Upright Imaging of <em>Drosophila</em> Embryos

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current ...

Case Western Reserve University

&#x5375;&#x6CE1;&#x3001; &#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x548C;&#x6392;&#x5375;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x9700;&#x8981;&#x4E00;&#x5957;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x3001; &#x81EA;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x65C1;&#x5206;&#x6CCC;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x5316;&#x4E3A;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x6295;&#x5165;&#x3002;&#x80DE;&#x5185;&#x8425;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x89E3;&#x4FC3;&#x6027;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x8C03;&#x8282;&#x9897;&#x7C92;&#x548C;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;&#x8425;&#x5730;&#x5728;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x964D;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x6062;&#x590D;&#x7684;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x836F;&#x7406;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x51B3;&#x5FC3;&#x5728;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;PDE3 &#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x9897;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; PDE4s &#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x5375;&#x6CE1;&#x88AB;&#x5206;&#x5272;&#x7684;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x4E8C;&#x916F;&#x9176; (&#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B;) &#x9000;&#x5316;&#x548C;&#x706D;&#x6D3B;&#x8425;&#x5730;&#xFF0C;&#x5728;&#x9176;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; PDE3 &#x514B;&#x9686;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x5F02;&#x6E90;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E86;&#x5C5E;&#x6027;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x6D3E;&#x751F;&#x81EA;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE; PDE3A&#x3002;PDE3 &#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x5B8C;&#x5168;&#x963B;&#x6B62;&#x5375;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;PDE3A &#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5F02;&#x6E90;&#x8868;&#x8FBE;&#x5BFC;&#x81F4;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2; (&#x53D1;&#x6CE1;) &#x7684;&#x6062;&#x590D;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x9A6C;&#x978D;&#x5C71;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x548C; MAPK &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#x6CE8;&#x5C04;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E; PDE3 &#x662F;&#x4E0B;&#x6E38;&#x4ECE;&#x6FC0;&#x9176; PKB/Akt &#x4ECB;&#x5BFC;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-1 &#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x4E2D;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5B55;&#x6FC0;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x6062;&#x590D;&#x3002;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x6A21;&#x5757;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x662F;&#x7531; PDE3 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4E0E; PDE &#x6D3B;&#x6027;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x63A8;&#x65AD;&#x7684;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;PDE3 &#x63A7;&#x5236;&#x6062;&#x590D;&#x7684;&#x4E24;&#x6816;&#x7C7B;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x7C7B;&#x4E2D;&#x7684;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E86;&#x89E3;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x53EF;&#x80FD;&#x63ED;&#x793A;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5BF9;&#x89E6;&#x53D1;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The development of the ovarian follicle, oocyte maturation, and ovulation require a complex set of endocrine, paracrine, and autocrine inputs that are translated into the regulation of cyclic nucleotide levels. Changes in intracellular cAMP mediate the gonadotropin regulation of granulosa and theca cell functions. Likewise, a decrease in cAMP concentration in the oocyte has been associated with the resumption of meiosis. Using pharmacological and molecular approaches, we determined that the expression of cyclic nucleotide phosphodiesterases (PDEs), the enzymes that degrade and inactivate cAMP, is compartmentalized in the ovarian follicle of all species studied, with PDE3 present in the oocytes and PDE4s in granulosa cells. The PDE3 expressed in the mouse oocyte was cloned, and the protein expressed in a heterologous system had properties similar to those of a PDE3A derived from somatic cells. Inhibition of the oocyte PDE3 completely blocked oocyte maturation in vitro and in vivo, demonstrating that the activity of this enzyme is essential for oocyte maturation. Heterologous expression of PDE3A in Xenopus oocyte causes morphological changes distinctive of resumption of meiosis (GVBD), as well as activation of mos translation and MAPK phosphorylation. Using mRNA and antibody microinjection in the Xenopus eggs, we have shown that PDE3 is downstream from the kinase PKB/Akt in the pathway that mediates IGF-1 but not progesterone-induced meiotic resumption. The presence of a similar regulatory module in mammalian oocytes is inferred by pharmacological studies with PDE3 inhibitors and measurement of PDE activity. Thus, PDE3 plays an essential role in the signaling pathway that controls resumption of meiosis in amphibians and mammals. Understanding the regulation of this enzyme may shed some light on the signals that trigger oocyte maturation.

Role of cyclic nucleotide signaling in oocyte maturation.

Le d&eacute;veloppement du follicule ovarien, la maturation des ovocytes et l&#39;ovulation exigent un ensemble complexe d&#39;entr&eacute;es du syst&egrave;me endocrinien, paracrine et autocrine qui sont traduites dans la r&eacute;gulation des niveaux de nucl&eacute;otides cycliques. Changements en AMPc intracellulaire m&eacute;dient la r&eacute;glementation de la gonadotrophine des fonctions des cellules granuleuses et th&eacute;cales. De m&ecirc;me, une diminution de la concentration d&#39;AMPc dans l&#39;ovocyte a &eacute;t&eacute; associ&eacute;e &agrave; la reprise de la m&eacute;iose. &Agrave; l&#39;aide d&#39;approches pharmacologiques et mol&eacute;culaires, nous avons d&eacute;termin&eacute; que l&#39;expression de nucl&eacute;otides cycliques phosphodiest&eacute;rases (PDEs), les enzymes qui d&eacute;gradent et inactivent cAMP, est compartiment&eacute;e dans le follicule ovarien de toutes les esp&egrave;ces &eacute;tudi&eacute;es, PDE3 pr&eacute;sents dans les ovocytes et PDE4s dans les cellules de la granulosa. La PDE3 exprim&eacute;e dans l&#39;ovocyte de souris a &eacute;t&eacute; clon&eacute; et la prot&eacute;ine exprim&eacute;e dans un syst&egrave;me h&eacute;t&eacute;rologue avait des propri&eacute;t&eacute;s semblables &agrave; celles d&#39;une PDE3A d&eacute;riv&eacute;e de cellules somatiques. L&#39;inhibition de l&#39;ovocyte PDE3 a compl&egrave;tement bloqu&eacute; la maturation des ovocytes in vitro et in vivo, ce qui d&eacute;montre que l&#39;activit&eacute; de cette enzyme est essentielle pour la maturation des ovocytes. Expression h&eacute;t&eacute;rologue de PDE3A dans les ovocytes de Xenopus provoque des changements morphologiques distinctifs de la reprise de la m&eacute;iose (GVBD), ainsi que l&#39;activation de la traduction de mos et phosphorylation MAPK. &Agrave; l&#39;aide de microinjection d&#39;anticorps et de l&#39;ARNm dans les oeufs de Xenopus, nous avons montr&eacute; que la PDE3 est en aval de la kinase PKB/Akt dans la voie qui m&eacute;die IGF-1 mais pas induite par la progest&eacute;rone m&eacute;iotique reprise. La pr&eacute;sence d&#39;un module r&eacute;glementaire similaire dans des ovocytes de mammif&egrave;res est d&eacute;duite par des &eacute;tudes pharmacologiques avec inhibiteurs de PDE3 et mesure de l&#39;activit&eacute; de la PDE. Ainsi, la PDE3 joue un r&ocirc;le essentiel dans la voie de signalisation qui contr&ocirc;le la reprise de la m&eacute;iose chez les amphibiens et les mammif&egrave;res. Comprendre la r&eacute;gulation de cette enzyme peut nous &eacute;clairer sur les signaux qui d&eacute;clenchent la maturation des ovocytes.

R&ocirc;le des nucl&eacute;otides cycliques de signalisation dans la maturation des ovocytes.

Die Rolle der zyklische Nukleotid-Signalisierung bei der Eizellreifung.

Lo sviluppo del follicolo ovarico, maturazione degli ovociti e l&#39;ovulazione richiedono un complesso insieme di ingressi, endocrina, paracrina e autocrine che vengono tradotti nella regolazione dei livelli di nucleotide ciclico. Cambiamenti nel cAMP intracellulare mediano il regolamento gonadotropina delle funzioni delle cellule di granulosa e teca. Allo stesso modo, una diminuzione della concentrazione di cAMP nell&#39;ovocita &egrave; stata associata con la ripresa della meiosi. Utilizzando approcci farmacologici e molecolari, abbiamo determinato che l&#39;espressione di nucleotide ciclico fosfodiesterasi (PDE), gli enzimi che degradano e inattivano cAMP, &egrave; compartimentato nel follicolo ovarico di tutte le specie studiate, con PDE3 presenti gli ovociti e PDE4s nelle cellule della granulosa. La PDE3 espressa nell&#39;ovocita del mouse &egrave; stato clonato, e la proteina espressa in un sistema eterologo aveva propriet&agrave; simili a quelle di un PDE3A derivato da cellule somatiche. Inibizione dell&#39;ovocita PDE3 completamente bloccato la maturazione degli ovociti in vitro e in vivo, dimostrando che l&#39;attivit&agrave; di questo enzima &egrave; essenziale per la maturazione degli ovociti. Espressione eterologa di PDE3A in Xenopus oocyte provoca cambiamenti morfologici distintivi di ripresa della meiosi (GVBD), come pure l&#39;attivazione della traduzione di mos e fosforilazione della MAPK. Mediante Microiniezione mRNA e anticorpo le uova di Xenopus, abbiamo dimostrato che la PDE3 &egrave; a valle la chinasi Akt/PKB nella via che media IGF-1 ma non progesterone-indotto meiotic ripresa. La presenza di un modulo simile regolamentazione nei mammiferi ovociti viene dedotta da studi farmacologici con inibitori di PDE3 e misurazione dell&#39;attivit&agrave; PDE. Cos&igrave;, PDE3 gioca un ruolo essenziale nella via di segnalazione che controlla la ripresa della meiosi in anfibi e mammiferi. Comprendere la regolazione di questo enzima pu&ograve; far luce sui segnali che attivano la maturazione degli ovociti.

Ruolo del nucleotide ciclico segnalazione nella maturazione degli ovociti.

&#x5375;&#x80DE;&#x3001;&#x5375;&#x6210;&#x719F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6392;&#x5375;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5165;&#x529B;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; cAMP &#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5375;&#x80DE;&#x306E;&#x9846;&#x7C92;&#x5C64;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30B4;&#x30CA;&#x30C9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D4;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x5375;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x518D;&#x958B;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306B;&#x5375;&#x80DE;&#x9846;&#x7C92;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; PDE4s &#x3068; PDE3 &#x306E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7A2E;&#x306E;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30B8;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (Pde) &#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3001;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x4ED5;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F; PDE3 &#x3067;&#x8907;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E; PDE3A &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7570;&#x7A2E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE; PDE3 &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x6210;&#x719F;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;, &#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x5375;&#x6210;&#x719F;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3002;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; PDE3A &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5F62;&#x614B;&#x5909;&#x5316;&#x72EC;&#x7279;&#x306E;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2; (GVBD) &#x306E;&#x518D;&#x958B;&#x3068;&#x3057;&#x3066; mos &#x7FFB;&#x8A33;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; MAPK &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MRNA &#x3068;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; PDE3 &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; PKB/Akt &#x306E; IGF-1 &#x306E;&#x5A92;&#x4ECB;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304B;&#x3089;&#x4E0B;&#x6D41;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B2;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x518D;&#x958B;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x5375;&#x5B50;&#x3067;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684; PDE3 &#x963B;&#x5BB3;&#x85AC;&#x3001;PDE &#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63A8;&#x8AD6;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;PDE3 &#x306F;&#x4E21;&#x751F;&#x985E;&#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x518D;&#x958B;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x5375;&#x6210;&#x719F;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5149;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5375;&#x6210;&#x719F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xB09C;&#xC18C; &#xC5EC; &#xD3EC;, oocyte &#xC131;&#xC219; &#xBC0F; &#xBC30; &#xB780; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xB85C; &#xBC88;&#xC5ED; &#xD558;&#xB294; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44;, paracrine, &#xBC0F; autocrine &#xC785;&#xB825;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC124;&#xC815;&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCEA0;&#xD504;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; granulosa &#xD568;&#xC218;&#xC640; theca &#xC140;&#xC758; &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC120; &#xC790;&#xADF9; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC911;&#xC7AC;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;,&#xB294; oocyte &#xCEA0;&#xD504; &#xB18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; meiosis &#xC7AC;&#xAC1C;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xC57D;&#xB9AC;&#xD559; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; phosphodiesterases (PDEs) &#xC800;&#xD558; &#xBC0F; &#xCEA0;&#xD504;, &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; oocytes&#xC5D0; PDE3 &#xBC0F; granulosa &#xC140;&#xC5D0; pde4s&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC885;&#xC758; &#xB09C;&#xC18C; &#xC5EC; &#xD3EC;&#xC5D0; &#xB4E4; &#xC5D0;&#xAC8C;&#xB9CC; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; oocyte &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; pde3&#xC744; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18D;&#xC131; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; pde3a&#xC758; &#xAC83;&#xACFC; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. Oocyte pde3&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xB294; &#xC644;&#xC804;&#xD788; oocyte &#xC131;&#xC219; &#xCCB4; &#xC678; &#xD558; &#xACE0; in vivo,&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; oocyte &#xC131;&#xC219;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC784;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xCC28;&#xB2E8;. Xenopus oocyte&#xC5D0; pde3a&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DD;&#xC774; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBCC0;&#xD654; mos &#xBC88;&#xC5ED; &#xBC0F; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; MAPK &#xD65C;&#xC131;&#xD654; meiosis (GVBD)&#xC758; &#xC7AC;&#xAC1C;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Xenopus &#xACC4;&#xB780; mRNA &#xBC0F; &#xD56D; &#xCCB4; microinjection&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; pde3&#xC740; IGF-1&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; PKB/Akt &#xD0A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; meiotic &#xC7AC;&#xAC1C; &#xD558;&#xC9C0; &#xD669; &#xCCB4; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xADDC;&#xC81C; &#xBAA8;&#xB4C8;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; PDE &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xCE21;&#xC815; &#xBC0F; PDE3 &#xC800; &#xD574;&#xC81C;&#xC640; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xCD94; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, PDE3 meiosis &#xC591;&#xC11C;&#xB958;&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC758; &#xC7AC;&#xAC1C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xC774;&#xD574; oocyte &#xC131;&#xC219; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB418; &#xAC70; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Oocyte &#xC131;&#xC219;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El desarrollo del fol&iacute;culo ov&aacute;rico, la maduraci&oacute;n de ovocitos y la ovulaci&oacute;n requieren un conjunto complejo de insumos autocrina, paracrina y endocrina que se traducen en la regulaci&oacute;n de los niveles de nucle&oacute;tidos c&iacute;clicos. Cambios en el campo intracelular median la regulaci&oacute;n de la gonadotropina de funciones de c&eacute;lula granulosa y teca. Asimismo, una disminuci&oacute;n en la concentraci&oacute;n de campo en el ovocito se ha asociado con la reanudaci&oacute;n de la meiosis. Utilizando los enfoques farmacol&oacute;gicos y moleculares, determinamos que la expresi&oacute;n de nucle&oacute;tico c&iacute;clico fosfodiesterasas (SEEP), las enzimas que degradan y desactivar el campo, est&aacute; compartimentada en el fol&iacute;culo ov&aacute;rico de todas las especies estudiadas, con PDE3 presentes en los ovocitos y PDE4s en c&eacute;lulas de la granulosa. La PDE3 expresada en el ovocito de rat&oacute;n fue clonado, y la prote&iacute;na que se expresa en un sistema heter&oacute;logo ten&iacute;a propiedades similares a las de un PDE3A derivado de las c&eacute;lulas som&aacute;ticas. Inhibici&oacute;n de los ovocitos PDE3 completamente bloqueado la maduraci&oacute;n de ovocitos in vitro e in vivo, demostrando que la actividad de esta enzima es esencial para la maduraci&oacute;n de ovocitos. Expresi&oacute;n heter&oacute;loga de PDE3A en ovocitos de Xenopus provoca cambios morfol&oacute;gicos distintivos de reanudaci&oacute;n de la meiosis (GVBD), as&iacute; como la activaci&oacute;n de la traducci&oacute;n de mos y fosforilaci&oacute;n de MAPK. Mediante microinyecci&oacute;n de mRNA y anticuerpo en los huevos de Xenopus, hemos demostrado que la PDE3 es aguas abajo de la quinasa PKB/Akt en el camino que media de IGF-1 pero no inducida por la progesterona mei&oacute;tica reanudaci&oacute;n. La presencia de un m&oacute;dulo regulador similar en mam&iacute;feros ovocitos se infiere por estudios farmacol&oacute;gicos con inhibidores de la PDE3 y medici&oacute;n de la actividad de la PDE. As&iacute;, la PDE3 juega un papel esencial en la v&iacute;a de se&ntilde;alizaci&oacute;n que controla la reanudaci&oacute;n de la meiosis en reptiles y mam&iacute;feros. Entender la regulaci&oacute;n de esta enzima puede arrojar algo de luz sobre las se&ntilde;ales que activan la maduraci&oacute;n de ovocitos.

Papel de nucle&oacute;tico c&iacute;clico en la maduraci&oacute;n de ovocitos.

&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x7279;&#x5B9A; PDE4 &#x78F7;&#x9178;&#x4E8C;&#x916F;&#x9176;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;

Cyclic AMP-specific PDE4 phosphodiesterases as critical components of cyclic AMP signaling.

AMP cyclique sp&eacute;cifiques phosphodiest&eacute;rases de PDE4 comme des composantes essentielles de la signalisation de l&#39;AMP cyclique.

Zyklisches AMP-spezifischen PDE4 Phosphodiesterasen als kritische Komponenten von zyklischem AMP-Signalisierung.

Specifici dell&#39;AMP ciclico fosfodiesterasi PDE4 come componenti critici di AMP ciclico segnalazione.

&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x56FA;&#x6709; PDE4 &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30B8;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;

&#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; &#xAD00;&#xB828; PDE4 phosphodiesterases &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xBD80;&#xD488;&#xC73C;&#xB85C;.

Espec&iacute;ficos AMP c&iacute;clico fosfodiesterasas de PDE4 como componentes cr&iacute;ticos de la se&ntilde;alizaci&oacute;n de AMP c&iacute;clico.

&#x7531;&#x4E8E;&#x8425;&#x5730;&#x963B;&#x6B62;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x548C;&#x4E24;&#x6816;&#x7C7B;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x4E8C;&#x916F;&#x9176; 3A (PDE3A) &#x662F;&#x5BF9;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8425;&#x5730;&#x6C34;&#x89E3;&#x8D1F;&#x6709;&#x4E3B;&#x8981;&#x8D23;&#x4EFB;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210; PDE3A &#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;Pde3a(-/-) &#x5973;&#x6027;&#x662F;&#x53EF;&#x884C;&#x548C;&#x6392;&#x5375;&#x7684;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x6570;&#x91CF;&#x4F46;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E0D;&#x80B2;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; ovulated &#x7684;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x53D1;&#x6CE1;&#x9636;&#x6BB5;&#x800C;&#x88AB;&#x6355;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x53D7;&#x7CBE;&#x3002;Pde3a(-/-) &#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x8425;&#x7279;&#x5B9A;&#x916F;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001; &#x8F7D;&#x8425;&#x589E;&#x52A0;&#x548C;&#x672A;&#x80FD;&#x63A5;&#x53D7;&#x4F53;&#x5916;&#x81EA;&#x53D1;&#x6210;&#x719F; &#xFF08;&#x6700;&#x591A; 48 &#x5C0F;&#x65F6;&#xFF09;&#x3002;Pde3a(-/-) &#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x6210;&#x719F;&#x6062;&#x590D;&#x901A;&#x8FC7;&#x6291;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#xFF08;PKA&#xFF09; &#x4E0E;&#x817A;&#x82F7; 3&#39;&#xFF0C;5&#39;-&#x73AF; monophosphorothioate&#xFF0C;Rp-&#x5F02;&#x6784;&#x4F53; &#xFF08;Rp &#x8425;&#x5730;&#xFF09;&#xFF0C;&#x6216;&#x6CE8;&#x5165;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x591A;&#x80BD; (PKI) &#x6216; mRNA &#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; CDC25&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x786E;&#x8BA4;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x8425; PKA &#x4FE1;&#x53F7;&#x662F;&#x8D1F;&#x8D23;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x5C01;&#x9501;&#x3002;Pde3a(-/-) &#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x53D1;&#x6CE1;&#x7834;&#x88C2;&#x663E;&#x793A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5F3A;&#x79EF;&#x91D1;&#x548C; MAPK&#xFF0C;&#x7ECF;&#x5386;&#x8FC7;&#x5B8C;&#x6210;&#x6324;&#x538B;&#x6781;&#x4F53;&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6210;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x7BA1;&#x4E3A;&#x53D7;&#x7CBE;&#x7684;&#x7CBE;&#x5B50;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D1;&#x73B0;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6307;&#x793A;&#xFF0C;&#x6062;&#x590D;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9057;&#x4F20;&#x8BC1;&#x636E;&#xFF0C;&#x4F53;&#x5916;&#x9700;&#x8981; PDE3A &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;Pde3a(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x8868;&#x793A;&#x6E38;&#x79BB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x6210;&#x719F;&#x548C;&#x6392;&#x5375;&#xFF0C;&#x4F53;&#x5185;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5F3A;&#x8C03;&#x4E86;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x5BF9;&#x907F;&#x5B55;&#x7684;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5973;&#x6027;&#x4E0D;&#x5B55;&#x75C7;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x4E8C;&#x916F;&#x9176; 3A &#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;

Since cAMP blocks meiotic maturation of mammalian and amphibian oocytes in vitro and cyclic nucleotide phosphodiesterase 3A (PDE3A) is primarily responsible for oocyte cAMP hydrolysis, we generated PDE3A-deficient mice by homologous recombination. The Pde3a(-/-) females were viable and ovulated a normal number of oocytes but were completely infertile, because ovulated oocytes were arrested at the germinal vesicle stage and, therefore, could not be fertilized. Pde3a(-/-) oocytes lacked cAMP-specific PDE activity, contained increased cAMP levels, and failed to undergo spontaneous maturation in vitro (up to 48 hours). Meiotic maturation in Pde3a(-/-) oocytes was restored by inhibiting protein kinase A (PKA) with adenosine-3',5'-cyclic monophosphorothioate, Rp-isomer (Rp-cAMPS) or by injection of protein kinase inhibitor peptide (PKI) or mRNA coding for phosphatase CDC25, which confirms that increased cAMP-PKA signaling is responsible for the meiotic blockade. Pde3a(-/-) oocytes that underwent germinal vesicle breakdown showed activation of MPF and MAPK, completed the first meiotic division extruding a polar body, and became competent for fertilization by spermatozoa. We believe that these findings provide the first genetic evidence indicating that resumption of meiosis in vivo and in vitro requires PDE3A activity. Pde3a(-/-) mice represent an in vivo model where meiotic maturation and ovulation are dissociated, which underscores inhibition of oocyte maturation as a potential strategy for contraception.

Cyclic nucleotide phosphodiesterase 3A-deficient mice as a model of female infertility.

Puisque le cAMP bloque la maturation m&eacute;iotique des mammif&egrave;res et des amphibiens des ovocytes in vitro et de nucl&eacute;otide cyclique phosphodiest&eacute;rase 3 a (PDE3A) est principalement responsable de l&#39;hydrolyse cAMP d&#39;ovocytes, nous avons g&eacute;n&eacute;r&eacute; des souris d&eacute;ficientes en PDE3A par recombinaison homologue. Les femelles de Pde3a(-/-) &eacute;taient viables et ovul&eacute; un nombre normal d&#39;ovocytes mais compl&egrave;tement st&eacute;riles, parce que les ovocytes ovul&eacute;s ont &eacute;t&eacute; arr&ecirc;t&eacute;s au stade de la v&eacute;sicule germinale et ne pourraient donc pas &ecirc;tre f&eacute;cond&eacute;s. Pde3a(-/-) ovocytes n&#39;avait pas d&#39;activit&eacute; de la PDE ax&eacute;s sur le cAMP, contenaient des niveaux accrus de camps et n&#39;a pas &agrave; subir une maturation spontan&eacute;e in vitro (jusqu&#39;&agrave; 48 heures). Maturation m&eacute;iotique dans des ovocytes de Pde3a(-/-) a &eacute;t&eacute; restaur&eacute;e en inhibant la prot&eacute;ine kinase A (PKA) avec l&#39;ad&eacute;nosine 3 &laquo;, 5 &raquo;-monophosphorothioate cyclique, Rp-isom&egrave;re (Rp-cAMPS) ou par injection de peptide d&#39;inhibiteur de la prot&eacute;ine kinase (PKI) ou de l&#39;ARNm codant pour la phosphatase CDC25, qui confirme que le cAMP-PKA accrue de signalisation est responsable du blocus m&eacute;iotique. Pde3a(-/-) les ovocytes qui ont subi la v&eacute;sicule germinale ventilation a montr&eacute; une activation de MPF et MAPK, termin&eacute; la premi&egrave;re division m&eacute;iotique extruder un globule polaire et est devenue comp&eacute;tentes pour la f&eacute;condation par les spermatozo&iuml;des. Nous croyons que ces r&eacute;sultats fournissent la premi&egrave;re preuve g&eacute;n&eacute;tique indiquant cette reprise de la m&eacute;iose in vivo et in vitro n&eacute;cessite l&#39;activit&eacute; PDE3A. Pde3a(-/-) souris repr&eacute;sentent un mod&egrave;le in vivo, o&ugrave; la maturation m&eacute;iotique et l&#39;ovulation sont dissoci&eacute;s, ce qui met en &eacute;vidence l&#39;inhibition de la maturation de l&#39;ovocyte comme une strat&eacute;gie possible pour la contraception.

Nucl&eacute;otide cyclique phosphodiest&eacute;rase 3 a souris d&eacute;ficientes comme mod&egrave;le de l&#39;infertilit&eacute; f&eacute;minine.

Zyklische-Nukleotid-Phosphodiesterase 3A-defizienten M&#xE4;usen als Modell f&#xFC;r Unfruchtbarkeit bei Frauen.

Poich&eacute; il campo ostruisce maturazione meiotica dei mammiferi e anfibi ovociti in vitro e nucleotide ciclico fosfodiesterasi 3A (PDE3A) &egrave; principalmente responsabile per idrolisi cAMP ovocita, abbiamo generato mouse PDE3A-carenti di ricombinazione omologa. Le femmine Pde3a(-/-) erano vitali e ovulato un normale numero di ovociti ma erano completamente sterili, perch&eacute; ovulated ovociti sono stati arrestati nella fase della vescicola germinale e, pertanto, non potrebbero essere fecondati. Pde3a(-/-) ovociti mancavano attivit&agrave; PDE cAMP specifico, contenevano livelli aumentati di campi e non &egrave; riuscito a sottoporsi a spontanea maturazione in vitro (fino a 48 ore). Maturazione meiotica in ovociti Pde3a(-/-) fu restaurato inibendo la chinasi di proteina A (PKA) con adenosina-3 &#39;, 5&#39;-ciclico monophosphorothioate, Rp-isomero (Rp-campi) o per iniezione della proteina chinasi inibitore peptide (PKI) o mRNA codifica per la fosfatasi CDC25, che conferma che la segnalazione aumentata cAMP-PKA &egrave; responsabile del blocco meiotic. Pde3a(-/-) ovociti che sub&igrave; la vescicola germinale ripartizione ha mostrato attivazione di MPF e MAPK, completato la prima divisione meiotica sporgersi un corpo polare e divenne competenti per la fecondazione gli spermatozoi. Noi crediamo che questi risultati forniscono la prima prova genetica che indica tale ripresa della meiosi in vivo e in vitro richiede attivit&agrave; di PDE3A. Pde3a(-/-) topi rappresentano un modello in vivo dove si dissociano maturazione meiotica e l&#39;ovulazione, che sottolinea l&#39;inibizione della maturazione ovocitaria come una strategia potenziale per la contraccezione.

Nucleotide ciclico fosfodiesterasi 3A-deficient mice come un modello di infertilit&agrave; femminile.

&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; in vitro &#x8A66;&#x9A13;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30FB; &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30B8;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; 3A &#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x3001;&#x4E21;&#x751F;&#x985E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x4EE5;&#x6765; &#xFF08;PDE3A&#xFF09; &#x306F;&#x5375;&#x5B50;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x4E3B;&#x306B;&#x62C5;&#x5F53;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B;&#x3088;&#x308B; PDE3A &#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Pde3a(-/-) &#x5973;&#x6027;&#x5B9F;&#x5B58;&#x3057;&#x5F97;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x756A;&#x53F7;&#x5375;&#x5B50;&#x306E;&#x6392;&#x5375;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x6392;&#x5375;&#x5375;&#x5B50;&#x5375;&#x6838;&#x80DE;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x902E;&#x6355;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x306A;&#x3044;&#x53D7;&#x7CBE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x80A5;&#x6C83;&#x306A;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;Pde3a(-/-) &#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x56FA;&#x6709; PDE &#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x6210;&#x719F; in vitro &#xFF08;48 &#x6642;&#x9593;&#xFF09; &#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Pde3a(-/-) &#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A(PKA) &#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3; 3 &#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x305F; &#39;, 5&#39;-&#x74B0;&#x72B6; monophosphorothioate&#x3001;Rp &#x7570;&#x6027;&#x4F53; &#xFF08;Rp &#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#xFF09; &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; PKA &#x3092;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x5C01;&#x9396;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x6CE8;&#x5C04;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; (PKI) &#x307E;&#x305F;&#x306F; mRNA &#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; CDC25&#x3001;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MPF &#x3068; MAPK &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x80DA;&#x80DE;&#x5D29;&#x58CA;&#x3092;&#x65BD;&#x884C;&#x3057;&#x305F; Pde3a(-/-) &#x5375;&#x6975;&#x4F53;&#x3092;&#x62BC;&#x51FA;&#x3057;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x3092;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3057;&#x3001;&#x7CBE;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53D7;&#x7CBE;&#x3092;&#x6709;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; in vivo &#x3067;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x518D;&#x958B;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B; in vitro PDE3A &#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x4FE1;&#x3058;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Pde3a(-/-) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x907F;&#x598A;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6226;&#x7565;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5375;&#x6210;&#x719F;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3069;&#x3053;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3068;&#x6392;&#x5375;&#x89E3;&#x96E2;&#x3092; in vivo &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30B8;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; 3A &#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5973;&#x6027;&#x4E0D;&#x598A;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;

&#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xCEA0;&#xD504; &#xCC28;&#xB2E8; &#xCCB4; &#xC678; &#xC21C;&#xD658; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xD3EC;&#xC2A4; 3a&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC640; &#xC591;&#xC11C;&#xB958; oocytes meiotic &#xC131;&#xC219; (PDE3A)&#xC740; &#xC8FC;&#xB85C; oocyte &#xCEA0;&#xD504; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;, &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; PDE3A &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC950;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pde3a(-/-) &#xC5EC;&#xC131; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xACE0; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xAC00; oocytes ovulated &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC; ovulated oocytes germinal &#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCCB4;&#xD3EC; &#xD558; &#xACE0;, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC218;&#xC815; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC218; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xBE44;&#xC625;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4;. Pde3a(-/-) oocytes &#xCEA0;&#xD504; &#xAD00;&#xB828; PDE &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD80;&#xC871; &#xC99D;&#xAC00; &#xCEA0;&#xD504; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xC131;&#xC219; &#xCCB4; &#xC678; (&#xCD5C;&#xB300; 48 &#xC2DC;&#xAC04;)&#xC744; &#xBC1B;&#xC544;&#xC57C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC2E4;&#xD328;. Pde3a(-/-) oocytes&#xC5D0;&#xC11C; meiotic &#xC131;&#xC219; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; 3 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A (PKA)&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xBCF5;&#xC6D0; &#39;, 5&#39;-&#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; monophosphorothioate, Rp-&#xC774;&#xC131;&#xC9C8;&#xCCB4; (&#xB77C;&#xC778;&#xB780;&#xD2B8;-&#xCEA0;&#xD504;) &#xB610;&#xB294; &#xC99D;&#xAC00; &#xCEA0;&#xD504; PKA &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; meiotic &#xBD09;&#xC1C4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; (PKI) &#xB610;&#xB294; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; CDC25 &#xC704;&#xD55C; mRNA &#xCF54;&#xB529;&#xC758; &#xC8FC;&#xC785;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;. MPF&#xC640; MAPK, &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; germinal &#xAE30; &#xACE0;&#xC7A5; &#xBC1B;&#xC558;&#xB2E4; Pde3a(-/-) oocytes &#xB3CC;&#xCD9C; &#xADF9; &#xBCF8;&#xBB38; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; meiotic &#xBD80;&#xBB38; &#xC644;&#xB8CC; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xD560;&#xC774; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; meiosis vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xADF8; &#xC7AC;&#xAC1C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; PDE3A &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xCCB4; &#xC678; &#xBBFF;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pde3a(-/-) &#xC950; in vivo &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; meiotic &#xC131;&#xC219; &#xBC0F; &#xBC30; &#xB780; &#xD574;&#xB9AC;&#xB294; &#xD53C;&#xC784;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB7B5;&#xC73C;&#xB85C; oocyte &#xC131;&#xC219;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xBC11;&#xC904;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5EC;&#xC131; &#xBD88; &#xC784;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xB85C; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xD3EC;&#xC2A4; 3A &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC950;.

Puesto que el campo bloquea la maduraci&oacute;n mei&oacute;tica de ovocitos de mam&iacute;feros y anfibios en vitro y nucle&oacute;tido c&iacute;clico fosfodiesterasa 3A (PDE3A) es principalmente responsable de la hidr&oacute;lisis de campamento de ovocitos, generamos ratones deficientes en PDE3A por recombinaci&oacute;n hom&oacute;loga. Las hembras Pde3a(-/-) eran viables y ovularon un n&uacute;mero normal de ovocitos pero eran totalmente est&eacute;riles, porque ovuladas ovocitos fueron arrestados en la etapa de ves&iacute;cula germinal y, por lo tanto, no pueden ser fertilizados. Pde3a(-/-) ovocitos carec&iacute;an de actividad de la PDE campamento-espec&iacute;fica, figuran el aumento de los niveles de campo y no someterse a espont&aacute;nea maduraci&oacute;n in vitro (hasta 48 horas). Maduraci&oacute;n mei&oacute;tica en ovocitos de Pde3a(-/-) fue restablecida mediante la inhibici&oacute;n de la prote&iacute;na quinasa A (PKA) con adenosina-3&#39;, 5&#39;-c&iacute;clico monophosphorothioate, Rp-is&oacute;mero (Rp-campos) o por la inyecci&oacute;n de la prote&iacute;na kinasa inhibidor p&eacute;ptido (PKI) o ARNm que codifica para la fosfatasa CDC25, que confirma que mayor campo-PKA se&ntilde;alizaci&oacute;n es responsable por el bloqueo mei&oacute;tico. Pde3a(-/-) ovocitos que sufri&oacute; la ruptura de la ves&iacute;cula germinal mostraron activaci&oacute;n de MPF y MAPK, complet&oacute; la primera divisi&oacute;n mei&oacute;tica sacando un cuerpo polar y lleg&oacute; a ser competentes para la fertilizaci&oacute;n de espermatozoides. Creemos que estos resultados proporcionan la primera evidencia gen&eacute;tica que indica la reanudaci&oacute;n de la meiosis en vivo e in vitro requiere actividad PDE3A. Pde3a(-/-) ratones representan un modelo in vivo donde maduraci&oacute;n mei&oacute;tica y la ovulaci&oacute;n son disociados, que subraya la inhibici&oacute;n de la maduraci&oacute;n de ovocitos como una estrategia potencial para la anticoncepci&oacute;n.

Article	Year
Role of cyclic nucleotide signaling in oocyte maturation. Molecular and cellular endocrinology\| PubMed ID: 11988323	2002
Cyclic AMP-specific PDE4 phosphodiesterases as critical components of cyclic AMP signaling. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 12493749	2003
Cyclic nucleotide phosphodiesterase 3A-deficient mice as a model of female infertility. The Journal of clinical investigation\| PubMed ID: 15254586	2004

Catherine Jin

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