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Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells

We will demonstrate how to study the functional effects of introducing a point mutation in an ion channel. We study G protein-gated inwardly rectifying ...

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Organotypic Cerebellar Cultures: Apoptotic Challenges and Detection

Organotypic cultures of neuronal tissue were first introduced by Hogue in 1947 1,2 and have constituted a major breakthrough in the field of neuroscience. ...

Salk Institute for Biological Studies

The Salk Institute for Biological Studies

&#x915A;&#x7C7B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x6210;&#x5206;&#xFF0C;&#x6784;&#x6210;&#x4E86;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x81B3;&#x98DF;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5E76;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x9884;&#x9632;&#x5242;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x6784;&#x591A;&#x5143;&#x915A;&#x7C7B;&#x7269;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5982;&#x4E39;&#x5B81;&#x9178;&#x3001; &#x539F;&#x513F;&#x8336;&#x9178;&#x3001; &#x7EFF;&#x539F;&#x9178;&#x548C;&#x767D;&#x85DC;&#x82A6;&#x9187;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x5171;&#x4EF7;&#x7684; 7&#x3001; 12-dimethylbenz &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; DNA &#x4F53;&#x5916; [a] &#x84BD; (&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x84BD;) &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#x548C;&#x5236;&#x6B62;&#x6C27;&#x5316;&#x7206;&#x88C2; 12-O-&#x4F5B;-13-&#x918B;&#x9178; (TPA)-&#x523A;&#x6FC0;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x591A;&#x5F62;&#x6838;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x4E2D;&#x6027;&#xFF09;&#x3002;32 P postlabeling DNA &#x5206;&#x6790;&#x5728;&#x9762;&#x524D; 3-&#x84BD; (3-MC) &#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x84BD;&#x5B75;&#x5316;-&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x5FAE;&#x7C92;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x5206;&#x522B;&#x4ECE;&#x6297;&#xFF0C;&#x4E8C;&#x6C22; syn-&#x548C;&#x53CD;-&#x4E8C;&#x73AF;&#x6C27;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6709; dGuo &#x548C;&#x62A4;&#x58C1;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6D3E;&#x751F;&#x3002;&#x915A;&#x7C7B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5728; 150 microM &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x51CF;&#x5C11;&#x6240;&#x6709;&#x7EA7;&#x522B;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x84BD; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269; 55-98%&#x3002;&#x6700;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x6709;&#x4EBA;&#x5728;&#x4E39;&#x5B81;&#x9178;&#xFF0C;&#x5B8C;&#x5168;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x84BD;&#x62A4;&#x58C1;&#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x7EFF;&#x539F;&#x9178;&#x662F;&#x6700;&#x6709;&#x6548;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x84BD; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x7279;&#x522B;&#x662F; syn DMBADE &#x62A4;&#x58C1; &#xFF08;20%&#xFF09;&#x3002;&#x4E0B;&#x964D;&#x4E86;&#x91CD;&#x5927;&#x4E0E;&#x5242;&#x91CF;&#x76F8;&#x5173;&#x7684; TPA &#x8BF1;&#x5BFC;&#x5316;&#x5B66;&#x53D1;&#x5149;&#x915A;&#x7C7B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x4E0E;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x540E;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6700;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x662F;&#x97A3;&#x9178;&#x548C;&#x767D;&#x85DC;&#x82A6;&#x9187;&#x4E0E; IC (50) = 5.19 &#x548C; 5.76 microM&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6291;&#x5236;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27; (ROS) &#x548C;&#x81F4;&#x764C;&#x7269;&#x8D28; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x68C0;&#x67E5;&#x915A;&#x7C7B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x6297;&#x764C;&#x6D3B;&#x6027;&#x53EF;&#x80FD;&#x5F88;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

7&#x3001; 12-Dimethylbenz &#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x5BF9;&#x690D;&#x7269;&#x915A;&#x7C7B;&#x7269;&#x8D28;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD; [a] &#x84BD; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x548C; TPA &#x523A;&#x6FC0;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x53D1;&#x5149;&#x6CD5;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;

Phenolics, common plant constituents, form up an important part of human diet and are considered potential chemopreventive agents. In the present study, structurally diverse phenolics, such as tannic acid, protocatechuic acid, chlorogenic acid and resveratrol, were investigated for their inhibitory effects on covalent binding of 7,12-dimethylbenz[a]anthracene (DMBA) to DNA in vitro and the suppression of oxidative burst in 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)-stimulated human polymorphonuclear neutrophils (PMNs). 32P-postlabeling analysis of DNA incubated with DMBA in the presence of 3-methylcholanthrene (3-MC)-induced microsomes produced three major adducts derived from anti-, syn- and anti-dihydrodiol epoxides through reactions with dGuo and dAdo, respectively. Phenolic compounds at the concentration of 150 microM reduced the levels of all DMBA-DNA adducts by 55-98%. The most dramatic effect was observed in case of tannic acid, which completely inhibited the formation of DMBA-dAdo adducts. Chlorogenic acid was the least effective inhibitor of DMBA-DNA adducts formation particularly syn-DMBADE-dAdo (20%). Human neutrophils showed a significant dose-related decrease of TPA-induced chemiluminescence after pretreatment with phenolic compounds. The most effective inhibitors were tannic acid and resveratrol with IC(50)=5.19 and 5.76 microM, respectively. These results suggest that the suppression of reactive oxygen species (ROS) and carcinogen-DNA adducts formation may be important for anticarcinogenic activity of the examined phenolics.

The effect of plant phenolics on the formation of 7,12-dimethylbenz[a]anthracene-DNA adducts and TPA-stimulated polymorphonuclear neutrophils chemiluminescence in vitro.

Compos&eacute;s ph&eacute;noliques, des constituants v&eacute;g&eacute;taux communs forment une part importante de l&#39;alimentation humaine et sont consid&eacute;r&eacute;s comme des agents potentiels de chimiopr&eacute;vention. Dans la pr&eacute;sente &eacute;tude, compos&eacute;s ph&eacute;noliques structures diverses, telles que l&#39;acide tannique, acide protocat&eacute;chuique, acide chlorog&eacute;nique et le resv&eacute;ratrol, ont &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;s pour leurs effets inhibiteurs sur la liaison covalente de 7, 12-dim&eacute;thylbenz [a] anthrac&egrave;ne (DMBA) &agrave; l&#39;ADN in vitro et la suppression de l&#39;oxydation fait irruption dans 12-O-t&eacute;trad&eacute;canoylphorbol-13-ac&eacute;tate (TPA)-stimule des polynucl&eacute;aires neutrophiles (PMN). L&#39;analyse d&#39;ADN 32P-post-marquage incub&eacute;es avec DMBA en pr&eacute;sence de 3-m&eacute;thylcholanthr&egrave;ne (3-MC)-induite par les microsomes produit trois principaux adduits d&eacute;riv&eacute;s anti-, syn - et anti-dihydrodiol &eacute;poxydes par r&eacute;action avec dGuo et dAdo, respectivement. Des compos&eacute;s ph&eacute;noliques &agrave; la concentration de 150 microM r&eacute;duisait les concentrations de tous les adduits d&#39;ADN de DMBA 55-98 %. L&#39;effet plus spectaculaire a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e dans le cas de l&#39;acide tannique qui inhibe compl&egrave;tement que la formation de DMBA-dAdo adduits. L&#39;acide chlorog&eacute;nique est que l&#39;inhibiteur moins efficace de DMBA-ADN adduits formation particuli&egrave;rement syn-DMBADE-dAdo (20 %). Neutrophiles humains ont montr&eacute; une diminution dose-d&eacute;pendante de chimiluminescence induite par le TPA apr&egrave;s un pr&eacute;traitement avec des compos&eacute;s ph&eacute;noliques. Les inhibiteurs plus efficaces ont &eacute;t&eacute; l&#39;acide tannique et le resv&eacute;ratrol avec IC (50) = 5.19 et 5,76 microM, respectivement. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la suppression des esp&egrave;ces r&eacute;actives de l&#39;oxyg&egrave;ne (ROS) et ADN-canc&eacute;rog&egrave;ne adduits formation pourrait &ecirc;tre importante pour l&#39;activit&eacute; anticarcinog&egrave;ne les ph&eacute;nols ont examin&eacute;.

L&#39;effet des d&eacute;riv&eacute;s ph&eacute;noliques v&eacute;g&eacute;taux sur la formation de 7, 12-dim&eacute;thylbenz [a] anthrac&egrave;ne-ADN adduits et chimiluminescence stimul&eacute;e par le TPA de polynucl&eacute;aires neutrophiles in vitro.

Die Wirkung der Pflanzenphenole auf die Bildung von 7,12-Dimethylbenz [a] anthracen-DNA-Addukte und TPA-stimulierten neutrophilen Chemilumineszenz in vitro.

Comuni componenti vegetali, composti fenolici, formano una parte importante della dieta umana e sono considerati potenziali agenti chemiopreventivi. Nel presente studio, strutturalmente diversi composti fenolici, come l&#39;acido tannico, acido protocatechico, acido clorogenico e resveratrolo, sono stati studiati per i loro effetti inibitori sull&#39;associazione covalente di 7,12-dimethylbenz [a] antracene (DMBA) di DNA in vitro e la soppressione di ossidativo scoppia in 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetato (TPA)-stimolato umani neutrofili polimorfonucleati (PMN). 32 P-postlabeling di analisi del DNA incubati con DMBA in presenza di 3-methylcholanthrene (3-MC)-indotta microsomi prodotte tre principali addotti derivati da anti-, syn - e anti-diidrodiolo epossidi attraverso reazioni con dGuo e dAdo, rispettivamente. Composti fenolici alla concentrazione di 150 microM ha ridotto i livelli di tutti DMBA-DNA addotti da 55-98%. L&#39;effetto pi&ugrave; drammatico &egrave; stato osservato nel caso di acido tannico, che completamente inibito che la formazione di DMBA-dAdo addotti. L&#39;acido clorogenico &egrave; stato che il meno efficacia inibitore di DMBA-DNA addotti formazione particolarmente syn-DMBADE-dAdo (20%). Neutrofili umani hanno mostrato una significativa diminuzione dose-correlata della chemiluminescenza TPA-indotta dopo pretrattamento con composti fenolici. Gli inibitori pi&ugrave; efficaci sono l&#39;acido tannico e resveratrolo con IC (50) = 5.19 e 5,76 microM, rispettivamente. Questi risultati suggeriscono che la soppressione delle specie reattive dell&#39;ossigeno (ROS) e cancerogeno-DNA addotti formazione pu&ograve; essere importante per attivit&agrave; antitumorali dei composti fenolici esaminati.

L&#39;effetto dei composti fenolici vegetali sulla formazione di 7,12-dimethylbenz [a] antracene-DNA addotti e chemiluminescenza TPA-stimolato i neutrofili polimorfonucleati in vitro.

&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x6210;&#x5206;&#x306F;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x98DF;&#x4E8B;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4E00;&#x90E8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5316;&#x5B66;&#x4E88;&#x9632;&#x85AC;&#x3068;&#x898B;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x30BF;&#x30F3;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30AB;&#x30C6;&#x30AD;&#x30E5;&#x9178;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;&#x30EC;&#x30B9;&#x30D9;&#x30E9; &#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB; &#x30B3;&#x30D0;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB; 7, 12-&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E; [a] &#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30BB;&#x30F3; &#xFF08;DMBA) dna &#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5916;&#x7D50;&#x5408;&#x963B;&#x5BB3;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3057;&#x3001;12-O-&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C7;&#x30AB;&#x30CE;&#x30A4;&#x30EB;&#x30DB;&#x30EB; &#x30DC;&#x30FC;&#x30EB; 13-&#x30A2;&#x30BB;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067; (TPA) &#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;-&#x523A;&#x6FC0;&#x591A;&#x5F62;&#x6838;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403; (PMNs)&#x3002;DNA &#x306E; 32 P postlabeling &#x89E3;&#x6790;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8; DMBA &#x3092; &#xFF08;3-MC&#xFF09; 3-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EC;&#x30F3;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;-&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x4E09;&#x5927;&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x7531;&#x6765;&#x6297;-&#x3001;syn &#x3068;&#x53CD;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B8; &#x30A8;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9; dGuo &#x3068;&#x8170;&#x7FBD;&#x76EE;&#x3001;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x8A98;&#x767A;&#x3002;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E; 150 microM &#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11; DMBA DNA &#x30A2;&#x30C0;&#x30AF;&#x30C8; 55 98 &#xFF05;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x306E;&#x5F62;&#x6210; DMBA &#x8170;&#x7FBD;&#x76EE;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; DMBA dna &#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x7279;&#x306B; syn DMBADE &#x8170;&#x7FBD;&#x76EE; &#xFF08;20 &#xFF05;&#xFF09; &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3072;&#x3068;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x3068;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x5F8C; TPA &#x8A98;&#x767A;&#x5316;&#x5B66;&#x767A;&#x5149;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x7528;&#x91CF;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30EC;&#x30B9;&#x30D9;&#x30E9; &#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068; IC (50) = 5.19 &#x3068; 5.76 microM &#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3002;&#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E; (ROS) &#x3068;&#x767A;&#x764C;&#x7269;&#x8CEA; DNA &#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x691C;&#x8A0E;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x6027;&#x6297;&#x767A;&#x764C;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

7, 12 &#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x6027; [a] &#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30BB;&#x30F3;-DNA &#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x304A;&#x3088;&#x3073; TPA &#x523A;&#x6FC0;&#x591A;&#x5F62;&#x6838;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x767A;&#x5149;&#x306E; in vitro &#x3067;&#x3002;

Phenolics, &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC131;&#xBD84; &#xC778;&#xAC04; &#xADDC;&#xC815;&#xC2DD;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; chemopreventive &#xB300;&#xB9AC;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; resveratrol, chlorogenic &#xC0B0; protocatechuic &#xC0B0; &#xD0C0; &#xB2CC; &#xC0B0; &#xB4F1; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; phenolics 7,12 dimethylbenz&#xC758; &#xACF5;&#xC720; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; dna &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; [a] anthracene (DMBA)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; 12 O-tetradecanoylphorbol-13-&#xCD08; &#xC0B0; (TPA)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8;-&#xC778;&#xAC04;&#xC758; polymorphonuclear neutrophils (PMNs) &#xC790;&#xADF9;. 3-Methylcholanthrene (3-&#xC5E0;&#xC528;) &#xC874;&#xC7AC; DMBA&#xC640; incubated DNA&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; 32 P postlabeling-microsomes &#xC0DD;&#xC0B0;&#xB41C; 3 &#xC8FC;&#xC694; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC548;&#xD2F0;-syn &#xBC0F; &#xC548;&#xD2F0; dihydrodiol epoxides Dguo&#xC640; &#xB2E4;&#xB3C4;, &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC01;&#xAC01; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC720;&#xB3C4;. &#xD398; &#xB180; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; 150 microM &#xB18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC218;&#xC900;&#xC758; DMBA DNA &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C; 55-98%. &#xAC00;&#xC7A5; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xACFC; DMBA &#xB2E4; &#xD615;&#xC131; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC800;&#xD574; &#xD0C0; &#xB2CC; &#xC0B0;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xB294; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Chlorogenic &#xC0B0; DMBA DNA&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C; &#xD615;&#xC131; &#xD2B9;&#xD788; syn-DMBADE-&#xB2E4;&#xB3C4; (20%) &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; &#xD398; &#xB180; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xACFC; &#xC804;&#xCC98;&#xB9AC; &#xD6C4; TPA &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xD654;&#xD559;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xAD00;&#xB828; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xC7A5; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC800; &#xD574;&#xC81C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xD0C0; &#xB2CC; &#xC0B0; IC (50)&#xC640; &#xB808; &#xC2A4; &#xBCA0;&#xB77C; &#xD2B8;&#xB864; 5.19&#xC640; 5.76 microM &#xAC01;&#xAC01; =. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xC608;&#xC0C1;&#xD560; &#xC218; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885; (&#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;)&#xC640; &#xBC1C;&#xC554; &#xBB3C;&#xC9C8;-DNA&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C; &#xD615;&#xC131; &#xAC80;&#xC0AC; phenolics&#xC758; &#xBBF8; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

7,12 Dimethylbenz &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xACF5;&#xC7A5; phenolics&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; [a] anthracene DNA &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C; &#xBC0F; TPA &#xC790;&#xADF9; polymorphonuclear &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; &#xD654;&#xD559; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C;.

Fenoles, componentes comunes en planta, forman encima una parte importante de la dieta humana y son considerados a potenciales agentes quimiopreventivos. En el presente estudio, estructuralmente diversos fenoles, como el &aacute;cido clorog&eacute;nico, &aacute;cido t&aacute;nico, &aacute;cido protocatechuico y resveratrol, fueron investigados por sus efectos inhibitorios sobre la uni&oacute;n covalente de 7,12-dimethylbenz [a] antraceno (DMBA) al ADN in vitro y la supresi&oacute;n de oxidativo estall&oacute; en 12-O-Tetradecanoilforbol-13-acetato (TPA)-estimulado humanos neutr&oacute;filos polimorfonucleares (PMN). 32 P-postlabeling de an&aacute;lisis de ADN se incubaron con DMBA en presencia de 3-metilcolantreno (3-MC)-inducida microsomas producido tres principales aductos derivados de anti-, ep&oacute;xidos syn - y anti-dihydrodiol a trav&eacute;s de reacciones con dGuo y dAdo, respectivamente. Compuestos fen&oacute;licos en la concentraci&oacute;n de 150 microM redujeron los niveles de todo DMBA-DNA aductos por 55-98%. El efecto m&aacute;s dram&aacute;tico fue observado en caso de &aacute;cido t&aacute;nico, que inhibe completamente que la formaci&oacute;n de DMBA-Lambris aductores. &Aacute;cido clorog&eacute;nico fue que el menos efectivo inhibidor de DMBA-DNA aductos formaci&oacute;n particularmente syn-DMBADE-Lambris (20%). Neutr&oacute;filos humanos mostraron una disminuci&oacute;n significativa de relacionado con la dosis de quimioluminiscencia inducida por TPA despu&eacute;s del tratamiento previo con compuestos fen&oacute;licos. Los inhibidores m&aacute;s eficaces fueron &aacute;cido t&aacute;nico y resveratrol con IC (50) = 4.46 y 5.76 microM, respectivamente. Estos resultados sugieren que la supresi&oacute;n de especies reactivas del ox&iacute;geno (ROS) y DNA-carcin&oacute;geno aductores de formaci&oacute;n puede ser importante para la actividad anticancer&iacute;gena de los fenoles examinados.

El efecto de resinas fen&oacute;licas de la planta en la formaci&oacute;n de 7,12-dimethylbenz aductos de ADN [a] antraceno y quimioluminiscencia TPA-estimulado polimorfonucleares neutr&oacute;filos in vitro.

&#x4EBA;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (hMSC) &#x83B7;&#x5F97;&#x4E86;&#x76F8;&#x5F53;&#x5927;&#x7684;&#x5174;&#x8DA3;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5176;&#x6F5C;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66FF;&#x4EE3;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E0E;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x7B56;&#x7565;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x690D;&#x5165;&#x524D;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x53EF;&#x4EE5;&#x662F;&#x5FC3;&#x810F;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x6307;&#x6807;&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#x6709;&#x7684;&#x672A;&#x5206;&#x5316;&#x7684; hMSC &#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x884C;&#x4E3A;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x8D44;&#x6599;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x4F7F;&#x7528;&#x534A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;-&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; 26 &#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x57FA; mRNA &#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x8BB0;&#x5F55;&#x8DE8;&#x819C;&#x79BB;&#x5B50;&#x7535;&#x6D41;&#x4E0E;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x9AA8;&#x9AD3; hMSC &#x88AB;&#x4ECE;&#x5065;&#x5EB7;&#x7684;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x3002;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053; mRNA &#x4E0E;&#x4E00;&#x4E9B;&#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x57FA; &#xFF08;&#x5982; Kv4.2&#x3001; Kv4.3&#x3001; MaxiK&#x3001; HCN2 &#x548C; alpha1C &#x7684; L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;) &#x7684;&#x9AD8;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x5916;&#x5411;&#x7535;&#x6D41;&#x5171;&#x5F55;&#x5F97;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6700;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x5916;&#x5411;&#x5F53;&#x524D;&#x8FC5;&#x901F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6F5C;&#x80FD;&#x79EF;&#x6781;&#x5230; + 20 &#x5728; mV&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7535;&#x6D41;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x5927;&#x7535;&#x5BFC;&#x7535;&#x538B;&#x548C; Ca(2+)-&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5F53;&#x524D;&#xFF0C;K(+) &#x8FDB;&#x884C;&#x7684; MaxiK &#x9891;&#x9053;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x7684;&#x4E59;&#x57FA; (IC(50) = 340 microm&#xFF09; &#x548C; 100 nm iberiotoxin &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5F88;&#x5927;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E;&#x66F4;&#x7F13;&#x6162;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5F53;&#x524D;&#x79EF;&#x6781;&#x5230;&#x96F6;&#x4E0B; 30 &#x5EA6;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x5728; mV&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7535;&#x6D41;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x6291;&#x5236;&#x7531; clofilium (IC(50) = 0.8 microm&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E86; Ba(2+) &#x62B5;&#x6E2F;&#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684; 1 microm BayK 8644&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x7684;&#x529F;&#x80FD; L &#x578B;&#x7ECF;&#x6E20;&#x9053;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x94A0;&#x7535;&#x6D41;&#x6216;&#x5185;&#x5411;&#x6574;&#x6D41;&#x7535;&#x6D41;&#x7B49;&#x5176;&#x4ED6;&#x5916;&#x6765;&#x7535;&#x6D41;&#x662F;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x4E0D;&#x540C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x672A;&#x5206;&#x5316;&#x7684; hMSC &#x5FEB;&#x4EF6;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5BF9;&#x751F;&#x7406;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x3002;

Human mesenchymal stem cells (hMSC) have gained considerable interest due to their potential use for cell replacement therapy and tissue engineering. One strategy is to differentiate these bone marrow stem cells in vitro into cardiomyocytes prior to implantation. In this context ion channels can be important functional markers of cardiac differentiation. At present there is little information about the electrophysiological behaviour of the undifferentiated hMSC. We therefore investigated mRNA expression of 26 ion channel subunits using semiquantitative RT-PCR and recorded transmembrane ion currents with the whole-cell voltage clamp technique. Bone marrow hMSC were obtained from healthy donors. The cells revealed a distinct pattern of ion channel mRNA with high expression levels for some channel subunits (e.g. Kv4.2, Kv4.3, MaxiK, HCN2, and alpha1C of the L-type calcium channel). Outward currents were recorded in almost all cells. The most abundant outward current rapidly activated at potentials positive to +20 mV. This current was identified as a large-conductance voltage- and Ca(2+)-activated K(+) current, conducted by MaxiK channels, due to its high sensitivity to tetraethylammonium (IC(50)= 340 microm) and its inhibition by 100 nm iberiotoxin. A large fraction of cells also demonstrated a more slowly activating current at potentials positive to -30 mV. This current was selectively inhibited by clofilium (IC(50)= 0.8 microm). Ba(2+) inward currents, stimulated by 1 microm BayK 8644 were found in a few cells, indicating the expression of functional L-type Ca(2+) channels. Other inward currents such as sodium currents or inward rectifier currents were absent. We conclude that undifferentiated hMSC express a distinct pattern of ion channel mRNA and functional ion channels that might contribute to physiological cell function.

Electrophysiological properties of human mesenchymal stem cells.

Les cellules souches m&eacute;senchymateuses humaines (CSAH) a acquis un int&eacute;r&ecirc;t consid&eacute;rable en raison de leur potentiel d&#39;utilisation pour la th&eacute;rapie de remplacement cellulaire et ing&eacute;nierie tissulaire. Une strat&eacute;gie consiste &agrave; diff&eacute;rencier ces cellules souches de moelle osseuse in vitro dans les cardiomyocytes avant l&#39;implantation. Dans ce contexte, canaux ioniques peuvent &ecirc;tre des marqueurs fonctionnels importants de diff&eacute;renciation cardiaque. &Agrave; l&#39;heure actuelle, il y a peu d&#39;informations sur le comportement &eacute;lectrophysiologique de la CSAH indiff&eacute;renci&eacute;e. Donc, nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;expression des ARNm des sous-unit&eacute;s de canal ionique 26 par RT-PCR semi-quantitative et enregistr&eacute; les courants ioniques transmembranaires avec la technique de bride de tension de la cellule enti&egrave;re. Moelle osseuse CSMH proviennent de donneurs sains. Les cellules ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; un mod&egrave;le distinct d&#39;ion ARNm du canal avec les niveaux d&#39;expression &eacute;lev&eacute;s pour quelques sous-unit&eacute;s du canal (par exemple Kv4.2, Kv4.3, MaxiK HCN2 et alpha1C du canal calcique de type L). Courants sortants ont &eacute;t&eacute; enregistr&eacute;es dans presque toutes les cellules. Le courant sortant plus abondant rapidement activ&eacute; &agrave; des potentiels positifs &agrave; + 20 mV. Ce courant a &eacute;t&eacute; identifi&eacute; comme une grande conductance et Ca(2+)-activ&eacute;s par le voltage k (+) actuel, dirig&eacute; par canaux MaxiK, en raison de sa grande sensibilit&eacute; aux t&eacute;tra&eacute;thylammonium (IC (50) = 340 microm) et son inhibition par 100 nm ib&eacute;riotoxine. Une grande partie des cellules a &eacute;galement d&eacute;montr&eacute; une plus lentement activant actuel &agrave; des potentiels positifs &agrave; -30 mV. Ce courant a &eacute;t&eacute; s&eacute;lectivement inhib&eacute; par clofilium (IC (50) = 0,8 microm). BA(2+) les courants entrants, stimul&eacute;es par 1 microm BayK 8644 trouv&eacute;es dans quelques cellules, indiquant l&#39;expression des canaux de type L heterodimeric fonctionnels. Autres courants entrants tels que les courants de sodium ou courants de redresseur entrant &eacute;taient absents. Nous concluons que CSMH indiff&eacute;renci&eacute;es express un patron distinct d&#39;ion channel ARNm et fonction de cellule de canaux ioniques fonctionnelle qui pourraient contribuer &agrave; physiologique.

Propri&eacute;t&eacute;s &eacute;lectrophysiologiques des cellules souches m&eacute;senchymateuses.

Elektrophysiologische Eigenschaften von humanen mesenchymalen Stammzellen.

Cellule staminali mesenchimali umane (hMSC) hanno guadagnato notevole interesse a causa della loro potenziale utilizzo per la terapia di sostituzione cellulare e ingegneria dei tessuti. Una strategia &egrave; di differenziare queste cellule staminali del midollo osseo in vitro in cardiomiociti prima dell&#39;impianto. In questo contesto canali ionici possono essere importanti marcatori funzionali di differenziazione cardiache. Attualmente ci sono poche informazioni circa il comportamento elettrofisiologico delle hMSC indifferenziato. Abbiamo quindi studiato espressione del mRNA di 26 subunit&agrave; di canale ionico mediante RT-PCR semiquantitativa e registrato correnti di ioni transmembrana con la tecnica del morsetto di tensione cellule intere. Midollo osseo hMSC sono stati ottenuti da donatori sani. Le cellule hanno rivelato un modello distinto di ione canale mRNA con livelli elevati di espressione per alcune subunit&agrave; del canale (ad esempio Kv4.2, Kv4.3, MaxiK, HCN2 e alpha1C del canale del calcio di tipo L). In quasi tutte le cellule sono state registrate le correnti verso l&#39;esterno. La corrente verso l&#39;esterno pi&ugrave; abbondante attivata rapidamente a potenziali positivi a + 20 mV. Questa corrente &egrave; stata identificata come una grande conduttanza voltaggio - e Ca(2+)-attivato K(+) corrente, condotta da canali MaxiK, a causa della sua elevata sensibilit&agrave; di tetraetilammonio (IC(50) = 340 microm) e la sua inibizione da 100 nm iberiotoxin. Una grande frazione delle cellule ha anche dimostrato un pi&ugrave; lentamente attivazione corrente a potenziali positivi di -30 mV. Questa corrente &egrave; stata inibita selettivamente da clofilium (IC(50) = 0.8 microm). BA(2+) correnti verso l&#39;interno, stimolate da 1 microm 8644 BayK sono state trovate in alcune cellule, che indica l&#39;espressione dei canali L-type Ca(2+) funzionali. Altre correnti verso l&#39;interno come le correnti di sodio o raddrizzatore inward correnti erano assenti. Concludiamo quello indifferenziato hMSC espresso un distinto pattern di ione canale mRNA e canali ionici funzionali che potrebbero contribuire al fisiologico delle cellule funzione.

Propriet&agrave; elettrofisiologiche di cellule staminali mesenchimali umane.

&#x30D2;&#x30C8;&#x9593;&#x8449;&#x7CFB;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; (&#x7ACB;&#x4F53;&#x7684;) &#x30BB;&#x30EB;&#x7F6E;&#x63DB;&#x7642;&#x6CD5;&#x3068;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CB;&#x30A2; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x95A2;&#x5FC3;&#x3092;&#x5F97;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1 &#x3064;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; in vitro &#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6CE8;&#x5165;&#x524D;&#x306B;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x6642;&#x70B9;&#x3067;&#x306F;&#x672A;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x7684;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x632F;&#x308B;&#x821E;&#x3044;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x5C11;&#x3057;&#x60C5;&#x5831;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684; RT-PCR &#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; 26 &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; mRNA &#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x96FB;&#x6D41;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x96FB;&#x5727;&#x3092;&#x8A18;&#x9332;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5065;&#x5EB7;&#x306A;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7ACB;&#x4F53;&#x7684;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B; mRNA &#x3068;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4E9C;&#x5358;&#x4F4D; (&#x4F8B;&#x3048;&#x3070; Kv4.2&#x3001;Kv4.3&#x3001;MaxiK&#x3001;HCN2&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; alpha1C L &#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;) &#x9AD8;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5916;&#x5411;&#x304D;&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x307C;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x8A18;&#x9332;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6025;&#x901F;&#x306B; +20 &#x3059;&#x308B;&#x6B63;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3067;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x5916;&#x5411;&#x304D;&#x96FB;&#x6D41; mV&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;&#x5927;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x96FB;&#x5727;- &#x3068; Ca(2+) - &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; MaxiK &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3057;&#x305F;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x305F; &#xFF08;ic50 &#x5024; &#xFF08;50 = 340 microm) &#x3068; 100 nm iberiotoxin &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3086;&#x3063;&#x304F;&#x308A;&#x3068;-30 &#x304B;&#x3089;&#x6B63;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3067;&#x73FE;&#x5728;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x5B9F;&#x8A3C; mV&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x306F; clofilium &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F; (ic50 &#x5024; &#xFF08;50 = 0.8 microm&#xFF09;&#x3002;Ba(2+) &#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x96FB;&#x6D41;&#x3001;1 microm BayK 8644 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x523A;&#x6FC0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5C11;&#x6570;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A; L &#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x96FB;&#x6D41;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x96FB;&#x6D41;&#x3084;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x306A;&#x3069;&#x304C;&#x6B20;&#x5E2D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x672A;&#x5206;&#x5316;&#x7ACB;&#x4F53;&#x7684;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; mRNA &#x3068;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;&#x9593;&#x8449;&#x7CFB;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3002;

&#xC778;&#xAC04; &#xC911;&#xAC04; &#xC5FD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (hMSC)&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xCCB4; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xC870;&#xC9C1; &#xACF5;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC744; &#xC5BB;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC804;&#xB7B5;&#xC740; &#xC774;&#xC2DD; &#xC804;&#xC5D0; cardiomyocytes&#xB85C;&#xC774; &#xACE8; &#xC218; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xD654;. &#xC774;&#xB7F0;&#xC774; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; undifferentiated hMSC electrophysiological &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC791;&#xC740; &#xC815;&#xBCF4;&#xAC00; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; semiquantitative RT-PCR&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; 26 &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; mRNA &#xD45C;&#xD604; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAE30;&#xC220;&#xACFC; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC774;&#xC628; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xAE30;&#xB85D;. &#xACE8; &#xC218; hMSC &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xC5BB;&#xC740; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC140; &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xBC1D;&#xD600; &#xC77C;&#xBD80; &#xCC44;&#xB110; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (&#xC608;: Kv4.2, Kv4.3, MaxiK, HCN2, &#xBC0F; L-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; alpha1C)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xC900; &#xB192;&#xC740; &#xC2DD; Mrna&#xB97C; &#xCC44;&#xB110;. &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xB958;&#xB294; &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC140;&#xC5D0; &#xAE30;&#xB85D; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; + 20 &#xC591;&#xC218; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD604;&#xC7AC; &#xBBA4;&#xC9C1; &#xBE44;&#xB514;&#xC624;. &#xC774; &#xC804;&#xB958;&#xB294; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xB85C; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xD070; &#xC804;&#xC555; &#xBC0F; Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654;-K(+) &#xD604;&#xC7AC;, tetraethylammonium &#xB192;&#xC740; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC778;&#xD574; MaxiK &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2E4;&#xC2DC; (IC(50) = 340 microm)&#xC640; 100 nm iberiotoxin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC140;&#xC758; &#xD070; &#xBD84;&#xC218; &#xB610;&#xD55C; &#xCC9C;&#xCC9C;&#xD788; &#xC804;&#xB958;-30&#xC5D0; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB354; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xBBA4;&#xC9C1; &#xBE44;&#xB514;&#xC624;. &#xC774; &#xC804;&#xB958;&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; clofilium&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; (IC(50) = 0.8 microm). Ba(2+) &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xB958;, 1 microm BayK 8644 &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5; L &#xD0C0;&#xC785; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xC804;&#xB958; &#xB610;&#xB294; &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; &#xC804;&#xB958; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC804;&#xB958; &#xACB0; &#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xACB0;&#xB860;&#xC744; &#xADF8; undifferentiated hMSC &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD328;&#xD134;&#xC758; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; mRNA &#xBC0F; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xC140; &#xD568;&#xC218;.

&#xC778;&#xAC04; &#xC911;&#xAC04; &#xC5FD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; electrophysiological &#xC18D;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las c&eacute;lulas madre mesenquimales humanas (hMSC) han ganado un gran inter&eacute;s debido a su uso potencial para la terapia de reemplazo de la c&eacute;lula y la ingenier&iacute;a de tejidos. Una estrategia es diferenciar estas c&eacute;lulas madre de m&eacute;dula &oacute;sea in vitro en cardiomiocitos antes de la implantaci&oacute;n. En este contexto canales i&oacute;nicos pueden ser marcadores funcionales importantes de diferenciaci&oacute;n cardiaca. En la actualidad existe poca informaci&oacute;n sobre el comportamiento electrofisiol&oacute;gico de la hMSC indiferenciado. Por lo tanto investigamos la expresi&oacute;n del mRNA de 26 subunidades del canal i&oacute;nico usando RT-PCR semicuantitativa y registr&oacute; corrientes transmembrana ion con la t&eacute;cnica de la abrazadera de tensi&oacute;n de c&eacute;lulas completas. HMSC de m&eacute;dula &oacute;sea se obtuvieron de donantes sanos. Las c&eacute;lulas revelaron un patr&oacute;n distinto del ion del mRNA del canal con niveles de alta expresi&oacute;n para algunas subunidades del canal (por ejemplo Kv4.2, Kv4.3, MaxiK, HCN2 y alpha1C de los canales de calcio tipo L). Corrientes externas se registraron en casi todas las c&eacute;lulas. La m&aacute;s abundante corriente hacia fuera r&aacute;pidamente activada en potenciales positivos a + 20 mV. Esta corriente fue identificada como un gran conductancia voltaje - y Ca(2+)-activa capacidad actual, llevada a cabo por los canales MaxiK, debido a su alta sensibilidad a Tetraetilamonio (IC(50) = 340 microm) y su inhibici&oacute;n por 100 nm iberiotoxin. Una gran parte de las c&eacute;lulas tambi&eacute;n demostr&oacute; m&aacute;s lentamente activar actual en potenciales positivos a -30 mV. Esta corriente fue inhibida selectivamente por clofilium (IC(50) = 0,8 microm). BA(2+) corrientes hacia adentro, estimuladas por 1 microm BayK 8644 fueron encontradas en algunas c&eacute;lulas, indicando la expresi&oacute;n de canales de tipo L de CA funcionales. Otras corrientes hacia adentro como corrientes de sodio o rectificador interno corrientes estuvieron ausentes. Concluimos eso hMSC indiferenciado exprese un patr&oacute;n distinto del ion del canal mRNA y funci&oacute;n de la c&eacute;lula de canales del ion funcionales que puedan contribuir a fisiol&oacute;gica.

Propiedades electrofisiol&oacute;gicas de las c&eacute;lulas madre mesenquimales humanas.

&#x6162;&#x6027;&#x5FC3;&#x623F;&#x98A4;&#x52A8; (&#x623F;&#x98A4;) &#x662F;&#x4E0E;&#x7F29;&#x77ED;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x65F6;&#x7A0B; (APD)&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6D89;&#x53CA;&#x6539;&#x6027;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5FC3;&#x623F;&#x79BB;&#x5B50;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5F88;&#x5C11;&#x77E5;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; ATP &#x654F;&#x611F; K(+) &#x6E20;&#x9053; (I(K,ATP)) &#x671F;&#x95F4;&#x6162;&#x6027;&#x623F;&#x98A4;&#x3002;AF &#x76F8;&#x5173;&#x7684; I(K,ATP) &#x6D3B;&#x52A8;&#x4E2D;&#x589E;&#x52A0;&#x5C06;&#x51CF;&#x5C11; APD&#xFF0C;&#x5E76;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x53D1;&#x8D77;&#x548C;/&#x6216;&#x81EA;&#x52A8;&#x5BF9;&#x7126;&#x7684;&#x5EF6;&#x7EED;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x7684; I(K,ATP) &#x4ECE;&#x7AA6;&#x6027;&#x5FC3;&#x5F8B; (SR) &#x60A3;&#x8005;&#x5FC3;&#x623F;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x6162;&#x6027;&#x623F;&#x98A4;&#x3002;&#x5FC3;&#x623F;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x9694;&#x79BB;&#x7684;&#x5FC3;&#x623F;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4ECE;&#x75C5;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x810F;&#x76F4;&#x89C6;&#x624B;&#x672F;&#x83B7;&#x5F97;&#x3002;&#x5185;&#x5411;&#x6574;&#x6D41;&#x7535;&#x6D41;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E0E;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#x901A;&#x8FC7;&#x5E94;&#x7528;&#x9664;&#x531D;&#x9053;&#x8109;&#x51B2; (1245 ms) &#x4ECE;-100 &#x5230; + 40 mV (0.5 Hz)&#x3002;I(K,ATP) &#x4E0E; I(K,ATP) &#x901A;&#x9053;&#x5F00;&#x7F50;&#x5668; rilmakalim &#x5DF2;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x5916;&#x6765;&#x7684;&#x6574;&#x6D41;&#x5668;&#x7531; 1 &#x6BEB;&#x7C73; Ba(2+) &#x5BF9;&#x5176;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86; I(K1) &#x548C; I(K,ATP)&#x3002;I(K1) &#x5BC6;&#x5EA6;&#x4E0D;&#x5F02;&#x623F;&#x98A4;&#x60A3;&#x8005;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x5728;-100 mV&#xFF1A;-14.8 + /-1.3 pA/pF&#xFF0C;n = 38/10 &#xFF08;&#x5355;&#x5143;&#x683C;/&#x75C5;&#x4EBA;&#xFF09;) &#x548C;&#x9536; (-13.8 + /-1.5 pA/pF&#xFF0C;n = 33/16&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;rilmakalim (0.3-10 microM&#xFF09; &#x6D53;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x5730;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E86; I(K,ATP) &#xFF08;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E3A; rilmakalim &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7535;&#x6D41;&#xFF09;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;I(K,ATP) &#x4E0E; 10 microM rilmakalim &#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x8F83;&#x5C0F; SR &#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD4; AF (&#x5728;-100 mV&#xFF1A;-5.3 + /-0.8 pA/pF&#xFF0C;n = 22/7 &#x4E0E;-11.2 + /-2.9 pA/pF&#xFF0C;n = 19/9 &#xFF1B; &#x5728; + 40 mV&#xFF1A; +9.6 + /-2.1 pA/pF&#xFF0C;n = 22/7 +23.7 + /-3.4 pA/pF&#xFF0C;n &#x4E0E;&#x5206;&#x522B; &#xFF1B; &#x81EA;&#x52A8;&#x5BF9;&#x7126;&#x548C;&#x9536;&#x3001; = 19/9P &lt; 0.05&#xFF09;&#x3002;&#x53EA;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x74E3;&#x75C5;&#x53D8;&#x53CA;&#x80BA;&#x52A8;&#x8109;&#x9AD8;&#x538B;&#x8981;&#x72EC;&#x7ACB;&#x8D21;&#x732E;&#x8005; I(K,ATP) &#x7535;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BC1;&#x636E;&#x6162;&#x6027;&#x623F;&#x98A4;&#x662F;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; ATP &#x654F;&#x611F; K(+) &#x7535;&#x6D41;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x66F4;&#x6539;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x63D0;&#x4F9B;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x6162;&#x6027;&#x623F;&#x98A4;&#x7535;&#x91CD;&#x6784;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x5728;&#x6162;&#x6027;&#x5FC3;&#x623F;&#x98A4;&#x52A8;&#x60A3;&#x8005;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684; ATP &#x654F;&#x611F; K(+) &#x7535;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3002;

Chronic atrial fibrillation (AF) is associated with shortening of action potential duration (APD), which involves modified activity of atrial ion currents. However, little is known about the activity of ATP-sensitive K(+) channels (I(K,ATP)) during chronic AF. An AF-related increase in the activity of I(K,ATP) would reduce APD and could contribute to initiation and/or perpetuation of AF. Here, we studied the activity of I(K,ATP) in atrial myocytes from patients with sinus rhythm (SR) and chronic AF. Human atrial myocytes were isolated from atrial tissue obtained from patients undergoing open-heart surgery. Inward rectifier currents were measured with the whole-cell patch-clamp technique by applying a depolarizing ramp pulse (1245 ms) from -100 to +40 mV (0.5 Hz). I(K,ATP) was activated with the I(K,ATP) channel opener rilmakalim. The inward rectifier I(K1) and I(K,ATP) were identified by their sensitivity to 1 mM Ba(2+). Density of I(K1) did not differ between cells from patients with AF (at -100 mV: -14.8 +/- 1.3 pA/pF, n = 38/10 (cells/patients)) and SR (-13.8 +/- 1.5 pA/pF, n = 33/16). In both types of cells, rilmakalim stimulated I(K,ATP) (defined as rilmakalim-inducible current) in a concentration-dependent manner (0.3-10 microM). However, maximum activation of I(K,ATP) with 10 microM rilmakalim was smaller in AF than in SR cells (at -100 mV: -5.3 +/- 0.8 pA/pF, n = 22/7 vs. -11.2 +/- 2.9 pA/pF, n = 19/9; at +40 mV: +9.6 +/- 2.1 pA/pF, n = 22/7 vs. +23.7 +/- 3.4 pA/pF, n = 19/9 for AF and SR, respectively; P < 0.05). Only aortic valve disease and pulmonary hypertension were found to be independent contributors to I(K,ATP) current density. We provide evidence that chronic AF is associated with a downregulation of ATP-sensitive K(+) currents. These changes may provide an additional molecular mechanism for electrical remodeling in chronic AF.

Decreased ATP-sensitive K(+) current density during chronic human atrial fibrillation.

Chronique fibrillation auriculaire (FA) est associ&eacute;e avec le raccourcissement de la dur&eacute;e du potentiel d&#39;action (DPA), qui implique l&#39;activit&eacute; modifi&eacute;e de courants ioniques auriculaire. Toutefois, on conna&icirc;t peu l&#39;activit&eacute; des canaux k (+) sensibles &agrave; l&#39;ATP (I(K,ATP)) pendant AF chronique. Une augmentation li&eacute;e &agrave; la AF dans l&#39;activit&eacute; de I(K,ATP) r&eacute;duirait la DGPA et pourrait contribuer &agrave; l&#39;initiation ou la perp&eacute;tuation de la FA. Ici, nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;activit&eacute; des I(K,ATP) dans les myocytes auriculaires provenant de patients avec un rythme sinusal (SR) et AF chronique. Les myocytes auriculaires humaines ont &eacute;t&eacute; isol&eacute;s de tissu auriculaire provenant de patients subissant une chirurgie &agrave; c&oelig;ur ouvert. Redresseur entrant courants ont &eacute;t&eacute; mesur&eacute;s par la technique de patch-clamp de la cellule enti&egrave;re en appliquant une impulsion de rampe d&eacute;polarisant (1245 ms) de -100 &agrave; + 40 mV (0,5 Hz). I(K,ATP) a &eacute;t&eacute; activ&eacute; avec le I(K,ATP) canal ouvre rilmakalim. Le redresseur entrant I(K1) et I(K,ATP) ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s par leur sensibilit&eacute; &agrave; 1 mM Ba(2+). Densit&eacute; de I(K1) ne diff&egrave;re pas entre les cellules de patients avec AF (&agrave; -100 mV:-14.8 +/-1,3 pA/pF, n = 38/10 (cellules/patients)) et SR (13,8 +/-1,5 pA/pF, n = 33/16). Dans les deux types de cellules, rilmakalim stimul&eacute;e par I(K,ATP) (d&eacute;fini comme le courant rilmakalim-inductible) d&#39;une mani&egrave;re dose-d&eacute;pendante (0.3-10 microM). Toutefois, l&#39;activation maximale de I(K,ATP) avec 10 microM rilmakalim est plus faible chez AF que dans les cellules de SR (&agrave; -100 mV: -5,3 +/-0,8 pA/pF, n = 22/7 vs -11,2 +/-2,9 pA/pF, n = 19/9; &agrave; + 40 mV: + 9,6 +/-2,1 pA/pF, n = 22/7 vs +23.7 +/-3,4 pA/pF, n = 19/9 pour AF et SR, respectivement ; P &lt; 0,05). Valvulopathie aortique et l&#39;hypertension art&eacute;rielle pulmonaire ont &eacute;t&eacute; end&eacute;mique contributeurs ind&eacute;pendants au I(K,ATP) densit&eacute; de courant. Nous d&eacute;montrons que AF chronique est associ&eacute;e &agrave; une diminution de l&#39;expression des courants de k (+) sensibles &agrave; l&#39;ATP. Ces changements peuvent fournir un autre m&eacute;canisme mol&eacute;culaire pour le remodelage &eacute;lectriques AF chronique.

Densit&eacute; de courant de k (+) sensibles &agrave; l&#39;ATP une diminution au cours de la fibrillation auriculaire chronique humaine.

Verminderte ATP-sensitiven K (+) Stromdichte w&#xE4;hrend der chronischen menschlichen Vorhofflimmern.

Fibrillazione atriale cronica (AF) &egrave; associata con accorciamento della durata del potenziale d&#39;azione (APD), che prevede attivit&agrave; modificata delle correnti dello ione atriale. Tuttavia, poco si sa circa l&#39;attivit&agrave; dei canali ATP-sensibili K(+) (I(K,ATP)) durante AF cronico. Un aumento dell&#39;attivit&agrave; del I(K,ATP) AF-correlati ridurrebbe APD e potrebbe contribuire all&#39;iniziazione e/o perpetuazione di AF. Qui, abbiamo studiato l&#39;attivit&agrave; di I(K,ATP) in miociti atriali nei pazienti con ritmo sinusale (SR) e AF cronico. Miociti atriali umane sono stati isolati dal tessuto atriale ottenuto da pazienti sottoposti a chirurgia a cuore aperto. Correnti di raddrizzatore verso l&#39;interno sono state misurate con la tecnica del patch-clamp cellule intere applicando un impulso depolarizing rampa (ms 1245) da -100 a + 40 mV (0,5 Hz). I(K,ATP) &egrave; stato attivato con il rilmakalim I(K,ATP) canale opener. Il raddrizzatore verso l&#39;interno I(K1) e I(K,ATP) sono stati identificati dalla loro sensibilit&agrave; di 1 mM Ba(2+). Densit&agrave; di I(K1) non differiscono tra cellule di pazienti con AF (a -100 mV:-14.8 + /-1,3 pA/pF, n = 38/10 (cellule/pazienti)) e SR (-13.8 + /-1,5 pA/pF, n = 33/16). In entrambi i tipi di cellule, rilmakalim stimolato I(K,ATP) (definito come corrente rilmakalim-inducible) in maniera concentrazione-dipendente (0,3-10 microM). Tuttavia, l&#39;attivazione massima del I(K,ATP) con 10 microM rilmakalim era pi&ugrave; piccolo in AF rispetto a cellule SR (a -100 mV: -5,3 + /-0,8 pA/pF, n = 22/7 vs 11,2 + 2,9 pA/pF, n = 19/9; a + 40 mV: +9.6 + 2,1 pA/pF, n = 22/7 vs +23.7 + 3,4 pA/pF, n = 19/9 per AF e SR, rispettivamente; P &lt; 0,05). Solo malattia della valvola aortica e ipertensione polmonare sono stati trovati per essere indipendenti hanno contribuito a densit&agrave; di corrente I(K,ATP). Forniamo prove che AF cronico &egrave; associato con una downregulation di ATP-sensibili K(+) correnti. Questi cambiamenti possono fornire un ulteriore meccanismo molecolare per rimodellamento elettrico in AF cronico.

Diminuito K(+) ATP-sensibili alla densit&agrave; di corrente durante la fibrillazione atriale cronica umana.

&#x6162;&#x6027;&#x5FC3;&#x623F;&#x7D30;&#x52D5; (AF) &#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x623F;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x6301;&#x7D9A;&#x6642;&#x9593;&#x306E; (APD) &#x306E;&#x77ED;&#x7E2E;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5C11;&#x3057; ATP &#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; &#xFF08;&#x6162;&#x6027;&#x5FC3;&#x623F;&#x7D30;&#x52D5;&#x4E2D;&#x306E; I(K,ATP)). &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;I(K,ATP) &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E; AF &#x95A2;&#x9023;&#x5897;&#x52A0;&#x3068; APD &#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x958B;&#x59CB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F; AF &#x306E;&#x6C38;&#x7D9A;&#x5316;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; I(K,ATP) &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3067;&#x6D1E;&#x8ABF;&#x5F8B; &#xFF08;SR&#xFF09; &#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x5FC3;&#x623F;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6162;&#x6027;&#x5FC3;&#x623F;&#x7D30;&#x52D5;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x5FC3;&#x623F;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x958B;&#x5FC3;&#x8853;&#x60A3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5FC3;&#x623F;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x306F;&#x3001;-100 &#x304B;&#x3089; +40 &#x306B;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7; &#x30D1;&#x30EB;&#x30B9; (1245 ms) &#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF; &#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6CD5;&#x3068;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F; mV &#xFF08;0.5 Hz&#xFF09;&#x3002;I(K,ATP) &#x306F;&#x3001;I(K,ATP) &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x9589;&#x5F0F; rilmakalim &#x3067;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574; I(K1) &#x3068; I(K,ATP) &#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x306F; 1 mM Ba(2+) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;I(K1) &#x306E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x5DEE;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F; AF &#x60A3;&#x8005;&#x7531;&#x6765;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593; (-100 mV:-14.8 &plusmn; 1.3 pA/pF&#x3001;n = 38/10 &#xFF08;&#x30BB;&#x30EB;/&#x60A3;&#x8005;&#xFF09;) &#x3068; SR (-13.8 &plusmn; 1.5 pA/pF&#x3001;n = 33/16)&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3067;&#x306F;&#x3001;rilmakalim I(K,ATP) (rilmakalim &#x8A98;&#x5C0E;&#x96FB;&#x6D41;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B9A;&#x7FA9;) &#x306F;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684; (0.3-10 microM&#xFF09; &#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;I(K,ATP) &#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; 10 microM rilmakalim &#x3068; AF &#x3088;&#x308A; SR &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x5C0F;&#x3055;&#x304B;&#x3063;&#x305F; (-100 mV:-5.3 &plusmn; 0.8 pA/pF&#x3001;n = 22/7-11.2 + 2.9 pA/pF&#x3001;n/&#x5BFE; = 19/9; +40 mV: 2.1 pA/pF&#x3001;n &#x500B;&#x306E; +/-+9.6 = 22/7 +23.7 + 3.4 pA/pF&#x3001;n/&#x5BFE; = 19/9 AF &#x3084; SR&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;;P &lt; 0.05)&#x3002;&#x306E;&#x307F;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x5F01;&#x819C;&#x75C7;&#x3068;&#x80BA;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x75C7; I(K,ATP) &#x96FB;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x8005;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6162;&#x6027;&#x5FC3;&#x623F;&#x7D30;&#x52D5;&#x304C; ATP &#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x96FB;&#x6C17;&#x6162;&#x6027;&#x5FC3;&#x623F;&#x7D30;&#x52D5;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6162;&#x6027;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x5FC3;&#x623F;&#x7D30;&#x52D5;&#x4E2D;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11; ATP &#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x96FB;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3002;

&#xB9CC;&#xC131; &#xC2EC; &#xBC29; &#xC138; &#xB3D9; (AF) &#xC2EC; &#xBC29; &#xC774;&#xC628; &#xC804;&#xB958; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC804;&#xC704; &#xAE30;&#xAC04; (APD), &#xB2E8;&#xCD95; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC57D;&#xAC04;&#xC740; ATP&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; K(+) &#xCC44;&#xB110; (&#xB9CC;&#xC131; &#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; I(K,ATP))&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;. AF &#xAD00;&#xB828; I(K,ATP)&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC00; APD&#xB97C; &#xC904;&#xC77C; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xBC0F; AF&#xC758; &#xC601;&#xAD6C; &#xD654;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBD80; &#xBE44; &#xB3D9; &#xB9AC;&#xB4EC; (SR)&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2EC; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; I(K,ATP)&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xACF5;&#xBD80; &#xBC0F; &#xB9CC;&#xC131; &#xC5B4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2EC; myocytes &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC808; &#xAC1C; &#xC218;&#xC220;&#xC744; &#xBC1B;&#xC740; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xC2EC; &#xBC29; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. -100&#xC5D0;&#xC11C; + 40 depolarizing &#xB7A8;&#xD504; &#xD384;&#xC2A4; (1245 ms)&#xB97C; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAE30;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; &#xC804;&#xB958; &#xCE21;&#xC815; mV (0.5 Hz). I(K,ATP) I(K,ATP) &#xCC44;&#xB110; &#xC624;&#xD504;&#xB108; rilmakalim&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958;&#xAE30; I(K1) &#xBC0F; I(K,ATP)&#xB294; 1 mm Ba(2+) &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Af &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC04;&#xC758; I(K1)&#xC758; &#xBC00;&#xB3C4; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xB2E4; (-100&#xC5D0;&#xC11C; mV: 1.3 pA/pF, n +-14.8 = 38/10 (&#xC140;/&#xD658;&#xC790;)) &#xBC0F; SR (1.5 pA/pF, n +-13.8 = 33/16). &#xB450; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC140; rilmakalim I(K,ATP) (rilmakalim&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC804;&#xB958;&#xB85C; &#xC815;&#xC758;)&#xB97C; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xACE0; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874; &#xBC29;&#xC2DD; (0.3-10 microM). &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; 10 microM rilmakalim&#xC640; I(K,ATP)&#xC758; &#xCD5C;&#xB300; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; SR &#xC140;&#xC5D0; &#xC5B4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC791;&#xB2E4; (-100&#xC5D0;&#xC11C; mV: 0.8 pA/pF, n +-5.3 = 22/7 &#xB300; 2.9 pA/pF, n +-11.2 = 19/9; + 40 mV: 2.1 pA/pF, n + +9.6 = 22/7 3.4 pA/pF, n + +23.7 &#xB300; = 19/9 AF&#xC640; SR, &#xAC01;&#xAC01;; P &lt; 0.05). &#xB9CC; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5; &#xBC38;&#xBE0C; &#xC9C8;&#xD658; &#xBC0F; &#xD3D0; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xACE0;&#xD608;&#xC555; I(K,ATP) &#xC804;&#xB958; &#xBC00;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xCC38;&#xC5EC;&#xC790; &#xC218; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB9CC;&#xC131; &#xC5B4;&#xB294; ATP&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; K(+) &#xC804;&#xB958; downregulation&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC740; &#xB9CC;&#xC131; &#xC5B4;&#xC5D0; &#xC804;&#xAE30; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xCD94;&#xAC00;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB9CC;&#xC131; &#xC2EC; &#xBC29; &#xC138; &#xB3D9; &#xC911; &#xAC10;&#xC18C; ATP&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; K(+) &#xC804;&#xB958; &#xBC00;&#xB3C4;.

Cr&oacute;nica fibrilaci&oacute;n auricular (FA) se asocia con el acortamiento de la duraci&oacute;n del potencial de acci&oacute;n (APD), que implica la actividad modificada de corrientes de iones atrial. Sin embargo, poco se sabe sobre la actividad de los canales de k sensibles a ATP (I(K,ATP)) durante el AF cr&oacute;nica. Un aumento relacionado con la AF en la actividad de I(K,ATP) reducir&iacute;a APD y podr&iacute;a contribuir a la iniciaci&oacute;n o la perpetuaci&oacute;n de la FA. Aqu&iacute;, se estudi&oacute; la actividad de I(K,ATP) en miocitos atriales de pacientes con ritmo sinusal (SR) y AF cr&oacute;nica. Miocitos atriales humanas fueron aislados de tejido auricular Obtenido de pacientes sometidos a cirug&iacute;a a coraz&oacute;n abierto. Las corrientes internas del rectificador se midieron con la t&eacute;cnica de patch-clamp de c&eacute;lulas completas aplicando un pulso de rampa de despolarizaci&oacute;n (1245 ms) de -100 a + 40 mV (0,5 Hz). I(K,ATP) se activ&oacute; con la rilmakalim de abridor de canal I(K,ATP). El rectificador interno I(K1) y I(K,ATP) fueron identificados por su sensibilidad a 1 mM Ba(2+). Densidad de I(K1) no difiri&oacute; entre las c&eacute;lulas de pacientes con FA (a -100 mV:-14.8 +/-1,3 pA/pF, n = 38/10 (c&eacute;lulas/pacientes)) y SR (-13.8 +/-1.5 pA/pF, n = 33/16). En ambos tipos de c&eacute;lulas, rilmakalim estimula I(K,ATP) (definida como corriente rilmakalim-inducible) de una manera dependiente de la concentraci&oacute;n (0.3-10 microM). Sin embargo, fue menor en AF que en c&eacute;lulas SR m&aacute;xima activaci&oacute;n de I(K,ATP) con 10 microM rilmakalim (a -100 mV:-5.3 +/-0.8 pA/pF, n = 22/7 vs-11.2 +/-2.9 pA/pF, n = 19/9; en + 40 mV: +9.6 +/-2.1 pA/pF, n = 22/7 vs +23.7 +/-3.4 pA/pF, n = 19/9 para AF y SR, respectivamente; P &lt; 0.05). S&oacute;lo la valvulopat&iacute;a a&oacute;rtica e hipertensi&oacute;n pulmonar fueron encontrados para ser colaboradores independientes a la densidad de corriente I(K,ATP). Proporcionamos evidencia que AF cr&oacute;nica se asocia con una regulaci&oacute;n a la baja de corrientes de k sensibles a ATP. Estos cambios pueden proporcionar un mecanismo molecular adicional para remodelado el&eacute;ctrico en AF cr&oacute;nica.

Disminuci&oacute;n capacidad ATP-sensibles a la densidad de corriente durante la fibrilaci&oacute;n auricular cr&oacute;nica humana.

&#x9274;&#x5B9A;&#x4EE5;&#x8C03;&#x8282;&#x8180;&#x80F1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; (SMC) &#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x903C;&#x5C3F;&#x808C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x548C;&#x673A;&#x68B0;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x6784;&#x9020;&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8180;&#x80F1;&#x903C;&#x5C3F;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8180;&#x80F1;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x79CD;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x57F9;&#x517B;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x5206;&#x6790;&#x8BC4;&#x5BA1;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x529B;&#x548C;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B66;&#x3001; &#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x5316;&#x548C;&#x6D41;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x5206;&#x6790;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x751F;&#x957F;&#x7279;&#x6027;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x7684; SMC &#x8FDB;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x4ECB;&#x8D28;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0E;&#x589E;&#x6B96;&#x808C;&#x5C42;&#x548C;&#x673A;&#x68B0;&#x7275;&#x5F20;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x5BFC;&#x81F4;&#x66F4;&#x7A20;&#x5BC6;&#x7684;&#x819C;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x6587;&#x5316;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#xFF0C;&alpha;-&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D; (SMA) &#x548C;&#x7ED3;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6E05;&#x695A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x540E;&#x8840;&#x6E05;&#x6D88;&#x9664;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5E94;&#x7528;&#x9009;&#x5B9A;&#x7684;&#x79FB;&#x884C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x6DB2;&#x548C;&#x673A;&#x68B0;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E0B;&#x9010;&#x6B65;&#x51CF;&#x5C11;&#x548C;&#x6D88;&#x9664;&#x8840;&#x6E05;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x53EF;&#x884C;&#x903C;&#x5C3F;&#x808C;&#x6784;&#x9020;&#x4E2D;&#x8C03;&#x5236; SMC &#x548C;&#x8868;&#x578B;&#x3002;

&#x8180;&#x80F1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8C03;&#x5236;&#x65B0;&#x601D;&#x8DEF;&#x53EF;&#x884C;&#x903C;&#x5C3F;&#x808C;&#x6784;&#x9020;&#x3002;

Identification of biochemical and mechanical stimuli in order to modulate the function of bladder smooth muscle cells (SMC) in viable detrusor constructs. Human bladder detrusor cells were seeded on bladder acellular matrix and cultured under different conditions. Cell viability and proliferation were assessed by fluorescent microscopic analyses. Histological, immunohistochemical and flow cytometric analyses were performed to compare growth characteristics and differentiation of SMC. The combination of medium conditioned with proliferative urothelium and mechanical stretch resulted in a more densely populated membrane. In this culture system, the expression of alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA) and desmin were clearly induced after serum elimination. SMC-phenotype can be modulated in viable detrusor constructs by applying selected combinations of urothelial-conditioned media and mechanical stimulation under stepwise reduction and elimination of serum.

New approaches in the modulation of bladder smooth muscle cells on viable detrusor constructs.

Identification des stimuli m&eacute;caniques et biochimiques afin de moduler la fonction des cellules musculaires lisses de la vessie (SMC) dans le d&eacute;trusor viable construit. Vessie humaine du d&eacute;trusor cellules ont &eacute;t&eacute; ensemenc&eacute;es sur matrice acellulaire de vessie et cultiv&eacute;es dans des conditions diff&eacute;rentes. La viabilit&eacute; cellulaire et la prolif&eacute;ration ont &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;s par des analyses microscopiques fluorescentes. Histologique, immunohistochimiques et flux des analyses par cytom&eacute;trie en flux ont &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;es pour comparer les caract&eacute;ristiques de croissance et de diff&eacute;renciation du SMC. La combinaison du milieu conditionn&eacute; avec l&#39;uroth&eacute;lium prolif&eacute;rative et &eacute;tirement m&eacute;canique a entra&icirc;n&eacute; une membrane plus dens&eacute;ment peupl&eacute;e. Dans ce syst&egrave;me de culture, l&#39;expression d&#39;actine muscle lisse-alpha (alpha-SMA) et la desmine &eacute;taient clairement induite apr&egrave;s &eacute;limination de s&eacute;rum. SMC-ph&eacute;notype peut &ecirc;tre modul&eacute;e dans les constructions de d&eacute;trusor viable en appliquant certaines combinaisons m&eacute;dias conditionn&eacute;s uroth&eacute;liaux et stimulation m&eacute;canique au titre de la r&eacute;duction progressive et d&#39;&eacute;limination du s&eacute;rum.

Construit de nouvelles approches dans la modulation des cellules musculaires lisses de la vessie sur le d&eacute;trusor viable.

Identifizierung der biochemischen und mechanische Reize, um die Funktion der Blase glatten Muskelzellen (SMC) lebensf&auml;hig Detrusor modulieren konstruiert. Menschliche Blase Detrusor Zellen wurden auf Blase azellul&auml;re Matrix entkernt und unter verschiedenen Bedingungen kultiviert. Zelle Entwicklungsf&auml;higkeit und Vermehrung wurden durch fluoreszierende mikroskopische Analysen beurteilt. Histologische, wurden immunhistochemische und Flow Cytometric Analysen durchgef&uuml;hrt, um die Wachstumseigenschaften und Differenzierung von SMC zu vergleichen. Die Kombination des Mediums bedingt mit proliferative Urothel und mechanischen Stretch ergab eine mehr dicht besiedelten Membran. In diesem Kultursystem Ausdruck Alpha-glatten Muskel Aktin (Alpha-SMA) und Desmin wurden eindeutig nach Serum-Eliminierung induziert. SMC-Ph&auml;notyp kann durch die Anwendung von ausgew&auml;hlter Kombinationen aus Urothelial konditionierten Medien und mechanische Stimulation unter schrittweise Reduzierung und Beseitigung von Serum in lebensf&auml;higen Detrusor-Konstrukten moduliert werden.

Neue Ans&auml;tze in der Modulation der Blase glatten Muskelzellen auf tragf&auml;hige Detrusor konstruiert.

Identificazione degli stimoli meccanici e biochimici per modulare la funzione delle cellule di muscolo liscio della vescica (SMC) in vitale del detrusore costruisce. Cellule del detrusore della vescica umana sono state seminate su matrice acellulare della vescica e coltivate in condizioni diverse. Vitalit&agrave; cellulare e proliferazione sono state valutate mediante analisi microscopiche fluorescente. Istologica, immunoistochimica e flusso cytometric analisi sono state effettuate per confrontare le caratteristiche di crescita e differenziazione di SMC. La combinazione di mezzo condizionato con urothelium proliferativa e stretch meccanico portato in una membrana pi&ugrave; densamente popolata. In questo sistema di coltura, l&#39;espressione dell&#39;actina muscolo liscio alpha (alpha-SMA) e desmina erano chiaramente indotto dopo l&#39;eliminazione del siero. SMC-fenotipo pu&ograve; essere modulata in costrutti del detrusore praticabile applicando selezionate combinazioni di media condizionata uroteliale e stimolazione meccanica sotto graduale riduzione ed eliminazione del siero.

Costruisce nuovi approcci nella modulazione delle cellule muscolari lisce della vescica su vitale del detrusore.

&#x8180;&#x80F1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE; (SMC) &#x3067;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x6392;&#x5C3F;&#x7B4B;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30FB;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3072;&#x3068;&#x8180;&#x80F1;&#x6392;&#x5C3F;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8180;&#x80F1;&#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x4E0A;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x53CA;&#x3073;&#x5897;&#x6B96;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D44;&#x7E54;&#x5B66;&#x7684;, &#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6D41;&#x308C;&#x306E;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x89E3;&#x6790;&#x6210;&#x9577;&#x7279;&#x6027;&#x3068; SMC &#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5897;&#x6B96;&#x4F53;&#x5916;&#x3068;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x3068;&#x8ABF;&#x6574;&#x57F9;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3088;&#x308A;&#x5BC6;&#x96C6;&#x819C;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; &alpha;-&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#xFF08;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;-SMA&#xFF09; &#x3068;&#x30C7;&#x30B9;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x8840;&#x6E05;&#x9664;&#x53BB;&#x5F8C;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x306E;&#x5C3F;&#x8DEF;&#x4E0A;&#x76AE;&#x30A8;&#x30A2;&#x30B3;&#x30F3;&#x3068;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x6BB5;&#x968E;&#x3054;&#x3068;&#x306E;&#x9084;&#x5143;&#x3068;&#x8840;&#x6E05;&#x306E;&#x6392;&#x9664;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x6392;&#x5C3F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x3067; SMC-&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8180;&#x80F1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x6392;&#x5C3F;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC2DD;&#xBCC4; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; detrusor&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC29;&#xAD11; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC; (SMC)&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC0F; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC29;&#xAD11; detrusor &#xC140; &#xBC29;&#xAD11; acellular &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC2DC;&#xB4DC; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xC591; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; &#xBC0F; &#xD655;&#xC0B0; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBD84;&#xC11D;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC870;&#xC9C1;&#xD559;, immunohistochemical &#xBC0F; &#xD750;&#xB984; cytometric &#xBD84;&#xC11D; &#xC131;&#xC7A5; &#xD2B9;&#xC131; &#xBC0F; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; SMC&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xACC4; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xCE58;&#xC640; &#xC99D;&#xC2DD; urothelium &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC758; &#xC870;&#xD569; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBC00;&#xB3C4;&#xAC00; &#xB9C9; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC54C;&#xD30C;-&#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; &#xB9D0;&#xB77C; (&#xC54C;&#xD30C;-SMA)&#xC640; desmin&#xC758; &#xC2DD; &#xD608; &#xCCAD; &#xC81C;&#xAC70; &#xD6C4; &#xC720;&#xB3C4; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xB9C8; &#xC824; &#xB780; &#xC131;&#xC6B4; &#xD615; urothelial &#xC870;&#xC808; &#xC5B8;&#xB860;&#xACFC; stepwise &#xAC10;&#xC18C; &#xBC0F; &#xD608; &#xCCAD;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xB41C; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; detrusor &#xAD6C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xC870; &#xB41C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; detrusor&#xC5D0; &#xBC29;&#xAD11; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Identificaci&oacute;n de est&iacute;mulos mec&aacute;nicos y bioqu&iacute;micos para modular la funci&oacute;n de c&eacute;lulas musculares lisas de la vejiga (SMC) en detrusor viable construye. C&eacute;lulas de m&uacute;sculo detrusor vejiga humana fueron sembradas en matriz acelular de la vejiga y cultivadas bajo diferentes condiciones. An&aacute;lisis de microscopio fluorescentes evaluaron la viabilidad celular y proliferaci&oacute;n. Histol&oacute;gico, inmunohistoqu&iacute;mico y flujo cytometric realizaron an&aacute;lisis para comparar las caracter&iacute;sticas de crecimiento y diferenciaci&oacute;n de SMC. La combinaci&oacute;n de medio condicionado con urotelio proliferativa y estiramiento mec&aacute;nico result&oacute; en una membrana m&aacute;s densamente poblada. En este sistema de la cultura, la expresi&oacute;n de actina del m&uacute;sculo liso de la alfa (alfa-SMA) y desmin fueron inducidos claramente despu&eacute;s de la eliminaci&oacute;n del suero. SMC-fenotipo puede ser modulado en construcciones del detrusor viables mediante la aplicaci&oacute;n de las combinaciones de medios urotelial-condicionado y estimulaci&oacute;n mec&aacute;nica en paso a paso y la eliminaci&oacute;n del suero.

Construye nuevos enfoques en la modulaci&oacute;n de las c&eacute;lulas de m&uacute;sculo liso de la vejiga en el detrusor viable.

&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (MSC) &#x4E0E;&#x4E0D;&#x6307;&#x5B9A; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; 5-&#x6C2E;&#x6742;&#x80DE;&#x82F7;&#x6CBB;&#x7597;&#x636E;&#x62A5;&#x9053;&#xFF0C;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x8C03;&#x67E5;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x5065;&#x5EB7;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x83B7;&#x5F97;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5316;&#x6218;&#x7565;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x540E; 1-3 &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x6587;&#x5316;&#x88AB;&#x516C;&#x5F00;&#x5411; 5-&#x6C2E;&#x6742;&#x80DE;&#x82F7; (3 mciroM) &#x4E4B;&#x540E; 6 &#x5468;&#x7684;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x57F9;&#x517B; 24 h&#x3002;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x786E;&#x5B9E;&#x4E0D;&#x4FC3;&#x4F7F; MyoD &#x751F;&#x808C;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x6216;&#x5FC3;&#x810F;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269; Nkx2.5 &#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 4 &#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x5728;&#x540E;&#x7EED;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x4EA7;&#x751F;&#x8DF3;&#x52A8;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5728;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5927;&#x7EA6; 10-15%&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x548C;&#x672A;&#x7ECF;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA; L &#x578B;&#x7ECF;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x5916;&#x5411;&#x6574;&#x6D41; K(+) &#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x6216;&#x6162;&#x901F;&#x6D3B;&#x5316;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x610F;&#x601D;&#x662F;&#x5F53;&#x524D;&#x632F;&#x5E45;&#x5728; + 60 mV &#x540E; 6 &#x5468;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x65F6;&#x95F4;&#x5339;&#x914D;&#x63A7;&#x4EF6;&#x76F8;&#x6BD4;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x4E00;&#x500D;&#x3002;&#x819C;&#x7535;&#x5BB9;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x660E;&#x663E;&#x5927;&#x4E8E;&#x63A7;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x6CBB;&#x7597;&#x540E; 2 &#x5468;&#x548C; 6 &#x5468;&#x540E;&#x4ECD;&#x7136;&#x5F88;&#x9AD8;&#x3002;K(+) &#x9891;&#x9053; Kv1.1&#x3001; Kv1.5&#x3001; Kv2.1&#x3001; Kv4.3 &#x548C; KCNMA1&#xFF0C;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053; Ca (v) 1.2 mRNAs &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0D;&#x53D7; 5-&#x6C2E;&#x6742;&#x80DE;&#x82F7;&#x3002;&#x94BE;&#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x4E59;&#x57FA;&#x4E0E;&#x6D53;&#x5EA6;&#x663E;&#x793A;&#x4EE5;&#x524D;&#x6765;&#x6291;&#x5236;&#x5FEB;&#x901F;&#x6216;&#x7F13;&#x6162;&#x6FC0;&#x6D3B; hMSC K(+) &#x7535;&#x6D41;&#x5728; clofilium &#x6CBB;&#x7597;&#x6291;&#x5236;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6CA1;&#x6709; hMSC &#x5411;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;5-&#x6C2E;&#x6742;&#x80DE;&#x82F7;&#x6CBB;&#x7597;&#x5728;&#x7535;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x9020;&#x6210;&#x6DF1;&#x523B;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

5-&#x6C2E;&#x6742;&#x80DE;&#x82F7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

Previously, mouse bone marrow-derived stem cells (MSC) treated with the unspecific DNA methyltransferase inhibitor 5-azacytidine were reported to differentiate into cardiomyocytes. The aim of the present study was to investigate the efficiency of a similar differentiation strategy in human mononuclear cells obtained from healthy bone marrow donors. After 1-3 passages, cultures were exposed for 24 h to 5-azacytidine (3 mciroM) followed by 6 weeks of further culture. Drug treatment did not induce expression of myogenic marker MyoD or cardiac markers Nkx2.5 and GATA-4 and did not yield beating cells during follow-up. In patch clamp experiments, approximately 10-15% of treated and untreated cells exhibited L-type Ca(2+) currents. Almost all cells showed outwardly rectifying K(+) currents of rapid or slow activation kinetics. Mean current amplitude at +60 mV doubled after 6 weeks of treatment compared with time-matched controls. Membrane capacitance of treated cells was significantly larger than in controls 2 weeks after treatment and remained high after 6 weeks. Expression levels of mRNAs for the K(+) channels Kv1.1, Kv1.5, Kv2.1, Kv4.3 and KCNMA1 and for the Ca(2+) channel Ca(v)1.2 were not affected by 5-azacytidine. Treatment with potassium channel blockers tetraethylammonium and clofilium at concentrations shown previously to inhibit rapid or slowly activating K(+) currents of hMSC inhibited proliferation of these cells. Our results suggest that despite the absence of differentiation of hMSC into cardiomyocytes, treatment with 5-azacytidine caused profound changes in current density.

5-Azacytidine induces changes in electrophysiological properties of human mesenchymal stem cells.

Moelle osseuse cellules souches de souris (MSC) trait&eacute;s avec le non-sp&eacute;cifique ADN m&eacute;thyltransf&eacute;rase inhibiteur de la 5-azacytidine auraient auparavant, se diff&eacute;rencient en cardiomyocytes. La pr&eacute;sente &eacute;tude visait &agrave; &eacute;tudier l&#39;efficacit&eacute; d&#39;une strat&eacute;gie de diff&eacute;renciation similaires dans les cellules mononucl&eacute;aires humaines provenant de donneurs de moelle saine. Apr&egrave;s 1 &agrave; 3 passages, les cultures ont &eacute;t&eacute; expos&eacute;es pendant 24 h &agrave; la 5-azacytidine (3 mciroM), suivie de six semaines de culture suppl&eacute;mentaire. Traitement de la toxicomanie n&#39;induit pas l&#39;expression du marqueur myog&egrave;ne MyoD ou marqueurs cardiaques Nkx2.5 et GATA-4 et ne pr&eacute;sentait pas de battre des cellules au cours du suivi. De patch clamp exp&eacute;riences, environ 10 &agrave; 15 % des traitement et cellules non trait&eacute;es expos&eacute;s des courants de type L Ca(2+). Presque toutes les cellules ont montr&eacute; ext&eacute;rieurement rectification k courants de la cin&eacute;tique d&#39;activation rapide ou lente. Signifie l&#39;amplitude du courant au + 60 mV doubl&eacute; apr&egrave;s 6 semaines de traitement par rapport aux t&eacute;moins du m&ecirc;me temps. Capacit&eacute; de la membrane des cellules trait&eacute;es &eacute;tait significativement plus grande que chez les t&eacute;moins de 2 semaines apr&egrave;s le traitement et sont demeur&eacute;s &eacute;lev&eacute;e apr&egrave;s 6 semaines. Les niveaux d&#39;expression des ARNm pour les canaux k Kv1.1, Kv1.5, Kv2.1, Kv4.3 et KCNMA1 et pour le canal de Ca(2+) Ca (v) 1.2 n&#39;&eacute;taient pas affect&eacute;s par la 5-azacytidine. Traitement avec les bloqueurs de canaux potassium t&eacute;tra&eacute;thylammonium et clofilium &agrave; concentrations d&eacute;crite pr&eacute;c&eacute;demment pour inhiber rapides ou activation lentement k courants du CSAH inhibe la prolif&eacute;ration de ces cellules. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que malgr&eacute; l&#39;absence de diff&eacute;renciation du CSAH dans les cardiomyocytes, traitement avec la 5-azacytidine a provoqu&eacute; des changements profonds dans la densit&eacute; de courant.

5-Azacytidine induit des changements dans les propri&eacute;t&eacute;s &eacute;lectrophysiologiques des cellules souches m&eacute;senchymateuses humaines.

Maus Knochenmark-Stammzellen (MSC) mit den unspezifischen DNA Methyltransferase-Hemmer 5-verursachte behandelt wurden zuvor gemeldet, in Cardiomyocytes zu unterscheiden. Das Ziel der vorliegenden Studie war es, die Effizienz der eine &auml;hnliche Strategie der Differenzierung in den menschlichen mononukle&auml;ren Zellen gewonnenen gesundes Knochenmark-Spender zu untersuchen. Nach 1-3 Durchg&auml;nge waren f&uuml;r 24 h bis 5-verursachte (3 MciroM) gefolgt von 6 Wochen weitere Kultur Kulturen ausgesetzt. Medikament&ouml;se Behandlung nicht veranlassen, Ausdruck der Myogener Marker MyoD oder Kardiale Marker NKX2 und GATA-4 und nicht zu schlagen Zellen w&auml;hrend der Follow-up. Im Patch Clamp Experimente, etwa 10-15 % der behandelten und unbehandelte Zellen ausgestellt L-f&ouml;rmige Ca(2+) Str&ouml;mungen. Fast alle Zellen zeigte nach au&szlig;en Gleichrichterdiode K(+) Str&ouml;mungen der schnelle oder langsame Aktivierung Kinetik. Meine aktuelle Amplitude bei + 60 mV verdoppelt, nach 6 Wochen der Behandlung im Vergleich zu Zeit passende Steuerelemente. Membran-Kapazit&auml;t von behandelten Zellen war 2 Wochen nach der Behandlung deutlich gr&ouml;&szlig;er als in Steuerelementen und nach 6 Wochen hoch geblieben. Stufen mRNAs f&uuml;r die K(+)-Kan&auml;le, Kv1.1, Kv1.5, Kv2.1, Kv4.3 und KCNMA1 und f&uuml;r den Ca(2+)-Kanal Ca (V) 1.2 wurden 5-verursachte nicht betroffen. Behandlung mit Kalium Kanal Blocker Tetraethylammonium und Clofilium bei Konzentrationen, die zuvor gezeigte hemmen schnell oder langsam aktivieren K(+) Str&ouml;mungen der hMSC gehemmt Vermehrung dieser Zellen. Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass trotz des Fehlens von Differenzierung des hMSC in Cardiomyocytes, Behandlung mit 5-verursachte tief greifende Ver&auml;nderungen in Stromdichte verursacht.

5-Verursachte induziert Ver&auml;nderungen in elektrophysiologische Eigenschaften des humanen mesenchymalen Stammzellen.

In precedenza, derivate da midollo osseo cellule staminali di topo (MSC) trattate con aspecifici DNA methyltransferase inibitore 5-azacytidine sono state segnalate per differenziare in cardiomiociti. Lo scopo del presente studio era di indagare l&#39;efficacia di una simile strategia di differenziazione in cellule mononucleate umane ottenuti da donatori di midollo osseo sano. Dopo 1-3 passaggi, le culture sono stati esposti per 24 h a 5-azacytidine (3 mciroM) seguita da 6 settimane di ulteriore cultura. Trattamento farmacologico non ha indotto l&#39;espressione del marcatore miogena MyoD o marker cardiaci NKX 2.5 e GATA-4 e non ha fatto cedere battendo cellule durante il follow-up. In patch clamp esperimenti, circa 10-15% dei trattati e non trattate cellule esposte tipo L Ca(2+) correnti. Quasi tutte le cellule hanno mostrato esteriormente rettifica K(+) correnti della cinetica di attivazione rapida o lenta. Significa ampiezza corrente a + 60 mV raddoppiato dopo 6 settimane di trattamento rispetto ai controlli abbinati a tempo. Capacit&agrave; di membrana delle cellule trattate era significativamente maggiore nei controlli 2 settimane dopo il trattamento e rimane elevata dopo 6 settimane. I livelli di espressione di mRNA per i canali K(+), Kv1.1, Kv1.5, Kv2.1, Kv4.3 e KCNMA1 e per il canale di Ca(2+) Ca (v) 1.2 non sono stati colpiti da 5-azacytidine. Trattamento con potassio canale bloccanti tetraetilammonio e clofilium a concentrazioni illustrati in precedenza per inibire la rapide o lentamente attivando correnti K(+) di hMSC ha inibito la proliferazione di queste cellule. I nostri risultati suggeriscono che nonostante l&#39;assenza di differenziazione della hMSC in cardiomiociti, trattamento con 5-azacytidine causato profondi cambiamenti nella densit&agrave; di corrente.

5-Azacytidine induce cambiamenti nelle propriet&agrave; elettrofisiologiche di cellule staminali mesenchimali umane.

&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7531;&#x6765;&#x5E79;&#x3001;&#x975E;&#x7279;&#x7570;&#x7684; DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; 5-&#x30A2;&#x30B6;&#x30B7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x3068;&#x51E6;&#x7406;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;MSC&#xFF09; &#x306F;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x5065;&#x5EB7;&#x306A;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x5358;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5FAE;&#x5206;&#x306E;&#x4F5C;&#x6226;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;1-3 &#x901A;&#x8DEF;&#x5F8C;&#x6587;&#x5316; 24 h 5-&#x30A2;&#x30B6;&#x30B7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3; (3 mciroM) &#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x6587;&#x5316;&#x306E; 6 &#x9031;&#x9593;&#x5F8C;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x85AC;&#x7269;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x7B4B;&#x539F;&#x6027;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC; MyoD &#x5F0F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5FC3;&#x81D3;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC; Nkx2.5 &#x3068;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 4 &#x306F;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x66B4;&#x884C;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E2D;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30ED;&#x30FC; &#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x964D;&#x4F0F;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF; &#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x7D04; 10-15% &#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x3001;L &#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x96FB;&#x6D41;&#x672A;&#x51E6;&#x7406;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x3078;&#x5411;&#x304B;&#x6574;&#x6D41;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x96FB;&#x6D41;&#x6025;&#x901F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7DE9;&#x6162;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B5;&#x30E8;&#x30F3;&#x30B5;&#x30E0;&#x610F;&#x5473; mV &#x306E;&#x500D;&#x5897;&#x6642;&#x9593;&#x7167;&#x5408;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E; 6 &#x9031;&#x9593;&#x5F8C;&#x3002;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x819C;&#x5BB9;&#x91CF;&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C; 2 &#x9031;&#x9593;&#x5185;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x3068; 6 &#x9031;&#x9593;&#x5F8C;&#x306B;&#x9AD8;&#x6C34;&#x6E96;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; Kv1.1 Kv1.5&#x3001;Kv2.1&#x3001;Kv4.3&#x3001;KCNMA1 &#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; Ca (v) 1.2 &#x306E; Mrna &#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; 5-&#x30A2;&#x30B6;&#x30B7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x906E;&#x65AD;&#x85AC;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x304A;&#x3088;&#x3073; clofilium &#x4EE5;&#x524D;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x793A;&#x3059;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3086;&#x3063;&#x304F;&#x308A;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x96FB;&#x6D41;&#x7ACB;&#x4F53;&#x7684;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x51E6;&#x7F6E;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7ACB;&#x4F53;&#x7684;&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;5-&#x30A2;&#x30B6;&#x30B7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x51E6;&#x7406;&#x6DF1;&#x9060;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x96FB;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

5-&#x30A2;&#x30B6;&#x30B7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3; &#x30D2;&#x30C8;&#x9593;&#x8449;&#x7CFB;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xACE8; &#xC218; &#xC720;&#xB798; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (MSC)&#xB294; &#xBD88;&#xD2B9;&#xC815; DNA methyltransferase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; 5-azacytidine&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; cardiomyocytes&#xB85C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xB3C4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xACE8; &#xC218; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xC5BB;&#xC740; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xC804;&#xB7B5;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. 1-3 &#xAD6C;&#xC808; &#xD6C4; &#xBB38;&#xD654; 5-azacytidine (3 mciroM) &#xCD94;&#xAC00; &#xBB38;&#xD654; 6 &#xC8FC; &#xB4A4;&#xC5D0; 24 &#xC2DC;&#xAC04; &#xB178;&#xCD9C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC57D;&#xBB3C; &#xCE58;&#xB8CC; myogenic &#xB9C8;&#xCEE4; Myod&#xC758; &#xC2DD;&#xC774;&#xB098; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xB9C8;&#xCEE4; Nkx2.5 &#xBC0F; &#xAC00;&#xD0C0;-4 &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xACE0; &#xD6C4;&#xC18D; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC15;&#xB3D9; &#xC140;&#xC744; &#xC591;&#xBCF4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xC2E4;&#xD5D8;, &#xC57D; 10-15%&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC140; &#xC804;&#xC2DC; L &#xD0C0;&#xC785; Ca(2+) &#xC804;&#xB958;. &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC140; &#xAC89;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; K(+) &#xC804;&#xB958; &#xBE60;&#xB978; &#xB610;&#xB294; &#xB290;&#xB9B0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. + 60&#xC5D0; &#xC804;&#xB958; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC744; &#xC758;&#xBBF8; mV &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xCE58;&#xB8CC; 6 &#xC8FC; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xB450; &#xBC30;&#xB85C;. &#xCE58;&#xB8CC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB9C9; &#xCEE4;&#xD328;&#xC2DC;&#xD134;&#xC2A4;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; 2 &#xC8FC; &#xBC0F; 6 &#xC8FC; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xC720;&#xC9C0;. K(+) &#xCC44;&#xB110; Kv1.1, Kv1.5, Kv2.1, Kv4.3 &#xBC0F; kcnma1&#xC640; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; Ca (v) 1.2 Mrnas&#xC758; &#xC2DD; &#xB808;&#xBCA8; 5 azacytidine&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCE7C;&#xB968; &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C; tetraethylammonium&#xC640; clofilium &#xB18D;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xB610;&#xB294; Hmsc&#xC758; K(+) &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xCC9C;&#xCC9C;&#xD788; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xC800;&#xD574;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; cardiomyocytes&#xC5D0; Hmsc&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; 5-azacytidine &#xCE58;&#xB8CC; &#xC804;&#xB958; &#xBC00;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2EC;&#xC624;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

5 Azacytidine electrophysiological &#xC18D;&#xC131; &#xC778;&#xAC04; &#xC911;&#xAC04; &#xC5FD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;.

Rat&oacute;n m&eacute;dula &oacute;sea c&eacute;lulas madre (MSC) tratadas con la metiltransferasa de ADN inespec&iacute;fica inhibidor de la 5-azacitidina fueron divulgadas previamente, diferenciarse en cardiomiocitos. El objetivo del presente estudio fue investigar la eficacia de una estrategia similar de la diferenciaci&oacute;n en c&eacute;lulas mononucleares humanas obtenidos de donantes de m&eacute;dula &oacute;sea sana. Despu&eacute;s de 1-3 pasajes, culturas fueron expuestas durante 24 h a 5-AZACITIDINA (mciroM 3) seguida de 6 semanas de otra cultura. Tratamiento farmacol&oacute;gico no indujo la expresi&oacute;n de marcadores mi&oacute;genos MyoD o marcadores cardiacos Nkx2.5 y GATA-4 y no di&oacute; paliza c&eacute;lulas durante el seguimiento. En la abrazadera del remiendo experimentos, aproximadamente 10-15% de los trataron y las c&eacute;lulas no tratadas exhibieron corrientes tipo L de CA. Casi todas las c&eacute;lulas mostraron exterior rectificaci&oacute;n k corrientes de cin&eacute;tica de activaci&oacute;n r&aacute;pida o lenta. Significa amplitud actual en + 60 mV se duplic&oacute; despu&eacute;s de 6 semanas de tratamiento en comparaci&oacute;n con los controles pareados por tiempo. Capacitancia de la membrana de las c&eacute;lulas tratadas fue significativamente mayor que en controles 2 semanas despu&eacute;s del tratamiento y se mantuvo alta despu&eacute;s de 6 semanas. Los niveles de expresi&oacute;n de los mRNAs de los canales de k, Kv1.1, Kv1.5, Kv2.1, Kv4.3 y KCNMA1 y para el canal de la CA Ca (v) 1.2 no fueron afectados por la 5-azacitidina. Tratamiento con Tetraetilamonio de bloqueadores de canales de potasio y clofilium en las concentraciones que se mostraron anteriormente para inhibir r&aacute;pidas o lentamente activar k corrientes de hMSC inhibi&oacute; la proliferaci&oacute;n de estas c&eacute;lulas. Nuestros resultados sugieren que a pesar de la ausencia de diferenciaci&oacute;n de hMSC en cardiomiocitos, tratamiento con 5-azacitidina causado profundos cambios en la densidad de corriente.

5-Azacitidina induce cambios en las propiedades electrofisiol&oacute;gicas de las c&eacute;lulas madre mesenquimales humanas.

&#x7A81;&#x89E6;&#x524D; GABA(B) &#x53D7;&#x4F53; (GABA(B)R) heterodimers GB(1a)/GB(2) &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x4E25;&#x91CD;&#x5F71;&#x54CD;&#x7A81;&#x89E6;&#x548C;&#x8BA4;&#x77E5;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8;&#x672C;&#x5730; GABA (B) R &#x6FC0;&#x6D3B;&#x901A;&#x8FC7;&#x96C6;&#x6210;&#x5149;&#x5B66;&#x5DE5;&#x5177;&#x76D1;&#x6D4B;&#x53D7;&#x4F53;&#x6784;&#x8C61;&#x548C;&#x4E2A;&#x522B;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D; boutons &#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x8C31;&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x4E0E;&#x5728;&#x5355;&#x7A81;&#x89E6;&#x91CA;&#x653E;&#x6982;&#x7387;&#x6210;&#x53CD;&#x6BD4;&#x7684; CFP YFP &#x6807;&#x8BB0; GB(1a)/GB(2) &#x53D7;&#x4F53;&#x97F3;&#x54C1;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x503C;&#x3002;&#x9AD8; FRET &#x7684; GABA (B) Rs &#x4F4E;&#x91CA;&#x653E;&#x6982;&#x7387;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x836F;&#x7406;&#x64CD;&#x7EB5;&#xFF0C;&#x8981;&#x4E48;&#x51CF;&#x5C11;&#x6216;&#x589E;&#x52A0;&#x57FA;&#x5E95;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x51CF;&#x5C11; intersynapse GB(1a)/GB(2) &#x53D7;&#x4F53;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6CBF;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x53D8;&#x5F02;&#x6027;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D; GABA (B) R &#x97F3;&#x662F;&#x679D;&#x6676;&#x5177;&#x4F53;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x91CD;&#x5EFA;&#x611F;&#x89C9;&#x7684;&#x8FD1;&#x7AEF;&#x5206;&#x884C;&#x7A81;&#x89E6;&#x7ED3;&#x6784;&#x4EA7;&#x751F;&#x8F83;&#x5927;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4E0D;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6D3B;&#x52A8;&#x51CF;&#x5C11;&#x57FA;&#x5E95;&#x53D7;&#x4F53;&#x6D3B;&#x5316;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x81EA;&#x6211;&#x5F3A;&#x5316;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x6982;&#x7387;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5F53;&#x5730;&#x57FA;&#x5E95; GABA &#x6D53;&#x5EA6;&#x53D8;&#x5316; GB(1a)/GB(2) &#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5728;&#x6D77;&#x9A6C;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x975E;&#x5747;&#x8D28;&#x6027;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

&#x57FA;&#x5E95; GABA &#x8C03;&#x8282; GABA (B) R &#x6784;&#x8C61;&#x548C;&#x91CA;&#x653E;&#x6982;&#x7387;&#x5728;&#x5355;&#x4E2A;&#x6D77;&#x9A6C;&#x7A81;&#x89E6;&#x3002;

Presynaptic GABA(B) receptor (GABA(B)R) heterodimers are composed of GB(1a)/GB(2) subunits and critically influence synaptic and cognitive functions. Here, we explored local GABA(B)R activation by integrating optical tools for monitoring receptor conformation and synaptic vesicle release at individual presynaptic boutons of hippocampal neurons. Utilizing fluorescence resonance energy transfer (FRET) spectroscopy, we detected a wide range of FRET values for CFP/YFP-tagged GB(1a)/GB(2) receptors that negatively correlated with release probabilities at single synapses. High FRET of GABA(B)Rs associated with low release probability. Notably, pharmacological manipulations that either reduced or increased basal receptor activation decreased intersynapse variability of GB(1a)/GB(2) receptor conformation. Despite variability along axons, presynaptic GABA(B)R tone was dendrite specific, having a greater impact on synapses at highly innervated proximal branches. Prolonged neuronal inactivity reduced basal receptor activation, leading to homeostatic augmentation of release probability. Our findings suggest that local variations in basal GABA concentration are a major determinant of GB(1a)/GB(2) conformational variability, which contributes to heterogeneity of neurotransmitter release at hippocampal synapses.

Basal GABA regulates GABA(B)R conformation and release probability at single hippocampal synapses.

Pr&#xE9;synaptiques GABA (B) des r&#xE9;cepteurs (GABA (B) R) h&#xE9;t&#xE9;rodim&#xE8;res sont compos&#xE9;s de Go (1a) / Go (2) sous-unit&#xE9;s et une influence d&#xE9;terminante sur les fonctions synaptiques et cognitif. Ici, nous avons explor&#xE9; locale GABA (B) d&#x26;#39;activation R en int&#xE9;grant des outils optiques pour la surveillance conformation du r&#xE9;cepteur et la lib&#xE9;ration des v&#xE9;sicules synaptiques &#xE0; chaque boutons pr&#xE9;synaptiques de neurones de l&#x26;#39;hippocampe. Utilisant Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) spectroscopie, nous avons d&#xE9;tect&#xE9; une large gamme de valeurs pour FRET CFP / YFP-&#xE9;tiquet&#xE9; Go (1a) / Go (2) les r&#xE9;cepteurs qui corr&#xE9;l&#xE9;s n&#xE9;gativement avec les probabilit&#xE9;s de lib&#xE9;ration au niveau des synapses individuelles. Haute FRET de GABA (B) associ&#xE9; &#xE0; Rs probabilit&#xE9; de lib&#xE9;ration faible. Notamment, les manipulations pharmacologiques qui a diminu&#xE9; ou augment&#xE9; l&#x26;#39;activation du r&#xE9;cepteur de base de la diminution de la variabilit&#xE9; intersynapse Go (1a) / Go (2) conformation du r&#xE9;cepteur. Malgr&#xE9; la variabilit&#xE9; le long des axones, pr&#xE9;synaptique GABA (B) ton R &#xE9;tait dendrite sp&#xE9;cifique, ayant un impact plus important sur les synapses &#xE0; tr&#xE8;s innerv&#xE9;s branches proximales. Prolong&#xE9;e d&#x26;#39;inactivit&#xE9; neuronale r&#xE9;duite activation du r&#xE9;cepteur de base, conduisant &#xE0; l&#x26;#39;augmentation de la probabilit&#xE9; de lib&#xE9;ration hom&#xE9;ostatique. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que les variations locales de la concentration basale GABA sont un d&#xE9;terminant majeur de Go (1a) / Go (2) la variabilit&#xE9; de conformation, ce qui contribue &#xE0; l&#x26;#39;h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; de la lib&#xE9;ration de neurotransmetteurs dans les synapses hippocampiques.

Basal GABA R&#xE9;gule GABA (B) Conformation R et la probabilit&#xE9; de sortie &#xE0; simple Synapses hippocampe

Pr&auml;synaptischen GABA(B)-Rezeptor (GABA(B)R) Heterodimere bestehen aus GB(1a)/GB(2) Untereinheiten und kritisch beeinflussen synaptische und kognitive Funktionen. Hier untersucht wir lokale GABA (B) R-Aktivierung durch Integration von optischen Instrumente zur &Uuml;berwachung der Rezeptor-Konformation und synaptische Vesikel Release auf einzelne pr&auml;synaptischen Bottoni hippocampal Neuronen. Verwendung Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer (FRET) Spektroskopie, erkannten wir eine breite Palette von FRET-Werte f&uuml;r GFP/YFP-markierte GB(1a)/GB(2)-Rezeptoren, die negativ korreliert mit Freigabe Wahrscheinlichkeiten bei einzelnen Synapsen. Hohe FRET von GABA (B) Rs niedrige Freigabe Wahrscheinlichkeit zugeordnet. Insbesondere verringert pharmakologische Manipulationen, die entweder reduziert oder basal-Aktivierung erh&ouml;ht intersynapse Variabilit&auml;t der GB(1a)/GB(2)-Rezeptor-Konformation. Trotz Variabilit&auml;t entlang der Axone wurde pr&auml;synaptischen GABA (B) R Ton Dendrit spezifisch, haben einen gr&ouml;&szlig;eren Einfluss auf Synapsen in hohem Grade innervated proximalen Filialen. Verl&auml;ngerte neuronaler Inaktivit&auml;t reduziert basale Rezeptor-Aktivierung zu hom&ouml;ostatische Vergr&ouml;&szlig;erung der Freigabe Wahrscheinlichkeit f&uuml;hrt. Unsere Ergebnisse weisen, dass lokale Unterschiede basale GABA-Konzentration sind ein wichtiger Faktor der GB(1a)/GB(2) Konformations&auml;nderungen Variabilit&auml;t, die Heterogenit&auml;t der Neurotransmitter-Release auf hippocampal Synapsen beitr&auml;gt.

Basale GABA regelt GABA (B) R Konformation und Release wahrscheinlich bei einzelnen hippocampal Synapsen.

Recettore GABA(B) presinaptico (eterodimeri GABA(B)R) sono composte da subunit&agrave; GB(1a)/GB(2) e criticamente influenzano le funzioni sinaptiche e cognitive. Qui, abbiamo esplorato attivazione GABA (B) R locale integrando strumenti ottici per il monitoraggio di conformazione del recettore e rilascio Vescicola sinaptica a singoli boutons presinaptica dei neuroni ippocampali. Utilizzando la spettroscopia di fluorescenza resonance energy transfer (FRET), abbiamo rilevato una vasta gamma di FRET valori di recettori GB(1a)/GB(2) CFP/YFP-etichettate negativamente correlata con le probabilit&agrave; di rilascio a singole sinapsi. FRET alta di GABA (B) Rs associato a basso rilascio probabilit&agrave;. In particolare, manipolazioni farmacologiche che sia ridotto o aumentato l&#39;attivazione del recettore basale diminuita variabilit&agrave; intersynapse di conformazione del recettore GB(1a)/GB(2). Nonostante la variabilit&agrave; lungo assoni, presinaptica GABA (B) R tono era specifico, avendo un impatto maggiore sulle sinapsi a rami prossimale altamente innervate dendrite. Prolungata inattivit&agrave; neuronale ridotta attivazione del recettore basale, portando a omeostatico aumento della probabilit&agrave; di rilascio. I nostri risultati suggeriscono che locali variazioni nella concentrazione di GABA basali sono un determinante di variabilit&agrave; conformazionale GB(1a)/GB(2), che contribuisce alla eterogeneit&agrave; del rilascio di neurotrasmettitore alle sinapsi ippocampali.

GABA basale regola probabilit&agrave; conformazione e il rilascio di GABA (B) R a singole sinapsi ippocampali.

&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;GABA&#xFF08;B&#xFF09;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;GABA&#xFF08;B&#xFF09;R&#xFF09;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x306F;&#x3001;GB&#xFF08;1A&#xFF09;/ GB&#xFF08;2&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x6279;&#x5224;&#x7684;&#x306B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3068;&#x8A8D;&#x77E5;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x7D42;&#x672B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x5149;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;GABA&#xFF08;B&#xFF09;R&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x304C;CFP / YFP&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;GB&#xFF08;1A&#xFF09;/ GB&#x306E;&#x5024;&#x3092;FRET&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#xFF08;2&#xFF09;&#x8CA0;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3067;&#x653E;&#x51FA;&#x78BA;&#x7387;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x9AD8;&#x3001;&#x4F4E;&#x653E;&#x51FA;&#x78BA;&#x7387;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;GABA&#xFF08;B&#xFF09;RS&#x306E;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x57FA;&#x790E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;GB&#xFF08;1A&#xFF09;/ GB&#xFF08;2&#xFF09;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;intersynapse&#x3070;&#x3089;&#x3064;&#x304D;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x52D5;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;GABA&#xFF08;B&#xFF09;R&#x306E;&#x97F3;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x652F;&#x914D;&#x8FD1;&#x652F;&#x5E97;&#x3067;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x6A39;&#x72B6;&#x7A81;&#x8D77;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x9577;&#x5F15;&#x304F;&#x795E;&#x7D4C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x653E;&#x51FA;&#x78BA;&#x7387;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x5897;&#x5927;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3001;&#x57FA;&#x790E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x5E95;GABA&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5C40;&#x6240;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x6D77;&#x99AC;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x5747;&#x4E00;&#x6027;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#xFF08;2&#xFF09;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x3001;GB&#xFF08;1A&#xFF09;/ GB&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x57FA;&#x5E95;GABA&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x6D77;&#x99AC;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;GABA&#xFF08;B&#xFF09;R&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x653E;&#x51FA;&#x78BA;&#x7387;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

Presynaptic GABA(B) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GABA(B)R) heterodimers GB(1a)/GB(2) &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xBE44;&#xD310;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xBC0F; &#xC778;&#xC9C0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAC1C;&#xBCC4; presynaptic boutons hippocampal &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xAD11;&#xD559; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xB85C;&#xCEEC; GABA (B) &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD0D0;&#xD5D8;. &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; (&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;) &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xD655;&#xB960; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xAC00; CFP/YFP &#xD0DC;&#xADF8; GB(1a)/GB(2) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xB113;&#xC740; &#xBC94;&#xC704; &#xAC12;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD655;&#xB960; &#xB0AE;&#xC740; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; GABA (B) Rs&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;. &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xAE30;&#xC800; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC870;&#xC791; GB(1a)/GB(2) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB098; &#xB780;&#xC758; intersynapse &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xAC10;&#xC18C;. &#xCD95; &#xC0AD;&#xC744; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; presynaptic GABA (B) R &#xD1A4; dendrite &#xD2B9;&#xC815; &#xB192;&#xC740; innervated &#xC778;&#xC811; &#xC9C0;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC5D0; &#xD070; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xACE0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xAE30;&#xC800; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD655;&#xB960;&#xC758; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xD655;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xAC10;&#xC18C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAE30;&#xC800; GABA &#xB18D;&#xB3C4; &#xC788;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBCC0;&#xC774; hippocampal &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC758;&#xC774; &#xC9C8;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; GB(1a)/GB(2) &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAE30;&#xC800; GABA &#xB2E8;&#xC77C; hippocampal &#xB0C5;&#xC5D0;&#xC11C; GABA (B) R &#xD615;&#xD0DC;&#xC640; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD655;&#xB960;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

Presin&#xE1;pticos de GABA (B) (receptor GABA (B) R) heterod&#xED;meros se componen de GB (1a) / E (2) subunidades y cr&#xED;ticamente influir en las funciones sin&#xE1;pticas y cognitivo. Aqu&#xED;, hemos explorado local de GABA (B) la activaci&#xF3;n de R mediante la integraci&#xF3;n de herramientas &#xF3;pticas para la conformaci&#xF3;n de seguimiento del receptor y la liberaci&#xF3;n de ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas en individuales boutons presin&#xE1;ptica de las neuronas del hipocampo. La utilizaci&#xF3;n de la transferencia de energ&#xED;a de resonancia fluorescente (FRET) espectroscopia, se detect&#xF3; una amplia gama de FRET valores de PPC / YFP de etiquetado GB (1a) / E (2) receptores que correlacionados negativamente con la probabilidad de liberaci&#xF3;n en las sinapsis individuales. Alto FRET de GABA (B) R asociado con baja probabilidad de liberaci&#xF3;n. En particular, las manipulaciones farmacol&#xF3;gicas que, o bien la reducci&#xF3;n o el aumento de la activaci&#xF3;n del receptor basal de disminuci&#xF3;n de la variabilidad intersynapse de GB (1 bis) / E (2) conformaci&#xF3;n del receptor. A pesar de la variabilidad a lo largo de los axones, presin&#xE1;ptica de GABA (B) el tono de R fue dendrita espec&#xED;fica, que tiene un mayor impacto en las sinapsis en el altamente inervados ramas proximales. La inactividad neuronal prolongada reduce la activaci&#xF3;n del receptor basales, lo que lleva al aumento de la homeostasis de la probabilidad de liberaci&#xF3;n. Nuestros hallazgos sugieren que las variaciones locales en la concentraci&#xF3;n de GABA basales son un determinante importante de GB (1a) / E (2) la variabilidad conformacional, lo que contribuye a la heterogeneidad de la liberaci&#xF3;n del neurotransmisor en las sinapsis del hipocampo.

Basal de GABA regula GABA (B) Conformaci&#xF3;n R y en la probabilidad de liberaci&#xF3;n individual sinapsis del hipocampo

G &#x86CB;&#x767D;&#x5C01;&#x95ED;&#x5185;&#x5FC3;&#x6574;&#x6D41;&#x94BE; (GIRK) &#x901A;&#x9053;&#x662F;&#x770B;&#x95E8;&#x4EBA;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; GIRK &#x6E20;&#x9053;&#x53D7;&#x523A;&#x6FC0;&#x654F;&#x611F;&#x6392;&#x5E8F; nexin 27 (SNX27) &#x86CB;&#x767D;&#x4E00;&#x7C7B;&#x901A;&#x8FC7;&#x6211; (-X-Ser/Thr-X-&Phi;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; X &#x662F;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#xFF0C;&Phi; &#x662F;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;) PDZ &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;G &#x86CB;&#x767D;&#x4E0D;&#x654F;&#x611F;&#x5185;&#x5411;&#x6574;&#x6D41;&#x901A;&#x9053; (IRK1) &#x5305;&#x542B;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x7C7B;&#x6211; PDZ &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6BCD;&#x9898;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6; PDZ &#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x86CB;&#x767D; 95 (PSD95) &#x4E0E;&#x540C;&#x4F19;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D; SNX27 &#x548C; PSD95 &#x6B67;&#x89C6;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4EE5;&#x524D;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7ED3;&#x6784;&#x52A0;&#x4E0A;&#x751F;&#x5316;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x5173;&#x952E;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x4E0A;&#x6E38;&#x6E20;&#x9053;&#x89C4;&#x8303; PDZ &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6BCD;&#x9898;&#x4E0E;&#x5728; SNX27 pdz &#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x7ED3;&#x6784;&#x53E3;&#x888B;&#x9759;&#x7535;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x66F4;&#x6539;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E26;&#x7535;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x7FA7;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x6216; PDZ &#x57DF;&#x4E2D;&#x5C06;&#x8F6C;&#x6362;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x534F;&#x4F1A;&#x548C; SNX27 &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;&#x6F84;&#x6E05;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x548C; PDZ &#x5305;&#x542B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x8FD9;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x9776;&#x70B9;&#x6CBB;&#x7597;&#x8111;&#x90E8;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;

G &#x86CB;&#x767D;&#x5C01;&#x95ED;&#x5185;&#x5FC3;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x654F;&#x611F;&#x6392;&#x5E8F; nexin 27 &#x6574;&#x6D41;&#x94BE;&#x901A;&#x9053;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8C03;&#x8282;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

G protein-gated inwardly rectifying potassium (GIRK) channels are important gatekeepers of neuronal excitability. The surface expression of neuronal GIRK channels is regulated by the psychostimulant-sensitive sorting nexin 27 (SNX27) protein through a class I (-X-Ser/Thr-X-Î¦, where X is any residue and Î¦ is a hydrophobic amino acid) PDZ-binding interaction. The G protein-insensitive inward rectifier channel (IRK1) contains the same class I PDZ-binding motif but associates with a different synaptic PDZ protein, postsynaptic density protein 95 (PSD95). The mechanism by which SNX27 and PSD95 discriminate these channels was previously unclear. Using high-resolution structures coupled with biochemical and functional analyses, we identified key amino acids upstream of the channel's canonical PDZ-binding motif that associate electrostatically with a unique structural pocket in the SNX27-PDZ domain. Changing specific charged residues in the channel's carboxyl terminus or in the PDZ domain converts the selective association and functional regulation by SNX27. Elucidation of this unique interaction site between ion channels and PDZ-containing proteins could provide a therapeutic target for treating brain diseases.

Mechanism underlying selective regulation of G protein-gated inwardly rectifying potassium channels by the psychostimulant-sensitive sorting nexin 27.

Aux prot&#xE9;ines G-d&#xE9;pendants vers l&#x26;#39;int&#xE9;rieur de redressement de potassium (Girk) canaux sont les gardiens importants de l&#x26;#39;excitabilit&#xE9; neuronale. L&#x26;#39;expression de surface de canaux Girk neuronales est r&#xE9;glement&#xE9;e par le tri-psychostimulant sensibles nexine 27 (SNX27) prot&#xE9;ine par un de classe I (-X-Ser/Thr-X-&#x3A6;, o&#xF9; X est un r&#xE9;sidu et &#x3A6; est un acide amin&#xE9; hydrophobe) PDZ-contraignant l&#x26;#39;interaction. La prot&#xE9;ine G insensible &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;rieur de canal redresseur (IRK1) contient la m&#xEA;me classe que je PDZ motif de liaison, mais s&#x26;#39;associe &#xE0; une prot&#xE9;ine PDZ synaptique diff&#xE9;rente, la prot&#xE9;ine de densit&#xE9; post-synaptique 95 (PSD95). Le m&#xE9;canisme par lequel SNX27 et PSD95 discriminer ces canaux &#xE9;tait auparavant incertaine. Utilisation de structures &#xE0; haute r&#xE9;solution coupl&#xE9;e &#xE0; des analyses biochimiques et fonctionnels, nous avons identifi&#xE9; les principaux acides amin&#xE9;s en amont de la cha&#xEE;ne canonique PDZ motif de liaison qui associent &#xE9;lectrostatiquement avec une poche unique structurelle dans le domaine SNX27-PDZ. Modification sp&#xE9;cifiques des r&#xE9;sidus charg&#xE9;s en extr&#xE9;mit&#xE9; carboxyle de la cha&#xEE;ne ou dans le domaine PDZ convertit l&#x26;#39;association s&#xE9;lective et r&#xE9;gulation fonctionnelle par SNX27. L&#x26;#39;&#xE9;lucidation de ce site d&#x26;#39;interaction unique entre les canaux ioniques et PDZ contenant des prot&#xE9;ines pourrait constituer une cible th&#xE9;rapeutique pour le traitement des maladies du cerveau.

M&#xE9;canisme sous-jacent r&#xE8;glement s&#xE9;lectif de la prot&#xE9;ine G-gated potassium &#xE0; rectification entrante canaux par le tri-psycho-stimulants sensibles nexine 27

G Protein-Gating einw&auml;rtsgleichrichtenden (GIRK) Kaliumkan&auml;le sind wichtige Gatekeeper der neuronalen Erregbarkeit. Der Oberfl&auml;che Ausdruck der neuronalen GIRK-Kan&auml;le ist geregelt durch das Psychostimulans-Sensitive Sortierung Nexin 27 (SNX27) Protein durch eine Klasse ich (-X-Ser/Thr-X-&Phi;, wobei X alle R&uuml;ckst&auml;nde und &Phi; ist eine hydrophobe Aminos&auml;ure) Interaktion PDZ-Bindung. Der G-Protein-unempfindlich nach innen Gleichrichter-Kanal (IRK1) enth&auml;lt der gleichen Klasse, ich PDZ-verbindlichem Motiv aber mit einer unterschiedlichen synaptische PDZ Protein, postsynaptisches Dichte Protein 95 (PSD95). Der Mechanismus, durch den SNX27 und PSD95 diese Kan&auml;le unterscheiden, war bisher unklar. Verwenden hochaufl&ouml;sende Strukturen gepaart mit biochemische und funktionelle Analysen, haben wir wichtige Aminos&auml;uren stromaufw&auml;rts des Senders kanonische PDZ-Bindung Motivs, die elektrostatisch eine einzigartige strukturelle Tasche in der SNX27-PDZ-Dom&auml;ne zuordnen identifiziert. &Auml;ndern von bestimmten aufgeladenen R&uuml;ckst&auml;nde in den Kanal Karboxyl-Terminus oder in die PDZ-Dom&auml;nen konvertiert die selektive Assoziation und funktionale Verordnung von SNX27. Aufkl&auml;rung dieser Website einzigartige Interaktion zwischen Ionenkan&auml;le und PDZ-haltige Proteine k&ouml;nnte ein Therapeutisches Zielmolek&uuml;l f&uuml;r die Behandlung von Erkrankungen des Nervensystems bieten.

Mechanismus zugrunde liegenden selektive Verordnung von G-Protein-Gating innerlich Rektifizieren Kaliumkan&auml;le von Psychostimulanzien-Sensitive Sortierung Nexin 27.

G proteina-gated interiormente rettificando potassio (GIRK) canali sono importanti gatekeeper dell&#39;eccitabilit&agrave; neuronale. L&#39;espressione superficiale di canali GIRK neuronale &egrave; regolata da psicostimolanti sensibili ordinamento nexina 27 (SNX27) proteina attraverso una classe I (-X-Ser/Thr-X-&Phi;, dove X &egrave; ogni residuo e &Phi; &egrave; un aminoacido idrofobico) interazione PDZ-associazione. Il canale di proteina-insensibile verso l&#39;interno raddrizzatore G (IRK1) contiene la stessa classe sono motivo di PDZ-associazione ma associati con una diversa proteina PDZ sinaptica, proteina densit&agrave; postsinaptica 95 (PSD95). Il meccanismo da cui SNX27 e PSD95 discriminare questi canali era gi&agrave; chiaro. Utilizzando strutture ad alta risoluzione, accoppiati con analisi biochimiche e funzionali, abbiamo identificato chiave aminoacidi a monte del motivo PDZ-associazione canonico del canale che associano elettrostaticamente con un&#39;unica tasca strutturale nel dominio PDZ-SNX27. Cambiando specifici residui di caricate nel terminus carbossilico del canale o del dominio PDZ converte l&#39;associazione selettiva e regolamento funzionale di SNX27. Delucidazione di questo sito unico di interazione tra canali ionici e le proteine contenenti PDZ potrebbe fornire un obiettivo terapeutico per il trattamento delle malattie del cervello.

Meccanismo sottostante regolamento selettiva di G protein-gated interiormente che rettifica i canali di potassio dalla nexina ordinamento sensibili psicostimolante 27.

G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x6027;&#x30AB;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;GIRK&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x30AD;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7CBE;&#x795E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x9078;&#x5225;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;27&#xFF08;SNX27&#xFF09;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;I&#xFF08;-X-Ser/Thr-X-&#x3A6;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;X&#x306F;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3A6;&#x306F;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#xFF09; PDZ-&#x7D50;&#x5408;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002; G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;IRK1&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;I PDZ&#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;PDZ&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F8C;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;95&#xFF08;PSD95&#xFF09;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SNX27&#x3068;PSD95&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x76F8;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;SNX27-PDZ&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x3067;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x9759;&#x96FB;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6B63;&#x898F;&#x306E;PDZ&#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x672B;&#x7AEF;&#x307E;&#x305F;&#x306F;PDZ&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x8377;&#x96FB;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x56E3;&#x4F53;&#x3068;SNX27&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;PDZ&#x542B;&#x6709;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x89E3;&#x660E;&#x306F;&#x3001;&#x8133;&#x75BE;&#x60A3;&#x3092;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5185;&#x5074;&#x306B;&#x7CBE;&#x795E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x9078;&#x5225;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;27&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AB;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6574;&#x6D41;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6A5F;&#x5E8F;

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBB38;&#xC774; &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; &#xCE7C;&#xB968; (GIRK) &#xCC44;&#xB110;&#xC740; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD765;&#xBD84;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC8C;&#xC774;&#xD2B8; &#xD0A4;&#xD37C;. &#xC2E0;&#xACBD; GIRK &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; psychostimulant &#xAD6C;&#xBD84; &#xC815;&#xB82C; nexin 27 (SNX27) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB098; (-X-Ser/Thr-X-&Phi;, X &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xB4E0; &#xC9C0; &#xACE0; &Phi;&#xB294; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;) PDZ-&#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;. G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958;&#xAE30; &#xCC44;&#xB110; (IRK1) &#xB098; PDZ-&#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB85C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; PDZ &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; postsynaptic &#xBC00;&#xB3C4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 95 (PSD95)&#xC640; &#xB3D9;&#xB8CC; &#xAC19;&#xC740; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Snx27&#xC640; psd95&#xC774;&#xC774; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xCC28;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBD84;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xC694; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC0C1;&#xB958; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC815;&#xC2DD; PDZ-&#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; electrostatically SNX27 PDZ &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xAD6C;&#xC870; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xBD84;&#xC11D;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD611;&#xD68C;&#xC640; snx27&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xADDC;&#xC81C; &#xBCC0;&#xD658; &#xD2B9;&#xC815; &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; carboxyl &#xC885;&#xC810; &#xB610;&#xB294; PDZ &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xACFC; PDZ &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB1CC; &#xC9C8;&#xD658; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBB38;&#xC774; &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; psychostimulant &#xAD6C;&#xBD84; &#xC815;&#xB82C; nexin 27 &#xC5EC; &#xCE7C;&#xB968; &#xCC44;&#xB110; &#xC870;&#xC815;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

G-prote&#xED;na cerradas por dentro rectificar potasio (GIRK) son canales importantes guardianes de la excitabilidad neuronal. La expresi&#xF3;n en la superficie de los canales neuronales GIRK est&#xE1; regulado por la clasificaci&#xF3;n psicoestimulantes sensible nexina 27 (SNX27) de prote&#xED;nas a trav&#xE9;s de una clase I (-X-Ser/Thr-X-&#x3A6;, donde X es cualquier residuo y &#x3A6; es un amino&#xE1;cido hidr&#xF3;fobo) PDZ vinculante interacci&#xF3;n. El canal de la prote&#xED;na G insensible hacia el interior del rectificador (IRK1) contiene la misma clase que PDZ vinculante motivo, pero se asocia con una prote&#xED;na PDZ diferentes sin&#xE1;ptica, la prote&#xED;na de densidad postsin&#xE1;ptica 95 (PSD95). El mecanismo por el cual SNX27 y PSD95 discriminar estos canales antes era poco claro. Uso de alta resoluci&#xF3;n de estructuras, junto con los an&#xE1;lisis bioqu&#xED;micos y funcionales, se identificaron los principales amino&#xE1;cidos aguas arriba de la can&#xF3;nica del canal PDZ vinculante motivo que se asocian electrost&#xE1;ticamente con un bolsillo estructural &#xFA;nica en el dominio PDZ-SNX27. Cambiando espec&#xED;ficos residuos cargados en carboxilo terminal del canal o en el dominio PDZ convierte la asociaci&#xF3;n selectiva y regulaci&#xF3;n funcional por SNX27. La elucidaci&#xF3;n de este sitio de interacci&#xF3;n &#xFA;nica entre los canales i&#xF3;nicos y las prote&#xED;nas PDZ que contienen podr&#xED;a proporcionar una diana terap&#xE9;utica para el tratamiento de enfermedades cerebrales.

Mecanismo que subyace a regulaci&#xF3;n selectiva de la prote&#xED;na G-cerrada interiormente rectificaci&#xF3;n de los canales de potasio por la clasificaci&#xF3;n psicoestimulantes sensible nexina 27

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Publication title Cited by 4	2010
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Bartosz Balana

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