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Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

University of Colorado Anschutz Medical Campus

&#x7EE7;&#x627F;&#x4EBA;&#x7C7B; &alpha; 1-antitrypsin (AAT) &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4; AAT &#x86CB;&#x767D;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x5FAA;&#x73AF;&#x6C34;&#x5E73;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#x7684;&#x503E;&#x5411;&#x3002;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x5B66;&#x80FD;&#x6D4B;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4EFB;&#x4F55;&#x80FD;&#x591F;&#x5206;&#x6CCC; AAT &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x6B63;&#x5E38; AAT &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5165;&#x5E94;&#x626D;&#x8F6C;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x5B66;&#x80FD;&#x6D4B;&#x9A8C;&#x6C34;&#x5E73;&#x548C;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x80BA;&#x90E8;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x57FA;&#x4E8E; lentivirally &#x8F6C;&#x5BFC;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x661F;) &#x79FB;&#x690D; AAT &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x53CC;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x4F20;&#x8F93;&#x6B63;&#x5E38;&#x4EBA;&#x7C7B; AAT &#x57FA;&#x56E0;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8367;&#x5149;&#x589E;&#x5165;&#x5C0F;&#x9F20;&#x661F;&#x8DDF;&#x8E2A;&quot;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&quot;&#x3002;&#x79FB;&#x690D; 3000 &#x7684;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x661F;&#x4E3A;&#x8F90;&#x7167;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4F53;&#x5185;&#x81F3;&#x5C11; 31 &#x5468;&#x540C;&#x65F6;&#x548C;&#x6301;&#x7EED;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x672C;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x8F6C;&#x67D3;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FDD;&#x6301;&#x8111;&#x795E;&#x7ECF;&#x3001; &#x81EA;&#x6211;&#x66F4;&#x65B0;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x548C;&#x80FD;&#x529B;&#x6765;&#x91CD;&#x5EFA;&#x5C0F;&#x5B66;&#x548C;&#x4E2D;&#x5B66;&#x7684;&#x53D7;&#x52A9;&#x4EBA;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x9700;&#x8981;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x7684; anti-proteases &#x6216;&#x5404;&#x79CD;&#x80BA;&#x90E8;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;

1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176; antitrypsin &#x7684;&#x64CD;&#x7EB5;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x540E;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Inherited mutations in the human alpha(1)-antitrypsin (AAT) gene lead to deficient circulating levels of AAT protein and a predisposition to developing emphysema. Gene therapy for individuals deficient in AAT is an attractive goal, because transfer of a normal AAT gene into any cell type able to secrete AAT should reverse deficient AAT levels and attenuate progression of lung disease. Here we present an approach for AAT gene transfer based on the transplantation of lentivirally transduced hematopoietic stem cells (HSCs). We develop a novel dual-promoter lentiviral system to transfer normal human AAT cDNA as well as a fluorescent tracking "reporter gene" into murine HSCs. After transplantation of 3,000 transduced HSCs into irradiated mouse recipients, we demonstrate simultaneous and sustained systemic expression of both genes in vivo for at least 31 weeks. The stem cells transduced with this protocol maintain multipotency, self-renewal potential, and the ability to reconstitute the hematopoietic systems of both primary and secondary recipients. This lentiviral-based system may be useful for investigations requiring the systemic secretion of anti-proteases or cytokines relevant to the pathogenesis of a variety of lung diseases.

Sustained expression of alpha1-antitrypsin after transplantation of manipulated hematopoietic stem cells.

H&eacute;r&eacute;ditaires mutations du g&egrave;ne humain alpha 1-antitrypsine (AAT) entra&icirc;ner d&eacute;ficients taux circulants de prot&eacute;ine AAT et une pr&eacute;disposition au d&eacute;veloppement de l&#39;emphys&egrave;me. La th&eacute;rapie g&eacute;nique pour les personnes d&eacute;ficientes en AAT est un objectif attrayant, parce que le transfert d&#39;un g&egrave;ne normal de AAT dans n&#39;importe quel type de cellule capable de s&eacute;cr&eacute;ter l&#39;AAT doit s&#39;inverser d&eacute;ficient AAT ainsi att&eacute;nuer l&#39;&eacute;volution des maladies pulmonaires. Nous pr&eacute;sentons une approche pour le transfert de g&egrave;nes d&#39;AAT bas&eacute; sur la greffe de lentivirally transduits des cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques (CSH). Nous d&eacute;veloppons un nouveau syst&egrave;me LENTIVIRAUX dual-promoteur pour transf&eacute;rer le cDNA de AAT humaine normale, mais aussi un fluorescent &laquo; g&egrave;ne rapporteur &raquo; de suivi dans les CSH murin. Apr&egrave;s que transplantation de 3,000 transduites CSH en destinataires des souris irradi&eacute;es, nous d&eacute;montrons l&#39;expression syst&eacute;mique simultan&eacute;e et soutenue des deux g&egrave;nes in vivo pour au moins 31 semaines. Les cellules souches transduites avec ce protocole maintenir multipotentialit&eacute;, autorenouvellement potentiel et la capacit&eacute; de reconstituer les syst&egrave;mes h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques des b&eacute;n&eacute;ficiaires primaires et secondaires. Ce syst&egrave;me bas&eacute; sur des g&egrave;nes peut &ecirc;tre utile pour les enqu&ecirc;tes n&eacute;cessitant la s&eacute;cr&eacute;tion syst&eacute;mique des anti-prot&eacute;ases ou cytokines pertinentes &agrave; la pathogen&egrave;se d&#39;une vari&eacute;t&eacute; de maladies pulmonaires.

Expression durable de l&#39;alpha1-antitrypsine apr&egrave;s transplantation de manipuler les cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques.

Vererbte Mutationen im menschlichen alpha 1-Antitrypsin (AAT)-Gen f&uuml;hren zu mangelhaft zirkulierenden Niveaus des AAT-Proteins und eine Pr&auml;disposition zur Entwicklung von Emphysem. Gentherapie f&uuml;r Einzelpersonen, die einen Mangel an AAT ist ein attraktives Ziel, da Transfer eines normalen AAT-Gens in jeder Zelle Art in der Lage, AAT sezernieren mangelhaft AAT-Ebenen und D&auml;mpfen Fortschreiten der Lungenerkrankung umkehren sollte. Hier pr&auml;sentieren wir ein Konzept f&uuml;r AAT Gentransfer basierend auf die Transplantation von lentivirally transduzierten h&auml;matopoetischen Stammzellen (HSCs). Wir entwickeln ein neuartiges Dual-Projekttr&auml;ger Lentivirale System zum normalen menschlichen AAT cDNA sowie eine Leuchtstofflampe tracking &quot;Reporter-gen&quot; in murinen HSCs &uuml;bertragen. Nach der Transplantation von 3.000 HSCs in bestrahlten Maus Empf&auml;nger transduzierten, demonstrieren wir gleichzeitige und nachhaltige systemische Expression beide Gene in-vivo mindestens 31 Wochen. Die Stammzellen, die mit diesem Protokoll transduzierten pflegen Multipotenz, Selbsterneuerung Potenzial und die F&auml;higkeit, die h&auml;matopoetischen Systeme der prim&auml;ren und sekund&auml;ren Empf&auml;nger wieder zusammenzusetzen. Diese Lentiviralen basierendes System n&uuml;tzlich f&uuml;r Untersuchungen erfordern die systemische Sekretion von Anti-proteases oder Zytokine, die relevant f&uuml;r die Pathogenese einer Vielzahl von Lungenkrankheiten.

Nachhaltig Ausdruck der alpha1-Antitrypsin nach der Transplantation von manipulierten hematopoietic Stammzellen.

Ereditato mutazioni l&#39;alfa umana (1)-portare antitripsina (AAT) gene carenti livelli circolanti di proteina AAT e una predisposizione allo sviluppo di enfisema. Terapia genica per individui carenti di AAT &egrave; un obiettivo attraente, perch&eacute; il trasferimento di un gene normale AAT in qualsiasi tipo di cellula in grado di secernere AAT dovrebbe invertire carenti livelli AAT e attenuare progressione della malattia polmonare. Qui di seguito presentiamo un approccio basato sul trapianto di lentivirally trasdotte cellule staminali ematopoietiche (HSCs) del trasferimento del gene AAT. Sviluppiamo un romanzo sistema lentivirale dual-promotore per trasferimento normale umano cDNA AAT, nonch&eacute; un fluorescente &quot;gene reporter&quot; di rilevamento in murino HSCs. Dopo il trapianto di 3.000 transduced HSCs in destinatari del mouse irradiati, dimostriamo simultanea e sostenuta espressione sistemica di entrambi i geni in vivo per almeno 31 settimane. Le cellule staminali transduced con questo protocollo mantenere multipotency, potenziale di auto-rinnovamento e la capacit&agrave; di ricostituire gli ematopoietici sistemi dei destinatari primari e secondari. Questo sistema basato su lentivirali possa essere utile per le indagini che richiedono la sistemica secrezione di citochine rilevanti per la patogenesi di una variet&agrave; di malattie polmonari o di anti-proteases.

Espressione sostenuta di alpha1-antitripsina dopo il trapianto di cellule staminali ematopoietiche manipolati.

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1) &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x7D99;&#x627F;-antitrypsin (AAT) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x925B;&#x6B20;&#x4E4F; AAT &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x80BA;&#x6C17;&#x816B;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D20;&#x56E0;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5FAA;&#x74B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AAT &#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x578B;&#x306B; AAT &#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x306F; AAT &#x306E;&#x6B20;&#x4E4F;&#x5024;&#x3068;&#x6E1B;&#x8870;&#x9032;&#x884C;&#x80BA;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x9006;&#x3079;&#x304D;&#x306E;&#x3067;&#x500B;&#x4EBA; AAT &#x306E;&#x6B20;&#x4E4F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x76EE;&#x6A19;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Lentivirally &#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; (HSCs) &#x306E;&#x79FB;&#x690D;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066; AAT &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6B63;&#x5E38;&#x30D2;&#x30C8; AAT cDNA &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x300C;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x300D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E; HSCs &#x306B;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x8EE2;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;3,000 &#x306E;&#x79FB;&#x690D; HSCs &#x7167;&#x5C04;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x4E21;&#x65B9;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 31 &#x9031;&#x9593;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x304B;&#x3064;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x5168;&#x8EAB;&#x306E;&#x5F0F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7387;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x3068;&#x30BB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;anti-proteases &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x80BA;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5168;&#x8EAB;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5F79;&#x306B;&#x7ACB;&#x3064;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x64CD;&#x4F5C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x5F8C;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x5F0F;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; 1-&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x3002;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC54C;&#xD30C; (1)-antitrypsin (AAT) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xC18D; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; AAT &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xACB0;&#xD54D; &#xC21C;&#xD658; &#xB808;&#xBCA8;&#xACFC; &#xAE30;&#xC885; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB0AC;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xC778; AAT &#xACB0;&#xD54D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD; AAT &#xBD84; &#xBE44; &#xC218;&#xB85C; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; AAT &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC591;&#xB3C4; &#xD574;&#xC57C; &#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; AAT &#xC218;&#xC900; &#xBC0F; &#xD3D0; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; attenuate &#xC9C4;&#xD589; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xBAA9;&#xD45C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC; lentivirally transduced &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (HSCs)&#xC758; &#xC774;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; AAT &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC774;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC811;&#xADFC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; AAT cDNA murine Hscs&#xB85C; &quot;&#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&quot;&#xB97C; &#xCD94;&#xC801; &#xD558;&#xB294; &#xD615;&#xAD11;&#xC744; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC18C;&#xC124; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xBAA8;&#xD130; lentiviral &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xD6C4; &#xC774;&#xC2DD; 3000&#xC758; &#xBC29;&#xC0AC;&#xB2A5;&#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC73C;&#xB85C; HSCs &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0;, &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 31 &#xC8FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC640; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xC9C0; multipotency, &#xC790;&#xAE30; &#xAC31;&#xC2E0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xBC0F; &#xBAA8;&#xB450; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC870; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; &#xC870; &#xD608; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xAC8C;. &#xC774; lentiviral &#xAE30;&#xBC18; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; anti-proteases &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD3D0; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xBCD1; &#xC778;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD06C;&#xB9B0; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD0A8;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC720;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC870;&#xC791;&#xB41C; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xC2DD; &#xD6C4; alpha1-antitrypsin &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xD45C;&#xD604;.

Heredado mutaciones en el gene humano alfa 1-antitripsina (AAT) conducen a deficientes niveles circulantes de la prote&iacute;na AAT y una predisposici&oacute;n al desarrollo de enfisema. Terapia g&eacute;nica para las personas deficientes en AAT es un objetivo atractivo, porque la transferencia de un gen normal de la AAT en cualquier tipo de c&eacute;lulas capaces de secretar AAT debe invertir deficientes niveles AAT y atenuada de progresi&oacute;n de la enfermedad pulmonar. Aqu&iacute; presentamos un enfoque para la transferencia de genes de la AAT basado en el trasplante de lentivirally transduced c&eacute;lulas madre hematopoy&eacute;ticas (HSCs). Desarrollamos un novedoso sistema lentivirales dual-promotor para transferir el cDNA AAT humana normal as&iacute; como un fluorescente &quot;gen reportero&quot; de seguimiento en HSCs murinas. Despu&eacute;s de trasplante de 3.000 transduced HSCs en recipientes de rat&oacute;n irradiados, demostramos la expresi&oacute;n sist&eacute;mica sostenida y simult&aacute;nea de ambos genes in vivo durante por lo menos 31 semanas. Las c&eacute;lulas transduced con este protocolo mantener multipotencia, auto-renovaci&oacute;n potencial y la capacidad de reconstituir los sistemas hematopoy&eacute;ticos de destinatarios primarios y secundarios. Este sistema basado en lentivirales puede ser &uacute;til para investigaciones que requieren la secreci&oacute;n sist&eacute;mica de anti-proteases o citoquinas pertinentes a la patogenesia de una variedad de enfermedades pulmonares.

Expresi&oacute;n sostenida de alfa-1-antitripsina despu&eacute;s del trasplante de c&eacute;lulas hematopoy&eacute;ticas manipuladas.

&#x9488;&#x5BF9;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5165;&#x4F53;&#x5185;&#x7279;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C31;&#x7CFB;&#x662F;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x505A;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8C03;&#x8282;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x7EA0;&#x6B63;&#x7EE7;&#x627F;&#x4EBA;&#x7C7B; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176; antitrypsin (&#x6028;&#x6068;) &#x865A;&#x6240;&#x81F4;&#x7684;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x7531;&#x5F02;&#x6784;&#x3001; &#x5206;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C31;&#x7CFB;&#x53EF;&#x77ED;&#x4F4F;&#x548C;&#x56F0;&#x96BE;&#x5177;&#x4F53; nt-3 &#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x67D3;&#x6BD2;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x80FD;&#x591F;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x5C06;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x591A;&#x8FBE; 70%&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x80BA;&#x80BA;&#x6CE1;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;AMs&#xFF09;&#x3002;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E4B;&#x540E;, &#x57FA;&#x56E0;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; AMs &#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x80BA;&#x80BA;&#x6CE1;&#x548C;&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x5185;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5BFF;&#x547D;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x524D;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#xFF0C;&#x5360;&#x8F6C;&#x5BFC; AMs &#x7684;&#x5947;&#x602A;&#x6301;&#x7EED;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x6B64;&#x957F;&#x5BFF;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5B9E;&#x73B0;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x6028;&#x6068;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x886C;&#x91CC;&#x6D41;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x5728;&#x65E2;&#x5B9A;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#xFF0C;lentivirally &#x4EA4;&#x4ED8;&#x6028;&#x6068;&#x6539;&#x5584;&#x8FDB;&#x5C55;&#x7684;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#xFF0C;&#x8870;&#x51CF;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x80BA;&#x7684;&#x6CD5;&#x89C4;&#x9075;&#x4ECE;&#x6027;&#x548C;&#x80BA;&#x6CE1;&#x5927;&#x5C0F;&#x53EF;&#x89C1;&#x4E00;&#x6591;&#x3002;&#x7ECF;&#x8FC7; 24 &#x4E2A;&#x661F;&#x671F;&#x6301;&#x7EED;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x4F53;&#x6DB2;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x5E94;&#x7B54;&#x7684;&#x6028;&#x6068;&#x86CB;&#x767D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;AMs &#x662F;&#x77ED;&#x7684;&#x6559;&#x6761;&#x6211;&#x4EEC;&#x7ED3;&#x679C;&#x6311;&#x6218;&#x751F;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x4F53;&#x5185;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x5E94;&#x7528;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x7EA0;&#x6B63;&#x7684;&#x6028;&#x6068;&#x865A;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x957F;&#x5BFF;&#x80BA;&#x80BA;&#x6CE1;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x3002;

Directed gene transfer into specific cell lineages in vivo is an attractive approach for both modulating gene expression and correcting inherited mutations such as emphysema caused by human alpha1 antitrypsin (hAAT) deficiency. However, somatic tissues are mainly comprised of heterogeneous, differentiated cell lineages that can be short lived and difficult to specifically transfect. Here, we describe an intratracheally instilled lentiviral system able to deliver genes selectively to as many as 70% of alveolar macrophages (AMs) in the mouse lung. Following a single in vivo lentiviral transduction, genetically tagged AMs persisted in lung alveoli and expressed transferred genes for the lifetime of the adult mouse. A prolonged macrophage lifespan, rather than precursor cell proliferation, accounted for the surprisingly sustained presence of transduced AMs. We utilized this long-lived population to achieve localized secretion of therapeutic levels of hAAT protein in lung epithelial lining fluid. In an established mouse model of emphysema, lentivirally delivered hAAT ameliorated the progression of emphysema, as evidenced by attenuation of increased lung compliance and alveolar size. After 24 weeks of sustained gene expression, no humoral or cellular immune responses to hAAT protein were detected. Our results challenge the dogma that AMs are short lived and suggest that these differentiated cells may be a possible target cell population for in vivo gene therapy applications, including the sustained correction of hAAT deficiency.

Amelioration of emphysema in mice through lentiviral transduction of long-lived pulmonary alveolar macrophages.

R&eacute;alis&eacute; le transfert de g&egrave;nes en lign&eacute;es cellulaires in vivo est une approche int&eacute;ressante pour les deux moduler l&#39;expression des g&egrave;nes et correction h&eacute;rit&eacute; des mutations comme l&#39;emphys&egrave;me caus&eacute;s par les humains alpha1 antitrypsine (hAAT). Cependant, les tissus somatiques sont principalement compos&eacute;es de lign&eacute;es de cellules h&eacute;t&eacute;rog&egrave;nes et diff&eacute;renci&eacute;s pouvant &ecirc;tre bref v&eacute;cue et difficiles &agrave; transfecter sp&eacute;cifiquement. Nous d&eacute;crivons ici un syst&egrave;me des g&egrave;nes par voie intratrach&eacute;ale instill&eacute; en mesure de livrer des g&egrave;nes s&eacute;lectivement que 70 % des macrophages alv&eacute;olaires (AMs) dans les poumons de souris. Suite &agrave; une seule transduction des g&egrave;nes in vivo, AMs g&eacute;n&eacute;tiquement marqu&eacute;s a persist&eacute; dans les alv&eacute;oles pulmonaires et exprim&eacute; des g&egrave;nes transf&eacute;r&eacute;s pendant la dur&eacute;e de vie de la souris adulte. Une dur&eacute;e de vie prolong&eacute;e des macrophages, plut&ocirc;t qu&#39;&agrave; la prolif&eacute;ration des cellules pr&eacute;curseurs, repr&eacute;sentait la pr&eacute;sence &eacute;tonnamment soutenue de transduite AMs. Nous avons eu recours &agrave; cette population de longue dur&eacute;e de vie pour atteindre la s&eacute;cr&eacute;tion localis&eacute;e des niveaux th&eacute;rapeutiques de hAAT de prot&eacute;ines dans l&#39;&eacute;pith&eacute;lium du liquide pulmonaire. Chez une souris &eacute;tablie mod&egrave;le d&#39;emphys&egrave;me, livr&eacute; lentivirally hAAT a am&eacute;lior&eacute; la progression de l&#39;emphys&egrave;me, comme en t&eacute;moigne l&#39;att&eacute;nuation de la taille de la conformit&eacute; et alv&eacute;olaire pulmonaire accrue. Apr&egrave;s 24 semaines de g&egrave;ne soutenue, expression, ne humorale ou cellulaire des r&eacute;ponses immunitaires &agrave; la prot&eacute;ine hAAT ont &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;s. Notre d&eacute;fi r&eacute;sultats le dogme que AMs sont courts a v&eacute;cu et sugg&egrave;rent que ces cellules diff&eacute;renci&eacute;es peuvent &ecirc;tre une population de cellules cibles possibles pour des applications de th&eacute;rapie g&eacute;nique in vivo, y compris la correction durable de la carence en hAAT.

Am&eacute;lioration de l&#39;emphys&egrave;me chez la souris par le biais de transduction des g&egrave;nes des macrophages alv&eacute;olaires pulmonaires longue dur&eacute;e de vie.

Gentransfer in bestimmte Zelle &Uuml;bertragungslinien in-vivo ist ein attraktives Konzept f&uuml;r beide modulierende Genexpression und Korrektur geerbt Mutationen wie Emphysem verursacht durch menschliche alpha1-antitrypsinmangel (hAAT) gerichtet. Jedoch bestehen somatische Gewebe haupts&auml;chlich aus heterogenen, differenzierte Zelle &Uuml;bertragungslinien, die kurz gelebt und schwierig, insbesondere bioaktiven sein k&ouml;nnen. Hier beschreiben wir eine Intratracheally eingefl&ouml;&szlig;t Lentivirale System Gene gezielt zu mehr als 70 % der alveol&auml;ren Makrophagen (AMs) in der Maus-Lunge zu liefern. Nach einer einzigen in-vivo Lentivirale Transduktion genetisch markierte AMs auf Lungen-Alveolen beibehalten und &uuml;bertragene Gene f&uuml;r die Lebensdauer der adulten Maus ausgedr&uuml;ckt. Eine Makrophage verl&auml;ngerte Lebensdauer, sondern als Vorl&auml;ufer Zellproliferation, entfiel der &uuml;berraschend anhaltenden Pr&auml;senz einer transduzierten AMs. Wir verwendet diese langlebige Population um lokalisierten Sekretion von therapeutischen Ebenen der hAAT Protein in der Lunge epitheliale Auskleidung Fl&uuml;ssigkeit zu erreichen. In einer etablierten Maus einged&auml;mmt Modell des Emphysems, lentivirally hAAT geliefert das Fortschreiten des Emphysems, wie D&auml;mpfung von erh&ouml;hten Lunge Compliance und alveol&auml;re Gr&ouml;&szlig;e belegt. Nach 24 Wochen anhaltende Gen Ausdruck, keine humorale oder zellul&auml;re Immunantworten zu hAAT Protein gefunden. Unsere Ergebnisse Herausforderung das Dogma, dass AMs kurz sind lebte und schlagen vor, da&szlig; diese differenzierten Zellen einer Zellpopulation m&ouml;gliches Ziel f&uuml;r in-vivo-gen-Therapie-Anwendungen, einschlie&szlig;lich die nachhaltige Korrektur des hAAT Mangel sein k&ouml;nnen.

Verbesserung des Emphysems bei M&auml;usen durch Lentivirale Transduktion der langlebigen pulmonale alveol&auml;re Makrophagen.

Diretto trasferimento genico in lignaggi specifici delle cellule in vivo &egrave; un approccio interessante per entrambi espressione genica modulante e correggendo ereditato mutazioni quali enfisema causata da umano Alfa1 antitripsina (hAAT). Tuttavia, tessuti somatici principalmente sono costituiti da linee cellulari eterogeneo, differenziato che possono essere breve vissuta e difficili a transfect specificamente. Qui, descriviamo un sistema lentivirale intratracheally instillato in grado di consegnare i geni selettivamente per oltre il 70% dei macrofagi alveolari (AMs) nel polmone del mouse. A seguito di un singolo trasduzione lentivirale in vivo, geneticamente tagged AMs ha persisto in alveoli polmonari ed espressi geni trasferiti per tutta la durata del mouse adulti. Una durata prolungata dei macrofagi, piuttosto che la proliferazione di cellule del precursore, rappresentava la presenza sorprendentemente sostenuta di AMs trasdotte. Abbiamo utilizzato questa popolazione longeva per raggiungere localizzata secrezione dei livelli terapeutici della proteina hAAT nel fluido di rivestimento epiteliale polmonare. In un mouse stabilito modello di enfisema, consegnato lentivirally hAAT migliorata la progressione di enfisema, come evidenziato dalla attenuazione della dimensione di conformit&agrave; e alveolare polmonare aumentata. Dopo 24 settimane di gene sostenuta espressione, non umorale o cellulare immune responses to hAAT proteina sono stati rilevati. La nostra sfida risultati il dogma che AMs sono brevi vissuto e suggeriscono che queste cellule differenziate possono essere una popolazione di cellule bersaglio possibile per applicazioni di terapia genica in vivo, tra cui la correzione sostenuta di deficit hAAT.

Miglioramento di enfisema nei topi attraverso la trasduzione lentivirale di macrofagi alveolari polmonari longevi.

&#x76E3;&#x7763;&#x7279;&#x5B9A;&#x30BB;&#x30EB;&#x8840;&#x7D71;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30DC;&#x3078;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x4E21;&#x65B9;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x8A02;&#x6B63;&#x30D2;&#x30C8; &alpha; 1 &#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; (hAAT) &#x6B20;&#x4E4F;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80BA;&#x6C17;&#x816B;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x7D99;&#x627F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x7D44;&#x7E54;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x77ED;&#x3044;&#x4F4F;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x305F;&#x3068;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F; transfect &#x306B;&#x56F0;&#x96E3;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x7570;&#x7A2E;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x7CFB;&#x8B5C;&#x306E;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6C17;&#x7BA1;&#x5185;&#x6CE8;&#x5165;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80BA;&#x5185;&#x306E;&#x80BA;&#x80DE;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8; (AMs) &#x306E; 70% &#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30BF;&#x30B0; AMs &#x80BA;&#x306E;&#x80BA;&#x80DE;&#x3067;&#x6C38;&#x7D9A;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6210;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x5BFF;&#x547D;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9577;&#x5F15;&#x304F;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x5BFF;&#x547D;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F; AMs &#x306E;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30EC;&#x30BC;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5206;&#x6CCC; hAAT &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x88AB;&#x8986;&#x6DB2;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x9577;&#x5BFF;&#x547D;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; lentivirally hAAT &#x914D;&#x4FE1;&#x80BA;&#x6C17;&#x816B;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x80BA;&#x6C17;&#x816B;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x80BA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x80BA;&#x80DE;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x6539;&#x5584;&#x3002;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 24 &#x9031;&#x9593;&#x5F8C;&#x5F0F;&#x3001;&#x3044;&#x3044;&#x3048;&#x4F53;&#x6DB2;&#x307E;&#x305F;&#x306F; hAAT &#x86CB;&#x767D;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x8AB2;&#x984C; AMs &#x304C;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6559;&#x7FA9;&#x306F;&#x3001;&#x4F4F;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30EB;&#x4EBA;&#x53E3; hAAT &#x6B20;&#x4E4F;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x88DC;&#x6B63;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;in vivo &#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

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Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC140; &#xD608;&#xD1B5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xBAA8;&#xB450; &#xBCC0;&#xC870; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC; &#xC774;&#xBA70; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; alpha1 antitrypsin (hAAT) &#xACB0;&#xD54D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xD3D0;&#xAE30; &#xC885; &#xAC19;&#xC740; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0C1;&#xC18D; &#xC218;&#xC815; &#xAC10;&#xB3C5;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC9C1; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC9E7;&#xC740; &#xC0B4; &#xC558; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B9;&#xBCC4;&#xD788; transfect &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC774;&#xAE30;&#xC885;, &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xACC4;&#xBCF4; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD3D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3D0; &#xD3EC; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; (AMs)&#xC758; 70% &#xC815;&#xB3C4;&#xB97C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xAC8C; &#xC2EC;&#xC5B4; intratracheally&#xC758; lentiviral &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; lentiviral &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD0DC;&#xADF8; AMs &#xD3D0; &#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC778; &#xC950;&#xC758; &#xC218;&#xBA85;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD45C;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC870; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; macrophage &#xC218;&#xBA85; transduced Ams&#xC758; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B8; &#xC815;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xCC28;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD3D0; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC548; &#xB300;&#xAE30; &#xC561;&#xCCB4;&#xC5D0; hAAT &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC218;&#xBA85;&#xC774; &#xAE34; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC124;&#xC815; &#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; lentivirally hAAT &#xBC30;&#xB2EC; &#xAE30;&#xC885;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378; &#xC99D;&#xAC00; &#xD3D0; &#xC900;&#xC218; &#xBC0F; &#xCE58;&#xACBD; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xAC10;&#xC1E0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3D0;&#xAE30; &#xC885;, &#xC9C4;&#xD589; ameliorated. &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 24 &#xC8FC; &#xD6C4; &#xC2DD;, &#xB354; &#xCCB4;&#xC561; &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC751;&#xB2F5; hAAT &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC80;&#xCD9C; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB3C4;&#xC804; Ams&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; &#xAD50;&#xB9AC; &#xC0B4;&#xBA74;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xC140; hAAT &#xACB0;&#xD54D;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xAD50;&#xC815; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; in vivo &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140; &#xC778;&#xAD6C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC218;&#xBA85;&#xC774; &#xAE34; &#xD3D0; &#xD3D0; &#xD3EC; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; lentiviral &#xBCC0;&#xD658;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xC885;&#xC758; &#xAC1C;&#xB7C9;.

Dirigido la transferencia de genes en linajes celulares espec&iacute;ficas en vivo es un enfoque atractivo para ambos genes moduladores y corregir heredado mutaciones como enfisema causado por humanos alfa 1 antitripsina (hAAT). Sin embargo, tejidos som&aacute;ticos se componen principalmente de linajes heterog&eacute;neo, diferenciado de la c&eacute;lula que pueden ser una palabra vivida y dif&iacute;cil transfectar espec&iacute;ficamente. Aqu&iacute;, describimos un sistema lentivirales PCSC inculcado capaz de suministrar genes selectivamente hasta el 70% de los macr&oacute;fagos alveolares (AMs) en el pulm&oacute;n del rat&oacute;n. Tras un solo transducci&oacute;n lentivirales in vivo, gen&eacute;ticamente etiquetados AMs persistieron en los alv&eacute;olos pulmonares y expresan genes transferidos durante toda la vida del rat&oacute;n adulto. Un macr&oacute;fago prolongada vida &uacute;til, en lugar de proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas precursoras, representaba la presencia sorprendentemente sostenida de AMs transduced. Utilizamos esta poblaci&oacute;n duradera para lograr la secreci&oacute;n localizada de niveles terap&eacute;uticos de hAAT prote&iacute;na en l&iacute;quido de revestimiento epitelial pulmonar. En un rat&oacute;n establecido modelo de enfisema, lentivirally entregado hAAT mejor&oacute; la progresi&oacute;n del enfisema, evidenciada por la atenuaci&oacute;n de tama&ntilde;o de cumplimiento y alveolar pulmonar creciente. Despu&eacute;s de 24 semanas del gene sostenida de expresi&oacute;n, no humoral o celular inmunorespuestas hAAT prote&iacute;na fueron detectados. Nuestro reto de resultados el dogma que carecen de AMs vivi&oacute; y sugieren que estas c&eacute;lulas diferenciadas pueden ser una posible poblaci&oacute;n celular para usos de la terapia g&eacute;nica in vivo, incluyendo la correcci&oacute;n sostenida de hAAT deficiencia.

Mejoramiento del enfisema en ratones a trav&eacute;s de transducci&oacute;n lentivirales de macr&oacute;fagos alveolares pulmonares duraderos.

Reduced expression of miR-129 has been reported in multiple tumor cell lines and in primary tumors including medulloblastoma, undifferentiated gastric cancers, lung adenocarcinoma, endometrial cancer and colorectal carcinoma. There is also recent evidence of an anti-proliferative activity of miR-129 in tumor cell lines. Still, little is known about how miR-129 regulates cell proliferation. Here we found that lentiviral-mediated overexpression of miR-129 in mouse lung epithelial cells (E10 cells) results in significant G(1) phase arrest that eventually leads to cell death. miR-129 induce G(1) phase arrest in multiple human lung adenocarcinoma cell lines, suggesting miR-129 targeting of G(1)/S phase-specific regulators. Interestingly, we show that Cdk6, a kinase involved in G(1)-S transition, is a direct target of miR-129. We also found the downregulation of three other cell cycle-related novel targets of miR-129, including Erk1, Erk2 and protein kinase C epsilon (Prkce). We further show that among these targets, only Cdk6 is functionally relevant. Restoring expression of Cdk6, but not Prkce partially rescues the cell growth arrest and cell death phenotype that results from miR-129 overexpression. Together, our data indicate that miR-129 plays an important role in regulating cell proliferation by downregulation of Cdk6.

miR-129 regulates cell proliferation by downregulating Cdk6 expression.

Nkx2-1(+) &#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x524D;&#x5185;&#x810F;&#x53EB;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x79CD;&#x7FA4;&#x5F15;&#x8D77;&#x6574;&#x4E2A;&#x4EA7;&#x540E;&#x80BA;&#x548C;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6240;&#x77E5;&#x751A;&#x5C11;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5F88;&#x96BE;&#x5728;&#x4E00;&#x79CD;&#x7EAF;&#x7CB9;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x7EAF;&#x5316;&#x53CA;&#x5B9A;&#x5411;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x539F;&#x59CB;&#x80BA;&#x3001; &#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6765;&#x81EA;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;)&#x3002;TGF&beta; &#x548C; BMP &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x8DDF;&#x7EC4;&#x5408;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684; BMP &#x53CA; FGF &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6307;&#x5B9A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6700;&#x7EC8;&#x80DA;&#x524D;&#x4F53;&#x3002;&#x5F53;&#x6D3E;&#x751F;&#x4F7F;&#x7528; Nkx2-1(GFP) &#x6572;&#x95E8;&#x8BB0;&#x8005;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x51C0;&#x5316;&#x6587;&#x5316;&#x7684;&#x6269;&#x5F20;&#xFF0C;&#x548C;&#x6709;&#x91CD;&#x53E0;&#x4E0E;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x540E;&#x611F;&#x5E94;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8868;&#x8FBE;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x6C47;&#x8F91; &#x300B; &#x80BA;&#x3001; &#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x8C31;&#x7CFB;&#x7684;&#x6307;&#x793A;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5; recellularize 3D &#x80BA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x652F;&#x67B6;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x6D3E;&#x751F;&#x7EAF;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80FD;&#x591F;&#x627C;&#x8981;&#x91CD;&#x8FF0;&#x7684;&#x80BA;/&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x53D1;&#x5C55;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x91CC;&#x7A0B;&#x7891;&#x3002;

&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684;&#x80BA;&#x3001; &#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x4ECE;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x6D3E;&#x751F;&#x3002;

Two populations of Nkx2-1(+) progenitors in the developing foregut endoderm give rise to the entire postnatal lung and thyroid epithelium, but little is known about these cells because they are difficult to isolate in a pure form. We demonstrate here the purification and directed differentiation of primordial lung and thyroid progenitors derived from mouse embryonic stem cells (ESCs). Inhibition of TGFÎ² and BMP signaling, followed by combinatorial stimulation of BMP and FGF signaling, can specify these cells efficiently from definitive endodermal precursors. When derived using Nkx2-1(GFP) knockin reporter ESCs, these progenitors can be purified for expansion in culture and have a transcriptome that overlaps with developing lung epithelium. Upon induction, they can express a broad repertoire of markers indicative of lung and thyroid lineages and can recellularize a 3D lung tissue scaffold. Thus, we have derived a pure population of progenitors able to recapitulate the developmental milestones of lung/thyroid development.

Efficient derivation of purified lung and thyroid progenitors from embryonic stem cells.

Deux populations de g&eacute;niteurs de Nkx2-1(+) dans l&#39;endoderme foregut en d&eacute;veloppement donnent lieu &agrave; l&#39;ensemble du poumon postnatal et l&#39;&eacute;pith&eacute;lium de la glande thyro&iuml;de, mais on conna&icirc;t ces cellules car elles sont difficiles &agrave; isoler sous une forme pure. Nous d&eacute;montrons ici la purification et la diff&eacute;renciation dirig&eacute;e de poumon primordial et prog&eacute;niteurs thyro&iuml;de d&eacute;riv&eacute;es de cellules souches embryonnaires de souris (CSE). Inhibition de TGF&beta; et BMP signaling, suivie d&#39;une stimulation combinatoire de BMP et FGF, signalisation, peut sp&eacute;cifier ces cellules efficacement &agrave; partir de pr&eacute;curseurs endodermiques d&eacute;finitives. Lorsque d&eacute;riv&eacute;e &agrave; l&#39;aide de Nkx2-1(GFP) knockin journaliste ESCs, ces cellules souches peuvent &ecirc;tre &eacute;pur&eacute;es pour l&#39;expansion dans la culture et ont un transcriptome qui chevauche l&#39;&eacute;pith&eacute;lium pulmonaire en d&eacute;veloppement. Lors de l&#39;induction, ils peuvent exprimer un vaste r&eacute;pertoire de marqueurs indicatifs de lign&eacute;es de poumon et de la thyro&iuml;de et peuvent recellularize un &eacute;chafaudage de tissu pulmonaire 3D. Ainsi, nous avons obtenu une population pure de prog&eacute;niteurs capables de r&eacute;capituler les &eacute;tapes importantes d&eacute;veloppementales du d&eacute;veloppement pulmonaire/thyro&iuml;de.

D&eacute;rivation efficace du poumon purifi&eacute; et des prog&eacute;niteurs de thyro&iuml;de de cellules souches embryonnaires.

Zwei Populationen von Nkx2-1(+) Vorl&auml;uferzellen in den Entwicklungsl&auml;ndern Vorderdarm Endodermis geben Anlass zu der gesamten postnatale Lunge und Schilddr&uuml;se Epithel, aber &uuml;ber diese Zellen ist wenig bekannt, weil sie schwierig, in einer reinen Form zu isolieren sind. Wir zeigen hier die Reinigung und gezielten Differenzierung der primordialen Lunge und Schilddr&uuml;se Vorfahre von M&auml;useder embryonalen Stammzellen (WSR) abgeleitet. Hemmung der TGF&beta; und BMP Signalling, kannst gefolgt von kombinatorischen Stimulation der BMP und FGF Signalling, diese Zellen effizient von endg&uuml;ltigen endodermalen Vorstufen. Wenn abgeleitet, mit Nkx2-1(GFP) knockin Reporter WSR, diese Vorl&auml;uferzellen k&ouml;nnen f&uuml;r eine Expansion in Kultur gereinigt werden und haben eine Transkriptom, die &Uuml;berschneidungen mit entwickelnde Lunge Epithel. Bei Induktion sie k&ouml;nnen ein breites Repertoire von Markern indikative Abstammungslinien, Lunge und Schilddr&uuml;se Ausdr&uuml;cken und leski Gewebe 3D Lunge recellularize k&ouml;nnen. Daher haben wir eine reine Bev&ouml;lkerung von Vorl&auml;uferzellen in der Lage, die Entwicklungsmeilensteine der Lunge/Schilddr&uuml;se Entwicklung zu rekapitulieren abgeleitet.

Effiziente Ableitung der gereinigten Lunge und Schilddr&uuml;se Vorl&auml;uferzellen aus embryonalen Stammzellen.

Due popolazioni di progenitori Nkx2-1(+) nell&#39;endoderma apparentemente in via di sviluppo danno luogo all&#39;intero polmone postnatale ed epitelio tiroideo, ma poco si sa di queste cellule perch&eacute; sono difficili da isolare in forma pura. Mostriamo qui la purificazione e la differenziazione diretto del polmone primordiale e progenitori della tiroide derivate da cellule staminali embrionali di topo (CES). Inibizione di TGF&beta; e BMP segnalazione, seguita da stimolazione combinatoria di BMP e FGF segnalando, pu&ograve; specificare queste cellule in modo efficiente da precursori endodermico definitivi. Quando derivati utilizzando Nkx2-1(GFP) knockin reporter CES, questi progenitori possono essere purificati per espansione nella cultura e hanno un transcriptome che coincide con lo sviluppo dell&#39;epitelio polmonare. Induzione, essi possono esprimere un vasto repertorio di marcatori indicativi dei lignaggi del polmone e della tiroide e pu&ograve; recellularize un&#39;impalcatura di tessuto polmonare 3D. Cos&igrave;, noi abbiamo derivato una popolazione pura di progenitori in grado di riassumere le tappe dello sviluppo di sviluppo del polmone/tiroide.

Derivazione efficiente del polmone purificato e progenitori della tiroide da cellule staminali embrionali.

&#x767A;&#x5C55;&#x9014;&#x4E0A;&#x306E;&#x524D;&#x8178;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x306E; Nkx2-1(+) &#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x306F;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x51FA;&#x751F;&#x5F8C;&#x80BA;&#x30FB;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306B;&#x4E0A;&#x6607;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x7D14;&#x7C8B;&#x306A;&#x5F62;&#x3067;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x304C;&#x56F0;&#x96E3;&#x306A;&#x305F;&#x3081;&#x5C11;&#x3057;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3068;&#x539F;&#x59CB;&#x306E;&#x80BA;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;Esc&#xFF09; &#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TGF&beta; &#x3068;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3001;BMP &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E; BMP &#x3068; FGF &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x7D44;&#x5408;&#x305B;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5185;&#x76AE;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; Esc &#x30CE;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3; Nkx2-1(GFP) &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x767A;&#x5C55;&#x9014;&#x4E0A;&#x306E;&#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3068;&#x91CD;&#x306A;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x304C;&#x3002;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x80BA;&#x30FB;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x5E45;&#x5E83;&#x3044;&#x30EC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3001;3 D &#x306E;&#x80BA;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x3092; recellularize &#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x80BA;&#x304C;&#x3093;/&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30C8;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x7D14;&#x7C8B;&#x306A;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3092;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x6D44;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x80BA;&#x3001;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3002;

&#xAC1C;&#xBC1C; foregut endoderm&#xC5D0;&#xC11C; Nkx2-1(+) progenitors&#xC758; &#xB450; &#xC778;&#xAD6C; &#xC804;&#xCCB4; &#xCD9C;&#xC0DD; &#xD6C4; &#xD3D0; &#xBC0F; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xC0C1;&#xD53C;&#xB97C; &#xC57C;&#xAE30;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC21C;&#xC218;&#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xC791;&#xC740;&#xC774; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC815;&#xD654;&#xC640; &#xC6D0;&#xC2DC; &#xD3D0; &#xBC0F; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; progenitors &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (ESCs)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xAC10;&#xB3C5;&#xB41C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. TGF&beta; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638;, BMP&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xB4A4;&#xC5D0; BMP&#xC640; FGF &#xC2E0;&#xD638;, &#xC870;&#xD569; &#xC790;&#xADF9; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140; &#xD655;&#xC2E4; &#xD55C; endodermal &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xC790; ESCs &#xCAD3; &#xACE0; nkx2-1(gfp)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD30C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; progenitors &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xB300;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC21C;&#xD654; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xACE0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD3D0; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC640; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; transcriptome. &#xC720;&#xB3C4;, &#xC2DC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xD3D0; &#xBC0F; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xACC4;&#xBCF4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC790;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xB808; &#xD37C; &#xD1A0;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; 3D &#xD3D0; &#xC870;&#xC9C1; &#xBE44; &#xACC4;&#xB97C; recellularize &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, progenitors &#xC815;&#xB9AC; &#xD3D0;&#xC554;/&#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC774;&#xC815;&#xD45C; &#xC218;&#xC758; &#xC21C;&#xC218;&#xD55C; &#xC778;&#xAD6C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC6B0;&#xB9AC;.

&#xC815;&#xD654; &#xD3D0; &#xBC0F; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; progenitors &#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD30C;&#xC0DD;.

Dos poblaciones de progenitores Nkx2-1(+) en el endodermo del foregut en desarrollo dan lugar a todo pulm&oacute;n postnatal y del epitelio de la tiroides, pero poco se sabe sobre estas c&eacute;lulas porque son dif&iacute;ciles de aislar en forma pura. Aqu&iacute; demostramos la purificaci&oacute;n y la diferenciaci&oacute;n dirigida de pulm&oacute;n primordial y progenitores de tiroides derivados de c&eacute;lulas madre embrionarias de rat&oacute;n (CES). Inhibici&oacute;n de TGF&beta; y BMP, se&ntilde;alizaci&oacute;n, seguido por el est&iacute;mulo combinatorio de BMP y FGF Se&ntilde;alizaci&oacute;n, puede especificar estas c&eacute;lulas eficientemente de precursores endodermales definitivos. Cuando deriva usando Nkx2-1(GFP) knockin reportero ESCs, estos progenitores pueden ser purificados para la expansi&oacute;n de la cultura y un transcriptoma que se superpone con desarrollo epitelio pulmonar. Inducci&oacute;n, puede expresar un amplio repertorio de marcadores indicativos de linajes de pulm&oacute;n y de la tiroides y puede recellularize un andamio de tejido pulmonar 3D. As&iacute;, hemos derivamos una poblaci&oacute;n pura de progenitores capaces de recapitular los hitos del desarrollo del desarrollo del pulm&oacute;n, tiroides.

Derivaci&oacute;n eficaz del pulm&oacute;n purificado y progenitores de la tiroides de c&eacute;lulas madre embrionarias.

Although RNA interference (RNAi) has become a ubiquitous laboratory tool since its discovery 12 years ago, in vivo delivery to selected cell types remains a major technical challenge. Here, we report the use of lentiviral vectors for long-term in vivo delivery of RNAi selectively to resident alveolar macrophages (AMs), key immune effector cells in the lung. We demonstrate the therapeutic potential of this approach by RNAi-based downregulation of p65 (RelA), a component of the pro-inflammatory transcriptional regulator, nuclear factor κB (NF-κB) and a key participant in lung disease pathogenesis. In vivo RNAi delivery results in decreased induction of NF-κB and downstream neutrophilic chemokines in transduced AMs as well as attenuated lung neutrophilia following stimulation with lipopolysaccharide (LPS). Through concurrent delivery of a novel lentiviral reporter vector (lenti-NF-κB-luc-GFP) we track in vivo expression of NF-κB target genes in real time, a critical step towards extending RNAi-based therapy to longstanding lung diseases. Application of this system reveals that resident AMs persist in the airspaces of mice following the resolution of LPS-induced inflammation, thus allowing these localized cells to be used as effective vehicles for prolonged RNAi delivery in disease settings.

Article	Year
Sustained expression of alpha1-antitrypsin after transplantation of manipulated hematopoietic stem cells. American journal of respiratory cell and molecular biology\| PubMed ID: 18323534	2008
Amelioration of emphysema in mice through lentiviral transduction of long-lived pulmonary alveolar macrophages. The Journal of clinical investigation\| PubMed ID: 20038801	2010
miR-129 regulates cell proliferation by downregulating Cdk6 expression. Cell cycle (Georgetown, Tex.)\| PubMed ID: 20404570	2010
Efficient derivation of purified lung and thyroid progenitors from embryonic stem cells. Cell stem cell\| PubMed ID: 22482505	2012
Lentiviral delivery of RNAi for in vivo lineage-specific modulation of gene expression in mouse lung macrophages. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy\| PubMed ID: 23403494	2013

Letty Kwok

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