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Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins <em>In Planta</em>

Plasmodesmata (Pd) are cell-to-cell connections that function as gateways through which small and large molecules are transported between plant cells. ...

Cornell University

&#x91CE;&#x706B;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x5149;&#x4F0F;&#x3002;&#x756A;&#x8304; DC3000&#xFF0C;&#x5BC4;&#x751F;&#x756A;&#x8304;&#x548C;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x57FA;&#x56E0; HrpL &#x66FF;&#x4EE3;&#x897F;&#x683C;&#x739B;&#x56E0;&#x5B50;&#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x652F;&#x6301;&#x5404;&#x79CD;&#x529F;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5206;&#x6790;&#x7684; DC3000&#xFF0C;&#x548C;&#x5177;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x53C2;&#x4E0E;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x8349;&#x6848;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; DC3000 &#x5E76;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FED;&#x4EE3;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x6D89;&#x53CA;&#x8BA1;&#x7B97;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x7275;&#x8FDE;&#x6BD2;&#x529B;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0B;&#x6E38; HrpL &#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x3002;&#x8FC7;&#x654F;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x81F4;&#x75C5; (Hrp) &#x521B;&#x529E;&#x4EBA;&#x5DF2;&#x77E5;&#x63A7;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801; Hrp (&#x4E09;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5206;&#x6CCC;&#x578B;) &#x673A;&#x68B0;&#x548C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5728; DC3000 &#x4E2D;&#x952E;&#x5165;&#x4E09;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6B64; (i) (&#x4E8C;) &#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x9690;&#x9A6C;&#x5C14;&#x79D1;&#x592B;&#x6A21;&#x578B; (HMM) miniTn5gus &#x8BF1;&#x53D8; Hrp regulon 9 &#x65B0;&#x7275;&#x8FDE;&#x6BD2;&#x529B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x57F9;&#x8BAD;&#x4E0E;&#x5DF2;&#x77E5;&#x548C;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x786E;&#x5B9A;&#x8FA3;&#x6839;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;(iii) &#x55EF;&#x8BC6;&#x522B;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x4E0A;&#x6E38;&#x7684;&#x989D;&#x5916; 12 &#x7275;&#x8FDE;&#x6BD2;&#x529B;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C; (&#x56DB;) &#x82AF;&#x7247;&#x548C; RNA &#x6591;&#x70B9;&#x7684; HrpL &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x5B50;&#x96C6;&#x4EE3;&#x8868;&#x8FD9;&#x4E9B; DC3000 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; Hrp regulon &#x7F16;&#x7801; 4 &#x9644;&#x52A0;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E09;&#x5206;&#x6CCC;&#x673A;&#x68B0;&#x8F85;&#x52A9;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D; HopPsyA&#xFF0C;AvrPpiB1 &#x7684;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA; &#xFF08;2 &#x4EFD;&#xFF09;&#xFF0C;AvrPpiC2&#x3001; AvrPphD &#xFF08;2 &#x4EFD;&#xFF09;&#xFF0C;AvrPphE&#x3001; AvrPphF&#xFF0C;&#x548C; AvrXv3&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x6216;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x56E0;&#x5B50;&#x57FA;&#x56E0;&#x65E0;&#x5173; Hrp &#x7C7B;&#x578B;&#x4E09;&#x3001; &#x5206;&#x6CCC;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; syringomycin &#x5408;&#x6210;&#x9176; &#xFF08;SyrE&#xFF09;&#xFF0C;N(epsilon)-(indole-3-acetyl)-l-lysine &#x5408;&#x6210;&#x9176; &#xFF08;IaaL&#xFF09;&#x548C;&#x63A7;&#x5236;&#x51A0;&#x751F;&#x4EA7;&#x9644;&#x5C5E; regulon&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x5019;&#x9009;&#x6548;&#x5E94;&#x57FA;&#x56E0;&#x3001; hopPtoA2&#x3001; hopPtoB2&#x3001; avrRps4 &#x540C;&#x6E90;&#xFF0C;&#x4E4B;&#x524D;&#x7531;&#x8FA3;&#x6839;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6837;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E86;&#x55EF;&#x671F;&#x5F85;&#x503C;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684;&#x610F;&#x4E49;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x80FD;&#x591F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x51FA;&#x6765;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E86; HrpL&#x3002;

&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x9274;&#x5B9A;&#x7684;&#x91CE;&#x706B;&#x5149;&#x4F0F;&#x3002;&#x7531; HrpL &#x66FF;&#x4EE3;&#x897F;&#x683C;&#x739B;&#x56E0;&#x5B50;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x756A;&#x8304; DC3000 &#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#x3002;

The ability of Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 to parasitize tomato and Arabidopsis thaliana depends on genes activated by the HrpL alternative sigma factor. To support various functional genomic analyses of DC3000, and specifically, to identify genes involved in pathogenesis, we developed a draft sequence of DC3000 and used an iterative process involving computational and gene expression techniques to identify virulence-implicated genes downstream of HrpL-responsive promoters. Hypersensitive response and pathogenicity (Hrp) promoters are known to control genes encoding the Hrp (type III protein secretion) machinery and a few type III effector proteins in DC3000. This process involved (i) identification of 9 new virulence-implicated genes in the Hrp regulon by miniTn5gus mutagenesis, (ii) development of a hidden Markov model (HMM) trained with known and transposon-identified Hrp promoter sequences, (iii) HMM identification of promoters upstream of 12 additional virulence-implicated genes, and (iv) microarray and RNA blot analyses of the HrpL-dependent expression of a representative subset of these DC3000 genes. We found that the Hrp regulon encodes candidates for 4 additional type III secretion machinery accessory factors, homologs of the effector proteins HopPsyA, AvrPpiB1 (2 copies), AvrPpiC2, AvrPphD (2 copies), AvrPphE, AvrPphF, and AvrXv3, and genes associated with the production or metabolism of virulence factors unrelated to the Hrp type III secretion system, including syringomycin synthetase (SyrE), N(epsilon)-(indole-3-acetyl)-l-lysine synthetase (IaaL), and a subsidiary regulon controlling coronatine production. Additional candidate effector genes, hopPtoA2, hopPtoB2, and an avrRps4 homolog, were preceded by Hrp promoter-like sequences, but these had HMM expectation values of relatively low significance and were not detectably activated by HrpL.

Genomewide identification of Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 promoters controlled by the HrpL alternative sigma factor.

La capacit&#xE9; de Pseudomonas syringae pv. tomate DC3000 &#xE0; parasiter thaliana tomate et Arabidopsis d&#xE9;pend des g&#xE8;nes activ&#xE9;s par le facteur sigma alternatif HrpL. Afin de soutenir diverses analyses g&#xE9;nomiques fonctionnelles de DC3000, et plus pr&#xE9;cis&#xE9;ment, d&#x26;#39;identifier les g&#xE8;nes impliqu&#xE9;s dans la pathogen&#xE8;se, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un projet de s&#xE9;quence DC3000 et a utilis&#xE9; un processus it&#xE9;ratif impliquant des techniques d&#x26;#39;expression du g&#xE8;ne de calcul et d&#x26;#39;identifier les g&#xE8;nes de virulence impliqu&#xE9;s en aval de-HrpL-sensibles promoteurs. R&#xE9;action d&#x26;#39;hypersensibilit&#xE9; et de pathog&#xE9;nie (hrp) promoteurs sont connus pour contr&#xF4;ler des g&#xE8;nes codant pour la HRP (de s&#xE9;cr&#xE9;tion de type III de prot&#xE9;ines) des machines et quelques prot&#xE9;ines de type III effectrices DC3000. Ce processus a impliqu&#xE9; (i) l&#x26;#39;identification de 9 nouveaux virulence impliqu&#xE9;s g&#xE8;nes dans le r&#xE9;gulon Hrp par miniTn5gus mutagen&#xE8;se, (ii) le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un mod&#xE8;le de Markov cach&#xE9; (HMM) form&#xE9;s avec des connus et transposon identifi&#xE9; des s&#xE9;quences promotrices du HRP, (iii) l&#x26;#39;identification HMM des promoteurs en amont de la p&#xE9;riode suppl&#xE9;mentaire de 12 virulence impliqu&#xE9;s g&#xE8;nes, et (iv) biopuces et des analyses par transfert d&#x26;#39;ARN de l&#x26;#39;expression HrpL d&#xE9;pendant d&#x26;#39;un sous-ensemble repr&#xE9;sentatif de ces g&#xE8;nes DC3000. Nous avons constat&#xE9; que le r&#xE9;gulon Hrp code candidats pour 4 autres facteurs de s&#xE9;cr&#xE9;tion de type III accessoires des machines, des homologues de l&#x26;#39;effecteur HopPsyA prot&#xE9;ines, AvrPpiB1 (2 exemplaires), AvrPpiC2, AvrPphD (2 exemplaires), AvrPphE, AvrPphF, et AvrXv3, et les g&#xE8;nes associ&#xE9;s &#xE0; la production ou le m&#xE9;tabolisme des facteurs de virulence sans rapport avec le syst&#xE8;me de s&#xE9;cr&#xE9;tion de type III Hrp, y compris synth&#xE9;tase syringomycine (Syre), N (epsilon) - (indole-3-ac&#xE9;tyl)-L-lysine synth&#xE9;tase (IAAL), et un r&#xE9;gulon subsidiaire commander coronatine la production. Candidat suppl&#xE9;mentaire g&#xE8;nes effecteurs, hopPtoA2, hopPtoB2, et un homologue avrRps4, ont &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;d&#xE9;es par HRP s&#xE9;quences de type promoteur, mais ceux-ci avaient des valeurs moyennes HMM d&#x26;#39;importance relativement faible et ne sont pas d&#xE9;tectable activ&#xE9; par HrpL.

Identification Genomewide de Pseudomonas syringae pv. Tomate DC3000 promoteurs contr&#xF4;l&#xE9;es par le facteur HrpL Alternative Sigma

Genomweiten Identifizierung von Pseudomonas syringae pv. Tomaten DC3000 Promotoren durch die HrpL alternative Sigma-Faktor gesteuert.

La capacit&agrave; di Pseudomonas syringae pv. Tomato DC3000 a parassitano pomodoro e Arabidopsis thaliana dipende da geni attivati dal fattore sigma alternativo HrpL. Per supportare vari funzionale analisi genomic di DC3000 e, in particolare, per identificare i geni coinvolti nella patogenesi, abbiamo sviluppato una sequenza bozza di DC3000 e utilizzato un iterativo processo coinvolgendo computazionale e tecniche di espressione genica per identificare i geni implicati virulenza a valle dei promotori HrpL-sensibli a reagire. Risposta ipersensibile e patogenicit&agrave; (Hrp) promotori sono conosciuti per controllare i geni che codificano le macchine Hrp (tipo di secrezione della proteina III) e qualche tipo di proteine effettrici III in DC3000. Questo processo coinvolto (i) identificazione di 9 nuovi geni di virulenza implicati nell&#39;Hrp Regulone di mutagenesi miniTn5gus, (ii) lo sviluppo di un modello di Markov nascosto (HMM) addestrato con il conosciuto e identificato trasposone sequenze promotore Hrp, (iii) HMM geni identificazione dei promotori a Monte di 12 ulteriori virulenza implicati, e (iv) microarray e RNA tamponando analisi dell&#39;espressione di un sottoinsieme rappresentativo di questi geni DC3000 HrpL-dipendente. Abbiamo trovato che il Regulone Hrp codifica candidati per 4 aggiuntive tipo III secrezione macchinari accessori fattori omologhi delle proteine effettrici HopPsyA, AvrPpiB1 (2 copie), AvrPpiC2, AvrPphD (2 copie), AvrPphE, AvrPphF e AvrXv3 e geni associati con la produzione o il cui metabolismo dei fattori di virulenza estranei al Hrp tipo sistema di secrezione di III, tra cui syringomycin sintetasi (SyrE), sintetasi N(epsilon)-(indole-3-acetyl)-l-lysine (IaaL)e una filiale Regulone controllo della produzione di coronatine. Ulteriori geni effettori, hopPtoA2, hopPtoB2 e un avrRps4 dell&#39;omologo, furono preceduti da Hrp promotore-come sequenze, ma questi aveva HMM i valori di aspettativa di importanza relativamente bassa e non sono stati attivati distintamente dal HrpL.

Identificazione di genomewide di Pseudomonas syringae pv. promotori di pomodoro DC3000 controllati dal fattore sigma alternativo HrpL.

Pseudomonas syringae&#x306E;PV&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x5BC4;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;DC3000&#x306F;HrpL&#x4EE3;&#x66FF;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DC3000&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;DC3000&#x306E;&#x30C9;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3001;HrpL-&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x53CD;&#x5FA9;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x904E;&#x654F;&#x611F;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3068;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#xFF08;HRP&#xFF09;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;DC3000&#x3067;HRP&#xFF08;III&#x578B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x6CCC;&#xFF09;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3068;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;III&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;i&#xFF09;miniTn5gus&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x3001;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x8B58;&#x5225;HRP&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x914D;&#x5217;&#x3001;&#xFF08;&#x2172;&#xFF09;&#x3067;&#x8A13;&#x7DF4;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x96A0;&#x308C;&#x30DE;&#x30EB;&#x30B3;&#x30D5;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#xFF08;HMM&#xFF09;HMM&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#xFF08;II&#xFF09;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;HRP&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30ED;&#x30F3;9&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;12&#x500B;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;DC3000&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;HrpL&#x4F9D;&#x5B58;&#x5F0F;&#x306E;&#xFF08;&#x2173;&#xFF09;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3068;RNA&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;HRP&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;4&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;III&#x5206;&#x6CCC;&#x6A5F;&#x69CB;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;HopPsyA&#x3001;AvrPpiB1&#xFF08;2&#x90E8;&#xFF09;&#x3001;AvrPpiC2&#x3001;AvrPphD&#xFF08;2&#x90E8;&#xFF09;&#x3001;AvrPphE&#x3001;AvrPphF&#x3001;&#x3068;AvrXv3&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x5019;&#x88DC;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;syringomycin&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;SyrE&#xFF09;&#x3001;N&#xFF08;&#x3B5;&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;HRP III&#x578B;&#x5206;&#x6CCC;&#x7CFB;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4EE3;&#x8B1D; - &#xFF08;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#xFF09;-L-&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;IaaL&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CA;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x5B50;&#x4F1A;&#x793E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30ED;&#x30F3;&#x751F;&#x7523;&#x3002;&#x8FFD;&#x52A0;&#x5019;&#x88DC;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;hopPtoA2&#x3001;hopPtoB2&#x3001;&#x3068;avrRps4&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;HRP&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x69D8;&#x914D;&#x5217;&#x304C;&#x5148;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x4F4E;&#x3044;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306E;HMM&#x306E;&#x671F;&#x5F85;&#x5024;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x691C;&#x51FA;HrpL&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Pseudomonas syringae&#x306E;PV&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;&#x540C;&#x5B9A;&#x3002; HrpL&#x4EE3;&#x66FF;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;DC3000&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;

&#xB179; syringae &#xB2A5;&#xB825; pv. &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xC640; Arabidopsis thaliana parasitize DC3000 &#xC720;&#xC804;&#xC790; HrpL &#xB300;&#xCCB4; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; &#xC778;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; &#xBD84;&#xC11D; DC3000, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD2B9;&#xD788;, &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; pathogenesis, &#xAD00;&#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC; DC3000 &#xCD08;&#xC548; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xAD00;&#xB828; &#xC804;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xC131; &#xB0B4;&#xD3EC; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD558;&#xB958; HrpL &#xC751;&#xB2F5; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604; &#xAE30;&#xBC95;. &#xACFC;&#xBBFC; &#xBC18;&#xC751;&#xACFC; pathogenicity (Hrp) &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; Hrp (&#xC720;&#xD615; III &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84; &#xBE44;) &#xAE30;&#xACC4; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xACE0; &#xBA87; DC3000 III effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC785;&#xB825; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACFC;&#xC815; (i) 9 &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3C5;&#xC131; &#xB0B4;&#xD3EC; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; Hrp regulon miniTn5gus mutagenesis, &#xC228;&#xACA8;&#xC9C4;&#xB41C; &#xB9C8;&#xB974;&#xCF54;&#xD504; &#xBAA8;&#xB378; (HMM)&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; (ii)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xACE0; transposon &#xC2DD;&#xBCC4; Hrp &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC640; &#xD6C8;&#xB828; (iii) &#xD760; &#xB3C5;&#xC131; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xC0C1;&#xB958; 12 &#xCD94;&#xAC00;&#xC758; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; (iv) microarray &#xBC0F; RNA &#xC624; &#xC810; DC3000 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB300;&#xD45C;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xBD84; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; HrpL &#xC885;&#xC18D; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xCC38;&#xC5EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Hrp regulon &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xB85C; 4 &#xCD94;&#xAC00; &#xC720;&#xD615; III &#xBD84; &#xBE44; &#xAE30;&#xACC4; &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xC694;&#xC18C;, homologs HopPsyA, AvrPpiB1 effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC; (2 &#xBD80;), AvrPpiC2, AvrPphD (2 &#xBD80;), AvrPphE, AvrPphF, &#xBC0F; AvrXv3, &#xBC0F; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB610;&#xB294; &#xB3C5;&#xC131; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xB300;&#xC0AC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBB34;&#xAD00; Hrp &#xC720;&#xD615; III &#xBD84; &#xBE44; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;, syringomycin &#xD569;&#xC131; (SyrE) N(epsilon)-(indole-3-acetyl)-l-lysine &#xD569;&#xC131; (IaaL)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC;&#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC790;&#xD68C;&#xC0AC; regulon coronatine &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, hopPtoA2, hopPtoB2, &#xBC0F; avrRps4 &#xCCB4; Hrp &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xAC19;&#xC740; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC55E;&#xC5D0; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD760; &#xAE30;&#xB300; &#xAC12;&#xC774; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC758;&#xBBF8;&#xC758; detectably Hrpl&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xD588;&#xB2E4;.

Genomewide &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB179; syringae&#xC758; &#xD0DC;&#xC591;&#xAD11; &#xBC1C;&#xC804;. &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; DC3000 &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; HrpL &#xB300;&#xCCB4; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4;.

La capacidad de Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 a parasitar tomate y Arabidopsis thaliana depende de los genes activados por el factor de HrpL alternativa sigma. Para apoyar diversos an&#xE1;lisis gen&#xF3;micos funcionales del DC3000, y espec&#xED;ficamente, para identificar los genes implicados en la patog&#xE9;nesis, se desarroll&#xF3; un proyecto de secuencia DC3000 y se utiliza un proceso iterativo que implica t&#xE9;cnicas de expresi&#xF3;n de c&#xE1;lculo y el gen para identificar los genes implicados virulencia aguas abajo de HrpL que responden a los promotores. Respuesta de hipersensibilidad y patogenicidad (HRP) a los promotores son conocidos por controlar los genes que codifican el HRP (tipo de secreci&#xF3;n de la prote&#xED;na III) las m&#xE1;quinas y unas pocas prote&#xED;nas de tipo III en la DC3000 efectoras. Este proceso que se trate (i) la identificaci&#xF3;n de 9 nuevos implicados en la virulencia de los genes del regul&#xF3;n HRP miniTn5gus mutag&#xE9;nesis, (ii) desarrollo de un modelo oculto de Markov (HMM) se entren&#xF3; con secuencias promotoras conocidas y transpos&#xF3;n identifica-HRP, (iii) la identificaci&#xF3;n HMM de los promotores de aguas arriba de los 12 adicionales implicados los genes de virulencia-, y (iv) de microarrays y de an&#xE1;lisis de ARN blot de la expresi&#xF3;n HrpL dependiente de un subconjunto representativo de estos genes DC3000. Se encontr&#xF3; que el regul&#xF3;n hrp codifica para 4 candidatos adicionales de tipo III la secreci&#xF3;n de factores accesorios de maquinaria, hom&#xF3;logos del efector HopPsyA prote&#xED;nas, AvrPpiB1 (2 copias), AvrPpiC2, AvrPphD (2 copias), AvrPphE, AvrPphF y AvrXv3, y los genes asociados con la la producci&#xF3;n o el metabolismo de los factores de virulencia no relacionados con el sistema hrp secreci&#xF3;n de tipo III, incluyendo sintetasa siringomicina (Syre), N (&#xE9;psilon) - (indol-3-acetil)-L-lisina sintetasa (IaaL), y un regul&#xF3;n subsidiaria controlar coronatina producci&#xF3;n. Candidato adicional genes efectores, hopPtoA2, hopPtoB2, y un hom&#xF3;logo avrRps4, fueron precedidos por el HRP, como promotor de las secuencias, pero &#xE9;stos ten&#xED;an valores HMM expectativa de importancia relativamente baja y no detectable activado por HrpL.

Identificaci&#xF3;n de genoma de Pseudomonas syringae pv. Tomato DC3000 Promotores controladas por el factor de HrpL Alternativa Sigma

&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4E13;&#x95E8;&#x8C03;&#x8282; DNA &#x6A21;&#x677F;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x548C;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5730;&#x5728;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;Geminivirus &#x8FD0;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D; NSP &#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7A7F;&#x68AD;&#x75C5;&#x6BD2; DNA &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;AtNSI&#xFF0C;&#x4E0E;&#x65B0;&#x578B;&#x5E72;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;AtNSI &#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x5B88;&#x6052;&#x5927;&#x76F8;&#x5F84;&#x5EAD;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x4E0E;&#x65B0;&#x578B;&#x5E72;&#x6CD5;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x662F;&#x76F4;&#x63A5;&#x548C; AtNSI acetylates &#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; NSP&#xFF0C;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;AtNSI &#x4E13;&#x95E8; acetylates &#x75C5;&#x6BD2;&#x5916;&#x58F3;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;AtNSI &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x6838;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8F85;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#x5DF2;&#x77E5;&#x771F;&#x6838;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x3002;&#x53CA;&#x5176;&#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x589E;&#x5F3A;&#x767D;&#x83DC;&#x66F2;&#x53F6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x534F;&#x8C03;&#x4E0E;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x4ECE;&#x5176;&#x51FA;&#x53E3;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2; DNA &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4E59;&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E0E; geminivirus &#x8FD0;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D; NSP &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

Protein acetylation is important in regulating DNA-templated processes specifically and protein-protein interactions more generally in eukaryotes. The geminivirus movement protein NSP is essential for virus movement, shuttling the viral DNA genome between the nucleus and the cytoplasm. We have identified a novel Arabidopsis protein, AtNSI, that interacts with NSP. AtNSI is highly conserved among widely divergent plants. Biochemical studies show that its interaction with NSP is direct and that AtNSI acetylates histones, but not NSP, in vitro. Rather, AtNSI specifically acetylates the viral coat protein. AtNSI is a nuclear protein but does not act as a transcriptional coactivator in vitro, which distinguishes it from known eukaryotic histone acetyltransferases. Its overexpression enhances the efficiency of infection by Cabbage leaf curl virus. These findings suggest a role for protein acetylation in coordinating replication of the viral DNA genome with its export from the nucleus.

A novel Arabidopsis acetyltransferase interacts with the geminivirus movement protein NSP.

L&#39;ac&eacute;tylation des prot&eacute;ines est importante dans la r&eacute;gulation de processus bas&eacute; sur un mod&egrave;le l&#39;ADN sp&eacute;cifiquement et d&#39;interactions de prot&eacute;ine-prot&eacute;ine plus g&eacute;n&eacute;ralement chez les eucaryotes. La prot&eacute;ine de mouvement virose PSN est essentielle pour la circulation du virus, le g&eacute;nome de l&#39;ADN viral de la navette entre le noyau et le cytoplasme. Nous avons identifi&eacute; une nouvelle prot&eacute;ine d&#39;Arabidopsis, AtNSI, qui interagit avec le PSN. AtNSI est hautement conserv&eacute;e chez les plantes tr&egrave;s divergentes. Des &eacute;tudes biochimiques montrent que son interaction avec le PSN est directe et que AtNSI ac&eacute;tyle des histones, mais pas NSP, in vitro. Au contraire, AtNSI ac&eacute;tyle sp&eacute;cifiquement la prot&eacute;ine de capside virale. AtNSI est une prot&eacute;ine nucl&eacute;aire mais n&#39;agit pas comme un co-activateur transcriptionnel in vitro, qui le distingue de l&#39;histone eucaryotes connu ac&eacute;tyltransf&eacute;rases. Sa surexpression am&eacute;liore l&#39;efficacit&eacute; de l&#39;infection par le virus de l&#39;enroulement chou. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent un r&ocirc;le pour l&#39;ac&eacute;tylation des prot&eacute;ines en coordination la r&eacute;plication du g&eacute;nome viral de l&#39;ADN avec son exportation &agrave; partir du noyau.

Un roman Arabidopsis ac&eacute;tyltransf&eacute;rase interagit avec la prot&eacute;ine de mouvement de virose du PSN.

Ein Roman aus Arabidopsis Acetyltransferase interagiert mit dem Gemini-Virus-Protein NSP Bewegung.

Acetilazione della proteina &egrave; importante nel disciplinare specificamente processi basati sul DNA e le interazioni della proteina-proteina, pi&ugrave; in generale negli eucarioti. La proteina di movimento geminivirus NSP &egrave; essenziale per la circolazione del virus, il genoma del DNA virale la spola tra il nucleo e il citoplasma. Abbiamo identificato una proteina novella di Arabidopsis, AtNSI, che interagisce con NSP. AtNSI &egrave; altamente conservato tra le piante ampiamente divergenti. Studi biochimici mostrano che la sua interazione con NSP &egrave; diretta e che AtNSI acetila gli istoni, ma non NSP, in vitro. Piuttosto, AtNSI acetila specificamente la proteina virale cappotto. AtNSI &egrave; una proteina nucleare, ma non agisce come un coactivator transcriptional in vitro, che lo distingue dal noto eucariotica istone acetiltransferasi. Sua sovraespressione migliora l&#39;efficienza di infezione da Cabbage leaf curl virus. Questi risultati suggeriscono un ruolo per acetilazione della proteina in coordinamento replicazione del genoma virale del DNA con l&#39;esportazione dal nucleo.

Un romanzo Arabidopsis acetiltransferasi interagisce con la proteina di movimento geminivirus NSP.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F; DNA &#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30B8;&#x30A7;&#x30DF;&#x30CB; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x79FB;&#x884C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; NSP &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; DNA &#x306E;&#x6838;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9593;&#x5F80;&#x5FA9;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;NSP &#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B; AtNSI &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;AtNSI &#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5E83;&#x304F;&#x767A;&#x6563;&#x690D;&#x7269;&#x9593;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F; NSP &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;AtNSI &#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x3044; NSP, in vitro &#x3067;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3080;&#x3057;&#x308D;&#x3001;AtNSI &#x306F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x3002;AtNSI &#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x771F;&#x6838;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x304B;&#x3089;&#x533A;&#x5225;&#x306F;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B3;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; in vitro &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D9;&#x30C4;&#x8449;&#x8449;&#x5DFB;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x611F;&#x67D3;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; DNA &#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x6838;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA; &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30B8;&#x30A7;&#x30DF;&#x30CB; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x79FB;&#x884C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; NSP &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; acetylation DNA &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xAE30;&#xBC18; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C; &#xBC0F; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. Geminivirus &#xC6B4;&#xB3D9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; NSP &#xD575;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC0AC;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; DNA &#xAC8C;&#xB188; &#xC600;&#xC8E0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C;&#xC124; Arabidopsis &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, NSP&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; Atnsi&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. Atnsi&#xC740; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD84;&#xAE30; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC911; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; NSP&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC9C1;&#xC811; &#xACE0; AtNSI acetylates &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; NSP, &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC624;&#xD788;&#xB824;, Atnsi&#xB294; &#xD2B9;&#xD788; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC678; &#xD22C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; acetylates. AtNSI &#xD575; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC9C4; &#xD575; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; acetyltransferases&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC744; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; transcriptional coactivator &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC791; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; overexpression &#xC591;&#xBC30;&#xCD94; &#xC78E; &#xCEEC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; acetylation &#xD575;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC218;&#xCD9C;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; DNA &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xC870;&#xC815; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;.

&#xC18C;&#xC124; Arabidopsis acetyltransferase geminivirus &#xC6B4;&#xB3D9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; NSP&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La acetilaci&oacute;n de la prote&iacute;na es importante en regular espec&iacute;ficamente ADN-plantilla procesos y las interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na m&aacute;s generalmente en eucariotas. La prote&iacute;na de movimiento de geminivirus NSP es esencial para el movimiento del virus, trasladar el genoma viral de ADN entre el n&uacute;cleo y el citoplasma. Hemos identificado una nueva prote&iacute;na de Arabidopsis, AtNSI, que interact&uacute;a con NSP. AtNSI es altamente conservada entre plantas ampliamente divergentes. Estudios bioqu&iacute;micos demuestran que su interacci&oacute;n con NSP es directo y que AtNSI acetylates las histonas, pero no de NSP, in vitro. Por el contrario, AtNSI acetylates espec&iacute;ficamente la prote&iacute;na de la c&aacute;psida viral. AtNSI es una prote&iacute;na nuclear pero no act&uacute;a como un coactivador transcripcional in vitro, que la distingue de conocidos eucariotas histona Acetiltransferasas. Su sobreexpresi&oacute;n realza la eficacia de la infecci&oacute;n por virus de enrollamiento de la hoja de col. Estos resultados sugieren un papel para la acetilaci&oacute;n de la prote&iacute;na en coordinaci&oacute;n replicaci&oacute;n del genoma viral ADN con su exportaci&oacute;n del n&uacute;cleo.

Una novela acetiltransferasa de Arabidopsis interact&uacute;a con la prote&iacute;na de movimiento de geminivirus NSP.

&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x6591;&#x70B9;&#x75C5; pathovar &#x756A;&#x8304; DC3000 (DC3000)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x756A;&#x8304;&#x548C;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x3002;(6.5 Megabases) DC3000 &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5305;&#x542B;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5706;&#x5F62;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8D28;&#x7C92;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x96C6;&#x4F53;&#x7F16;&#x7801; 5,763 ORFs&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x8BBE;&#x7ACB;&#x7684; 298 &#x548C;&#x5047;&#x5B9A;&#x5B58;&#x5728;&#x6BD2;&#x529B;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x51E0;&#x4E2A;&#x96C6;&#x7FA4;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x786E;&#x8BA4; 31 &#x548C; 19 &#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E09;&#x3001; &#x5206;&#x6CCC;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x81F4;&#x75C5;&#x57FA;&#x56E0; paralogous &#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x8FD1;&#x7AEF;&#x5230;&#x79FB;&#x52A8;&#x5143;&#x7D20;&#xFF0C;&#x96C6;&#x4F53;&#x5360; 7%&#x7684; DC3000 &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7EC6;&#x83CC;&#x62E5;&#x6709;&#x7528;&#x4E8E;&#x8D2D;&#x7F6E;&#x517B;&#x5206;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x5927;&#x6C47;&#x8F91; &#x300B;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x7CD6;&#x7C7B;&#x3001; &#x4EE5;&#x53CA;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x9644;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x53D7;&#x7275;&#x8FDE;&#x3002;&#x8D85;&#x8FC7; 12%&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x732E;&#x7ED9;&#x89C4;&#x4F8B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53EF;&#x80FD;&#x53CD;&#x6620;&#x51FA;&#x5FEB;&#x901F;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x53CA;&#x9644;&#x751F;&#x589E;&#x957F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x9047;&#x5230;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x9700;&#x8981;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5206;&#x6790;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x9AD8;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#x4E0E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6709;&#x5E8F;&#x7684;&#x5047;&#x3001; &#x6076;&#x81ED;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x3001; &#x5C1A;&#x672A;&#x900F;&#x9732; 1,159 DC3000&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; 811 &#x7F3A;&#x4E4F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x6240;&#x7279;&#x6709;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;

&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x548C;&#x756A;&#x8304;&#x75C5;&#x539F;&#x91CE;&#x706B;&#x5149;&#x4F0F;&#x3002;&#x756A;&#x8304; DC3000&#x3002;

We report the complete genome sequence of the model bacterial pathogen Pseudomonas syringae pathovar tomato DC3000 (DC3000), which is pathogenic on tomato and Arabidopsis thaliana. The DC3000 genome (6.5 megabases) contains a circular chromosome and two plasmids, which collectively encode 5,763 ORFs. We identified 298 established and putative virulence genes, including several clusters of genes encoding 31 confirmed and 19 predicted type III secretion system effector proteins. Many of the virulence genes were members of paralogous families and also were proximal to mobile elements, which collectively comprise 7% of the DC3000 genome. The bacterium possesses a large repertoire of transporters for the acquisition of nutrients, particularly sugars, as well as genes implicated in attachment to plant surfaces. Over 12% of the genes are dedicated to regulation, which may reflect the need for rapid adaptation to the diverse environments encountered during epiphytic growth and pathogenesis. Comparative analyses confirmed a high degree of similarity with two sequenced pseudomonads, Pseudomonas putida and Pseudomonas aeruginosa, yet revealed 1,159 genes unique to DC3000, of which 811 lack a known function.

The complete genome sequence of the Arabidopsis and tomato pathogen Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000.

Nous rapportons la s&#xE9;quence compl&#xE8;te du g&#xE9;nome de la bact&#xE9;rie pathog&#xE8;ne mod&#xE8;le Pseudomonas syringae pathovar DC3000 tomate (DC3000), qui est pathog&#xE8;ne sur tomate et Arabidopsis thaliana. Le g&#xE9;nome DC3000 (6,5 m&#xE9;gabases) contient un chromosome circulaire et deux plasmides, qui, collectivement, coder 5,763 ORF. Nous avons identifi&#xE9; 298 g&#xE8;nes de virulence &#xE9;tablis et putative, y compris plusieurs groupes de g&#xE8;nes codant pour 31 confirm&#xE9;s et 19 prot&#xE9;ines de type III pr&#xE9;dit syst&#xE8;me de s&#xE9;cr&#xE9;tion de effectrices. La plupart des g&#xE8;nes de virulence &#xE9;taient membres de familles paralogues et qui &#xE9;taient aussi proximale &#xE0; des &#xE9;l&#xE9;ments mobiles qui, collectivement, repr&#xE9;sentent 7% du g&#xE9;nome DC3000. La bact&#xE9;rie poss&#xE8;de un large r&#xE9;pertoire de transporteurs pour l&#x26;#39;acquisition d&#x26;#39;&#xE9;l&#xE9;ments nutritifs, en particulier les sucres, ainsi que des g&#xE8;nes impliqu&#xE9;s dans l&#x26;#39;attachement &#xE0; la surface des plantes. Plus de 12% des g&#xE8;nes sont d&#xE9;di&#xE9;s &#xE0; la r&#xE9;glementation, ce qui peut refl&#xE9;ter la n&#xE9;cessit&#xE9; d&#x26;#39;une adaptation rapide aux divers environnements rencontr&#xE9;s au cours de la croissance &#xE9;piphyte et la pathogen&#xE8;se. Des analyses comparatives ont confirm&#xE9; un haut degr&#xE9; de similitude avec pseudomonades s&#xE9;quenc&#xE9;s deux, Pseudomonas putida et Pseudomonas aeruginosa, encore r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; 1,159 g&#xE8;nes uniques &#xE0; DC3000, dont 811 n&#x26;#39;ont pas de fonction connue.

La s&#xE9;quence compl&#xE8;te du g&#xE9;nome de l&#x26;#39;Arabidopsis et tomate pathog&#xE8;nes Pseudomonas syringae pv. Tomate DC3000

Die komplette Genomsequenz des Arabidopsis und Tomate Erreger Pseudomonas syringae pv. Tomaten DC3000.

Riportiamo la sequenza completa del genoma del patogeno batterico modello pomodoro di Pseudomonas syringae pathovar DC3000 (DC3000), che &egrave; patogena sul pomodoro e Arabidopsis thaliana. Il genoma DC3000 (6,5 MB) contiene un cromosoma circolare e due plasmidi, che codificano collettivamente 5.763 ORFs. Abbiamo identificato 298 stabilito e geni di virulenza putativo, compresi diversi cluster di geni che codificano per 31 confermato e 19 previsto tipo III secrezione proteine delle sistema effettrici. Molti dei geni di virulenza erano membri di famiglie paralogous e furono anche prossimale di elementi mobili, che collettivamente costituiscono il 7% del genoma DC3000. Il batterio possiede un vasto repertorio di trasportatori per l&#39;acquisizione dei nutrienti, specialmente gli zuccheri, cos&igrave; come geni implicati nell&#39;attacco a piantare le superfici. Oltre 12% dei geni sono dedicati al regolamento, che pu&ograve; riflettere la necessit&agrave; di rapido adattamento ai diversi ambienti incontrati durante la patogenesi e la crescita epifita. Analisi comparative ha confermato un elevato grado di somiglianza con due sequenziata Pseudomonas, Pseudomonas putida e Pseudomonas aeruginosa, ancora rivelato 1.159 geni unici a DC3000, di cui 811 manca una funzione conosciuta.

La sequenza completa del genoma di Arabidopsis e pomodoro patogeno Pseudomonas syringae pv. Tomato DC3000.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x3084;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x7D30;&#x83CC;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;Pseudomonas syringae&#x306E;pathovar&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;DC3000&#xFF08;DC3000&#xFF09;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DC3000&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#xFF08;6.5&#x30E1;&#x30AC;&#xFF09;&#x306E;&#x74B0;&#x72B6;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x3068;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;5763&#x306E;ORF&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;31&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3001;19&#x306F;&#x4E88;&#x6E2C;III&#x578B;&#x5206;&#x6CCC;&#x7CFB;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x3092;&#x542B;&#x3080;298&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x30D1;&#x30E9;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x3082;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;DC3000&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;7&#xFF05;&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x308B;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x306B;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x6804;&#x990A;&#x7D20;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x7CD6;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x3078;&#x306E;&#x4ED8;&#x7740;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30EC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;12&#xFF05;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x304C;&#x7740;&#x751F;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x767A;&#x75C7;&#x6642;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x74B0;&#x5883;&#x3078;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x9069;&#x5FDC;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x5C02;&#x5FF5;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F03;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x3060;811&#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x306E;DC3000&#x306B;&#x4E00;&#x610F;&#x306E;1159&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Pseudomonas&#x5C5E;&#x3001;&#x30B7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#xB7;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C0;&#xFF08;Pseudomonas putida&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x3068;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x5EA6;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;

&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x3001;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x75C5;&#x539F;Pseudomonas syringae&#x306E;PV&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x914D;&#x5217;&#x3002;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;DC3000

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xB179; syringae pathovar &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; DC3000 (DC3000) &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xC640; Arabidopsis thaliana&#xC5D0; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. DC3000 &#xAC8C;&#xB188; (6.5 megabases)&#xC5D0; &#xC6D0;&#xD615; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xCD1D;&#xCE6D; 5,763 ORFs &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xB450; plasmids &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 298 &#xC124;&#xB9BD; &#xBC0F; &#xC0C1; &#xB3C5;&#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD655;&#xC778; 31 &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB4F1; 19 &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xC720;&#xD615; III &#xBD84; &#xBE44; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9CE;&#xC740; &#xB3C5;&#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; paralogous &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC77C;&#xC6D0; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xCD1D;&#xCE6D; DC3000 &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; 7%&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xBC14;&#xC77C; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC778;&#xC811; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB294; &#xC601;&#xC591;&#xBD84;&#xC758; &#xC218;&#xC9D1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC758; &#xD070; &#xB808; &#xD37C; &#xD1A0;&#xB9AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC720; &#xD558; &#xACE0;, &#xD2B9;&#xD788; &#xC124;&#xD0D5;, &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xD3EC; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C;. &#xC774;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 12%&#xB294; &#xADDC;&#xC81C; epiphytic &#xC131;&#xC7A5;&#xACFC; pathogenesis &#xC911;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xBE60;&#xB978; &#xC801;&#xC751;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694;&#xB97C; &#xBC18;&#xC601;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xCD5C;&#xC120;&#xC744; &#xB2E4;&#xD558;&#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xAD50; &#xBD84;&#xC11D; &#xC544;&#xC9C1; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xB450; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; pseudomonads, &#xB179; putida, &#xB179; &#xB18D; &#xADE0;&#xACFC; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; 1159 &#xC720;&#xC804;&#xC790; DC3000, 811&#xC758; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0; &#xACF5;&#xAC1C;.

&#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xC640; Arabidopsis &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xB179; syringae&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; pv. DC3000 &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se presenta la secuencia completa del genoma del modelo pat&#xF3;geno bacteriano Pseudomonas syringae patovar tomato DC3000 (DC3000), que es pat&#xF3;geno en tomate y Arabidopsis thaliana. El genoma DC3000 (6,5 megabases) contiene un cromosoma circular y dos pl&#xE1;smidos, que en conjunto 5.763 ORFs codifican. Se identificaron 298 genes de virulencia establecidas y la posible existencia, entre ellos varios grupos de genes que codifican 31 confirmados y predijo 19 tipo III prote&#xED;nas efectoras del sistema de secreci&#xF3;n. Muchos de los genes de virulencia eran miembros de familias paralogous y tambi&#xE9;n fueron proximales a los elementos m&#xF3;viles, que colectivamente forman el 7% del genoma DC3000. La bacteria posee un amplio repertorio de los transportistas para la adquisici&#xF3;n de nutrientes, especialmente az&#xFA;cares, as&#xED; como los genes implicados en el apego a la superficie de las plantas. M&#xE1;s del 12% de los genes que se dedican a la regulaci&#xF3;n, lo que puede reflejar la necesidad de una r&#xE1;pida adaptaci&#xF3;n a los diversos ambientes se encuentran durante el crecimiento de ep&#xED;fitas y la patogenia. An&#xE1;lisis comparativos confirm&#xF3; un alto grado de similitud con dos pseudomonas secuenciados, Pseudomonas putida y Pseudomonas aeruginosa, sin embargo, revel&#xF3; 1.159 genes &#xFA;nicos para DC3000, de los cuales 811 carecen de una funci&#xF3;n conocida.

La secuencia completa del genoma de la Arabidopsis y tomate pat&#xF3;geno Pseudomonas syringae pv. Tomato DC3000

DNA viruses can modulate the activity of cellular acetyltransferases to regulate virus gene expression and to affect cell cycle progression in order to support virus replication. A role for protein acetylation in regulating the nuclear export of the bipartite geminivirus DNA genome was recently suggested by the findings that the viral movement protein NSP, which shuttles the viral genome between the nucleus and the cytoplasm, interacts with a novel Arabidopsis acetyltransferase, AtNSI, and the increased expression of AtNSI enhances susceptibility to Cabbage leaf curl virus infection. To further investigate the interaction of NSP and AtNSI and to establish the importance of this interaction in virus infections, we used a reverse yeast two-hybrid selection and deletion analysis to identify NSP mutants that were impaired in their ability to bind AtNSI. These mutants identified a 38-amino-acid region of NSP, to which no function had so far been assigned, as being necessary for NSP-AtNSI interaction. Three NSP missense mutants were analyzed in detail and were found to be comparable to wild-type NSP in their levels of accumulation, nucleocytoplasmic shuttling, DNA binding, and cooperative interaction with the viral cell-to-cell movement protein MP. Despite this, Cabbage leaf curl virus that expressed each mutated NSP was defective in its ability to infect Arabidopsis, exhibiting lower levels of infectivity than the wild-type virus, and delayed systemic spread of the virus and attenuated disease symptoms. Our data demonstrate the importance of the interaction of NSP with AtNSI for virus infection and pathogenicity.

Interaction of the movement protein NSP and the Arabidopsis acetyltransferase AtNSI is necessary for Cabbage leaf curl geminivirus infection and pathogenicity.

Nuclear shuttling in plant cells.

DNA viruses can suppress or enhance the activity of cellular acetyltransferases to regulate virus gene expression and to affect cell cycle progression in support of virus replication. A role for protein acetylation in regulating the nuclear export of the bipartite geminivirus (Begomovirus) DNA genome was recently suggested by the findings that the viral movement protein NSP, a nuclear shuttle protein, interacts with the Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) nuclear acetyltransferase AtNSI (nuclear shuttle protein interactor), and that this interaction and NSI expression are necessary for cabbage leaf curl virus infection and pathogenicity. To further investigate the consequences of NSI-NSP interactions, and the potential role of NSI in Arabidopsis growth and development, we used a reverse yeast two-hybrid selection and deletion analysis to identify NSI mutants that failed to interact with NSP, and promoter fusions to a uidA reporter gene to analyze the pattern of NSI expression during plant development. We found that NSI self assembles into highly active enzyme complexes and that high concentrations of NSP, in the absence of viral DNA, can inhibit NSI activity in vitro. Based on our detailed analysis of three NSI missense mutants, we identified an 88-amino acid putative domain, which spans NSI residues 107 to 194, as being required for both NSI oligomerization and its interaction with NSP. Finally, we found that NSI is predominantly transcribed in vascular cells, and that its expression is developmentally regulated in a manner that resembles the sink-to-source transition. Our data indicate that NSP can inhibit NSI activity by interfering with its assembly into highly active complexes, and suggest a mechanism by which NSP can both recruit NSI to regulate nuclear export of the viral genome and down-regulate NSI activity on cellular targets, perhaps to affect cellular differentiation and favor virus replication.

The geminivirus nuclear shuttle protein NSP inhibits the activity of AtNSI, a vascular-expressed Arabidopsis acetyltransferase regulated with the sink-to-source transition.

Transient gene expression is an indispensable tool for studying functions of gene products. In the case of plants, transient introduction of genes by Agrobacterium infiltration is a method of choice for many species. However, this technique does not work efficiently in Arabidopsis leaf tissue, the most widely used model system for basic plant biology research. Here we present an optimized protocol for biolistic delivery of plasmid DNA into the epidermis of Arabidopsis leaves, which can be easily performed using the Bio-Rad Helios gene gun system. This protocol yields efficient and reproducible transient expression of diverse genes and is exemplified here for use in a functional assay of a transcription repressor and for the subcellular localization and cell-to-cell movement of plant viral movement protein. This protocol is suitable for studies of biological function and subcellular localization of the gene product of interest directly in planta by utilizing different types of activity-based assays. Using this procedure, the data are obtained after 2-4 d of work.

Functional transient genetic transformation of Arabidopsis leaves by biolistic bombardment.

&#x77AC;&#x6001;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x7814;&#x7A76;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6216;&#x7F3A;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x519C;&#x6746;&#x83CC;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6E17;&#x900F;&#x7684;&#x77AC;&#x6001;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x662F;&#x8BB8;&#x591A;&#x7269;&#x79CD;&#x9009;&#x62E9;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x4E0D;&#x80FD;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x53F6;&#x7247;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x57FA;&#x672C;&#x690D;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6700;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E00;&#x79CD;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x67AA;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92; DNA &#x5230;&#x8868;&#x76AE;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x7684;&#x53F6;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x751F;&#x7269; Rad Helios &#x57FA;&#x56E0;&#x67AA;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8F7B;&#x677E;&#x5730;&#x6267;&#x884C;&#x534F;&#x8BAE;&#x3002;&#x672C;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x6536;&#x76CA;&#x7387;&#x4E0D;&#x540C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x548C;&#x53EF;&#x91CD;&#x73B0;&#x77AC;&#x65F6;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x4F8B;&#x5B50;&#x5C31;&#x662F;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E2D;&#x8F6C;&#x5F55;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x529F;&#x80FD;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x53CA;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x548C;&#x690D;&#x7269;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8FD0;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3002;&#x8BE5;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x662F;&#x9002;&#x5408;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x53CA;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x7269;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x5174;&#x8DA3; planta &#x5229;&#x7528;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x6570;&#x636E;&#x83B7;&#x5F97;&#x540E; 2-4 d &#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3002;

&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x77AC;&#x6001;&#x9057;&#x4F20;&#x8F6C;&#x5316;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x7684;&#x53F6;&#x7247;&#x67AA;&#x6CD5;&#x3002;

Expression transitoire de g&#xE8;nes est un outil indispensable pour &#xE9;tudier les fonctions de produits g&#xE9;niques. Dans le cas des plantes, l&#x26;#39;introduction transitoire de g&#xE8;nes par l&#x26;#39;infiltration d&#x26;#39;Agrobacterium est une m&#xE9;thode de choix pour de nombreuses esp&#xE8;ces. Cependant, cette technique ne fonctionne pas efficacement dans les tissus foliaires Arabidopsis, le syst&#xE8;me mod&#xE8;le le plus largement utilis&#xE9; pour la recherche de biologie v&#xE9;g&#xE9;tale de base. Ici, nous pr&#xE9;sentons un protocole optimis&#xE9; pour la livraison biolistique d&#x26;#39;ADN plasmidique dans l&#x26;#39;&#xE9;piderme des feuilles d&#x26;#39;Arabidopsis, qui peut &#xEA;tre facilement r&#xE9;alis&#xE9;e en utilisant le Bio-Rad syst&#xE8;me H&#xE9;lios canon &#xE0; g&#xE8;nes. Ce protocole donne efficace et reproductible expression transitoire de g&#xE8;nes diff&#xE9;rents et est exemplifi&#xE9; pour l&#x26;#39;utilisation dans un test fonctionnel d&#x26;#39;un r&#xE9;presseur transcriptionnel, et pour la localisation subcellulaire et cellule &#xE0; cellule mouvement de prot&#xE9;ine de mouvement viral v&#xE9;g&#xE9;tal. Ce protocole est adapt&#xE9; pour les &#xE9;tudes de fonction biologique et la localisation subcellulaire du produit du g&#xE8;ne d&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t directement dans la plante en utilisant diff&#xE9;rents types d&#x26;#39;activit&#xE9;s bas&#xE9;es sur des tests. En utilisant cette proc&#xE9;dure, les donn&#xE9;es sont obtenues apr&#xE8;s 2-4 D de travail.

Fonctionnelle de transformation g&#xE9;n&#xE9;tique transitoire des feuilles d&#x26;#39;Arabidopsis par bombardement biolistique

Transiente Genexpression ist ein unverzichtbares Werkzeug f&uuml;r die Untersuchung von Funktionen von Genprodukten. Im Falle von Pflanzen ist vor&uuml;bergehende Einf&uuml;hrung Gene durch Agrobacterium Eindringen eine Methode der Wahl f&uuml;r viele Vogelarten. Jedoch funktioniert diese Technik nicht effizient in Arabidopsis Blattgewebe, die am h&auml;ufigsten verwendeten Modellsystem f&uuml;r grundlegende Biologie Pflanzenforschung. Hier pr&auml;sentieren wir ein optimiertes Protokoll f&uuml;r biolistische Zustellung von Plasmid DNA in der Epidermis von Arabidopsis-Bl&auml;tter, die mit dem Bio-Rad-Helios-gen-Waffe-System leicht durchgef&uuml;hrt werden k&ouml;nnen. Dieses Protokoll liefert effiziente und reproduzierbare transiente Expression von unterschiedlichen Genen und ist hier beispielhaft f&uuml;r eine funktionelle Assay ein Verdr&auml;nger Transkription und f&uuml;r die subzellulare Lokalisation und Zell-Zell-Bewegung des viralen Bewegung Pflanzeneiwei&szlig;. Dieses Protokoll eignet sich f&uuml;r Studien der biologischen Funktion und subzellulare Lokalisation des Produkts gen des Interesses direkt an Planta durch die Verwendung von verschiedener Arten von Activity based Assays. Bei diesem Verfahren werden die Daten nach 2-4 d Arbeit gewonnen.

Funktionale transient genetische Transformation von Arabidopsis l&auml;sst durch biolistische Bombardement.

Espressione genica transitoria &egrave; uno strumento indispensabile per lo studio delle funzioni dei prodotti del gene. Nel caso di piante, transitoria introduzione di geni di infiltrazione dell&#39;agrobatterio &egrave; un metodo di scelta per molte specie. Tuttavia, questa tecnica non funziona in modo efficiente in Arabidopsis foglia tessuto, il sistema di modello pi&ugrave; ampiamente usato per la ricerca di biologia vegetale di base. Qui di seguito presentiamo un protocollo ottimizzato per la consegna di tali del DNA del plasmide nell&#39;epidermide delle foglie di Arabidopsis, che possono essere facilmente eseguite utilizzando il sistema Bio-Rad Helios gene gun. Questo protocollo rese efficienti e riproducibile transitoria espressione di diversi geni ed &egrave; esemplificata qui per uso in un&#39;analisi funzionale di un repressore della trascrizione e per la localizzazione sottocellulare e movimento alla cella di proteine vegetali movimento virale. Questo protocollo &egrave; adatto per gli studi di funzione biologica e localizzazione subcellulare del prodotto del gene di interesse direttamente in planta utilizzando diversi tipi di analisi basate su attivit&agrave;. Utilizzando questa procedura, i dati sono ottenuti dopo 2-4 d del lavoro.

Trasformazione genetica funzionale transitoria di Arabidopsis lascia da tali bombardamenti.

&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6D78;&#x900F;&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x5C0E;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7A2E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306F;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x8449;&#x7D44;&#x7E54;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9283;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AA;&#x30B9;Bio-Rad&#x793E;&#x88FD;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x8449;&#x306E;&#x8868;&#x76AE;&#x306B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;DNA&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9283;&#x9001;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x306E;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x3068;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x690D;&#x7269;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x79FB;&#x884C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x4F8B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x690D;&#x7269;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x4F5C;&#x696D;&#x306E;2-4&#x65E5;&#x5F8C;&#x306B;&#x53D6;&#x5F97;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5FAE;&#x7C92;&#x5B50;&#x9283;&#x7206;&#x6483;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x8449;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x904E;&#x6E21;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;

&#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xADFC; &#xCE68;&#xD22C; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xB3C4;&#xC785; &#xB9CE;&#xC740; &#xC885;&#xC871;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; Arabidopsis &#xC78E; &#xC870;&#xC9C1;, &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xB77C; &#xB4DC; &#xD5EC; &#xB9AC;&#xC624;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCD1D; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC218;&#xD589;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; Arabidopsis &#xC78E;&#xC758; &#xD45C; &#xD53C;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; DNA&#xC758; biolistic &#xB0A9;&#xD488;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC7AC;&#xD604; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xACFC;&#xB3C4; &#xC2DD; &#xC218;&#xC775;&#xB960; &#xC804;&#xC0AC; &#xC9C4;&#xC555;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC774;&#xB3D9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC140; &#xC6B4;&#xB3D9;&#xACFC; subcellular &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xC99D; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAE30;&#xBC18;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xAD00;&#xC2EC; planta&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; subcellular &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC808;&#xCC28;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC791;&#xC5C5;&#xC758; 2-4 d &#xD6C4; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Arabidopsis&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; biolistic &#xD3ED;&#xACA9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB098;&#xBB47;&#xC78E;.

La expresi&#xF3;n g&#xE9;nica transitoria es una herramienta indispensable para el estudio de las funciones de los productos g&#xE9;nicos. En el caso de las plantas, introducci&#xF3;n transitoria de genes por la infiltraci&#xF3;n de Agrobacterium es un m&#xE9;todo de elecci&#xF3;n para muchas especies. Sin embargo, esta t&#xE9;cnica no funciona de manera eficiente en el tejido foliar de Arabidopsis, el sistema modelo m&#xE1;s ampliamente utilizado para la investigaci&#xF3;n b&#xE1;sica biolog&#xED;a de las plantas. Aqu&#xED; presentamos un protocolo optimizado para suministro biol&#xED;stico de ADN pl&#xE1;smido en la epidermis de las hojas de Arabidopsis, que pueden ser f&#xE1;cilmente realizadas utilizando el Bio-Rad Helios sistema gen pistola. Este protocolo se obtiene la expresi&#xF3;n transitoria eficiente y reproducible de diversos genes y se ejemplifica aqu&#xED; para su uso en un ensayo funcional de un represor de la transcripci&#xF3;n y para la localizaci&#xF3;n subcelular y c&#xE9;lula a c&#xE9;lula movimiento de prote&#xED;na vegetal movimiento viral. Este protocolo es adecuado para estudios de la funci&#xF3;n biol&#xF3;gica y la localizaci&#xF3;n subcelular del producto del gen de inter&#xE9;s directamente en planta mediante la utilizaci&#xF3;n de diferentes tipos de ensayos basados &#x200B;&#x200B;en la actividad. Utilizando este procedimiento, los datos se obtienen despu&#xE9;s de 2-4 d&#xED;as de trabajo.

Funcional de transformaci&#xF3;n transitoria gen&#xE9;tica de las hojas de Arabidopsis mediante el bombardeo biol&#xED;sticos

Synaptotagmins are calcium sensors that regulate synaptic vesicle exo/endocytosis. Thought to be exclusive to animals, they have recently been characterized in plants. We show that Arabidopsis synaptotagmin SYTA regulates endosome recycling and movement protein (MP)-mediated trafficking of plant virus genomes through plasmodesmata. SYTA localizes to endosomes in plant cells and directly binds the distinct Cabbage leaf curl virus (CaLCuV) and Tobacco mosaic virus (TMV) cell-to-cell movement proteins. In a SYTA knockdown line, CaLCuV systemic infection is delayed, and cell-to-cell spread of TMV and CaLCuV movement proteins is inhibited. A dominant-negative SYTA mutant causes depletion of plasma membrane-derived endosomes, produces large intracellular vesicles attached to plasma membrane, and inhibits cell-to-cell trafficking of TMV and CaLCuV movement proteins, when tested in an Agrobacterium-based leaf expression assay. Our studies show that SYTA regulates endocytosis, and suggest that distinct virus movement proteins transport their cargos to plasmodesmata for cell-to-cell spread via an endocytic recycling pathway.

Arabidopsis synaptotagmin SYTA regulates endocytosis and virus movement protein cell-to-cell transport.

Plant viruses overcome the barrier of the plant cell wall by encoding cell-to-cell movement proteins (MPs), which direct newly replicated viral genomes to, and across, the wall. The paradigm for how a single MP regulates and coordinates these activities is the Tobacco mosaic virus (TMV) 30-kDa protein (MP(TMV)). Detailed studies demonstrate that TMV multiplies exclusively in the cytoplasm and have documented associations of MP(TMV) with endoplasmic reticulum (ER) membrane, microtubules, and plasmodesmata throughout the course of infection. As TMV poorly infects Arabidopsis thaliana, Turnip vein clearing virus (TVCV) is the tobamovirus of choice for studies in this model plant. A key problem, which has contributed to confusion in the field, is the unproven assumption that the TVCV and TMV life cycles are identical. We engineered an infectious TVCV replicon that expressed a functional fluorescence-tagged MP(TVCV) and report here the unexpected discovery that MP(TVCV), beyond localizing to ER membrane and plasmodesmata, targeted to the nucleus in a nuclear localization signal (NLS)-dependent manner, where it localized to novel F-actin-containing filaments that associated with chromatin. The MP(TVCV) NLS appeared to be conserved in the subgroup 3 tobamoviruses, and our mutational analyses showed that nuclear localization of MP(TVCV) was necessary for efficient TVCV cell-to-cell movement and systemic infection in Nicotiana benthamiana and Arabidopsis thaliana. Our studies identify a novel nuclear stage in TVCV infection and suggest that nuclear MP encoded by TVCV and other subgroup 3 tobamoviruses interacts with F-actin and chromatin to modulate host defenses or cellular physiology to favor virus movement and infection.

The tobamovirus Turnip Vein Clearing Virus 30-kilodalton movement protein localizes to novel nuclear filaments to enhance virus infection.

Synaptotagmins are a large gene family in animals that have been extensively characterized due to their role as calcium sensors to regulate synaptic vesicle exocytosis and endocytosis in neurons, and dense core vesicle exocytosis for hormone secretion from neuroendocrine cells. Thought to be exclusive to animals, synaptotagmins have recently been characterized in Arabidopsis thaliana, in which they comprise a five gene family. Using infectivity and leaf-based functional assays, we have shown that Arabidopsis SYTA regulates endocytosis and marks an endosomal vesicle recycling pathway to regulate movement protein-mediated trafficking of the Begomovirus Cabbage leaf curl virus (CaLCuV) and the Tobamovirus Tobacco mosaic virus (TMV) through plasmodesmata (Lewis and Lazarowitz, 2010). To determine whether SYTA has a central role in regulating the cell-to-cell trafficking of a wider range of diverse plant viruses, we extended our studies here to examine the role of SYTA in the cell-to-cell movement of additional plant viruses that employ different modes of movement, namely the Potyvirus Turnip mosaic virus (TuMV), the Caulimovirus Cauliflower mosaic virus (CaMV) and the Tobamovirus Turnip vein clearing virus (TVCV), which in contrast to TMV does efficiently infect Arabidopsis. We found that both TuMV and TVCV systemic infection, and the cell-to-cell trafficking of the their movement proteins, were delayed in the Arabidopsis Col-0 syta-1 knockdown mutant. In contrast, CaMV systemic infection was not inhibited in syta-1. Our studies show that SYTA is a key regulator of plant virus intercellular movement, being necessary for the ability of diverse cell-to-cell movement proteins encoded by Begomoviruses (CaLCuV MP), Tobamoviruses (TVCV and TMV 30K protein) and Potyviruses (TuMV P3N-PIPO) to alter PD and thereby mediate virus cell-to-cell spread.

The Arabidopsis synaptotagmin SYTA regulates the cell-to-cell movement of diverse plant viruses.

Metazoan synaptotagmins are Ca(2+) sensors that regulate exocytosis and endocytosis in various cell types, notably in nerve and neuroendocrine cells [1, 2]. Recently, the structurally related extended synaptotagmins were shown to tether the cortical ER to the plasma membrane in human and yeast cells to maintain ER morphology and stabilize ER-plasma membrane (ER-PM) contact sites for intracellular lipid and Ca(2+) signaling [3, 4]. The Arabidopsis synaptotagmin SYTA regulates endocytosis and the ability of plant virus movement proteins (MPs) to alter plasmodesmata to promote virus cell-to-cell transport [5, 6]. Yet how MPs modify plasmodesmata, the cellular functions of SYTA and how these aid MP activity, and the proteins essential to form plant cell ER-PM contact sites remain unknown. We addressed these questions using an Arabidopsis SYTA knockdown line syta-1 and a Tobamovirus movement protein MP(TVCV) [5, 7]. We report here that SYTA localized to ER-PM contact sites. These sites were depleted and the ER network collapsed in syta-1, and both reformed upon rescue with SYTA. MP(TVCV) accumulation in plasmodesmata, but not secretory trafficking, was also inhibited in syta-1. During infection, MP(TVCV) recruited SYTA to plasmodesmata, and SYTA and the cortical ER were subsequently remodeled to form viral replication sites adjacent to plasmodesmata in which MP(TVCV) and SYTA directly interacted caged within ER membrane. SYTA also accumulated in plasmodesmata active in MP(TVCV) transport. Our findings show that SYTA is essential to form ER-PM contact sites and suggest that MPs interact with SYTA to recruit these sites to alter plasmodesmata for virus cell-to-cell movement.

Synaptotagmin SYTA forms ER-plasma membrane junctions that are recruited to plasmodesmata for plant virus movement.

Agrobacterium is a natural genetic engineer of plants that exports several virulence proteins into host cells in order to take advantage of the cell machinery to facilitate transformation and support bacterial growth. One of these effectors is the F-box protein VirF, which presumably uses the host ubiquitin/proteasome system (UPS) to uncoat the packaging proteins from the invading bacterial T-DNA. By analogy to several other bacterial effectors, VirF most likely has several functions in the host cell and, therefore, several interacting partners among host proteins. Here we identify one such interactor, an Arabidopsis trihelix-domain transcription factor VFP3, and further show that its very close homolog VFP5 also interacted with VirF. Interestingly, interactions of VirF with either VFP3 or VFP5 did not activate the host UPS, suggesting that VirF might play other UPS-independent roles in bacterial infection. To better understand the potential scope of VFP3 function, we used RNAi to reduce expression of the VFP3 gene. Transcriptome profiling of these VFP3-silenced plants using high-throughput cDNA sequencing (RNA-seq) revealed that VFP3 substantially affected plant gene expression; specifically, 1,118 genes representing approximately 5% of all expressed genes were significantly either up- or down-regulated in the VFP3 RNAi line compared to wild-type Col-0 plants. Among the 507 up-regulated genes were genes implicated in the regulation of transcription, protein degradation, calcium signaling, and hormone metabolism, whereas the 611 down-regulated genes included those involved in redox regulation, light reactions of photosynthesis, and metabolism of lipids, amino acids, and cell wall. Overall, this pattern of changes in gene expression is characteristic of plants under stress. Thus, VFP3 likely plays an important role in controlling plant homeostasis.

Interaction of Arabidopsis Trihelix-Domain Transcription Factors VFP3 and VFP5 with Agrobacterium Virulence Protein VirF.

Our fundamental knowledge of the protein-sorting pathways required for plant cell-to-cell trafficking and communication via the intercellular connections termed plasmodesmata has been severely limited by the paucity of plasmodesmal targeting sequences that have been identified to date. To address this limitation, we have identified the plasmodesmal localization signal (PLS) in the Tobacco mosaic virus (TMV) cell-to-cell-movement protein (MP), which has emerged as the paradigm for dissecting the molecular details of cell-to-cell transport through plasmodesmata. We report here the identification of a bona fide functional TMV MP PLS, which encompasses amino acid residues between positions 1 and 50, with residues Val-4 and Phe-14 potentially representing critical sites for PLS function that most likely affect protein conformation or protein interactions. We then demonstrated that this PLS is both necessary and sufficient for protein targeting to plasmodesmata. Importantly, as TMV MP traffics to plasmodesmata by a mechanism that is distinct from those of the three plant cell proteins in which PLSs have been reported, our findings provide important new insights to expand our understanding of protein-sorting pathways to plasmodesmata.

Article	Year
Genomewide identification of Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 promoters controlled by the HrpL alternative sigma factor. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 11854524	2002
A novel Arabidopsis acetyltransferase interacts with the geminivirus movement protein NSP. The Plant cell\| PubMed ID: 12837950	2003
The complete genome sequence of the Arabidopsis and tomato pathogen Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 12928499	2003
Interaction of the movement protein NSP and the Arabidopsis acetyltransferase AtNSI is necessary for Cabbage leaf curl geminivirus infection and pathogenicity. Journal of virology\| PubMed ID: 15452236	2004
Nuclear shuttling in plant cells. Symposia of the Society for Experimental Biology\| PubMed ID: 15565880	2004
The geminivirus nuclear shuttle protein NSP inhibits the activity of AtNSI, a vascular-expressed Arabidopsis acetyltransferase regulated with the sink-to-source transition. Plant physiology\| PubMed ID: 16461385	2006
Functional transient genetic transformation of Arabidopsis leaves by biolistic bombardment. Nature protocols\| PubMed ID: 19131958	2009
Arabidopsis synaptotagmin SYTA regulates endocytosis and virus movement protein cell-to-cell transport. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 20133785	2010
The tobamovirus Turnip Vein Clearing Virus 30-kilodalton movement protein localizes to novel nuclear filaments to enhance virus infection. Journal of virology\| PubMed ID: 23536678	2013
The Arabidopsis synaptotagmin SYTA regulates the cell-to-cell movement of diverse plant viruses. Frontiers in plant science\| PubMed ID: 25414709	2014
Synaptotagmin SYTA forms ER-plasma membrane junctions that are recruited to plasmodesmata for plant virus movement. Current biology : CB\| PubMed ID: 26166780	2015
Interaction of Arabidopsis Trihelix-Domain Transcription Factors VFP3 and VFP5 with Agrobacterium Virulence Protein VirF. PloS one\| PubMed ID: 26571494	2015
Identification of a Functional Plasmodesmal Localization Signal in a Plant Viral Cell-To-Cell-Movement Protein. mBio\| PubMed ID: 26787834	2016

Sondra G. Lazarowitz

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