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In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

University of California, Berkeley

&#x5728;&#x5916;&#x90E8;&#x5316;&#x7597;&#x5F15;&#x8BF1;&#x7684;&#x6E10;&#x53D8;&#xFF0C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x4E2D;&#x6027;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;) &#x548C;&#x76D8;&#x57FA;&#x7F51;&#x67C4;&#x83CC;&#x6709;&#x58F3;&#x53D8;&#x5F62;&#x866B;&#x901A;&#x8FC7;&#x504F;&#x632F;&#x5149;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x79EF;&#x7D2F;&#x8102;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x54E6;-&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187;-3 &#x6FC0;&#x9176; (PI(3)Ks)&#xFF0C;PtdIns(3,4,5)P(3)&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8FB9;&#x7F18;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5176;&#x5411;&#x4E0A;&#x6E10;&#x53D8; &#xFF1B;&#x5185;&#x90E8; PtdIns(3,4,5)P(3) &#x6E10;&#x53D8;&#x5927;&#x5927;&#x8D85;&#x8FC7;&#x5916;&#x90E8;&#x5F15;&#x8BF1;&#x5242;&#x3002;&#x968F;&#x9644;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x53CD;&#x9988;&#x56DE;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x653E;&#x5927;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6E10;&#x53D8;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#xFF1A; &#x5728;&#x524D;&#x6CBF; PtdIns(3,4,5)P(3) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6216;&#x591A;&#x4E2A; Rho &#x86CB;&#x767D; (Rac&#x3001; Cdc42 &#x6216; Rho)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x589E;&#x52A0; PtdIns(3,4,5)P(3) &#x79EF;&#x7D2F;&#x523A;&#x6FC0;&#x81EA;&#x5DF1;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6B64;&#x53CD;&#x9988;&#xFF0C;&#x4EE5; K PI (3) &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E2D;&#x65AD;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x5927;&#x5C0F;&#x548C;&#x4F2A;&#x8DB3;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x4E2D;&#x5FFD;&#x52A8;&#x5FFD;&#x505C;&#x7684;&#x8F68;&#x8FF9;&#x5373;&#x66F4;&#x504F;&#x79BB;&#x5411;&#x4E0A;&#x6E10;&#x53D8;&#x65B9;&#x5411;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x662F;&#x505A;&#x7684;&#x90A3;&#x4E9B;&#x63A7;&#x4EF6;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5185;&#x90E8;&#x7684; PtdIns(3,4,5)P(3) &#x6E10;&#x53D8;&#x653E;&#x5927;&#x660E;&#x663E;&#x53D7;&#x5230; latrunculin &#x6216; jasplakinolide&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x805A;&#x5408;&#x6216;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x7684;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64; PtdIns(3,4,5)P(3) &#x548C;&#x805A;&#x5408;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E3B;&#x52A8;&#x5E76;&#x4FDD;&#x6301;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x6027;&#x8D1F;&#x8D23;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6781;&#x6027;&#x548C;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x3002;

PI (3) Ks &#x8102;&#x4EA7;&#x54C1;&#x4FDD;&#x6301;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6781;&#x6027;&#x3001; &#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x5411;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3002;

In gradients of external chemo-attractant, mammalian neutrophilic leukocytes (neutrophils) and Dictyostelium discoideum amoebae adopt a polarized morphology and selectively accumulate lipid products of phosphatidylinositol-3-OH kinases (PI(3)Ks), including PtdIns(3,4,5)P(3), at their up-gradient edges; the internal PtdIns(3,4,5)P(3) gradient substantially exceeds that of the external attractant. An accompanying report presents evidence for a positive feedback loop that amplifies the gradient of internal signal: PtdIns(3,4,5)P(3) at the leading edge stimulates its own accumulation by inducing activation of one or more Rho GTPases (Rac, Cdc42, and/or Rho), which in turn increase PtdIns(3,4,5)P(3) accumulation. Here we show that interruption of this feedback by treatment with PI(3)K inhibitors reduces the size and stability of pseudopods and causes cells to migrate in jerky trajectories that deviate more from the up-gradient direction than do those of controls. Moreover, amplification of the internal PtdIns(3,4,5)P(3) gradient is markedly impaired by latrunculin or jasplakinolide, toxins that inhibit polymerization or depolymerization of actin, respectively. Thus reciprocal interplay between PtdIns(3,4,5)P(3) and polymerized actin initiates and maintains the asymmetry of intracellular signals responsible for cell polarity and directed motility.

Lipid products of PI(3)Ks maintain persistent cell polarity and directed motility in neutrophils.

Dans des gradients de chimio-attractant externe, mammif&egrave;res leucocytes neutrophiles (neutrophiles) et les amibes Dictyostelium discoideum adoptent une morphologie polaris&eacute;e et accumulent s&eacute;lectivement produits lipidiques de phosphatidylinositol-3-OH kinases (PI(3)Ks), dont PtdIns(3,4,5)P(3), sur leurs bords haut gradient ; le gradient de PtdIns(3,4,5)P(3) interne sensiblement sup&eacute;rieur &agrave; celui de l&#39;attractant externe. Un rapport d&#39;accompagnement pr&eacute;sente des preuves pour une boucle de r&eacute;troaction positive qui amplifie la pente du signal interne : PtdIns(3,4,5)P(3) &agrave; la fine pointe stimule sa propre accumulation en induisant l&#39;activation d&#39;un ou plusieurs GTPases de Rho (Rac, Cdc42 ou Rho), qui &agrave; son tour augmenter PtdIns(3,4,5)P(3) accumulation. Ici, nous montrons que l&#39;interruption de cette r&eacute;troaction par traitement avec des inhibiteurs de la PI (3) K r&eacute;duit la taille et la stabilit&eacute; des pseudopodes et provoque des cellules migrer des trajectoires saccad&eacute;s qui s&#39;&eacute;cartent de plus de la direction de la pente vers le haut que celles des contr&ocirc;les. En outre, amplification du gradient PtdIns(3,4,5)P(3) interne est nettement diminu&eacute;e par Latrunculine ou des jasplakinolide, des toxines qui inhibent la polym&eacute;risation ou la d&eacute;polym&eacute;risation de l&#39;actine, respectivement. Ainsi, une interaction r&eacute;ciproque entre PtdIns(3,4,5)P(3) et l&#39;actine polym&eacute;ris&eacute;e initie et maintient l&#39;asym&eacute;trie des signaux intracellulaires responsables de polarit&eacute; cellulaire et motilit&eacute; dirig&eacute;e.

Produits lipidiques de Ks PI (3) maintiennent la polarit&eacute; cellulaire persistant et r&eacute;alis&eacute; la motilit&eacute; des neutrophiles.

Lipid-Produkte von PI (3) Ks eine unterbrechungsfreie Zellpolarit&#xE4;t und dirigierten die Motilit&#xE4;t der neutrophilen Granulozyten.

In gradienti di chemio-attraente esterno, mammiferi neutrofili leucociti (neutrofili) e Dictyostelium discoideum amebe adottano una morfologia polarizzata e selettivamente accumulano prodotti lipidico fosfatidilinositolo-3-OH chinasi (PI(3)Ks), compreso PtdIns(3,4,5)P(3), ai loro bordi up-gradiente; il gradiente PtdIns(3,4,5)P(3) interno supera sostanzialmente che l&#39;esterno dell&#39;esca. Una relazione di accompagnamento presenta prove per un ciclo di feedback positivo che amplifica la pendenza del segnale interno: PtdIns(3,4,5)P(3) all&#39;avanguardia stimola la propria accumulazione di indurre attivazione di uno o pi&ugrave; Rho GTPases (Rac, Cdc42, o Rho), che a sua volta aumentare PtdIns(3,4,5)P(3) accumulo. Qui vi mostriamo che interruzione di questo feedback da un trattamento con inibitori della K PI (3) riduce le dimensioni e la stabilit&agrave; di pseudopodi e induce le cellule a migrare in traiettorie a scatti che si discostano in pi&ugrave; dalla direzione up-gradiente rispetto quelli dei controlli. Inoltre, amplificazione del gradiente PtdIns(3,4,5)P(3) interno &egrave; marcatamente alterato da latrunculin o jasplakinolide, le tossine che inibiscono la polimerizzazione o depolimerizzazione dell&#39;actina, rispettivamente. Cos&igrave; la reciproca interazione tra PtdIns(3,4,5)P(3) e actina polimerizzata avvia e mantiene l&#39;asimmetria dei segnali intracellulari responsabile polarit&agrave; cellulare e motilit&agrave; diretto.

Lipidi prodotti di PI (3) Ks polarit&agrave; cellulare persistente e diretto motilit&agrave; in neutrofili.

&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5916;&#x90E8;&#x5316;&#x5B66;&#x8A98;&#x5F15;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x767D;&#x8840;&#x7403; (&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;) &#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x6027;&#x7C98;&#x83CC;&#x30AD;&#x30A4;&#x30ED;&#x30BF;&#x30DE;&#x30DB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30AB;&#x30D3; &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x504F;&#x5149;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x30D5;&#x30A9;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;-3 &#x2010; OH &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (PI(3)Ks)&#x3001;PtdIns(3,4,5)P(3)&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x52FE;&#x914D;&#x7AEF;; &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x88FD;&#x54C1;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x5185;&#x90E8; PtdIns(3,4,5)P(3) &#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;&#x8A98;&#x5F15;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ED8;&#x5C5E;&#x3059;&#x308B;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x5185;&#x90E8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x52FE;&#x914D;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3059;&#x308B;&#x6B63;&#x5E30;&#x9084;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;: PtdIns(3,4,5)P(3) &#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A8;&#x30C3;&#x30B8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x72EC;&#x81EA;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;1 &#x3064;&#x4EE5;&#x4E0A; Rho &#x9806;&#x756A; PtdIns(3,4,5)P(3) &#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x8F38;&#x9001; (Rac&#x3001;Cdc42&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; Rho&#xFF09; &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068;&#x4EEE;&#x8DB3;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x3088;&#x308A;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x52FE;&#x914D;&#x65B9;&#x5411;&#x304B;&#x3089;&#x9038;&#x8131;&#x304E;&#x304F;&#x3057;&#x3083;&#x304F;&#x306E;&#x8ECC;&#x9053;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x51E6;&#x7406; PI (3) K &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x306E; PtdIns(3,4,5)P(3) &#x52FE;&#x914D;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x640D;&#x306A;&#x308F;&#x308C;&#x308B; latrunculin &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B8;&#x30E3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30AD;&#x30CE;&#x30EA;&#x30C9;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x91CD;&#x5408;&#x3084;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x8131;&#x91CD;&#x5408;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066; PtdIns(3,4,5)P(3) &#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x6975;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C7;&#x30A3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C6;&#x30C3;&#x30C9;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

PI (3) Ks &#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x88FD;&#x54C1;&#x306F;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x6975;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x3092;&#x76E3;&#x7763;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC678;&#xBD80; &#xD56D; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;-&#xC720;&#xC778;&#xC758; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; neutrophilic &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; (&#xD638; &#xC911;&#xAD6C;)&#xC640; Dictyostelium discoideum amoebae &#xD3B8;&#xAD11;&#xB41C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xCC44;&#xD0DD; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xC9C8; phosphatidylinositol 3 &#xC624; kinases (PI(3)Ks), &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xCD5C;&#xB300; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;; PtdIns(3,4,5)P(3)&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD95;&#xC801; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0B4;&#xBD80; PtdIns(3,4,5)P(3) &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xB97C; &#xCD08;&#xACFC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC678;&#xBD80; &#xC720;&#xC778;&#xC758;. &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558;&#xB294; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xBC18; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;: &#xC55E; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;&#xC5D0; PtdIns(3,4,5)P(3) &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; GTPases (Rac, Cdc42, &#xB610;&#xB294; Rho) &#xCC28;&#xB840;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; PtdIns(3,4,5)P(3) &#xCD95;&#xC801;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xC5EC; &#xC790;&#xCCB4; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xC790;&#xADF9;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC911;&#xB2E8; PI (3) K &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; pseudopods&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC704;&#xCABD; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xD0C8; &#xD558;&#xB294; &#xC721; &#xD3EC; &#xADA4;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD560; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB0B4;&#xBD80; PtdIns(3,4,5)P(3) &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;&#xC758; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC740; latrunculin &#xB610;&#xB294; jasplakinolide, &#xC911; &#xD569; &#xB610;&#xB294; &#xB9D0;&#xB77C;, depolymerization&#xB97C; &#xAC01;&#xAC01; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC7A5;&#xC560;&#xAC00; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; Ptdins(3,4,5)p(3)&#xC640; polymerized &#xB9D0;&#xB77C; &#xC0AC;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC2E0;&#xD638; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xC140; &#xADF9;&#xC131; &#xBC0F; &#xAC10;&#xB3C5;&#xB41C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xC720;&#xC9C0;.

PI (3) Ks&#xC758; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC81C;&#xD488; &#xC601;&#xAD6C; &#xC140; &#xADF9;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xAC10;&#xB3C5;.

En gradientes de quimio-atrayente externo, mam&iacute;feros neutrof&iacute;lica leucocitos (neutr&oacute;filos) y Dictyostelium discoideum amebas adoptan una morfolog&iacute;a polarizada y selectivamente se acumulan productos de l&iacute;pidos de quinasas de la fosfatidilinositol-3-OH (PI(3)Ks), incluyendo PtdIns(3,4,5)P(3), en sus bordes de gradiente arriba; el gradiente de PtdIns(3,4,5)P(3) interno supera sustancialmente del atrayente externo. Un informe de acompa&ntilde;amiento presenta evidencia para un circuito de retroalimentaci&oacute;n positiva que amplifica el gradiente de se&ntilde;al interna: PtdIns(3,4,5)P(3) a la vanguardia estimula su propia acumulaci&oacute;n induciendo la activaci&oacute;n de uno o m&aacute;s Rho GTPasas (Rac, Cdc42 o Rho), que a su vez aumentar la acumulaci&oacute;n de PtdIns(3,4,5)P(3). Aqu&iacute; demostramos que la interrupci&oacute;n de esta contestaci&oacute;n del tratamiento con inhibidores de la PI (3) K reduce el tama&ntilde;o y la estabilidad de pseud&oacute;podos y hace que las c&eacute;lulas migran en trayectorias desiguales que se alejan m&aacute;s de la direcci&oacute;n de arriba-gradiente que hacen los controles. Por otra parte, amplificaci&oacute;n de la gradiente de PtdIns(3,4,5)P(3) interno es notablemente deteriorada por LATRUNCULINA o jasplakinolide, toxinas que inhiben la polimerizaci&oacute;n o despolimerizaci&oacute;n de la actina, respectivamente. As&iacute; la interacci&oacute;n rec&iacute;proca entre PtdIns(3,4,5)P(3) y actina polimerizada inicia y mantiene la asimetr&iacute;a de se&ntilde;ales intracelulares responsables de la polaridad celular y motilidad dirigida.

Productos de l&iacute;pidos de Ks de PI (3) mantienen la polaridad de la c&eacute;lula persistente y direcci&oacute;n motilidad en neutr&oacute;filos.

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x7279;&#x70B9;&#x662F; LePRK1 &#x548C; LePRK2&#xFF0C;&#x82B1;&#x7C89;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x9176;&#x4ECE;&#x756A;&#x8304; (Muschietti et al&#xFF0C;1998&#x5E74;)&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x9176;&#x4ECE;&#x7389;&#x7C73;&#xFF0C;ZmPRK1&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x8FD8;&#x7279;&#x522B;&#x665A;&#x7684;&#x82B1;&#x7C89;&#x53D1;&#x80B2;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4ECE;&#x756A;&#x8304;&#xFF0C;LePRK3 &#x7684;&#x7B2C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x82B1;&#x7C89;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x9176;&#x3002;LePRK3 &#x662F;&#x4E0D;&#x5C11;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; LePRK1 &#x548C; LePRK2 &#x6BD4;&#x8981;&#x4E48;&#x662F;&#x4E92;&#x76F8;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x5206;&#x5E03;&#x663E;&#x793A;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A; LePRKs &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x82B1;&#x7C89;&#x7BA1;&#x5899;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x540C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;-&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x7B80;&#x5E76;&#x5F15;&#x7269;&#x514B;&#x9686;&#x4ECE;&#x5176;&#x5B83;&#x8304;&#x679C;&#x7C7B;&#x756A;&#x8304;&#x6FC0;&#x9176;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x65AD;&#x51FA;&#x8BCA;&#x65AD;&#x7684;&#x82B1;&#x7C89;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6807;&#x51C6;&#x786E;&#x5B9A;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x6570;&#x636E;&#x5E93;&#x4E2D;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;-&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x82B1;&#x7C89;&#x8868;&#x8FBE; 5 &#x4E2A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA; &#xFF1B;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E24;&#x4EBA;&#x663E;&#x7136;&#x662F;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684; LePRK3&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5176;&#x6210;&#x5458;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5728;&#x82B1;&#x7C89;&#x7BA1;&#x751F;&#x957F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x611F;&#x77E5;&#x80DE;&#x5916;&#x63D0;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x82B1;&#x7C89;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3002;

&#x5728;&#x756A;&#x8304;&#x3001; &#x7389;&#x7C73;&#x548C;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x65B0;&#x82B1;&#x7C89;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x9176;&#xFF1A; &#x756A;&#x8304;&#x6FC0;&#x9176;&#x663E;&#x793A;&#x91CD;&#x53E0;&#x4F46;&#x82B1;&#x7C89;&#x7BA1;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

We previously characterized LePRK1 and LePRK2, pollen-specific receptor kinases from tomato (Muschietti et al., 1998). Here we identify a similar receptor kinase from maize, ZmPRK1, that is also specifically expressed late in pollen development, and a third pollen receptor kinase from tomato, LePRK3. LePRK3 is less similar to LePRK1 and LePRK2 than either is to each other. We used immunolocalization to show that all three LePRKs localize to the pollen tube wall, in partially overlapping but distinct patterns. We used RT-PCR and degenerate primers to clone homologues of the tomato kinases from other Solanaceae. We deduced features diagnostic of pollen receptor kinases and used these criteria to identify family members in the Arabidopsis database. RT-PCR confirmed pollen expression for five of these Arabidopsis candidates; two of these are clearly homologues of LePRK3. Our results reveal the existence of a distinct pollen-specific receptor kinase gene family whose members are likely to be involved in perceiving extracellular cues during pollen tube growth.

New pollen-specific receptor kinases identified in tomato, maize and Arabidopsis: the tomato kinases show overlapping but distinct localization patterns on pollen tubes.

Nous avons caract&eacute;ris&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment LePRK1 et LePRK2, kinases du r&eacute;cepteur sp&eacute;cifique au pollen de la tomate (Muschietti et al., 1998). Ici, nous identifions une semblable kinase du r&eacute;cepteur du ma&iuml;s, ZmPRK1, qui est &eacute;galement sp&eacute;cifiquement exprim&eacute; tardivement dans le d&eacute;veloppement du pollen, et une troisi&egrave;me kinase du r&eacute;cepteur de pollen de la tomate, LePRK3. LePRK3 ressemble moins &agrave; LePRK1 et LePRK2 que soit les uns aux autres. Nous avons utilis&eacute; l&#39;immunolocalisation pour montrer que tous les trois LePRKs localiser &agrave; la paroi du tube pollinique, en se chevauchant partiellement mais des profils distincts. Nous avons utilis&eacute; la RT-PCR et les amorces d&eacute;g&eacute;n&eacute;r&eacute;es de cloner les homologues des kinases tomate d&#39;autres solanac&eacute;es. Nous avons d&eacute;duit les caract&eacute;ristiques diagnostiques des kinases du r&eacute;cepteur du pollen et utilis&eacute; ces crit&egrave;res pour identifier les membres de la famille dans la base de donn&eacute;es de l&#39;Arabidopsis. RT-PCR a confirm&eacute; expression de pollen pour cinq de ces candidats d&#39;Arabidopsis ; deux d&#39;entre eux sont clairement homologues de LePRK3. Nos r&eacute;sultats r&eacute;v&egrave;lent l&#39;existence d&#39;une famille de g&egrave;nes distincts pollen sp&eacute;cifique du r&eacute;cepteur kinase dont les membres sont susceptibles d&#39;&ecirc;tre impliqu&eacute;s dans la perception des signaux extracellulaires durant la croissance du tube pollinique.

Nouvelles kinases du r&eacute;cepteur sp&eacute;cifique au pollen identifi&eacute;s dans la tomate, le ma&iuml;s et Arabidopsis : les kinases de tomate montrent qui se chevauchent mais les mod&egrave;les de localisation distincte sur les tubes polliniques.

Neue Pollen-spezifischen Rezeptor-Kinasen in Tomaten, Mais und Arabidopsis identifiziert: die Tomate Kinasen zeigen aber deutliche &#xDC;berschneidungen Lokalisierung Muster auf Pollenschl&#xE4;uche.

Abbiamo precedentemente caratterizzata LePRK1 e LePRK2, le chinasi del recettore specifico del polline dal pomodoro (Muschietti et al., 1998). Qui ci identifichiamo una simile chinasi del recettore da mais, ZmPRK1, che si esprime anche in particolare ritardo nello sviluppo del polline, e una terza chinasi del recettore di polline dal pomodoro, LePRK3. LePRK3 &egrave; meno simile a LePRK1 e LePRK2 di sia &egrave; a vicenda. Abbiamo utilizzato immunolocalization per mostrare che tutti i tre LePRKs localizzare alla parete del tubo pollinico, in parzialmente sovrapposte ma distinti modelli. Abbiamo utilizzato RT-PCR e primer degenerato per clonare omologhi della chinasi di pomodoro da altre Solanacee. Abbiamo dedotto caratteristiche diagnostiche della chinasi del recettore di polline e usato questi criteri per identificare i membri della famiglia nel database di Arabidopsis. RT-PCR ha confermato espressione di polline per cinque di questi candidati di Arabidopsis; due di questi sono chiaramente degli omologhi di LePRK3. I nostri risultati rivelano l&#39;esistenza di una famiglia di geni distinti recettori specifici del polline chinasi i cui membri sono suscettibili di essere coinvolti nel percepire segnali extracellulari durante la crescita del tubo pollinico.

Nuova chinasi del recettore specifico polline identificate in Arabidopsis, mais e pomodoro: la chinasi pomodoro Visualizza sovrapposti ma modelli distinti di localizzazione su tubi pollinici.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4EE5;&#x524D; LePRK1 &#x3068; LePRK2&#x3001;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8; (Muschietti et al., 1998&#x5E74;) &#x304B;&#x3089;&#x82B1;&#x7C89;&#x7279;&#x7570;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7279;&#x5FB4;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3082;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x3067;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x5F8C;&#x671F;&#x306E;&#x82B1;&#x7C89;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3001;ZmPRK1&#x3001;&#x30C8;&#x30A6;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B3;&#x30B7;&#x304B;&#x3089;&#x3001;3 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x82B1;&#x7C89;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x3001;LePRK3 &#x304B;&#x3089;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;LePRK3 &#x306F; LePRK1 &#x3068;&#x3082;&#x304A;&#x4E92;&#x3044;&#x306B;&#x3088;&#x308A; LePRK2 &#x4EE5;&#x4E0B;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x3059;&#x3079;&#x3066; 3 LePRKs &#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;&#x91CD;&#x8907;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x82B1;&#x7C89;&#x7BA1;&#x58C1;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x3002;&#x540C;&#x65CF;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4ED6;&#x306E;&#x30CA;&#x30B9;&#x79D1;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B; RT-PCR &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7E2E;&#x9000;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x82B1;&#x7C89;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x8A3A;&#x65AD;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x5185;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x57FA;&#x6E96;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RT-PCR &#x82B1;&#x7C89;&#x5F0F; 5 &#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x5019;&#x88DC;&#x8005;&#x306E;&#x78BA;&#x8A8D;;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E8C;&#x3064;&#x306F;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B; LePRK3 &#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x82B1;&#x7C89;&#x7BA1;&#x306E;&#x4F38;&#x9577;&#x4E2D;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x3092;&#x77E5;&#x899A;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x82B1;&#x7C89;&#x7279;&#x7570;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x3001;&#x30C8;&#x30A6;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B3;&#x30B7;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x82B1;&#x7C89;&#x7279;&#x7570;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF1A; &#x30C8;&#x30DE;&#x30C8; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x82B1;&#x7C89;&#x7BA1;&#x304C;&#x91CD;&#x8907;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; LePRK1 &#xBC0F; LePRK2, &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; (Muschietti et al., 1998)&#xC5D0;&#xC11C; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xD2B9;&#xC815; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; kinases &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC625;&#xC218;&#xC218;, &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD6C4;&#xBC18;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294; Zmprk1&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB2C8;&#xC640; &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0;, Leprk3&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB2C8; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. LePRK3 Leprk1&#xC640; Leprk2&#xB3C4; &#xC11C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB35C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; 3 &#xAC1C;&#xC758; LePRKs &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xAD00; &#xBCBD;&#xC758; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xD328;&#xD134; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xCCA9; &#xB41C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBCF4;&#xC5EC; immunolocalization&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xAC00;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; kinases homologues &#xBCF5;&#xC81C; RT-PCR &#xBC0F; &#xB514; &#xC81C;&#xB108; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xD504;&#xB77C;&#xC774; &#xBA38; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; kinases&#xC758; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xCD94;&#xB860; &#xD558; &#xACE0; Arabidopsis &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC871;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xC900;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;. RT-PCR &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xC2DD; Arabidopsis &#xD6C4;&#xBCF4;&#xC758;; 5 &#xD655;&#xC778; &#xC774;&#xB4E4;&#xC758; 2 &#xAC1C;&#xB294; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; Leprk3&#xC758; homologues&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC1C; &#xBCC4;&#xAC1C; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xD2B9;&#xC815; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC774; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xAD00; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC9C0; &#xAC01;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB420; &#xD655;&#xB960;&#xC774; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0;, &#xC625;&#xC218;&#xC218;, Arabidopsis&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xD2B9;&#xC815; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; kinases: &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; kinases &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xAD00;&#xC5D0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD328;&#xD134; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC911;&#xBCF5; &#xD45C;&#xC2DC;.

Anteriormente caracterizamos LePRK1 y LePRK2, quinasas de polen-espec&iacute;fica del receptor de tomate (Muschietti et al., 1998). Aqu&iacute; identificamos una quinasa del receptor similar a base de ma&iacute;z, ZmPRK1, que se expresa espec&iacute;ficamente tarde en desarrollo de polen, y una tercer cinasa del receptor de polen de tomate, LePRK3. LePRK3 es menos similar a LePRK1 y LePRK2 que o bien uno al otro. Utilizamos inmunolocalizaci&oacute;n para mostrar que todos tres LePRKs localizar a la pared del tubo pol&iacute;nico, en parcialmente superpuestas pero patrones distintos. Utilizamos la RT-PCR y cebadores degenerados para clonar hom&oacute;logos de las quinasas de tomate de otras solan&aacute;ceas. Nos deduce caracter&iacute;sticas de diagn&oacute;sticos de quinasas de receptor del polen y utiliza estos criterios para identificar a miembros de la familia en la base de datos de Arabidopsis. RT-PCR confirm&oacute; expresi&oacute;n de polen para cinco de estos candidatos de Arabidopsis; dos de ellos son claramente hom&oacute;logos de LePRK3. Nuestros resultados revelan la existencia de una familia distinto del receptor del polen-espec&iacute;fica del gene de la cinasa cuyos miembros suelen involucrarse en percibir se&ntilde;ales extracelulares durante el crecimiento del tubo pol&iacute;nico.

Nuevo quinasas de polen-espec&iacute;fica del receptor identificadas en tomate, ma&iacute;z y Arabidopsis: las quinasas de tomate Mostrar superposici&oacute;n pero patrones de localizaci&oacute;n distinta en los tubos de polen.

&#x50CF;&#x4E2D;&#x6027;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x7684; hl-60 &#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x504F;&#x632F;&#x5149;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#xFF0C;&#x4E0E; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x51F8;&#x51FA; pseudopod &#x524D;&#x6CBF;&#x548C;&#x6536;&#x7F29;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;-&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x5728;&#x540E;&#x9000;&#x548C;&#x53CC;&#x65B9;&#x56DE;&#x5E94;&#x8D8B;&#x5316;&#x3002;&#x4E0E;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3001; &#x6BD2;&#x7D20;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x6B64;&#x6781;&#x6027;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x4E0D;&#x540C;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E09;&#x8054; G &#x86CB;&#x767D;&#x4EA7;&#x751F;&#x5206;&#x6B67;&#x3001; &#x5BF9;&#x7ACB;&#x7684;&quot;frontness&quot;&#x548C;&quot;backness&quot;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;Frontness &#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; Gi &#x4ECB;&#x5BFC;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684; 3&#39;-&#x808C;&#x9187;&#x78F7;&#x8102;&#x8102; (PI3Ps)&#x3001; Rac&#x3001; &#x5C0F;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3002;G12 &#x548C; G13 &#x89E6;&#x53D1; backness &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; &#xFF08;Rho&#xFF09; &#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; II Rho &#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x517C;&#x5BB9;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E24;&#x4E2A;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x805A;&#x5408;&#x6210;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x57DF;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x524D;&#x7F18;&#x5F15;&#x8BF1;&#x5230;&#x540E;&#x9762;&#x6BD4;&#x4EFB;&#x4F55;&#x65F6;&#x5019;&#x90FD;&#x66F4;&#x4E3A;&#x654F;&#x611F;&#x3002;&#x540E;&#x8005;&#x6548;&#x679C;&#x8BF4;&#x660E;&#x4E24;&#x5BF9;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x7EDF;&#x4E00;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x8D8B;&#x5316;&#x548C;&#x5F15;&#x8BF1;&#x5242;&#x68AF;&#x5EA6;&#x9006;&#x8F6C;&#x5176;&#x54CD;&#x5E94;&#x901A;&#x8FC7;&#x6267;&#x884C; 180 &#x5EA6;&#x5927;&#x8F6C;&#x5F2F;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x4E0D;&#x540C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x89C4;&#x7BA1;&#x81EA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6781;&#x6027;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Like neutrophilic leukocytes, differentiated HL-60 cells respond to chemoattractant by adopting a polarized morphology, with F-actin in a protruding pseudopod at the leading edge and contractile actin-myosin complexes at the back and sides. Experiments with pharmacological inhibitors, toxins, and mutant proteins show that this polarity depends on divergent, opposing "frontness" and "backness" signals generated by different receptor-activated trimeric G proteins. Frontness depends upon Gi-mediated production of 3'-phosphoinositol lipids (PI3Ps), the activated form of Rac, a small GTPase, and F-actin. G12 and G13 trigger backness signals, including activation of a second GTPase (Rho), a Rho-dependent kinase, and myosin II. Functional incompatibility causes the two resulting actin assemblies to aggregate into separate domains, making the leading edge more sensitive to attractant than the back. The latter effect explains both the neutrophil's ability to polarize in uniform concentrations of chemoattractant and its response to reversal of an attractant gradient by performing a U-turn.

Divergent signals and cytoskeletal assemblies regulate self-organizing polarity in neutrophils.

Comme les leucocytes neutrophiles, cellules HL-60 diff&eacute;renci&eacute;es r&eacute;pondent &agrave; chemoattractant en adoptant une morphologie polaris&eacute;e, avec l&#39;actine-F dans une saillie pseudopodes &agrave; la fine pointe et complexes d&#39;actine-myosine contractile &agrave; l&#39;arri&egrave;re et les c&ocirc;t&eacute;s. Des exp&eacute;riences avec des inhibiteurs pharmacologiques, des toxines et des prot&eacute;ines mutantes montrent que cette polarit&eacute; d&eacute;pend des signaux divergents, adverses &laquo; frontness &raquo; et &laquo; articulation &raquo; g&eacute;n&eacute;r&eacute;es par les prot&eacute;ines G trim&egrave;res &agrave; diff&eacute;rents r&eacute;cepteurs activ&eacute;s. Frontness d&eacute;pend de la production de Gi par l&#39;interm&eacute;diaire de 3&#39;-phosphoinositol lipides (PI3Ps), la forme allotropique de Rac, une petite GTPase et l&#39;actine F. G12 et G13 d&eacute;clenchent des signaux d&#39;articulation, y compris l&#39;activation d&#39;une deuxi&egrave;me GTPase (Rho), une kinase Rho-d&eacute;pendante et la myosine II. Incompatibilit&eacute; fonctionnelle entra&icirc;ne les deux assemblys r&eacute;sultants de l&#39;actine &agrave; s&#39;agr&eacute;ger en domaines distincts, rendant le bord d&#39;attaque plus sensibles &agrave; la r&eacute;pulsion que le dos. Ce dernier effet explique la capacit&eacute; des deux le neutrophile &agrave; polariser des concentrations uniformes de facteur chimiotactique et sa r&eacute;ponse au renversement d&#39;un gradient de r&eacute;pulsion en effectuant un demi-tour.

Des signaux divergents assembl&eacute;es du cytosquelette r&egrave;glent l&#39;auto-organisation de polarit&eacute; dans les neutrophiles.

Abweichende Signale und Baugruppen Zytoskelett regulieren sich selbst organisierenden Polarit&#xE4;t der neutrophilen Granulozyten.

Come i leucociti neutrofili, differenziate delle cellule HL-60 rispondono a chemoattractant adottando una morfologia polarizzata, con F-actina in uno pseudopodo sporgente all&#39;avanguardia e complessi contrattili actina-miosina sul retro e i lati. Esperimenti con inibitori farmacologici, tossine e proteine mutanti mostrano che questa polarit&agrave; dipende divergenti, avversari &quot;anteriorit&agrave;&quot; e &quot;posteriorit&agrave;&quot; segnali generati dai recettori attivati trimeric G proteine differenti. Anteriorit&agrave; dipende dalla produzione Gi-mediata del 3&#39;-phosphoinositol lipidi (PI3Ps), la forma attivata del Rac, un piccolo GTPase e F-actina. G12 e G13 attivano segnali posteriorit&agrave;, inclusa l&#39;attivazione di una seconda GTPasi (Rho), una chinasi Rho-dipendente e miosina II. Incompatibilit&agrave; funzionale fa s&igrave; che i due assembly risultante di actina da aggregare in domini separati, rendendo pi&ugrave; sensibile a attractant dietro la leading edge. L&#39;effetto di quest&#39;ultimo spiega la capacit&agrave; di entrambi i neutrofili polarizzare in concentrazioni uniforme del chemioattrattante e la sua risposta ad inversione di un gradiente attractant effettuando un&#39;inversione a u.

Segnali divergenti e assemblee citoscheletriche regolano Self-Organizing polarit&agrave; nei neutrofili.

&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; HL &#x2010; 60 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x7A81;&#x51FA;&#x507D;&#x8DB3;&#x6700;&#x5148;&#x7AEF;&#x3068;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30FB; &#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x53CE;&#x7E2E;&#x932F;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066; F &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x504F;&#x5149;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B9F;&#x9A13;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5909;&#x7570;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3053;&#x306E;&#x6975;&#x6027;&#x767A;&#x6563;&#x3001;&#x53CD;&#x5BFE;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&quot;frontness&quot;&#x3068;&quot;backness&quot;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Frontness &#x4F9D;&#x5B58; Gi &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x6642;&#x306B;&#x751F;&#x7523;&#x306E; 3&#39;-phosphoinositol &#x8102;&#x8CEA; (PI3Ps)&#x3001;Rac&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A; GTPase &#x3068; F &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3002;G12 &#x3068; G13 &#x306F;&#x3001;2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E; gtp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;&rho;&#xFF09;&#x3001;Rho &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; II &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;backness &#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x975E;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA; &#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A8;&#x30C3;&#x30B8;&#x306F;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x3088;&#x308A;&#x8A98;&#x5F15;&#x7269;&#x8CEA;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x4F5C;&#x308B;&#x96C6;&#x8A08;&#x5225;&#x3005; &#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;u &#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5316;&#x5B66;&#x8A98;&#x56E0;&#x7269;&#x8CEA;&#x3068;&#x8A98;&#x5F15;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x53CD;&#x8EE2;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x5747;&#x4E00;&#x306A;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x5206;&#x6975;&#x3059;&#x308B;&#x4E21;&#x65B9;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x767A;&#x6563;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x306E;&#x6975;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Neutrophilic &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; &#xCC98;&#xB7FC; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; HL-60 &#xC140; chemoattractant&#xC5D0; &#xC55E; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD280;&#xC5B4;&#xB098;&#xC628; pseudopod &#xBC0F; &#xC218;&#xCD95; &#xC131; &#xB9D0;&#xB77C; myosin &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB4A4;&#xCABD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC591;&#xCABD;&#xC5D0; F-&#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; &#xB300;&#xB9BD; &#xB41C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xCC44;&#xD0DD; &#xD558; &#xC5EC; &#xC751;&#xB2F5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC57D;&#xB9AC; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;, &#xB3C5; &#xC18C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC1FC;&#xC774; &#xADF9;&#xC131; &#xB2E4;&#xB978; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; trimeric G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xBD84;&#xAE30;, &#xBC18;&#xB300; &quot;frontness&quot; &#xBC0F; &quot;backness&quot; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. Frontness &#xC9C0; &#xC9C8;&#xC758; 3&#39;-phosphoinositol (PI3Ps)&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xAE30; &#xC911;&#xC7AC;, Rac, &#xC791;&#xC740; GTPase &#xBC0F; F &#xB9D0;&#xB77C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. G12&#xC640; G13 backness &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C;, &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; GTPase (Rho), Rho &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4;&#xC640; myosin II&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB4F1;&#xC744; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xB2A5; &#xBE44; &#xD638;&#xD658;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xB450; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xB4B7;&#xBA74; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC720;&#xC778;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xCCA8;&#xB2E8;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9D1;&#xACC4;&#xB97C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6C4;&#xC790;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; u-&#xD134;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xC5EC; chemoattractant &#xBC0F; &#xC720;&#xC778; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;&#xC758; &#xBC18;&#xC804;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xADE0;&#xC77C; &#xD55C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xADF9; &#xBAA8;&#xB450; neutrophil &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBD84;&#xAE30; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; cytoskeletal &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; neutrophils &#xC790;&#xAE30; &#xADF9;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

Como leucocitos neutrof&iacute;lica, diferenciadas de las c&eacute;lulas HL-60 responden a quimioatrayentes adoptando una morfolog&iacute;a polarizada, con F-actina en un seud&oacute;podo que sobresale en el borde de ataque y complejos actina-miosina contr&aacute;ctiles en la espalda y los lados. Experimentos con inhibidores farmacol&oacute;gicos, toxinas y prote&iacute;nas mutantes muestran que esta polaridad depende de se&ntilde;ales divergentes, opuestas &quot;frontness&quot; y &quot;backness&quot; generadas por prote&iacute;nas G trim&eacute;rica activada por receptores diferentes. Frontness depende de la producci&oacute;n de Gi-mediada de 3&#39;-Fosfoinositol l&iacute;pidos (PI3Ps), la forma activada de Rac, una peque&ntilde;a GTPasa y F-actina. G12 y G13 desencadenar se&ntilde;ales backness, incluida la activaci&oacute;n de un segundo GTPasa (Rho), una quinasa dependiente de Rho y miosina II. Incompatibilidad funcional hace que los dos conjuntos de actina resultante a agregado en dominios separados, haciendo la vanguardia m&aacute;s sensibles a la atrayente que la parte posterior. El efecto de este &uacute;ltimo explica la capacidad de los neutr&oacute;filos a polarizar en concentraciones uniformes de quimioatrayentes y su respuesta a la revocaci&oacute;n de un gradiente atrayente realizando un giro de 180 grados.

Se&ntilde;ales divergentes y asambleas citoesqueleto regulan polaridad autoorganizada en neutr&oacute;filos.

&#x771F;&#x6838;&#x8D8B;&#x5316;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x89E3;&#x662F;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187;-3,4,5-&#x4E09;&#x78F7;&#x9178; (PIP3) &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E0A;&#x7684;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x91CD;&#x70B9;&#x662F;&#x4E86;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x8D8B;&#x5316;&#x7684;&#x6D45;&#x5C42;&#x5916;&#x90E8;&#x6E10;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6269;&#x589E;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x68AF;&#x5EA6;&#x7684; PIP3&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5256;&#x6790;&#x672C;&#x767D;&#x76AE;&#x4E66;&#x4E2D;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7F51;&#x7EDC;&#x548C;&#x5B8C;&#x5168;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x591A;&#x5C11;&#x591A;&#x5C11;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x7684;&#x6B64;&#x653E;&#x5927;&#x751F;&#x5316;&#x6D3E;&#x751F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x548C;&#x6B63;&#x89C4;&#x5316;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x5728;&#x4FE1;&#x53F7;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x8BC1;&#x660E;&#x5176;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EFF;&#x771F;&#x548C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6240;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#x819C;&#x7684;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x5206;&#x5E03;&#x5360;&#x5927;&#x7EA6;&#x4E8C;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E00;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4ECE;&#x6D4B;&#x91CF;&#x653E;&#x5927;&#x5230; PIP3 &#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x663E;&#x793A;&#x57FA;&#x7840;&#x751F;&#x5316;&#x7F51;&#x7EDC;&#x884C;&#x4E3A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5FAE;&#x5438;&#x7BA1;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EBF;&#x6027;&#x653E;&#x5927;&#x5668;&#x3002;

&#x5F62;&#x6001;&#x5728;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x4E8B;&#x9879;&#xFF1A; &#x819C;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x5F71;&#x54CD;&#x653E;&#x5927;&#x3002;

A key mediator of eukaryotic chemotaxis is the asymmetric accumulation of phosphatidylinositol-3,4,5-triphosphate (PIP3) on the cell membrane. Recent work has focused on understanding how a shallow external gradient of chemoattractant leads to an amplified internal gradient of PIP3. In this paper we dissect what fraction of this amplification is derived biochemically by the signal transduction network and how much arises entirely from the effects of cell morphology. Here we identify and formalize the role of morphology in signal detection and demonstrate its effects through simulation and experiments. Our key result is that an asymmetric distribution of membrane accounts for approximately one-half of the measured amplification from ligand concentration to PIP3 production. We also show that the underlying biochemical network behaves as a linear amplifier in the micropipette assay.

Morphology matters in immune cell chemotaxis: membrane asymmetry affects amplification.

Un m&eacute;diateur cl&eacute; de chimiotactisme eucaryote est l&#39;accumulation asym&eacute;trique de phosphatidylinositol-3,4,5-triphosphate (PIP3) sur la membrane cellulaire. Travaux r&eacute;cents ont port&eacute; sur la compr&eacute;hension de comment une pente externe superficielle de chemoattractant m&egrave;ne &agrave; un gradient amplifi&eacute; interne de PIP3. Dans cet article que nous diss&eacute;quer quelle fraction de cette amplification est d&eacute;riv&eacute;e biochimiquement par le r&eacute;seau de transduction de signal et combien d&eacute;coule enti&egrave;rement les effets de la morphologie cellulaire. Ici nous identifions et officialiser le r&ocirc;le de la morphologie dans la d&eacute;tection du signal et de d&eacute;montrer ses effets par le biais de simulation et d&#39;exp&eacute;riences. Notre principal r&eacute;sultat est qu&#39;une distribution asym&eacute;trique de membrane repr&eacute;sente environ la moiti&eacute; de l&#39;amplification mesur&eacute;e de la concentration de ligand &agrave; PIP3 production. Nous montrons &eacute;galement que le r&eacute;seau biochimique sous-jacentes se comporte comme un amplificateur lin&eacute;aire dans le dosage de la micropipette.

Les questions de morphologie dans le chimiotactisme des cellules immunitaires : asym&eacute;trie membranaire influe sur l&#39;amplification.

Ein wichtiger Vermittler von eukaryotische Chemotaxis ist die asymmetrische Anh&auml;ufung von Phosphatidylinositol-3,4,5-Triphosphat (PIP3) auf der Zellmembran. Die j&uuml;ngsten Arbeiten konzentriert sich auf das Verst&auml;ndnis, wie externe flache Steigung Chemoattractant f&uuml;hrt zu einer verst&auml;rkten internen Steigung von PIP3. In diesem Papier werden wir sezieren wird welcher Bruchteil dieser Verst&auml;rkung biochemisch abgeleitet, indem der Signal-Transduktion-Netzwerk und wieviel g&auml;nzlich von den Auswirkungen der Zellmorphologie entsteht. Hier wir identifizieren und die Rolle der Morphologie in Signalerkennung zu formalisieren und ihre Auswirkungen durch Simulation und Experimente zu demonstrieren. Unser zentrale Ergebnis ist, dass eine asymmetrische Verteilung der Membran ungef&auml;hr H&auml;lfte der gemessenen Verst&auml;rkung von Liganden-Konzentration PIP3 Produktion ausmacht. Wir zeigen auch, dass das zugrunde liegende biochemische Netzwerk als lineare Verst&auml;rker in der Mikropipette Probe verh&auml;lt.

Morphologie z&auml;hlt in Immunzellen Chemotaxis: Membran Asymmetrie wirkt sich Verst&auml;rkung.

Un mediatore chiave della chemiotassi eucariotica &egrave; l&#39;accumulo asimmetrico di fosfatidilinositolo-3, 4,5-trifosfato (PIP3) sulla membrana cellulare. Recente lavoro si &egrave; concentrato sulla comprensione come un gradiente esterno superficiale di chemioattrattanti conduce a una pendenza interna amplificata del PIP3. In questa carta che sezionare quale frazione di questa amplificazione deriva biochimicamente da rete di trasduzione del segnale e quanta si pone interamente dagli effetti della morfologia cellulare. Qui noi identificare e formalizzare il ruolo della morfologia nel rilevamento segnale e dimostrare i suoi effetti attraverso esperimenti e simulazione. Il nostro risultato chiave &egrave; che una distribuzione asimmetrica della membrana conti per circa la met&agrave; di amplificazione misurato dalla concentrazione del ligando alla produzione PIP3. Ci mostra anche che la rete biochimica sottostante si comporta come un amplificatore lineare nel dosaggio della micropipetta.

Morfologia conta nella chemiotassi delle cellule immunitarie: asimmetria di membrana influisce sull&#39;amplificazione.

&#x771F;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC; &#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;-3,4,5-&#x4E09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178; (PIP3) &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x8D70;&#x306E;&#x6D45;&#x3044;&#x5916;&#x90E8;&#x52FE;&#x914D;&#x306F; PIP3 &#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5185;&#x90E8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x6211;&#x3005; &#x3092;&#x89E3;&#x5256;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x306E;&#x4F55;&#x5206;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3068;&#x3069;&#x306E;&#x304F;&#x3089;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x304B;&#x3089;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4FE1;&#x53F7;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5F62;&#x5F0F;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x306E;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x306A;&#x5206;&#x5E03;&#x304C;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304B;&#x3089;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x5897;&#x5E45; PIP3 &#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x7D04;&#x534A;&#x5206;&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x308B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30D4;&#x30DA;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x30EA;&#x30CB;&#x30A2;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D7;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;.

&#x5F62;&#x614B;&#x4E8B;&#x9805;&#x3067;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;: &#x819C;&#x306E;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x5897;&#x5E45;&#x3002;

&#xC9C4; &#xD575; chemotaxis&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790; phosphatidylinositol-3,4,5-&#xC0BC;&#xC778;&#xC0B0; (PIP3) &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xCD95;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC791;&#xD488;&#xC740; chemoattractant&#xC758; &#xC595;&#xC740; &#xC678;&#xBD80; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; pip3&#xC758; &#xC99D;&#xD3ED;&#xB41C; &#xB0B4;&#xBD80; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD574; &#xBD80;&#xC774; &#xC2E0;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC774; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC758; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC77C;&#xBD80;&#xBD84; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD30C;&#xC545; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACF5;&#xC2DD;&#xD654; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xADF8; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9C9;&#xC758; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xBD84;&#xD3EC; PIP3 &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC758; &#xC57D; &#xC808;&#xBC18;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC815;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; micropipette &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xD615; &#xC99D;&#xD3ED;&#xAE30;&#xB85C; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; chemotaxis&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;: &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC99D;&#xD3ED;.

Un mediador clave de la quimiotaxis eucariotas es la acumulaci&oacute;n asim&eacute;trica de fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato (PIP3) en la membrana celular. Trabajo reciente se ha centrado en entender c&oacute;mo un gradiente superficial externo de quimioatrayentes conduce a un gradiente interno amplificado de PIP3. En este trabajo que diseccionamos qu&eacute; fracci&oacute;n de esta amplificaci&oacute;n se deriva bioqu&iacute;micamente por la red de transducci&oacute;n de se&ntilde;al y cu&aacute;nto se presenta totalmente de los efectos de la morfolog&iacute;a de la c&eacute;lula. Aqu&iacute; identificamos y formalizar el papel de la morfolog&iacute;a en detecci&oacute;n de se&ntilde;al y demostrar sus efectos a trav&eacute;s de la simulaci&oacute;n y experimentos. Nuestro resultado clave es que una distribuci&oacute;n asim&eacute;trica de la membrana representa aproximadamente la mitad de la amplificaci&oacute;n medida de la concentraci&oacute;n de ligando a PIP3 producci&oacute;n. Tambi&eacute;n demostramos que la red bioqu&iacute;mica subyacente se comporta como un amplificador lineal en el ensayo de la micropipeta.

Cuestiones de morfolog&iacute;a en la quimiotaxis de c&eacute;lulas inmunitarias: amplificaci&oacute;n afecta la asimetr&iacute;a de la membrana.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x521B;&#x5EFA;&#x6307;&#x6570;&#x68AF;&#x5EA6;&#x7684;&#x8D8B;&#x5316;&#xFF0C;f-&#x6EE1;&#x8DB3;-&#x4F4E;&#x6D53;&#x7F29;&#x94C0;-&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178; &#xFF08;&#x4E0E; fMLP) &#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x5668;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316; HL60 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6E10;&#x53D8;&#x8DE8;&#x5176;&#x76F4;&#x5F84;&#xFF0C;&#x662F;&#x76F4;&#x63A5;&#x6210;&#x6B63;&#x6BD4;&#x73AF;&#x5883;&#x6D53;&#x5EA6; (C) &#x4E2D;&#x7684;&#x6E10;&#x53D8;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x6240;&#x4EE5;&#x6BD4;&#x7387; DeltaC/C &#x662F;&#x5E38;&#x6570;&#x5230;&#x5904;&#x516C;&#x5F00;&#x5DEE;&#x5F02;&#x4E0E; fMLP &#x6D53;&#x5EA6; (DeltaC) &#x5728;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x73AF;&#x5883;&#x4E0E; fMLP &#x6D53;&#x5EA6;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x89E3;&#x79BB;&#x5E38;&#x6570; (K(d)) fmlp &#x4E0E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5176;&#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;&#x7EA6; 10 nM&#xFF09; &#x6BD4;&#x5F53;&#x5B83;&#x662F; 0.09 &#x6216; 0.13 0.05 DeltaC/C &#x65F6;&#x8981;&#x5C11;&#x5F97;&#x591A;&#x722C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x6E10;&#x53D8;&#x8DE8;&#x5176;&#x76F4;&#x5F84;&#x800C;&#x4E0D;&#x79FB;&#x52A8;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x9047;&#x5230;&#x5F15;&#x8BF1;&#x5242;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x6240;&#x6709; DeltaC/C &#x6BD4;&#x7387;&#x8FDB;&#x884C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#xFF0C;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C; &#xFF08;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53CA;&#x5176;&#x8FC1;&#x79FB;&#x8DEF;&#x5F84;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x9664;&#x4EE5;&#x6309;&#x6B63;&#x786E;&#x65B9;&#x5411;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB;&#x7531;&#x8868;&#x793A;&#xFF09; &#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x7684;&#x8D8B;&#x5316;&#x80FD;&#x529B;&#x90FD;&#x662F;&#x6700;&#x5927;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5F00;&#x59CB;&#x5728;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684; K(d) &#x548C;&#x9010;&#x6B65;&#x5728;&#x8F83;&#x9AD8;&#x6216;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5F00;&#x59CB;&#x4E0B;&#x964D;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5C06;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;

&#x5728;&#x540E;&#x7F18;&#x4E0E;&#x9886;&#x5148;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5F15;&#x8BF1;&#x5242;&#x786E;&#x5B9A;&#x8D8B;&#x5316;&#x5B9E;&#x529B;&#x3002;

We have analyzed chemotaxis of neutrophil-differentiated HL60 cells in microfluidic devices that create exponential gradients of the chemoattractant, f-Met-Leu-Phe (fMLP). Such gradients expose each cell to a difference in fMLP concentration (DeltaC) across its diameter that is directly proportional to the ambient concentration (C) at that cell's position in the gradient, so the ratio DeltaC/C is constant everywhere. Cells exposed to ambient fMLP concentrations near the constant of dissociation (K(d)) for fMLP binding to its receptor ( approximately 10 nM) crawl much less frequently when DeltaC/C is 0.05 than when it is 0.09 or 0.13. Hence, cells can detect the gradient across their diameter without moving and, thus, without experiencing temporal changes in attractant concentration. At all DeltaC/C ratios tested, the average chemotactic prowess of individual cells (indicated by the distance a cell traveled in the correct direction divided by the length of its migration path) is maximal for cells that start migrating at concentrations near the K(d) and progressively decreases at higher or lower starting concentrations.

Bound attractant at the leading vs. the trailing edge determines chemotactic prowess.

Nous avons analys&eacute; le chimiotactisme des cellules HL60 neutrophile dissoci&eacute;s des dispositifs microfluidiques qui cr&eacute;ent des gradients exponentielles de la chemoattractant, f-Met-Leu-Phe (fMLP). Ces gradients exposent chaque cellule d&#39;une diff&eacute;rence dans la concentration fMLP (DeltaC) &agrave; travers son diam&egrave;tre qui est directement proportionnelle &agrave; la concentration ambiante (C) &agrave; la position de cette cellule dans la pente, donc le ratio DeltaC/C est constante dans le monde. Les cellules expos&eacute;es &agrave; des concentrations ambiantes fMLP pr&egrave;s de la constante de dissociation (K(d)) pour la fMLP liaison &agrave; son r&eacute;cepteur (environ 10 nM) analyse beaucoup moins fr&eacute;quemment lorsque DeltaC/C est de 0,05 que quand elle est 0,09 ou 0,13. Donc, cellules peuvent d&eacute;tecter le gradient &agrave; travers leur diam&egrave;tre sans bouger et donc sans subir de changements temporels de la concentration de substance attractive. Les rapports de tout DeltaC/C test&eacute;s, les prouesses chimiotactique moyenne des cellules individuelles (indiqu&eacute; par la distance parcourue d&#39;une cellule dans le bon sens, divis&eacute; par la longueur de sa trajectoire de migration) sont maximale pour les cellules qui commencent &agrave; migrer &agrave; des concentrations pr&egrave;s du K(d) et progressivement diminue &agrave; plus ou moins &agrave; partir des concentrations.

Attractant li&eacute; &agrave; l&#39;attaque contre le bord de fuite d&eacute;termine les prouesses chimiotactique.

Wir haben Chemotaxis von Neutrophilen-differenzierte HL60 Zellen in Microfluidic Vorrichtungen analysiert, die exponentielle Verl&auml;ufe der Chemoattractant, f-Met-Leu-Phe (fMLP) zu erstellen. Solche Farbverl&auml;ufe machen jede Zelle um einen Unterschied in fMLP-Konzentration (DeltaC) &uuml;ber sein Durchmesser, die direkt proportional zur Umgebungstemperatur Konzentration (C) dieser Zelle Position im Farbverlauf, so das Verh&auml;ltnis DeltaC/C konstant ist &uuml;berall verf&uuml;gbar. Zellen, die Umgebungstemperatur fMLP Konzentrationen ausgesetzt in der N&auml;he von die Konstante der Dissoziation (K(d)) f&uuml;r fMLP Bindung an seinen Rezeptor (ca. 10 nM) viel seltener zu crawlen, wenn DeltaC/C 0,05 als wenn es 0,09 oder 0,13. Daher k&ouml;nnen Zellen den Farbverlauf &uuml;ber deren Durchmesser ohne zu bewegen und damit ohne zeitliche &Auml;nderungen in Lockstoff Konzentration erkennen. &Uuml;berhaupt DeltaC/C Verh&auml;ltnissen getestet, wird die durchschnittliche chemotaktische Tapferkeit einzelner Zellen (gekennzeichnet durch die Entfernung eine Zelle in die richtige Richtung, dividiert durch die L&auml;nge des Pfads Migration) maximal bei Zellen, die bei Konzentrationen in der N&auml;he der K(d) und schrittweise sinkt bei h&ouml;heren oder niedrigeren Konzentrationen ab Migration zu starten.

Gebundenen Lockstoff bei f&uuml;hrenden vs. die Hinterkante bestimmt chemotaktische Tapferkeit.

Abbiamo analizzato la chemiotassi dei neutrofili-differenziato cellule HL60 in dispositivi microfluidici che creare sfumature esponenziale di chemioattrattanti, f-Met-Leu-Phe (fMLP). Tali gradienti espongono ogni cella a una differenza di concentrazione fMLP (DeltaC) attraverso il suo diametro &egrave; direttamente proporzionale alla concentrazione ambientale (C) in posizione di quella cella nella sfumatura, quindi il rapporto DeltaC/C &egrave; costante ovunque. Cellule esposte a concentrazioni ambientali fMLP vicino la costante di dissociazione (K(d)) per l&#39;associazione fMLP al suo recettore (circa 10 nM) strisciare molto meno frequentemente quando DeltaC/C &egrave; 0,05 rispetto a quando &egrave; 0,09 o 0.13. Quindi, le cellule possono rilevare il gradiente attraverso il loro diametro senza muoversi e, quindi, senza sperimentare cambiamenti temporali nella concentrazione dell&#39;esca. DeltaC/C a tutti i rapporti testati, la prodezza chemiotattica media delle singole celle (indicato dalla distanza percorsa una cella nella corretta direzione divisa per la lunghezza del suo percorso di migrazione) &egrave; massima per le cellule che iniziano la migrazione a concentrazioni vicino al K(d) e progressivamente diminuisce al superiore o inferiore a partire concentrazioni.

Attractant rilegato a condurre contro il bordo determina prodezza chemiotattica.

&#x8D70;&#x3001;f-&#x4F1A;&#x3063;&#x305F;-&#x30EB;&#x30FC;-Phe (fMLP) &#x306E;&#x6307;&#x6570;&#x95A2;&#x6570;&#x7684;&#x306A;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x5206;&#x5316; HL60 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5404;&#x30BB;&#x30EB; fMLP &#x6FC3;&#x5EA6; (DeltaC) &#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x6BD4; DeltaC/C &#x306F;&#x3069;&#x3053;&#x3067;&#x3082;&#x5B9A;&#x6570;&#x3067;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3001;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6; (C) &#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x305D;&#x306E;&#x76F4;&#x5F84;&#x3092;&#x6A2A;&#x5207;&#x3063;&#x3066;&#x516C;&#x958B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8; fMLP &#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x7D30;&#x80DE;&#x8FD1;&#x304F;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x5B9A;&#x6570; &#xFF08;K(d)) &#x305D;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; fMLP &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081; (&#x7D04; 10 nM) DeltaC/C &#x3088;&#x308A; 0.09 &#x307E;&#x305F;&#x306F; 0.13 &#x304C; 0.05 &#x306E;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x307B;&#x3069;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB; &#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x305D;&#x306E;&#x76F4;&#x5F84;&#x3092;&#x6A2A;&#x5207;&#x3063;&#x3066;&#x79FB;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x305A;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x8A98;&#x5F15;&#x7269;&#x8CEA;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;&#x5168;&#x7136; DeltaC/C &#x6BD4; (&#x30BB;&#x30EB;&#x305D;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x30D1;&#x30B9;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3067;&#x5272;&#x3063;&#x305F;&#x5024;&#x3092;&#x6B63;&#x3057;&#x3044;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x8D70;&#x884C;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;)&#x3001;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x306E;&#x8155;&#x524D;&#x306F;&#x6700;&#x5927;&#x6FC3;&#x5EA6; K(d) &#x3068;&#x5F90;&#x3005; &#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4F4E;&#x3044;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x3067;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A8;&#x30C3;&#x30B8;&#x5BFE;&#x3067;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8A98;&#x5F15;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x306E;&#x8155;&#x524D;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; chemoattractant, f-&#xCDA9;&#xC871;-&#xB808;&#xC774;-&#xD398; (fMLP)&#xC758; &#xC9C0; &#xC218; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xACB0;&#xD569; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0; HL60 &#xC138;&#xD3EC; neutrophil &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC758; chemotaxis &#xBD84;&#xC11D;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xBE44;&#xC728;&#xC740; DeltaC/C&#xB294; &#xC0C1;&#xC218; &#xC0AC;&#xBC29; &#xADF8;&#xB798;&#xC11C; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xB18D;&#xB3C4; (C)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB2F9; &#xC140;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xBE44;&#xB840;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC9C1;&#xACBD;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; fMLP &#xB18D;&#xB3C4; (DeltaC)&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xB97C; &#xAC01; &#xC140;&#xC744; &#xB178;&#xCD9C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xBCC0; fMLP &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xC140; &#xADFC;&#xCC98; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC218; (fMLP &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; K(d)) (&#xC57D; 10 nM) DeltaC/C&#xAC00; 0.05 0.09 &#xC778;&#xC9C0; 0.13 &#xB54C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB35C; &#xC790;&#xC8FC; &#xD06C;&#xB864; &#xB9C1;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC140; &#xC774;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70;, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC720;&#xC778; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xACBD;&#xD5D8; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC9C1;&#xACBD;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0C9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBAA8;&#xB450;&#xC5D0;&#xC11C; DeltaC/C &#xBE44;&#xC728;, &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC140; (&#xC140;&#xC758; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xACBD;&#xB85C; &#xAE38;&#xC774; &#xB098;&#xB208; &#xC62C;&#xBC14;&#xB978; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC8FC;&#xD589; &#xAC70;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C;)&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xD608; &#xC6A9; K(d) &#xACE0; &#xC810;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xB610;&#xB294; &#xB0AE;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xADFC;&#xCC98; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xB300;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD6C4;&#xD589; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC; &#xB300; &#xC120;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC720;&#xC778; &#xD608; &#xB178;&#xD558;&#xC6B0;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hemos analizado Quimiotaxis de c&eacute;lulas diferenciadas neutr&oacute;filo de HL60 en dispositivos microflu&iacute;dicos que crean gradientes exponenciales de la quimioatrayentes, f-Met-Leu-Phe (fMLP). Tales gradientes exponen cada c&eacute;lula a una diferencia en la concentraci&oacute;n de fMLP (DeltaC) a trav&eacute;s de su di&aacute;metro que es directamente proporcional a la concentraci&oacute;n ambiental (C) en la posici&oacute;n de la c&eacute;lula del degradado, por lo que la relaci&oacute;n DeltaC/C es constante en todo el mundo. Las c&eacute;lulas expuestas a concentraciones fMLP ambiente cerca de la constante de disociaci&oacute;n (k para fMLP Uni&oacute;n a su receptor (aproximadamente 10 nM) arrastran mucho menos frecuentemente cuando DeltaC/C es 0.05 que cuando est&aacute; 0.09 o 0.13. Por lo tanto, las c&eacute;lulas pueden detectar el gradiente a trav&eacute;s de su di&aacute;metro sin moverse y, as&iacute;, sin experimentar cambios temporales en la concentraci&oacute;n de atrayente. En absoluto DeltaC/C cocientes probados, la proeza quimiot&aacute;ctica promedio de c&eacute;lulas individuales (indicado por la distancia recorrida de una celda en la direcci&oacute;n correcta, dividida por la longitud de su ruta de migraci&oacute;n) es m&aacute;xima para las c&eacute;lulas que comienzan a migrar a concentraciones cerca de la K(d) y progresivamente disminuye en mayor o menor a partir de las concentraciones.

Atrayente consolidado en el l&iacute;der contra el borde de fuga determina quimiot&aacute;cticos proezas.

&#x867D;&#x7136;&#x826F;&#x597D;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x63A7;&#x5236;&#x611F;&#x67D3;&#x5230;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4ECE;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x5176;&#x8FC1;&#x79FB;&#x6A21;&#x5F0F;&#x5185;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x6216;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7528;&#x6765;&#x67E5;&#x627E;&#x5176;&#x672C;&#x5730;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x6218;&#x7565;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x68C0;&#x67E5;&#x5B8C;&#x597D;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6210;&#x65E2;&#x5C0F;&#xFF0C;&#x77AC;&#x53D8;&#x5927;&#xFF0C;&#x6301;&#x7EED;&#x7FA4;&#x901A;&#x8FC7;&#x534F;&#x8C03;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#xFF0C;&#x5408;&#x4F5C;&#x884C;&#x52A8;&#x7684;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x51FA;&#x53E3;&#x4ECE;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x80FD;&#x89E6;&#x53D1;&#x7FA4;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x5F62;&#x6210;&#x6070;&#x597D;&#x5728;&#x7A7A;&#x95F4;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E05;&#x9664;&#x8BE5;&#x884C;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x5305;&#x819C;&#x4E0B;&#x7AA6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x57FA;&#x7840;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8702;&#x62E5;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x5236;&#x53CA;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x5F62;&#x6210;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x65B0;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x3002;

&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x611F;&#x67D3;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;

Although the signals that control neutrophil migration from the blood to sites of infection have been well characterized, little is known about their migration patterns within lymph nodes or the strategies that neutrophils use to find their local sites of action. To address these questions, we used two-photon scanning-laser microscopy to examine neutrophil migration in intact lymph nodes during infection with an intracellular parasite, Toxoplasma gondii. We found that neutrophils formed both small, transient and large, persistent swarms via a coordinated migration pattern. We provided evidence that cooperative action of neutrophils and parasite egress from host cells could trigger swarm formation. Neutrophil swarm formation coincided in space and time with the removal of macrophages that line the subcapsular sinus of the lymph node. Our data provide insights into the cellular mechanisms underlying neutrophil swarming and suggest new roles for neutrophils in shaping immune responses.

Dynamics of neutrophil migration in lymph nodes during infection.

Bien que les signaux qui contr&#xF4;lent la migration des neutrophiles dans le sang &#xE0; des sites d&#x26;#39;infection ont &#xE9;t&#xE9; bien caract&#xE9;ris&#xE9;s, on conna&#xEE;t peu leurs habitudes de migration au sein des ganglions lymphatiques ou les strat&#xE9;gies que les neutrophiles utiliser pour trouver leurs sites d&#x26;#39;action locaux. Pour r&#xE9;pondre &#xE0; ces questions, nous avons utilis&#xE9; deux photons &#xE0; balayage laser microscopique pour examiner la migration des neutrophiles dans les ganglions lymphatiques intactes lors de l&#x26;#39;infection par un parasite intracellulaire, Toxoplasma gondii. Nous avons trouv&#xE9; que les neutrophiles form&#xE9; deux petites, transitoires et grandes entreprises, des essaims persistants par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;un mod&#xE8;le migratoire coordonn&#xE9;e. Nous avons fourni la preuve que l&#x26;#39;action concert&#xE9;e des neutrophiles et d&#x26;#39;&#xE9;vacuation des parasites de cellules h&#xF4;tes pourrait d&#xE9;clencher la formation essaim. Formation essaim des neutrophiles a co&#xEF;ncid&#xE9; dans le temps et l&#x26;#39;espace avec la suppression des macrophages qui bordent le sinus sous-capsulaire du ganglion lymphatique. Nos donn&#xE9;es donnent un aper&#xE7;u des m&#xE9;canismes cellulaires qui sous-tendent l&#x26;#39;essaimage des neutrophiles et de proposer de nouveaux r&#xF4;les pour les neutrophiles dans le fa&#xE7;onnement des r&#xE9;ponses immunitaires.

Dynamique de la migration des neutrophiles dans les ganglions lymphatiques au cours des infections

Obwohl die Signale, die Steuern neutrophil Migration aus dem Blut zu Seiten der Infektion gut gepr&auml;gt haben, ist wenig bekannt &uuml;ber ihre Migration-Mustern in Lymphknoten oder die Strategien, die Neutrophilen zu benutzen, um ihre lokalen Websites der Aktion zu finden. Um diese Fragen zu l&ouml;sen, haben wir zwei-Photonen-scanning-Laser-Mikroskopie um neutrophil Migration in intakten Lymphknoten w&auml;hrend der Infektion mit einem intrazellul&auml;ren Parasiten Toxoplasma Gondii zu untersuchen. Wir fanden, dass neutrophile beide bildeten kleine, vor&uuml;bergehende und gro&szlig;e, hartn&auml;ckig Schw&auml;rme &uuml;ber eine koordinierte Migration Muster. Wir Beweise vorgelegt, dass kooperative Ma&szlig;nahmen der Neutrophilen und Parasit Ausstieg von Wirtszellen Schwarm Bildung ausl&ouml;sen k&ouml;nnte. Neutrophil Schwarm Bildung fiel in Raum und Zeit mit der Beseitigung von Makrophagen dieser Linie der subkapsul&auml;re Sinus der Lymphknoten. Unsere Daten einen Einblick in die zellul&auml;ren Mechanismen neutrophil Ausschw&auml;rmen und schlagen Sie neue Rollen f&uuml;r Neutrophilen bei der Gestaltung von Immunantworten.

Dynamik des neutrophil Migration in den Lymphknoten w&auml;hrend der Infektion.

Anche se i segnali che controllano la migrazione dei neutrofili dal sangue ai siti di infezione sono stati ben caratterizzati, poco si sa sui loro modelli di migrazione all&#39;interno dei linfonodi o le strategie che i neutrofili utilizzano per trovare i siti locali di azione. Per rispondere a queste domande, abbiamo utilizzato due-fotone laser scansione microscopia per esaminare la migrazione dei neutrofili nei linfonodi intatti durante l&#39;infezione con un parassita intracellulare, Toxoplasma gondii. Abbiamo trovato che i neutrofili formarono sia piccoli, transitori e ampio, persistenti sciami tramite un pattern di migrazione coordinato. Abbiamo fornito prove che l&#39;azione cooperativa di neutrofili ed egress parassita da cellule ospiti potrebbe innescare la formazione di sciame. Neutrofili sciame formazione coincise nello spazio e nel tempo con la rimozione dei macrofagi che la linea del seno sottocapsulare del linfonodo. I nostri dati forniscono informazioni sui meccanismi cellulari sottostanti sciamare dei neutrofili e suggeriscono nuovi ruoli per i neutrofili nel plasmare le risposte immunitarie.

Dinamiche della migrazione dei neutrofili nei linfonodi durante l&#39;infezione.

&#x8840;&#x6DB2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3078;&#x306E;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x904A;&#x8D70;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x3084;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x6226;&#x7565;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x79FB;&#x52D5;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7591;&#x554F;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3001;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x6642;&#x306B;&#x7121;&#x50B7;&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x306B;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x904A;&#x8D70;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;2&#x3064;&#x306E;&#x5149;&#x5B50;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x304C;&#x8ABF;&#x6574;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x79FB;&#x884C;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4E21;&#x65B9;&#x5C0F;&#x3055;&#x304F;&#x3001;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x3001;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x7FA4;&#x308C;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x3068;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x51FA;&#x53E3;&#x306E;&#x5354;&#x8ABF;&#x884C;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x7FA4;&#x308C;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x7FA4;&#x308C;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x884C;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x306E;&#x88AB;&#x819C;&#x4E0B;&#x6D1E;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306B;&#x6642;&#x9593;&#x3068;&#x7A7A;&#x9593;&#x306B;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x7FA4;&#x308C;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x611F;&#x67D3;&#x6642;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x306B;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x904A;&#x8D70;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;

&#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD638; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xC798; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xBE44;&#xB85D; &#xC791;&#xC740; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808; &#xC774;&#xB098; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xB294; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xB85C;&#xCEEC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804;&#xB7B5; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;, Toxoplasma gondii&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808;&#xC5D0; &#xD638; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xAC80;&#xC0AC; 2 &#xAD11;&#xC790; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; &#xBAA8;&#xB450; &#xD615;&#xC131; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC870;&#xC728; &#xB41C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC791;&#xC740; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD558; &#xACE0; &#xD070;, &#xC601;&#xAD6C; &#xBA54;&#xB69C;&#xAE30;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC758; &#xD611;&#xB825; &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xD0C8;&#xCD9C;&#xAD6C; &#xACF5;&#xB3D9; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD638; &#xB5BC; &#xD615;&#xC131; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xADF8; &#xB77C;&#xC778; &#xB9BC;&#xD504; &#xB178;&#xB4DC;&#xC758; subcapsular &#xBD80; &#xBE44; &#xB3D9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD638;&#xC5D0; &#xC9C4;&#xC744; &#xCE58;&#xACE0; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;.

&#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808;&#xC5D0; &#xD638; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;.

A pesar de las se&#xF1;ales que controlan la migraci&#xF3;n de los neutr&#xF3;filos de la sangre a los sitios de infecci&#xF3;n han sido bien caracterizados, se sabe poco sobre sus patrones de migraci&#xF3;n dentro de los ganglios linf&#xE1;ticos o las estrategias que los neutr&#xF3;filos utilizar para encontrar sus sitios de acci&#xF3;n locales. Para responder a estas preguntas, hemos utilizado dos fotones del l&#xE1;ser de barrido con microscopio para examinar la migraci&#xF3;n de neutr&#xF3;filos en los ganglios linf&#xE1;ticos intactos durante la infecci&#xF3;n con un par&#xE1;sito intracelular, el Toxoplasma gondii. Hemos encontrado que los neutr&#xF3;filos forman dos peque&#xF1;as, transitorias y grandes enjambres persistentes a trav&#xE9;s de un patr&#xF3;n de migraci&#xF3;n coordinada. Hemos presentado pruebas de que la acci&#xF3;n cooperativa de los neutr&#xF3;filos y la salida del par&#xE1;sito de las c&#xE9;lulas hu&#xE9;sped puede desencadenar la formaci&#xF3;n del enjambre. La formaci&#xF3;n de los neutr&#xF3;filos enjambre coincidieron en espacio y tiempo con la eliminaci&#xF3;n de los macr&#xF3;fagos que recubren el seno subcapsular del ganglio linf&#xE1;tico. Nuestros datos proporcionan evidencias de los mecanismos celulares que subyacen a un enjambre de neutr&#xF3;filos y sugerir nuevos roles para los neutr&#xF3;filos en la conformaci&#xF3;n de la respuesta inmune.

Din&#xE1;mica de la migraci&#xF3;n de los neutr&#xF3;filos en los ganglios linf&#xE1;ticos durante la infecci&#xF3;n

&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76AE;&#x5C42;&#x7684;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x9009;&#x62E9;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x5206;&#x5E03;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80F8;&#x817A;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Dc) &#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x76AE;&#x8D28;&#x53CA;&#x5176;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x80F8;&#x817A;&#x76AE;&#x8D28;&#x4F7F;&#x4E0E; DCs &#x7684;&#x9891;&#x7E41;&#x63A5;&#x89E6;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x534F;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0;&#x65F6;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x89E3;&#x79EF;&#x6781;&#x9009;&#x62E9;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x663E;&#x793A;&#x76AE;&#x8D28;&#x533A;&#x8BAE;&#x4F1A;&#x53CA; CCL21 &#x8868;&#x8FBE;&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x662F;&#x4E0E;&#x6574;&#x4E2A;&#x76AE;&#x5C42;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x8840;&#x7BA1;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; CCR7 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x52A0;&#x76F4;&#x6D41;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x80CC;&#x666F;&#x4E0B;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x9009;&#x62E9; TCR CCR7 &#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x76F4;&#x6D41;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x610F;&#x89C1;&#x786E;&#x5B9A;&#x8109;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5173;&#x8054;&#x4FC3;&#x8FDB; DCs &#x4E0E;&#x6B63;&#x5728;&#x63A5;&#x53D7;&#x79EF;&#x6781;&#x9009;&#x62E9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x80F8;&#x817A;&#x76AE;&#x8D28;&#x5185;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x3002;

&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x80F8;&#x817A;&#x76AE;&#x8D28; CCR7 &#x914D;&#x4F53;&#x6765;&#x6E90;&#x7684;&#x80F8;&#x817A;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Little is known about the dynamics of the interactions between thymocytes and other cell types, as well as the spatiotemporal distribution of thymocytes during positive selection in the microenvironment of the cortex. We used two-photon laser scanning microscopy of the mouse thymus to visualize thymocytes and dendritic cells (DCs) and to characterize their interactions in the cortex. We show that thymocytes make frequent contacts with DCs in the thymic cortex and that these associations increase when thymocytes express T cell receptors that mediate positive selection. We also show that cortical DCs and the chemokine CCL21 expression are closely associated with capillaries throughout the cortex. The overexpression of the chemokine receptor CCR7 in thymocytes results in an increase in DC-thymocyte interactions, while the loss of CCR7 in the background of a positive-selecting TCR reduces the extent of DC-thymocyte interactions. These observations identify a vasculature-associated microenvironment within the thymic cortex that promotes interactions between DCs and thymocytes that are receiving positive selection signals.

Thymocyte-dendritic cell interactions near sources of CCR7 ligands in the thymic cortex.

On conna&#xEE;t peu la dynamique des interactions entre les thymocytes et autres types de cellules, ainsi que la distribution spatio-temporelle des thymocytes lors de la s&#xE9;lection positive dans le microenvironnement du cortex. Nous avons utilis&#xE9; deux photons laser microscopie de la souris pour visualiser le thymus thymocytes et les cellules dendritiques (DC) et de caract&#xE9;riser leurs interactions dans le cortex. Nous montrons que les thymocytes &#xE9;tablir des contacts fr&#xE9;quents avec les pays en d&#xE9;veloppement dans le cortex thymique et que ces associations augmentent lorsque les thymocytes expriment des r&#xE9;cepteurs des lymphocytes T qui interviennent dans la s&#xE9;lection positive. Nous montrons aussi que les PED corticales et la chimiokine CCL21 expression sont &#xE9;troitement associ&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;ensemble du cortex capillaires. La surexpression du r&#xE9;cepteur de chimiokine CCR7 dans les r&#xE9;sultats de thymocytes &#xE0; une augmentation de DC-thymocytes interactions, tandis que la perte de CCR7 dans le fond d&#x26;#39;un TCR positif s&#xE9;lectionnant r&#xE9;duit l&#x26;#39;&#xE9;tendue de la DC-thymocytes interactions. Ces observations font ressortir un micro-vasculaire associ&#xE9;e au sein du cortex thymique qui favorise les interactions entre les pays en d&#xE9;veloppement et des thymocytes qui re&#xE7;oivent des signaux de s&#xE9;lection positive.

Interactions cellulaires Thymocyte-dendritiques &#xE0; proximit&#xE9; de sources de CCR7 ligands dans le cortex thymique

&Uuml;ber die Dynamik der Wechselwirkungen zwischen Thymozyten und andere Zelltypen sowie die raumzeitliche Verteilung der Thymozyten w&auml;hrend positive Auswahl in das Mikromilieu des Cortex ist wenig bekannt. Wir verwendet zwei-Photonen-Laser-scanning-Mikroskopie der Maus Thymus, Thymozyten und dendritischen Zellen (DCs) zu visualisieren und deren Wechselwirkungen im Kortex zu charakterisieren. Wir zeigen, dass Thymozyten h&auml;ufige Kontakten mit DCs in den Tumor Kortex zu machen und diese Verb&auml;nde zu erh&ouml;hen, wenn Thymozyten T-ZELLREZEPTOREN &auml;u&szlig;ern, die positiv-Auswahl zu vermitteln. Wir zeigen auch, dass kortikale DCs und Chemokine CCL21 Ausdruck eng mit Kapillaren in der Hirnrinde. Die &Uuml;berexpression der Chemokin-Rezeptor CCR7 in Thymozyten f&uuml;hrt zu einer Zunahme der DC-Thymocyte Interaktionen, w&auml;hrend der Verlust von CCR7 im Hintergrund eine Positive Auswahl TCR das Ausma&szlig; der DC-Thymocyte Interaktionen reduziert. Diese Beobachtungen identifizieren ein Gef&auml;&szlig;system-assoziierte Mikromilieu innerhalb der Thymom Kortex, der f&ouml;rdert Interaktionen zwischen DCs und Thymozyten, die positiv-Auswahl-Signale empfangen.

Thymocyte-Dendritische Zelle Interaktionen in der N&auml;he von CCR7 Liganden im Tumor Kortex.

Poco si sa circa la dinamica delle interazioni tra timociti e altri tipi di cellule, come pure la distribuzione spatiotemporal di timociti durante la selezione positiva nel microambiente della corteccia. Abbiamo usato due-fotone laser scanning microscopy del timo del mouse per visualizzare i timociti e cellule dendritiche (DCs) e per caratterizzare la loro interazioni nella corteccia. Mostriamo che timociti fare frequenti contatti con DCs nella corteccia del timo e che queste associazioni aumentano quando timociti esprimono i recettori delle cellule T che mediano la selezione positiva. Mostriamo anche che DCs corticale e la chemochina CCL21 espressione sono strettamente associati con capillari in tutta la corteccia. L&#39;iperespressione del recettore delle chemochine CCR7 nei risultati di timociti in un aumento delle interazioni di DC-timocita, mentre la perdita di CCR7 sullo sfondo di un TCR positivo-la selezione riduce l&#39;entit&agrave; delle interazioni DC-timocita. Queste osservazioni identificano un microambiente associato al sistema vascolare all&#39;interno della corteccia del timo che promuove le interazioni tra DCs e timociti che stanno ricevendo segnali di selezione positiva.

Interazioni cellula dendritica timocita vicino a fonti di CCR7 ligandi nella corteccia del timo.

&#x30EA;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6B63;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x6642;&#x306B;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x5206;&#x5E03;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;DC&#xFF09;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x5927;&#x8133;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3067;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x80F8;&#x817A;&#x306E;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x8D70;&#x67FB;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x80F8;&#x817A;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x3001;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6B63;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x56E3;&#x4F53;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x983B;&#x7E41;&#x306A;&#x63A5;&#x89E6;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;CCL21&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x76AE;&#x8CEA;&#x5168;&#x4F53;&#x306B;&#x6BDB;&#x7D30;&#x8840;&#x7BA1;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DC-&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x80F8;&#x817A;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;CCR7&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x306E;&#x9078;&#x629E;TCR&#x306E;&#x80CC;&#x666F;&#x306B;&#x3042;&#x308B;CCR7&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x3001;DC-&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3092;&#x8EFD;&#x6E1B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x200B;&#x200B;&#x5BDF;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x53D7;&#x4FE1;&#x3057;&#x3066;&#x200B;&#x200B;&#x3044;&#x308B;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x80F8;&#x817A;&#x76AE;&#x8CEA;&#x5185;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x80F8;&#x817A;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CCR7&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x6E90;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;

&#xC791;&#xC740; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC740; microenvironment&#xC5D0; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC120;&#xD0DD; &#xB3D9;&#xC548; thymocytes spatiotemporal &#xBC30;&#xD3EC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; thymocytes &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. Thymocytes&#xACFC; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DCs)&#xC744; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; 2 &#xAD11;&#xC790; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; thymus&#xC758; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; thymocytes thymic &#xD53C; &#xC9C8; Dc&#xC640; &#xBE48;&#xBC88;&#xD55C; &#xC811;&#xCD09;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB54C; thymocytes &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC120;&#xD0DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; DCs &#xBC0F; chemokine CCL21 &#xC2DD; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBAA8;&#xC138; &#xD608;&#xAD00;&#xC5D0; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB418;&#xC5B4; &#xBCF4;&#xC5EC;. Thymocytes&#xC758; chemokine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; ccr7&#xC758; overexpression DC-thymocyte &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xAE0D;&#xC815;&#xC744; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558;&#xBA74; TCR&#xC758; &#xBC30;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; ccr7&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; DC-thymocyte &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC815;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCE21; Dc&#xC640; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC120;&#xD0DD; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC1B;&#xACE0; thymocytes &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; thymic &#xD53C; &#xC9C8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD608;&#xAD00; &#xAD00;&#xB828; microenvironment&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Thymic &#xD53C; &#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; CCR7 ligands&#xC758; &#xC18C;&#xC2A4; &#xADFC;&#xCC98; thymocyte &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;.

Se sabe poco sobre la din&#xE1;mica de las interacciones entre los timocitos y otros tipos celulares, as&#xED; como la distribuci&#xF3;n espacio-temporal de los timocitos durante la selecci&#xF3;n positiva en el microambiente de la corteza. Hemos utilizado dos fotones del l&#xE1;ser microscop&#xED;a de barrido del rat&#xF3;n timo para visualizar los timocitos y las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas (DC) y caracterizar las interacciones en la corteza. Se demuestra que los timocitos establecer contactos frecuentes con los pa&#xED;ses en desarrollo en la corteza de un timo y que estas asociaciones se incrementan cuando los timocitos expresan receptores de c&#xE9;lulas T que intervienen en la selecci&#xF3;n positiva. Tambi&#xE9;n se muestra que los pa&#xED;ses en desarrollo cortical y la expresi&#xF3;n de quimioquinas CCL21 est&#xE1;n estrechamente relacionados con los capilares en toda la corteza. La sobreexpresi&#xF3;n del receptor de quimioquinas CCR7 en los resultados de timocitos en un aumento de la CC-timocitos interacciones, mientras que la p&#xE9;rdida de CCR7 en el fondo de un TCR positiva seleccionar reduce en la medida de DC-timocitos interacciones. Estas observaciones identificar un micro vasculatura asociada dentro de la corteza de un timo que promueve la interacci&#xF3;n entre los pa&#xED;ses en desarrollo y timocitos que est&#xE1;n recibiendo se&#xF1;ales positivas de selecci&#xF3;n.

Timocitos-dendr&#xED;ticas Interacciones celulares cerca de Fuentes de CCR7 ligandos en la corteza de un timo

&#x672C;&#x6587;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x91CF;&#x5316;&#x7B49;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x73B0;&#x8C61;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4ECE;&#x5EF6;&#x65F6;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x591A;&#x901A;&#x9053;&#x4E09;&#x7EF4;&#x56FE;&#x50CF;&#x5806;&#x6808;&#x7684;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6807;&#x672C;&#x7684;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5404;&#x79CD; 5 &#x7EF4; (x&#x3001; y&#x3001; z&#x3001; t&#x3001; lambda&#xFF09; &#x5305;&#x542B;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (DC) &#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x9F20;&#x6807;&#x80F8;&#x817A;&#x76AE;&#x8D28;&#x548C;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x7684;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x83B7;&#x5F97;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; &#xFF08;TPLSM&#xFF09;&#x3002;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x88AB;&#x5212;&#x5B9A;&#x81EA;&#x52A8;&#x4F7F;&#x7528;&#x5747;&#x503C;&#x79FB;&#x4F4D;&#x7684;&#x805A;&#x7C7B;&#x7B97;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4F7F;&#x5F62;&#x6001;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8BA1;&#x7B97;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x9C81;&#x68D2;&#x7684;&#x591A;&#x5047;&#x8BBE;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x7B97;&#x6CD5;&#x7528;&#x6765;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE; (DC &#x5904;&#x4E8E;&#x9759;&#x6B62;&#x72B6;&#x6001;&#xFF09;&#x3002;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x6570;&#x636E;&#x542F;&#x7528;&#x52A8;&#x6001;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8BA1;&#x7B97;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x80F8;&#x817A;&#x3001; &#x6D04;&#x6E38;&#x89C4;&#x5F8B;&#x548C;&#x80F8;&#x817A;&#x76F4;&#x6D41;&#x63A5;&#x89E6;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x5236;&#x5B9A;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x68C0;&#x67E5;&#x3001; &#x7EA0;&#x6B63;&#x7F16;&#x8F91;&#x548C;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x7684;&#x81EA;&#x52A8;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x751F;&#x6210;&#x7ED3;&#x679C;&#x540C;&#x610F;&#x624B;&#x52A8;&#x751F;&#x6210;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5230; 8%&#x4EE5;&#x5185;&#x3002;

&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x80F8;&#x817A;&#x76AE;&#x8D28;&#x5EF6;&#x65F6;&#x5E8F;&#x5217;&#x4ECE;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7684;&#x591A;&#x901A;&#x9053;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x56FE;&#x50CF;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x7684; 5 D &#x5206;&#x6790;&#x3002;

This paper presents automated methods to quantify dynamic phenomena such as cell-cell interactions and cell migration patterns from time-lapse series of multi-channel three-dimensional image stacks of living specimens. Various 5-dimensional (x, y, z, t, lambda) images containing dendritic cells (DC), and T-cells or thymocytes in the developing mouse thymic cortex and lymph node were acquired by two-photon laser scanning microscopy (TPLSM). The cells were delineated automatically using a mean-shift clustering algorithm. This enables morphological measurements to be computed. A robust multiple-hypothesis tracking algorithm was used to track thymocytes (the DC were stationary). The tracking data enable dynamic measurements to be computed, including migratory patterns of thymocytes, and duration of thymocyte-DC contacts. Software was developed for efficient inspection, corrective editing, and validation of the automated analysis results. Our software-generated results agreed with manually generated measurements to within 8%.

Automated 5-D analysis of cell migration and interaction in the thymic cortex from time-lapse sequences of 3-D multi-channel multi-photon images.

Ce document pr&#xE9;sente des m&#xE9;thodes automatis&#xE9;es pour quantifier des ph&#xE9;nom&#xE8;nes dynamiques tels que interactions cellule-cellule et les sch&#xE9;mas de migration des cellules de time-lapse s&#xE9;rie de multi-canal piles d&#x26;#39;images en trois dimensions de sp&#xE9;cimens vivants. Diverses images en 5 dimensions (x, y, z, t, lambda) contenant des cellules dendritiques (DC), et les lymphocytes T ou thymocytes dans le d&#xE9;veloppement de la souris thymique cortex et les ganglions lymphatiques ont &#xE9;t&#xE9; acquises par microscopie &#xE0; deux photons &#xE0; balayage laser (TPLSM) . Les cellules ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;limit&#xE9;es automatiquement &#xE0; l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;un algorithme de clustering moyenne de d&#xE9;calage. Cela permet des mesures morphologiques doivent &#xEA;tre calcul&#xE9;s. Un algorithme de suivi robuste multi-hypoth&#xE8;se a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour suivre les thymocytes (le DC &#xE9;tait stationnaire). Les donn&#xE9;es de suivi permettent des mesures dynamiques pour &#xEA;tre calcul&#xE9;, y compris les sch&#xE9;mas migratoires des thymocytes et la dur&#xE9;e de thymocytes-DC contacts. Le logiciel a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9; pour inspection efficace, l&#x26;#39;&#xE9;dition correctives, et la validation des r&#xE9;sultats d&#x26;#39;analyse automatis&#xE9;s. Nos g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;es par le logiciel des r&#xE9;sultats d&#x26;#39;accord avec les mesures g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;es manuellement &#xE0; moins de 8%.

Automatique 5-D Analyse de la migration cellulaire et l&#x26;#39;interaction dans le cortex thymique de time-lapse s&#xE9;quences de 3-D multi-canaux multi-photons Images

Dieser Beitrag stellt automatisierte Methoden, um dynamische Ph&auml;nomene wie Zell-Zell-Interaktionen zu quantifizieren und Zelle Migrationsmuster von Time-Lapse Reihe Mehrkanal dreidimensionales Bild Felsnadeln von lebenden Exemplaren. Verschiedenen 5-dimensionalen (X, y, Z, t, Lambda) Bilder mit dendritische Zellen (DC), und T-Zellen oder Thymozyten in den Entwicklungsl&auml;ndern Maus Thymom Kortex und Lymphknoten wurden von zwei-Photonen-Laser-scanning-Mikroskopie (TPLSM) erworben. Die Zellen wurden automatisch mit einen Mittelwert-UMSCHALT-clustering-Algorithmus abgegrenzt. Dadurch k&ouml;nnen die morphologische Messungen berechnet werden. Ein robuste Multiple-Hypothese-Tracking-Algorithmus wurde zum Nachverfolgen von Thymozyten (DC waren station&auml;re) verwendet. Die Tracking-Daten erm&ouml;glichen dynamische Messungen berechnet werden, einschlie&szlig;lich wandernde Muster der Thymozyten und Dauer der Thymocyte-DC-Kontakte. Software wurde entwickelt f&uuml;r effiziente Inspektion, korrigierende Bearbeitung und &Uuml;berpr&uuml;fung der automatischen Analyse-Ergebnisse. Unsere Software generierten Ergebnisse vereinbart mit manuell erstellte Messungen innerhalb von 8 %.

Automatische 5-D-Analyse von Zellmigration und Interaktion im Tumor Kortex von Zeitraffer-Sequenzen von Mehrkanal Multiphoton 3D-Bilder.

Questo libro presenta metodi automatizzati per quantificare i fenomeni dinamici come le interazioni cellula-cellula e cellula modelli di migrazione da Time-lapse serie di pile multicanale immagine tridimensionale di esemplari viventi. Vari 5-dimensionali (x, y, z, t, lambda) celle di immagini contenenti dendritiche (DC), e T-cellule o timociti nel linfonodo e sviluppo corteccia timica del mouse sono stati acquisiti da due-fotone laser scanning microscopy (TPLSM). Le cellule sono state delineate automaticamente utilizzando un algoritmo di clustering significa spostamento. Questo permette misurazioni morfologiche da computare. Un algoritmo robusto rilevamento multiplo-l&#39;ipotesi &egrave; stato utilizzato per tenere traccia di timociti (la DC sono stati stazionari). I dati di rilevamento consentono misure dinamiche essere calcolata, inclusi modelli migratori di timociti e durata dei contatti timocita-DC. Software &egrave; stato sviluppato per ispezione efficiente, modifica correttiva e convalida dei risultati dell&#39;analisi automatizzata. I nostri risultati generati dal software concordano con misurazioni generate manualmente a entro l&#39;8%.

Analisi automatica 5-D della migrazione cellulare e l&#39;interazione nella corteccia del timo da Time-lapse sequenze di immagini 3D di multi-photon multi-canale.

&#x672C;&#x8AD6;&#x6587;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30D7;&#x30B9;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x751F;&#x6D3B;&#x6A19;&#x672C;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x753B;&#x50CF;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x52D5;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x73FE;&#x8C61;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;DC&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x958B;&#x767A;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80F8;&#x817A;&#x306E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;T-&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7A2E;&#x3005;&#x306E;&#xFF08;X&#x3001;Y&#x3001;Z&#x3001;T&#x3001;&#x3BB;&#xFF09;5&#x6B21;&#x5143;&#x753B;&#x50CF;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x8D70;&#x67FB;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;TPLSM&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8CB7;&#x53CE;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5E73;&#x5747;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x81EA;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x7DDA;&#x5F15;&#x304D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x5024;&#x3092;&#x8A08;&#x7B97;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x8907;&#x6570;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;DC&#x304C;&#x9759;&#x6B62;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#xFF09;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x304C;&#x6E21;&#x308A;&#x9CE5;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x80F8;&#x817A;-DC&#x9023;&#x7D61;&#x5148;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x3066;&#x3001;&#x8A08;&#x7B97;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x691C;&#x67FB;&#x3001;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3001;&#x7DE8;&#x96C6;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x89E3;&#x6790;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x691C;&#x8A3C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F53;&#x793E;&#x306E;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;8&#xFF05;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x624B;&#x52D5;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

3-D&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30D7;&#x30B9;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x80F8;&#x817A;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x52D5;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;5-D&#x306E;&#x89E3;&#x6790;

&#xC774; &#xC885;&#xC774; &#xC140; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xAC19;&#xC740; &#xB3D9;&#xC801; &#xD604;&#xC0C1;&#xC744; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC140;&#xC758; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xD45C;&#xBCF8;&#xC758; &#xBA40;&#xD2F0; &#xCC44;&#xB110; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC2A4;&#xD0DD; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBB34;&#xB2AC; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xB41C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; 5 &#xCC28;&#xC6D0; (x, y, z, t, &#xB78C;&#xB2E4;) &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DC), &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xBC0F; T &#xC138;&#xD3EC; &#xB610;&#xB294; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; thymic &#xD53C; &#xC9C8; &#xBC0F; &#xB9BC;&#xD504; &#xB178;&#xB4DC; thymocytes 2 &#xAD11;&#xC790; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; (TPLSM)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC140; &#xD3C9;&#xADE0; &#xC2DC;&#xD504;&#xD2B8; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC790;&#xB3D9; delineated &#xD588;&#xB2E4;. &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xACC4;&#xC0B0; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Thymocytes (DC &#xACE0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;)&#xB97C; &#xCD94;&#xC801; &#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB2E4;&#xC911; &#xAC00;&#xC124; &#xCD94;&#xC801; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xC801; &#xB370;&#xC774;&#xD130; thymocytes, &#xCCA0;&#xC0C8; &#xD328;&#xD134; &#xBC0F; thymocyte DC &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;&#xC758; &#xAE30;&#xAC04;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xACC4;&#xC0B0;&#xD560; &#xC218; &#xB3D9;&#xC801; &#xCE21;&#xC815; &#xAC00;&#xB2A5;. &#xC18C;&#xD504;&#xD2B8;&#xC6E8;&#xC5B4;&#xB294; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xAC80;&#xC0AC;, &#xAD50;&#xC815; &#xD3B8;&#xC9D1; &#xBC0F; &#xC790;&#xB3D9;&#xB41C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xAC80;&#xC99D;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC18C;&#xD504;&#xD2B8;&#xC6E8;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xACB0;&#xACFC; 8% &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xB3D9;&#xC758; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xB41C; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xB2E4;&#xC911; &#xCC44;&#xB110; multi-photon &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; thymic &#xD53C; &#xC9C8;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; 5 &#xCC28;&#xC6D0; &#xBD84;&#xC11D;.

Este art&#xED;culo presenta los m&#xE9;todos automatizados para cuantificar los fen&#xF3;menos din&#xE1;micos, tales como las interacciones c&#xE9;lula-c&#xE9;lula y los patrones de migraci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas de la serie de lapso de tiempo de m&#xFA;ltiples canales en tres dimensiones pilas de im&#xE1;genes de los espec&#xED;menes vivos. Varias im&#xE1;genes de cinco dimensiones (x, y, z, t, lambda) que contienen las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas (DC), y las c&#xE9;lulas T o timocitos en el desarrollo de la corteza del timo del rat&#xF3;n y los ganglios linf&#xE1;ticos fueron adquiridas por dos fotones microscop&#xED;a de escaneo l&#xE1;ser (TPLSM) . Las c&#xE9;lulas fueron delineadas autom&#xE1;ticamente utilizando un algoritmo de agrupamiento medio de cambio. Esto permite que las mediciones morfol&#xF3;gicas para ser calculado. Un robusto de m&#xFA;ltiples hip&#xF3;tesis de algoritmo de seguimiento se utiliz&#xF3; para realizar un seguimiento de los timocitos (la DC era estacionaria). Los datos de seguimiento permiten mediciones din&#xE1;micas para ser calculados, incluyendo patrones migratorios de timocitos y la duraci&#xF3;n de los timocitos-CC contactos. El software fue desarrollado para una inspecci&#xF3;n eficiente, la edici&#xF3;n de correcci&#xF3;n y validaci&#xF3;n de los resultados de los an&#xE1;lisis automatizados. Nuestros resultados generados por el software de acuerdo con las mediciones manualmente generados a dentro de un 8%.

Automatizado de 5-D An&#xE1;lisis de la migraci&#xF3;n celular y la interacci&#xF3;n en la corteza de un timo a partir de secuencias de lapso de tiempo de 3-D Multi-canal multi-fotones Im&#xE1;genes

&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x5BBF;&#x4E3B;&#xFF0C;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x4E3B;&#x673A; CD8 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x63A7;&#x5236;&#x611F;&#x67D3;&#x79EF;&#x6781;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7684;&#x50F5;&#x6301;&#x5C40;&#x9762;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;CD8 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E00;&#x822C;&#x901A;&#x8FC7;&#x672C;&#x5730;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x4FB5;&#x5165;&#x7684;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE; Ags &#x627F;&#x8BA4;&#x540E;&#x6548;&#x5E94;&#x5206;&#x5B50;&#x9632;&#x6B62;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;CD8 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x5F13;&#x5F62;&#x548C;&#x88C5;&#x7532;&#x8FD0;&#x5175;&#x8F66;&#x5728;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5C1A;&#x672A;&#x88AB;&#x5BA1;&#x67E5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x5C0F;&#x9F20;&#x611F;&#x67D3;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x751F;&#x6D3B;&#x7ED3;&#x5408;&#x8111;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x53CA;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7684;&#x8111;&#x5207;&#x7247;&#x68C0;&#x67E5;&#x4ECE;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684; CD8 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x548C;&#x88C5;&#x7532;&#x8FD0;&#x5175;&#x8F66;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x7279;&#x5B9A; Ag &#x7684; CD8 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x62DB;&#x52DF;&#x5230;&#x7684;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5927;&#x8111;&#x548C;&#x4E0B;&#x6B63;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x94F6;&#x627F;&#x8BA4;&#x90A3;&#x91CC;&#x4FDD;&#x7559;&#x3002;&#x8111;&#x7684; CD8 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8FDB;&#x884C;&#x77AC;&#x6001;&#x63A5;&#x89E6;&#x542B;&#x6709;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x8089;&#x82BD;&#x80BF;&#x6837;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x4E2A;&#x522B; CD11b(+) Apc&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4E00;&#x4E9B;&#x4E0D;&#x5305;&#x542B;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5FFD;&#x7565;&#x4E0D;&#x53D8;&#x94F6;&#x8F74;&#x627F;&#x56CA;&#x80BF;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x8054;&#x7EDC;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x542B;&#x6709;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x6216;&#x56CA;&#x80BF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x793A;&#x6D3B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x9996;&#x6B21;&#x76F4;&#x63A5;&#x89C2;&#x5BDF;&#x548C;&#x7406;&#x89E3;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x5E94;&#x7B54;&#x4E3A;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x7684;&#x89C6;&#x89D2;&#x3002;

&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;

The intracellular parasite Toxoplasma gondii can establish persistent infection in the brain of a mammalian host, a standoff that involves the active participation of host CD8 T cells to control infection. CD8 T cells generally protect against intracellular pathogens by local delivery of effector molecules upon recognition of specific pathogen Ags on invaded host cells. However, the interactions between CD8 T cells, T. gondii, and APCs in the brain have not yet been examined. In this study we have used a mouse infection model in conjunction with two-photon microscopy of living brain tissue and confocal microscopy of fixed brain sections to examine the interactions between CD8 T cells, parasites, and APCs from chronically infected mice. We found that Ag-specific CD8 T cells were recruited to the brains of infected mice and persisted there in the presence of ongoing Ag recognition. Cerebral CD8 T cells made transient contacts with granuloma-like structures containing parasites and with individual CD11b(+) APCs, including some that did not contain parasites. In contrast, T cells ignored intact Ag-bearing cysts and did not contact astrocytes or neurons, including neurons containing parasites or cysts. Our data represent the first direct observation of the dynamics of T cell-parasite interactions within living tissue and provide a new perspective for understanding immune responses to persistent pathogens in the brain.

Dynamic imaging of T cell-parasite interactions in the brains of mice chronically infected with Toxoplasma gondii.

Le parasite intracellulaire Toxoplasma gondii peut &#xE9;tablir une infection persistante dans le cerveau d&#x26;#39;un mammif&#xE8;re h&#xF4;te, une impasse qui implique la participation active des cellules T CD8 d&#x26;#39;accueil pour contr&#xF4;ler l&#x26;#39;infection. Les cellules T CD8 g&#xE9;n&#xE9;ralement contre les agents pathog&#xE8;nes intracellulaires par la livraison locale de mol&#xE9;cules effectrices de la reconnaissance de l&#x26;#39;agent pathog&#xE8;ne sp&#xE9;cifique sur Ags envahi les cellules h&#xF4;tes. Cependant, les interactions entre les cellules T CD8, T. gondii, et les APC dans le cerveau n&#x26;#39;ont pas encore &#xE9;t&#xE9; examin&#xE9;. Dans cette &#xE9;tude nous avons utilis&#xE9; un mod&#xE8;le d&#x26;#39;infection de la souris en conjonction avec microscopie &#xE0; deux photons de tissu c&#xE9;r&#xE9;bral de vie et de la microscopie confocale des coupes de cerveau fixes afin d&#x26;#39;examiner les interactions entre les lymphocytes T CD8, les parasites, et les APC de souris infect&#xE9;es chroniquement. Nous avons constat&#xE9; que l&#x26;#39;Ag-lymphocytes T CD8 sp&#xE9;cifiques ont &#xE9;t&#xE9; recrut&#xE9;s pour les cerveaux de souris infect&#xE9;es et a persist&#xE9; l&#xE0;, en pr&#xE9;sence de l&#x26;#39;Ag de reconnaissance en cours. C&#xE9;r&#xE9;braux lymphocytes T CD8 ont &#xE9;tabli des contacts transitoires avec des structures de type granulome contenant des parasites et individuels CD11b (+) APC, y compris certains qui ne contiennent pas de parasites. En revanche, les cellules T ignor&#xE9; intactes Ag porteurs de kystes et de ne pas en contact avec les astrocytes ou des neurones, y compris les neurones contenant des parasites ou des kystes. Nos donn&#xE9;es repr&#xE9;sentent la premi&#xE8;re observation directe de la dynamique des cellules T-parasite interactions au sein des tissus vivants et offrent une nouvelle perspective pour comprendre les r&#xE9;ponses immunitaires &#xE0; des agents pathog&#xE8;nes persistants dans le cerveau.

Imagerie dynamique des cellules T-parasite interactions dans les cerveaux de souris chroniquement infect&#xE9;es par Toxoplasma gondii

Die intrazellul&auml;re Parasiten Toxoplasma Gondii kann anhaltende Infektionen im Gehirn eines S&auml;ugetier-Hosts, einer Pattsituation einrichten, bei der die aktive Beteiligung der Host CD8 T-Zellen, Infektion zu kontrollieren. CD8 T-Zellen sch&uuml;tzen im allgemeinen gegen intrazellul&auml;re Erreger durch lokale &Uuml;bermittlung der Effektor-Molek&uuml;le auf Anerkennung der spezifischen Erreger Ags auf einmarschierten Wirtszellen. Jedoch sind die Interaktionen zwischen CD8 T-Zellen, T. Gondii und APCs im Gehirn noch nicht untersucht worden. In dieser Studie haben wir einem Mausmodell Infektion verwendet, in Verbindung mit zwei-Photonen-Mikroskopie der lebenden Gehirn Gewebe und konfokale Mikroskopie der festen Gehirn Abschnitte, die Interaktionen zwischen CD8 T-Zellen, Parasiten und APCs von chronisch infizierten M&auml;usen zu pr&uuml;fen. Wir fanden diese Ag-spezifische CD8-T-Zellen wurden, die Gehirne von infizierten M&auml;usen rekrutiert und dort in Anwesenheit von laufenden Ag Anerkennung beibehalten. Zerebrale CD8 T-Zellen gemacht fl&uuml;chtige Kontakte mit Granulom-Strukturen mit Parasiten und individuelle CD11b(+)-APCs, darunter einige, die keine Parasiten enthielt. Im Gegensatz dazu T-Zellen ignoriert intakte Ag-Lager-Zysten und haben nicht an Astrozyten oder Neuronen, einschlie&szlig;lich Neuronen, Parasiten oder Zysten enthalten. Unsere Daten repr&auml;sentieren die erste direkte Beobachtung der Dynamik der T-Zell-Parasit-Interaktionen in lebendes Gewebe und bieten eine neue Perspektive f&uuml;r Verst&auml;ndnis Immunantworten gegen dauerhafte Krankheitserreger im Gehirn.

Dynamische Bildgebung der T-Zell-Parasit-Interaktionen in den Gehirnen von M&auml;usen, die chronisch mit Toxoplasma Gondii infiziert.

Il parassita intracellulare Toxoplasma gondii pu&ograve; stabilire infezione persistente nel cervello di un mammifero ospite, una situazione di stallo che coinvolge la partecipazione attiva delle cellule T CD8 host per controllare l&#39;infezione. Le cellule T CD8 generalmente proteggono contro patogeni intracellulari di recapito locale di molecole effettrici su riconoscimento di Ags su cellule ospiti invaso da organismi patogeni specifici. Tuttavia, le interazioni tra le cellule T CD8, T. gondii e APC nel cervello non sono ancora state esaminate. In questo studio abbiamo utilizzato un modello di infezione del mouse in combinazione con microscopia del due-fotone di vivere brain tissue e microscopia confocal di sezioni fisse del cervello per esaminare le interazioni tra le cellule T CD8, parassiti e APC da topi cronicamente infetti. Abbiamo trovato che le cellule T CD8 Ag-specifici sono state reclutate per il cervello dei topi infetti e persistenti ci in presenza di riconoscimento in corso di Ag. Le cellule T CD8 cerebrale fatto transitorie contatti con granuloma-come le strutture contenenti parassiti e con singoli CD11b(+) APC, compresi alcuni che non contengono parassiti. Al contrario, le cellule T ignorato intatte Ag-cuscinetto cisti e non ha fatto contatto astrociti o neuroni, tra cui i neuroni contenenti parassiti o cisti. I nostri dati rappresentano la prima osservazione diretta della dinamica delle interazioni cellula T-parassita all&#39;interno del tessuto vivente e forniscono una nuova prospettiva per la comprensione risposta immunitaria agli agenti patogeni persistenti nel cervello.

Imaging dinamico delle interazioni cellula T-parassita nel cervello di topi cronicamente infettati da Toxoplasma gondii.

&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;CD8 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306A;&#x53C2;&#x52A0;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3053;&#x3046;&#x7740;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x8133;&#x5185;&#x6301;&#x7D9A;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; CD8 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x4FB5;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E0A;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;AGS&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x6642;&#x306B;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5C40;&#x6240;&#x9001;&#x9054;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x8133;&#x5185;&#x306E;CD8 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x3001;&#x3068;APC&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CD8 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3001;&#x6162;&#x6027;&#x7684;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;APC&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x8133;&#x7D44;&#x7E54;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x56FA;&#x5B9A;&#x8133;&#x5207;&#x7247;&#x306E;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Ag-&#x7279;&#x7570;&#x7684;CD8 T&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8133;&#x306B;&#x88DC;&#x5145;&#x3057;&#x3001;&#x7D99;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x9280;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x305D;&#x3053;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8133;&#x306E;CD8 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8089;&#x82BD;&#x816B;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3068;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3082;&#x542B;&#x3081;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;CD11b&#x3092;&#xFF08;+&#xFF09;&#x306F;APC&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x63A5;&#x89E6;&#x3092;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;Ag&#x6709;&#x5229;&#x5B50;&#x56A2;&#x80DE;&#x3092;&#x7121;&#x8996;&#x3057;&#x3001;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3084;&#x56A2;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3084;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x3001;&#x9023;&#x7D61;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x7D44;&#x7E54;&#x5185;&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x529B;&#x5B66;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x8133;&#x5185;&#x306E;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x8996;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6162;&#x6027;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x611F;&#x67D3;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;

&#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; Toxoplasma gondii &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;, &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; CD8 T &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xCC38;&#xC5EC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xCE58;&#xC758; &#xB1CC;&#xC5D0; &#xC601;&#xAD6C;&#xC801;&#xC778; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC124;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. CD8 T &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD2B9;&#xC815; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; Ags &#xCE68;&#xACF5;&#xB41C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xB85C;&#xCEEC; &#xBC30;&#xB2EC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0; &#xC73C;&#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xBCF4;&#xD638;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, CD8 T &#xC138;&#xD3EC;, T. gondii APCs &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD574;&#xC57C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC544;&#xC9C1; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD568;&#xAED8; &#xC0DD;&#xD65C;&#xC758; 2 &#xAD11;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xBAA8;&#xB378; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xB294; &#xB1CC; &#xC870;&#xC9C1;&#xACFC; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC758; &#xB9CC;&#xC131; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; CD8 T &#xC138;&#xD3EC;, &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;, APCs &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC;&#xD560; &#xACE0;&#xC815;&#xB41C; &#xB1CC; &#xC139;&#xC158;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Ag &#xAD00;&#xB828; CD8 T &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC950;&#xC758; &#xB450;&#xB1CC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xCDA9; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xC790;&#xC138; &#xC778;&#xC2DD; &#xC874;&#xC7AC; &#xAC70;&#xAE30; &#xC720;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB300;&#xB1CC; CD8 T &#xC138;&#xD3EC; &#xC721;&#xC544; &#xC885; &#xAC19;&#xC740; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xC77C;&#xBD80;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xBCC4; CD11b(+) APCs &#xACFC;&#xB3C4; &#xC811;&#xCD09;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, T &#xC138;&#xD3EC; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; Ag &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; cysts&#xC744; &#xBB34;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;, &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xB610;&#xB294; cysts&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5F0;&#xB77D; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0DD;&#xD65C; &#xB0B4; T &#xC138;&#xD3EC;-&#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xCC30; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xACE0; &#xB450;&#xB1CC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC601;&#xAD6C; &#xC774;&#xD574; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;.

&#xB9CC;&#xC131; Toxoplasma gondii&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xB450;&#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; T &#xC138;&#xD3EC;-&#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5ED;&#xB3D9;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xC0C1;.

El intracelular par&#xE1;sito Toxoplasma gondii puede establecer una infecci&#xF3;n persistente en el cerebro de un hu&#xE9;sped mam&#xED;fero, un enfrentamiento que implica la participaci&#xF3;n activa de las c&#xE9;lulas T CD8 de acogida para controlar la infecci&#xF3;n. Las c&#xE9;lulas T CD8 en general, la protecci&#xF3;n contra pat&#xF3;genos intracelulares mediante la entrega local de mol&#xE9;culas efectoras en el reconocimiento del agente pat&#xF3;geno espec&#xED;fico de AGS en invadieron las c&#xE9;lulas hu&#xE9;sped. Sin embargo, las interacciones entre las c&#xE9;lulas T CD8 y T. gondii, y APCs en el cerebro todav&#xED;a no han sido examinados. En este estudio hemos utilizado un modelo de rat&#xF3;n de infecci&#xF3;n en relaci&#xF3;n con el microscopio de dos fotones de tejido cerebral de vida y de microscop&#xED;a confocal de las secciones del cerebro fijos para examinar las interacciones entre las c&#xE9;lulas T CD8, par&#xE1;sitos, y veh&#xED;culos blindados de los ratones infectados cr&#xF3;nicamente. Se encontr&#xF3; que el Ag-espec&#xED;ficas las c&#xE9;lulas T CD8 fueron reclutados para el cerebro de los ratones infectados y se mantuvo all&#xED; en la presencia de Ag en curso de reconocimiento. Cerebral las c&#xE9;lulas T CD8 se puso en contacto con transitorios, como el granuloma-estructuras que contienen par&#xE1;sitos y con cada uno de CD11b (+) veh&#xED;culos blindados, incluyendo algunas que no contiene par&#xE1;sitos. En contraste, las c&#xE9;lulas T intactas ignorado Ag portadores de quistes y no ponerse en contacto con los astrocitos o neuronas, incluyendo las neuronas que contienen par&#xE1;sitos o quistes. Nuestros datos representan la primera observaci&#xF3;n directa de la din&#xE1;mica de la T de par&#xE1;sitos dentro de las interacciones c&#xE9;lula-tejido vivo y ofrecer una nueva perspectiva para la comprensi&#xF3;n de la respuesta inmune a pat&#xF3;genos persistentes en el cerebro.

Imagen din&#xE1;mica de T par&#xE1;sito interacciones c&#xE9;lula-en los cerebros de ratones infectados cr&#xF3;nicamente con Toxoplasma gondii

&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x80F8;&#x817A;&#x88AB;&#x7B5B;&#x67E5; self-reactivity &#x4E4B;&#x524D;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x9000;&#x51FA;&#x80F8;&#x817A;&#x3001; &#x4F46;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5982;&#x4F55;&#x626B;&#x63CF;&#x81EA;&#x6211;&#x6297;&#x539F;&#x9AD3;&#x8D28;&#x76EE;&#x524D;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x80F8;&#x817A;&#x9AD3;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC5;&#x901F;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x9891;&#x7E41;&#x3001; &#x77AC;&#x6001;&#x63A5;&#x89E6;&#x3002;&#x5B58;&#x5728;&#x6D88;&#x6781;&#x9009;&#x62E9;&#x914D;&#x4F53;&#x4E0B;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CF;&#x7F13;&#x3001; &#x6210;&#x4E3A;&#x5C40;&#x9650;&#x4E8E;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x76F4;&#x5F84;&#x7EA6; 30 microm &#x548C;&#x4E0E;&#x5468;&#x56F4;&#x9694;&#x79BB;&#x533A;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x63A5;&#x89E6;&#x3002;&#x4E09;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E00;&#x7684;&#x591A;&#x514B;&#x9686;&#x80F8;&#x817A;&#x9AD3;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E5F;&#x8868;&#x660E;&#x5BC6;&#x95ED;&#x3001; &#x901F;&#x5EA6;&#x8F83;&#x6162;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BF9;&#x5E94;&#x4E8E; autoreactive &#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8BB8;&#x591A; autoreactive &#x80F8;&#x817A;&#x505A;&#x4E0D;&#x63A5;&#x53D7;&#x7ACB;&#x5373;&#x902E;&#x6355;&#x548C;&#x540E;&#x9047;&#x5230;&#x6D88;&#x6781;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x6B7B;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x800C;&#x5176;&#x4F59;&#x9AD3;&#x8D28;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x91C7;&#x53D6;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#x8BA1;&#x5212;&#x3002;

&#x6D88;&#x6781;&#x9009;&#x62E9;&#x5BF9;&#x80F8;&#x817A;&#x9AD3;&#x8D28;&#x4E2D;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Developing thymocytes are screened for self-reactivity before they exit the thymus, but how thymocytes scan the medulla for self antigens is unclear. Using two-photon microscopy, we observed that medullary thymocytes migrated rapidly and made frequent, transient contacts with dendritic cells. In the presence of a negative selecting ligand, thymocytes slowed, became confined to areas of approximately 30 microm in diameter and had increased contact with dendritic cells surrounding confinement zones. One third of polyclonal medullary thymocytes also showed confined, slower migration and may correspond to autoreactive thymocytes. Our data suggest that many autoreactive thymocytes do not undergo immediate arrest and death after encountering a negative selecting ligand but instead adopt an altered migration program while remaining in the medullary microenvironment.

The impact of negative selection on thymocyte migration in the medulla.

Thymocytes en d&#xE9;veloppement sont projet&#xE9;s pour l&#x26;#39;auto-r&#xE9;activit&#xE9; avant leur sortie du thymus, mais comment thymocytes num&#xE9;riser la moelle pour les antig&#xE8;nes du soi n&#x26;#39;est pas claire. En utilisant la microscopie &#xE0; deux photons, nous avons observ&#xE9; que les thymocytes m&#xE9;dullaires migr&#xE9; rapidement et fait des contacts fr&#xE9;quents et transitoires avec les cellules dendritiques. En pr&#xE9;sence d&#x26;#39;un ligand n&#xE9;gative s&#xE9;lection, thymocytes ralenti, est devenu confin&#xE9;e &#xE0; des zones d&#x26;#39;environ 30 microm de diam&#xE8;tre et avait augment&#xE9; de contact avec les cellules dendritiques autour des zones de confinement. Un tiers des thymocytes m&#xE9;dullaires polyclonaux a &#xE9;galement montr&#xE9; confin&#xE9;, plus lente migration et peut correspondre &#xE0; thymocytes autor&#xE9;actifs. Nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que de nombreux thymocytes autor&#xE9;actifs ne subissent pas l&#x26;#39;arrestation imm&#xE9;diate et la mort apr&#xE8;s avoir rencontr&#xE9; un ligand n&#xE9;gative s&#xE9;lection, mais au lieu d&#x26;#39;adopter un programme de migration alt&#xE9;r&#xE9;, tout en restant dans le microenvironnement m&#xE9;dullaire.

L&#x26;#39;impact de la s&#xE9;lection n&#xE9;gative sur les migrations thymocytes dans la moelle

Entwicklungsl&auml;ndern Thymozyten sind auf Self-reactivity untersucht, bevor sie Thymus verlassen, aber es unklar, wie Thymozyten Scannen, die Medulla f&uuml;r selbst-Antigene ist. Mit zwei-Photonen-Mikroskopie, beobachteten wir, dass medull&auml;re Thymozyten schnell migriert und h&auml;ufige, fl&uuml;chtige mit dendritischen Zellen Kontakte. In der Gegenwart eine negative Auswahl Ligand Thymozyten verlangsamt, wurde auf Bereiche von etwa 30 Microm Durchmesser beschr&auml;nkt und hatte Kontakt mit dendritischen Zellen umgebenden Beengtheit Zonen erh&ouml;ht. Ein Drittel der polyklonalen medull&auml;re Thymozyten auch zeigte beengten und langsamer Migration und autoreaktive Thymozyten entsprechen kann. Unsere Daten zeigen, dass viele autoreaktive Thymozyten nicht zu unterziehen, sofortige Verhaftung und Tod nach der Begegnung eine negative Auswahl Ligand aber stattdessen eine ver&auml;nderte Migrationsprogramm bleiben Sie in der medull&auml;re Mikromilieu erlassen.

Die Auswirkungen der negativen Selektion auf Thymocyte Migration in der Medulla.

Timociti in via di sviluppo sono sottoposti a screening per self-reactivity prima uscita del timo, ma come timociti scansione il midollo per gli antigeni self non &egrave; chiaro. Utilizzando la microscopia del due-fotone, si osserv&ograve; che timociti midollari migrarono rapidamente ed transitori, frequenti contatti con le cellule dendritiche. In presenza di un ligando selezionato negativo, timociti rallentarono, divennero confinati alle aree di circa 30 microm di diametro e avevano aumentato contatto con cellule dendritiche circostanti zone di confinamento. Un terzo dei timociti midollari policlonali anche mostrato migrazione confinati, pi&ugrave; lento e pu&ograve; corrispondere a timociti autoreattivi. I nostri dati suggeriscono che molti timociti autoreattivi non subire l&#39;arresto immediato e la morte dopo aver incontrato un ligando selezionato negativo ma invece adottare un programma di migrazione alterati pur rimanendo nel microambiente midollare.

L&#39;impatto della selezione negativa sulla migrazione timocita nel midollo.

&#x958B;&#x767A;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;&#x80F8;&#x817A;&#x3092;&#x7D42;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x6297;&#x539F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x9AC4;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x3001;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x3001;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x63A5;&#x89E6;&#x3092;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8CA0;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x920D;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x76F4;&#x5F84;&#x7D04;30&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;3&#x5206;&#x306E;1&#x306B;&#x3082;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x4F4E;&#x901F;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x8CA0;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306B;&#x906D;&#x9047;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x5373;&#x6642;&#x505C;&#x6B62;&#x3068;&#x6B7B;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x4E2D;&#x306B;&#x6B8B;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x9593;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#xB7;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9AC4;&#x8CEA;&#x306E;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x8CA0;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;

&#xAC1C;&#xBC1C; thymocytes thymus, &#xC885;&#xB8CC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; thymocytes &#xC790;&#xAE30; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8; &#xC218;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xBD84;&#xBA85; &#xC804;&#xC5D0; self-reactivity&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xC601; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xACE8; &#xC218; thymocytes &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC790;&#xC8FC;, &#xACFC;&#xB3C4; &#xC811;&#xCD09; &#xD588;&#xB2E4; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC120;&#xD0DD; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC874;&#xC7AC; thymocytes &#xB454;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C1;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D; 30 microm&#xC758; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xAD6D;&#xD55C; &#xB41C; &#xAC10; &#xAE08; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2FC; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC811;&#xCD09;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. Polyclonal &#xACE8; &#xC218; thymocytes&#xC758; 1/3&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xD55C;&#xC815; &#xB41C;, &#xB354; &#xB290;&#xB9AC;&#xAC8C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC8FC;&#xBA70; autoreactive thymocytes &#xC77C;&#xCE58; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB9CE;&#xC740; autoreactive thymocytes &#xC989;&#xC2DC; &#xCCB4;&#xD3EC;&#xC640; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC120;&#xD0DD; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD55C; &#xD6C4; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744; &#xBC1B;&#xC544;&#xC57C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB300;&#xC2E0; &#xACE8; &#xC218; microenvironment&#xC5D0; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC774;&#xBBFC; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xCC44;&#xD0DD; &#xD55C;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBAA8; &#xC218;&#xC5D0; thymocyte&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC120;&#xD0DD;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;.

Timocitos en desarrollo son examinados para detectar la reactividad de la auto-antes de que salga el timo, pero &#xBF;c&#xF3;mo timocitos analizar la m&#xE9;dula de ant&#xED;genos propios no est&#xE1; claro. Usando microscop&#xED;a de dos fotones, se observ&#xF3; que los timocitos medulares migrado r&#xE1;pidamente e hizo contactos frecuentes y transitorios con las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas. En presencia de un ligando negativo seleccionar, timocitos ralentizado, se convirti&#xF3; en confinada a las &#xE1;reas de aproximadamente 30 micras de di&#xE1;metro y se hab&#xED;a incrementado contacto con las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas que rodean las zonas de confinamiento. Una tercera de timocitos medulares policlonales tambi&#xE9;n mostr&#xF3; confinado, la migraci&#xF3;n m&#xE1;s lenta y puede corresponder a los timocitos autorreactivos. Nuestros datos sugieren que muchos timocitos autorreactivos no se someten a la detenci&#xF3;n inmediata y la muerte despu&#xE9;s de encontrarse con un ligando de la selecci&#xF3;n negativa, pero en lugar de adoptar un programa de migraci&#xF3;n alterada mientras permanecen en el microambiente medular.

El impacto de la selecci&#xF3;n negativa sobre Migraci&#xF3;n Antitimocito en la m&#xE9;dula

&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6B63;&#x51C6;&#x5907;&#x518D;&#x66DD;&#x5149;&#x540E;&#x8FC5;&#x901F;&#x4F5C;&#x51FA;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x75C5;&#x539F; &#xFF1B; &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x4E2D;&#x5FAA;&#x73AF;&#x8BB0;&#x5FC6; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x672A;&#x77E5;&#x8BB0;&#x5FC6; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x53EC;&#x56DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x611F;&#x67D3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x539F;&#x751F;&#x52A8;&#x7269;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#xFF0C;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x4E00;&#x8D77;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x4E4B;&#x540E;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#xFF0C;&#x8BB0;&#x5FC6; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x66F4;&#x5FEB;&#x6BD4;&#x5929;&#x771F; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3001; relocalized &#x5411;&#x5305;&#x819C;&#x4E0B;&#x7AA6; (SCS) &#x9644;&#x8FD1;&#x5165;&#x4FB5;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x548C;&#x4ECE;&#x4E8B;&#x4E0E;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5165;&#x4FB5;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7531;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x8F6C;&#x79FB;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4ECE;&#x53D1;&#x751F;&#x5230; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5165;&#x4FB5;&#x7387;&#x589E;&#x52A0;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x671F;&#x95F4;&#x53EC;&#x56DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x98A0;&#x8986;&#x5BF9;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x548C;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x4E2D;&#x7684;&#x53EC;&#x56DE;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x54CD;&#x5E94;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

Memory T cells circulate through lymph nodes where they are poised to respond rapidly upon re-exposure to a pathogen; however, the dynamics of memory T cell, antigen-presenting cell, and pathogen interactions during recall responses are largely unknown. We used a mouse model of infection with the intracellular protozoan parasite, Toxoplasma gondii, in conjunction with two-photon microscopy, to address this question. After challenge, memory T cells migrated more rapidly than naive T cells, relocalized toward the subcapsular sinus (SCS) near invaded macrophages, and engaged in prolonged interactions with infected cells. Parasite invasion of T cells occurred by direct transfer of the parasite from the target cell into the T cell and corresponded to an antigen-specific increase in the rate of T cell invasion. Our results provide insight into cellular interactions during recall responses and suggest a mechanism of pathogen subversion of the immune response.

Dynamics of T cell, antigen-presenting cell, and pathogen interactions during recall responses in the lymph node.

Les cellules T m&#xE9;moire circulent &#xE0; travers les ganglions lymphatiques o&#xF9; ils sont pr&#xEA;ts &#xE0; r&#xE9;pondre rapidement &#xE0; la r&#xE9;-exposition &#xE0; un agent pathog&#xE8;ne, mais la dynamique de la m&#xE9;moire des lymphocytes T, cellules pr&#xE9;sentatrices d&#x26;#39;antig&#xE8;ne, et les interactions des agents pathog&#xE8;nes au cours des r&#xE9;ponses de rappel sont largement inconnues. Nous avons utilis&#xE9; un mod&#xE8;le murin de l&#x26;#39;infection par le parasite protozoaire intracellulaire, Toxoplasma gondii, en conjonction avec la microscopie biphotonique, &#xE0; r&#xE9;pondre &#xE0; cette question. Apr&#xE8;s d&#xE9;fi, la m&#xE9;moire des lymphocytes T migr&#xE9; plus rapidement que les lymphocytes T na&#xEF;fs, les relocaliser vers le sinus sous-capsulaire (SCS), pr&#xE8;s de macrophages envahis, et engag&#xE9;s dans des interactions prolong&#xE9;es avec des cellules infect&#xE9;es. L&#x26;#39;invasion des parasites de cellules T produite par transfert direct du parasite de la cellule cible dans la cellule T et correspondait &#xE0; une augmentation sp&#xE9;cifique de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne dans le taux de l&#x26;#39;invasion des cellules T. Nos r&#xE9;sultats permettent de mieux comprendre les interactions cellulaires au cours des r&#xE9;ponses de rappel et de proposer un m&#xE9;canisme de subversion agent pathog&#xE8;ne de la r&#xE9;ponse immunitaire.

Dynamique de la cellule T, cellule pr&#xE9;sentatrice d&#x26;#39;antig&#xE8;ne, et les interactions des agents pathog&#xE8;nes au cours des interventions de rappel dans le ganglion lymphatique

T Ged&auml;chtniszellen zirkulieren Lymphknoten, wo sie bereit sind, schnell auf erneute Exposition auf ein Pathogen zu reagieren; die Dynamik der Speicherzelle T, Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen und Krankheitserreger Interaktionen w&auml;hrend R&uuml;ckruf Antworten sind jedoch weitgehend unbekannt. Wir haben ein Mausmodell der Infektion mit dem intrazellul&auml;re Protozoen-Parasiten Toxoplasma Gondii, in Verbindung mit zwei-Photonen-Mikroskopie, mit dieser Frage besch&auml;ftigen. Nach Herausforderung T-Ged&auml;chtniszellen migriert schneller als die naiven T-Zellen, relocalized in Richtung der subkapsul&auml;re Sinus (SCS) in der N&auml;he &uuml;berfallen Makrophagen und l&auml;ngere Interaktionen mit infizierten Zellen beteiligt. Parasit-Invasion von T-Zellen erfolgte durch direkte &Uuml;bertragung des Parasiten von der Zielzelle in die T-Zelle und entsprach einer Antigen-spezifischen Anstieg der T-Zell-Invasion. Unsere Ergebnisse geben einen Einblick in die zellul&auml;ren Interaktionen w&auml;hrend R&uuml;ckruf Antworten und schlagen einen Mechanismus der Erreger Subversion der Immunantwort.

Dynamik der T-Zelle, Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen und Krankheitserreger Interaktionen w&auml;hrend R&uuml;ckruf Antworten in den Lymphknoten.

Le cellule T memoria circolano attraverso i linfonodi dove essi sono pronti a rispondere velocemente su re-esposizione a un agente patogeno; Tuttavia, le dinamiche di memoria T cell, cellule presentanti l&#39;antigene e interazioni agente patogeno durante le risposte di richiamo sono in gran parte sconosciute. Abbiamo utilizzato un modello murino di infezione con il protozoo parassita intracellulare, Toxoplasma gondii, in collaborazione con microscopia del due-fotone, per affrontare questa questione. Dopo la sfida, le cellule memoria T migrarono pi&ugrave; rapidamente le cellule T naive, relocalized verso il seno sottocapsulare (SCS) vicino macrofagi invasi e impegnati in prolungati interazioni con le cellule infette. Invasione parassita delle cellule T si &egrave; verificato dal trasferimento diretto del parassita dalla cellula bersaglio nella cellula T ed ha corrisposto ad un aumento del tasso di invasione delle cellule T antigene-specifiche. I nostri risultati forniscono informazioni nelle interazioni cellulari durante le risposte di richiamo e suggeriscono un meccanismo di sovversione patogeno della risposta immunitaria.

Dinamica delle cellule T, cellule presentanti l&#39;antigene e interazioni agente patogeno durante le risposte di richiamo nel linfonodo.

&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30FC;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x518D;&#x66DD;&#x9732;&#x6642;&#x306B;&#x8FC5;&#x901F;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x614B;&#x52E2;&#x3092;&#x6574;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x3092;&#x901A;&#x3063;&#x3066;&#x5FAA;&#x74B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6642;&#x306E;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30FC;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306A;&#x70B9;&#x304C;&#x591A;&#x3044;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x539F;&#x866B;&#x3001;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x5F8C;&#x3001;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30FC;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x4FB5;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x88AB;&#x819C;&#x6D1E;&#xFF08;SCS&#xFF09;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;relocalized&#x3068;&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x5F93;&#x4E8B;&#x3057;&#x3001;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x8EE2;&#x9001;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x7387;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x8EE2;&#x8986;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

T&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x306E;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x4E2D;&#x306B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;

&#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;; &#xC7AC; &#xB178;&#xCD9C; &#xC2DC; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xB300;&#xC751; &#xD0DC;&#xC138;&#xB294; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC21C;&#xD658; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; T &#xC140;, &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB9AC;&#xCF5C; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC5ED;&#xD559; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;.&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; Toxoplasma gondii &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; protozoan &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xACFC; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3C4;&#xC804;, &#xD6C4; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xC774;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; relocalized subcapsular &#xBD80; &#xBE44; &#xB3D9; (SCS) &#xCE68;&#xACF5;&#xB41C; &#xB300; &#xADFC;&#xCC98; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC885;&#xC0AC;. T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xCE68;&#xC785; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558; &#xC5EC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD55C;&#xACFC; T &#xC138;&#xD3EC; &#xCE68;&#xACF5; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC99D;&#xAC00;&#xC5D0; &#xB300;&#xC751;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9AC;&#xCF5C; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xD30C;&#xAD34; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;.

T &#xC138;&#xD3EC;, &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xB9BC;&#xD504; &#xB178;&#xB4DC;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5; &#xD68C;&#xC218; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;.

C&#xE9;lulas T de memoria circular a trav&#xE9;s de los ganglios linf&#xE1;ticos, donde est&#xE1;n a punto de responder con rapidez en la re-exposici&#xF3;n a un pat&#xF3;geno, sin embargo, la din&#xE1;mica de la memoria de las c&#xE9;lulas T, c&#xE9;lulas presentadoras de ant&#xED;geno, y las interacciones pat&#xF3;geno durante recordar las respuestas son en gran parte desconocido. Se utiliz&#xF3; un modelo de rat&#xF3;n de infecci&#xF3;n por el par&#xE1;sito protozoario intracelular Toxoplasma gondii, en relaci&#xF3;n con el microscopio de dos fotones, para abordar esta cuesti&#xF3;n. Despu&#xE9;s de la exposici&#xF3;n, c&#xE9;lulas T de memoria migrado m&#xE1;s r&#xE1;pidamente que las c&#xE9;lulas T ingenuas y relocalizado hacia el seno subcapsular (SCS), cerca de los macr&#xF3;fagos invadido, y particip&#xF3; en las interacciones prolongadas con las c&#xE9;lulas infectadas. Invasi&#xF3;n del par&#xE1;sito de las c&#xE9;lulas T se produjo por transferencia directa del par&#xE1;sito de la c&#xE9;lula diana en la c&#xE9;lula T y correspondi&#xF3; a un aumento de ant&#xED;geno espec&#xED;fico de la tasa de invasi&#xF3;n de las c&#xE9;lulas T. Nuestros resultados proporcionan una visi&#xF3;n de las interacciones celulares durante recordar las respuestas y proponer un mecanismo de subversi&#xF3;n agente pat&#xF3;geno de la respuesta inmune.

Din&#xE1;mica de las c&#xE9;lulas T, c&#xE9;lula presentadora de ant&#xED;geno, y las interacciones pat&#xF3;geno durante recordar las respuestas en el ganglio linf&#xE1;tico

&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x8FD0;&#x52A8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6781;&#x6027;&#x7684;&#x8FF9;&#x8C61;&#xFF0C;&#x4F46;&#x9700;&#x8981;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x548C;&#x91CF;&#x5316;&#x5728;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x534A;&#x81EA;&#x52A8;&#x7684;&#x505A;&#x6CD5;&#x6765;&#x91CF;&#x5316;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4E3A;&#x6570;&#x4EE5;&#x767E;&#x8BA1;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5B8C;&#x597D; retrovirally &#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x8367;&#x5149;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x5EF6;&#x65F6;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x5B8C;&#x597D;&#x80F8;&#x817A;&#x5C0F;&#x53F6;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-PKC&zeta;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6781;&#x6027;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x548C; LAT-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5177;&#x6709;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BB9;&#x6613;&#x5730;&#x9002;&#x5E94;&#x5176;&#x4ED6;&#x8367;&#x5149;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;

&#x91CF;&#x5316;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5728;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x3002;

The movement of proteins within cells can provide dynamic indications of cell signaling and cell polarity, but methods are needed to track and quantify subcellular protein movement within tissue environments. Here we present a semiautomated approach to quantify subcellular protein location for hundreds of migrating cells within intact living tissue using retrovirally expressed fluorescent fusion proteins and time-lapse two-photon microscopy of intact thymic lobes. We have validated the method using GFP-PKCÎ¶, a marker for cell polarity, and LAT-GFP, a marker for T-cell receptor signaling, and have related the asymmetric distribution of these proteins to the direction and speed of cell migration. These approaches could be readily adapted to other fluorescent fusion proteins, tissues and biological questions.

Quantifying subcellular distribution of fluorescent fusion proteins in cells migrating within tissues.

Le mouvement des prot&#xE9;ines dans les cellules peuvent fournir des indications dynamiques de signalisation cellulaire et de la polarit&#xE9; cellulaire, mais les m&#xE9;thodes sont n&#xE9;cessaires pour suivre et de quantifier le mouvement des prot&#xE9;ines subcellulaire dans des environnements de tissus. Ici, nous pr&#xE9;sentons une approche semi-automatique de quantifier la prot&#xE9;ine emplacement subcellulaire des centaines de cellules qui migrent dans le tissu vivant intact en utilisant un retrovirus exprim&#xE9;es prot&#xE9;ines de fusion fluorescentes et time-lapse microscopie &#xE0; deux photons des lobes thymiques intactes. Nous avons valid&#xE9; la m&#xE9;thode utilisant la GFP-PKC&#x3B6;, un marqueur de la polarit&#xE9; cellulaire, et LAT-GFP, un marqueur de signalisation du r&#xE9;cepteur des cellules T, et ont reli&#xE9; la distribution asym&#xE9;trique de ces prot&#xE9;ines &#xE0; la direction et la vitesse de la migration cellulaire. Ces approches pourraient &#xEA;tre facilement adapt&#xE9; &#xE0; d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines de fusion fluorescentes, des tissus et des questions biologiques.

Quantifier la distribution subcellulaire des prot&#xE9;ines de fusion fluorescentes dans les cellules migrent &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;rieur des tissus

Die Bewegung der Proteine innerhalb der Zellen kann dynamische Angaben von Zelle signalisieren und Zellpolarit&auml;t, aber Methoden sind notwendig, um zu verfolgen und subzellulare Protein Bewegung im Gewebe-Umgebungen zu quantifizieren. Hier pr&auml;sentieren wir Ihnen einen semiautomated Ansatz zur Quantifizierung der subzellul&auml;ren Protein Lage f&uuml;r Hunderte von Migration intakt innerhalb von Zellen fluoreszierende Schmelzverfahrensproteine und Zeitraffer zwei-Photonen-Mikroskopie intakt Thymom Lappen lebendes Gewebe mit retrovirally ausgedr&uuml;ckt. Wir haben die Methode mit der GFP-PKC&zeta;, ein Marker f&uuml;r die Zellpolarit&auml;t, und LAT-GFP, ein Marker f&uuml;r die T-Zell-Rezeptor Signalgebung, validiert und haben mit die asymmetrische Verteilung dieser Proteine, die Richtung und Geschwindigkeit der Zellmigration Bezug. Diese Ans&auml;tze k&ouml;nnten andere fluoreszierende Fusionsproteine, Gewebe und biologische Fragen leicht angepasst werden.

Quantifizierung der subzellul&auml;ren Verteilung von fluoreszierenden Schmelzverfahrensproteine in den Zellen im Gewebe migrieren.

Il movimento delle proteine all&#39;interno delle cellule pu&ograve; fornire indicazioni dinamiche di segnalazione delle cellule e la polarit&agrave; delle cellule, ma i metodi sono necessari per monitorare e quantificare il movimento sottocellulare della proteina all&#39;interno di ambienti di tessuto. Qui di seguito presentiamo un approccio semiautomatico per quantificare la posizione sottocellulare della proteina per centinaia di migrazione di cellule all&#39;interno intatto tessuto vivente usando retrovirally espresso proteine di fusione fluorescenti e time-lapse microscopia del due-fotone di lobi timici intatti. Ci hanno convalidato il metodo usando GFP-PKC&zeta;, un marker per la polarit&agrave; delle cellule e LAT-GFP, un marker per T-cell receptor signaling ed hanno correlato la distribuzione asimmetrica di queste proteine per la direzione e la velocit&agrave; di migrazione cellulare. Questi approcci potrebbero essere facilmente adattati ad altre proteine di fusione fluorescenti, tessuti e questioni biologiche.

Quantificare la distribuzione subcellulare delle proteine di fusione fluorescenti in cellule di migrare all&#39;interno dei tessuti.

&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x6975;&#x6027;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x8868;&#x793A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3057;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x6642;&#x9593;&#x7D4C;&#x904E;&#x3092;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x80F8;&#x817A;&#x8449;&#x306E;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x7D44;&#x7E54;&#x5185;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x4F55;&#x767E;&#x3082;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x534A;&#x81EA;&#x52D5;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6975;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;GFP-PKC&#x3B6;&#x3001;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;LAT-GFP&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x65B9;&#x5411;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x5206;&#x5E03;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x3084;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x8CEA;&#x554F;&#x306B;&#x9069;&#x5408;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x7D44;&#x7E54;&#x5185;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;

&#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB3D9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC140; &#xADF9;&#xC131;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xCD94;&#xC801; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; subcellular &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC870;&#xC9C1; &#xD658;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC218;&#xBC31; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB0B4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; subcellular &#xC704;&#xCE58; &#xCC99;&#xB3C4;&#xB97C; semiautomated &#xBC29;&#xC2DD; retrovirally&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0DD;&#xD65C; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xAD11; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; thymic &#xB3CC;&#xCD9C;&#xBD80;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; 2 &#xAD11;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;. GFP-PKC&zeta;, &#xC138;&#xD3EC; &#xADF9;&#xC131; &#xD45C;&#xC2DD; &#xACE0; &#xC704;&#xB3C4;-GFP, T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD574;&#xC57C; &#xD558; &#xACE0; &#xBC29;&#xD5A5;&#xACFC; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xBD84;&#xD3EC; &#xAD00;&#xB828;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xB2E4;&#xB978; &#xD615;&#xAD11; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC870;&#xC9C1; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC744; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC870;&#xC9C1; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xC140;&#xC5D0; &#xD615;&#xAD11; &#xC735;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; subcellular &#xBD84;&#xD3EC; &#xCE21;&#xC815;.

El movimiento de las prote&#xED;nas dentro de las c&#xE9;lulas puede proporcionar indicaciones din&#xE1;micas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n celular y la polaridad celular, pero los m&#xE9;todos son necesarios para rastrear y cuantificar el movimiento subcelular de prote&#xED;nas en los entornos de los tejidos. Aqu&#xED; presentamos un enfoque semiautom&#xE1;tico para cuantificar la ubicaci&#xF3;n subcelular de prote&#xED;nas de cientos de c&#xE9;lulas que migran dentro de los tejidos vivos intactos utilizando prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n expresadas retroviralmente fluorescentes y time-lapse microscop&#xED;a de dos fotones de la intactos los l&#xF3;bulos t&#xED;micos. Hemos validado el m&#xE9;todo que utiliza las buenas pr&#xE1;cticas agrarias PKC&#x3B6;, un marcador de la polaridad celular, y LAT-GFP, un marcador para la se&#xF1;alizaci&#xF3;n del receptor de c&#xE9;lulas T, y se han relacionado con la distribuci&#xF3;n asim&#xE9;trica de estas prote&#xED;nas a la direcci&#xF3;n y la velocidad de la migraci&#xF3;n celular. Estos enfoques podr&#xED;a ser f&#xE1;cilmente adaptado a otras prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n fluorescentes, tejidos biol&#xF3;gicos y preguntas.

La cuantificaci&#xF3;n de la distribuci&#xF3;n subcelular de las prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n fluorescentes en las c&#xE9;lulas que migran dentro de los tejidos

&#x867D;&#x7136;&#x7814;&#x7A76;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x548C;&#x5176;&#x51B3;&#x8BAE;&#x5B58;&#x5728;&#x8FC7;&#x591A;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5F88;&#x5C11;&#x4F7F;&#x4FDD;&#x6301;&#x5065;&#x5EB7;&#xFF0C;&#x5C31;&#x5730;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x90E8;&#x5206;&#x5DE5;&#x5177;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x6D3B;&#x5668;&#x5B98;&#x6216;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x4F9D;&#x9760;&#x516C;&#x5F00;&#x7ED3;&#x679C; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#xFF09; &#x5728;&#x5176;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x4EBA;&#x5458;&#x4E00;&#x7EA7;&#x7684;&#x5FAE;&#x5999;&#x4E4B;&#x5904;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x662F;&#x4E00;&#x5957;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x5408;&#x5E76;&#xFF0C;&#x4F7F; 3D &#x548C;&#x65F6;&#x6001;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x548C;&#x91CF;&#x5316;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5904;&#x7406;&#x6216;&#x5939;&#x5C42;&#x52A8;&#x8109;&#x7624;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x89D2;&#x819C;&#x5185;&#x7684;&#x83CC;&#x7FA4;&#x5206;&#x5E03;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x8868;&#x660E; MyD88 &#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x4E3A; Toll-Like &#x53D7;&#x4F53; (&#x5355;&#x53CD;) &#x4E2D;&#x592E;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5728;&#x4FDD;&#x62A4;&#x591A;&#x5C42;&#x4E0A;&#x7684;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x548C;&#x904D;&#x5386;&#x53CD;&#x5BF9;&#x673A;&#x4F1A;&#x4E3B;&#x4E49;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x75C5;&#x539F;&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x3002;

&#x672A;&#x52A0;&#x5DE5;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x9632;&#x5FA1;&#x7EC6;&#x83CC;&#x9ECF;&#x9644;&#x548C;&#x540E;&#x7EED;&#x904D;&#x5386;&#x9700;&#x8981; MyD88&#x3002;

While a plethora of in vivo models exist for studying infectious disease and its resolution, few enable factors involved in the maintenance of health to be studied in situ. This is due in part to a paucity of tools for studying subtleties of bacterial-host interactions at a cellular level within live organs or tissues, requiring investigators to rely on overt outcomes (e.g. pathology) in their research. Here, a suite of imaging technologies were combined to enable 3D and temporal subcellular localization and quantification of bacterial distribution within the murine cornea without the need for tissue processing or dissection. These methods were then used to demonstrate the importance of MyD88, a central adaptor protein for Toll-Like Receptor (TLR) mediated signaling, in protecting a multilayered epithelium against both adhesion and traversal by the opportunistic bacterial pathogen Pseudomonas aeruginosa ex vivo and in vivo.

3D quantitative imaging of unprocessed live tissue reveals epithelial defense against bacterial adhesion and subsequent traversal requires MyD88.

Bien que d&#x26;#39;une pl&#xE9;thore de mod&#xE8;les in vivo existent pour &#xE9;tudier les maladies infectieuses et sa r&#xE9;solution, peu de facteurs permettent impliqu&#xE9;s dans le maintien de la sant&#xE9; &#xE0; &#xEA;tre &#xE9;tudi&#xE9; in situ. Cela est d&#xFB; en partie &#xE0; un manque d&#x26;#39;outils pour &#xE9;tudier les subtilit&#xE9;s de bact&#xE9;ries interactions h&#xF4;te-&#xE0; un niveau cellulaire au sein des organes ou des tissus vivants, ce qui n&#xE9;cessite de s&#x26;#39;appuyer sur des enqu&#xEA;teurs r&#xE9;sultats manifestes (par exemple la pathologie) dans leurs recherches. Ici, une suite de technologies d&#x26;#39;imagerie ont &#xE9;t&#xE9; combin&#xE9;s pour permettre &#xE0; la 3D et temporelle localisation subcellulaire et la quantification de la distribution des bact&#xE9;ries dans la corn&#xE9;e de souris sans avoir besoin de traitement des tissus ou de dissection. Ces m&#xE9;thodes ont ensuite &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour d&#xE9;montrer l&#x26;#39;importance de MyD88, une prot&#xE9;ine adaptatrice central pour Toll-Like Receptor (TLR) de la signalisation induite, dans la protection d&#x26;#39;un &#xE9;pith&#xE9;lium multicouche &#xE0; la fois contre l&#x26;#39;adh&#xE9;sion et la travers&#xE9;e par la bact&#xE9;rie pathog&#xE8;ne opportuniste Pseudomonas aeruginosa ex vivo et in vivo.

Imagerie 3D quantitative des tissus vivants &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat brut r&#xE9;v&#xE8;le la D&#xE9;fense &#xE9;pith&#xE9;liale contre l&#x26;#39;adh&#xE9;sion bact&#xE9;rienne et la suite Traversal N&#xE9;cessite MyD88

W&auml;hrend eine Vielzahl von in-vivo-Modelle vorhanden f&uuml;r die Untersuchung von Infektionskrankheiten und ihre L&ouml;sung, erm&ouml;glichen nur wenige Faktoren, die bei der Aufrechterhaltung der Gesundheit in-situ untersucht werden. Dies ist zum Teil auf einen Mangel an Werkzeugen f&uuml;r das Studium der Feinheiten der bakteriell-Host Interaktionen auf Zellebene im Leben Organen oder Geweben, die Ermittler in ihrer Forschung auf offene Ergebnisse (z. B. Pathologie) setzen. Hier eine Reihe von imaging-Technologien wurden kombiniert, um 3D und zeitliche subzellulare Lokalisation und Quantifizierung der bakteriellen Verteilung innerhalb der murinen Hornhaut ohne die Notwendigkeit f&uuml;r Gewebe Verarbeitung oder Dissektion zu aktivieren. Diese Methoden wurden dann verwendet, um die Bedeutung von MyD88 demonstrieren, eine zentrale Adapterprotein f&uuml;r Toll-Like-Rezeptor (TLR) vermittelte signalisieren, in eine mehrschichtige Epithel gegen Adh&auml;sion und Durchlauf durch die opportunistische bakterielle Erreger Pseudomonas Aeruginosa ex-Vivo- und in-vivo zu sch&uuml;tzen.

Quantitative 3D-Bildverarbeitung von unverarbeiteten Leben Gewebe zeigt, dass epitheliale Verteidigung gegen bakterielle Adh&auml;sion und nachfolgende Traversal MyD88 erfordert.

Article	Year
Lipid products of PI(3)Ks maintain persistent cell polarity and directed motility in neutrophils. Nature cell biology\| PubMed ID: 12080345	2002
New pollen-specific receptor kinases identified in tomato, maize and Arabidopsis: the tomato kinases show overlapping but distinct localization patterns on pollen tubes. Plant molecular biology\| PubMed ID: 12139002	2002
Divergent signals and cytoskeletal assemblies regulate self-organizing polarity in neutrophils. Cell\| PubMed ID: 12887922	2003
Morphology matters in immune cell chemotaxis: membrane asymmetry affects amplification. Physical biology\| PubMed ID: 17021383	2006
Bound attractant at the leading vs. the trailing edge determines chemotactic prowess. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 17684096	2007
Dynamics of neutrophil migration in lymph nodes during infection. Immunity\| PubMed ID: 18718768	2008
Thymocyte-dendritic cell interactions near sources of CCR7 ligands in the thymic cortex. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)\| PubMed ID: 18981121	2008
Automated 5-D analysis of cell migration and interaction in the thymic cortex from time-lapse sequences of 3-D multi-channel multi-photon images. Journal of immunological methods\| PubMed ID: 18992251	2009
Dynamic imaging of T cell-parasite interactions in the brains of mice chronically infected with Toxoplasma gondii. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)\| PubMed ID: 19414791	2009
The impact of negative selection on thymocyte migration in the medulla. Nature immunology\| PubMed ID: 19543275	2009
Dynamics of T cell, antigen-presenting cell, and pathogen interactions during recall responses in the lymph node. Immunity\| PubMed ID: 19699173	2009
Quantifying subcellular distribution of fluorescent fusion proteins in cells migrating within tissues. Immunology and cell biology\| PubMed ID: 20956985	2011
3D quantitative imaging of unprocessed live tissue reveals epithelial defense against bacterial adhesion and subsequent traversal requires MyD88. PloS one\| PubMed ID: 21901151	2011

Paul Herzmark

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