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Automated Radiochemical Synthesis of [<sup>18</sup>F]3F4AP: A Novel PET Tracer for Imaging Demyelinating Diseases

3-[18F]fluoro-4-aminopyridine, [18F]3F4AP, is a radiofluorinated analog of the FDA-approved drug for multiple sclerosis 4-aminopyridine (4AP). This ...

The University of Chicago

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In recent studies of human bacterial pathogens, oxidation sensing and regulation have been shown to impact very diverse pathways that extend beyond inducing antioxidant genes in the bacteria. In fact, some redox-sensitive regulatory proteins act as major regulators of bacteria's adaptability to oxidative stress, an ability that originates from immune host response as well as antibiotic stress. Such proteins play particularly important roles in pathogenic bacteria S. aureus, P. aeruginosa, and M. tuberculosis in part because reactive oxygen species and reactive nitrogen species present significant challenges for pathogens during infection. Herein, we review recent progress toward the identification and understanding of oxidation sensing and regulation in human pathogens. The newly identified redox switches in pathogens are a focus of this review. We will cover several reactive oxygen species-sensing global regulators in both gram-positive and gram-negative pathogenic bacteria in detail. The following discussion of the mechanisms that these proteins employ to sense redox signals through covalent modification of redox active amino acid residues or associated metalloprotein centers will provide further understanding of bacteria pathogenesis, antibiotic resistance, and host-pathogen interaction.

Redox signaling in human pathogens.

Dans des &eacute;tudes r&eacute;centes d&#39;agents anthropopathog&egrave;nes bact&eacute;riennes, oxydation de d&eacute;tection et de la r&eacute;glementation ont d&eacute;montr&eacute; &agrave; l&#39;impact des voies tr&egrave;s diverses qui s&#39;&eacute;tendent au-del&agrave; induisant des g&egrave;nes d&#39;antioxydant dans les bact&eacute;ries. En fait, certaines prot&eacute;ines r&eacute;gulatrices de l&#39;oxydo-r&eacute;duction sensible agissent comme r&eacute;gulateurs principaux de l&#39;adaptabilit&eacute; de la bact&eacute;rie au stress oxydatif, une capacit&eacute; qui provenance de la r&eacute;action immunitaire de l&#39;h&ocirc;te ainsi que des stress antibiotiques. Ces prot&eacute;ines jouent un r&ocirc;le particuli&egrave;rement important chez les bact&eacute;ries pathog&egrave;nes S. aureus, P. aeruginosa et M. tuberculosis en partie souvent parce que les esp&egrave;ces r&eacute;actives de l&#39;oxyg&egrave;ne et azote r&eacute;actif esp&egrave;ces pr&eacute;sentent des d&eacute;fis importants pour les agents pathog&egrave;nes lors de l&#39;infection. Ici, nous passons en revue les progr&egrave;s r&eacute;cents vers l&#39;identification et la compr&eacute;hension de l&#39;oxydation de d&eacute;tection et de r&eacute;gulation dans les pathog&egrave;nes humains. Les interrupteurs r&eacute;dox nouvellement identifi&eacute;s chez les agents pathog&egrave;nes sont une mise au point de cet examen. Nous allons couvrir plusieurs oxyg&eacute;n&eacute;es d&eacute;tection esp&egrave;ces r&eacute;gulateurs globaux dans les bact&eacute;ries pathog&egrave;nes Gram positifs et &agrave; Gram n&eacute;gatifs en d&eacute;tail. La discussion des m&eacute;canismes qui emploient de ces prot&eacute;ines d&#39;oxydor&eacute;duction du sens des signaux par le biais de la modification covalente de redox actif des acides amin&eacute;s ou centres de prot&eacute;ine associ&eacute;e fournira davantage de compr&eacute;hension de la pathog&eacute;nie des bact&eacute;ries, la r&eacute;sistance aux antibiotique et interaction h&ocirc;te-pathog&egrave;ne.

Redox signaling in pathog&egrave;nes humains.

In j&uuml;ngsten Studien der bakteriellen Krankheitserreger beim Menschen Oxydation Sensorik und Regelung nachweislich sehr unterschiedliche Wege auswirken, die Antioxidans-Genen in Bakterien induzieren hinausgehen. In der Tat wirken einige Redox-Sensitive regulatorischen Proteine als wichtige Regulatoren der Bakterien Anpassungsf&auml;higkeit an oxidativen Stress, eine F&auml;higkeit, die immun Wirtsantwort sowie antibiotische Belastungen stammt. Solche Proteine spielen besonders wichtige Rollen in pathogenen Bakterien M. Tuberkulose, S. Aureus und p. Aeruginosa teilweise weil bedeutende Herausforderungen f&uuml;r Krankheitserreger reaktive Sauerstoffspezies und reaktive Stickstoff-Spezies w&auml;hrend der Infektion zu pr&auml;sentieren. Hierin, &uuml;berpr&uuml;fen wir die j&uuml;ngsten Fortschritte bei der Identifizierung und Verst&auml;ndnis der Oxydation Sensorik und Regulierung im Krankheitserreger beim Menschen. Neu identifizierte Redox Schalter in Krankheitserreger sind ein Schwerpunkt dieser &Uuml;berpr&uuml;fung. Wir umfassen mehrere reaktive Sauerstoff Spezies Erkennung globale Regulatoren in sowohl Gram-positive und Gram-negativer pathogene Bakterien im Detail. Die folgende Diskussion der Mechanismen, mit denen diese Proteine zu Sinn Redox-Signale &uuml;ber kovalente Modifikation der Redox-aktiven Aminos&auml;urereste um oder zugeordneten Metalloproteine Zentren bieten weitere Verst&auml;ndnis der Pathogenese der Bakterien, Antibiotika-Resistenz und Host-Erreger-Interaktion.

Redox signalisieren in Krankheitserreger beim Menschen.

Negli studi recenti di umani agenti patogeni batterici, ossidazione sensing e regolamento hanno dimostrati di avere un impatto molto diversi percorsi che si estendono di l&agrave; di indurre i geni antiossidanti nei batteri. Infatti, alcune proteine regolatrici redox-sensibili agiscono come regolatori principali dell&#39;adattabilit&agrave; dei batteri a stress ossidativo, un&#39;abilit&agrave; che proviene dalla risposta immunitaria ospite cos&igrave; come lo stress agli antibiotici. Tali proteine giocano ruoli particolarmente importanti nei batteri patogeni S. aureus, p. aeruginosa e M. tuberculosis in parte perch&eacute; specie reattive dell&#39;ossigeno e azoto reattivi presenti significative sfide per gli agenti patogeni durante l&#39;infezione. Nel presente documento, passiamo in rassegna recente progresso verso l&#39;identificazione e la comprensione di ossidazione di rilevamento e di regolamento in agenti patogeni umani. Gli interruttori di redox recentemente identificata in agenti patogeni sono una messa a fuoco di questa recensione. Tratteremo diversi reattivi dell&#39;ossigeno specie di rilevamento globale regolatori in batteri patogeni gram-positivi e Gram-negativi in dettaglio. La seguente discussione dei meccanismi che impiegano queste proteine a redox senso di segnali mediante modificazione covalente di residui dell&#39;amminoacido attivo redox o centri associati metalloproteina fornir&agrave; ulteriore comprensione della patogenesi di batteri, la resistenza agli antibiotici e interazione ospite-patogeno.

Redox signaling in agenti patogeni umani.

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&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B0;&#xD654; &#xAC10;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xADDC;&#xC81C;&#xB294; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xD56D; &#xC0B0;&#xD654; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC720;&#xB3C4; &#xB118;&#xC5B4; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xACBD;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC2E4;, &#xC77C;&#xBD80; redox &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xADDC;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;, &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC640; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB798; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC801;&#xC751;&#xC131;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xADDC;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xD788; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; S. &#xAD6C; &#xADE0;, P. &#xB18D; &#xADE0; &#xBC0F; M. &#xACB0;&#xD575; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885;&#xC640; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC885; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xACFC;&#xC81C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xC0B0;&#xD654; &#xAC10;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC9C4;&#xD589;&#xB960;&#xC744; &#xAC80;&#xD1A0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD655;&#xC778;&#xB41C; &#xB41C; redox &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&#xAC00;&#xC774; &#xAC80;&#xD1A0;&#xC758; &#xCD08;&#xC810;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC18;&#xC751; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885; &#xAC10;&#xC9C0; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xADDC;&#xC81C; &#xC790;&#xC138;&#xD558;&#xAC8C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB78C; &#xC591;&#xC131; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB8F0; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC10;&#xAC01; redox&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xB2E4;&#xC74C; &#xD1A0;&#xB860; redox active &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xACF5;&#xC720; &#xC218;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638; &#xB610;&#xB294; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; metalloprotein &#xC13C;&#xD130; &#xCD94;&#xAC00; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; pathogenesis, &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C; &#xC800;&#xD56D;&#xACFC; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Redox &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En estudios recientes de los pat&oacute;genos bacterianos humanos, detecci&oacute;n de la oxidaci&oacute;n y la regulaci&oacute;n han demostrado impacto muy diversos caminos que se extienden m&aacute;s all&aacute; de la inducci&oacute;n de genes de antioxidantes en las bacterias. De hecho, algunas prote&iacute;nas reguladoras redox sensible act&uacute;an como reguladores importantes de la adaptabilidad de las bacterias al estr&eacute;s oxidativo, una habilidad que se origina en la respuesta inmune del anfitri&oacute;n as&iacute; como antibi&oacute;tico estr&eacute;s. Tales prote&iacute;nas papel particularmente importante en bacterias pat&oacute;genas S. aureus, p. aeruginosa y M. tuberculosis en parte porque de especies reactivas de ox&iacute;geno y nitr&oacute;geno reactivo presentan retos importantes pat&oacute;genos durante la infecci&oacute;n. En este documento, repasamos recientes progresos hacia la identificaci&oacute;n y comprensi&oacute;n de oxidaci&oacute;n detecci&oacute;n y regulaci&oacute;n en los pat&oacute;genos humanos. Los interruptores redox nuevamente identificado en pat&oacute;genos son el foco de esta revisi&oacute;n. Cubriremos varios reactivas del ox&iacute;geno especies de detecci&oacute;n global de reguladores en bacterias pat&oacute;genas tanto Gram-positivas y Gram-negativas en detalle. La siguiente discusi&oacute;n de los mecanismos que emplean estas prote&iacute;nas a redox de sentido las se&ntilde;ales a trav&eacute;s de la modificaci&oacute;n covalente de residuos del amino&aacute;cido activo de redox o centros asociados metalloprotein proporcionar&aacute; m&aacute;s comprensi&oacute;n de la patogenesia de bacterias, resistencia a los antibi&oacute;ticos y la interacci&oacute;n hospedante-pat&oacute;geno.

Redox en pat&oacute;genos humanos.

&#x4E0E;&#x8010;&#x7532;&#x6C27;&#x897F;&#x6797;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x5D1B;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FEB;&#x5207;&#x9700;&#x8981;&#x65B0;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x3002;&#x5FB7;&#x8BFA;&#x560C;&#x5464;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x662F;&#x6709;&#x5E0C;&#x671B;&#x4F46;&#x672A;&#x5145;&#x5206;&#x5229;&#x7528;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x53EA;&#x8981;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x4E0E;&#x53D7;&#x635F;&#x560C;&#x5464;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x7EC6;&#x83CC;&#x51CF;&#x6BD2;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8F6C;&#x6362; 5-&#x54AA;&#x5511;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (&#x7A7A;&#x6C14;) 4-&#x7FA7;&#x57FA;-5-&#x54AA;&#x5511;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (CAIR) &#x5728;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x5185;&#x5B58;&#x5728;&#x6839;&#x672C;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x5728;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8F6C;&#x53D8;&#x53D1;&#x751F;&#x901A;&#x8FC7;&#x50AC;&#x5316; PurK &#x548C;&#x7EAF; &#xFF1B; &#x4E24;&#x6B65;&#x8F6C;&#x6362;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5B83;&#x88AB;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x50AC;&#x5316;&#x7C7B;&#x4E8C;&#x7EAF;&#x4E00;&#x6B65;&#x8F6C;&#x6362;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x9176;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6297;&#x751F;&#x7D20;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4EA4;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x7EFC;&#x5408;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x7279;&#x6027;&#x7684; PurK &#x548C;&#x7EAF;&#x4ECE;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x3002;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC; PurK &#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86; nonconserved &#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x7A7A;&#x6C14;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5360;&#x5730;&#x5047;&#x5B9A;&#x7A7A;&#x6C14;&#x7684;&#x54AA;&#x5511;&#x73AF;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5F02;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x6216;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x51CF;&#x5C11;&#x9176;&#x6548;&#x7387;&#x7531;&#x5468;&#x56F4;&#x5341;&#x500D;&#x3002;&#x4E3A;&#x78B3;&#x9178;&#x6C22;&#x6839; K(m) PurK &#x9176;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x51B3;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53D1;&#x73B0;&#x8981; &sim;18.8 &#x6BEB;&#x7C73;&#x3002;&#x7EAF;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7C7B;&#x4E8C;&#x7EAF;&#x7684;&#x63CF;&#x8FF0;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x751F;&#x5316;&#x8BC1;&#x5B9E; His38 &#x662F;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x4E3A;&#x672A;&#x6765;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#x6253;&#x51FB; S.&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x560C;&#x5464;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x63D0;&#x4F9B;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

N5 carboxyaminoimidazole &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x548C;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC; N5 carboxyaminoimidazole &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

With the rapid rise of methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections, new strategies against S. aureus are urgently needed. De novo purine biosynthesis is a promising yet unexploited target, insofar as abundant evidence has shown that bacteria with compromised purine biosynthesis are attenuated. Fundamental differences exist within the process by which humans and bacteria convert 5-aminoimidazole ribonucleotide (AIR) to 4-carboxy-5-aminoimidazole ribonucleotide (CAIR). In bacteria, this transformation occurs through a two-step conversion catalyzed by PurK and PurE; in humans, it is mediated by a one-step conversion catalyzed by class II PurE. Thus, these bacterial enzymes are potential targets for selective antibiotic development. Here, the first comprehensive structural and biochemical characterization of PurK and PurE from S. aureus is presented. Structural analysis of S. aureus PurK reveals a nonconserved phenylalanine near the AIR-binding site that occupies the putative position of the imidazole ring of AIR. Mutation of this phenylalanine to isoleucine or tryptophan reduced the enzyme efficiency by around tenfold. The K(m) for bicarbonate was determined for the first time for a PurK enzyme and was found to be âˆ¼18.8â€…mM. The structure of PurE is described in comparison to that of human class II PurE. It is confirmed biochemically that His38 is essential for function. These studies aim to provide foundations for future structure-based drug-discovery efforts against S. aureus purine biosynthesis.

Structural and biochemical characterization of N5-carboxyaminoimidazole ribonucleotide synthetase and N5-carboxyaminoimidazole ribonucleotide mutase from Staphylococcus aureus.

Avec l&#39;augmentation rapide de methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections, nouvelles strat&eacute;gies contre le Staphylococcus aureus sont urgent. Biosynth&egrave;se des purines de novo est une cible prometteuse encore inexploit&eacute;e, dans la mesure o&ugrave; une preuve abondante a montr&eacute; que les bact&eacute;ries avec la biosynth&egrave;se de la purine compromis sont att&eacute;nu&eacute;s. Il existe des diff&eacute;rences fondamentales dans le processus par lequel les humains et les bact&eacute;ries convertissent 5-aminoimidazole ribonucl&eacute;otide (AIR) 4-carboxy-5-aminoimidazole ribonucl&eacute;otide (CAIR). Chez les bact&eacute;ries, cette transformation se fait par une conversion en deux &eacute;tapes catalys&eacute;e par PurK et PurE ; chez l&#39;homme, elle est m&eacute;diatis&eacute;e par une conversion en une &eacute;tape catalys&eacute;e par classe II pur. Ainsi, ces enzymes bact&eacute;riennes sont des cibles potentielles pour le d&eacute;veloppement antibioth&eacute;rapie s&eacute;lective. Ici, la premi&egrave;re compl&egrave;te structurale et biochimique caract&eacute;risation de PurK et PurE de S. aureus est pr&eacute;sent&eacute;e. L&#39;analyse structurale de S. aureus PurK r&eacute;v&egrave;le une ph&eacute;nylalanine nonconserved pr&egrave;s du site de liaison AIR qui occupe la position pr&eacute;sum&eacute;e de l&#39;anneau imidazole de l&#39;AIR. Mutation de ce ph&eacute;nylalanine isoleucine ou tryptophane r&eacute;duit l&#39;efficacit&eacute; de l&#39;enzyme par pr&egrave;s de dix fois. Le K(m) du bicarbonate a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute; pour la premi&egrave;re fois pour une enzyme PurK et s&#39;est av&eacute;r&eacute; &sim;18.8 mM. La structure de PurE est d&eacute;crite par rapport &agrave; celle des humain classe II pur. Biochimiquement, il est confirm&eacute; que His38 est essentiel pour la fonction. Ces &eacute;tudes visent &agrave; fournir les fondations pour les efforts futurs bas&eacute;e sur la structure-d&eacute;couverte de m&eacute;dicaments contre la biosynth&egrave;se des purines S. aureus.

Caract&eacute;risation structurale et biochimique de la synth&eacute;tase de ribonucl&eacute;otide N5-carboxyaminoimidazole et N5-carboxyaminoimidazole mutase de ribonucl&eacute;otide de Staphylococcus aureus.

Mit dem rasanten Aufstieg der Methicillin-resistente Staphylococcus Aureus Infektionen sind neue Strategien gegen S. Aureus dringend erforderlich. De Novo Purin-Biosynthese ist ein vielversprechender noch unerschlossenen Ziel, insofern als reichliche Beweise hat gezeigt, dass Bakterien bei kompromittierten Purin-Biosynthese abgeschw&auml;cht werden. Grundlegende Unterschiede gibt es innerhalb des Prozesses, durch den Menschen und Bakterien 5-aminoimidazol-RIBONUKLEOTID (Luft) in 4-Carboxy-5-aminoimidazol-RIBONUKLEOTID (CAIR) konvertieren. In Bakterien tritt diese Umwandlung durch einen zweistufigen Umwandlung katalysiert durch PurK und rein; beim Menschen ist es durch eine einstufige Umwandlung katalysiert durch Klasse II PurE vermittelt. Diese bakterielle Enzyme sind daher m&ouml;gliche Ziele f&uuml;r selektive Antibiotika Entwicklung. Hier ist die erste umfassende strukturelle und biochemische Charakterisierung der PurK und PurE von S. Aureus pr&auml;sentiert. Strukturanalyse von S. Aureus PurK zeigt eine nonconserved Phenylalanin in der N&auml;he des AIR-Bindung, die die vermeintliche Position der Imidazolring Luft einnimmt. Mutation dieses Phenylalanin, Isoleucin oder Tryptophan reduziert die Enzym-Effizienz von rund um das Zehnfache. Die K(m) f&uuml;r Bikarbonat wurde zum ersten Mal f&uuml;r ein Enzym PurK bestimmt und wurde festgestellt, dass &sim;18.8 mM. Die Struktur der PurE ist im Vergleich zu dem menschlichen Klasse II PurE beschrieben. Biochemisch wird best&auml;tigt, dass His38 f&uuml;r Funktion wichtig. Diese Studien Ziel Grundlagen f&uuml;r k&uuml;nftige Struktur-basierten Wirkstoffforschung Bem&uuml;hungen gegen S. Aureus-Purin-Biosynthese.

Strukturelle und biochemische Charakterisierung von N5-Carboxyaminoimidazole-RIBONUKLEOTID-Synthase und N5-Carboxyaminoimidazole-RIBONUKLEOTID-Mutase von Staphylococcus Aureus.

Con il rapido aumento delle infezioni di aureus meticillino-resistente Staphylococcus, nuove strategie contro S. aureus sono urgentemente necessari. De novo biosintesi delle purine &egrave; un bersaglio promettente ancora non sfruttato, in quanto abbondanti prove ha dimostrato che i batteri con biosintesi delle purine compromesso vengono attenuati. Esistono differenze fondamentali all&#39;interno del processo mediante il quale gli esseri umani e batteri convertono 5-aminoimidazole ribonucleotide (aria) 4-carboxy-5-aminoimidazole ribonucleotide (CAIR). Nei batteri, questa trasformazione avviene attraverso una conversione in due tappe catalizzata da PurK e puro; negli esseri umani, esso &egrave; mediata da una conversione di One-Step catalizzata dalla classe II PurE. Cos&igrave;, questi enzimi batterici sono potenziali bersagli per lo sviluppo di antibiotico selettivo. Qui, viene presentata il prima completa strutturale e biochimica caratterizzazione di PurK e PurE da S. aureus. Analisi strutturale di S. aureus PurK rivelano una fenilalanina nonconserved vicino al sito di AIR-associazione che occupa la posizione putativa dell&#39;anello di imidazolo di aria. Mutazione di questo fenilalanina isoleucina o triptofano riduce l&#39;efficienza dell&#39;enzima da intorno dieci volte. Il K(m) per bicarbonato &egrave; stato determinato per la prima volta per un enzima PurK ed &egrave; stato trovato per essere &sim;18.8 mM. La struttura di PurE &egrave; descritta rispetto a quello della classe umana II PurE. Viene confermato biochimicamente che His38 &egrave; essenziale per la funzione. Questi studi mirano a fornire le basi per gli sforzi futuri basati su struttura-scoperta della droga contro la biosintesi delle purine di S. aureus.

Caratterizzazione strutturale e biochimica di N5-carboxyaminoimidazole sintetasi ribonucleotide e mutasi ribonucleotide N5-carboxyaminoimidazole da Staphylococcus aureus.

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N5-carboxyaminoimidazole &#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3068; N5 carboxyaminoimidazole &#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30E0;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x30FB;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xBA54; &#xD2F0; &#xC2E4;&#xB9B0; &#xB0B4;&#xC131; &#xD669;&#xC0C9; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xC0C1; &#xAD6C; &#xADE0; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; S. &#xAD6C; &#xADE0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC804;&#xB7B5; &#xAE34;&#xAE09; &#xD558; &#xAC8C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; purine &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC740; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xC544;&#xC9C1; unexploited &#xB300;&#xC0C1; insofar&#xC73C;&#xB85C; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC70; &#xD6FC;&#xC190;&#xB41C; purine &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAC10;&#xC1E0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xCC28;&#xC774;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xBCC0;&#xD658; 5 aminoimidazole ribonucleotide (&#xC5D0; &#xC5B4;) 4-carboxy-5-aminoimidazole ribonucleotide (CAIR) &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;. &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;,&#xC774; &#xBCC0;&#xD658; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xBCC0;&#xD658; Purk&#xC640; &#xC21C;&#xC218;;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294;, 1 &#xB2E8;&#xACC4; &#xBCC0;&#xD658; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II &#xC21C;&#xC218; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138;&#xADE0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC0C1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, S. &#xAD6C; &#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; Purk&#xC640; &#xC21C;&#xC218;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. S. &#xAD6C; &#xADE0; Purk&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC5B4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC0C1; &#xC774;&#xBBF8; &#xB9C1; &#xC5B4;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xCC28;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xADFC;&#xCC98; nonconserved &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC18C;&#xB958;&#xC2E0; &#xB610;&#xB294; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC774;&#xC774; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC5F4; &#xBC30; &#xC8FC;&#xC704;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD6A8;&#xC728; &#xAC10;&#xC18C;. &#xC911; &#xD0C4;&#xC0B0;&#xC5FC;&#xC758; K(m) PurK &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815; &#xBC0F; &sim;18.8 m M&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC21C;&#xC218;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II &#xC21C;&#xC218;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xD654;&#xD559;&#xC801; His38 &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xBBF8; &#xADE0; purine &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xBC18; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB178;&#xB825;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xACE0;&#xC790; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

N5 carboxyaminoimidazole ribonucleotide &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xC0C1; &#xAD6C; &#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; N5 carboxyaminoimidazole ribonucleotide mutase&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Con el r&aacute;pido aumento de las infecciones resistentes a la meticilina estafilococo &aacute;ureo, se necesitan urgentemente nuevas estrategias frente a S. aureus. Bios&iacute;ntesis de purinas de novo son un objetivo prometedor a&uacute;n sin explotar, medida abundante evidencia ha demostrado que las bacterias con la bios&iacute;ntesis de purinas comprometidos se aten&uacute;an. Diferencias fundamentales existen dentro del proceso por el cual los seres humanos y bacterias convierten 5-aminoimidazol ribonucle&oacute;tido (aire) a 4-carboxy-5-aminoimidazol ribonucle&oacute;tido (CAIR). En bacterias, esta transformaci&oacute;n se produce a trav&eacute;s de una conversi&oacute;n de dos etapas catalizada por PurK y pura; en los seres humanos, &eacute;l es mediado por una conversi&oacute;n de un solo paso catalizada por clase II puro. Por lo tanto, estas enzimas bacterianas son objetivos potenciales para el desarrollo de antibi&oacute;tico selectivo. Aqu&iacute;, se presenta la primera integral caracterizaci&oacute;n estructural y bioqu&iacute;mica de PurK y puro de S. aureus. An&aacute;lisis estructural de S. aureus PurK revelan una fenilalanina nonconserved cerca del sitio de uni&oacute;n a aire que ocupa la posici&oacute;n putativa del anillo imidaz&oacute;lico de aire. Mutaci&oacute;n de este fenilalanina isoleucina o tript&oacute;fano reduce la eficacia de la enzima por alrededor de diez veces. El k bicarbonato se determin&oacute; por primera vez para una enzima PurK y fue encontrado para ser &sim;18.8 mM. La estructura del puro se describe en comparaci&oacute;n con la de humano clase II puro. Bioqu&iacute;micamente se confirma que la His38 es esencial para la funci&oacute;n. Estos estudios pretenden sentar las bases para los esfuerzos futuros de descubrimiento de f&aacute;rmacos basado en estructura contra la bios&iacute;ntesis de purinas de S. aureus.

Caracterizaci&oacute;n estructural y bioqu&iacute;mica de N5-carboxyaminoimidazole ribonucle&oacute;tido sintetasa y N5-carboxyaminoimidazole Mutasa de ribonucle&oacute;tido de Staphylococcus aureus.

&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x751F;&#x7269;&#x5206;&#x5B50;&#x901A;&#x5E38;&#x7528;&#x4E8E;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BCA;&#x65AD;&#x3002;&#xFF08;99 &#x7C73;&#xFF09;Tc &#x662F;&#x6700;&#x5E38;&#x7528;&#x7684;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x793A;&#x8E2A;&#x5242;&#x5728;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x836F;&#x7269;&#x3002;() 188Re &#x548C; (186) &#x518D;&#x4E5F;&#x901A;&#x5E38;&#x7528;&#x4F5C;&#x533B;&#x5B66;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x793A;&#x8E2A;&#x5242;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E3A; radiolabeling &#x8F83;&#x957F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x6D89;&#x53CA;&#x5728; bioconjugation &#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E00;&#x9879;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5E08;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x770B;&#x5230; perrhenate (ReO(4)(-)) &#x79BB;&#x5B50;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x6807;&#x7B7E;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x94BC;&#x9178;&#x76D0; (MoO(4)(2-))-&#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;&#x6469;&#x8FBE;&#xFF09; &#x53EF;&#x4EE5;&#x7ED1;&#x5B9A; perrhenate &#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x7B49;&#x6E29;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x91CF;&#x70ED;&#x6CD5;&#x6D4B;&#x91CF;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; ReO(4)(-) &#x662F; 541 &#x6469;&#x8FBE;&#x7684;&#x89E3;&#x79BB;&#x5E38;&#x6570; nM &#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89E3;&#x51B3;&#x4E0E;&#x7ED1;&#x5B9A; ReO(4)(-) &#x6469;&#x8FBE;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E86;&#x542B;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x8054;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5C55;&#x51FA;&#x7684; perrhenate &#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7A81;&#x53D8;&#x86CB;&#x767D; (K(d) = 104 nM&#xFF09;&#x3002;&#x4E0E;&#x7ED1;&#x5B9A; perrhenate &#x89E3;&#x51B3;&#x4E86;&#x6469;&#x8FBE; (1.7 &#x2460;) &#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C; A11C/R153C &#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;2.0 &#x2460;&#xFF09;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#x663E;&#x793A; perrhenate &#x79BB;&#x5B50;&#x5360;&#x636E;&#x7684;&#x94BC;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4F7F;&#x7528;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x94BC;&#x9178;&#x76D0;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x3002;&#x4E0E;&#x94BC;&#x9178;&#x76D0;-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7A97;&#x4F53;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;perrhenate &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6469;&#x8FBE;&#x7684;&#x6574;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0D;&#x53D8;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5728;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; perrhenate &#x662F;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x3002;

&#x5DE5;&#x7A0B;&#x7684; MoO4(2-) &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; ReO4(-) &#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#xFF1A; &#x5728;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x7684;&#x65B0;&#x53D6;&#x5411;&#x3002;

Radiolabeled biomolecules are routinely used for clinical diagnostics. (99m)Tc is the most commonly used radioactive tracer in radiopharmaceuticals. (188)Re and (186)Re are also commonly used as radioactive tracers in medicine. However, currently available methods for radiolabeling are lengthy and involve several steps in bioconjugation processes. In this work we present a strategy to engineer proteins that may selectively recognize the perrhenate (ReO(4)(-)) ion as a new way to label proteins. We found that a molybdate (MoO(4)(2-))-binding protein (ModA) from Escherichia coli can bind perrhenate with high affinity. Using fluorescence and isothermal titration calorimetry measurements, we determined the dissociation constant of ModA for ReO(4)(-) to be 541 nM and we solved a crystal structure of ModA with a bound ReO(4)(-). On the basis of the structure we created a mutant protein containing a disulfide linkage, which exhibited increased affinity for perrhenate (K(d) = 104 nM). High-resolution crystal structures of ModA (1.7 Ã…) and A11C/R153C mutant (2.0 Ã…) were solved with bound perrhenate. Both structures show that a perrhenate ion occupies the molybdate binding site using the same amino acid residues that are involved in molybdate binding. The overall structure of the perrhenate-bound ModA is unchanged compared with that of the molybdate-bound form. In the mutant protein, the bound perrhenate is further stabilized by the engineered disulfide bond.

Binding of ReO4(-) with an engineered MoO4(2-)-binding protein: towards a new approach in radiopharmaceutical applications.

Biomol&eacute;cules radiomarqu&eacute;es sont couramment utilis&eacute;s pour le diagnostic clinique. (99 m)TC est le traceur radioactif plus couramment utilis&eacute; dans les produits radiopharmaceutiques. (188)Re et Re (186) sont aussi couramment utilis&eacute;s comme traceurs radioactifs en m&eacute;decine. Cependant, actuellement les m&eacute;thodes disponibles pour radiomarquage sont longues et impliquent plusieurs &eacute;tapes dans le processus de bioconjugaison. Dans ce travail, nous pr&eacute;sentons une strat&eacute;gie pour l&#39;ing&eacute;nieur de prot&eacute;ines qui peuvent reconna&icirc;tre s&eacute;lectivement le perrh&eacute;nate (ReO(4)(-)) ion comme une nouvelle fa&ccedil;on de prot&eacute;ines de l&#39;&eacute;tiquette. Nous avons constat&eacute; qu&#39;un molybdate (MoO(4)(2-))-binding protein (ModA) d&#39;Escherichia coli peut lier perrh&eacute;nate avec une haute affinit&eacute;. Utilisant la fluorescence et les mensurations de calorim&eacute;trie isotherme de titration, nous avons d&eacute;termin&eacute; la constante de dissociation de ModA pour ReO(4)(-) &ecirc;tre 541 nM et nous avons r&eacute;solu une structure cristalline de ModA avec un ReO(4)(-) li&eacute;. Sur la base de la structure, nous avons cr&eacute;&eacute; une prot&eacute;ine mutante contenant une liaison disulfure, qui pr&eacute;sentaient une affinit&eacute; accrue pour perrh&eacute;nate (K(d) = 104 nM). Les structures cristallines de haute r&eacute;solution de ModA (1,7 &Aring;) et mutant A11C/R153C (2.0 &Aring;) ont &eacute;t&eacute; r&eacute;solus avec perrh&eacute;nate li&eacute;. Les deux structures montrent qu&#39;un ion perrh&eacute;nate occupe le site de liaison de molybdate en utilisant les m&ecirc;mes r&eacute;sidus d&#39;acides amin&eacute;s qui sont impliqu&eacute;s dans la liaison de molybdate. La structure globale de la ModA perrh&eacute;nate li&eacute; est inchang&eacute;e compar&eacute;e &agrave; celle de la forme de molybdate-li&eacute;e. Dans la prot&eacute;ine mutante, le perrh&eacute;nate li&eacute; est plus stabilis&eacute; par la liaison disulfure machin&eacute;.

La liaison de ReO4(-) avec une prot&eacute;ine de liaison MoO4(2-) Ing&eacute;nierie : vers une nouvelle approche dans les applications radiopharmaceutiques.

Radioaktive Biomolek&uuml;le werden routinem&auml;&szlig;ig f&uuml;r die klinische Diagnostik verwendet. (99 m)TC ist die am h&auml;ufigsten verwendeten radioaktiver Tracer in Radiopharmaka. (188)Re und Re (186) werden h&auml;ufig auch als radioaktiver Tracer in der Medizin verwendet. Jedoch derzeit verf&uuml;gbare Methoden f&uuml;r radiolabeling sind langwierige und beinhalten mehrere Schritte in Bioconjugation Prozessen. In dieser Arbeit pr&auml;sentieren wir eine Strategie, um Proteine zu konstruieren, die selektiv die Perrhenate (ReO(4)(-)) Ion als einen neuen Weg zur Bezeichnung Proteine erkennen. Wir fanden, dass ein Molybdat (MoO(4)(2-))-verbindliches Protein (ModA) von Escherichia coli Perrhenate mit hoher Affinit&auml;t binden kann. Mit Fluoreszenz und Isotherme Titrierung Kalorimetrie Messungen, wir entschlossen die Dissoziationskonstante der ModA f&uuml;r ReO(4)(-) 541 sein nM und wir l&ouml;sen eine Kristallstruktur von ModA mit einem gebundenen ReO(4)(-). Auf der Grundlage der Struktur, die wir erstellt ein mutant Protein, enth&auml;lt eine Disulfid-Bindung, die erh&ouml;hte Affinit&auml;t f&uuml;r Perrhenate ausgestellt (K(d) = 104 nM). Hochaufl&ouml;sende Kristallstrukturen der ModA (1.7 &Aring;) und A11C/R153C Mutant (2.0 &Aring;) wurden mit gebundenen Perrhenate gel&ouml;st. Beide Strukturen zeigen, dass eine Perrhenate Ion nimmt die Molybdat-Bindungsstelle, die mit der gleichen Aminos&auml;ure-R&uuml;ckst&auml;nde, die in Molybdat Bindung beteiligt sind. Die allgemeine Struktur der Perrhenate gebundene-ModA ist unver&auml;ndert im Vergleich zu den Molybdat-gebundener Form. Im mutierte Protein ist der gebundenen Perrhenate weiter durch die manipulierte Disulfidbindung stabilisiert.

Binden von ReO4(-) mit einer technisch MoO4(2-)-verbindliches Protein: f&uuml;r einen neuen Ansatz in radiopharmazeutische Anwendungen.

Biomolecole radiomarcati sono abitualmente utilizzati per la diagnostica clinica. (99 m)TC &egrave; il tracciante radioattivo pi&ugrave; comunemente usato in prodotti radiofarmaceutici. (188)Re e Re (186) sono comunemente utilizzati come traccianti radioattivi in medicina. Tuttavia, attualmente disponibili metodi per radiolabeling sono lunghi e comportano diversi passaggi nei processi di bioconjugation. In questo lavoro presentiamo una strategia per l&#39;ingegnere di proteine che possono riconoscere selettivamente il perrhenate (ReO(4)(-)) ione come un nuovo modo di proteine in etichetta. Abbiamo trovato che un molibdato (MoO(4)(2-))-binding protein (ModA) da Escherichia coli pu&ograve; associare perrhenate con alta affinit&agrave;. Mediante fluorescenza e misurazioni di calorimetria isotermica di titolazione, abbiamo determinato la costante di dissociazione di ModA per ReO(4)(-) essere 541 nM e abbiamo risolto una struttura di cristallo della ModA con un ReO(4)(-) associato. Sulla base della struttura abbiamo creato una proteina mutante contenente un legame disolfuro, che ha esibito la maggiore affinit&agrave; per perrhenate (K(d) = 104 nM). Strutture cristalline ad alta risoluzione di ModA (1.7 &Aring;) e mutante A11C/R153C (2.0 &Aring;) sono stati risolti con associata perrhenate. Entrambe le strutture mostrano che un ione perrhenate occupa il sito di legame di molibdato utilizzando i residui dell&#39;amminoacido stesso che sono coinvolti nell&#39;associazione di molibdato. La struttura complessiva della ModA perrhenate-bound &egrave; invariata rispetto a quello della forma-molibdato-bound. Della proteina mutante, il perrhenate legato &egrave; ulteriormente stabilizzata dal legame disolfuro ingegnerizzati.

Associazione di ReO4(-) con un MoO4(2-)-binding protein ingegnerizzati: verso un nuovo approccio nelle applicazioni di radiofarmaci.

&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6A19;&#x8B58;&#x751F;&#x4F53;&#x5206;&#x5B50;&#x65E5;&#x5E38;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A3A;&#x65AD;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;(99 m)Tc &#x306F;&#x3001;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;(188)&#x65E5;&#x6642;&#x3068; (186) &#x65E5;&#x6642;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x533B;&#x5B66;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x9577;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3001;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x4F34;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x904E;&#x30EC; &#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x9178; (ReO(4)(-)) &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3002; &#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x8A8D;&#x8B58;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CB;&#x30A2;&#x306B;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30E2;&#x30EA;&#x30D6;&#x30C7;&#x30F3;&#x9178; &#xFF08;MoO(4)(2-)&#xFF09; &#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;-&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (ModA&#xFF09; &#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x904E;&#x30EC; &#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x9178;&#x9AD8;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x3068;&#x7B49;&#x6E29;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x71B1;&#x91CF;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E; ModA 541 &#x306B; ReO(4)(-) &#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x5B9A;&#x6570;&#x6C7A;&#x5B9A; nM &#x3068;&#x6211;&#x3005; &#x89E3;&#x6C7A;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C0;&#x3067;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; ReO(4)(-) &#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x3082;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x904E;&#x30EC; &#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x9178;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x5C55;&#x793A;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210; (K(d) = 104 nM)&#x3002;ModA &#xFF08;1.7 &Aring;&#xFF09; &#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x3068; A11C/R153C &#x5909;&#x7570;&#x4F53; (2.0 &Aring;) &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x904E;&#x30EC; &#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x9178;&#x304C;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x904E;&#x30EC; &#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x9178;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30E2;&#x30EA;&#x30D6;&#x30C7;&#x30F3;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x540C;&#x3058;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30E2;&#x30EA;&#x30D6;&#x30C7;&#x30F3;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x904E;&#x30EC; &#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x9178;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30E2;&#x30FC;&#x30C0;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x30E2;&#x30EA;&#x30D6;&#x30C7;&#x30F3;&#x9178;&#x9023;&#x7D50;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x904E;&#x30EC; &#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x9178;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

ReO4(-) &#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306E; MoO4(2-) &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#xFF1A; &#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x5411;&#x3051;&#x305F;&#x3002;

&#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xB41C; biomolecules &#xC815;&#xAE30;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC784;&#xC0C1; &#xC9C4;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. (99 m)Tc &#xBC29;&#xC0AC;&#xC131;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC131; &#xCD94;&#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. (188)&#xC7AC;&#xC640; (186) &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC758;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC131; &#xD2B8;&#xB808;&#xC774; &#xC11C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD604;&#xC7AC; radiolabeling &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xAE34; &#xD558; &#xACE0; bioconjugation &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC791;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; perrhenate (&#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; ReO(4)(-)) &#xC774;&#xC628; &#xC778;&#xC2DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC804;&#xB7B5; &#xC18C;&#xAC1C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; molybdate (MoO(4)(2-))&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC;-&#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (&#xD328;&#xC158;) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; perrhenate &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC218; 541 Reo(4)(-)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD328;&#xC158;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC218; &#xACB0;&#xC815; &#xD615;&#xAD11; &#xB4F1;&#xC628; &#xC801;&#xC815; &#xC5F4; &#xB7C9; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xB274; &#xBA55;&#xC2DC;&#xCF54;&#xC640; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD574;&#xACB0; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; Reo(4)(-)&#xC640; &#xD328;&#xC158;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;. &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xADFC;&#xAC70; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB9CC;&#xB4E0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; perrhenate&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xC804;&#xC2DC; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569; (K(d) = 104 nM). &#xD328;&#xC158; (1.7 &Aring;)&#xC758; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; A11C/R153C &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (2.0 &Aring;) &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; perrhenate&#xB85C; &#xD574;&#xACB0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAD6C;&#xC870; perrhenate &#xC774;&#xC628; &#xCC28;&#xC9C0; molybdate &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; molybdate &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Perrhenate &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD328;&#xC158;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xADF8; molybdate &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xD3FC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; perrhenate &#xCD94;&#xAC00; &#xC870;&#xC791;&#xB41C; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xB41C;.

&#xC124;&#xACC4; &#xB41C; MoO4(2-) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Reo4(-)&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;: &#x25CB; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xD5A5;&#xD574;.

Biomol&eacute;culas radiactivos se utilizan habitualmente para el diagn&oacute;stico cl&iacute;nico. (99 m)TC es el trazador radioactivo m&aacute;s com&uacute;nmente usado en radiof&aacute;rmacos. (188)Re y Re (186) tambi&eacute;n com&uacute;nmente se utilizan como trazadores radiactivos en medicina. Sin embargo, actualmente los m&eacute;todos disponibles para radiolabeling son largos e involucran varios pasos en los procesos de bioconjugation. En este trabajo presentamos una estrategia para Ingeniero de prote&iacute;nas que pueden reconocer selectivamente la perrenato (ion ReO(4)(-)) como una nueva forma de prote&iacute;nas de la etiqueta. Encontramos que un molibdato (MoO(4)(2-))-binding protein (ModA) de Escherichia coli puede enlazar perrenato con alta afinidad. Mediante fluorescencia y mediciones de calorimetr&iacute;a de titulaci&oacute;n isot&eacute;rmica, determinamos la constante de disociaci&oacute;n de ModA para ReO(4)(-) ser 541 nM y se solucion&oacute; una estructura cristalina de la ModA con un ReO(4)(-) consolidado. Sobre la base de la estructura que hemos creado una prote&iacute;na mutante que contiene un v&iacute;nculo de disulfuro, que exhibi&oacute; mayor afinidad por perrenato (K(d) = 104 nM). Estructuras de cristal de alta resoluci&oacute;n de ModA (1.7 &Aring;) y A11C/R153C mutante (2.0 &Aring;) fueron solucionados con perrenato encuadernado. Ambas estructuras muestran que un i&oacute;n perrenato ocupa el sitio de uni&oacute;n de molibdato usando los mismo residuos de amino&aacute;cidos que participan en el enlace de molibdato. La estructura global de la ModA de perrenato enlazado permanece invariable en comparaci&oacute;n con la de la forma de molibdato-limite. En la prote&iacute;na mutante, la perrenato consolidado se estabiliza m&aacute;s por la ingenier&iacute;a disulfuro.

Uni&oacute;n de ReO4(-) con una prote&iacute;na de uni&oacute;n a MoO4(2-) Ingenier&iacute;a: hacia un nuevo enfoque en aplicaciones de radiof&aacute;rmacos.

&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x5982;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x8301;&#x58EE;&#x6210;&#x957F;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x751F;&#x5B58;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5FC5;&#x987B;&#x611F;&#x89C9;&#x548C;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x9632;&#x5FA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5305;&#x62EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x539A;&#x58C1; millimolar &#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x786B;&#x9187;&#x548C;&#x4FDD;&#x62A4;&#x9176;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5DF2;&#x77E5;&#xFF0C;&#x5E2E;&#x52A9;&#x62B5;&#x5FA1;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x63A7;&#x5236;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9632;&#x62A4;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x9065;&#x611F;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4ECD;&#x7136;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x65B0;&#x6C27;&#x5316;&#x611F;&#x5E94;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#xFF0C;Rv1049 &#x6216;&#x9A6C;&#x94C1; (&#x6C27;&#x5316;&#x9065;&#x611F;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;)&#x3002;&#x9A6C;&#x94C1;&#x662F;&#x9A6C;&#x5C14;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x5176;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x540C;&#x6837;&#x5BF9;&#x67AF;&#x8349; OhrR &#x548C; MgrA&#xFF0C;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x52A0;&#x5165;&#x4ECE; DNA &#x5B58;&#x5728;&#x6C27;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8F6C;&#x5F55;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x3002;&#x9A6C;&#x94C1;&#x611F;&#x5B98;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x5BF9; N-&#x603B;&#x7AD9;&#x9644;&#x8FD1; &#xFF08;Cys10 &#x548C; Cys12&#xFF09;&#xFF0C;&#x6C27;&#x5316;&#x540E;&#x5F62;&#x6210;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x6C27;&#x5316;&#x3002;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x5F62;&#x6210;&#x91CD;&#x65B0;&#x6392;&#x5217;&#x4ECE; DNA &#x5BFC;&#x81F4;&#x5927;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x5206;&#x89E3;&#x7684;&#x6C22;&#x952E;&#x7F51;&#x7EDC;&#x3002;&#x9A6C;&#x94C1;&#x524D;&#x9762;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x751F;&#x5B58;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5728;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x9A6C;&#x94C1;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x5411;&#x957F;&#x671F;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; rv1050 &#xFF08;&#x5047;&#x5B9A;&#x51FA;&#x53E3;&#x4E0D;&#x5C1A;&#x672A;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#xFF09; &#x6C27;&#x5316;&#x5242;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x51FA;&#x5B83;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x6B64;&#x9A6C;&#x94C1;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x83CC;&#x751F;&#x5B58;&#x5728;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x6C27;&#x5316;&#x9065;&#x611F;&#x8C03;&#x8282;&#x5668; (&#x9A6C;&#x94C1;) &#x662F;&#x65B0;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x76F8;&#x5173;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x5728;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x3002;

Mycobacterium tuberculosis thrives in oxidative environments such as the macrophage. In order to survive the bacterium must sense and adapt to the oxidative conditions. Several antioxidant defenses including a thick cell wall, millimolar concentrations of small molecule thiols and protective enzymes are known to help the bacterium withstand the oxidative stress. However, oxidation-sensing regulators that control these defenses have remained elusive. In this paper, we report a new oxidation-sensing regulator, Rv1049 or MosR (Mycobacterium tuberculosis oxidation-sensing Regulator). MosR is a transcriptional repressor of the MarR family, which, similarly to B. subtilis OhrR and S. aureus MgrA, dissociates from DNA in the presence of oxidants, enabling transcription. MosR senses oxidation through a pair of cysteines near the N-terminus (Cys10 and Cys12) that upon oxidation forms a disulfide bond. Disulfide formation rearranges a network of hydrogen bonds which leads to a large conformational change of the protein and dissociation from DNA. MosR has been shown previously to play an important role on survival of the bacterium in the macrophage. In this study we show that the main role of MosR is to upregulate expression of rv1050 (a putative exported oxidoreductase that has not yet been characterized) in response to oxidants and propose that it is through this role that MosR contributes to the bacterium survival in the macrophage.

The oxidation-sensing regulator (MosR) is a new redox dependent transcription factor in Mycobacterium tuberculosis.

Mycobacterium tuberculosis se d&eacute;veloppe dans des environnements oxydants tels que les macrophages. Pour survivre la bact&eacute;rie doit d&eacute;tecter et s&#39;adapter aux conditions oxydatives. Plusieurs des d&eacute;fenses antioxydantes dont une paroi cellulaire &eacute;paisse, des concentrations millimolaires de thiols de petites mol&eacute;cules et des enzymes protectrices sont connues pour aider la bact&eacute;rie &agrave; r&eacute;sister au stress oxydatif. Cependant, les r&eacute;gulateurs de d&eacute;tection d&#39;oxydation qui contr&ocirc;lent ces d&eacute;fenses sont rest&eacute;s insaisissables. Dans cet article, nous pr&eacute;sentons un nouveau r&eacute;gulateur d&eacute;tection d&#39;oxydation, Rv1049 ou plus (d&eacute;tection d&#39;oxydation r&eacute;gulateur de Mycobacterium tuberculosis). Plus est un r&eacute;presseur transcriptionnel de la famille de MarR, qui, de m&ecirc;me pour b. subtilis OhrR et S. aureus MgrA, se dissocie de l&#39;ADN en pr&eacute;sence d&#39;oxydants, permettant la transcription. Plus d&eacute;tecte l&#39;oxydation gr&acirc;ce &agrave; une paire de cyst&eacute;ines pr&egrave;s du N-terminal (Cys10 et Cys12) qui, apr&egrave;s oxydation, forme un pont disulfure. Formation de liaisons disulfure se transpose en un r&eacute;seau de liaisons hydrog&egrave;nes qui m&egrave;ne &agrave; un grand changement de conformation de la prot&eacute;ine et la dissociation de l&#39;ADN. Plus a &eacute;t&eacute; montr&eacute; ant&eacute;rieurement &agrave; jouer un r&ocirc;le important sur la survie de la bact&eacute;rie dans les macrophages. Dans cette &eacute;tude, nous montrons que le r&ocirc;le principal de plus est &agrave; r&eacute;guler positivement expression de rv1050 (un putatif export&eacute; oxydor&eacute;ductase qui n&#39;a pas encore &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute;e) en r&eacute;ponse aux oxydants et proposer que c&#39;est gr&acirc;ce &agrave; ce r&ocirc;le que plus contribue &agrave; la survie de la bact&eacute;rie dans les macrophages.

Le r&eacute;gulateur de d&eacute;tection d&#39;oxydation (plus) est un nouveau facteur de transcription d&eacute;pendant de redox &agrave; Mycobacterium tuberculosis.

Mycobacterium Tuberculosis gedeiht in oxidativen Umgebungen wie die Makrophagen. Um das Bakterium &Uuml;berleben muss Sinn und die oxidative Bedingungen anzupassen. Mehrere antioxidative Abwehr einschlie&szlig;lich eine Dicke Zellwand, bekannterma&szlig;en millimolar Konzentration von niedermolekularen thiole und sch&uuml;tzende Enzyme helfen, die Bakterien, die den oxidativen Stress zu widerstehen. Oxydation-Sensorik-Regulatoren, die diese Abwehrmechanismen zu steuern sind jedoch schwer fassbaren geblieben. In diesem Papier teilen wir Ihnen einen neuen Oxydation-Sensorik Regulator, Rv1049 oder MosR (Mycobacterium Tuberculosis Oxydation-Sensorik-Regulator). MosR ist ein transkriptionelle Verdr&auml;nger von MarR Familie, die, &auml;hnlich zu B. Subtilis OhrR und S. Aureus MgrA, von DNA in Anwesenheit von Oxidantien distanziert, Transkription aktivieren. MosR sp&uuml;rt Oxydation durch ein paar von Cysteine nahe der N-Terminus (Cys10 und Cys12), die bei der Oxydation eine Disulfidbindung bildet. Disulfid-Bildung ordnet ein Netz von Wasserstoffbr&uuml;ckenbindungen, die auf eine gro&szlig;e &Auml;nderung der Konformations&auml;nderungen des Proteins und Dissoziation von DNA f&uuml;hrt. MosR hat sich bereits gezeigt auf das &Uuml;berleben des Bakteriums in den Makrophagen eine wichtige Rolle spielen. In dieser Studie zeigen wir, dass die Hauptaufgabe der MosR Upregulate Ausdruck der rv1050 ist (eine vermeintliche exportiert Oxidoreduktase, die noch nicht charakterisiert worden ist) als Reaktion auf Oxidantien und vorschlagen, dass es &uuml;ber diese Rolle ist, die f&uuml;r das Bakterium &Uuml;berleben in den Makrophagen MosR beitr&auml;gt.

Der Oxydation-Sensorik-Regler (MosR) ist eine neue Redox abh&auml;ngiger Transkriptionsfaktor in Mycobacterium Tuberculosis.

Mycobacterium tuberculosis prospera in ambienti ossidativi, quali i macrofagi. Per sopravvivere il batterio deve percepire e adattarsi alle condizioni di ossidazione. Difese antiossidanti diversi tra cui una spessa parete cellulare, millimolare concentrazioni di enzimi protettivi e tioli piccola molecola sono noti per aiutare il batterio sopportare lo stress ossidativo. Tuttavia, ossidazione-sensing regolatori che controllano queste difese sono rimasti sfuggenti. In questa carta, segnaliamo un nuovo ossidazione-sensing regolatore, Rv1049 o MosR (Mycobacterium tuberculosis ossidazione-sensing regolatore). MosR &egrave; un repressore trascrizionale della famiglia MarR, che, allo stesso modo di b. subtilis OhrR e S. aureus MgrA, si dissocia dal DNA in presenza di ossidanti, consentendo la trascrizione. MosR sensi ossidazione attraverso una coppia di cisteine vicino al N-terminus (Cys10 e Cys12) che su ossidazione si forma un legame disolfuro. Formazione di disolfuro riorganizza una rete di legami idrogeno che conduce a un grande cambiamento conformazionale della proteina e dissociazione dal DNA. MosR &egrave; stato dimostrato in precedenza a giocare un ruolo importante sulla sopravvivenza del batterio nel macrofago. In questo studio dimostriamo che il ruolo principale di MosR &egrave; espressione di potenziamento del rv1050 (un putativo esportati ossidoreduttasi che non sono ancora stata caratterizzata) in risposta a ossidanti e proporre che &egrave; attraverso questo ruolo che MosR contribuisce per la sopravvivenza del batterio nel macrofago.

Il regolatore di ossidazione-sensing (MosR) &egrave; un nuovo fattore di trascrizione dipendente redox in Mycobacterium tuberculosis.

&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x306F;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x7E41;&#x6804;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x3092;&#x751F;&#x304D;&#x6B8B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x6761;&#x4EF6;&#x306B;&#x9069;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x539A;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6297;&#x9178;&#x5316;&#x9632;&#x5FA1;&#x7528;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x4FDD;&#x8B77;&#x9175;&#x7D20;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x8010;&#x3048;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9632;&#x5FA1;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x9178;&#x5316;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x306F;, &#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x9178;&#x5316;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; &#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3001;Rv1049 &#x307E;&#x305F;&#x306F; MosR (&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x9178;&#x5316;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; &#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x7D50;&#x6838;)&#x3002;MosR &#x8EE2;&#x5199;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306B; B. subtilis OhrR &#x3068; MgrA&#x3001;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x306E; DNA &#x304C;&#x9178;&#x5316;&#x5264;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x89E3;&#x96E2;&#x3001;&#x30DE;&#x30FC;&#x4E00;&#x5BB6;&#x3067;&#x3059;&#x3002;MosR &#x9178;&#x5316;&#x3001;N &#x306F;&#x9178;&#x5316;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x5F62;&#x6210;&#x672B;&#x7AEF;&#x4ED8;&#x8FD1; (Cys10 &#x304A;&#x3088;&#x3073; Cys12) &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x611F;&#x899A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x5F62;&#x6210;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x89E3;&#x96E2;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x304B;&#x3089;&#x306E; DNA &#x306E;&#x6C34;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MosR &#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x83CC;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x6211;&#x3005; MosR &#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306E; rv1050 &#x306E;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x5F0F;&#x306B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; (&#x306F;&#x63A8;&#x5B9A;&#x8F38;&#x51FA;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;) &#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x5FDC;&#x3048;&#x3066; MosR &#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3067;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9178;&#x5316;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; &#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF; &#xFF08;MosR&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x6838;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30EC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC740; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xB4F1;&#xC758; &#xC0B0;&#xD654; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC88;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB97C; &#xC0B4;&#xC544;&#xB0A8;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB290;&#xAEF4;&#xC9C4;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC0B0;&#xD654; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC801;&#xC751; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450;&#xAEBC;&#xC6B4; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD56D; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC29;&#xC5B4; &#xCCB4;&#xACC4; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; thiols &#xBC0F; &#xBCF4;&#xD638; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; millimolar &#xB18D;&#xB3C4; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB97C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xACAC;&#xB51C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xC5B4; &#xCCB4;&#xACC4;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC0B0;&#xD654; &#xAC10;&#xC9C0; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB17C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0B0;&#xD654; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC870;&#xC808;&#xAE30;, Rv1049 &#xB610;&#xB294; MosR (&#xACB0;&#xD575;&#xADE0; &#xC0B0;&#xD654; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;) &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. MosR &#xB9C8; &#xB974; &#xAC00;&#xC871;&#xC758;, &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; B. subtilis OhrR &#xBC0F; S. &#xAD6C; &#xADE0; MgrA&#xC5D0;&#xC11C; dissociates DNA oxidants&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;, &#xC804;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; transcriptional &#xC9C4;&#xC555;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. MosR &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; N-&#xB9D0;&#xB2E8; (Cys10 &#xBC0F; Cys12) &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC758; &#xC30D;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xD615;&#xC131; DNA&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xB9AC;&#xC758; &#xD070; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; &#xC218;&#xC18C; &#xACB0;&#xD569; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC815;&#xB82C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Mosr&#xB294; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Mosr&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; rv1050&#xC758; upregulate &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xD45C;&#xC2DC; (&#xD55C; &#xC0C1; &#xC218;&#xCD9C; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xB418;&#xC9C0; &#xC544;&#xC9C1; oxidoreductase) oxidants&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; Mosr&#xB294; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xACE0;.

&#xC0B0;&#xD654; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC870;&#xC808;&#xAE30; (MosR) &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; redox &#xC885;&#xC18D; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xB2E4;.

Mycobacterium tuberculosis prospera en ambientes oxidativos como el macr&oacute;fago. Para sobrevivir la bacteria debe sentir y adaptarse a las condiciones de oxidaci&oacute;n. Varios defensas antioxidantes incluyendo una gruesa pared celular, milimolar concentraciones de tioles de peque&ntilde;as mol&eacute;culas y enzimas protectoras son conocidas para ayudar a la bacteria a soportar el estr&eacute;s oxidativo. Sin embargo, detecci&oacute;n de oxidaci&oacute;n de los reguladores que controlan estas defensas han permanecido esquivos. En este papel, Divulgamos un nuevo regulador de detecci&oacute;n de oxidaci&oacute;n, Rv1049 o MosR (Mycobacterium tuberculosis regulador sensor de oxidaci&oacute;n). MosR es un represor transcripcional de la familia MarR, que, del mismo modo a B. subtilis OhrR y S. aureus MgrA, disocia de ADN en presencia de oxidantes, permitiendo la transcripci&oacute;n. MosR detecta oxidaci&oacute;n a trav&eacute;s de un par de ciste&iacute;nas cerca de N-terminal (Cys10 y Cys12) que por oxidaci&oacute;n forma un enlace disulfuro. Formaci&oacute;n de disulfuro reorganiza una red de enlaces de hidr&oacute;geno que conduce a un gran cambio conformacional de la prote&iacute;na y disociaci&oacute;n del ADN. MosR ha demostrado previamente a desempe&ntilde;ar un papel importante en la supervivencia de la bacteria en el macr&oacute;fago. En este estudio demostramos que el papel principal de MosR es expresi&oacute;n de alza de rv1050 (una supuesta exportado oxidorreductasa que a&uacute;n no se ha caracterizado) en respuesta a oxidantes y proponen que es a trav&eacute;s de este papel que MosR contribuye a la supervivencia de la bacteria en el macr&oacute;fago.

El regulador de detecci&oacute;n de oxidaci&oacute;n (MosR) es un nuevo factor de transcripci&oacute;n dependiente de redox en Mycobacterium tuberculosis.

Quinone molecules are intracellular electron-transport carriers, as well as critical intra- and extracellular signals. However, transcriptional regulation of quinone signaling and its molecular basis are poorly understood. Here, we identify a thiol-stress-sensing regulator YodB family transcriptional regulator as a central component of quinone stress response of Staphylococcus aureus, which we have termed the quinone-sensing and response repressor (QsrR). We also identify and confirm an unprecedented quinone-sensing mechanism based on the S-quinonization of the essential residue Cys-5. Structural characterizations of the QsrR-DNA and QsrR-menadione complexes further reveal that the covalent association of menadione directly leads to the release of QsrR from operator DNA following a 10° rigid-body rotation as well as a 9-Å elongation between the dimeric subunits. The molecular level characterization of this quinone-sensing transcriptional regulator provides critical insights into quinone-mediated gene regulation in human pathogens.

Molecular mechanism of quinone signaling mediated through S-quinonization of a YodB family repressor QsrR.

Remyelination therapy goes to trial for multiple sclerosis.

Oligodendrocyte death contributes to the pathogenesis of the inflammatory demyelinating disease multiple sclerosis (MS). Nevertheless, current MS therapies are mainly immunomodulatory and have demonstrated limited ability to inhibit MS progression. Protection of oligodendrocytes is therefore a desirable strategy for alleviating disease. Here we demonstrate that enhancement of the integrated stress response using the FDA-approved drug guanabenz increases oligodendrocyte survival in culture and prevents hypomyelination in cerebellar explants in the presence of interferon-γ, a pro-inflammatory cytokine implicated in MS pathogenesis. In vivo, guanabenz treatment protects against oligodendrocyte loss caused by CNS-specific expression of interferon-γ. In a mouse model of MS, experimental autoimmune encephalomyelitis, guanabenz alleviates clinical symptoms, which correlates with increased oligodendrocyte survival and diminished CNS CD4+ T cell accumulation. Moreover, guanabenz ameliorates relapse in relapsing-remitting experimental autoimmune encephalomyelitis. Our results provide support for a MS therapy that enhances the integrated stress response to protect oligodendrocytes against the inflammatory CNS environment.

Article	Year
Redox signaling in human pathogens. Antioxidants & redox signaling\| PubMed ID: 20578795	2011
Structural and biochemical characterization of N5-carboxyaminoimidazole ribonucleotide synthetase and N5-carboxyaminoimidazole ribonucleotide mutase from Staphylococcus aureus. Acta crystallographica. Section D, Biological crystallography\| PubMed ID: 21795812	2011
Binding of ReO4(-) with an engineered MoO4(2-)-binding protein: towards a new approach in radiopharmaceutical applications. Journal of biological inorganic chemistry : JBIC : a publication of the Society of Biological Inorganic Chemistry\| PubMed ID: 21861186	2012
The oxidation-sensing regulator (MosR) is a new redox dependent transcription factor in Mycobacterium tuberculosis. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 22992749	2012
Molecular mechanism of quinone signaling mediated through S-quinonization of a YodB family repressor QsrR. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 23479646	2013
Remyelination therapy goes to trial for multiple sclerosis. Neurology(R) neuroimmunology & neuroinflammation\| PubMed ID: 25340076	2014
Pharmaceutical integrated stress response enhancement protects oligodendrocytes and provides a potential multiple sclerosis therapeutic. Nature communications\| PubMed ID: 25766071	2015

Pedro Brugarolas

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