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Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

University of Kentucky

&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3001; &#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5185;&#x5316;&#x4E0E; &alpha; 1 &#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x8131;&#x654F;&#x6027;&#x80FD; (alpha(1)-AR) &#x4E9A;&#x578B;&#x5171;&#x8F6D;&#x4E0E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (alpha(1)-AR/GFP) &#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9E;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x751F;&#x6D3B;&#x3001; &#x6682;&#x6001;&#x8F6C;&#x67D3;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; (&#x6797;&#x514B;) 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;(1B) &alpha;-AR/GFP &#x8367;&#x5149;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x3002;&Alpha; (1B) &#x7684;&#x523A;&#x6FC0;-AR &#x4E0E;&#x53BB;&#x6C27;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x6FC0;&#x9176; 1/2 (ERK1/2) &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5FEB;&#x901F; &alpha; (1B)-AR/GFP &#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3002;&#x53BB;&#x6C27;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20; (15 h) &#x957F;&#x671F;&#x63A5;&#x89E6;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684; alpha (1B) &#x8131;&#x654F;-AR-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B; ERK1/2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;(1A) &alpha;-AR/GFP &#x8367;&#x5149;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x4E0D;&#x53EA;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x819C;&#x5C42;&#x3002;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x4EBA;&#x53E3; alpha (1A) &#x7387;-AR/&#x4E24;&#x6027;&#x662F;&#x6BD4; alpha (1B) &#x89C1;&#x8FC7;&#x6162;-&#x4E34;&#x573A;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x66B4;&#x9732;&#x4E5F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8131;&#x654F;&#x7684; alpha (1A)-AR-&#x4ECB;&#x5BFC; ERK1/2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;Alpha(1D)-AR/GFP &#x8367;&#x5149;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x4E3B;&#x8981;&#x819C;&#x5C42;&#xFF0C;&#x548C;&#x6B64;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E0D;&#x53D7;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x3002;Alpha(1D)-AR/&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53BB;&#x6C27;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x6CBB;&#x7597;&#x589E;&#x52A0; ERK1/2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x589E;&#x957F;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5927;&#x3002;&#x4E0E; &beta;-arrestin 1 cotransfection &#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x6216;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x523A;&#x6FC0; alpha(1A)-&#x6216; alpha (1B) &#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;-AR/GFP &#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x7A97;&#x4F53;&#x7684; &beta;-arrestin 1&#xFF0C;&beta;-arrestin 1 (319-418&#xFF09;&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684; alpha(1A)-&#x548C; &alpha; (1B)-&#x6577;&#x8BBE;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x9C7C;&#x7901;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x67D3; alpha 1-AR/GFP &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x6709;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5E03;&#x548C;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5185;&#x5316;&#xFF0C;alpha 1-&#x6577;&#x8BBE;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x9C7C;&#x7901;&#xFF0C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x522B;&#x548C;&#x90A3;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4ECB;&#x5BFC; alpha 1-AR &#x5185;&#x90E8;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; arrestins &#x548C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x957F;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x4FC3;&#x6548;&#x5242;&#x7684;&#x949D;&#x611F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5DEE;&#x5F02;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5728; alpha 1 &#x4EBA;&#x5DE5;&#x9C7C;&#x7901;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x3002;

&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x53CA; &alpha; 1-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x578B;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;

The cellular localization, agonist-mediated internalization, and desensitization properties of the alpha(1)-adrenoceptor (alpha(1)-AR) subtypes conjugated with green fluorescent protein (alpha(1)-AR/GFP) were assessed using real-time imaging of living, transiently transfected human embryonic kidney (HEK) 293 cells. The alpha(1B)-AR/GFP fluorescence was detected predominantly on the cell surface. Stimulation of the alpha(1B)-AR with phenylephrine led to an increase in extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) phosphorylation and promoted rapid alpha(1B)-AR/GFP internalization. Long-term exposure (15 h) to phenylephrine resulted in desensitization of the alpha(1B)-AR-mediated activation of ERK1/2 phosphorylation. Alpha(1A)-AR/GFP fluorescence was detected not only on the cell surface but also intracellularly. The rate of internalization of the cell surface population alpha(1A)-AR/GFPs was slower than that seen for the alpha(1B)-AR. Agonist exposure also resulted in desensitization of the alpha(1A)-AR-mediated increase in ERK1/2 phosphorylation. The alpha(1D)-AR/GFP fluorescence was detected mainly intracellularly, and this localization was unaffected by exposure to phenylephrine. Phenylephrine treatment of alpha(1D)-AR/GFP expressing cells increased ERK1/2 phosphorylation. However, this increase was not significant. Cotransfection with beta-arrestin 1 did not increase the rate or extent of agonist-stimulated alpha(1A)- or alpha(1B)-AR/GFP internalization. However, a dominant-negative form of the beta-arrestin 1, beta-arrestin 1 (319-418), blocked agonist-mediated internalization of both the alpha(1A)- and alpha(1B)-ARs. These data show that transfected alpha(1)-AR/GFP fusion proteins are functional, that there are differences in the cellular distribution and agonist-mediated internalization between the alpha(1)-ARs, and that agonist-mediated alpha(1)-AR internalization is dependent on arrestins and can be desensitized by long-term exposure to an agonist. These differences could contribute to the diversity in physiologic responses regulated by the alpha(1)-ARs.

Differences in the cellular localization and agonist-mediated internalization properties of the alpha(1)-adrenoceptor subtypes.

La localisation cellulaire, internalisation m&eacute;di&eacute;e par un agoniste et propri&eacute;t&eacute;s de d&eacute;sensibilisation de l&#39;alpha (1)-adr&eacute;nergiques (sous-types alpha(1)-AR) conjugu&eacute; &agrave; la prot&eacute;ine fluorescente verte (alpha(1)-AR/GFP) ont &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;s &agrave; l&#39;aide de l&#39;imagerie en temps r&eacute;el du living, transfect&eacute;es transitoirement les cellules r&eacute;nales embryonnaires humaines (HEK) 293. L&#39;alpha (1 b)-fluorescence AR/GFP a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e principalement sur la surface de la cellule. Stimulation de l&#39;alpha (1 b) - AR avec la ph&eacute;nyl&eacute;phrine a conduit &agrave; une augmentation de la kinase r&eacute;gul&eacute;e par les signaux extracellulaires phosphorylation (ERK1/2) 1/2 et promu rapide alpha (1 b) - internalisation de l&#39;AR/GFP. Une exposition prolong&eacute;e &agrave; la ph&eacute;nyl&eacute;phrine (15 h) s&#39;est sold&eacute;e une d&eacute;sensibilisation de l&#39;alpha (1 b) - AR - m&eacute;di&eacute;e par l&#39;activation de la phosphorylation de ERK1/2. Alpha (1 a)-fluorescence AR/GFP a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e non seulement sur la surface de la cellule, mais aussi dans les cellules. Le taux de l&#39;internalisation de l&#39;alpha de population surface cellulaire (1 a) - AR/coordonnateurs a &eacute;t&eacute; plus lente que celle observ&eacute;e pour l&#39;alpha (1 b) - l&#39;exposition agoniste AR. a &eacute;galement entra&icirc;n&eacute; une d&eacute;sensibilisation de l&#39;alpha (1 a) - AR - m&eacute;di&eacute;e par augmentation de la phosphorylation de ERK1/2. La fluorescence GFP-AR/alpha(1D) a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e principalement dans les cellules, et cette localisation n&#39;est pas affect&eacute;e par l&#39;exposition &agrave; la ph&eacute;nyl&eacute;phrine. La ph&eacute;nyl&eacute;phrine traitement de cellules exprimant la GFP-AR/alpha(1D) augmente la phosphorylation de ERK1/2. Toutefois, cette augmentation n&#39;&eacute;tait pas significative. Cotransfection avec 1 b&eacute;ta-arrestine n&#39;augmente pas le taux ou l&#39;&eacute;tendue de la alpha(1A) - stimul&eacute;e par l&#39;agoniste ou alpha (1 b)-internalisation de l&#39;AR/GFP. Cependant, une forme dominante n&eacute;gative du 1-arrestine b&ecirc;ta, b&ecirc;ta-arrestine 1 (319-418), bloqu&eacute; internalisation m&eacute;di&eacute;e par un agoniste de l&#39;alpha(1A) - et alpha (1 b)-ARs. Ces donn&eacute;es montrent qu&#39;alpha transfect&eacute;e (1)-prot&eacute;ines de fusion AR/GFP sont fonctionnels, qu&#39;il y a des diff&eacute;rences dans la distribution cellulaire et l&#39;internalisation m&eacute;di&eacute;e par un agoniste entre l&#39;alpha (1) - ARs et qu&#39;alpha m&eacute;di&eacute;e par un agoniste (1) - AR internalisation d&eacute;pend arrestins et peut &ecirc;tre humidifi&eacute;e par une exposition prolong&eacute;e &agrave; un agoniste. Ces diff&eacute;rences pourraient contribuer &agrave; la diversit&eacute; des r&eacute;actions physiologiques r&eacute;gis par l&#39;alpha (1)-ARs.

Diff&eacute;rences dans la localisation cellulaire et les propri&eacute;t&eacute;s d&#39;internalisation m&eacute;di&eacute;e par un agoniste de l&#39;alpha (1)-sous-types de r&eacute;cepteurs adr&eacute;nergiques.

Unterschiede in der zellul&#xE4;ren Lokalisation und Agonist-vermittelte Internalisierung Eigenschaften der alpha (1)-Adrenozeptor-Subtypen.

La desensibilizzazione propriet&agrave; della alfa (1), internalizzazione mediata da agonista e localizzazione cellulare-adrenorecettori (sottotipi alpha(1)-AR) coniugato con proteina verde fluorescente (alpha(1)-AR/GFP) sono stati valutati utilizzando immagini in tempo reale di vita, transitoriamente transfected le 293 cellule Rene embrionale umano (HEK). L&#39;alfa (1B)-fluorescenza AR/GFP &egrave; stato rilevato prevalentemente sulla superficie della cellula. Stimolazione della alfa (1B) - AR con fenilefrina ha portato ad un aumento della chinasi segnale-regolata extracellulare fosforilazione (ERK1/2) 1/2 e promosso alfa rapido (1B) - interiorizzazione AR/GFP. L&#39;esposizione a lungo termine (15 h) a Fenilefrina ha provocato desensibilizzazione della alfa (1B) - AR - mediata attivazione di fosforilazione di ERK1/2. Alfa (1A)-fluorescenza AR/GFP &egrave; stato rilevato non solo sulla superficie delle cellule, ma anche intracellularly. Il tasso di interiorizzazione della Alfa superficie popolazione cellulare (1A) - AR/GFPs era pi&ugrave; lento rispetto a quello visto per l&#39;alfa (1B) - l&#39;esposizione AR. agonista ha portato anche nella desensibilizzazione della alfa (1A) - AR - mediata aumento della fosforilazione di ERK1/2. La fluorescenza alpha(1D)-AR/GFP &egrave; stata rilevata prevalentemente intracellularly, e questa localizzazione &egrave; stata influenzata dall&#39;esposizione di Fenilefrina. Trattamento di Fenilefrina delle cellule che esprimono alpha(1D)-AR/GFP aumentata fosforilazione di ERK1/2. Tuttavia, questo aumento non &egrave; stato significativo. Cotransfection con arrestin beta 1 non ha fatto aumentare il tasso o la misura di alpha(1A) agonista-stimolato - o alfa (1B)-interiorizzazione AR/GFP. Tuttavia, una forma dominante negativa del arrestin beta 1, beta-arrestin 1 (319-418), bloccato interiorizzazione mediata da agonista di alpha(1A) - sia alfa (1B)-ARs. Questi dati mostrano che l&#39;alfa transfected (1)-proteine di fusione di GFP/AR sono funzionali, che ci sono differenze nella distribuzione cellulare e interiorizzazione agonista-mediato tra l&#39;alfa (1) - ARs e che l&#39;alfa-agonista-mediata (1) - interiorizzazione AR &egrave; dipendente da arrestins e pu&ograve; essere desensibilizzato da esposizione a lungo termine a un agonista. Queste differenze potrebbero contribuire alla diversit&agrave; nelle risposte fisiologiche regolata da Alfa (1)-ARs.

Le differenze nelle propriet&agrave; di agonista-mediata interiorizzazione della alfa (1) e localizzazione cellulare-sottotipi di adrenorecettori.

&#x5C40;&#x5728;&#x3001;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5185;&#x5316;&#x3068;&#x8131;&#x611F;&#x4F5C;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1)-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (alpha(1)-AR) &#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x5171;&#x5F79;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (alpha(1)-AR/GFP) &#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x4E00;&#x904E;&#x6027; transfected &#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x306E;&#x814E;&#x81D3; &#xFF08;HEK) 293 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1 b)-AR/GFP &#x86CD;&#x5149;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1 b) &#x306E;&#x523A;&#x6FC0; - AR &#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EC;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068; 1/2 (ERK1/2) &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1 b) &#x6607;&#x683C; - AR/GFP &#x5185;&#x5316;&#x3002;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EC;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x66B4;&#x9732; (15 h) &#x8131;&#x611F;&#x4F5C;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1 b) &#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x305F; - AR - ERK1/2 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1 a)-AR/GFP &#x86CD;&#x5149;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x307E;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x8868;&#x9762;&#x4EBA;&#x53E3;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1 a) &#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x5316;&#x7387; - AR/&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AB;&#x30EB; &#x30D5;&#x30ED;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30A2;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1 b) &#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x9045;&#x3044; - &#x7740;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x9732;&#x51FA;&#x3082;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1 a) &#x306E;&#x8131;&#x611F;&#x4F5C; - AR - ERK1/2 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x53CD;&#x5FDC;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Alpha(1D)-AR/GFP &#x86CD;&#x5149;&#x304C;&#x4E3B;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EC;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EC;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x6CBB;&#x7642; alpha(1D)-AR/GFP &#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; ERK1/2 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x78BA;&#x304B;&#x3081;&#x308B;&#x306E; &beta; &#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3; 1 &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x523A;&#x6FC0; alpha(1A) - &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1 b) &#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;-AR/GFP &#x5185;&#x5316;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8; &#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&beta; &#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3; 1 &#x306E; &beta; &#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3; 1 (319 418)&#x3001;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5185;&#x5316;&#x3068;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E; alpha(1A) - &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1 b) &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;-ARs&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x8868;&#x793A;&#x305D;&#x306E; transfected &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1)-AR/GFP &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3068;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5185;&#x5316;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1) - &#x30A2;&#x30EB;&#x30B9;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1) - &#x9593;&#x3067;&#x9055;&#x3044;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A; AR &#x5185;&#x5316;&#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x920D;&#x611F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;-ARs&#x3002;

&#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (1) &#x306E;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5185;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x9055;&#x3044;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3002;

&#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;, &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC911;&#xC7AC; &#xBC0F;&#xB294; &#xC54C;&#xD30C; (1)-adrenoceptor&#xC758; &#xB454;&#xAC10; &#xC18D;&#xC131; (alpha(1)-AR) &#xD558;&#xC704; conjugated &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (alpha(1)-AR/GFP) &#xC0DD;&#xD65C;, transiently transfected &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; (HEK) 293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC54C;&#xD30C; (1B)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;/GFP &#xD615;&#xAD11; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC54C;&#xD30C; (1B)&#xC758; &#xC790;&#xADF9;-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; phenylephrine&#xC640; 1/2 (ERK1/2) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD0A4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xC8FC;&#xB3C4;&#xD558; &#xACE0; &#xBE60;&#xB978; &#xC54C;&#xD30C; (1B) &#xC2B9;&#xC9C4;-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;/GFP &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;. &#xC54C;&#xD30C; (1B)&#xC758; &#xB454;&#xAC10; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; phenylephrine&#xC5D0; &#xC7A5;&#xAE30; &#xB178;&#xCD9C; (15h)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;-&#xC911;&#xC7AC; ERK1/2 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. &#xC54C;&#xD30C; (1A)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;/GFP &#xD615;&#xAD11; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB610;&#xD55C; &#xCE68; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; &#xC778;&#xAD6C; &#xC54C;&#xD30C; (1A)&#xC758; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4;-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;/Gfps&#xB294; &#xC54C;&#xD30C; (1B)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF8; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB290;&#xB9B0;-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xB178;&#xCD9C; &#xB610;&#xD55C; &#xC54C;&#xD30C; (1A)&#xC758; &#xB454;&#xAC10; &#xACB0;&#xACFC;-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;-&#xC911;&#xC7AC; ERK1/2 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;. Alpha(1D)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;/GFP &#xD615;&#xAD11; &#xC8FC;&#xB85C; &#xCE68; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; phenylephrine&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294;. Alpha(1D)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;/GFP &#xD45C;&#xD604; &#xC140; phenylephrine &#xCE58;&#xB8CC; ERK1/2 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC99D;&#xAC00;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xC99D;&#xAC00; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;. &#xC18D;&#xB3C4; &#xB610;&#xB294; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC790;&#xADF9; alpha(1A)-&#xB610;&#xB294; &#xC54C;&#xD30C; (1B)&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; arrestin 1 cotransfection &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;/GFP &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xBCA0;&#xD0C0; arrestin 1&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; arrestin 1 (319-418), alpha(1A)-&#xBC0F; &#xC54C;&#xD30C; (1B)&#xC758; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC911;&#xC7AC; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xCC28;&#xB2E8;-ARs. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xADF8; transfected &#xC54C;&#xD30C; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;/GFP &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5;, &#xD734;&#xB300; &#xC804;&#xD654; &#xC720;&#xD1B5; &#xBC0F; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC911;&#xC7AC; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xB294; &#xC54C;&#xD30C; (1)-ARs, &#xC0AC;&#xC774; &#xCC28;&#xC774;&#xC810;&#xC774; &#xBC0F; &#xADF8; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC911;&#xC7AC; &#xC54C;&#xD30C; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; arrestins&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACE0; &#xD55C; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC7A5;&#xAE30; &#xB178;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; desensitized &#xC218;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774; &#xC54C;&#xD30C; (1)-Ars&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; &#xC54C;&#xD30C; (1)-adrenoceptor &#xD558;&#xC704;&#xC758; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC911;&#xC7AC; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xC18D;&#xC131;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;.

La localizaci&oacute;n celular, internalizaci&oacute;n mediada por agonista y propiedades de la desensibilizaci&oacute;n de la alfa 1-adrenoceptor (subtipos alpha(1)-AR) conjugan con la prote&iacute;na verde fluorescente (alpha(1)-AR/GFP) fueron evaluados usando proyecci&oacute;n de imagen en tiempo real de la vida, transitorio transfected ri&ntilde;&oacute;n embrionario humano (HEK) 293 c&eacute;lulas. El alfa (1B)-fluorescencia de AR/GFP se detect&oacute; predominante en la superficie celular. Estimulaci&oacute;n de la alfa (1B) - AR con fenilefrina condujo a un aumento en la quinasa regulada por se&ntilde;al extracelular fosforilaci&oacute;n (ERK1/2) de 1/2 y promovido alfa r&aacute;pida (1B) - internalizaci&oacute;n de AR/GFP. Exposici&oacute;n a largo plazo (15 h) a la fenilefrina causaba una desensibilizaci&oacute;n de la alfa (1B) - AR - mediada por la activaci&oacute;n de ERK1/2 fosforilaci&oacute;n. Alfa (1A)-fluorescencia de AR/GFP fue detectada no s&oacute;lo en la superficie celular, pero tambi&eacute;n intracelular. La tasa de internalizaci&oacute;n de la alfa de poblaci&oacute;n superficie celular (1A) - AR/Pfg fue m&aacute;s lenta que visto Alpha (1B) - AR. agonista exposici&oacute;n tambi&eacute;n causaba una desensibilizaci&oacute;n de la alfa (1A) - AR - mediada por aumento de la fosforilaci&oacute;n de ERK1/2. La fluorescencia alpha(1D)-AR/GFP se detect&oacute; principalmente intracelular, y esta localizaci&oacute;n era inafectada por la exposici&oacute;n a la fenilefrina. Tratamiento de fenilefrina de c&eacute;lulas expresando GFP-AR/alpha(1D) mayor fosforilaci&oacute;n de ERK1/2. Sin embargo, este incremento no fue significativo. Cotransfection con beta-arrestin 1 no aument&oacute; la tasa o el grado de alpha(1A) - agonista-estimulado o alfa (1B)-internalizaci&oacute;n de AR/GFP. Sin embargo, una forma dominante negativo de la 1 beta-arrestin, beta-arrestin 1 (319-418), bloqueado internalizaci&oacute;n mediada por agonista de la alpha(1A) - y alfa (1B)-ARs. Estos datos demuestran esa fusi&oacute;n transfected alfa 1-AR/GFP prote&iacute;nas son funcionales, que existen diferencias en la distribuci&oacute;n celular y la internalizaci&oacute;n mediada por agonista entre las alfa 1-ARs, y esa internalizaci&oacute;n mediada por agonista alfa 1-AR depende de arrestins y pueden ser desensibilizadas por exposici&oacute;n prolongada a un agonista. Estas diferencias podr&iacute;an contribuir a la diversidad en las respuestas fisiol&oacute;gicas regulada por las alfa 1-ARs.

Diferencias en las propiedades de internalizaci&oacute;n mediada por agonista de los subtipos de receptores adren&eacute;rgicos beta2 alfa 1 y localizaci&oacute;n celular.

(Alpha1D-AR) alpha1D-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x662F;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#x7684;&#x3002;&#x5F02;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D7;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7684;&#x4E8C;&#x805A; ARs &#x4FC3;&#x8FDB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; alpha1D-&#x4EBA;&#x624D;&#x57F9;&#x8BAD;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5728;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A; alpha1D &#x4EBA;&#x624D;&#x57F9;&#x8BAD;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x6C34;&#x5E73;&#x3001; &#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x6D4B;&#x91CF;&#x548C;&#x5927;&#x9F20;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x6536;&#x7F29;&#x88AB;&#x7528;&#x4F5C;&#x529F;&#x80FD;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x63AA;&#x65BD;&#x3002;

Alpha1D-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x662F;&#x8868;&#x793A;&#x819C;&#x5C42;&#x548C;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x548C;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x5BF9;&#x4EBA;&#x4F53;&#x7684;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

The cellular localization of the alpha1D-adrenergic receptor (alpha1D-AR) is controversial. Studies in heterologous cell systems have shown that this receptor is expressed in intracellular compartments. Other studies show that dimerization with other ARs promotes the cell surface expression of the alpha1D-AR. To assess the cellular localization in vascular smooth muscle cells, we developed an adenoviral vector for the efficient expression of a GFP labeled alpha1D-AR. We also measured cellular localization with immunocytochemistry. Intracellular calcium levels, measurement of reactive oxygen species and contraction of the rat aorta were used as measures of functional activity.

The alpha1D-adrenergic receptor is expressed intracellularly and coupled to increases in intracellular calcium and reactive oxygen species in human aortic smooth muscle cells.

La localisation cellulaire des r&eacute;cepteurs adr&eacute;nergiques-alpha1D (alpha1D-AR) est controvers&eacute;e. Dans les syst&egrave;mes cellulaires h&eacute;t&eacute;rologues ont d&eacute;montr&eacute; que ce r&eacute;cepteur est exprim&eacute; dans les compartiments intracellulaires. D&#39;autres &eacute;tudes montrent que dim&eacute;risation avec d&#39;autres ARs favorise l&#39;expression &agrave; la surface cellulaire de l&#39;alpha1D-AR. Pour &eacute;valuer la localisation cellulaire dans les cellules musculaires lisses vasculaires, nous avons d&eacute;velopp&eacute; un vecteur ad&eacute;noviral pour l&#39;expression efficace d&#39;un GFP &eacute;tiquet&eacute; alpha1D-AR. Nous avons aussi mesur&eacute; la localisation cellulaire avec immunocytochimie. Taux de calcium intracellulaire, la mesure d&#39;esp&egrave;ces r&eacute;actives de l&#39;oxyg&egrave;ne et de la contraction de l&#39;aorte de rat ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s comme mesures de l&#39;activit&eacute; fonctionnelle.

L&#39;alpha1D-adr&eacute;nergique est exprim&eacute; dans les cellules et coupl&eacute; &agrave; l&#39;augmentation de calcium intracellulaire et les esp&egrave;ces r&eacute;actives de l&#39;oxyg&egrave;ne dans les cellules musculaires lisses aortiques humaines.

Die zellul&auml;re Lokalisierung von den alpha1D-adrenerge Rezeptor (alpha1D-AR) ist umstritten. Studien in heterologe Zellsysteme haben gezeigt, dass dieser Rezeptor in intrazellul&auml;ren Depots ausgedr&uuml;ckt wird. Andere Studien zeigen, dass Dimerisierung mit anderen ARs f&ouml;rdert den Zelle Oberfl&auml;che Ausdruck von der alpha1D-AR. Um die zellul&auml;re Lokalisierung im vaskul&auml;ren glatten Muskelzellen zu beurteilen, entwickelten wir eine adenoviral Vektor f&uuml;r effiziente Ausdruck einer GFP beschriftet alpha1D-AR. Wir messen auch zellul&auml;re Lokalisierung mit Immunzytochemie. Intrazellul&auml;ren Kalziumspiegel, Messung der reaktive Sauerstoffspezies und Kontraktion der Ratte-Aorta dienten als Ma&szlig;nahmen der funktionelle Aktivit&auml;t.

Alpha1D-adrenerge Rezeptor ist intrazellul&auml;r ausgedr&uuml;ckt und zum Anstieg der intrazellul&auml;ren Kalzium und reaktive Sauerstoffspezies in menschlichen Aortenklappe glatten Muskelzellen verbunden.

La localizzazione cellulare del recettore adrenergico-alpha1D (alpha1D-AR) &egrave; controversa. Studi in sistemi cellulari eterologa hanno dimostrato che questo recettore &egrave; espresso in compartimenti intracellulari. Altri studi mostrano che la dimerizzazione con altri ARs promuove l&#39;espressione di superficie delle cellule dell&#39;alpha1D-AR. Per valutare la localizzazione cellulare nelle cellule muscolari lisce vascolari, abbiamo sviluppato un vettore adenovirale per l&#39;espressione efficiente di un GFP etichettati alpha1D-AR. Abbiamo anche misurato la localizzazione cellulare con immunocitochimica. Livelli di calcio intracellulare, misura di specie reattive dell&#39;ossigeno e la contrazione dell&#39;aorta di ratto sono stati utilizzati come misure di attivit&agrave; funzionale.

Il recettore adrenergico-alpha1D &egrave; espresso intracellularly e accoppiato all&#39;aumento di calcio intracellulare e specie reattive dell&#39;ossigeno nelle cellule del muscolo liscio aortiche umane.

&#x7D30;&#x80DE;&#x5C40;&#x5728; alpha1D &#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;alpha1D-AR&#xFF09; &#x306E;&#x8B70;&#x8AD6;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7570;&#x7A2E;&#x7D30;&#x80DE;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5316;&#x8868;&#x793A; ARs alpha1D &#x7740;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; alpha1D &#x7740;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4ED8;&#x3044;&#x305F; GFP &#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x305F;&#x3081;&#x958B;&#x767A;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x514D;&#x75AB;&#x67D3;&#x8272;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3068;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x30E1;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Alpha1D-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x3072;&#x3068;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Alpha1D-&#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (alpha1D-AR) &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB17C;&#xB780;&#xC774; &#xB2E4;. &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC140; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC774; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; dimerization &#xB2E4;&#xB978; ARs alpha1D &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; &#xD45C;&#xD604; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD608;&#xAD00; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD3C9;&#xAC00;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; alpha1D &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; GFP&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD45C;&#xD604; &#xC704;&#xD55C; adenoviral &#xBCA1;&#xD130; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; immunocytochemistry&#xC640; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xCE21;&#xC815;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xC218;&#xC900;, &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885;&#xC758; &#xCE21;&#xC815; &#xBC0F; &#xC950; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5;&#xC758; &#xC218;&#xCD95; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC218;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;.

Alpha1D-&#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xCE68; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885; &#xACB0;&#xD569;.

La localizaci&oacute;n celular del receptor adren&eacute;rgico-alpha1D (alpha1D-AR) es controvertida. Estudios en sistemas celulares heter&oacute;logos han demostrado que este receptor se expresa en los compartimientos intracelulares. Otros estudios muestran que dimerizaci&oacute;n con otro ARs promueve la expresi&oacute;n superficial de la c&eacute;lula de la alpha1D-AR. Para evaluar la localizaci&oacute;n celular en c&eacute;lulas de m&uacute;sculo liso vascular, desarrollamos un vector adenoviral para la expresi&oacute;n eficiente de una GFP con la etiqueta alpha1D-AR. Tambi&eacute;n se evalu&oacute; la localizaci&oacute;n celular con inmunocitoqu&iacute;mica. Los niveles de calcio intracelular, medici&oacute;n de especies reactivas del ox&iacute;geno y la contracci&oacute;n de la aorta de rata fueron utilizados como medidas de actividad funcional.

El receptor alpha1D-adren&eacute;rgico se expres&oacute; intracelular y junto a aumentos de calcio intracelular y especies reactivas del ox&iacute;geno en las c&eacute;lulas de m&uacute;sculo liso a&oacute;rtico humano.

1-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x53D7;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x4E00;&#x4F53; (AR) &#x4F34;&#x4EBA;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27; (ROS) &#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5242;&#x91CF;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;ROS &#x5347;&#x5E45;&#x5728; 10 &#x5206;&#x949F;&#x5185;&#x660E;&#x663E;&#x548C;&#x6700;&#x5927;&#x540E; 45 &#x5206;&#x949F;&#x957F;&#x671F;&#x6FC0;&#x6D3B; (&gt; 4 h) &#x7684; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;-AR &#x5BFC;&#x81F4;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x589E;&#x52A0;&#x88AB;&#x6321;&#x4F4F;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176; AR &#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x76D0;&#x9178;&#x54CC;&#x5511;&#x55EA;&#x4E3A;&#x9009;&#x62E9;&#x6027; alpha1D AR &#x62EE; 8-[2-[4-(2-methoxyphenyl)-1-piperazinyl]ethyl]-8-azaspiro[4.5]decane-7&#xFF0C;9-&#x8FEA;&#x5965;&#x5185; &#xFF08;BMY 7378)&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4EA7;&#x751F; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176; AR &#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5347;&#x5E45;&#x4E5F;&#x88AB;&#x6321;&#x4F4F; p38 &#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole (SB 202190) &#x548C; NAPDH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; apocynin&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x6FC0;&#x9176; 1/2 &#x6291;&#x5236;&#x5242; 2&#39;-&#x6C28;&#x57FA;-3&#39;-methoxyflavone &#xFF08;PD 98059&#xFF09; &#x6216; c &#x541B; NH2 &#x672B;&#x7AEF;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; 1&#xFF0C;9 pyrazoloanthrone &#x5B89;&#x7279;&#x62C9; (1&#xFF0C;9-cd) &#x5421;&#x5511;-6(2H)-(SP 600125) &#x662F;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x6C34;&#x5E73;&#x6216;&#x51CB;&#x4EA1;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;Pifithrin-&alpha; &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x80BF;&#x7624;&#x6291;&#x5236;&#x86CB;&#x767D; p53&#xFF0C;ros &#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x672A;&#x963B;&#x6B62; alpha1D-AR &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;Alpha1D-AR &#x6FC0;&#x6D3B; p53 &#x6613;&#x4F4D;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x3002;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x79FB;&#x4F4D;&#x7684; p53 &#x963B;&#x6B62;&#x7684;&#x76D0;&#x9178;&#x54CC;&#x5511;&#x55EA;&#x3001; BMY 7378&#x3001; apocynin&#x3001; SB 202190 pifithrin alpha&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4E5F;&#x662F;&#x9488;&#x5BF9; p53 &#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A; alpha1D-AR &#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x9014;&#x5F84;&#x6D89;&#x53CA; p38 &#x548C; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x7684;&#x3002;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x6D89;&#x53CA;&#x80BF;&#x7624;&#x6291;&#x5236;&#x86CB;&#x767D; p53 &#x548C; p53 &#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684; alpha1D AR &#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6570;&#x636E;&#x8FD8;&#x63D0;&#x4F9B; alpha1D AR &#x548C; p53 &#x4E4B;&#x95F4;&#x8054;&#x7CFB;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

Alpha1D-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x901A;&#x8FC7; p53 &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

Activation of the endogenous alpha1-adrenergic receptor (AR) associated with human aortic smooth muscle cells resulted in a dose- and time-dependent increase in the levels of mitochondrial reactive oxygen species (ROS). ROS increases were apparent within 10 min and maximal after 45 min. Prolonged activation (>4 h) of the alpha1-AR resulted in smooth muscle cell apoptosis. Both the increase in ROS and apoptotic cell death were blocked by the nonselective alpha1-AR antagonist prazosin as well as the selective alpha1D-AR antagonist 8-[2-[4-(2-methoxyphenyl)-1-piperazinyl]ethyl]-8-azaspiro[4.5]decane-7, 9-dione (BMY 7378). Increases in ROS and apoptosis produced by alpha1-AR activation were also blocked by the p38 mitogen-activated protein kinase inhibitor 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole (SB 202190) and the NAPDH oxidase inhibitor apocynin. The extracellular signal-regulated kinase 1/2 inhibitor 2'-amino-3'-methoxyflavone (PD 98059) or the c-Jun NH2-terminal kinase inhibitor 1, 9-pyrazoloanthrone anthra(1, 9-cd)pyrazol-6(2H)-one (SP 600125) was without effect on increases in ROS levels or apoptosis. Pifithrin-alpha, an inhibitor of the tumor suppressor protein p53, had no effect on ROS generation but did block alpha1D-AR-induced apoptosis. Activation of the alpha1D-AR resulted in translocation of p53 to the mitochondria. The mitochondrial translocation of p53 was blocked by prazosin, BMY 7378, apocynin, SB 202190, and pifithrin-alpha. Apoptosis was also blocked by small interfering RNA directed against p53. These data show that the alpha1D-AR is coupled to the generation of mitochondrial ROS by a pathway involving p38 and NADPH oxidase. Sustained activation of the alpha1D-AR results in smooth muscle cell apoptosis in a pathway that involves the tumor suppressor protein p53 and the mitochondrial translocation of p53. The data also provide evidence of a linkage between the alpha1D-AR and p53.

The alpha1D-adrenergic receptor induces vascular smooth muscle apoptosis via a p53-dependent mechanism.

Activation des r&eacute;cepteurs alpha1-adr&eacute;nergiques endog&egrave;ne (AR) associ&eacute;es &agrave; des cellules musculaires lisses aortiques humaines a entra&icirc;n&eacute; une augmentation dose-d&eacute;pendante et temps dans les niveaux de mitochondrial reactive oxygen species (ROS). ROS augmentations &eacute;taient apparemment moins de 10 min et maximale apr&egrave;s 45 min. activation prolong&eacute;e (&gt; 4 h) de l&#39;alpha1-AR a abouti &agrave; l&#39;apoptose des cellules musculaires lisses. Les deux l&#39;augmentation de la mort des cellules apoptotiques et de ROS ont &eacute;t&eacute; bloqu&eacute;s par la prazosine d&#39;antagoniste non s&eacute;lectif alpha1-AR ainsi que l&#39;antagoniste s&eacute;lectif alpha1D-AR 8-[2-[4-(2-methoxyphenyl)-1-piperazinyl]ethyl]-8-azaspiro[4.5]decane-7, 9-dione (BMY 7378). Augmentations ROS et apoptose produites par l&#39;activation de l&#39;alpha1-AR ont &eacute;t&eacute; &eacute;galement bloqu&eacute;es par p38 mitogen-activated protein kinase inhibiteur de la 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole (202190 SB) et de la NADPH oxydase inhibiteur apocynin. L&#39;extracellulaire signal-regulated kinase 1/2 inhibiteur de la 2&#39;-amino-3&#39;-flavone (PD 98059) ou inhibiteur de la kinase c-Jun NH2-terminal 1, 9-pyrazoloanthrone anthra (1, 9-cd) pyrazol-6(2H)-un (600125 SP) est sans effet sur l&#39;augmentation des niveaux ROS ou apoptose. Pifithrin-alpha, un inhibiteur de la suppresseur de tumeur p53 prot&eacute;ine, n&#39;avait aucun effet sur la production de ROS, mais n&#39;a bloqu&eacute; l&#39;apoptose induite par l&#39;alpha1D-AR. Activation de l&#39;AR-alpha1D a abouti &agrave; la translocation de la p53 aux mitochondries. La translocation mitochondriale de p53 a &eacute;t&eacute; bloqu&eacute;e par la prazosine, BMY 7378, apocynin, 202190 SB et pifithrin-alpha. L&#39;apoptose a &eacute;t&eacute; bloqu&eacute;e par petits ARN interf&eacute;rents dirig&eacute; contre p53. Ces donn&eacute;es montrent que l&#39;AR-alpha1D est coupl&eacute;e &agrave; la production de ROS mitochondriale par une voie impliquant p38 et NADPH oxydase. Activation soutenue des r&eacute;sultats alpha1D-AR dans l&#39;apoptose des cellules musculaires lisses dans une voie qui implique le prot&eacute;ine suppresseur de tumeur p53 et la translocation mitochondriale de p53. Les donn&eacute;es fournissent &eacute;galement preuve d&#39;un lien entre l&#39;alpha1D-AR et p53.

Le r&eacute;cepteur alpha1D-adr&eacute;nergique induit l&#39;apoptose de muscle lisse vasculaire via un m&eacute;canisme d&eacute;pendant de p53.

Aktivierung der endogenen alpha1-adrenergen Rezeptor (AR) zugeordneten menschlichen Aortenklappe glatten Muskelzellen ergab eine Erh&ouml;hung der Dosis und zeitabh&auml;ngige der mitochondrialen reaktive Sauerstoffspezies (ROS). ROS Zuw&auml;chse waren offensichtlich innerhalb von 10 min und maximal nach 45 min. lang andauernde Aktivierung (&gt; 4H) f&uuml;hrte zu der alpha1-AR Glattmuskel Zelle Apoptosis. Sowohl der Anstieg von ROS und Apoptotic Zellentod geblockt wurden die unselektiv alpha1-AR Antagonist Prazosin sowie der selektiven alpha1D-AR-Antagonist 8-[2-[4-(2-methoxyphenyl)-1-piperazinyl]ethyl]-8-azaspiro[4.5]decane-7, 9-Dione (BMY 7378). Erh&ouml;hungen der ROS und Apoptosis von alpha1-AR-Aktivierung produziert wurden von der p38 Mitogen-aktivierte Protein-Kinase Inhibitor 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole (SB-202190) und die NAPDH-Oxidase Hemmer Apocynin auch blockiert. Die extrazellul&auml;re Signal-regulierte Kinase 1/2-Hemmer 2&#39;-amino-3&#39;-Methoxyflavone (PD-98059) oder der c-Jun NH2-Terminal Kinase-Inhibitor 1, 9-Pyrazoloanthrone Anthra (1, 9-cd) Pyrazol-6(2H)-eins (SP 600125) war ohne Auswirkungen auf den Anstieg der ROS-Ebenen oder Apoptose. Pifithrin-Alpha, ein Inhibitor der der Tumorsuppressor Protein p53, hatte keine Auswirkung auf ROS-Generation aber hat alpha1D-AR-induced Apoptosis blockieren. Aktivierung der alpha1D-AR f&uuml;hrte zu den Mitochondrien Translokation von p53. Die mitochondriale Translokation von p53 wurde von Prazosin, BMY 7378 Apocynin, SB-202190 und Pifithrin-Alpha blockiert. Apoptose wurde auch von kleinen interfering RNA gegen p53 blockiert. Diese Daten zeigen, dass die alpha1D-AR an die Generation der mitochondrialen ROS durch einen Weg mit p38 und NADPH Oxydase gekoppelt ist. Dauerhafte Aktivierung des alpha1D-AR ergibt glatte Muskulatur Zelle Apoptosis in einen Weg, bei der der Tumorsuppressor Protein p53 und die mitochondriale Translokation von p53. Die Daten liefern auch Beweise f&uuml;r eine Verbindung zwischen dem alpha1D-AR und p53.

Die alpha1D-adrenerge Rezeptoren induziert vaskul&auml;rer Glatter Muskelzellen Apoptosis &uuml;ber eine p53-abh&auml;ngige Mechanismus.

Attivazione del recettore alfa1-adrenergico endogeno (AR) associato a cellule di muscolo liscio aortiche umane ha provocato un aumento dose - e tempo-dipendente dei livelli di specie mitocondriale reattive dell&#39;ossigeno (ROS). ROS aumenti sono stati apparente entro 10 min e massimo dopo 45 min attivazione prolungata (&amp;gt; 4 h) di alpha1-AR ha portato nell&#39;apoptosi delle cellule muscolari lisce. Sia l&#39;aumento di ROS e apoptosi morte cellulare sono stati bloccati dalla prazosina antagonista non selettivo alpha1-AR, come pure l&#39;antagonista selettivo alpha1D-AR 8-[2-[4-(2-methoxyphenyl)-1-piperazinyl]ethyl]-8-azaspiro[4.5]decane-7, 9-dione (BMY 7378). Aumenti ROS e apoptosi prodotta dall&#39;attivazione alpha1-AR sono stati anche bloccati da p38 proteina mitogene-attivata della chinasi inibitore 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole (SB 202190) e il NAPDH ossidasi inibitore apocynin. L&#39;inibitore della chinasi segnale-regolata extracellulare 1/2 2 &#39;-amino - 3&#39;-methoxyflavone (PD 98059) o l&#39;inibitore della chinasi c-Jun NH2-terminal 1, 9-pyrazoloanthrone anthra (1, 9-cd) pirazol-6(2H)-uno (SP 600125) era senza effetto sull&#39;aumento nei livelli di ROS o apoptosi. Pifithrin-alpha, un inibitore del soppressore tumorale della proteina p53, ha avuto alcun effetto sulla generazione di ROS, ma ha fatto bloccare l&#39;apoptosi indotta da alpha1D-AR. Attivazione di alpha1D-AR ha portato nella traslocazione di p53 ai mitocondri. La traslocazione mitocondriale di p53 &egrave; stata bloccata da prazosin, BMY 7378, apocynin, SB 202190 e pifithrin-alpha. Apoptosis &egrave; stato bloccato anche da piccolo RNA interferente diretto contro la p53. Questi dati mostrano che il alpha1D-AR &egrave; accoppiato alla generazione di ROS mitocondriali con un sentiero che coinvolge p38 e NADPH ossidasi. Attivazione sostenuta dei risultati alpha1D-AR in apoptosi delle cellule muscolari lisce in un percorso che coinvolge la proteina di soppressore tumorale p53 e la traslocazione mitocondriale di p53. I dati inoltre forniscono la prova di un collegamento tra il alpha1D-AR e p53.

Il recettore alpha1D-adrenergico induce l&#39;apoptosi di muscolatura liscia vascolare tramite un meccanismo di p53-dipendente.

&#x3072;&#x3068;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3; &alpha; 1 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (AR) &#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E; (ROS) &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x7DDA;&#x91CF;&#x3068;&#x6642;&#x9593;&#x4F9D;&#x5B58;&#x5897;&#x52A0;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ROS &#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 10 &#x5206;&#x4EE5;&#x5185;&#x3067;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x3068;&#x6700;&#x5927;&#x3067; 45 &#x5206;&#x306E;&#x9577;&#x5F15;&#x304F;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C; &#xFF08;&#x76EE; 4 h) &alpha; 1-AR &#x306E;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ROS &#x3068;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x7684; &alpha; 1-AR &#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BE;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x9078;&#x629E;&#x7684; alpha1D AR &#x62EE;&#x6297; 8-[2-[4-(2-methoxyphenyl)-1-piperazinyl]ethyl]-8-azaspiro[4.5]decane-7&#x3001;9-&#x30C7;&#x30A3;&#x30AA;&#x30CD; (BMY 7378) &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ROS &#x3068; &alpha; 1 AR &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;p38 &#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole (SB 202190) &#x3068; NAPDH &#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; apocynin &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 1/2 &#x963B;&#x5BB3;&#x5264; 2 &#39;-&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE; - 3&#39;-&#x30E1;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D5;&#x30E9;&#x30DC;&#x30F3; (PD 98059) &#x307E;&#x305F;&#x306F; c Jun NH2 &#x672B;&#x7AEF;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3; 1 9 pyrazoloanthrone &#x30A2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30E9; (1, 9 cd) &#x30D4;&#x30E9;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;-6(2H)-1 (600125 SP) ROS &#x6C34;&#x6E96;&#x3084;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;Pifithrin-&alpha;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x6291;&#x5236;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; p53 &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F; ros &#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304C; alpha1D AR &#x8A98;&#x5C0E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Alpha1D AR &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; p53 &#x306E;&#x8EE2;&#x6D41;&#x306B;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;P53 &#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x8EE2;&#x6D41;&#x306F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BE;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;BMY 7378&#x3001;apocynin&#x3001;SB 202190&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; pifithrin &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x307E;&#x305F; p53 &#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x76E3;&#x7763;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09; RNA &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; alpha1D AR &#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E; ROS &#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x306B; p38 &#x3068; NADPH &#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Alpha1D AR &#x7D50;&#x679C;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x6291;&#x5236;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; p53&#x3001;p53 &#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x8EE2;&#x6D41;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F; alpha1D AR &#x3068; p53 &#x306E;&#x9023;&#x643A;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Alpha1D-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;p53 &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC218;&#xC6A9; &#xC0DD; alpha1 &#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xCCB4; (AR) &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885; (&#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;)&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD22C;&#xC5EC; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xC99D;&#xAC00; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8; &#xC99D;&#xAC00; 45 &#xBD84; &#xC7A5;&#xAE30; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4; 10 &#xBD84; &#xC774;&#xB0B4; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4; (&amp;gt; 4 h) alpha1-AR&#xC758; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC; apoptosis&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC;. &#xB450; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;&#xACFC; apoptotic &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; alpha1-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xC801;&#xC5D0; &#xAC8C; prazosin &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; alpha1D &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xC801; 8-[2-[4-(2-methoxyphenyl)-1-piperazinyl]ethyl]-8-azaspiro[4.5]decane-7, 9-&#xB514;&#xC624;&#xB124; (BMY 7378)&#xAC00; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;&#xACFC; apoptosis alpha1 &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC99D;&#xAC00;&#xB294; p38 &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole (SB 202190)&#xACFC; NAPDH &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; apocynin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638; &#xADDC;&#xC81C; &#xB2C8; 1/2 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#39; 2-&#xC544;&#xBBF8;&#xB178;-3&#39;-methoxyflavone (PD 98059) &#xB610;&#xB294; c 6 &#xC6D4; NH2 &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; 1 9 pyrazoloanthrone anthra (1, 9-cd) pyrazol-6(2H)-1 (SP 600125) &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8; &#xC218;&#xC900;&#xC774; &#xB098; apoptosis&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xD588;&#xB2E4;. Pifithrin &#xC54C;&#xD30C; &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; p 53&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC;, alpha1D &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xC720;&#xB3C4; apoptosis&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD588; &#xC5B4;. Alpha1D AR&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xACB0;&#xACFC; p53&#xC758; &#xC804; &#xC88C;&#xB294; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC5D0;. P53&#xC758; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC804; prazosin, BMY 7378, apocynin, SB 202190 &#xBC0F; pifithrin-&#xC54C;&#xD30C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Apoptosis&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA p53&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xB3C5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; alpha1D &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; p38&#xC640; NADPH &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;&#xC758; &#xC138;&#xB300; &#xACB0;&#xD569;&#xC740; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; p53 &#xBC0F; p53&#xC758; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC804; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC; apoptosis&#xC5D0; alpha1D &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; alpha1D AR &#xBC0F; p53&#xC758; &#xC5F0;&#xB3D9;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;.

Alpha1D-&#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; p53 &#xC885;&#xC18D; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD608;&#xAD00; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; apoptosis&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Activaci&oacute;n del receptor alpha1-adren&eacute;rgico end&oacute;geno (AR) asociada a las c&eacute;lulas del m&uacute;sculo liso a&oacute;rtico humana result&oacute; en un incremento de la dosis y tiempo dependiente en los niveles de especies reactivas de ox&iacute;geno mitocondrial (ROS). ROS aumentos fueron evidentes dentro de 10 minutos y m&aacute;xima despu&eacute;s de la activaci&oacute;n prolongada de 45 min (&gt; 4 h) de la alpha1-AR dio lugar a la apoptosis de las c&eacute;lulas musculares lisas. Tanto el aumento de ROS y apoptosis muerte celular fueron bloqueados por la prazosina de antagonista no selectivo alpha1-AR as&iacute; como el antagonista selectivo alpha1D-AR 8-[2-[4-(2-methoxyphenyl)-1-piperazinyl]ethyl]-8-azaspiro[4.5]decane-7, 9-dione (BMY 7378). Aumentos en ROS y apoptosis producido por la activaci&oacute;n de alpha1-AR tambi&eacute;n fueron bloqueados por el p38 mit&oacute;geno activada de la prote&iacute;na cinasa inhibidor 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole (SB 202190) y la NAPDH oxidasa inhibidor apocynin. La quinasa regulada por se&ntilde;al extracelular 1/2 inhibidor 2&#39;-amino-3&#39;-methoxyflavone (PD 98059) o el inhibidor de la quinasa c-Jun NH2-terminal 1, 9-pyrazoloanthrone anthra (1, 9-cd) pirazol-6(2H)-uno (600125 SP) estaba sin efecto aumentos en los niveles ROS o apoptosis. Pifithrin-alfa, un inhibidor de la p53 de prote&iacute;na supresora de tumor, no influy&oacute; en la generaci&oacute;n de ROS, pero bloquear la apoptosis inducida por alpha1D-AR. Activaci&oacute;n de la alpha1D-AR result&oacute; en la translocaci&oacute;n de p53 a las mitocondrias. La translocaci&oacute;n mitocondrial de p53 fue bloqueada por el prazos&iacute;n, BMY 7378, apocynin, SB 202190 y pifithrin-alfa. Apoptosis tambi&eacute;n fue bloqueado por ARN interferente peque&ntilde;o dirigido contra p53. Estos datos demuestran que el alpha1D-AR est&aacute; acoplado a la generaci&oacute;n de ROS mitocondrial por una v&iacute;a que implica p38 y NADPH oxidasa. Activaci&oacute;n sostenida de los resultados de la alpha1D-AR en la apoptosis de las c&eacute;lulas musculares lisas en una v&iacute;a que implica la prote&iacute;na p53 supresora de tumor y la translocaci&oacute;n mitocondrial de p53. Los datos tambi&eacute;n demuestran un v&iacute;nculo entre el alpha1D-AR y p53.

El receptor alpha1D-adren&eacute;rgico induce apoptosis de m&uacute;sculo liso vascular mediante un mecanismo dependiente de p53.

&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; T (cTnT) &#x662F;&#x8C03;&#x8282;&#x5FC3;&#x810F;&#x808C;&#x8089;&#x6536;&#x7F29;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x548C;&#x591A;&#x6837;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x4E0E;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x7EC6;&#x4E1D;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x78F7;&#x3002;&#x5176; N &#x7AEF;&#x6709;&#x4E00;&#x534A;&#x662F;&quot;&#x80F6;&#x6C34;&quot;&#x951A;&#x5B9A;&#x5230;&#x539F;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x65E8;&#x5728;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x5C3E;&#x533A;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0D;&#x88AB;&#x89C6;&#x4E3A;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x7406;&#x89E3;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; cTnT &#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x5C3E;&#x533A;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x5220;&#x9664; (&#x6C28;&#x57FA;&#x9178; 1-91) &#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7ECF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x808C;&#x4E1D;&#x7ED3;&#x6784;&#x7B49;&#x8F74;&#x6D4B;&#x529B;&#x751F;&#x4EA7;&#x3001; &#x7B49;&#x8DDD; ATPase &#x901F;&#x7387;&#x548C;&#x6ED1;&#x52A8;&#x901F;&#x5EA6;&#x7684;&#x7EC6;&#x4E1D;&#x3002;Chemomechanical &#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4F30;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; (cTn) &#x4EA4;&#x706B;&#x4E0E;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7BB1;&#x8BBE;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x5305;&#x542B;&#x5DF2;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684; cTnT &#x6D17;&#x6DA4;&#x900F;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5236;&#x5242;&#x4E2D;&#x88AB;&#x622A;&#x65AD;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF09; &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; &#x2170; &#x548C; cTnC&#x3002;&#x53BB;&#x9664; cTnT N-&#x7AEF;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178; 1-91 (cTnT del) &#x589E;&#x5F3A;&#x4E86; nonsaturating &#x7ECF;&#x808C;&#x4E1D;&#x7ED3;&#x6784;&#x54CD;&#x5E94;&#x7EA7;&#x522B; &#xFF08;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x8303;&#x56F4;&#xFF09;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x9971;&#x548C;&#x7ECF;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x662F;&#x51CF;&#x5C11;&#x5F20;&#x529B;&#x548C; ATPase &#x7387;&#x3002;&#x4E00;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; cTnT del &#x6291;&#x5236;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#xFF0C;&quot;&#x91CD;&#x542F;&quot;&#x808C;&#x4E1D;&#x7ED3;&#x6784;&#x7ECF;&#x53CD;&#x5E94;&#x80FD;&#x529B;&#x56DE;&#x5230;&#x63A7;&#x5236;&#x6C34;&#x5E73;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x589E;&#x654F;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x53E6;&#x4E00;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4F1A;&#x635F;&#x5BB3;&#x7B49;&#x8F74;&#x6D4B;&#x5F20;&#x529B;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C; ATPase &#x7387;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; cTnT (cTnT P) &#x5DEE;&#x5F02;&#x8C03;&#x8282;&#x7D27;&#x5F20;&#x6210;&#x672C; &#xFF08;&#x8DE8;&#x6865;&#x5355;&#x8F66;&#x5229;&#x7387;&#x6307;&#x6570;&#xFF09;&#xFF1A; &#x7BB1;-&#x5FB7;&#x5C14;-P &#x4E0A;&#x5347;&#x548C;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x5B8C;&#x597D;&#x7BB1;-wt-&#x4F53;&#x80B2;&#x7B49;&#x8F74;&#x6D4B;&#x5149;&#x7EA4;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x50CF;&#x7684; cTn del &#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x8584;&#x4E1D;&#x6ED1;&#x901F;&#x662F;&#x5BF9;&#x7ECF;&#x4E0E;&#x7BB1; wt.&#x78F7;&#x9178;&#x5316; cTnT &#x76F8;&#x6BD4;&#x66F4;&#x52A0;&#x654F;&#x611F; (&#x662F;&#x5426; cTnT del &#x6216;-wt) &#x538B;&#x4F4E;&#x6ED1;&#x52A8;&#x901F;&#x5EA6;&#x548C;&#x5173;&#x8054;&#x7ECF;&#x8131;&#x654F;&#x7684;&#x6ED1;&#x52A8;&#x901F;&#x5EA6;&#x7684;&#x7EC6;&#x4E1D;&#x3002;

&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; T N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x5220;&#x9664;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5BF9;&#x808C;&#x4E1D;&#x7ED3;&#x6784;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Cardiac troponin T (cTnT) is a phosphoprotein that modulates cardiac muscle contraction through its extensive and diverse interactions with neighboring thin filament proteins. Its N-terminal half is the "glue" that anchors the troponin complex to tropomyosin-actin. Until now, studies aimed at investigating the role of the N-terminal tail region have not considered the effects of phosphorylation. To understand better the regulatory role of the N-terminal tail region of phosphorylated cTnT, we investigated the functional effects of N-terminal deletion (amino acids 1-91) and phosphorylation on Ca(2+) dependence of myofilament isometric force production, isometric ATPase rate, and thin filament sliding speed. Chemomechanical profiles were assessed in detergent permeabilized fiber preparations where the native troponin (cTn) was exchanged with recombinant cTn engineered to contain modified cTnT (truncated, phosphorylated) in the presence of wild-type cTnI and cTnC. Removal of the cTnT N-terminal amino acids 1-91 (cTnT-del) enhances myofilament responsiveness to nonsaturating Ca(2+) levels (the physiological range in cardiac myocytes). However, at saturating Ca(2+) levels, there is a reduction in isometric tension and ATPase rate. On one hand, phosphorylation of cTnT-del attenuates the sensitizing effect induced by truncation of the N-terminal tail, "resetting" myofilament Ca(2+) responsiveness back to control levels. On the other hand, it impairs isometric tension development and ATPase rate. Interestingly, phosphorylation of cTnT (cTnT-P) differentially regulates tension cost (an index of cross-bridge cycling rate): increased by cTn-del-P and decreased by intact cTn-wt-P. Like the isometric fiber data, sliding speed of thin filaments regulated by cTn-del is more sensitive to Ca(2+) compared with cTn-wt. Phosphorylation of cTnT (whether cTnT-del or -wt) depresses sliding speed and is associated with Ca(2+) desensitization of thin filament sliding speed.

Impact of cardiac troponin T N-terminal deletion and phosphorylation on myofilament function.

Troponine T (cTnT) est une phosphoprot&eacute;ine qui module la contraction du muscle cardiaque par l&#39;interm&eacute;diaire de ses interactions vaste et diversifi&eacute;es avec les voisins de prot&eacute;ines des filaments minces. Son N-terminal la moiti&eacute; est de la &laquo; colle &raquo; qui ancre la troponine complexe actine-tropomyosine. Jusqu&#39;&agrave; pr&eacute;sent, les &eacute;tudes visant &agrave; d&eacute;terminer le r&ocirc;le de la r&eacute;gion de queue amino-terminale n&#39;ont envisag&eacute; les effets de la phosphorylation. Pour mieux comprendre le r&ocirc;le r&eacute;gulateur de la r&eacute;gion N-terminale de queue de cTnT phosphoryl&eacute;e, nous avons &eacute;tudi&eacute; les effets fonctionnels de la suppression de N-terminal (acides amin&eacute;s 1-91) et la phosphorylation sur Ca(2+) d&eacute;pendance de myofilaments isom&eacute;trique force production, taux d&#39;ATPase isom&eacute;trique et mince filament vitesse de glissement. Mi-chimique profils ont &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;es dans des pr&eacute;parations de detergent fibre perm&eacute;abilis&eacute;es o&ugrave; la troponine native (cTn) a &eacute;t&eacute; &eacute;chang&eacute;e avec cTn recombinant con&ccedil;u pour contenir cTnT mis &agrave; jour le (tronqu&eacute;, phosphoryl&eacute;e) en pr&eacute;sence de TnIc sauvage et cTnC. Enl&egrave;vement de la cTnT N-terminale des acides amin&eacute;s 1-91 (cTnT-del) am&eacute;liore la r&eacute;activit&eacute; de myofilaments &agrave; Ca(2+) non saturantes niveaux (les limites physiologiques dans les myocytes cardiaques). Toutefois, &agrave; saturer les niveaux de Ca(2+), il y a une r&eacute;duction de la tension isom&eacute;trique et taux d&#39;ATPase. D&#39;une part, la phosphorylation de cTnT-del att&eacute;nue l&#39;effet sensibilisant induite par la troncature de la queue du N-terminal, &laquo; r&eacute;initialisation &raquo; r&eacute;activit&eacute; Ca(2+) myofilaments retour aux niveaux de contr&ocirc;le. En revanche, il alt&egrave;re le d&eacute;veloppement de tension isom&eacute;trique et le taux de l&#39;ATPase. Fait int&eacute;ressant, la phosphorylation de cTnT (cTnT-P) r&eacute;glemente diff&eacute;rentiellement co&ucirc;t de tension (un indice du taux de cyclisme de pont-Croix): cTn-del-P a augment&eacute; et diminu&eacute; d&#39;intact cTn-wt-p. Comme les donn&eacute;es de fibre isom&eacute;trique, glissant vitesse de minces filaments r&eacute;glement&eacute;es par le cTn-del est plus sensible aux Ca(2+) par rapport &agrave; la Phosphorylation de cTnT cTn-m/m (si cTnT-del ou -wt) diminue la vitesse de glissement et est associ&eacute; &agrave; d&eacute;sensibilisation de ca(2+) du filament mince, vitesse de glissement.

Impact de la suppression de N-terminal de troponine T et de la phosphorylation sur la fonction des myofilaments.

Kardiale Troponin T (cTnT) ist ein Phosphoprotein, die Kontraktion der Herzmuskulatur durch seine umfangreichen und vielf&auml;ltigen Interaktionen mit benachbarten d&uuml;nnen Filamenten Proteine moduliert. Die N-terminale H&auml;lfte ist der &quot;Klebstoff&quot;, der die Troponin-Komplex gegen Tropomyosin-Actin verankert. Bis jetzt betrachteten Studien zur Untersuchung der Rolle der N-terminalen Schwanz Region nicht die Auswirkungen der Phosphorylierung. Um besser zu verstehen, die Rolle der N-terminalen Schwanz Region phosphorylierten cTnT, untersuchten wir die funktionellen Auswirkungen der N-terminalen l&ouml;schen (Aminos&auml;uren 1-91) und Phosphorylierung auf Ca(2+) Abh&auml;ngigkeit von Myofilament isometrische Kraft, Produktion, isometrische ATPase-Rate und d&uuml;nnen Filamenten, die Gleitgeschwindigkeit. Chemomechanical-Profile wurden beurteilt in Sp&uuml;lmittel permeabilized Faser-Zubereitungen, wo die native Troponin (cTn) mit rekombinanten cTn so konstruiert, dass ge&auml;nderte cTnT enthalten ausgetauscht wurde (gek&uuml;rzt, phosphoryliert) in Anwesenheit von Wildtyp cTnI und cTnC. Entfernung von der cTnT N-terminalen Aminos&auml;uren 1-91 (cTnT-del) verbessert die Myofilament Reaktion auf nonsaturating Ca(2+) Ebenen (der physiologische Bereich in kardialen Myozyten). Bei S&auml;ttigung Ca(2+) Ebenen, gibt es jedoch ein R&uuml;ckgang der ATPase Komplettpreise, isometrische Spannung. Einerseits d&auml;mpft die Phosphorylierung von cTnT-del die sensibilisierende Wirkung induziert durch Abschneiden der N-terminalen Schwanz, &quot;zur&uuml;cksetzen&quot; Myofilament Ca(2+) Reaktionsf&auml;higkeit wieder auf ein Niveau der Kontrolle. Auf der anderen Seite, beeintr&auml;chtigt es die ATPase Komplettpreise, isometrische Spannung Entwicklung. Interessanterweise Phosphorylierung von cTnT (cTnT-P) differentiell reguliert Spannung Kosten (ein Index der Kreuz-Br&uuml;cke-Radfahren-Rate): erh&ouml;hte sich um cTn-del-P und verringerten intakt cTn-wt-P. Wie die isometrische Faser-Daten, Gleitgeschwindigkeit d&uuml;nner Filamente von cTn-del reguliert ist empfindlicher gegen&uuml;ber Ca(2+) gegen&uuml;ber cTn-WT Phosphorylierung von cTnT (ob cTnT-del oder -wt) dr&uuml;ckt, Gleitgeschwindigkeit und Ca(2+) Desensibilisierung von d&uuml;nnen Filamenten, die Gleitgeschwindigkeit zugeordnet ist.

Auswirkungen der Herztroponin T N-Terminal l&ouml;schen und Phosphorylierung auf Myofilament-Funktion.

Troponina cardiaca T (cTnT) &egrave; una fosfoproteina che modula la contrazione del muscolo cardiaco attraverso la sua vaste e diversificate interazioni con la vicina proteine dei filamenti sottili. La N-terminale met&agrave; &egrave; la &quot;colla&quot; che ancore della troponina complessa tropomiosina-actina. Fino ad ora, gli studi volti a indagare il ruolo della regione di coda del N-terminale non hanno considerato gli effetti della fosforilazione. Per capire meglio il ruolo normativo della regione coda N-terminale di cTnT fosforilati, abbiamo studiato gli effetti funzionali dell&#39;eliminazione del N-terminale (aminoacidi 1-91) e la fosforilazione sulla dipendenza da Ca(2+) di miofilamenti isometrico della forza produzione, tasso di ATPasi isometrica e sottile filamento velocit&agrave; di scorrimento. Chemiomeccanica profili sono stati valutati in preparati di fibra permeabilized detergente dove nativa della troponina (cTn) &egrave; stata scambiata con cTn ricombinante ingegnerizzata per contenere cTnT modificato (troncato, fosforilata) in presenza di selvaggio-tipo n e cTnC. Rimozione di cTnT aminoacidi 1-91 N-terminale (cTnT-del) migliora la reattivit&agrave; miofilamenti al Ca(2+) nonsaturating livelli (il range fisiologico in miociti cardiaci). Tuttavia, a Ca(2+) livelli di saturazione, c&#39;&egrave; una riduzione della tensione isometrica e tasso di ATPasi. Da un lato, la fosforilazione di cTnT-del attenua l&#39;effetto sensibilizzante indotta dal troncamento della coda N-terminale, &quot;reset&quot; reattivit&agrave; Ca(2+) miofilamenti torna a livelli di controllo. D&#39;altra parte, altera lo sviluppo tensione isometrica e tasso di ATPasi. Curiosamente, la fosforilazione di cTnT (cTnT-P) regola differenzialmente costo tensione (indice di tasso di ciclismo cross-bridge): aumentato da cTn-del-P e diminuito da intatto cTn-wt-P. Come i dati fibra isometrica, scorrevole Velocit&agrave; di sottili filamenti regolata da cTn-del &egrave; pi&ugrave; sensibile alla Ca(2+) confrontato con cTn-WT fosforilazione di cTnT (se cTnT-del o -wt) deprime la velocit&agrave; di scorrimento ed &egrave; associato con Ca(2+) desensibilizzazione del filamento sottile velocit&agrave; di scorrimento.

Impatto dell&#39;eliminazione di troponina cardiaca T N-terminale e la fosforilazione sulla funzione di miofilamenti.

&#x5FC3;&#x7B4B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3; T (cTnT) &#x5FC3;&#x7B4B;&#x53CE;&#x7E2E;&#x7D30;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8FD1;&#x96A3;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x304B;&#x3064;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x534A;&#x5206;&#x306F;&#x300C;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x5264;&#x300D;&#x3002;&#x4ECA;&#x307E;&#x3067;&#x3001;N &#x672B;&#x7AEF;&#x5C3E;&#x90E8;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x76EE;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8003;&#x616E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178; cTnT &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x5C3E;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; N &#x672B;&#x7AEF;&#x524A;&#x9664; &#xFF08;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178; 1 91&#xFF09; &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7B49;&#x5C3A;&#x6027;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5F37;&#x5236;&#x7684;&#x306B;&#x751F;&#x7523;&#x3001;&#x7B49;&#x5C3A;&#x6027; atp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x308A;&#x901F;&#x5EA6;&#x3002;&#x30B1;&#x30E2;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30AB;&#x30EB; &#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3; (cTn) &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x5909;&#x66F4; cTnT &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; cTn &#x3068;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6D17;&#x5264;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x6E96;&#x5099;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F; (&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;) &#x91CE;&#x751F;&#x578B; cTnI &#x3068; cTnC &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3002;CTnT N &#x672B;&#x7AEF;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178; 1-91 &#x306E;&#x9664;&#x53BB; &#xFF08;cTnT-&#x30C7;&#x30EB;&#xFF09; &#x5F37;&#x5316; nonsaturating &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; (&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x7BC4;&#x56F2;)&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x98FD;&#x548C;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7B49;&#x5C3A;&#x6027;&#x5F35;&#x529B;&#x3068; ATPase &#x7387;&#x524A;&#x6E1B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;cTnT &#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x300C;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x623B;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x300D;N &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x5C3E;&#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5897;&#x611F;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4E00;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x7B49;&#x5C3A;&#x6027;&#x5F35;&#x529B;&#x958B;&#x767A;&#x3068; ATPase &#x7387;&#x640D;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;cTnT &#xFF08;cTnT P&#xFF09; &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7DCA;&#x5F35;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8; (&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9; &#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30B8; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7387;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;) &#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#xFF1A; cTn &#x30C7;&#x30EB; P &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x8005;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E; cTn wt P. &#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7B49;&#x5C3A;&#x6027;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x3059;&#x3079;&#x308A;&#x901F;&#x5EA6; cTn-&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x7D30;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x7DCF;&#x91CD;&#x91CF; cTnT &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3059; &#xFF08;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B; cTnT del &#x307E;&#x305F;&#x306F; -wt) &#x3059;&#x3079;&#x308A;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x62BC;&#x4E0B;&#x3057;&#x3066;&#x3059;&#x3079;&#x308A;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x7D30;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x8131;&#x611F;&#x4F5C;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5FC3;&#x7B4B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3; T N &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB;&#x524A;&#x9664;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3002;

&#xC2EC;&#xC7A5; troponin T (cTnT)&#xC640; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xC587;&#xC740; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xADFC;&#xC721; &#xC218;&#xCD95; &#xBCC0;&#xC870; phosphoprotein &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xC808;&#xBC18;&#xC740; troponin tropomyosin &#xB9D0;&#xB77C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC575;&#xCEE4; &quot;&#xC811;&#xCC29;&#xC81C;&quot;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xAF2C;&#xB9AC; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xACA8;&#xB0E5; &#xD558;&#xB294; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB418;&#xC9C0;. Phosphorylated Ctnt&#xC758; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xAF2C;&#xB9AC; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560;, &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xC6B0;&#xB9AC; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC0AD;&#xC81C; (&#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; 1-91)&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC; &#xBC0F; myofilament &#xB4F1;&#xAC01;&#xC758; Ca(2+) &#xC758;&#xC874;&#xC5D0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0DD;&#xC0B0;, &#xC544;&#xC774;&#xC18C;&#xBA54;&#xD2B8;&#xB9AD; ATPase &#xC18D;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB529; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC587;&#xC740; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Chemomechanical &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; cTn &#xC218;&#xC815;&#xB41C; cTnT &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; troponin (cTn)&#xB97C; &#xAD50;&#xD658; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xC81C; permeabilized &#xC12C;&#xC720; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; (&#xC798;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;, phosphorylated) &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; Ctni&#xC640; Ctnc&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;. &#xC81C;&#xAC70; cTnT N &#xB9E8;&#xB05D; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; 1-91 (cTnT del) &#xD5A5;&#xC0C1; myofilament &#xC751;&#xB2F5; nonsaturating Ca(2+) &#xC218;&#xC900; (&#xC2EC;&#xC7A5; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xBC94;&#xC704;). &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Ca(2+) &#xC218;&#xC900; &#xD3EC;&#xD654;&#xC5D0; &#xC544;&#xC774;&#xC18C;&#xBA54;&#xD2B8;&#xB9AD; &#xAE34;&#xC7A5;&#xACFC; ATPase &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xAC00; &#xC774;&#xB2E4;. &#xD55C; &#xC190;&#xC5D0; cTnT &#xB378;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &quot;&#xC7AC;&#xC124;&#xC815;&quot; myofilament Ca(2+) &#xC751;&#xB2F5; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC2DC; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xAF2C;&#xB9AC; &#xC790;&#xB974;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; sensitizing &#xD6A8;&#xACFC; &#xC57D;&#xD654;. &#xB2E4;&#xB978; &#xD55C;&#xD3B8;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC544;&#xC774;&#xC18C;&#xBA54;&#xD2B8;&#xB9AD; &#xAE34;&#xC7A5; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xACFC; ATPase &#xC18D;&#xB3C4; &#xC190;&#xC0C1;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, cTnT (cTnT-P)&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xCC28;&#xB3D9; &#xAE34;&#xC7A5; &#xBE44;&#xC6A9; (&#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xBE0C;&#xB9AC;&#xC9C0; &#xC790;&#xC804;&#xAC70; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC778;&#xB371;&#xC2A4;) &#xC870;&#xC808;: cTn-&#xB378;-P &#xC99D;&#xAC00; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC18C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; cTn wt. &#xC544;&#xC774;&#xC18C;&#xBA54;&#xD2B8;&#xB9AD; &#xC12C;&#xC720; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC640; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; Ca(2+) cTn &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; Ctnt&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB354; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C;&#xC740; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB529; cTn &#xB378;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xC587;&#xC740; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; (&#xC5EC;&#xBD80; cTnT del &#xB610;&#xB294;-wt) &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB529; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC6B0;&#xC6B8; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558; &#xACE0; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB529; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC587;&#xC740; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC758; Ca(2+) &#xB454;&#xAC10; &#xC5F0;&#xAD00;.

&#xC2EC;&#xC7A5; troponin T N-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC0AD;&#xC81C; &#xBC0F; myofilament &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;.

Troponina T (cTnT) es una fosfoprote&iacute;na que modula la contracci&oacute;n del m&uacute;sculo cardiaco a trav&eacute;s de sus amplias y diversas interacciones con los vecinos de prote&iacute;nas de filamentos finos. Su N-terminal la mitad es el &quot;pegamento&quot; que ancla el complejo a tropomiosina-actina troponina. Hasta ahora, los estudios dirigidos a investigar el papel de la regi&oacute;n N-terminal de la cola no han considerado los efectos de la fosforilaci&oacute;n. Para comprender mejor el papel regulador de la regi&oacute;n N-terminal de la cola de cTnT fosforilada, investigamos los efectos funcionales de la canceladura del N-terminal (amino&aacute;cidos 1-91) y fosforilaci&oacute;n en dependencia de la CA de miofilamentos isom&eacute;trica fuerza de producci&oacute;n, tasa de ATPasa isom&eacute;trica y filamento fino, velocidad de desplazamiento. Quimiomec&aacute;nica perfiles se evaluaron en los preparativos de la fibra detergente permeabilized donde la troponina nativa (cTn) se intercambiaba con cTn recombinante dise&ntilde;ado para contener cTnT modificado (truncado, fosforilados) en presencia de cTnI salvaje-tipo y cTnC. Eliminaci&oacute;n de la cTnT N-terminal amino&aacute;cidos 1-91 (cTnT-Supr) mejora la respuesta Miofilamento a CA nonsaturating niveles (la gama fisiol&oacute;gica en miocitos cardiacos). Sin embargo, a saturar los niveles de CA, hay una reducci&oacute;n en la tensi&oacute;n isom&eacute;trica y tasa de ATPasa. Por un lado, fosforilaci&oacute;n de reposo-del aten&uacute;a el efecto de sensibilizaci&oacute;n inducido por el truncamiento de la cola del N-terminal, &quot;empezar de cero&quot; capacidad de respuesta de miofilamentos CA hacia niveles de control. Por otra parte, que perjudique el desarrollo de la tensi&oacute;n isom&eacute;trica y tasa de ATPasa. Curiosamente, la fosforilaci&oacute;n de cTnT (cTnT-P) regula diferencialmente costo de tensi&oacute;n (un &iacute;ndice de tasa de ciclismo Cruz-Puente): aumentado por cTn-del-P y disminuido por intacto cTn-wt-P. Como los datos de fibra isom&eacute;trica, velocidad de filamentos finos regulada por cTn-de desplazamiento es m&aacute;s sensible a CA en comparaci&oacute;n con la fosforilaci&oacute;n de la cTn-pesos de reposo (si reposo-del o -wt) deprime la velocidad de desplazamiento y se asocia con la desensibilizaci&oacute;n de la CA del filamento fino, velocidad de desplazamiento.

Impacto de la eliminaci&oacute;n del N-terminal de troponina T y fosforilaci&oacute;n en funci&oacute;n de los miofilamentos.

&#x7ECF;&#x8131;&#x654F;&#x7684; myofilaments &#x88AB;&#x6307;&#x793A;&#x4E3A;&#x53D1;&#x75C5;&#x7684;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6027;&#x6269;&#x5F20;&#x578B;&#x5FC3;&#x808C;&#x75C5; (DCM) &#x4E0E;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178; 210 (DeltaK210) &#x5728;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; T (cTnT) &#x5220;&#x9664;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x3002;DeltaK210 &#x6572;&#x5165;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5BC6;&#x5207;&#x627C;&#x8981;&#x91CD;&#x8FF0;&#x8BB0;&#x8F7D;&#x8FD9;&#x7A81;&#x53D8;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x76F8;&#x5F53;&#x591A;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x652F;&#x6301;&#x547D;&#x9898;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F;&#x5FC3;&#x808C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x662F;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x52A0;&#x5267;&#x8BE5;&#x5220;&#x9664;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; K210 &#x5220;&#x9664;&#x5BF9;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x503E;&#x5411;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;DeltaK210 &#x5FC3;&#x4ECE;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F;&#x808C;&#x539F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; &#x2170; (46%)&#x3001; cTnT &#xFF08;30%&#xFF09; &#x548C; MyBP-C (32%) &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x63A7;&#x4EF6;&#x76F8;&#x6BD4;&#x8DCC;&#x5E45;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7279;&#x5F02;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x5206;&#x6790;&#x5728;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5FC3;&#x808C;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684; cTnT-Thr(203) (28%) &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; cTnI-Ser(23/24) (41%)&#x3002;&#x4F53;&#x5916;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x8868;&#x660E; DeltaK210 &#x589E;&#x52A0; cTnT-Thr(203) &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x503E;&#x5411;&#x4E09;&#x500D;&#xFF0C;&#x800C;&#x65E0;&#x9700;&#x66F4;&#x6539; cTnI-Ser(23/24) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;CTnT DeltaK210 &#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x62DF;&#x8868;&#x660E; cTnT &#x87BA;&#x65CB; (&#x6B8B;&#x7559; 203-224) &#x7684;&#x9759;&#x7535;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x73AF;&#x5883;&#x5468;&#x56F4; Thr(203)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x6216;&#x8BB8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x89E3;&#x91CA;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684; PKC &#x4F9D;&#x8D56;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8868;&#x660E; cTnT DeltaK210 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; &#x2170; cTnT &#x586B;&#x5145;&#x7269;&#x4E0E;&#x96C6;&#x4F53;&#x76F8;&#x6BD4;&#x66F4;&#x5F3A;&#x3001; &#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x8868;&#x660E;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5FC3;&#x808C;&#x75C5;&#x7684; DeltaK210 &#x6709;&#x6DF1;&#x8FDC;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5F71;&#x54CD;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; &#x2170; cTnT &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x5173;&#x952E;&#x5FC3;&#x808C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;

&#x5FC3;&#x808C;&#x75C5;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5220;&#x9664; K210 &#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; T &#x6539;&#x53D8;&#x5FC3;&#x808C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x503E;&#x5411;&#x3002;

Ca(2+) desensitization of myofilaments is indicated as a primary mechanism for the pathogenesis of familial dilated cardiomyopathy (DCM) associated with the deletion of lysine 210 (DeltaK210) in cardiac troponin T (cTnT). DeltaK210 knock-in mice closely recapitulate the clinical phenotypes documented in patients with this mutation. Considerable evidence supports the proposition that phosphorylation of cardiac sarcomeric proteins is a key modulator of function and may exacerbate the effect of the deletion. In this study we investigate the impact of K210 deletion on phosphorylation propensity of sarcomeric proteins. Analysis of cardiac myofibrils isolated from DeltaK210 hearts identified a decrease in phosphorylation of cTnI (46%), cTnT (30%) and MyBP-C (32%) compared with wild-type controls. Interestingly, immunoblot analyses with phospho-specific antibodies show augmented phosphorylation of cTnT-Thr(203) (28%) and decreased phosphorylation of cTnI-Ser(23/24) (41%) in mutant myocardium. In vitro kinase assays indicate that DeltaK210 increases phosphorylation propensity of cTnT-Thr(203) three-fold, without changing cTnI-Ser(23/24) phosphorylation. Molecular modeling of cTnT-DeltaK210 structure reveals changes in the electrostatic environment of cTnT helix (residues 203-224) that lead to a more basic environment around Thr(203), which may explain the enhanced PKC-dependent phosphorylation. In addition, yeast two-hybrid assays indicate that cTnT-DeltaK210 binds stronger to cTnI compared with cTnT-wt. Collectively, our observations suggest that cardiomyopathy-causing DeltaK210 has far-reaching effects influencing cTnI-cTnT binding and posttranslational modifications of key sarcomeric proteins.

Cardiomyopathy-causing deletion K210 in cardiac troponin T alters phosphorylation propensity of sarcomeric proteins.

Ca(2+) d&eacute;sensibilisation des myofilaments est indiqu&eacute;e comme un m&eacute;canisme primaire de la pathogen&egrave;se de la cardiomyopathie dilat&eacute;e (DCM) associ&eacute;e &agrave; la suppression de la lysine 210 (DeltaK210) dans la troponine T (cTnT). DeltaK210 souris knock-in r&eacute;capitulent &eacute;troitement les ph&eacute;notypes cliniques document&eacute;es chez les patients atteints de cette mutation. De nombreux t&eacute;moignages appuient la proposition que la phosphorylation des prot&eacute;ines du sarcom&egrave;re cardiaques est un modulateur cl&eacute; de fonction et peut aggraver l&#39;effet de la suppression. Dans cette &eacute;tude, nous &eacute;tudions l&#39;impact de la suppression de K210 sur la propension de la phosphorylation des prot&eacute;ines du sarcom&egrave;re. Analyse des myofibrilles cardiaques isol&eacute;s de coeurs de DeltaK210 fait ressortir une diminution de la phosphorylation de TnIc (46 %), cTnT (30 %) et MaBP-C (32 %) compar&eacute;e aux t&eacute;moins de type sauvage. Fait int&eacute;ressant, les analyses immunoblot avec anticorps phospho-sp&eacute;cifiques montrent augment&eacute;e de la phosphorylation de cTnT-Thr(203) (28 %) et une diminution de la phosphorylation de cTnI-Ser(23/24) (41 %) dans le myocarde mutant. Kinase in vitro tests indiquent que DeltaK210 augmente la propension de la phosphorylation de cTnT-Thr(203) tripl&eacute;, sans changer la phosphorylation de cTnI-Ser(23/24). Mod&eacute;lisation mol&eacute;culaire de cTnT-DeltaK210 structure r&eacute;v&egrave;le des changements dans l&#39;environnement &eacute;lectrostatique de cTnT helix (r&eacute;sidus 203-224) qui conduisent &agrave; un environnement plus basique autour de Thr(203), ce qui peut expliquer la phosphorylation d&eacute;pendante du PKC am&eacute;lior&eacute;e. En outre, essais de deux-hybride de levure indiquent que cTnT-DeltaK210 lie plus forts TnIc comparativement &agrave; cTnT-poids collectivement, nos observations sugg&egrave;rent que causant la cardiomyopathie DeltaK210 a des effets profonds qui influencent la liaison cTnI-cTnT et les modifications post-traductionnelles des prot&eacute;ines du sarcom&egrave;re cl&eacute;s.

Cardiomyopathie causant suppression K210 dans la troponine T modifie la propension de la phosphorylation des prot&eacute;ines du sarcom&egrave;re.

Ca(2+) Desensibilisierung des Myofilaments wird als prim&auml;re Mechanismus f&uuml;r die Pathogenese der famili&auml;re dilatative Kardiomyopathie (DCM) verbunden mit der Streichung von Lysin 210 (DeltaK210) in kardialen Troponin T (cTnT) angegeben. DeltaK210 Knock-in M&auml;usen rekapitulieren eng die klinischen Ph&auml;notypen bei Patienten mit dieser Mutation dokumentiert. Betr&auml;chtlichen Beweis unterst&uuml;tzt die These, dass Phosphorylierung der kardialen Sarkomerproteine Proteine ist eine wichtige Funktion-Modulator und kann die Wirkung des L&ouml;schvorgangs verschlimmern. In dieser Studie untersuchen wir den Einfluss des K210 l&ouml;schen auf Phosphorylierung Neigung der Sarkomerproteine Proteine. Analyse der kardialen Myofibrillen isoliert aus DeltaK210 Herzen identifiziert einen R&uuml;ckgang der Phosphorylierung von cTnI (46 %), cTnT (30 %) und MyBP-C (32 %) im Vergleich zu Wildtyp Steuerelemente. Interessanterweise zeigen Immunoblot Analysen mit Phospho-spezifische Antik&ouml;rper erg&auml;nzt Phosphorylierung von cTnT-Thr(203) (28 %) und Phosphorylierung von cTnI-Ser(23/24) (41 %) sank in mutant Myokard. In-vitro-Kinase Proben zeigen, dass DeltaK210 Phosphorylierung Neigung des cTnT-Thr(203), das Dreifache erh&ouml;ht ohne cTnI-Ser(23/24) Phosphorylierung. Molekulare Modellierung cTnT-DeltaK210-Struktur zeigt &Auml;nderungen in der elektrostatischen cTnT Helix (R&uuml;ckst&auml;nde 203-224), die zu einer grundlegenden Umgebung rund um Thr(203), was, die verbesserte PKC-abh&auml;ngige Phosphorylierung erkl&auml;ren k&ouml;nnte. Zus&auml;tzlich zeigen Hefe-zwei-Hybrid-Assays, dass cTnT-DeltaK210 bindet st&auml;rker an cTnI cTnT-WT Kollektiv gegen&uuml;ber, unsere Beobachtungen legen nahe, dass Kardiomyopathie verursachender DeltaK210 hat weit reichende Auswirkungen cTnI-cTnT-Bindung und posttranslationale Modifikationen der wichtigsten Sarkomerproteine Proteine zu beeinflussen.

Kardiomyopathie-verursachen l&ouml;schen K210 in Herztroponin T &auml;ndert Phosphorylierung Neigung der Sarkomerproteine Proteine.

CA(2+) desensibilizzazione dei miofilamenti &egrave; indicato come un meccanismo primario per la patogenesi della cardiomiopatia dilatativa familiare (DCM) associata con l&#39;eliminazione di lisina 210 (DeltaK210) di troponina cardiaca T (cTnT). DeltaK210 knock-in topi strettamente ripassare i fenotipi clinici documentati in pazienti con questa mutazione. Una considerevole evidenza supporta la proposizione che la fosforilazione delle proteine cardiache sarcomero &egrave; un fondamentale modulatore della funzione e possono aggravare l&#39;effetto dell&#39;eliminazione. In questo studio abbiamo indagare l&#39;impatto dell&#39;eliminazione di K210 sulla propensione di fosforilazione delle proteine sarcomero. Analisi di miofibrille cardiaci isolato dai cuori DeltaK210 identificato una diminuzione della fosforilazione di n (46%), cTnT (30%) e MyBP-C (32%) rispetto ai controlli di tipo selvatico. &Egrave; interessante notare, immunoblot analisi con anticorpi fosfo-specifici mostrano aumentata fosforilazione di cTnT-Thr(203) (28%) e diminuito la fosforilazione della cTnI-Ser(23/24) (41%) nel miocardio mutante. Dosaggi chinasi in vitro indicano che DeltaK210 aumenta la propensione di fosforilazione della cTnT-Thr(203) triplo, senza cambiare la fosforilazione cTnI-Ser(23/24). Modellistica molecolare di cTnT-DeltaK210 struttura rivela cambiamenti nell&#39;ambiente elettrostatico di cTnT elica (residui 203-224) che portano a un ambiente pi&ugrave; base intorno a Thr(203), che pu&ograve; spiegare la maggiore fosforilazione di PKC-dipendente. Inoltre, dosaggi di due-ibrido del lievito indicano che cTnT-DeltaK210 si lega pi&ugrave; forte a n rispetto con cTnT-WT collettivamente, nostre osservazioni suggeriscono che la cardiomiopatia-causando DeltaK210 ha effetti di vasta portata influenzano il legame n-cTnT e modifiche di posttranslational delle proteine chiave sarcomero.

Cardiomiopatia-provocando eliminazione K210 in troponina cardiaca T altera la propensione di fosforilazione delle proteine sarcomero.

&#x7B4B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x8131;&#x611F;&#x4F5C;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3; 210 (DeltaK210) &#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3; T &#x306E;&#x524A;&#x9664; (cTnT) &#x5BB6;&#x65CF;&#x6027;&#x62E1;&#x5F35;&#x578B;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x75C7; &#xFF08;DCM&#xFF09; &#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DeltaK210 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A4;&#x30F3; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x60A3;&#x8005;&#x3067;&#x6587;&#x66F8;&#x5316;&#x81E8;&#x5E8A;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x8981;&#x7D04;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x547D;&#x984C;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x5FC3;&#x81D3;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x86CB;&#x767D;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30AD;&#x30FC;&#x5909;&#x8ABF;&#x95A2;&#x6570;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x524A;&#x9664;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x60AA;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x6027;&#x5411;&#x4E0A;&#x5668; K210 &#x524A;&#x9664;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DeltaK210 &#x5FC3;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x5358;&#x4E00;&#x7B4B;&#x539F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;cTnI &#xFF08;46 &#xFF05;&#xFF09;&#x3001;cTnT &#xFF08;30 &#xFF05;&#xFF09;&#x3001;MyBP-C (32%) &#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x8B58;&#x5225;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x578B;&#x7279;&#x7570;&#x6297;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x89E3;&#x6790; cTnT-Thr(203) &#xFF08;28 &#xFF05;&#xFF09; &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x62E1;&#x5F35;&#x73FE;&#x5B9F;&#x611F;&#x3057;&#x3001;cTnI-Ser(23/24) &#xFF08;41 &#xFF05;&#xFF09; &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vitro &#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x8A66;&#x91D1; cTnI-Ser(23/24) &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x305B;&#x305A;&#x3068; cTnT-Thr(203) &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x50BE;&#x5411;&#x304C; DeltaK210 three-fold&#x3001;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CTnT DeltaK210 &#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x62E1;&#x5F35; PKC &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044; Thr(203) &#x5468;&#x8FBA;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B; cTnT &#x306E;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;203 224 &#x6B8B;&#x57FA;&#xFF09; &#x306E;&#x9759;&#x96FB;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;cTnT DeltaK210 cTnI cTnT-&#x91CD;&#x91CF;&#x3092;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x3066;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306B;&#x5F37;&#x304F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x89B3;&#x6E2C; DeltaK210 &#x5FC3;&#x7B4B;&#x75C7;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x306A;&#x308B; cTnI cTnT &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x4FEE;&#x98FE;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x9060;&#x5927;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x9175;&#x6BCD; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x8A66;&#x91D1;&#x3002;

&#x5FC3;&#x7B4B;&#x75C7;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x3066;&#x524A;&#x9664;&#x5668; K210 &#x5FC3;&#x7B4B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3; T &#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x50BE;&#x5411;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Myofilaments&#xC758; Ca(2+) &#xB454;&#xAC10; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xADFC;&#xC721; &#xBCD1; &#xAC00;&#xC871; &#xB3D9; &#xACF5;&#xC774; &#xD655;&#xC7A5; &#xB418;&#xC5B4; &#xC99D; (DCM) (cTnT) &#xC2EC;&#xC7A5; troponin T&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; 210 (DeltaK210) &#xC2E0;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBCD1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. DeltaK210 &#xB178;&#xD06C;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xC950;&#xB294; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C;&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC00;&#xC9C4; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0; &#xC784;&#xC0C1; &#xACE0;&#xAE30; &#xC815;&#xB9AC;. &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC70; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xC81C;&#xC548; &#xC2EC;&#xC7A5; sarcomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30; &#xC774;&#xBA70; &#xC0AD;&#xC81C;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC545;&#xD654; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; sarcomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC131;&#xD5A5;&#xC5D0; K210 &#xC0AD;&#xC81C;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;. DeltaK210 &#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC2EC;&#xC7A5; myofibrils&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; cTnI (46%), cTnT (30%)&#xC640; MyBP-C (32%)&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC778; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC640; immunoblot &#xBD84;&#xC11D; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2EC;&#xADFC;&#xC5D0;&#xC11C; cTnT-Thr(203) (28%)&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC15; &#xD558; &#xACE0; cTnI-Ser(23/24) (41%)&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C;. &#xCCB4; &#xC678; &#xB2C8; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; cTnI-Ser(23/24) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; DeltaK210 Ctnt-thr(203)&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC131;&#xD5A5;&#xC744; three-fold, &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. CTnT DeltaK210 &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; PKC &#xC885;&#xC18D; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; Thr(203) &#xC8FC;&#xBCC0; &#xB354; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; cTnT &#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4; (&#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 203-224)&#xC758; &#xC815;&#xC804;&#xAE30; &#xD658;&#xACBD; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; cTnT DeltaK210 cTnI &#xCD1D;&#xCE6D; cTnT &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB354; &#xAC15;&#xD55C; &#xACB0;&#xC18D;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xADFC;&#xC721; &#xBCD1; &#xC99D; &#xC720;&#xBC1C; DeltaK210 cTnI cTnT &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xC8FC;&#xC694; sarcomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; posttranslational &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2EC;&#xC7A5; &#xADFC;&#xC721; &#xBCD1; &#xC99D;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xC2EC;&#xC7A5; troponin T&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AD;&#xC81C; K210 sarcomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC131;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CA la desensibilizaci&oacute;n de los miofilamentos se indica como mecanismo principal para la patogenesia de la cardiomiopat&iacute;a dilatada (DCM) asociada con la supresi&oacute;n de lisina 210 (DeltaK210) en la troponina T (cTnT). DeltaK210 knock-in ratones estrechamente recapitulan los fenotipos cl&iacute;nicos documentados en los pacientes con esta mutaci&oacute;n. Considerable evidencia apoya la propuesta que la fosforilaci&oacute;n de prote&iacute;nas card&iacute;acas sarcomeric es un modulador de la tecla de funci&oacute;n y pueden agravar el efecto de la eliminaci&oacute;n. En este estudio investigamos los efectos de la eliminaci&oacute;n de K210 de la propensi&oacute;n de la fosforilaci&oacute;n de prote&iacute;nas sarcomeric. An&aacute;lisis de cardiacas miofibrillas aisladas de DeltaK210 corazones identific&oacute; una disminuci&oacute;n en la fosforilaci&oacute;n de cTnI (46%), reposo (30%) y MyBP-C (32%) en comparaci&oacute;n con controles de tipo salvaje. Curiosamente, immunoblot an&aacute;lisis con anticuerpos espec&iacute;ficos phospho muestran aumentada fosforilaci&oacute;n de cTnT-Thr(203) (28%) y disminuy&oacute; la fosforilaci&oacute;n de cTnI-Ser(23/24) (41%) en miocardio mutante. Ensayos in vitro de la cinasa indican que DeltaK210 aumenta la propensi&oacute;n de la fosforilaci&oacute;n de cTnT-Thr(203) tres veces, sin cambiar la fosforilaci&oacute;n de cTnI-Ser(23/24). Modelado molecular de cTnT-DeltaK210 estructura revela cambios en el ambiente electrost&aacute;tico de cTnT h&eacute;lice (residuos 203-224) que conducen a un ambiente m&aacute;s b&aacute;sico alrededor de Thr(203), que puede explicar la mayor fosforilaci&oacute;n de la PKC-dependiente. Adem&aacute;s, ensayos de dos h&iacute;bridos de levadura indican que cTnT-DeltaK210 ATA m&aacute;s fuerte para cTnI en comparaci&oacute;n con pesos de cTnT colectivamente, nuestras observaciones sugieren que DeltaK210 que causan cardiomiopat&iacute;a tiene efectos a largo plazo que influyen en la cTnI-reposo obligatorio y modificaciones postraduccionales de prote&iacute;nas sarcomeric clave.

Eliminaci&oacute;n que causan cardiomiopat&iacute;a K210 en troponina T altera la propensi&oacute;n de la fosforilaci&oacute;n de prote&iacute;nas sarcomeric.

&#x773C;&#x5916;&#x808C;&#x663E;&#x793A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x4FEE;&#x6539;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6EE1;&#x8DB3;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E0D;&#x65AD;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6240;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x9700;&#x6C42;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x63A2;&#x8BA8;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B9;&#x9762;&#x662F;&#x57FA;&#x677F;&#x773C;&#x5916;&#x808C;&#x7684;&#x80FD;&#x91CF;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x4E0B;&#x80A2;&#x808C;&#x8089;&#xFF0C;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x8FDB;&#x5165; GLUT1 &#x548C;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x8FD0;&#x8F7D;&#x4F53; 4 &#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x5728;&#x53D7;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x548C;&#x6536;&#x7F29;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5339;&#x914D;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4F9B;&#x5E94;&#x5230;&#x6D88;&#x8D39;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x901A;&#x8FC7;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E00;&#x76F4;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x53EF;&#x80FD;&#x8981;&#x6C42;&#x9AD8;&#x57FA;&#x5E95; (&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x548C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x65E0;&#x5173;) &#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6444;&#x53D6;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5BF9;&#x773C;&#x5916;&#x808C;&#x4E0D;&#x9002;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E00;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x4F5C;&#x8005;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5047;&#x8BBE;&#x7684;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6444;&#x53D6;&#x7684;&#x773C;&#x5916;&#x808C;&#x4E0D;&#x53D7;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6216;&#x6536;&#x7F29;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

&#x5927;&#x9F20;&#x773C;&#x5916;&#x808C;&#x7684;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6444;&#x53D6;&#xFF1A; &#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x548C;&#x6536;&#x7F29;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Extraocular muscles show specific adaptations to fulfill the metabolic demands imposed by their constant activity. One aspect that has not been explored is the availability of substrate for energy pathways in extraocular muscles. In limb muscles, glucose enters by way of GLUT1 and GLUT4 transporters in a process regulated by insulin and contractile activity to match metabolic supply to demand. This mechanism may not apply to extraocular muscles because their constant activity may require high basal (insulin- and activity-independent) glucose uptake. The authors tested the hypothesis that glucose uptake by extraocular muscles is not regulated by insulin or contractile activity.

Glucose uptake in rat extraocular muscles: effect of insulin and contractile activity.

Muscles extra-oculaires montrent des adaptations sp&#xE9;cifiques pour r&#xE9;pondre aux exigences m&#xE9;taboliques impos&#xE9;es par leur activit&#xE9; constante. Un aspect qui n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; explor&#xE9;e est la disponibilit&#xE9; de substrat pour voies de l&#x26;#39;&#xE9;nergie dans les muscles extraoculaires. Dans les muscles des membres, le glucose entre par voie de GLUT1 et GLUT4 des transporteurs dans un processus r&#xE9;glement&#xE9;s par l&#x26;#39;insuline et l&#x26;#39;activit&#xE9; contractile &#xE0; faire correspondre l&#x26;#39;offre &#xE0; la demande m&#xE9;tabolique. Ce m&#xE9;canisme peut ne pas s&#x26;#39;appliquer aux muscles extraoculaires parce que leur activit&#xE9; constante peut requi&#xE8;rent une insuline basale &#xE9;lev&#xE9;e (l&#x26;#39;insuline et l&#x26;#39;activit&#xE9; ind&#xE9;pendante) la captation du glucose. Les auteurs ont test&#xE9; l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se selon laquelle l&#x26;#39;absorption du glucose par les muscles extraoculaires n&#x26;#39;est pas r&#xE9;gul&#xE9;e par l&#x26;#39;insuline ou de l&#x26;#39;activit&#xE9; contractile.

La captation du glucose dans les muscles extra-oculaires de rat: effet de l&#x26;#39;insuline et l&#x26;#39;activit&#xE9; contractile

Extraokul&auml;ren Muskeln zeigen spezifische Anpassungen zu die metabolischen Anforderungen ihrer konstanten Aktivit&auml;t zu erf&uuml;llen. Ein Aspekt, der nicht erforscht wurde, ist die Verf&uuml;gbarkeit von Substrat f&uuml;r Energie-Wege im extraokul&auml;ren Muskeln. In der Muskulatur der Gliedma&szlig;en betritt Glukose durch GLUT1 und den GLUT4-Transporter in einem Prozess von Insulin und kontraktilen Aktivit&auml;t metabolische Angebots an die Nachfrage entsprechend geregelt. Dieser Mechanismus kann nicht relevant f&uuml;r extraokul&auml;ren Muskeln, weil ihre konstanten Aktivit&auml;t hohe basale (Insulin - und leistungsunabh&auml;ngige) Glukoseaufnahme erfordern. Die Autoren getestet die Hypothese, dass Glukoseaufnahme von extraokul&auml;ren Muskeln ist nicht geregelt, Insulin oder kontraktilen Aktivit&auml;t.

Glukoseaufnahme in Ratte extraokul&auml;ren Muskeln: Wirkung von Insulin und kontraktilen Aktivit&auml;t.

Muscoli extraoculari mostrano adattamenti specifici per soddisfare le richieste metaboliche imposte dalla loro attivit&agrave; costante. Un aspetto che non &egrave; stato esplorato &egrave; la disponibilit&agrave; di substrato per percorsi energetici nei muscoli extraoculari. Nei muscoli dell&#39;arto, glucosio entra a titolo di GLUT1 e GLUT4 trasportatori in un processo regolato da insulina e l&#39;attivit&agrave; contrattile per abbinare metabolica offerta alla domanda. Questo meccanismo non pu&ograve; applicarsi ai muscoli extraoculari perch&eacute; loro costante attivit&agrave; pu&ograve; richiedere l&#39;assorbimento del glucosio alto basale (insulina - e attivit&agrave;-indipendente). Gli autori hanno testato l&#39;ipotesi che assorbimento del glucosio da muscoli estrinseci non &egrave; regolato da insulina o attivit&agrave; contrattile.

Assorbimento del glucosio nei muscoli extraoculari ratto: effetto dell&#39;insulina e l&#39;attivit&agrave; contrattile.

&#x5916;&#x773C;&#x7B4B;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x5B9A;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8AB2;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x9700;&#x8981;&#x3092;&#x6E80;&#x305F;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x614B;&#x69D8;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x773C;&#x7B4B;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x56DB;&#x80A2;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x9700;&#x8981;&#x306B;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x4F9B;&#x7D66;&#x3092;&#x4E00;&#x81F4;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x53CE;&#x7E2E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;GLUT1&#x3068;GLUT4&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5165;&#x529B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9A;&#x6570;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x57FA;&#x790E;&#xFF08;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x6D3B;&#x52D5;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#xFF09;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x5834;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x773C;&#x7B4B;&#x306B;&#x306F;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8457;&#x8005;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x773C;&#x7B4B;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x53CE;&#x7E2E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x773C;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#xFF1A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3068;&#x53CE;&#x7E2E;&#x6D3B;&#x6027;

&#xC548;&#xAD6C; &#xADFC;&#xC721; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC77C;&#xC815; &#xD55C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xACFC; &#xB41C; &#xBCC0;&#xD654; &#xC694;&#xAD6C;&#xB97C; &#xCDA9;&#xC871; &#xD558;&#xB294; &#xD2B9;&#xC815; &#xAC01; &#xC0C9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD0D0;&#xD5D8; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xD55C; &#xCE21;&#xBA74;&#xC740; &#xC548;&#xAD6C; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xACBD;&#xB85C; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB9AC; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xBC0F; &#xB300;&#xC0AC; &#xACF5;&#xAE09;&#xC744; &#xC218;&#xC694;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xAC8C; &#xC218;&#xCD95; &#xD65C;&#xB3D9; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; GLUT1 &#xBC0F; GLUT4 &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB4E4;&#xC5B4;&#xAC11;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC77C;&#xC815; &#xD55C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xB192;&#xC740; &#xAE30;&#xC800; (&#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xBC0F; &#xD65C;&#xB3D9;-&#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778;) &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBBC0;&#xB85C; &#xC548;&#xAD6C; &#xADFC;&#xC721;&#xC774;&#xC774; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC801;&#xC6A9; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC800;&#xC790; &#xAC00;&#xC124; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC548;&#xAD6C; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xADF8; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xB610;&#xB294; &#xC218;&#xCD95; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294;&#xB2E4;.

&#xC950; &#xC548;&#xAD6C; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;: &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xACFC; &#xC218;&#xCD95; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;.

M&#xFA;sculos extraoculares muestran adaptaciones espec&#xED;ficas para cumplir con las demandas metab&#xF3;licas impuestas por su actividad constante. Un aspecto que no se ha explorado es la disponibilidad de sustrato para las v&#xED;as de energ&#xED;a en los m&#xFA;sculos extraoculares. En m&#xFA;sculos de las extremidades, la glucosa entra a trav&#xE9;s de los transportadores GLUT1 y GLUT4 en un proceso regulado por la insulina y la actividad contr&#xE1;ctil para adecuar la oferta a la demanda metab&#xF3;lica. Este mecanismo no se aplique a los m&#xFA;sculos extraoculares, ya que su actividad constante puede requerir basal alta (la insulina y la actividad independiente) la captaci&#xF3;n de glucosa. Los autores probaron la hip&#xF3;tesis de que la captaci&#xF3;n de glucosa por los m&#xFA;sculos extraoculares no est&#xE1; regulada por la insulina o la actividad contr&#xE1;ctil.

La captaci&#xF3;n de glucosa en los m&#xFA;sculos extraoculares rata: Efecto de la insulina y la actividad contr&#xE1;ctil

&#x751F;&#x6D3B;&#x5728;&#x9AD8;&#x6D77;&#x62D4;&#x7684;&#x4EBA;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x6709;&#x964D;&#x4F4E;&#x8840;&#x7CD6;&#x6C34;&#x5E73;&#x548C;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x53D1;&#x75C5;&#x7387;&#x964D;&#x4F4E;&#x3002;&#x66F4;&#x5FEB;&#x7684;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6444;&#x53D6;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x89E3;&#x91CA;&#xFF1A; &#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x662F;&#x5728;&#x6B63;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6700;&#x5927;&#x7684;&#x7CD6;&#x63A5;&#x6536;&#x5668;&#x548C;&#x5176;&#x9002;&#x5E94;&#x9AD8;&#x539F;&#x7F3A;&#x6C27;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x7684;&#x6444;&#x53D6;&#x548C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5047;&#x8BBE;&#x7684;&#x6162;&#x6027;&#x5E38;&#x538B;&#x7F3A;&#x6C27;&#x589E;&#x52A0;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6444;&#x53D6;&#x7684;&#x6BD4;&#x76EE;&#x9C7C;&#x808C;&#x548C;&#x964D;&#x4F4E;&#x8840;&#x7CD6;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6210;&#x5E74;&#x96C4;&#x6027; C57BL/6J &#x5C0F;&#x9F20;&#x5219;&#x7559;&#x5728;&#x5E38; [&#x5206;&#x6570;&#x7684;&#x542F;&#x53D1; O&#x2082; = 21%(&#x7BA1;&#x5236;)] &#x6216;&#x5E38;&#x538B;&#x7F3A;&#x6C27; [&#x5206;&#x6570;&#x7684;&#x542F;&#x53D1; O&#x2082; = 10%&#xFF08;&#x7F3A;&#x6C27;&#xFF09;] &#x4E3A; 4 wk&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8840;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x548C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6C34;&#x5E73;&#x3001; &#x4F53;&#x5916;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x6444;&#x53D6;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6307;&#x6807;&#x4E86;&#x3002;&#x6162;&#x6027;&#x7F3A;&#x6C27;&#x964D;&#x4F4E;&#x8840;&#x6DB2;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x548C;&#x8840;&#x6D46;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20; [&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#xFF1A; 14.3 &plusmn; 0.65 &#x6BEB;&#x7C73;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0E; 9.9 &plusmn; 0.83 mM &#x5728;&#x7F3A;&#x6C27; (P &lt; 0.001) &#xFF1B; &#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#xFF1A; 1.2 &plusmn; 0.2 ng/ml &#x5728;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0E; 0.7 &plusmn; 0.1 ng/ml &#x5728;&#x7F3A;&#x6C27; (P &lt; 0.05)] &#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7531;&#x6052;&#x4E45;&#x6A21;&#x578B;&#x8BC4;&#x4F30; 2 [21.5 &plusmn; 3.8 &#x5728;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0E; 39.3 &plusmn; 5.7 &#x5728;&#x7F3A;&#x6C27; (P &lt; 0.03)]&#x3002;&#x6709;&#x5DEE;&#x522B;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5927;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x5438;&#x6536;&#x4F53;&#x5916;&#x6BD4;&#x76EE;&#x9C7C;&#x808C; (1.59 &plusmn; 0.24 &#x548C; 1.71 &plusmn; 0.15 &mu;mol&middot;g&#x207B;&sup1;&middot;h&#x207B;&sup1; &#x5728;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x7F3A;&#x6C27;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;)&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x523A;&#x6FC0;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6444;&#x53D6;&#x4F4E;&#x6C27;&#x6BD4;&#x63A7;&#x5236; 4 wk &#x540E;&#x662F;&#x6BD4;&#x76EE;&#x9C7C;&#x808C;&#x9AD8;&#x51FA; 30%(6.24 &plusmn; 0.23 4.87 &plusmn; 0.37 &mu;mol&middot;g&#x207B;&sup1;&middot;h&#x207B;&sup1;&#xFF0C;P &#x4E0E; &lt; 0.02)&#x3002;&#x808C;&#x7CD6;&#x539F;&#x542B;&#x91CF;&#x6CA1;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x6162;&#x6027;&#x7F3A;&#x6C27;&#x7684;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; 4 &#x548C; 1&#xFF0C;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187; 3-&#x6FC0;&#x9176;&#x3001; &#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176; 3 &#x6C34;&#x5E73;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; B/Akt &#x548C;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x662F;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6BD4;&#x76EE;&#x9C7C;&#x808C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x523A;&#x6FC0;&#x540E;&#x7684; Akt &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x662F;&#x5927;&#x5927; (25%) &#x9AD8;&#x4E8E;&#x4F4E;&#x6C27;&#x63A7;&#x5236; (P &lt; 0.05)&#x3002;&#x65E2;&#x4E0D;&#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176; 3 &#x4E5F; AMP &#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x78F7;&#x9178;&#x4F4E;&#x6C27; 4 wk &#x540E;&#x66F4;&#x6539;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x6162;&#x6027;&#x7F3A;&#x6C27;&#x7684;&#x9002;&#x5E94;&#x5305;&#x62EC;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x523A;&#x6FC0;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x7684;&#x6444;&#x53D6;&#x3002;

&#x6162;&#x6027;&#x7F3A;&#x6C27;&#x589E;&#x52A0;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6444;&#x53D6;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x6BD4;&#x76EE;&#x9C7C;&#x808C;&#x3002;

People living at high altitude appear to have lower blood glucose levels and decreased incidence of diabetes. Faster glucose uptake and increased insulin sensitivity are likely explanations for these findings: skeletal muscle is the largest glucose sink in the body, and its adaptation to the hypoxia of altitude may influence glucose uptake and insulin sensitivity. This study tested the hypothesis that chronic normobaric hypoxia increases insulin-stimulated glucose uptake in soleus muscles and decreases plasma glucose levels. Adult male C57BL/6J mice were kept in normoxia [fraction of inspired Oâ‚‚ = 21% (Control)] or normobaric hypoxia [fraction of inspired Oâ‚‚ = 10% (Hypoxia)] for 4 wk. Then blood glucose and insulin levels, in vitro muscle glucose uptake, and indexes of insulin signaling were measured. Chronic hypoxia lowered blood glucose and plasma insulin [glucose: 14.3 Â± 0.65 mM in Control vs. 9.9 Â± 0.83 mM in Hypoxia (P < 0.001); insulin: 1.2 Â± 0.2 ng/ml in Control vs. 0.7 Â± 0.1 ng/ml in Hypoxia (P < 0.05)] and increased insulin sensitivity determined by homeostatic model assessment 2 [21.5 Â± 3.8 in Control vs. 39.3 Â± 5.7 in Hypoxia (P < 0.03)]. There was no significant difference in basal glucose uptake in vitro in soleus muscle (1.59 Â± 0.24 and 1.71 Â± 0.15 Î¼molÂ·gâ»Â¹Â·hâ»Â¹ in Control and Hypoxia, respectively). However, insulin-stimulated glucose uptake was 30% higher in the soleus after 4 wk of hypoxia than Control (6.24 Â± 0.23 vs. 4.87 Â± 0.37 Î¼molÂ·gâ»Â¹Â·hâ»Â¹, P < 0.02). Muscle glycogen content was not significantly different between the two groups. Levels of glucose transporters 4 and 1, phosphoinositide 3-kinase, glycogen synthase kinase 3, protein kinase B/Akt, and AMP-activated protein kinase were not affected by chronic hypoxia. Akt phosphorylation following insulin stimulation in soleus muscle was significantly (25%) higher in Hypoxia than Control (P < 0.05). Neither glycogen synthase kinase 3 nor AMP-activated protein kinase phosphorylation changed after 4 wk of hypoxia. These results demonstrate that the adaptation of skeletal muscles to chronic hypoxia includes increased insulin-stimulated glucose uptake.

Chronic hypoxia increases insulin-stimulated glucose uptake in mouse soleus muscle.

Les personnes vivant &#xE0; haute altitude semblent avoir des niveaux inf&#xE9;rieurs de glyc&#xE9;mie et une diminution de l&#x26;#39;incidence du diab&#xE8;te. Absorption rapide du glucose et la sensibilit&#xE9; accrue &#xE0; l&#x26;#39;insuline sont des explications probables de ces r&#xE9;sultats: le muscle squelettique est le plus grand puits de glucose dans le corps, et son adaptation &#xE0; l&#x26;#39;hypoxie d&#x26;#39;altitude peuvent influer sur l&#x26;#39;absorption du glucose et la sensibilit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;insuline. Cette &#xE9;tude a test&#xE9; l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se selon laquelle hypoxie chronique augmente normobare stimul&#xE9;e par l&#x26;#39;insuline absorption du glucose dans les muscles sol&#xE9;aire et diminue les taux plasmatiques de glucose. M&#xE2;les adultes souris C57BL/6J ont &#xE9;t&#xE9; conserv&#xE9;s dans des conditions de normoxie [fraction de inspiration O &#x2082; = 21% (contr&#xF4;le)] ou de l&#x26;#39;hypoxie normobare [fraction de inspiration O &#x2082; = 10% (hypoxie)] pendant 4 semaines. Puis le glucose sanguin et d&#x26;#39;insuline, l&#x26;#39;absorption de glucose dans le muscle in vitro, et les indices de signalisation de l&#x26;#39;insuline ont &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;es. Hypoxie chronique abaiss&#xE9; la glyc&#xE9;mie et l&#x26;#39;insulin&#xE9;mie [glucose: 14,3 &#xB1; 0,65 mM dans le contr&#xF4;le vs 9,9 &#xB1; 0,83 mm dans l&#x26;#39;hypoxie (P &#x26;lt;0,001); l&#x26;#39;insuline: 1,2 &#xB1; 0,2 ng / ml dans le contr&#xF4;le vs 0,7 &#xB1; 0,1 ng / ml dans L&#x26;#39;hypoxie (P &#x26;lt;0,05)] et la sensibilit&#xE9; accrue &#xE0; l&#x26;#39;insuline d&#xE9;termin&#xE9; par l&#x26;#39;&#xE9;valuation du mod&#xE8;le hom&#xE9;ostatique 2 [21,5 &#xB1; 3,8 en contr&#xF4;le vs 39,3 &#xB1; 5,7 en hypoxie (P &#x26;lt;0,03)]. Il n&#x26;#39;y avait pas de diff&#xE9;rence significative dans la captation du glucose basale in vitro dans le muscle sol&#xE9;aire (1,59 &#xB1; 0,24 et 1,71 &#xB1; 0,15 pmol &#xB7; g &#x207B; &#xB9; &#xB7; h &#x207B; &#xB9; pour le Contr&#xF4;le et l&#x26;#39;hypoxie, respectivement). Cependant, stimul&#xE9;e par l&#x26;#39;insuline la captation du glucose &#xE9;tait de 30% plus &#xE9;lev&#xE9;e dans le muscle sol&#xE9;aire apr&#xE8;s 4 semaines d&#x26;#39;hypoxie que de contr&#xF4;le (6,24 &#xB1; 0,23 vs 4,87 &#xB1; 0,37 pmol &#xB7; g &#x207B; &#xB9; &#xB7; h &#x207B; &#xB9;, P &#x26;lt;0,02). Contenu glycog&#xE8;ne musculaire n&#x26;#39;&#xE9;tait pas significativement diff&#xE9;rente entre les deux groupes. Les niveaux de transporteurs de glucose 4 et 1, phosphoinositide 3-kinase, la glycog&#xE8;ne synthase kinase 3, la prot&#xE9;ine kinase B / Akt, et la prot&#xE9;ine kinase activ&#xE9;e par l&#x26;#39;AMP n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; affect&#xE9;s par l&#x26;#39;hypoxie chronique. Phosphorylation de l&#x26;#39;Akt suivant stimulation par l&#x26;#39;insuline dans le muscle sol&#xE9;aire a &#xE9;t&#xE9; significativement (25%) plus &#xE9;lev&#xE9; dans l&#x26;#39;hypoxie que de contr&#xF4;le (P &#x26;lt;0,05). Ni la glycog&#xE8;ne synthase kinase 3, ni l&#x26;#39;AMP-activated protein kinase phosphorylation chang&#xE9; apr&#xE8;s 4 semaines d&#x26;#39;hypoxie. Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que l&#x26;#39;adaptation des muscles squelettiques &#xE0; l&#x26;#39;hypoxie chronique comprend la captation du glucose stimul&#xE9;e par l&#x26;#39;insuline a augment&#xE9;.

Augmente l&#x26;#39;hypoxie chronique d&#x26;#39;insuline stimul&#xE9;e par l&#x26;#39;absorption du glucose dans le muscle sol&#xE9;aire de souris

Menschen leben in gro&szlig;er H&ouml;he offenbar niedriger Blutzuckerwerte und verminderte Inzidenz von Diabetes. Schneller Glukoseaufnahme und erh&ouml;hte Insulin-Empfindlichkeit sind wahrscheinlich Erkl&auml;rungen f&uuml;r diese Ergebnisse: Skelettmuskulatur ist die gr&ouml;&szlig;te Glukose-Senke im K&ouml;rper und ihre Anpassung an die Hypoxie H&ouml;he kann die Glukose-Aufnahme und Insulin-Empfindlichkeit beeinflussen. Diese Studie getestet der Hypothese, dass chronische Normobaric Hypoxie erh&ouml;ht Insulin stimuliert Glukoseaufnahme in Schollenmuskel Muskeln und Glukose-Plasmaspiegel sinkt. Erwachsene m&auml;nnliche C57BL/6J M&auml;use wurden in Normoxia gehalten [Bruchteil der inspiriert O&#x2082; = 21 % (Control)] oder Normobaric Hypoxie [Bruchteil der inspiriert O&#x2082; = 10 % (Hypoxie)] f&uuml;r 4 wk. Dann wurden die Blut-Glukose und Insulin-Ebenen, in-vitro-Muskel Glukoseaufnahme und Indizes Insulin zu signalisieren gemessen. Chronischer Hypoxie senkte Blut-Glukose und Plasma-Insulin [Glukose: 14,3 &plusmn; 0,65 mM im Steuerelement vs. 9,9 &plusmn; 0,83 mM in Hypoxie (P &lt; 0.001); Insulin: 1,2 &plusmn; 0,2 ng/ml im Steuerelement vs. 0,7 &plusmn; 0,1 ng/ml in Hypoxie (P &lt; 0,05)] und erh&ouml;hte Insulinempfindlichkeit von hom&ouml;ostatischen Modell Bewertung 2 bestimmt [21.5 &plusmn; 3,8 Kontrolle vs. 39,3 &plusmn; 5,7 in Hypoxie (P &lt; 0,03)]. Gab es keinen signifikanten Unterschied in der basalen Glukoseaufnahme in-vitro Soleus Muskel (1,59 &plusmn; 0,24 und 1,71 &plusmn; 0,15 &mu;mol&middot;g&#x207B;&sup1;&middot;h&#x207B;&sup1; Kontrolle und Hypoxie, beziehungsweise). Insulin stimuliert Glukoseaufnahme war jedoch 30 % h&ouml;her in den Schollenmuskel nach 4 kW Hypoxie als Steuerelement (6.24 &plusmn; 0,23 vs. 4,87 &plusmn; 0,37 &mu;mol&middot;g&#x207B;&sup1;&middot;h&#x207B;&sup1;, P &lt; 0,02). Muskel Glykogen Inhalt war nicht signifikant zwischen den beiden Gruppen. Ebenen der Glukose-Transporter 4 und 1, Phosphoinositide 3-Kinase Glykogen-Synthase Kinase 3, Proteinkinase B/Akt und AMP-aktivierte Proteinkinase waren von chronischer Hypoxie nicht betroffen. Akt Phosphorylierung nach Insulin-Stimulation in Soleus Muskel war signifikant (25 %) bei Hypoxie h&ouml;her als Steuerelement (P &lt; 0,05). Weder Glykogen-Synthase Kinase 3 noch AMP-aktivierte Kinase Proteinphosphorylierung ver&auml;ndert nach 4 kW Hypoxie. Diese Ergebnisse zeigen, dass die Anpassung der Skelettmuskulatur zu chronischer Hypoxie erh&ouml;hte Insulin stimuliert Glukoseaufnahme enth&auml;lt.

Chronischer Hypoxie erh&ouml;ht Insulin stimuliert Glukoseaufnahme in Maus Soleus Muskel.

Persone che vivono in alta quota sembrano avere pi&ugrave; bassi livelli di glucosio e ridotta incidenza di diabete. Pi&ugrave; veloce assorbimento del glucosio e insulina aumentata sensibilit&agrave; sono probabili spiegazioni per questi risultati: muscolo scheletrico &egrave; il pi&ugrave; grande lavandino di glucosio nel corpo, e il suo adattamento per l&#39;ipossia di altitudine possa influenzare la sensibilit&agrave; di insulina e la captazione di glucosio. Questo studio ha testato l&#39;ipotesi che aumenti di ipossia cronica normobarica assorbimento del glucosio insulino-stimolata nel Soleo muscoli e diminuisce i livelli plasmatici di glucosio. Topi C57BL/6J maschi adulti sono stati tenuti in fenotipi [frazione di ispirazione o &#x2082; = 21% (controllo)] o ipossia normobarica [frazione di ispirazione o &#x2082; = 10% (ipossia)] per 4 sett. Poi sono stati misurati livelli di glucosio e di insulina nel sangue, assorbimento del glucosio muscolare in vitro e indici di segnalazione insulina. Ipossia cronica abbassato insulina glucosio e plasma sangue [glucosio: 14,3 &plusmn; 0.65 mM nel controllo vs 9,9 &plusmn; 0,83 mM in ipossia (P 0.001 &lt;); insulina: 1,2 &plusmn; 0,2 ng/ml nel controllo vs 0,7 &plusmn; 0,1 ng/ml in ipossia (P &lt; 0.05)] e aumentata sensibilit&agrave; all&#39;insulina determinata dalla valutazione del modello omeostatico 2 [21,5 &plusmn; 3.8 nel controllo vs 39,3 &plusmn; 5.7 in ipossia (P &lt; 0,03)]. Non non c&#39;era alcuna differenza significativa nell&#39;assorbimento del glucosio basale in vitro nel muscolo soleo (1,59 &plusmn; 0,24 e 1.71 &plusmn; 0,15 &mu;mol&middot;g&#x207B;&sup1;&middot;h&#x207B;&sup1; in controllo e ipossia, rispettivamente). Tuttavia, assorbimento del glucosio insulino-stimolata era superiore nel Soleo del 30% dopo 4 sett di ipossia rispetto a controllo (6.24 &plusmn; 0,23 vs 4.87 &mu;mol&middot;g&#x207B;&sup1;&middot;h&#x207B;&sup1; &plusmn; 0,37, P &lt; 0,02). Contenuto di glicogeno muscolare non era significativamente diversa tra i due gruppi. Livelli di glucosio trasportatori 4 e 1, fosfoinositide 3-chinasi, glicogeno sintasi chinasi 3, chinasi di proteina B/Akt e la chinasi di proteina attivata da AMP non furono influenzati dalla ipossia cronica. La fosforilazione di Akt dopo stimolazione di insulina nel muscolo soleo &egrave; stato significativamente (25%) superiori a ipossia controllo (P &lt; 0,05). N&eacute; glicogeno sintasi chinasi 3 n&eacute; AMP-attivato proteina chinasi fosforilazione cambiata dopo 4 sett di ipossia. Questi risultati dimostrano che l&#39;adattamento dei muscoli scheletrici all&#39;ipossia cronica comprende assorbimento del glucosio insulino-stimolato aumentata.

Ipossia cronica aumenta l&#39;assorbimento del glucosio insulino-stimolata nel muscolo soleo del mouse.

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1.2&#xB1;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;0.7&#x3067;0.2 ng / ml&#x306E;&#xB1;0.1 ng / ml&#x3067;&#xFF1A;;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;14.3&#xB1;0.65&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;MM&#x5BFE;9.9&#xB1;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;0.83 mM&#x306E;&#xFF08;P &#x26;lt;0.001&#xFF09;&#xFF1A;&#x6162;&#x6027;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x75C7;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x7CD6;&#x5024;&#x3068;&#x8840;&#x6F3F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;[&#x8840;&#x7CD6;&#x5024;&#x3092;&#x4E0B;&#x3052;&#x308B;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x75C7;&#xFF08;P &#x26;lt;0.05&#xFF09;]&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x5927;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x8A55;&#x4FA1;2&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;[21.5&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;39.3&#x306E;&#xB1;3.8&#xB1;5.7&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x306B;&#xFF08;P &#x26;lt;0.03&#xFF09;]&#x3002;&#x30D2;&#x30E9;&#x30E1;&#x7B4B;&#x306E;in vitro&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x57FA;&#x5E95;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#xFF08;1.59&#xB1;0.24&#x3068;1.71&#xB1;0.15&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xB7;G&#x207B;&#xB9;&#xB7;H&#x207B;&#xB9;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x75C7;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#xFF09;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x306E;4&#x9031;&#x9593;&#x5F8C;&#x306E;&#x30D2;&#x30E9;&#x30E1;&#x7B4B;&#x3067;30&#xFF05;&#x9AD8;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#xFF08;6.24&#xB1;0.23&#x5BFE;4.87&#xB1;0.37&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xB7;G&#x207B;&#xB9;&#xB7;H&#x207B;&#xB9;&#x3001;P &#x26;lt;0.02&#xFF09;&#x3002;&#x7B4B;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x91CF;&#x306F;&#x4E21;&#x7FA4;&#x9593;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;4&#x3068;1&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C1;&#x30C9;3  - &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;3&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;B / Akt&#x306E;&#x3068;&#x3001;AMP-&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;&#x6162;&#x6027;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D2;&#x30E9;&#x30E1;&#x7B4B;&#x3067;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F8C;&#x306E;Akt&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;&#xFF08;25&#xFF05;&#xFF09;&#x3001;&#x5BFE;&#x7167;&#xFF08;P &#x26;lt;0.05&#xFF09;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x306E;&#x65B9;&#x304C;&#x9AD8;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;3&#x3082;AMP&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x9178;&#x7D20;&#x306E;4&#x9031;&#x9593;&#x5F8C;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6162;&#x6027;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30D2;&#x30E9;&#x30E1;&#x7B4B;&#x306E;&#x6162;&#x6027;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7CD6;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;

&#xB192;&#xC740; &#xACE0;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;&#xB4E4;&#xC740; &#xB0AE;&#xC740; &#xD608;&#xC561; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC218;&#xC900; &#xBC0F; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xC758; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xB960;&#xC774; &#xAC10;&#xC18C; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4;. &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xBC0F; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC124;&#xBA85;: &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721;&#xC740; &#xC2E0;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC2F1;&#xD06C; &#xBC0F; &#xACE0;&#xB3C4; hypoxia &#xADF8; &#xC801;&#xC751; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xBC0F; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB9CC;&#xC131; normobaric hypoxia &#xC99D;&#xAC00; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC790;&#xADF9; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; soleus&#xC5D0; &#xADFC;&#xC721; &#xBC0F; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xAC00;&#xC124; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. &#xC131;&#xC778; &#xB0A8;&#xC131; C57BL/6J &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; normoxia&#xC5D0; &#xBCF4;&#xAD00; &#xD588;&#xB2E4; [&#xC601;&#xAC10; &#xC744;&#xB41C; O&#x2082;&#xC758; &#xBD84;&#xC218; = 21% (&#xC81C;&#xC5B4;)] &#xB610;&#xB294; normobaric hypoxia [&#xC601;&#xAC10; &#xC744;&#xB41C; O&#x2082;&#xC758; &#xBD84;&#xC218; = 10% (Hypoxia)] 4 &#xC8FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;. &#xADF8;&#xB7F0; &#xB2E4;&#xC74C; &#xD608;&#xC561; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xBC0F; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC218;&#xCE58;, &#xCCB4; &#xC678; &#xADFC;&#xC721; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC778;&#xB371;&#xC2A4; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9CC;&#xC131; hypoxia &#xD608;&#xC561; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xBC0F; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xB0AE; &#xCDC4; &#xB2E4; [&#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;: 14.3 &plusmn; 9.9 &plusmn; Hypoxia&#xC5D0;&#xC11C; 0.83 m m &#xB300; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; 0.65 mM (P &lt; 0.001); &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;: 1.2 &plusmn; 0.2 ng/ml &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0;&#xC11C; Hypoxia&#xC5D0;&#xC11C; 0.7 &plusmn; 0.1 ng/ml &#xB300; (P &lt; 0.05)] homeostatic &#xBAA8;&#xB378; &#xD3C9;&#xAC00; 2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; [21.5 Hypoxia&#xC5D0;&#xC11C; 39.3 &plusmn; 5.7 &#xB300; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0;&#xC11C; &plusmn; 3.8 (P &lt; 0.03)]. Soleus &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCCB4; &#xC678; &#xAE30;&#xC800; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC5D0; &#xD070; &#xCC28;&#xC774; (1.59 0.24&#xC640; 1.71 &plusmn; &plusmn; 0.15 &mu;mol&middot;g&#x207B;&sup1;&middot;h&#x207B;&sup1; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC640; Hypoxia, &#xAC01;&#xAC01;). &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC790;&#xADF9; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xBCF4;&#xB2E4; hypoxia&#xC758; 4 &#xC8FC; &#xD6C4; 30%&#xB294; soleus &#xB192;&#xC740; &#xD588;&#xB2E4; (6.24 &plusmn; 0.23 4.87 &plusmn; 0.37 &mu;mol&middot;g&#x207B;&sup1;&middot;h&#x207B;&sup1;, P &#xB300; &lt; 0.02). &#xADFC;&#xC721; glycogen &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB450; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC0AC;&#xC774; &#xB2E4;. &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC6B4;&#xBC18; 4 &#xBC0F; 1, phosphoinositide 3 &#xB2C8; glycogen synthase &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 3&#xC758; &#xC218;&#xC900;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; B/Akt&#xC640; AMP &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xB9CC;&#xC131; &#xC800; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC99D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB410;&#xB2E4;. Akt &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; soleus &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD06C;&#xAC8C;&#xB294; (25%) &#xC81C;&#xC5B4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB192;&#xC740; Hypoxia (P &lt; 0.05). &#xC778; &#xB450; glycogen synthase &#xB2C8; 3&#xB3C4; &#xC570;&#xD504; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC0B0;&#xD654; hypoxia&#xC758; 4 &#xC8FC; &#xD6C4; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9CC;&#xC131; &#xC800; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC99D;&#xC744; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721;&#xC758; &#xC801;&#xC751; &#xC99D;&#xAC00; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC790;&#xADF9; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9CC;&#xC131; hypoxia &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; soleus &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC790;&#xADF9; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las personas que viven en las alturas parecen tener niveles m&#xE1;s bajos de glucosa en la sangre y disminuci&#xF3;n de la incidencia de la diabetes. M&#xE1;s r&#xE1;pida absorci&#xF3;n de la glucosa y la sensibilidad a la insulina son posibles explicaciones para estos resultados: el m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico es el mayor sumidero de glucosa en el cuerpo, y su adaptaci&#xF3;n a la hipoxia de la altitud pueden influir en la absorci&#xF3;n de la glucosa y la sensibilidad a la insulina. En este estudio se prueba la hip&#xF3;tesis de que la hipoxia cr&#xF3;nica normob&#xE1;rica aumenta la insulina estimula la captaci&#xF3;n de glucosa en los m&#xFA;sculos s&#xF3;leo y disminuye los niveles de glucosa en plasma. Macho adultas ratones C57BL/6J se mantuvieron en normoxia [fracci&#xF3;n de inspiraci&#xF3;n O $ &#x2082; $ = 21% (control)] o hipoxia normob&#xE1;rica [fracci&#xF3;n de inspiraci&#xF3;n O $ &#x2082; $ = 10% (hipoxia)] durante 4 semanas. Entonces la glucosa en la sangre y los niveles de insulina, en la captaci&#xF3;n de glucosa en el m&#xFA;sculo in vitro, y los &#xED;ndices de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de la insulina se midieron. La hipoxia cr&#xF3;nica reduce la glucosa en sangre y la insulina en el plasma [glucosa: 14,3 &#xB1; 0,65 mM en control frente a 9,9 &#xB1; 0,83 mm en la hipoxia (p &#x26;lt;0,001), la insulina: 1,2 &#xB1; 0,2 ng / ml en el control frente a 0,7 &#xB1; 0,1 ng / ml en La hipoxia (P &#x26;lt;0,05)] y la sensibilidad a la insulina determinado por la evaluaci&#xF3;n del modelo homeost&#xE1;tico 2 [21,5 &#xB1; 3,8 en el control vs 39,3 &#xB1; 5,7 en la hipoxia (p &#x26;lt;0,03)]. No hubo diferencia significativa en la captaci&#xF3;n de glucosa basal in vitro en el m&#xFA;sculo soleus (1,59 &#xB1; 0,24 y 1,71 &#xB1; 0,15 mmol &#xB7; g &#x207B; &#xB9; $ h &#x207B; &#xB9; en el Control y la hipoxia, respectivamente). Sin embargo, la insulina estimula la captaci&#xF3;n de glucosa fue 30% mayor en el s&#xF3;leo despu&#xE9;s de 4 semanas de la hipoxia que el control (6,24 &#xB1; 0,23 vs 4,87 &#xB1; 0,37 mmol &#xB7; g &#xB7; h &#x207B; &#xB9; &#x207B; &#xB9;, P &#x26;lt;0,02). El contenido de gluc&#xF3;geno muscular no fue significativamente diferente entre los dos grupos. Los niveles de los transportadores de glucosa 4 y 1, phosphoinositide 3-quinasa, la gluc&#xF3;geno sintasa quinasa 3, la prote&#xED;na quinasa B / Akt, y AMP-activated prote&#xED;na quinasa no se vieron afectadas por la hipoxia cr&#xF3;nica. Fosforilaci&#xF3;n de Akt siguiente estimulaci&#xF3;n de la insulina en el m&#xFA;sculo s&#xF3;leo fue significativamente (25%) m&#xE1;s alto en la hipoxia que el control (P &#x26;lt;0,05). Ni la gluc&#xF3;geno sintasa quinasa 3 ni activada por AMP fosforilaci&#xF3;n de la prote&#xED;na quinasa cambiado despu&#xE9;s de 4 semanas de la hipoxia. Estos resultados demuestran que la adaptaci&#xF3;n de los m&#xFA;sculos esquel&#xE9;ticos a la hipoxia cr&#xF3;nica incluye aumento de la insulina estimula la captaci&#xF3;n de glucosa.

Aumenta la hipoxia cr&#xF3;nica absorci&#xF3;n de insulina estimulada por la glucosa en rat&#xF3;n m&#xFA;sculo s&#xF3;leo

&#x6548;&#x7387;&#x548C;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; PKA &#x886C;&#x5E95;&#xFF0C;&beta;-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;&#x5F15;&#x8D77;&#x4E86;&#x7A7A;&#x95F4;&#x9700;&#x8981; PKA &#x7684;&#x5BC6;&#x95ED;&#x7684;&#x6C60;&#x951A;&#x5B9A;&#x5728;&#x63A5;&#x8FD1;&#x5176;&#x57FA;&#x8D28;&#x3002;&#x4F9D;&#x8D56; PKA &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5FC3;&#x810F;&#x5FC3;&#x808C;&#x86CB;&#x767D;&#x4E00;&#x76F4;&#x6FC0;&#x70C8;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x4E3B;&#x9898;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x3001; &#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x5728;&#x808C;&#x8282; PKA &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x529F;&#x80FD;&#x4ECD;&#x7136;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x4E0E;&#x8868;&#x5F81;&#x65B0;&#x578B;&#x5FC3;&#x808C; AKAP &#xFF08;A &#x6FC0;&#x9176;&#x951A;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;) &#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; T (cTnT)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#x7B5B;&#x9009;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6210;&#x4EBA;&#x4EBA;&#x4F53;&#x5FC3;&#x810F;&#x57FA;&#x56E0;&#x5E93;&#x4E2D;&#x7684;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A; PKA &#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x4E9A;&#x7684;&#x57FA;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B; cTnT &#x8BF1;&#x9975;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6C89;&#x6DC0;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5; cTnT &#x53CC;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; AKAP&#xFF0C;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A; PKA &#x76D1;&#x7BA1;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7C7B;&#x578B;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x4E00;&#x548C;&#x4E8C;&#x3002;&#x5E72;&#x6270;&#x80BD; Ht31&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; Ht31P &#xFF08;&#x63A7;&#x5236;&#xFF09;&#x3001; &#x5E9F;&#x9664; cTnT/PKA-R &#x534F;&#x4F1A;&#x3002;&#x622A;&#x65AD;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x786E;&#x5B9A;&#x548C;&#x4E24;&#x4EB2;&#x6027;&#x87BA;&#x65CB;&#x57DF;&#x4E2D; cTnT &#x4F5C;&#x4E3A; PKA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;Ht31 &#x6216; Ht31P &#x7684;&#x80BD;&#x73B0;&#x573A;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8FD9;&#x4E00;&#x70B9; (&#x63A7;&#x5236;)&#x3002;Gelsolin &#x4F9D;&#x8D56;&#x6E05;&#x9664;&#x7684;&#x7EC6;&#x4E1D;&#x86CB;&#x767D;&#x4E5F;&#x51CF;&#x5C11;&#x808C;&#x4E1D;&#x7ED3;&#x6784;&#x7ED1;&#x5B9A; PKA &#x7C7B;&#x578B; II&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x66FF;&#x4EE3;&#x590D;&#x6742;&#x4E0E;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7BB1;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x7BB1;&#x7684;&#x7BB1;&#x4EA4;&#x6362;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x663E;&#x793A; PKA &#x7C7B;&#x578B; II &#x662F;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728;&#x808C;&#x4E1D;&#x7ED3;&#x6784;&#x6676;&#x683C;&#x4E2D;&#x3002;&#x4F4D;&#x79FB;&#x7684; PKA cTnT &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x4E0E;&#x9CA2;&#x9C7C; PKA &#x6D3B;&#x6027;&#x663E;&#x8457;&#x8DCC;&#x5E45;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528; cTnT &#x4F5C;&#x4E3A;&#x53CC;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5FC3;&#x808C; AKAP&#x3002;

&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; T&#x3001; &#x5FC3;&#x808C;&#x7684; AKAP&#xFF0C;tethers &#x5728; myofilaments &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A&#x3002;

Efficient and specific phosphorylation of PKA substrates, elicited in response to Î²-adrenergic stimulation, require spatially confined pools of PKA anchored in proximity of its substrates. PKA-dependent phosphorylation of cardiac sarcomeric proteins has been the subject of intense investigations. Yet, the identity, composition, and function of PKA complexes at the sarcomeres have remained elusive. Here we report the identification and characterization of a novel sarcomeric AKAP (A-kinase anchoring protein), cardiac troponin T (cTnT). Using yeast two-hybrid technology in screening two adult human heart cDNA libraries, we identified the regulatory subunit of PKA as interacting with human cTnT bait. Immunoprecipitation studies show that cTnT is a dual specificity AKAP, interacting with both PKA-regulatory subunits type I and II. The disruptor peptide Ht31, but not Ht31P (control), abolished cTnT/PKA-R association. Truncations and point mutations identified an amphipathic helix domain in cTnT as the PKA binding site. This was confirmed by a peptide SPOT assay in the presence of Ht31 or Ht31P (control). Gelsolin-dependent removal of thin filament proteins also reduced myofilament-bound PKA-type II. Using a cTn exchange procedure that substitutes the endogenous cTn complex with a recombinant cTn complex we show that PKA-type II is troponin-bound in the myofilament lattice. Displacement of PKA-cTnT complexes correlates with a significant decrease in myofibrillar PKA activity. Taken together, our data propose a novel role for cTnT as a dual-specificity sarcomeric AKAP.

Cardiac troponin T, a sarcomeric AKAP, tethers protein kinase A at the myofilaments.

Efficace et sp&eacute;cifique de la phosphorylation des substrats PKA, obtenue en r&eacute;ponse &agrave; une stimulation &beta;-adr&eacute;nergique, exigent dans l&#39;espace confin&eacute;s des piscines de PKA ancr&eacute; &agrave; proximit&eacute; de ses substrats. PKA-d&eacute;pendante la phosphorylation des prot&eacute;ines du sarcom&egrave;re cardiaques a fait l&#39;objet de recherches intenses. Pourtant, l&#39;identit&eacute;, la composition et fonction des complexes PKA aux sarcom&egrave;res sont rest&eacute;s insaisissables. Nous rapportons ici l&#39;identification et la caract&eacute;risation d&#39;un roman AKAP sarcom&egrave;re (prot&eacute;ine kinase-a ancrage) troponine T (cTnT). Utilisant la technologie de double-hybride de levure dans deux banques d&#39;ADNc de coeur humain adulte de d&eacute;pistage, nous avons identifi&eacute; la sous-unit&eacute; r&eacute;gulatrice de PKA comme interagissant avec app&acirc;t cTnT humaine. Immunopr&eacute;cipitation &eacute;tudes montrent que cTnT est une double sp&eacute;cificit&eacute; AKAP, interagissant avec les deux types de sous-unit&eacute;s PKA r&eacute;glementaires I et II. Le peptide disruptor Ht31, mais pas Ht31P (contr&ocirc;le), abolit l&#39;association cTnT/PKA-R. Troncatures et des mutations ponctuelles identifi&eacute; un domaine amphipathic helix cTnT comme le site de liaison de PKA. Ceci a &eacute;t&eacute; confirm&eacute; par un test SPOT de peptide en pr&eacute;sence de Ht31 ou Ht31P (contr&ocirc;le). Enl&egrave;vement de la gelsoline d&eacute;pendant des prot&eacute;ines des filaments minces r&eacute;duit &eacute;galement li&eacute; aux myofilaments PKA de type II. &Agrave; l&#39;aide d&#39;une proc&eacute;dure d&#39;&eacute;change de cTn qui substitue le cTn endog&egrave;ne complexe avec un cTn recombinant complex, nous montrons que PKA de type II est troponine li&eacute; dans le r&eacute;seau de myofilaments. D&eacute;placement de PKA-cTnT complexes est corr&eacute;l&eacute;e avec une diminution significative de l&#39;activit&eacute; PKA myofibrillaire. Pris ensemble, nos donn&eacute;es proposent un nouveau r&ocirc;le pour cTnT comme un AKAP sarcom&egrave;re double sp&eacute;cificit&eacute;.

Troponine T, un sarcom&egrave;re AKAP, longes de prot&eacute;ine kinase A aux myofilaments.

Effiziente und spezifische Phosphorylierung von PKA-Substrate, in Reaktion auf &beta;-adrenerge Stimulation entlockte erfordern r&auml;umlich beengte Becken des PKA in der N&auml;he ihrer Substrate verankert. PKA-abh&auml;ngige Phosphorylierung der kardialen Sarkomerproteine Proteine war Gegenstand intensiver Untersuchungen. Doch haben die Identit&auml;t, Zusammensetzung und Funktion der PKA-komplexe an der Sarkomeren schwer fassbaren blieben. Hier berichten wir die Identifizierung und Charakterisierung von einer neuartigen Sarkomerproteine AKAP (Verankerung Protein A-Kinase), kardiale Troponin T (cTnT). Hefe-zwei-Hybrid-Technologie im screening von zwei Erwachsenen menschlichen Herzen cDNA-Bibliotheken verwenden, wurden die regulatorische Untereinheit des PKA als Interaktion mit menschlichen cTnT K&ouml;der. Immunopr&auml;zipitation-Studien zeigen, dass diese cTnT eine duale Spezifit&auml;t AKAP, Interaktion mit sowohl PKA-regulatorischen Untereinheiten-Typ I und II ist. Der Disruptor Peptid Ht31, aber nicht Ht31P (Kontrolle), cTnT/PKA-R Vereinigung abgeschafft. K&uuml;rzungen und Punktmutationen identifiziert eine amphipathische Helix Dom&auml;ne in cTnT als die PKA-Bindungsstelle. Dies best&auml;tigte ein Peptid-SPOT-Assay in Anwesenheit von Ht31 oder Ht31P (Kontrolle). Gelsolina-abh&auml;ngigen Entfernung von d&uuml;nnen Filamenten Proteine reduziert auch Myofilament gebundene PKA-Typ II. Mit einem cTn-Austausch-Verfahren, die ersetzt, die endogene cTn Komplex mit einer komplexen rekombinante cTn zeigen wir, dass PKA-Typ II Troponin in die Myofilament-Verband gebunden ist. Verschiebung der PKA-cTnT komplexe korreliert mit einem deutlichen R&uuml;ckgang der Myofibrill&auml;ren PKA-Aktivit&auml;t. Zusammen genommen, schlagen unsere Daten eine neue Rolle f&uuml;r cTnT als ein Dual-Spezifit&auml;t Sarkomerproteine AKAP.

Herztroponin T, ein Sarkomerproteine AKAP festbindet Proteinkinase A an der Myofilaments.

Efficace e specifica la fosforilazione dei substrati PKA, ha suscitato in risposta alla stimolazione &beta;-adrenergica, richiedono spazialmente confinate piscine di PKA ancorata in prossimit&agrave; dei suoi substrati. PKA-dipendente fosforilazione delle proteine cardiache sarcomero &egrave; stata oggetto di indagini intense. Eppure, l&#39;identit&agrave;, la composizione e la funzione dei complessi PKA presso i sarcomeri sono rimasti sfuggente. Qui riportiamo l&#39;identificazione e la caratterizzazione di un romanzo AKAP sarcomero (A-chinasi di proteina d&#39;ancoraggio), troponina cardiaca T (cTnT). Utilizzando la tecnologia two-hybrid lievito in due librerie di cDNA cuore umano adulto di screening, abbiamo identificato la subunit&agrave; normativa di PKA come interagire con esca umana cTnT. Immunoprecipitazione studi mostrano che cTnT &egrave; una specificit&agrave; dual AKAP, interagendo con entrambi PKA-regolamentazione tipo subunit&agrave; I e II. Il peptide disruptor Ht31, ma non Ht31P (controllo), abolito associazione cTnT/PKA-R. Troncamenti e mutazioni puntiformi identificato un dominio elica amphipathic in cTnT come il sito di legame di PKA. Ci&ograve; &egrave; stato confermato da un dosaggio SPOT del peptide in presenza di Ht31 o Ht31P (controllo). Rimozione gelsolina-dipendente delle proteine dei filamenti sottili anche ridotto associato a miofilamenti PKA-tipo II. Utilizzando una procedura di scambio cTn che sostituisce la cTn endogena complesse con un complesso di cTn ricombinante mostriamo che PKA-tipo II &egrave; troponina associato nella grata di miofilamenti. Spostamento di PKA-cTnT complessi correla con una diminuzione significativa nell&#39;attivit&agrave; PKA miofibrillare. Presi insieme, i nostri dati propongono un nuovo ruolo per cTnT come un dual-specificit&agrave; sarcomero AKAP.

Troponina cardiaca T, un sarcomero AKAP, attacchi della chinasi di proteina A presso i miofilamenti.

&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; &beta;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A98;&#x767A;&#x3001;PKA &#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x3001;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684; PKA &#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x305D;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x505C;&#x6CCA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PKA &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x5FC3;&#x81D3;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x5F37;&#x70C8;&#x306A;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x3060;, &#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;, &#x7D44;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073; PKA &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x95A2;&#x6570;&#x306F;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x5B9A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x65B0;&#x898F;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2; AKAP &#xFF08;A &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF09; &#x5831;&#x544A;&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3; T (cTnT)&#x3002;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x5FC3;&#x306E; cDNA &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3067;&#x9175;&#x6BCD; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; PKA &#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x4EBA;&#x9593; cTnT &#x306E;&#x990C;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x305D;&#x306E; cTnT &#x4E8C;&#x91CD;&#x7279;&#x7570;&#x6027; I &#x304A;&#x3088;&#x3073; II &#x306E;&#x4E21;&#x65B9; PKA &#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B; AKAP &#x3067;&#x3059;.&#x4E71;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; Ht31&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x3044; Ht31P (&#x5236;&#x5FA1;)&#x3001;cTnT/PKA-r &#x5354;&#x4F1A;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3068;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x4E21;&#x89AA;&#x5A92;&#x6027;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x306B; cTnT PKA &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; Ht31 &#x307E;&#x305F;&#x306F; Ht31P &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F; (&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;)&#x3002;&#x7D30;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B2;&#x30EB;&#x30BE;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x9664;&#x53BB;&#x3082;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; PKA &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; II &#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; cTn &#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3067;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; cTn &#x4EE3;&#x66FF; cTn &#x4EA4;&#x63DB;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; PKA &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; II &#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3; &#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x683C;&#x5B50;&#x306B;&#x533A;&#x5207;&#x308B;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x4F4D; PKA cTnT &#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x7B4B;&#x539F;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E; PKA &#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; cTnT &#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2; AKAP &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x65B0;&#x898F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.

&#x5FC3;&#x7B4B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3; T &#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2; AKAP &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A &#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30C6;&#x30B6;&#x30FC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&Beta;-&#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC744; elicited PKA &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; &#xD544;&#xC694; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; PKA&#xC758; &#xD55C;&#xC815; &#xB41C; &#xC218;&#xC601;&#xC7A5;&#xC758; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xADFC;&#xC811;&#xC5D0; &#xC815;&#xBC15;. PKA &#xC885;&#xC18D; &#xC2EC;&#xC7A5; sarcomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xAC15;&#xB82C;&#xD55C; &#xC218;&#xC0AC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC774; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC815;&#xCCB4;&#xC131; &#xAD6C;&#xC131;&#xACFC; &#xD568;&#xC218;&#xB294; sarcomeres&#xC5D0;&#xC11C; PKA &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC560;&#xB9E4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C;&#xC124; sarcomeric AKAP (A &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;)&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC2EC;&#xC7A5; troponin T (cTnT). &#xB450; &#xC131;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB9C8;&#xC74C; cDNA &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB204; &#xB8E9; 2 &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; cTnT &#xBBF8;&#xB07C;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; PKA&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xD30C;&#xC545;. Immunoprecipitation &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xADF8; cTnT &#xC774;&#xC911; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; AKAP, I &#xBC0F; II PKA &#xADDC;&#xC815; subunits &#xC720;&#xD615; &#xBAA8;&#xB450;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC29;&#xD574; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; Ht31, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; Ht31P (&#xC81C;&#xC5B4;) cTnT/PKA-R &#xD611;&#xD68C; &#xD3D0;&#xC9C0;. &#xC798;&#xB9BC; &#xBC0F; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; PKA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; Ctnt&#xC5D0;&#xC11C; amphipathic &#xB098;&#xC120; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; Ht31 &#xB610;&#xB294; ht31p&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC790;&#xB9AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; (&#xC81C;&#xC5B4;). &#xC587;&#xC740; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; Gelsolin &#xC885;&#xC18D; &#xC81C;&#xAC70; myofilament &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; PKA &#xC720;&#xD615; II &#xAC10;&#xC18C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; PKA &#xD0C0;&#xC785; II&#xB294; troponin &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; myofilament &#xACA9;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; cTn &#xBCF5;&#xD569; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0DD; Ctn&#xC744; &#xB300;&#xCCB4; &#xD558;&#xB294; cTn &#xAD50;&#xD658; &#xC808;&#xCC28;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. PKA cTnT &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xBCC0;&#xC704; myofibrillar PKA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xC5F0;&#xAD00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC18C;&#xC124; &#xC5ED;&#xD560; &#xC704;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; cTnT &#xC774;&#xC911; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; sarcomeric AKAP&#xB85C;.

&#xC2EC;&#xC7A5; troponin T, sarcomeric AKAP tethers &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A&#xB97C; myofilaments&#xC5D0;&#xC11C;.

Fosforilaci&oacute;n eficiente y espec&iacute;fica de sustratos PKA, suscitado en respuesta a la estimulaci&oacute;n &beta;-adren&eacute;rgica, requieren espacial confinados piscinas de PKA anclado en la proximidad de sus sustratos. PKA dependiente fosforilaci&oacute;n de prote&iacute;nas card&iacute;acas sarcomeric ha sido objeto de intensas investigaciones. Sin embargo, la identidad, composici&oacute;n y funci&oacute;n de complejos PKA en los sarc&oacute;meros se han mantenido elusivos. Aqu&iacute; divulgamos la identificaci&oacute;n y caracterizaci&oacute;n de una novela AKAP sarcomeric (prote&iacute;na de anclaje de quinasa-A), troponina T (cTnT). Usando tecnolog&iacute;a de dos h&iacute;brido de levadura en la proyecci&oacute;n de dos bibliotecas de cDNA de coraz&oacute;n humano adulto, identificamos la subunidad reguladora de PKA interactuar con cebo humano cTnT. Inmunoprecipitaci&oacute;n estudios muestran que CTNT es una especificidad dual AKAP, interactuando con ambos tipos de subunidades reguladoras PKA I y II. El p&eacute;ptido disruptor Ht31, pero no Ht31P (control), aboli&oacute; la Asociaci&oacute;n cTnT/PKA-R. Truncamientos y mutaciones de punto hab&iacute;an identificado un dominio de h&eacute;lice anfip&aacute;ticos en reposo como el sitio de uni&oacute;n de PKA. Esto fue confirmado por un an&aacute;lisis de punto de p&eacute;ptido en presencia de Ht31 o Ht31P (control). Retiro gelsolina dependiente de prote&iacute;nas de filamentos delgados tambi&eacute;n reducido Miofilamento-limite PKA-tipo II. Mediante un procedimiento de intercambio de cTn que sustituye la cTn end&oacute;gena compleja con un cTn recombinante complejo mostramos que PKA-tipo II es troponina-limita en el enrejado de miofilamentos. Desplazamiento de PKA-cTnT complejos se correlaciona con una disminuci&oacute;n significativa en la actividad PKA miofibrilar. Tomados en conjunto, nuestros datos proponen un nuevo papel para cTnT como un AKAP sarcomeric especificidad dual.

Troponina T, un AKAP sarcomeric, correas kinase de prote&iacute;na A en los miofilamentos.

&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x5185;&#x5BB9;&#x662F;&#x5047;&#x5B9A;&#x5185;&#x5728;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x662F;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x808C;&#x8089;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7EA7;&#x522B;&#x6210;&#x6B63;&#x6BD4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E3E;&#x884C;&#x771F;&#x6B63;&#x6240;&#x6709;&#x808C;&#x8089;&#x7684;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3002;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x6A2A;&#x8188;&#x819C;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x65AD;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x808C;&#x8089;&#x7EC4;&#x7EC7; &#xFF1B;&#x5B83;&#x662F;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x808C;&#x8089;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x5176;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x90FD;&#x672C;&#x8D28;&#x4E0A;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x547C;&#x5438;&#x7387;&#x90FD;&#x5728;&#x6A2A;&#x8188;&#x819C;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x817F;&#x4E09;&#x5934;&#x808C;&#x808C; &#xFF08;TS&#xFF0C;&#x80A2;&#x4F53;&#x808C;&#x8089;&#xFF09; &#x76F8;&#x6BD4;&#x66F4;&#x5927;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B64;&#x7ACB;&#x9694;&#x819C;&#x548C; TS &#x7684;&#x6210;&#x4EBA;&#x7537;&#x6027;&#x65AF;&#x666E;&#x62C9;&#x683C;&#x5927;&#x9F20;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x3002;&#x6781;&#x8C31;&#x6CD5;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x547C;&#x5438;&#x3002;&#x547C;&#x5438;&#x7684;&#x914D;&#x5408;&#xFF0C;&#x89E3;&#x5076;&#x8054;&#x86CB;&#x767D; 1&#x3001; 2 &#x548C; 3 &#xFF08;UCP1&#x3001; UCP2 &#x548C; UCP3&#xFF09; &#x7684;&#x5185;&#x5BB9;&#x548C;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053; 1 &#xFF08;VDAC1&#xFF09; &#x7531;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x5206;&#x5149;&#x5149;&#x5EA6;&#x6CD5;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x590D;&#x6742;&#x56DB;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x547C;&#x5438;&#x56FD;&#x5BB6; 3 (&#x57FA;&#x677F;&#x548C;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684; ADP) &#x548C; 5 (&#x8BA9;) &#x5206;&#x522B;&#x662F; 27 &plusmn; 8%&#x53CA; 24 &plusmn; 10%&#xFF0C;&#xFF0C;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684;&#x6BD4;&#x5728; TS &#x7684;&#x9694;&#x819C; (P &lt; &#x5BF9;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6BD4;&#x8F83; 0.05&#xFF09;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x547C;&#x5438;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x4E09;&#x3001; &#x7B2C;&#x56DB;&#x548C;&#x7B2C;&#x4E94;&#x3001; UCP1 &#x548C; VDAC1 &#x7684;&#x5185;&#x5BB9;&#x5206;&#x522B;&#x9AD8;&#x8188;&#x808C;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; (23 &plusmn; 6&#xFF0C;30 &plusmn; 8&#xFF0C;25 &plusmn; 8&#x3001; 36&#x3001; 15 &#x548C; 18 &plusmn; &plusmn; 8%&#x5206;&#x522B;&#xFF0C;P &le; 0.04 &#x6240;&#x6709;&#x6BD4;&#x8F83;&#xFF09;&#x3002;&#x590D;&#x6742;&#x56DB;&#x6D3B;&#x52A8;&#x662F; 64 &plusmn; 16%&#x9AD8;&#x51FA;&#x8188;&#x808C;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; (P &le; 0.01)&#x3002;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; UCP2 &#x548C; UCP3 &#x5185;&#x5BB9;&#x548C;&#x590D;&#x6742;&#x6211;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E0D;&#x662F; TS &#x548C;&#x9694;&#x819C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8188;&#x808C;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x547C;&#x5438;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684;&#x7A0E;&#x7387;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x547C;&#x5438;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x542B;&#x91CF;&#x9AD8;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x4F7F;&#x65E0;&#x6548;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x521D;&#x7684;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6307;&#x793A;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x5185;&#x5BB9;&#x4E0D;&#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x6A2A;&#x8188;&#x819C;&#x4E2D;&#x7684;&#x6709;&#x6C27;&#x4EE3;&#x8C22;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; UCP1 &#x548C; VDAC1 &#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x8C03;&#x8282;&#x9694;&#x819C;&#x6709;&#x6C27;&#x4EE3;&#x8C22;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x5927;&#x9F20;&#x8188;&#x808C;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x5728;&#x4E0B;&#x80A2;&#x808C;&#x8089;&#x6BD4;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x547C;&#x5438;&#x7387;&#x8F83;&#x4F4E;&#x3002;

The mitochondrial content of skeletal muscles is proportional to activity level, with the assumption that intrinsic mitochondrial function is the same in all muscles. This may not hold true for all muscles. For example, the diaphragm is a constantly active muscle; it is possible that its mitochondria are intrinsically different compared with other muscles. This study tested the hypothesis that mitochondrial respiration rates are greater in the diaphragm compared with triceps surae (TS, a limb muscle). We isolated mitochondria from diaphragm and TS of adult male Sprague Dawley rats. Mitochondrial respiration was measured by polarography. The contents of respiratory complexes, uncoupling proteins 1, 2, and 3 (UCP1, UCP2, and UCP3), and voltage-dependent anion channel 1 (VDAC1) were determined by immunoblotting. Complex IV activity was measured by spectrophotometry. Mitochondrial respiration states 3 (substrate and ADP driven) and 5 (uncoupled) were 27 Â± 8% and 24 Â± 10%, respectively, lower in diaphragm than in TS (P < 0.05 for both comparisons). However, the contents of respiratory complexes III, IV, and V, UCP1, and VDAC1 were higher in diaphragm mitochondria (23 Â± 6, 30 Â± 8, 25 Â± 8, 36 Â± 15, and 18 Â± 8% respectively, P â‰¤ 0.04 for all comparisons). Complex IV activity was 64 Â± 16% higher in diaphragm mitochondria (P â‰¤ 0.01). Mitochondrial UCP2 and UCP3 content and complex I activity were not different between TS and diaphragm. These data indicate that diaphragm mitochondria respire at lower rates, despite a higher content of respiratory complexes. The results invalidate our initial hypothesis and indicate that mitochondrial content is not the only determinant of aerobic capacity in the diaphragm. We propose that UCP1 and VDAC1 play a role in regulating diaphragm aerobic capacity.

Rat diaphragm mitochondria have lower intrinsic respiratory rates than mitochondria in limb muscles.

Le contenu mitochondrial des muscles squelettiques est proportionnelle au niveau d&#x26;#39;activit&#xE9;, avec l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que la fonction mitochondriale intrins&#xE8;que est la m&#xEA;me dans tous les muscles. Cela peut ne pas vrai pour tous les muscles. Par exemple, le diaphragme est un muscle actif en permanence, il est possible que ses mitochondries sont intrins&#xE8;quement diff&#xE9;rents par rapport &#xE0; d&#x26;#39;autres muscles. Cette &#xE9;tude a test&#xE9; l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que les taux de la respiration mitochondriale sont plus importants dans la membrane par rapport &#xE0; triceps sural (TS, un muscle du membre). Nous avons isol&#xE9; les mitochondries du diaphragme et TS de rats m&#xE2;les adultes Sprague-Dawley. La respiration mitochondriale a &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;e par polarographie. Le contenu de complexes respiratoires, le d&#xE9;couplage des prot&#xE9;ines 1, 2 et 3 (UCP1, UCP2, et UCP3), et le canal d&#x26;#39;anions d&#xE9;pendant de la tension 1 (VDAC1) ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;s par immunotransfert. Complexe d&#x26;#39;activit&#xE9; IV a &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;e par spectrophotom&#xE9;trie. Etats respiration mitochondriale 3 (substrat et de l&#x26;#39;ADP driven) et 5 (d&#xE9;coupl&#xE9;) &#xE9;taient de 27 &#xB1; 8% et 24 &#xB1; 10%, respectivement, inf&#xE9;rieure dans le diaphragme que dans TS (P &#x26;lt;0,05 pour les deux comparaisons). Cependant, le contenu de l&#x26;#39;appareil respiratoire complexes III, IV et V, UCP1, et VDAC1 &#xE9;taient plus &#xE9;lev&#xE9;s dans les mitochondries &#xE0; membrane (23 &#xB1; 6, 30 &#xB1; 8, 25 &#xB1; 8, 36 &#xB1; 15, et 18 &#xB1; 8%, respectivement, P &#x2264; 0,04 pour toutes les comparaisons). Complexe d&#x26;#39;activit&#xE9; IV &#xE9;tait de 64 &#xB1; 16% plus &#xE9;lev&#xE9; dans le diaphragme mitochondries (P &#x2264; 0,01). Mitochondriale UCP2 et UCP3 contenu et de l&#x26;#39;activit&#xE9; complexe I ne sont pas diff&#xE9;rents entre les TS et le diaphragme. Ces donn&#xE9;es indiquent que respirent membrane des mitochondries &#xE0; des taux inf&#xE9;rieurs, en d&#xE9;pit d&#x26;#39;une teneur plus &#xE9;lev&#xE9;e des complexes respiratoires. Les r&#xE9;sultats infirmer notre hypoth&#xE8;se initiale et indiquent que le contenu mitochondrial n&#x26;#39;est pas le seul d&#xE9;terminant de la capacit&#xE9; a&#xE9;robie dans le diaphragme. Nous proposons que UCP1 et VDAC1 jouer un r&#xF4;le dans la r&#xE9;gulation de la capacit&#xE9; a&#xE9;robie diaphragme.

Diaphragme de rat mitochondries ont des taux inf&#xE9;rieurs respiratoires intrins&#xE8;ques que les mitochondries dans les muscles des membres

Der mitochondriale Inhalt der Skelettmuskulatur ist proportional zur Aktivit&auml;t, mit der Annahme, dass die mitochondriale Funktion in alle Muskeln gleich ist. Dies kann nicht f&uuml;r alle Muskeln zutreffen. Die Membran ist beispielsweise ein st&auml;ndig aktiv Muskel; Es ist m&ouml;glich, dass die Mitochondrien Finanzierungsgrunds&auml;tze grundlegend verschieden im Vergleich zu anderen Muskeln sind. Diese Studie getestet die Hypothese, die mitochondriale Atmung Preise im Zwerchfell gegen&uuml;ber Trizeps Surae (TS, ein Glied-Muskel) gr&ouml;&szlig;er sind. Wir isolierte Mitochondrien aus Membran und TS von Erwachsenen m&auml;nnlichen Sprague-Dawley Ratten. Mitochondriale Atmung wurde durch Polarographie gemessen. Der Inhalt der Atemwege komplexe, Abkopplung Proteine 1, 2 und 3 (UCP1 genannt, UCP2 und UCP3), und Spannung-abh&auml;ngigen Anionenkanal 1 (VDAC1) wurden durch Immunoblotting bestimmt. Komplex IV-Aktivit&auml;t wurde durch Spektralphotometrie gemessen. Mitochondriale Atmung Staaten 3 (Substrat und ADP angetrieben) und 5 (entkoppelt) waren 27 &plusmn; 8 % und 24 &plusmn; 10 %, bzw., in Membrane als TS geringer (P &lt; 0,05 f&uuml;r beide Vergleiche). Jedoch den Inhalt der Atemwege komplexe III, IV und V, UCP1 genannt und VDAC1 lagen in den Mitochondrien Membran (23 &plusmn; 6, 30 &plusmn; 8, 25 &plusmn; 8, 36, 15 und 18 &plusmn; &plusmn; 8 % bzw. P &le; 0,04 f&uuml;r alle Vergleiche). Komplex IV-Aktivit&auml;t war 64 &plusmn; 16 % h&ouml;her in den Mitochondrien Membran (P &le; 0,01). Mitochondriale UCP2 und UCP3 Inhalte und komplex ich Aktivit&auml;ten waren nicht anders zwischen TS und Zwerchfell. Diese Daten zeigen, dass die Membran Mitochondrien bei niedrigeren Raten, trotz einer h&ouml;heren Gehalt der Atemwege komplexe aufatmen. Die Ergebnisse unserer ersten Hypothese ung&uuml;ltig und darauf hinweisen, dass die mitochondriale Inhalt ist nicht die einzige Determinante der aeroben Kapazit&auml;t im Zwerchfell. Wir schlagen UCP1 genannt und VDAC1 eine Rolle spielen bei der Regulierung der Membran aerobe Kapazit&auml;t.

Ratte Membran Mitochondrien haben niedrigere intrinsische Atemwege als Mitochondrien in der Muskulatur der Gliedma&szlig;en.

Il contenuto mitocondriale dei muscoli scheletrici &egrave; proporzionale al livello di attivit&agrave;, con il presupposto che la funzione mitocondriale intrinseca &egrave; la stessa in tutti i muscoli. Questo pu&ograve; non valgono per tutti i muscoli. Ad esempio, il diaframma &egrave; un muscolo costantemente attivo; &egrave; possibile che i suoi mitocondri sono intrinsecamente diversi rispetto ad altri muscoli. Questo studio ha testato l&#39;ipotesi che i tassi di respirazione mitocondriale sono maggiori del diaframma rispetto al tricipite surale (TS, un muscolo dell&#39;arto). Abbiamo isolato i mitocondri da diaframma e TS di ratti Sprague Dawley maschi adulti. Respirazione mitocondriale &egrave; stato misurato da polarografia. Il contenuto dei complessi respiratori, disgiungere proteine 1, 2 e 3 (UCP1, UCP2 e UCP3), e il canale voltaggio-dipendente anione 1 (VDAC1) sono stati determinati da immunoblotting. Complesso IV attivit&agrave; &egrave; stata misurata mediante spettrofotometria. Respirazione mitocondriale stati 3 (substrato e ADP driven) e 5 (disgiunto) erano 27 &plusmn; 8% e 24 &plusmn; 10%, rispettivamente, inferiore a diaframma rispetto a TS (P &lt; 0.05 per entrambi i confronti). Tuttavia, il contenuto dei complessi respiratori, III, IV e V, UCP1 e VDAC1 era pi&ugrave; elevato nei mitocondri a membrana (23 &plusmn; 6, 30 &plusmn; 8, 25 &plusmn; 8, 36 &plusmn; 15 e 18 &plusmn; 8% rispettivamente, P &le; 0,04 per tutti i confronti). Complesso IV attivit&agrave; era 64 &plusmn; 16% superiore nei mitocondri a membrana (P &le; 0,01). Mitocondriale contenuto UCP2 e UCP3 e complesso attivit&agrave; non erano diversi tra TS e diaframma. Questi dati indicano che i mitocondri diaframma respire a tassi inferiori, nonostante un pi&ugrave; alto contenuto di complessi respiratori. I risultati invalidano la nostra ipotesi iniziale e indicano che il contenuto mitocondriale non &egrave; il solo determinante della capacit&agrave; aerobica del diaframma. Proponiamo che UCP1 e VDAC1 gioca un ruolo nella regolazione della capacit&agrave; aerobica a membrana.

Ratto diaframma mitocondri hanno tassi respiratori intrinseci inferiori rispetto i mitocondri nei muscoli degli arti.

&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x5185;&#x5BB9;&#x306F;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x3067;&#x540C;&#x3058;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x524D;&#x63D0;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x6D3B;&#x52D5;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x306B;&#x5F53;&#x3066;&#x306F;&#x307E;&#x3089;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30D5;&#x30E9;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x5E38;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x7B4B;&#x8089;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x3068;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x547C;&#x5438;&#x7387;&#x306F;&#x4E0B;&#x817F;&#x4E09;&#x982D;&#x7B4B;&#xFF08;TS&#x3001;&#x624B;&#x8DB3;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#xFF09;&#x3068;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E4;&#x30D5;&#x30E9;&#x30E0;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x96C4;Sprague Dawley&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6A2A;&#x9694;&#x819C;&#x3068;TS&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x547C;&#x5438;&#x306F;&#x30DD;&#x30FC;&#x30E9;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x547C;&#x5438;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5185;&#x5BB9;&#x306F;&#x3001;&#x8131;&#x5171;&#x5F79;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;1&#x3001;2&#x3001;3&#xFF08;UCP1&#x3001;UCP&#x200B;&#x200B;2&#x3001;UCP3&#x3068;&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A2;&#x30CB;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;1&#xFF08;VDAC1&#xFF09;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;IV&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5149;&#x5149;&#x5EA6;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x547C;&#x5438;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x304C;3&#xFF08;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;ADP&#x99C6;&#x52D5;&#xFF09;&#x3068;5&#xFF08;&#x975E;&#x7D50;&#x5408;&#xFF09;27&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#xB1;8&#xFF05;&#x3068;24&#xB1;10&#xFF05;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;TS&#xFF08;&#x4E21;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;P 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&#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721;&#xC758; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xB294; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC77C; &#xAC00;&#xC815; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xBE44;&#xB840; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; true&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xD6A1; &#xACBD; &#xB9C9;&#xC774; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC801;&#xC778; &#xADFC;&#xC721;; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC758;&#xB294; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E4;&#xB978; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;&#xC774; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558;&#xB2E4;.&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xD638;&#xD761; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0BC; &#xB450; &#xADFC; surae (TS, &#xB2E4;&#xB9AC; &#xADFC;&#xC721;)&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD6A1; &#xACBD; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xD070; &#xAC00;&#xC124; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4; &#xD504; &#xB7A8;&#xACFC; &#xC131;&#xC778; &#xB0A8;&#xC131; Sprague Dawley &#xC950;&#xC758; TS&#xC5D0;&#xC11C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;. &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xD638;&#xD761; polarography&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE21;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 1, 2 &#xBC0F; 3 (UCP1, UCP2, &#xBC0F; UCP3), &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DC; &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC744; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; 1 (VDAC1) immunoblotting&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; 4 &#xC0BC; &#xBD84; &#xAD11; &#xAD11;&#xB3C4; &#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE21;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xD638;&#xD761; &#xC0C1;&#xD0DC; 3 (&#xAE30;&#xD310; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xB3D9; ADP) &#xBC0F; 5 (&#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C;)&#xB294; 27 &plusmn; 8%&#xC640; 24 &plusmn; 10%, &#xAC01;&#xAC01;, ts&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6A1; &#xACBD; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0AE;&#xC740; (P 0.05 &lt; &#xB450; &#xBE44;&#xAD50;). &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xB2E8;&#xC9C0; III, IV &#xBC0F; V, UCP1, &#xBC0F; vdac1&#xC758; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC744; &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4; &#xD504; &#xB7A8; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB192;&#xC558;&#xB2E4; (23 &plusmn; 6, 30 &plusmn; 8, 25 &plusmn; 8, 36 &plusmn; 15, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; 18 &plusmn; 8% &#xAC01;&#xAC01; P &le; 0.04 &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBE44;&#xAD50;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;). &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; 4 &#xC138; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; 64 &plusmn; 16% &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4; &#xD504; &#xB7A8; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; (P &le; 0.01)&#xC5D0;&#xC11C; &#xB354; &#xB192;&#xC740;. &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; UCP2 &#xBC0F; UCP3 &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB09C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD588;&#xB2E4; TS&#xC640; &#xD6A1; &#xACBD; &#xB9C9; &#xC0AC;&#xC774; &#xB2E4;&#xB978;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4; &#xD504; &#xB7A8; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xD638;&#xD761; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xB0AE;&#xC740; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; respire&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xBB34;&#xD6A8;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xD6A1; &#xACBD; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5D0;&#xC5B4;&#xB85C;&#xBE45; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; UCP1 &#xBC0F; VDAC1 &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4; &#xD504; &#xB7A8; &#xC5D0;&#xC5B4;&#xB85C;&#xBE45; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xAC83;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC950; &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4; &#xD504; &#xB7A8; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC0AC;&#xC9C0; &#xADFC;&#xC721;&#xC758; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB0AE;&#xC740; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xAC00;&#xC9C4;&#xB2E4;.

El contenido mitocondrial de los m&#xFA;sculos esquel&#xE9;ticos es proporcional al nivel de actividad, con la suposici&#xF3;n de que la funci&#xF3;n mitocondrial intr&#xED;nseca es la misma en todos los m&#xFA;sculos. Esto no puede ser cierto para todos los m&#xFA;sculos. Por ejemplo, el diafragma es un m&#xFA;sculo constantemente activa, es posible que su mitocondrias son intr&#xED;nsecamente diferente en comparaci&#xF3;n con otros m&#xFA;sculos. Este estudio prob&#xF3; la hip&#xF3;tesis de que las tasas de respiraci&#xF3;n mitocondrial son mayores en el diafragma en comparaci&#xF3;n con el tr&#xED;ceps sural (TS, una muscular de las extremidades). Se aislaron las mitocondrias de diafragma y el TS de ratas macho adultas Sprague Dawley. Respiraci&#xF3;n mitocondrial se midi&#xF3; por polarograf&#xED;a. El contenido de los complejos de prote&#xED;nas desacoplantes respiratorias, 1, 2 y 3 (UCP1, UCP2, y UCP3), y dependiente de la tensi&#xF3;n de los canales de aniones 1 (VDAC1) se determinaron por inmunotransferencia. Actividad del complejo IV se midi&#xF3; por espectrofotometr&#xED;a. Estados respiraci&#xF3;n mitocondrial 3 (sustrato e impulsada por ADP) y 5 (desacoplado) fueron de 27 &#xB1; 8% y 24 &#xB1; 10%, respectivamente, m&#xE1;s bajas en el diafragma que en TS (P &#x26;lt;0,05 para ambas comparaciones). Sin embargo, el contenido de las v&#xED;as respiratorias III complejos, IV y V, UCP1, y VDAC1 fueron mayores en las mitocondrias diafragma (23 &#xB1; 6, 30 &#xB1; 8, 25 &#xB1; 8, 36 &#xB1; 15, y 18 &#xB1; 8%, respectivamente, P &#x2264; 0,04 para todas las comparaciones). Actividad del complejo IV fue de 64 &#xB1; 16% superior en las mitocondrias de diafragma (P &#x2264; 0,01). Mitocondrial UCP2 y UCP3 contenido y la actividad de complejo I no fueron diferentes entre TS y el diafragma. Estos datos indican que respiran diafragma mitocondrias a tasas m&#xE1;s bajas, a pesar de un contenido m&#xE1;s alto de los complejos respiratorios. Los resultados invalidan la hip&#xF3;tesis inicial e indican que el contenido mitocondrial no es el &#xFA;nico factor determinante de la capacidad aer&#xF3;bica en el diafragma. Proponemos que la UCP1 y VDAC1 desempe&#xF1;ar un papel en la regulaci&#xF3;n de la capacidad aer&#xF3;bica del diafragma.

El diafragma de rata mitocondrias tienen tasas m&#xE1;s bajas respiratorias intr&#xED;nseco que las mitocondrias en los m&#xFA;sculos de las extremidades

&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF;&#x6539;&#x53D8;&#x5FC3;&#x810F;&#x808C;&#x4E1D;&#x7ED3;&#x6784;&#x54CD;&#x5E94;&#x662F;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5FC3;&#x8870;&#x7684;&#x6807;&#x5FD7;&#x3002;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; I &#xFF08;cTnI&#xFF09; &#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x8282;&#x6536;&#x7F29;&#x529B;&#x548C;&#x5FC3;&#x810F;&#x808C;&#x8089;&#x7ECF;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; &#x2170; &#x53EF;&#x4EE5;&#x7531;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#xFF08;PKA&#xFF09; &#x5728; Ser(22/23) &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC) &#x5728; Ser(22/23)&#x3001; Ser(42/44)&#x3001; Thr(143) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;Ser(22/23) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x610F;&#x4E49;&#x5145;&#x5206;&#x4E86;&#x89E3;&#xFF0C;&#x800C;&#x5176;&#x4ED6;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; &#x2170; &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x6536;&#x7F29;&#x529B;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECD;&#x7136;&#x6FC0;&#x70C8;&#x8FA9;&#x8BBA;&#x7684;&#x4E3B;&#x9898;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x8BC1;&#x636E;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x81EA;&#x4E0A;&#x800C;&#x4E0B;&#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5; (MS) &#x4E0E;&#x4EB2;&#x548C;&#x5C42;&#x6790;&#x5B9A;&#x91CF;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;&#x5927;&#x9F20;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; &#x2170; &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x66F4;&#x6539; (SHR) &#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x6A21;&#x578B;&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;&#x6027;&#x5FC3;&#x810F;&#x75C5;&#x548C;&#x5931;&#x8D25;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;cTnI &#x662F;&#x5728;&#x5931;&#x8D25;&#x4E2D;&#x7684; hyperphosphorylated &#x76F8;&#x6BD4;&#x5E74;&#x9F84;&#x5339;&#x914D;&#x8840;&#x538B;&#x6B63;&#x5E38;&#x5927;&#x9F20;&#x4EAC;&#x90FD;&#x5927;&#x9F20; SHR &#x5FC3;&#x808C;&#x3002;&#x81EA;&#x4E0A;&#x800C;&#x4E0B;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x6355;&#x83B7;&#x89E3;&#x79BB; MS &#x6BEB;&#x4E0D;&#x542B;&#x7CCA;&#x5730;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x589E;&#x5F3A;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230; Ser(22/23) &#x548C; Ser(42/44) &#x5728; SHR.&#x589E;&#x5F3A; Ser(22/23) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6838;&#x5B9E;&#x4E0E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7279;&#x5F02;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x5206;&#x6790;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E; PKC-&alpha; &#x4E0A;&#x8C03;&#x548C;-&delta;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11; PKC&epsilon;&#xFF0C;&#x4F46; SHR &#x5FC3;&#x808C; PKA &#x6216; PKC-&beta; &#x6C34;&#x5E73;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x5728;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;&#x5FC3;&#x8870;&#xFF0C;&#x652F;&#x6301; cTnI PKC &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x6170;&#x85C9;&#x548C;&#x5FC3;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5168;&#x4E0E;&#x6F5C;&#x5728;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4; &#xFF08;PKC &#x7279;&#x5B9A;&#xFF09; &#x7AD9;&#x70B9;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4F53;&#x5185;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; cTnI-Ser(42/44) &#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

&#x589E;&#x5F3A;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728;&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;&#x5FC3;&#x8870;&#x3002;

An altered cardiac myofilament response to activating Ca(2+) is a hallmark of human heart failure. Phosphorylation of cardiac troponin I (cTnI) is critical in modulating contractility and Ca(2+) sensitivity of cardiac muscle. cTnI can be phosphorylated by protein kinase A (PKA) at Ser(22/23) and protein kinase C (PKC) at Ser(22/23), Ser(42/44), and Thr(143). Whereas the functional significance of Ser(22/23) phosphorylation is well understood, the role of other cTnI phosphorylation sites in the regulation of cardiac contractility remains a topic of intense debate, in part, due to the lack of evidence of in vivo phosphorylation. In this study, we utilized top-down high resolution mass spectrometry (MS) combined with immunoaffinity chromatography to determine quantitatively the cTnI phosphorylation changes in spontaneously hypertensive rat (SHR) model of hypertensive heart disease and failure. Our data indicate that cTnI is hyperphosphorylated in the failing SHR myocardium compared with age-matched normotensive Wistar-Kyoto rats. The top-down electron capture dissociation MS unambiguously localized augmented phosphorylation sites to Ser(22/23) and Ser(42/44) in SHR. Enhanced Ser(22/23) phosphorylation was verified by immunoblotting with phospho-specific antibodies. Immunoblot analysis also revealed up-regulation of PKC-Î± and -Î´, decreased PKCÎµ, but no changes in PKA or PKC-Î² levels in the SHR myocardium. This provides direct evidence of in vivo phosphorylation of cTnI-Ser(42/44) (PKC-specific) sites in an animal model of hypertensive heart failure, supporting the hypothesis that PKC phosphorylation of cTnI may be maladaptive and potentially associated with cardiac dysfunction.

Augmented phosphorylation of cardiac troponin I in hypertensive heart failure.

Une r&eacute;ponse de myofilaments cardiaques alt&eacute;r&eacute;es d&#39;activation Ca(2+) est une caract&eacute;ristique d&#39;une insuffisance cardiaque humaine. La phosphorylation de la troponine I (cTnI) est critique dans la modulation de la contractilit&eacute; et la sensibilit&eacute; de la Ca(2+) du muscle cardiaque. TnIc peut &ecirc;tre phosphoryl&eacute;e par la prot&eacute;ine kinase A (PKA) &agrave; Ser(22/23) et la prot&eacute;ine kinase C (PKC) Ser(22/23), Ser(42/44) et Thr(143). Alors que la signification fonctionnelle de la phosphorylation de Ser(22/23) est bien entendue, le r&ocirc;le des autres sites de phosphorylation de TnIc dans la r&eacute;gulation de la contractilit&eacute; cardiaque reste un sujet de d&eacute;bats intenses, en partie, en raison de l&#39;absence de preuves de la phosphorylation in vivo. Dans cette &eacute;tude, nous avons utilis&eacute; descendante haute r&eacute;solution, spectrom&eacute;trie de masse (MS) combin&eacute; avec la chromatographie d&#39;immunoaffinit&eacute; pour d&eacute;terminer quantitativement les modifications de la phosphorylation de TnIc en rat spontan&eacute;ment hypertendu (SHR) mod&egrave;le de Cardiopathie hypertensive et l&#39;&eacute;chec. Nos donn&eacute;es indiquent que cTnI est hyperphosphoryl&eacute;e en l&#39;omettant myocarde SHR compar&eacute;e &agrave; des rats Wistar-Kyoto normotendus appari&eacute;s selon l&#39;&acirc;ge. La dissociation de capture &eacute;lectronique de haut en bas MS sans ambigu&iuml;t&eacute; localis&eacute;e augment&eacute;e des sites de phosphorylation de Ser(22/23) et Ser(42/44) RSH Enhanced Ser(22/23) la phosphorylation a &eacute;t&eacute; v&eacute;rifi&eacute;e par immunotransfert avec anticorps phospho-sp&eacute;cifiques. Immunobuvardage a &eacute;galement r&eacute;v&eacute;l&eacute; une r&eacute;gulation de la PKC-&alpha; et - &delta;, a diminu&eacute; de PKC&epsilon;, mais pas de changements dans les niveaux PKA ou PKC-&beta; dans le myocarde SHR. Ceci fournit une preuve directe de phosphorylation in vivo de cTnI-Ser(42/44) sites (PKC sp&eacute;cifiques) dans un mod&egrave;le animal de l&#39;insuffisance cardiaque hypertensive, supporte l&#39;hypoth&egrave;se que la PKC phosphorylation de TnIc peut-&ecirc;tre &ecirc;tre inadapt&eacute;s et potentiellement associ&eacute;e &agrave; une dysfonction cardiaque.

Augment&eacute;e de la phosphorylation de la troponine I dans l&#39;insuffisance cardiaque hypertensive.

Eine ver&auml;nderte kardiale Myofilament-Antwort zur Aktivierung der Ca(2+) ist ein Markenzeichen der menschlichen Herzinsuffizienz. Phosphorylierung des kardialen Troponin I (cTnI) ist entscheidend f&uuml;r die Modulation der Kontraktilit&auml;t und Ca(2+) Empfindlichkeit des Herzmuskels. cTnI kann durch Proteinkinase A (PKA) bei Ser(22/23) und Proteinkinase C (PKC) in Ser(22/23), Ser(42/44) und Thr(143) phosphoryliert werden. W&auml;hrend die funktionelle Bedeutung der Ser(22/23) Phosphorylierung gut verstanden wird, bleibt die Rolle der anderen cTnI-Phosphorylierung-Seiten bei der Regulierung der kardialen Kontraktilit&auml;t intensiv diskutiert, teilweise wegen des Mangels an Beweis f&uuml;r in-vivo Phosphorylierung. In dieser Studie benutzt wir oben hochaufl&ouml;sende Massenspektrometrie (MS) mit Spitzenteam Immunoaffinity Chromatographie quantitativ bestimmen die cTnI Phosphorylierung &Auml;nderungen in spontan Hypertensive Ratte (SHR) Modell Hypertensive Herzkrankheit und scheitern. Unsere Daten zeigen, dass cTnI ist Hyperphosphorylated in der fehlerhaften SHR Myokard mit altersbezogenen normotensive Wistar-Kyoto Ratten verglichen. Der Top-Down-Elektron Erfassung Dissoziation MS eindeutig lokalisiert erweitert Phosphorylierung Websites Ser(22/23) und Ser(42/44) der Einstufung Enhanced Ser(22/23) Phosphorylierung Immunoblotting Phospho-spezifische Antik&ouml;rper nachgepr&uuml;ft wurde. Immunoblot Analyse ergab auch Up-Regulierung des PKC-&alpha; und - &delta;, verringerte PKC&epsilon;, aber keine Ver&auml;nderungen in der PKA oder PKC-&beta;-Ebenen im Myokard SHR. Dies bietet direkte Beweise f&uuml;r in-vivo Phosphorylierung von cTnI-Ser(42/44) (PKC-spezifischen) Websites in einem Tiermodell der Hypertensive Herzinsuffizienz, unterst&uuml;tzen die Hypothese, dass PKC Phosphorylierung von cTnI abgebaut und kardiale Dysfunktion potenziell zugeordnet werden kann.

Vergr&ouml;&szlig;erte Phosphorylierung von Herztroponin I Hypertensive Herzinsuffizienz.

Una risposta miofilamenti cardiaca alterata attivazione di Ca(2+) &egrave; un segno distintivo di guasto di cuore umano. Fosforilazione di troponina cardiaca I (n) &egrave; fondamentale nel modulare la contrattilit&agrave; e Ca(2+) sensibilit&agrave; del muscolo cardiaco. n pu&ograve; essere fosforilata dalla proteina chinasi A (PKA) presso Ser(22/23) e protein chinasi C (PKC) presso Ser(22/23), Ser(42/44) e Thr(143). Considerando che &egrave; ben compreso il significato funzionale di fosforilazione della Ser(22/23), il ruolo di altri siti di fosforilazione n nella regolazione della contrattilit&agrave; cardiaca rimane un argomento di intenso dibattito, in parte, a causa della mancanza di prove di fosforilazione in vivo. In questo studio, abbiamo utilizzato top-down ad alta risoluzione in spettrometria di massa (MS) combinato con cromatografia di immunoaffinity per determinare quantitativamente le modifiche di fosforilazione n spontaneamente ratto ipertesi modello (SHR) di cardiopatia ipertensiva e fallimento. I nostri dati indicano che n &egrave; iperfosforilata in failover miocardio SHR confrontato con age-matched normotesi ratti Wistar-Kyoto. La dissociazione per cattura top-down elettrone MS senza ambiguit&agrave; localizzata aumentata siti di fosforilazione di Ser(22/23) e Ser(42/44) in SHR Enhanced Ser(22/23) fosforilazione &egrave; stata verificata da immunoblotting con anticorpi fosfo-specifici. Immunoblot analisi hanno rivelato anche up-regulation di PKC-&alpha; e - &delta;, diminuito PKC&epsilon;, ma senza cambiamenti nei livelli di PKA o PKC-&beta; nel miocardio SHR. Questo fornisce una prova diretta di fosforilazione in vivo di cTnI-Ser(42/44) (PKC) siti in un modello animale di insufficienza cardiaca ipertensiva, sostenendo l&#39;ipotesi che la fosforilazione della PKC di n pu&ograve; essere disadattivi e potenzialmente associato con disfunzione cardiaca.

Aumentata fosforilazione di troponina cardiaca I in insufficienza cardiaca ipertensiva.

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x5909;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5FC3;&#x81D3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x79C1; (cTnI) &#x306F;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3068;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;cTnI &#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A(PKA) &#x306F; Ser(22/23) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C (PKC) Ser(22/23)&#x3001;Ser(42/44)&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Thr(143) &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ser(22/23) &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x610F;&#x7FA9;&#x304C;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E; cTnI &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x5FC3;&#x53CE;&#x7E2E;&#x529B;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x6FC0;&#x3057;&#x3044;&#x8B70;&#x8AD6;&#x306E;&#x30C8;&#x30D4;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x90E8;&#x5206; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x304C;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30C3;&#x30D7;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5; (MS) &#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x81EA;&#x7136;&#x767A;&#x75C7;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; cTnI &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B; immunoaffinity &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3068;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x6027;&#x5FC3;&#x75BE;&#x60A3;&#x3068;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E; (SHR) &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x306E;&#x4F75;&#x7528;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x305D;&#x306E; cTnI &#x306E;&#x904E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30EB;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x3042;&#x308B; shr &#x3068;&#x3001;&#x5E74;&#x9F62;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x6B63;&#x5E38;&#x8840;&#x5727;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3002;&#x30C8;&#x30C3;&#x30D7;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x96FB;&#x5B50;&#x6355;&#x7372;&#x89E3;&#x96E2;&#x660E;&#x78BA;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA; MS &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; Ser(22/23) &#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x73FE;&#x5B9F;&#x611F;&#x3057;&#x3001;Ser(42/44), SHR &#x306E;&#x5F37;&#x5316; Ser(22/23) &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x578B;&#x7279;&#x7570;&#x6297;&#x4F53;&#x514D;&#x75AB;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x6240;&#x898B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x89E3;&#x6790;&#x3082; PKC &alpha; &#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;-&delta;&#x3001;PKC&epsilon;&#x3001;PKA &#x307E;&#x305F;&#x306F; PKC &beta; &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3001;shr &#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C; (PKC &#x56FA;&#x6709;) &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x6027;&#x5FC3;&#x4E0D;&#x5168;&#x3001;PKC &#x30EA;&#x30F3;&#x9178; cTnI &#x306E;&#x4E0D;&#x9069;&#x5FDC;&#x3068;&#x5FC3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5168;&#x3068;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; cTnI-Ser(42/44) &#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5FC3;&#x7B4B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x62E1;&#x5F35;&#x73FE;&#x5B9F;&#x611F;&#x306E;&#x79C1;&#x306E;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x6027;&#x5FC3;&#x4E0D;&#x5168;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3002;

Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC2EC;&#xC7A5; myofilament &#xC751;&#xB2F5; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xB9C8;&#xBE44;&#xC758; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC2EC;&#xC7A5; troponin&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB098; (cTnI)&#xC740; &#xC218;&#xCD95;&#xACFC; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xADFC;&#xC721;&#xC758; Ca(2+) &#xAC10;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ctni&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A (PKA) Ser(22/23) &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PKC) Ser(22/23), Ser(42/44), &#xBC0F; thr(143)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphorylated &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ser(22/23) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACE0;, &#xBC18;&#xBA74; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC218;&#xCD95; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; cTnI &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xB0A8;&#xC544; &#xCE58;&#xC5F4; &#xD55C; &#xB17C;&#xC7C1;&#xC758; &#xC8FC;&#xC81C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; in vivo &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70; &#xBD80;&#xC871;&#xC73C;&#xB85C;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD0D1;-&#xB2E4;&#xC6B4; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (MS) &#xACE0;&#xD608;&#xC555; &#xC131; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC9C8;&#xD658;&#xACFC; &#xC2E4;&#xD328; (SHR) &#xBAA8;&#xB378; &#xC591;&#xC801; &#xC800;&#xC808;&#xB85C; &#xACE0;&#xD608;&#xC555; &#xC950;&#xC5D0; cTnI &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; immunoaffinity &#xCC29; &#xC0C9; &#xC778;&#xC1C4;&#xAE30;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD65C;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; cTnI &#xD45C;&#xC2DC; &#xC2E4;&#xD328;&#xC5D0; hyperphosphorylated SHR myocardium normotensive Wistar &#xAD50;&#xD1A0; &#xC950; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xB098;&#xC774; &#xBE44;&#xD574;. &#xD0D1;-&#xB2E4;&#xC6B4; &#xC804;&#xC790; &#xCEA1;&#xCC98; &#xBD84;&#xB9AC; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; MS &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; ser(22/23)&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC15; &#xD558; &#xACE0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; Ser(22/23) SHR. &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; Ser(42/44) &#xC778; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC640; immunoblotting&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC80;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Immunoblot &#xBD84;&#xC11D; &#xB610;&#xD55C; PKC-&alpha;&#xC758; &#xC5C5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0;-&delta;, PKC&epsilon;, SHR myocardium&#xC758; PKA &#xB610;&#xB294; PKC &beta; &#xC218;&#xC900; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAC10;&#xC18C;. &#xC774;&#xB85C;&#xC368; Ctni-ser(42/44)&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC70; maladaptive&#xACFC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7A5;&#xC560;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xAD00; Ctni&#xC758; PKC &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC9C0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xACE0;&#xD608;&#xC555; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xB9C8;&#xBE44;&#xC758; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; (PKC &#xC804;&#xC6A9;) &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;.

&#xC2EC;&#xC7A5; troponin&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC99D;&#xAC15; &#xB098; &#xACE0;&#xD608;&#xC555; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xB9C8;&#xBE44;&#xC5D0;.

Una respuesta de alteraci&oacute;n cardiaca Miofilamento a activar CA es un sello de fracaso del coraz&oacute;n humano. Fosforilaci&oacute;n de la troponina I (cTnI) es fundamental en la modulaci&oacute;n de la contractilidad y la sensibilidad de la CA del m&uacute;sculo card&iacute;aco. cTnI puede ser fosforilado por la prote&iacute;na quinasa A (PKA) en Ser(22/23) y prote&iacute;na quinasa C (PKC) en Ser(22/23), Ser(42/44) y Thr(143). Considerando que la significaci&oacute;n funcional de la fosforilaci&oacute;n de Ser(22/23) es bien entendida, el papel de otros sitios de fosforilaci&oacute;n de cTnI en la regulaci&oacute;n de la contractilidad cardiaca sigue siendo un tema de intenso debate, en parte, debido a la falta de evidencia de fosforilaci&oacute;n en vivo. En este estudio, utilizamos alta resoluci&oacute;n top-down, espectrometr&iacute;a de masas (MS) combinado con cromatograf&iacute;a de inmunoafinidad para determinar cuantitativamente los cambios de la fosforilaci&oacute;n de cTnI en rata de hipertensos espont&aacute;neamente modelo (SHR) de cardiopat&iacute;a hipertensiva e insuficiencia. Nuestros datos indican que cTnI es hiperfosforilada en la falla miocardio SHR en comparaci&oacute;n con las ratas normotensas de edad comparable Wistar-Kyoto. La disociaci&oacute;n de la captura de electr&oacute;n de arriba a abajo MS inequ&iacute;vocamente localizada aumentada sitios de fosforilaci&oacute;n para Ser(22/23) y Ser(42/44) en SHR. mejorado Ser(22/23) fosforilaci&oacute;n se verific&oacute; immunoblotting con anticuerpos phospho-espec&iacute;ficos. Immunoblot an&aacute;lisis tambi&eacute;n revel&oacute; la para arriba-regulaci&oacute;n de PKC-&alpha; y - &delta;, disminuy&oacute; a PKC&epsilon;, pero sin cambios en los niveles PKA o PKC-&beta; en el miocardio SHR. Esto proporciona evidencia directa de fosforilaci&oacute;n en vivo de cTnI-Ser(42/44) sitios (espec&iacute;ficos de PKC) en un modelo animal de la insuficiencia card&iacute;aca de hipertensos, apoyando la hip&oacute;tesis que la fosforilaci&oacute;n de la PKC de cTnI puede ser potencialmente asociados con disfunci&oacute;n cardiaca y desadaptativas.

Article	Year
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Mary L. Garcia-Cazarin

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