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Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran

A central problem in developmental biology is to deduce the origin of the myriad cell types present in vertebrates as they arise from undifferentiated ...

Stanford University 

&#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xAC8C;&#xB188; &#xC5F0;&#xAD6C; zebrafish &#xC790;&#xC8FC; &#xD569;&#xC131; oligonucleotides RNA &#xC811;&#xD569; &#xB610;&#xB294; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; morpholinos &#xB77C;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC758; &#xC81C;&#xC815; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC81C;&#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC5C6;&#xB294; &#xAF2C;&#xB9AC; (ntl) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; photoactivatable morpholino&#xC758; &#xD569;&#xC131;. &#xC774; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; &#xC2DC; &#xC57D; spatiotemporal &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xC790;&#xC774;&#xD06C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xAD11;&#xD654;&#xD559; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0; &#xC785;&#xC744; &#xBE5B; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;.

Estudios de gen&oacute;mica funcional en el pez cebra utilizan con frecuencia llamados morfolinos que bloquean RNA empalme o traducci&oacute;n de oligonucle&oacute;tidos sint&eacute;ticos. Sin embargo, la actividad constitutiva de estos reactivos limita su utilidad experimental. Divulgamos aqu&iacute; la s&iacute;ntesis de un Morfolino photoactivatable dirigido a ning&uacute;n gen cola (ntl). Este reactivo enjaulado permite regulaci&oacute;n de spatiotemporal g&eacute;nica in vivo y la generaci&oacute;n fotoqu&iacute;mica de organismos de mosaico funcionalmente.

Luz-controlada en embriones de pez cebra el silenciamiento del gen.

&#x529F;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7814;&#x7A76;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7ECF;&#x5E38;&#x4F7F;&#x7528;&#x5408;&#x6210;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x79F0;&#x4E3A; morpholinos&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62; RNA &#x7684;&#x62FC;&#x63A5;&#x6216;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8BD5;&#x5242;&#x7684;&#x672C;&#x6784;&#x6D3B;&#x52A8;&#x9650;&#x5236;&#x5176;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A;&#x9488;&#x5BF9;&#x6CA1;&#x6709;&#x5C3E;&#x5DF4; (ntl) &#x57FA;&#x56E0; photoactivatable morpholino &#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x6B64;&#x7B3C;&#x7684;&#x8BD5;&#x5242;&#x8BB8;&#x53EF;&#x8BC1;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x63A7;&#x53CA;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x9A6C;&#x8D5B;&#x514B;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x7684;&#x5149;&#x5316;&#x5B66;&#x751F;&#x6210;&#x3002;

&#x5149;&#x63A7;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x6C89;&#x9ED8;&#x3002;

Functional genomic studies in zebrafish frequently use synthetic oligonucleotides called morpholinos that block RNA splicing or translation. However, the constitutive activity of these reagents limits their experimental utility. We report here the synthesis of a photoactivatable morpholino targeting the no tail (ntl) gene. This caged reagent permits spatiotemporal gene regulation in vivo and the photochemical generation of functionally mosaic organisms.

Light-controlled gene silencing in zebrafish embryos.

Des &eacute;tudes de g&eacute;nomique fonctionnelles chez le poisson z&egrave;bre utilisent fr&eacute;quemment des oligonucl&eacute;otides synth&eacute;tiques appel&eacute;s morpholinos qui bloquent l&#39;&eacute;pissage de l&#39;ARN ou de traduction. Toutefois, l&#39;activit&eacute; constitutive de ces r&eacute;actifs limite leur utilit&eacute; exp&eacute;rimentale. Nous rapportons ici la synth&egrave;se d&#39;un morpholino photoactivatable ne ciblant le g&egrave;ne de l&#39;aucune queue (ntl). Ce r&eacute;actif en cage permet in vivo de la r&eacute;gulation g&eacute;nique spatio-temporelle et la g&eacute;n&eacute;ration photochimique du fonctionnellement des organismes de mosa&iuml;que.

Lumi&egrave;re contr&ocirc;l&eacute;e silen&ccedil;age g&eacute;nique chez les embryons de poisson-z&egrave;bre.

Genomische Funktionsstudien in Zebrafish verwenden h&auml;ufig synthetische Oligonukleotide genannt Morpholinos, die RNA-Splei&szlig;en oder &Uuml;bersetzung zu blockieren. Allerdings schr&auml;nkt die konstitutive Aktivit&auml;t der diese Reagenzien die ein experimentelle Programm. Wir berichten hier die Synthese einer Photoactivatable Morpholino gezielt das kein Schwanz (Ntl)-Gen. Dieser K&auml;fig Reagenz erlaubt raumzeitliche Genregulation in-vivo und die photochemische Generation funktional Mosaik Organismen.

Lichtgesteuerte gen-silencing in den Zebrafish Embryos.

Studi di genomici funzionali nello zebrafish utilizzano frequentemente oligonucleotides sintetici chiamati morpholinos che bloccano il RNA splicing o traduzione. Tuttavia, l&#39;attivit&agrave; costitutiva di questi reagenti limita la loro utilit&agrave; sperimentale. Riportiamo qui la sintesi di un photoactivatable oligonucleotides non targeting nessun gene della coda (ntl). Questo reagente in gabbia consente la regolazione genica spatiotemporal in vivo e la generazione fotochimica di funzionalmente gli organismi mosaico.

Luce controllata gene silencing in embrioni di zebrafish.

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x7FFB;&#x8A33; RNA &#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; morpholinos &#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x7DCF;&#x5408;&#x7684;&#x306A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8A66;&#x85AC;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306A;&#x30E6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x5C3E; (ntl) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6D3B;&#x6027;&#x578B; morpholino &#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x8A66;&#x85AC; in vivo &#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x30E2;&#x30B6;&#x30A4;&#x30AF;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x5149;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x751F;&#x6210;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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Embryogenesis is a remarkable program of cell proliferation, migration, and differentiation that transforms a single fertilized egg into a complex multicellular organism. Understanding this process at the molecular and systems levels will require an interdisciplinary approach, including the concepts and technologies of chemical biology. This tutorial review provides an overview of chemical tools that have been used in developmental biology research, focusing on methods that enable spatiotemporal control of gene function and the visualization of embryonic patterning. Limitations of current approaches and future challenges are also discussed.

Chemical technologies for probing embryonic development.

L&#39;embryogen&egrave;se est un remarquable programme de prolif&eacute;ration cellulaire, la migration et la diff&eacute;renciation qui transforme un seul &oelig;uf f&eacute;cond&eacute; en un organisme multicellulaire complex. Compr&eacute;hension de ce processus au niveau mol&eacute;culaire et syst&egrave;mes exigera une approche interdisciplinaire, y compris les concepts et les technologies de la biologie chimique. Cette revue tutoriel donne un aper&ccedil;u des outils chimiques qui ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s dans la recherche en biologie du d&eacute;veloppement, mettant l&#39;accent sur les m&eacute;thodes qui activent le contr&ocirc;le spatio-temporelle de la fonction des g&egrave;nes et la visualisation de structuration embryonnaire. On discute aussi des limitations des approches actuelles et d&eacute;fis futurs.

Technologies chimiques pour sonder le d&eacute;veloppement embryonnaire.

Embryogenese ist ein bemerkenswertes Programm der Zellproliferation, Migration und Differenzierung, die eine einzige befruchtete Eizelle in einem komplexen vielzelligen Organismus umwandelt. Verst&auml;ndnis dieses Prozesses auf der molekularen und Systeme erfordert einen interdisziplin&auml;ren Ansatz, einschlie&szlig;lich die Konzepte und Technologien der chemischen Biologie. Dieses Lernprogramm &Uuml;berpr&uuml;fung bietet eine &Uuml;bersicht &uuml;ber chemische Werkzeuge, die benutzt wurden, in der Entwicklungsbiologie Forschung konzentriert sich auf Methoden, die raumzeitliche Kontrolle der Genfunktion und die Visualisierung der embryonalen Musterung zu erm&ouml;glichen. Einschr&auml;nkungen der aktuellen Ans&auml;tze und Herausforderungen der Zukunft werden auch erl&auml;utert.

Chemische Technologien zur Sondierung der embryonalen Entwicklung.

L&#39;embriogenesi &egrave; un programma straordinario di proliferazione cellulare, migrazione e differenziazione che un singolo uovo fecondato si trasforma in un organismo pluricellulare complesso. Comprensione di questo processo a livello molecolare e sistemi richiedono un approccio interdisciplinare, tra cui i concetti e le tecnologie della biologia chimica. Questa recensione tutorial fornisce una panoramica degli strumenti chimici che sono stati utilizzati nella ricerca di biologia dello sviluppo, concentrandosi sui metodi che consentono il controllo spatiotemporal di funzione del gene e la visualizzazione di patterning embrionale. Limitazioni di approcci attuali e future sfide vengono anche discussi.

Tecnologie chimiche per sondare lo sviluppo embrionale.

&#x80DA;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x79FB;&#x884C;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; 1 &#x3064;&#x306E;&#x53D7;&#x7CBE;&#x5375;&#x306F;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x591A;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x6280;&#x8853;&#x3084;&#x6982;&#x5FF5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5B66;&#x969B;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;&#x80DA;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3001;&#x767A;&#x751F;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5316;&#x5B66;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x6982;&#x8981;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5236;&#x9650;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3068;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x306E;&#x8AB2;&#x984C;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x3082;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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Embryogenesis &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;, &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC218;&#xC815; &#xB41C; &#xB2EC;&#xAC40;&#xC744; &#xBCC0;&#xD658; &#xD558;&#xB294; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC758; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B4; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xAC1C;&#xB150;&#xACFC; &#xD654;&#xD559; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xD559; &#xC81C; &#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC;&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC790;&#xC2B5;&#xC11C; &#xAC80;&#xD1A0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; spatiotemporal &#xC81C;&#xC5B4; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBC30;&#xC544; &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD94;&#xACE0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB41C; &#xD654;&#xD559; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC758; &#xAC1C;&#xC694;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC811;&#xADFC; &#xBC0F; &#xBBF8;&#xB798; &#xACFC;&#xC81C;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xC0AC;&#xD56D; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

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Embriog&eacute;nesis es un notable programa de proliferaci&oacute;n celular, migraci&oacute;n y diferenciaci&oacute;n que un solo &oacute;vulo fecundado se transforma en un organismo multicelular complejo. Entender este proceso a nivel molecular y sistemas requerir&aacute; un enfoque interdisciplinario, incluyendo los conceptos y tecnolog&iacute;as de Biolog&iacute;a qu&iacute;mica. Esta revisi&oacute;n tutorial proporciona un Resumen de herramientas qu&iacute;micas que han sido utilizados en la investigaci&oacute;n de la biolog&iacute;a del desarrollo, m&eacute;todos que permiten el control espacio-temporal de funciones de los genes y la visualizaci&oacute;n de patrones embrionario. Tambi&eacute;n se discuten las limitaciones de los enfoques actuales y futuros desaf&iacute;os.

Tecnolog&iacute;as qu&iacute;micas para sondear el desarrollo embrionario.

&#x80DA;&#x80CE;&#x7531;&#x9057;&#x4F20;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x6267;&#x884C;&#x4E00;&#x79CD;&#x9648;&#x65E7;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x89C4;&#x7BA1;&#x548C;&#x7834;&#x8BD1;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x9700;&#x8981;&#x63A7;&#x5236;&#x80DA;&#x80CE;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x6280;&#x672F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9057;&#x4F20;&#x64CD;&#x7EB5;&#xFF0C;&#x7B3C;&#x7684; morpholino (cMO) &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x706D;&#x6D3B;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x5149;&#x5B66;&#x900F;&#x660E;&#x751F;&#x7269;&#x4E0E;&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x89C1;&#x4E00;&#x6591;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4F18;&#x5316;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x53D1;&#x5939; cMOs &#x7EB3;&#x5165; dimethoxynitrobenzyl (DMNB) &#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x65B9;&#x6CD5;-&#x57FA;&#x4E8E;&#x53CC;&#x5B98;&#x80FD;&#x56E2;&#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8; cMO &#x5927;&#x4F1A;&#x53EA;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5546;&#x4E1A;&#x4E0A;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x8BD5;&#x5242;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x7B80;&#x5316;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x7F16;&#x5199;&#x5177;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x914D;&#x7F6E; cMOs &#x548C;&#x8C03;&#x67E5;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8BD5;&#x5242;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x6027;&#x8D28;&#x5C06;&#x5982;&#x4F55;&#x4E0E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5173;&#x8054;&#x8D77;&#x6765;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x8BBE;&#x7ACB; cMO &#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x539F;&#x5219;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6210;&#x529F;&#x5730;&#x5C06;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x51E0;&#x4E2A;&#x53D1;&#x80B2;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4EA6;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F5C;&#x597D;&#x51C6;&#x5907;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B; bromohydroxyquinoline (BHQ) &#x7684;&#x4E0B;&#x4E00;&#x4EE3; cMO-&#x57FA;&#x4E8E;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x7684;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50; uncaging&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x5C55;&#x5EFA;&#x7ACB; cMO &#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x6027;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5316;&#x5B66;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;

&#x591A;&#x624D;&#x591A;&#x827A;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x7B3C; morpholinos &#x7684;&#x5408;&#x7406;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3002;

Embryogenesis is regulated by genetic programs that are dynamically executed in a stereotypic manner, and deciphering these molecular mechanisms requires the ability to control embryonic gene function with similar spatial and temporal precision. Chemical technologies can enable such genetic manipulations, as exemplified by the use of caged morpholino (cMO) oligonucleotides to inactivate genes in zebrafish and other optically transparent organisms with spatiotemporal control. Here we report optimized methods for the design and synthesis of hairpin cMOs incorporating a dimethoxynitrobenzyl (DMNB)-based bifunctional linker that permits cMO assembly in only three steps from commercially available reagents. Using this simplified procedure, we have systematically prepared cMOs with differing structural configurations and investigated how the in vitro thermodynamic properties of these reagents correlate with their in vivo activities. Through these studies, we have established general principles for cMO design and successfully applied them to several developmental genes. Our optimized synthetic and design methodologies have also enabled us to prepare a next-generation cMO that contains a bromohydroxyquinoline (BHQ)-based linker for two-photon uncaging. Collectively, these advances establish the generality of cMO technologies and will facilitate the application of these chemical probes in vivo for functional genomic studies.

Versatile synthesis and rational design of caged morpholinos.

L&#39;embryogen&egrave;se est r&eacute;gul&eacute;e par des programmes g&eacute;n&eacute;tiques qui sont dynamiquement ex&eacute;cut&eacute;es d&#39;une mani&egrave;re st&eacute;r&eacute;otyp&eacute;e, et d&eacute;chiffrage de ces m&eacute;canismes mol&eacute;culaires exige la capacit&eacute; de contr&ocirc;ler la fonction du g&egrave;ne embryonnaire avec une pr&eacute;cision spatiale et temporelle similaire. Technologies chimiques peuvent permettre de telles manipulations g&eacute;n&eacute;tiques, comme en t&eacute;moigne l&#39;utilisation des oligonucl&eacute;otides morpholino &quot;cage&quot; (OCM) pour inactiver les g&egrave;nes chez le poisson-z&egrave;bre et d&#39;autres organismes optiquement transparents avec contr&ocirc;le spatio-temporelle. Nous rapportons ici optimis&eacute; des m&eacute;thodes pour la conception et la synth&egrave;se de l&#39;&eacute;pingle &agrave; cheveux cMOs, int&eacute;grant un dimethoxynitrobenzyl (Dinitrobutane)-bas&eacute; linker bifonctionnel qui permet des OCM montage en seulement trois &eacute;tapes des r&eacute;actifs disponibles dans le commerce. &Agrave; l&#39;aide de cette proc&eacute;dure simplifi&eacute;e, nous avons syst&eacute;matiquement &eacute;tabli cMOs avec diff&eacute;rentes configurations structurelles et &eacute;tudi&eacute; comment les propri&eacute;t&eacute;s thermodynamiques in vitro de ces r&eacute;actifs sont en corr&eacute;lation avec leur activit&eacute; in vivo. Gr&acirc;ce &agrave; ces &eacute;tudes, nous avons &eacute;tabli les principes g&eacute;n&eacute;raux de conception de l&#39;OCM et appliqu&eacute;es avec succ&egrave;s &agrave; plusieurs g&egrave;nes. Notre synth&eacute;tique optimis&eacute;e et conception de m&eacute;thodologies nous ont &eacute;galement permis d&#39;&eacute;tablir une OCM de g&eacute;n&eacute;ration qui contient un bromohydroxyquinoline (BHQ)-base de linker pour deux photons uncaging. Collectivement, ces avances &eacute;tablissent la g&eacute;n&eacute;ralit&eacute; des technologies de l&#39;OCM et faciliteront l&#39;application de ces sondes chimiques in vivo pour des &eacute;tudes de g&eacute;nomique fonctionnelles.

Synth&egrave;se polyvalente et une conception rationnelle des morpholinos &quot;cage&quot;.

Embryogenese wird durch genetische Programme, die dynamisch auf stereotype Weise ausgef&uuml;hrt werden, und Entzifferung dieser molekularen Mechanismen erfordert die F&auml;higkeit, embryonalen Genfunktion mit &auml;hnlichen r&auml;umlichen und zeitlichen Pr&auml;zision zu steuern. Chemische Technologien k&ouml;nnen derartige genetischen Manipulationen, wie durch den Einsatz von K&auml;fig Morpholino (cMO) Oligonukleotide an Genen im Zebrafisch und andere optisch transparenten Organismen mit raumzeitliche Steuerelement zu inaktivieren. Hier berichten wir optimierte Methoden f&uuml;r das Design und die Synthese der Einbeziehung einer Dimethoxynitrobenzyl (DMNB) Haarnadel-cMOs-basierten bifunktionelle Linker, die GMO f&uuml;r Montage in nur drei Schritten aus handels&uuml;blichen Reagenzien erlaubt. Bei diesem vereinfachte Verfahren haben wir systematisch vorbereitet cMOs mit unterschiedlichen strukturellen Konfigurationen und untersucht, wie die in-vitro-thermodynamischen Eigenschaften von diese Reagenzien mit ihren in-vivo Aktivit&auml;ten korrelieren. Durch diese Studien haben wir Allgemeine Gestaltungsleits&auml;tze GMO gegr&uuml;ndet und erfolgreich angewendet, um mehrere Entwicklungsst&ouml;rungen Gene. Unsere optimierte Kunststoff und Design, die Methoden konnten wir eine n&auml;chste Generation GMO vorzubereiten, die eine Bromohydroxyquinoline (BHQ) enth&auml;lt auch-Linker f&uuml;r zwei-Photonen-uncaging basiert. Zusammen diese Fortschritte der Allgemeing&uuml;ltigkeit der GMO-Technologien schaffen und erleichtert die Anwendung der die chemischen Sonden in-vivo f&uuml;r genomische Funktionsstudien.

Vielseitige Synthese und rationelle Gestaltung der K&auml;fig Morpholinos.

L&#39;embriogenesi &egrave; regolato da programmi genetici che vengono eseguiti in modo dinamico in maniera stereotipata e decifrare questi meccanismi molecolari richiede la capacit&agrave; di controllare la funzione genica embrionale con simile precisione spaziale e temporale. Tecnologie chimiche possono consentire tali manipolazioni genetiche, come esemplificato dall&#39;uso di oligonucleotidi oligonucleotides in gabbia (OCM) per inattivare i geni in zebrafish e altri organismi otticamente trasparente con controllo spatiotemporal. Qui riportiamo ottimizzato i metodi per la progettazione e la sintesi del tornante cMOs che incorporano un dimethoxynitrobenzyl (DMNB)-basato del linker bifunzionale che permette cMO assieme in soli tre passi da reagenti commercialmente disponibili. Utilizzando questa procedura semplificata, abbiamo sistematicamente preparato cMOs con differenti configurazioni strutturali e studiato come le propriet&agrave; termodinamiche in vitro di questi reagenti correlano con le loro attivit&agrave; in vivo. Attraverso questi studi, abbiamo stabilito i principi generali per la progettazione dell&#39;OCM e li applicato con successo a diversi geni dello sviluppo. Nostro sintetico ottimizzato e design metodologie anche ci hanno permesso di preparare una generazione OCM che contiene un bromohydroxyquinoline (BHQ)-basato del linker per due-fotone uncaging. Collettivamente, questi progressi stabilire la genericit&agrave; delle OCM tecnologie e facilitano l&#39;applicazione di queste sonde chimiche in vivo per studi di genomici funzionale.

Sintesi versatile e razionale progettazione di morpholinos in gabbia.

&#x80DA;&#x3001;&#x578B;&#x3069;&#x304A;&#x308A;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x5B9F;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x6574;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x8AAD;&#x3059;&#x308B;&#x80DA;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x306E;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3067;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x6280;&#x8853;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306F;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x4ED6;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x900F;&#x660E;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8; morpholino (cMO) &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F8B;&#x793A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x5831;&#x544A;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x8A2D;&#x8A08;&#x30FB;&#x5408;&#x6210; dimethoxynitrobenzyl (DMNB) &#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3; cMOs &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;-cMO &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x307F; 3 &#x3064;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3067;&#x5E02;&#x8CA9;&#x8A66;&#x85AC;&#x304B;&#x3089;&#x8A31;&#x53EF; 2&#x5B98;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7C21;&#x7565;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x69CB;&#x6210;&#x3068; cMOs &#x3092;&#x6E96;&#x5099;&#x3057;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8A66;&#x85AC;&#x306E; in vitro &#x3067;&#x306E;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x3068; in vivo &#x6D3B;&#x6027;&#x76F8;&#x95A2;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;cMO &#x8A2D;&#x8A08;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x539F;&#x5247;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3001;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F; bromohydroxyquinoline (BHQ) &#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6B21;&#x4E16;&#x4EE3; cMO &#x3092;&#x6E96;&#x5099;&#x3059;&#x308B;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;-2 &#x5149;&#x5B50;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3002;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306F; cMO &#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x5316;&#x5B66;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; in vivo &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6C4E;&#x7528;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8; morpholinos &#x306E;&#x7406;&#x6027;&#x7684;&#x306A;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3002;

Embryogenesis &#xC815;&#xD615; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2E4;&#xD589; &#xB418;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xACF5;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC815;&#xBC00; &#xBC30;&#xC544; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD574;&#xB3C5;. &#xD654;&#xD559; &#xAE30;&#xC220; exemplified &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; morpholino (cMO) oligonucleotides zebrafish spatiotemporal &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xAD11;&#xD559; &#xD22C;&#xBA85; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xB4F1;&#xC744; &#xC124;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xACFC; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; cMOs &#xD1B5;&#xD569; dimethoxynitrobenzyl (DMNB)&#xC758; &#xD569;&#xC131; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;-&#xAE30;&#xBC18; &#xC0C1;&#xC6A9; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC5D0;&#xC11C; 3 &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; cMO &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xD5C8;&#xC6A9; bifunctional &#xB9C1;&#xCEE4;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xC808;&#xCC28;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; cMOs &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAD6C;&#xC131; &#xC900;&#xBE44; &#xBC0F; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559;&#xC801; &#xC18D;&#xC131; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC5F0;&#xAD00; &#xC870;&#xC0AC;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC; cMO &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC6D0;&#xCE59;&#xC744; &#xC124;&#xB9BD; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;. &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; &#xC124;&#xACC4; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860; &#xB610;&#xD55C; bromohydroxyquinoline (BHQ)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC138;&#xB300; cMO &#xC900;&#xBE44; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC124;&#xC815;&#xD55C;-2 &#xAD11;&#xC790; uncaging&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9C1;&#xCEE4;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD1B5;&#xCE6D; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xC9C4;&#xBCF4; cMO &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xBCF4;&#xD3B8;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xB9BD; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xAC8C;&#xB188; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD654;&#xD559; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC751;&#xC6A9;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xB2E4;&#xC7AC; &#xB2E4;&#xB2A5; &#xD55C; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; &#xAC10; &#xAE08;&#xB41C; morpholinos&#xC758; &#xD569;&#xB9AC;&#xC801;&#xC778; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Embriog&eacute;nesis es regulada por programas gen&eacute;ticos que din&aacute;micamente se ejecutan de manera estereotipada, y descifrar estos mecanismos moleculares requiere la posibilidad de controlar la funci&oacute;n del gen embrionario con similar precisi&oacute;n espacial y temporal. Tecnolog&iacute;as qu&iacute;micas pueden permitir tales manipulaciones gen&eacute;ticas, ejemplificado por el uso de oligonucle&oacute;tidos Morfolino enjaulado (cMO) para inactivar genes en el pez cebra y otros organismos &oacute;pticamente transparentes con control espacio-temporal. Aqu&iacute; divulgamos optimizado de m&eacute;todos para el dise&ntilde;o y s&iacute;ntesis de horquilla cMOs incorporando un dimethoxynitrobenzyl (DMNB)-base vinculador bifuncional que permite montaje cMO en s&oacute;lo tres pasos de reactivos disponibles en el mercado. Mediante este procedimiento simplificado, sistem&aacute;ticamente hemos preparado cMOs con diferentes configuraciones estructurales e investig&oacute; c&oacute;mo las propiedades termodin&aacute;micas in vitro de estos reactivos se correlacionan con sus actividades en vivo. A trav&eacute;s de estos estudios, hemos establecido los principios generales para el dise&ntilde;o de la OCM y aplic&oacute; con &eacute;xito a varios genes del desarrollo. Nuestro sint&eacute;tico optimizado y dise&ntilde;o de metodolog&iacute;as tambi&eacute;n nos han permitido preparar un cMO de &uacute;ltima generaci&oacute;n que contiene un bromohydroxyquinoline (BHQ)-base vinculador para uncaging de dos fotones. Colectivamente, estos avances establecen la generalidad de las tecnolog&iacute;as de la OCM y facilitar&aacute;n la aplicaci&oacute;n de estas sondas qu&iacute;micas in vivo para estudios de gen&oacute;mica funcional.

S&iacute;ntesis vers&aacute;til y dise&ntilde;o racional de morfolinos enjaulado.

&#xD569;&#xC131; &#xBC0F; nonnatural oligonucleotides &#xC2EC;&#xBB38; zebrafish&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB9AC;&#xBDF0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC870;&#xC0AC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; oligonucleotide &#xAE30;&#xBC18; &#xAE30;&#xC220; perturbing RNA &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; RNA &#xC2DD;&#xC758; &#xD55C;&#xACC4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC804;&#xB7B5; oligonucleotide &#xD568;&#xC218;&#xC758; spatiotemporal &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD2B9;&#xD788; &#xBE5B; &#xBB38;&#xC774; &#xAE30;&#xC220; zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xC758; &#xAD11; &#xD22C;&#xBA85;&#xC131;&#xC744; &#xC545;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294;.

Zebrafish &#xAC1C;&#xBC1C; &#xACF5;&#xBD80; oligonucleotide &#xAE30;&#xBC18; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Oligonucle&oacute;tidos sint&eacute;ticos y no naturales se han utilizado extensivamente para cuestionar la funci&oacute;n del gen en el pez cebra. En esta revisi&oacute;n, estudio las capacidades y limitaciones de las diversas tecnolog&iacute;as basadas en oligonucle&oacute;tidos para perturbar la funci&oacute;n del RNA y el seguimiento de la expresi&oacute;n de RNA. Tambi&eacute;n examinamos las &uacute;ltimas estrategias para lograr el control espacio-temporal de la funci&oacute;n de oligonucle&oacute;tidos, particularmente cerrada luz tecnolog&iacute;as que explotan la transparencia &oacute;ptica de embriones de pez cebra.

Herramientas basadas en oligonucle&oacute;tidos para estudiar el desarrollo del pez cebra.

&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x975E;&#x5929;&#x7136;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5DF2;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4E8E;&#x5BA1;&#x95EE;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x6B21;&#x5BA1;&#x67E5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x6270;&#x52A8; RNA &#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x8DDF;&#x8E2A; RNA &#x8868;&#x8FBE;&#x5404;&#x79CD;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EA6;&#x7814;&#x7A76;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x95E8;&#x63A7;&#x5149;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x900F;&#x660E;&#x5EA6;&#x3002;

&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

Synthetic and nonnatural oligonucleotides have been used extensively to interrogate gene function in zebrafish. In this review, we survey the capabilities and limitations of various oligonucleotide-based technologies for perturbing RNA function and tracking RNA expression. We also examine recent strategies for achieving spatiotemporal control of oligonucleotide function, particularly light-gated technologies that exploit the optical transparency of zebrafish embryos.

Oligonucleotide-based tools for studying zebrafish development.

Oligonucl&eacute;otides synth&eacute;tiques et d ont &eacute;t&eacute; largement utilis&eacute;s pour interroger la fonction des g&egrave;nes chez le poisson z&egrave;bre. Dans cette revue, nous sondons les capacit&eacute;s et les limites des diverses technologies ax&eacute;es sur les oligonucl&eacute;otides pour perturber la fonction RNA et expression de RNA de suivi. Nous examinons &eacute;galement les derni&egrave;res strat&eacute;gies pour atteindre contr&ocirc;le spatio-temporelle de la fonction de l&#39;oligonucl&eacute;otide, particuli&egrave;rement d&eacute;pendants &agrave; la lumi&egrave;re des technologies qui exploitent la transparence optique des embryons de poisson-z&egrave;bre.

Outils oligonucl&eacute;otide pour &eacute;tudier le d&eacute;veloppement du poisson z&egrave;bre.

Nonnatural und synthetischen Oligonukleotide wurden ausgiebig Genfunktion in Zebrafisch Verh&ouml;ren verwendet. In diesem Bericht befragen wir die M&ouml;glichkeiten und Grenzen verschiedener Oligonukleotid-basierte Technologien f&uuml;r RNA-Funktion hineingebracht und tracking-RNA Ausdruck. Wir pr&uuml;fen auch den letzten Strategien zum Erreichen der raumzeitliche Kontrolle der Oligonukleotid-Funktion, insbesondere Licht-Gating-Technologien, die die optische Transparenz der Zebrafisch-Embryonen zu nutzen.

Oligonukleotid-basierte Tools f&uuml;r Zebrafisch-Entwicklung zu studieren.

Oligonucleotidi sintetici e nonnatural sono stati ampiamente utilizzati per interrogare la funzione del gene nello zebrafish. In questa recensione, abbiamo indagine le capacit&agrave; e i limiti delle varie tecnologie basate su oligonucleotide per conturbanti funzione di RNA e l&#39;inseguimento di espressione di RNA. Esaminiamo anche recenti strategie per raggiungere spatiotemporal controllo della funzione del oligonucleotide, particolarmente luce-gated tecnologie che sfruttano la trasparenza ottica di embrioni di zebrafish.

Strumenti basati su oligonucleotide per studiare lo sviluppo dello zebrafish.

&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x975E;&#x5929;&#x7136;&#x5E83;&#x7BC4;&#x56F2;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x5236;&#x9650;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x6280;&#x8853;&#x3092; RNA &#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x6442;&#x52D5;&#x3068; RNA &#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x306E;&#x5149;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x3092;&#x60AA;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x7279;&#x306B;&#x5149;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x3002;

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3002;

Desarrollo embrionario depende de control espacial y temporal de funciones de los genes, y descifrar los mecanismos moleculares que subyacen a la formaci&oacute;n del patr&oacute;n requiere m&eacute;todos para perturbar la expresi&oacute;n g&eacute;nica con precisi&oacute;n similar. Tecnolog&iacute;as qu&iacute;micas pueden permitir tales perturbaciones, ejemplificado por el uso de oligonucle&oacute;tidos Morfolino enjaulado (cMO) para foto-inactivar genes en embriones de pez cebra con control espacio-temporal. Este cap&iacute;tulo describe los principios generales para el dise&ntilde;o de la OCM y m&eacute;todos para el montaje de la OCM en tres pasos de reactivos disponibles en el mercado. T&eacute;cnicas experimentales para la microinyecci&oacute;n y la fotoactivaci&oacute;n de estos reactivos se describen en detalle, as&iacute; como la preparaci&oacute;n y aplicaci&oacute;n de dextrano de fluoresce&iacute;na enjaulado (cFD) para etiquetado irradiado c&eacute;lulas. Con estos protocolos, cMOs pueden ser herramientas eficaces para estudios de gen&oacute;mica funcional en pez cebra y otros organismos modelo.

Control espacio-temporal de expresi&oacute;n del gen embrionario usando morfolinos enjaulado.

&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3001;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x8AAD;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6442;&#x52D5;&#x306F;&#x65B0;&#x8208;&#x5316;&#x5B66;&#x6280;&#x8853;&#x5199;&#x771F;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8; morpholino (cMO) &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F8B;&#x793A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7AE0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;cMO &#x8A2D;&#x8A08;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x539F;&#x5247;&#x3068; cMO &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x5E02;&#x8CA9;&#x8A66;&#x85AC;&#x304B;&#x3089;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8A66;&#x85AC;&#x306E; photoactivation &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x6280;&#x8853;&#x6E96;&#x5099;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B1;&#x30FC;&#x30B8; &#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30EC;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3; &#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3; (cFD) &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x7167;&#x5C04;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;cMOs &#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DC;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30CA;&#x5165;&#x308A; morpholinos &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x80DA;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x5236;&#x5FA1;&#x3002;

&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x7834;&#x8BD1;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x6A21;&#x5F0F;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x6270;&#x52A8;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x8981;&#x6C42;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x65B0;&#x5174;&#x5316;&#x5DE5;&#x6280;&#x672F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6270;&#x52A8;&#x7B3C;&#x7684; morpholino (cMO) &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7167;&#x7247;&#x706D;&#x6D3B;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E0E;&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x89C1;&#x4E00;&#x6591;&#x3002;&#x672C;&#x7AE0;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86;&#x5947;&#x7F8E;&#x7535;&#x5B50;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x539F;&#x5219;&#x4E0E;&#x65B9;&#x6CD5; cMO &#x5927;&#x4F1A;&#x4ECE;&#x5546;&#x4E1A;&#x4E0A;&#x53EF;&#x7528;&#x8BD5;&#x5242;&#x5206;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x663E;&#x5FAE;&#x6CE8;&#x5C04;&#x548C;&#x8C03;&#x4EA1;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8BD5;&#x5242;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6280;&#x672F;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x7EC6;&#x8282;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7F16;&#x5199;&#x548C;&#x7B3C;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x8461;&#x805A;&#x7CD6; (cFD) &#x7528;&#x4E8E;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x8F90;&#x7167;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;cMOs &#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x6A21;&#x5F0F;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236;&#x4F7F;&#x7528;&#x7B3C;&#x7684; morpholinos &#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Embryonic development depends on spatial and temporal control of gene function, and deciphering the molecular mechanisms that underlie pattern formation requires methods for perturbing gene expression with similar precision. Emerging chemical technologies can enable such perturbations, as exemplified by the use of caged morpholino (cMO) oligonucleotides to photo-inactivate genes in zebrafish embryos with spatiotemporal control. This chapter describes general principles for cMO design and methods for cMO assembly in three steps from commercially available reagents. Experimental techniques for the microinjection and photoactivation of these reagents are described in detail, as well as the preparation and application of caged fluorescein dextran (cFD) for labeling irradiated cells. Using these protocols, cMOs can be effective tools for functional genomic studies in zebrafish and other model organisms.

Spatiotemporal control of embryonic gene expression using caged morpholinos.

Le d&eacute;veloppement embryonnaire d&eacute;pend de contr&ocirc;le spatial et temporel de la fonction du g&egrave;ne et d&eacute;crypter les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires qui sous-tendent la formation du patron exige des m&eacute;thodes pour perturber l&#39;expression des g&egrave;nes avec une pr&eacute;cision similaire. Nouvelles technologies chimiques peut permettre &agrave; ces perturbations, comme en t&eacute;moigne l&#39;utilisation des oligonucl&eacute;otides morpholino &quot;cage&quot; (OCM) pour photo-inactiver les g&egrave;nes dans des embryons de poisson-z&egrave;bre avec contr&ocirc;le spatio-temporelle. Ce chapitre d&eacute;crit les principes g&eacute;n&eacute;raux de conception de l&#39;OCM et m&eacute;thodes pour l&#39;assemblage des OCM en trois &eacute;tapes &agrave; partir de r&eacute;actifs disponibles dans le commerce. Techniques exp&eacute;rimentales de la microinjection et photoactivation de ces r&eacute;actifs sont d&eacute;crits en d&eacute;tail, ainsi que la pr&eacute;paration et application de dextran de fluoresc&eacute;ine en cage (cFD) pour l&#39;&eacute;tiquetage irradi&eacute; des cellules. &Agrave; l&#39;aide de ces protocoles, cMOs peuvent &ecirc;tre des outils efficaces pour des &eacute;tudes de g&eacute;nomique fonctionnelles dans le poisson-z&egrave;bre et d&#39;autres organismes mod&egrave;les.

Contr&ocirc;le spatio-temporelle de l&#39;expression g&eacute;nique embryonnaire &agrave; l&#39;aide de la &quot;cage&quot; morpholinos.

Embryonalentwicklung h&auml;ngt von der r&auml;umlichen und zeitlichen Steuerung der Genfunktion und Entschl&uuml;sselung der molekularen Mechanismen, die Strukturbildung zugrunde liegen Methoden f&uuml;r hineingebracht Genexpression mit &auml;hnlicher Pr&auml;zision erfordert. Neue chemische Technologien k&ouml;nnen solche St&ouml;rungen, wie durch den Einsatz von K&auml;fig Morpholino (cMO) Oligonukleotide an Foto-Gene in den Zebrafish Embryos mit raumzeitliche Steuerelement inaktivieren. Dieses Kapitel beschreibt Allgemeine Gestaltungsleits&auml;tze cMO und Methoden f&uuml;r GMO Assembly in drei Schritten aus handels&uuml;blichen Reagenzien. Experimentelle Techniken f&uuml;r die Mikroinjektion und Photoaktivierung diese Reagenzien sind beschrieben im Detail sowie die Vorbereitung und Anwendung der K&auml;fig Fluoreszein Dextran (cFD) zum Beschriften von bestrahlten Zellen. Verwenden diese Protokolle, ist cMOs effiziente Tools zur genomischen Funktionsstudien in Zebrafisch und sonstige Modellorganismen.

Raumzeitliche Kontrolle der embryonalen Genexpression mit K&auml;fig Morpholinos.

Lo sviluppo embrionale dipende dal controllo spaziale e temporale della funzione del gene, e decifrare i meccanismi molecolari che sottostanno alla formazione di pattern richiede metodi per conturbanti espressione genica con precisione simile. Emergenti tecnologie chimiche possono consentire tali perturbazioni, come esemplificato dall&#39;uso di oligonucleotidi oligonucleotides in gabbia (OCM) per inattivare foto di geni in embrioni di zebrafish con controllo spatiotemporal. Questo capitolo descrive i principi generali per la progettazione dell&#39;OCM e metodi per l&#39;assemblaggio dell&#39;OCM in tre passi da reagenti commercialmente disponibili. Tecniche sperimentali per la microiniezione e photoactivation di questi reagenti sono descritti in dettaglio, cos&igrave; come la preparazione e applicazione di destrano fluoresceina in gabbia (cFD) per il contrassegno irradiati cellule. Utilizzando questi protocolli, cMOs possono essere strumenti efficaci per gli studi di genomici funzionali in zebrafish e altri organismi modello.

Spatiotemporal controllo dell&#39;espressione genica embrionale usando morpholinos in gabbia.

&#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; perturbing &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC815;&#xBC00; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC774; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD328;&#xD134; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xAE30;&#xCD08;&#xAC00; &#xB418;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD574;&#xB3C5;. &#xD654;&#xD559; &#xC2E0;&#xAE30;&#xC220; exemplified &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; morpholino (cMO) oligonucleotides &#xC0AC;&#xC9C4; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; spatiotemporal &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xACFC; zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBB3C;&#xACB0;&#xC744; &#xC124;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; cMO &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18; &#xC6D0;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xC6A9; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC5D0;&#xC11C; 3 &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; cMO &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xBD80; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0; microinjection &#xBC0F; photoactivation&#xC774; &#xC2DC;&#xC774; &#xC57D;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xBC0F; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xC9C0;&#xC815;&#xC5D0; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; fluorescein dextran (cFD)&#xC758; &#xBC18;&#xAD6C; &#xC140;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; cMOs zebrafish &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB378; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xAC8C;&#xB188; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; morpholinos&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC30;&#xC544; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; spatiotemporal &#xC81C;&#xC5B4;.

&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF1A; &#x53F3;&#x8FB9;&#x7684;&#x90BB;&#x5C45;&#x3002;

Stem cells: The right neighbour.

Cellules souches: Le Voisin droit

Stammzellen: der richtige Nachbar.

Cellule staminali: il vicino di destro.

&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF1A;&#x53F3;&#x96A3;&#x4EBA;

&#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;: &#xBC14;&#xB85C; &#xC774;&#xC6C3;.

C&#xE9;lulas madre: El derecho de Vecinos

&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;combinatorially &#x5728;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4E0A;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x4E0A;&#x7684;&#x5B9A;&#x4E49;&#x65B9;&#x5F0F;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#x5177;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;&#x89E3;&#x51B3;&#x57FA;&#x7840;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9635;&#x5217;&#x64CD;&#x4F5C;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x8F6C;&#x5F55;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x4E86;&#x89E3;&#x80DA;&#x80CE;&#x5206;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x4E0B;&#x9762;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x5982;&#x4F55;&#x80DA;&#x80CE;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x3001; &#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x53D8;&#x5316;&#x53EF;&#x4EE5;&#x770B;&#x51FA;&#x901A;&#x8FC7;&#x96C6;&#x6210;&#x7B3C; morpholino &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4E0E; photoactivatable &#x8367;&#x5149;&#xFF0C;&#x8367;&#x5149;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6392;&#x5E8F;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x52A8;&#x6001;&#x5206;&#x6790;&#x6CA1;&#x6709;&#x5C3E;&#x5DF4; (&#x4E8E;&#x6B21;&#x65E5;)-&#x4F9D;&#x8D56;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0D;&#x540C;&#x53D1;&#x5C55;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x8F74;&#x5411;&#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x7EC4;&#x79BB;&#x6563;&#x7684;&#x91CD;&#x5408;&#x4E0E;&#x810A;&#x7D22;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x627F;&#x8BFA;&#x6216;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x810A;&#x7D22;&#x53D1;&#x5C55;&#x65B0;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x548C;&#x72EC;&#x7279; transcriptomes &#x5185;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7684;&#x987A;&#x5E8F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7531;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6F14;&#x793A;&#x5982;&#x4F55;&#x5149;&#x63A7;&#x5316;&#x5B66;&#x5DE5;&#x5177;&#x53EF;&#x4EE5;&#x89E3;&#x5256;&#x4E0E;&#x65F6;&#x7A7A;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;

&#x4E2D;&#x8F74;&#x5411;&#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E8E;&#x6B21;&#x65E5;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x3002;

Transcription factors have diverse roles during embryonic development, combinatorially controlling cellular states in a spatially and temporally defined manner. Resolving the dynamic transcriptional profiles that underlie these patterning processes is essential for understanding embryogenesis at the molecular level. Here we show how temporal, tissue-specific changes in embryonic transcription factor function can be discerned by integrating caged morpholino oligonucleotides with photoactivatable fluorophores, fluorescence-activated cell sorting and microarray technologies. As a proof of principle, we have dynamically profiled No tail a (Ntla)-dependent genes at different stages of axial mesoderm development in zebrafish, discovering discrete sets of transcripts that are coincident with either notochord cell fate commitment or differentiation. Our studies reveal new regulators of notochord development and the sequential activation of distinct transcriptomes within a cell lineage by a single transcriptional factor and demonstrate how optically controlled chemical tools can dissect developmental processes with spatiotemporal precision.

Spatiotemporal resolution of the Ntla transcriptome in axial mesoderm development.

Facteurs de transcription ont des r&ocirc;les diversifi&eacute;s au cours du d&eacute;veloppement embryonnaire, combinatoirement contr&ocirc;lant les &Eacute;tats cellulaires de fa&ccedil;on spatialement et temporellement d&eacute;finie. R&eacute;soudre les profils transcriptionnelles dynamiques qui sous-tendent ces processus de structuration est essentiel pour l&#39;embryogen&egrave;se de compr&eacute;hension au niveau mol&eacute;culaire. Ici, nous montrons comment on peuvent discerner des changements temporels, tissu-sp&eacute;cifique en fonction de facteur de transcription embryonnaire en int&eacute;grant avec cage morpholino oligonucl&eacute;otides avec des fluorophores photoactivatable, activ&eacute;s par fluorescence cell technologies de tri et de microarray. Comme une preuve de principe, nous avons dress&eacute; dynamiquement un profil sans queue un (ALNT)-g&egrave;nes d&eacute;pendants &agrave; diff&eacute;rents stades de d&eacute;veloppement du m&eacute;soderme axial chez le poisson z&egrave;bre, d&eacute;couvrir des ensembles discrets de transcriptions qui co&iuml;ncident avec l&#39;engagement de destin cellulaire notochorde ou diff&eacute;renciation. Nos &eacute;tudes r&eacute;v&egrave;lent de nouveaux r&eacute;gulateurs du d&eacute;veloppement de la notochorde et l&#39;activation s&eacute;quentielle des transcriptomes distinctes au sein d&#39;une lign&eacute;e de cellules par un seul facteur de transcription et de d&eacute;montrent comment optiquement contr&ocirc;l&eacute;e outils chimiques peuvent diss&eacute;quer des processus de d&eacute;veloppement avec une pr&eacute;cision spatio-temporelle.

R&eacute;solution spatio-temporelle de la transcriptome ALNT dans le d&eacute;veloppement du m&eacute;soderme axial.

Transkriptionsfaktoren haben unterschiedliche Rollen w&auml;hrend der Embryonalentwicklung, combinatorially Steuerung zellul&auml;re Staaten in einer r&auml;umlich und zeitlich definierte Weise. Aufl&ouml;sen der dynamischen transkriptionelle Profile, die diese Musterung Prozesse zugrunde liegen, ist essentiell f&uuml;r Verst&auml;ndnis Embryogenese auf molekularer Ebene. Hier zeigen wir wie Temporale, Gewebe-spezifischen &Auml;nderungen in embryonalen Transkription Faktor Funktion erkannt werden k&ouml;nnen, durch die Integration mit K&auml;fig Morpholino Oligonucleotides mit Photoactivatable Fluorophore, Fluoreszenz-aktivierte Zelle Sortieren und Microarray Technologien. Als Beweis des Prinzips, haben wir keinen Schwanz ein (Ntla) dynamisch profiliert-abh&auml;ngigen Gene in verschiedenen Entwicklungsstadien axial Mesoderm in Zebrafisch, diskrete Gruppen von Abschriften, die zusammenfallend mit Chorda dorsalis Zelle Schicksal Engagement oder Differenzierung sind zu entdecken. Unsere Studien zeigen neue Regler der Chorda dorsalis Entwicklung und die sequenzielle Aktivierung der unterschiedlichen Transcriptomes innerhalb einer Zelle-Linie durch einen einzigen transcriptional Faktor und demonstrieren wie optisch kontrolliert, dass chemische Werkzeuge k&ouml;nnen Entwicklungsprozesse mit raumzeitliche Pr&auml;zision zu sezieren.

Raumzeitliche Aufl&ouml;sung der Ntla Transkriptom axial Mesoderm Entwicklung.

Fattori di trascrizione hanno ruoli diversi durante lo sviluppo embrionale, controllando combinatoriamente stati cellulari in maniera spazialmente e temporalmente definita. Risolvendo i profili dinamici trascrizionali che sottendono questi processi patterning &egrave; essenziale per l&#39;embriogenesi di comprensione a livello molecolare. Qui vi mostriamo come cambiamenti temporali, tessuto-specifici in funzione del fattore di trascrizione embrionali possono essere individuate integrando in gabbia oligonucleotides oligonucleotides con fluorofori photoactivatable, fluorescenza-attivato cell sorting e microarray technologies. Come prova di principio, noi non abbiamo profilato dinamicamente coda un (Ntla)-geni dipendenti nelle diverse fasi di sviluppo del mesoderma assiale in zebrafish, alla scoperta di insiemi discreti di trascrizioni che sono coincidente con impegno di destino delle cellule notocorda o differenziazione. I nostri studi rivelano nuovi regolatori dello sviluppo della notocorda e l&#39;attivazione sequenza di transcriptomes distinti all&#39;interno di una stirpe di cellule da un singolo fattore trascrizionale e dimostrano come otticamente controllata strumenti chimici possono sezionare i processi di sviluppo con precisione spatiotemporal.

Spatiotemporal risoluzione del transcriptome Ntla nello sviluppo del mesoderma assiale.

&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D3;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x72B6;&#x614B;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x80DA;&#x306E;&#x767A;&#x80B2;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x52D5;&#x7684;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x89E3;&#x6C7A;&#x306F;&#x5206;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306E;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x79C1;&#x9054;&#x306F;&#x793A;&#x3059;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x80DA;&#x6027;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B; morpholino &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x6D3B;&#x6027;&#x578B; fluorophores&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x3002;&#x539F;&#x5247;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306B;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x5C3E; (Ntla) &#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;-&#x4F9D;&#x5B58;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x810A;&#x7D22;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x547D;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5206;&#x5316;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x7269;&#x306E;&#x96E2;&#x6563;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3059;&#x308B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EF8;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x810A;&#x7D22;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x898F;&#x5236;&#x5F53;&#x5C40;&#x3068;&#x660E;&#x77AD;&#x306A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0; &#x30BB;&#x30EB;&#x8840;&#x7D71;&#x5185;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5149;&#x5236;&#x5FA1;&#x5316;&#x5B66;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x904E;&#x7A0B;&#x3092;&#x89E3;&#x5256;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ntla &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x8EF8;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x958B;&#x767A;&#x3067;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3002;

&#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; combinatorially &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xD560; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xAE30;&#xCD08;&#xAC00; &#xB418;&#xB294; &#xB3D9;&#xC801; transcriptional &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xD574; embryogenesis &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801;, &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xBCC0;&#xACBD; &#xAC07;&#xD78C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xBCC4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xD615;&#xAD11;-&#xD65C;&#xC131;&#xD654; photoactivatable fluorophores&#xC640; &#xD568;&#xAED8; morpholino oligonucleotides &#xC140; &#xC815;&#xB82C; &#xBC0F; microarray &#xAE30;&#xC220;. &#xD504;&#xB85C; &#xC6D0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C; &#xC5C6;&#xACE0; &#xAF2C;&#xB9AC; (Ntla)-&#xC885;&#xC18D; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xAC00; zebrafish, notochord &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85; &#xD22C;&#xC785; &#xB610;&#xB294; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D;&#xC758; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC138;&#xD2B8;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC5D0; &#xCD95; mesoderm &#xBC1C;&#xC804;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB2E8;&#xC77C; transcriptional &#xACC4;&#xC218;&#xB85C; notochord &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xBC0F; &#xC140; &#xD608;&#xD1B5; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; transcriptomes&#xC758; &#xC21C;&#xCC28; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xACC4;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC785;&#xC99D; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAD11;&#xD559; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD654;&#xD559; &#xB3C4;&#xAD6C; spatiotemporal &#xC815;&#xBC00;&#xB3C4;&#xC640; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xD574; &#xBD80; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD95; mesoderm &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0;&#xC11C; Ntla transcriptome spatiotemporal &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;.

Factores de transcripci&oacute;n tienen diversas funciones durante el desarrollo embrionario, combinatorially controlar Estados celulares de manera espacial y temporal definida. Resolver los perfiles transcripcionales din&aacute;micos que subyacen a estos procesos de patrones es esencial para la embriog&eacute;nesis de comprensi&oacute;n a nivel molecular. A continuaci&oacute;n os mostramos c&oacute;mo se observan cambios temporales, tejidos espec&iacute;ficos en funci&oacute;n del factor de transcripci&oacute;n embrionario integrando enjaulado Morfolino oligonucle&oacute;tidos con fluor&oacute;foros photoactivatable, activado por fluorescencia celular tecnolog&iacute;as de clasificaci&oacute;n y microarrays. Como una prueba del principio, nos no hemos perfilado din&aacute;micamente cola un (Ntla)-genes dependientes en las diferentes etapas de desarrollo del mesodermo axial en el pez cebra, descubriendo discretos conjuntos de transcripciones que son coincidentes con el compromiso de destino celular notocordio o diferenciaci&oacute;n. Nuestros estudios revelan nuevos reguladores del desarrollo de la notocorda y la activaci&oacute;n secuencial de transcriptomas distintos dentro de un linaje de la c&eacute;lula por un solo factor transcripcional y demuestran c&oacute;mo &oacute;pticamente controlado herramientas qu&iacute;micas pueden diseccionar los procesos de desarrollo con precisi&oacute;n espacio-temporal.

Article	Year
Light-controlled gene silencing in zebrafish embryos. Nature chemical biology\| PubMed ID: 17717538	2007
Chemical technologies for probing embryonic development. Chemical Society reviews\| PubMed ID: 18568156	2008
Versatile synthesis and rational design of caged morpholinos. Journal of the American Chemical Society\| PubMed ID: 19708646	2009
Oligonucleotide-based tools for studying zebrafish development. Zebrafish\| PubMed ID: 20392138	2010
Spatiotemporal control of embryonic gene expression using caged morpholinos. Methods in cell biology\| PubMed ID: 21924162	2011
Stem cells: The right neighbour. Nature\| PubMed ID: 22281591	2012
Spatiotemporal resolution of the Ntla transcriptome in axial mesoderm development. Nature chemical biology\| PubMed ID: 22286130	2012

Ilya A. Shestopalov

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