biomolecular-detection-employing-interferometric-reflectance-imaging

Biomolecular Detection employing the Interferometric Reflectance Imaging Sensor (IRIS)

The sensitive measurement of biomolecular interactions has use in many fields and industries such as basic biology and microbiology, ...

Boston University 

&#x8FC7;&#x654F;&#x75C7;&#x8BCA;&#x65AD;&#x4F7F;&#x7528;&#x82AF;&#x7247;&#x5E73;&#x53F0;&#x53EF;&#x4EE5;&#x540C;&#x65F6;&#x8981;&#x6C42;&#x53EA;&#x6709;&#x5C0F;&#x5377;&#x7684;&#x8840;&#x6E05;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FC7;&#x654F;&#x539F;&#xFF0C;&#x5927;&#x6279;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A; IgE &#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x63A2;&#x9488;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x963B;&#x788D;&#x4E86;&#x5FC5;&#x8981;&#x5728; immunodiagnostics &#x4E2D;&#x7684;&#x6709;&#x5173;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x8FDB;&#x884C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3001; &#x81EA;&#x4FE1;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E00;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x8BA2;&#x4E86;&#x76F4;&#x63A5;&#x5173;&#x8054;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x6821;&#x51C6;&#x3001; &#x5EC9;&#x4EF7;&#x3001; &#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x591A;&#x8DEF;&#x590D;&#x7528;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x82AF;&#x7247;&#x65B9;&#x6CD5;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5230;&#x6355;&#x83B7;&#x6807;&#x8BB0;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6297;&#x4F53;&#x4E34;&#x5E8A;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x7684;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x6211;&#x4EEC;&#x6821;&#x51C6;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x589E;&#x5F3A; (&#x5496;&#x5561;&#x5385;) &#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x6280;&#x672F;&#x4F18;&#x52BF;&#xFF1A; (i) &#x5728;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x4E13;&#x95E8;&#x4E3A;&#x8367;&#x5149; &#xFF1B; &#x4F18;&#x5316;&#x5206;&#x5C42;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x53D1;&#x5C04;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;(&#x4E8C;) &#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x6267;&#x884C;&#x65E0;&#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x5728;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x70B9;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x6301;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x8367;&#x5149; &#xFF1B; &#x8367;&#x5149;&#x589E;&#x5F3A;&#x53CA; (iii) &#x4E00;&#x79CD;&#x6821;&#x51C6;&#x3001; &#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x65E0;&#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6765;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x6D4B;&#x91CF;&#x63A2;&#x9488;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x548C;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x6297;&#x539F;&#x5BF9;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x5BF9;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x6297;&#x4F53; IgG&#x3001; &beta;-&#x4E73;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8FC7;&#x654F;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; IgEs &#x81F3; Ara h 1 (&#x82B1;&#x751F;&#x4E3B;&#x8981;&#x8FC7;&#x654F;&#x539F;&#xFF09; &#x548C;&#x83F2;&#x5F8B;&#x5BBE;&#x7684;&#x4EA7;&#x751F;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x86CB;&#x767D;&#x91CF;&#x5F3A;&#x7684;&#x7EBF;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5173;&#x7CFB;&#x4EBA;&#x8840;&#x6E05;&#x4E2D;&#x7684; p 1 (timothy &#x8349;&#x4E3B;&#x8981;&#x8FC7;&#x654F;&#x539F;&#xFF09; &#x5EFA;&#x7ACB;&#x5496;&#x5561;&#x9986;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x6027;&#x3002;

&#x591A;&#x8DEF;&#x590D;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x6821;&#x51C6;&#x548C;&#x91CF;&#x5316;&#x8FC7;&#x654F;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; IgE &#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

Using a microarray platform for allergy diagnosis allows for testing of specific IgE sensitivity to a multitude of allergens, while requiring only small volumes of serum. However, variation of probe immobilization on microarrays hinders the ability to make quantitative, assertive, and statistically relevant conclusions necessary in immunodiagnostics. To address this problem, we have developed a calibrated, inexpensive, multiplexed, and rapid protein microarray method that directly correlates surface probe density to captured labeled secondary antibody in clinical samples. We have identified three major technological advantages of our calibrated fluorescence enhancement (CaFE) technique: (i) a significant increase in fluorescence emission over a broad range of fluorophores on a layered substrate optimized specifically for fluorescence; (ii) a method to perform label-free quantification of the probes in each spot while maintaining fluorescence enhancement for a particular fluorophore; and (iii) a calibrated, quantitative technique that combines fluorescence and label-free modalities to accurately measure probe density and bound target for a variety of antibody-antigen pairs. In this paper, we establish the effectiveness of the CaFE method by presenting the strong linear dependence of the amount of bound protein to the resulting fluorescence signal of secondary antibody for IgG, Î²-lactoglobulin, and allergen-specific IgEs to Ara h 1 (peanut major allergen) and Phl p 1 (timothy grass major allergen) in human serum.

Multiplexed method to calibrate and quantitate fluorescence signal for allergen-specific IgE.

En utilisant une plate-forme de puces pour le diagnostic d&#39;allergie permet de tester de sensibilit&eacute; d&#39;IgE sp&eacute;cifique &agrave; une multitude d&#39;allerg&egrave;nes, tout en exigeant seulement de petites quantit&eacute;s de s&eacute;rum. Cependant, la variation de l&#39;immobilisation de la sonde sur des microarrays entrave la capacit&eacute; de faire quantitative, s&#39;affirmer et des conclusions statistiquement pertinentes n&eacute;cessaires dans l&#39;immunodiagnostic. Pour r&eacute;soudre ce probl&egrave;me, nous avons d&eacute;velopp&eacute; une m&eacute;thode de microarray de prot&eacute;ine calibr&eacute;, multiplex&eacute;, rapide et &eacute;conomique qui est directement corr&eacute;l&eacute;e surface sonde densit&eacute; d&#39;anticorps secondaire captur&eacute;s dans les &eacute;chantillons cliniques. Nous avons identifi&eacute; trois principaux avantages technologiques de notre technique d&#39;am&eacute;lioration (CaFE) fluorescence calibr&eacute;: (i) une augmentation significative de l&#39;&eacute;mission de fluorescence sur une large gamme des fluorophores sur un substrat en couches optimis&eacute; sp&eacute;cifiquement pour fluorescence ; (ii) une m&eacute;thode pour ex&eacute;cuter exempte d&#39;&eacute;tiquette quantification des sondes dans chaque endroit, tout en conservant l&#39;augmentation de la fluorescence d&#39;un fluorophore particuli&egrave;re ; et (iii) une technique quantitative calibr&eacute;e qui combine la fluorescence et modalit&eacute;s exempte d&#39;&eacute;tiquette pour mesurer exactement la densit&eacute; de la sonde et cible li&eacute; &agrave; une vari&eacute;t&eacute; de paires d&#39;anticorps-antig&egrave;ne. Dans cet article, nous &eacute;tablissons l&#39;efficacit&eacute; de la m&eacute;thode de CaFE en pr&eacute;sentant la forte d&eacute;pendance lin&eacute;aire de la quantit&eacute; de prot&eacute;ine li&eacute;e pour le signal de fluorescence r&eacute;sultant de l&#39;anticorps secondaire pour les IgG, &beta;-lactoglobuline et allerg&egrave;ne sp&eacute;cifique IgEs &agrave; Ara h 1 (principal allerg&egrave;ne d&#39;arachide) et Phl p 1 (allerg&egrave;ne majeur de Timoth&eacute;e herbe) dans le s&eacute;rum humain.

M&eacute;thode multiplex&eacute; d&#39;&eacute;talonner et de quantifier le signal de fluorescence pour IgE allerg&egrave;ne sp&eacute;cifique.

Mit eine Microarray-Plattform f&uuml;r Allergie-Diagnostik erm&ouml;glicht das Testen der spezifischen IgE-Empfindlichkeit auf eine Vielzahl von Allergenen, aber nur kleine Mengen von Serum verlangt. Variation der Sonde Immobilisierung auf Microarrays behindert jedoch die F&auml;higkeit, quantitative, durchsetzungsf&auml;hige und statistisch relevante Schlussfolgerungen in Immundiagnostik notwendig. Um dieses Problem zu beheben, haben wir eine kalibrierte, preiswert, Multiplex und schnelle Protein Microarray-Methode, die Oberfl&auml;che direkt korreliert entwickelt Pr&uuml;fpunkt Dichte an aufgezeichneten beschriftete Sekund&auml;rantik&ouml;rper in klinischen Proben. Wir haben drei gro&szlig;e technologische Vorteile unserer kalibrierten Fluoreszenz-Erweiterung (CaFE)-Technik identifiziert: (i) eine deutliche Zunahme der Fluoreszenzemission &uuml;ber eine breite Palette von Fluorophore auf eine mehrschichtige Substrat optimiert speziell f&uuml;r Fluoreszenz; (Ii) ein Verfahren durchf&uuml;hren Etikett-freie Quantifizierung der Sonden in einzelnen Spots unter Beibehaltung der Fluoreszenz-Erweiterung f&uuml;r einen bestimmten Fluorophore; und (Iii) eine kalibrierte, quantitative Technik, die verbindet Fluoreszenz und Etikett-freie Modalit&auml;ten Sonde Dichte und gebundenen Target f&uuml;r eine Vielzahl von Antik&ouml;rper-Antigen-Paare genau zu messen. In diesem Papier errichten wir die Wirksamkeit der CaFE-Methode durch die Vorlage der starken linearen Abh&auml;ngigkeit der Menge des gebundenen Proteins mit dem resultierenden Fluoreszenz-Signal des Sekund&auml;rantik&ouml;rpers f&uuml;r IgG, &beta;-Lactoglobulin, und Allergen-spezifischen IgEs Ara h 1 (Erdnuss wichtige Allergen) und Phl p 1 (Timotheus Gras wichtige Allergen) in humanem Serum.

Multiplex-Methode zu kalibrieren und Quantifizierung der Fluoreszenz-Signal f&uuml;r allergenspezifische IgE.

Utilizzando una piattaforma microarray per la diagnosi di allergia permette per il test di sensibilit&agrave; di IgE specifiche per una moltitudine di allergeni, mentre richiedendo solo piccole quantit&agrave; di siero. Tuttavia, variazione di immobilizzazione sonda su microarrays ostacola la capacit&agrave; di rendere quantitativa, assertivo e statisticamente rilevanti conclusioni necessarie in immunodiagnostica. Per risolvere questo problema, abbiamo sviluppato un metodo di microarray di proteine calibrata, poco costoso, multiplex e rapida che correla direttamente la superficie della sonda densit&agrave; di anticorpo secondario marcato catturato in campioni clinici. Abbiamo identificato tre principali vantaggi tecnologici della nostra tecnica di fluorescenza calibrate enhancement (CaFE): (i) un aumento significativo nell&#39;emissione di fluorescenza sopra una vasta gamma di fluorofori su un substrato stratificato ottimizzato specificamente per fluorescenza; (ii) un metodo per eseguire senza etichetta quantificazione delle sonde in ogni luogo pur mantenendo la valorizzazione di fluorescenza per un fluoroforo particolare; e (iii) una tecnica calibrata, quantitativa che combina la fluorescenza e privo di etichetta modalit&agrave; per misurare con precisione la sonda densit&agrave; e destinazione associata per una variet&agrave; di coppie dell&#39;anticorpo-antigene. In questa carta, noi stabilire l&#39;efficacia del metodo CaFE presentando la forte dipendenza lineare della quantit&agrave; di proteina associata al segnale risultante di fluorescenza di anticorpo secondario per IgG, beta-lactoglobulin e allergeni specifici IgEs per Ara h 1 (arachidi principali allergeni) e Phl p 1 (allergene maggiore di timothy erba) nel siero umano.

Metodo multiplex per calibrare e quantificare il segnale di fluorescenza per IgE allergene-specifiche.

&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x8A3A;&#x65AD;&#x7528;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4; &#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; IgE &#x611F;&#x5EA6;&#x306B;&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x30B2;&#x30F3;&#x3001;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x8840;&#x6E05;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x91CF;&#x7684;&#x3001;&#x65AD;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3068;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x7D50;&#x8AD6; immunodiagnostics &#x3067;&#x5FC5;&#x8981;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x95A2;&#x6821;&#x6B63;&#x3001;&#x5B89;&#x4FA1;&#x3067;&#x3001;&#x591A;&#x91CD;&#x5316;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6A19;&#x8B58;&#x4E8C;&#x6B21;&#x6297;&#x4F53;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; 3 &#x3064;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x6821;&#x6B63;&#x86CD;&#x5149;&#x5897;&#x5F37; &#xFF08;&#x30AB;&#x30D5;&#x30A7;&#xFF09; &#x6CD5;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x305F;: (i) &#x86CD;&#x5149;&#x767A;&#x5149; fluorophores &#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x6027;; &#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5C64;&#x72B6;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;(ii) &#x7279;&#x5B9A; fluorophore &#x7528;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x5897;&#x5F37;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x5404;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x7121;&#x6599;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;;(iii) &#x86CD;&#x5149;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3068;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x6297;&#x4F53; &#xFF0D; &#x6297;&#x539F;&#x5BFE;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x30E2;&#x30C0;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x6821;&#x6B63;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x624B;&#x6CD5;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;, p 1 &#xFF08;&#x30C6;&#x30A3;&#x30E2;&#x30B7;&#x30FC;&#x8349;&#x4E3B;&#x8981;&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x30B2;&#x30F3;&#xFF09; &#x3072;&#x3068;&#x8840;&#x6E05;&#x4E2D;&#x306E;&#x4E8C;&#x6B21;&#x6297;&#x4F53; IgG&#x3001;&beta;-&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x30B2;&#x30F3;&#x7279;&#x7570; IgEs &#xFF08;&#x30D4;&#x30FC;&#x30CA;&#x30C3;&#x30C4;&#x4E3B;&#x8981;&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x30B2;&#x30F3;) Ara h 1&#x3001;Phl &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x91CF;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x7DDA;&#x5F62;&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30AB;&#x30D5;&#x30A7;&#x624B;&#x6CD5;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x30B2;&#x30F3;&#x7279;&#x7570;&#x7684; IgE &#x3092;&#x91CF;&#x7684;&#x306B;&#x8868;&#x308F;&#x3059;&#x591A;&#x91CD;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3002;

&#xC54C;&#xB808;&#xB974;&#xAE30; &#xC9C4;&#xB2E8; microarray &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC54C;&#xB808;&#xB974;&#xAE30; &#xC99D;&#xC0C1;, &#xD2B9;&#xC815; ige&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC591;&#xC758; &#xD608; &#xCCAD;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; microarrays&#xC5D0; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; immobilization&#xC758; &#xBCC0;&#xD615; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC591;&#xC801;, &#xB3C5;&#xB2E8;&#xC801;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD1B5;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828;&#xC131;&#xC774; &#xB192;&#xC740; &#xACB0;&#xB860; immunodiagnostics&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBC29;&#xD574;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC9C1;&#xC811; &#xC5F0;&#xAD00; &#xD45C;&#xBA74; &#xBCF4;&#xC815;, &#xBA40;&#xD2F0;&#xD50C;&#xB809;&#xC2A4;, &#xC2F8;&#xACE0; &#xBE60;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microarray &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xD55C; &#xC784;&#xC0C1; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCEA1;&#xCC98;&#xB41C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC870; &#xCCB4; &#xBC00;&#xB3C4; &#xC870;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBCF4;&#xC815; &#xB41C; &#xD615;&#xAD11; &#xC99D;&#xC9C4; (&#xCE74;&#xD398;) &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC8FC;&#xC694; &#xAE30;&#xC220;&#xC801; &#xC7A5;&#xC810; &#xD655;&#xC778;: (i) &#xD615;&#xAD11; &#xBC29;&#xCD9C; &#xD615;&#xAD11;;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xAC8C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xACC4;&#xCE35;&#xD654; &#xB41C; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; fluorophores&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; (ii) &#xD2B9;&#xC815; fluorophore;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xC99D;&#xC9C4;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xAC01; &#xC790;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xC758; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xC5C6;&#xB294; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; (iii) &#xD615;&#xAD11; &#xBC0F; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xCE21;&#xC815; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC00;&#xB3C4; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD56D; &#xCCB4;-&#xD56D; &#xC6D0; &#xC30D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xB300;&#xC0C1; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xC5C6;&#xB294; modalities&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xC815;, &#xC591;&#xC801; &#xAE30;&#xC220;. &#xC774; &#xB17C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; p 1 (&#xD2F0;&#xBAA8;&#xC2DC; &#xC794;&#xB514; &#xC8FC;&#xC694; &#xC54C;&#xB808;&#xB974;&#xAE30;) &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608; &#xCCAD;&#xC5D0;&#xC11C; IgG, &beta;-lactoglobulin &#xBC0F; &#xC54C;&#xB808;&#xB974;&#xAE30; &#xAD00;&#xB828; IgEs Ara h 1 (&#xB545;&#xCF69; &#xC8FC;&#xC694; &#xC54C;&#xB808;&#xB974;&#xAE30;) &#xBC0F; Phl &#xC774;&#xCC28; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC591;&#xC758; &#xAC15;&#xD55C; &#xC120;&#xD615; &#xC758;&#xC874;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE74;&#xD398; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCF4;&#xC815; &#xBC0F; quantitate &#xC54C;&#xB808;&#xB974;&#xAE30; &#xD2B9;&#xC815; Ige&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xB2E4;&#xC911;&#xD654; &#xBC29;&#xBC95;.

Utilizando una plataforma de microarrays para el diagn&oacute;stico de la alergia permite pruebas de sensibilidad de IgE espec&iacute;fica a una multitud de al&eacute;rgenos, mientras exige que s&oacute;lo peque&ntilde;os vol&uacute;menes de suero. Sin embargo, variaci&oacute;n de inmovilizaci&oacute;n de la sonda sobre micromatrices dificulta la capacidad para hacer cuantitativa, asertivo y conclusiones estad&iacute;sticamente relevantes necesarias en inmunodiagn&oacute;stico. Para solucionar este problema, hemos desarrollado un m&eacute;todo de microarray de prote&iacute;nas calibrado, barato, multiplexado y r&aacute;pida que correlaciona directamente la superficie sonda densidad al anticuerpo secundario marcado capturado en muestras cl&iacute;nicas. Hemos identificado tres principales ventajas tecnol&oacute;gicas de nuestra t&eacute;cnica de fluorescencia calibrado mejora (CaFE): (i) un aumento significativo en la emisi&oacute;n de fluorescencia sobre una amplia gama de fluor&oacute;foros sobre un sustrato capa optimizado espec&iacute;ficamente para fluorescencia; (ii) un m&eacute;todo para realizar cuantificaci&oacute;n de etiqueta-libre de las sondas en cada lugar manteniendo mejora de fluorescencia para un fluor&oacute;foro particular; y (iii) una t&eacute;cnica cuantitativa calibrada que combina fluorescencia y modalidades libre de etiqueta para medir con precisi&oacute;n la densidad de la sonda y destino consolidado para una variedad de pares de ant&iacute;geno-anticuerpo. En este trabajo, establecemos la efectividad del m&eacute;todo CaFE presentando la fuerte dependencia lineal de la cantidad de prote&iacute;na enlazada a la se&ntilde;al de fluorescencia resultante de anticuerpo secundario para IgG, &beta;-LACTOGLOBULINA y alergenos espec&iacute;ficos IgEs a Ara h 1 (cacahuete alerg&eacute;nico principal) y Phl p 1 (alerg&eacute;nico principal de la hierba de Timoteo) en suero humano.

Alexander P. Reddington

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