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Transmembrane Domain Oligomerization Propensity determined by ToxR Assay

The oversimplified view of protein transmembrane domains as merely anchors in phospholipid bilayers has long since been disproven.  In many cases ...

University of Colorado at Boulder

ToxR des essais &#xE0; base de transcription reporteurs permettre la force d&#x26;#39;interactions h&#xE9;lice transmembranaires dans les membranes biologiques &#xE0; mesurer. Auparavant, ces tests ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s uniquement pour &#xE9;tudier les syst&#xE8;mes transmembranaires un seul passage. Pour faciliter les enqu&#xEA;tes de domaine transmembranaire polytopique (TMD) oligom&#xE9;risation, nous avons appliqu&#xE9; la m&#xE9;thodologie ToxR &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tude des multi-pass oligom&#xE9;risation TMD pour donner &#xAB;Multi-Tox&#xBB;. Association propensions de l&#x26;#39;oncoprot&#xE9;ine virale, membrane latente prot&#xE9;ine-1 (LMP-1), et E. coli de la membrane int&#xE9;grante diacylglyc&#xE9;rol kinase (DAGK) ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9; par multi-Tox, mettant en &#xE9;vidence les r&#xE9;sidus d&#x26;#39;importance m&#xE9;canique particuli&#xE8;re. Les deux homo-et h&#xE9;t&#xE9;ro-oligom&#xE9;risations ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;s.

Multi-Tox: Application du dosage Reporter ToxR-transcriptionnelle de l&#x26;#39;&#xE9;tude de la Multi-pass oligom&#xE9;risation domaine prot&#xE9;ine transmembranaire

Transkriptionelle Reporter ToxR basierende Assays erm&ouml;glichen die St&auml;rke der Transmembran-Helix-Wechselwirkungen in biologischen Membranen gemessen werden. Fr&uuml;her wurden diese Proben nur Untersuchung Einschritt-Transmembran-Systeme verwendet. Zur Erleichterung der Untersuchung von polytopischen Transmembranegebiet (TMD) Oligomerisierung angewendet wir die ToxR Methodik zum Studium der Multipass TMD Oligomerisierung, &#39;Multi-Tox&#39; zu geben. Verein Neigungen die virale OIT3, latentes Membrane Protein-1 (LMP-1) und das E. Coli membranst&auml;ndiger Diacylglycerol Kinase (DAGK) von Multi-Tox, Hervorhebung R&uuml;ckst&auml;nde von besonderer Bedeutung der mechanistischen studiert wurden. Beide Homo und Hetero-Oligomerizations wurden untersucht.

Multi-Tox: Anwendung des ToxR-transkriptionelle Reporter Assays zum Studium der Multipass Protein Transmembranegebiet Oligomerisierung.

ToxR-based reporter transcriptional dosaggi permettono la forza delle interazioni del transmembrane helix in membrane biologiche deve essere misurata. In precedenza, questi dosaggi sono stati utilizzati solo per lo studio del transmembrane sistemi single-pass. Per facilitare l&#39;indagine di oligomerizzazione dominio transmembrana (TMD) polytopic, abbiamo applicato la metodologia ToxR allo studio del multi-pass oligomerizzazione TMD a dare &#39;Multi-Tox&#39;. Propensioni associazione l&#39;oncoproteina dei tipo virale, latente di membrana proteina-1 (LMP-1) e l&#39;e. coli integrale di membrana diacilglicerolo chinasi (DAGK) sono stati studiati da Multi-Tox, evidenziando i residui di particolare importanza meccanicistica. Sono stati studiati sia homo - ed etero-oligomerizations.

Multi-Tox: applicazione del dosaggio ToxR-transcriptional reporter allo studio di oligomerizzazione dominio transmembrana proteine multi-pass.

ToxR&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x819C;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;1&#x56DE;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x578B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x9762;&#x4F53;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;TMD&#xFF09;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F; &#x26;quot;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;Tox&#x306E;&#x26;quot;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D1;&#x30B9;TMD&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5316;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;ToxR&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x816B;&#x760D;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x6027;&#x5411;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-1&#xFF08;LMP-1&#xFF09;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x819C;&#x7A4D;&#x5206;&#x30B8;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;DAGK&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x6A5F;&#x5E8F;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3001;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;Tox&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DB;&#x30E2; - &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;oligomerizations&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;Tox&#x306E;&#xFF1A;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D1;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5316;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;ToxR&#x8EE2;&#x5199;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;

&#x57FA;&#x4E8E; ToxR &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8BB0;&#x8005;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x8981;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E2D;&#x5141;&#x8BB8;&#x8DE8;&#x819C;&#x87BA;&#x65CB;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5316;&#x9A8C;&#x7814;&#x7A76;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x8DE8;&#x819C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x4E3A;&#x65B9;&#x4FBF;&#x8C03;&#x67E5;&#x591A;&#x9762;&#x4F53;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF; (TMD) &#x9F50;&#x805A;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x591A;&#x7A0B; TMD &#x9F50;&#x805A;&#x7ED9; &#39; &#x591A; Tox&#39; &#x91C7;&#x7528; ToxR &#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x534F;&#x4F1A;&#x503E;&#x5411;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; &#x6F5C;&#x4F0F;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;-1 (LMP-1&#xFF09; &#x548C;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x819C;&#x79EF;&#x5206;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E8C;&#x916F;&#x6FC0;&#x9176; (DAGK) &#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x591A; Tox&#xFF0C;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x7279;&#x5B9A;&#x673A;&#x68B0;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x540C;&#x6E90;-&#x548C;&#x5F02;&#x8D28;-oligomerizations &#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x591A;-Tox&#xFF1A; ToxR &#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x86CB;&#x767D;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF;&#x9F50;&#x805A;&#x3002;

ToxR-based transcriptional reporter assays allow the strength of transmembrane helix interactions in biological membranes to be measured. Previously, these assays have only been used to study single-pass transmembrane systems. To facilitate investigation of polytopic transmembrane domain (TMD) oligomerization, we applied the ToxR methodology to the study of multi-pass TMD oligomerization to give 'Multi-Tox'. Association propensities of the viral oncoprotein, latent membrane protein-1 (LMP-1), and the E. coli membrane-integral diacylglycerol kinase (DAGK) were studied by Multi-Tox, highlighting residues of particular mechanistic importance. Both homo- and hetero-oligomerizations were studied.

Multi-Tox: application of the ToxR-transcriptional reporter assay to the study of multi-pass protein transmembrane domain oligomerization.

Transcriptional &#xAE30;&#xC790; ToxR &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xCE21;&#xC815; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB098;&#xC120; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAC15;&#xB3C4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xB9CC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD328;&#xC2A4; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. Polytopic &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (TMD) oligomerization&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#39; &#xBA40;&#xD2F0;-Tox&#39; &#xC8FC;&#xACE0; multi-pass TMD oligomerization&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; ToxR &#xBC29;&#xBC95;&#xB860; &#xC801;&#xC6A9;. &#xD611;&#xD68C; &#xACBD;&#xD5A5; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; oncoprotein, &#xC7A0;&#xC7AC; &#xB41C; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-1 (LMP-1)&#xB294; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC815;&#xC218; diacylglycerol &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (DAGK) &#xBA40;&#xD2F0;-Tox, &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB450; &#xD638;&#xBAA8;-&#xBC0F; hetero-oligomerizations &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xBA40;&#xD2F0;-Tox: &#xBA40;&#xD2F0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; oligomerization&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; ToxR transcriptional &#xAE30;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;.

ToxR basados &#x200B;&#x200B;en ensayos de reportero transcripcional permitir que la fuerza de las interacciones h&#xE9;lice transmembrana en las membranas biol&#xF3;gicas a medir. Anteriormente, estos ensayos s&#xF3;lo se han utilizado para estudiar los sistemas de un solo paso transmembrana. Para facilitar la investigaci&#xF3;n del dominio transmembrana polit&#xF3;pica (TMD) de oligomerizaci&#xF3;n, se aplic&#xF3; la metodolog&#xED;a toxR al estudio de la multi-pass oligomerizaci&#xF3;n DTM para dar &#x26;#39;Multi-Tox&#x26;#39;. Propensiones de Asociaci&#xF3;n de la oncoprote&#xED;na viral, la membrana latente prote&#xED;na-1 (LMP-1), y la E. coli membrana integral quinasa diacilglicerol (DAGK) fueron estudiados en un Multi-Tox, destacando los residuos de importancia mecanicista en particular. Tanto la homo-y hetero oligomerizaciones se estudiaron.

Multi-Tox: Aplicaci&#xF3;n del reportero de ensayo toxR-transcripcional para el Estudio de la Multi-pass oligomerizaci&#xF3;n de prote&#xED;nas dominio transmembrana

Alyssa Wiener

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