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Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Mount Sinai School of Medicine 

&#x4EE5;&#x524D;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x548C;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684; GnRH &#x53D7;&#x4F53; (GnRH-R) &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x5927;&#x9F20; GnRH-R &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x4E2D;&#x5B9A;&#x4E49;&#x51E0;&#x4E2A;&#x987A;&#x5F0F;&#x8C03;&#x63A7;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5305;&#x62EC;&#x529F;&#x80FD;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E3A;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x56E0;&#x5B50; 1&#x3001; &#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x548C;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C; LIM homeodomain &#x54CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20;&#x4E3B;&#x8981;&#x5728;&#x77AC;&#x65F6;&#x8F6C;&#x67D3;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9F20;&#x6807; gonadotrope &#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x4E2D;&#x6240;&#x793A;&#x7684;&#x56FE;&#x6848;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x66F4;&#x591A;&#x6DF1;&#x5165;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210;&#x8F74;&#x627F; 3.3 kb &#x5927;&#x9F20; GnRH-R &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80CE;&#x76D8;&#x78B1;&#x6027;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x5927;&#x9F20; GnRH-R &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x62A5;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x8868;&#x8FBE; LHbeta &#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; FSHbeta &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x5782;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728; TSHbeta &#x6216; GH &#x9633;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5782;&#x4F53;&#x53D1;&#x80B2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x6A21;&#x5F0F;&#x662F;&#x517C;&#x5BB9;&#x7684;&#x8868;&#x5F81; gonadotrope &#x6CBF;&#x88AD;&#x7684;&#x51FA;&#x73B0;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x88AB; colocalized &#x4E0E;&#x80DA;&#x80CE;&#x5929; 13.5 &#x5728;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x7D20; &alpha; &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x56E0;&#x5B50; 1 &#x5728;&#x4EE5;&#x540E;&#x7684;&#x5782;&#x4F53;&#x53D1;&#x5C55;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5982;&#x5916;&#x4FA7;&#x7684;&#x95F4;&#x9694;&#x548C;&#x6D77;&#x9A6C;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x662F;&#x56E0;&#x6B64;&#x80FD;&#x529B;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x591A;&#x6837;&#x5316;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3001; &#x6307;&#x6325;&#x8F6C;&#x5F55;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8FD9;&#x6837;&#x4E00;&#x4E2A;&#x500D;&#x6570;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5982;&#x6B64;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; GnRH-R &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;

&#x5927;&#x9F20;&#x4FC3;&#x6027;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6307;&#x5BFC; gonadotrope &#x7EC6;&#x80DE;&#x5782;&#x4F53;&#x524D;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5728;&#x591A;&#x4E2A;&#x6027;&#x817A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80CE;&#x76D8;&#x78B1;&#x6027;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Previous studies dealing with the mechanisms underlying the tissue-specific and regulated expression of the GnRH receptor (GnRH-R) gene led us to define several cis-acting regulatory sequences in the rat GnRH-R gene promoter. These include functional sites for steroidogenic factor 1, activator protein 1, and motifs related to GATA and LIM homeodomain response elements as demonstrated primarily in transient transfection assays in mouse gonadotrope-derived cell lines. To understand these mechanisms in more depth, we generated transgenic mice bearing the 3.3-kb rat GnRH-R promoter linked to the human placental alkaline phosphatase reporter gene. Here we show that the rat GnRH-R promoter drives the expression of the reporter gene in pituitary cells expressing the LHbeta and/or FSHbeta subunit but not in TSHbeta- or GH-positive cells. Furthermore, the spatial and temporal pattern of the transgene expression during the development of the pituitary was compatible with that characterizing the emergence of the gonadotrope lineage. In particular, transgene expression is colocalized with the expression of the glycoprotein hormone alpha-subunit at embryonic day 13.5 and with that of steroidogenic factor 1 at later stages of pituitary development. Transgene expression was also found in specific brain areas, such as the lateral septum and the hippocampus. A single promoter is thus capable of directing transcription in highly diverse tissues, raising the question of the different combinations of transcription factors that lead to such a multiple, but nevertheless cell-specific, expressions of the GnRH-R gene.

The promoter of the rat gonadotropin-releasing hormone receptor gene directs the expression of the human placental alkaline phosphatase reporter gene in gonadotrope cells in the anterior pituitary gland as well as in multiple extrapituitary tissues.

Des &eacute;tudes ant&eacute;rieures portant sur les m&eacute;canismes qui sous-tendent l&#39;expression tissu-sp&eacute;cifique et r&eacute;glement&eacute;e du g&egrave;ne de la GnRH (GnRH-R) de r&eacute;cepteurs nous a conduit &agrave; d&eacute;finir plusieurs s&eacute;quences r&eacute;gulatrices agissant en cis dans le promoteur du g&egrave;ne rat GnRH-R. Il s&#39;agit notamment des sites fonctionnels pour steroidogenic factor 1, prot&eacute;ine activatrice 1, motifs et reli&eacute;s aux &eacute;l&eacute;ments de r&eacute;ponse de hom&eacute;odomaine GATA et LIM, comme l&#39;a montr&eacute; surtout dans les essais de transfection transitoire dans les lign&eacute;es cellulaires d&eacute;riv&eacute;es de gonadotrope de souris. Pour comprendre ces m&eacute;canismes de fa&ccedil;on plus approfondie, nous avons g&eacute;n&eacute;r&eacute; des souris transg&eacute;niques portant le promoteur de GnRH-R 3.3-Ko rat li&eacute; au g&egrave;ne de journaliste de la phosphatase alcaline placentaire humaine. Ici, nous montrons que le promoteur de GnRH-R rat pousse l&#39;expression du g&egrave;ne rapporteur dans les cellules hypophysaires exprimant la sous-unit&eacute; LHbeta et/ou FSHbeta, mais pas dans les cellules TSHbeta ou GH-positives. En outre, le mod&egrave;le spatial et temporel de l&#39;expression du transg&egrave;ne au cours du d&eacute;veloppement de l&#39;hypophyse &eacute;tait compatible avec celle caract&eacute;risant l&#39;&eacute;mergence de la lign&eacute;e gonadotrope. En particulier, expression du transg&egrave;ne est associ&eacute;e avec l&#39;expression de la sous-unit&eacute; alpha glycoprot&eacute;ine hormone &agrave; jour embryonnaire 13,5 et celle du facteur st&eacute;ro&iuml;dog&eacute;nique 1 aux stades ult&eacute;rieurs du d&eacute;veloppement hypophysaire. Expression du transg&egrave;ne a &eacute;t&eacute; &eacute;galement trouv&eacute;e dans des zones sp&eacute;cifiques du cerveau, comme la cloison lat&eacute;rale et l&#39;hippocampe. Un promoteur unique est ainsi capable de diriger la transcription dans les tissus tr&egrave;s diversifi&eacute;s, soulevant la question des diff&eacute;rentes combinaisons de facteurs de transcription qui m&egrave;nent au multiple, mais n&eacute;anmoins sp&eacute;cifiques des cellules, les expressions du g&egrave;ne de la GnRH-R.

Le promoteur du g&egrave;ne du r&eacute;cepteur rat gonadolib&eacute;rine dirige l&#39;expression du g&egrave;ne de la phosphatase alcaline placentaire humaine reporter dans les cellules de gonadotrope dans l&#39;hypophyse ant&eacute;rieure aussi bien que dans nombreux tissus extrahypophysaires.

Der Promotor der Ratte Gonadotropin-Releasing-Hormon-Rezeptor-Gen die Expression des menschlichen plazentale alkalische Phosphatase Reportergens in gonadotrope Zellen in der vorderen Hypophyse als auch in mehreren Geweben extrapituitary.

Studi precedenti a che fare con i meccanismi sottostanti l&#39;espressione tessuto-specifica e regolamentata del gene del recettore (GnRH-R) di GnRH ci ha portato a definire diverse sequenze regolatrici cis-acting nel promotore del gene di ratto GnRH-R. Questi includono siti funzionali per motivi legati agli elementi di risposta homeodomain GATA e LIM come dimostrato soprattutto in dosaggi di trasfezione transiente in linee di cellule gonadotrope-derivato del mouse steroidogenica fattore 1 e proteina attivatore 1. Per capire questi meccanismi in modo pi&ugrave; approfondito, abbiamo generato topi transgenici recanti il promotore di GnRH-R 3.3-kb ratto legato al gene reporter della fosfatasi alcalina placentare umana. Qui vi mostriamo che il promotore del GnRH-R ratto spinge l&#39;espressione del gene reporter in cellule dell&#39;ipofisi che esprimono la subunit&agrave; LHbeta o FSHbeta, ma non in cellule TSHbeta-GH-positive. Inoltre, il modello spaziale e temporale dell&#39;espressione del transgene durante lo sviluppo dell&#39;ipofisi era compatibile con quello che caratterizza l&#39;emergere del lignaggio gonadotrope. In particolare, l&#39;espressione del transgene &egrave; colocalized con l&#39;espressione della glicoproteina ormone alfa-subunit&agrave; a embrionale giorno 13,5 e con quella del fattore steroidogenica 1 nelle fasi successive dello sviluppo dell&#39;ipofisi. Espressione del transgene &egrave; stato anche trovato in aree cerebrali specifiche, come il setto laterale e l&#39;ippocampo. Un singolo promotore &egrave; cos&igrave; in grado di dirigere la trascrizione nei tessuti altamente diversificati, sollevare la questione delle diverse combinazioni di fattori di trascrizione che portano ad un multiplo, ma nondimeno cellula-specifico, espressioni del gene GnRH-R.

Il promotore del gene del recettore ratto GnRH dirige l&#39;espressione del gene reporter fosfatasi alcalina placentare umano in cellule gonadotrope nella ghiandola pituitaria anteriore cos&igrave; come nei tessuti extrapituitary multiple.

GnRH &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (GnRH R) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x6271;&#x3046;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; GnRH R &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x898F;&#x5236;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x3092;&#x5C0E;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x6A5F;&#x80FD;&#x90E8;&#x4F4D;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7523;&#x751F;&#x8981;&#x56E0; 1&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 1&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x6F5F;&#x3068; LIM &#x30DB;&#x30E1;&#x30AA; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; gonadotrope &#x7531;&#x6765;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x904E;&#x6E21;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x4E3B;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3072;&#x3068;&#x80CE;&#x76E4;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; &#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 3.3 kb &#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; GnRH R &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x8EF8;&#x53D7;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; GnRH R &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C; TSHbeta &#x307E;&#x305F;&#x306F; GH &#x967D;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F; LHbeta &#x3084; FSHbeta &#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x306B; transgene &#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x3068; gonadotrope &#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x51FA;&#x73FE;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3; &alpha; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x65E5; 13.5 &#x3068;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9; &#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x8981;&#x56E0; 1 &#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Transgene &#x5F0F;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x5916;&#x5074;&#x4E2D;&#x9694;&#x3068;&#x6D77;&#x99AC;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x8133;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x306A;&#x3069;&#x8907;&#x6570;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x7D30;&#x80DE;&#x7279;&#x7570;&#x5F0F; GnRH R &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306E;&#x8CEA;&#x554F;&#x3092;&#x4E0A;&#x3052;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x6307;&#x793A;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x524D;&#x65B9;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x817A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8907;&#x6570;&#x306E; extrapituitary &#x7D44;&#x7E54; gonadotrope &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D2;&#x30C8;&#x80CE;&#x76E4;&#x578B;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; &#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

GnRH &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GnRH-R) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xBC0F; &#xADDC;&#xC81C; &#xC2DD; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB2E4;&#xB8E8;&#xACE0; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xC950; GnRH R &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; cis &#xD589;&#xB3D9; &#xADDC;&#xC81C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC815;&#xC758; &#xD558;. Steroidogenic &#xC694;&#xC18C; 1, &#xD65C;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1, &#xBC0F; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; gonadotrope &#xD30C;&#xC0DD; &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xACFC;&#xB3C4; transfection &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xB4EF;&#xC774; GATA&#xACFC; &#xC784; homeodomain &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xAE4A;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD0DC; &#xBC18; &#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xC131; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; 3.3 kb &#xC950; GnRH-R &#xBAA8;&#xD130; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950; &#xC0DD;&#xC131;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; TSHbeta &#xB610;&#xB294; GH &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; LHbeta &#xBC0F; FSHbeta &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xB1CC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB9CC; &#xC950; GnRH R &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xAE30;&#xC790; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB1CC; &#xD558; &#xC218; &#xCCB4;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; transgene &#xC2DD;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xD328;&#xD134; gonadotrope &#xD608;&#xD1B5;&#xC758; &#xCD9C;&#xD604;&#xC744; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xD638;&#xD658; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, transgene &#xC2DD; &#xBC30;&#xC544; &#xB0A0; 13.5&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xD45C;&#xD604; &#xBC0F; &#xB1CC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xB098;&#xC911; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; steroidogenic &#xC694;&#xC18C; 1&#xC758; colocalized&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Transgene &#xC2DD; &#xB610;&#xD55C; &#xCE21;&#xBA74; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xD574; &#xB9C8; &#xB4F1;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xB1CC; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC0AC; &#xAC10;&#xB3C5;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC30;&#xC218;, GnRH-R &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC140; &#xAD00;&#xB828; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xD569; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC744; &#xC81C;&#xAE30;.

&#xC950; &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC120; &#xC790;&#xADF9; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC;-&#xBC29;&#xCD9C; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130; gonadotrope &#xC5EC;&#xB7EC; extrapituitary &#xC9C1;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C;&#xB294; &#xC55E;&#xCABD;&#xC5D0; &#xB1CC; &#xD558; &#xC218; &#xCCB4;&#xB3C4; &#xC140;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD0DC; &#xBC18; &#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xC131; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Estudios previos relacionados con los mecanismos subyacentes a la expresi&oacute;n espec&iacute;fica de tejido y regulada del gene del receptor (GnRH-R) de GnRH nos llevaron a definir varias secuencias reguladoras de cis-actuar en el promotor del gen de rata GnRH-R. Se trata de sitios funcionales para Esteroidog&eacute;nica factor 1, prote&iacute;na activadora 1 y motivos relacionados con elementos de respuesta GATA y LIM homeodomain seg&uacute;n lo demostrado principalmente en ensayos de transfecci&oacute;n transitoria en l&iacute;neas de c&eacute;lulas gonadotrope de rat&oacute;n. Para entender estos mecanismos en m&aacute;s profundidad, hemos generado ratones transg&eacute;nicos con el promotor de GnRH-R 3.3 kb rata ligado al gen reportero de fosfatasa alcalina placentaria humana. Aqu&iacute; mostramos que el promotor de la GnRH-R de rata impulsa la expresi&oacute;n del gen reportero en c&eacute;lulas hipofisarias expresando la subunidad LHbeta o FSHbeta pero no en las c&eacute;lulas TSHbeta - o GH-positivas. Adem&aacute;s, el patr&oacute;n espacial y temporal de la expresi&oacute;n del transgen durante el desarrollo de la hip&oacute;fisis era compatible con eso que caracterizan la aparici&oacute;n del linaje gonadotrope. En particular, la expresi&oacute;n del transg&eacute;n se colocalized con la expresi&oacute;n de la subunidad alfa glicoprote&iacute;na hormona en el d&iacute;a embrionario 13.5 y con eso de Esteroidog&eacute;nica factor 1 en etapas posteriores de desarrollo pituitario. Expresi&oacute;n del transg&eacute;n se encontr&oacute; tambi&eacute;n en &aacute;reas espec&iacute;ficas del cerebro, como el tabique lateral y el hipocampo. Un promotor solo as&iacute; es capaz de dirigir la transcripci&oacute;n en tejidos muy diversos, planteando la cuesti&oacute;n de las diferentes combinaciones de factores de transcripci&oacute;n que conducen a un m&uacute;ltiplo, pero sin embargo c&eacute;lulas espec&iacute;ficas, expresiones del gen GnRH-R.

El promotor del gene del receptor de hormona liberadora de gonadotropina rata dirige la expresi&oacute;n del gen reportero fosfatasa alcalina placentaria humana en gonadotrope c&eacute;lulas en la gl&aacute;ndula pituitaria anterior, as&iacute; como en tejidos extrapituitary m&uacute;ltiples.

GnRH &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x751F;&#x6B96;&#x8EF8;&#x5185;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x3044;&#x77E5;&#x8B58;&#x3068; gonadotrope &#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684; in vivo &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vitro &#x3067;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x5206;&#x96E2;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; GnRH &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x904E;&#x6E21;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B; gonadotrope &#x6D3E;&#x751F;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E; 2 &#x884C;&#x3001;alphaT3 1&#x3001;LbetaT2 &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B; GnRH &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA; &#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9; &#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x8981;&#x56E0; - &#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x6F5F;&#x3068; LIM &#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x5BB6;&#x65CF;&#x9023;&#x308C;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 1 &#xFF08;SF-1) &#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;SF 1 &#x306E;&#x91CD;&#x5927;&#x306A;&#x542B;&#x610F;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6D3B;&#x6027; PACAP &#xFF08;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30B7;&#x30AF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF09; &#x306E;&#x4FC3;&#x9032;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E; CREB &#x95A2;&#x9023;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3072;&#x3068;&#x80CE;&#x76E4;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; 1f13-5 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vitro &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x306E;&#x5408;&#x610F;&#x306F;&#x3001;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; gonadotrope &#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x6388;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x3082;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE; hippocampo &#x9694;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x7279;&#x306B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E; GnRH &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306F; SF-1 &#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A; in vitro &#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x9A5A;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;SF 1 &#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x3067;&#x73FE;&#x5728;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x306E;&#x500B;&#x4F53;&#x767A;&#x751F;&#x4E2D;&#x3001;transgene E 13.5 &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x65E9;&#x3044;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;in vivo &#x3067; SF 1 GnRH &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x767A;&#x9054;&#x6BB5;&#x968E;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; SF-1 &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;GnRH &#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x304C;&#x3002;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E; GnRH &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x5236;&#x5FA1;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x751F;&#x7406;&#x3068;&#x751F;&#x7406;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x306E; gonadotrope &#x95A2;&#x6570;&#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x3001;SF-1 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7D5E;&#x308A;&#x8FBC;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

[GnRH &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9; &#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x8981;&#x56E0; 1 &#x306E;&#x66D6;&#x6627;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B9;&#x30F3;]&#x3002;

&#x7531;&#x4E8E; GnRH &#x53D7;&#x4F53;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x751F;&#x6B96;&#x8F74;&#x5185;&#x7684;&#xFF0C;&#x6B64;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x548C;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4EEA;&#x5668;&#x7684;&#x4E86;&#x89E3;&#x5FC5;&#x987B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x4E86;&#x89E3;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x548C;&#x75C5;&#x7406;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684; gonadotrope &#x51FD;&#x6570;&#x3002;&#x4E3A;&#x6F84;&#x6E05;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E92;&#x8865;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x9996;&#x5148;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x9694;&#x79BB;&#x5782;&#x4F53;&#x5927;&#x9F20; GnRH &#x53D7;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5E76;&#x8C03;&#x67E5;&#x5176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4F7F;&#x7528;&#x77AC;&#x65F6;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6210;&#x4E24;&#x4E2A; gonadotrope &#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x3001; alphaT3-1 &#x548C; LbetaT2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x56E0;&#x6B64;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E86;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; GnRH &#x53D7;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x63AA;&#x65BD;&#x5305;&#x62EC;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x56E0;&#x5B50;-1 (SF-1&#xFF09;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5728;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; LIM homeodomain &#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x5177;&#x6709;&#x51B3;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F3A;&#x8C03;&#x4E86; SF 1 &#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x610F;&#x4E49;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E; CREB &#x76F8;&#x5173;&#x56E0;&#x5B50;&#x5BF9;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#x80BD; (&#x5782;&#x4F53;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x73AF;&#x5316;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x591A;&#x80BD;) &#x523A;&#x6FC0;&#x884C;&#x52A8; &#x300B; &#x4E2D;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x901A;&#x8FC7;&#x9F20;&#x6807;&#x4F7F;&#x7528;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80CE;&#x76D8;&#x78B1;&#x6027;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x62A5;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6280;&#x672F;&#x5206;&#x6790;&#x6B64;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x4E0E;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x662F;&#x5782;&#x4F53;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x8D4B;&#x4E88;&#x5782;&#x4F53; gonadotrope &#x7279;&#x5B9A;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x5B83;&#x4E5F;&#x80FD;&#x591F;&#x76F4;&#x63A5;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x51E0;&#x4E2A;&#x9886;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x5DF2;&#x77E5;&#x8868;&#x8FBE;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x7684; GnRH &#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F; hippocampo &#x95F4;&#x9694;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x4E0D;&#x8981;&#x53D1;&#x8868; SF-1&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x5B83;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4E00;&#x6837;&#x679C;&#x65AD;&#x63D0;&#x51FA;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728;&#x5782;&#x4F53;&#x4E2A;&#x4F53;&#x53D1;&#x80B2;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x8868;&#x793A;&#x65E9;&#x5728; E 13.5 &#x800C; SF-1 &#x5219;&#x4E0D;&#x5B58;&#x5728;&#x5782;&#x4F53;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;SF 1 &#x5C06;&#x4E0D;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x53D1;&#x5C55;&#x9636;&#x6BB5;&#x5782;&#x4F53; GnRH &#x53D7;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#x7B26;&#x5408;&#x4E00;&#x822C;&#x6216;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x5782;&#x4F53;&#x6316;&#x7A7A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801; SF 1&#x3001; &#x6697;&#x793A; GnRH &#x53D7;&#x4F53;&#x8868;&#x793A;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6CA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x4E00;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x8D1F;&#x8D23;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65E9;&#x671F;&#x53D1;&#x80B2;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684; GnRH &#x53D7;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x56E0;&#x7D20;&#x5E94;&#x4F7F;&#x53EF;&#x80FD;&#x7EC6;&#x5316; SF-1 &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x63A7;&#x4E2D;&#x66F4;&#x666E;&#x904D;&#xFF0C;&#x5728;&#x751F;&#x7406;&#x4E0E;&#x75C5;&#x7406;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684; gonadotrope &#x51FD;&#x6570;&#x4E2D;&#x3002;

[&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x56E0;&#x5B50; 1 &#x5728;&#x5927;&#x9F20; GnRH &#x53D7;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E2D;&#x7684;&#x542B;&#x7CCA;&#x4E0D;&#x6E05;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;&#x7ECF;&#x9A8C;&#x6559;&#x8BAD;&#x4ECE;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;]&#x3002;

Because the GnRH receptor plays a paramount role within the reproductive axis, the understanding of the molecular apparatus that governs the tissue-specific expression and regulation of this gene must lead to a better knowledge of the physiology and the physiopathology of the gonadotrope function. To elucidate these mechanisms, we have used two complementary in vivo and in vitro approaches. Firstly, we have isolated the pituitary promoter of the rat GnRH receptor gene and investigated its activity using transient transfection into two gonadotrope-derived cell lines, the alphaT3-1 and the LbetaT2 cell lines. We have thus defined a primary set of transcription factors involved in the tissue-specific expression of the GnRH receptor gene. These include the steroidogenic factor-1 (SF-1) which plays a decisive role while functionally interacting with proteins related to the GATA and LIM homeodomain families of transcription factors. In addition, we highlighted the critical implication of SF-1 and its functional interaction with a CREB-related factor in the stimulatory action of PACAP (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide) on promoter activity. These results have led us to analyze the activity of this promoter by transgenesis in the mouse using human placental alkaline phosphatase as a reporter gene. In agreement with the in vitro data, the pituitary promoter was found to confer gonadotrope-specific activity in the pituitary. It was also able to direct transgene expression in several areas of the central nervous system known to express the endogenous GnRH receptor, in particular in the hippocampo-septal complex. Some of these tissue do not express SF-1, suggesting that, in vivo, its role would not be as decisive as suggested by the in vitro experiments. Surprisingly, during pituitary ontogenesis, the transgene is expressed as early as E 13.5 whereas SF-1 is not yet present in the pituitary. Thus, in vivo, SF-1 would not be necessary for the activation of the GnRH receptor gene during the early developmental stages in the pituitary. These results are consistent with data obtained following general or pituitary-specific knockout of the gene encoding SF-1, suggesting that the GnRH receptor is expressed despite the absence of this factor. Identifying the factors responsible for the activation of the GnRH receptor gene at these early developmental stages should make it possible to refine the role of SF-1, not only in gene regulation but more generally, in the physiology and the physiopathology of the gonadotrope function.

[An ambiguous role of steroidogenic factor 1 in the rat GnRH receptor gene expression. Lessons from transgenic mice].

Parce que le r&eacute;cepteur de la GnRH joue un r&ocirc;le primordial au sein de l&#39;axe de la reproduction, la compr&eacute;hension de l&#39;appareil mol&eacute;culaire qui r&eacute;git l&#39;expression tissu-sp&eacute;cifique et la r&eacute;gulation de ce g&egrave;ne doivent conduire &agrave; une meilleure connaissance de la physiologie et la physiopathologie de la fonction gonadotrope. Afin d&#39;&eacute;lucider ces m&eacute;canismes, nous avons utilis&eacute; deux approches compl&eacute;mentaires in vivo et in vitro. Tout d&#39;abord, nous avons isol&eacute; l&#39;hypophyse promoteur du g&egrave;ne du r&eacute;cepteur de la GnRH rat et examin&eacute; son activit&eacute; &agrave; l&#39;aide de transfection transitoire dans les deux lign&eacute;es cellulaires d&eacute;riv&eacute;es de gonadotrope, l&#39;alphaT3-1 et les lign&eacute;es de cellules LbetaT2. Nous avons donc d&eacute;fini un premier ensemble de facteurs de transcription impliqu&eacute;s dans l&#39;expression tissu-sp&eacute;cifique du g&egrave;ne du r&eacute;cepteur de la GnRH. Il s&#39;agit de la st&eacute;ro&iuml;dog&egrave;nes factor-1 (SF-1) qui joue un r&ocirc;le d&eacute;cisif, tandis que fonctionnellement interagit avec les prot&eacute;ines li&eacute;es &agrave; la GATA et LIM hom&eacute;odomaine familles de facteurs de transcription. En outre, nous avons mis en &eacute;vidence l&#39;implication critique de SF-1 et de son interaction fonctionnelle avec un facteur de CREB li&eacute;es &agrave; l&#39;action stimulatrice de PACAP (Pituitary Adenylate Cyclase activant Polypeptide) sur l&#39;activit&eacute; du promoteur. Ces r&eacute;sultats nous ont amen&eacute;s &agrave; analyser l&#39;activit&eacute; de ce promoteur par transg&eacute;n&egrave;se chez la souris &agrave; l&#39;aide de la phosphatase alcaline placentaire humaine comme un g&egrave;ne rapporteur. En accord avec les donn&eacute;es in vitro, le promoteur hypophysaire s&#39;est av&eacute;r&eacute; pour conf&eacute;rer activit&eacute; gonadotrope sp&eacute;cifiques dans l&#39;hypophyse. Il &eacute;tait aussi capable de diriger l&#39;expression du transg&egrave;ne dans plusieurs domaines du syst&egrave;me nerveux central qui expriment le r&eacute;cepteur de la GnRH endog&egrave;ne, en particulier dans le complexe hippocampo-septal. Certains de ces tissus n&#39;expriment pas de SF-1, indiquant que, in vivo, son r&ocirc;le ne soit pas aussi d&eacute;cisive comme sugg&eacute;r&eacute; par les exp&eacute;riences in vitro. &Eacute;tonnamment, au cours de l&#39;ontogen&egrave;se pituitaire, le transg&egrave;ne est exprim&eacute; d&egrave;s E 13,5 alors que SF-1 n&#39;est pas encore pr&eacute;sent dans l&#39;hypophyse. Ainsi, in vivo, SF-1 serait pas n&eacute;cessaire pour l&#39;activation du g&egrave;ne du r&eacute;cepteur de la GnRH pendant les premiers stades du d&eacute;veloppement de l&#39;hypophyse. Ces r&eacute;sultats concordent avec les donn&eacute;es obtenues apr&egrave;s pituitaire sp&eacute;cifiques ou g&eacute;n&eacute;ral knock-out du g&egrave;ne codant la SF-1, ce qui sugg&egrave;re que le r&eacute;cepteur de la GnRH est exprim&eacute; en d&eacute;pit de l&#39;absence de ce facteur. Identifier les facteurs responsables de l&#39;activation du g&egrave;ne du r&eacute;cepteur de la GnRH &agrave; ces premiers stades du d&eacute;veloppement devrait permettre d&#39;affiner le r&ocirc;le de SF-1, non seulement dans la r&eacute;gulation des g&egrave;nes, mais d&#39;une mani&egrave;re plus g&eacute;n&eacute;rale, la physiologie et la physiopathologie de la fonction gonadotrope.

[Un r&ocirc;le ambigu du facteur st&eacute;ro&iuml;dog&eacute;nique 1 chez le rat, expression de g&egrave;ne des r&eacute;cepteurs GnRH. Le&ccedil;ons tir&eacute;es des souris transg&eacute;niques].

[Eine ambivalente Rolle von steroidogenen Faktor 1 in der Ratte GnRH-Rezeptor-Gen-Expression. Lehren aus transgenen M&#xE4;usen].

Perch&eacute; i recettori del GnRH gioca un ruolo fondamentale all&#39;interno dell&#39;asse riproduttivo, la comprensione dell&#39;apparato molecolare che governa l&#39;espressione tessuto-specifica e regolamento di questo gene deve portare ad una migliore conoscenza della fisiologia e della fisiopatologia della funzione gonadotrope. Per chiarire questi meccanismi, che abbiamo usato due approcci complementari in vivo e in vitro. In primo luogo, abbiamo isolato pituitario promotore del gene del recettore GnRH ratto e studiato la sua attivit&agrave; mediante trasfezione transiente in due linee di cellule gonadotrope-derivati, la alphaT3-1 e le linee di cellule LbetaT2. Abbiamo quindi definito un set di fattori di trascrizione coinvolti nell&#39;espressione tessuto-specifica del gene del recettore GnRH primario. Questi includono lo steroidogenica factor-1 (SF-1) che svolge un ruolo decisivo, mentre funzionalmente interagendo con le proteine legate alla GATA e LIM homeodomain famiglie di fattori di trascrizione. Inoltre, abbiamo messo in evidenza le implicazioni critiche di SF-1 e la sua interazione funzionale con un fattore di CREB nell&#39;azione stimolante di PACAP (adenilato ciclasi pituitaria attivando polipeptide) sull&#39;attivit&agrave; del promotore. Questi risultati ci hanno portato ad analizzare l&#39;attivit&agrave; di questo promotore di transgenesi nel topo con fosfatasi alcalina placenta umana come un gene reporter. In accordo con i dati in vitro, il promotore dell&#39;ipofisi &egrave; stato trovato a conferire gonadotrope specifiche attivit&agrave; nella ghiandola pituitaria. Fu anche in grado di dirigere l&#39;espressione del transgene in diverse aree del sistema nervoso centrale noto per esprimere il recettore di GnRH endogeno, in particolare nel complesso hippocampo-settale. Alcuni di questi tessuti non esprimono SF-1, suggerendo che, in vivo, il ruolo non sarebbe cos&igrave; decisivo come suggerito dagli esperimenti in vitro. Sorprendentemente, durante l&#39;ontogenesi dell&#39;ipofisi, il transgene &egrave; espressa fin da 13,5 E considerando che SF-1 non &egrave; ancora presente nella ghiandola pituitaria. Cos&igrave;, in vivo, SF-1 non sarebbe necessario per l&#39;attivazione del gene del recettore GnRH durante le prime fasi dello sviluppo nella ghiandola pituitaria. Questi risultati sono coerenti con i dati ottenuti seguendo generali o specifici di ipofisi knockout del gene codifica SF-1, suggerendo che i recettori del GnRH sono espresso nonostante l&#39;assenza di questo fattore. Identificare i fattori responsabili per l&#39;attivazione del gene del recettore GnRH in queste prime fasi dello sviluppo dovrebbe rendere possibile affinare il ruolo di SF-1, non solo nella regolazione dei geni, ma pi&ugrave; in generale, la fisiologia e la fisiopatologia della funzione gonadotrope.

[Un ruolo ambiguo del fattore steroidogenica 1 nel ratto dell&#39;espressione genica dei recettori GnRH. Lezioni da topi transgenici].

GnRH &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC0DD;&#xC2DD; &#xCD95; &#xB0B4; &#xCD5C;&#xACE0; &#xC5ED;&#xD560; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xAD6C; &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xC2DD; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xB294; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xC758; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC744; &#xD558; &#xC5EC; gonadotrope &#xD568;&#xC218; physiopathology &#xB9AC;&#xB4DC; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBA85;&#xB8CC;&#xB97C; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC0C1;&#xD638; &#xBCF4;&#xC644;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; &#xBC29;&#xBC95; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xCCAB;&#xC9F8;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC950; GnRH &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB1CC; &#xBAA8;&#xD130;&#xB97C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; &#xB450; gonadotrope &#xD30C;&#xC0DD; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;, alphaT3 1, LbetaT2 &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xACFC;&#xB3C4; transfection&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD574;&#xB2F9; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; GnRH &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Steroidogenic &#xC778;&#xC790;-1 (SF-1) &#xB3D9;&#xC548; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; homeodomain &#xAC00;&#xC871; GATA &#xBC0F; &#xC784; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xAE30;&#xB2A5; &#xACB0;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; SF 1&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC758;&#xBBF8;&#xC640; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; PACAP (&#xB1CC; &#xD558; &#xC218; &#xCCB4; Adenylate Cyclase &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Polypeptide)&#xC758; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xB85C; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C; CREB &#xAD00;&#xB828; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xAC15;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04; &#xD0DC; &#xBC18; &#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xC131; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; transgenesis&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC774; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC8FC;&#xB3C4;&#xD574; &#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCB4; &#xC678; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xACC4;&#xC57D; &#xB1CC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBD80;&#xC5EC; gonadotrope &#xAD00;&#xB828; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xB1CC; &#xD558; &#xC218; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC9C1;&#xC811; hippocampo septal &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC0DD; GnRH &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; transgene &#xC2DD; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; SF-1, &#xC81C;&#xC548;, vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560; &#xAC83;&#xC774; &#xC548; &#xB41C;&#xB2E4;&#xB294; &#xCCB4; &#xC678; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xACB0;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC911; &#xB1CC; ontogenesis&#xB294; transgene &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; E 13.5 &#xC77C;&#xCC0D; &#xBC18;&#xBA74; SF 1 &#xC544;&#xC9C1;&#xB294; &#xB1CC; &#xD558; &#xC218; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC83;&#xC740;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, vivo&#xC5D0;&#xC11C; SF 1 &#xD544;&#xC694; &#xC5C6;&#xC744; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0;&#xB294; &#xB1CC; &#xD558; &#xC218; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD08;&#xAE30; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xB2E8;&#xACC4; GnRH &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; SF-1 &#xC778;&#xCF54;&#xB529;, &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; GnRH &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xAC00;&#xC774; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18; &#xB610;&#xB294; &#xB1CC; &#xD558; &#xC218; &#xCCB4; &#xAD00;&#xB828; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC5BB;&#xC740; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCD08;&#xAE30; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; GnRH &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559; &#xBC0F; gonadotrope &#xD568;&#xC218; physiopathology&#xC5D0;&#xC11C; &#xB354; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, SF-1&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC218;&#xC815; &#xD574;&#xC57C; &#xD55C;&#xB2E4;.

[&#xC950; GnRH &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; steroidogenic &#xC694;&#xC18C; 1&#xC758; &#xBAA8;&#xD638;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB808;&#xC2A8;]&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Porque el receptor de GnRH desempe&ntilde;a un papel primordial en el eje reproductivo, la comprensi&oacute;n del aparato molecular que regula la expresi&oacute;n espec&iacute;fica de tejido y la regulaci&oacute;n de este gen deben conducir a un mejor conocimiento de la fisiolog&iacute;a y la fisiopatolog&iacute;a de la funci&oacute;n gonadotrope. Para aclarar estos mecanismos, hemos utilizado dos enfoques complementarios in vivo e in vitro. En primer lugar, hemos aislado al pituitario promotor del gene del receptor de GnRH rata e investigado su actividad mediante transfecci&oacute;n transitoria en dos l&iacute;neas de c&eacute;lulas gonadotrope, el alphaT3-1 y las l&iacute;neas de c&eacute;lulas LbetaT2. As&iacute; hemos definido un conjunto principal de factores de transcripci&oacute;n implicados en la expresi&oacute;n espec&iacute;fica de tejido del gene del receptor de GnRH. Estos incluyen la Esteroidog&eacute;nica factor-1 (SF-1) que juega un papel decisivo, aunque funcionalmente interactuando con prote&iacute;nas relacionadas a la GATA y LIM homeodomain familias de factores de transcripci&oacute;n. Adem&aacute;s, destacamos la implicaci&oacute;n cr&iacute;tica de SF-1 y su interacci&oacute;n funcional con un factor CREB-relacionadas en la acci&oacute;n estimuladora de PACAP (polip&eacute;ptido de la activaci&oacute;n del Adenilato ciclasa pituitaria) sobre la actividad del promotor. Estos resultados nos han llevado a analizar la actividad de este promotor por transg&eacute;nesis en el rat&oacute;n con fosfatasa alcalina placentaria humana como un gen reportero. De acuerdo con los datos in vitro, el promotor pituitario fue encontrado para conferir gonadotrope espec&iacute;ficos actividad en la gl&aacute;ndula pituitaria. Tambi&eacute;n era capaz de dirigir la expresi&oacute;n del transg&eacute;n en varias &aacute;reas del sistema nervioso central sabido que expresan el receptor de GnRH end&oacute;geno, en particular en el complejo hippocampo-septal. Algunos de estos tejidos no expresan SF-1, lo que sugiere que, en vivo, su papel no ser&iacute;a tan decisiva como la sugerida por los experimentos in vitro. Sorprendentemente, durante la ontog&eacute;nesis pituitario, el transg&eacute;n se expresa tan pronto como E 13.5 mientras que SF-1 no est&aacute; todav&iacute;a presente en la hip&oacute;fisis. As&iacute;, en vivo, SF-1 no ser&iacute;a necesaria para la activaci&oacute;n del gene del receptor de GnRH durante las primeras etapas del desarrollo en la hip&oacute;fisis. Estos resultados son consistentes con los datos obtenidos tras nocaut general o pituitaria espec&iacute;fica del gen codificaci&oacute;n SF-1, lo que sugiere que el receptor de GnRH se expresa pese a la ausencia de este factor. Identificar los factores responsables de la activaci&oacute;n del gene del receptor de GnRH en estas primeras etapas del desarrollo deber&iacute;a permitir perfeccionar el papel de SF-1, no s&oacute;lo en la regulaci&oacute;n g&eacute;nica, sino m&aacute;s generalmente, en la fisiolog&iacute;a y la fisiopatolog&iacute;a de la funci&oacute;n gonadotrope.

[Un papel ambiguo del factor Esteroidog&eacute;nica 1 en la rata la expresi&oacute;n de genes del receptor de GnRH. Lecciones de ratones transg&eacute;nicos].

La capacit&eacute; &agrave; associer des mutations dans les g&egrave;nes du cancer, la maladie et de ses sous-types est essentielle pour comprendre l&#39;oncogen&egrave;se et identification de biomarqueurs pour le diagnostic clinique. Une m&eacute;thode de balayage de mutation en deux &eacute;tapes qui successivement utilis&eacute; endonucl&eacute;ase V (activit&eacute;) pour &eacute;br&eacute;cher l&#39;inad&eacute;quations et DNA ligase resceller incorrectement ou entaill&eacute; non sp&eacute;cifique des sites a &eacute;t&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment d&eacute;velopp&eacute;e dans notre laboratoire. On rapporte une analyse mono-&eacute;tage optimis&eacute;e qui permet la ligase &agrave; relire le clivage de l&#39;activit&eacute; en temps r&eacute;el aux termes d&#39;un compromis entre les conditions de la m&eacute;moire tampon. Correction d&#39;&eacute;preuves en temps r&eacute;el se traduit par une r&eacute;duction spectaculaire du clivage de l&#39;arri&egrave;re-plan. Une strat&eacute;gie PCR universelle qui utilise des amorces g&egrave;ne-sp&eacute;cifiques non &eacute;tiquet&eacute;s et marqu&eacute;s des amorces universelles, permet multiplex&eacute;e amplification g&eacute;nique et s&#39;oppose &agrave; une amplification des dim&egrave;res d&#39;amorce. &Eacute;tiquet&eacute;s &agrave; l&#39;interne par PCR amorces &eacute;liminent clivage d&#39;activit&eacute; &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; 5&#39;, permettant la lecture de l&#39;&eacute;lectrophor&egrave;se capillaire haut d&eacute;bit. En outre, l&#39;intensit&eacute; du signal est augment&eacute;e et artefacts sont r&eacute;duits en g&eacute;n&eacute;rant h&eacute;t&eacute;roduplex contenant seul d&#39;entre les deux incompatibilit&eacute;s possibles (par exemple a/c ou G/T). Le dosage de la seule &eacute;tape am&eacute;liore la sensibilit&eacute; &agrave; 01:50 et 1/100 (type de mutant : sauvage) pour les mutations inconnues dans le p53 et des g&egrave;nes KRAS, respectivement, les perspectives d&#39;ouverture comme un outil de d&eacute;tection pr&eacute;coce.

Mutation de haute sensibilit&eacute; activit&eacute; num&eacute;risation &agrave; travers la relecture de la ligase en temps r&eacute;el.

Hohe Empfindlichkeit EndoV Mutation Scannen durch Echtzeit-Ligase Korrekturlesen.

&#x5C06;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x53CA;&#x5176;&#x5B50;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E0E;&#x8BE5;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x7406;&#x89E3;&#x53D1;&#x751F;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BCA;&#x65AD;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x3002;&#x4E24;&#x6B65;&#x7A81;&#x53D8;&#x626B;&#x63CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6309;&#x987A;&#x5E8F;&#x4F7F;&#x7528;&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176; (EndoV) V &#x963B;&#x51FB;&#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#x548C; DNA &#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x91CD;&#x65B0;&#x5C01;&#x88C5;&#x4E0D;&#x6B63;&#x786E;&#x6216; nonspecifically &#x954D;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4EE5;&#x524D;&#x662F;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x3002;&#x6B64;&#x5904;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x5355;&#x6B65;&#x6267;&#x884C;&#x68C0;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x8FDB;&#x884C;&#x6821;&#x5BF9; EndoV &#x5288;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B9E;&#x65F6;&#x4E0B;&#x7F13;&#x51B2;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x59A5;&#x534F;&#x3002;&#x5B9E;&#x65F6;&#x6821;&#x5BF9;&#x7ED3;&#x679C;&#x80CC;&#x666F;&#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x6025;&#x5267;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x666E;&#x904D;&#x7684; PCR &#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x96C7;&#x7528;&#x672A;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7279;&#x5F02;&#x5F15;&#x7269;&#x548C;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x901A;&#x7528;&#x5F15;&#x7269;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x591A;&#x8DEF;&#x590D;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x6269;&#x589E;&#x548C;&#x6392;&#x9664;&#x6269;&#x589E;&#x5F15;&#x7269;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x6807;&#x8BB0; PCR &#x5F15;&#x7269;&#x6D88;&#x9664;&#x603B;&#x7AD9; 5&#39;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x7BA1;&#x7535;&#x6CF3;&#x8BFB;&#x51FA; EndoV &#x5288;&#x88C2;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x548C;&#x6587;&#x7269;&#x90FD;&#x51CF;&#x5C11;&#x751F;&#x6210; heteroduplexes &#x4EC5;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5339;&#x914D; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982; a/C &#x6216; G/T&#xFF09;&#x3002;&#x5355;&#x6B65;&#x6267;&#x884C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x4E3A; 1:50&#x3001; 1: 100 (&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF1A; &#x91CE;&#x751F;&#x578B;) &#x672A;&#x77E5;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; p53 &#x548C; k-ras &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65E9;&#x671F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5DE5;&#x5177;&#x6253;&#x5F00;&#x7684;&#x524D;&#x666F;&#x3002;

&#x9AD8;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6; EndoV &#x7A81;&#x53D8;&#x626B;&#x63CF;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B9E;&#x65F6;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x6821;&#x5BF9;&#x3002;

The ability to associate mutations in cancer genes with the disease and its subtypes is critical for understanding oncogenesis and identifying biomarkers for clinical diagnosis. A two-step mutation scanning method that sequentially used endonuclease V (EndoV) to nick at mismatches and DNA ligase to reseal incorrectly or nonspecifically nicked sites was previously developed in our laboratory. Herein we report an optimized single-step assay that enables ligase to proofread EndoV cleavage in real-time under a compromise between buffer conditions. Real-time proofreading results in a dramatic reduction of background cleavage. A universal PCR strategy that employs both unlabeled gene-specific primers and labeled universal primers, allows for multiplexed gene amplification and precludes amplification of primer dimers. Internally labeled PCR primers eliminate EndoV cleavage at the 5' terminus, enabling high-throughput capillary electrophoresis readout. Furthermore, signal intensity is increased and artifacts are reduced by generating heteroduplexes containing only one of the two possible mismatches (e.g. either A/C or G/T). The single-step assay improves sensitivity to 1:50 and 1:100 (mutant:wild type) for unknown mutations in the p53 and K-ras genes, respectively, opening prospects as an early detection tool.

High sensitivity EndoV mutation scanning through real-time ligase proofreading.

La capacit&agrave; di associare le mutazioni nei geni del cancro con la malattia e relativi sottotipi &egrave; fondamentale per la comprensione di oncogenesi e identificazione di biomarcatori per la diagnosi clinica. Un metodo di scansione mutazione in due fasi in sequenza utilizzata endonucleasi V (EndoV) Nick a mancate corrispondenze e ligasi del DNA per sigillare in modo errato o scalfiti siti precedentemente &egrave; stato sviluppato nel nostro laboratorio. Qui riportiamo un&#39;analisi single-step ottimizzata che consente ligasi per proofread EndoV clivaggio in tempo reale con un compromesso tra condizioni di buffer. Correzione in tempo reale si traduce in una drastica riduzione del clivaggio di sfondo. Una strategia universale di PCR che impiega sia adenoide gene-specific primer e con etichetta universal primer, permette di amplificazione genica multiplex e osta amplificazione dei dimeri di primer. Internamente con etichetta PCR primer eliminare EndoV scissione al 5&#39; capolinea, permettendo la lettura di elettroforesi capillare ad alta velocit&agrave;. Inoltre, &egrave; l&#39;aumento della intensit&agrave; di segnale e gli artefatti sono ridotti generando heteroduplexes contenente solo uno di mancate corrispondenze possibili due (per esempio a/c o G/T). Il dosaggio di single-step migliora la sensibilit&agrave; 01.50 e 1:100 (mutante: wild type) per sconosciuto mutazioni della p53 e geni K-ras, rispettivamente, aprendo prospettive come strumento di rilevazione precoce.

Mutazione di EndoV alta sensibilit&agrave; scansione attraverso la rilettura della ligasi in tempo reale.

&#x304C;&#x3093;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x75C5;&#x6C17;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x767A;&#x764C;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3057;&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A3A;&#x65AD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; V (EndoV) &#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x4E0D;&#x4E00;&#x81F4;&#x3068;&#x6B63;&#x3057;&#x304F;&#x306B;&#x518D;&#x30B7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3059;&#x308B; DNA &#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x9806;&#x6B21;&#x4F7F;&#x7528;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304C;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; 2 &#x6BB5;&#x968E;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x8D70;&#x67FB;&#x6CD5;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x5F53;&#x7814;&#x7A76;&#x5BA4;&#x3067;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x6211;&#x3005; &#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x30EA; &#x30AC;&#x30FC;&#x30BC; EndoV &#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x3092;&#x6821;&#x6B63;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB; &#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x5831;&#x544A;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; &#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x59A5;&#x5354;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x3002;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x6821;&#x6B63;&#x80CC;&#x666F;&#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x524A;&#x6E1B;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x306A; PCR &#x6226;&#x7565;&#x591A;&#x91CD;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5897;&#x5E45;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x7684;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB; PCR &#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; EndoV &#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8; &#x30AD;&#x30E3;&#x30D4;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x51FA;&#x3057;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;5&#39; &#x672B;&#x7AEF;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F37;&#x5EA6;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30C8;&#x304C; 1 &#x3064;&#x3060;&#x3051;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x4E0D;&#x4E00;&#x81F4; (&#x4F8B;&#x3048;&#x3070; A/C &#x307E;&#x305F;&#x306F; G/T &#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;) &#x3092;&#x542B;&#x3080; heteroduplexes &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x524A;&#x6E1B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB; &#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; 1:50 &#x3068; 1 &#x672A;&#x77E5;&#x5909;&#x7570; p53 &#x3068; K &#x2010; ras &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; &#xFF08;&#x5909;&#x7570;: &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF09;: 100 &#x3078;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5C55;&#x671B;&#x3092;&#x958B;&#x304F;&#x304C;&#x5411;&#x4E0A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; &#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6821;&#x6B63;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6; EndoV &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3002;

&#xC9C8;&#xBCD1; &#xBC0F; &#xADF8; &#xD558;&#xC704; &#xC554; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; &#xBC1C;&#xC554;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC784;&#xC0C1; &#xC9C4;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2C9; endonuclease V (EndoV)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58;&#xC640; DNA &#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xBD09;&#xC778;&#xC5D0; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; nonspecifically &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xAE01;&#xC5B4; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC80;&#xC0C9; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAD50;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; EndoV &#xBD84;&#xC5F4; &#xD558; &#xB9AC;&#xAC00; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBC84;&#xD37C; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C;. &#xBC30;&#xACBD; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xAC10;&#xC18C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xAD50;&#xC815;. &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC5C6;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD2B9;&#xC815; &#xB1CC;&#xAD00; &#xBC0F; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xBCF4;&#xD3B8;&#xC801;&#xC778; &#xB1CC;&#xAD00;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xD3B8;&#xC801;&#xC778; PCR &#xC804;&#xB7B5; &#xBA40;&#xD2F0;&#xD50C;&#xB809;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC99D;&#xD3ED;&#xACFC; &#xB1CC;&#xAD00; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558;&#xB294; &#xAC78;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB0B4;&#xBD80;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; PCR&#xC744; &#xBD84;&#xB958; &#xB1CC;&#xAD00; &#xC81C;&#xAC70; 5&#39; &#xB9D0;&#xB2E8;, &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xBAA8; &#xC138;&#xAD00; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; &#xD310;&#xB3C5; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; EndoV &#xBD84;&#xC5F4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC2E0;&#xD638; &#xAC15;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC0F; &#xC720;&#xBB3C; &#xB450; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; (&#xC608;: a/C &#xB610;&#xB294; G/T) &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB9CC; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; heteroduplexes&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC5D0; 1&#xC2DC; 50&#xBD84;, 1: 100 (&#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;: &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xD0C0;&#xC785;) &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; p53 &#xBC0F; K-ras &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xB3C4; &#xAC01;&#xAC01; &#xCD08;&#xAE30; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xC11C; &#xC7A0;&#xC7AC; &#xACE0;&#xAC1D;&#xC744; &#xC5F4;&#xAE30;.

&#xB192;&#xC740; &#xAC10;&#xB3C4; EndoV &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xB9AC;&#xAC00; &#xAD50;&#xC815; &#xD558;.

La capacidad que se asocia a mutaciones en los genes del c&aacute;ncer de la enfermedad y sus subtipos es fundamental para comprender la oncog&eacute;nesis e identificaci&oacute;n de biomarcadores para el diagn&oacute;stico cl&iacute;nico. Un m&eacute;todo de an&aacute;lisis de mutaci&oacute;n dos pasos que utilizan secuencialmente endonucleasa V (EndoV) a nick en desajustes y ADN ligasa para sellar incorrectamente o un Mellado sitios previamente fue desarrollado en nuestro laboratorio. Adjunto divulgamos un ensayo de single-step optimizado que permite ligasa corregir la hendidura EndoV en tiempo real bajo un compromiso entre condiciones de b&uacute;fer. Correcci&oacute;n en tiempo real se traduce en una reducci&oacute;n dram&aacute;tica de escote de fondo. Una estrategia universal de PCR que emplea sin etiqueta cartillas gene-espec&iacute;ficas y etiquetadas cebadores universales, permite la amplificaci&oacute;n del gen multiplexada y excluye la amplificaci&oacute;n de d&iacute;meros de la cartilla. Etiquetado internamente PCR cartillas eliminan EndoV escote en el 5&#39; terminal, lo que permite la lectura de electroforesis capilar de alto rendimiento. Adem&aacute;s, se incrementa la intensidad de la se&ntilde;al y artefactos se reducen generando heterod&uacute;plex que contienen s&oacute;lo uno de los dos posibles desajustes (e.g./c o G/T). El ensayo solo paso mejora la sensibilidad a la 1:50 y 1: 100 (tipo mutante: salvaje) para desconocido mutaciones en los genes de la K-ras y p53 respectivamente, abriendo perspectivas como una herramienta de detecci&oacute;n temprana.

Mutaci&oacute;n de alta sensibilidad EndoV exploraci&oacute;n a trav&eacute;s de la correcci&oacute;n de la ligasa en tiempo real.

Mdm2 is the main regulator of p53 and is amplified in approximately 7% of all human cancers. MDM2 gene amplification as well as expression has been correlated to an increased tumorigenic potential. We have analyzed the prevalence of MDM2 gene amplifications and SNP309 in 284 colorectal tumors using a relatively new highly sensitive PCR/ligase detection reaction method in relation to TP53 mutational status and genomic instability. We found MDM2 to be amplified in 9% of the 284 colorectal cancers analyzed and a significantly higher proportion of tumors with high MDM2 gene amplification retained a wild-type p53 gene (P = 0.058). MDM2 gene amplification was significantly correlated to advanced tumor stage. Several small-molecule MDM2 antagonists have already been identified that either physically inhibit the p53-MDM2 binding or the E3 ligase function of MDM2. Our results suggest that MDM2 is a promising target for this type of cancer therapy in a substantial subgroup of colorectal cancers.

MDM2 gene amplification is correlated to tumor progression but not to the presence of SNP309 or TP53 mutational status in primary colorectal cancers.

Mdm2 &#x7684; p53 &#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#xFF0C;&#x5927;&#x7EA6; 7%&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x764C;&#x75C7;&#x4E2D;&#x88AB;&#x653E;&#x5927;&#x3002;MDM2 &#x57FA;&#x56E0;&#x6269;&#x589E;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8868;&#x8FBE;&#x5DF2;&#x81F4;&#x7624;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x589E;&#x52A0;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x65B0;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F; PCR/&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x68C0;&#x6D4B;&#x53CD;&#x5E94;&#x65B9;&#x6CD5; TP53 &#x7A81;&#x53D8;&#x72B6;&#x6001;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684; 284 &#x5927;&#x80A0;&#x80BF;&#x7624; MDM2 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x653E;&#x5927;&#x548C; SNP309 &#x7684;&#x6D41;&#x884C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; MDM2 &#x8981;&#x653E;&#x5927;&#x5728;&#x5206;&#x6790; 284 &#x5927;&#x80A0;&#x764C;&#x7684; 9%&#xFF0C;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x660E;&#x663E;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x9AD8; MDM2 &#x57FA;&#x56E0;&#x6269;&#x589E;&#x4E0E;&#x80BF;&#x7624;&#x4FDD;&#x7559;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; p53 &#x57FA;&#x56E0; (P = 0.058)&#x3002;MDM2 &#x57FA;&#x56E0;&#x6269;&#x589E;&#x5230;&#x665A;&#x671F;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x9636;&#x6BB5;&#x662F;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50; MDM2 &#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x4EFB;&#x4E00;&#x7269;&#x7406;&#x6291;&#x5236; p53 MDM2 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6216; MDM2 &#x7684; E3 &#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; MDM2 &#x8FD9;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x764C;&#x75C7;&#x6CBB;&#x7597;&#x5927;&#x80A0;&#x764C;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B9E;&#x8D28;&#x6027;&#x5206;&#x7EC4;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

MDM2 &#x57FA;&#x56E0;&#x6269;&#x589E;&#x76F8;&#x5173;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; SNP309 &#x6216; TP53 &#x7A81;&#x53D8;&#x72B6;&#x6001;&#x5728;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x764C;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;

MDM2 est le principal r&eacute;gulateur de la p53 et est amplifi&eacute; chez environ 7 % de tous les cancers humains. Amplification du g&egrave;ne MDM2 ainsi que l&#39;expression a &eacute;t&eacute; corr&eacute;l&eacute;e &agrave; un risque accru de tumorig&egrave;ne. Nous avons analys&eacute; la pr&eacute;valence de l&#39;amplification du g&egrave;ne MDM2 et SNP309 dans les tumeurs colorectales 284 en utilisant une m&eacute;thode relativement nouvelle de r&eacute;action d&eacute;tection ultrasensible de PCR/ligase en ce qui concerne le statut mutationnel TP53 et instabilit&eacute; g&eacute;nomique. Nous avons trouv&eacute; MDM2 &agrave; amplifier dans 9 % des cancers colorectaux 284 analys&eacute;s et une proportion significativement plus &eacute;lev&eacute;e de tumeurs avec amplification des g&egrave;nes MDM2 &eacute;lev&eacute;e conserv&eacute; un g&egrave;ne p53 sauvage (P = 0,058). Amplification du g&egrave;ne MDM2 est significativement corr&eacute;l&eacute;e au stade de la tumeur avanc&eacute;e. Antagonistes de MDM2 plusieurs petites mol&eacute;cules ont d&eacute;j&agrave; &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s que soit physiquement les inhibent la liaison de MDM2-p53 ou la fonction de ligase E3 de MDM2. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que MDM2 est une cible prometteuse pour ce type de traitement du cancer dans un sous-groupe important des cancers colorectaux.

Amplification du g&egrave;ne MDM2 est corr&eacute;l&eacute;e &agrave; la progression tumorale, mais pas &agrave; la pr&eacute;sence de SNP309 ou TP53 statut mutationnel dans cancer colorectal primitif.

Mdm2 ist der wichtigste Regulator von p53 und wird in etwa 7 % aller menschlichen Krebserkrankungen verst&auml;rkt. MDM2 GENAMPLIFIKATION sowie Ausdruck wurde auf ein erh&ouml;htes tumorigenic Potenzial korreliert. Wir haben die Pr&auml;valenz von MDM2 gen Verst&auml;rkungen und SNP309 bei 284 kolorektalen Tumoren, die &uuml;ber ein relativ neues hochempfindlichen PCR/Ligase Reaktion Nachweisverfahren in Bezug auf TP53 teilhabende Status und genomische Instabilit&auml;t analysiert. Wir fanden MDM2 verst&auml;rken k&ouml;nnen, in 9 % der 284 colorectal Krebse, die analysiert und ein deutlich h&ouml;herer Anteil von Tumoren mit hohen MDM2 GENAMPLIFIKATION behielt ein Wildtyp p53-Gen (P = 0.058). MDM2 GENAMPLIFIKATION war signifikant zur fortgeschrittenen Tumor Stufe wurde. Mehrere kleine-Molek&uuml;l MDM2-Antagonisten wurden bereits identifiziert, dass entweder physisch die p53-MDM2-Bindung oder die E3-Ligase-Funktion von MDM2 hemmen. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass MDM2 ein vielversprechendes Ziel f&uuml;r diese Art von Krebs-Therapie in eine betr&auml;chtliche Untergruppe von colorectal Krebse ist.

MDM2 GENAMPLIFIKATION ist bis zum Fortschreiten der Tumor jedoch nicht auf das Vorhandensein von SNP309 oder TP53 teilhabende Status in der prim&auml;ren colorectal Krebse korreliert.

MDM2 &egrave; il principale regolatore della p53 e viene amplificato in circa il 7% di tutti i tumori umani. Amplificazione del gene MDM2 come espressione &egrave; stato correlato a un aumento potenziale tumorigeno. Abbiamo analizzato la prevalenza di amplificazioni gene MDM2 e SNP309 in 284 tumori del colon-retto utilizzando un metodo reazione rilevamento PCR/ligasi altamente sensibile relativamente nuovo in materia di status mutazionale TP53 e instabilit&agrave; genomica. Abbiamo trovato MDM2 per essere amplificato nel 9% dei tumori del colon-retto 284 analizzati e una proporzione significativamente maggiore di tumori con alta amplificazione del gene MDM2 mantenne un gene p53 wild-type (P = 0,058). Amplificazione del gene MDM2 &egrave; stato significativamente correlato alla fase avanzata di tumore. Alcuni antagonisti di MDM2 piccolo-molecola sono stati identificati gi&agrave; che sia fisicamente inibiscono il legame di p53-MDM2 o la funzione della ligasi E3 di MDM2. I nostri risultati suggeriscono che MDM2 &egrave; un bersaglio promettente per questo tipo di terapia del cancro in un sostanza sottogruppo di tumori del colon-retto.

Amplificazione del gene MDM2 &egrave; correlata alla progressione del tumore, ma non per la presenza di SNP309 o TP53 status mutazionale in tumori colorettali primari.

Mdm2 &#x306F; p53 &#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x7D04; 7 &#xFF05; &#x306B;&#x5897;&#x5E45;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MDM2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5897;&#x5E45;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5F0F;&#x767A;&#x764C;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306B;&#x76F8;&#x95A2;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6; PCR/&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x691C;&#x51FA;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6CD5; TP53 &#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; 284 &#x5927;&#x8178;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; MDM2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5897;&#x5E45;&#x3068; SNP309 &#x306E;&#x6709;&#x75C5;&#x7387;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5206;&#x6790; 284 &#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306E; 9 &#xFF05; &#x3067;&#x5897;&#x5E45;&#x3055;&#x308C;&#x308B; MDM2 &#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; p53 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9AD8; MDM2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5897;&#x5E45;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x5272;&#x5408;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301; &#xFF08;P = 0.058)&#x3002;MDM2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5897;&#x5E45;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x76F8;&#x95A2;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50; MDM2 &#x30A2;&#x30F3;&#x30BF;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x65E2;&#x306B;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3001;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306B; p53 MDM2 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x307E;&#x305F;&#x306F; MDM2 &#x306E; E3 &#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x963B;&#x5BB3;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MDM2 &#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x304C;&#x3093;&#x6CBB;&#x7642;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306E;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5185;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

MDM2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5897;&#x5E45;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x304C; SNP309 &#x307E;&#x305F;&#x306F; TP53 &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Mdm2 p53&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xBA70;, &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC554; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC758; &#xC57D; 7%&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xD3ED; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; MDM2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC99D;&#xD3ED; &#xC99D;&#xAC00; tumorigenic &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB41C; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; TP53 mutational &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBC0F; genomic &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; PCR/&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC80;&#xCD9C; &#xBC18;&#xC751; &#xBC29;&#xBC95; 284 &#xB300; &#xC7A5; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0; MDM2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD655;&#xB300; &#xBC0F; snp309&#xC758; &#xC720; &#xBCD1; &#xC728;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; MDM2 &#xBD84;&#xC11D; 284 &#xB300; &#xC7A5; &#xC554;&#xC758; 9%&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; &#xB192;&#xC740; MDM2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC99D;&#xD3ED;&#xACFC; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC774; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xB192;&#xC740; &#xC720;&#xC9C0; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; p53 &#xC720;&#xC804;&#xC790; (P = 0.058). MDM2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC740; &#xACE0;&#xAE09; &#xC885;&#xC591; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xAE4A;&#xC740; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;. &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; MDM2 &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC774;&#xBBF8; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; p53 MDM2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC774;&#xB098; mdm2&#xC758; E3 &#xB9AC;&#xAC00; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; MDM2 &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xD558;&#xC704; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0;&#xC758;&#xC774; &#xC720;&#xD615;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xB9DD; &#xB300;&#xC0C1; &#xC81C;&#xC548;.

MDM2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC5D0;&#xB294; &#xC8FC; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554;&#xC5D0; SNP309 &#xB610;&#xB294; TP53 mutational &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC874;&#xC7AC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC885;&#xC591; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4; &#xC774;&#xB2E4;.

MDM2 es el principal regulador de p53 y se amplifica en aproximadamente el 7% de los c&aacute;nceres humanos. Amplificaci&oacute;n del gen MDM2 as&iacute; como expresi&oacute;n se ha correlacionado con un mayor potencial tumor&iacute;geno. Hemos analizado la prevalencia de MDM2 gene amplificaciones y SNP309 en 284 tumores colorrectales mediante un novedoso m&eacute;todo de reacci&oacute;n de detecci&oacute;n PCR/ligasa altamente sensible en relaci&oacute;n con el estado mutacional de TP53 e inestabilidad gen&oacute;mica. Encontramos MDM2 amplificado en el 9% de los c&aacute;nceres colorrectales 284 analizados y una proporci&oacute;n significativamente mayor de tumores con alta amplificaci&oacute;n del gen MDM2 retuvo un gen p53 de tipo salvaje (P = 0.058). Amplificaci&oacute;n del gen MDM2 se correlacion&oacute; significativamente con estadio tumoral avanzado. Varios antagonistas de MDM2 de mol&eacute;culas peque&ntilde;as se han identificado ya que f&iacute;sicamente o inhibir el atascamiento de p53-MDM2 o la funci&oacute;n de ligasa E3 de MDM2. Nuestros resultados sugieren que MDM2 es un objetivo prometedor para este tipo de terapia del c&aacute;ncer en un subgrupo substancial de los c&aacute;nceres colorrectales.

Amplificaci&oacute;n del gen MDM2 se correlaciona a la progresi&oacute;n del tumor pero no a la presencia de SNP309 o TP53 estado mutacional en casos de c&aacute;ncer colorrectales primarios.

&#x5927;&#x80A0;&#x764C; (CRC) 30 &#x5C81;&#x7684;&#x60A3;&#x8005;&#x4E2D;&#x51FA;&#x73B0;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x7F55;&#x89C1;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x548C;&#x674E;&#x5F17;&#x52B3;&#x6885;&#x5C3C;&#x68B5;&#x5185;&#x62A5;&#x544A;&#x4E86;&#x51E0;&#x4F8B;&#x3002;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x5982;&#x4F55;&#x5F80;&#x5F80;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x75BE;&#x75C5;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x7684; p53 &#x901A;&#x8DEF;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8BC4;&#x4F30;&#x60A3;&#x8005;&#x65E9;&#x671F;&#x53D1;&#x75C5; CRC &#x7684;&#x751F;&#x6B96;&#x53D8;&#x5F02;&#x7684; p53 &#x57FA;&#x56E0;&#x548C; MDM2 SNP309 &#x662F;&#x5426;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;

&#x57FA;&#x56E0;&#x53D8;&#x5F02;&#x5728;&#x751F;&#x6B96; TP53 &#x548C; MDM2 SNP309 &#x4E0D;&#x4E0E;&#x65E9;&#x671F;&#x5927;&#x80A0;&#x764C;&#x53D1;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

Colorectal cancer (CRC) arising in patients under age 30 is a rare disease, and few cases have been reported within Li-Fraumeni kindreds. To determine how often alterations in the p53 pathway genes contribute to disease susceptibility, we have evaluated patients with early onset CRC for the presence of germline variants in the p53 gene and MDM2 SNP309.

Genetic variants in germline TP53 and MDM2 SNP309 are not associated with early onset colorectal cancer.

Cancer colorectal (CCR), qui en d&eacute;coulent chez les patients &acirc;g&eacute;s de moins de 30 est une maladie rare, et peu de cas ont &eacute;t&eacute; signal&eacute;s dans les tribus de Li-Fraumeni. Pour d&eacute;terminer la fr&eacute;quence des alt&eacute;rations dans les g&egrave;nes de la voie p53 contribuent &agrave; la susceptibilit&eacute; &agrave; la maladie, nous avons &eacute;valu&eacute; les atteintes de forme pr&eacute;coce de CRC et la pr&eacute;sence de cellules germinales des variantes dans le g&egrave;ne p53 et MDM2 SNP309.

Variants g&eacute;n&eacute;tiques dans les cellules germinales TP53 et MDM2 SNP309 ne sont pas associ&eacute;s &agrave; un cancer colorectal apparition pr&eacute;coce.

Kolorektales Karzinom (CRC) entstehen bei Patienten unter 30 Jahren ist eine seltene Krankheit, und innerhalb Li-Fraumeni Geschlechtern wurden nur wenige F&auml;lle beschrieben. Zu ermitteln, wie oft Ver&auml;nderungen in den Genen des p53-Weg zur Krankheit Anf&auml;lligkeit, wir haben Patienten mit fr&uuml;hem Beginn CRC auf das Vorhandensein von Keimbahn-Varianten im p53-Gen und MDM2 SNP309 evaluiert.

Genetische Varianten in Keimbahn TP53 und MDM2 SNP309 sind nicht fr&uuml;h beginnende colorectal Krebs zugeordnet.

Cancro del colon-retto (CRC) derivanti in pazienti sotto l&#39;et&agrave; 30 &egrave; una malattia rara, e pochi casi sono stati segnalati all&#39;interno di stirpi di Li-Fraumeni. Per determinare quanto spesso alterazioni nei geni p53 pathway contribuiscono alla suscettibilit&agrave; di malattia, noi abbiamo valutato i pazienti con esordio precoce CRC per la presenza di varianti della linea germinale nel gene p53 e MDM2 SNP309.

Varianti genetiche nella linea germinale TP53 e MDM2 SNP309 non sono associati con il cancro del colon-retto ad esordio precoce.

30 &#x6B73;&#x672A;&#x6E80;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x5927;&#x8178;&#x764C; (CRC) &#x306F;&#x307E;&#x308C;&#x306A;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x5185;&#x306E; Li Fraumeni &#x30B1;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3069;&#x306E;&#x304F;&#x3089;&#x3044;&#x306E;&#x983B;&#x5EA6;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B; p53 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x75BE;&#x60A3;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3001;CRC &#x306E;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x5909;&#x7570; p53 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068; MDM2 SNP309 &#x5B58;&#x5728;&#x767A;&#x75C7;&#x65E9;&#x671F;&#x60A3;&#x8005;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x751F;&#x6B96; TP53 &#x3068; MDM2 SNP309 &#x306F;&#x767A;&#x75C7;&#x5927;&#x8178;&#x306E;&#x65E9;&#x671F;&#x764C;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#xB300; &#xC7A5; &#xC554; (CRC) 30 &#xC138; &#xC774;&#xD558;&#xC758; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB4DC;&#xBB38; &#xC9C8;&#xD658; &#xBC0F; Li Fraumeni &#xC871;&#xC18D; &#xB0B4; &#xACBD;&#xC6B0;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xC790;&#xC8FC; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; p53 &#xD1B5;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xACBD;, p53 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; MDM2 SNP309 &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCC0;&#xC885;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; CRC &#xBC1C;&#xBCD1; &#xCD08;&#xAE30; &#xD658;&#xC790;&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615;&#xC5D0; &#xBC88;&#xC9F8; TP53 &#xBC0F; MDM2 snp309&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xCD08;&#xAE30; &#xC99D;&#xC0C1; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554;.

C&aacute;ncer colorrectal (CCR), que se presenta en pacientes menores de 30 a&ntilde;os es una enfermedad rara, y pocos casos se han divulgado dentro de Li-Fraumeni kindreds. Para determinar la frecuencia con alteraciones en los genes de la v&iacute;a de p53 contribuyen a la susceptibilidad de la enfermedad, hemos evaluado pacientes con aparici&oacute;n temprana CRC para detectar la presencia de variantes de la l&iacute;nea germinal en el gen p53 y MDM2 SNP309.

Variantes gen&eacute;ticas en l&iacute;nea germinal TP53 y MDM2 SNP309 no est&aacute;n asociados con el c&aacute;ncer colorrectal de inicio temprano.

Aberrant promoter methylation and genomic instability occur frequently during colorectal cancer development. CpG island methylator phenotype (CIMP) has been shown to associate with microsatellite instability, and BRAF mutation and is often found in the right-side colon. Nevertheless, the relative importance of CIMP and chromosomal instability (CIN) for tumorigenesis has yet to be thoroughly investigated in sporadic colorectal cancers.

CpG island methylator phenotype associates with low-degree chromosomal abnormalities in colorectal cancer.

M&eacute;thylation aberrante de promoteur et l&#39;instabilit&eacute; g&eacute;nomique se produisent fr&eacute;quemment pendant le d&eacute;veloppement du cancer colorectal. CpG &icirc;le methylator ph&eacute;notype (CIMP) a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; &agrave; associer &agrave; l&#39;instabilit&eacute; des microsatellites et mutation de BRAF et se trouve souvent dans le c&ocirc;lon de droite. N&eacute;anmoins, l&#39;importance relative de la CIMP et instabilit&eacute; chromosomique (CIN) de tumorigen&egrave;se doit encore &ecirc;tre une enqu&ecirc;te approfondie dans les cancers colorectaux sporadiques.

Ph&eacute;notype de CpG &icirc;le methylator associe &agrave; bas degr&eacute; des anomalies chromosomiques dans le cancer colorectal.

Aberrant Promotor-Methylierung und genomische Instabilit&auml;t treten h&auml;ufig w&auml;hrend der Entwicklung von Darmkrebs. CpG-Insel-Methylator-Ph&auml;notyp (CIMP) nachweislich Mikrosatelliten-Instabilit&auml;t und BRAF-Mutation zuzuordnen und wird oft im rechten Dickdarm gefunden. Trotzdem hat die relative Bedeutung der CIMP und chromosomale Instabilit&auml;t (CIN) f&uuml;r Tumorentstehung gegeben in sporadischen colorectal Krebse gr&uuml;ndlich untersucht werden.

CpG-Insel-Methylator-Ph&auml;notyp ordnet niedriger Grad Chromosomenanomalien bei Dickdarmkrebs.

La metilazione aberrante promotore e instabilit&agrave; genomica si verificano frequentemente durante lo sviluppo del cancro del colon-retto. Fenotipo di methylator isola CpG (CIMP) &egrave; stato dimostrato da associare all&#39;instabilit&agrave; dei microsatelliti e mutazione di BRAF e spesso si trova nel colon di destra. Tuttavia, l&#39;importanza relativa del CIMP e instabilit&agrave; cromosomica (CIN) per la tumorigenesi deve ancora essere accuratamente studiati nei tumori del colon-retto sporadici.

Fenotipo di methylator isola CpG associa a basso grado di anomalie cromosomiche nel cancro del colon-retto.

&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5F02;&#x5E38;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7ECF;&#x5E38;&#x53D1;&#x751F;&#x5927;&#x80A0;&#x764C;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;CpG &#x5C9B; methylator &#x578B; (CIMP) &#x5DF2;&#x88AB;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E0E;&#x5FAE;&#x536B;&#x661F;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C; BRAF &#x7A81;&#x53D8;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x548C;&#x53F3;&#x4FA7;&#x7ED3;&#x80A0;&#x4E2D;&#x7ECF;&#x5E38;&#x4F1A;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;CIMP &#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A; (CIN) &#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x5C1A;&#x672A;&#x5728;&#x6563;&#x53D1;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x764C;&#x8FDB;&#x884C;&#x5F7B;&#x5E95;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;

CpG &#x5C9B; methylator &#x8868;&#x578B;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x4F4E;&#x5EA6;&#x5728;&#x7ED3;&#x76F4;&#x80A0;&#x764C;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5F02;&#x5E38;&#x3002;

&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306B;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CpG &#x306E;&#x5CF6;&#x306E; methylator &#x306B;&#x8868;&#x73FE; (CIMP) &#x3092;&#x578B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30B5;&#x30C6;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C8;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068; BRAF &#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x53F3;&#x5074;&#x7D50;&#x8178;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;CIMP &#x3068;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027; &#xFF08;CIN&#xFF09; &#x816B;&#x760D;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x3067;&#x6563;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x3092;&#x5FB9;&#x5E95;&#x7684;&#x306B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CpG &#x306E;&#x5CF6;&#x306E; methylator &#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306F;&#x4F4E;&#x5EA6;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD0C8; &#xC120; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xBC0F; genomic &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC790;&#xC8FC; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. CpG &#xC12C; methylator &#xD615; (CIMP) microsatellite &#xBD88;&#xC548;&#xACFC; BRAF &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC624;&#xB978;&#xCABD; &#xCF5C;&#xB860;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC885;&#xC885; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, CIMP &#xBC0F; tumorigenesis&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; (CIN)&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xC0B0;&#xBC1C;&#xC801; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554;&#xC5D0; &#xCCA0;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC544;&#xC9C1;.

CpG &#xC12C; methylator &#xD615; &#xB0AE;&#xC740; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Metilaci&oacute;n aberrante del promotor y la inestabilidad gen&oacute;mica ocurren con frecuencia durante el desarrollo de c&aacute;ncer colorrectal. Fenotipo de methylator de Isla CpG (CIMP) ha demostrado que se asocia a la inestabilidad de microsat&eacute;lites y mutaci&oacute;n BRAF y a menudo se encuentra en el colon del lado derecho. Sin embargo, la importancia relativa de la CIMP e inestabilidad cromos&oacute;mica (CIN) para la tumorig&eacute;nesis todav&iacute;a tiene que ser investigados a fondo en los c&aacute;nceres colorrectales espor&aacute;dicos.

Fenotipo de methylator isla CpG se asocia con bajo grado de anormalidades cromos&oacute;micas en el c&aacute;ncer colorrectal.

&#x5728;&#x75C5;&#x60C5;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5305;&#x62EC;&#x5B9E;&#x4F53;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x57FA;&#x56E0;&#x62F7;&#x8D1D;&#x6570;&#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x7ED3;&#x76F4;&#x80A0;&#x764C;&#x60A3;&#x8005;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4F18;&#x79C0;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x7279;&#x70B9;&#x5728;&#x7ED3;&#x76F4;&#x80A0;&#x764C;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5F02;&#x5E38;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6267;&#x884C; 299 &#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x4E0D;&#x540C;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3001; &#x817A;&#x7624;&#x3001; &#x817A;&#x764C;&#x9636;&#x6BB5; 1-4 &#x548C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684; 130 &#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5E7F;&#x6CDB; (&gt; 1/2 &#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x81C2;&#xFF09; &#x548C;&#x7126; &#xFF08;&lt; 1/2 &#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x81C2;&#xFF09; &#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x653E;&#x5927;&#x4E86;&#x6307;&#x51FA;&#x5BF9;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 7&#x3001; 8q&#x3001; 13q&#xFF0C;20&#xFF0C;&#x548C; X &#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 4&#xFF0C;8 p&#xFF0C;14q&#xFF0C;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5220;&#x9664; 15q&#xFF0C;17 p&#xFF0C;18&#xFF0C;20 p &#x548C; 22q&#x3002;&#x533A;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x764C;&#x75C7;&#x57FA;&#x56E0;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5982; VEGFA&#x3001; MYC&#x3001; &#x5B5F;&#x4E70;&#x3001; FGF6&#x3001; FGF23&#x3001; &#x6797;&#x6069;&#x3001; MMP9&#x3001; MYBL2&#x3001; AURKA&#x3001; UBE2C &#x548C;&#x6291;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0; PTEN &#x5728;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x91CD;&#x70B9;&#x6D3B;&#x52A8; &#xFF08;&#x6536;&#x76CA;&#x6216;&#x635F;&#x5931;&#xFF09;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x91CD;&#x70B9;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5305;&#x62EC;&#x6F5C;&#x5728;&#x65B0;&#x5019;&#x9009;&#x80BF;&#x7624;&#x6291;&#x5236;&#x5668; (&#x635F;&#x5931;) &#x548C;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0; &#xFF08;&#x6536;&#x76CA;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; CCDC68&#x3001; CSMD1&#x3001; POLR1D&#x3001; PMEPA1&#x3002;&#x4ECE;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x53CD;&#x6620;&#x5176;&#x62F7;&#x8D1D;&#x6570;&#x66F4;&#x6539;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5173;&#x7CFB;&#x5C06;&#x6837;&#x54C1;&#x62F7;&#x8D1D;&#x6570;&#x66F4;&#x6539;&#x7B97;&#x4F5C;&#x4E0D;&#x4F34;&#x6709;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x6570;&#x636E;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5206;&#x6790;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x8868;&#x660E; 8 p&#x3001; 4 p &#x548C; 15q &#x7684;&#x5220;&#x9664;&#x5173;&#x8054;&#x4E0E;&#x751F;&#x5B58;&#x548C;&#x75C5;&#x60C5;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5728; 18q&#x3001; 8 p&#x3001; 4 p&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x5220;&#x9664;&#x4E0E;&#x8BE5;&#x6837;&#x54C1;&#xFF0C;15q &#x6709;&#x7279;&#x522B;&#x5DEE;&#x7684;&#x9884;&#x540E;&#x7684;&#x6743;&#x529B;&#x3002;&#x6CE8;&#x91CA;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x6C27;&#x5316;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x9014;&#x5F84;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x9884;&#x540E;&#x4E0D;&#x826F;&#x7684;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x51CF;&#x5C11;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5F3A;&#x70C8;&#x8D8B;&#x52BF;&#x3002;

&#x534F;&#x4F1A;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x4E0E;&#x75BE;&#x75C5;&#x8FDB;&#x5C55;&#x4E0E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF1A; &#x5927;&#x80A0;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x63A2;&#x7D22;&#x3002;

During disease progression the cells that comprise solid malignancies undergo significant changes in gene copy number and chromosome structure. Colorectal cancer provides an excellent model to study this process. To indentify and characterize chromosomal abnormalities in colorectal cancer, we performed a statistical analysis of 299 expression and 130 SNP arrays profiled at different stages of the disease, including normal tissue, adenoma, stages 1-4 adenocarcinoma, and metastasis. We identified broad (> 1/2 chromosomal arm) and focal (< 1/2 chromosomal arm) events. Broad amplifications were noted on chromosomes 7, 8q, 13q, 20, and X and broad deletions on chromosomes 4, 8p, 14q, 15q, 17p, 18, 20p, and 22q. Focal events (gains or losses) were identified in regions containing known cancer pathway genes, such as VEGFA, MYC, MET, FGF6, FGF23, LYN, MMP9, MYBL2, AURKA, UBE2C, and PTEN. Other focal events encompassed potential new candidate tumor suppressors (losses) and oncogenes (gains), including CCDC68, CSMD1, POLR1D, and PMEPA1. From the expression data, we identified genes whose expression levels reflected their copy number changes and used this relationship to impute copy number changes to samples without accompanying SNP data. This analysis provided the statistical power to show that deletions of 8p, 4p, and 15q are associated with survival and disease progression, and that samples with simultaneous deletions in 18q, 8p, 4p, and 15q have a particularly poor prognosis. Annotation analysis reveals that the oxidative phosphorylation pathway shows a strong tendency for decreased expression in the samples characterized by poor prognosis.

Association of survival and disease progression with chromosomal instability: a genomic exploration of colorectal cancer.

Au cours de la progression de la maladie les cellules qui forment des tumeurs malignes subissent des changements importants dans la structure des g&egrave;nes copie nombre et chromosome. Cancer colorectal fournit un excellent mod&egrave;le pour &eacute;tudier ce processus. Pour identifier et caract&eacute;riser les anomalies chromosomiques dans le cancer colorectal, nous avons effectu&eacute; une analyse statistique d&#39;expression 299 et 130 tableaux SNP profil&eacute;es &agrave; diff&eacute;rents stades de la maladie, y compris les tissus normaux, ad&eacute;nome, ad&eacute;nocarcinome &eacute;tapes 1-4 et la m&eacute;tastase. Nous avons identifi&eacute; large (&gt; 1/2 bras chromosomiques) et focales (&lt; 1/2 bras chromosomiques) &eacute;v&eacute;nements. Amplification large ont &eacute;t&eacute; relev&eacute;es sur les chromosomes 7, 8 q, 13 q, 20 et X et grandes destructions sur les chromosomes 4, 8p, 14q, 15 q, 17 p, 18, p 20 et 22 q. &Eacute;v&eacute;nements focales (gains ou pertes) ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s dans les r&eacute;gions contenant des g&egrave;nes connus du cancer de la voie, comme VEGFA, MYC, MET, FGF6, FGF23, LYN, MMP9, MYBL2, AURKA, UBE2C et PTEN. Autres &eacute;v&eacute;nements focales englobaient les potentiels nouveaux suppresseurs de tumeur du candidat (pertes) et oncog&egrave;nes (SERS), y compris CCDC68, CSMD1, POLR1D et PMEPA1. Partir des donn&eacute;es de l&#39;expression, nous avons identifi&eacute; des g&egrave;nes dont les niveaux d&#39;expression refl&egrave;tent leurs changements de num&eacute;ros de copie et utilis&eacute; cette relation d&#39;imputer les modifications num&eacute;ros de copie aux &eacute;chantillons sans accompagnement donn&eacute;es SNP. Cette analyse a fourni la puissance statistique pour montrer que les destructions de 8P 4P et 15 q sont associ&eacute;es &agrave; la survie et la progression de la maladie et que des &eacute;chantillons avec des suppressions simultan&eacute;es en 18q, 8 p, 4 p, et 15 q ont un pronostic particuli&egrave;rement mauvais. Analyse de l&#39;annotation r&eacute;v&egrave;le que la voie de la phosphorylation oxydative montre une forte tendance &agrave; la diminution de l&#39;expression dans les &eacute;chantillons caract&eacute;ris&eacute;s par mauvais pronostic.

Association de la progression de survie et de la maladie avec une instabilit&eacute; chromosomique : une exploration g&eacute;nomique du cancer colorectal.

W&auml;hrend Fortschreiten der Krankheit zu unterziehen die Zellen, die solide Malignome bilden wesentliche &Auml;nderungen in der Kopie, um Anzahl und Chromosom Genstruktur. Darmkrebs stellt ein hervorragendes Modell, um diesen Prozess zu studieren. Um indentify und Chromosomenanomalien bei Dickdarmkrebs zu charakterisieren, f&uuml;hrten wir eine statistische Analyse der 299 Ausdruck und 130 SNP-Arrays, die in verschiedenen Stadien der Krankheit, einschlie&szlig;lich normalem Gewebe, Adenom, Stufen 1-4 Adenokarzinom und Metastasierung profiliert. Wir breiten identifiziert (&gt; chromosomalen 1/2-Arm) und fokale (&lt; chromosomalen 1/2-Arm) Veranstaltungen. Breite Verst&auml;rkungen wurden auf den Chromosomen 7, 8q, 13q, 20, und X und breiten L&ouml;schungen auf Chromosomen 4, 8 p, 14qter, bemerkt 15q, 17 p, 18, 20 p und 22q, distale. Fokale Ereignisse (Gewinne oder Verluste) wurden in Regionen mit bekannten Weg Gene, wie VEGFA, MYC, MET, FGF6, FGF23, LYN, MMP9, MYBL2, AURKA, UBE2C und PTEN identifiziert. Andere fokalen Veranstaltungen umfasste potenzielle neue Kandidaten Tumor Suppressors (Verluste) und Onkogene (Gewinne), einschlie&szlig;lich CCDC68, CSMD1, POLR1D und PMEPA1. Aus den Daten Ausdruck haben wir festgestellt, Gene, deren Stufen reflektiert ihre Kopie &auml;ndert und diese Beziehung zur Kopie &auml;ndert zu Beispielen zu unterstellen, ohne begleitende SNP-Daten verwendet. Diese Analyse zur Verf&uuml;gung gestellt, der statistischen macht zu zeigen, dass L&ouml;schungen 8p, 4P und 15q, &Uuml;berleben und Fortschreiten der Krankheit und die Proben mit gleichzeitigen Streichungen in 18q, 8p, 4P zugeordnet sind, und 15q haben eine besonders schlechte Prognose. Anmerkung-Analyse zeigt, dass die Oxidative Phosphorylierung-Pathway eine starke Tendenz f&uuml;r verringerten Ausdruck in den Proben zeichnet sich durch schlechte Prognose zeigt.

Verband der &uuml;berleben und Krankheit Progression mit chromosomalen Instabilit&auml;t: eine genomische Erforschung von Darmkrebs.

Durante la progressione della malattia le cellule che compongono i tumori maligni solidi subiscono cambiamenti significativi nella struttura di numero e cromosoma copia genica. Cancro del colon-retto fornisce un modello eccellente per studiare questo processo. Per identificare e caratterizzare anomalie cromosomiche nel cancro del colon-retto, abbiamo eseguito un&#39;analisi statistica di espressione 299 e 130 SNP array profilate in diverse fasi della malattia, tra cui tessuto normale, adenoma, adenocarcinoma fasi 1-4 e le metastasi. Abbiamo identificato ampio (&amp;gt; 1/2 braccio cromosomico) e focale (&lt; 1/2 braccio cromosomico) eventi. Amplificazioni di vasti sono stati notati sui cromosomi 7, 8q, 13q, 20 e X e ampie delezioni su cromosomi 4, 8P, 14q, 15q, 17 p, 18, 20 p e 22q. Eventi focali (guadagni o perdite) sono stati identificati in regioni contenenti geni del pathway cancro noti, come VEGFA, MYC, MET, FGF6 FGF23, LYN, MMP9, MYBL2, AURKA, UBE2C e PTEN. Altri eventi focali comprendevano ai potenziali nuovi candidati soppressori tumorali (perdite) e oncogeni (guadagni), tra cui CCDC68, CSMD1, POLR1D e PMEPA1. Dai dati di espressione, abbiamo identificato geni i cui livelli di espressione riflettono le modifiche apportate alla copia numero e usato questo rapporto per imputare copia cambia numero di campioni senza accompagnamento dati SNP. Questa analisi ha fornito la potenza statistica per mostrare che delezioni di 8 p, p 4 e 15q sono associati con la sopravvivenza e la progressione della malattia e che campioni con delezioni simultanee 18q, 8 p, p 4 e 15q hanno una prognosi particolarmente. Annotazione analisi rivela che il percorso della fosforilazione ossidativa Mostra una forte tendenza per la diminuita espressione nei campioni caratterizzati da prognosi infausta.

Associazione di progressione di malattia e di sopravvivenza con instabilit&agrave; cromosomica: un&#39;esplorazione genomica del cancro del colon-retto.

&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x4E2D;&#x306B;&#x60AA;&#x6027;&#x56FA;&#x5F62;&#x816B;&#x760D;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x6570;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5927;&#x8178;&#x304C;&#x3093;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Indentify&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7570;&#x5E38;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;299 &#x5F0F;&#x3068;&#x6B63;&#x5E38;&#x7D44;&#x7E54;&#x3001;&#x817A;&#x816B;&#x3001;&#x6BB5;&#x968E; 1-4 &#x306E;&#x817A;&#x764C;, &#x8EE2;&#x79FB;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; 130 &#x306E; SNP &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x8B58;&#x5225; (&#x76EE; 1/2 &#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x8155;&#xFF09; &#x3068;&#x7126;&#x70B9;&#x8DDD;&#x96E2; (&lt; 1/2 &#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x8155;) &#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3002;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 7&#x3001;8 q, 20, 13 q-&#x3068; X &#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 4, 8 p &#x3057;&#x3066; 14 q &#x306B;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x6B20;&#x843D;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5897;&#x5E45;&#x304C;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F; 15q&#x3001;17 p&#x3001;18&#x3001;20 p &#x3068; 22q&#x3002;&#x7126;&#x70B9;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8; &#xFF08;&#x5229;&#x76CA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x640D;&#x5931;&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x764C;&#x95A2;&#x9023;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; VEGFA&#x3001;MYC&#x3001;&#x30E1;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EA;&#x30BF;&#x30F3;&#x3001;FGF6&#x3001;FGF23&#x3001;LYN&#x3001;MMP9&#x3001;MYBL2&#x3001;AURKA&#x3001;UBE2C&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; PTEN &#x306A;&#x3069;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5730;&#x57DF;&#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5019;&#x88DC;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x30B5;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC; &#xFF08;&#x640D;&#x5931;&#xFF09;&#x3001;CCDC68&#x3001;CSMD1&#x3001;POLR1D&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; PMEPA1 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; &#xFF08;&#x5229;&#x76CA;&#xFF09; &#x3092;&#x5305;&#x542B;&#x3059;&#x308B;&#x4ED6;&#x306E;&#x7126;&#x70B9;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3002;&#x767A;&#x73FE;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x306E;&#x756A;&#x53F7;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x304A;&#x3088;&#x3073; SNP &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x756A;&#x53F7;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8EE2;&#x5AC1;&#x3059;&#x308B;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x524A;&#x9664; 8 p&#x3001;4 p&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; 15q &#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3068;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3068;&#x540C;&#x6642;&#x524A;&#x9664; 18q&#x3001;8 p&#x3001;4 p &#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;15q &#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x7279;&#x306B;&#x4E88;&#x5F8C;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x7D71;&#x8A08;&#x306E;&#x529B;&#x306F;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30CE;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x89E3;&#x6790;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x6E1B;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x50BE;&#x5411;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x4E88;&#x5F8C;&#x4E0D;&#x826F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5354;&#x4F1A;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3068;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3068;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;: &#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x63A2;&#x67FB;&#x3002;

&#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xACE0;&#xCCB4; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC744; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xC0AC; &#xBC88;&#xD638;&#xC640; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBC1B; &#xB2E4;. &#xB300; &#xC7A5; &#xC554;&#xC774;&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;, &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; 299 &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; 130 SNP &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xC815;&#xC0C1; &#xC870;&#xC9C1;, adenoma, &#xB2E8;&#xACC4; 1-4 &#xC120; &#xC554; &#xBC0F; &#xC804;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1;&#xC758; &#xD1B5;&#xACC4; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xD655;&#xC778; (&amp;gt; 1/2 &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xD314;) &#xBC0F; &#xCD08;&#xC810; (&lt; 1/2 &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xD314;) &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;. &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xD655;&#xB300; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 7, 8q, 13q, 20, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; X &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 4, 8p, 14q&#xC5D0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC0AD;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC5B8;&#xAE09; 15q, 17 p, 18, 20 p &#xBC0F; 22q. (&#xC774;&#xB4DD; &#xB610;&#xB294; &#xC190;&#xC2E4;) &#xCD08;&#xC810; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; VEGFA, MYC, &#xBA54;&#xD2B8;&#xB85C;, FGF6, FGF23, &#xB9B0;, MMP9, MYBL2, AURKA, UBE2C, &#xBC0F; PTEN &#xB4F1; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC554; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xCD08;&#xC810; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC885;&#xC591; &#xC9C4;&#xC555; (&#xC190;&#xC2E4;) &#xBC0F; oncogenes (&#xC774;&#xC775;), CCDC68, CSMD1, POLR1D, &#xBC0F; pmepa1&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0;. &#xC2DD; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xC2DD; &#xB808;&#xBCA8; &#xBCF5;&#xC0AC; &#xBC88;&#xD638; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC744; &#xBC18;&#xC601; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; SNP &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xB3D9;&#xBC18; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC0D8;&#xD50C; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; &#xBC88;&#xD638; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB3CC;&#xB9AC;&#xB2E4; &#xD30C;&#xC545;. &#xC774; &#xBD84;&#xC11D; 8p, 4p, 15q&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB294; &#xC0DD;&#xC874; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xACFC; &#xADF8; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; 18q, 8p, 4p, &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC0AD;&#xC81C; &#xAD00;&#xB828; 15q&#xB294; &#xD2B9;&#xD788; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xC608; &#xD6C4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xD1B5;&#xACC4;&#xC801; &#xC804;&#xC6D0; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC8FC;&#xC11D; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0B0;&#xD654; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD1B5;&#xB85C; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xC608; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC0D8;&#xD50C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xD55C; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC874; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC9C4;&#xD589;&#xC758; &#xD611;&#xD68C;: &#xB300; &#xC7A5; &#xC554; &#xAC8C;&#xB188; &#xD0D0;&#xC0AC;.

Durante la progresi&oacute;n de la enfermedad, las c&eacute;lulas que componen los tumores s&oacute;lidos malignos experimentan cambios significativos en la estructura de cromosomas y el n&uacute;mero de copia gen&eacute;tica. El c&aacute;ncer colorrectal es un modelo excelente para estudiar este proceso. Para identificar y caracterizar las anormalidades cromos&oacute;micas en el c&aacute;ncer colorrectal, se realiz&oacute; un an&aacute;lisis estad&iacute;stico de expresi&oacute;n 299 y 130 matrices SNP perfiladas en diferentes etapas de la enfermedad, incluyendo tejido normal, adenoma, adenocarcinoma de etapas 1-4 y met&aacute;stasis. Identificamos amplio (&gt; 1/2 brazo cromos&oacute;mico) y focal (&lt; brazo cromos&oacute;mico de 1 1/2) eventos. Amplios amplificaciones fueron observados en los cromosomas 7, 8q, 13q, 20 y X y amplios eliminaciones en los cromosomas 4, 8P, 14q, 15q, 17 p, 18, 20 p y 22q. Eventos focales (ganancias o p&eacute;rdidas) identificaron en las regiones que contienen genes de la v&iacute;a de c&aacute;ncer conocidos, como VEGFA, MYC, MET, FGF6, FGF23, LYN, MMP9, MYBL2, AURKA, UBE2C y PTEN. Otros eventos focales abarcan potenciales nuevos supresores tumorales candidato (p&eacute;rdidas) y oncogenes (ganancias), incluyendo CCDC68, CSMD1, POLR1D y PMEPA1. De los datos de expresi&oacute;n, se identificaron genes cuyos niveles de expresi&oacute;n reflejaban sus cambios de n&uacute;meros de copia y utilizan esta relaci&oacute;n para imputar copia n&uacute;mero cambia a las muestras sin el acompa&ntilde;amiento de datos SNP. Este an&aacute;lisis proporcionan el poder estad&iacute;stico suficiente para mostrar que eliminaciones de 15q, 4P y 8P est&aacute;n asociados con la supervivencia y progresi&oacute;n de la enfermedad y las muestras con eliminaciones simult&aacute;neas en 18q, 8P, 4P y 15q tienen un pron&oacute;stico particularmente pobre. Anotaci&oacute;n an&aacute;lisis revela que la v&iacute;a de la fosforilaci&oacute;n oxidativa muestra una fuerte tendencia para expresi&oacute;n disminuida en las muestras que se caracteriza por mal pron&oacute;stico.

Asociaci&oacute;n de supervivencia y enfermedad la progresi&oacute;n con inestabilidad cromos&oacute;mica: una exploraci&oacute;n gen&oacute;mica del c&aacute;ncer colorrectal.

GnRH &#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;&#x6027;&#x817A;&#xFF09;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x524D;&#x5782;&#x4F53; gonadotrope&#xFF0C;&#x662F;&#x6B63;&#x5E38;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x4FC3;&#x6027;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20; LH &#x548C; FSH&#x3001; &#x9752;&#x6625;&#x671F;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x7E41;&#x6B96;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x6027;&#x817A;&#x548C;&#x4FC3;&#x6027;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5DF2;&#x6DF1;&#x5165;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x8BFE;&#x9898;&#x3002;&#x5C0F;&#x9F20; LbetaT2 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x8868;&#x793A;&#x6210;&#x719F;&#x7684; gonadotrope&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x6027;&#x817A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x548C; gonadotrope &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x4FBF;&#x4E8E;&#x8BBF;&#x95EE;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x590D;&#x6742;&#x548C;&#x4E0D;&#x65AD;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x6587;&#x5B66;&#x4E2D;&#x6240;&#x8F7D;&#x7684;&#x8D44;&#x6599;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8DEF;&#x5F84;&#x7684;&#x77E5;&#x8BC6;&#x5E93;&#xFF0C;&#x662F;&#x627F;&#x8F7D;&#x7684; web&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; 106 &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x51FA;&#x7248;&#x7269;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#xFF0C;&#x7B56;&#x5C55;&#x5168;&#x9762;&#x7684;&#x77E5;&#x8BC6;&#x5E93;&#x7684;&#x6027;&#x817A;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x56FE;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; LbetaT2 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x79EF;&#x6781;&#x548C;&#x6D88;&#x6781;&#x63A7;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC; GnRH &#x672C;&#x8EAB;&#x3001; &#x4E0B;&#x4E18;&#x8111;&#x56E0;&#x7D20;&#x3001; &#x6027;&#x817A;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x548C;&#x80BD;&#x3001; &#x4EE5;&#x53CA;&#x5176;&#x4ED6;&#x6FC0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x6027;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x77E5;&#x8BC6;&#x5E93;&#x5305;&#x542B; 187 &#x5B9E;&#x4F53;&#x548C; 206 &#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x4F7F;&#x7528; CellDesigner &#x8F6F;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5B83;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x9644;&#x52A0;&#x8BF4;&#x660E;&#x7684;&#x56FE;&#x5F62;&#x8868;&#x793A;&#x5F62;&#x5F0F;&#x5B58;&#x50A8;&#x5728;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x6807;&#x8BB0;&#x8BED;&#x8A00;&#x4E2D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7EC4;&#x88C5;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x9014;&#x5F84;&#x53D1;&#x5E03;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x524D;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x5957;&#x4EF6;&#x4E3B;&#x529E;&#x7684;&#x77E5;&#x8BC6;&#x5E93;&#x4E2D; web &#x8BBF;&#x95EE;&#x7684;&#x683C;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x516C;&#x5171;&#x8D44;&#x6E90;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5B9E;&#x4F53;&#x88AB;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x516C;&#x5171;&#x7684; wiki&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8BBA;&#x575B;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x3001; &#x66F4;&#x65B0;&#x548C;&#x66F4;&#x6B63;&#x9519;&#x8BEF;&#x3002;&#x6027;&#x817A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7F51;&#x7EDC;&#x662F;&#x5728; http://tsb.mssm.edu/pathwayPublisher/GnRHR_Pathway/GnRHR_Pathway_ index.html &#x516C;&#x5F00;&#x53EF;&#x8BBF;&#x95EE;&#x7684;&#x3002;

&#x7814;&#x7A76;&#x8D44;&#x6E90;&#xFF1A; &#x4FC3;&#x6027;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC; LbetaT2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7F51;&#x7EDC;&#xFF1A; &#x57FA;&#x4E8E;&#x8DEF;&#x5F84;&#x7684; web &#x8BBF;&#x95EE;&#x77E5;&#x8BC6;&#x5E93;&#x3002;

The GnRH receptor (GnRHR), expressed at the cell surface of the anterior pituitary gonadotrope, is critical for normal secretion of gonadotropins LH and FSH, pubertal development, and reproduction. The signaling network downstream of the GnRHR and the molecular bases of the regulation of gonadotropin expression have been the subject of intense research. The murine LbetaT2 cell line represents a mature gonadotrope and therefore is an important model for the study of GnRHR-signaling pathways and modulation of the gonadotrope cell by physiological regulators. In order to facilitate access to the information contained in this complex and evolving literature, we have developed a pathway-based knowledgebase that is web hosted. At present, using 106 relevant primary publications, we curated a comprehensive knowledgebase of the GnRHR signaling in the LbetaT2 cell in the form of a process diagram. Positive and negative controls of gonadotropin gene expression, which included GnRH itself, hypothalamic factors, gonadal steroids and peptides, as well as other hormones, were illustrated. The knowledgebase contains 187 entities and 206 reactions. It was assembled using CellDesigner software, which provides an annotated graphic representation of interactions, stored in Systems Biology Mark-up Language. We then utilized Biological Pathway Publisher, a software suite previously developed in our laboratory, to host the knowledgebase in a web-accessible format as a public resource. In addition, the network entities were linked to a public wiki, providing a forum for discussion, updating, and error correction. The GnRHR-signaling network is openly accessible at http://tsb.mssm.edu/pathwayPublisher/GnRHR_Pathway/GnRHR_Pathway_ index.html.

Research resource: Gonadotropin-releasing hormone receptor-mediated signaling network in LbetaT2 cells: a pathway-based web-accessible knowledgebase.

Le r&#xE9;cepteur de la GnRH (RGnRH), exprim&#xE9; &#xE0; la surface cellulaire de la cellule gonadotrope ant&#xE9;hypophysaire, est essentiel pour la s&#xE9;cr&#xE9;tion normale des gonadotrophines LH et FSH, le d&#xE9;veloppement pubertaire, et la reproduction. Les aval du r&#xE9;seau de signalisation de la RGnRH et les bases mol&#xE9;culaires de la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;expression gonadotrophine ont fait l&#x26;#39;objet d&#x26;#39;intenses recherches. Le murin LbetaT2 lign&#xE9;e cellulaire repr&#xE9;sente une gonadotrope mature et est donc un mod&#xE8;le important pour l&#x26;#39;&#xE9;tude des voies de signalisation GNRHR et la modulation de la cellule gonadotrope par les r&#xE9;gulateurs physiologiques. Afin de faciliter l&#x26;#39;acc&#xE8;s &#xE0; l&#x26;#39;information contenue dans cette litt&#xE9;rature complexe et &#xE9;volutif, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une base de connaissances voie bas&#xE9;e sur qui est web h&#xE9;berg&#xE9;. &#xC0; l&#x26;#39;heure actuelle, en utilisant 106 publications pertinentes primaires, nous commissaire un vaste base de connaissances de l&#x26;#39;RGnRH de signalisation dans la cellule LbetaT2 sous la forme d&#x26;#39;un diagramme de processus. Les contr&#xF4;les positifs et n&#xE9;gatifs de l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes gonadotrophine, qui comprenait la GnRH elle-m&#xEA;me, les facteurs hypothalamiques, st&#xE9;ro&#xEF;des gonadiques et des peptides, ainsi que d&#x26;#39;autres hormones, ont &#xE9;t&#xE9; illustr&#xE9;s. La base de connaissances contient 187 entit&#xE9;s et 206 r&#xE9;actions. Il a &#xE9;t&#xE9; assembl&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;aide CellDesigner logiciel, qui fournit une repr&#xE9;sentation graphique des interactions annot&#xE9;, stock&#xE9;es dans la biologie des syst&#xE8;mes Mark-up Language. Nous avons ensuite utilis&#xE9; Editeur voie biologique, une suite logicielle d&#xE9;velopp&#xE9;e pr&#xE9;c&#xE9;demment dans notre laboratoire, pour accueillir la base de connaissances dans un format accessible sur le Web comme une ressource publique. En outre, les entit&#xE9;s du r&#xE9;seau &#xE9;taient li&#xE9;es &#xE0; un wiki public, en fournissant un forum de discussion, la mise &#xE0; jour, et la correction d&#x26;#39;erreur. Le r&#xE9;seau de signalisation RGnRH est ouvertement accessible &#xE0; http://tsb.mssm.edu/pathwayPublisher/GnRHR_Pathway/GnRHR_Pathway_ index.html.

Ressources pour la recherche: hormone lib&#xE9;rant la gonadotropine m&#xE9;di&#xE9;e par le r&#xE9;cepteur r&#xE9;seau de signalisation dans les cellules LbetaT2: un sentier &#xE0; base de connaissances accessible sur le Web

Der GnRH-Rezeptor (GnRHR), auf der Zelloberfl&auml;che von der vorderen Hypophyse Gonadotrope ausgedr&uuml;ckt ist wichtig f&uuml;r normale Sekretion der Gonadotropine LH und FSH, Pubert&auml;t und Reproduktion. Das Signalling Netzwerk stromabw&auml;rts von der GnRHR und die molekularen Grundlagen der Regelung von Choriongonadotropin Ausdruck wurden Gegenstand intensiver Forschung. Die murine LbetaT2-Zelllinie stellt eine ausgereifte Gonadotrope und ist daher ein wichtiges Modell f&uuml;r die Studie GnRHR-signaling Pathways und Modulation der Gonadotrope Zelle durch physiologische Regulatoren. Um Zugriff auf die Informationen in diesem komplexen und sich entwickelnden Literatur zu erleichtern, haben wir eine Pfad-basierte Wissensdatenbank entwickelt, die Web gehostet ist. Derzeit kuratiert mit 106 entsprechende prim&auml;re Publikationen, wir eine umfassende Wissensdatenbank aus der GnRHR-Signalisierung in der LbetaT2-Zelle in Form von einem Prozessdiagramm. Positive und negative Kontrollen der Genexpression Choriongonadotropin, das GnRH selbst, hypothalamische Faktoren, Gonadale Steroide und Peptide, sowie andere Hormone enthalten, sind illustriert. Die Knowledgebase enth&auml;lt 187 Entit&auml;ten und 206 Reaktionen. Es wurde montiert, mit CellDesigner-Software, bietet eine kommentierte grafische Darstellung von Interaktionen, gespeichert in Systems Biology Markup Language. Dann benutzt wir biologische Pathway-Verlag, eine Software-Suite, die zuvor in unserem Labor entwickelt um die Knowledgebase im Web zug&auml;nglich Format als &ouml;ffentliche Ressource zu hosten. Dar&uuml;ber hinaus waren die Netzwerkidentit&auml;ten &ouml;ffentliche Wikis, die sich als Forum f&uuml;r Diskussion, aktualisieren und Fehlerkorrektur verbunden. Das GnRHR-Signalisierung-Netzwerk ist offen zug&auml;nglich auf http://tsb.mssm.edu/pathwayPublisher/GnRHR_Pathway/GnRHR_Pathway_ index.html.

Ressource-Forschung: Gonadotropin - Releasing-Hormon-Rezeptor-vermittelten Signalling Netzwerk in LbetaT2 Zellen: eine Pfad-basierte Web zug&auml;nglich Knowledgebase.

Il recettore di GnRH (GnRHR), ha espresso alla superficie delle cellule delle gonadotrope dell&#39;ipofisi anteriore, &egrave; fondamentale per la normale secrezione di gonadotropine LH e FSH, sviluppo puberale e la riproduzione. La rete di segnalazione a valle del GnRHR e le basi molecolari della regolazione della espressione di gonadotropina sono state l&#39;argomento di ricerca intensa. La linea cellulare LbetaT2 murina rappresenta un gonadotrope maturo ed &egrave; pertanto un importante modello per lo studio dei percorsi GnRHR-segnalazione e modulazione della cella gonadotrope dai regolatori fisiologici. Per facilitare l&#39;accesso alle informazioni contenute in questa letteratura complessa e in continua evoluzione, abbiamo sviluppato un knowledgebase di percorso che &egrave; web ospitato. Al momento, utilizzando 106 pubblicazioni pertinenti primari, curata una Knowledge base completa del segnale GnRHR nella cellula sotto forma di un diagramma di processo LbetaT2. Controlli positivi e negativi dell&#39;espressione genica di gonadotropina, che includeva GnRH stesso, fattori ipotalamici, steroidi gonadici e peptidi, cos&igrave; come altri ormoni, sono stati illustrati. La knowledgebase contiene 187 entit&agrave; e 206 reazioni. Esso &egrave; stato assemblato utilizzando il software CellDesigner, che fornisce una rappresentazione grafica con annotazioni di interazioni, archiviati in Systems Biology Mark-up Language. Abbiamo poi utilizzato biologica Pathway editore, una suite di software precedentemente sviluppata nel nostro laboratorio, per ospitare la knowledgebase in un formato accessibile dal web come una risorsa pubblica. Inoltre, le entit&agrave; di rete sono state collegate a una wiki pubblica, fornendo un forum di discussione, aggiornamento e correzione di errore. La rete GnRHR-segnalazione &egrave; apertamente accessibile a http://tsb.mssm.edu/pathwayPublisher/GnRHR_Pathway/GnRHR_Pathway_ index. html.

Ricerca risorse: GnRH rete segnalazione mediata da recettori nelle cellule LbetaT2: un knowledgebase accessibile dal web basate sul percorso.

&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x524D;&#x8449;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;GnRH&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;GnRHR&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;LH&#x3068;FSH&#x3001;&#x601D;&#x6625;&#x671F;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x518D;&#x751F;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x5206;&#x6CCC;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; GnRHR&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x3068;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;&#x306F;&#x3001;&#x96C6;&#x4E2D;&#x7684;&#x306A;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;LbetaT2&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306F;&#x6210;&#x719F;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x7269;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3001;&#x5F93;&#x3063;&#x3066;GnRHR-&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x5F53;&#x5C40;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3067;&#x9032;&#x5316;&#x3057;&#x3066;&#x6587;&#x5B66;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x3078;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Web&#x3067;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30CA;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x73FE;&#x6642;&#x70B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;106&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x51FA;&#x7248;&#x7269;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#xB7;&#x30C0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306E;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3067;LbetaT2&#x30BB;&#x30EB;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;GnRHR&#x306E;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x30CA;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x30AD;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3002; GnRH&#x306E;&#x81EA;&#x4F53;&#x3001;&#x8996;&#x5E8A;&#x4E0B;&#x90E8;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x3001;&#x6027;&#x817A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x3084;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x30B4;&#x30CA;&#x30C9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D4;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x306E;&#x6B63;&#x3068;&#x8CA0;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30CA;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;187&#x30A8;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;206&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x8A00;&#x8A9E;&#x3067;&#x683C;&#x7D0D;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6CE8;&#x91C8;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;CellDesigner&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30A6;&#x30A7;&#x30D6;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3067;&#x30CA;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x51FA;&#x7248;&#x793E;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x5BA4;&#x3067;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x30B9;&#x30A4;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x8B70;&#x8AD6;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E9;&#x30E0;&#x3001;&#x66F4;&#x65B0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A8;&#x30E9;&#x30FC;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x516C;&#x5171;&#x306E;wiki&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002; GnRHR&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306F;http://tsb.mssm.edu/pathwayPublisher/GnRHR_Pathway/GnRHR_Pathway_ index.html&#x306B;&#x516C;&#x7136;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7814;&#x7A76;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#xFF1A;LbetaT2&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B4;&#x30CA;&#x30C9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D4;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#xFF1A;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;Web&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30CA;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;

GnRH &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GnRHR), &#xC55E;&#xCABD; &#xB1CC; gonadotrope&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; gonadotropins LH &#xBC0F; FSH, pubertal &#xAC1C;&#xBC1C;&#xACFC; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xC815;&#xC0C1; &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD558;&#xB958;&#xC5D0; GnRHR &#xBC0F; &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC120; &#xC790;&#xADF9; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC2DD; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xC9C0;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB294; &#xAC15;&#xB82C;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC81C; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. Murine LbetaT2 &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xC131;&#xC219; gonadotrope &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xBA70; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; GnRHR &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; gonadotrope &#xC140;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0; &#xBCC0;&#xD654; &#xD558; &#xBB38;&#xD559;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC815;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC6F9; &#xD638;&#xC2A4;&#xD305; &#xD1B5;&#xB85C;-&#xAE30;&#xBC18; &#xC9C0;&#xC2DD; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;, &#xC6B0;&#xB9AC; GnRHR &#xC2E0;&#xD638; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; LbetaT2 &#xC140;&#xC758; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xC220; &#xC790;&#xB8CC; &#xD050;&#xB808;&#xC774;&#xD130; 106 &#xAD00;&#xB828; &#xC8FC;&#xC694; &#xCD9C;&#xD310;&#xBB3C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xD3EC;&#xD568; &#xC790;&#xCCB4; GnRH, hypothalamic &#xC694;&#xC778;, gonadal &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC0F; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;, &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC;, &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC120; &#xC790;&#xADF9; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. Knowledgebase 187 &#xC5D4;&#xD130;&#xD2F0;&#xC640; 206 &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;, &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xB9C8;&#xD06C;&#xC5C5; &#xC5B8;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xC800;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC11D;&#xC774; &#xCD94;&#xAC00; &#xB41C; &#xADF8;&#xB798;&#xD53D; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; CellDesigner &#xC18C;&#xD504;&#xD2B8;&#xC6E8;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xD1B5;&#xB85C; &#xAC8C;&#xC2DC;&#xC790;, &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF8; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; &#xC18C;&#xD504;&#xD2B8;&#xC6E8;&#xC5B4; &#xC2A4;&#xC704;&#xD2B8; &#xACF5;&#xACF5; &#xC790;&#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C; &#xC6F9;&#xC744; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD615;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xC220; &#xC790;&#xB8CC; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC5D4;&#xD130;&#xD2F0; &#xD1A0;&#xB860;, &#xC5C5;&#xB370;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xC624;&#xB958; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3EC;&#xB7FC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xACF5;&#xC6A9; &#xC704; &#xD0A4;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. GnRHR &#xC2E0;&#xD638; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB294; http://tsb.mssm.edu/pathwayPublisher/GnRHR_Pathway/GnRHR_Pathway_ index.html&#xC5D0; &#xACF5;&#xAC1C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC790;&#xC6D0; &#xC5F0;&#xAD6C;: &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC120; &#xC790;&#xADF9; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC;-&#xBC29;&#xCD9C; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;-&#xC911;&#xC7AC; &#xC2E0;&#xD638; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; LbetaT2 &#xC140;: &#xD1B5;&#xB85C;-&#xAE30;&#xBC18; &#xC6F9; &#xC811;&#xADFC; &#xAE30;&#xC220; &#xC790;&#xB8CC;.

El receptor de GnRH (GnRHR), expresada en la superficie celular de la gonadotropas pituitaria anterior, es fundamental para la secreci&#xF3;n normal de gonadotropinas LH y FSH, el desarrollo puberal, y la reproducci&#xF3;n. Las aguas abajo de la red de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de la GnRHR y las bases moleculares de la regulaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n de gonadotropina han sido objeto de intensa investigaci&#xF3;n. La l&#xED;nea celular murina LbetaT2 representa un gonadotropas madura y por lo tanto es un modelo importante para el estudio de GnRHR las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n y la modulaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas gonadotropas de los reguladores fisiol&#xF3;gicos. Con el fin de facilitar el acceso a la informaci&#xF3;n contenida en esta literatura compleja y cambiante, hemos desarrollado una base de conocimiento de la v&#xED;a basada en Web que est&#xE1; alojado. En la actualidad, utilizando 106 publicaciones primarias relevantes, se comisariada una completa base de conocimientos de la GnRHR se&#xF1;alizaci&#xF3;n en la c&#xE9;lula LbetaT2 en la forma de un diagrama de proceso. Los controles positivos y negativos de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica de gonadotropina, que inclu&#xED;a GnRH s&#xED;, factores hipotal&#xE1;micos, esteroides gonadales y p&#xE9;ptidos, as&#xED; como otras hormonas, se ilustra. La base de conocimientos contiene 187 entidades y 206 reacciones. Se reuni&#xF3; con CellDesigner software, que proporciona una representaci&#xF3;n gr&#xE1;fica de las interacciones anotada, almacenada en Biolog&#xED;a de Sistemas Mark-up Language. A continuaci&#xF3;n, utiliza Publisher v&#xED;a biol&#xF3;gica, una suite de software previamente desarrollado en nuestro laboratorio, para albergar la base de conocimientos en un formato accesible desde la web como un recurso p&#xFA;blico. Adem&#xE1;s, las entidades de la red estaban vinculados a un wiki p&#xFA;blico, proporcionando un foro para la discusi&#xF3;n, actualizaci&#xF3;n y correcci&#xF3;n de errores. La red de se&#xF1;alizaci&#xF3;n GnRHR es de f&#xE1;cil acceso a las http://tsb.mssm.edu/pathwayPublisher/GnRHR_Pathway/GnRHR_Pathway_ index.html.

Investigaci&#xF3;n de Recursos: hormona liberadora de gonadotropina mediada por receptor de la red de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas LbetaT2: una v&#xED;a basada en la Web accesible a Base de Conocimientos

&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x67D3;&#x5F88;&#x96BE;&#x5B9E;&#x73B0;&#x6700;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x548C;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x6210;&#x719F;&#x3002;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Dc) &#x4EE3;&#x8868;&#x4E4B;&#x95F4;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x3001; &#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x73AF;&#x8282;&#x3002;&#x5212;&#x5B9A;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E3B;&#x8981;&#x96C6;&#x6563;&#x63A7;&#x5236;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x53CD;&#x5411;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x708E;&#x75C7;&#x901A;&#x8DEF;&#x9887;&#x5177;&#x6311;&#x6218;&#x6027;&#x7684;&#x4EFB;&#x52A1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F18;&#x5316;&#x548C;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x6709;&#x6548;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x8BA9;&#x6211;&#x4EEC;&#x77ED;&#x6682;&#x5FEB;&#x9012; DNA &#x7684;&#x5929;&#x771F;&#x4E3B;&#x533A;&#x8BAE;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF; nucleofection &#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E90;&#x6027; DCs &#x4E0E;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x53CA;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6548;&#x7387;&#x7531;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x8D28;&#x7C92;&#x662F; nucleoporated&#x3002;&#x4EE5; nucleoporation &#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x5BF9;&#x76F4;&#x6D41;&#x6210;&#x719F;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x6807;&#x8BB0;&#x7269; CD86 &#x548C; MHCII GFP &#x9633;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x8FBE;&#x5230; 70%&#xFF0C;&#x8D85;&#x8FC7; 50%&#xFF0C;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6548;&#x7387;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x6700;&#x4F73;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x6761;&#x4EF6;&#x548C; CD86 &#x548C; MHCII &#x8868;&#x8FBE;&#x4E0D;&#x53D8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA (siRNA) &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x94BB;&#x673A;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E00;&#x3001; &#x5173;&#x952E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x8BC6;&#x522B;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &#xFF08;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#xFF09; &#x53CD;&#x5E94;&#x611F;&#x67D3;&#x65B0;&#x57CE;&#x75AB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x96C6;&#x6563;&#x63A7;&#x5236;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x3002;&#x94BB;&#x673A;-&#x6211;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x65E0;&#x6CD5;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7684;&#x897F;&#x65B9; siRNA &#x6CBB;&#x7597;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x3002;&#x94BB;&#x673A;-&#x6211;&#x51FB;&#x5012;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; IFN&beta; mRNA &#x4E0E;&#x8D1F;&#x63A7;&#x5236; siRNA &#x76F8;&#x6BD4;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 75%&#x3002;&#x672C;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x5E94;&#x63A2;&#x8BA8;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B; DCs &#x4E2D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x9A8C;&#x8BC1;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x8F6C;&#x8D28;&#x7C92;&#x548C; siRNA &#x67D3;&#x4EBA;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6765;&#x6E90;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Transfection of primary immune cells is difficult to achieve at high efficiency and without cell activation and maturation. Dendritic cells (DCs) represent a key link between the innate and adaptive immune systems. Delineating the signaling pathways involved in the activation of human primary DCs and reverse engineering cellular inflammatory pathways have been challenging tasks. We optimized and validated an effective high-throughput transfection protocol, allowing us to transiently express DNA in naÃ¯ve primary DCs, as well as investigate the effect of gene silencing by RNA interference. Using a high-throughput nucleofection system, monocyte-derived DCs were nucleoporated with a plasmid expressing green fluorescent protein (GFP), and transfection efficiency was determined by flow cytometry, based on GFP expression. To evaluate the effect of nucleoporation on DC maturation, the expression of cell surface markers CD86 and MHCII in GFP-positive cells was analyzed by flow cytometry. We established optimal assay conditions with a cell viability reaching 70%, a transfection efficiency of over 50%, and unchanged CD86 and MHCII expression. We examined the impact of small interfering RNA (siRNA)-mediated knockdown of RIG-I, a key viral recognition receptor, on the induction of the interferon (IFN) response in DCs infected with Newcastle disease virus. RIG-I protein was undetectable by Western blot in siRNA-treated cells. RIG-I knockdown caused a 75% reduction in the induction of IFNÎ² mRNA compared with the negative control siRNA. This protocol should be a valuable tool for probing the immune response pathways activated in human DCs.

Validation of efficient high-throughput plasmid and siRNA transfection of human monocyte-derived dendritic cells without cell maturation.

La transfection de cellules immunitaires primaires est difficile &#xE0; r&#xE9;aliser avec une grande efficacit&#xE9; et sans activation cellulaire et la maturation. Les cellules dendritiques (DC) repr&#xE9;sentent un lien essentiel entre les syst&#xE8;mes immunitaire inn&#xE9;e et adaptative. D&#xE9;limiter les voies de signalisation impliqu&#xE9;es dans l&#x26;#39;activation de l&#x26;#39;homme PED primaires et reverse engineering cellulaires voies inflammatoires ont &#xE9;t&#xE9; des t&#xE2;ches difficiles. Nous avons optimis&#xE9; et valid&#xE9; un protocole de transfection efficaces &#xE0; haut d&#xE9;bit, ce qui nous permet d&#x26;#39;exprimer de fa&#xE7;on transitoire l&#x26;#39;ADN dans les PED na&#xEF;fs primaires, ainsi que d&#x26;#39;&#xE9;tudier l&#x26;#39;effet de l&#x26;#39;inactivation des g&#xE8;nes par ARN interf&#xE9;rence. Gr&#xE2;ce &#xE0; un syst&#xE8;me nucl&#xE9;ofection haut d&#xE9;bit, d&#xE9;riv&#xE9;es de monocytes PED ont &#xE9;t&#xE9; nucleoporated avec un plasmide exprimant la prot&#xE9;ine fluorescente verte efficacit&#xE9; (GFP), et la transfection a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;e par cytom&#xE9;trie de flux, bas&#xE9; sur l&#x26;#39;expression de GFP. Pour &#xE9;valuer l&#x26;#39;effet de la maturation des DC sur nucleoporation, l&#x26;#39;expression de marqueurs de surface cellulaire CD86 et CMH II dans la GFP-positives cellules a &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;e par cytom&#xE9;trie de flux. Nous avons &#xE9;tabli les conditions optimales de dosage avec une viabilit&#xE9; cellulaire atteignant 70%, une efficacit&#xE9; de transfection de plus de 50%, et inchang&#xE9;e expression CD86 et CMH II. Nous avons examin&#xE9; l&#x26;#39;impact de petits ARN interf&#xE9;rents (siARN) m&#xE9;di&#xE9;e par inactivation de RIG-I, un r&#xE9;cepteur de reconnaissance cl&#xE9; virale, sur l&#x26;#39;induction de l&#x26;#39;interf&#xE9;ron (IFN) de r&#xE9;ponse dans les PED infect&#xE9;es par le virus de la maladie de Newcastle. RIG-I prot&#xE9;ine a &#xE9;t&#xE9; ind&#xE9;tectable par Western blot dans les cellules trait&#xE9;es siARN. RIG-I knockdown a provoqu&#xE9; une r&#xE9;duction de 75% dans l&#x26;#39;induction de l&#x26;#39;ARNm IFN&#x3B2; par rapport &#xE0; la siRNA contr&#xF4;le n&#xE9;gatif. Ce protocole devrait &#xEA;tre un outil pr&#xE9;cieux pour sonder les voies de la r&#xE9;ponse immunitaire activ&#xE9;es dans les PED de l&#x26;#39;homme.

Validation des efficace &#xE0; haut d&#xE9;bit transfection de plasmide et SiRNA des cellules dendritiques d&#xE9;riv&#xE9;es de monocytes Sans la maturation des cellules

Transfektion von prim&auml;ren Immunzellen ist schwierig, mit hoher Effizienz und ohne ZELLAKTIVIERUNG und Reifung zu erzielen. Dendritische Zellen (DCs) stellen eine wichtige Verbindung zwischen der angeborenen und erworbenen immunen Systemen dar. Abgrenzung der Signalwege die Aktivierung des menschlichen prim&auml;re DCs beteiligt und reverse engineering zellul&auml;re entz&uuml;ndliche Wege haben anspruchsvolle Aufgaben. Wir optimiert und validiert eine effektive Hochdurchsatz-Transfection-Protokoll, so dass wir vor&uuml;bergehend schnelles DNA in naiven prim&auml;re DCs sowie untersuchen die Auswirkungen der Gen-silencing von RNA-Interferenz. Mit einem hohen Durchsatz-Nucleofection-System, abgeleitete Monozyt DCs wurden Nucleoporated mit einem Plasmid Ausdr&uuml;cken gr&uuml;n fluoreszierende Protein (GFP) und Transfektion Effizienz von Durchflusszytometrie, basierend auf GFP-Expression festgelegt wurde. Um die Wirkung der Nucleoporation auf DC Reifung zu bewerten, wurde der Ausdruck der Zelle Oberfl&auml;che Marker CD86 und MHCII in den GFP-positiven Zellen durch Durchflusszytometrie analysiert. Wir optimale Assay-Bedingungen mit einer Zelle Entwicklungsf&auml;higkeit erreichen eine Transfektionseffizienz von &uuml;ber 50 %, 70 % und CD86 und MHCII Ausdruck unver&auml;ndert. Wir untersuchten die Auswirkungen der small interfering RNA (SiRNA) - vermittelten Niederschlag von RIG - ich, eine virale Tastenerkennung Rezeptor, auf die Induktion von Interferon (IFN) Antwort in DCs mit Newcastle Disease Virus infiziert. RIG-ich Protein wurde durch Western blot in SiRNA behandelten Zellen. RIG-ich Niederschlag verursachte eine Erm&auml;&szlig;igung von 75 % in die Induktion von IFN&beta; mRNA im Vergleich mit der Negativkontrolle SiRNA. Dieses Protokoll sollte ein wertvolles Werkzeug f&uuml;r die &Uuml;berpr&uuml;fung der Immunantwort Wege in menschlichen DCs aktiviert sein.

Validierung der effiziente Hochdurchsatz-Plasmid und SiRNA Transfektion von menschlichen Monozyte abgeleiteten dendritischen Zellen ohne Zelle Reifung.

Transfezione delle cellule del sistema immunitario primarie &egrave; difficile da realizzare ad alta efficienza e senza maturazione e attivazione delle cellule. Le cellule dendritiche (DCs) rappresentano un collegamento fondamentale tra il sistema immunitario innato e adattivo. Delineare le vie di segnalazione coinvolte nell&#39;attivazione dei controller di dominio primario umano e reverse engineering cellulare infiammatorie percorsi hanno stato impegnativo compiti. Abbiamo ottimizzato e convalidato un protocollo di transfezione di alto-rendimento effettivo, ci permette di DNA transitoriamente espresso in na&iuml;ve controller primario di dominio, come pure indagare l&#39;effetto di silenziamento genico di interferenza del RNA. Utilizzando un sistema di alto-rendimento nucleofection, monocyte-derivati DCs sono stati nucleoporated con un plasmide esprimendo la green fluorescent protein (GFP) e transfezione efficienza &egrave; stata determinata mediante citometria a flusso, basato sull&#39;espressione di GFP. Per valutare l&#39;effetto di nucleoporation sulla maturazione della DC, l&#39;espressione di marcatori di superficie cellulare CD86 e MHCII in cellule GFP-positive &egrave; stato analizzato tramite flusso cytometry. Abbiamo stabilito le condizioni di dosaggio ottimale con una vitalit&agrave; cellulare raggiungendo il 70%, un&#39;efficienza di trasfezione di oltre il 50% e immutata espressione CD86 e MHCII. Abbiamo esaminato l&#39;impatto di piccolo RNA interferente (siRNA) - mediata atterramento di RIG - I, un recettore chiave riconoscimento virale, sull&#39;induzione della risposta di interferone (IFN) in DCs infettati con virus della malattia di Newcastle. RIG-I della proteina era inosservabile da Western blot in cellule trattate con siRNA. RIG-atterramento mi ha causato una riduzione del 75% nell&#39;induzione di mRNA IFN&beta; confrontato con il controllo negativo siRNA. Questo protocollo dovrebbe essere un prezioso strumento per sondare il risposta immunitaria percorsi attivati nel controller di dominio umano.

Convalida di efficiente transfezione high-throughput del plasmide e siRNA di umane monocyte-derived cellule dendritiche senza maturazione delle cellule.

&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x3067;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6210;&#x719F;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;DC&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x3068;&#x9069;&#x5FDC;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x9593;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x8F2A;&#x90ED;&#x3092;&#x63CF;&#x304F;&#x3068;&#x3001;&#x30EA;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CB;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30B9;&#x30AF;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x4E3B;&#x8981;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;DNA&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5358;&#x7403;&#x7531;&#x6765;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x3067;nucleoporated&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3001;GFP&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; DC&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x306B;nucleoporation&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;GFP&#x967D;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;CD86&#x304A;&#x3088;&#x3073;MHCII&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;70&#xFF05;&#x3001;50&#xFF05;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x52B9;&#x7387;&#x3068;&#x3001;&#x5909;&#x308F;&#x3089;&#x306A;&#x3044;CD86&#x304A;&#x3088;&#x3073;MHCII&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30AB;&#x30C3;&#x30B9;&#x30EB;&#x75C5;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#xFF08;IFN&#xFF09;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;siRNA&#xFF09;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;RIG-I&#x3001;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8A8D;&#x8B58;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; RIG-I&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;siRNA&#x51E6;&#x7406;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A6;&#x30A8;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; RIG-I&#x3092;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;siRNA&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;IFN&#x3B2;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3067;75&#xFF05;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;DC&#x3067;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x63A2;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x304C;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x30D2;&#x30C8;&#x5358;&#x7403;&#x7531;&#x6765;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068;siRNA&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x691C;&#x8A3C;

&#xAE30;&#xBCF8; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; transfection &#xACE0;&#xD6A8;&#xC728; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC131;&#xC219; &#xC5C6;&#xC774; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB835;&#xB2E4;. &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DCs) &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBC0F; &#xC801;&#xC751;&#xD615; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC04;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB9C1;&#xD06C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; Dc&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xBB18;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xB9AC;&#xBC84;&#xC2A4; &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5FC;&#xC99D; &#xACBD;&#xB85C; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xB3C4;&#xC804; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xBC0F; &#xAE30;&#xBCF8; Dc &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; transiently &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; DNA&#xB97C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; transfection &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; RNA &#xAC04;&#xC12D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE68;&#xBB35;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC;. &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; nucleofection &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, monocyte &#xD30C;&#xC0DD; Dc nucleoporated &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP)&#xACFC; transfection &#xD6A8;&#xC728; cytometry, GFP &#xC2DD;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. DC &#xC131;&#xC219;&#xC5D0; nucleoporation&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB9C8;&#xCEE4; CD86 &#xBC0F; MHCII GFP-&#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD; cytometry &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; 70%, 50% &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; transfection &#xD6A8;&#xC728;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xC124;&#xB9BD;&#xACFC; cd86&#xACFC; MHCII &#xC2DD;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA (siRNA)-&#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC7A5;&#xBE44;-&#xC601;&#xD5A5; &#xAC80;&#xC0AC; &#xB098;, &#xB274;&#xCE90;&#xC2AC; &#xBCD1; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; Dc&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; (IFN) &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD0A4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC778;&#xC2DD; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;. &#xC7A5;&#xBE44;-&#xB098; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xC11C; &#xBD80;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0; siRNA &#xCDE8;&#xAE09; &#xC140;&#xC5D0; &#xC624; &#xC810;. &#xC7A5;&#xBE44;-&#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xB09C; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC5B4; Sirna&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; IFN&beta; Mrna&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; 75% &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; &#xC778;&#xAC04; Dc&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xACBD;&#xB85C; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xC140; &#xC131;&#xC219; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; monocyte &#xC720;&#xB798; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC640; siRNA transfection&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La transfecci&#xF3;n de c&#xE9;lulas primarias inmunes es dif&#xED;cil de lograr en una alta eficiencia y sin activaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas y la maduraci&#xF3;n. Las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas (DC) representan un v&#xED;nculo clave entre los sistemas inmune innata y adaptativa. Delimitaci&#xF3;n de las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n implicadas en la activaci&#xF3;n de los pa&#xED;ses en desarrollo humanos b&#xE1;sicos y de ingenier&#xED;a inversa inflamatorios v&#xED;as celulares han sido dif&#xED;ciles tareas. Hemos optimizado y validado un sistema eficaz de alto rendimiento de protocolo de transfecci&#xF3;n, lo que nos permite expresar de forma transitoria de ADN en los pa&#xED;ses en desarrollo no tratados previamente primaria, as&#xED; como investigar el efecto de silenciamiento g&#xE9;nico por ARN de interferencia. El uso de un sistema de nucleofection de alto rendimiento, derivados de los monocitos pa&#xED;ses en desarrollo fueron nucleoporated con un pl&#xE1;smido que expresa la eficiencia de la prote&#xED;na verde fluorescente (GFP), y la transfecci&#xF3;n se determin&#xF3; por citometr&#xED;a de flujo, sobre la base de la expresi&#xF3;n de GFP. Para evaluar el efecto de la maduraci&#xF3;n nucleoporation DC, la expresi&#xF3;n de marcadores de superficie celular CD86 y MHCII en las buenas pr&#xE1;cticas agrarias de c&#xE9;lulas positivas se analizaron por citometr&#xED;a de flujo. Hemos establecido las condiciones &#xF3;ptimas de ensayo con una viabilidad celular llegando al 70%, una eficiencia de transfecci&#xF3;n de m&#xE1;s del 50%, y sin cambiar de expresi&#xF3;n CD86 y MHCII. Se examin&#xF3; el impacto de peque&#xF1;os ARN de interferencia (siRNA) mediada por ca&#xED;da de RIG-I, un receptor clave de reconocimiento viral, en la inducci&#xF3;n del interfer&#xF3;n (IFN) de respuesta en los pa&#xED;ses en desarrollo infectados por el virus de la enfermedad de Newcastle. RIG-I prote&#xED;nas era indetectable por Western blot en pacientes tratados con siRNA-c&#xE9;lulas. RIG-I precipitaci&#xF3;n caus&#xF3; una reducci&#xF3;n del 75% en la inducci&#xF3;n de ARNm de IFN en comparaci&#xF3;n con el siRNA control negativo. Este protocolo debe ser una valiosa herramienta para sondear las v&#xED;as de la respuesta inmune activadas en pa&#xED;ses en desarrollo humano.

Validaci&#xF3;n de alto rendimiento eficiente de la transfecci&#xF3;n de pl&#xE1;smidos y SiRNA de las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas humanas derivadas de monocitos-Sin la maduraci&#xF3;n de c&#xE9;lulas

Le cellule dendritiche sono presentanti l&#39;antigene delle cellule che svolgono un ruolo essenziale nel collegamento il sistema immunitario innato e adattivo. Gran parte della ricerca si &egrave; concentrata sulle vie di segnalazione attivate su infezione delle cellule dendritiche da vari agenti patogeni. L&#39;alto livello di attivit&agrave; nel campo rende auspicabile avere una risorsa basata sul percorso per accedere alle informazioni in letteratura. Diagrammi percorso attuale mancano di completezza o un&#39;interfaccia editoriale open-access. Quindi, c&#39;&egrave; bisogno di un affidabile, sapientemente curata knowledgebase che integra queste informazioni in una mappa di reti di segnalazione.

Segnalazione rete di cellule dendritiche in risposta agli agenti patogeni: un comunit&agrave;-input supportato knowledgebase.

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Dendritic cells are antigen-presenting cells that play an essential role in linking the innate and adaptive immune systems. Much research has focused on the signaling pathways triggered upon infection of dendritic cells by various pathogens. The high level of activity in the field makes it desirable to have a pathway-based resource to access the information in the literature. Current pathway diagrams lack either comprehensiveness, or an open-access editorial interface. Hence, there is a need for a dependable, expertly curated knowledgebase that integrates this information into a map of signaling networks.

Signaling network of dendritic cells in response to pathogens: a community-input supported knowledgebase.

Les cellules dendritiques sont des cellules pr&#xE9;sentatrices d&#x26;#39;antig&#xE8;ne qui jouent un r&#xF4;le essentiel en reliant les syst&#xE8;mes immunitaire inn&#xE9;e et adaptative. Beaucoup de recherches ont port&#xE9; sur les voies de signalisation d&#xE9;clench&#xE9;es lors de l&#x26;#39;infection des cellules dendritiques par divers agents pathog&#xE8;nes. Le niveau &#xE9;lev&#xE9; d&#x26;#39;activit&#xE9; dans le domaine, il est souhaitable de disposer d&#x26;#39;une ressource bas&#xE9;e sur la voie pour acc&#xE9;der &#xE0; l&#x26;#39;information dans la litt&#xE9;rature. Diagrammes de cha&#xEE;nes actuelles manquent soit l&#x26;#39;int&#xE9;gralit&#xE9; ou une interface de r&#xE9;daction en libre acc&#xE8;s. Par cons&#xE9;quent, il ya une n&#xE9;cessit&#xE9; d&#x26;#39;une fiable, experte organis&#xE9;e de connaissances qui int&#xE8;gre ces informations dans une carte des r&#xE9;seaux de signalisation.

R&#xE9;seau de signalisation des cellules dendritiques en r&#xE9;ponse &#xE0; des agents pathog&#xE8;nes: une communaut&#xE9; d&#x26;#39;entr&#xE9;e pris en charge la base de connaissances

Dendritische Zellen sind Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen, die eine wichtige Rolle bei der Verkn&uuml;pfung des angeborenen und erworbenen Immunsystems. Viel Forschung konzentriert sich auf die Signalwege, die nach Infektion von dendritischen Zellen durch verschiedene Erreger ausgel&ouml;st. Das hohe Niveau der T&auml;tigkeit im Bereich macht es w&uuml;nschenswert, eine Ressource Weg-basierten Zugriff auf die Informationen in der Literatur zu haben. Aktuelle Weg-Diagramme fehlen Vollst&auml;ndigkeit oder eine redaktionelle Open Access-Schnittstelle. Folglich, gibt es eine Notwendigkeit f&uuml;r eine zuverl&auml;ssige, professionell kuratierte Knowledgebase, die diese Informationen in der Karte der Signalisierung Netzwerke integriert.

Signalisierung Netzwerk von dendritischen Zellen als Reaktion auf Krankheitserreger: Beitrag-Gemeinschaft unterst&uuml;tzt Knowledgebase.

&#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBC0F; &#xC801;&#xC751;&#xD615; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;. &#xB9CE;&#xC740; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD544;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xBB38;&#xD5CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xD1B5;&#xB85C;-&#xAE30;&#xBC18; &#xC790;&#xC6D0;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xBC14;&#xB78C;&#xC9C1;&#xD55C; &#xB9CC;&#xB4E0;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xACBD;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4;&#xADF8;&#xB7A8; &#xD3EC;&#xAD04;, &#xB610;&#xB294; &#xAC1C;&#xBC29;&#xD615; &#xD3B8;&#xC9D1; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBD80;&#xC871;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC774; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294;, &#xC804;&#xBB38;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD050;&#xB808;&#xC774;&#xD130; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;.

&#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;: &#xCEE4;&#xBBA4;&#xB2C8;&#xD2F0; &#xC785;&#xB825; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xAE30;&#xC220; &#xC790;&#xB8CC;.

Las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas son c&#xE9;lulas presentadoras de ant&#xED;geno, que juegan un papel fundamental en la vinculaci&#xF3;n de los sistemas inmune innata y adaptativa. Mucha investigaci&#xF3;n se ha centrado en las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n activadas en la infecci&#xF3;n de c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas por varios pat&#xF3;genos. El alto nivel de actividad en el campo hace que sea deseable tener un recurso basado v&#xED;a para acceder a la informaci&#xF3;n en la literatura. Diagramas actuales de la v&#xED;a o bien carecen de la amplitud, o una interfaz de edici&#xF3;n de acceso abierto. Por lo tanto, existe una necesidad de un fiable, expertamente curada base de conocimiento que integra esta informaci&#xF3;n en un mapa de las redes de se&#xF1;alizaci&#xF3;n.

La red de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas en la respuesta a pat&#xF3;genos: un sistema comunitario de entrada el apoyo de Conocimientos

In der Hypophyse Gonadotropes Proteinkinase C (PKC) und MAPK/ERK Signalisierung Kaskaden werden aktiviert durch GnRH. Phosphoprotein-angereichertes Astrozyten 15 (PEA-15) ist ein cytosolisches ERK-Ger&uuml;stbau-Protein, das in L&beta;T2 Gonadotrope Zellen ausgedr&uuml;ckt wird. Pharmakologische Hemmung der PKC und zum kleinen interferierender RNA-vermittelte Schweigen G&alpha;q/11 aufgedeckt, dass GnRH Anh&auml;ufung von phosphorylierten PEA-15 PKC-abh&auml;ngigen Weise induziert. Um die potentielle Rolle von PEA-15 in der GnRH-Signalisierung zu untersuchen, haben wir die Regelung der ERK subzellulare Lokalisation und die Aktivierung des ribosomalen S6 Kinase, ein Substrat von ERK gepr&uuml;ft. Ergebnisse der zellul&auml;ren Fraktionierung/Western blot Analyse und Immunhistochemie ergab, dass GnRH-induzierte Anh&auml;ufung von phosphorylierten ERK im Zellkern abgeschw&auml;cht wurde, wenn PEA-15 Ausdruck reduziert wurde. In Ermangelung der GnRH-Stimulation, umgekehrt mit PEA-15 ERK in das Zytosol verankert. Unsere Daten zeigen, dass GnRH-induzierte nukleare Translokation von ERK erfordert seine Version von PEA-15, die auf PEA-15 Phosphorylierung von PKC auftritt. Weitere gen-silencing Experimente in den GnRH-stimuliert Zellen nachgewiesen, dass ribosomal S6 Kinase Aktivierung PEA-15 und PKC abh&auml;ngig war. Dar&uuml;ber hinaus verursacht kleine interferierender RNA-vermittelte Niederschlag von PEA-15 eine Verringerung der GnRH-stimuliert Ausdruck der fr&uuml;hen Antwort Gene Egr2 und c-Jun sowie Choriongonadotropin FSH&beta;-Untereinheit Genexpression. PEA-15 Niederschlag erh&ouml;ht LH&beta; und gemeinsamen mRNAs der &alpha;-Glykoprotein-Untereinheit, was auf eine m&ouml;gliche Rolle bei differenziellen Regulierung der Genexpression von Choriongonadotropin Untereinheit. Wir schlagen vor, PEA-15 einen neuartigen Punkt der Konvergenz der PKC und MAPK/ERK Bahnen unter GnRH-Stimulierung stellt. PKC, ERK und PEA-15 bilden eine und Logik-Gatter, die die Reaktion der Zelle Gonadotrope auf Gonadoliberin pr&auml;gt.

Charakterisierung einer MAPK Ger&uuml;stbau-Protein-Logik-Gate in Gonadotropes.

&#x5728;&#x5782;&#x4F53; gonadotropes&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC) &#x548C; MAPK/ERK &#x4FE1;&#x53F7;&#x53F6;&#x6805;&#x7684; (&#x8C4C;&#x8C46; 15&#xFF09; GnRH&#x3002; &#x78F7;&#x86CB;&#x767D;&#x6D53;&#x7F29;&#x7684;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE; 15 &#x662F;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684; ERK &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;L&beta;T2 gonadotrope &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236; PKC &#x548C;&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684; G&alpha;q/11 &#x63ED;&#x793A; GnRH &#x8BF1;&#x4F7F;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8C4C;&#x8C46; 15 PKC &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8C03;&#x67E5;&#x8C4C;&#x8C46; 15 GnRH &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86; ERK &#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x548C;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53; S6 &#x6FC0;&#x9176;&#xFF0C;&#x886C;&#x5E95;&#x7684; ERK &#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x998F;/&#x897F;&#x65B9;&#x6240;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x6210;&#x679C;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x5316;&#x663E;&#x793A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; ERK GnRH &#x8BF1;&#x5BFC;&#x79EF;&#x7D2F;&#x5F31;&#x6BD2;&#x75AB;&#x82D7;&#x65F6;&#x51CF;&#x5C11;&#x8C4C;&#x8C46; 15 &#x8868;&#x8FBE;&#x4E86;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709; GnRH &#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8C4C;&#x8C46; 15 &#x5B9A;&#x4F4D; ERK &#x7EC6;&#x80DE;&#x6EB6;&#x8D28;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;GnRH &#x81F4;&#x6838;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684; ERK &#x9700;&#x8981;&#x4ECE;&#x8C4C;&#x8C46; 15&#xFF0C;&#x53D1;&#x751F;&#x540E;&#x7531; PKC &#x8C4C;&#x8C46; 15 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5176;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x9644;&#x52A0; GnRH &#x523A;&#x6FC0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53; S6 &#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x8C4C;&#x8C46; 15 &#x548C; PKC&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x8C4C;&#x8C46; 15 &#x9020;&#x6210;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x53CD;&#x5E94;&#x57FA;&#x56E0; Egr2 GnRH &#x523A;&#x6FC0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C; c &#x541B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4FC3;&#x6027;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20; FSH&beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8C4C;&#x8C46; 15 &#x2477; &#x589E;&#x52A0;&#x4E86; LH&beta; &#x548C;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684; &alpha;-&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D; mRNAs&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x53EF;&#x80FD;&#x5DEE;&#x4FC3;&#x6027;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4E9A;&#x57FA;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8C4C;&#x8C46; 15 &#x8868;&#x793A;&#x65B0;&#x578B; GnRH &#x523A;&#x6FC0;&#x4E0B;&#x7684; PKC &#x548C; MAPK/ERK &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6C47;&#x5408;&#x70B9;&#x3002;PKC&#x3001; ERK &#x548C;&#x8C4C;&#x8C46; 15 &#x5F62;&#x6210;&#x5F62;&#x72B6;&#x5BF9; GnRH &#x7684; gonadotrope &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x548C;&#x903B;&#x8F91;&#x95E8;&#x3002;

&#x5728; gonadotropes MAPK &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D;&#x903B;&#x8F91;&#x95E8;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

In the pituitary gonadotropes, both protein kinase C (PKC) and MAPK/ERK signaling cascades are activated by GnRH. Phosphoprotein-enriched in astrocytes 15 (PEA-15) is a cytosolic ERK scaffolding protein, which is expressed in LÎ²T2 gonadotrope cells. Pharmacological inhibition of PKC and small interfering RNA-mediated silencing of GÎ±q/11 revealed that GnRH induces accumulation of phosphorylated PEA-15 in a PKC-dependent manner. To investigate the potential role of PEA-15 in GnRH signaling, we examined the regulation of ERK subcellular localization and the activation of ribosomal S6 kinase, a substrate of ERK. Results obtained by cellular fractionation/Western blot analysis and immunohistochemistry revealed that GnRH-induced accumulation of phosphorylated ERK in the nucleus was attenuated when PEA-15 expression was reduced. Conversely, in the absence of GnRH stimulation, PEA-15 anchors ERK in the cytosol. Our data suggest that GnRH-induced nuclear translocation of ERK requires its release from PEA-15, which occurs upon PEA-15 phosphorylation by PKC. Additional gene-silencing experiments in GnRH-stimulated cells demonstrated that ribosomal S6 kinase activation was dependent on both PEA-15 and PKC. Furthermore, small interfering RNA-mediated knockdown of PEA-15 caused a reduction in GnRH-stimulated expression of early response genes Egr2 and c-Jun, as well as gonadotropin FSHÎ²-subunit gene expression. PEA-15 knockdown increased LHÎ² and common Î±-glycoprotein subunit mRNAs, suggesting a possible role in differential regulation of gonadotropin subunit gene expression. We propose that PEA-15 represents a novel point of convergence of the PKC and MAPK/ERK pathways under GnRH stimulation. PKC, ERK, and PEA-15 form an AND logic gate that shapes the response of the gonadotrope cell to GnRH.

Characterization of a MAPK scaffolding protein logic gate in gonadotropes.

Dans les gonadotropes hypophysaires, &#xE0; la fois la prot&#xE9;ine kinase C (PKC) et MAPK / ERK cascades de signalisation sont activ&#xE9;s par la GnRH. Phosphoprotein-enrichi dans les astrocytes 15 (PEA-15) est une prot&#xE9;ine cytosolique ERK &#xE9;chafaudages, qui est exprim&#xE9;e dans les cellules gonadotropes L&#x3B2;T2. L&#x26;#39;inhibition pharmacologique de la PKC et des petits ARN interf&#xE9;rents &#xE0; m&#xE9;diation silence de G&#x3B1;q/11 a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que la GnRH induit l&#x26;#39;accumulation de phosphoryl&#xE9;e PEA-15 d&#x26;#39;une mani&#xE8;re d&#xE9;pendante de la PKC. Pour &#xE9;tudier le r&#xF4;le potentiel du PEA-15 dans la signalisation de la GnRH, nous avons examin&#xE9; la r&#xE9;glementation de ERK localisation subcellulaire et l&#x26;#39;activation de S6 kinase ribosomique, un substrat de ERK. Les r&#xE9;sultats obtenus par fractionnement cellulaire / analyse par Western blot et immunohistochimie a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que la GnRH induit l&#x26;#39;accumulation de ERK phosphoryl&#xE9; dans le noyau a &#xE9;t&#xE9; att&#xE9;nu&#xE9;e lorsque PEA-15 expression a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;duit. A l&#x26;#39;inverse, en l&#x26;#39;absence de stimulation de la GnRH, PEA-15 ERK ancres dans le cytosol. Nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que la GnRH induit la translocation nucl&#xE9;aire de ERK n&#xE9;cessite sa lib&#xE9;ration de PEA-15, qui se produit lors PEA-15 phosphorylation par la PKC. D&#x26;#39;autres g&#xE8;nes silencieux exp&#xE9;riences dans les cellules stimul&#xE9;es par la GnRH ont d&#xE9;montr&#xE9; que ribosomal S6 kinase activation &#xE9;tait d&#xE9;pendant &#xE0; la fois PEA-15 et de la PKC. En outre, des petits ARN interf&#xE9;rents &#xE0; m&#xE9;diation knockdown de PEA-15 a provoqu&#xE9; une r&#xE9;duction de l&#x26;#39;expression GnRH stimul&#xE9;es par des g&#xE8;nes de r&#xE9;ponse pr&#xE9;coce EGR2 et c-Jun, ainsi que l&#x26;#39;expression du g&#xE8;ne gonadotrophine FSH&#x3B2; sous-unit&#xE9;. PEA-15 a augment&#xE9; knockdown LH&#x3B2; et commune ARNm des sous-unit&#xE9;s &#x3B1;-glycoprot&#xE9;ine, sugg&#xE9;rant un r&#xF4;le possible dans la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;expression diff&#xE9;rentielle des g&#xE8;nes sous-unit&#xE9; de gonadotrophine. Nous proposons que PEA-15 repr&#xE9;sente un nouveau point de convergence des voies PKC et des MAPK / ERK en vertu de la stimulation GnRH. PKC, ERK et PEA-15 sous forme une porte logique ET qui fa&#xE7;onne la r&#xE9;ponse de la cellule gonadotrope &#xE0; la GnRH.

Caract&#xE9;risation d&#x26;#39;un porte &#xC9;chafaudages MAPK Logic prot&#xE9;ines dans gonadotropes

In gonadotropes dell&#39;ipofisi, sia protein chinasi C (PKC) e cascate di segnalazione MAPK/ERK sono attivati dal GnRH. fosfoproteina arricchita negli astrociti 15 (PEA-15) &egrave; una proteina citosolica di ponteggi ERK, che &egrave; espresso nelle cellule gonadotrope L&beta;T2. L&#39;inibizione farmacologica della PKC e piccolo interfering RNA-mediata silenziamento G&alpha;q 11 ha rivelato che GnRH induce accumulo di fosforilata PEA-15 in modo PKC-dipendente. Per indagare il ruolo potenziale di PEA-15 nel GnRH segnalazione, abbiamo esaminato il regolamento della localizzazione sottocellulare ERK e l&#39;attivazione di ribosomal S6 chinasi, un substrato di ERK. Risultati ottenuti dal frazionamento cellulare/Western blot analisi e immunoistochimica ha rivelato che accumulo GnRH-indotto di ERK fosforilato nel nucleo &egrave; stato attenuato quando espressione di PEA-15 &egrave; stato ridotto. Al contrario, in assenza di stimolazione GnRH, PEA-15 ancore ERK nel citosol. I nostri dati suggeriscono che traslocazione nucleare GnRH-indotto di ERK richiede la sua uscita dal pisello-15, che si verifica sulla fosforilazione di pisello-15 da PKC. Ulteriori esperimenti di silenziamento genico in cellule stimolate GnRH ha dimostrato che attivazione di chinasi ribosomiale S6 era dipendente sia PEA-15 e PKC. Inoltre, piccola interferenza RNA-mediata atterramento di pisello-15 ha causato una riduzione del GnRH-stimolata espressione dei geni di risposta precoce Egr2 e c-Jun, nonch&eacute; gonadotropina espressione del gene FSH&beta;-subunit&agrave;. PEA-15 atterramento aumentato LH&beta; e comuni mRNAs di subunit&agrave; &alpha;-glicoproteina, suggerendo un possibile ruolo nella regolazione differenziale dell&#39;espressione genica di gonadotropina subunit&agrave;. Proponiamo che PEA-15 rappresenta un punto di convergenza delle vie PKC e MAPK/ERK sotto stimolazione del GnRH romanzo. PKC, ERK e PEA-15 formano una porta logica AND che modella la risposta della cellula gonadotrope al GnRH.

Caratterizzazione di una porta logica proteina MAPK. ponteggi in gonadotropes.

&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#xFF08;PKC&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;MAPK / ERK&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;GnRH&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;15&#xFF08;PEA-15&#xFF09;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6FC3;&#x7E2E;L&#x3B2;T2&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x200B;&#x200B;ERK&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; G&#x3B1;q/11&#x306E;PKC&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#x5A92;&#x4ECB;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;GnRH&#x306F;&#x3001;PKC-&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;PEA-15&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x306E;GnRH&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;PEA-15&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;ERK&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3068;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;S6&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;ERK&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x643A;&#x5E2F;&#x753B;/&#x30A6;&#x30A8;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x5206;&#x6790;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;PEA-15&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x6838;&#x5185;&#x3067;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;ERK&#x306E;GnRH&#x306E;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x84C4;&#x7A4D;&#x304C;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;GnRH&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x975E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30BE;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;PEA-15&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;ERK&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;ERK&#x306E;GnRH&#x3092;&#x8A98;&#x8D77;&#x6838;&#x5185;&#x79FB;&#x884C;&#x304C;PKC&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;PEA-15&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;PEA-15&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; GnRH&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;S6&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;PEA-15&#x3068;PKC&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;PEA-15&#x306E;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x5FDC;&#x7B54;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;EGR2&#x304A;&#x3088;&#x3073;c-Jun&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;FSH&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;GnRH&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002; PEA-15&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;LH&#x3B2;&#x3068;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x3B1;-&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;mRNA&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;PEA-15&#x306F;&#x3001;GnRH&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;PKC&#x3068;MAPK / ERK&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x53CE;&#x675F;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002; PKC&#x3001;ERK&#x3001;&#x3068;GnRH&#x306E;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5F62;&#x4F5C;&#x308B;PEA-15&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x8AD6;&#x7406;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x3002;

&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;MAPK&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30ED;&#x30B8;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x7279;&#x6027;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PKC)&#xC640; MAPK/ERK &#xACC4;&#xACE1; &#xC2E0;&#xD638; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xB1CC; gonadotropes&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xB2E4; 15 GnRH. Phosphoprotein &#xB18D;&#xCD95; (&#xC644;&#xB450;&#xCF69;-15)&#xB294; L&beta;T2 gonadotrope &#xC140; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; cytosolic ERK &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. PKC&#xC758; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC800;&#xD574; &#xBC0F; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xC911;&#xC7AC; &#xB41C; &#xCE68;&#xBB35; G&alpha;q/11 &#xACF5;&#xAC1C; GnRH PKC &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; phosphorylated &#xC644;&#xB450;&#xCF69;-15&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;. &#xC644;&#xB450;&#xCF69;-15 &#xC2E0;&#xD638; Gnrh&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560; &#xC870;&#xC0AC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC80;&#xC0AC; ERK subcellular &#xC9C0; &#xBC29;&#xD654;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xACFC; ribosomal S6 kinase, ERK&#xC758; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xBCC4; &#xBC95;/&#xC11C;&#xC591; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xAE30;&#xC220; &#xC644; &#xB450; 15 &#xC2DD; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xD575; phosphorylated ERK&#xC758; &#xCD95;&#xC801; GnRH &#xC720;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC1E0;&#xB294; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C;, GnRH &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC644;&#xB450;&#xCF69;-15&#xB294; cytosol&#xC5D0;&#xC11C; ERK&#xB97C; &#xACE0;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; GnRH &#xC720;&#xB3C4; &#xD575; &#xC804; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; ERK &#xC644;&#xB450;&#xCF69;-15, PKC, &#xC644; &#xB450; 15 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2DC; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GnRH &#xC790;&#xADF9; &#xC140;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC2DC;&#xC5F0; ribosomal S6 kinase &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC644;&#xB450;&#xCF69;-15 &#xBC0F; PKC&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC644;&#xB450;&#xCF69;-15&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD55C; &#xCD08;&#xAE30; &#xC751;&#xB2F5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; egr2&#xC758; &#xC2DD; GnRH &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC0F; c &#xC900; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC120; &#xC790;&#xADF9; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; FSH&beta; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;. &#xC644;&#xB450;&#xCF69;-15 &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; LH&beta; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC120; &#xC790;&#xADF9; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xCC28;&#xB4F1; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &alpha; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; mRNAs &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC644; &#xB450; 15 GnRH &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0;&#xC11C; PKC&#xACFC; MAPK/ERK &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xC735;&#xD569;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC9C0;&#xC810;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PKC, ERK, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC644;&#xB450;&#xCF69; 15 Gnrh&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; gonadotrope &#xC140;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5; &#xBAA8;&#xC591; AND &#xB85C;&#xC9C1; &#xAC8C;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Gonadotropes&#xC5D0; MAPK &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB17C;&#xB9AC; &#xAC8C;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

En los gonadotropes pituitaria, tanto la prote&#xED;na quinasa C (PKC) y MAPK / ERK cascadas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n se activan por la GnRH. Fosfoprote&#xED;na-enriquecidos en astrocitos 15 (PEA-15) es una prote&#xED;na citos&#xF3;lica ERK andamios, que se expresa en las c&#xE9;lulas L&#x3B2;T2 gonadotrope. La inhibici&#xF3;n farmacol&#xF3;gica de la PKC y de peque&#xF1;os ARN de interferencia mediada por silenciamiento de G&#x3B1;q/11 revel&#xF3; que la GnRH induce la acumulaci&#xF3;n de fosforilados PEA-15 de una manera dependiente de PKC. Para investigar el papel potencial de la PEA-15 en la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de la GnRH, se analiz&#xF3; la regulaci&#xF3;n de la localizaci&#xF3;n subcelular de ERK y la activaci&#xF3;n de la quinasa ribos&#xF3;mica S6, un sustrato de ERK. Los resultados obtenidos por fraccionamiento celular / Western blot e inmunohistoqu&#xED;mica revel&#xF3; que la GnRH inducida por la acumulaci&#xF3;n de ERK fosforilada en el n&#xFA;cleo se atenu&#xF3; cuando PEA-15 expresi&#xF3;n se redujo. Por el contrario, en ausencia de estimulaci&#xF3;n con GnRH, PEA-15 anclas de ERK en el citosol. Nuestros datos sugieren que la GnRH inducida por la translocaci&#xF3;n nuclear de ERK requiere su liberaci&#xF3;n de la PEA-15, que se produce por el PEA-15 fosforilaci&#xF3;n por PKC. Adicional silenciamiento de genes experimentos en c&#xE9;lulas de GnRH-estimuladas demostr&#xF3; que ribos&#xF3;mica S6 quinasa activaci&#xF3;n era dependiente tanto del PEA-15 y PKC. Adem&#xE1;s, peque&#xF1;os ARN de interferencia mediada desmontables de PEA-15 caus&#xF3; una reducci&#xF3;n en la expresi&#xF3;n de GnRH-estimulada de respuesta temprana genes Egr2 y c-Jun, as&#xED; como gonadotropina FSH&#x3B2; subunidad expresi&#xF3;n g&#xE9;nica. PEA-15 aument&#xF3; ca&#xED;da LH&#x3B2; com&#xFA;n y la glicoprote&#xED;na &#x3B1;-ARNm de las subunidades, lo que sugiere un posible papel en la regulaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n diferencial de gonadotropina gen de la subunidad. Proponemos que la PEA-15 representa un punto de la novela de la convergencia de las PKC y MAPK / ERK v&#xED;as bajo la estimulaci&#xF3;n de GnRH. PKC, ERK, y la forma del PEA-15 una puerta Y l&#xF3;gica que da forma a la respuesta de la c&#xE9;lula gonadotropas a la GnRH.

Caracterizaci&#xF3;n de una puerta de Andamios MAPK l&#xF3;gica de prote&#xED;nas en gonadotropes

Identifying the early gene program induced by GnRH would help understand how GnRH-activated signaling pathways modulate gonadotrope secretory response. We previously analyzed GnRH-induced early genes in LÎ²T2 cells, however these lack GnRH self-potentiation, a physiological attribute of gonadotropes. To minimize cellular heterogeneity, rat primary pituitary cultures were enriched for gonadotropes by 40-60% using a sedimentation gradient. Given the limited number of gonadotropes, RNA was amplified prior to microarray analysis. Thirty-three genes were up-regulated 40min after GnRH stimulation. Real-time PCR confirmed regulation of several transcripts including fosB, c-fos, egr-2 and rap1b, a small GTPase and member of the Ras family. GnRH stimulated rap1b gene expression in gonadotropes, measured by a sensitive single cell assay. Immunocytochemistry revealed increased Rap1 protein in GnRH-stimulated gonadotropes. These data establish rap1b as a novel gene rapidly induced by GnRH and a candidate to modulate gonadotropin secretion in rat gonadotropes.

Optimized amplification and single-cell analysis identify GnRH-mediated activation of Rap1b in primary rat gonadotropes.

&#x786E;&#x5B9A;&#x81F4; GnRH &#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5C06;&#x5E2E;&#x52A9;&#x4E86;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55; GnRH &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x8C03;&#x8282; gonadotrope &#x5206;&#x6CCC;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x5206;&#x6790; GnRH &#x8BF1;&#x5BFC;&#x65E9;&#x671F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; L&beta;T2&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7F3A;&#x4E4F; GnRH self-potentiation&#xFF0C;gonadotropes &#x751F;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x5C3D;&#x91CF;&#x51CF;&#x5C11;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F02;&#x8D28;&#x6027;&#xFF0C;&#x5927;&#x9F20;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x5782;&#x4F53;&#x6587;&#x5316;&#x5145;&#x5B9E;&#x4E86;&#x4E3A; gonadotropes &#x4F7F;&#x7528;&#x6C89;&#x6DC0;&#x6E10;&#x53D8;&#x7684; 40-60%&#x3002;&#x9274;&#x4E8E; gonadotropes &#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x6709;&#x9650;&#xFF0C;RNA &#x662F;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#x524D;&#x653E;&#x5927;&#x3002;&#x4E09;&#x5341;&#x4E09;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x540E; GnRH &#x523A;&#x6FC0;&#x4E86;&#x4E0A;&#x8C03; 40 &#x5206;&#x949F;&#x3002;&#x5B9E;&#x65F6;&#x8367;&#x5149;&#x5B9A;&#x91CF; PCR &#x8BC1;&#x5B9E;&#x76F8;&#x5173;&#x8111;&#x533A; fosB&#x3001; c-fos&#x3001; &#x5E9F;&#x6C14;&#x518D;&#x5FAA;&#x73AF;-2 &#x548C; rap1b&#x3001; &#x5C0F;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; Ras &#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x5305;&#x62EC;&#x51E0;&#x4E2A;&#x8A8A;&#x672C;&#x89C4;&#x4F8B;&#x3002;GnRH &#x523A;&#x6FC0; gonadotropes&#xFF0C;&#x8861;&#x91CF;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x68C0;&#x6D4B; rap1b &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x900F;&#x9732;&#x589E;&#x52A0; GnRH &#x523A;&#x6FC0; gonadotropes Rap1 &#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x5EFA;&#x7ACB; rap1b &#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x8282;&#x5927;&#x9F20; gonadotropes &#x4FC3;&#x6027;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x5206;&#x6CCC;&#x8FC5;&#x901F; GnRH &#x548C;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x6240;&#x81F4;&#x3002;

&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x653E;&#x5927;&#x548C;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A; Rap1b &#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x539F; gonadotropes &#x4ECB;&#x5BFC; GnRH &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

Identifier le programme du g&#xE8;ne pr&#xE9;coce induite par la GnRH aideraient &#xE0; comprendre comment la GnRH-voies de signalisation activ&#xE9;es moduler la r&#xE9;ponse s&#xE9;cr&#xE9;toire gonadotrope. Nous avons d&#xE9;j&#xE0; analys&#xE9; la GnRH g&#xE8;nes induits au d&#xE9;but de L&#x3B2;T2 cellules, mais ceux-ci GnRH absence d&#x26;#39;auto-potentialisation, un attribut physiologique de gonadotropes. Pour minimiser l&#x26;#39;h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; cellulaire, cultures primaires de rat hypophysaires ont &#xE9;t&#xE9; enrichies pour gonadotropes de 40-60% en utilisant un gradient de s&#xE9;dimentation. &#xC9;tant donn&#xE9; le nombre limit&#xE9; de gonadotropes, l&#x26;#39;ARN a &#xE9;t&#xE9; amplifi&#xE9; avant analyse des puces. Trente-trois g&#xE8;nes &#xE9;taient r&#xE9;gul&#xE9;s &#xE0; la hausse 40min apr&#xE8;s stimulation GnRH. PCR en temps r&#xE9;el a confirm&#xE9; la r&#xE9;glementation des transcriptions de plusieurs, y compris fosB, c-fos, egr-2 et rap1b, une petite GTPase et membre de la famille Ras. GnRH stimul&#xE9;e dans l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes rap1b gonadotropes, mesur&#xE9;e par un test sur cellules de sensibilit&#xE9; maximale simple. Immunocytochimie ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une augmentation prot&#xE9;ine Rap1 dans la GnRH stimul&#xE9;es gonadotropes. Ces donn&#xE9;es &#xE9;tablissent que rap1b un nouveau g&#xE8;ne rapidement induite par la GnRH et un candidat &#xE0; moduler la s&#xE9;cr&#xE9;tion de gonadotrophines dans gonadotropes chez le rat.

Amplification optimis&#xE9;e et d&#x26;#39;analyse unicellulaire Identifier GnRH-activation m&#xE9;di&#xE9;e par des Rap1b dans gonadotropes primaires de rat

Ermittlung des fr&uuml;hen gen-Programms von GnRH induziert w&uuml;rde dazu beitragen, wie GnRH-aktiviert Signalisierung verstehen Wege modulieren Gonadotrope sekretorische Antwort. Wir analysierten zuvor GnRH-induzierte fr&uuml;he Gene in den L&beta;T2 Zellen, aber diese GnRH-Self-potentiation, eine physiologische Gonadotropes-Attribut fehlt. Um zellul&auml;re Heterogenit&auml;t zu minimieren, wurden Ratte Hypophyse Prim&auml;rkulturen von 40-60 % mit einem Farbverlauf Ablagerung f&uuml;r Gonadotropes bereichert. Angesichts die begrenzte Zahl von Gonadotropes, wurde RNA vor der Microarray-Analyse verst&auml;rkt. Dreiunddrei&szlig;ig Gene wurden oben-geregelt 40 min nach GnRH-Stimulation. Echtzeit-PCR best&auml;tigt Regulierung der mehrere Protokolle einschlie&szlig;lich FosB, c-fos, AGR-2 und rap1b, eine kleine GTPase und Mitglied der Ras-Familie. GnRH stimuliert rap1b Genexpression in Gonadotropes, durch einen empfindlichen Einzelzellen-Assay gemessen. Immunzytochemie ergab erh&ouml;hte Rap1 Protein in GnRH-stimuliert Gonadotropes. Diese Daten stellen rap1b als ein neuartiges gen rasch induziert durch GnRH und ein Kandidat, Gonadotropin-Sekretion in Ratte Gonadotropes modulieren.

Optimierte Verst&auml;rkung und einzellige Analyse identifizieren GnRH-vermittelte Aktivierung der Rap1b im prim&auml;ren Ratte Gonadotropes.

Identificando il primo programma di gene indotto dal GnRH aiuterebbe a capire come attivato GnRH signaling pathways modulano risposta secretoria gonadotrope. Abbiamo precedentemente analizzato geni precoce GnRH-indotta in cellule L&beta;T2, tuttavia questi mancano self-potentiation di GnRH, un attributo fisiologico di gonadotropes. Per minimizzare l&#39;eterogeneit&agrave; cellulare, culture ipofisario primario ratto erano arricchite per gonadotropes da 40-60% con una sfumatura di sedimentazione. Dato il numero limitato di gonadotropes, RNA &egrave; stato amplificato prima dell&#39;analisi di microarray. Trenta-tre geni sono stati regolati fino 40 min dopo stimolazione GnRH. PCR in tempo reale confermato regolamento delle trascrizioni diverse tra cui fosB, c-fos, egr-2 e rap1b, un piccolo GTPase e membro della famiglia Ras. GnRH stimolata espressione genica rap1b in gonadotropes, misurata mediante un saggio sensibile singola cella. Immunocitochimica ha rivelato aumentata proteina Rap1 in gonadotropes GnRH-stimolata. Questi dati stabiliscono rap1b come un romanzo gene rapidamente indotto dal GnRH e un candidato di modulare la secrezione di gonadotropina nel ratto gonadotropes.

Amplificazione ottimizzata e a cella singola analisi identificare GnRH-mediata attivazione di Rap1b nel ratto primaria gonadotropes.

&#x306E;GnRH&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x521D;&#x671F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;GnRH&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x3001;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x7269;&#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;L&#x3B2;T2&#x7D30;&#x80DE;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3057;&#x3066;GnRH&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x5897;&#x5F37;&#x3001;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x5C5E;&#x6027;&#x3067;&#x306E;GnRH&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x521D;&#x671F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E0D;&#x5747;&#x8CEA;&#x6027;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x6291;&#x3048;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x521D;&#x4EE3;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x57F9;&#x990A;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x5806;&#x7A4D;&#x52FE;&#x914D;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;40&#x304B;&#x3089;60&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6570;&#x3092;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;RNA&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x5897;&#x5E45;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E09;&#x5341;&#x4E09;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;GnRH&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F8C;&#x306B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;40&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;PCR&#x306F;&#x3001;FOSB&#x3001;c-fos&#x306E;&#x3001;EGR-2&#x3068;rap1b&#x3001;Ras&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;GTPase&#x3068;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002; GnRH&#x306F;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x3067;rap1b&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;GnRH&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B4;&#x30CA;&#x30C9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D4;&#x30F3;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;Rap1&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6025;&#x901F;&#x306B;GnRH&#x3092;&#x3057;&#x3001;&#x5019;&#x88DC;&#x8005;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;rap1b&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5897;&#x5E45;&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BB;&#x30EB;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x4EE3;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x6027;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x3067;Rap1b&#x306E;GnRH&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;

Gnrh&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xCD08;&#xAE30; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC2E0;&#xD638; GnRH &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC29;&#xBC95; &#xC774;&#xD574; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xACBD;&#xB85C; gonadotrope &#xBD84; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; GnRH self-potentiation, gonadotropes&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xBD80;&#xC871; L&beta;T2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; GnRH &#xC720;&#xB3C4; &#xCD08;&#xAE30; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC774; &#xC9C8;&#xC744; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC950; &#xC8FC; &#xB1CC; &#xBB38;&#xD654; &#xCE68;&#xC804; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; 40-60 %gonadotropes &#xB300; &#xD55C; &#xB18D;&#xCD95; &#xD588;&#xB2E4;. Gonadotropes&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC218;&#xB97C; &#xAC10;&#xC548;&#xD560; &#xB54C;, microarray &#xBD84;&#xC11D; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; RNA &#xC99D;&#xD3ED; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 30-3 &#xC720;&#xC804;&#xC790; GnRH &#xC790;&#xADF9; &#xD6C4; 40 &#xBD84; &#xC704;&#xB85C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR fosB c-fos, egr 2&#xC640; rap1b, &#xC791;&#xC740; GTPase, Ras &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. GnRH &#xC790;&#xADF9; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; gonadotropes&#xC5D0;&#xC11C; rap1b &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;. &#xACF5;&#xAC1C; Immunocytochemistry gonadotropes GnRH &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; Rap1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xC950; gonadotropes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC120; &#xC790;&#xADF9; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xBD84; &#xBE44; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; Gnrh&#xC640; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB85C; rap1b&#xB97C; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xC99D;&#xD3ED; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC950; gonadotropes&#xC5D0;&#xC11C; rap1b&#xC758; GnRH &#xC911;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Identificar el programa gen precoz inducida por GnRH ayudar&#xED;a a entender c&#xF3;mo la GnRH activados por las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n modular la respuesta secretora de gonadotropas. Hemos analizado anteriormente GnRH inducida por los genes a principios de L&#x3B2;T2 c&#xE9;lulas, sin embargo, estos GnRH la falta de auto-potenciaci&#xF3;n, un atributo fisiol&#xF3;gico de gonadotropes. Para minimizar la heterogeneidad celular, la hip&#xF3;fisis de rata cultivos primarios fueron enriquecidos por gonadotropes en un 40-60% con un gradiente de sedimentaci&#xF3;n. Dado el n&#xFA;mero limitado de gonadotropes, el ARN fue amplificado antes de an&#xE1;lisis de microarrays. Treinta y tres genes son regulados hasta 40 minutos despu&#xE9;s de la estimulaci&#xF3;n de GnRH. PCR en tiempo real confirm&#xF3; la regulaci&#xF3;n de varias transcripciones incluidas fosB, c-fos, EGR-2 y rap1b, una peque&#xF1;a GTPasa y miembro de la familia Ras. GnRH estimul&#xF3; la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica en rap1b gonadotropes, medida por un ensayo de c&#xE9;lulas sola sensible. La inmunocitoqu&#xED;mica revel&#xF3; aumento de prote&#xED;nas en Rap1 GnRH estimulada gonadotropes. Estos datos establecen rap1b como un nuevo gen r&#xE1;pidamente inducida por GnRH y un candidato para modular la secreci&#xF3;n de gonadotropinas en la rata gonadotropes.

Optimizado amplificaci&#xF3;n y an&#xE1;lisis de una sola c&#xE9;lula de Identificaci&#xF3;n de la GnRH mediada por la activaci&#xF3;n de la Rap1b en gonadotropes primarios de rata

Article	Year
The promoter of the rat gonadotropin-releasing hormone receptor gene directs the expression of the human placental alkaline phosphatase reporter gene in gonadotrope cells in the anterior pit... Endocrinology\| PubMed ID: 14592958	2004
[An ambiguous role of steroidogenic factor 1 in the rat GnRH receptor gene expression. Lessons from transgenic mice]. Journal de la SociÃ©tÃ© de biologie\| PubMed ID: 15146959	2004
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Optimized amplification and single-cell analysis identify GnRH-mediated activation of Rap1b in primary rat gonadotropes. Molecular and cellular endocrinology\| PubMed ID: 22127306	2012

Hanna Pincas

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