in-vitro-assay-of-bacterial-adhesion-onto-mammalian-epithelial-cells

<em>In Vitro</em> Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

Groupe de Recherche sur les Maladies Infectieuses du Porc GREMIP, Faculte de medecine veterinaire

&#x4E0D;&#x5B9A;&#x53C2;&#x6570;&#x6570;&#x503C;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6790;&#x662F;&#x80BF;&#x7624;&#x6D78;&#x6DA6;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE; (TIIC) &#x8868;&#x578B;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x53EF;&#x9760;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x5404;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x662F;&#x9176;&#x548C;&#x673A;&#x68B0; &#xFF1B; &#x5B9E;&#x73B0;&#x6E17;&#x900F;&#x4ECE;&#x56FA;&#x4F53;&#x80BF;&#x7624;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6539;&#x53D8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x8981;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5BF9;&#x4E73;&#x623F;&#x3001; &#x80BE;&#x810F;&#x548C;&#x80BA;&#x80BF;&#x7624;&#x6807;&#x672C;&#x4E2D;&#x7684; TIIC &#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5206;&#x7C7B;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E24;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4F7F;&#x7528; IV &#x578B;&#x80F6;&#x539F;&#x9176;&#x7B2C; IA &#x5355;&#x72EC;&#x6216;&#x8054;&#x5408;&#x578B;&#x80F6;&#x539F;&#x9176;&#xFF0C;&#x5E76;&#x952E;&#x5165;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x673A;&#x68B0;&#x7CFB;&#x7EDF; (Medimachine &trade;) &#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x7684;&#x9176;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x5904;&#x7406;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001; &#x8868;&#x9762;&#x6807;&#x5FD7;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x548C;&#x589E;&#x6B96;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E0D;&#x5927;&#x5927;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x9176;&#x6CBB;&#x7597;&#x51CF;&#x5C11;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96; &#xFF1B;&#x5177;&#x4F53;&#x80F6;&#x539F;&#x9176;&#x548C;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x5F15;&#x53D1;&#x4E86;&#x5982; CD4&#x3001; CD8&#x3001; CD45RA&#x3001; CD14&#x3001; &#x8868;&#x9762;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x663E;&#x8457;&#x8DCC;&#x5E45;&#x6307;&#x793A;&#x91C7;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D7;&#x5230;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x7531; Medimachine &trade; &#x673A;&#x68B0;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5206;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x4FDD;&#x6301;&#x8868;&#x578B;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; TIIC &#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x6700;&#x4F73;&#x3002;

&#x8868;&#x578B;&#x9274;&#x5B9A;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80BF;&#x7624;&#x514D;&#x75AB;&#x6E17;&#x900F;&#x540E;&#x673A;&#x68B0;&#x548C;&#x9176;&#x7684;&#x5206;&#x7C7B;&#x3002;

Multi-parametric flow cytometry analysis is a reliable method for phenotypic and functional characterization of tumor infiltrating immune cells (TIIC). The isolation of infiltrating leukocytes from solid tumors can be achieved through various methods which can be both enzymatic and mechanical; however, these methods may alter cell biology. The aim of this study was to compare the effects of three tissue disaggregation techniques on TIIC biology in breast, kidney and lung tumor specimens. We therefore compared two enzymatic treatments using either collagenase type IA alone or in combination with collagenase type IV and DNase I type II, and one mechanical system (Medimachineâ„¢). We evaluated the impact of treatments on cell viability, surface marker integrity and proliferative capacity. We show that cell viability was not significantly altered by treatments. However, enzymatic treatments decreased cell proliferation; specifically collagenases and DNase provoked a significant decrease in detection of surface markers such as CD4, CD8, CD45RA and CD14, indicating that results of phenotypic studies employing these techniques could be affected. In conclusion, mechanical tissue disaggregation by Medimachineâ„¢ appears to be optimal to maintain phenotypic and functional TIIC features.

Phenotypic characterization and functional analysis of human tumor immune infiltration after mechanical and enzymatic disaggregation.

Analyse en cytom&eacute;trie en flux multiparam&eacute;triques est une m&eacute;thode fiable pour la caract&eacute;risation ph&eacute;notypique et fonctionnelle des tumeurs infiltrant les cellules immunitaires (TIIC). L&#39;isolement d&#39;infiltration de leucocytes de tumeurs solides peut &ecirc;tre obtenue par diff&eacute;rentes m&eacute;thodes qui peuvent &ecirc;tre enzymatique et m&eacute;canique ; Cependant, ces m&eacute;thodes peuvent alt&eacute;rer la biologie cellulaire. Le but de cette &eacute;tude &eacute;tait de comparer les effets de trois techniques de d&eacute;sagr&eacute;gation du tissu sur la biologie TIIC dans des &eacute;chantillons de tumeur du sein, les reins et les poumons. Par cons&eacute;quent, nous avons compar&eacute; deux traitements enzymatiques utilisant type de collag&eacute;nase IA seul ou en combinaison avec collag&eacute;nase de type IV et DNase type I, II et un syst&egrave;me m&eacute;canique (Medimachine &trade;). Nous avons &eacute;valu&eacute; l&#39;impact des traitements sur la viabilit&eacute; des cellules, l&#39;int&eacute;grit&eacute; de la surface de marqueur et capacit&eacute; prolif&eacute;rative. Nous montrons que la viabilit&eacute; des cellules n&#39;a pas &eacute;t&eacute; modifi&eacute;e significativement par les traitements. Cependant, les traitements enzymatiques diminue la prolif&eacute;ration cellulaire ; plus pr&eacute;cis&eacute;ment des collag&eacute;nases et DNase a provoqu&eacute; une diminution significative de la d&eacute;tection de marqueurs de surface telles que CD4, CD8, CD45RA et CD14, indiquant que les r&eacute;sultats des &eacute;tudes ph&eacute;notypiques employant ces techniques pourraient &ecirc;tre affect&eacute;s. En conclusion, d&eacute;sagr&eacute;gation m&eacute;canique tissulaire par Medimachine &trade; semble &ecirc;tre optimale pour maintenir les caract&eacute;ristiques TIIC ph&eacute;notypiques et fonctionnelles.

Caract&eacute;risation ph&eacute;notypique et analyse fonctionnelle d&#39;infiltration immunitaire de tumeur humaine apr&egrave;s d&eacute;sagr&eacute;gation m&eacute;canique et enzymatique.

Multiparameter-Flow Cytometry-Analyse ist eine zuverl&auml;ssige Methode f&uuml;r die ph&auml;notypische und Funktionelle Charakterisierung des Tumors infiltrierende Immunzellen (TIIC). Die Isolation der Leukozyten von soliden Tumoren infiltrieren kann durch verschiedene Methoden erreicht werden, die sowohl mechanische als auch enzymatische sein kann; Allerdings, k&ouml;nnen diese Methoden Zellbiologie &auml;ndern. Das Ziel dieser Studie war es, die Auswirkungen der drei Gewebe Entzweiung Techniken auf TIIC Biologie in Brust, Niere und Lunge Tumor Proben zu vergleichen. Wir haben daher zwei enzymatische Behandlungen, die mit entweder Collagenase Typ IA allein oder in Kombination mit Collagenase Typ IV und DNase ich Typ II und einem mechanischen System (Medimachine &trade;) verglichen. Wir evaluieren die Wirkung der Behandlungen auf Zellviabilit&auml;t, Oberfl&auml;che Markierung Integrit&auml;t und proliferative Kapazit&auml;t. Wir zeigen, dass die Zellviabilit&auml;t durch Behandlungen nicht wesentlich ver&auml;ndert wurde. Jedoch sank die enzymatische Behandlungen Zellvermehrung; speziell Kolagenasen und DNase provozierte einen betr&auml;chtlicher R&uuml;ckgang der Erkennung der Oberfl&auml;che Marker wie CD4, CD8, CD45RA und Verwendung CD14, darauf hinweist, dass die ph&auml;notypische Studien besch&auml;ftigt diese Techniken betroffen sein k&ouml;nnten. Abschlie&szlig;end erscheint mechanische Gewebe Untergliederung von Medimachine &trade; optimal, ph&auml;notypische und funktionelle TIIC Funktionen aufrechtzuerhalten.

Ph&auml;notypische Charakterisierung und funktionelle Analyse der menschlichen Tumor immun Infiltration nach mechanische und enzymatische Aufschl&uuml;sselung.

L&#39;analisi di citometria a flusso multiparametrico &egrave; un metodo affidabile per la caratterizzazione fenotipica e funzionale di tumore infiltrante le cellule immunitarie (TIIC). L&#39;isolamento di infiltrazione dei leucociti da tumori solidi pu&ograve; essere raggiunto attraverso vari metodi che possono essere sia enzimatica e meccanica; Tuttavia, questi metodi possono alterare la biologia cellulare. Lo scopo di questo studio era di confrontare gli effetti delle tre tecniche di disgregazione del tessuto sulla biologia TIIC in campioni di tumore al seno, polmone e rene. Abbiamo quindi confrontato due trattamenti enzimatici utilizzando sia tipo di collagenasi IA da solo o in combinazione con collagenasi tipo IV e dnasi I tipo II e un sistema meccanico (Medimachine &trade;). Abbiamo valutato l&#39;impatto dei trattamenti sulla vitalit&agrave; delle cellule, l&#39;integrit&agrave; del marcatore di superficie e capacit&agrave; proliferativa. Mostriamo che vitalit&agrave; cellulare non &egrave; stato significativamente alterato da trattamenti. Tuttavia, trattamenti enzimatici ridotta proliferazione cellulare; in particolare la collagenasi e la dnasi provocato una diminuzione significativa nella rilevazione di marcatori di superficie quali CD4, CD8, CD45RA e CD14, indicando che i risultati degli studi fenotipici impiegando queste tecniche potrebbero essere influenzati. In conclusione, disgregazione meccanica del tessuto Medimachine &trade; sembra essere ottimale per mantenere le caratteristiche fenotipiche e funzionali TIIC.

Caratterizzazione fenotipica e analisi funzionale del sistema immunitario infiltrazione tumorale umano dopo disgregazione meccanica ed enzimatica.

&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6D41;&#x308C;&#x306E;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x89E3;&#x6790; (TIIC) &#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x96E2;&#x56FA;&#x5F62;&#x816B;&#x760D;&#x304B;&#x3089;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x6D78;&#x6F64;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x7684;&#x53CA;&#x3073;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x4E73;&#x304C;&#x3093;&#x3001;&#x814E;&#x81D3;&#x3001;&#x80BA;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x6A19;&#x672C;&#x306E; TIIC &#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059; 3 &#x3064;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x30B3;&#x30E9;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x578B; IV &#x30B3;&#x30E9;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x578B; IA &#x5358;&#x72EC;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x3068; DNase II &#x3068; 1 &#x3064;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; (Medimachine &trade;) &#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; 2 &#x3064;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x7684;&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x51E6;&#x7406;&#x30BB;&#x30EB;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x6B96;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306F;&#x30BB;&#x30EB;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068; DNase &#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; CD4&#x3001;cd8 &#x967D;&#x6027;&#x3068; cd45ra &#x306F;&#x306A;&#x3069; CD14, &#x8868;&#x9762;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5; &#x30CA;&#x30CE;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E4;&#x30E2;&#x30F3;&#x30C9; Medimachine &trade; &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E; TIIC &#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x514D;&#x75AB;&#x6D78;&#x6F64;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x3068;&#x9175;&#x7D20;&#x5206;&#x89E3;&#x5F8C;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x3002;

Multi-parametric &#xD750;&#xB984; cytometry &#xBD84;&#xC11D; &#xC885;&#xC591; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; (TIIC) &#xCE68;&#xD22C;&#xC758; phenotypic &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C;&#xAC00; &#xCE68;&#xD22C;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801;; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xC720; &#xBC29;, &#xC2E0;&#xC7A5;&#xACFC; &#xD3D0; &#xC885;&#xC591; &#xD45C;&#xBCF8; TIIC &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xBD95;&#xAD34; &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xCF5C;&#xB77C; &#xC720;&#xD615; IV&#xC640; &#xCF5C;&#xB77C; &#xC720;&#xD615; IA &#xD63C;&#xC790; &#xB610;&#xB294; &#xC870;&#xD569;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC0F; DNase II, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD55C; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (Medimachine &trade;) &#xC785;&#xB825; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBE44;&#xAD50;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;, &#xD45C;&#xBA74; &#xD45C;&#xC2DD; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131; &#xBC0F; &#xC99D;&#xC2DD; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xD06C;&#xAC8C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD6A8;&#xC18C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xAC10;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;; &#xD2B9;&#xD788; collagenases&#xC640; DNase &#xC790;&#xADF9; &#xD45C;&#xBA74; &#xB9C8;&#xCEE4; CD4, CD8, CD45RA CD14, &#xB4F1;&#xC758; &#xD0D0;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xCC44;&#xC6A9; phenotypic &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, Medimachine &trade;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC870;&#xC9C1; &#xBD95;&#xAD34; phenotypic TIIC &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xAC83; &#xC778; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4;.

Phenotypic &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBD95;&#xAD34; &#xD6C4; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC885;&#xC591; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCE68;&#xD22C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;.

An&aacute;lisis de citometr&iacute;a de flujo PARAMETRICO es un m&eacute;todo fiable para la caracterizaci&oacute;n fenot&iacute;pica y funcional de c&eacute;lulas inmunes (TIIC) de la infiltraci&oacute;n del tumor. El aislamiento de la infiltraci&oacute;n de leucocitos de tumores s&oacute;lidos puede lograrse a trav&eacute;s de varios m&eacute;todos que pueden ser tanto enzim&aacute;tica y mec&aacute;nica; sin embargo, estos m&eacute;todos pueden alterar la biolog&iacute;a celular. El objetivo de este estudio fue comparar los efectos de tres t&eacute;cnicas de desagregaci&oacute;n de tejido en biolog&iacute;a TIIC en muestras de tumor de mama, ri&ntilde;&oacute;n y pulm&oacute;n. Por lo tanto, se compararon dos tratamientos enzim&aacute;ticos utilizando tipo de colagenasa IA solo o en combinaci&oacute;n con colagenasa tipo IV y ADNasa tipo II y un sistema mec&aacute;nico (Medimachine &trade;). Evaluamos el impacto de los tratamientos sobre la viabilidad celular, la integridad superficial del marcador y la capacidad proliferativa. Demostramos que la viabilidad celular no fue alterado significativamente por tratamientos. Sin embargo, tratamientos enzim&aacute;ticos disminuyeron la proliferaci&oacute;n celular; espec&iacute;ficamente colagenasas y DNasa provocaron una disminuci&oacute;n significativa en la detecci&oacute;n de marcadores de superficie como CD45RA, CD4, CD8 y CD14, indicando que los resultados de estudios fenot&iacute;picos que emplean estas t&eacute;cnicas podr&iacute;an verse afectados. En conclusi&oacute;n, la desagregaci&oacute;n mec&aacute;nica del tejido por Medimachine &trade; parece ser &oacute;ptima para mantener caracter&iacute;sticas TIIC fenot&iacute;picas y funcionales.

Caracterizaci&oacute;n fenot&iacute;pica y an&aacute;lisis funcional de infiltraci&oacute;n inmunes humanas del tumor despu&eacute;s de la disgregaci&oacute;n mec&aacute;nica y enzim&aacute;tica.

Jason Letourneau

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