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A Rapid Approach to High-Resolution Fluorescence Imaging in Semi-Thick Brain Slices

A fundamental goal to both basic and clinical neuroscience is to better understand the identities, molecular makeup, and patterns of connectivity that are ...

Precisionary Instruments Inc.

Taumatina &egrave; uno dei pi&ugrave; dolci sostanze conosciute fino ad oggi, &egrave; importante studiare la taumatina. Chiaramente, si sono chiarite le propriet&agrave; biochimiche di taumatina. Taumatina era stato isolato e sequenziato. Il meccanismo della dolcezza di taumatina pu&ograve; essere dovuto alla combinazione di alcuni gruppi speciali e i recettori. La funzione esatta di taumatina non &egrave; ancora chiara. Anche se ingegneria gene di taumatina &egrave; stata effettuata per 20 anni, ci sono ancora alcuni problemi da risolvere per l&#39;utilizzo nel mercato.

[Proteina dolce taumatina e di ingegneria genetica].

&#x751C;&#x6700;&#x751C;&#x7684;&#x662F;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x7269;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x8981;&#x7814;&#x7A76;&#x5947;&#x5F02;&#x679C;&#x751C;&#x3002;&#x6E05;&#x695A;&#x5730;&#x9610;&#x660E;&#x4E86;&#x751C;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x751C;&#x4E86;&#x5F97;&#x5230;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x3002;&#x751C;&#x751C;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x4E00;&#x4E9B;&#x7279;&#x6B8A;&#x7684;&#x7FA4;&#x4F53;&#x548C;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x3002;&#x751C;&#x7684;&#x786E;&#x5207;&#x804C;&#x80FD;&#x662F;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x867D;&#x7136; 20 &#x591A;&#x5E74;&#x7684;&#x751C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5DF2;&#x8FDB;&#x884C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ECD;&#x6709;&#x4E00;&#x4E9B;&#x56F0;&#x96BE;&#x9700;&#x8981;&#x89E3;&#x51B3;&#x7684;&#x5E02;&#x573A;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

[&#x751C;&#x86CB;&#x767D;&#x751C;&#x548C;&#x5B83;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DE5;&#x7A0B;]&#x3002;

Thaumatin is one of the sweetest substances known to date,it is important to study the thaumatin. The biochemical properties of thaumatin have been clarified clearly. Thaumatin had been isolated and sequenced. The mechanism of the sweetness of thaumatin may be due to the combination of some special groups and the receptors. The exact function of thaumatin is still not clear. Although gene engineering of thaumatin has been carried out for 20 years, there are still some difficulties to be solved for using in the market.

[Sweet protein thaumatin and it's genetic engineering].

Thaumatine est l&#39;un des plus doux substances connues &agrave; ce jour, il est important d&#39;&eacute;tudier la thaumatine. Les propri&eacute;t&eacute;s biochimiques de la thaumatine ont &eacute;t&eacute; clairement pr&eacute;cis&eacute;es. Thaumatine avait &eacute;t&eacute; isol&eacute; et s&eacute;quenc&eacute;. Le m&eacute;canisme de la douceur de la thaumatine est peut-&ecirc;tre due &agrave; la combinaison de certains groupes sp&eacute;ciaux et les r&eacute;cepteurs. La fonction exacte de la thaumatine est toujours pas claire. Bien que le g&eacute;nie g&eacute;n&eacute;tique de la thaumatine a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e depuis 20 ans, il y a toujours des difficult&eacute;s &agrave; r&eacute;soudre pour l&#39;utilisation sur le march&eacute;.

[Douce prot&eacute;ines thaumatine et sa g&eacute;n&eacute;tique].

[S&#xFC;&#xDF;e Protein Thaumatin und es ist Gentechnik].

&#x30BF;&#x30A6;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306F; 1 &#x3064;&#x306E;&#x7518;&#x3044;&#x65E5;&#x4ED8;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7269;&#x8CEA;&#x3001;&#x30BF;&#x30A6;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30A6;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x660E;&#x78BA;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30A6;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x304C;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x3001;&#x5869;&#x57FA;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30A6;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x7518;&#x3055;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7279;&#x5225;&#x306A;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30BF;&#x30A6;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x306F;&#x3063;&#x304D;&#x308A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30BF;&#x30A6;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5DE5;&#x5B66;&#x306F;&#x3001;20 &#x5E74;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;&#x5E02;&#x5834;&#x3067;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x3079;&#x304D;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x56F0;&#x96E3;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x3002;

[&#x7518;&#x3044;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30BF;&#x30A6;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5DE5;&#x5B66;]&#x3002;

Thaumatin&#xC740; &#xB2EC;&#xCF64;&#xD55C; &#xC911; &#xD604;&#xC7AC;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xBB3C;&#xC9C8;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC5EC; thaumatin &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Thaumatin&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xC18D;&#xC131; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xBA85;&#xD655;&#xD788; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Thaumatin &#xC808;&#xC5F0; &#xACE0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;. Thaumatin&#xC758; &#xB2E8; &#xB9DB;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xBA87;&#xBA87; &#xD2B9;&#xBCC4; &#xD55C; &#xADF8;&#xB8F9; &#xBC0F; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xACB0;&#xD569; &#xB54C;&#xBB38;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Thaumatin&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xACF5;&#xD559; thaumatin&#xC758; 20 &#xB144; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xC2DC;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD574;&#xACB0; &#xD574;&#xC57C; &#xD560; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBB38;&#xC81C;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

[&#xB2EC;&#xCF64;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; thaumatin &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC720;&#xC804; &#xACF5;&#xD559;].

La taumatina es uno de los m&aacute;s dulces sustancias conocidas hasta la fecha, es importante estudiar la taumatina. Las propiedades bioqu&iacute;micas de extractos de plantas han sido esclarecidas claramente. La taumatina hab&iacute;a sido aislada y secuenciada. El mecanismo de la dulzura de extractos de plantas puede ser debido a la combinaci&oacute;n de algunos grupos especiales y los receptores. La funci&oacute;n exacta de taumatina todav&iacute;a no est&aacute; clara. Aunque la ingenier&iacute;a gen&eacute;tica de extractos de plantas se ha realizado durante 20 a&ntilde;os, todav&iacute;a hay algunas dificultades a resolver para usar en el mercado.

[Dulce prote&iacute;na taumatina y su ingenier&iacute;a gen&eacute;tica].

&#x53EF;&#x884C;&#x8111;&#x5207;&#x7247;&#x4E2D;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x83B7;&#x53D6;&#x51E0;&#x4E2A;&#x533A;&#x57DF;&#x5305;&#x62EC;&#x8179;&#x4FA7;&#x88AB;&#x76D6;&#x533A;&#x3001; &#x4E0B;&#x4E18;&#x8111;&#x3001; &#x5BFC;&#x6C34;&#x7BA1;&#x5468;&#x56F4;&#x7070;&#x8D28;&#x7684;&#x7070;&#x8272;&#x7269;&#x8D28;&#x548C;&#x810A;&#x9AD3;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x672C;&#x8D28;&#x662F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x6539;&#x6027;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x8111;&#x810A;&#x6DB2; &#xFF08;&#x4E2A;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x6C2F;&#x5316;&#x94A0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x66FF;&#x6362;&#x6700;&#x521D;&#x7531;&#x8BBE;&#x5907;&#x6E17;&#x900F;&#x7518;&#x6CB9;&#x3002;&#x5728;&#x5207;&#x7247;&#x5236;&#x5907;&#x671F;&#x95F4;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x6B64;&#x4FEE;&#x6539;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7518;&#x6CB9;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x539F;&#x5219;&#x662F;&#x9632;&#x6B62;&#x88AB;&#x52A8;&#x6C2F;&#x5316;&#x5165;&#x5883;&#x3001; &#x968F;&#x540E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80BF;&#x80C0;&#x548C;&#x6EB6;&#x89E3;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6025;&#x6027;&#x795E;&#x7ECF;&#x6BD2;&#x6027;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0;&#x5F62;&#x6001;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6B63;&#x5E38;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x6216;&#x8517;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5730;&#x4E2A;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6C2F;&#x5316;&#x94A0;&#x88AB;&#x53D6;&#x800C;&#x4EE3;&#x4E4B;&#x7684;&#x8517;&#x7CD6;&#x7684;&#x751F;&#x6D3B;/&#x6B7B;&#x4EA1;&#x6BD4;&#x7387;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x51C6;&#x5907;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x7535;&#x6D41;&#x94B3;&#x548C;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x5F55;&#x97F3;&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x548C;&#x836F;&#x7406;&#x6027;&#x80FD;&#x6307;&#x6807;&#x7684;&#x68C0;&#x67E5;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E0E;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x5728;&#x53EF;&#x884C;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6570;&#x76EE;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x65B0;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x63D0;&#x9AD8;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6B64;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7518;&#x6CB9;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;

&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x7B80;&#x5355;&#x83B7;&#x5F97;&#x53EF;&#x884C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x8111;&#x7247;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF1A; &#x7518;&#x6CB9;&#x6C2F;&#x5316;&#x94A0;&#x66F4;&#x6362;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;

Viable neurons in brain slices are crucial for electrophysiological studies. The present study describes a new method for obtaining viable cells in several regions of the central nervous system including the ventral tegmental area, the hypothalamus, the periaqueductal grey matter and the spinal cord. The essence of the method was to use a modified artificial cerebrospinal fluid (ACSF) in which all NaCl was replaced initially by equi-osmotic glycerol. This modified glycerol-based ACSF was used during slice preparation. The underlying principle for the modification is to prevent the possible acute neurotoxic effects of passive chloride entry, subsequent cell swelling and lysis. This method significantly increased the live/dead ratio in morphology compared to the normal ACSF or sucrose-base ACSF, in which NaCl was replaced by sucrose. An examination of some electrophysiological and pharmacological properties of the neurons in these preparations, by means of current-clamp and voltage-clamp recordings, revealed similar properties of those neurons obtained with the traditional ACSF method. Due to the increase in the number of viable neurons, the new ACSF increases the productivity of experiments. Based on our data, we propose that this glycerol-based solution may protect CNS neurons.

Patch-clamp studies in the CNS illustrate a simple new method for obtaining viable neurons in rat brain slices: glycerol replacement of NaCl protects CNS neurons.

Neurones viables dans des tranches de cerveau sont cruciales pour les &eacute;tudes &eacute;lectrophysiologiques. La pr&eacute;sente &eacute;tude d&eacute;crit une nouvelle m&eacute;thode pour l&#39;obtention de cellules viables dans plusieurs r&eacute;gions du syst&egrave;me nerveux central dont l&#39;aire tegmentale ventrale, l&#39;hypothalamus, la substance grise p&eacute;riaqueducale et la moelle &eacute;pini&egrave;re. L&#39;essence de la m&eacute;thode consistait &agrave; utiliser un liquide c&eacute;phalorachidien artificiel modifi&eacute; (FSCA) dans lequel tous NaCl a &eacute;t&eacute; remplac&eacute; au d&eacute;part de glyc&eacute;rol equi-osmotique. Cette mis &agrave; jour le FSCA ax&eacute;e sur le glyc&eacute;rol a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; au cours de la pr&eacute;paration de tranches. Le principe sous-jacent de la modification est d&#39;emp&ecirc;cher les effets neurotoxiques aigus possibles d&#39;entr&eacute;e passive de chlorure, de gonflement cellulaire ult&eacute;rieures et de lyse. Cette m&eacute;thode a consid&eacute;rablement augment&eacute; le ratio live/dead dans la morphologie par rapport &agrave; l&#39;ACSF normal ou fsca saccharose-base, dans lequel NaCl a &eacute;t&eacute; remplac&eacute; par le saccharose. L&#39;examen de certaines propri&eacute;t&eacute;s &eacute;lectrophysiologiques et pharmacologiques des neurones dans ces pr&eacute;parations, au moyen d&#39;enregistrements courant-clamp et voltage clamp, a r&eacute;v&eacute;l&eacute; des propri&eacute;t&eacute;s similaires de ces neurones obtenus avec la m&eacute;thode traditionnelle du fsca. En raison de l&#39;augmentation du nombre de neurones viables, le FSCA nouvelle augmente la productivit&eacute; des exp&eacute;riences. Selon nos donn&eacute;es, nous proposons que cette solution de glyc&eacute;rol peut prot&eacute;ger les neurones de la CNS.

&Eacute;tudes de patch-clamp dans le SNC illustrent une nouvelle m&eacute;thode simple permettant d&#39;obtenir des neurones viables dans les coupes de cerveau de rat : remplacement de glyc&eacute;rol de NaCl prot&egrave;ge les neurones de la CNS.

Lebensf&auml;hige Neuronen im Gehirn Scheiben sind entscheidend f&uuml;r elektrophysiologische Untersuchungen. Die vorliegende Studie beschreibt eine neue Methode zur Erlangung von entwicklungsf&auml;higen Zellen in mehreren Regionen des zentralen Nervensystems einschlie&szlig;lich der ventralen Haubengebiet, der Hypothalamus, die Periaqu&auml;duktales Grau Angelegenheit und das R&uuml;ckenmark. Das Wesen der Methode war, eine modifizierte k&uuml;nstliche Liquor cerebrospinalis (ACSF) zu verwenden, in der alle NaCl zun&auml;chst von Equi-osmotische Glycerin ersetzt wurde. Diese modifizierte Glycerin basierende ACSF wurde w&auml;hrend brotmesser Vorbereitung verwendet. Das zugrunde liegende Prinzip f&uuml;r die &Auml;nderung ist die m&ouml;glichen akuten neurotoxischen Wirkungen passive Chlorid ein- und nachfolgende Zelle Swelling und Zerst&ouml;rung zu verhindern. Diese Methode deutlich erh&ouml;ht das Leben/Dead-Verh&auml;ltnis in Morphologie im Vergleich zu den normalen ACSF oder Saccharose-Base ACSF, in denen NaCl durch Saccharose ersetzt wurde. Eine Untersuchung der einige elektrophysiologischen und pharmakologischen Eigenschaften der Neuronen in diese Vorbereitungen, mittels Klemm-Strom und Spannung-Klemme Aufnahmen, ergab &auml;hnliche Eigenschaften diese Neuronen, die mit der traditionellen Methode der ACSF. Aufgrund der Zunahme der Anzahl lebensf&auml;higer Neuronen erh&ouml;ht die neue ACSF die Produktivit&auml;t der Experimente. Auf der Grundlage unserer Daten, schlagen wir vor, dass diese Glycerin-basierte L&ouml;sung CNS Neuronen sch&uuml;tzen kann.

Patch-Clamp Untersuchungen im ZNS veranschaulichen eine einfache neue Methode zur Erlangung von lebensf&auml;higer Neurons in Ratte-Gehirn-Scheiben: Glycerin Ersatz NaCl sch&uuml;tzt CNS Neuronen.

Neuroni vitali in fettine di cervello sono cruciali per gli Studi elettrofisiologici. Il presente studio descrive un nuovo metodo per ottenere cellule vitali nelle diverse regioni del sistema nervoso centrale compreso l&#39;area tegmentale ventrale, l&#39;ipotalamo, la materia grigia periacquiduttale e del midollo spinale. L&#39;essenza del metodo era quello di utilizzare un modificato artificiale cerebrospinale (ACSF) in cui tutti NaCl fu sostituito inizialmente da glicerolo equi-osmotica. Questo modificato ACSF glicerolo-base &egrave; stato utilizzato durante la preparazione della fetta. Il principio sottostante per la modifica &egrave; per prevenire i possibili effetti neurotossici acuti della voce passiva cloruro, gonfiore delle cellule successive e lisi. Questo metodo significativamente aumentato il rapporto live/dead nella morfologia rispetto alla normale ACSF o saccarosio-base ACSF, in cui NaCl &egrave; stato sostituito dal saccarosio. L&#39;esame di alcune propriet&agrave; farmacologiche ed elettrofisiologiche dei neuroni in queste preparazioni, tramite pinza di corrente e tensione-morsetto registrazioni, ha rivelato propriet&agrave; simili di quelli ottenuti con il metodo tradizionale di ACSF di neuroni. A causa dell&#39;aumento del numero di neuroni vitali, il nuovo ACSF aumenta la produttivit&agrave; degli esperimenti. Sulla base dei nostri dati, noi proponiamo che questa soluzione a base di glicerolo pu&ograve; proteggere i neuroni CNS.

Studi di patch-clamp nel SNC illustrano un nuovo metodo semplice per ottenere i neuroni vitali in fettine di cervello di ratto: sostituzione del glicerolo di NaCl protegge i neuroni CNS.

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&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1; &#x30FB; &#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C7;&#x30A3;&#x306F;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x304C;&#x793A;&#x3059;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x8133;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x6C42;&#x3081;&#x308B;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;: &#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x4EA4;&#x63DB; NaCl &#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB1CC; &#xC870;&#xAC01; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB274;&#xB7F0; electrophysiological &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBCF5; &#xBD80; tegmental &#xC601;&#xC5ED;, &#xC2DC;&#xC0C1; &#xD558; &#xBD80;, periaqueductal &#xD68C;&#xC0C9; &#xBB3C;&#xC9C8;, &#xCC99;&#xC218; &#xB4F1; &#xC911;&#xCD94;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8; &#xBAA8;&#xB4E0; NaCl &#xB3D9;&#xB4F1; &#xC0BC; &#xD22C; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC98;&#xC74C; &#xAD50;&#xCCB4;&#xB294; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xC778;&#xACF5; &#xB1CC; &#xCC99;&#xCD94; &#xC561;&#xCCB4; (&reg;)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xB41C; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; &#xAE30;&#xBC18; ACSF &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xC900;&#xBE44; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC6D0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC218;&#xB3D9; &#xC5FC;&#xD654; &#xD56D;&#xBAA9;&#xACFC; &#xD6C4;&#xC18D; &#xC140; &#xBD93;&#xAE30; lysis &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAE09;&#xC131; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;. &#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC77C;&#xBC18; ACSF &#xB610;&#xB294; &#xC790;&#xB2F9; &#xC790;&#xB8CC; ACSF, NaCl &#xC790;&#xB2F9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB300;&#xCCB4; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;/&#xC8FD;&#xC740; &#xBE44;&#xC728; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC804;&#xB958; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xBC0F; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xB179;&#xC74C;/&#xB179;&#xD654;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; electrophysiological &#xBC0F; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC18D;&#xC131;&#xC758; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; ACSF &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5BB;&#xC740; &#xADF8; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC218;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; ACSF &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC131;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; &#xAE30;&#xBC18; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xC911;&#xCD94; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CNS&#xC5D0; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC950; &#xB1CC; &#xC870;&#xAC01;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95; &#xC124;&#xBA85;: Nacl&#xC758; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; &#xAD50;&#xCCB4; &#xC911;&#xCD94; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las neuronas viables en rebanadas del cerebro son cruciales para los estudios electrofisiol&oacute;gicos. El presente estudio describe un nuevo m&eacute;todo para la obtenci&oacute;n de c&eacute;lulas viables en varias regiones del sistema nervioso central incluyendo el &aacute;rea tegmental ventral, el hipot&aacute;lamo, la materia gris periacueductal y la m&eacute;dula espinal. La esencia del m&eacute;todo era utilizar un modificado artificial cerebroespinal (ACSF) en el que todos NaCl fue sustituido inicialmente por glicerol equi-osm&oacute;tico. Este modificado ACSF basadas en glicerol fue utilizado durante la preparaci&oacute;n de la rebanada. El principio subyacente para la modificaci&oacute;n es prevenir los posibles efectos neurot&oacute;xicos agudos de entrada pasiva de cloruro, hinchaz&oacute;n de la c&eacute;lula siguiente y lisis. Este m&eacute;todo aument&oacute; significativamente la proporci&oacute;n de vivo/muerto en morfolog&iacute;a comparada con la normal ACSF o ACSF sacarosa-base, en el que el NaCl fue reemplazado por sacarosa. Un examen de algunas propiedades farmacol&oacute;gicas y electrofisiol&oacute;gicos de las neuronas en estos preparativos, por medio de grabaciones de pinza de corriente y voltaje-abrazadera, revel&oacute; caracter&iacute;sticas similares de esas neuronas obtenidas con el m&eacute;todo tradicional de ACSF. Debido al aumento en el n&uacute;mero de neuronas viables, el nuevo ACSF aumenta la productividad de los experimentos. Seg&uacute;n nuestros datos, proponemos que esta soluci&oacute;n basada en glicerol puede proteger a las neuronas de la CNS.

Estudios de Patch-clamp en el CNS ilustran un nuevo m&eacute;todo simple para la obtenci&oacute;n de neuronas viables en rebanadas de cerebro de rata: reemplazo de glicerol de NaCl protege las neuronas de la CNS.

Taxol &egrave; uno dei pi&ugrave; potenti agenti chemioterapeutici noti, mostrando eccellente attivit&agrave; contro una vasta gamma di tumori. In aggiunta a anticancro, taxol ha l&#39;effetto di impedire un innesto arteriosclerosi, antiscaring formazione e inibendo l&#39;angiogenesi. Ci sono cinque percorsi possibili per industrializzare la produzione di taxol: isolamento dalla corteccia di specie yew, sintesi totale, semisintesi, coltura di tessuti o cellule, endofita fermentazione fungina e ingegneria del metabolismo. Ci sono almeno 14 geni correlati per la biosintesi di taxol era stati clonati da tassi e funzionalmente espresso in host differenti. Il sistema di espressione combinatori di taxol fa progressi come la chiarificazione del pathway biosintetico di taxol.

[I recenti progressi nella biosintesi di Taxol].

&#x30BF;&#x30AD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x5316;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x307B;&#x304B;&#x306B;&#x6297;&#x764C;&#x5264;&#x3001;&#x30BF;&#x30AD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30EB;&#x63A5;&#x304E;&#x6728;&#x3059;&#x308B;&#x52D5;&#x8108;&#x786C;&#x5316;, antiscaring &#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x9632;&#x6B62;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30AD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30EB;&#x751F;&#x7523;&#x5DE5;&#x696D;&#x5316;&#x306B; 5 &#x3064;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C8;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#xFF1A; &#x6A39;&#x76AE;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x306E;&#x30A4;&#x30C1;&#x30A4;&#x7A2E;&#x3001;&#x5168;&#x5408;&#x6210;&#x3001;semisynthesis&#x3001;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x304B;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x5185;&#x751F;&#x771F;&#x83CC;&#x6027;&#x767A;&#x9175;&#x3068;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x5DE5;&#x5B66;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x30BF;&#x30AD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 14 &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30A4;&#x30C1;&#x30A4;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30AD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x7D44;&#x5408;&#x305B;&#x5F0F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x9032;&#x884C;&#x30BF;&#x30AD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x89E3;&#x660E;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

[&#x30BF;&#x30AD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x300D;&#x3002;

&#x7D2B;&#x6749;&#x9187;&#x662F;&#x6700;&#x6709;&#x529B;&#x5316;&#x7597;&#x836F;&#x7269;&#x5DF2;&#x77E5;&#xFF0C;&#x5C55;&#x793A;&#x4F18;&#x79C0;&#x7684;&#x764C;&#x75C7;&#x7B49;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x6297;&#x764C;&#x3001; &#x7D2B;&#x6749;&#x9187;&#x5177;&#x6709;&#x9632;&#x6B62;&#x79FB;&#x690D;&#x52A8;&#x8109;&#x786C;&#x5316;&#x3001; &#x7622;&#x75D5;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x6291;&#x5236;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x6709;&#x4E94;&#x4E2A;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x8DEF;&#x7EBF;&#xFF0C;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x5316;&#x751F;&#x4EA7;&#x7D2B;&#x6749;&#x9187;&#xFF1A; &#x4ECE;&#x6811;&#x76AE;&#x79CD;&#x7EA2;&#x8C46;&#x6749;&#x3001; &#x5168;&#x5408;&#x6210;&#x3001; &#x534A;&#x5408;&#x6210;&#x3001; &#x7EC4;&#x7EC7;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x3001; &#x5185;&#x751F;&#x771F;&#x83CC;&#x53D1;&#x9175;&#x548C;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x7684;&#x9694;&#x79BB;&#x3002;&#x90A3;&#x91CC;&#x662F;&#x81F3;&#x5C11; 14 &#x7D2B;&#x6749;&#x9187;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DF2;&#x88AB;&#x514B;&#x9686;&#x4ECE;&#x7EA2;&#x8C46;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4E3B;&#x673A;&#x3002;&#x7D2B;&#x6749;&#x9187;&#x7EC4;&#x5408;&#x8868;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6F84;&#x6E05;&#x7684;&#x7D2B;&#x6749;&#x9187;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x9014;&#x5F84;&#x53D6;&#x5F97;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

[&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x7D2B;&#x6749;&#x9187;&#x7684;&#x6700;&#x65B0;&#x8FDB;&#x5C55;]&#x3002;

Taxol is one of the most potent chemotherapeutic agents known, showing excellent activity against a range of cancers. In addition to anticancer, taxol has the effect of preventing graft arteriosclerosis, antiscaring formation and inhibiting angiogenesis. There are five possible routes to industrialize taxol production: isolation from the bark of the yew species, total synthesis, semisynthesis, tissue or cell culture, endophytic fungal fermentation and metabolism engineering. There are at least 14 genes related to the taxol biosynthesis had been cloned from yews and functionally expressed in different hosts. The combinational expression system of taxol makes progress as the clarification of biosynthetic pathway of taxol.

[Recent advances in the biosynthesis of Taxol].

Le Taxol est un des plus puissants agents chimioth&eacute;rapeutiques connus, montrant excellente activit&eacute; contre une vari&eacute;t&eacute; de cancers. Outre anticanc&eacute;reux, taxol a pour effet d&#39;emp&ecirc;cher greffer art&eacute;rioscl&eacute;rose, antiscaring formation et en inhibant l&#39;angiogen&egrave;se. Il y a cinq voies possibles d&#39;industrialiser la production de taxol : isolement de l&#39;&eacute;corce de l&#39;esp&egrave;ces d&#39;if, synth&egrave;se totale, h&eacute;misynth&egrave;se, culture tissulaire ou cellulaire, fermentation champignon endophyte et g&eacute;nie du m&eacute;tabolisme. Il sont au moins 14 g&egrave;nes associ&eacute;s &agrave; la biosynth&egrave;se de taxol ont &eacute;t&eacute; clon&eacute;s chez IFS et fonctionnellement exprim&eacute; sous forme de diff&eacute;rents h&ocirc;tes. Le syst&egrave;me d&#39;expression combinatoire de taxol progresse comme la clarification de la voie de biosynth&egrave;se de taxol.

[Avances r&eacute;centes dans la biosynth&egrave;se de Taxol].

Taxol geh&ouml;rt zu den wirksamsten Chemotherapeutika bekannt, zeigen hervorragende Wirkung gegen eine Reihe von Krebserkrankungen. Zus&auml;tzlich wirkt gegen Krebs, Taxol verhindern Arteriosklerose, Antiscaring Bildung und Hemmung der Angiogenese Pfropfen. Es gibt f&uuml;nf m&ouml;gliche Routen zu industrialisieren Taxol Produktion: Isolierung aus der Rinde der Eibe Arten, Totalsynthese, Semisynthesis, Gewebe- oder Kultur, endophytische Pilze G&auml;rung und Stoffwechsel-Technik. Es sind mindestens 14 Gene mit Bezug zu der Taxol-Biosynthese von Eiben und funktional ausgedr&uuml;ckt in verschiedenen Hosts geklont wurde, hatte. Die kombinatorische Expressionssystem von Taxol kommt voran, als die Kl&auml;rung der biosynthetischen Bahn der Taxol.

[J&uuml;ngsten Fortschritte in der Biosynthese von Taxol].

Taxol&#xC740; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD654;&#xD559;&#xC694;&#xBC95; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;, &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC554;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC911;. &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; &#xC554;, taxol&#xC740; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xACBD;&#xD654; &#xC99D;, antiscaring &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xD608;&#xAD00; &#xC2E0;&#xC0DD; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC774;&#xC2DD; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD6A8;&#xACFC;. 5 &#xAC1C;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xACBD;&#xB85C;&#xAC00; taxol &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC0B0;&#xC5C5;&#xD654;: &#xC720; &#xC885;, &#xCD1D; &#xD569;&#xC131;, semisynthesis, &#xC870;&#xC9C1; &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xBB38;&#xD654;, endophytic &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xBC1C;&#xD6A8; &#xB300;&#xC0AC; &#xACF5;&#xD559;&#xC758; &#xAECD;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACA9;&#xB9AC;. &#xAC70;&#xAE30;&#xB294; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 14 &#xC720;&#xC804;&#xC790; taxol &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD588;&#xB2E4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF5;&#xC81C; yews &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C;. Taxol&#xC758; &#xC870;&#xD569; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; taxol&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB300; &#xD55C; &#xC124;&#xBA85;&#xC774; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558; &#xAC8C;.

[Taxol&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC9C4;&#xBCF4;].

Taxol es uno de los agentes quimioterap&eacute;uticos m&aacute;s potentes conocidos, mostrando excelente actividad contra una variedad de c&aacute;nceres. Adem&aacute;s contra el c&aacute;ncer, taxol tiene el efecto de prevenir injerto arterioesclerosis, formaci&oacute;n antiscaring e inhibir la angiog&eacute;nesis. Hay cinco rutas posibles para la industrializaci&oacute;n de la producci&oacute;n de taxol: aislamiento de la corteza de la especies de Tejo, s&iacute;ntesis total, semis&iacute;ntesis, tejido o c&eacute;lula cultura, fermentaci&oacute;n de hongo end&oacute;fitos e ingenier&iacute;a de metabolismo. All&iacute; son al menos 14 genes relacionados con la bios&iacute;ntesis de taxol hab&iacute;a sido clonados de tejos y funcionalmente expresados en diferentes hosts. El sistema de expresi&oacute;n combinacional de taxol avanza como la aclaraci&oacute;n de la v&iacute;a biosint&eacute;tica del taxol.

[Los avances recientes en la bios&iacute;ntesis de Taxol].

Secondo studi precedenti di SARS-CoV (coronavirus della sindrome respiratoria acuta grave), una variet&agrave; di nuovi geni accessori sono stati identificati nel genoma di SARS-CoV, che erano sparpagliati i geni strutturali di SARS-CoV e considerato unico per il genoma di SARS-CoV. Le proteine sconosciute previste (PUP) codificate da geni accessori potrebbero giocano un ruolo importante nell&#39;infezione SARS-CoV. Tre di questi geni, chiamati X 4, X 5 e ORF10, sono stati sintetizzati e introdotto in e. coli per indurre l&#39;espressione. SDS-PAGE e Western blotting ha rivelato che i tre geni sono stati espressi in e. coli. L&#39;induzione dell&#39;espressione di geni SARS cuccioli a diverse temperature, tempi di induzione, concentrazioni di IPTG e un valori di cellule di e. coli sono stati eseguiti. La condizione ottimale di induzione dei geni SARS-CoV cuccioli &egrave; stata caratterizzata secondo l&#39;analisi orthorgonal. Il rapporto di proteine ricombinanti di cuccioli delle proteine totali &egrave; come segue: X 4, 20%; X 5, 27,8%; ORF10, 68,5% nelle condizioni ottimale.

[Ottimizzazione della condizione di espressione dei geni di SARS-CoV PUPs in e. coli].

SARS &#x30B3;&#x30ED;&#x30CA; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (&#x91CD;&#x75C7;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x5668;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CA; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF09; &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3068;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; SARS &#x30B3;&#x30ED;&#x30CA; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x3042;&#x3063;&#x305F; SARS &#x30B3;&#x30ED;&#x30CA; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6563;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3001;SARS &#x30B3;&#x30ED;&#x30CA; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x4E00;&#x610F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x672A;&#x77E5;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; &#xFF08;&#x30D1;&#x30C3;&#x30D7;&#x30B9;&#xFF09; &#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3067; SARS &#x30B3;&#x30ED;&#x30CA; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;3 X 4&#x3001;X 5&#x3001;ORF10 &#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SDS &#x30DA;&#x30FC;&#x30B8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x897F;&#x90E8;&#x306B;&#x3057;&#x307F;&#x304C;&#x4ED8;&#x304F; 3 &#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6E29;&#x5EA6;&#x8A98;&#x5C0E;&#x56DE;&#x3001;IPTG &#x6FC3;&#x5EA6;&#x3001;E. &#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5024;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; SARS &#x30D1;&#x30C3;&#x30D7;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;SARS CoV &#x30D1;&#x30C3;&#x30D7;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306F; orthorgonal &#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3068;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7DCF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3078;&#x306E;&#x5B50;&#x72AC;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6BD4;&#x7387;&#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x3068;&#x304A;&#x308A;&#x3067;&#x3059;: X 4&#x3001;20%;X 5&#x3001;27.8%;ORF10&#x3001;68.5 &#xFF05; &#x6700;&#x9069;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

[SARS CoV &#x30D1;&#x30C3;&#x30D7;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;]&#x3002;

SARS CoV (&#xC911;&#xC99D; &#xAE09;&#xC131; &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xCF54;&#xB85C;&#xB098; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;)&#xC758; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC758; &#xD558;&#xBA74; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC18C;&#xC124; &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; SARS CoV &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD588;&#xB2E4; interspersed SARS Cov&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; SARS CoV &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC608;&#xCE21; &#xB41C; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (&#xC0C8;&#xB07C;) &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xD638;&#xD654;&#xB294; SARS CoV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 3 X 4 X 5&#xC640; ORF10, &#xADF8; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD569;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC2DD; &#xC720;&#xB3C4;&#xB97C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785;. SDS &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xC640; &#xC11C;&#xC591; blotting &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC138; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC628;&#xB3C4;, &#xC720;&#xB3C4; &#xC2DC;&#xAC04;, IPTG &#xB18D;&#xB3C4; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC140; &#xAC12;&#xC5D0; SARS &#xC0C8;&#xB07C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. SARS CoV &#xC0C8;&#xB07C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xC870;&#xAC74; orthorgonal &#xBD84;&#xC11D; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCD1D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB07C;&#xC758; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC740; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: x4, 20%; X 5, 27.8%; ORF10, &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; 68.5%&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

[&#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; SARS CoV &#xC0C8;&#xB07C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC2DD; &#xC870;&#xAC74;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;].

&#x6839;&#x636E;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684; Sars &#xFF08;&#x4E25;&#x91CD;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EFC;&#x5408;&#x75C7;&#x51A0;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;) &#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x65B0;&#x914D;&#x4EF6;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x4E25;&#x91CD;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EFC;&#x5408;&#x75C7;&#x51A0;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x88AB;&#x70B9;&#x7F00;&#x7684;&#x4E25;&#x91CD;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EFC;&#x5408;&#x75C7;&#x51A0;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7ED3;&#x6784;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x5BF9;&#x4E25;&#x91CD;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EFC;&#x5408;&#x75C7;&#x51A0;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x3002;&#x8F85;&#x52A9;&#x57FA;&#x56E0;&#x6240;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; (Pup) &#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x4E25;&#x91CD;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EFC;&#x5408;&#x75C7;&#x51A0;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A; X 4&#x3001; X 5 &#x548C; ORF10&#xFF0C;&#x4E09;&#x662F;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x5F15;&#x5165;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;&#x7535;&#x6CF3;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x900F;&#x9732;&#x5DF2;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E25;&#x91CD;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EFC;&#x5408;&#x75C7; Pup &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x3001; &#x611F;&#x5E94;&#x65F6;&#x4EE3;&#x3001; IPTG &#x6D53;&#x5EA6;&#x548C;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x503C;&#x4E86;&#x3002;Pup SARS &#x51A0;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F18;&#x5316;&#x4E0A;&#x5C97;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x6839;&#x636E;&#x6B63;&#x4EA4;&#x5206;&#x6790;&#x3002;Pup &#x603B;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x662F;&#xFF0C;&#x5982;&#x4E0B;&#x6240;&#x793A;&#xFF1A; X 4&#x3001; 20%&#xFF1B;X 5&#x3001; 27.8%&#xFF1B;ORF10&#xFF0C;&#x5728;&#x6700;&#x4F73;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684; 68.5%&#x3002;

[Sars Pup &#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x4F18;&#x5316;]&#x3002;

According to previous studies of SARS-CoV (Severe acute respiratory syndrome coronavirus), a variety of novel accessory genes have been identified in SARS-CoV genome, which were interspersed the structural genes of SARS-CoV and considered to be unique to the SARS-CoV genome. The predicted unknown proteins (PUPs) encoded by the accessory genes might play important roles in the SARS-CoV infection. Three of those genes, called X4, X5 and ORF10, were synthesized and introduced into E. coli to induce expression. SDS-PAGE and Western blotting revealed that the three genes have been expressed in E. coli. The induction of SARS PUPs genes expression in different temperatures, induction times, IPTG concentrations and A values of E. coli cells were performed. The optimal induction condition of SARS-CoV PUPs genes was characterized according to the orthorgonal analysis. The ratio of recombinant proteins of PUPs to total proteins is as follows: X4, 20%; X5, 27.8%; ORF10, 68.5% under the optimum conditions.

[Optimization of expression condition of SARS-CoV PUPs genes in E. coli].

Selon des &eacute;tudes ant&eacute;rieures du SARS-CoV (coronavirus du syndrome respiratoire aigu s&eacute;v&egrave;re), une vari&eacute;t&eacute; de nouveaux g&egrave;nes accessoires ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s dans le g&eacute;nome du SARS-CoV, qui ont &eacute;t&eacute; intercal&eacute;s des g&egrave;nes structuraux du SARS-CoV et consid&eacute;r&eacute; comme unique pour le g&eacute;nome du coronavirus du SRAS. Les prot&eacute;ines inconnus pr&eacute;dites (PUP), cod&eacute;es par les g&egrave;nes accessoires pourraient jouer un r&ocirc;le important dans l&#39;infection par le SRAS. Trois de ces g&egrave;nes, appel&eacute;s X 4, X 5 et ORF10, ont &eacute;t&eacute; synth&eacute;tis&eacute;s et introduits dans e. coli pour induire l&#39;expression. SDS-PAGE et transfert Western a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que les trois g&egrave;nes ont &eacute;t&eacute; exprim&eacute;s chez e. coli. L&#39;induction de l&#39;expression de g&egrave;nes de SRAS chiots &agrave; diff&eacute;rentes temp&eacute;ratures, temps d&#39;induction, les concentrations IPTG et des valeurs de cellules d&#39;Escherichia coli ont &eacute;t&eacute; effectu&eacute;es. La condition optimale d&#39;induction de g&egrave;nes de petits SARS-CoV a &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute;e selon l&#39;analyse d&#39;orthorgonal. Le ratio de prot&eacute;ines recombinantes, des petits aux prot&eacute;ines totales est comme suit: X 4, 20 % ; X 5, 27,8 % ; ORF10, 68,5 % dans des conditions optimales.

[Optimisation de la condition de l&#39;expression des g&egrave;nes de chiots-SRAS chez e. coli].

Nach fr&uuml;heren Untersuchungen des SARS-CoV (Schweres akutes respiratorisches Syndrom Coronavirus), eine Vielzahl von neuartigen Zubeh&ouml;r Gene wurden in SARS-CoV-Genom, welches waren die strukturelle Gene des SARS-CoV durchsetzt und als einzigartige des SARS-CoV-Genoms. Die vorhergesagte unbekannter Proteine (PUPs) Zubeh&ouml;r Gene codiert k&ouml;nnte der SARS-CoV-Infektion eine wichtige Rolle spielen. Drei dieser Gene, X 4, X 5 und ORF10, genannt wurden synthetisiert und in E. Coli Ausdruck veranlassen eingef&uuml;hrt. SDS-PAGE und Westliches Beflecken ergab, dass die drei Gene in E. Coli ge&auml;u&szlig;ert wurden. Die Induktion von SARS PUPs Gene Ausdruck in unterschiedlichen Temperaturen, Induktion Mal, IPTG Konzentration sowie ein Werte von E. Coli Zellen wurden durchgef&uuml;hrt. Der optimale Induktion Zustand des SARS-CoV PUPs Gene zeichnete sich nach der Orthorgonal-Analyse. Das Verh&auml;ltnis von rekombinanten Proteinen PUPs Gesamt Proteine ist wie folgt: X 4, 20 %; X 5, 27,8 %; ORF10, 68,5 % unter optimalen Bedingungen.

[Optimierung der Ausdrucksbedingung der SARS-CoV PUPs Gene in E. Coli].

Seg&uacute;n estudios previos del SARS-CoV (coronavirus del s&iacute;ndrome respiratorio agudo severo), una variedad de genes accesorios nuevos se han identificado en el genoma del SARS-CoV, que fueron intercalados los genes estructurales del SARS-CoV y considerado &uacute;nico en el genoma del SARS-CoV. Las prote&iacute;nas desconocidas predichas (PUP) codificadas por los genes accesorios podr&iacute;an desempe&ntilde;an papeles importantes en la infecci&oacute;n de SARS-CoV. Tres de esos genes, llamados X 4, X 5 y ORF10, fueron sintetizados e introducido en e. coli para inducir la expresi&oacute;n. SDS-PAGE y Western blotting revelaron que los tres genes se han expresado en e. coli. La inducci&oacute;n de la expresi&oacute;n de genes de SARS cachorros en diferentes temperaturas, tiempos de inducci&oacute;n, concentraciones de IPTG y un valores de c&eacute;lulas de e. coli fueron realizados. La condici&oacute;n &oacute;ptima de la inducci&oacute;n de genes de cachorros de SARS-CoV se caracteriz&oacute; seg&uacute;n el an&aacute;lisis de orthorgonal. La proporci&oacute;n de prote&iacute;nas recombinantes de cachorros a prote&iacute;nas totales es la siguiente: 4 X, 20%; X 5, 27,8%; ORF10, 68,5% bajo condiciones &oacute;ptimas.

[Optimizaci&oacute;n de condici&oacute;n de la expresi&oacute;n de genes de cachorros de SARS-CoV en e. coli].

&#x9EC4;&#x82B1;&#x84BF;&#x4E2D; p450 &#x6C27;&#x5316; cDNA &#x514B;&#x9686;&#x53CA;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

[&#x9EC4;&#x82B1;&#x84BF; p450 &#x6C27;&#x5316; cDNA &#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;]&#x3002;

Cloning and bioinformatics analysis of P450 cDNA in Artemisia annua.

[Cloning and bioinformatics analysis of P450 cDNA in Artemisia annua].

Analyse de clonage et de la bioinformatique du cDNA P450 dans Artemisia annua.

[Analyse clonage et de la bioinformatique du cDNA P450 dans Artemisia annua].

Klonen und Bioinformatik Analyse der P450 cDNA in Einj&auml;hriger Beifu&szlig;.

[Cloning und Bioinformatik Analyse der P450 cDNA in Artemisia Annua].

Clonazione e Bioinformatica analisi del cDNA del P450 in Artemisia annua.

[Analisi clonazione e bioinformatica di cDNA P450 in Artemisia annua].

&#x9EC4;&#x82B1;&#x84BF;&#x306E; P450 cDNA &#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x3002;

[&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x9EC4;&#x82B1;&#x84BF;&#x306E; P450 cDNA &#x306E;]&#x3002;

&#xC544; &#xB974; &#xD14C; &#xBBF8;&#xC2DC; annua&#xC758; P450 Cdna&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559; &#xBD84;&#xC11D;.

[&#xC544; &#xB974; &#xD14C; &#xBBF8;&#xC2DC; annua&#xC758; P450 Cdna&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559; &#xBD84;&#xC11D;].

An&aacute;lisis de clonaci&oacute;n y bioinform&aacute;tica del cDNA P450 en Artemisia annua.

[An&aacute;lisis de clonaci&oacute;n y bioinform&aacute;tica del cDNA P450 en Artemisia annua].

&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4&#xFF0C;11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x5408;&#x9176;&#x662F;&#x4ECE;&#x9EC4;&#x82B1;&#x84BF;&#x514B;&#x9686;&#x5176;&#x4ED6;&#x7F16;&#x7801;&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;&#x5408;&#x6210;&#x9176; (&#x5236;&#x5242;) &#x548C;&#x82F1;&#x56FD;&#x653F;&#x5E9C; CoA &#x8FD8;&#x539F;&#x9176; (HMGR) &#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x514B;&#x9686;&#x4ECE;&#x5564;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x3002;&#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x6269;&#x589E;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86; DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x3002;&#x5EFA;&#x9020;&#x4E86;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x540D;&#x4E3A; pGBT9/A/&#x82F1;&#x56FD;/&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;&#x5BB9;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E3A;&#x82F1;&#x56FD;&#x653F;&#x5E9C; CoA &#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x548C;&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;&#x5408;&#x9176;&#x53CA;&#x5176;&#x4ED6; pYeDP60/G/AS&#xFF0C;&#x5305;&#x542B;&#x7F16;&#x7801;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4,11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5EFA;&#x9020;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E24;&#x79CD;&#xFF1A; &#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x88AB;&#x8BC4;&#x4E3A;&#x96A7; [AS]&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x8F7D;&#x6709;&#x8D28;&#x7C92; pYeDP60/G/AS;&#x7B2C;&#x4E8C;&#xFF0C;&#x897F;&#x96A7; [&#x82F1;&#x56FD;&#x653F;&#x5E9C; + &#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38; + AS]&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; cotransformation &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; LiOAc &#x4E0E; PEG4000 &#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86; pGBT9/A/&#x82F1;&#x56FD;/&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;&#x548C; pYeDP60/G/AS &#x7684;&#x5411;&#x91CF;&#x3002;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x5C06;&#x88AB;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x53D1;&#x9175;&#x3002;&#x6837;&#x54C1;&#x4ECE;&#x9175;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4,11-&#x53CC;&#x70EF;&#x7684;&#x6C14;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4EA7;&#x751F;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4,11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x70C3;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x897F;&#x96A7; [&#x82F1;&#x56FD;&#x653F;&#x5E9C; + &#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38; + AS] &#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4,11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x70C3;&#x751F;&#x4EA7;&#x548C;&#x897F;&#x96A7; [&#x56E0;&#x4E3A;] &#x662F; 23.6 x L(-1) &#x548C; 10 microg &#x6BEB;&#x514B; x L(-1)&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x5176;&#x6D53;&#x5EA6;&#x88AB;&#x62A5;&#x544A;&#x4E3A; valencene &#x7684;&#x7B49;&#x6548;&#x9879;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A; HMGR &#x548C;&#x5236;&#x5242;&#x57FA;&#x56E0;&#x526F;&#x672C;&#x589E;&#x52A0;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4&#xFF0C;11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x70C3;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x9175;&#x6BCD;&#x53D1;&#x9175;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;

[&#x82F1;&#x56FD;&#x653F;&#x5E9C; CoA &#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x548C;&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x62F7;&#x8D1D;&#x6570;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E86; amorpha4&#x3001; 11 &#x4E8C;&#x70EF;&#x70C3;&#x751F;&#x4EA7;&#x4E2D;&#x9175;&#x6BCD;]&#x3002;

The gene encoding amorpha-4, 11-diene synthase was cloned from Artemisia annua L. Other two genes encoding the FPP synthase (FPPS) and HMG-CoA reductase (HMGR) were cloned from Saccharomyces cerevisiae. The cloned cDNAs were confirmed by DNA sequencing. Two expression vectors were constructed, one is named pGBT9/A/HMG/FPP harboring genes for HMG-CoA reductase and FPP synthase and the other is pYeDP60/G/AS, containing the gene encoding amorpha-4,11-diene synthase. Two kinds of engineered yeast were constructed: the first was named WHT [AS], which contained the plasmid pYeDP60/G/AS; the second was WHT [HMG + FPP + AS], in which the vectors pGBT9/A/ HMG/FPP and pYeDP60/G/AS were introduced by cotransformation mediated with LiOAc and PEG4000. The positive clones were identified for further fermentations. The samples from fermentations were analyzed by GC-MS for amorpha-4,11-diene. The results show that engineered yeasts could produce amorpha-4,11-diene. Moreover, the amorpha-4,11-diene production of WHT[ HMG + FPP + AS] and WHT[ AS] were 23.6 mg x L(-1) and 10 microg x L(-1), respectively. Its concentrations were reported as equivalents of valencene. The results showed the copy number increase of HMGR and FPPS genes can improve the production of amorpha-4, 11-diene in the fermentation of engineered yeasts.

[Increase of copy number of HMG-CoA reductase and FPP synthase genes improves the amorpha4,11-diene production in engineered yeast].

Le g&egrave;ne codant amorpha-4, 11-di&egrave;ne synthase a &eacute;t&eacute; clon&eacute; &agrave; partir d&#39;Artemisia annua L. Autres deux g&egrave;nes codant pour la FPP synthase (FPP) et la HMG-CoA r&eacute;ductase (HMGR) ont &eacute;t&eacute; clon&eacute;s chez Saccharomyces cerevisiae. Les ADNc clon&eacute;s ont &eacute;t&eacute; confirm&eacute;s par le s&eacute;quen&ccedil;age de l&#39;ADN. Deux vecteurs d&#39;expression ont &eacute;t&eacute; construits, l&#39;un est nomm&eacute; pGBT9/A/HMG/FPP g&egrave;nes h&eacute;bergeant de r&eacute;ductase de HMG-CoA synthase FPP et l&#39;autre est pYeDP60/G/AS, contenant le g&egrave;ne codant pour la synthase amorpha-4,11-di&egrave;ne. Deux sortes de levures modifi&eacute;es ont &eacute;t&eacute; construits : le premier a &eacute;t&eacute; nomm&eacute; WHT [AS], qui contenait le plasmide pYeDP60/G/AS ; le second &eacute;tait WHT [HMG + FPP + AS], dans laquelle les vecteurs pGBT9/A/HMG/FPP et pYeDP60/G/AS ont &eacute;t&eacute; introduites de co-transformation v&eacute;hicul&eacute;e par LiOAc et PEG4000. Les clones positifs ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s pour les fermentations plus loin. Les &eacute;chantillons de fermentations ont &eacute;t&eacute; analys&eacute;s par GC-MS pour amorpha-4,11-di&egrave;ne. Les r&eacute;sultats montrent que les levures d&#39;ing&eacute;nierie pourraient produire amorpha-4,11-di&egrave;ne. En outre, la production d&#39;amorpha-4,11-di&egrave;ne de WHT [HMG + FPP + AS] et WHT [comme] &eacute;taient mg 23,6 x L(-1) et des 10 microg x L(-1), respectivement. Ses concentrations ont &eacute;t&eacute; signal&eacute;es comme &eacute;quivalents de valencene. Les r&eacute;sultats montrent que l&#39;augmentation du nombre de copie des g&egrave;nes HMGR et FPP peut am&eacute;liorer la production d&#39;amorpha-4, 11-di&egrave;ne dans la fermentation des levures modifi&eacute;es.

[Augmentation du nombre de copies de l&#39;HMG-CoA r&eacute;ductase et g&egrave;nes de synthase FPP am&eacute;liore l&#39;amorpha4, la production de 11-di&egrave;ne chez la levure machin&eacute;].

Gen f&uuml;r Amorpha-4, wurde 11-dien-Synthase aus Artemisia Annua L. geklont. Andere zwei Gene, die Codierung der FPP-Synthase (FPP) und HMG-CoA-Reduktase (HMGR) wurden von Saccharomyces Cerevisiae geklont. Der geklonte cDNAs wurden durch DNA-Sequenzierung best&auml;tigt. Zwei Expressionsvektoren gebaut wurden, eine hei&szlig;t pGBT9/A/HMG/FPP Entwurfsdokumente Gene f&uuml;r HMG-CoA-Reduktase und FPP-Synthase und die andere ist pYeDP60/G/AS, welches das Gen Kodierung Amorpha-4,11-dien-Synthase. Zwei Arten von ver&auml;nderter Hefe wurden gebaut: die erste hie&szlig; WHT [AS], enthielt die Plasmid-pYeDP60/G/AS; der zweite war WHT [HMG + FPP + AS], in denen die Vektoren pGBT9/A/HMG/FPP und pYeDP60/G/AS durch Cotransformation vermittelt mit LiOAc und PEG4000 eingef&uuml;hrt wurden. Die positive Klone wurden f&uuml;r weitere Fermentationen identifiziert. Die Beispiele von Fermentationen wurden f&uuml;r Amorpha-4,11-dien von GC-MS analysiert. Die Ergebnisse zeigen, die Hefen entwickelt k&ouml;nnten Amorpha-4,11-dien produzieren. Dar&uuml;ber hinaus die Amorpha-4,11-dien-Produktion von WHT [HMG + FPP + AS] und WHT [wie] waren 23,6 mg x L(-1) und 10 &micro;g x L(-1), beziehungsweise. Ihre Konzentrationen wurden als &Auml;quivalente von Valencene gemeldet. Die Ergebnisse zeigten, dass die Kopie Zahlzunahme HMGR und FPP-Gene die Produktion von Amorpha-4, 11-dien in der Fermentation von ver&auml;nderter Hefen verbessern kann.

[Erh&ouml;hung der Nummer der Ausfertigung der HMG-CoA-Reduktase und FPP-Synthase Gene verbessert die amorpha4, 11-dien-Produktion in ver&auml;nderter Hefe].

Il gene che codifica per amorpha-4, 11-diene sintasi &egrave; stato clonato da Artemisia annua L. Altri due geni che codificano la FPP sintasi (FPP) e HMG-CoA reduttasi (HMGR) sono stati duplicati da Saccharomyces cerevisiae. I cDNAs clonati sono stati confermati dal sequenziamento del DNA. Furono costruiti due vettori di espressione, uno denominato pGBT9/A/HMG/FPP harboring geni per la riduttasi di HMG-CoA sintasi FPP e l&#39;altro &egrave; pYeDP60/G/AS, contenente il gene che codifica per amorpha-4.11-diene sintasi. Furono costruiti due tipi di lievito ingegnerizzato: il primo &egrave; stato denominato WHT [AS], che conteneva il plasmide pYeDP60/G/AS; il secondo era WHT [FPP, HMG + AS], in cui i vettori pGBT9/A/HMG/FPP e pYeDP60/G/AS sono stati introdotti da cotransformation mediata con LiOAc e PEG4000. I cloni positivi sono stati identificati per ulteriori fermentazioni. I campioni da fermentazioni sono stati analizzati mediante GC-MS per amorpha-4.11-diene. I risultati mostrano che ingegnerizzato lieviti potrebbero produrre amorpha-4.11-diene. Inoltre, la produzione di amorpha-4.11-diene di WHT [HMG + FPP AS] e WHT [come] erano 23,6 mg x L(-1) e 10 microg x L(-1), rispettivamente. Le concentrazioni sono stati segnalati come equivalenti di valencene. I risultati hanno mostrato che l&#39;aumento di numero di copia dei geni HMGR e FPP pu&ograve; migliorare la produzione di amorpha-4, 11-diene nella fermentazione dei lieviti ingegnerizzati.

[Aumento del numero di copie di HMG-CoA reduttasi e geni sintasi FPP migliora la amorpha4, 11-diene produzione nel lievito ingegnerizzato].

&#x64AD;&#x7A2E; 4 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3; &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x9EC4;&#x82B1;&#x84BF; L. &#x304B;&#x3089;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9; FPP &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; (FPP) &#x3068; Hmg-coa &#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20; (HMGR&#xFF09; &#x4ED6; 2 &#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x9175;&#x6BCD;&#x304B;&#x3089;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x3089;&#x308C;&#x305F; cDNAs DNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x304C;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30EB; CoA &#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068; FPP &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E; pYeDP60/G/AS&#x3001;: &#x64AD;&#x7A2E;-4,11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3; &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E; pGBT9/A/&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30EB;/FPP &#x306E;&#x96A0;&#x308C;&#x5BB6;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x540D;&#x524D;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E; 2 &#x7A2E;&#x985E;&#x304C;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#xFF1A; &#x6700;&#x521D;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; pYeDP60/G/AS; &#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066; WHT [AS]&#x3001;&#x547D;&#x540D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E; pGBT9/A/&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30EB;/FPP &#x306E;&#x3068; pYeDP60/G/AS &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x5A92;&#x4ECB; LiOAc &#x3068; PEG4000 &#x3068; cotransformation &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F; WHT [&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30EB; + FPP + AS] &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x80AF;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x767A;&#x9175;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x767A;&#x9175;&#x304B;&#x3089;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;: &#x64AD;&#x7A2E;-4,11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x306E; GC-MS &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x884C;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;: &#x64AD;&#x7A2E;-4,11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x3092;&#x4F5C;&#x308A;&#x51FA;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;WHT [&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30EB; + FPP &#x3068;&#x3057;&#x3066;]: &#x64AD;&#x7A2E;-4,11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x751F;&#x7523;&#x3068; 23.6 mg x L(-1) &#x3068; 10 0.5&#x3001;5&#x3001;50&#x3001;500 [&#x3068;&#x3057;&#x3066;] WHT x L(-1)&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F; valencene &#x306E;&#x540C;&#x7B49;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;FPPS &#x304A;&#x3088;&#x3073; HMGR &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x6570;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;: &#x64AD;&#x7A2E;-4, 11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x767A;&#x9175;&#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

[&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30EB; CoA &#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068; FPP &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x6570;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x5411;&#x4E0A; amorpha4&#x3001;11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x751F;&#x7523;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;]&#x3002;

&#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4 &#xC9C4; 11-&#xB514; &#xC5D4; synthase &#xC544; &#xB974; &#xD14C; &#xBBF8;&#xC2DC; annua L.&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xB450; &#xC720;&#xC804;&#xC790; FPP synthase (FPPS)&#xC640; HMG-CoA reductase (HMGR) &#xC778;&#xCF54;&#xB529; Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C;. &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; cDNAs DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xC2DD;&#xC744; &#xBCA1;&#xD130; &#xAC74;&#xC124; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;, HMG-CoA reductase&#xC640; FPP synthase&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; pYeDP60/G/AS, &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xB514; &#xC5D4; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11 synthase &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; pGBT9/A/HMG/FPP &#xC740;&#xB2C9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB77C;&#xACE0; &#xD558;&#xB098;. &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0;&#xB294; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC885;&#xB958;&#xAC00; &#xAC74;&#xC124; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;: &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; pYeDP60/G/AS; WHT [AS] &#xC120;&#xC815; &#xB410;&#xB2E4; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8;&#xB294; WHT [HMG + FPP + AS] &#xBCA1;&#xD130; pGBT9/A/HMG/FPP&#xC640; pYeDP60/G/AS cotransformation LiOAc &#xBC0F; peg4000&#xC640; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB3C4;&#xC785; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBCF5;&#xC81C;&#xD488; &#xB354; fermentations&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. Fermentations&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11-&#xB514; &#xC5D4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; GC-MS&#xB85C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. Yeasts &#xC124;&#xACC4; &#xACB0;&#xACFC; &#xC1FC; &#xB514; &#xC5D4; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11 &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, WHT [HMG + FPP + AS] &#xB514; &#xC5D4; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11 &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC0F; WHT [&#xC73C;&#xB85C;] L(-1) 10 microg x 23.6 mg &#xD588;&#xB2E4; L(-1), x &#xAC01;&#xAC01;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; valencene&#xC758; &#xB4F1;&#xAC00;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xB3C4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; HMGR &#xBC0F; FPPS &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; &#xC218; &#xC99D;&#xAC00; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4, &#xC124;&#xACC4; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xBC1C;&#xD6A8;&#xC5D0; 11 &#xB514; &#xC5D4;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;.

[HMG-CoA reductase&#xC640; FPP synthase &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC0AC;&#xBCF8; &#xC22B;&#xC790;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; amorpha4, &#xC124;&#xACC4; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; 11 &#xB514; &#xC5D4; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD5A5;&#xC0C1;].

El gene que codifica el Amphora-4, 11-dieno synthase fue reproducido de Artemisia annua L. Otros dos genes que codifican la FPP synthase (FPP) y HMG-CoA reductasa (HMGR) fueron clonados de Saccharomyces cerevisiae. Los cDNAs clonados fueron confirmados por secuenciaci&oacute;n del ADN. Se construyeron dos vectores de expresi&oacute;n, una se llama pGBT9/A/HMG/FPP que genes de HMG-CoA reductasa y FPP synthase y el otro es pYeDP60/G/AS, que contienen el gen que codifica la amorpha-4,11-dieno sintasa. Se construyeron dos tipos de levadura Ingenier&iacute;a: el primero fue nombrado WHT [AS], que conten&iacute;a el pl&aacute;smido pYeDP60/G/AS; el segundo fue WHT [HMG + FPP AS], en que los vectores pGBT9/A/HMG/FPP y pYeDP60/G/AS fueron introducidos por cotransformation mediado con LiOAc y PEG4000. Se identificaron los clones positivos para otras fermentaciones. Se analizaron las muestras de fermentaciones por GC-MS para amorpha-4,11-dieno. Los resultados muestran que dise&ntilde;ado levaduras podr&iacute;an producir amorpha-4,11-dieno. Por otra parte, la producci&oacute;n de amorpha-4,11-dieno de WHT [HMG, FPP + AS] y WHT [como] fueron 23,6 mg x 10 microg y L(-1) x L(-1), respectivamente. Sus concentraciones se informaron como equivalentes de VALENCENO. Los resultados mostraron que el aumento del n&uacute;mero de copia de genes HMGR y FPP puede mejorar la producci&oacute;n de amorpha-4, 11-dieno en la fermentaci&oacute;n de las levaduras de ingenier&iacute;a.

[Aumento de n&uacute;mero de copia de HMG-CoA reductasa y FPP synthase genes mejora la producci&oacute;n de 11-dieno en ingenier&iacute;a levadura, amorpha4].

&#x8D28;&#x7C92; pET32CPS &#x5BB9; SmCPS &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x88AB;&#x8F6C;&#x53D8;&#x6210;&#x5BFC;&#x81F4;&#x91CD;&#x7EC4;&#x682A;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; [pET32CPS] &#x7684; trxB &#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; BL21 (DE3)&#x3002;[PET32CPS] &#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x6E29;&#x5EA6;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x65F6;&#x95F4;&#x3001; IPTG &#x6D53;&#x5EA6;&#x548C; A600 &#x503C;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x611F;&#x5E94;&#x88AB;&#x6267;&#x884C;&#x3002;SmCPS &#x7684;&#x6700;&#x4F73;&#x8868;&#x8FBE;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x6839;&#x636E;&#x6B63;&#x4EA4;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x548C;&#x5174;&#x8DA3;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x603B;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6BD4;&#x7387;&#x8FBE;&#x5230;&#x81F3; 35.6%&#x3002;SmCPS &#x86CB;&#x767D;&#x7531; Ni2 + &#x4EB2;&#x548C;&#x5C42;&#x6790;&#x67F1;&#x7EAF;&#x5316;&#x91CD;&#x7EC4;&#x662F;&#x7531; SDS-&#x548C;&#x897F;&#x65B9;&#x5370;&#x8FF9;&#xFF0C;&#x6807;&#x8BC6;&#x7136;&#x540E;&#x7528;&#x4E8E;&#x5154;&#x514D;&#x75AB;&#x63A5;&#x79CD;&#x3002;&#x5154; SmCPS &#x6297;&#x8840;&#x6E05;&#x7684;&#x6EF4;&#x5EA6;&#x662F; 1&#xFF1A; 24 300 &#x540E;&#x7B2C;&#x4E09;&#x6B21;&#x514D;&#x75AB;&#x63A5;&#x79CD;&#xFF0C;&#x548C;&#x5177;&#x4F53;&#x53EF;&#x7531;&#x897F;&#x65B9;&#x86CB;&#x767D;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x8BA4; SmCPS &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x3002;&#x7B79;&#x5907; SmCPS &#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x6210;&#x529F;&#x5960;&#x5B9A;&#x4E86;&#x57FA;&#x7840;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; SmCPS &#x548C;&#x751F;&#x4EA7;&#x4E39;&#x53C2;&#x916E;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

[&#x4F18;&#x5316;&#x8868;&#x8FBE;&#x3001; &#x7EAF;&#x5316;&#x4E39;&#x53C2;&#x4E39;&#x53C2; copalyl &#x4E8C;&#x78F7;&#x9178;&#x5408;&#x9176;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x91CD;&#x7EC4;&#x53CA;&#x5236;&#x5907;&#x5154;&#x6297; SmCPS]&#x3002;

The expression plasmid pET32CPS harboring SmCPS gene was transformed into E. coli BL21 trxB (DE3) resulting in recombinant strain E. coli [pET32CPS]. The induction of E. coli [pET32CPS] in different temperatures, induction time, IPTG concentrations and A600 values of E. coli were performed. The optimal expression conditions of SmCPS were characterized according to the orthogonal analysis, and the ratio of the interest protein to total proteins reached to 35.6%. The recombinant SmCPS protein purified by Ni2+ affinity chromatography column was identified by SDS-PAGE and Western blotting, and then used for rabbit immunization. The titer of the rabbit antiserum against SmCPS was about 1:24 300 after the third immunization, and could specifically recognize the antigen of SmCPS protein by Western blotting analysis. The successful preparation of polyclonal antibody against SmCPS laid a foundation for further correlative study between expression of SmCPS and the production of tanshinones in protein level.

[Optimizing expression and purification of recombinant Salvia miltiorrhiza copalyl diphosphate synthase protein in E. coli and preparation of rabbit antiserum against SmCPS].

Le g&egrave;ne expression plasmide pET32CPS renfermant SmCPS a &eacute;t&eacute; transform&eacute; en trxB d&#39;e. coli BL21 (DE3) ayant pour r&eacute;sultat la souche recombinante e. coli [pET32CPS]. L&#39;induction d&#39;e. coli [pET32CPS] &agrave; diff&eacute;rentes temp&eacute;ratures, temps d&#39;induction, les concentrations de IPTG et A600 valeurs d&#39;e. coli ont &eacute;t&eacute; effectu&eacute;es. Les conditions d&#39;une expression optimale de SmCPS ont &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute;es selon l&#39;analyse orthogonal, et le ratio de la prot&eacute;ine d&#39;int&eacute;r&ecirc;t aux prot&eacute;ines totales ont atteint 35,6 %. Le recombinant SmCPS prot&eacute;ine purifi&eacute;e par la colonne de chromatographie d&#39;affinit&eacute; Ni2 + a &eacute;t&eacute; identifi&eacute; par SDS-PAGE et Western Blot et ensuite utilis&eacute; pour l&#39;immunisation de lapin. Le titre de l&#39;antis&eacute;rum de lapin contre SmCPS &eacute;tait d&#39;environ 1:24 300 apr&egrave;s la troisi&egrave;me de la vaccination et pourrait reconna&icirc;tre express&eacute;ment l&#39;antig&egrave;ne de prot&eacute;ine SmCPS par Western Blot de l&#39;analyse. Le succ&egrave;s de la pr&eacute;paration des anticorps polyclonaux contre SmCPS jet&eacute; les bases pour les plus de l&#39;&eacute;tude corr&eacute;lative entre l&#39;expression de la SmCPS et la production de tanshinones au niveau de la prot&eacute;ine.

[Optimisation expression et purification de recombinaison de Salvia miltiorrhiza copalyl diphosphate synthase prot&eacute;ines dans e. coli et la pr&eacute;paration de l&#39;antis&eacute;rum de lapin contre SmCPS].

Das Ausdruck Plasmid pET32CPS Entwurfsdokumente SmCPS gen verwandelte sich in TrxB von E. Coli BL21 (DE3) was zu rekombinanten Stamm E. Coli [pET32CPS]. Die Induktion von E. Coli [pET32CPS] in verschiedenen Temperaturen, Induktionszeit, IPTG Konzentrationen und A600 Werte von E. Coli wurden durchgef&uuml;hrt. Die optimalen Ausdruck-Bedingungen der SmCPS zeichneten sich nach der orthogonalen Analyse und das Verh&auml;ltnis des Proteins Interesse an total Proteine auf 35,6 % erreicht. Rekombinante SmCPS-Protein, das von Ni2 + Affinit&auml;t Chromatographie Spalte wurde durch SDS-PAGE und westliche Beflecken identifiziert und dann f&uuml;r die Kaninchen Immunisierung verwendet. Der das Kaninchen-Antiserum gegen SmCPS-Titer war &uuml;ber 1:24 300 nach der dritten Impfung, und speziell das Antigen der SmCPS Protein von westlichen befleckenden Analyse erkennen konnte. Die erfolgreiche Vorbereitung der polyklonalen Antik&ouml;rpern gegen SmCPS Grundstein ein f&uuml;r weitere Korrelative Studie zwischen Ausdruck der SmCPS und die Produktion von Tanshinones in Protein-Ebene.

[Optimierung Expression und Reinigung von rekombinanten Salvia Miltiorrhiza Copalyl Diphosphat Synthase Protein in E. Coli und Vorbereitung der Kaninchen Antiserum gegen SmCPS].

Il gene espressione del plasmide pET32CPS harboring SmCPS fu trasformato in e. coli BL21 trxB (DE3) con conseguente ricombinante ceppo e. coli [pET32CPS]. L&#39;induzione di e. coli [pET32CPS] a diverse temperature, tempo di induzione, concentrazioni di IPTG e A600 valori di Escherichia coli sono stati eseguiti. Le condizioni ottimali di espressione di SmCPS sono state caratterizzate secondo l&#39;analisi ortogonale, e il rapporto tra la proteina di interesse alle proteine totale raggiunto al 35,6%. Ricombinante SmCPS proteina purificata Ni2 + colonna di cromatografia di affinit&agrave; &egrave; stato identificato da SDS-PAGE e Western blotting e quindi utilizzato per immunizzazione del coniglio. Il titolo dell&#39;antisiero di coniglio contro SmCPS era di circa 1:24 300 dopo immunizzazione al terzo e in particolare potrebbe riconoscere l&#39;antigene della proteina SmCPS di analisi macchiantesi occidentali. La preparazione di successo di anticorpo policlonale contro SmCPS gettato basi per ulteriore studio correlativo tra espressione di SmCPS e la produzione di tanshinones a livello di proteine.

[Ottimizzazione espressione e purificazione della proteina Salvia miltiorrhiza copalyl difosfato sintasi in e. coli ricombinante e preparazione dell&#39;antisiero di coniglio contro SmCPS].

&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; pET32CPS &#x306E;&#x96A0;&#x308C;&#x5BB6;&#x7684; SmCPS &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC; [pET32CPS] &#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x5927;&#x8178;&#x83CC; BL21 trxB (DE3) &#x306B;&#x5909;&#x8EAB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5927;&#x8178;&#x83CC; [pET32CPS] &#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6E29;&#x5EA6;, &#x8A98;&#x5C0E;&#x6642;&#x9593;&#x3001;IPTG &#x6FC3;&#x5EA6;&#x304A;&#x3088;&#x3073; A600 &#x5024;&#x306E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;SmCPS &#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x6761;&#x4EF6;&#x76F4;&#x4EA4;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308C;&#x3070;&#x3001;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3001;35.6 &#xFF05; &#x306B;&#x7DCF;&#x86CB;&#x767D;&#x306B;&#x95A2;&#x5FC3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6BD4;&#x7387;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; SmCPS &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; ni 2 + &#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;&#x30AB;&#x30E9;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x305F; SDS &#x30DA;&#x30FC;&#x30B8;&#x3068;&#x3001;&#x30A6;&#x30A8;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SmCPS &#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x6297;&#x8840;&#x6E05;&#x529B;&#x4FA1;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x3060;&#x3063;&#x305F; 1:24 300 3 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x5F8C;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x897F;&#x90E8;&#x306E;&#x3057;&#x307F;&#x304C;&#x4ED8;&#x304F;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; SmCPS &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6210;&#x529F;&#x306E;&#x6E96;&#x5099; SmCPS &#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306E; SmCPS &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E; tanshinones &#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3068;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x76F8;&#x95A2;&#x7814;&#x7A76;&#x8CA1;&#x56E3;&#x30EC;&#x30A4;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x3002;

[&#x30B5;&#x30EB;&#x30D3;&#x30A2;&#x4F5C;&#x7528;&#x30B3;&#x30D1;&#x30EA;&#x30EB;&#x30CB;&#x30EA;&#x30F3;&#x4E8C;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30A8;&#x30B7;&#x30A7;&#x30EA;&#x30D2;&#x30A2;&#x5C5E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x6D44;&#x5316;&#x3068; SmCPS &#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x6297;&#x8840;&#x6E05;&#x306E;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3068;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;]&#x3002;

&#xC2DD; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; pET32CPS &#xC740;&#xB2C9; SmCPS &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; [pET32CPS]&#xC774; &#xD53C;&#xB85C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; BL21 trxB (DE3)&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xBAA8; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; [pET32CPS] &#xB2E4;&#xB978; &#xC628;&#xB3C4;, &#xC720;&#xB3C4; &#xC2DC;&#xAC04;, IPTG &#xB18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; A600 &#xAC12;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. Smcps&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC2DD; &#xC870;&#xAC74; &#xC9C1;&#xAD50; &#xBD84;&#xC11D; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xCD1D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC2EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC740; 35.6%&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC;. Ni2 + &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xCE7C;&#xB7FC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xD654; &#xD558;&#xB294; SmCPS &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; SDS &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xC640; Western blotting, &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xD1A0;&#xB07C; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Smcps&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1A0;&#xB07C; &#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC811;&#xC885; &#xD6C4; 1:24 300 &#xBD80; &#xB7FD; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; SmCPS &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC778;&#xC2DD; &#xD2B9;&#xBCC4;&#xD788; &#xC218; &#xACE0;. Smcps&#xC5D0; &#xB300;&#xD558;&#xC5EC; polyclonal &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xC900;&#xBE44; Smcps&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; tanshinones&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC0AC;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC9C4;&#xD559;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB9C8;&#xB828; &#xD588;&#xB2E4;.

[&#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xC0D0;&#xBE44;&#xC5B4; miltiorrhiza copalyl diphosphate synthase &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC815;&#xC81C; &#xBC0F; Smcps&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1A0;&#xB07C; &#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC900;&#xBE44;].

El gen de SmCPS que expresi&oacute;n pl&aacute;smido pET32CPS se transform&oacute; en e. coli BL21 trxB (DE3) dando por resultado la cepa recombinante Escherichia coli [pET32CPS]. La inducci&oacute;n de e. coli [pET32CPS] en diferentes temperaturas, tiempo de inducci&oacute;n y concentraciones de IPTG A600 valores de e. coli fueron realizados. Seg&uacute;n el an&aacute;lisis ortogonal se caracterizaron las condiciones &oacute;ptimas de la expresi&oacute;n de SmCPS, y la relaci&oacute;n de la prote&iacute;na de inter&eacute;s para prote&iacute;nas totales alcanzaron a 35,6%. El recombinante SmCPS prote&iacute;na purificada por la columna de cromatograf&iacute;a de afinidad de Ni2 + fue identificada por SDS-PAGE y Western Blot y utilizarlas para la inmunizaci&oacute;n de conejo. El t&iacute;tulo del antisuero contra SmCPS conejo era de 1:24 300 despu&eacute;s de la tercera inmunizaci&oacute;n y espec&iacute;ficamente podr&iacute;a reconocer el ant&iacute;geno de la prote&iacute;na SmCPS por Western Blot an&aacute;lisis. La exitosa preparaci&oacute;n de anticuerpos policlonales contra SmCPS hab&iacute;a sentado las bases para el estudio adicional correlativa entre la expresi&oacute;n de SmCPS y la producci&oacute;n de tanshinones en el nivel de la prote&iacute;na.

[Optimizaci&oacute;n de la expresi&oacute;n y purificaci&oacute;n de recombinante prote&iacute;na Salvia miltiorrhiza copalyl difosfato sintasa e. coli y preparaci&oacute;n de antisuero de conejo contra SmCPS].

X 5 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; SARS &#x30B3;&#x30ED;&#x30CA; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x672A;&#x77E5;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x5C01;&#x5165;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C01;&#x5165;&#x4F53;&#x306F;&#x5C3F;&#x7D20;&#x306E;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB; &#x30C6;&#x30A3;&#x30FC; &#x30FB; &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x304C;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x6D44;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x524D;&#x3082;&#x3063;&#x3066;&#x4F5C;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x88FD;&#x54C1;&#x306F;&#x5C3F;&#x7D20;&#x306E;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067; refolded &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6D44;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x76EE; 95 &#xFF05; &#x306E;&#x7D14;&#x5EA6;&#x3068; 93.3 mg &#x306E;&#x53CE;&#x7387;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F; x L(-1)&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x897F;&#x90E8;&#x306E;&#x3057;&#x307F;&#x304C;&#x4ED8;&#x304F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; X 5 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E; 68 &#xFF05; LC ESI-MS/MS &#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

[&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x6E96;&#x5099; recombinat SARS &#x30B3;&#x30ED;&#x30CA; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; X 5 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;]&#x3002;

X 5 &#x86CB;&#x767D;&#x662F; Sars &#x7684;&#x5047;&#x5B9A;&#x5B58;&#x5728;&#x672A;&#x77E5;&#x86CB;&#x767D;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x5305;&#x6DB5;&#x4F53;&#x5F62;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x66FE;&#x6210;&#x529F;&#x5730;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x5305;&#x6DB5;&#x4F53;&#x6EB6;&#x89E3;&#x540E;&#x9AD8;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5C3F;&#x7D20;&#x3002;&#x4EB2;&#x548C;&#x5C42;&#x6790;&#x9884;&#x5236;&#x51C0;&#x5316;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x8BE5;&#x4EA7;&#x54C1; refolded &#x5728;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x5C3F;&#x7D20;&#x68AF;&#x5EA6;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x3002;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E0E; &gt; 95%&#x7684;&#x7EAF;&#x5EA6;&#x548C;&#x4EA7;&#x91CF;&#x7684; 93.3 &#x6BEB;&#x514B; x L(-1)&#x3002;&#x83B7;&#x5F97;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x548C;&#x897F;&#x65B9;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x5370;&#x8FF9;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;X 5 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6709;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x5F3A;&#x5927;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x7B2C;&#x516D;&#x5341;&#x4E00;&#x5C4A; 8%&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x5E8F;&#x5217;&#x786E;&#x8BA4;&#x4E86; LC--&#x8D28;&#x8C31;/&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

[&#x91CD;&#x7EC4; SARS &#x51A0;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2; X 5 &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3001; &#x7EAF;&#x5316;&#x53CA;&#x6297;&#x4F53;&#x5236;&#x5907;]&#x3002;

X5 protein is one of the putative unknown proteins of SARS-CoV. The recombinant protein has been successfully expressed in E. coli in the form of insoluble inclusion body. The inclusion body was dissolved in high concentration of urea. Affinity Chromatography was preformed to purify the denatured protein, and then the product was refolded in a series of gradient solutions of urea. The purified protein was obtained with the purity of > 95% and the yield of 93.3 mg x L(-1). Polyclonal antibody of this protein was obtained, and Western blotting assay indicated that the X5 protein has the strong property of antigen. Sixty-eight percent of the recombinant protein sequence was confirmed by LC-ESI-MS/MS analysis.

[Expression, purification and antibody preparation of recombinat SARS-CoV X5 protein].

5 X prot&eacute;ine est l&#39;une des prot&eacute;ines inconnues putatifs du SARS-CoV. La prot&eacute;ine recombinante a &eacute;t&eacute; exprim&eacute;e avec succ&egrave;s chez e. coli dans la forme de corps d&#39;inclusion insolubles. Le corps d&#39;inclusion a &eacute;t&eacute; dissoute en forte concentration d&#39;ur&eacute;e. Chromatographie d&#39;affinit&eacute; est pr&eacute;form&eacute;e pour purifier la prot&eacute;ine d&eacute;natur&eacute;e, et alors le produit a &eacute;t&eacute; repli&eacute; dans une s&eacute;rie de solutions gradients d&#39;ur&eacute;e. La prot&eacute;ine purifi&eacute;e a &eacute;t&eacute; obtenue avec la puret&eacute; de &gt; 95 % et le rendement de 93,3 mg x L(-1). Des anticorps polyclonaux de cette prot&eacute;ine a &eacute;t&eacute; obtenue, et dosage &eacute;pongeant occidental a indiqu&eacute; que le X 5 prot&eacute;ine poss&egrave;de le fort de l&#39;antig&egrave;ne. Soixante-huit pour cent de la s&eacute;quence de la prot&eacute;ine recombinante a &eacute;t&eacute; confirm&eacute;e par l&#39;analyse de LC-ESI-MS/MS.

[Expression, purification et anticorps pr&eacute;paration de recombinat prot&eacute;ine SARS-CoV X 5].

X 5 Protein ist eines der vermeintlichen unbekannten Proteine des SARS-CoV. Das rekombinante Protein wurde erfolgreich in E. Coli in Form von unl&ouml;slich Einschlussk&ouml;rper ausgedr&uuml;ckt. Die Einschlussk&ouml;rper l&ouml;ste sich in hoher Konzentration von Harnstoff. Affinit&auml;tschromatographie wurde vorgeformt, um das denaturierte Protein zu reinigen, und dann wurde das Produkt in einer Reihe von gradient L&ouml;sungen von refaltet. Das gereinigte Protein erfolgte mit der Reinheit des &gt; 95 % und die Rendite von 93,3 mg x L(-1). Polyklonale Antik&ouml;rper dieses Proteins erworben wurde, und westlichen befleckenden Assay darauf hingewiesen, dass der X 5 Protein hat die starke Eigenschaft Antigen. 68 Prozent der rekombinanten Protein-Reihenfolge wurde LC-ESI-MS/MS-Analyse best&auml;tigt.

[Ausdruck, Reinigung und Antik&ouml;rper Vorbereitung der Recombinat SARS-CoV X 5 Protein].

5 X proteina &egrave; una delle proteine sconosciute putative di SARS-CoV. La proteina ricombinante &egrave; stata espressa con successo in e. coli in forma di corpo di inclusione insolubile. Il corpo di inclusione &egrave; stato dissolto in alta concentrazione di urea. Cromatografia di affinit&agrave; &egrave; stata preformata per purificare la proteina denaturata, e quindi il prodotto &egrave; stato ripiegato in una serie di soluzioni di gradiente di urea. La proteina purificata &egrave; stata ottenuta con la purezza &amp;gt; 95% e il rendimento di 93.3 mg x L(-1). Anticorpo policlonale di questa proteina &egrave; stata ottenuta, e dosaggio macchiante occidentali ha indicato che il 5 X proteina ha la forte propriet&agrave; dell&#39;antigene. Sessantotto per cento della sequenza della proteina ricombinante &egrave; stata confermata da analisi LC-ESI-MS/MS.

[Espressione, purificazione e anticorpo preparazione della recombinat proteina SARS-CoV X 5].

X 5 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; SARS Cov&#xC758; &#xC0C1; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131; &#xD3EC;&#xD568; &#xBC14;&#xB514;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xD568; &#xBC14;&#xB514; &#xC6B0; &#xB808; &#xC544;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD574;&#xC0B0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCE5C;&#xD654;&#xC131; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xB294; &#xBCC0;&#xC131;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC815;&#xD654; preformed &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC81C;&#xD488; &#xC6B0; &#xB808; &#xC544;&#xC758; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988;&#xC5D0;&#xC11C; refolded&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C;. &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &amp;gt; 95%&#xC758; &#xC21C;&#xB3C4;&#xC640; 93.3 mg &#xC218;&#xC728; &#xC5BB;&#xC740; L(-1) x. Polyclonal &#xD56D; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xAC00;&#xC838;&#xC628;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC11C; &#xBD80; &#xB7FD; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; X 5 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC758; &#xAC15;&#xD55C; &#xC18D;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; 60 %&#xB294; LC ESI MS/MS &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;.

[Recombinat SARS CoV X 5 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC2DD;, &#xC815;&#xD654; &#xBC0F; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC900;&#xBE44;].

X 5 prote&iacute;na es una de las prote&iacute;nas desconocidas putativas del SARS-CoV. La prote&iacute;na recombinante se ha expresado con &eacute;xito en e. coli en la forma de cuerpo de inclusi&oacute;n insoluble. El cuerpo de inclusi&oacute;n fue disuelto en la alta concentraci&oacute;n de urea. Cromatograf&iacute;a de afinidad fue preformado para purificar la prote&iacute;na desnaturalizada, y entonces el producto fue replegado en una serie de gradiente soluciones de urea. La prote&iacute;na purificada fue obtenida con la pureza del &gt; 95% y el rendimiento de 93.3 mg x L(-1). Se obtuvo un anticuerpo policlonal de esta prote&iacute;na, y Western Blot an&aacute;lisis indicaron que el X 5 prote&iacute;na tiene la caracter&iacute;stica fuerte de ant&iacute;geno. Sesenta y ocho por ciento de la secuencia de la prote&iacute;na recombinante fue confirmada por an&aacute;lisis de LC-ESI-MS/MS.

[Preparaci&oacute;n de expresi&oacute;n y purificaci&oacute;n de anticuerpos de recombinat SARS-CoV X 5 prote&iacute;na].

&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4,11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x5408;&#x9176; (ADS) &#x53EF;&#x4EE5;&#x8F6C;&#x6362;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4&#x3001; 11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x3001; &#x9752;&#x84BF;&#x7D20;&#x524D;&#x4F53;&#x7684;&#x91D1;&#x5408;&#x6B22;&#x7126;&#x78F7;&#x9178; (&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;&#xFF09;&#x3002;&#x5E7F;&#x544A;&#x7684;&#x9752;&#x84BF;&#x7D20;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x68C0;&#x8BA8;&#x603B;&#x7ED3;&#x4E86;&#x8FD1;&#x5E74;&#x6765;&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x548C;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x5E7F;&#x544A;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; DNA &#x548C;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4&#xFF0C;11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x5408;&#x9176; cDNA &#x5E8F;&#x5217;&#x662F;&#x4ECE;&#x9EC4;&#x82B1;&#x84BF;&#x514B;&#x9686;CDNA &#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4&#xFF0C;11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x5408;&#x9176;&#x5305;&#x542B; 546 &#x79CD;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7F16;&#x7801; 1 641 bp &#x5F00;&#x653E;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6;&#x3002;&#x5E7F;&#x544A;&#x663E;&#x793A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8F85;&#x52A9;&#x56E0;&#x5B50;&#x4F18;&#x5316;&#x5E7F;&#x6CDB; ph &#x503C;&#x548C;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x7EDD;&#x5BF9;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x57FA;&#x677F;&#x548C;&#x4EA7;&#x54C1;&#x5E7F;&#x544A;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x4E0D;&#x9AD8;&#x548C;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4&#x3001; 11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x4ECE;&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;&#x5E7F;&#x544A;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x521D;&#x6B65;&#x7684; 1&#xFF0C;6-&#x5C01;&#x95ED;&#x4E0E;&#x5176;&#x540E;&#x7684; 1&#xFF0C;10-&#x5173;&#x95ED;&#x3002;&#x5E7F;&#x544A; cDNA &#x514B;&#x9686;&#x4ECE;&#x9EC4;&#x82B1;&#x84BF; L&#xFF0C;&#x6216;&#x5B8C;&#x5168;&#x5408;&#x6210;&#x7684; PCR&#xFF0C;&#x5F15;&#x5165;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4E3B;&#x673A;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x3001; &#x9175;&#x6BCD;&#x3001; &#x70DF;&#x8349; L.&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x548C; A.&#x6784;&#x5DE2;&#x66F2;&#x9709;&#x9020;&#x6210;&#x5404;&#x79CD;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x4EA7;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4&#xFF0C;11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x3002;&#x5982;&#x4F55;&#x63D0;&#x9AD8;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4&#xFF0C;11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x7531;&#x4E24;&#x79CD;&#x7B56;&#x7565;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x57FA;&#x677F;&#x4F9B;&#x5E94;&#x548C;&#x4ECE;&#x7ADE;&#x4E89;&#x9014;&#x5F84;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4&#xFF0C;11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x70C3;&#x751F;&#x4EA7;&#x6307;&#x6325;&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;&#x901A;&#x91CF;&#x7B49;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;

[&#x6700;&#x65B0;&#x8FDB;&#x5C55;&#x7684;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4,11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x5408;&#x9176;&#x53CA;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x7814;&#x7A76;]&#x3002;

Amorpha-4,11-diene synthase (ADS) can convert farnesyl pyrophosphate (FPP) to amorpha-4, 11-diene, a precursor of artemisinin. ADS plays an important role in the biosynthesis of artemisinin. This review summarizes the molecular biology and metabolic engineering study of ADS in recent years. The genomic DNA and its cDNA sequences of amorpha-4, 11-diene synthase were cloned from Artemisia annua L. The cDNA encoding amorpha-4, 11-diene synthase contains a 1 641 bp open reading frame coding for 546 amino acids. ADS shows a broad pH optimum and an absolute requirement for divalent metal ions as cofactors. The specificity of ADS to the substrates and products is not high and the formation of amorpha-4, 11-diene by ADS from FPP is achieved by an initial 1, 6-closure with subsequent 1, 10-closure. The ADS cDNA cloned from Artemisia annua L, or totally synthesized by PCR, was introduced into different hosts including E. coli, S. cerevisiae, Nicotiana tabacum L. Arabidopsis thaliana and A. nidulans resulting in varied engineering microorganisms and cells producing amorpha-4, 11-diene. The way to improve the production of amorpha-4, 11-diene was investigated by two strategies such as improving the supply of substrate and directing FPP flux to amorpha-4, 11-diene production from competing pathways.

[Recent advances in the study of amorpha-4,11-diene synthase and its metabolic engineering].

Amorpha-4,11-di&egrave;ne synthase (ADS) peut convertir farn&eacute;syl pyrophosphate (FPP) amorpha-4, 11-di&egrave;ne, un pr&eacute;curseur de l&#39;art&eacute;misinine. ANNONCES joue un r&ocirc;le important dans la biosynth&egrave;se de l&#39;art&eacute;misinine. Cette revue r&eacute;sume la biologie mol&eacute;culaire et l&#39;&eacute;tude d&#39;ing&eacute;nierie m&eacute;tabolique des annonces ces derni&egrave;res ann&eacute;es. L&#39;ADN g&eacute;nomique et ses s&eacute;quences d&#39;ADNc d&#39;amorpha-4, 11-di&egrave;ne synthase ont &eacute;t&eacute; clon&eacute;s chez Artemisia annua L. L&#39;ADNc codant amorpha-4, 11-di&egrave;ne synthase contient une trame de lecture ouverte bp 1 641 codant pour 546 acides amin&eacute;s. ANNONCES montre un large pH optimum et une exigence absolue pour les ions m&eacute;talliques divalents comme cofacteurs. La sp&eacute;cificit&eacute; des annonces aux substrats et produits n&#39;est pas haute et la formation d&#39;amorpha-4, 11-di&egrave;ne par annonces de FPP est obtenue par une initiale 1, 6-fermeture avec ult&eacute;rieure 1, 10-fermeture. L&#39;ADNc annonces clon&eacute;e de l&#39;Artemisia annua L, ou totalement synth&eacute;tis&eacute; par PCR, a &eacute;t&eacute; introduit dans des h&ocirc;tes diff&eacute;rents, y compris E. coli, S. cerevisiae, Nicotiana tabacum L. Arabidopsis thaliana et a. nidulans entra&icirc;nant divers micro-organismes ing&eacute;nieries et cellules productrice amorpha-4, 11-di&egrave;ne. La fa&ccedil;on d&#39;am&eacute;liorer la production d&#39;amorpha-4, 11-di&egrave;ne a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e par deux strat&eacute;gies telles que l&#39;am&eacute;lioration de l&#39;offre du substrat et de diriger le flux FPP amorpha-4, 11-di&egrave;ne production de voies concurrentes.

[R&eacute;cents progr&egrave;s dans l&#39;&eacute;tude du synthase amorpha-4,11-di&egrave;ne et son g&eacute;nie m&eacute;tabolique].

Amorpha-4,11-dien-Synthase (ADS) kann in Amorpha-4, 11-dien, einen Vorl&auml;ufer des Artemisinin Farnesyl Diphosphate (FPP) konvertieren. Werbung spielt eine wichtige Rolle in der Biosynthese von Artemisinin. Diesen Bericht werden die Molekularbiologie und metabolische engineering-Studie von anzeigen in den letzten Jahren. Die genomische DNA und ihre DNA-Sequenzen von Amorpha-4, 11-dien-Synthase wurden von Artemisia Annua L. geklont. Die cDNA Kodierung Amorpha-4, enth&auml;lt 11-dien-Synthase eine 1 641 bp offene Leseraster f&uuml;r 546 Aminos&auml;uren kodieren. ADS zeigt einen breiten pH-optimum und eine unbedingte Voraussetzung f&uuml;r bivalente Metallionen als Kofaktoren. Die Besonderheit der anzeigen auf die Substrate und Produkte ist nicht hoch und die Bildung von Amorpha-4, 11-dien durch Anzeigen von FPP wird erreicht, indem eine anf&auml;ngliche 1, 6-Verschluss mit nachfolgenden 1, 10-Verschluss. Das ADS-cDNA aus Artemisia Annua L geklonten oder v&ouml;llig synthetisiert durch PCR, wurde eingef&uuml;hrt, in unterschiedlichen Hosts wie E. coli, S. Cerevisiae, Nicotiana Tabacum L. Arabidopsis Thaliana und A. Nidulans, was zu vielf&auml;ltigen technischen Mikroorganismen und Zellen produzieren Amorpha-4, 11-dien. Der Weg zur Verbesserung der Erzeugung von Amorpha-4, 11-dien wurde von zwei Strategien wie die Verbesserung der Versorgung mit Substrat und Regie FPP Flussmittel Amorpha-4, 11-dien-Produktion von konkurrierenden wegen untersucht.

[Aktuelle Fortschritte in der Studie von Amorpha-4,11-dien-Synthase und seine metabolic Engineering].

Amorpha-4.11-diene sintasi (ADS) possono convertire Synthase pirofosfato (FPP) amorpha-4, 11-diene, un precursore dell&#39;artemisinina. ANNUNCI gioca un ruolo importante nella biosintesi di artemisinina. Questa recensione riassume la biologia molecolare e studio di ingegneria metabolica di annunci negli ultimi anni. Il DNA genomico e le sequenze del cDNA di amorpha-4, 11-diene sintasi sono stati clonati da Artemisia annua L. Il cDNA che codifica amorpha-4, 11-diene sintasi contiene un 1 641 bp open reading frame coding per 546 amminoacidi. ANNUNCI Mostra un ampio pH ottimo e un requisito assoluto per bivalenti ioni metallici come cofattori. La specificit&agrave; degli annunci per i substrati ed i prodotti non &egrave; alto e la formazione di amorpha-4, 11-diene di annunci da FPP &egrave; raggiunto da un 1 iniziale, 6-chiusura con conseguente 1, 10-chiusura. ANNUNCI cDNA clonato da Artemisia annua L, o totalmente sintetizzato mediante PCR, &egrave; stata introdotta in diversi ospiti tra cui E. coli, S. cerevisiae, Nicotiana tabacum L. Arabidopsis thaliana e a. nidulans risultante in vari microrganismi ingegneria e cellule produttrici amorpha-4, 11-diene. Il modo per migliorare la produzione di amorpha-4, 11-diene &egrave; stato studiato da due strategie ad esempio migliorando il rifornimento di substrato e dirigendo il flusso FPP amorpha-4, 11-diene produzione da percorsi concorrenti.

[Recenti progressi nello studio della sua ingegneria metabolica e amorpha-4.11-diene sintasi].

&#x64AD;&#x7A2E;-4,11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; (ADS) &#x30D5;&#x30A1;&#x30EB;&#x30CD;&#x30B7;&#x30EB; &#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178; (FPP) &#x306F;: &#x64AD;&#x7A2E; 4, 11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;, &#x30A2;&#x30EB;&#x30C6;&#x30DF;&#x30B7;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5E83;&#x544A;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C6;&#x30DF;&#x30B7;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3068;&#x5E83;&#x544A;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x5DE5;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD1;&#x5E74;&#x3067;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9EC4;&#x82B1;&#x84BF; L. &#x304B;&#x3089;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; DNA &#x3068;&#x305D;&#x306E; cDNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;: &#x64AD;&#x7A2E; 4 11 &#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x5143;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x64AD;&#x7A2E; 4 &#x306E; cDNA &#x306B;&#x306F; 11 &#x30B8;&#x30A8;&#x30F3; &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x306F; 546 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; 1 641 bp &#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5E83;&#x544A;&#x306F;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x5E45;&#x5E83;&#x3044; pH &#x3068; 2&#x4FA1;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D76;&#x5BFE;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5E83;&#x544A;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x88FD;&#x54C1;: &#x64AD;&#x7A2E; 4 &#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x9AD8;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3001;11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3; FPP &#x306E;&#x5E83;&#x544A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3001;&#x521D;&#x671F; 1&#x3001;6-&#x9589;&#x9396;&#x3068;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E; 1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; 10 &#x9589;&#x9396;&#x3002;&#x5E83;&#x544A; cDNA &#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x9EC4;&#x82B1;&#x84BF; L&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F; pcr&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3001;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x3001;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3; L. &#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x3001;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x5DE5;&#x5B66;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x751F;&#x3058;&#x308B; A. nidulans &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5225;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x7523;: &#x64AD;&#x7A2E;-4 11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x3002;&#x64AD;&#x7A2E; 4 &#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5; 11 &#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x4F9B;&#x7D66;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3057;&#x3001;FPP &#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;: &#x64AD;&#x7A2E; 4 11 &#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x7AF6;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304B;&#x3089;&#x6F14;&#x51FA;&#x306A;&#x3069; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

[&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;: &#x64AD;&#x7A2E;-4,11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x53CA;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x5DE5;&#x5B66;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;]&#x3002;

&#xB514; &#xC5D4; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11 synthase (&#xAD11;&#xACE0;) &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4, 11-&#xB514; &#xC5D4;, artemisinin &#xC804;&#xC870; farnesyl &#xC778;&#xC0B0; (FPP)&#xC744; &#xBCC0;&#xD658;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD11;&#xACE0; artemisinin&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0; &#xCD5C;&#xADFC; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC790; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xBC0F; &#xAD11;&#xACE0;&#xC758; &#xB300;&#xC0AC; &#xACF5;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC694;&#xC57D;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Genomic DNA&#xC640; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4, 11-&#xB514; &#xC5D4; synthase&#xC758; cDNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xC544; &#xB974; &#xD14C; &#xBBF8;&#xC2DC; annua L.&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4 &#xC778;&#xCF54;&#xB529; cDNA 11-&#xB514; &#xC5D4; synthase 546 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCF54;&#xB529; 1 641 bp &#xC5F4;&#xB824;&#xC788;&#xB294; &#xB3C5;&#xC11C; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xD3EC;&#xD568;. &#xAD11;&#xACE0; cofactors &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; Ph&#xC640; divalent &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC808;&#xB300; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xD310; &#xBC0F; &#xC81C;&#xD488; &#xAD11;&#xACE0;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC740; &#xB192;&#xC740; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4&#xC758; &#xD615;&#xC131;, FPP&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD11;&#xACE0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; 11 &#xB514; &#xC5D4; &#xCD08;&#xAE30; 1 &#xB144; &#xC774;&#xD6C4; 1, 6-&#xD3D0;&#xC1C4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; 10 &#xD3D0;&#xC1C4;. &#xAD11;&#xACE0; Cdna&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544; &#xB974; &#xD14C; &#xBBF8;&#xC2DC; annua L, &#xBCF5;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; &#xC644;&#xC804;&#xD788; PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD569;&#xC131; &#xB41C; E. &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC00;, S. cerevisiae, Nicotiana tabacum L. Arabidopsis thaliana A. nidulans &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xACF5;&#xD559; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xB4F1; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC640; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4, 11-&#xB514; &#xC5D4; &#xC140;. &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; 11-&#xB514; &#xC5D4; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xACF5;&#xAE09;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558; &#xACE0; &#xACBD;&#xC7C1; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; FPP &#xD50C;&#xB7ED;&#xC2A4; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4, 11-&#xB514; &#xC5D4; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xAC10;&#xB3C5; &#xB4F1; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC804;&#xB7B5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC0AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;.

[&#xCD5C;&#xADFC; &#xBC1C;&#xC804; &#xB514; &#xC5D4; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11 synthase&#xC640;&#xC758; &#xB300;&#xC0AC; &#xACF5;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;].

Amorpha-4,11-dieno sintasa (ADS) puede convertir FARNESIL PIROFOSFATO (FPP) a amorpha-4, 11-dieno, un precursor de la artemisinina. ANUNCIOS desempe&ntilde;a un papel importante en la bios&iacute;ntesis de la artemisinina. Esta revisi&oacute;n resume la biolog&iacute;a molecular y estudio ingenier&iacute;a metab&oacute;lica de anuncios en los &uacute;ltimos a&ntilde;os. El ADN gen&oacute;mico y sus secuencias de cDNA de amorpha-4, 11-dieno synthase fueron clonados de Artemisia annua L. El cDNA de codificaci&oacute;n amorpha-4, 11-dieno sintasa contiene un marco de lectura abierto de bp 1 641 546 amino&aacute;cidos que codifica. ANUNCIOS muestra un amplio pH &oacute;ptimo y un requisito absoluto para iones met&aacute;licos divalentes como cofactores. La especificidad de anuncios a los sustratos y productos no es alta y la formaci&oacute;n de amorpha-4, 11-dieno por anuncios de FPP es alcanzado por una inicial 1, 6-cierre con posterior 1, 10-cierre. El cDNA de anuncios clonados de Artemisia annua L, o totalmente sintetizada por PCR, fue introducido en diferentes hosts como E. coli, S. cerevisiae, Nicotiana tabacum L. Arabidopsis thaliana y a. nidulans resultando en variados microorganismos ingenier&iacute;a y c&eacute;lulas productora amorpha-4, 11-dieno. La forma de mejorar la producci&oacute;n de amorpha-4, 11-dieno fue investigado por dos estrategias tales como mejorar el suministro de sustrato y dirigir el flujo FPP amorpha-4, 11-dieno producci&oacute;n de v&iacute;as que compiten.

[Avances recientes en el estudio de amorpha-4,11-dieno sintasa y su ingenier&iacute;a metab&oacute;lica].

&#x6D41;&#x611F;&#x975E; A/H1N1 &#x75C5;&#x6BD2;&#x7F16;&#x7801;&#x6784;&#x9020;&#x5708;&#x6216; NS1&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE; pre mRNAs &#x7684; 3&#39; &#x7AEF;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#xFF1A; 30 kDa CPSF &#xFF08;&#x5288;&#x88C2;&#x548C; polyadenylation &#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;CPSF30&#xFF09; &#x7684;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x3002;CPSF30 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684; NS1 &#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x6297;&#x6D41;&#x611F; A/H1N1 &#x75C5;&#x6BD2;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x7B5B;&#x9009;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x662F;&#x6784;&#x9020;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x7B5B;&#x9009;&#x6291;&#x5236; A/H1N1 &#x6D41;&#x611F; NS1 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B; CPSF30 &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E2D;&#x836F;&#x3002;A/H1N1 &#x75C5;&#x6BD2;&#x7684; NS1 &#x57FA;&#x56E0;&#x8FDE;&#x7EED;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (PCR) &#x6269;&#x589E;&#x548C;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; CPSF30 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;-&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (RT-PCR) &#x514B;&#x9686;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#x7531;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7247;&#x6BB5;&#x5206;&#x522B;&#x88AB; subcloned &#x5230;&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53; pGBKT7 &#x548C; pGADT7&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6784;&#x9020;&#xFF0C;&#x9975;&#x5411;&#x91CF; pGBKNS1 &#x548C;&#x730E;&#x7269;&#x5411;&#x91CF; pGADCPSF&#x3001; &#x9175;&#x6BCD; AH109 &#x6210;&#x4E86; co-transformed&#x3002;&#x516B;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x9175;&#x6BCD;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x91C7;&#x6458;&#x53CA;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;/&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x906D;&#x53D7;&#x6838;&#x67E5;&#x3002;NS1 CPSF30 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x88AB;&#x5141;&#x8BB8;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;&#x8D85;&#x8FC7;&#x4E09;&#x5341;&#x5C81;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x6807;&#x8BC6;&#x4E2D;&#x6210;&#x836F;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x53CC;&#x9EC4;&#x8FDE;&#x53E3;&#x670D;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x5C55;&#x793A;&#x7684; NS1 CPSF30 &#x4E92;&#x52A8;&#x5F3A;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

[&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x9009;&#x62E9; A/H1N1 &#x6D41;&#x611F; NS1 &#x975E;&#x7ED3;&#x6784;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B; CPSF30 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x5C4F;&#x5E55;]&#x3002;

Influenza A/H1N1 virus-encoded nonstructural, or NS1, protein inhibits the 3'-end processing of cellular pre-mRNAs by binding the cellular protein: the 30-kDa subunit of CPSF (cleavage and polyadenylation specificity factor, CPSF30). CPSF30 binding site of the NS1 protein is a potential target for the development of drugs against influenza A/H1N1 virus. A yeast two-hybrid screening system was constructed and used for screening Chinese medicines that inhibit the interaction of the A/H1N1 flu NS1 protein and human CPSF30 protein. The NS1 gene of A/H1N1 virus was amplified by consecutive polymerase chain reaction (PCR), and the human CPSF30 gene of HeLa cell cloned by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Then the two gene fragments confirmed by sequencing were subcloned into the yeast expression vectors pGBKT7 and pGADT7, respectively. The two constructs, bait vector pGBKNS1 and prey vector pGADCPSF, were co-transformed into yeast AH109. The eight individual yeast colonies were picked and subjected to verification by PCR/gel electrophoresis. The inhibition of the NS1-CPSF30 interaction was allowed the identification of selective inhibitors. The four of more than thirty identified Chinese medicines, including 'Shuanghuanglian oral liquid', showed the strong inhibition of the NS1-CPSF30 interaction.

[Development of a yeast two-hybrid screen for selection of A/H1N1 influenza NS1 non-structural protein and human CPSF30 protein interaction inhibitors].

Grippe A/H1N1 virus-encod&eacute; structurale ou NS1, prot&eacute;ine inhibe la transformation de l&#39;extr&eacute;mit&eacute; 3&#39; des pr&eacute;-ARNm cellulaire en se liant &agrave; la prot&eacute;ine cellulaire : la sous-unit&eacute; 30 kDa du CPSF (clivage et polyad&eacute;nylation sp&eacute;cificit&eacute; facteur, CPSF30). CPSF30 site de liaison de la prot&eacute;ine NS1 est une cible potentielle pour le d&eacute;veloppement de m&eacute;dicaments contre le virus de la grippe A/H1N1. Une syst&egrave;me de contr&ocirc;le de deux-hybride de levure a &eacute;t&eacute; construite et utilis&eacute;e pour d&eacute;pister des m&eacute;decines chinoises qui inhibent l&#39;interaction de la prot&eacute;ine NS1 de grippe A/H1N1 et la prot&eacute;ine humaine CPSF30. Le g&egrave;ne NS1 du virus A/H1N1 a &eacute;t&eacute; amplifi&eacute; par cons&eacute;cutives polymerase chain reaction (PCR), et le g&egrave;ne humain de la CPSF30 des cellules HeLa clon&eacute; par r&eacute;action en cha&icirc;ne polym&eacute;rase-transcriptase inverse (RT-PCR). Ensuite les fragments de deux g&egrave;nes, confirm&eacute;s par le s&eacute;quen&ccedil;age ont &eacute;t&eacute; sous-clon&eacute; dans la levure expression vecteurs pGBKT7 et pGADT7, respectivement. Les deux constructions, vecteur pGBKNS1 d&#39;app&acirc;ts et proies vecteur pGADCPSF, ont &eacute;t&eacute; co-transformed dans la levure de AH109. Les huit colonies de levure individuels ont &eacute;t&eacute; cueillies et soumis &agrave; v&eacute;rification par PCR/&eacute;lectrophor&egrave;se. L&#39;inhibition de l&#39;interaction de NS1-CPSF30 a &eacute;t&eacute; permise d&#39;identifier des inhibiteurs s&eacute;lectifs. Les quatre de plus de trente identifi&eacute; les m&eacute;dicaments chinois, y compris le &laquo; Liquide de shuanghuanglian oral &raquo;, ont montr&eacute; la forte inhibition de l&#39;interaction de NS1-CPSF30.

[D&eacute;veloppement d&#39;un &eacute;cran de double-hybride de levure pour s&eacute;lection des prot&eacute;ines non structurelles de grippe A/H1N1 NS1 et inhibiteurs d&#39;interaction des prot&eacute;ines humaines CPSF30].

Grippe A/H1N1 Virus-codierte Nonstructural oder NS1, Protein hemmt die 3&#39;-Ende-Verarbeitung von zellul&auml;ren Pre-mRNAs binden das zellul&auml;re Protein: das 30-kDa-Untereinheit des CPSF (Spaltung und Polyadenylierung Spezifit&auml;t Faktor, CPSF30). CPSF30-Bindungsstelle des NS1-Proteins ist ein potenzielles Ziel f&uuml;r die Entwicklung von Medikamenten gegen Influenza A/H1N1-Virus. Eine Hefe-zwei-Hybrid screening-System wurde gebaut und verwendet f&uuml;r das screening von chinesischer Arzneimitteln, die die Interaktion der A/H1N1-Grippe NS1-Protein und menschliche CPSF30 Protein hemmen. Das NS1-gen von A/H1N1-Virus wurde verst&auml;rkt durch aufeinanderfolgende Polymerase-Kettenreaktion (PCR) und das menschliche CPSF30 gen HeLa-Zelle geklont durch Reverse Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR). Dann wurden die zwei gen-Fragmente, die durch Sequenzierung best&auml;tigt bzw. in die Hefe Ausdruck Vektoren pGBKT7 und pGADT7, subkloniert. Die beiden Konstrukte, K&ouml;der Vektor pGBKNS1 und Vektor-pGADCPSF zum Opfer, wurden co-transformed in Hefe AH109. Die acht einzelnen Hefe-Kolonien wurden gepfl&uuml;ckt und &Uuml;berpr&uuml;fung durch PCR und Gelelektrophorese unterworfen. Die Hemmung der Interaktion NS1-CPSF30 durfte die Identifizierung der selektive Inhibitoren. Die vier von mehr als drei&szlig;ig chinesische Arzneimitteln, auch &#39;Shuanghuanglian orale Fl&uuml;ssigkeit&#39; identifiziert, zeigte die starke Hemmung der Interaktion NS1-CPSF30.

[Entwicklung eines Hefe-zwei-Hybrid-Screens f&uuml;r Auswahl von A/H1N1-Grippe NS1 Nichttragendes Protein und menschlichen CPSF30-Protein-Interaktion-Inhibitoren].

Influenza A/H1N1 virus codificato nonstructural, o NS1, proteina inibisce il 3&#39;-terminare l&#39;elaborazione del pre-mRNA cellulare associando la proteina cellulare: la subunit&agrave; 30-kDa di CPSF (clivaggio e poliadenilazione specificit&agrave; fattore, CPSF30). CPSF30 sito di legame della proteina NS1 &egrave; un potenziale bersaglio per lo sviluppo di farmaci contro il virus dell&#39;influenza A/H1N1. Un lievito due-ibrido sistema di screening &egrave; stato costruito e utilizzato per lo screening cinese farmaci che inibiscono l&#39;interazione di influenza A/H1N1 NS1 proteina e proteina umana CPSF30. Il gene NS1 del virus A/H1N1 &egrave; stato amplificato dal consecutivi polymerase chain reaction (PCR), e il gene umano CPSF30 di cellule HeLa clonato da reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Poi i frammenti di due gene confermati dal sequenziamento sono stati subcloned nel lievito espressione vettori pGBKT7 e pGADT7, rispettivamente. I due costrutti, esche vettore pGBKNS1 e preda vector pGADCPSF, furono co-transformed in lievito AH109. Otto colonie singole di lievito sono stati raccolti e sottoposti a verifica mediante PCR/gel di elettroforesi. L&#39;inibizione dell&#39;interazione NS1-CPSF30 &egrave; stato permesso l&#39;identificazione di inibitori selettivi. I quattro di pi&ugrave; di trent&#39;anni identificato medicine cinesi, tra cui &#39;Shuanghuanglian liquido orale&#39;, ha dimostrato la forte inibizione dell&#39;interazione NS1-CPSF30.

[Lo sviluppo di uno schermo di due-ibrido di lievito per la selezione di proteine non strutturali l&#39;influenza A/H1N1 NS1 e inibitori di interazione della proteina CPSF30 umani].

&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; a/h1n1 &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x975E;&#x69CB;&#x9020;&#x90E8;&#x6750;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; NS1&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B; 3&#39;-&#x7D50;&#x5408;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; Mrna &#x306E;&#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x51E6;&#x7406;: 30 kDa &#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; CPSF &#xFF08;&#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x3068;&#x8D77;&#x3053;&#x308B;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;, CPSF30&#xFF09; &#x306E;&#x3002;NS1 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; CPSF30 &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; a/h1n1 &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x85AC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; CPSF30 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068; a/h1n1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; NS1 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x6F22;&#x65B9;&#x85AC;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NS1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; a/h1n1 &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x9023;&#x7D9A;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC; (PCR) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x5E45;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x9175;&#x7D20;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC; (RT-PCR) &#x30D2;&#x30C8; CPSF30 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; HeLa &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8907;&#x88FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;[&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 2 &#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x9175;&#x6BCD;&#x5F0F;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; pGBKT7 &#x3068; pGADT7 &#x306B; subcloned &#x3044;&#x305F;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; pGBKNS1 &#x3092;&#x990C;&#x3057;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; pGADCPSF &#x3092;&#x7372;&#x7269;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD; AH109 &#x306B; co-transformed &#x3044;&#x305F;&#x3002;8 &#x3064;&#x306E;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30A4;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8; &#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x3092;&#x63A1;&#x53D6;&#x3057;&#x3001;&#x691C;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B; PCR/&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NS1 CPSF30 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x8A31;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;30 &#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E; 4 &#39;Shuanghuanglian &#x7D4C;&#x53E3;&#x6DB2;&#x4F53;&#39; &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6F22;&#x65B9;&#x85AC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3001;NS1 CPSF30 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x3010; &#x9175;&#x6BCD; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E; a/h1n1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; NS1 &#x975E;&#x69CB;&#x9020;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593; CPSF30 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x958B;&#x767A; &#x3011;&#x3002;

&#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A/H1N1 &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB85C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; nonstructural &#xB610;&#xB294; NS1, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC911; Mrnas&#xC758; 3&#39;-&#xC5D4;&#xB4DC; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC5B5;&#xC81C;: CPSF (&#xC808;&#xB2E8;, polyadenylation &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;, CPSF30)&#xC758; 30 kDa &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;. NS1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; CPSF30 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A/H1N1 &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC0C1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB204; &#xB8E9; &#xB450; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC74;&#xC124; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; A/H1N1 &#xB3C5;&#xAC10; NS1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04; CPSF30 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xAD6D; &#xC758;&#xC57D;&#xD488; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9;. NS1 &#xC720;&#xC804;&#xC790; A/h 1 n 1 &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xC5F0;&#xC18D; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (PCR)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xD3ED; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC778;&#xAC04; CPSF30 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (RT-PCR)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C;. &#xB2E4;&#xC74C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xAC01; &#xAC01;&#xAC01; &#xD6A8; &#xC2DD; &#xBCA1;&#xD130; Pgbkt7&#xC640; pGADT7, subcloned &#xD588;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAD6C;&#xBB38; &#xBCA1;&#xD130; pGBKNS1 &#xBBF8;&#xB07C; &#xBA39;&#xC774; &#xBCA1;&#xD130; pGADCPSF, &#xD6A8; &#xBAA8; ah109&#xC5D0; co-transformed &#xD588;&#xB2E4;. 8 &#xAC1C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xD3EC;&#xCC29; &#xD558; &#xACE0; PCR/&#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778;&#xC744; &#xBC1B;&#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. NS1-CPSF30 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC800; &#xD574;&#xC81C;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. 30 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; 4 &#39;Shuanghuanglian &#xAD6C;&#xAC15; &#xC561;&#xCCB4;&#39;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC911;&#xAD6D; &#xC758;&#xC57D;&#xD488; &#xC2DD;&#xBCC4;, NS1-CPSF30 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAC15;&#xD55C; &#xC800;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4;.

[A/H1N1 &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; NS1-&#xAD6C;&#xC870; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xC778;&#xAC04; CPSF30 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xD654;&#xBA74;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;].

Gripe A/H1N1 virus-codificado nonstructural o NS1, prote&iacute;na inhibe el procesamiento extremo 3&#39; de los pre-mRNAs celulares atando la prote&iacute;na celular: la subunidad 30 kDa de CPSF (escote y poliadenilaci&oacute;n especificidad factor, CPSF30). CPSF30 sitio de uni&oacute;n de la prote&iacute;na NS1 es un blanco potencial para el desarrollo de f&aacute;rmacos contra el virus de influenza A/H1N1. Una levadura dos-h&iacute;brido sistema fue construida y utilizada para la detecci&oacute;n de medicinas chinas que inhiben la interacci&oacute;n de la gripe A/H1N1 prote&iacute;na NS1 y prote&iacute;na de CPSF30 humana. El gen NS1 del virus A/H1N1 fue amplificado por la reacci&oacute;n en cadena consecutiva de la polimerasa (PCR), y el gene humano de la CPSF30 de c&eacute;lulas HeLa clonados por la reacci&oacute;n en cadena de polimerasa-transcriptasa reversa (RT-PCR). Luego los fragmentos de dos genes confirmados ordenando fueron subcloned en el pGBKT7 de vectores de expresi&oacute;n de levadura y pGADT7, respectivamente. Las dos construcciones, cebo pGBKNS1 vector y vector pGADCPSF de presas, fueron co-transformed en la levadura AH109. Las ocho colonias individuales de levadura fueron recogidas y sometidas a verificaci&oacute;n por PCR/electroforesis. La inhibici&oacute;n de la interacci&oacute;n de NS1-CPSF30 permitieron la identificaci&oacute;n de inhibidores selectivos. Los cuatro de m&aacute;s de treinta hab&iacute;a identificado medicinas chinas, incluyendo &#39;Shuanghuanglian l&iacute;quido oral&#39;, mostr&oacute; la fuerte inhibici&oacute;n de la interacci&oacute;n de NS1-CPSF30.

[Desarrollo de una pantalla de dos h&iacute;bridos de levadura para selecci&oacute;n de prote&iacute;nas no estructurales de gripe A/H1N1 NS1 y humanos inhibidores de interacci&oacute;n de la prote&iacute;na de CPSF30].

&#x8D28;&#x7C92;&#x643A;&#x5E26;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x83CC; &#xFF08;W303-1B[pYeDP60/G/ADS]) &#x548C; S.&#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8F6C;&#x6362; &#xFF08;W303-1B[rDNA:ADS])&#xFF0C;&#x5EFA;&#x9020;&#x4E86;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5BB9; (ADS) &#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4,11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x5408;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x67E5;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4,11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x70C3;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#x8D28;&#x7C92; pYeDP60/G/&#x5E7F;&#x544A;&#xFF0C;&#x6E2F;&#x53E3;&#x7684;&#x5E7F;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0;&#x53D8;&#x6210;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD; W303-1B&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4; W303-1B [pYeDP60/G/&#x5E7F;&#x544A;]&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B; multi-copies &#x8D28;&#x7C92;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x3002;&#x5E7F;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x76D2; PCR &#x6269;&#x589E;&#x7684; pYeDP60/G/&#x5E7F;&#x544A;&#x6A21;&#x677F;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x83B7;&#x5F97;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x5F15;&#x5165;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD; W303-1B &#x83B7;&#x5F97; W303 1B [rDNA:ADS]&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5E7F;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x7EB3;&#x5165; rDNA &#x8F68;&#x8FF9;&#x901A;&#x8FC7;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x9175;&#x6BCD;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x3002;&#x6C14;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E24;&#x8005;&#x7684;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4EA7;&#x751F;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4,11-&#x4E8C;&#x70EF;&#x70C3;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;W303-1B [pYeDP60/G/&#x5E7F;&#x544A;] &#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4,11-&#x53CC;&#x70EF;&#x4EA7;&#x91CF;&#x9AD8;&#x4E8E; W303-1B [rDNA:ADS]&#x3002;&#x5357;&#x90E8;&#x6C61;&#x70B9;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x5E7F;&#x544A; W303-1B [rDNA:ADS] &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x57FA;&#x56E0;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x526F;&#x672C;&#x3002;&#x5B83;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x52A0;&#x5E7F;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0;&#x526F;&#x672C;&#x6539;&#x5584;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0;-4,11-&#x53CC;&#x70EF;&#x4EA7;&#x91CF;&#x3002;

[&#x5DE5;&#x7A0B;&#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7D2B;&#x7A57;&#x69D0; 4,11 &#x4E8C;&#x70EF;&#x70C3;&#x751F;&#x4EA7;]&#x3002;

Plasmid-carrying Saccharomyces cerevisia (W303-1B[pYeDP60/G/ADS]) and genome-transformed S. cerevisia (W303-1B[rDNA:ADS]), both harboring amorpha-4,11-diene synthase (ADS) gene were constructed to investigate the production of amorpha-4,11-diene. The recombinant plasmid pYeDP60/G/ADS that harbors the ADS gene was transformed into S. cerevisiae W303-1B, resulting in the engineered yeast W303-1B[pYeDP60/G/ADS], which contains multi-copies of the plasmid. The ADS gene expression cassette was obtained by PCR amplification of the pYeDP60/G/ADS template, and then introduced into S. cerevisiae W303-1B to obtain the engineered yeast W303-1B[rDNA:ADS], in which the ADS gene was integrated into the rDNA locus of the yeast genome through the homologous recombination. GC-MS analysis confirmed that both of the engineered yeasts could produce amorpha-4,11-diene. Moreover, the amorpha-4,11-diene yield of W303-1B[pYeDP60/G/ADS] was higher than that of W303-1B[rDNA:ADS]. Southern blot analysis showed that there is only one copy of ADS gene in the genome of W303-1B[rDNA:ADS]. It implied that the amorpha-4,11-diene yield can be improved by increasing the ADS gene copies.

[Production of amorpha-4,11-diene in engineered yeasts].

Porteurs de plasmide Saccharomyces cerevisia (W303-1B[pYeDP60/G/ADS]) et transform&eacute;es par le g&eacute;nome S. cerevisia (W303-1B[rDNA:ADS]), les deux renfermant du g&egrave;ne amorpha-4,11-di&egrave;ne synthase (ADS) ont &eacute;t&eacute; construits afin d&#39;&eacute;tudier la production de 4,11-amorpha-di&egrave;ne. Les plasmide recombinant pYeDP60/G/annonces qui contient le g&egrave;ne d&#39;annonces a &eacute;t&eacute; transform&eacute; en S. cerevisiae W303-1 b, ayant pour r&eacute;sultat la levure machin&eacute;e W303-1 b [pYeDP60/G/annonces], qui contient multi-copies du plasmide. La cassette d&#39;expression de g&egrave;ne annonces a &eacute;t&eacute; obtenue par amplification par PCR du mod&egrave;le pYeDP60/G/annonces et puis introduite dans S. cerevisiae W303-1 b pour obtenir la levure machin&eacute;e W303-1 b [rDNA:ADS], dans laquelle le g&egrave;ne annonces a &eacute;t&eacute; int&eacute;gr&eacute; dans le locus rDNA g&eacute;nome de la levure par le biais de la recombinaison homologue. Analyse par CPG-SM a confirm&eacute; que deux des levures modifi&eacute;es pouvaient produire amorpha-4,11-di&egrave;ne. En outre, le rendement d&#39;amorpha-4,11-di&egrave;ne de W303-1 b [pYeDP60/G/annonces] &eacute;tait sup&eacute;rieur &agrave; celui de W303-1 b [rDNA:ADS]. Analyse Southern a montr&eacute; qu&#39;il y a qu&#39;une seule copie du g&egrave;ne d&#39;annonces dans le g&eacute;nome de W303-1 b [rDNA:ADS]. Elle implique que le rendement amorpha-4,11-di&egrave;ne peut &ecirc;tre am&eacute;lior&eacute; en augmentant les copies du g&egrave;ne annonces.

[Production d&#39;amorpha-4,11-di&egrave;ne en levures modifi&eacute;es].

Plasmid-tragenden Saccharomyces Cerevisia (W303-1B[pYeDP60/G/ADS]) und Genom-transformierten S. Cerevisia (W303-1B[rDNA:ADS]), beide Entwurfsdokumente Amorpha-4,11-dien-Synthase (ADS)-Gen wurden konstruiert, um die Produktion von Amorpha-4,11-dien zu untersuchen. Die rekombinante Plasmid pYeDP60/G/anzeigen, die das ADS-gen birgt verwandelte S. Cerevisiae W303-1B, wodurch die ver&auml;nderte Hefe W303-1B [pYeDP60/G/ADS], die Multi-copies des Plasmids enth&auml;lt. Die ADS-Gen-Ausdruck-Kassette wurde durch PCR-Verst&auml;rkung der Vorlage pYeDP60/G/ADS abgerufen und dann in S. Cerevisiae W303-1B, die ver&auml;nderte Hefe W303-1B [rDNA:ADS], zu erhalten, in denen das ADS-gen in der rDNA-Locus des Hefegenoms durch homologe Rekombination integriert wurde eingef&uuml;hrt. GC-MS-Analyse best&auml;tigt, dass beide die ver&auml;nderter Hefen Amorpha-4,11-dien produzieren k&ouml;nnte. Dar&uuml;ber hinaus war die Amorpha-4,11-dien-Ausbeute von W303-1B [pYeDP60/G/ADS] h&ouml;her als die der W303-1B [rDNA:ADS]. S&uuml;dlicher Fleckanalyse zeigte, dass es nur eine Kopie des ADS-Gens in das Genom der W303-1B [rDNA:ADS]. Es impliziert, dass die Amorpha-4,11-dien-Ausbeute verbessert werden kann, durch die Erh&ouml;hung der ADS-gen-Kopien.

[Produktion von Amorpha-4,11-dien in ver&auml;nderter Hefen].

Plasmide-carrying Saccharomyces cerevisia (W303-1B[pYeDP60/G/ADS]) e trasformato dal genoma S. cerevisia (W303-1B[rDNA:ADS]), entrambi harboring gene amorpha-4.11-diene sintasi (ADS) sono stati costruiti per indagare la produzione di amorpha-4.11-diene. I plasmide ricombinante pYeDP60/G/annunci che porti il gene annunci fu trasformata in S. cerevisiae W303-1B, con conseguente il lievito ingegnerizzato W303-1B [pYeDP60/G/annunci], che contiene multi-copies del plasmide. La cassetta di espressione genica di annunci &egrave; stata ottenuta dall&#39;amplificazione di PCR del modello pYeDP60/G/annunci e poi introdotto in S. cerevisiae W303-1B per ottenere il lievito ingegnerizzato W303-1B [rDNA:ADS], in cui il gene di annunci &egrave; stato integrato nel locus rDNA del genoma del lievito attraverso la ricombinazione omologa. Analisi GC-MS ha confermato che entrambi i lieviti ingegnerizzati potrebbe produrre amorpha-4.11-diene. Inoltre, il rendimento di amorpha-4.11-diene di W303-1B [pYeDP60/G/annunci] era superiore a quello di W303-1B [rDNA:ADS]. Southern blot analisi ha mostrato che non c&#39;&egrave; solo una copia del gene annunci nel genoma di W303-1B [rDNA:ADS]. &Egrave; implicito che il rendimento di amorpha-4.11-diene pu&ograve; essere migliorato aumentando le copie del gene di annunci.

[Produzione di amorpha-4.11-diene in lieviti ingegnerizzati].

&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30B1;&#x30B9;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;W303-1B[pYeDP60/G/ADS]) &#x3068;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x5909;&#x63DB; S. &#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;W303-1B[rDNA:ADS])&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x85AC;&#x5264;: &#x64AD;&#x7A2E;-4,11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; (&#x5E83;&#x544A;) &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;: &#x64AD;&#x7A2E;-4,11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; pYeDP60/G/&#x5E83;&#x544A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6E2F;&#x6E7E;&#x5E83;&#x544A;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067; W303-1B [pYeDP60/G/&#x5E83;&#x544A;] &#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x7D50;&#x679C; W303 1 b &#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5E83;&#x544A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8; pYeDP60/G/&#x5E83;&#x544A;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E; PCR &#x5897;&#x5E45;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x53D6;&#x5F97;&#x3057;&#x3001;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x9175;&#x6BCD; W303 1B &#x5E83;&#x544A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x9175;&#x6BCD;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E; rDNA &#x8ECC;&#x8DE1;&#x306B;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F; [rDNA:ADS] &#x53D6;&#x5F97;&#x3059;&#x308B; 1d14-5 W303 1B &#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GC-MS &#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;: &#x64AD;&#x7A2E;-4,11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x3092;&#x4F5C;&#x308A;&#x51FA;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;W303-1B [pYeDP60/G/&#x5E83;&#x544A;]: &#x64AD;&#x7A2E;-4,11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x53CE;&#x91CF; W303-1B [rDNA:ADS] &#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9AD8;&#x3044;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30B6;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x89E3;&#x6790;&#x5E83;&#x544A; W303-1B [rDNA:ADS] &#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x3092; 1 &#x3064;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;: &#x64AD;&#x7A2E;-4,11-&#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x53CE;&#x91CF;&#x5E83;&#x544A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x6697;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

[&#x751F;&#x7523;]: &#x64AD;&#x7A2E;-4,11 - &#x30B8;&#x30A8;&#x30F3;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067;&#x306F;&#x3002;

&#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xB4E4;&#xACE0; Saccharomyces cerevisia (W303-1B[pYeDP60/G/ADS]) &#xBC0F; &#xAC8C;&#xB188; &#xBCC0;&#xD615; S. cerevisia (W303-1B[rDNA:ADS]), &#xB458; &#xB2E4; &#xC740;&#xB2C9; &#xB514; &#xC5D4; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11 synthase (&#xAD11;&#xACE0;) &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11-&#xB514; &#xC5D4;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC74;&#xC124; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; pYeDP60/G/&#xAD11;&#xACE0; &#xAD11;&#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xBE44;&#xD638; &#xD558;&#xB294; S. cerevisiae W303-1B, &#xC124;&#xACC4; &#xD6A8; &#xBAA8; W303-1B [pYeDP60/G/&#xAD11;&#xACE0;] &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC758; multi-copies&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xACB0;&#xACFC;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xBAA8; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAD11;&#xACE0; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; pYeDP60/G/&#xAD11;&#xACE0; &#xC11C;&#xC2DD; &#xD30C;&#xC77C;&#xC758; PCR &#xC99D;&#xD3ED;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5BB;&#xC740; &#xC774;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC870;&#xC791;&#xB41C; &#xD6A8; &#xBAA8; W303-1B [rDNA:ADS] &#xAD11;&#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; rDNA &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xD588;&#xB2E4; &#xAD6C;&#xD558;&#xB294; S. cerevisiae W303-1b&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785;. GC-MS &#xBD84;&#xC11D; &#xBAA8;&#xB450; &#xC870;&#xC791;&#xB41C; yeasts &#xB514; &#xC5D4; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, W303-1B [pYeDP60/G/&#xAD11;&#xACE0;] &#xB514; &#xC5D4; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11 &#xC218;&#xC728; W303-1B [rDNA:ADS]&#xC758; &#xADF8;&#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB192;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB0A8;&#xCABD; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB098;&#xB9CC; W303-1B [rDNA:ADS]&#xC758; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD11;&#xACE0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83; &#xC554;&#xC2DC; &#xAD11;&#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8;&#xC744; &#xB298;&#xB824; &#xB514; &#xC5D4; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11 &#xC218;&#xC728;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

[&#xB514; &#xC5D4; &#xC871;&#xC81C;&#xBE44;-4,11-&#xC124;&#xACC4; &#xB41C; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;].

Pl&aacute;smido-llevar Saccharomyces cerevisia (W303-1B[pYeDP60/G/ADS]) y transformado por el genoma S. cerevisia (W303-1B[rDNA:ADS]), ambos genes amorpha-4,11-dieno sintasa (ADS) que fueron construidos para investigar la producci&oacute;n de amorpha-4,11-dieno. Los pl&aacute;smido recombinante pYeDP60/G/anuncios que alberga el gene de anuncios se transform&oacute; en S. cerevisiae W303-1B, dando por resultado la levadura Ingenier&iacute;a W303-1B [pYeDP60/G/anuncios], que contiene multi-copies del pl&aacute;smido. El casete de expresi&oacute;n del gen de anuncios fue obtenido por amplificaci&oacute;n por PCR de la plantilla de pYeDP60/G/anuncios y luego introducido en S. cerevisiae W303-1B para obtener la levadura Ingenier&iacute;a W303-1B [rDNA:ADS], en el que el gen de anuncios se integr&oacute; el rDNA locus del genoma de la levadura a trav&eacute;s de la recombinaci&oacute;n hom&oacute;loga. El an&aacute;lisis por GC-MS confirm&oacute; que ambos de las levaduras Ingenier&iacute;a podr&iacute;an producir amorpha-4,11-dieno. Por otra parte, el rendimiento de amorpha-4,11-dieno de W303-1B [pYeDP60/G/anuncios] fue mayor que el de W303-1B [rDNA:ADS]. Mancha blanca /negra meridional el an&aacute;lisis demostr&oacute; que hay una &uacute;nica copia del gene de anuncios en el genoma de W303-1B [rDNA:ADS]. Se implica que se puede mejorar el rendimiento de amorpha-4,11-dieno incrementando las copias del gene de anuncios.

[Producci&oacute;n de amorpha-4,11-dieno en levaduras Ingenier&iacute;a].

Cyclotides &#x662F;&#x4E00;&#x5BB6;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&quot;&#x8FF7;&#x4F60;&quot;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53D1;&#x751F;&#x5807;&#x3001; &#x831C;&#x8349;&#x79D1;&#x3001; &#x846B;&#x82A6;&#x79D1;&#x690D;&#x7269;&#x5BB6;&#x5EAD;&#xFF0C;&#x5305;&#x542B;&#x5934;&#x5230;&#x5C3E;&#x5FAA;&#x73AF;&#x9AA8;&#x5E72;&#x548C;&#x5B89;&#x6392;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x7684;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED3;&#x3002;&#x4EE5;&#x7814;&#x7A76;&#x81EA;&#x7136;&#x7684;&#x5929;&#x5C71;&#x5807;&#x83DC; V cyclotides&#x3001; &#x88AB;&#x63D0;&#x53D6;&#xFF0C;&#x5E72;&#x7684;&#x836F;&#x8349; 50%&#x4E59;&#x9187;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6D53;&#x7F29;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x63D0;&#x53D6;&#x906D;&#x5230;&#x5355;&#x72EC;&#x5206;&#x533A;&#x4E4B;&#x95F4;&#x6B63;&#x5DF1;&#x70F7;&#xFF0C;&#x4E59;&#x9178;&#x4E59;&#x916F;&#x548C;&#x6B63;&#x4E01;&#x9187;&#xFF0C;&#x6C34;&#x6EB6;&#x5242;&#x6EB6;&#x5242;&#x3002;&#x5305;&#x542B; cyclotides &#x7684;&#x4E01;&#x9187;&#x63D0;&#x53D6;&#x906D;&#x5230;&#x67F1;&#x5C42;&#x6790;&#x6CD5;&#x5BF9;&#x8461; LH-20&#xFF0C;30%&#x7532;&#x9187;&#x6D17;&#x8131;&#x3002;&#x7EC4;&#x5206;&#x662F;&#x76F4;&#x63A5;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x6570;&#x7801;&#x5730;&#x9762;&#x7535;&#x89C6;&#x548C;&#x53CD;&#x76F8;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x4FDD;&#x7559;&#x65F6;&#x95F4;&#x5CF0;&#x88AB;&#x53CD;&#x76F8;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x548C;&#x6536;&#x96C6;&#x5230;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x4E0A;&#x663E;&#x793A;&#x3002;Cyclotides &#x63A8;&#x6D4B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7FA4;&#x4F17;&#x8303;&#x56F4;&#x4ECE; 3 &#x4E07;&#x5230; 3 500 Da&#x3002;&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684; cyclotides &#x4E0E;&#x6570;&#x7801;&#x5730;&#x9762;&#x7535;&#x89C6;&#xFF0C;&#x70F7;&#x57FA;&#x4E0E; iodoacetamide&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x88AB;&#x5355;&#x72EC;&#x5206;&#x89E3;&#x4E0E;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178; C endoproteinase&#x3001; endoproteinase &#x8D56;&#x6C28;&#x9178; C &#x548C;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x3002;&#x6D88;&#x5316;&#x591A;&#x80BD;&#x88AB;&#x51C0;&#x5316;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x548C;&#x4E0A;&#x8FDB;&#x884C;&#x8D28;&#x8C31; TOF/TOF &#x5206;&#x6790;&#x5668;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x65B0;&#x7684; cyclotide&#x3001; cycloviolacin T1 &#x548C;&#x62A5;&#x544A;&#x7684; cyclotide varv E &#x662F;&#x5177;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FDB;&#x884C;&#x8D28;&#x8C31; TOF/TOF &#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x6240;&#x4EE5;&#x5206;&#x79BB;&#x4E0E;&#x8868;&#x5F81;&#x7684; cyclotides &#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x5FEB;&#x901F;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728;&#x7EE7;&#x627F;&#x3002;

[&#x9610;&#x53D1;&#x4E24;&#x4E2A; cyclotides &#x7684;&#x4E2D;&#x63D0;&#x7434;&#x5929;&#x5C71;&#x5807;&#x83DC;&#x9A6C;&#x514B;&#x897F;&#x59C6;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7531;&#x8FDB;&#x884C;&#x8D28;&#x8C31; TOF/TOF &#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;]&#x3002;

The cyclotides are a family of cyclic "mini" proteins that occur in Violaceae, Rubiaceae and Cucurbitaceae plant families and contain a head-to-tail cyclic backbone and a cystine knot arranged by three disulfide bonds. To study the natural cyclotides of V tianshanica, dried herb was extracted with 50% ethanol, and the concentrated aqueous extract was subjected to a solvent-solvent partitioning between water and hexane, ethyl acetate and n-butanol, separately. The n-butanol extract containing cyclotides was subjected to column chromatography over Sephadex LH-20, eluted with 30% methanol. The subfractions were directly reduced by DTT and analyzed by reverse-phase HPLC. The peaks with different retention times were shown on the profile of RP-HPLC and collected. The cyclotides were speculated based on masses range from 3 000 to 3 500 Da. The purified cyclotides were reduced with DTT, alkylated with iodoacetamide, and then were cleaved with endoproteinase Glu-C, endoproteinase Lys-C and Trypsin, separately. The digested peptides were purified on RP-HPLC and analyzed on MALDI TOF/TOF analyzer. A new cyclotide, cycloviolacin T1 and a reported cyclotide varv E were systemically determined using MALDI TOF/TOF system. So the method for the isolation and characterization of cyclotides was quickly built up in succession.

[Elucidating the structure of two cyclotides of Viola tianshanica maxim by MALDI TOF/TOF MS analysis].

Les cyclotides sont une famille de prot&eacute;ines de &laquo; minis &raquo; cycliques qui se produisent dans Violaceae, Rubiaceae et Cucurbitaceae plante familles et contiennent un squelette cyclique de t&ecirc;te &agrave; queue et un noeud de cystine, arrang&eacute; par trois ponts disulfures. Pour &eacute;tudier la cyclotides naturelle de V tianshanica, herbes s&eacute;ch&eacute;es a &eacute;t&eacute; extrait avec de l&#39;&eacute;thanol 50 %, et l&#39;extrait aqueux concentr&eacute; a &eacute;t&eacute; soumis &agrave; un solvant-solvant partitionnement entre eau et hexane, ac&eacute;tate d&#39;&eacute;thyle et de n-butanol, s&eacute;par&eacute;ment. L&#39;extrait de n-butanol, contenant des cyclotides a &eacute;t&eacute; soumis &agrave; la chromatographie sur colonne sur Sephadex LH-20, &eacute;lu&eacute; avec 30 % de m&eacute;thanol. Les sous-fractions &eacute;taient directement r&eacute;duites par le DTT et analys&eacute;es par HPLC en phase invers&eacute;e. Les pics avec des temps de r&eacute;tention diff&eacute;rents ont &eacute;t&eacute; diffus&eacute;s sur le profil de RP-HPLC et recueillis. Les cyclotides ont &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se bas&eacute;e sur la gamme de masses de 3 000 &agrave; 3 500 Da. Les cyclotides purifi&eacute;es ont &eacute;t&eacute; r&eacute;duits avec TNT, alkyl&eacute; avec l&#39;iodoac&eacute;tamide et ont &eacute;t&eacute; ensuite cliv&eacute;s avec endoprot&eacute;inase Glu-C, endoprot&eacute;inase C-Lys et la trypsine, s&eacute;par&eacute;ment. Les peptides dig&eacute;r&eacute;es ont &eacute;t&eacute; purifi&eacute;es sur RP-HPLC et analys&eacute;es sur analyseur de MALDI-TOF/TOF. Une nouvelle cyclotide, cycloviolacin T1 et un cyclotide d&eacute;clar&eacute;s varv E ont &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;es syst&eacute;miquement MALDI TOF/TOF System.*. Si la m&eacute;thode pour l&#39;isolement et la caract&eacute;risation des cyclotides a &eacute;t&eacute; rapidement construite dans la succession.

[&Eacute;lucider la structure des deux cyclotides de maxim tianshanica Alto par analyse de MALDI TOF/TOF MS].

Die Cyclotides sind eine Familie der zyklischen &quot;Mini&quot; Proteine, die in Violaceae, R&ouml;tegew&auml;chse (Rubiaceae) auftreten und Cucurbitaceae Pflanzen Familien und ein Kopf-an-Tail zyklische R&uuml;ckgrat und eine Cystin-Knot, arrangiert von drei Disulfidbr&uuml;cken enthalten. Um die nat&uuml;rliche Cyclotides des V Tianshanica zu studieren, getrocknete Kr&auml;uter mit 50 % Ethanol extrahiert wurde, und konzentrierten w&auml;&szlig;rigen Extrakts war ein L&ouml;sungsmittel-L&ouml;sungsmittel-Partitionierung zwischen Wasser und Hexan, Ethylacetat und n-Butanol, separat unterworfen. Der n-Butanol-Extrakt, enth&auml;lt Cyclotides wurde unterworfen S&auml;ulenchromatographie &uuml;ber Sephadex LH-20, mit 30 % Methanol eluiert. Die Subfraktionen wurden direkt durch DTT reduziert und von Reverse-Phase-HPLC analysiert. Die Spitzen mit verschiedenen Retentionszeiten wurden auf das Profil des RP-HPLC und gesammelten gezeigt. Die Cyclotides wurden spekuliert, basierend auf Massen reichen von 3 000 bis 3 500 Da. Die gereinigten Cyclotides wurden mit DVB-t, mit Iodacetamid, alkylierte reduziert und dann wurden zerspaltet mit Endoproteinase Glu-C, Endoproteinase Lys-C und Trypsin, getrennt. Die verdauten Peptide wurden auf RP-HPLC gereinigt und auf MALDI-TOF/TOF-Analyzer analysiert. Eine neue Cyclotide, Cycloviolacin T1 und einem gemeldeten Cyclotide Varv E wurden systemisch bestimmt mit MALDI-TOF/TOF-System. So wurde die Methode f&uuml;r die Isolierung und Charakterisierung von Cyclotides schnell hintereinander gebaut.

[Die die Struktur der beiden Cyclotides von Viola Tianshanica Maxim von MALDI-TOF/TOF-MS-Analyse].

I cyclotides sono una famiglia di proteine &quot;mini&quot; cicliche che si verificano in Violaceae, Rubiaceae e Cucurbitaceae famiglie dei vegetali e contengono un backbone ciclico testa-coda e un nodo di cistina organizzato da tre ponti disolfuro. Per studiare la cyclotides naturale di tianshanica V, erba secca &egrave; stata estratta con etanolo al 50%, e l&#39;estratto acquoso concentrato &egrave; stato sottoposto ad un solvente-solvente partizionamento tra acqua ed esano, acetato di etile, n-butanolo, separatamente. L&#39;Estratto di n-butanolo contenente cyclotides fu sottoposto a cromatografia a colonna sopra Sephadex LH-20, eluito con metanolo al 30%. I subfractions erano direttamente ridotto da DTT e analizzati mediante HPLC in fase inversa. I picchi con tempi di ritenzione differenti sono stati mostrati sul profilo di RP-HPLC e raccolti. I cyclotides sono stati speculato basato sul range di masse da 3 000 a 3 500 Da. Il cyclotides purificato sono stati ridotti con DTT, alchilati con iodoacetamide e poi sono stati spaccati con endoproteinase Glu-C, endoproteinase-Lys-C e tripsina, separatamente. I digerita peptidi sono stati purificati su RP-HPLC e analizzati su analizzatore di MALDI TOF/TOF. Un nuovo cyclotide, cycloviolacin T1 e un varv cyclotide segnalati E sistemica sono stati determinati mediante sistema di MALDI-TOF/TOF. Cos&igrave; il metodo per l&#39;isolamento e caratterizzazione di cyclotides fu rapidamente costruito in successione.

[Chiarire la struttura delle due cyclotides di maxim tianshanica Viola da analisi MALDI TOF/TOF MS].

Cyclotides &#x30A2;&#x30AB;&#x30CD;&#x79D1;&#x30B9;&#x30DF;&#x30EC;&#x79D1;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x300C;&#x30DF;&#x30CB;&#x300D;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3068;&#x30A6;&#x30EA;&#x79D1;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3068;&#x982D;&#x5C3E;&#x7E70;&#x8FD4;&#x3057;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068; 3 &#x3064;&#x306E;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7269;&#x7D50;&#x675F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x3073;&#x76EE;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;V tianshanica &#x306E;&#x81EA;&#x7136; cyclotides &#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4E7E;&#x71E5;&#x30CF;&#x30FC;&#x30D6; 50% &#x30A8;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x62BD;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;&#x62BD;&#x51FA;&#x6DB2;&#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x6C34;&#x3068;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#x3068;&#x9162;&#x9178;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x3001;n-&#x30D6;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x9593;&#x5225;&#x306B;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5206;&#x5272;&#x6EB6;&#x5A92;-&#x6EB6;&#x5A92;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Cyclotides &#x3092;&#x542B;&#x3080; n-&#x30D6;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x62BD;&#x51FA;&#x30AB;&#x30E9;&#x30E0; &#x30FB; &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x30BB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; LH-30% &#x30E1;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x6EB6;&#x51FA; 20&#x3001;&#x670D;&#x5F93;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E9C;&#x5206;&#x753B;&#x76F4;&#x63A5; DTT &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x524A;&#x6E1B;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x9006;&#x76F8; HPLC &#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x4FDD;&#x6301;&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306F; RP HPLC &#x3068;&#x53CE;&#x96C6;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;Cyclotides &#x3044;&#x305F;&#x63A8;&#x6E2C; 3 000 3 &#x304B;&#x3089;&#x5927;&#x8846;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F; 500 &#x30C0;&#x3002;&#x7CBE;&#x88FD; cyclotides &#x3068; DTT&#x3001;&#x30E8;&#x30FC;&#x30C9;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C8;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F; [endoproteinase Glu C&#x3001;endoproteinase Lys C &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x5225;&#x3005; &#x306B;&#x88C2;&#x304B;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6D88;&#x5316;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;, MALDI TOF/TOF &#x30A2;&#x30CA;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B6;&#x30FC;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x65B0;&#x3057;&#x3044; cyclotide&#x3001;cycloviolacin T1 &#x3068;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F; cyclotide varv E &#x5168;&#x8EAB; MALDI TOF/TOF &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3060;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3068; cyclotides &#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3059;&#x3050;&#x306B;&#x9023;&#x7D9A;&#x3067;&#x5EFA;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

[&#x30D3;&#x30AA;&#x30E9; tianshanica &#x30DE;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E0;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E; cyclotides &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F; MALDI TOF/TOF MS &#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E3;&#x660E;]&#x3002;

Cyclotides Violaceae, Rubiaceae&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC21C;&#xD658; &quot;&#xBBF8;&#xB2C8;&quot; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC00;&#xC871; &#xC774;&#xBA70;, Cucurbitaceae &#xAC00;&#xC871;&#xC744; &#xC124;&#xCE58; &#xD558; &#xACE0; &#xBA38;&#xB9AC;-&#xAF2C;&#xB9AC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xBC31;&#xBCF8; &#xBC0F; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC758;&#xD574; cystine &#xB9E4;&#xB4ED; &#xD3EC;&#xD568;. 50% &#xC5D0;&#xD0C4;&#xC62C;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xB41C; &#xB9D0;&#xB9B0;&#xB41C; &#xD5C8;&#xBE0C; V tianshanica&#xC758; &#xC790;&#xC5F0; cyclotides &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xC9D1;&#xC911;&#xB41C; &#xC218;&#xC131; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC740; &#xC6A9; &#xB9E4; &#xC6A9; &#xB9E4; &#xBB3C;, &#xD5E5; &#xC0B0;, &#xCD08; &#xC0B0; &#xC5D0;&#xD2F8;&#xACFC; n butanol &#xC0AC;&#xC774; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBD84;&#xD560;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;. Cyclotides&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; n butanol &#xCD94;&#xCD9C;&#xC740; &#xC5F4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; Sephadex LH-20 &#xB144; &#xC774;&#xC0C1; &#xD558; 30% &#xBA54;&#xD0C4;&#xC62C;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; eluted&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;. Subfractions &#xC9C1;&#xC811; DTT &#xAC10;&#xC18C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC5ED; &#xC0C1; HPLC&#xB85C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xBCF4;&#xC874; &#xD68C;&#xC640; &#xBD09;&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; RP HPLC &#xBC0F; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. Cyclotides&#xB85C; 3 000&#xC5D0;&#xC11C; 3&#xC758; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD94;&#xCE21; &#xD588;&#xB2E4; 500 Da. &#xC21C;&#xD654; cyclotides DTT, alkylated iodoacetamide&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; endoproteinase Glu C, endoproteinase &#xB9AC;&#xC2A4; C&#xC640; &#xD2B8;&#xB9BD; &#xC2E0;, &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBD99;&#xC5B4; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xD654; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; RP HPLC&#xC5D0; &#xC815;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; MALDI TOF/TOF &#xBD84;&#xC11D;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. MALDI TOF/TOF &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; cyclotide, cycloviolacin T1 &#xBC0F; &#xBCF4;&#xACE0; cyclotide varv E &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB798;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC;&#xC640; cyclotides&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xC5F0;&#xC18D; &#xD574; &#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC74;&#xC124; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C;

[MALDI TOF TOF/MS &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBE44;&#xC62C;&#xB77C; tianshanica maxim&#xC758; &#xB450; cyclotides&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; elucidating].

Los cyclotides son una familia de prote&iacute;nas &quot;mini&quot; c&iacute;clicas que se producen en Violaceae, Rubiaceae y cucurbit&aacute;ceas familias de plantas y contienen una estructura c&iacute;clica de cabeza a cola y un nudo de cistina arregl&oacute; por tres enlaces de disulfuro. Para estudiar la cyclotides natural de tianshanica V, hierba seca fue extra&iacute;da con etanol al 50%, y el extracto acuoso concentrado fue sometido a un solvente solvente repartir entre agua y hexano, acetato de etilo y n-butanol, por separado. El extracto de n-butanol conteniendo cyclotides fue sometido a la cromatograf&iacute;a de columna sobre Sephadex LH-20, eluida con 30% de metanol. Las subfracciones se redujo en TDT directamente y se analizaron por HPLC de fase inversa. Los picos con tiempos de retenci&oacute;n diferentes fueron demostrados en el perfil de RP-HPLC y recogidos. Los cyclotides se especula basado en el rango de masas de 3 000 a 3 500 Da. Los cyclotides purificadas se redujeron con TDT, alquilado con iodoacetamide y luego fueron troceados con Endoproteinasa Glu-C, Endoproteinasa Lys-C y tripsina, por separado. Los p&eacute;ptidos digeridos fueron purificados en RP-HPLC y analizados en analizador de MALDI TOF/TOF. Un nuevo cyclotide, cycloviolacin T1 y un varv de cyclotide divulgados E sist&eacute;micamente se determinaron mediante MALDI TOF/TOF sistema. As&iacute; que el m&eacute;todo para el aislamiento y caracterizaci&oacute;n de cyclotides se construy&oacute; r&aacute;pidamente en la sucesi&oacute;n.

[Dilucidar la estructura de dos cyclotides de tianshanica m&aacute;xima de Viola por el an&aacute;lisis por MALDI TOF/TOF MS].

&#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC9C4; &#xD575; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P450s &#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; NADPH-&#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P450 reductase (&#xC2EC;&#xD3D0; &#xC18C;&#xC0DD;&#xC220;) P450 monooxygenases&#xC758; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD1A0;&#xB2C8; &#xC9C0;&#xC758; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P450 reductase &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD55C; cDNA (TchCPR)&#xB294; &#xAD73;&#xC740; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC808;&#xC5F0;. CDNA 717 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; 2154 &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xC758; &#xC5F4;&#xB824;&#xC788;&#xB294; &#xB3C5;&#xC11C; &#xD504;&#xB808;&#xC784;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Tchcpr&#xB294; gumnosperms&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; Cprs&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131; (&amp;gt; 82%) &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; angiosperms (&lt; 74%). &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; Tchcpr&#xC640; &#xADF8;&#xC758; &#xD0DC;&#xADF8;&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790; &#xD4E8;&#xC804; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xC798;&#xB9B0; &#xAD6C;&#xBB38; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988; &#xAC00;&#xC838;&#xC628; &#xC720;&#xBC1C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; B121(DE3), &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xD654; &#xCE5C;&#xD654;&#xC131; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. 61 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; N-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC758; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xD615;&#xD0DC; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; 48 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; Tchcpr&#xC758; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xC548; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; Tchcpr&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c.&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; Recombinantly &#xC815;&#xD654; cprt61&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; C&#xC758; 1.6057 nmol microg TchCPR reductase &#xB2F9; &#xBD84; &#xB2F9; &#xAC10;&#xC18C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xD615;&#xD0DC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB192;&#xC740;.

[cDNA &#xD074;&#xB85C;&#xB2DD; Taxus &#xAF43;&#xC758; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P450 reductase&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; overexpression &#xBC0F; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D;].

NADPH-&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; p450 &#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; (CPR) p450 &#x6C27;&#x5316; monooxygenases &#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4F19;&#x4F34;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6240;&#x6709;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P450s &#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x6350;&#x52A9;&#x56FD;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0; &#xFF08;TchCPR&#xFF09; &#x7F16;&#x7801;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; p450 &#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; T.&#x4E2D;&#x56FD;&#x5B64;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x6108;&#x4F24;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;CDNA &#x5305;&#x542B;&#x5E27;&#x6253;&#x5F00;&#x9605;&#x8BFB;&#x7684; 2154&#x5E74;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7F16;&#x7801;&#x4E00;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA; 717&#x3002;TchCPR &#x5177;&#x6709;&#x9AD8;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#x5230;&#x5176;&#x4ED6;&#x56FD;&#x522B;&#x7684; gumnosperms (&gt; 82%&#xFF09; &#x6BD4;&#x88AB;&#x5B50;&#x690D;&#x7269;&#x7684; &#xFF08;&lt; 74%)&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5168;&#x957F; TchCPR &#x548C; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x878D;&#x5408;&#x4ED6;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x622A;&#x65AD;&#x6784;&#x9020;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E86;&#x548C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8868;&#x8FBE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; B121(DE3)&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x7EAF;&#x51C0;&#x4EB2;&#x548C;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; N &#x7EC8;&#x7AEF; 48 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; TchCPR &#x88AB;&#x6210;&#x529F;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x8D85;&#x8FC7; 61 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9AD8;&#x6548;&#x5730;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x622A;&#x65AD;&#x7684; TchCPR &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x88AB;&#x6DB2;&#x8D28;&#x8054;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; C.&#x51CF;&#x5C11;Recombinantly &#x7EAF;&#x51C0;&#x7684; CPRT61 &#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6D3B;&#x52A8;&#x662F;&#x6BCF;&#x5206;&#x949F;&#x6BCF; microg TchCPR &#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 1.6057 nmol &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; C &#x548C;&#x5B83;&#x662F;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6;&#x56DB;&#x79CD;&#x622A;&#x65AD;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3002;

[cDNA &#x514B;&#x9686;&#x3001; &#x4E2D;&#x56FD;&#x7EA2;&#x8C46;&#x6749;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; p450 &#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x7684;&#x5F02;&#x6E90;&#x8868;&#x8FBE;&#x53CA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5206;&#x6790;]&#x3002;

NADPH-cytochrome P450 reductase (CPR), a partner for P450 monooxygenases, serves as the electron donor to almost all eukaryotic cytochrome P450s. One cDNA (TchCPR) encoding cytochrome P450 reductase of T. chinensis was isolated from callus cells. The cDNA contains an open reading frame of 2154 nucleotides which encodes a protein of 717 amino acid residues. The TchCPR has higher similarity to other CPRs of gumnosperms (>82%) than that of angiosperms (<74%). The recombinant full-length TchCPR and a series of N-terminal truncated constructs with N-terminal fusion of His Tag were obtained and induced to express in E. coli B121(DE3), and then purified using affinity chromatography. The truncated forms of N-terminal more than 61 amino acid residues could be efficiently expressed while the truncated mutant of N-terminal 48 amino acid residues and the wild-type TchCPR were not successfully expressed in E. coli cells. The activity of the truncated TchCPR was assayed by measuring the reduction of cytochrome C. The electron transfer activity of the recombinantly purified CPRT61 was 1.6057 nmol of cytochrome C reduced per min per microg TchCPR reductase, and it is higher than that of the other four truncated forms.

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Jian-Qiang Kong

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