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Measuring the Kinetics of mRNA Transcription in Single Living Cells

The transcriptional activity of RNA polymerase II (Pol II) is a dynamic process and therefore measuring the kinetics of the transcriptional process in ...

Bar Ilan University

Bar-Ilan University

GeneRetriever&#xFF1A; &#x8F6F;&#x4EF6;&#x6765;&#x63D0;&#x53D6;&#x6240;&#x6709;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9057;&#x4F20;&#x6807;&#x8BB0;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x534F;&#x52A9;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49;&#x82AF;&#x7247;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;

GeneRetriever: software to extract all genes and transcripts in between two genetic markers to assist design of human custom microarrays.

GeneRetriever : logiciel pour extraire tous les g&egrave;nes et les transcriptions entre deux marqueurs g&eacute;n&eacute;tiques pour aider &agrave; la conception de puces personnalis&eacute;es humaine.

GeneRetriever: Software, um alle Gene und Transkripte in zwischen zwei genetische Marker zu extrahieren, um benutzerdefinierte Gestaltung von Mensch-Microarrays zu unterst&#xFC;tzen.

GeneRetriever: software per estrarre tutti i geni e le trascrizioni tra due marcatori genetici per assistere la progettazione dei microarrays umano personalizzato.

GeneRetriever: &#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x4EBA;&#x9593;&#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30E0; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x62BD;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x3002;

GeneRetriever: &#xC18C;&#xD504;&#xD2B8;&#xC6E8;&#xC5B4; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; &#xC9C0;&#xC815; microarrays&#xC758; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC0AC;&#xC774; &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C;&#xB97C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

GeneRetriever: software para extraer todos los genes y las transcripciones entre dos marcadores gen&eacute;ticos para ayudar a dise&ntilde;o de microarrays personalizado humano.

Doublecortin &#x6837; (DCX) &#x57DF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;DCX &#x4E32;&#x8054;&#x57DF;&#x663E;&#x793A;&#x5728; X-&#x8FDE;&#x9501; doublecortin (DCX) &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5728;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x8272;&#x7D20;&#x53D8;&#x6027;-1 (RP1)&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B; DCX &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x662F;&#x5173;&#x8054;&#x4E0E;&#x5F02;&#x5E38;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3001; &#x766B;&#x75EB;&#x3001; &#x7CBE;&#x795E;&#x53D1;&#x80B2;&#x8FDF;&#x7F13; &#xFF1B;RP1 &#x7A81;&#x53D8;&#x662F;&#x5173;&#x8054;&#x7A97;&#x4F53;&#x7684;&#x7EE7;&#x627F;&#x5931;&#x660E;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; DCDC2 &#x5DF2;&#x7ECF;&#x4E0E; dyslectic &#x9605;&#x8BFB;&#x6B8B;&#x75BE;&#x4EBA;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x51FA;&#x4E8E;&#x6B64;&#x57FA;&#x56E0;&#x5BB6;&#x65CF;&#x53EF;&#x80FD;&#x5F88;&#x91CD;&#x8981;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x900F;&#x5F7B;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9F20;&#x6807;&#x4E2D;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x3002;DCX &#x91CD;&#x590D;&#x57FA;&#x56E0;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684; 11 &#x4E2A; paralogs&#xFF0C;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x514B;&#x9686; DCX &#x57DF;&#x4ECE;&#x4E5D;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8D28;&#x7591;&#x5F52;&#x4E8E; DCX &#x57DF;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x4E4B;&#x95F4;&#xFF0C;&#x5747;&#x53D7;&#x5230;&#x4FDD;&#x80B2;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; DCX &#x57DF;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5F00;&#x59CB;&#x50A8;&#x85CF;&#x5728;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x8C03;&#x8282;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x523A;&#x6FC0;&#x4F53;&#x5916;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7EC4;&#x88C5;&#x3002;&#x4E32;&#x8054;&#x91CD;&#x590D;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x800C;&#x90A3;&#x4E9B;&#x4E0E;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E3A;&#x5BCC;&#x542B;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ED3;&#x6784;&#x6216;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x7684;&#x5355;&#x4E00;&#x91CD;&#x590D;&#x4E2D;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x9AA8;&#x67B6;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7EC4;&#x4EF6; JNK/&#x5730;&#x56FE;-&#x6FC0;&#x9176;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x53EA;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x4EA4;&#x4E92; Neurabin 2 &#x548C;&#x4E0D;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x96C6;&#x56E2;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x534F;&#x4F1A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;Sub-specialization &#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x6210;&#x5458;&#x5C40;&#x9650;&#x80DE;&#x5185;&#x5B9A;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x89E3;&#x91CA;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x6210;&#x529F;&#x3002;

&#x5171;&#x540C;&#x548C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9F20;&#x6807; DCX &#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;

The doublecortin-like (DCX) domains serve as protein-interaction platforms. DCX tandem domains appear in the product of the X-linked doublecortin (DCX) gene, in retinitis pigmentosa-1 (RP1), as well as in other gene products. Mutations in the human DCX gene are associated with abnormal neuronal migration, epilepsy, and mental retardation; mutations in RP1 are associated with a form of inherited blindness, while DCDC2 has been associated with dyslectic reading disabilities. Motivated by the possible importance of this gene family, a thorough analysis to detect all family members in the mouse was conducted. The DCX-repeat gene superfamily is composed of eleven paralogs, and we cloned the DCX domains from nine different genes. Our study questioned which functions attributed to the DCX domain, are conserved among the different members. Our results suggest that the proteins with the DCX-domain have conserved and unique roles in microtubule regulation and signal transduction. All the tested proteins stimulated microtubule assembly in vitro. Proteins with tandem repeats stabilized the microtubule cytoskeleton in transfected cells, while those with single repeats localized to actin-rich subcellular structures, or the nucleus. All tested proteins interacted with components of the JNK/MAP-kinase pathway, while only a subset interacted with Neurabin 2, and a nonoverlapping group demonstrated actin association. The sub-specialization of some members due to confined intracellular localization, and protein interactions may explain the success of this superfamily.

Common and divergent roles for members of the mouse DCX superfamily.

Domaines comme doublecortin (DCX) servent de plateformes d&#39;interaction de la prot&eacute;ine. Domaines tandem DCX apparaissent dans le produit du g&egrave;ne li&eacute; &agrave; le X doublecortin (DCX), dans la r&eacute;tinite pigmentaire-1 (RP1), ainsi que dans d&#39;autres produits de g&egrave;ne. Des mutations dans le g&egrave;ne humain de DCX sont associ&eacute;es &agrave; la migration neuronale anormale, l&#39;&eacute;pilepsie et un retard mental ; mutations RP1 sont associ&eacute;es &agrave; une forme de c&eacute;cit&eacute; h&eacute;r&eacute;ditaire, tandis que DCDC2 a &eacute;t&eacute; associ&eacute;e &agrave; dyslexique handicap de lecture. Motiv&eacute; par l&#39;importance de cette famille de g&egrave;nes, a effectu&eacute; une analyse approfondie pour d&eacute;tecter tous les membres de la famille chez la souris. La superfamille du g&egrave;ne DCX-r&eacute;p&eacute;tition se compose d&#39;onze paralogues, et nous avons clon&eacute; les domaines DCX de neuf diff&eacute;rents g&egrave;nes. Notre &eacute;tude remise en question de quelles fonctions attribu&eacute;es au domaine DCX, sont conserv&eacute;es entre les diff&eacute;rents membres. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les prot&eacute;ines avec le DCX-domaine ont conserv&eacute; et des r&ocirc;les uniques dans la transduction de signal et r&egrave;glement de microtubules. Toutes les prot&eacute;ines test&eacute;es stimul&eacute;e par l&#39;assemblage des microtubules in vitro. Prot&eacute;ines avec des s&eacute;quences r&eacute;p&eacute;t&eacute;es en tandem stabilis&eacute; le cytosquelette de microtubules dans les cellules transfect&eacute;es, tandis que ceux avec simples r&eacute;p&eacute;titions localis&eacute;es dans des structures subcellulaires riche en actine, ou le noyau. Tous test&eacute;s prot&eacute;ines interagissent avec les composants de la voie JNK/MAP-kinase, tandis que seulement un sous-ensemble interagi avec 2 Neurabin et un groupe ne se chevauchant pas d&eacute;montr&eacute; de liaison de l&#39;actine. La sous-sp&eacute;cialisation de certains membres en raison de limite localisation intracellulaire et interactions prot&eacute;ine peuvent expliquer le succ&egrave;s de cette superfamille.

R&ocirc;les communs et divergents pour les membres de la superfamille DCX de souris.

Die Doublecortin-artigen (DCX) Dom&auml;nen dienen als Protein-Interaktion Plattformen. DCX-Tandem-Dom&auml;nen, die in das Produkt X-chromosomale Doublecortin (DCX) Gen in Retinitis Pigmentosa-1 (RP1), ebenso wie andere Genprodukte angezeigt werden. Mutationen im menschlichen DCX-Gen sind mit Arrest der neuronalen Migration, Epilepsie und Geistesverlangsamung verbunden; Mutationen im RP1 sind eine Form der vererbten Blindheit, zugeordnet, w&auml;hrend DCDC2 mit legasthenischen lesen Behinderungen verbunden ist. Motiviert durch die m&ouml;gliche Bedeutung dieser gen-Familie, erfolgte eine gr&uuml;ndliche Analyse, alle Familienmitglieder in der Maus zu erkennen. Der DCX-Wiederholung-Gen-Superfamilie besteht aus elf Paralogs, und wir die DCX-Dom&auml;nen aus neun verschiedenen Genen geklont. Unsere Studie befragt, welche Funktionen der DCX-Dom&auml;ne zugeschrieben, sind unter den verschiedenen Mitgliedern konserviert. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass die Proteine mit der DCX-Domain erhalten haben und einzigartigen Rollen in Microtubule-Verordnung und Signal-Transduktion. Alle getesteten Proteine stimuliert Microtubule Versammlung in-vitro. Proteine mit Tandem-Wiederholungen stabilisiert Microtubule Zytoskeletts in transfected Zellen, w&auml;hrend die mit einzelnen Wiederholungen Aktin-reiche subzellulare Strukturen oder den Zellkern lokalisiert. Alle getesteten Proteine interagierte mit Komponenten von JNK/MAP-Kinase-Signalweg, w&auml;hrend nur eine Teilmenge mit Neurabin 2 interagiert, und eine nicht &uuml;berlappende Gruppe Aktin-Verband zeigte. Die Sub-specialization einiger Mitglieder aufgrund des beschr&auml;nkt intrazellul&auml;re Lokalisation und Protein-Interaktionen erkl&auml;rt den Erfolg dieser Superfamilie.

Gemeinsame und unterschiedliche Rollen f&uuml;r Mitglieder der Maus-DCX-Superfamilie.

I domini di simil-doublecortin (DCX) servono come piattaforme di interazione della proteina. Domini tandem DCX compaiono nel prodotto del gene X-linked doublecortin (DCX), retinite pigmentosa-1 (RP1), cos&igrave; come in altri prodotti del gene. Mutazioni nel gene DCX umana sono associate con anomalie della migrazione neuronale, epilessia e ritardo mentale; mutazioni nel RP1 sono associate con una forma di cecit&agrave; ereditaria, mentre DCDC2 &egrave; stato associato con disabilit&agrave; di lettura dyslectic. Motivata dall&#39;importanza possibile di questa famiglia di geni, &egrave; stata condotta un&#39;analisi approfondita per individuare tutti i membri della famiglia nel topo. La Superfamiglia gene DCX-ripetizione &egrave; composta da undici paralogs e abbiamo clonato i domini DCX da nove diversi geni. Il nostro studio in dubbio che le funzioni attribuite al dominio DCX, sono conservate tra i diversi membri. I nostri risultati suggeriscono che le proteine con il dominio di DCX hanno conservato e unico ruolo nella trasduzione del segnale e regolamento dei microtubuli. Tutte le proteine testate stimolarono microtubuli in vitro. Le proteine con ripetizioni tandem stabilizzato il citoscheletro dei microtubuli in celle transfected, mentre quelli con singoli ripete localizzati a strutture subcellulari actina-ricco, o il nucleo. Tutti testati proteine ha interagito con i componenti della via JNK/mappa-chinasi, mentre solo un sottoinsieme interagito con Neurabin 2, e un gruppo non sovrapposta dimostrata associazione actina. Il Dott di alcuni membri dovuto a limitata localizzazione intracellulare, e le interazioni della proteina possono spiegare il successo di questa superfamiglia.

Ruoli comuni e divergenti per i membri della superfamiglia del mouse DCX.

Doublecortin &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; (DCX) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DCX &#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF; doublecortin (DCX) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x8272;&#x7D20;&#x5909;&#x6027;&#x75C7;-1 &#xFF08;RP1) &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x4ED6;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; DCX &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x52D5;&#x3001;&#x3066;&#x3093;&#x304B;&#x3093;&#x3068;&#x7CBE;&#x795E;&#x9045;&#x6EDE;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;;DCDC2 dyslectic &#x8AAD;&#x307F;&#x969C;&#x5BB3;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; RP1 &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x7D99;&#x627F;&#x8272;&#x899A;&#x7570;&#x5E38;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52D5;&#x6A5F;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x5BB6;&#x65CF;&#x5168;&#x54E1;&#x3067;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FB9;&#x5E95;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;DCX repeat &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC; &#x30A4;&#x30EC;&#x30D6;&#x30F3; &#x30D1;&#x30E9;&#x30ED;&#x30B0;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;DCX &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; 9 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x9593;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; DCX &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x8CEA;&#x554F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;DCX &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x793A;&#x5506;&#x3068;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3068;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3002;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E; in vitro &#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x3067;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x4E0B;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6838;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x3068;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E2D;&#x306E; transfected &#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x307F; Neurabin 2 &#x3068;&#x4EA4;&#x6D41;&#x3057;&#x3001;&#x91CD;&#x8907;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x5354;&#x4F1A;&#x9593; JNK/MAP &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8FD1;&#x5E74;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x3057;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; DCX &#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x5171;&#x901A;&#x3068;&#x767A;&#x6563;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3002;

Doublecortin &#xAC19;&#xC740; (DCX) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DCX &#xD0E0;&#xB364; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; X&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; doublecortin (DCX) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xD654;-1 (RP1) &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488; &#xCC98;&#xB7FC; &#xC81C;&#xD488;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; DCX &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xACBD; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, &#xAC04; &#xC9C8;, &#xC815;&#xC2E0; &#xC9C0;&#xCCB4;;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; rp1&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; DCDC2 dyslectic &#xC77D;&#xAE30; &#xC7A5;&#xC560;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0C1;&#xC18D; &#xB41C; &#xC2E4;&#xBA85;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC88C;&#xC6B0;, &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC744; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCCA0;&#xC800; &#xD55C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. DCX &#xBC18;&#xBCF5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; superfamily 11 paralogs&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 9 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; DCX &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBCF5;&#xC81C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; DCX &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC;, &#xB2E4;&#xB978; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; DCX &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xC874; &#xD574;&#xC57C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; microtubule &#xADDC;&#xC81C;&#xC640; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xAC70;&#xCE5C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microtubule &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xCCB4; &#xC678; &#xC790;&#xADF9;. &#xC9C1;&#xB82C; &#xC2DD; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microtubule cytoskeleton transfected &#xC138;&#xD3EC; &#xADF8; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBC18;&#xBCF5; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; subcellular &#xAD6C;&#xC870; &#xB610;&#xB294; &#xD575;&#xC744; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; &#xC548;&#xC815;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; Neurabin 2&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xACB9;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xADF8;&#xB8F9; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD611;&#xD68C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; JNK/&#xC9C0;&#xB3C4;-&#xB2C8; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC77C;&#xBD80; &#xD68C;&#xC6D0;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xAD6D;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC774;&#xC774; superfamily&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC744; &#xC124;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; DCX superfamily&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xD655;&#xC0B0; &#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;.

Los dominios de doublecortin-como (DCX) sirven como plataformas de interacci&oacute;n de la prote&iacute;na. Dominios de t&aacute;ndem DCX aparecen en el producto del gen doublecortin X-ligado (DCX), en la retinosis pigmentaria-1 el (RP1), as&iacute; como en otros productos g&eacute;nicos. Las mutaciones en el gene humano de DCX est&aacute;n asociadas con la migraci&oacute;n neuronal anormal, epilepsia y retraso mental; mutaciones en RP1 se asocian a una forma de ceguera hereditaria, mientras DCDC2 se ha asociado con disl&eacute;xicos lectura discapacidades. Motivado por la posible importancia de esta familia de genes, se realiz&oacute; un an&aacute;lisis exhaustivo para detectar a todos los miembros de la familias en el rat&oacute;n. La superfamilia de gene DCX-repetici&oacute;n se compone de once paralogs, y hemos reproducido los dominios DCX de nueve genes diferentes. Nuestro estudio cuestion&oacute; qu&eacute; funciones atribuidas al dominio DCX, se conservan entre los diferentes miembros. Nuestros resultados sugieren que las prote&iacute;nas con el dominio DCX han conservado y funciones &uacute;nicas en la transducci&oacute;n de se&ntilde;al y regulaci&oacute;n de microt&uacute;bulos. Todas las prote&iacute;nas probadas estimulan Asamblea de microt&uacute;bulos in vitro. Prote&iacute;nas con repeticiones en t&aacute;ndem estabilizan el citoesqueleto de microt&uacute;bulos en las c&eacute;lulas transfected, mientras que aquellos con repeticiones solas localizadas a estructuras subcelulares ricos en actina, o el n&uacute;cleo. Todo probado prote&iacute;nas interact&uacute;an con componentes de la v&iacute;a JNK/MAP-quinasa, mientras que s&oacute;lo un subconjunto interactu&oacute; con 2 Neurabin y un grupo traslapan demostr&oacute; Asociaci&oacute;n de actina. La subespecialidad de algunos miembros debido al limitado localizaci&oacute;n intracelular, y las interacciones prote&iacute;na pueden explicar el &eacute;xito de esta superfamilia.

Funciones comunes y divergentes para miembros de la Superfamilia DCX de rat&oacute;n.

We imaged transcription in living cells using a locus-specific reporter system, which allowed precise, single-cell kinetic measurements of promoter binding, initiation and elongation. Photobleaching of fluorescent RNA polymerase II revealed several kinetically distinct populations of the enzyme interacting with a specific gene. Photobleaching and photoactivation of fluorescent MS2 proteins used to label nascent messenger RNAs provided sensitive elongation measurements. A mechanistic kinetic model that fits our data was validated using specific inhibitors. Polymerases elongated at 4.3 kilobases min(-1), much faster than previously documented, and entered a paused state for unexpectedly long times. Transcription onset was inefficient, with only 1% of polymerase-gene interactions leading to completion of an mRNA. Our systems approach, quantifying both polymerase and mRNA kinetics on a defined DNA template in vivo with high temporal resolution, opens new avenues for studying regulation of transcriptional processes in vivo.

In vivo dynamics of RNA polymerase II transcription.

Hemos fotografiado la transcripci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas vivas utilizando un sistema reportero locus espec&#xED;ficos, lo que permiti&#xF3; precisos, una sola c&#xE9;lula de mediciones cin&#xE9;ticas de promotor de uni&#xF3;n de iniciaci&#xF3;n, y la elongaci&#xF3;n. Photobleaching de fluorescente RNA polimerasa II revel&#xF3; varias poblaciones cin&#xE9;ticamente distintas de la enzima que interact&#xFA;a con un gen espec&#xED;fico. Photobleaching y fotoactivaci&#xF3;n de prote&#xED;nas fluorescentes MS2 utilizados para etiquetar los ARN mensajeros nacientes siempre sensibles a las mediciones de elongaci&#xF3;n. Un modelo mecanicista cin&#xE9;tica que se ajuste a nuestros datos se valid&#xF3; el uso de inhibidores espec&#xED;ficos. Polimerasas alargado en el 4,3 kilobases min (-1), mucho m&#xE1;s r&#xE1;pido de lo que se documenta, y entr&#xF3; en un estado de pausa inesperada para los tiempos largos. Inicio de la transcripci&#xF3;n era ineficiente, con s&#xF3;lo el 1% de las interacciones gen de la polimerasa-que conducen a la realizaci&#xF3;n de un ARNm. Nuestro enfoque de sistemas, tanto en la cuantificaci&#xF3;n de la polimerasa y la cin&#xE9;tica de ARNm en una plantilla de ADN se define en vivo con alta resoluci&#xF3;n temporal, abre nuevas v&#xED;as para el estudio de la regulaci&#xF3;n de los procesos de transcripci&#xF3;n in vivo.

En Vivo Din&#xE1;mica de la RNA polimerasa II transcripci&#xF3;n

&#x6211;&#x4EEC;&#x6620;&#x50CF;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x8F68;&#x8FF9;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5141;&#x8BB8;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6D4B;&#x91CF;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7ED3;&#x5408;&#x3001; &#x8D77;&#x7206;&#x548C;&#x4F38;&#x957F;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#x7684;&#x8367;&#x5149; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II &#x900F;&#x9732;&#x51E0;&#x4E2A;&#x52A8;&#x529B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E0D;&#x540C;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x4E0E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x9176;&#x3002;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#x548C;&#x8C03;&#x4EA1;&#x7528;&#x4E8E;&#x6807;&#x7B7E;&#x65B0;&#x751F;&#x4FE1;&#x4F7F; Rna &#x8367;&#x5149; MS2 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x63D0;&#x4F9B;&#x654F;&#x611F;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x578B;&#x9002;&#x5408;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x88AB;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x4F7F;&#x7528;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x5F02;&#x6027;&#x7B80;&#x5217;&#x7EC6;&#x957F;&#x7684;&#x5728; 4.3 kilobases min(-1)&#xFF0C;&#x6BD4;&#x4EE5;&#x524D;&#x6709;&#x6848;&#x53EF;&#x7A3D;&#xFF0C;&#x5FEB;&#x5F97;&#x591A;&#x548C;&#x8FDB;&#x5165;&#x6682;&#x505C;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x610F;&#x5916;&#x5730;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x8D77;&#x75C5;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6548;&#x7387;&#x8F83;&#x4F4E;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709; 1%&#x7684;&#x591A;&#x805A;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5BFC;&#x81F4; mRNA &#x7684;&#x5B8C;&#x6210;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x91CF;&#x5316;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x548C; mRNA &#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x9AD8;&#x65F6;&#x7A7A;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4F53;&#x5185; DNA &#x6A21;&#x677F;&#x5C06;&#x6253;&#x5F00;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x65B0;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;

RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II &#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;

Nous imag&#xE9;e de la transcription dans les cellules vivantes en utilisant un syst&#xE8;me rapporteur sp&#xE9;cifique du locus, ce qui a permis pr&#xE9;cis, une seule cellule mesures cin&#xE9;tiques de promoteur de liaison, l&#x26;#39;initiation et l&#x26;#39;&#xE9;longation. Photoblanchiment de fluorescente ARN polym&#xE9;rase II a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; plusieurs populations distinctes cin&#xE9;tiquement de l&#x26;#39;enzyme interagissant avec un g&#xE8;ne sp&#xE9;cifique. Photoblanchiment et photoactivation de fluorescence MS2 prot&#xE9;ines utilis&#xE9;s pour marquer des ARN messagers naissants ont fourni des mesures d&#x26;#39;allongement sensibles. Un mod&#xE8;le m&#xE9;caniste cin&#xE9;tique qui correspond &#xE0; nos donn&#xE9;es ont &#xE9;t&#xE9; valid&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;inhibiteurs sp&#xE9;cifiques. Polym&#xE9;rases allong&#xE9;e &#xE0; 4,3 min kilobases (-1), beaucoup plus rapide que pr&#xE9;c&#xE9;demment document&#xE9;, et entra dans une &#xE9;tat de pause pour les temps de fa&#xE7;on inattendue longues. L&#x26;#39;apparition de transcription &#xE9;tait inefficace, avec seulement 1% de la polym&#xE9;rase-g&#xE8;nes interactions menant &#xE0; l&#x26;#39;ach&#xE8;vement d&#x26;#39;un ARNm. Notre approche syst&#xE9;mique, quantifier &#xE0; la fois la polym&#xE9;rase et de la cin&#xE9;tique d&#x26;#39;ARNm sur une matrice d&#x26;#39;ADN d&#xE9;finie in vivo avec une r&#xE9;solution temporelle &#xE9;lev&#xE9;e, ouvre de nouvelles voies pour l&#x26;#39;&#xE9;tude de la r&#xE9;gulation des processus de transcription in vivo.

Dans la dynamique in vivo de l&#x26;#39;ARN polym&#xE9;rase II de transcription

Wir abgebildet Transkription in lebenden Zellen mit einem Locus-spezifische Reporter-System, die pr&auml;zise, einzellige kinetische Messungen der Promotor binden, Einleitung und Dehnung erlaubt. Photobleichung von fluoreszierenden RNA-Polymerase II ergab mehrere kinetisch unterschiedliche Populationen des Enzyms, die Interaktion mit einem bestimmten Gen. Photobleichung und Photoaktivierung fluoreszierenden MS2-Proteine, die zur Bezeichnung der aufkeimenden Messenger-RNAs verwendet bereitgestellt sensible Dehnung Messungen. Ein mechanistisches kinetisches Modell, das unsere Daten passt wurde mit spezifische Inhibitoren &uuml;berpr&uuml;ft. Polymerasen bei 4,3 Kilobases min(-1), viel schneller als zuvor dokumentierten, l&auml;nglich und trat in einen angehaltenen Status f&uuml;r unerwartet lange Zeiten. Transkription Beginn war ineffizient, mit nur 1 % der Polymerase-gen-Interaktionen, die zum Abschluss einer mRNA. Unsere Systemansatz, Quantifizierung der Polymerase und mRNA Kinetik auf einer definierten DNA-Vorlage, die in-vivo mit hoher zeitlicher Aufl&ouml;sung, &ouml;ffnet neue Wege f&uuml;r die Regulierung der in-vivo transkriptionelle Prozesse zu studieren.

In-vivo Dynamik der RNA-Polymerase II Transkription.

Abbiamo ripreso la trascrizione nelle cellule viventi, utilizzando un sistema specifico locus reporter, che ha permesso la precise, cella singola misurazioni cinetiche del promotore associazione, iniziazione e allungamento. Photobleaching di fluorescente RNA polimerasi II ha rivelato diverse popolazioni cineticamente distinte dell&#39;enzima interagenti con un gene specifico. Photobleaching e photoactivation delle proteine di MS2 fluorescente utilizzato per l&#39;etichetta nascente Messaggero RNAs fornito misurazioni allungamento sensibile. Un modello meccanicistico cinetico che si inserisce i nostri dati &egrave; stato convalidato utilizzando inibitori specifici. Polimerasi allungata a 4,3 kilobasi min(-1), molto pi&ugrave; veloce di precedentemente documentato ed &egrave; entrato un stato pausa per inaspettatamente lunghi periodi. L&#39;esordio di trascrizione era inefficiente, con solo l&#39;1% delle interazioni gene-polimerasi portando a completamento di un mRNA. Il nostro approccio di sistemi, quantificare la cinetica della polimerasi sia mRNA su un modello definito di DNA in vivo con alta risoluzione temporale, apre nuove strade per lo studio della regolazione di transcriptional processi in vivo.

Dinamiche in vivo della trascrizione di RNA polimerasi II.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;&#x958B;&#x59CB;&#x3068;&#x4F38;&#x9577;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;II&#x306E;&#x9000;&#x8272;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x96C6;&#x56E3;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9000;&#x8272;&#x3068;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x4F38;&#x3073;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;&#x65B0;&#x751F;&#x306E;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;RNA&#x3092;&#x6A19;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;MS2&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x9069;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x901F;&#x304F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x6587;&#x66F8;&#x5316;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3001;4.3&#x30AD;&#x30ED;&#x5206;&#xFF08;-1&#xFF09;&#x3067;&#x4F38;&#x9577;&#x3057;&#x3001;&#x4E88;&#x671F;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x9577;&#x3044;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E00;&#x6642;&#x505C;&#x6B62;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8EE2;&#x5199;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;mRNA&#x3092;&#x5B8C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x81F3;&#x3063;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x308F;&#x305A;&#x304B;1&#xFF05;&#x3067;&#x3001;&#x975E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9AD8;&#x6642;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3067;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;DNA&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x4E0A;&#x3067;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;mRNA&#x52D5;&#x614B;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x5F53;&#x793E;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#xB7;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x9053;&#x3092;&#x958B;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;II&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;in vivo&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;, &#xAC1C;&#xC2DC; &#xBC0F; &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728;&#xC758; &#xC815;&#xBC00;, &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xCE21;&#xC815; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4; &#xAD00;&#xB828; &#xAE30;&#xC790; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC0AC; &#xBA87; &#xAD70;&#xB370;. Photobleaching &#xD615;&#xAD11; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; II&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC9C0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. Photobleaching &#xBC0F; photoactivation &#xCD08;&#xAE30; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; RNAs &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xD615;&#xAD11; MS2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xB294; &#xAE30;&#xACC4; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBAA8;&#xB378;&#xC740; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC774; &#xAC80;&#xC0AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3F4; 4.3 kilobases min(-1), &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xBE68;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBB38;&#xC11C;&#xD654;&#xC5D0; &#xAE38;&#xCB49;&#xD55C;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xC2DC; &#xC911;&#xC9C0; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xAC00; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C; &#xAE34; &#xC2DC;&#xAC04;. &#xC804;&#xC0AC; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC120;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; Mrna&#xC758; &#xC644;&#xC131;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; 1% &#xBC16;&#xC5D0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xC758; &#xB41C; DNA &#xC11C;&#xC2DD; &#xD30C;&#xC77C; &#xC784;&#xC2DC; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; mRNA &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xCE21;&#xC815; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC811;&#xADFC; &#xADDC;&#xC81C; transcriptional &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xACF5;&#xBD80;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4;&#xB3C4; &#xC5FD;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; II &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD559;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x4F9D;&#x6258;&#x6CCA;&#x82F7;&#x80F6;&#x8D28;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Cdelta (&#x916A;&#x6C28;&#x9178;) &#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x6CA1;&#x6709;&#x5B8C;&#x5168;&#x641E;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x5728;&#x7531;&#x4F9D;&#x6258;&#x6CCA;&#x82F7; Erk1/2 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x4F9D;&#x6258;&#x6CCA;&#x82F7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6301;&#x7EED;&#x6FC0;&#x6D3B; Erk1/2 &#x548C;&#x78F7;-Erk1/2 &#x7684;&#x6838;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;MEK1 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x51CF;&#x5C11;&#x4F9D;&#x6258;&#x6CCA;&#x82F7;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x51CB;&#x4EA1;&#x800C;&#x6291;&#x5236; JNK &#x548C; p38 &#x5374;&#x6CA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x6837;&#x505A;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F9D;&#x6258;&#x6CCA;&#x82F7; Erk1/2 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x662F;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; Erk1/2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x916A;&#x6C28;&#x9178; KD &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x548C;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x62A5;&#x9053;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x5BF9; 64 &#x548C; 187 &#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x662F;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x4F9D;&#x6258;&#x6CCA;&#x82F7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; PKCdeltatyrosine &#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; PKCdeltaon &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E0A;&#x916A;&#x6C28;&#x9178; 155&#xFF0C;&#x540C;&#x6837;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F9D;&#x6258;&#x6CCA;&#x82F7; Erk1/2 &#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6838;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5176;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x4E0D;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684; Erk1/2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x4F9D;&#x6258;&#x6CCA;&#x82F7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x9176;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;-1 (MKP-1&#xFF09;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E0E;&#x6301;&#x4E45;&#x6027; Erk1/2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x76F8;&#x5173;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x4E0B;&#x8C03;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6C89;&#x9ED8; mkp-1 &#x7684;&#x589E;&#x52A0; Erk1/2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x7684;&#x4F9D;&#x6258;&#x6CCA;&#x82F7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x4F9D;&#x6258;&#x6CCA;&#x82F7;&#x8BF1;&#x5BFC; polyubiquitylation &#x548C; mkp-1 &#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; PKCdeltaon &#x916A;&#x6C28;&#x9178; 64 &#x548C; 187 &#x4E13;&#x95E8; Erk1/2 &#x9014;&#x5F84;&#x901A;&#x8FC7;&#x6FC0;&#x6D3B; Erk1/2 &#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4; mkp-1 &#x7684;&#x4E0B;&#x8C03;&#x3002;

&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Cdelta &#x5BF9;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B; Erk1/2 &#x901A;&#x8FC7;&#x4E0B;&#x8C03; mkp-1 &#x7684;&#xFF1A; &#x7684;&#x4F9D;&#x6258;&#x6CCA;&#x82F7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The mechanism underlying the important role of protein kinase Cdelta (PKCdelta) in the apoptotic effect of etoposide in glioma cells is incompletely understood. Here, we examined the role of PKCdelta in the activation of Erk1/2 by etoposide. We found that etoposide induced persistent activation of Erk1/2 and nuclear translocation of phospho-Erk1/2. MEK1 inhibitors decreased the apoptotic effect of etoposide, whereas inhibitors of p38 and JNK did not. The activation of Erk1/2 by etoposide was downstream of PKCdelta since the phosphorylation of Erk1/2 was inhibited by a PKCdelta-KD mutant and PKCdelta small interfering RNA. We recently reported that phosphorylation of PKCdelta on tyrosines 64 and 187 was essential for the apoptotic effect of etoposide. Using PKCdeltatyrosine mutants, we found that the phosphorylation of PKCdeltaon these tyrosine residues, but not on tyrosine 155, was also essential for the activation of Erk1/2 by etoposide. In contrast, nuclear translocation of PKCdelta was independent of its tyrosine phosphorylation and not necessary for the phosphorylation of Erk1/2. Etoposide induced down-regulation of kinase phosphatase-1 (MKP-1), which correlated with persistent phosphorylation of Erk1/2 and was dependent on the tyrosine phosphorylation of PKCdelta. Moreover, silencing of MKP-1 increased the phosphorylation of Erk1/2 and the apoptotic effect of etoposide. Etoposide induced polyubiquitylation and degradation of MKP-1 that was dependent on PKCdelta and on its tyrosine phosphorylation. These results indicate that distinct phosphorylation of PKCdeltaon tyrosines 64 and 187 specifically activates the Erk1/2 pathway by the down-regulation of MKP-1, resulting in the persistent phosphorylation of Erk1/2 and cell apoptosis.

Phosphorylation of protein kinase Cdelta on distinct tyrosine residues induces sustained activation of Erk1/2 via down-regulation of MKP-1: role in the apoptotic effect of etoposide.

Les m&eacute;canismes qui sous-tendent le r&ocirc;le important de la prot&eacute;ine kinase Cdelta (PKCdelta) dans l&#39;effet apoptotique de l&#39;&eacute;toposide dans les cellules de gliome sont incompl&egrave;tement compris. Ici, nous avons examin&eacute; le r&ocirc;le de PKCdelta dans l&#39;activation de Erk1/2 par &eacute;toposide. Nous avons trouv&eacute; que l&#39;&eacute;toposide induit l&#39;activation persistante de Erk1/2 et la translocation nucl&eacute;aire du phospho-Erk1/2. Inhibiteurs MEK1 a diminu&eacute; l&#39;effet apoptotique de l&#39;&eacute;toposide, tandis que les inhibiteurs de p38 et de JNK n&#39;ont pas. L&#39;activation de Erk1/2 par etoposide &eacute;tait en aval de PKCdelta puisque la phosphorylation de Erk1/2 est inhib&eacute;e par un mutant PKCdelta-KD et PKCdelta petits ARN interf&eacute;rents. Nous avons r&eacute;cemment rapport&eacute; que la phosphorylation de PKCdelta sur les tyrosines 64 et 187 &eacute;tait essentiel pour l&#39;effet apoptotique de l&#39;&eacute;toposide. Utilisation de mutants de PKCdeltatyrosine, nous avons constat&eacute; que la phosphorylation de PKCdeltaon ces r&eacute;sidus de tyrosine, mais pas sur tyrosine 155, &eacute;tait &eacute;galement essentielle pour l&#39;activation de Erk1/2 par &eacute;toposide. En revanche, la translocation nucl&eacute;aire du PKCdelta &eacute;tait ind&eacute;pendante de sa phosphorylation de tyrosine et pas n&eacute;cessaire pour la phosphorylation de Erk1/2. &Eacute;toposide induite par r&eacute;gulation n&eacute;gative de la kinase phosphatase-1 (MKP-1), en corr&eacute;lation avec la phosphorylation de Erk1/2 persistante, qui d&eacute;pendait de la phosphorylation de tyrosine de PKCdelta. En outre, le silen&ccedil;age de MKP-1 augment&eacute; la phosphorylation de Erk1/2 et l&#39;effet apoptotique de l&#39;&eacute;toposide. &Eacute;toposide induite par polyubiquitylation et la d&eacute;gradation de MKP-1, qui d&eacute;pendait PKCdelta et sur sa phosphorylation de tyrosine. Ces r&eacute;sultats indiquent que la phosphorylation distincte de PKCdeltaon tyrosines 64 et 187 sp&eacute;cifiquement active la voie de Erk1/2 par la r&eacute;gulation n&eacute;gative de MKP-1, ayant pour r&eacute;sultat la phosphorylation persistante de Erk1/2 et les cellules de l&#39;apoptose.

Activation soutenue de Erk1/2 par l&#39;interm&eacute;diaire de r&eacute;gulation n&eacute;gative de MKP-1 induit la phosphorylation de la prot&eacute;ine kinase Cdelta sur les r&eacute;sidus de tyrosine distinctes : r&ocirc;le dans l&#39;effet apoptotique de l&#39;&eacute;toposide.

Der Mechanismus zugrunde liegt die wichtige Rolle der Proteinkinase Cdelta (PKCdelta) im Apoptotic Effekt von Etoposid in Gliomzellen wird nicht vollst&auml;ndig verstanden. Hier haben wir die Rolle des PKCdelta bei der Aktivierung von Erk1/2 von Etoposid gepr&uuml;ft. Wir fanden, dass dieses Etoposid anhaltende Aktivierung von Erk1/2 und nukleare Translokation von Phospho-Erk1/2 induziert. MEK1-Inhibitoren verringert den Apoptotic Effekt von Etoposid, w&auml;hrend p38 und JNK-Inhibitoren nicht tat. Die Aktivierung von Erk1/2 von Etoposid wurde flussabw&auml;rts von PKCdelta, da die Phosphorylierung von Erk1/2 durch eine PKCdelta-KD-Mutante und PKCdelta small interfering RNA gehemmt wurde. Vor kurzem berichteten wir, dass die Phosphorylierung von PKCdelta auf Tyrosines 64 und 187 war unerl&auml;sslich f&uuml;r den Apoptotic Effekt von Etoposid. Mit PKCdeltatyrosine Mutanten, fanden wir, dass die Phosphorylierung von PKCdeltaon diese Tyrosin-R&uuml;ckst&auml;nde, aber nicht auf Tyrosin 155, war auch notwendig f&uuml;r die Aktivierung von Erk1/2 von Etoposid. Im Gegensatz dazu war nukleare Translokation der PKCdelta unabh&auml;ngig vom seine Tyrosin-Phosphorylierung und nicht notwendig f&uuml;r die Phosphorylierung von Erk1/2. Etoposid induzierte Herunterregulation Kinase Phosphatase-1 (MKP-1), die mit permanenten Phosphorylierung von Erk1/2 korreliert und war die Tyrosin-Phosphorylierung von PKCdelta abh&auml;ngig. Zudem sind die Unterdr&uuml;ckender MKP-1 die Phosphorylierung von Erk1/2 und der Apoptotic Effekt von Etoposid. Etoposid induzierte Polyubiquitylation und Abbau von MKP-1, die auf PKCdelta und auf seine Tyrosin-Phosphorylierung angewiesen war. Diese Ergebnisse zeigen, dass unterschiedliche Phosphorylierung des PKCdeltaon aktiviert Tyrosines 64 und 187 speziell den Erk1/2-Weg durch die Herunterregulation der MKP-1, was zu der anhaltenden Phosphorylierung von Erk1/2 und Zelle Apoptosis.

Phosphorylierung der Proteinkinase Cdelta &uuml;ber unterschiedliche Tyrosin R&uuml;ckst&auml;nde induziert anhaltende Aktivierung von Erk1/2 &uuml;ber Herunterregulation MKP-1: Rolle im Apoptotic Effekt von Etoposid.

Il meccanismo sottostante l&#39;importante ruolo della chinasi di proteina Cdelta (PKCdelta) nell&#39;effetto apoptotic di etoposide in cellule di glioma &egrave; compreso in modo incompleto. Qui, abbiamo esaminato il ruolo di PKCdelta nell&#39;attivazione di Erk1/2 di etoposide. Abbiamo trovato che etoposide indotta persistente attivazione di Erk1/2 e traslocazione nucleare di fosfo-Erk1/2. Inibitori MEK1 diminuito l&#39;effetto apoptotic di etoposide, considerando che gli inibitori di p38 e JNK non hanno. L&#39;attivazione di Erk1/2 di etoposide &egrave; stato a valle della PKCdelta poich&eacute; la fosforilazione di Erk1/2 &egrave; stata inibita da un mutante PKCdelta-KD e PKCdelta piccolo RNA interferente. Abbiamo recentemente riportato che la fosforilazione della PKCdelta su tirosine 64 e 187 era essenziale per l&#39;effetto apoptotic di etoposide. Utilizzando PKCdeltatyrosine mutanti, abbiamo trovato che la fosforilazione della PKCdeltaon questi residui di tirosina, ma non su tirosina 155, inoltre era essenziale per l&#39;attivazione di Erk1/2 di etoposide. Al contrario, traslocazione nucleare di PKCdelta &egrave; stato indipendente della sua fosforilazione della tirosina e non necessarie per la fosforilazione di Erk1/2. Etoposide indotta down-regulation della chinasi fosfatasi-1 (MKP-1), che correlato con persistente fosforilazione di Erk1/2 e dipendeva la fosforilazione della tirosina di PKCdelta. Inoltre, silenziamento di MKP-1 aumenta la fosforilazione di Erk1/2 e l&#39;effetto apoptotic di etoposide. Etoposide indotta da polyubiquitylation e degradazione di MKP-1 che era dipendente sul PKCdelta e sulla sua fosforilazione della tirosina. Questi risultati indicano che la fosforilazione distinta di PKCdeltaon tirosine 64 e 187 in particolare attiva il pathway di Erk1/2 dalla down-regulation di MKP-1, con conseguente la persistente fosforilazione di Erk1/2 e cell apoptosis.

Sostenuta attivazione di Erk1/2 via down-regulation di MKP-1 induce la fosforilazione della chinasi di proteina Cdelta sui residui di tirosina distinti: ruolo nell&#39;effetto apoptotic di etoposide.

&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; Cdelta (PKCdelta) &#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x30A8;&#x30C8;&#x30DD;&#x30B7;&#x30C9; &#x30B0;&#x30EA;&#x30AA;&#x30FC;&#x30DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Erk1/2 &#x306E;&#x30A8;&#x30C8;&#x30DD;&#x30B7;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; PKCdelta &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30A8;&#x30C8;&#x30DD;&#x30B7;&#x30C9; Erk1/2 &#x306E;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x6838;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x30D5;&#x30A9;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A9;-Erk1/2 &#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;JNK &#x3068; p38 &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F; MEK1 &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30A8;&#x30C8;&#x30DD;&#x30B7;&#x30C9;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Erk1/2 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; PKCdelta KD &#x5909;&#x7570;&#x3068; PKCdelta &#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09; RNA &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x3067; Erk1/2 &#x306E;&#x30A8;&#x30C8;&#x30DD;&#x30B7;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F; PKCdelta &#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5831;&#x544A; PKCdelta tyrosines 64 &#x3068; 187 &#x3067;&#x30A8;&#x30C8;&#x30DD;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;PKCdeltatyrosine &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; PKCdeltaon &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3; 155&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x307E;&#x305F; Erk1/2 &#x306E;&#x30A8;&#x30C8;&#x30DD;&#x30B7;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;PKCdelta &#x306E;&#x6838;&#x79FB;&#x884C;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3068; Erk1/2 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x4E0D;&#x8981;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30A8;&#x30C8;&#x30DD;&#x30B7;&#x30C9; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;-Erk1/2 &#x306E;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057; PKCdelta &#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F; 1 (MKP-1), &#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;MKP-1 &#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068; Erk1/2 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x30A8;&#x30C8;&#x30DD;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A8;&#x30C8;&#x30DD;&#x30B7;&#x30C9;&#x8A98;&#x8D77;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; PKCdelta &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F; MKP 1 &#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; PKCdeltaon &#x306E; tyrosines 64 &#x3068; 187 &#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B; Erk1/2 &#x7D4C;&#x8DEF; MKP-1 Erk1/2 &#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3002;

&#x5225;&#x500B;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; Cdelta &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B; MKP 1 &#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; Erk1/2 &#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#xFF1A; &#x30A8;&#x30C8;&#x30DD;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; etoposide&#xC758; apoptotic &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; Cdelta (PKCdelta)&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xBD88;&#xC644;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xC774;&#xD574; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; etoposide&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Erk1/2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; Pkcdelta&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; etoposide &#xC720;&#xB3C4; Erk1/2&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC778;-Erk1/2&#xC758; &#xD575; &#xC804; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; JNK&#xC640; p38 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC54A; MEK1 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; etoposide, apoptotic &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC10;&#xC18C;. Erk1/2 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; PKCdelta KD &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; PKCdelta &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;&#xB294; &#xC774;&#xD6C4; etoposide&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Erk1/2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; Pkcdelta&#xC758; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; &#xADF8; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xBCF4;&#xACE0; 64&#xC640; 187 tyrosines&#xC5D0; PKCdelta etoposide apoptotic &#xD6A8;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. PKCdeltatyrosine &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC; Pkcdeltaon&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; 155, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD588;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C; etoposide&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Erk1/2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, Pkcdelta&#xC758; &#xD575; &#xC804; &#xC88C;&#xB294; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; Erk1/2&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Etoposide &#xC720;&#xB3C4; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xB2C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;-1 (MKP-1) Erk1/2&#xC758; &#xC601;&#xAD6C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00;&#xC640; Pkcdelta&#xC758; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, MKP 1&#xC758; &#xC785;&#xC744; Erk1/2&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC640; etoposide&#xC758; apoptotic &#xD6A8;&#xACFC; &#xC99D;&#xAC00;. Etoposide polyubiquitylation&#xC640; PKCdelta &#xBC0F; tyrosine &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC885;&#xC18D; &#xB418;&#xC5C8;&#xB358; MKP 1&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; Pkcdeltaon&#xC758; tyrosines 64&#xC640; 187 &#xD2B9;&#xBCC4;&#xD788; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Erk1/2 &#xD1B5;&#xB85C; Erk1/2&#xC640; &#xC140; apoptosis&#xC758; &#xC601;&#xAD6C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; MKP-1 &#xB2E4;&#xC6B4; &#xADDC;&#xC815;.

&#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; Cdelta &#xBCC4;&#xAC1C; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC720;&#xB3C4; MKP 1 &#xB2E4;&#xC6B4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Erk1/2&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;: etoposide apoptotic &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;.

Se entiende el mecanismo subyacente a la importante funci&oacute;n de la prote&iacute;na quinasa Cdelta (PKCdelta) en el efecto apoptotic de etop&oacute;sido en c&eacute;lulas de glioma. Aqu&iacute;, se analiz&oacute; el papel de PKCdelta en la activaci&oacute;n de Erk1/2 por etop&oacute;sido. Encontramos que etoposide inducida persistente activaci&oacute;n de Erk1/2 y translocaci&oacute;n nuclear de fosfo-Erk1/2. Inhibidores de MEK1 disminuyeron el efecto apoptotic de etop&oacute;sido, mientras que los inhibidores de p38 y JNK no. La activaci&oacute;n de Erk1/2 por etoposide fue aguas abajo de PKCdelta puesto que la fosforilaci&oacute;n de Erk1/2 fue inhibida por un mutante PKCdelta-KD y ARN interferente peque&ntilde;o PKCdelta. Nos inform&oacute; recientemente que la fosforilaci&oacute;n de PKCdelta en tirosinas 64 y 187 era esencial para el efecto apoptotic de etop&oacute;sido. Usando a mutantes PKCdeltatyrosine, encontramos que la fosforilaci&oacute;n de PKCdeltaon estos residuos tirosina, pero no en tirosina 155, tambi&eacute;n es esencial para la activaci&oacute;n de Erk1/2 por etop&oacute;sido. En cambio, translocaci&oacute;n nuclear de PKCdelta era independiente de la fosforilaci&oacute;n de la tirosina y no es necesario para la fosforilaci&oacute;n de Erk1/2. Etoposide inducida abajo-regulaci&oacute;n de quinasa fosfatasa-1 (MKP-1), que correlacion&oacute; con persistente fosforilaci&oacute;n de Erk1/2 y depend&iacute;a de la fosforilaci&oacute;n de la tirosina de PKCdelta. Por otra parte, silenciamiento de MKP-1 aumenta la fosforilaci&oacute;n de Erk1/2 y el efecto de la apoptosis de etop&oacute;sido. Etoposide inducida poliubiquitinaci&oacute;n y degradaci&oacute;n de MKP-1 que era dependiente en PKCdelta y en la fosforilaci&oacute;n de la tirosina. Estos resultados indican que la fosforilaci&oacute;n distinta de PKCdeltaon tirosinas 64 y 187 espec&iacute;ficamente activa la v&iacute;a Erk1/2 por la abajo-regulaci&oacute;n de MKP-1, dando por resultado la fosforilaci&oacute;n persistente de la apoptosis de la c&eacute;lula y Erk1/2.

Fosforilaci&oacute;n de la prote&iacute;na quinasa Cdelta en residuos tirosina distintas induce la activaci&oacute;n sostenida de Erk1/2 v&iacute;a regulaci&oacute;n de MKP-1: papel en el efecto apoptotic de etop&oacute;sido.

&#x5BFC;&#x51FA;&#x7684; mRNAs &#x9488;&#x5BF9;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6216;&#x7531;&#x51E0;&#x4E2A;&#x8870;&#x51CF;&#x673A;&#x5236;&#x53EF;&#x4EE5;&#x964D;&#x89E3;&#x3002;5&#39;3 &#39; &#x9000;&#x5316;&#x673A;&#x68B0;--&gt; &#x5411;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28; P &#x673A;&#x6784; (PBs) &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9075;&#x5FAA;&#x7684; PBs &#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684; pbs &#x673A;&#x5236;&#x626B;&#x63CF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x62C7;&#x6307;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x95EE;&#x662F;&#x5426; PBs &#x79EF;&#x6781;&#x626B;&#x63CF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6216;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x5426;&#x8DB3;&#x591F;&#x3002;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x793A; PBs &#x629B;&#x951A;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x5411;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5355;&#x7C92;&#x5B50;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x8868;&#x660E;&#x5927;&#x591A;&#x6570; PBs &#x5C55;&#x793A;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5BC6;&#x95ED;&#x7684;&#x8BAE;&#x6848;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x8FD0;&#x52A8;&#xFF0C;&#x800C;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7684;&#x94C5;&#x5BF9;&#x4F1A;&#x8BAE;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x5728;&#x8FDC;&#x8DDD;&#x79BB;&#x8FD0;&#x52A8;&#x5BF9;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x628A;&#x4E00;&#x4E9B; PBs&#x3002;&#x94C5;&#x8C03;&#x52A8;&#x76F8;&#x6BD4; SMN &#x673A;&#x6784;&#x3001; &#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x4F53;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x3001; &#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x548C;&#x5E94;&#x529B;&#x9897;&#x7C92;&#x548C;&#x6269;&#x6563;&#x7CFB;&#x6570;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x3002;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4E2D;&#x65AD;&#x9020;&#x6210;&#x5927;&#x91CF;&#x51CF;&#x5C11;&#x94C5;&#x8C03;&#x52A8;&#x4E0E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; PB &#x5927;&#x4F1A;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8131;&#x8272;&#x6D4B;&#x91CF;&#x663E;&#x793A;&#x52A8;&#x6001; PB &#x88C5;&#x914D;&#x5143;&#x4EF6;&#x7684;&#x6D41;&#x91CF;&#x5E76;&#x4E0D;&#x53D7;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8131;&#x8272;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x62C7;&#x6307;&#x9176; Dcp2 &#x975E;&#x52A8;&#x6001; PB &#x6838;&#x5FC3;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E0D;&#x65AD;&#x4EA4;&#x6362; Dcp1 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x94C5;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5B83;&#x6F14;&#x793A;&#x5982;&#x4F55; PB &#x62C6;&#x88C5;&#x96C6;&#x6210;&#x5B8C;&#x6574;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;

&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; P &#x8EAB;&#x4F53;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3001; &#x88C5;&#x914D;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x53CD;&#x6C47;&#x7F16;&#x3002;

Exported mRNAs are targeted for translation or can undergo degradation by several decay mechanisms. The 5'-->3' degradation machinery localizes to cytoplasmic P bodies (PBs). We followed the dynamic properties of PBs in vivo and investigated the mechanism by which PBs scan the cytoplasm. Using proteins of the decapping machinery, we asked whether PBs actively scan the cytoplasm or whether a diffusion-based mechanism is sufficient. Live-cell imaging showed that PBs were anchored mainly to microtubules. Quantitative single-particle tracking demonstrated that most PBs exhibited spatially confined motion dependent on microtubule motion, whereas stationary PB pairs were identified at the centrosome. Some PBs translocated in long-range movements on microtubules. PB mobility was compared with mitochondria, endoplasmic reticulum, peroxisomes, SMN bodies, and stress granules, and diffusion coefficients were calculated. Disruption of the microtubule network caused a significant reduction in PB mobility together with an induction of PB assembly. However, FRAP measurements showed that the dynamic flux of assembled PB components was not affected by such treatments. FRAP analysis showed that the decapping enzyme Dcp2 is a nondynamic PB core protein, whereas Dcp1 proteins continuously exchanged with the cytoplasm. This study reveals the mechanism of PB transport, and it demonstrates how PB assembly and disassembly integrate with the presence of an intact cytoskeleton.

The dynamics of mammalian P body transport, assembly, and disassembly in vivo.

ARNm export&#xE9;s sont la cible de la traduction ou peut subir une d&#xE9;gradation par des m&#xE9;canismes de d&#xE9;sint&#xE9;gration plusieurs. Le 5&#x26;#39;- machinerie de d&#xE9;gradation&#x26;gt; 3 &#x26;#39;se localise dans les organes cytoplasmiques P (PBS). Nous avons suivi les propri&#xE9;t&#xE9;s dynamiques de PBS in vivo et &#xE9;tudi&#xE9; le m&#xE9;canisme par lequel PB num&#xE9;riser le cytoplasme. Utilisation de prot&#xE9;ines de la machinerie de d&#xE9;capsulage, nous avons demand&#xE9; si PB activement num&#xE9;riser le cytoplasme ou si un m&#xE9;canisme de diffusion bas&#xE9; sur est suffisante. Imagerie des cellules vivantes ont montr&#xE9; que PBS ont &#xE9;t&#xE9; ancr&#xE9;e principalement aux microtubules. Quantitative &#xE0; une particule de suivi a d&#xE9;montr&#xE9; que la plupart PB expos&#xE9; mouvement dans l&#x26;#39;espace confin&#xE9; d&#xE9;pend de mouvement des microtubules, alors que stationnaires paires PB ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s &#xE0; la centrosome. Certains PB translocation dans les mouvements &#xE0; long terme sur les microtubules. PB a &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9;e &#xE0; la mobilit&#xE9; des mitochondries, r&#xE9;ticulum endoplasmique, les peroxysomes, les organismes de SMN, et les granules de stress, et les coefficients de diffusion ont &#xE9;t&#xE9; calcul&#xE9;s. Perturbation du r&#xE9;seau de microtubules a caus&#xE9; une r&#xE9;duction significative de la mobilit&#xE9; PB avec une induction de PB de montage. Cependant, les mesures du PAF a montr&#xE9; que le flux dynamique de composants assembl&#xE9;s PB n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; affect&#xE9;e par de tels traitements. L&#x26;#39;analyse a montr&#xE9; que le FRAP DCP2 enzyme est une prot&#xE9;ine de d&#xE9;capsulage de base non dynamique PB, alors que DCP1 prot&#xE9;ines en permanence &#xE9;chang&#xE9;es avec le cytoplasme. Cette &#xE9;tude r&#xE9;v&#xE8;le le m&#xE9;canisme de PB de transport, et il montre comment PB montage et le d&#xE9;montage d&#x26;#39;int&#xE9;grer &#xE0; la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;un cytosquelette intact.

La dynamique des Transports corps d&#x26;#39;un mammif&#xE8;re P, montage et d&#xE9;montage en Vivo

Exportierte mRNAs sind gezielt f&uuml;r &Uuml;bersetzung oder Abbau durch mehrere Mechanismen der Zerfall unterziehen k&ouml;nnen. Die 5&#39;--&gt; 3&#39; Abbau Maschinen lokalisiert zytoplasmatischen P stellen (PBs). Wir folgten die dynamischen Eigenschaften der PBs in vivo und untersuchten der Mechanismus, mit dem PBs scan Zytoplasma. Mit Proteine der Entkr&ouml;nenenzym Maschine, fragten wir, ob scan PBs aktiv Zytoplasma oder ob ein Verbreitung basierenden Mechanismus ausreichend ist. Leben-Zelle Darstellung zeigte, dass PBs wurden haupts&auml;chlich zu Mikrotubuli verankert. Quantitative Einzel-Teilchen Verfolgung gezeigt, dass die meisten PBs abh&auml;ngig von Microtubule Bewegung, r&auml;umlich begrenzten Bewegung ausgestellt, w&auml;hrend station&auml;ren PB-Paare an das Zentrosom identifiziert wurden. Einige PBs in weitr&auml;umige Bewegungen auf Mikrotubuli transloziert. PB Mobilit&auml;t wurde verglichen mit Endoplasmatisches Retikulum, Mitochondrien, Peroxisomen, SMN stellen und Spannung Granulat und Diffusionskoeffizienten berechnet wurden. Unterbrechung des Netzwerks Microtubule verursachte eine signifikante Reduktion in PB Mobilit&auml;t zusammen mit einer Induktion von PB-Versammlung. FRAP Messungen zeigte allerdings, dass der dynamische Lichtstrom der eingebaute PB-Komponenten solche Behandlungen nicht betroffen war. FRAP-Analyse zeigte, dass das Entkr&ouml;nenenzym Enzym Dcp2 einen nicht dynamischen PB-Kern-Protein, w&auml;hrend Dcp1 Proteine kontinuierlich mit Zytoplasma ausgetauscht. Diese Studie zeigt den Mechanismus der PB-Transport, und zeigt, wie PB-Montage und Demontage mit dem Vorhandensein eines intakten Zytoskeletts integrieren.

Die Dynamik der S&auml;ugetier-P K&ouml;rper, Transport, Montage und Demontage in-vivo.

MRNAs esportati sono mirati per la traduzione o pu&ograve; subire degrado da diversi meccanismi di decadimento. 5&#39;--&gt; 3&#39; Macchine di degrado si localizza a citoplasmatiche P (PBs). Abbiamo seguito le propriet&agrave; dinamiche della PBs in vivo e studiato il meccanismo da cui PBs scansione del citoplasma. Utilizzando proteine del macchinario decapsulatura, abbiamo chiesto se PBs attivamente scandire il citoplasma o se &egrave; sufficiente un meccanismo di diffusione. Live cell imaging ha mostrato che PBs sono stati ancorati prevalentemente ai microtubuli. Rilevamento di singola particella quantitativa ha dimostrato che PBs pi&ugrave; esposte spazialmente limitato movimento dipende dal movimento dei microtubuli, mentre coppie PB stazionarie sono state identificate presso il centrosoma. Alcuni PBs traslocata in movimenti a lungo raggio sui microtubuli. Mobilit&agrave; PB &egrave; stato confrontato con il reticolo endoplasmatico, mitocondri, perossisomi, corpi di SMN, e lo stress granuli e coefficienti di diffusione sono stati calcolati. Interruzione della rete dei microtubuli ha causato una significativa riduzione nella mobilit&agrave; PB insieme ad un&#39;induzione dell&#39;Assemblea PB. Tuttavia, FRAP misurazioni hanno dimostrato che il flusso dinamico di componenti assemblati PB non fu influenzato da tali trattamenti. FRAP analisi ha dimostrato che l&#39;enzima decapsulatura Dcp2 &egrave; una proteina di nucleo di PB non dinamiche, considerando che le proteine Dcp1 continuamente scambiati con il citoplasma. Questo studio rivela il meccanismo di trasporto PB, e dimostra come lo smontaggio e montaggio di PB si integrano con la presenza di un citoscheletro intatto.

La dinamica dei mammiferi P corpo trasporto, montaggio e smontaggio in vivo.

&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;mRNA&#x306F;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 5&#x26;#39; - &#x26;gt; 3 &#x26;#39;&#x5206;&#x89E3;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;P&#x6A5F;&#x95A2;&#xFF08;PBS&#xFF09;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;PBS&#x52D5;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;PBS&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8131;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;PBS&#x3092;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x62E1;&#x6563;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30E1;&#x200B;&#x200B;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x5C0B;&#x306D;&#x305F;&#x3002;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;PBS&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x5358;&#x4E00;&#x7C92;&#x5B50;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x306F;&#x5B9A;&#x5E38;PB&#x30DA;&#x30A2;&#x304C;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;PBS&#x306F;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;PBS&#x306F;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x3067;&#x306E;&#x9577;&#x8DDD;&#x96E2;&#x904B;&#x52D5;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x305F;&#x3002; PB&#x30E2;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x3001;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;SMN&#x6A5F;&#x95A2;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x9846;&#x7C92;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x62E1;&#x6563;&#x4FC2;&#x6570;&#x3092;&#x7B97;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x7834;&#x58CA;&#x306F;&#x3001;PB&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;PB&#x79FB;&#x52D5;&#x5EA6;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;FRAP&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;PB&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; FRAP&#x5206;&#x6790;&#x306F;Dcp1&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x9023;&#x7D9A;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x8131;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x9175;&#x7D20;Dcp2&#x306F;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;PB&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;PB&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;PB&#x7D44;&#x7ACB;&#x3001;&#x5206;&#x89E3;&#x304C;&#x7121;&#x50B7;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3068;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;P&#x30DC;&#x30C7;&#x30A3;&#x8F38;&#x9001;&#x3001;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3001;&#x5206;&#x89E3;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;

&#xB0B4;&#xBCF4;&#xB0B8;&#xB41C; mRNAs &#xBC88;&#xC5ED; &#xB300;&#xC0C1; &#xB610;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBD80;&#xD328; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xBC1B;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 5&#39;3 &#39; &#xC800;&#xD558; &#xAE30;&#xACC4;--&gt; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; P &#xC2DC;&#xCCB4; (PBs) localizes. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; PBs &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBC0F; &#xC870;&#xC0AC;&#xB294; Pbs&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xB530;&#xB77C;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; decapping &#xAE30;&#xACC4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; Pbs&#xB97C; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC5EC;&#xBD80; &#xB610;&#xB294; &#xBCF4;&#xAE09; &#xAE30;&#xBC18; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C;&#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xBB3C;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; PBs microtubules&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC815;&#xBC15; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC591;&#xC801; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC785;&#xC790; &#xCD94;&#xC801; &#xACE0;&#xC815; PB &#xC30D;&#xC740; centrosome&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xBC18;&#xBA74; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; PBs &#xACF5;&#xAC04;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xBAA8;&#xC158; microtubule &#xBAA8;&#xC158;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC804;&#xC2DC; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xBD80; PBs translocated microtubules&#xC5D0; &#xC7A5;&#xAC70;&#xB9AC; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. PB &#xC774;&#xB3D9;&#xC131; SMN &#xC2DC;&#xCCB4;, peroxisomes, endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;, &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50;&#xB294; &#xACE0; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xACFC; &#xB9BD; &#xBC0F; &#xD655;&#xC0B0; &#xACC4;&#xC218; &#xACC4;&#xC0B0; &#xD588;&#xB2E4;. Microtubule &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC911;&#xB2E8; PB &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD568;&#xAED8; PB &#xC774;&#xB3D9;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, FRAP &#xCE21;&#xC815; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xC870;&#xB9BD; PB &#xCEF4;&#xD3EC;&#xB10C;&#xD2B8;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xD50C;&#xB7ED;&#xC2A4;&#xB294; &#xADF8;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Dcp1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xACFC; &#xAD50;&#xD658; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; FRAP &#xBD84;&#xC11D; decapping &#xD6A8;&#xC18C; Dcp2 &#xBE44;&#xB3D9;&#xC801; PB &#xCF54;&#xC5B4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC1D;&#xD600; PB &#xC804;&#xC1A1; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBC0F; PB &#xC870;&#xB9BD;&#xACFC; &#xD574;&#xCCB4; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; cytoskeleton&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; P &#xC5ED;&#xD559; &#xC804;&#xC1A1; &#xC870;&#xB9BD;&#xACFC; &#xD574;&#xCCB4; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xCCB4;.

MRNAs exportados son objeto de traducci&#xF3;n o puede sufrir degradaci&#xF3;n por mecanismos de desintegraci&#xF3;n varios. El 5&#x26;#39;-&#x26;gt; 3 &#x26;#39;maquinaria de degradaci&#xF3;n se localiza en los cuerpos citoplasm&#xE1;ticos P (PBS). Se siguieron las propiedades din&#xE1;micas de PBS en vivo e investig&#xF3; el mecanismo por el cual PP escanear el citoplasma. El uso de prote&#xED;nas de la maquinaria destapado, nos preguntamos si el PP activamente escanear el citoplasma o si un mecanismo de difusi&#xF3;n basado es suficiente. En vivo de c&#xE9;lulas de im&#xE1;genes mostr&#xF3; que PBS estaban anclados sobre todo a los microt&#xFA;bulos. Cuantitativo de una sola part&#xED;cula de seguimiento demostr&#xF3; que la mayor&#xED;a PP exhibi&#xF3; el movimiento espacialmente confinados depende el movimiento de los microt&#xFA;bulos, mientras que los fijos pares PB fueron identificados en el centrosoma. Algunos PP trasladadas en los movimientos de largo alcance sobre los microt&#xFA;bulos. PB se compar&#xF3; con la movilidad de mitocondrias, ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico, peroxisomas, los &#xF3;rganos del SMN, y los gr&#xE1;nulos de estr&#xE9;s, y los coeficientes de difusi&#xF3;n se calcularon. La interrupci&#xF3;n de la red de microt&#xFA;bulos caus&#xF3; una reducci&#xF3;n significativa en PB movilidad junto con una inducci&#xF3;n de PB ensamblado. Sin embargo, las mediciones FRAP mostr&#xF3; que el flujo din&#xE1;mico de los componentes ensamblados PB no se vio afectada por estos tratamientos. El an&#xE1;lisis mostr&#xF3; que el FRAP DCP2 enzima decapping es una prote&#xED;na no din&#xE1;mico PB n&#xFA;cleo, mientras que las prote&#xED;nas DCP1 continuamente intercambiada con el citoplasma. Este estudio revela el mecanismo de PB transporte, y que muestra c&#xF3;mo PB montaje y desmontaje se integran con la presencia de un citoesqueleto intacto.

La din&#xE1;mica del transporte de mam&#xED;feros cuerpo P, armado y desarmado en Vivo

&#x6838;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x751F;&#x6CE8;&#x5B9A;&#x8981;&#x4ECE;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x65C5;&#x884C;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684; mRNA &#x8A8A;&#x672C;&#x3002;&#x67D0;&#x4E9B;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ED4;&#x7EC6;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x3001; &#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x878D;&#x5165;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D; &beta;-&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684; &beta;-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D; mRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x5B9A;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x6574;&#x4E2A;&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x3002;&#x91CF;&#x5316;&#x663E;&#x793A; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II &#x4F38;&#x957F;&#x7387; 3.3 kb/&#x5206;&#x949F;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x8FDB;&#x5C55;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x53CD;&#x5F0F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x56E0;&#x5B50;&#x662F;&#x77AC;&#x6001; &#xFF08;40 &#x79D2;&#xFF09;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x7EFC;&#x5408;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7AD9;&#x70B9;&#x5185;&#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x548C;&#x975E;&#x7F16;&#x7801;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7387;&#x6D4B;&#x91CF;&#x76F8;&#x95F4;&#x671F;&#x95F4;&#x548C;&#x4E4B;&#x540E;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x8BC1;&#x660E;&#x5973;&#x513F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0D;&#x540C;&#x6B65;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8D77;&#x59CB;&#x7684;&#x5929;&#x6570;&#x3002;Nucleoplasmic &#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28; mRNA &#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x663E;&#x793A; &beta;-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;-&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x54CD;&#x5E94;&#x542F;&#x52A8;&#x4ECE;&#x73B0;&#x6709;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28; mRNA &#x6C60;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x4ECE;&#x57FA;&#x56E0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x540E;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x65B0;&#x5408;&#x6210;&#x8A8A;&#x672C;&#x3002;&#x5B83;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E;&#x968F;&#x673A;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x5728;&#x8C03;&#x89E3; mRNA &#x5728;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x8FD0;&#x8F6C;&#x3002;

MRNA &#x5728;&#x7A7A;&#x95F4;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x4E2D;&#x7684;&#x751F;&#x6D3B;&#x3002;

Nuclear transcribed genes produce mRNA transcripts destined to travel from the site of transcription to the cytoplasm for protein translation. Certain transcripts can be further localized to specific cytoplasmic regions. We examined the life cycle of a transcribed beta-actin mRNA throughout gene expression and localization, in a cell system that allows the in vivo detection of the gene locus, the transcribed mRNAs and the cytoplasmic beta-actin protein that integrates into the actin cytoskeleton. Quantification showed that RNA polymerase II elongation progressed at a rate of 3.3 kb/minute and that transactivator binding to the promoter was transient (40 seconds), and demonstrated the unique spatial structure of the coding and non-coding regions of the integrated gene within the transcription site. The rates of gene induction were measured during interphase and after mitosis, demonstrating that daughter cells were not synchronized in respect to transcription initiation of the studied gene. Comparison of the spatial and temporal kinetics of nucleoplasmic and cytoplasmic mRNA transport showed that the beta-actin-localization response initiates from the existing cytoplasmic mRNA pool and not from the newly synthesized transcripts arising after gene induction. It was also demonstrated that mechanisms of random movement were predominant in mediating the efficient translocation of mRNA in the eukaryotic cell.

The life of an mRNA in space and time.

Nucl&#xE9;aires des g&#xE8;nes transcrits produire transcrits d&#x26;#39;ARNm destin&#xE9;s &#xE0; voyager &#xE0; partir du site de la transcription dans le cytoplasme pour la traduction des prot&#xE9;ines. Certaines transcriptions peuvent encore &#xEA;tre localis&#xE9;e &#xE0; certaines r&#xE9;gions cytoplasmiques. Nous avons examin&#xE9; le cycle de vie d&#x26;#39;un transcrit de b&#xEA;ta-actine &#xE0; travers l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes et de la localisation, dans un syst&#xE8;me cellulaire qui permet la d&#xE9;tection in vivo du locus du g&#xE8;ne, les ARNm transcrits et la b&#xEA;ta-actine cytoplasmique de prot&#xE9;ines qui s&#x26;#39;int&#xE8;gre dans le cytosquelette d&#x26;#39;actine. Quantification a montr&#xE9; que l&#x26;#39;ARN polym&#xE9;rase II allongement progress&#xE9; &#xE0; un taux de 3,3 kb par minute et que transactivateurs liant au promoteur &#xE9;tait transitoire (40 secondes), et a d&#xE9;montr&#xE9; la structure spatiale unique du codage et des r&#xE9;gions non codantes du g&#xE8;ne int&#xE9;gr&#xE9; dans le site de transcription. Les taux de l&#x26;#39;induction du g&#xE8;ne ont &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;es au cours d&#x26;#39;interphase et apr&#xE8;s la mitose, montrant que les cellules filles n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; synchronis&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;gard d&#x26;#39;initiation de la transcription du g&#xE8;ne &#xE9;tudi&#xE9;. La comparaison des cin&#xE9;tiques spatiales et temporelles de transport ARNm nucl&#xE9;oplasmique et cytoplasmiques ont montr&#xE9; que la r&#xE9;ponse b&#xEA;ta-actine-localisation lance &#xE0; partir du pool d&#x26;#39;ARNm cytoplasmique existant et non &#xE0; partir des relev&#xE9;s de notes nouvellement synth&#xE9;tis&#xE9;es qui se produiraient apr&#xE8;s l&#x26;#39;induction de g&#xE8;nes. Il a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; que les m&#xE9;canismes de mouvement al&#xE9;atoire &#xE9;taient pr&#xE9;dominants dans la m&#xE9;diation de la translocation efficace de l&#x26;#39;ARNm dans la cellule eucaryote.

La vie d&#x26;#39;un ARNm dans l&#x26;#39;espace et le temps

Nukleare transkribierten Gene produzieren mRNA Transkripte, die Reisen von der Website der Transkription in das Zytoplasma f&uuml;r Protein-&Uuml;bersetzung. Bestimmte Protokolle k&ouml;nnen weitere spezifische zytoplasmatische Regionen lokalisiert werden. Wir untersucht den Lebenszyklus von einem transkribierten Beta-Actin mRNA im gesamten Genexpression und Lokalisierung, in eine Zelle-System, das erm&ouml;glicht die in-vivo Erkennung der Gen-Locus, die transkribierte mRNAs und die zytoplasmatische Beta-Actin-Protein, das in das Aktin-Zytoskelett integriert. Quantifizierung zeigte, dass die RNA-Polymerase II Dehnung fortgeschritten in H&ouml;he von 3,3 kb pro Minute und die Bindung an die Projekttr&auml;ger Transactivator war vor&uuml;bergehend (40 Sekunden) und demonstriert die einzigartige r&auml;umliche Struktur der Kodierung und nicht-kodierenden Regionen im integrierten gen innerhalb der Transkription-Website. Die Preise der Gen-Induktion wurden gemessen, w&auml;hrend Interphase und nach der Mitose, demonstrieren, dass Tochterzellen in Bezug auf Transkription Einleitung des untersuchten Gens nicht synchronisiert wurden. Die r&auml;umliche und zeitliche Kinetik des nucleoplasmic und des cytoplasmatische mRNA im Vergleich zeigte, dass die Beta-Aktin-Lokalisierung-Antwort aus dem vorhandenen cytoplasmatische mRNA-Pool und nicht aus die neugebildete Transkripte ergeben nach gen Induktion initiiert. Es wurde auch gezeigt, dass Mechanismen der zuf&auml;lligen Bewegungen vorherrschende bei der Vermittlung der effizienten Translokation von mRNA in eukaryotischen Zellen waren.

Das Leben einer mRNA in Raum und Zeit.

Geni nucleari trascritti producono trascritti di mRNA destinati a viaggiare dal sito di trascrizione nel citoplasma per la traduzione della proteina. Alcune trascrizioni possono essere ulteriormente localizzate a specifiche regioni citoplasmatiche. Abbiamo esaminato il ciclo di vita di un mRNA trascritto beta-actina in tutta l&#39;espressione genica e la localizzazione, in un sistema cellulare che permette la rilevazione in vivo il locus del gene, il trascritto di mRNA e la proteina beta-actina citoplasmatica che integra il citoscheletro di actina. Quantificazione ha mostrato che allungamento di RNA polimerasi II progredito a un tasso del 3,3 kb/minuto e che transactivator vincolante al promotore &egrave; stato transitorio (40 secondi) e ha dimostrato la particolare struttura spaziale delle regioni codificante e non codificanti del gene integrato all&#39;interno del sito di trascrizione. Le tariffe di induzione genica sono state misurate durante l&#39;interfase e dopo la mitosi, dimostrando che cellule figlie non erano sincronizzate rispetto all&#39;iniziazione della trascrizione del gene studiato. Confronto tra la cinetica spaziale e temporale dei trasporti mRNA citoplasmatici e nucleoplasmic hanno mostrato che la risposta di beta-actina-localizzazione avvia dal pool di mRNA citoplasmatici esistenti e non dalle trascrizioni recentemente sintetizzate risultanti dopo l&#39;induzione del gene. &Egrave; stato anche dimostrato che meccanismi di movimento casuale erano predominanti nella mediazione la traslocazione efficiente del mRNA nella cellula eucariotica.

La vita di un mRNA nello spazio e nel tempo.

&#x6838;&#x8EE2;&#x5199;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306B;&#x79FB;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x904B;&#x547D;&#x3065;&#x3051;mRNA&#x8EE2;&#x5199;&#x7269;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;mRNA&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306B;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x200B;&#x200B;&#x3B2;-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;in vivo&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x30BB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3B2;-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;mRNA&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306F;&#x3001;RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;II&#x306E;&#x4F38;&#x3073;&#x304C;3.3&#x30AD;&#x30ED;&#x30D0;&#x30A4;&#x30C8;/&#x5206;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3067;&#x9032;&#x884C;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;40&#x79D2;&#xFF09;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x5185;&#x7B26;&#x53F7;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x7A7A;&#x9593;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x975E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x5A18;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3057;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x958B;&#x59CB;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3067;&#x540C;&#x671F;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x9593;&#x671F;&#x3068;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x5F8C;&#x306B;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; nucleoplasmic&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;mRNA&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x52D5;&#x614B;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x3001;&#x3B2;-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;mRNA&#x306E;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x5F8C;&#x306B;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306A;&#x52D5;&#x304D;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x771F;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x306B;&#x512A;&#x52E2;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;

&#x7A7A;&#x9593;&#x3068;&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;mRNA&#x306E;&#x751F;&#x6D3B;

&#xD575; &#xBCA0;&#xB080;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; mRNA &#xC131;&#xC801;&#xD45C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB179;&#xC74C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xD589;&#xC744; &#xC6B4;&#xBA85; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xD2B9;&#xC815; &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C; &#xCD94;&#xAC00; &#xD2B9;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC9C4; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;, &#xBCA0;&#xB080;&#xB41C; mRNAs &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xB9D0;&#xB77C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xAC80;&#xCD9C; &#xC140; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xBCA0;&#xB080;&#xB41C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xB9D0;&#xB77C; mRNA &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;, &#xC804;&#xCCB4; &#xC218;&#xBA85; &#xC8FC;&#xAE30;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD80; &#xB7C9; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; II &#xC2E0;&#xC7A5; 3.3 kb/&#xBD84;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; transactivator &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; (40 &#xCD08;) &#xACFC;&#xB3C4; &#xD588; &#xACE0; &#xC804;&#xC0AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB0B4; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xCF54;&#xB529; &#xBC0F; &#xBE44; &#xCF54;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xACF5;&#xAC04; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC720;&#xB3C4;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xACC4;&#xBA74; &#xC911;&#xACFC; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4;, &#xB538; &#xC140; &#xACF5;&#xBD80; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xB410;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD6C4; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. Nucleoplasmic &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; mRNA &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD604;&#xC9C0;&#xD654; &#xC751;&#xB2F5; &#xAE30;&#xC874; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; mRNA &#xD480;&#xACFC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC720;&#xB3C4; &#xD6C4; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xB41C; &#xC0AC;&#xBCF8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xC784;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC9C4; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; Mrna&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC804; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xC138; &#xD588;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;.

&#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; Mrna&#xC758; &#xC0DD;&#xD65C;.

Nucleares genes transcritos producir transcritos de ARNm destinados a viajar desde el sitio de la transcripci&#xF3;n al citoplasma para la traducci&#xF3;n de prote&#xED;nas. Algunas transcripciones pueden ser m&#xE1;s espec&#xED;ficos localizados en las regiones citoplasm&#xE1;ticas. Se examin&#xF3; el ciclo de vida de un transcrito de beta-actina ARNm a lo largo de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica y la localizaci&#xF3;n, en un sistema celular que permite la detecci&#xF3;n in vivo del locus del gen, los ARNm transcrito y la beta-actina citopl&#xE1;smica prote&#xED;na que se integra en el citoesqueleto de actina. Cuantificaci&#xF3;n mostr&#xF3; que la RNA polimerasa II alargamiento progresado a una velocidad de 3,3 kb por minuto y transactivador que la uni&#xF3;n al promotor fue transitoria (40 segundos), y demostr&#xF3; la estructura &#xFA;nica espacial de las regiones codificantes y no codificantes del gen integrado dentro del la transcripci&#xF3;n sitio. Las tasas de inducci&#xF3;n del gen se midieron durante la interfase y despu&#xE9;s de la mitosis, lo que demuestra que las c&#xE9;lulas hijas no estaban sincronizadas con respecto a la iniciaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n del gen estudiado. Comparaci&#xF3;n de la cin&#xE9;tica espacial y temporal del transporte de ARNm nucleoplasmic y citoplasm&#xE1;tica mostr&#xF3; que la respuesta de la beta-actina-localizaci&#xF3;n se inicia desde la piscina frente al citoplasma de mRNA existente y no de las transcripciones de nueva s&#xED;ntesis que surgen despu&#xE9;s de la inducci&#xF3;n de genes. Tambi&#xE9;n se demostr&#xF3; que los mecanismos de movimiento al azar fueron predominantes en la mediaci&#xF3;n de la translocaci&#xF3;n eficiente de ARNm en la c&#xE9;lula eucariota.

La vida de un ARNm en el espacio y el tiempo

&#x901A;&#x8FC7; mRNAs &#x7684;&#x80DE;&#x6838;&#x80DE;&#x8D28;&#x8FDE;&#x4F53;&#x6613;&#x4F4D;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x6D41;&#x52A8;&#x3002;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x4FE1;&#x4F7F; RNA &#x51FA;&#x53E3;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x77E5;&#x8BC6;&#x4ECD;&#x7136;&#x5F88;&#x5DEE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8FD0;&#x8F93;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x5B9E;&#x65F6;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x671F;&#x95F4;&#x51FA;&#x53E3;&#x5927;&#x5355; mRNA &#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269; (mRNPs) &#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x3002;&#x5927;&#x5BB9;&#x91CF; mRNP &#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x51FA;&#x53E3;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5230;&#x6838;&#x5B54;&#x590D;&#x5408; (&#x5168;&#x56FD;&#x4EBA;&#x5927;) &#x53D1;&#x751F; 5 40 &#x5206;&#x949F;&#x65F6;&#x95F4;&#x5185;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x65E0;&#x4EBA;&#x5927;&#x5806;&#x79EF;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;mRNP &#x51FA;&#x53E3;&#x662F;&#x5FEB;&#x901F; &#xFF08;&#x7EA6; 0.5 s) &#x548C;&#x6BD4; nucleoplasmic &#x6269;&#x6563;&#x52A8;&#x529B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901F;&#x5EA6;&#x66F4;&#x5FEB;&#x3002;&#x51FA;&#x53E3;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x8868;&#x660E; mRNA &#x4EBA;&#x5927;&#x4EA4;&#x4E92;&#x72EC;&#x7ACB;&#x8FDB;&#x884C;&#x51FA;&#x53E3;&#x3002;Nucleoplasmic &#x8FD0;&#x8F93;&#x52A8;&#x6001;&#x542B;&#x6709;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x7684;&#x548C; intronless mRNAs &#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x7684;&#x786E;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x5BFC;&#x51FA;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x5355;&#x4E2A; mRNP &#x7EA7;&#x7684;&#x6838;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C; inter-chromatin &#x8F68;&#x9053;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176; mRNPs &#x5F25;&#x6F2B;&#xFF0C;&#x548C;&#x8BC1;&#x660E; mRNP &#x4EBA;&#x5927;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x5404;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;

&#x5355;&#x4E2A; mRNP &#x80DE;&#x6838;&#x80DE;&#x8D28;&#x8FDE;&#x4F53;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x51FA;&#x53E3;&#x901A;&#x8FC7;&#x6838;&#x5B54;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

The flow of genetic information in eukaryotic cells occurs through the nucleocytoplasmic translocation of mRNAs. Knowledge of in vivo messenger RNA export kinetics remains poor in comparison with that of protein transport. We have established a mammalian system that allowed the real-time visualization and quantification of large single mRNA-protein complexes (mRNPs) during export. The in vivo dynamics of bulk mRNP transport and export, from transcription to the nuclear pore complex (NPC), occurred within a 5-40 minute time frame, with no NPC pile-up. mRNP export was rapid (about 0.5 s) and kinetically faster than nucleoplasmic diffusion. Export inhibition demonstrated that mRNA-NPC interactions were independent of ongoing export. Nucleoplasmic transport dynamics of intron-containing and intronless mRNAs were similar, yet an intron did increase export efficiency. Here we provide visualization and analysis at the single mRNP level of the various steps in nuclear gene expression and the inter-chromatin tracks through which mRNPs diffuse, and demonstrate the kinetics of mRNP-NPC interactions and translocation.

Dynamics of single mRNP nucleocytoplasmic transport and export through the nuclear pore in living cells.

La circulation de l&#x26;#39;information g&#xE9;n&#xE9;tique dans les cellules eucaryotes se fait par la translocation nucl&#xE9;ocytoplasmique de l&#x26;#39;ARNm. La connaissance de l&#x26;#39;ARN messager in vivo la cin&#xE9;tique d&#x26;#39;exportation demeure faible en comparaison avec celui du transport des prot&#xE9;ines. Nous avons mis en place un syst&#xE8;me mammif&#xE8;re qui a permis la visualisation en temps r&#xE9;el et la quantification des ARNm de grandes simples complexes prot&#xE9;ine-(mRNP) lors de l&#x26;#39;exportation. La dynamique en vivo de transport en vrac et &#xE0; l&#x26;#39;exportation mRNP, de la transcription du complexe du pore nucl&#xE9;aire (CPN), a eu lieu dans un d&#xE9;lai de 5 &#xE0; 40 minutes, sans NPC pile-up. mRNP exportation a &#xE9;t&#xE9; rapide (environ 0,5 s) et cin&#xE9;tiquement plus vite que la diffusion nucl&#xE9;oplasmique. L&#x26;#39;inhibition de l&#x26;#39;exportation a d&#xE9;montr&#xE9; que l&#x26;#39;ARNm-NPC interactions &#xE9;taient ind&#xE9;pendants de l&#x26;#39;exportation en cours. La dynamique de transport nucl&#xE9;oplasmique de ARNm intron contenant et intron &#xE9;taient semblables, mais un intron fait augmenter l&#x26;#39;efficacit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;exportation. Ici, nous fournir une visualisation et d&#x26;#39;analyse au niveau mRNP unique des diff&#xE9;rentes &#xE9;tapes de l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes nucl&#xE9;aires et les pistes inter-chromatine &#xE0; travers lequel mRNP diffuse, et de d&#xE9;montrer la cin&#xE9;tique de mRNP-NPC interactions et la translocation.

Dynamique des Transports mRNP unique nucl&#xE9;ocytoplasmique et de l&#x26;#39;Exportation &#xE0; travers le pore nucl&#xE9;aire dans les cellules vivantes

Der genetische Informationsflu&szlig; in eukaryotischen Zellen erfolgt &uuml;ber die Nucleocytoplasmic-Translokation mRNAs. Kenntnis der in-vivo Boten-RNA-Export-Kinetik bleibt schlecht im Vergleich zu jenen der Proteintransport. Wir haben ein S&auml;ugetier-System etabliert, die die Echtzeit-Visualisierung und Quantifizierung der gro&szlig;en einzigen mRNA-Protein-komplexe (mRNPs) w&auml;hrend des Exports zul&auml;ssig. In-vivo Dynamik mRNP Bef&ouml;rderung und Exportartikel, Transkription, die nukleare Pore komplexe (NPC), innerhalb eines Zeitraums von 5-40 Minuten, mit keine NPC-zusammenlegbar aufgetreten. mRNP Export war schnell (&uuml;ber 0,5 s) und kinetisch schneller als nucleoplasmic Verbreitung. Export-Hemmung gezeigt, dass die mRNA-NPC Interaktionen unabh&auml;ngig von laufenden Export waren. Nucleoplasmic Transport Dynamik der Intron-haltigen und intronless mRNAs waren &auml;hnlich, doch ein Intron Export Effizienzsteigerung. Hier bieten wir, Visualisierung und Analyse auf der Ebene der einzelnen mRNP der verschiedenen Schritte in nuklearen Genexpression und die inter-chromatin Spuren durch die mRNPs diffundieren, und die Kinetik der mRNP-NPC-Interaktionen und Translokation zu demonstrieren.

Dynamik der einzelnen mRNP Nucleocytoplasmic Transport und Export durch die nukleare Pore in lebenden Zellen.

Il flusso dell&#39;informazione genetica nelle cellule eucariotiche avviene attraverso la traslocazione di nucleo-citoplasmatici dei mRNAs. Conoscenza della cinetica di esportazione di RNA messaggero in vivo rimane povero rispetto a quello del trasporto della proteina. Abbiamo istituito un sistema mammifero che ha permesso la visualizzazione in tempo reale e la quantificazione dei complessi di grandi dimensioni singolo mRNA-proteina (mRNPs) durante l&#39;esportazione. La dinamica in vivo di mRNP trasporto alla rinfusa e di esportazione, dalla trascrizione per il complesso poro nucleare (NPC), che si &egrave; verificato in un lasso di tempo di 5-40 minuti, con pile-up nessun NPC. mRNP export &egrave; stato rapido (circa 0,5 s) e cineticamente pi&ugrave; velocemente di diffusione nucleoplasmic. Inibizione di esportazione ha dimostrato che le interazioni mRNA-NPC erano indipendenti di esportazione in corso. Trasporto nucleoplasmic dinamica dei mRNAs contenenti introne e intronless era simili, eppure un introne ha fatto aumentare l&#39;efficienza di esportazione. Qui forniamo visualizzazione ed analisi a livello di singolo mRNP i vari passaggi nell&#39;espressione del gene nucleare e le tracce di inter-chromatin attraverso il quale mRNPs diffusa e dimostrare la cinetica di interazioni mRNP-NPC e traslocazione.

Dinamica di mRNP singolo nucleo-citoplasmatici trasporto ed esportazione attraverso il poro nucleare nelle cellule viventi.

&#x771F;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x60C5;&#x5831;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x306F;&#x3001;mRNA&#x306E;&#x6838; - &#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; in vivo&#x3067;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;RNA&#x306E;&#x8F38;&#x51FA;&#x52D5;&#x614B;&#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x306F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x6642;&#x306B;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;mRNA-&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#xFF08;mRNPs&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D0;&#x30EB;&#x30AF;mRNP&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x8F38;&#x51FA;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x52D5;&#x614B;&#x306E;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x304B;&#x3089;&#x6838;&#x819C;&#x5B54;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#xFF08;NPC&#xFF09;&#x306B;&#x3001;&#x7121;NPC&#x30D1;&#x30A4;&#x30EB;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x3001;5&#x304B;&#x3089;40&#x5206;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x67A0;&#x5185;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x3002; mRNP&#x8F38;&#x51FA;&#x304C;&#x6025;&#x901F;&#xFF08;&#x7D04;0.5&#x79D2;&#xFF09;&#x3068;nucleoplasmic&#x62E1;&#x6563;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x901F;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8F38;&#x51FA;&#x6291;&#x5236;&#x306F;&#x3001;mRNA-NPC&#x3068;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x304C;&#x9032;&#x884C;&#x4E2D;&#x3067;&#x3001;&#x8F38;&#x51FA;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;mRNA&#x306E;Nucleoplasmic&#x8F38;&#x9001;&#x52D5;&#x614B;&#x306F;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x8F38;&#x51FA;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3073;&#x307E;&#x3093;&#x6027;mRNPs&#x306B;&#x7D4C;&#x7531;&#x3059;&#x308B;&#x6838;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;mRNP&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;mRNP-NPC&#x3068;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3068;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x819C;&#x5B54;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;MRNP&#x6838; - &#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9593;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x8F38;&#x51FA;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;

&#xC9C4; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xC804; &#xC815;&#xBCF4;&#xC758; &#xD750;&#xB984; Mrnas&#xC758; nucleocytoplasmic &#xC804;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC2DD; in vivo &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; RNA &#xB0B4;&#xBCF4;&#xB0B4;&#xAE30; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBCF4;&#xB0B4;&#xAE30; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD070; &#xB2E8;&#xC77C; mRNA &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C; (mRNPs)&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC124;&#xB9BD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xB7C9; mRNP &#xC804;&#xC1A1; &#xC5ED;&#xD559; &#xC218;&#xCD9C;, &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD575; &#xACF5; (NPC)&#xB97C; &#xC804;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5C6;&#xB294; NPC &#xC0B0;&#xB354;&#xBBF8;&#xC640; 5-40 &#xBD84; &#xC2DC;&#xAC04; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. mRNP &#xB0B4;&#xBCF4;&#xB0B4;&#xAE30;&#xB294; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; (&#xC57D; 0.5 s) &#xD558; &#xACE0; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; nucleoplasmic &#xBCF4;&#xAE09; &#xC9C0;. &#xC218;&#xCD9C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC2DC;&#xC5F0; mRNA NPC &#xC0C1;&#xD638; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xCD9C;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4;. Intron&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; intronless Mrnas&#xC758; nucleoplasmic &#xC804;&#xC1A1; &#xC5ED;&#xD559; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xC544;&#xC9C1;&#xB294; intron &#xC218;&#xCD9C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBC0F; &#xD575; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB294; mRNPs &#xD655;&#xC0B0;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; mRNP NPC &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC804; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; inter-chromatin &#xD2B8;&#xB799;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; mRNP &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xC77C; mRNP nucleocytoplasmic &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575; &#xACF5; &#xD1B5;&#xD574; &#xC218;&#xCD9C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;.

El flujo de informaci&#xF3;n gen&#xE9;tica en las c&#xE9;lulas eucariotas se produce a trav&#xE9;s de la translocaci&#xF3;n nucleocytoplasmic de mRNAs. El conocimiento de ARN mensajero en vivo exportaci&#xF3;n cin&#xE9;tica sigue siendo pobre en comparaci&#xF3;n con la de transporte de prote&#xED;nas. Hemos establecido un sistema de los mam&#xED;feros que permiti&#xF3; la visualizaci&#xF3;n en tiempo real y cuantificaci&#xF3;n de prote&#xED;nas individuales grandes complejos de ARNm (mRNPs) durante la exportaci&#xF3;n. El vivo en la din&#xE1;mica de transporte mRNP mayor y exportaci&#xF3;n, a partir de la transcripci&#xF3;n del complejo del poro nuclear (CPN), se produjo dentro de un marco de tiempo 5-40 minutos, sin NPC pile-up. mRNP exportaci&#xF3;n fue r&#xE1;pida (alrededor de 0,5 s) y cin&#xE9;ticamente m&#xE1;s r&#xE1;pido que la difusi&#xF3;n nucleoplasmic. La inhibici&#xF3;n de las exportaciones demuestra que la APN mRNA interacciones eran independientes de exportaci&#xF3;n en curso. La din&#xE1;mica de transporte de mRNAs nucleoplasmic intr&#xF3;n que contienen intrones, y fueron similares, sin embargo, un intr&#xF3;n hizo aumentar la eficiencia de las exportaciones. Aqu&#xED; le ofrecemos la visualizaci&#xF3;n y el an&#xE1;lisis a nivel mRNP solo de los varios pasos en la expresi&#xF3;n de genes nucleares y las pistas entre la cromatina a trav&#xE9;s del cual mRNPs difusa, y demostrar la cin&#xE9;tica de las interacciones de los PNJ mRNP-y translocaci&#xF3;n.

Din&#xE1;mica de Transporte Individual mRNP nucleocytoplasmic y exportaci&#xF3;n a trav&#xE9;s del poro nuclear en las c&#xE9;lulas vivas

&#x524D;&#x4F53;&#x4FE1;&#x4F7F; RNA (pre-mRNA) &#x62FC;&#x63A5;&#x50AC;&#x5316;&#x526A;&#x63A5;&#x3001; &#x6838;&#x7CD6;&#x5927;&#x578B;&#x6838;&#x86CB;&#x767D; (&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#xFF09; &#x590D;&#x6742;&#x7531;&#x4E94;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x6838;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x9897;&#x7C92; &#xFF08;snRNPs&#xFF09; &#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x7528;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x5404;&#x7EA7;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; snRNP &#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x5982;&#x4F55;&#x526A;&#x63A5;&#x88C5;&#x914D;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;SnRNP &#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EFC;&#x5408;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x786E;&#x5B9A;&#x6574;&#x4E2A;&#x63D0;&#x53CA;&#x6838;&#x6D46;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E2A;&#x522B; snRNPs pre mRNA &#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#x7387; snRNP &#x6269;&#x6563;&#x3002;&#x6838;&#x5FC3;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x526A;&#x63A5;&#xFF0C;U2 &#x548C; U5 snRNPs&#xFF0C;15-30 s&#xFF0C;pre mRNA &#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x6307;&#x793A;&#x5728;&#x6B64;&#x65F6;&#x95F4;&#x6BB5;&#x5185;&#x5B8C;&#x6210;&#x62FC;&#x63A5;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0E; pre mRNA U1 &#x548C; U4/U6 snRNPs &#x79D2;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x4E0E; pre mRNA &#x7684;&#x4E2A;&#x522B; snRNPs &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0D;&#x540C;&#x5185;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0E;&#x526A;&#x63A5;&#x5927;&#x4F1A;&#x9010;&#x6B65;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x76F8;&#x4E00;&#x81F4;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4F30;&#x8BA1;&#x7387;&#x7684;&#x62FC;&#x63A5;&#x5728;&#x4EBA;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;

&#x4E0E; pre mRNA &#x5DEE;&#x5F02;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; snRNPs &#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x62FC;&#x63A5;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;

Precursor messenger RNA (pre-mRNA) splicing is catalyzed by the spliceosome, a large ribonucleoprotein (RNP) complex composed of five small nuclear RNP particles (snRNPs) and additional proteins. Using live cell imaging of GFP-tagged snRNP components expressed at endogenous levels, we examined how the spliceosome assembles in vivo. A comprehensive analysis of snRNP dynamics in the cell nucleus enabled us to determine snRNP diffusion throughout the nucleoplasm as well as the interaction rates of individual snRNPs with pre-mRNA. Core components of the spliceosome, U2 and U5 snRNPs, associated with pre-mRNA for 15-30 s, indicating that splicing is accomplished within this time period. Additionally, binding of U1 and U4/U6 snRNPs with pre-mRNA occurred within seconds, indicating that the interaction of individual snRNPs with pre-mRNA is distinct. These results are consistent with the predictions of the step-wise model of spliceosome assembly and provide an estimate on the rate of splicing in human cells.

The differential interaction of snRNPs with pre-mRNA reveals splicing kinetics in living cells.

Pr&#xE9;curseur ARN messager (pr&#xE9;-ARNm) &#xE9;pissage est catalys&#xE9;e par l&#x26;#39;&#xE9;pissage, une ribonucl&#xE9;oprot&#xE9;ine grande (RNP) complexe compos&#xE9; de cinq petites particules RNP nucl&#xE9;aires (snRNP) et des prot&#xE9;ines suppl&#xE9;mentaires. En utilisant l&#x26;#39;imagerie des cellules vivantes de composants snRNP GFP-tagg&#xE9;s exprim&#xE9;s &#xE0; des niveaux endog&#xE8;nes, nous avons examin&#xE9; la fa&#xE7;on dont le spliceosome assemble in vivo. Une analyse compl&#xE8;te de la dynamique des snRNP dans le noyau de la cellule nous a permis de d&#xE9;terminer la diffusion &#xE0; travers le snRNP nucl&#xE9;oplasme ainsi que les taux d&#x26;#39;interaction de snRNPs individuels avec pr&#xE9;-ARNm. Les principaux &#xE9;l&#xE9;ments de l&#x26;#39;&#xE9;pissage, U2 et U5 snRNP, associ&#xE9; &#xE0; un pr&#xE9;-ARNm pendant 15-30 s, indiquant que l&#x26;#39;&#xE9;pissage est r&#xE9;alis&#xE9;e dans ce d&#xE9;lai. En outre, la liaison de U1 et U4/U6 snRNP avec pr&#xE9;-ARNm produite en quelques secondes, indiquant que l&#x26;#39;interaction des snRNP individuels avec pr&#xE9;-ARNm est distincte. Ces r&#xE9;sultats sont coh&#xE9;rents avec les pr&#xE9;dictions du mod&#xE8;le par &#xE9;tapes de l&#x26;#39;assemblage du spliceosome et fournir une estimation sur le taux de l&#x26;#39;&#xE9;pissage dans les cellules humaines.

L&#x26;#39;interaction diff&#xE9;rentielle de snRNPs avec pr&#xE9;-ARNm r&#xE9;v&#xE8;le Cin&#xE9;tique d&#x26;#39;&#xE9;pissage dans les cellules vivantes

Vorl&auml;ufer Boten-RNA (Pre-mRNA) Splei&szlig;en ist katalysiert durch das Spliceosom, eine gro&szlig;e Ribonucleoprotein (RNP) Komplex setzt sich aus f&uuml;nf kleine nukleare RNP Partikel (SnRNPs) und zus&auml;tzliche Proteine. Mit live-Zelle Darstellung der GFP markiert SnRNP Komponenten auf endogene Ebenen ausgedr&uuml;ckt, haben wir gepr&uuml;ft, wie das Spliceosom in-vivo montiert. Eine umfassende Analyse der SnRNP Dynamik im Zellkern konnten wir SnRNP Verbreitung im gesamten das Karyoplasma sowie die Interaktion der einzelnen SnRNPs mit Pre-mRNA zu bestimmen. Kernkomponenten von Spliceosom, U2 und U5 SnRNPs, Pre-mRNA f&uuml;r 15-30 s, zugeordnet, dass Splei&szlig;en innerhalb dieser Frist durchgef&uuml;hrt wird. Dar&uuml;ber hinaus trat Bindung der U1 und U4/U6 SnRNPs mit Pre-mRNA innerhalb von Sekunden angibt, die das Zusammenspiel der einzelnen SnRNPs mit Pre-mRNA verschieden ist. Diese Ergebnisse stehen im Einklang mit den Vorhersagen des schrittweisen Modells Spliceosom Assembly sowie eine Einsch&auml;tzung &uuml;ber die H&ouml;he des Splei&szlig;en in den menschlichen Zellen.

Die differentielle Interaktion von SnRNPs mit Pre-mRNA enth&uuml;llt Splei&szlig;en Kinetik in lebenden Zellen.

Precursore RNA messaggero (pre-mRNA) lo splicing &egrave; catalizzato dallo spliceosoma, una ribonucleoproteina grande (RNP) complessa composto da cinque particelle della RNP nucleari piccole (biogen&egrave;se) e proteine supplementari. Usando live cell imaging di GFP-etichettato snRNP componenti espressa a livelli endogeni, abbiamo esaminato come lo spliceosoma assembla in vivo. Un&#39;analisi completa delle dinamiche snRNP nel nucleo della cellula ci ha permesso di determinare snRNP diffusione in tutto il nucleoplasma, nonch&eacute; i tassi di interazione delle singole biogen&egrave;se con pre-mRNA. Principali componenti di spliceosoma, U2 e U5 biogen&egrave;se, associati con pre-mRNA per 15-30 s, che indica che lo splicing avviene entro questo periodo di tempo. Inoltre, associazione di U1 e U4/U6 biogen&egrave;se con pre-mRNA si &egrave; verificato in pochi secondi, che indica che l&#39;interazione dei singoli biogen&egrave;se con pre-mRNA &egrave; distinta. Questi risultati sono coerenti con le previsioni del modello graduale dell&#39;Assemblea spliceosoma e forniscono una stima sul tasso di splicing nelle cellule umane.

L&#39;interazione differenziale di biogen&egrave;se con pre-mRNA rivela splicing cinetica in cellule viventi.

&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;RNA&#xFF08;mRNA&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#xFF09;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;5&#x5C0F;&#x6838;RNP&#x7C92;&#x5B50;&#xFF08;snRNPs&#xFF09;&#x3068;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;RNP&#xFF09;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E6;&#x5A92;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x5185;&#x5728;&#x6027;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;GFP&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;snRNP&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x5185;&#x306E;snRNP&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x6838;&#x8CEA;&#x306A;&#x3069;&#x306E;pre-mRNA&#x306E;&#x500B;&#x3005;&#x306E;snRNPs&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;snRNP&#x62E1;&#x6563;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 15&#x304B;&#x3089;30&#x79D2;&#x9593;&#x306E;pre-mRNA&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;U2&#x3068;U5 snRNPs&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x5185;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;mRNA&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3068;U1&#x3068;U4/U6 snRNPs&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;pre-mRNA&#x306E;&#x500B;&#x3005;snRNPs&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x79D2;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x7684;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x898B;&#x7A4D;&#x3082;&#x308A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D7;&#x30EC;mRNA&#x3068;SnRNPs&#x306E;&#x5DEE;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

Spliceosome&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xB9E4;&#xB294; &#xC804; &#xAD6C;&#xCCB4; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; RNA (mRNA pre) &#xC811;&#xD569;, &#xB300;&#xD615; ribonucleoprotein (RNP) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; 5 &#xAC1C;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xD575; RNP &#xC785;&#xC790; (snRNPs)&#xC640; &#xCD94;&#xAC00; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131;. &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC0DD; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; snRNP GFP &#xD0DC;&#xADF8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; spliceosome in vivo &#xC870;&#xB9BD; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xD575;&#xC5D0; snRNP &#xC5ED;&#xD559;&#xC758; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; &#xAC1C;&#xBCC4; snRNPs &#xC0AC;&#xC804; Mrna&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC694;&#xAE08;&#xC73C;&#xB85C;&#xB294; nucleoplasm&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; snRNP &#xBCF4;&#xAE09; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD575;&#xC2EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; spliceosome, u 2&#xC758; U5 snRNPs, 15-30 s&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC804;-Mrna&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;&#xC774; &#xAE30;&#xAC04; &#xB0B4; &#xC811;&#xD569;&#xC740; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC0AC;&#xC804; Mrna&#xC640; u 1&#xACFC; U4/U6 Snrnps&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC774; &#xC774;&#xC804; mRNA &#xAC1C;&#xBCC4; snRNPs &#xC0C1;&#xD638; &#xAD6C;&#xBD84;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xCD08; &#xC774;&#xB0B4; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; spliceosome &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xC911;&#xB300;&#xD615; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xC608;&#xCE21;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558; &#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC811;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xACAC;&#xC801;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Snrnps&#xC758; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC0C1;&#xD638; &#xC0AC;&#xC804; mRNA &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC811;&#xD569; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Precursor del ARN mensajero (pre-ARNm) de empalme es catalizada por la spliceosome, una gran ribonucleoprote&#xED;na (RNP) complejo compuesto de cinco peque&#xF1;as part&#xED;culas nucleares RNP (snRNPs) y prote&#xED;nas adicionales. Uso de im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas de GFP-etiquetados componentes snRNP expresadas en los niveles end&#xF3;genos, se examin&#xF3; c&#xF3;mo la spliceosome re&#xFA;ne en vivo. Un an&#xE1;lisis exhaustivo de la din&#xE1;mica de snRNP en el n&#xFA;cleo de la c&#xE9;lula nos ha permitido determinar la difusi&#xF3;n snRNP en todo el nucleoplasma, as&#xED; como las tasas de interacci&#xF3;n de snRNPs individuales con pre-mRNA. Los componentes b&#xE1;sicos de la spliceosome U2 y U5 snRNPs, asociado con el pre-ARNm de 15-30 s, lo que indica que el empalme se lleva a cabo dentro de este per&#xED;odo de tiempo. Adem&#xE1;s, la uni&#xF3;n de U1 y U4/U6 snRNPs con pre-ARNm producido en cuesti&#xF3;n de segundos, lo que indica que la interacci&#xF3;n de snRNPs individuales con pre-ARNm es distinto. Estos resultados son consistentes con las predicciones del modelo por etapas de montaje spliceosome y proporcionar una estimaci&#xF3;n de la tasa de corte y empalme en c&#xE9;lulas humanas.

La interacci&#xF3;n diferencial de snRNPs con Pre-ARNm revela Cin&#xE9;tica de empalme en las c&#xE9;lulas vivas

&#x5904;&#x7406;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x4E0A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684; RNA &#x524D; mRNA &#x5305;&#x62EC;&#x4E0A;&#x9650;&#x3001; &#x62FC;&#x63A5;&#x3001; &#x7F16;&#x8F91;&#x3001; 3&#39; &#x52A0;&#x5DE5;&#x3001; &#x548C; polyadenylation&#x3002;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x65F6;&#x53D1;&#x751F; co-transcriptionally RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II (Pol II) &#x9176;&#x4ECE;&#x4E8B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x3002;&#x62FC;&#x63A5;&#x5F71;&#x54CD; Pol II &#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x4E0D;&#x662F;&#x5F88;&#x4E86;&#x89E3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x57FA;&#x56E0;&#x6784;&#x9020;&#x542B;&#x6709;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x548C;&#x7528;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7EB3;&#x5165;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x79EF;&#x6781;&#x8F6C;&#x5F55;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#xFF0C;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x76D1;&#x89C6;&#x534F;&#x4F1A;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5E76;&#x62FC;&#x63A5;&#x4E0A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x673A;&#x6784;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E3A; intronless &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x5728;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4E2D; U1 snRNP &#x62FC;&#x63A5;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709; U1 snRNP&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709; snRNPs &#x79EF;&#x7D2F;&#x542B;&#x6709;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x6570;&#x76EE;&#x90FD;&#x589E;&#x52A0;&#x62DB;&#x8058;&#x7684;&#x526A;&#x63A5;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x65B0;&#x751F; RNA &#x53EF;&#x4EE5;&#x540C;&#x65F6;&#x88C5;&#x914D;&#x591A;&#x4E2A; spliceosomes&#x3002;&#x4F53;&#x5185;&#x7684; Pol II &#x4F38;&#x957F;&#x3001; Pol II &#x82AF;&#x7247;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4F7F;&#x7528; Spliceostatin &#x548C; Meayamycin &#x62FC;&#x63A5;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8868;&#x660E;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x89E3;&#x8026;&#x4ECE;&#x6B63;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x62FC;&#x63A5;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4F38;&#x957F;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x8FDB;&#x884C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x57FA;&#x56E0;&#x62FC;&#x63A5;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4FDD;&#x7559; polyadenylated mRNA &#x8F6C;&#x5F55;&#x7EC8;&#x6B62;&#x540E;&#x5728;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7AD9;&#x70B9;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x4ECE;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x7684;&#x62FC;&#x63A5;&#xFF0C;&#x5728;&#x5B8C;&#x6210;&#x4E4B;&#x524D;&#x88AB;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;pre-mRNA post-transcriptionally &#x5904;&#x7406;&#x867D;&#x7136;&#x4ECD;&#x62F4;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x57FA;&#x56E0;&#x7AEF;&#x9644;&#x8FD1;&#x3002;

&#x4F53;&#x5185;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II &#x4F38;&#x957F;&#x671F;&#x95F4; co-transcriptional &#x62FC;&#x63A5;&#x3002;

RNA processing events that take place on the transcribed pre-mRNA include capping, splicing, editing, 3' processing, and polyadenylation. Most of these processes occur co-transcriptionally while the RNA polymerase II (Pol II) enzyme is engaged in transcriptional elongation. How Pol II elongation rates are influenced by splicing is not well understood. We generated a family of inducible gene constructs containing increasing numbers of introns and exons, which were stably integrated in human cells to serve as actively transcribing gene loci. By monitoring the association of the transcription and splicing machineries on these genes in vivo, we showed that only U1 snRNP localized to the intronless gene, consistent with a splicing-independent role for U1 snRNP in transcription. In contrast, all snRNPs accumulated on intron-containing genes, and increasing the number of introns increased the amount of spliceosome components recruited. This indicates that nascent RNA can assemble multiple spliceosomes simultaneously. Kinetic measurements of Pol II elongation in vivo, Pol II ChIP, as well as use of Spliceostatin and Meayamycin splicing inhibitors showed that polymerase elongation rates were uncoupled from ongoing splicing. This study shows that transcription elongation kinetics proceed independently of splicing at the model genes studied here. Surprisingly, retention of polyadenylated mRNA was detected at the transcription site after transcription termination. This suggests that the polymerase is released from chromatin prior to the completion of splicing, and the pre-mRNA is post-transcriptionally processed while still tethered to chromatin near the gene end.

The in vivo kinetics of RNA polymerase II elongation during co-transcriptional splicing.

ARN traitement des &#xE9;v&#xE9;nements qui ont lieu sur le pr&#xE9;-ARNm transcrit inclure le recouvrement, l&#x26;#39;&#xE9;pissage, &#xE9;dition, traitement de 3 &#x26;#39;, et de polyad&#xE9;nylation. La plupart de ces processus se produisent co-transcriptionnel alors l&#x26;#39;ARN polym&#xE9;rase II (Pol II), enzyme est engag&#xE9; dans &#xE9;longation de la transcription. Comment les taux d&#x26;#39;allongement Pol II sont influenc&#xE9;s par &#xE9;pissage n&#x26;#39;est pas bien comprise. Nous avons g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; une famille de g&#xE8;ne inductible construit contenant un nombre croissant d&#x26;#39;introns et des exons, qui ont &#xE9;t&#xE9; int&#xE9;gr&#xE9;s de fa&#xE7;on stable dans des cellules humaines pour servir activement la transcription loci. En surveillant l&#x26;#39;association des m&#xE9;canismes de transcription et &#xE9;pissage sur ces g&#xE8;nes in vivo, nous avons montr&#xE9; que seulement U1 snRNP localis&#xE9; le g&#xE8;ne sans intron, compatible avec un r&#xF4;le d&#x26;#39;&#xE9;pissage ind&#xE9;pendant pour U1 snRNP dans la transcription. En revanche, tous les snRNP accumul&#xE9;e sur intron contenant des g&#xE8;nes, et en augmentant le nombre d&#x26;#39;introns augment&#xE9; la quantit&#xE9; de composants spliceosome recrut&#xE9;s. Cela indique que l&#x26;#39;ARN naissant peut assembler spliceosomes multiples simultan&#xE9;ment. Les mesures cin&#xE9;tiques de Pol II allongement in vivo, Pol II ChIP, ainsi que l&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;inhibiteurs d&#x26;#39;&#xE9;pissage Spliceostatin et Meayamycin montr&#xE9; que les taux d&#x26;#39;allongement polym&#xE9;rase ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;coupl&#xE9;es de l&#x26;#39;&#xE9;pissage en cours. Cette &#xE9;tude montre que la cin&#xE9;tique &#xE9;longation de la transcription se d&#xE9;roulent ind&#xE9;pendamment de l&#x26;#39;&#xE9;pissage des g&#xE8;nes au mod&#xE8;le &#xE9;tudi&#xE9; ici. &#xC9;tonnamment, la r&#xE9;tention d&#x26;#39;ARNm polyad&#xE9;nyl&#xE9; a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;e sur le site de la transcription apr&#xE8;s terminaison de la transcription. Cela indique que la polym&#xE9;rase est lib&#xE9;r&#xE9; de la chromatine avant l&#x26;#39;ach&#xE8;vement de l&#x26;#39;&#xE9;pissage, et le pr&#xE9;-ARNm est post-transcriptionnel trait&#xE9;es tout en attach&#xE9; &#xE0; la chromatine pr&#xE8;s de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; du g&#xE8;ne.

La cin&#xE9;tique de Vivo de l&#x26;#39;ARN polym&#xE9;rase II Allongement lors de la co-transcriptionnelle &#xE9;pissure

Verarbeiten von Ereignissen, die statt auf die transkribierte RNA Pre-mRNA geh&ouml;ren capping, Splei&szlig;en, Bearbeitung, 3&#39; Verarbeitung und Polyadenylierung. Die meisten dieser Prozesse auftreten co-transcriptionally, w&auml;hrend das RNA-Polymerase II (Pol II) Enzym transkriptionelle Dehnung beteiligt ist. Wie Pol II Dehnung Preise durch Splei&szlig;en beeinflusst werden ist nicht gut verstanden. Wir generiert eine Familie durch Induktion erh&auml;ltlichen Gen-Konstrukte, die mit immer mehr Introns und Exons, die stabil in den menschlichen Zellen dienen als aktiv Transkription gen Loci integriert wurden. Durch &Uuml;berwachung der Association der Transkription und Maschinen auf diese Gene in-vivo-Splei&szlig;en, zeigten wir, dass nur U1-SnRNP lokalisiert an den intronless gen, mit einer Splei&szlig;en-unabh&auml;ngige Rolle f&uuml;r U1-SnRNP in Transkription. Im Gegensatz dazu erh&ouml;ht alle SnRNPs im Intron-haltigen Gene und Erh&ouml;hung der Anzahl der Introns angesammelten den Spliceosom Komponenten rekrutiert. Dies bedeutet, dass die entstehende RNA gleichzeitig mehrere Spliceosomes zusammenstellen kann. Kinetische Messungen der Pol II Dehnung in-vivo, Pol-II-ChIP sowie die Verwendung von Spliceostatin und Meayamycin-Inhibitoren Splei&szlig;en zeigte, dass Polymerase Dehnung Preise abgekoppelt vom laufenden Splei&szlig;en. Diese Studie zeigt, dass Transkription Dehnung Kinetik Vorgehen unabh&auml;ngig von Splei&szlig;en an die Modell-Gene, studierte hier. &Uuml;berraschend, Aufbewahrung von Polyadenylated, die mRNA am Standort Transkription nach Beendigung der Transkription erkannt wurde. Dies deutet darauf hin, dass die Polymerase von Chromatin vor dem Abschluss der Splei&szlig;en freigegeben wird, und die Pre-mRNA post-transcriptionally verarbeitet wird, w&auml;hrend noch an Chromatin gen Ende angebunden.

Die in-vivo Kinetik der RNA-Polymerase II Dehnung w&auml;hrend co-transcriptional Splei&szlig;en.

Elaborazione di eventi che si svolgono sul trascritto di RNA pre-mRNA includono tappatura, splicing, editing, 3&#39; elaborazione e poliadenilazione. Co-transcriptionally la maggior parte di questi processi avvengono mentre l&#39;enzima RNA polimerasi II (Pol II) &egrave; impegnata in allungamento trascrizionale. Come tassi di allungamento Pol II sono influenzati da splicing non &egrave; ben compreso. Abbiamo generato una famiglia di costrutti inducible gene contenente un numero crescente di introni ed esoni, che sono stati integrati stabilmente nelle cellule umane per servire come trascrivere attivamente loci del gene. Monitorando l&#39;associazione della trascrizione e lo splicing macchinari su questi geni in vivo, ci ha mostrato che solo snRNP U1 localizzato il gene intronless, coerenza con un ruolo indipendente impionbatura per U1 snRNP nella trascrizione. Al contrario, tutti biogen&egrave;se accumulati su introne contenenti geni e aumentando il numero degli introni aumentato la quantit&agrave; di componenti spliceosoma reclutati. Questo indica che RNA nascente pu&ograve; montare contemporaneamente pi&ugrave; spliceosomes. Misurazioni cinetiche di allungamento Pol II in vivo, Pol II ChIP, cos&igrave; come uso di Spliceostatin e Meayamycin lo splicing inibitori hanno mostrato che tassi di allungamento della polimerasi sono stati disgiunti da splicing in corso. Questo studio dimostra che cinetica di allungamento trascrizione proceda indipendentemente da splicing presso i geni modello studiati qui. Sorprendentemente, ritenzione di poliadenilazione che mRNA &egrave; stato individuato presso il sito di trascrizione dopo la terminazione della trascrizione. Questo suggerisce che la polimerasi &egrave; pubblicata da cromatina prima del completamento di splicing, e il pre-mRNA viene elaborato post-transcriptionally mentre ancora legato a cromatina verso la fine del gene.

La cinetica in vivo di allungamento di RNA polimerasi II durante lo splicing co-transcriptional.

pre-mRNA&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306B;&#x884C;&#x308F;RNA&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x7DE8;&#x96C6;&#x3001;3 &#x26;#39;&#x51E6;&#x7406;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x5316;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306E;RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;II&#xFF08;Pol II&#xFF09;&#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x8EE2;&#x5199;&#x4F38;&#x9577;&#x306B;&#x5F93;&#x4E8B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x3001;&#x5171;&#x8EE2;&#x5199;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;Pol II&#x306E;&#x4F38;&#x9577;&#x7387;&#x306F;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x3092;&#x8EE2;&#x5199;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3;&#x3001;&#x6570;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x69CB;&#x7BC9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3068;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;U1 snRNP&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3001;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;U1 snRNP&#x304C;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;snRNPs&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x52DF;&#x96C6;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x91CF;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x304C;&#x65B0;&#x751F;RNA&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;spliceosomes&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; in vivo&#x3067;&#x306E;Pol II&#x306E;&#x4F38;&#x9577;&#x3001;&#x30DD;&#x30EB;II&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x3001;Spliceostatin&#x3068;Meayamycin&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x4F38;&#x9577;&#x7387;&#x304C;&#x7D99;&#x7D9A;&#x7684;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x5B66;&#x3093;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3067;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x9032;&#x3080;&#x305D;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x4F38;&#x9577;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x5316;mRNA&#x306E;&#x4FDD;&#x6301;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x7D42;&#x4E86;&#x5F8C;&#x306B;&#x8EE2;&#x5199;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593;&#x306E;pre-mRNA&#x304C;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x306B;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x5171;&#x540C;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x4E2D;&#x306B;RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;II&#x4F38;&#x9577;&#x306E;&#x4F53;&#x5185;&#x52D5;&#x614B;&#x306B;

RNA&#xB97C; &#xBCA0;&#xB080;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC804; mRNA &#xC0C1;&#xD55C;, &#xC811;&#xD569;, &#xD3B8;&#xC9D1;, &#xB4F1; 3&#39; &#xCC98;&#xB9AC;, polyadenylation. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC740; co-transcriptionally RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; (Pol II) 2 &#xC138; &#xD6A8;&#xC18C; transcriptional &#xC2E0;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC885;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xC0DD;. Pol 2 &#xCC28; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xB960; &#xC811;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870; introns &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; loci&#xB97C; &#xBCA0; &#xB07C;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD588;&#xB2E4; exons&#xC758; &#xC22B;&#xC790;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xB179;&#xD654; &#xD611;&#xD68C; in vivo&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xAE30;&#xACC4; &#xC811;&#xD569; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; intronless &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; u 1 Snrnp&#xC758; &#xC811;&#xD569; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; U1 snRNP &#xADF8; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. Intron &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, &#xBC0F; introns&#xC758; &#xC218;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC5D0; &#xCD95;&#xC801; &#xB41C; &#xBAA8;&#xB4E0; snRNPs spliceosome &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xCC44;&#xC6A9;&#xC758; &#xAE08;&#xC561;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;. &#xCD08;&#xAE30; RNA &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; spliceosomes&#xB97C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Spliceostatin &#xBC0F; Meayamycin &#xC811;&#xD569; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; Pol II &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;, Pol II &#xCE69;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xCE21;&#xC815; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xB960; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xD569;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xD569; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD544; &#xC0AC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xC5EC;&#xAE30; &#xACF5;&#xBD80; &#xBAA8;&#xB378; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC811;&#xD569; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC9C4;&#xD589;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, mRNA &#xC804;&#xC0AC; &#xC885;&#xB8CC; &#xD6C4; &#xC804;&#xC0AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB41C; polyadenylated&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;. &#xD6A8;&#xC18C; &#xC811;&#xD569;, &#xC900;&#xACF5; &#xC804;&#xC5D0; chromatin&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; chromatin &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB05D;&#xC5D0; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xB2FF;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0AC;&#xC804; mRNA &#xCC98;&#xB9AC; post-transcriptionally &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; II co-transcriptional &#xC811;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728;&#xC758; in vivo &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;.

ARN procesamiento de eventos que tienen lugar en el pre-mRNA transcrito incluyen nivelaci&#xF3;n, corte y empalme, edici&#xF3;n, procesamiento 3 &#x26;#39;, y la poliadenilaci&#xF3;n. La mayor&#xED;a de estos procesos ocurren co-transcripcionalmente mientras que la RNA polimerasa II (Pol II) enzima se dedica a la elongaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n. C&#xF3;mo Pol tasas de elongaci&#xF3;n II est&#xE1;n influenciados por el empalme no se entiende bien. Hemos generado una familia de genes inducibles construye contiene un n&#xFA;mero creciente de intrones y exones, que fueron integrados establemente en las c&#xE9;lulas humanas para servir como activamente transcribir loci de genes. Mediante la supervisi&#xF3;n de la asociaci&#xF3;n de los mecanismos de transcripci&#xF3;n y el splicing de estos genes en vivo, se mostr&#xF3; que s&#xF3;lo el snRNP U1 localizada en el gen de intrones, en consonancia con un papel de empalme-independiente de snRNP U1 en la transcripci&#xF3;n. Por el contrario, todos los snRNPs acumulado en intr&#xF3;n que contienen los genes, y aumentando el n&#xFA;mero de intrones aument&#xF3; la cantidad de componentes spliceosome reclutados. Esto indica que el ARN naciente puede ensamblar spliceosomas m&#xFA;ltiples simult&#xE1;neamente. Mediciones cin&#xE9;ticas de Pol alargamiento II in vivo, chip Pol II, as&#xED; como el uso de inhibidores de empalme Spliceostatin y Meayamycin mostr&#xF3; que las tasas de polimerasa de alargamiento se desacopla de empalme curso. Este estudio muestra que la cin&#xE9;tica de transcripci&#xF3;n elongaci&#xF3;n proceder independientemente de empalme en los genes de los modelos estudiados. Sorprendentemente, la retenci&#xF3;n de ARNm poliadenilado se detect&#xF3; en el sitio de la transcripci&#xF3;n despu&#xE9;s de la terminaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n. Esto sugiere que la polimerasa se libera de la cromatina antes de la terminaci&#xF3;n de empalme, y el ARNm de pre-es post-procesado transcripcionalmente mientras todav&#xED;a atado a la cromatina cerca del final del gen.

La cin&#xE9;tica en Vivo de la polimerasa de ARN II elongaci&#xF3;n durante la co-transcripcional de empalme

Splicing pu&ograve; verificarsi co-transcriptionally. Cosa succede quando la reazione di splicing in ritardo dopo il processo di transcriptional completato? Abbiamo trovato che tassi di allungamento sono indipendenti di splicing in corso sui geni esaminati e suggeriscono che quando ha completato la trascrizione, ma lo splicing non ha le Macchine giuntatrici sono conservata presso il sito della trascrizione, indipendentemente dalla polimerasi.

Trascrizione e lo splicing: quando i due si incontreranno.

Co-transcriptionally &#x53EF;&#x4EE5;&#x8FDB;&#x884C;&#x62FC;&#x63A5;&#x3002;&#x5F53;&#x62FC;&#x63A5;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x6EDE;&#x540E;&#x4E8E;&#x5DF2;&#x5B8C;&#x6210;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5B8C;&#x6210;&#x540E;&#xFF0C;&#x4F1A;&#x53D1;&#x751F;&#x4EC0;&#x4E48;&#xFF1F;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x68C0;&#x67E5;&#x57FA;&#x56E0;&#x7814;&#x7A76;&#x6B63;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x62FC;&#x63A5;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5F53;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5DF2;&#x5B8C;&#x6210;&#xFF0C;&#x4F46;&#x62FC;&#x63A5;&#x4E0D;&#x4E86;&#xFF0C;&#x62FC;&#x63A5;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;

&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x62FC;&#x63A5;&#xFF1A; &#x5F53;&#x9A6C;&#x514B; &middot; &#x5410;&#x6E29;&#x7684;&#x6EE1;&#x8DB3;&#x3002;

Splicing can occur co-transcriptionally. What happens when the splicing reaction lags after the completed transcriptional process? We found that elongation rates are independent of ongoing splicing on the examined genes and suggest that when transcription has completed but splicing has not, the splicing machinery is retained at the site of transcription, independently of the polymerase.

Transcription and splicing: when the twain meet.

&#xC9;pissure peut se produire co-transcriptionnel. Qu&#x26;#39;est-ce qui se passe quand la r&#xE9;action d&#x26;#39;&#xE9;pissage accuse apr&#xE8;s le processus achev&#xE9; la transcription? On a constat&#xE9; que les taux d&#x26;#39;allongement sont ind&#xE9;pendants de l&#x26;#39;&#xE9;pissage en cours sur les g&#xE8;nes examin&#xE9;s et indiquent que lorsque la transcription a termin&#xE9; mais n&#x26;#39;a pas d&#x26;#39;&#xE9;pissage, la machinerie d&#x26;#39;&#xE9;pissage est retenu au niveau du site de la transcription, ind&#xE9;pendamment de la polym&#xE9;rase.

Transcription et &#xE9;pissage: quand les deux sont inconciliables

Splei&szlig;en kann co-transcriptionally auftreten. Was passiert, wenn die Splei&szlig;en Reaktion nach dem abgeschlossenen transkriptionelle Prozess hinkt? Wir fanden, dass die Dehnung Preise sind unabh&auml;ngig von laufenden Splei&szlig;en auf die untersuchten Gene und schlagen vor, da&szlig; wenn die Transkription beendet ist, aber nicht hat Splei&szlig;en, Splei&szlig;en Maschinen auf dem Gel&auml;nde der Transkription, unabh&auml;ngig von der Polymerase beibehalten wird.

Transkription und Splei&szlig;en: Wenn das Twain treffen.

&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x5171;&#x8EE2;&#x5199;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x53CD;&#x5FDC;&#x304C;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3057;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x5F8C;&#x9045;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3069;&#x3046;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4F38;&#x9577;&#x7387;&#x304C;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4E0A;&#x306E;&#x7D99;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x304C;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x8EE2;&#x5199;&#x3068;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF1A;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DF;&#x30FC;&#x30C8;

&#xC811;&#xD569; co-transcriptionally &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC811;&#xD569; &#xBC18;&#xC751; &#xC644;&#xB8CC; transcriptional &#xACFC;&#xC815; &#xD6C4; lags &#xD558;&#xBA74; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xB429;&#xB2C8;&#xAE4C;? &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xB960;&#xC740; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC811;&#xD569;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801; &#xB179;&#xC74C; &#xC644;&#xB8CC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xC811;&#xD569;, &#xC811;&#xD569; &#xAE30;&#xACC4; &#xC804;&#xC0AC; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC804;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xC811;&#xD569;: twain &#xB9CC;&#xB0A0; &#xB54C;.

Empalme puede ocurrir co-transcripcionalmente. &#xBF;Qu&#xE9; sucede cuando la reacci&#xF3;n de empalme se queda despu&#xE9;s de que el proceso se ha completado la transcripci&#xF3;n? Hemos encontrado que las tasas de elongaci&#xF3;n son independientes de empalme curso sobre los genes examinados y sugieren que cuando la transcripci&#xF3;n ha completado, pero no tiene empalme, la maquinaria de empalme se mantiene en el sitio de la transcripci&#xF3;n, independientemente de la polimerasa.

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Yehuda Brody

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