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Development of Cell-type specific anti-HIV gp120 aptamers for siRNA delivery

The global epidemic of infection by HIV has created an urgent need for new classes of antiretroviral agents. The potent ability of small interfering ...

Beckman Research Institute of City of Hope

&#x8BEF;&#x7801;&#x7387;&#x7684;&#x5E38;&#x89C4; PCR &#x4ECE;&#x5355;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x653E;&#x5927;&#x6BB5;&#x86CB;&#x767D;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x4F53;&#x5916;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x65F6;&#x6709;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x653E;&#x5927;&#x3001; &#x9AD8;&#x4FDD;&#x771F;&#x653E;&#x5927;&#x7684; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x9519;&#x8BEF;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4F20;&#x64AD;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x539F;&#x59CB; DNA &#x6A21;&#x677F;&#x5BF9;&#x653E;&#x5927;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x529B;&#x66F4;&#x5927;&#x3002;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x653E;&#x5927;&#x5229;&#x7528;&#x6210;&#x5BF9;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x548C;&#x70ED;&#x5FAA;&#x73AF;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E8E;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x6269;&#x589E;&#x4E0E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6216;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5D4C;&#x5408;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x975E;&#x6210;&#x500D;&#x653E;&#x5927;&#x548C;&#x751F;&#x4EA7;&#x662F;&#x4ECE;&#x539F;&#x59CB;&#x6A21;&#x677F;&#x590D;&#x5236;&#x4E0D;&#x8D85;&#x8FC7;&#x4E09;&#x4E2A;&#x8F6E;&#x7684;&#x622A;&#x65AD;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;&#x5916;&#x663E;&#x5B50; 6 &#x7684; p53 &#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x5229;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x6A21;&#x578B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4EE5;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x3002;&#x5305;&#x542B;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5D4C;&#x5408;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; 3&#39;--&gt; 5&#39; &#x626D;&#x8F6C;-deoxynucleotides &#x6216; 2&#39;-&#x9752;&#x6885;-ribonucleotides &#x5728; 6-8 &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4ECE; 3 &#39; &#x603B;&#x7AD9;&#x4FDD;&#x7559;&#x5E8F;&#x5217;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x548C;&#x5E95;&#x6F06;&#x63A8;&#x5E7F;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;PfuTurbo &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E0E; Taq &#x6216;&#x6392;&#x6C14;&#x53E3; (&#x5916;&#x62E6;&#x622A;&#x5668;-) DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#xFF0C;&#x4FEE;&#x6539;&#x540E;&#x7684;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5B8C;&#x5168;&#x622A;&#x65AD; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x5EF6;&#x4F38;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x88AB;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x4EA7;&#x54C1;&#x56E0;&#x4E0D;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6269;&#x589E;&#x7684;&#x6A21;&#x677F;&#x77ED; 3&#39; &#x4E92;&#x8865;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x3002;&#x622A;&#x65AD;&#x7684; amplific &#x5305;&#x88C5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6839;&#x636E;&#x662F;&#x5426;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6216;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5D4C;&#x5408;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x653E;&#x5927;&#x4E8C;&#x6B21;&#x6216;&#x51E0;&#x4F55;&#x3002;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x653E;&#x5927;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5927;&#x6709;&#x53EF;&#x4E3A;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x5F53;&#x6A21;&#x677F;&#x9A71;&#x52A8;&#x653E;&#x5927;&#x6B32;&#x4EE5;&#x589E;&#x52A0; thefrequency &#x65E0;&#x9519;&#x8BEF;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;

&#x622A;&#x65AD;&#x653E;&#x5927;&#xFF1A; &#x9AD8;&#x4FDD;&#x771F;&#x6A21;&#x677F;&#x9A71;&#x52A8;&#x6838;&#x9178;&#x6269;&#x589E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

The error rate of conventional PCR is problematic when amplifying from single cells or amplifying segments for protein functional analysis by in vitro translation. We describe truncated amplification, a method for high-fidelity amplification in which DNA polymerase errors are not propagated efficiently and original DNA templates exert greater influence on the amplification process. Truncated amplification utilizes pairs of oligonucleotides and thermal cycling, but it differs from PCR. Truncated amplification amplifies non-exponentially with one or two chimeric oligonucleotides and produces truncated terminal products that are no more than three rounds of replication from the original template. Exon 6 of the p53 gene was utilized as a model system to demonstrate proof of principle. Chimeric oligonucleotides containing three 3'-->5' reversed-deoxynucleotides or 2'-OMe-ribonucleotides at 6-8 nucleotides from the 3 'terminus retained sequence specificity and primer extension activity. With PfuTurbo but not with Taq or Vent (exo-) DNA polymerases, the modified nucleotides completely truncated the DNA polymerase elongation. The resulting truncated terminal products are not templates for further amplification because of the short length of the 3' complementary region. Truncated amplific ation can amplify quadratically or geometrically depending on whether two or one chimeric oligonucleotides are used. Truncated amplification is a promising approach when template-driven amplification is desired to increase thefrequency of error-free products.

Truncated amplification: a method for high-fidelity template-driven nucleic acid amplification.

Le taux d&#39;erreur de la PCR classique pose probl&egrave;me si amplifiant de cellules individuelles ou amplifier des segments pour l&#39;analyse fonctionnelle des prot&eacute;ines par transcription in vitro. Nous d&eacute;crivons tronqu&eacute;e d&#39;amplification, un proc&eacute;d&eacute; d&#39;amplification de haute fid&eacute;lit&eacute; dans lequel l&#39;ADN polym&eacute;rase erreurs ne sont pas propag&eacute;es efficacement et matrices d&#39;ADN originales exercent une plus grande influence sur le processus d&#39;amplification. Amplification tronqu&eacute;e utilise des paires d&#39;oligonucl&eacute;otides et thermique cyclisme, mais elle diff&egrave;re de la PCR. Amplification tronqu&eacute;e amplifie non exponentielle avec un ou deux oligonucl&eacute;otides chim&eacute;riques et fabrique des produits terminaux tronqu&eacute;es qui ne sont pas plus de trois cycles de r&eacute;plication &agrave; partir du mod&egrave;le original. Exon 6 du g&egrave;ne p53 a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; comme mod&egrave;le pour fournir une preuve de principe. Chim&eacute;riques oligonucl&eacute;otides contenant trois 3 &laquo;--&gt; 5 &laquo; d&eacute;soxynucl&eacute;otides invers&eacute; ou 2&#39;--OMe ribonucl&eacute;otides &agrave; 6-8 nucl&eacute;otides de la 3 &#39; terminus conserv&eacute; activit&eacute; de sequence sp&eacute;cificit&eacute; et amorce d&#39;extension. Avec PfuTurbo mais pas avec le Taq ou Vent (exo-) ADN polym&eacute;rases, les nucl&eacute;otides modifi&eacute;s tronqu&eacute; compl&egrave;tement l&#39;&eacute;longation de l&#39;ADN polym&eacute;rase. Les produits terminales tronqu&eacute;s qui en r&eacute;sultent ne sont pas mod&egrave;les plus d&#39;amplification en raison de la courte longueur de la r&eacute;gion 3&#39; compl&eacute;mentaires. Ation amplific tronqu&eacute; peut amplifier quadratique ou g&eacute;om&eacute;triquement selon que les deux ou un seul des oligonucl&eacute;otides chim&eacute;riques sont utilis&eacute;s. Amplification tronqu&eacute;e est une approche prometteuse lors de l&#39;amplification orient&eacute;s mod&egrave;les d&eacute;sire augmenter la fr&eacute;quence des produits sans erreur.

Tronqu&eacute; d&#39;amplification : une m&eacute;thode d&#39;amplification des acides nucl&eacute;iques bas&eacute; sur des mod&egrave;les de haute fid&eacute;lit&eacute;.

Abgeschnittene Verst&#xE4;rkung: eine Methode zur High-Fidelity-Template-driven Nukleins&#xE4;ureamplifikation.

Il tasso di errore di PCR convenzionale &egrave; problematico quando amplificando da cellule singole o amplificare segmenti per l&#39;analisi funzionale della proteina di traduzione in vitro. Descriviamo amplificazione troncato, un metodo per l&#39;amplificazione ad alta fedelt&agrave; in cui DNA polimerasi errori non vengono propagate in modo efficiente e modelli del DNA originale esercitano una maggiore influenza sul processo di amplificazione. Amplificazione troncati utilizza coppie di oligonucleotidi e termali in bicicletta, ma differisce dalla PCR. Troncato amplificazione amplifica esponenzialmente non con uno o due oligonucleotidi chimerici e produce prodotti terminale troncati che sono non pi&ugrave; di tre giri di replica dal modello originale. Esone 6 del gene p53 &egrave; stato utilizzato come sistema di modello per dimostrare la prova del principio. Chimerici oligonucleotidi contenenti tre 3&#39;--&gt; 5&#39; invertita-deoxynucleotides o 2&#39;--OMe ribonucleotidi a 6-8 nucleotidi dal 3 &#39; capolinea mantenuto attivit&agrave; sequenza specificit&agrave; e primer extension. Con PfuTurbo, ma non con le polimerasi di Taq o DNA Vent (exo-), i nucleotidi modificati completamente troncato l&#39;allungamento della polimerasi del DNA. I prodotti terminali troncati risultanti non sono modelli per ulteriore amplificazione a causa della breve lunghezza della regione 3&#39; complementari. Amplific troncato ation pu&ograve; amplificare quadraticamente o geometricamente a seconda se vengono utilizzati uno o due oligonucleotidi chimerici. Amplificazione troncato &egrave; un promettente approccio quando modello-driven amplificazione &egrave; voluta per aumentare la frequenza di prodotti privi di errore.

Troncato di amplificazione: un metodo per l&#39;amplificazione dell&#39;acido nucleico modello-driven ad alta fedelt&agrave;.

&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x5897;&#x5E45;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5897;&#x5E45;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B; in vitro &#x7FFB;&#x8A33;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x5F93;&#x6765;&#x306E; PCR &#x306E;&#x30A8;&#x30E9;&#x30FC;&#x7387;&#x306F;&#x554F;&#x984C;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5897;&#x5E45;&#x3001;&#x3069;&#x306E; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A8;&#x30E9;&#x30FC;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x4F1D;&#x64AD;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x5FE0;&#x5B9F;&#x5EA6;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x5897;&#x5E45;&#x7528;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x3066;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B8;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E; DNA &#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5897;&#x5E45;&#x904E;&#x7A0B;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x529B;&#x3092;&#x884C;&#x4F7F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5897;&#x5E45;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x71B1;&#x5FAA;&#x74B0;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x304C;&#x304B;&#x3089;&#x306E; PCR &#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5897;&#x5E45;&#x306F; 1 &#x3064;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9; &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x975E;&#x6307;&#x6570;&#x95A2;&#x6570;&#x7684;&#x5897;&#x5E45;&#x3001;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5143;&#x306E;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E; 3 &#x4EBA;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x306F;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7AEF;&#x672B;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3; p53 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 6 &#x539F;&#x5247;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5229;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;3 &#x3064;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;--&gt; 3&#39;5 &#39;&#x9006; deoxynucleotides &#x307E;&#x305F;&#x306F; 2&#39;--&#x9752;&#x6885;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; 3 &#x304B;&#x3089; 6 8 &#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#39; &#x672B;&#x7AEF;&#x4FDD;&#x6301;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x666E;&#x53CA;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3002;PfuTurbo &#x304C; Taq &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8; (&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;-) DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x4F38;&#x9577;&#x3092;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7AEF;&#x672B;&#x88FD;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5897;&#x5E45;&#x7528;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; 3&#39; &#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x9577;&#x3055;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F; amplific &#x60C5;&#x5831;&#x306F; 2 &#x3064;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9; &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x4E8C;&#x6B21;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5E7E;&#x4F55;&#x5B66;&#x7684;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x99C6;&#x52D5;&#x578B;&#x5897;&#x5E45;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x30A8;&#x30E9;&#x30FC; &#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x671B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5897;&#x5E45;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x5897;&#x5E45;: &#x5FE0;&#x5B9F;&#x5EA6;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x99C6;&#x52D5;&#x578B;&#x6838;&#x9178;&#x5897;&#x5E45;&#x6CD5;&#x3002;

&#xAE30;&#xC874;&#xC758; PCR&#xC758; &#xC624;&#xB958;&#xC728; &#xBB38;&#xC81C;&#xAC00; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xB54C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xD3ED; &#xB610;&#xB294; &#xC99D;&#xD3ED; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC88;&#xC5ED; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xC99D;&#xD3ED; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC624;&#xB958;&#xAC00; &#xC804;&#xD30C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xCDA9;&#xC2E4;&#xB3C4; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; DNA &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xC99D;&#xD3ED; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; &#xD070; &#xC601;&#xD5A5;&#xB825;&#xC744; &#xBC1C;&#xD718;. &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xC99D;&#xD3ED; oligonucleotides &#xBC0F; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xB9C1;, &#xC5F4; &#xC30D;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; PCR&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558;&#xB098; &#xB610;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; chimeric oligonucleotides&#xC640; &#xBE44; &#xAE30;&#xD558;&#xAE09;&#xC218;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558; &#xACE0; &#xC6D0;&#xBCF8; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xB354; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; 3 &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xB294; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Exon p53 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 6 &#xC6D0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC785;&#xC99D; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. Chimeric oligonucleotides 3&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; 3&#39;--&gt; 5&#39; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; deoxynucleotides &#xB610;&#xB294; 2&#39;-&#xC624; &#xC6B0; &#xBA54;-ribonucleotides 3&#xC5D0;&#xC11C; 6 8 &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#39; &#xC885;&#xC810; &#xC720;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xBC0F; &#xB1CC;&#xAD00; &#xD655;&#xC7A5; &#xD65C;&#xB3D9;. PfuTurbo &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Taq &#xB610;&#xB294; &#xD658;&#xAE30; (&#xC5D1; &#xC18C;-) DNA &#xD3F4; &#xD568;&#xAED8; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xB41C; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xB294; &#xC644;&#xC804;&#xD788; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC2E0;&#xC7A5;&#xC744; &#xC798;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC798;&#xB9BC;&#xB41C; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC81C;&#xD488; &#xD558;&#xC9C0; 3&#39; &#xBCF4;&#xC644; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xAE38;&#xC774; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB354;&#xC6B1; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; amplific ation &#xB450; &#xBC88; &#xC774;&#xC0C1; chimeric oligonucleotides &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC5EC;&#xBD80;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; quadratically &#xB610;&#xB294; &#xAE30;&#xD558;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xD3ED;. &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xAE30;&#xBC18; &#xD655;&#xB300; &#xC624;&#xB958; &#xC5C6;&#xB294; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; thefrequency &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xC6D0;&#xD560; &#xB54C; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC740; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xC811;&#xADFC; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xC99D;&#xD3ED; &#xC798;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xACE0; &#xCDA9;&#xC2E4;&#xB3C4; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xAE30;&#xBC18; &#xD575; &#xC0B0; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;.

La tasa de error de PCR convencional es problem&aacute;tica cuando la amplificaci&oacute;n de las c&eacute;lulas o amplificar segmentos de an&aacute;lisis funcional de la prote&iacute;na por traducci&oacute;n in vitro. Describimos amplificaci&oacute;n truncada, un m&eacute;todo de amplificaci&oacute;n de alta fidelidad en que ADN polimerasa errores no se propagan eficientemente y plantillas de la DNA originales ejercen mayor influencia en el proceso de amplificaci&oacute;n. Amplificaci&oacute;n truncada utiliza pares de oligonucle&oacute;tidos y termales ciclismo, pero se diferencia de la polimerizaci&oacute;n en cadena. Amplificaci&oacute;n truncada ampl&iacute;a exponencialmente no con uno o dos oligonucle&oacute;tidos quim&eacute;ricas y produce productos terminales truncados que son no m&aacute;s de tres rondas de replicaci&oacute;n de la plantilla original. Ex&oacute;n 6 del gene p53 se utiliz&oacute; como modelo para demostrar la prueba de principio. Oligonucle&oacute;tidos quim&eacute;ricos que contiene tres 3&#39;--&gt; Deoxynucle&oacute;tidos 5&#39; invertida-por o 2&#39;-OMe-ribonucle&oacute;tidos en 6-8 nucle&oacute;tidos de los 3 &#39; terminal retuvo la actividad de extensi&oacute;n de especificidad y cartilla de secuencia. Con PfuTurbo pero no con Taq o Vent (exo-) ADN polimerasas, los nucle&oacute;tidos modificados totalmente truncan el alargamiento de la ADN polimerasa. Los productos resultantes de terminales truncados no son plantillas para la amplificaci&oacute;n adicional debido a la corta longitud de la regi&oacute;n 3&#39; complementarios. Aci&oacute;n amplific truncado puede amplificar cuadr&aacute;tica o geom&eacute;trico dependiendo de si se utilizan uno o dos oligonucle&oacute;tidos quim&eacute;ricas. Amplificaci&oacute;n truncada es un enfoque prometedor cuando basados en plantillas amplificaci&oacute;n se desea aumentar el deslastre de productos libres de error.

Truncado de amplificaci&oacute;n: un m&eacute;todo de amplificaci&oacute;n de &aacute;cidos nucleicos basados en plantillas de alta fidelidad.

Analyse de d&eacute;calage de mobilit&eacute; &eacute;lectrophor&eacute;tique (EMSA) est une technique bien caract&eacute;ris&eacute;e et largement utilis&eacute;e pour l&#39;analyse d&#39;interaction proten-ADN et l&#39;analyse de la combinatoire de facteur de transcription. Actuellement mis en &oelig;uvre EMSA implique g&eacute;n&eacute;ralement l&#39;utilisation beaucoup de temps d&#39;&eacute;lectrophor&egrave;se de l&#39;ADN et de gel de polyacrylamide radiomarqu&eacute;. Nous &eacute;tudions la bionanoscience d&#39;auto-assemblage supramol&eacute;culaire nanostructures de prot&eacute;ine nucl&eacute;ique. Nous avons entrepris ces &eacute;tudes parce qu&#39;ils promettent d&#39;am&eacute;liorer notre compr&eacute;hension des assemblages form&eacute;s au cours de l&#39;&eacute;volution pr&eacute;biotique, fournissent des outils pour l&#39;analyse des processus biologiques tels que la recombinaison de l&#39;ADN et peuvent conduire au d&eacute;veloppement de biocapteurs &agrave; l&#39;&eacute;chelle nanom&eacute;trique, con&ccedil;u pour le ciblage mol&eacute;culaire sp&eacute;cifique au site. Au cours de ce travail, nous avons constat&eacute; que EMSA de ces structures complexes pourrait &ecirc;tre efficacement appliqu&eacute;e avec puces microfluidiques, con&ccedil;us pour la s&eacute;paration des fragments d&#39;ADN. Dans le pr&eacute;sent rapport, nous comparons les deux techniques et d&eacute;montrer que le syst&egrave;me microfluidique est &eacute;galement capable de r&eacute;soudre les m&eacute;langes complexes produites en d&eacute;corant des interm&eacute;diaires de recombinaison de l&#39;ADN avec des m&eacute;langes de prot&eacute;ines liant l&#39;ADN. En outre, le syst&egrave;me de puce microfluidique am&eacute;liore l&#39;AESM en permettant l&#39;analyse avec des &eacute;chantillons plus petits, en &eacute;vitant l&#39;utilisation de radiomarquage, et r&eacute;duisant le temps impliqu&eacute; &agrave; seulement quelques minutes.

Analyse de d&eacute;calage de mobilit&eacute; avec puces microfluidiques.

Mobility-Shift-Analyse mit Mikrofluidik-Chips.

&#x7535;&#x6CF3;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7387;&#x6539;&#x53D8;&#x5206;&#x6790; &#xFF08;EMSA&#xFF09; &#x662F;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; DNA &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7EC4;&#x5408;&#x6570;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x4EBA;&#x4EEC;&#x719F;&#x77E5;&#x548C;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#x5B9E;&#x65BD;&#x5730;&#x9AD8;&#x8F9B;&#x4E00;&#x822C;&#x6D89;&#x53CA;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; DNA &#x548C;&#x805A;&#x4E19;&#x70EF;&#x9170;&#x80FA;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x8D39;&#x65F6;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x6B63;&#x7814;&#x7A76;&#x81EA;&#x6211;&#x7EC4;&#x88C5;&#x8D85;&#x5206;&#x5B50;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6838;&#x9178;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684; bionanoscience&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x53D6;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x627F;&#x8BFA;&#x8981;&#x8BA9;&#x6211;&#x4EEC;&#x52A0;&#x6DF1;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x5728;&#x751F;&#x547D;&#x8D77;&#x6E90;&#x8FDB;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x50CF; DNA &#x91CD;&#x7EC4;&#x3001; &#x751F;&#x7269;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x9776;&#x5411;&#x7EB3;&#x7C73;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x82AF;&#x7247;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7528;&#x4E8E; DNA &#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x4E0E;&#x5730;&#x9AD8;&#x8F9B;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x80FD;&#x591F;&#x5F97;&#x5230;&#x6709;&#x6548;&#x5B9E;&#x65BD;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BC1;&#x660E;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E5F;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x89E3;&#x51B3;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x88C5;&#x9970; DNA &#x91CD;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x4E0E; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x82AF;&#x7247;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5141;&#x8BB8;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684;&#x6837;&#x672C;&#xFF0C;&#x907F;&#x514D;&#x4F7F;&#x7528; radiolabeling&#xFF0C;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E86;&#x5730;&#x9AD8;&#x8F9B;&#x548C;&#x7F29;&#x77ED;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x6D89;&#x53CA;&#x5230;&#x51E0;&#x5206;&#x949F;&#x3002;

&#x6D41;&#x52A8;&#x6027;&#x8F6C;&#x5411;&#x5206;&#x6790;&#x4E0E;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x82AF;&#x7247;&#x3002;

Electrophoretic mobility shift analysis (EMSA) is a well-characterized and widely used technique for the analysis of proten-DNA interaction and the analysis of transcription factor combinatorics. Currently implemented EMSA generally involves the time-consuming use of radiolabeled DNA and polyacrylamide gel electrophoresis. We are studying the bionanoscience of self-assembling supramolecular protein-nucleic nanostructures. We have undertaken these studies because they promise to enhance our understanding of assemblies formed during prebiotic evolution, provide tools for analysis of biological processes like DNA recombination, and may lead to the development of nanoscale biosensors designed for site-specific molecular targeting. During the course of that work, we noted that EMSA of these complex structures could be effectively implemented with microfluidics chips designed for the separation of DNA fragments. In this report we compare the two techniques and demonstrate that the microfluidics system is also capable of resolving complex mixtures produced by decorating DNA recombination intermediates with mixtures of DNA binding proteins. Moreover, the microfluidics chip system improves EMSA by permitting analysis with smaller samples, avoiding the use of radiolabeling, and reducing the time involved to a matter of minutes.

Mobility-shift analysis with microfluidics chips.

Analisi di spostamento di mobilit&agrave; elettroforetica (EMSA) sono una tecnica ben caratterizzata e ampiamente utilizzata per l&#39;analisi dell&#39;interazione proten-DNA e l&#39;analisi di calcolo combinatorio di fattore di trascrizione. Attualmente implementato EMSA generalmente implica l&#39;uso che richiede tempo di elettroforesi del DNA e del gel di poliacrilammide radioattivo. Stiamo studiando la bionanoscience delle nanostrutture proteina nucleico supramolecolari auto-assemblanti. Abbiamo intrapreso questi studi perch&eacute; promettono di migliorare la nostra comprensione delle assemblee formate durante l&#39;evoluzione prebiotica, forniscono strumenti per l&#39;analisi dei processi biologici come ricombinazione del DNA e possono portare allo sviluppo di biosensori su scala nanometrica, progettato per il targeting molecolare site-specific. Nel corso di questo lavoro, abbiamo notato che l&#39;EMSA di queste strutture complesse potrebbe essere attuato efficacemente con chip microfluidici progettate per la separazione di frammenti di DNA. In questa relazione noi confrontare le due tecniche e dimostrare che il sistema di microfluidica &egrave; anche in grado di risolvere complesse miscele prodotte dalla decorazione prodotti intermedi di ricombinazione del DNA con miscele di proteine leganti il DNA. Inoltre, il sistema di chip microfluidici migliora l&#39;EMSA consentendo analisi con piccoli campioni, evitando l&#39;uso di radiolabeling, e riducendo il tempo coinvolti in una manciata di minuti.

Analisi mobilit&agrave;-shift con chip microfluidici.

&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306E;&#x79FB;&#x52D5;&#x6027;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x89E3;&#x6790; (EMSA) DNA 26arc-7 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x8AD6;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3088;&#x304F;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3068;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x5B9F;&#x88C5; EMSA &#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6A19;&#x8B58; DNA &#x3068;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x304C;&#x304B;&#x304B;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x8D85;&#x5206;&#x5B50;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-&#x6838;&#x9178;&#x30CA;&#x30CE;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30B5;&#x30A4;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x524D;&#x751F;&#x7269;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x79C1;&#x9054;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D04;&#x675F;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067; DNA &#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x6A19;&#x7684;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30CA;&#x30CE;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x3001;EMSA &#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x306E; DNA &#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x7528;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x6307;&#x6458;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x6280;&#x6CD5;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3082;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x308B; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; DNA &#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3092;&#x98FE;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; EMSA &#x30AB;&#x30A4;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x3088;&#x308A;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3068;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6539;&#x5584;&#x3057;&#x3001;&#x5206;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x77ED;&#x7E2E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xAE30;&#xB3D9;&#xC131; &#xAD50;&#xB300; &#xBD84;&#xC11D; (EMSA) proten DNA &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xC804;&#xC0AC; &#xACC4;&#xC218; &#xC870;&#xD569;&#xB860;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; well-characterized &#xBC0F; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xAE30;&#xC220;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xAD6C;&#xD604; EMSA &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xB41C; DNA&#xC640; polyacrylamide &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC774; &#xAC78;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD575; nanostructures &#xAC16;&#xACE0; supramolecular bionanoscience &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; prebiotic &#xC9C4;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC57D;&#xC18D; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; DNA &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xACFC;&#xC815;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAD00;&#xB828; &#xBD84;&#xC790; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB098;&#xB178; biosensors&#xC758; &#xBC1C;&#xC804;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCC29;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xC791;&#xC5C5;&#xC758; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; EMSA microfluidics &#xCE69; DNA &#xB2E8;&#xD3B8;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xAC83;&#xC744; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xD604; &#xB420; &#xC218; &#xC9C0;&#xC801; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xACE0; microfluidics &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; DNA &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4; DNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7A5;&#xC2DD; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xD574;&#xACB0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC785;&#xC99D;. &#xB610;&#xD55C;, microfluidics &#xCE69; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; EMSA radiolabeling&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xD53C;&#xD558;&#xACE0; &#xC791;&#xC740; &#xC0D8;&#xD50C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xBD84; &#xBB38;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xB2E8;&#xCD95;.

Microfluidics &#xCE69;&#xACFC; &#xAE30;&#xB3D9;&#xC131; &#xAD50;&#xB300; &#xBD84;&#xC11D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

An&aacute;lisis de cambio de movilidad electrofor&eacute;tica (EMSA) es una t&eacute;cnica bien caracterizada y ampliamente utilizada para el an&aacute;lisis de interacci&oacute;n proten-DNA y el an&aacute;lisis de la combinatoria de factor de transcripci&oacute;n. Actualmente implementado EMSA generalmente implica el uso desperdiciadora de tiempo de la electroforesis de ADN y gel de poliacrilamida radiactivo. Estamos estudiando la bionanoscience de nanoestructuras capaces de autoensamblado de prote&iacute;na-nucleicos supramolecular. Hemos llevado a cabo estos estudios porque prometen mejorar nuestra comprensi&oacute;n de los conjuntos formados durante la evoluci&oacute;n prebi&oacute;tica, proporcionan herramientas para el an&aacute;lisis de los procesos biol&oacute;gicos como la recombinaci&oacute;n del ADN y pueden conducir al desarrollo de biosensores de nanoescala dise&ntilde;ados para apuntar al blanco molecular espec&iacute;fica. Durante el transcurso de ese trabajo, observamos que EMSA de estas estructuras complejas podr&iacute;a aplicarse eficazmente con las virutas de la microflu&iacute;dica dise&ntilde;adas para la separaci&oacute;n de fragmentos de ADN. En este informe comparamos las dos t&eacute;cnicas y demostrar que el sistema de la microflu&iacute;dica tambi&eacute;n es capaz de resolver mezclas complejas producidas por decorar productos intermedios de recombinaci&oacute;n de ADN con mezclas de prote&iacute;nas de uni&oacute;n de ADN. Adem&aacute;s, el sistema de chip de microflu&iacute;dica mejora la EMSA, permitiendo que los an&aacute;lisis con muestras m&aacute;s peque&ntilde;as, evitando el uso de radiolabeling, y reduciendo el tiempo involucrado en cuesti&oacute;n de minutos.

An&aacute;lisis de la movilidad-cambio con chips de microflu&iacute;dica.

Artificially ordered protein arrays provide a facile approach to a variety of problems in biology and nanoscience. Current demonstration systems use either nucleic acid tethers or methyltransferase fusions in order to target proteins or peptides of interest to nucleic acid scaffolds. These demonstrations point to the large number of useful devices and assemblies that can be envisioned using this approach, including smart biological probes and drug delivery systems. In principle, these systems are now capable of imitating the earliest forms of prebiotic organisms and can be expected to reach the complexity of a small virus in the near future. Third-generation methyltransferase inhibitors provide an example of a smart chemotherapeutics that can be constructed with this approach. We describe the use of mechanistic enzymology, computer-aided design, and microfluidic chip-based capillary electrophoresis in assessing the final assembly and testing of designs of this type.

Construction of ordered protein arrays.

&#x4EBA;&#x5DE5;&#x5E8F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x9635;&#x5217;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x548C;&#x7EB3;&#x7C73;&#x79D1;&#x5B66;&#x95EE;&#x9898;&#x7B80;&#x6613;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x6F14;&#x793A;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F7F;&#x7528;&#x6838;&#x9178;&#x7CFB;&#x7EF3;&#x6216;&#x4E3A;&#x4E86;&#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x6216;&#x591A;&#x80BD;&#x6838;&#x9178;&#x652F;&#x67B6;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x793A;&#x5A01;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6307;&#x5411;&#x4E86;&#x5927;&#x91CF;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x667A;&#x80FD;&#x751F;&#x7269;&#x63A2;&#x9488;&#x548C;&#x7ED9;&#x836F;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6240;&#x8BBE;&#x60F3;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x3002;&#x539F;&#x5219;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x73B0;&#x5728;&#x80FD;&#x6A21;&#x4EFF;&#x751F;&#x7269;&#x751F;&#x547D;&#x8D77;&#x6E90;&#x7684;&#x6700;&#x65E9;&#x5F62;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9884;&#x671F;&#x5728;&#x4E0D;&#x4E45;&#x7684;&#x5C06;&#x6765;&#x8FBE;&#x6210;&#x5C0F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E09;&#x4EE3;&#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x63D0;&#x4F9B;&#x667A;&#x80FD;&#x7684;&#x5316;&#x7597;&#x836F;&#x7269;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6784;&#x9020;&#x7684;&#x793A;&#x4F8B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x5B66;&#x3001; &#x8BA1;&#x7B97;&#x673A;&#x8F85;&#x52A9;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x82AF;&#x7247;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x7BA1;&#x7535;&#x6CF3;&#x8BC4;&#x4F30;&#x6700;&#x540E;&#x7684;&#x7EC4;&#x88C5;&#x548C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

&#x5EFA;&#x8BBE;&#x7684;&#x6709;&#x5E8F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x9635;&#x5217;&#x3002;

Alignements de prot&eacute;ine artificiellement ordonn&eacute;e offrent une approche facile pour une vari&eacute;t&eacute; de probl&egrave;mes en biologie et en nanosciences. Les syst&egrave;mes actuels de d&eacute;monstration utilisent les sangles de l&#39;acide nucl&eacute;ique ou m&eacute;thyltransf&eacute;rase fusions afin de cibler des prot&eacute;ines ou des peptides d&#39;int&eacute;r&ecirc;t pour les &eacute;chafaudages de l&#39;acide nucl&eacute;ique. Ces d&eacute;monstrations pointent vers le grand nombre de dispositifs utiles et d&#39;assemblys qui peuvent &ecirc;tre envisag&eacute;es en utilisant cette approche, notamment les sondes biologiques intelligents et drug delivery systems. En principe, ces syst&egrave;mes sont maintenant capables d&#39;imiter les premi&egrave;res formes d&#39;organismes pr&eacute;biotiques et est susceptible d&#39;atteindre la complexit&eacute; d&#39;un petit virus dans un proche avenir. Inhibiteurs de la troisi&egrave;me g&eacute;n&eacute;ration m&eacute;thyltransf&eacute;rase fournissent un exemple d&#39;une chimioth&eacute;rapie intelligent qui peut &ecirc;tre construit avec cette approche. Les auteurs d&eacute;crivent l&#39;utilisation de l&#39;enzymologie m&eacute;caniste, conception assist&eacute;e par ordinateur et microfluidique puce l&#39;&eacute;lectrophor&egrave;se capillaire en &eacute;valuant l&#39;assemblage final et les essais des mod&egrave;les de ce type.

Construction des alignements de prot&eacute;ine ordonn&eacute;e.

Bau der bestellten Protein-Arrays.

Le schiere della proteina artificialmente ordinata forniscono un facile approccio a una variet&agrave; di problemi in biologia e nanoscienze. Attuali sistemi di dimostrazione utilizzano attacchi di acido nucleico o metiltransferasi fusioni al fine di indirizzare le proteine o peptidi di interesse per l&#39;acido nucleico ponteggi. Queste dimostrazioni punto per il gran numero di dispositivi utili e gli assembly che possono essere immaginati utilizzando questo approccio, tra cui smart sonde biologiche e sistemi di somministrazione farmacologica. In linea di principio, questi sistemi sono ora in grado di imitare le prime forme di organismi prebiotici e possono essere previsto per raggiungere la complessit&agrave; di un piccolo virus in un prossimo futuro. Inibitori della terzo-generazione metiltransferasi forniscono un esempio di un chemotherapeutics intelligente che pu&ograve; essere costruito con questo approccio. Descriviamo l&#39;uso meccanicistico alla classe delle transferasi, computer-aided design e elettroforesi capillare basato su chip microfluidici nel valutare l&#39;assemblaggio finale e la sperimentazione di progetti di questo tipo.

Costruzione di matrici di proteina ordinato.

&#x4EBA;&#x5DE5;&#x7684;&#x306B;&#x9806;&#x5E8F;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x53CA;&#x3073;&#x30CA;&#x30CE;&#x30B5;&#x30A4;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x554F;&#x984C;&#x3078;&#x306E;&#x5B89;&#x6613;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6838;&#x9178;&#x30C6;&#x30B6;&#x30FC;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6838;&#x9178;&#x8DB3;&#x5834;&#x306B;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3068;&#x30B9;&#x30DE;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x85AC;&#x7269;&#x9001;&#x9054;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306A;&#x3069;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x60F3;&#x50CF;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x306B;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x539F;&#x5247;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3092;&#x8FD1;&#x3044;&#x5C06;&#x6765;&#x306B;&#x5230;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x671F;&#x5F85;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B2C; 3 &#x4E16;&#x4EE3;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x57FA;&#x8EE2;&#x79FB;&#x9175;&#x7D20;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x30B9;&#x30DE;&#x30FC;&#x30C8;&#x5316;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x5264;&#x306E;&#x4F8B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x9175;&#x7D20;&#x5B66;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x652F;&#x63F4;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3067;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D4;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9806;&#x5E8F;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3002;

&#xC778;&#xC704;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB82C; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xACFC; nanoscience&#xC758; &#xBB38;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC190;&#xC26C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xB370;&#xBAA8; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC911; &#xD575; &#xC0B0; &#xBC27;&#xC904; &#xB610;&#xB294; methyltransferase fusions&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB610;&#xB294; &#xD575; &#xC0B0; &#xAC74;&#xC124; &#xAE30;&#xACC4; &#xC784;&#xB300;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC704; &#xB9CE;&#xC740; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC7A5;&#xCE58; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xB9C8;&#xD2B8; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC804;&#xB2EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6C;&#xC0C1; &#xC218; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xAC00;&#xB9AC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xCE59;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC9C0;&#xAE08; prebiotic &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xBAA8;&#xBC29; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC791;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC744; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC7A5;&#xB798;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC;&#xD560; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xC0C1; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 3 &#xC138;&#xB300; methyltransferase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xAC00;&#xC774; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC2A4;&#xB9C8;&#xD2B8; chemotherapeutics&#xC758; &#xC608;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAE30;&#xACC4; enzymology, &#xCEF4;&#xD4E8;&#xD130; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xC124;&#xACC4; &#xBC0F; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBBF8;&#xC138; &#xCE69;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xBAA8; &#xC138;&#xAD00; &#xBC95; &#xD3C9;&#xAC00; &#xCD5C;&#xC885; &#xC870;&#xB9BD; &#xBC0F; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC774;&#xB7F0;&#xC774; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC815;&#xB82C; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xAC74;&#xC124;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Prote&iacute;na artificial ordenado matrices ofrecen un enfoque f&aacute;cil a una variedad de problemas en la biolog&iacute;a y la Nanociencia. Los sistemas actuales de demostraci&oacute;n utilizan correas de &aacute;cido nucleico o metiltransferasa fusiones a fin de atacar las prote&iacute;nas o p&eacute;ptidos de inter&eacute;s para andamios de &aacute;cido nucleico. Estas manifestaciones se&ntilde;alan a la gran cantidad de dispositivos &uacute;tiles y asambleas que pueden ser visualizadas desde este enfoque, incluyendo sondas biol&oacute;gicas inteligentes y sistemas de entrega de medicamentos. En principio, estos sistemas son ahora capaces de imitar las primeras formas de organismos prebi&oacute;ticos y pueden esperar a llegar a la complejidad de un peque&ntilde;o virus en un futuro pr&oacute;ximo. Inhibidores de la metiltransferasa de tercera generaci&oacute;n proporcionan un ejemplo de una quimioterapia inteligente que puede fabricarse con este enfoque. Describimos el uso de enzimolog&iacute;a mecanicista, dise&ntilde;o asistido por ordenador y microflu&iacute;dicos basadas en chip de electroforesis capilar en el montaje final de evaluaci&oacute;n y pruebas de dise&ntilde;os de este tipo.

Construcci&oacute;n de matrices de prote&iacute;na ordenado.

Les r&eacute;actions des interm&eacute;diaires d&eacute;riv&eacute;s de glucides ou de lipides avec prot&eacute;ines conduisent &agrave; la formation de produits de r&eacute;action de Maillard, qui par la suite conduit &agrave; la formation de pointe des produits terminaux de glycation/lipoxidation (&acirc;ge/ALEs). Niveaux d&#39;&acirc;ge/ALEs sont augment&eacute;s dans les maladies comme le diab&egrave;te. &Agrave; la diff&eacute;rence des &acirc;ges, on sait peu sur les effets des ALE in vitro. Nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que les ALEs peuvent avoir effets pro-inflammatoires dans les monocytes.

Effets pro-inflammatoires de produits finis lipoxidation avanc&eacute;e dans les monocytes.

Die Reaktionen der Kohlenhydrat - oder Lipid abgeleitete Zwischenprodukte mit Proteinen f&uuml;hren zur Bildung der Maillard-Reaktion-Produkte, die sp&auml;ter zur Bildung von advanced Glycation/Lipoxidation End Produkte (Alter/ALEs f&uuml;hrt). Alter/ALEs sind Krankheiten wie Diabetes zugenommen. Im Gegensatz zu Zeiten ist sehr wenig &uuml;ber in-vitro-ALE-Effekte bekannt. Wir die Hypothese, dass ALEs in Monozyten Proinflammatory Auswirkungen haben k&ouml;nnen.

Proinflammatory Effekte erweiterte Lipoxidation-Endprodukte in Monozyten.

Le reazioni dei carboidrati-lipidi derivati o prodotti intermedi con proteine portano alla formazione di prodotti di reazione di Maillard, che successivamente conduce alla formazione di avanzati prodotti finali di glicazione/lipoxidation (et&agrave;/ALEs). Livelli di et&agrave;/ALEs sono aumentati in malattie come il diabete. A differenza di et&agrave;, molto poco si sa circa gli effetti ALE in vitro. Abbiamo ipotizzato che ALEs pu&ograve; avere effetti proinfiammatori nei monociti.

Proinfiammatorie effetti dei prodotti finali lipoxidation avanzate nei monociti.

The reactions of carbohydrate- or lipid-derived intermediates with proteins lead to the formation of Maillard reaction products, which subsequently leads to the formation of advanced glycation/lipoxidation end products (AGE/ALEs). Levels of AGE/ALEs are increased in diseases like diabetes. Unlike AGEs, very little is known about ALE effects in vitro. We hypothesized that ALEs can have proinflammatory effects in monocytes.

Proinflammatory effects of advanced lipoxidation end products in monocytes.

&#x78B3;&#x6C34;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x6216;&#x8102;&#x80AA;&#x6E90;&#x6027;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x4EA7;&#x7269;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x540E;&#x6765;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x665A;&#x671F;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;/&#x8102;&#x8D28;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7EC8;&#x4EA7;&#x7269; (&#x5E74;&#x9F84;/&#x9EA6;&#x82BD;&#xFF09;&#x3002;&#x5E74;&#x9F84;/&#x9EA6;&#x82BD;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x5982;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3002;&#x4E0D;&#x540C;&#x5E74;&#x9F84;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x5F88;&#x5C11;&#x662F;&#x5DF2;&#x77E5;&#x4F53;&#x5916;&#x7684; ALE &#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x9EA6;&#x82BD;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4FC3;&#x708E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5148;&#x8FDB;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7EC8;&#x4EA7;&#x7269;&#x4E2D;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4FC3;&#x708E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x53CD;&#x5FDC;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x70AD;&#x6C34;&#x5316;&#x7269;&#x3084;&#x8102;&#x8CEA;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306A;&#x7CD6;&#x5316;/lipoxidation &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x88FD;&#x54C1; &#xFF08;&#x5E74;&#x9F62;/&#x30A8;&#x30FC;&#x30EB;) &#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x30E1;&#x30A4;&#x30E9;&#x30FC;&#x30C9;&#x53CD;&#x5FDC;&#x751F;&#x6210;&#x7269;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x75BE;&#x60A3;&#x306F;&#x3001;&#x5E74;&#x9F62;/&#x30A8;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5E74;&#x9F62;&#x5C64;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x30A8;&#x30FC;&#x30EB;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066; in vitro &#x3067;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x5358;&#x7403;&#x708E;&#x75C7;&#x8A98;&#x767A;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306A; lipoxidation &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x88FD;&#x54C1;&#x5358;&#x7403;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x8A98;&#x767A;&#x52B9;&#x679C;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0C4;&#xC218;&#xD654;&#xBB3C; &#xC774;&#xB098; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;&#xC758; &#xBC18;&#xC751; &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; &#xACE0;&#xAE09; glycation/lipoxidation &#xCD5C;&#xC885; &#xC81C;&#xD488; (&#xB098; &#xC774;/&#xC54C; &#xB808; &#xC2A4;)&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; &#xBA54;&#xC77C; &#xB77C; &#xB4DC; &#xBC18;&#xC751; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8;. &#xB098; &#xC774;/&#xC54C; &#xB808; &#xC2A4; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xAC19;&#xC740; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC5F0;&#xB839;&#xB300;&#xC640;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC8FC; &#xC791;&#xC740; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0; &#xC77C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC54C; &#xB808; &#xC2A4; monocytes&#xC5D0; proinflammatory &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC00;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;.

Monocytes&#xC5D0; &#xACE0;&#xAE09; lipoxidation &#xCD5C;&#xC885; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; Proinflammatory &#xD6A8;&#xACFC;.

Las reacciones de carbohidratos o l&iacute;pidos-derivados intermedios con prote&iacute;nas conducen a la formaci&oacute;n de productos de la reacci&oacute;n de Maillard, que posteriormente conduce a la formaci&oacute;n de productos finales de glicosilaci&oacute;n/Indo (edad/ALEs) de avanzada. Se aumentan los niveles de edad/ALEs en enfermedades como la diabetes. A diferencia de las edades, muy poco se sabe acerca de los efectos ALE in vitro. Presumimos que ALEs pueden tener efectos proinflammatory en monocitos.

Efectos proinflammatory de productos avanzados de Indo en monocitos.

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x663E;&#x793A; 12 15-&#x8102;&#x6C27;&#x5316;&#x9176; (12/15-LO&#xFF09; &#x7684;&#x9014;&#x5F84; arachidonate &#x9178;&#x4EE3;&#x8C22;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5305;&#x62EC;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7403;&#x80A5;&#x5927;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x6C89;&#x79EF;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x80BE;&#x75C5; (DN) &#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x4E8B;&#x4EF6; (&#x5EB7; SW&#x3001; &#x963F;&#x5FB7;&#x52D2; SG&#x3001; &#x5EB7;&#x5FB7;&#x7EB3;&#x65AF; CC&#x3001; LaPage J&#x3001; &#x987E; JL&#x3001; Nadler JL&#x3001; &#x602A;&#x517D; R.&#x80BE; Int 59&#xFF1A; 1354&#x5E74;-1362&#xFF0C;2001 &#x5E74; &#xFF1B;&#x5EB7; SW&#xFF0C;&#x602A;&#x517D; R&#xFF0C;&#x89C1;&#x5F81;&#x62A5; A&#x3001; &#x5EB7;&#x5FB7;&#x7EB3;&#x65AF; CC&#x3001; LaPage J&#xFF0C;Mundel P&#x3001; &#x5361;&#x4EC0;&#x5766; C &#x963F;&#x5FB7;&#x52D2; SG&#x3002;J &#x6211; Soc Nephrol 14: 3178-3187&#xFF0C;2003 &#x5E74; &#xFF1B;Kim YS&#xFF0C;&#x5170;&#x4EAD; L &#x963F;&#x5FB7;&#x52D2; SG&#xFF0C;&#x602A;&#x517D; R.&#x80BE; Int 64&#xFF1A; 1702&#x5E74;-1714&#x5E74;&#xFF0C;2003 &#x5E74; &#xFF1B;&#x745E;&#x8FEA;&#x9A6C;&#x3001; &#x963F;&#x5FB7;&#x52D2; SG&#x3001; Kim YS&#x3001; &#x5170;&#x4EAD; L&#x3001; &#x7F57;&#x897F; JJ&#x3001; &#x5EB7; SW&#x3001; Nadler JL&#x3001; &#x89C1;&#x5F81;&#x62A5; A&#x3001; &#x602A;&#x517D; R.Am J &#x63A2;&#x9488;&#x80BE;&#x63A2;&#x9488; 283&#xFF1A; F985-F994&#xFF0C;2002&#x5E74;&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x662F;&#x5426;&#x4F53;&#x5185;&#x9776;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; Rna (siRNAs) 12/15-&#x5362;&#x53EF;&#x6539;&#x5584;&#x80BE;&#x529F;&#x80FD;&#x635F;&#x4F24;&#x548C; DN &#x8132;&#x6CE8;&#x5165;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x7684; 1 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x5B9E;&#x73B0;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x8BBF;&#x95EE;&#x4E0E; siRNA &#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x5728;&#x80BE;&#x4E2D;&#x7684;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CC;&#x7EDE; 12/15-&#x5362; siRNA &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5171;&#x8F6D;&#x4E0E;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x3002;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5; DBA/2J &#x5C0F;&#x9F20;&#x88AB;&#x6CE8;&#x5165;&#x76AE;&#x4E0B;&#x4E0E;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x6807;&#x8BB0; 12/15-&#x5362; siRNA&#x3001; siRNA &#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x6216;&#x8F66;&#x8F86;&#x672C;&#x8EAB;&#xFF0C;&#x4E24;&#x6B21;&#x6BCF;&#x5468;&#x4E3A; 7 &#x78F7;&#x9178;&#x76D0;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x63A7;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x6536;&#x5230; 12/15-&#x5362; siRNA &#x8868;&#x660E;&#x86CB;&#x767D;&#x5C3F;&#x3001; &#x80BE;&#x4F53;&#x91CD;&#x6BD4;&#x7387;&#x3001; &#x80BE;&#x5C0F;&#x7403;&#x7CFB;&#x819C;&#x57FA;&#x8D28;&#x6269;&#x5F20;&#x3001; &#x80BE;&#x529F;&#x80FD;&#x635F;&#x4F24;&#x548C;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;/&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D78;&#x6DA6;&#xFF0C;&#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#x90FD;&#x8F83;&#x4F4E;&#x80BE;&#x76AE;&#x8D28;&#x6216;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7403;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#x80F0;&#x817A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6807;&#x8BB0;&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&beta;&#x3001; &#x7ED3;&#x7F14;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0E;&#x5173;&#x8054;&#x3001; I &#x578B;&#x548C; IV &#x578B;&#x80F6;&#x539F;&#x3001; &#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7269;&#x6291;&#x5236;&#x7269; 1 &#x548C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5173;&#x8054;&#x80A5;&#x539A;&#x7684;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7403;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x589E;&#x52A0;&#x4E5F;&#x65E0;&#x6CD5; siRNA &#x7BA1;&#x7406;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x9996;&#x6B21;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x76EE;&#x6807; 12/15-&#x5362;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x6807;&#x8BB0; siRNAs &#x7684;&#x7F2C;&#x6C99;&#x5766;&#x5728;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684; DN&#x3002;

&#x9488;&#x5BF9; 12/15-&#x8102;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x5728;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x80BE;&#x75C5; 1 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x53C2;&#x6570;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; Rna &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

We previously showed that the 12/15-lipoxygenase (12/15-LO) pathway of arachidonate acid metabolism is involved in multiple events related to diabetic nephropathy (DN), including glomerular hypertrophy and extracellular matrix deposition (Kang SW, Adler SG, Nast CC, LaPage J, Gu JL, Nadler JL, Natarajan R. Kidney Int 59: 1354-1362, 2001; Kang SW, Natarajan R, Shahed A, Nast CC, LaPage J, Mundel P, Kashtan C, Adler SG. J Am Soc Nephrol 14: 3178-3187, 2003; Kim YS, Lanting L, Adler SG, Natarajan R. Kindney Int 64: 1702-1714, 2003; Reddy MA, Adler SG, Kim YS, Lanting L, Rossi JJ, Kang SW, Nadler JL, Shahed A, Natarajan R. Am J Physiol Renal Physiol 283: F985-F994, 2002). In this study, we investigated whether in vivo delivery of small interfering RNAs (siRNAs) targeting 12/15-LO can ameliorate renal injury and DN in a streptozotocin-injected mouse model of type 1 diabetes. To achieve greater in vivo access and siRNA expression in the kidney, we used double-stranded 12/15-LO siRNA oligonucleotides conjugated with cholesterol. Diabetic DBA/2J mice were injected subcutaneously with either cholesterol-tagged 12/15-LO siRNA, mismatched control siRNA, or vehicle alone, twice weekly for 7 wk. Relative to controls, mice that received 12/15-LO siRNA showed significant reduction in albuminuria, kidney-to-body weight ratios, glomerular mesangial matrix expansion, renal structural damage, and monocyte/macrophage infiltration. These effects were associated with lower renal cortical or glomerular levels of profibrotic markers transforming growth factor-beta, connective tissue growth factor, type I and type IV collagens, plasminogen activator inhibitor 1, and fibronectin. The diabetes-induced increase in glomerular cyclin-dependent kinase inhibitors that are associated with hypertrophy was also prevented by siRNA administration. Our results show for the first time that systemic delivery of cholesterol-tagged siRNAs targeting 12/15-LO has renoprotective effects under diabetic conditions and therefore could be a novel therapeutic approach for DN.

Effects of cholesterol-tagged small interfering RNAs targeting 12/15-lipoxygenase on parameters of diabetic nephropathy in a mouse model of type 1 diabetes.

Nous avons montr&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment que la 12/15-lipoxyg&eacute;nase (12/15-LO) voie du m&eacute;tabolisme de l&#39;arachidonate acide est impliqu&eacute;e dans plusieurs &eacute;v&eacute;nements li&eacute;s &agrave; la n&eacute;phropathie diab&eacute;tique (ND), y compris l&#39;hypertrophie glom&eacute;rulaire et le d&eacute;p&ocirc;t de la matrice extracellulaire (Kang SW, Adler SG, Nast CC, LaPage J, Gu JL, JL Nadler, Nicolas R. Kidney Int 59 : 1354-1362, 2001 ; Kang SW, R Natarajan, A nouama, Nast CC, J LaPage, algerienne P, Kashtan C, SG Adler. J Am Soc Nephrol 14 : 3178-3187, 2003 ; Kim YS, L Lanting, Adler SG, Nicolas R. Kindney Int 64:1702-1714, 2003 ; MA Reddy, Adler SG, Kim YS, Lanting L, Rossi JJ, Kang SW, JL Nadler, Alice A, Nicolas R. Am J Physiol r&eacute;nale Physiol 283 : F985-F994, 2002). Dans cette &eacute;tude, nous avons examin&eacute; si livraison in vivo des petits ARN interf&eacute;rents (siARN) ciblant les 12/15-LO peut am&eacute;liorer des l&eacute;sions r&eacute;nales et DN dans un mod&egrave;le murin de streptozotocine-inject&eacute; de diab&egrave;te de type 1. Pour atteindre un plus grand acc&egrave;s in vivo et expression de siARN dans le rein, nous avons utilis&eacute; 12/15-LO siARN double brin oligonucl&eacute;otides conjugu&eacute;s avec le cholest&eacute;rol. Souris DBA/2J diab&eacute;tiques ont &eacute;t&eacute; inject&eacute;es par voie sous-cutan&eacute;e avec cholest&eacute;rol-le tag 12/15-LO siRNA, siARN contr&ocirc;le d&eacute;pareill&eacute;s ou v&eacute;hicule seul, deux fois par semaine pour 7 par semaine : Relative aux contr&ocirc;les, souris qui ont re&ccedil;u 12/15-LO siARN ont montr&eacute; une r&eacute;duction significative d&#39;albuminurie, rapports poids du rein-&agrave;-corps, glom&eacute;rulaires m&eacute;sangiales matrice expansion, des dommages structurels r&eacute;nal et infiltration de monocytes/macrophages. Ces effets ont &eacute;t&eacute; associ&eacute;s &agrave; des niveaux corticales ou glom&eacute;rulaires r&eacute;nales inf&eacute;rieurs des marqueurs profibrotic transforming growth factor-beta, facteur de croissance du tissu conjonctif, type I et les collag&egrave;nes de type IV, 1, inhibiteur de l&#39;activateur du plasminog&egrave;ne et la fibronectine. L&#39;augmentation induite par le diab&egrave;te inhibiteurs glom&eacute;rulaire kinases cycline-d&eacute;pendantes qui sont associ&eacute;s &agrave; l&#39;hypertrophie a &eacute;galement &eacute;t&eacute; emp&ecirc;ch&eacute;e par l&#39;administration de siARN. Nos r&eacute;sultats montrent pour la premi&egrave;re fois que la d&eacute;livrance syst&eacute;mique de cholest&eacute;rol-le tag siARN ciblant les 12/15-LO a des effets renoprotective dans des conditions diab&eacute;tiques et serait donc une nouvelle approche th&eacute;rapeutique pour DN.

Effets du cholest&eacute;rol-le tag petits ARN interf&eacute;rants ciblant les 12/15-lipoxyg&eacute;nase sur les param&egrave;tres de la n&eacute;phropathie diab&eacute;tique dans un mod&egrave;le murin de diab&egrave;te de type 1.

Wir haben zuvor gezeigt, dass es der 12/15-Lipoxygenase (12/15-LO) Weg Arachidonate sauren Stoffwechsel mehrere Ereignisse im Zusammenhang mit diabetischer Nephropathie (DN), einschlie&szlig;lich glomerul&auml;re Hypertrophie und der extrazellul&auml;ren Matrix Deposition beteiligt ist (Kang SW, Adler-SG, Nast CC, LaPage J, Gu JL, Nadler JL, Natarajan R. Kidney Int 59: 1354-1362, 2001; Kang SW, Natarajan R, Shahed A, Nast CC, LaPage J, Mundel P, Kashtan C, Adler-SG. J Am Soc Nephrol 14: 3178-3187, 2003; Kim YS, Lanting L, Adler SG, Natarajan R. Kindney Int 64:1702-1714, 2003; Reddy MA, Adler SG, Kim YS, Lanting L, Rossi JJ, Kang SW, Nadler JL, Shahed A, Natarajan R. Am J Physiol Renal Physiol 283: F985-F994, 2002). In dieser Studie untersuchten wir ob in-vivo Lieferung von kleinen interferierender RNAs (SiRNAs) f&uuml;r 12/15-LO renale Sch&auml;digung und DN in einem Streptozocin gesch&auml;umtes Mausmodell des Typ 1 Diabetes lindern kann. Um in-vivo Zugang und SiRNA Ausdruck in der Niere zu erreichen, haben wir mit Cholesterin konjugierten doppelstr&auml;ngige SiRNA 12/15-LO-Oligonukleotide verwendet. Diabetische DBA/2J M&auml;use wurden subkutan mit Cholesterin-Tag 12/15-LO SiRNA, nicht &uuml;bereinstimmende Steuerelement SiRNA oder Fahrzeug allein zweimal w&ouml;chentlich f&uuml;r 7 wk. verwandter Steuerelemente, M&auml;usen injiziert, die 12/15-LO SiRNA zeigte deutliche Verringerung Albuminurie, Niere-zu-Gewicht-Verh&auml;ltnis, glomerul&auml;re mesangialen Matrix Ausbau und renale Struktursch&auml;den Monozyte/Makrophagen eindringen zu empfangen. Diese Effekte wurden mit niedrigeren renale kortikale oder glomerul&auml;re Ebenen von Profibrotic Markern transforming Growth Faktor-Beta, Bindegewebe Wachstumsfaktor, Typ I und Typ IV Kollagenase, Plasminogen-Aktivator-Inhibitor 1 und Fibronektin. Die Diabetes-induzierte Zunahme der glomerul&auml;re cyclin-abh&auml;ngige Kinase-Inhibitoren, die mit Hypertrophie wurde auch von SiRNA-Verwaltung verhindert. Unsere Ergebnisse zeigen erstmals, dass systemische Lieferung von Cholesterin-getaggten SiRNAs Zielgruppenadressierung 12/15-LO nephroprotektiven Wirkung unter Diabetische Bedingungen hat und daher k&ouml;nnte einen neuen therapeutischen Ansatz f&uuml;r DN.

Auswirkungen der Cholesterin-Tag kleine interferierender RNAs Zielgruppenadressierung 12/15-Lipoxygenase auf Parameter der Diabetische Nephropathie in einem Mausmodell des Typ 1 Diabetes.

Abbiamo precedentemente dimostrato che il 12/15-lipossigenasi (12/15-LO) pathway dell&#39;arachidonato metabolismo acido &egrave; coinvolto in pi&ugrave; eventi correlati a nefropatia diabetica (DN), tra cui l&#39;ipertrofia glomerulare e la deposizione di matrice extracellulare (SW Kang, Adler SG, Nast CC, LaPage J, Gu JL, Nadler JL, R. Natarajan Kidney Int 59:1354-1362, 2001; Kang SW, Natarajan R, A Viviana, Nast CC, LaPage J, Mundel P, C Kashtan, Adler SG. J Am Soc anche 14:3178-3187, 2003; Kim YS, Lanting L, Adler SG, R. Natarajan Kindney Int 64:1702-1714, 2003; MA Reddy, Adler SG, Kim YS, Lanting L, Rossi JJ, Kang SW, Nadler JL, A Viviana, Natarajan R. Am J Physiol renale Physiol 283: F985-F994, 2002). In questo studio, abbiamo valutato se consegna in vivo di piccoli RNA interferenti (siRNA) targeting per 12/15-LO pu&ograve; migliorare il danno renale e DN in un modello murino streptozotocin-iniettato del diabete di tipo 1. Per ottenere maggiore accesso in vivo e siRNA espressione nel rene, abbiamo usato double-stranded 12/15-LO siRNA oligonucleotides coniugati con il colesterolo. DBA/2J topi diabetici erano iniettati per via sottocutanea con colesterolo-tagged 12/15-LO siRNA, siRNA controllo non corrispondenti o veicolo da solo, due volte settimanali per 7 settimana relativa ai controlli, topi che hanno ricevuto 12/15-LO siRNA ha mostrato significativa riduzione nella albuminuria, rapporti di peso del rene-a-corpo, espansione matrice mesangiale glomerulare, danni strutturali renali e infiltrazione di monociti/macrofagi. Questi effetti sono stati associati con livelli renali corticali o glomerulari inferiori dei marcatori profibrotic trasformando growth factor-beta, fattore di crescita del tessuto connettivo, tipo I e tipo IV collageni, dell&#39;inibitore dell&#39;attivatore del plasminogeno 1 e fibronectina. L&#39;aumento del diabete indotto gli inibitori di chinasi ciclina-dipendente glomerulare che sono associati con ipertrofia &egrave; stato impedito anche dall&#39;amministrazione del siRNA. I nostri risultati mostrano per la prima volta che consegna sistemico di colesterolo-tagged siRNAs targeting per 12/15-LO ha effetti renoprotettive condizioni diabetica e quindi potrebbe essere un nuovo approccio terapeutico per DN.

Effetti della RNAs d&#39;interferenza piccolo colesterolo-Tag targeting per 12/15-lipossigenasi sui parametri della nefropatia diabetica in un modello murino di diabete di tipo 1.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;12/15-&#x30EA;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (12/15-LO) &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30A2;&#x30E9;&#x30AD;&#x30C9;&#x30F3;&#x9178;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x7CF8;&#x7403;&#x4F53;&#x306E;&#x80A5;&#x5927;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x6C88;&#x7740;&#x306A;&#x3069;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x6027;&#x814E;&#x75C7; (DN)&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; (&#x30AB;&#x30F3; SW&#x3001;&#x30A2;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC; SG&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C7;&#x30CA;&#x30B9;&#x30C8; CC&#x3001;LaPage J&#x3001;Gu JL&#x3001;&#x30CA;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC; JL &#x30CA;&#x30BF;&#x30E9;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3; R. &#x814E;&#x81D3; Int 59: 1354&#x5E74;-1362, 2001;&#x30AB;&#x30F3; SW&#x3001;&#x30CA;&#x30BF;&#x30E9;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3; R&#x3001;Shahed A&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C7;&#x30CA;&#x30B9;&#x30C8; CC&#x3001;LaPage J&#x3001;&#x30DE;&#x30F3;&#x30C7;&#x30EB; Kashtan C P &#x30A2;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC; SG&#x3002;J &#x5348;&#x524D; Soc Nephrol 14:3178 3187 2003;&#x30AD;&#x30E0; YS &#x30E9;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; L &#x30A2;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC; SG&#x3001;&#x30CA;&#x30BF;&#x30E9;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3; R. &#x306B;&#x305D;&#x306E; Int 64: 1702&#x5E74;-1714&#x5E74;, 2003;&#x30FB; &#x30EC;&#x30C7;&#x30A3; MA&#x3001;&#x30A2;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC; SG&#x3001;&#x30AD;&#x30E0; YS&#x3001;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; L&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30B7; JJ&#x3001;&#x30AB;&#x30F3; SW&#x3001;&#x30CA;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC; JL&#x3001;Shahed A&#x3001;&#x30CA;&#x30BF;&#x30E9;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3; R. &#x5348;&#x524D; J &#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x814E;&#x751F;&#x7406; 283: F985 F994, 2002&#x5E74;)&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, 12/15-LO &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x5E72;&#x6E09;&#x306E; RNAs (Sirna) &#x306E;&#x814E;&#x969C;&#x5BB3;&#x3068; DN 1 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BE;&#x30C8;&#x30B7;&#x30F3;&#x6295;&#x4E0E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x6539;&#x5584;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;In vivo &#x3067;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3068;&#x814E;&#x81D3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; siRNA &#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x5171;&#x5F79;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396; 12/15-LO siRNA &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E; DBA/2 j &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x76AE;&#x4E0B; 12/15-LO siRNA &#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30BF;&#x30B0;&#x3001;&#x4E0D;&#x4E00;&#x81F4;&#x5BFE;&#x7167; siRNA &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8ECA;&#x4E21;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x306E; 2 &#x56DE;&#x6BCE;&#x9031; 7 wk. &#x76F8;&#x5BFE;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x53D6;&#x3063;&#x305F; 12/15-LO siRNA &#x86CB;&#x767D;&#x5C3F;&#x3001;&#x814E;&#x81D3;&#x4F53;&#x91CD;&#x6BD4;, &#x7CF8;&#x7403;&#x4F53;&#x30E1;&#x30B5;&#x30F3;&#x30AE;&#x30A6;&#x30E0; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30B9;&#x62E1;&#x5F35;, &#x814E;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x640D;&#x50B7;&#x3068;&#x5358;&#x7403;/&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x6D78;&#x6F64;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x814E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x7CF8;&#x7403;&#x4F53;&#x306E;&#x4F4E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x7D44;&#x7E54;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; profibrotic &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x985E;&#x304A;&#x3088;&#x3073; IV &#x578B;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;, &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3; &#x30FB; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; &#x30FB; &#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC; 1 &#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x80A5;&#x5927;&#x75C7;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7CF8;&#x7403;&#x4F53;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x85AC;&#x306E;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x8A98;&#x767A;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x307E;&#x305F; siRNA &#x6295;&#x4E0E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9632;&#x304C;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x5168;&#x8EAB; siRNAs &#x306E;&#x914D;&#x9054;&#x306E; 12/15-LO &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3044;&#x305F; doca-nacl &#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066; DN &#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

12/15-&#x30EA;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x6027;&#x814E;&#x75C7; 1 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3044;&#x305F;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x5E72;&#x6E09;&#x306E; RNAs &#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3002;

12/15-Lipoxygenase (12/15-LO) &#xD1B5;&#xB85C; arachidonate &#xC0B0; &#xB300;&#xC0AC;&#xC758; &#xC0AC; &#xBE44; &#xB300; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; &#xC99D; &#xCC29;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xC2E0; &#xC7A5;&#xBCD1; (DN)&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC5B4; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF8; (&#xAC15; SW, &#xC544;&#xB4E4; &#xB7EC; SG, Nast CC, LaPage J, &#xC11C;&#xC6B8; JL, Nadler JL, Natarajan R. &#xC2E0;&#xC7A5; Int 59: 1354-1362, 2001; &#xAC15; SW Natarajan R, Shahed A, Nast CC, LaPage J, Mundel P, Kashtan C &#xC560; &#xB4E4;&#xB7EC; SG. J &#xC57C; Soc Nephrol 14: 3178-3187, 2003; &#xAE40; YS, Lanting L &#xC560; &#xB4E4;&#xB7EC; SG, Natarajan R. Kindney Int 64: 1702-1714, 2003; &#xB808;&#xB514; &#xC5C4;&#xB9C8;, &#xC544;&#xB4E4; &#xB7EC; SG, &#xAE40; YS, Lanting L&#xB85C; &#xC2DC; JJ, &#xAC15; SW, Nadler JL, Shahed A, Natarajan R. &#xC624;&#xC804; J Physiol &#xC2E0;&#xC7A5; Physiol 283: F985-F994, 2002). &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xBD80; 12/15-&#xC18C;&#xD638;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xBC29;&#xD574; RNAs (siRNAs)&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBC30;&#xB2EC; &#xC218; &#xAC1C;&#xB7C9; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xBD80;&#xC0C1;&#xACFC; DN &#xD0C0;&#xC785;-1 &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xC758; streptozotocin &#xC8FC;&#xC785; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC0AC;. &#xD070; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xC7A5;&#xC5D0; siRNA &#xC2DD;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB354;&#xBE14;-&#xC88C;&#xCD08; 12/15-&#xC18C;&#xD638; siRNA oligonucleotides &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xD3EC;&#xB974;&#xD22C;&#xAC08;&#xC5B4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; DBA/2J &#xC0DD;&#xC950; &#xC8FC;&#xC785; &#xD588;&#xB2E4; subcutaneously &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xD0DC;&#xADF8; 12/15-&#xC18C;&#xD638; siRNA, &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; siRNA &#xB610;&#xB294; &#xCC28;&#xB7C9;, &#xD63C;&#xC790; &#xB450; &#xBC88; &#xB9E4;&#xC8FC; 7 wk. &#xC0C1;&#xB300;&#xB97C; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC1B;&#xC740; 12/15-&#xC18C;&#xD638; siRNA &#xB2E8;&#xBC31;&#xB1E8;, &#xC2E0;&#xC7A5; &#xBAB8; &#xBB34;&#xAC8C; &#xBE44;&#xC728;, &#xC0AC; mesangial &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xD655;&#xC7A5;, &#xC2E0;&#xC7A5; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC190;&#xC0C1; &#xBC0F; monocyte/macrophage &#xCE68;&#xD22C;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-&#xBCA0;&#xD0C0;, &#xACB0;&#xD569; &#xC870;&#xC9C1; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; profibrotic &#xB9C8;&#xCEE4;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xD53C; &#xC9C8; &#xB610;&#xB294; &#xC0AC; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0;, I, &#xD0C0;&#xC785; IV &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;, plasminogen activator &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; 1, &#xBC0F; fibronectin &#xC785;&#xB825;. &#xBE44; &#xB300;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC0AC; &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xC720;&#xBC1C; &#xC99D;&#xAC00; &#xB610;&#xD55C; siRNA &#xAD00;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; 12/15-&#xC18C;&#xD638;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xD0DC;&#xADF8; Sirnas&#xC758; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801; &#xBC30;&#xB2EC; &#xB2F9;&#xB1E8; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; renoprotective &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC0F; DN&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC801; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

12/15-Lipoxygenase &#xD0C0;&#xC785;-1 &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC950; &#xBAA8;&#xD615;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xC2E0; &#xC7A5;&#xBCD1;&#xC758; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xBC29;&#xD574; RNAs &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xD0DC;&#xADF8;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;.

Hemos demostrado anteriormente que el 12/15-(12/15-LO) Lipoxigenasa Araquidonato metabolismo &aacute;cido participa en varios eventos relacionados con la nefropat&iacute;a diab&eacute;tica (DN), incluyendo la hipertrofia glomerular y la deposici&oacute;n de la matriz extracelular (Kang SW, Adler SG, Nast CC, LaPage J, Gu JL, Nadler JL, Natarajan R. ri&ntilde;&oacute;n Int 59: 1354-1362, 2001; Kang SW, R Natarajan, A Shahed, Nast CC, pesar J, Mundal P, C Kashtan, Adler SG. J Am Soc Nephrol 14: 3178-3187, 2003; Kim YS, Lanting L, Adler SG, Natarajan R. Kindney Int 64:1702-1714, 2003; MA Reddy, Adler SG, Kim YS, Lanting L, Rossi JJ, Kang SW, JL Nadler, A Shahed, Natarajan R. Am J Physiol Renal Physiol 283: F985-F994, 2002). En este estudio, investigamos si entrega en vivo de ARN interferente peque&ntilde;o (siRNAs) dirigidas a 12/15-LO puede mejorar la lesi&oacute;n renal y DN en un modelo murino streptozotocin-inyectado de diabetes tipo 1. Para lograr un mayor acceso en vivo y expresi&oacute;n de siRNA en el ri&ntilde;&oacute;n, utilizamos double-stranded 12/15-LO siRNA oligonucle&oacute;tidos conjugados con el colesterol. Ratones DBA/2J diab&eacute;ticos se inyectan por v&iacute;a subcut&aacute;nea con colesterol-agreg&oacute; 12/15-LO siRNA, siRNA de control no coinciden o veh&iacute;culo solamente, dos veces semanalmente para wk. 7 relativa a los controles, ratones que recibieron 12/15-LO siRNA demostrada una reducci&oacute;n significativa en la albuminuria, cocientes peso del ri&ntilde;&oacute;n y el cuerpo, expansi&oacute;n de matriz mesangial glomerulares y da&ntilde;o estructural renal, infiltraci&oacute;n de monocitos/macr&oacute;fagos. Estos efectos fueron asociados con bajos niveles corticales o glomerulares renales de marcadores de citosinas transformar el factor de crecimiento-beta, factor de crecimiento de tejido conectivo, tipo I y tipo IV col&aacute;genos, inhibidor del activador del plasmin&oacute;geno 1 y fibronectina. El aumento de diabetes inducida por inhibidores de glomerular quinasa dependiente de ciclina que se asocian a hipertrofia tambi&eacute;n fue prevenido por la administraci&oacute;n de siRNA. Nuestros resultados demuestran por primera vez que entrega sist&eacute;mica de colesterol-etiquetado siRNAs dirigidos a 12/15-LO tiene efectos de pacientes diab&eacute;ticos en condiciones y por lo tanto podr&iacute;a ser un nuevo enfoque terap&eacute;utico para DN.

Efectos de colesterol-etiquetado small RNAs interferentes dirigidos a 12/15-lipoxigenasa en par&aacute;metros de la nefropat&iacute;a diab&eacute;tica en un modelo murino de la diabetes tipo 1.

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2; (HIV) &#x7684;&#x4FE1;&#x5C01;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x7531;&#x5916;&#x90E8;&#x7684;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (gp120) &#x548C;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF; (gp41&#xFF09; &#x7EC4;&#x6210;&#xFF0C;&#x5728;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x65B9;&#x9762;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x6761;&#x76EE;&#x5DF2;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E34;&#x5E8A;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#x6218;&#x7565;&#x3002;&#x5728;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x51E0;&#x4E2A; 2&#39;-F &#x53D6;&#x4EE3; RNA &#x9002;&#x914D;&#x5B50;&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; HIV-1(BaL) gp120 &#x86CB;&#x767D;&#x4E0E; nanomole &#x4EB2;&#x548C;&#x7684;&#x88AB;&#x5B64;&#x7ACB;&#x4ECE; RNA &#x5E93;&#x6280;&#x672F; &#xFF08;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6F14;&#x5316;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x6307;&#x6570;&#x7EA7;&#xFF09; &#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9002;&#x914D;&#x5B50;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6211;&#x4EEC;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x65B0;&#x53CC;&#x91CD;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x6297; gp120 &#x9002;&#x914D;&#x5B50; siRNA &#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x3002;&#x9002;&#x914D;&#x5B50;&#x548C;&#x9002;&#x914D;&#x5B50; siRNA &#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x4E13;&#x95E8;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x548C;&#x88AB;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x6210;&#x8868;&#x793A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; gp160 &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x9002;&#x914D;&#x5B50;&#x6240;&#x4F5C;&#x7684;&#x5207;&#x5757;&#x673A;&#x57FA;&#x677F; siRNA &#x529F;&#x80FD;&#x662F;&#x7531;&#x5207;&#x5757;&#x673A;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5177;&#x4F53;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x590D;&#x5236;&#x548C;&#x611F;&#x67D3;&#x529B; CEM T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x521D;&#x7EA7;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x5916;&#x5468;&#x8840;) &#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x51FA;&#x4E86; &#39;&#x7C98;&#39; &#x5E8F;&#x5217;&#x4E0A;&#x5316;&#x5B66;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x9002;&#x914D;&#x81EA;&#x4EA7;&#x81EA;&#x9500;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x591A;&#x8DEF;&#x590D;&#x7528;&#x5207;&#x5757;&#x673A;&#x57FA;&#x677F; siRNAs &#x7684;&#x9644;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x6574;&#x5957;&#x65B0;&#x578B;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x963B;&#x65AD;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x548C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x9002;&#x914D;&#x5B50;&#x5207;&#x5757;&#x673A;&#x57FA;&#x677F; siRNAs &#x4EA4;&#x4ED8;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

&#x9009;&#x62E9;&#x3001; &#x8868;&#x5F81;&#x4E0E;&#x5E94;&#x7528;&#x9002;&#x914D;&#x65B0;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; RNA gp 120 &#x5B50;&#x5207;&#x5757;&#x673A;&#x57FA;&#x677F; siRNAs &#x5230;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x7B80;&#x6613;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

The envelope glycoprotein of human immunodeficiency virus (HIV) consists of an exterior glycoprotein (gp120) and a trans-membrane domain (gp41) and has an important role in viral entry into cells. HIV-1 entry has been validated as a clinically relevant anti-viral strategy for drug discovery. In the present work, several 2'-F substituted RNA aptamers that bind to the HIV-1(BaL) gp120 protein with nanomole affinity were isolated from a RNA library by the SELEX (Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment) procedure. From two of these aptamers we created a series of new dual inhibitory function anti-gp120 aptamer-siRNA chimeras. The aptamers and aptamer-siRNA chimeras specifically bind to and are internalized into cells expressing HIV gp160. The Dicer-substrate siRNA delivered by the aptamers is functionally processed by Dicer, resulting in specific inhibition of HIV-1 replication and infectivity in cultured CEM T-cells and primary blood mononuclear cells (PBMCs). Moreover, we have introduced a 'sticky' sequence onto a chemically synthesized aptamer which facilitates attachment of the Dicer substrate siRNAs for potential multiplexing. Our results provide a set of novel inhibitory agents for blocking HIV replication and further validate the use of aptamers for delivery of Dicer substrate siRNAs.

Selection, characterization and application of new RNA HIV gp 120 aptamers for facile delivery of Dicer substrate siRNAs into HIV infected cells.

La glycoprot&#xE9;ine d&#x26;#39;enveloppe du virus de l&#x26;#39;immunod&#xE9;ficience humaine (VIH) est constitu&#xE9; d&#x26;#39;une glycoprot&#xE9;ine ext&#xE9;rieure (gp120) et un domaine trans-membranaire (gp41) et a un r&#xF4;le de l&#x26;#39;entr&#xE9;e du virus dans des cellules. VIH-1 entr&#xE9;e a &#xE9;t&#xE9; valid&#xE9; en tant que cliniquement pertinente anti-viral strat&#xE9;gie de d&#xE9;couverte de m&#xE9;dicaments. Dans le pr&#xE9;sent travail, plusieurs 2&#x26;#39;-F substitu&#xE9; aptam&#xE8;res d&#x26;#39;ARN qui se lient &#xE0; la pand&#xE9;mie du VIH-1 (BAL) prot&#xE9;ine gp120 avec nanomole affinit&#xE9; ont &#xE9;t&#xE9; isol&#xE9;s &#xE0; partir d&#x26;#39;une biblioth&#xE8;que de l&#x26;#39;ARN par la SELEX (&#xE9;volution syst&#xE9;matique de ligands par enrichissement exponentiel) proc&#xE9;dure. De deux de ces aptam&#xE8;res nous avons cr&#xE9;&#xE9; une s&#xE9;rie de nouveaux inhibiteurs de la fonction double anti-gp120 aptam&#xE8;re-siRNA chim&#xE8;res. Les aptam&#xE8;res et aptam&#xE8;re-siRNA chim&#xE8;res se lier sp&#xE9;cifiquement &#xE0; et sont internalis&#xE9;s dans les cellules exprimant gp160 de VIH. Le siRNA Dicer-substrat d&#xE9;livr&#xE9; par les aptam&#xE8;res est fonctionnellement trait&#xE9;es par Dicer, r&#xE9;sultant en une inhibition sp&#xE9;cifique de la r&#xE9;plication du VIH-1 et l&#x26;#39;infectiosit&#xE9; dans les CEM culture des cellules T et les cellules sanguines mononucl&#xE9;aires (PBMC primaires). En outre, nous avons mis en place un &#xAB;collantes&#xBB; s&#xE9;quence sur un aptam&#xE8;re synth&#xE9;tis&#xE9; chimiquement, qui facilite la fixation des substrats de Dicer siRNA pour le multiplexage potentiel. Nos r&#xE9;sultats fournissent un ensemble de nouveaux agents inhibiteurs pour bloquer la r&#xE9;plication du VIH et de valider davantage l&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;aptam&#xE8;res pour la livraison de siRNA substrats de Dicer.

S&#xE9;lection, caract&#xE9;risation et l&#x26;#39;application des nouvelles d&#x26;#39;ARN du VIH Gp 120 aptam&#xE8;res pour la livraison de siRNA Facile substrats de Dicer dans les cellules infect&#xE9;s par le VIH

Das Umschlag-Glykoprotein von Human Immunodeficiency Virus (HIV) besteht aus einer &auml;u&szlig;eren Glykoprotein (gp120) und einer Trans-Membran-Dom&auml;ne (gp41) und spielt eine wichtige Rolle im viral-Eintrag in die Zellen. HIV-1-Eintrag ist als klinisch relevante antiviralen Strategie f&uuml;r Drogeentdeckung validiert worden. In der vorliegenden Arbeit wurden mehrere 2&#39;-F ersetzt RNA Aptamere, die das HIV-1(BaL)-gp120-Protein mit Nanomole Affinit&auml;t binden, aus einer RNA-Bibliothek von der Prozedur SELEX (systematische Evolution von Liganden durch exponentielle Anreicherung) isoliert. Von zwei dieser Aptamere haben wir eine Reihe von neuen hemmenden Doppelfunktion Anti-gp120 Aptamer-SiRNA Chim&auml;ren. Die Aptamere und Aptamer-SiRNA Chim&auml;ren speziell binden und in Zellen, die zum Ausdruck bringen HIV gp160 verinnerlicht werden. Die SiRNA Dicer-Substrat von der Aptamere geliefert wird funktional von Dicer, was zu spezifischen Hemmung der Replikation von HIV-1 und Infektiosit&auml;t in kultivierten CEM T-Zellen und prim&auml;re MONONUKLE&Auml;RE Blutzellen (PBMCs) verarbeitet. Dar&uuml;ber hinaus haben wir eine &#39;sticky&#39; Sequenz auf einem chemisch synthetisierte Aptamer eingef&uuml;hrt, die Anlage von den Dicer Substrat SiRNAs f&uuml;r potenzielle Multiplexen erleichtert. Unsere Ergebnisse bieten eine Reihe von neuen hemmenden Wirkstoffen f&uuml;r die HIV-Replikation blockieren und die Verwendung von Aptamere f&uuml;r Lieferung von Dicer Substrat SiRNAs weiter zu &uuml;berpr&uuml;fen.

Auswahl, Charakterisierung und Anwendung von neuen HIV RNA Gp 120 Aptamere f&uuml;r einfache Anlieferung der Dicer Substrat SiRNAs in HIV infizierten Zellen.

La glicoproteina busta del virus dell&#39;immunodeficienza umana (HIV) &egrave; costituito da una glicoproteina esterno (gp120) e un dominio trans-membrana (gp41) e ha un ruolo importante in entrata virale in cellule. Entrata HIV-1 &egrave; stato convalidato come una strategia anti-virale clinicamente rilevante per la scoperta della droga. Nel presente lavoro, pi&ugrave; 2&#39;-F sostituito RNA aptameri che si legano alla proteina gp120 HIV-1(BaL) con affinit&agrave; nanomole sono stati isolati da una libreria di RNA dalla procedura SELEX (evoluzione sistematica dei ligandi di arricchimento esponenziale). Da due di questi aptameri abbiamo creato una serie di nuovi doppia funzione inibitoria anti-gp120 aptamer-siRNA chimere. Le chimere aptamer-siRNA e aptameri specificamente legano e vengono interiorizzate in cellule che esprimono l&#39;HIV gp160. La cubettatrice-substrato siRNA consegnato dagli aptameri funzionalmente elaborato da Dicer, con conseguente inibizione specifica della replicazione dell&#39;HIV-1 e l&#39;infettivit&agrave; in CEM T-cellule coltivate e cellule mononucleari del sangue primario (PBMCs). Inoltre, abbiamo introdotto una sequenza &#39;appiccicosa&#39; su un aptamer chimicamente sintetizzato che facilita l&#39;attaccamento del cubettatrice substrato siRNA per potenziali multiplexing. I nostri risultati forniscono una serie di nuovi agenti inibitori per bloccare la replicazione dell&#39;HIV e convalidare ulteriormente l&#39;utilizzo di aptameri per la consegna della cubettatrice substrato siRNA.

Selezione, caratterizzazione e applicazione del nuovi RNA HIV gp 120 aptameri per facile consegna della cubettatrice substrato siRNAs in HIV infetta le cellule.

&#x30D2;&#x30C8;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;HIV&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;gp120&#x306E;&#xFF09;&#x3068;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;gp41&#xFF09;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; HIV-1&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306F;&#x5275;&#x85AC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6226;&#x7565;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306F;&#x3001;2&#x26;#39;-F&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;RNA&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x7F6E;&#x63DB;HIV-1&#xFF08;BAL&#xFF09;&#x30CA;&#x30CE;&#x30E2;&#x30EB;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;gp120&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;SELEX&#xFF08;&#x6307;&#x6570;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7684;&#x9032;&#x5316;&#xFF09;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3067;RNA&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;2&#x3064;&#x304B;&#x3089;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x963B;&#x5BB3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6297;gp120&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x3001;siRNA&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x3001;siRNA&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;HIV gp160&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x304C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30B5;&#x30FC;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;siRNA&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x57F9;&#x990A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;CEM T&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E00;&#x6B21;&#x8840;&#x5358;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;PBMC&#xFF09;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;HIV-1&#x8907;&#x88FD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30B5;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x591A;&#x91CD;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30B5;&#x30FC;&#x57FA;&#x677F;siRNA&#x306E;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x4E0A;&#x306B; &#x26;quot;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AD;&#x30FC; &#x26;#39;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;HIV&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x963B;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30B5;&#x30FC;&#x57FA;&#x677F;siRNA&#x306E;&#x9001;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

HIV&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30B5;&#x30FC;&#x57FA;&#x677F;siRNA&#x306E;&#x7C21;&#x4FBF;&#x306A;&#x914D;&#x4FE1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;RNA HIV Gp&#x306E;120&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x5FDC;&#x7528;

&#xC778;&#xAC04; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (HIV)&#xC758; &#xBD09;&#xD22C; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC678;&#xBD80; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (gp120)&#xC640; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB9C9; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (gp41) &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC774;. &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xD56D;&#xBAA9; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC784;&#xC0C1; &#xAD00;&#xB828; &#xC548;&#xD2F0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xB7B5; &#xAC80;&#xC99D; &#xB41C;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; 2&#39;-F &#xB300;&#xC2E0; RNA aptamers HIV-1(BaL) gp120 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; nanomole &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; RNA &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; SELEX (&#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xC9C4;&#xD654;&#xC758; Ligands &#xC9C0; &#xC218; &#xB18D;&#xCD95; &#xD558; &#xC5EC;) &#xC808;&#xCC28;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;. 2 &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; aptamers &#xC548;&#xD2F0; gp120 aptamer siRNA &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xC77C;&#xB828;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xC5B5;&#xC81C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Aptamers &#xBC0F; aptamer siRNA &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xD2B9;&#xBCC4;&#xD788;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xC140; HIV gp160 &#xD45C;&#xD604;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0B4; &#xBA74; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Aptamers&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC804;&#xB2EC; Dicer &#xAE30;&#xD310; siRNA Dicer, hiv-1 &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; infectivity &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; CEM T-&#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD608;&#xC561; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC; (PBMCs)&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB2E4;&#xC911;&#xD654; Dicer &#xAE30;&#xD310; Sirnas&#xC758; &#xBD80;&#xCC29;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xB41C; aptamer&#xC5D0; &#39;&#xB048; &#xC801;&#39; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB3C4;&#xC785; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; HIV &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC18C;&#xC124; &#xAE08;&#xC9C0; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xB354;&#xC6B1; Dicer &#xAE30;&#xD310; Sirnas&#xC758; &#xBC30;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; aptamers&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xD655;&#xC778;.

&#xC120;&#xD0DD;, &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; HIV&#xC5D0; Dicer &#xAE30;&#xD310; Sirnas&#xC758; &#xC190;&#xC26C;&#xC6B4; &#xBC30;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; RNA HIV gp 120 aptamers &#xC801;&#xC6A9; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xAC10;&#xC5FC;.

La glicoprote&#xED;na de la envoltura del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) se compone de una glicoprote&#xED;na exterior (gp120) y un dominio trans-membrana (gp41) y tiene un papel importante en la entrada del virus en las c&#xE9;lulas. VIH-1 entrada ha sido validado como cl&#xED;nicamente relevante anti-viral estrategia para el descubrimiento de f&#xE1;rmacos. En el presente trabajo, varios 2&#x26;#39;-F sustituido apt&#xE1;meros de ARN que se unen al VIH-1 (BAL) prote&#xED;na gp120 con nanomol afinidad se aislaron a partir de una biblioteca de ARN por el SELEX (Evoluci&#xF3;n sistem&#xE1;tica de ligandos por enriquecimiento exponencial) procedimiento. De dos de estos apt&#xE1;meros hemos creado una serie de nuevos inhibidores duales de la funci&#xF3;n anti-gp120 siRNA aptamer quimeras. Los apt&#xE1;meros y quimeras siRNA aptamer se unen espec&#xED;ficamente a y se internaliza en las c&#xE9;lulas que expresan gp160 del VIH. El ARNsi Dicer-sustrato entregado por los apt&#xE1;meros est&#xE1; funcionalmente procesada por Dicer, resultando en la inhibici&#xF3;n espec&#xED;fica de la replicaci&#xF3;n del VIH-1 y la infectividad en la CEM cultivadas las c&#xE9;lulas T y c&#xE9;lulas mononucleares de sangre primarias (PBMC). Por otra parte, hemos introducido una &#x26;#39;pega&#x26;#39; la secuencia en el apt&#xE1;mero de s&#xED;ntesis qu&#xED;mica que facilita la uni&#xF3;n de los siRNAs sustrato Dicer para multiplexaci&#xF3;n potencial. Nuestros resultados proporcionan un conjunto de nuevos agentes inhibidores para bloquear la replicaci&#xF3;n del VIH y adem&#xE1;s validar el uso de apt&#xE1;meros para la entrega de siRNAs sustrato Dicer.

La selecci&#xF3;n, caracterizaci&#xF3;n y aplicaci&#xF3;n de nuevos ARN del VIH gp 120 apt&#xE1;meros para la entrega de siRNAs sustrato Facile Dicer en c&#xE9;lulas infectadas con VIH

Bereitstellung von kleinen st&ouml;renden (Si) RNA f&uuml;r bestimmte Zelle Bev&ouml;lkerungen in-vivo bleibt f&uuml;r ihre erfolgreiche therapeutische Anwendung eine gewaltige Herausforderung. Wir zeigen, dass SiRNA synthetisch einer CpG-Oligonukleotid-Agonist des Toll-Like-Rezeptor (TLR) verkn&uuml;pft 9 Ziele und Schweigen-gen in TLR9(+) myeloid Zellen und B-Zellen, die beide Schl&uuml;sselkomponenten von Tumor-Untersuchungsverfahren sind. Wenn ein CpG-konjugierten SiRNA, das als Ziel das immun Tumorsuppressor-Gen, die, das STAT3 bei M&auml;usen bei der Tumor-Ort oder intraven&ouml;s injiziert wird, tr&auml;gt dieser Tumor-assoziierte dendritische Zellen, Makrophagen und B-Zellen. Unterdr&uuml;ckender des Stat3 f&uuml;hrt zur Aktivierung der Tumor-assoziierte Immunzellen und letztlich zu potenten antitumor Immunantworten. Unsere Ergebnisse zeigen, dass das Potenzial von TLR-Agonist-SiRNA-Konjugaten f&uuml;r gezielte gen-silencing TLR Stimulation und immun-Aktivierung in der Tumor-Mikromilieu gekoppelt.

In-vivo SiRNA Lieferung an Immunzellen durch Konjugation an ein TLR9-Agonist verbessert antitumor Immunantworten.

Consegna efficiente dei piccoli interferenti (si) RNA a popolazioni di cellule specifiche in vivo rimane una sfida formidabile successo dell&#39;applicazione terapeutica. Mostriamo che siRNA sinteticamente collegato a un agonista di oligonucleotidi CpG del recettore toll-like (TLR) 9 geni target e silenzi in TLR9(+) cellule mieloidi e le cellule B, entrambi dei quali sono componenti chiave del microambiente del tumore. Quando un siRNA CpG-coniugati che gli obiettivi del gene soppressore immune che STAT3 &egrave; iniettato in topi localmente presso il sito del tumore o per via endovenosa, entra nel tumore-associati delle cellule dendritiche, macrofagi e cellule B. Silenziamento di Stat3 porta all&#39;attivazione delle cellule del sistema immunitario associato al tumore e in definitiva a potente risposta immunitaria antitumorale. I nostri risultati dimostrano che il potenziale dei TLR agonisti-siRNA coniugati per silenziamento genico mirato accoppiato con attivazione di stimolazione e immunitario TLR nel microambiente del tumore.

Consegna in vivo di siRNA alle cellule immunitarie di coniugazione di un agonista TLR9 migliora la risposta immunitaria antitumorale.

La prestation efficace de interf&#xE9;rents (SI) d&#x26;#39;ARN &#xE0; des populations cellulaires sp&#xE9;cifiques in vivo reste un formidable d&#xE9;fi pour son application th&#xE9;rapeutique r&#xE9;ussie. Nous montrons que le siRNA synth&#xE9;tique li&#xE9;e &#xE0; un agoniste CpG oligonucl&#xE9;otide de r&#xE9;cepteurs toll-like (TLR) 9 cibles et des g&#xE8;nes dans les silences TLR9 (+) des cellules my&#xE9;lo&#xEF;des et les cellules B, qui sont tous deux des &#xE9;l&#xE9;ments cl&#xE9;s du microenvironnement de la tumeur. Quand un siARN CpG-conjugu&#xE9; qui cible le g&#xE8;ne suppresseur de Stat3 immunitaire est inject&#xE9; chez la souris, soit localement au site de la tumeur ou par voie intraveineuse, il p&#xE9;n&#xE8;tre dans associ&#xE9;es &#xE0; la tumeur des cellules dendritiques, les macrophages et les lymphocytes B. Taire de Stat3 conduit &#xE0; l&#x26;#39;activation des associ&#xE9;s &#xE0; la tumeur des cellules immunitaires et, finalement, &#xE0; des r&#xE9;ponses antitumorales puissantes immunitaires. Nos r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent le potentiel de TLR-agoniste siRNA conjugu&#xE9;s pour faire taire g&#xE8;ne cibl&#xE9; coupl&#xE9; avec stimulation des TLR et activation du syst&#xE8;me immunitaire dans le microenvironnement tumoral.

L&#x26;#39;administration in vivo de SiRNA aux cellules immunitaires par conjugaison &#xE0; un agoniste de TLR9 Am&#xE9;liore Antitumor r&#xE9;ponses immunitaires

&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; (si) RNA &#x5230;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x4F20;&#x9012;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5DE8;&#x5927;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x5176;&#x6210;&#x529F;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5; siRNA &#x7EFC;&#x5408;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230; CpG &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242; toll &#x6837;&#x53D7;&#x4F53; (&#x5355;&#x53CD;) 9 TLR9(+) &#x9AD3;&#x7CFB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; B &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x548C;&#x6C89;&#x9ED8;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5F53;&#x76EE;&#x6807; Stat3 &#x6CE8;&#x5165;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80BF;&#x7624;&#x90E8;&#x4F4D;&#x5728;&#x672C;&#x5730;&#x6216;&#x9759;&#x8109;&#x6CE8;&#x5C04;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4E2D;&#x592E;&#x4EBA;&#x6C11;&#x653F;&#x5E9C;&#x5171;&#x8F6D; siRNA &#x65F6;&#xFF0C;&#x5B83;&#x8FDB;&#x5165;&#x80BF;&#x7624;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6C89;&#x9ED8; Stat3 &#x5BFC;&#x81F4;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x80BF;&#x7624;&#x76F8;&#x5173;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6700;&#x7EC8;&#x7684;&#x70C8;&#x6027;&#x7684;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x514D;&#x75AB;&#x5E94;&#x7B54;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5355;&#x53CD;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242; siRNA &#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x9776;&#x5411;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x52A0;&#x4E0A;&#x5355;&#x53CD;&#x523A;&#x6FC0;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x3002;

SiRNA &#x5411;&#x5171;&#x8F6D; TLR9 &#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5BF9;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x589E;&#x5F3A;&#x3002;

Efficient delivery of small interfering (si)RNA to specific cell populations in vivo remains a formidable challenge to its successful therapeutic application. We show that siRNA synthetically linked to a CpG oligonucleotide agonist of toll-like receptor (TLR)9 targets and silences genes in TLR9(+) myeloid cells and B cells, both of which are key components of the tumor microenvironment. When a CpG-conjugated siRNA that targets the immune suppressor gene Stat3 is injected in mice either locally at the tumor site or intravenously, it enters tumor-associated dendritic cells, macrophages and B cells. Silencing of Stat3 leads to activation of tumor-associated immune cells and ultimately to potent antitumor immune responses. Our findings demonstrate the potential of TLR agonist-siRNA conjugates for targeted gene silencing coupled with TLR stimulation and immune activation in the tumor microenvironment.

In vivo delivery of siRNA to immune cells by conjugation to a TLR9 agonist enhances antitumor immune responses.

in vivo&#x3067;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306B;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;SI&#xFF09;RNA&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x9001;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x6CBB;&#x7642;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;&#x306B;&#x624B;&#x3054;&#x308F;&#x3044;&#x8AB2;&#x984C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x7DCF;&#x5408;&#x7684;&#x306B;&#x816B;&#x760D;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x3082;Toll&#x69D8;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;TLR&#xFF09;9&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x6C88;&#x9ED9;&#x306E;TLR9&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#xFF08;+&#xFF09;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;B&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;CpG&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;siRNA&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;Stat3&#x306E;CpG&#x3092;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E5;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;siRNA&#x304C;&#x5C40;&#x6240;&#x7684;&#x306B;&#x816B;&#x760D;&#x90E8;&#x4F4D;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x9759;&#x8108;&#x5185;&#x6295;&#x4E0E;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x95A2;&#x9023;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3001;B&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5165;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; STAT3&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x95A2;&#x9023;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;TLR&#x523A;&#x6FC0;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x76F8;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;TLR&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;siRNA&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TLR9&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;siRNA&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30DC;&#x9001;&#x9054;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;

Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; (si) RNA&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBC30;&#xB2EC;&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB3C4;&#xC804;&#xC744; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; siRNA &#xC885;&#xD569;&#xC801;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD1B5;&#xD589;&#xC138; &#xAC19;&#xC774; (TLR)&#xC758; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xC18C;&#xBE44;&#xC7AC; oligonucleotide &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; 9 &#xBAA9;&#xD45C;&#xC640; &#xCE68;&#xBB35; &#xC720;&#xC804;&#xC790; TLR9(+) &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; B &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xBAA8;&#xB450; &#xC885;&#xC591; microenvironment&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C; Stat3 &#xC0DD;&#xC950; &#xC885;&#xC591; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB85C;&#xCEEC;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xC815; &#xB9E5;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC785; &#xD558;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC5B5;&#xC555; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xC18C;&#xBE44;&#xC7AC; conjugated siRNA &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;, &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; B &#xC138;&#xD3EC; &#xB4E4;&#xC5B4;&#xAC11;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; antitumor &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; stat3&#xC758; &#xC785;&#xC744;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; TLR &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; siRNA conjugates &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC785;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; &#xC885;&#xC591; microenvironment&#xC5D0; TLR &#xC790;&#xADF9;&#xACFC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

TLR9 &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xB97C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; Sirna&#xC758; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xB2EC; antitumor &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La prestaci&#xF3;n eficiente de los peque&#xF1;os de interferencia (si) ARN a las poblaciones espec&#xED;ficas de c&#xE9;lulas in vivo sigue siendo un reto formidable para su aplicaci&#xF3;n terap&#xE9;utica exitosa. Se demuestra que el siRNA sint&#xE9;tico relacionado con un agonista de oligonucle&#xF3;tidos de CpG Toll-like receptor (TLR) 9 de las metas y los genes silencios en TLR9 (+) las c&#xE9;lulas mieloides y las c&#xE9;lulas B, los cuales son componentes clave del microambiente tumoral. Cuando un ARNsi CpG conjugado que se dirige el gen supresor inmunol&#xF3;gico Stat3 se inyecta en ratones de forma local en el sitio del tumor o por v&#xED;a intravenosa, entra asociados a tumores c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas, macr&#xF3;fagos y c&#xE9;lulas B. Silencios de Stat3 conduce a la activaci&#xF3;n de los asociados al tumor las c&#xE9;lulas inmunes y, finalmente, a las respuestas inmunitarias antitumorales potentes. Nuestros hallazgos demuestran el potencial de siRNA agonista TLR-conjugados para el silenciamiento de genes espec&#xED;fico, junto con la estimulaci&#xF3;n de TLR y la activaci&#xF3;n inmune en el microambiente tumoral.

En Vivo entrega de siRNA a las c&#xE9;lulas inmunes de la conjugaci&#xF3;n de un agonista TLR9 mejora las respuestas inmunitarias antitumorales

&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x7684;&#x4FEE;&#x6539;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C03;&#x63A7;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E0E;&#x8FDB;&#x884C;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x6B63;&#x5728;&#x4E0E; E1&#x3001; E2&#xFF0C;&#x6709;&#x65F6; E3 &#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x786B;&#x916F;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x4E00;&#x76F4;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5185;&#x5728;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x786B;&#x916F;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x5F7B;&#x5E95;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x590D;&#x5408;&#x6A21;&#x578B;&#x548C; Ubc9 &#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x5185;&#x5728;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5927;&#x7EA6;&#x76F8;&#x6251; 1 &#x786B;&#x916F;&#x5171;&#x8F6D;&#x3002;Ubc9 &#x7EA6;&#x76F8;&#x6251; 1 &#x786B;&#x916F;&#x4E2D;&#x95F4;&#x6709;&#x5927;&#x7EA6; 3.6 h &#x534A;&#x751F;&#x6D3B; (&#x6C34;&#x89E3;&#x7387; k = 5.33 + /-2.8 x10(-5) s(-1))&#xFF0C;&#x5E76;&#x7565;&#x6709;&#x4E0B;&#x964D;&#xFF0C;&#x5728;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027; &#xFF08;k = 12.5 + /-1.8 x 10(-5) s(-1))&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x65B9;&#x9762;&#x9002;&#x5EA6;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684; E3&#xFF0C;(RanBP2) &#x4E5F;&#x6709;&#x53EA;&#x6C34;&#x89E3;&#x7387; (+ /-0.8 x 10(-5) s(-1) &#x4E3A;&#x79EF;&#x6781;&#x4E0E; 7.38 + /-0.7 x 10(-5) s(-1) &#x4E3A;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001; E3 E3 13.8) &#x6E29;&#x548C;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x9AD8;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x6709;&#x5BB3;&#x7684;&#x786B;&#x916F;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x6D88;&#x9664;&#x9176;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6309; thioesterases&#xFF0C;&#x4EE5;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5176;&#x80DE;&#x5185;&#x4E30;&#x5EA6;&#x548C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x4FEE;&#x6539;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;

&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x4FEE;&#x6539;&#x4E2D;&#x786B;&#x916F;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;

Ubiquitin-like modifications are important mechanisms in cellular regulation, and are carried out through several steps with reaction intermediates being thioester conjugates of ubiquitin-like proteins with E1, E2, and sometimes E3. Despite their importance, a thorough characterization of the intrinsic stability of these thioester intermediates has been lacking. In this study, we investigated the intrinsic stability by using a model compound and the Ubc9 approximately SUMO-1 thioester conjugate. The Ubc9 approximately SUMO-1 thioester intermediate has a half life of approximately 3.6 h (hydrolysis rate k = 5.33 +/- 2.8 x10(-5) s(-1)), and the stability decreased slightly under denaturing conditions (k = 12.5 +/- 1.8 x 10(-5) s(-1)), indicating a moderate effect of the three-dimensional structural context on the stability of these intermediates. Binding to active and inactive E3, (RanBP2) also has only a moderate effect on the hydrolysis rate (13.8 +/- 0.8 x 10(-5) s(-1) for active E3 versus 7.38 +/- 0.7 x 10(-5) s(-1) for inactive E3). The intrinsically high stability of these intermediates suggests that unwanted thioester intermediates may be eliminated enzymatically, such as by thioesterases, to regulate their intracellular abundance and trafficking in the control of ubiquitin-like modifications.

Stability of thioester intermediates in ubiquitin-like modifications.

Ubiquitin-comme modifications sont d&#39;importants m&eacute;canismes de r&eacute;gulation cellulaire et sont effectu&eacute;es au moyen de plusieurs &eacute;tapes avec des interm&eacute;diaires de r&eacute;action &eacute;tant thioester conjugu&eacute;s de l&#39;ubiquitin-comme prot&eacute;ines E1, E2 et E3 parfois. Malgr&eacute; leur importance, une caract&eacute;risation compl&egrave;te de la stabilit&eacute; intrins&egrave;que de ces interm&eacute;diaires thioester a fait d&eacute;faut. Dans cette &eacute;tude, nous avons &eacute;tudi&eacute; la stabilit&eacute; intrins&egrave;que &agrave; l&#39;aide d&#39;un mod&egrave;le compos&eacute; et le Ubc9 environ SUMO-1 thioester conjugu&eacute;. Le Ubc9 environ SUMO-1 thioester interm&eacute;diaire a une demi-vie d&#39;environ 3,6 h (hydrolyse taux k = 5.33 +/-2,8 x10(-5) s(-1)) et la stabilit&eacute; ont l&eacute;g&egrave;rement diminu&eacute; dans des conditions d&eacute;naturantes (k = 12,5 +/-1,8 x 10 s(-1)), indiquant un effet mod&eacute;r&eacute; du contexte structurel en trois dimensions sur la stabilit&eacute; de ces interm&eacute;diaires. Liaison &agrave; l&#39;E3 actifs et inactifs, (RanBP2) a &eacute;galement qu&#39;un effet mod&eacute;r&eacute; sur le taux d&#39;hydrolyse (13,8 +/-0,8 x 10 s(-1) pour l&#39;E3 active contre 7,38 +/-0,7 x 10 s(-1) pour l&#39;E3 inactif). La stabilit&eacute; intrins&egrave;que &eacute;lev&eacute;e de ces interm&eacute;diaires sugg&egrave;re que thioester ind&eacute;sirable interm&eacute;diaires peuvent &ecirc;tre &eacute;limin&eacute;es enzymatiquement, tel que par thioesterases, de r&eacute;glementer leur intracellulaire abondance et le contr&ocirc;le des modifications de l&#39;ubiquitin-comme la traite.

Stabilit&eacute; des interm&eacute;diaires thioester &agrave; ubiquitin-comme des modifications.

Ubiquitin-&auml;hnliche Modifikationen sind wichtige Mechanismen in zellul&auml;ren Verordnung und werden durch mehrere Schritte mit Reaktion Zwischenprodukte Thioester Konjugaten Ubiquitin-&auml;hnliche Proteine mit E1, E2 und E3 manchmal wird durchgef&uuml;hrt. Trotz ihrer Wichtigkeit hat eine gr&uuml;ndliche Charakterisierung der inneren Stabilit&auml;t dieser Thioester-Zwischenprodukte gefehlt. In dieser Studie untersuchten wir die innere Stabilit&auml;t mithilfe eines Modells zusammengesetzte und die Ubc9 etwa SUMO-1 Thioester konjugiert. Die Ubc9 etwa SUMO-1 Thioester Mittelstufe hat eine Halbwertszeit von ca. 3,6 h (Hydrolyse Tarif k = 5.33 +/-2,8 x10(-5) s(-1)) und die Stabilit&auml;t unter Denaturierung Bedingungen leicht gesunken (k = 12,5 +/-1,8 x 10(-5) s(-1)), angibt, eine moderate Wirkung von dreidimensionalen strukturellen Kontext auf die Stabilit&auml;t dieser Zwischenprodukte. Binden an aktiven und inaktiven E3, hat (RanBP2) auch nur eine moderate Wirkung auf die Hydrolysegeschwindigkeit (13,8 +/-0.8 X-10(-5)-s(-1) f&uuml;r aktive E3 gegen&uuml;ber 7,38 +/-0,7 X-10(-5)-s(-1) f&uuml;r inaktive E3). Die an sich hohe Stabilit&auml;t diese Zwischenprodukte suggeriert, dass unerw&uuml;nschte Thioester Zwischenprodukte m&ouml;glicherweise beseitigt enzymatisch, so wie von Thioesterases, deren intrazellul&auml;re regulieren F&uuml;lle und des Menschenhandels in die Kontrolle der Ubiquitin-&auml;hnliche &Auml;nderungen.

Stabilit&auml;t der Thioester Zwischenprodukte im Ubiquitin-&auml;hnliche &Auml;nderungen.

Ubiquitin-come modifiche sono importanti meccanismi di regolazione cellulare e vengono effettuate attraverso diversi passaggi con prodotti intermedi di reazione essendo tioestere coniugati delle proteine ubiquitina-come con E1, E2 ed E3 talvolta. Nonostante la loro importanza, una caratterizzazione approfondita della intrinseca stabilit&agrave; di questi intermedi tioestere &egrave; stato carente. In questo studio, abbiamo studiato la stabilit&agrave; intrinseca utilizzando un modello composto e il Ubc9 circa SUMO-1 tioestere coniugato. Il Ubc9 circa SUMO-1 tioestere intermedio ha un&#39;emivita di circa 3,6 h (idrolisi tasso k = 5,33 + 2,8 x10(-5) s(-1)) e la stabilit&agrave; &egrave; leggermente diminuito sotto condizioni di denaturazione (k = 12.5 + 1,8 x 10(-5) s(-1)), che indica un moderato effetto del contesto strutturale tridimensionale sulla stabilit&agrave; di questi intermedi. Associazione a E3 attivi e inattivi, (RanBP2) ha anche solo un moderato effetto sul tasso di idrolisi (13,8 + /-0,8 x 10(-5) s(-1) per l&#39;E3 attivo versus 7,38 + 0,7 x 10(-5) s(-1) per l&#39;E3 inattivo). L&#39;intrinseca elevata stabilit&agrave; di questi intermedi suggerisce che tioestere indesiderati intermedi possono essere eliminati enzimaticamente, tali come da thioesterases, a regolare la loro intracellulare abbondanza e il traffico nel controllo delle modifiche di ubiquitin-like.

Stabilit&agrave; del tioestere intermedi nelle modifiche di ubiquitin-like.

&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x304C; E1&#x3001;E2&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x3005; E3 &#x3068;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x62B1;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x53CD;&#x5FDC;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3068;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x5FB9;&#x5E95;&#x7684;&#x306A;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3068;&#x3001;Ubc9 &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x76F8;&#x64B2; 1 &#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x5171;&#x5F79;&#x7D04;&#x3002;Ubc9 &#x7D04;&#x76F8;&#x64B2; 1 &#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x4E2D;&#x9593;&#x304C;&#x7D04; 3.6 h &#x306E;&#x534A;&#x6E1B; &#xFF08;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x7387; k 2.8 x10(-5) s(-1)) &#x3068;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x306F;&#x3084;&#x3084;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027; &plusmn; 5.33 = (k = 12.5 &plusmn; 1.8 &#x500D; 10(-5) s(-1))&#x3001;3&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x9069;&#x5EA6;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;(RanBP2) &#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3068;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E; E3 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x901F;&#x5EA6; (0.8 x 10(-5) s(-1) &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; E3 7.38 &plusmn; 0.7 x 10(-5) s(-1) &#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; E3 &#x306E;&#x5BFE;&#x306E; &plusmn; 13.8&#xFF09; &#x5F71;&#x97FF;&#x3001;&#x4E2D;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3082;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4E0D;&#x8981;&#x306A;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x6392;&#x9664;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7269;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B; thioesterases &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x8C4A;&#x304B;&#x3055;&#x3068;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x4FEE;&#x6B63;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;

&#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xC218;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xACE0;, E1, E2, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB54C;&#xB85C;&#xB294; e 3&#xC640; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; thioester conjugates &#xB418; &#xACE0; &#xBC18;&#xC751; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;&#xC640; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC218;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; thioester &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC758; &#xCCA0;&#xC800; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xBD80;&#xC871; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCF5;&#xD569; &#xBAA8;&#xB378; &#xBC0F; ubc9&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xC870;&#xC0AC; &#xC2A4;&#xBAA8;-1 thioester &#xACF5;&#xC561; &#xC57D;. Ubc9 &#xC57D; &#xC2A4;&#xBAA8;-1 thioester &#xC911;&#xAE09;&#xC740; &#xC57D; 3.6 h&#xC758; &#xD558;&#xD504; &#xB77C;&#xC774;&#xD504; (&#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xC18D;&#xB3C4; k = 2.8 x10(-5) s(-1)) &#xBC0F; &#xBCC0;&#xC131; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D;&#xAC04; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xC548;&#xC815;&#xC131; + 5.33 (k = 10(-5) s(-1)), &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC758; &#xC801;&#xB2F9; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; x 1.8 + 12.5. &#xD65C;&#xC131; &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; e3&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; (RanBP2) &#xB610;&#xD55C; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xC18D;&#xB3C4; (13.8 0.8 x 10(-5) s(-1) &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; e 3&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 0.7 x 10(-5) s(-1) + 7.38 &#xB300; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; e 3 &#xC704;&#xD55C; + /-)&#xC5D0; &#xC801;&#xB2F9; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xB9CC;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8; &#xC6D0;&#xCE58; &#xC54A;&#xB294; thioester &#xC81C;&#xAC70; enzymatically, &#xB4F1; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC870;&#xC808; &#xD558; thioesterases&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; &#xD48D;&#xC694;&#xB85C; &#xC6C0;&#xACFC; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xC218;&#xC815; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;.

&#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xC218;&#xC815; thioester &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131;.

Ubiquitina-como modificaciones son mecanismos importantes en la regulaci&oacute;n celular y se realizan a trav&eacute;s de varios pasos intermedios de reacci&oacute;n siendo tio&eacute;ster conjugados de ubiquitina-como prote&iacute;nas E1, E2 y E3 a veces. A pesar de su importancia, ha faltado una caracterizaci&oacute;n completa de la estabilidad intr&iacute;nseca de estos intermedios tio&eacute;ster. En este estudio, investigamos la estabilidad intr&iacute;nseca mediante un modelo compuesto y el Ubc9 aproximadamente SUMO-1 tio&eacute;ster conjugado. El Ubc9 aproximadamente SUMO-1 tio&eacute;ster intermedio tiene una vida media de aproximadamente 3,6 h (hidr&oacute;lisis tasa k = 5,33 +/-2,8 x10(-5) s(-1)) y la estabilidad disminuy&oacute; levemente bajo condiciones de desnaturalizaci&oacute;n (k = 12.5 +/-1.8 x 10(-5) s(-1)), indicando un efecto moderado del contexto estructural tridimensional sobre la estabilidad de estos intermedios. Enlazando a E3 activos e inactivos, (RanBP2) tambi&eacute;n tiene s&oacute;lo un efecto moderado sobre la velocidad de hidr&oacute;lisis (13,8 +/-0.8 x 10(-5) s(-1) para el E3 activo versus 7,38 +/-0.7 x 10(-5) s(-1) para el E3 inactivo). La intr&iacute;nseca alta estabilidad de estos intermedios sugiere eso no deseado tio&eacute;ster intermedios pueden ser eliminadas enzim&aacute;ticamente, tal como por thioesterases, para regular su intracelular abundancia y el control de modificaciones de la ubiquitina-como la trata.

Estabilidad del tio&eacute;ster intermedios en modificaciones de ubiquitina-como.

Las estrategias terap&#xE9;uticas dise&#xF1;adas para tratar la infecci&#xF3;n por el VIH con combinaciones de medicamentos antivirales han demostrado ser el mejor m&#xE9;todo para retardar la progresi&#xF3;n al SIDA. A pesar de este progreso, hay problemas con la resistencia a los medicamentos virales y la toxicidad, lo que exige nuevos enfoques para la lucha contra la infecci&#xF3;n VIH-1. Por ello, hemos desarrollado un enfoque diferente combinaci&#xF3;n para el tratamiento de la infecci&#xF3;n por VIH en la que un apt&#xE1;mero ARN, con una alta afinidad de uni&#xF3;n al VIH-1 sobre (gp120) de prote&#xED;nas y propiedades de neutralizaci&#xF3;n del virus, se une y se ofrece un peque&#xF1;o ARN de interferencia (siRNA ) que desencadena la secuencia espec&#xED;fica de la degradaci&#xF3;n de ARN del VIH. Hemos probado las actividades antivirales de estos RNAs quim&#xE9;ricos en un Rag2 humanizado (- / -) &#x251C; &#x2502; n (- / -) modelo (GAR-hu) del rat&#xF3;n con la hematopoyesis humana multilinaje. En este modelo animal, la replicaci&#xF3;n de VIH-1 y CD4 (+) el agotamiento de c&#xE9;lulas T imitar la situaci&#xF3;n se ve en humanos infectados por el VIH. Nuestros resultados muestran que el tratamiento con el apt&#xE1;mero anti-gp120 o el aptamer-siRNA quimera supresi&#xF3;n de la replicaci&#xF3;n del VIH-1 en varios &#xF3;rdenes de magnitud e impidi&#xF3; que las c&#xE9;lulas CD4 de ayuda viral inducida por (+) disminuci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas T. En comparaci&#xF3;n con el apt&#xE1;mero solo, la combinaci&#xF3;n aptamer ARNsi proporcionan inhibici&#xF3;n m&#xE1;s amplia, lo que resulta en un efecto antiviral significativamente m&#xE1;s largo que se extiende m&#xE1;s all&#xE1; de varias semanas de la &#xFA;ltima dosis inyectada. El apt&#xE1;mero por lo tanto act&#xFA;a como un amplio espectro del VIH-neutralizaci&#xF3;n del agente y un veh&#xED;culo de entrega de siRNA. La combinaci&#xF3;n aptamer-siRNA agente proporciona un enfoque atractivo, no t&#xF3;xico terap&#xE9;utico para el tratamiento de la infecci&#xF3;n por el VIH.

Un apt&#xE1;mero-siRNA Quimera Suprime el VIH-1 Carga viral y protege de CD4 Helper (+) Disminuci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas T en ratones humanizados

&#x7528;&#x4E8E;&#x6CBB;&#x7597;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x836F;&#x7269;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x7B56;&#x7565;&#x5DF2;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x51CF;&#x7F13;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x6700;&#x4F73;&#x505A;&#x6CD5;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x5C55;&#xFF0C;&#x6709;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8010;&#x836F;&#x6027;&#x548C;&#x6BD2;&#x6027;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x6253;&#x51FB;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x578B;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x65B0;&#x529E;&#x6CD5;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x6CBB;&#x7597;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684; RNA &#x9002;&#x914D;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x9AD8;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5173;&#x8054;&#x5230;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x4FE1;&#x5C01; (gp120) &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E2D;&#x548C;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF0C;&#x9644;&#x52A0;&#x5230;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x63D0;&#x4F9B;&#x89E6;&#x53D1;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; Rna &#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA (siRNA) &#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x4E0E;&#x591A;&#x5411;&#x5206;&#x5316;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x9020;&#x8840;&#x529F;&#x80FD;&#x4EBA;&#x6027;&#x5316; Rag2(-/-)&gamma;c(-/-) (&#x62B9;&#x5E03;&#x80E1;) &#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5D4C;&#x5408; RNAs &#x7684;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x590D;&#x5236;&#x548C; CD4(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8017;&#x7AED;&#x6A21;&#x4EFF;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x60A3;&#x8005;&#x770B;&#x5230;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E0E;&#x6297; gp120 &#x9644;&#x7740;&#x6216;&#x9644;&#x7740; siRNA &#x671B;&#x6708;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x590D;&#x5236;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6570;&#x91CF;&#x7EA7;&#x963B;&#x6B62;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x5E2E;&#x52A9;&#x5668; CD4(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x9002;&#x914D;&#x5B50;&#xFF0C;&#x9002;&#x914D;&#x5B50; siRNA &#x7EC4;&#x5408;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6269;&#x5C55;&#x8D85;&#x51FA;&#x53BB;&#x5E74;&#x6CE8;&#x5C04;&#x5242;&#x91CF;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x661F;&#x671F;&#x663E;&#x8457;&#x8F83;&#x957F;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x9002;&#x914D;&#x5B50;&#x56E0;&#x6B64;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5E7F;&#x8C31;&#x4E2D;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C;&#x4EE3;&#x7406;&#x548C; siRNA &#x4EA4;&#x4ED8;&#x8F66;&#x8F86;&#x3002;&#x7EC4;&#x5408;&#x9002;&#x914D;&#x5B50; siRNA &#x4EE3;&#x7406;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5438;&#x5F15;&#x4EBA;&#x7684;&#x3001; &#x65E0;&#x6BD2;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;

&#x9002;&#x914D;&#x5B50; siRNA &#x671B;&#x6708;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x75C5;&#x6BD2;&#x8D1F;&#x8377;&#x91CF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4FDD;&#x62A4;&#x514D;&#x53D7;&#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x5E2E;&#x52A9;&#x5668; CD4(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;

Therapeutic strategies designed to treat HIV infection with combinations of antiviral drugs have proven to be the best approach for slowing the progression to AIDS. Despite this progress, there are problems with viral drug resistance and toxicity, necessitating new approaches to combating HIV-1 infection. We have therefore developed a different combination approach for the treatment of HIV infection in which an RNA aptamer, with high binding affinity to the HIV-1 envelope (gp120) protein and virus neutralization properties, is attached to and delivers a small interfering RNA (siRNA) that triggers sequence-specific degradation of HIV RNAs. We have tested the antiviral activities of these chimeric RNAs in a humanized Rag2(-/-)Î³c(-/-) (RAG-hu) mouse model with multilineage human hematopoiesis. In this animal model, HIV-1 replication and CD4(+) T cell depletion mimic the situation seen in human HIV-infected patients. Our results show that treatment with either the anti-gp120 aptamer or the aptamer-siRNA chimera suppressed HIV-1 replication by several orders of magnitude and prevented the viral-induced helper CD4(+) T cell decline. In comparison to the aptamer alone, the aptamer-siRNA combination provided more extensive inhibition, resulting in a significantly longer antiviral effect that extended several weeks beyond the last injected dose. The aptamer thus acts as a broad-spectrum HIV-neutralizing agent and an siRNA delivery vehicle. The combined aptamer-siRNA agent provides an attractive, nontoxic therapeutic approach for treatment of HIV infection.

An aptamer-siRNA chimera suppresses HIV-1 viral loads and protects from helper CD4(+) T cell decline in humanized mice.

Les strat&#xE9;gies th&#xE9;rapeutiques visant &#xE0; traiter l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH avec des combinaisons de m&#xE9;dicaments antiviraux se sont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9;s &#xEA;tre la meilleure approche pour ralentir la progression vers le SIDA. Malgr&#xE9; ces progr&#xE8;s, il ya des probl&#xE8;mes avec la r&#xE9;sistance virale aux m&#xE9;dicaments et la toxicit&#xE9;, ce qui n&#xE9;cessite de nouvelles approches de lutte contre le VIH-1 infection. Nous avons donc d&#xE9;velopp&#xE9; une approche diff&#xE9;rente combinaison pour le traitement de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH, dans lequel un ARN aptam&#xE8;re, avec une affinit&#xE9; de liaison &#xE9;lev&#xE9;e pour le VIH-1 enveloppe (gp120) des prot&#xE9;ines et des propri&#xE9;t&#xE9;s de neutralisation du virus, est attach&#xE9; &#xE0; et d&#xE9;livre un petit ARN interf&#xE9;rent (siRNA ) qui d&#xE9;clenche la s&#xE9;quence-sp&#xE9;cifique d&#x26;#39;ARN du VIH d&#xE9;gradation. Nous avons test&#xE9; les activit&#xE9;s antivirales de ces ARN chim&#xE8;res dans un Rag2 humanis&#xE9; (- / -) &#x3B3;c (- / -) mod&#xE8;le de souris (RAG-hu) avec l&#x26;#39;h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE8;se humaine multilign&#xE9;e. Dans ce mod&#xE8;le animal, le VIH-1 et la r&#xE9;plication CD4 (+) la d&#xE9;pl&#xE9;tion des cellules T imiter la situation observ&#xE9;e dans l&#x26;#39;homme par le VIH chez les patients infect&#xE9;s. Nos r&#xE9;sultats montrent que le traitement avec soit l&#x26;#39;aptam&#xE8;re anti-gp120 ou l&#x26;#39;aptam&#xE8;re-siRNA chim&#xE8;re supprim&#xE9; la r&#xE9;plication du VIH-1 par plusieurs ordres de grandeur et ont emp&#xEA;ch&#xE9; les CD4 helper d&#x26;#39;origine virale (+) baisse des lymphocytes T. En comparaison avec l&#x26;#39;aptam&#xE8;re seul, la combinaison aptam&#xE8;re-siRNA fourni inhibition plus vaste, ce qui entra&#xEE;ne un effet significativement plus antiviral qui s&#x26;#39;&#xE9;tendait au-del&#xE0; de plusieurs semaines la derni&#xE8;re dose inject&#xE9;e. L&#x26;#39;aptam&#xE8;re agit ainsi comme un large spectre du VIH-agent de neutralisation et d&#x26;#39;un v&#xE9;hicule de livraison de siRNA. Le combin&#xE9; aptam&#xE8;re-siRNA agent fournit une belle approche th&#xE9;rapeutique pour le traitement non-toxique de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH.

Un aptam&#xE8;re-siRNA Chimera Supprime le VIH-1 de la charge virale et prot&#xE8;ge des CD4 Helper (+) d&#xE9;clin des lymphocytes T chez la souris humanis&#xE9;es

Therapeutische Strategien zur Behandlung der HIV-Infektion mit Kombinationen von Virostatika erwiesen sich die beste Herangehensweise f&uuml;r die Verlangsamung der Progression zu AIDS. Trotz dieser Fortschritte gibt es Probleme mit viralen Resistenzen und Toxizit&auml;t, erfordern neue Ans&auml;tze zur Bek&auml;mpfung von HIV-1-Infektion. Wir haben daher einen andere Kombination Ansatz zur Behandlung der HIV-Infektion entwickelt, in denen ein Aptamer RNA mit hohen Bindungsaffinit&auml;t an den HIV-1 Umschlag (gp120) Protein und Virus Neutralisation Eigenschaften, ist an und liefert einen kleinen interfering RNA (SiRNA), die Sequenz-spezifische Verschlechterung der HIV-RNA ausl&ouml;st. Wir haben die antiviralen Aktivit&auml;ten der diese Chim&auml;ren RNAs in einem humanisierten Mausmodell der Rag2(-/-)&gamma;c(-/-) (RAG-Hu) mit multiline&auml;rer menschlichen Blutbildung getestet. In diesem Tiermodell nachahmen HIV-1-Replikation und CD4(+) T Zelle Entleerung die Situation im menschlichen HIV-infizierten Patienten gesehen. Unsere Ergebnisse zeigen, dass die Behandlung mit den Anti-gp120 Aptamer oder die Aptamer-SiRNA-Chim&auml;re HIV-1-Replikation durch mehrere Gr&ouml;&szlig;enordnungen unterdr&uuml;ckt und verhindert den viral-induzierte Helfer CD4(+) T Zelle Niedergang. Im Vergleich zu den Aptamer allein bereitgestellt die Aptamer-SiRNA-Kombination umfassender Hemmung, wodurch eine signifikant l&auml;nger antivirale Wirkung, die mehrere Wochen &uuml;ber die letzten injizierte Dosis erweitert. Die Aptamer fungiert somit als ein Breitspektrum HIV-Neutralisierung-Agent und ein SiRNA Delivery Vehicle. Der kombinierte Aptamer-SiRNA-Agent bietet einen attraktiven, ungiftig therapeutischen Ansatz zur Behandlung der HIV-Infektion.

Ein Aptamer-SiRNA-Chim&auml;re unterdr&uuml;ckt virale Belastungen von HIV-1 und sch&uuml;tzt vor Helfer CD4(+) T Zelle R&uuml;ckgang der humanisierte M&auml;use.

Strategie terapeutiche progettati per trattare l&#39;infezione da HIV con combinazioni di farmaci antivirali hanno dimostrato di essere l&#39;approccio migliore per rallentare la progressione verso l&#39;AIDS. Nonostante questo progresso, non ci sono problemi con la resistenza ai farmaci virali e tossicit&agrave;, che necessita di nuovi approcci per combattere l&#39;infezione da HIV-1. Abbiamo quindi sviluppato un approccio differente combinazione per il trattamento dell&#39;infezione da HIV in cui un aptamer di RNA, con affinit&agrave; di legame ad alta per l&#39;HIV-1 (gp120) proteine e virus neutralizzazione propriet&agrave; della busta, &egrave; associata a e offre un piccolo RNA interferente (siRNA) che innesca la degradazione di sequenza-specifici di HIV RNA. Abbiamo testato l&#39;attivit&agrave; antivirale di questi chimerici RNAs in un modello di mouse Rag2(-/-)&gamma;c(-/-) (RAG-hu) umanizzato con ematopoiesi umana multilineare. In questo modello animale, replica di HIV-1 e deplezione delle cellule T CD4(+) imitare la situazione vista in pazienti affetti da HIV umani. I nostri risultati mostrano che trattamento con l&#39;anti-gp120 aptamer o aptamer-siRNA chimera soppressa la replicazione dell&#39;HIV-1 da parecchi ordini di grandezza e ha impedito il declino di cella CD4(+) T helper virale indotta. In confronto la aptamer da solo, la combinazione aptamer-siRNA fornito inibizione pi&ugrave; estesa, con conseguente un significativamente pi&ugrave; effetto antivirale che esteso parecchie settimane oltre l&#39;ultima dose iniettata. La aptamer agisce cos&igrave; come un agente neutralizzante l&#39;HIV ad ampio spettro e un veicolo di consegna siRNA. L&#39;agente combinato aptamer-siRNA fornisce un approccio terapeutico attraente, non tossico per il trattamento dell&#39;infezione da HIV.

Una chimera aptamer-siRNA sopprime carichi virali di HIV-1 e protegge dal declino di cellule helper T CD4(+) nel topo umanizzato.

&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x85AC;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6CBB;&#x7642;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30A4;&#x30BA;&#x3078;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x9045;&#x3089;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x5584;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x3068;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306F;&#x3001;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3068;&#x306E;&#x95D8;&#x3044;&#x3078;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;HIV-1&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#xFF08;gp120&#x306E;&#xFF09;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x4E2D;&#x548C;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3078;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3067;&#x3001;RNA&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3057;&#x3001;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;siRNA&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#xFF09;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3001;HIV RNA&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;RAG2&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;RNA&#x306E;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x3B3;C&#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x591A;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x9020;&#x8840;&#x3068;&#xFF08;RAG-HU&#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;HIV-1&#x8907;&#x88FD;&#x3068;CD4&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x6841;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6297;gp120&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x307E;&#x305F;&#x306F;siRNA&#x306F;&#x3001;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;HIV-1&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;CD4&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x9632;&#x3044;&#x3060;&#x3002;&#x5358;&#x72EC;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;-siRNA&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;&#x6570;&#x9031;&#x9593;&#x306E;&#x6700;&#x5F8C;&#x306E;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7528;&#x91CF;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x3066;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x305F;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x9577;&#x3044;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5E83;&#x3044;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;HIV-&#x4E2D;&#x548C;&#x5264;&#x304A;&#x3088;&#x3073;siRNA&#x9001;&#x9054;&#x30D3;&#x30D2;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC; -  siRNA&#x306E;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x3001;&#x7121;&#x6BD2;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x3001;siRNA&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;CD4&#x304B;&#x3089;HIV-1&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8CA0;&#x8377;&#x3068;&#x4FDD;&#x8B77;&#xFF08;+&#xFF09;&#x30D2;&#x30C8;&#x5316;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;

&#xD56D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC73C;&#xB85C; HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC804;&#xB7B5; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xB454;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC88B;&#xC740; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC785;&#xC99D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC800;&#xD56D; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xC131;, &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC; &#xD1F4;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xBB38;&#xC81C;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; HIV 1 &#xBD09;&#xD22C; (gp120) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC911;&#xD654; &#xC18D;&#xC131;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; RNA aptamer &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; &#xBC0F; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA (siRNA) &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; Rnas&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAD00;&#xB828; &#xC131;&#xB2A5; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; HIV &#xAC10;&#xC5FC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; multilineage &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC870; humanized Rag2(-/-)&gamma;c(-/-) (&#xAC78; &#xB808; &#xD6C4;) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; chimeric Rnas&#xC758; &#xD56D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; hiv-1 &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; CD4(+) T &#xC140; &#xACE0;&#xAC08; &#xBAA8;&#xBC29; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF8; &#xC0C1;&#xD669;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC548;&#xD2F0; gp120 aptamer &#xB610;&#xB294; aptamer siRNA &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC9C4;&#xB3C4; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBA85;&#xB839;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; HIV 1 &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC555; &#xD558; &#xACE0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xB3C4; &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; CD4(+) T &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xB9C9;&#xC744; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD63C;&#xC790; aptamer &#xBE44;&#xD574; aptamer siRNA &#xC870;&#xD569; &#xB354; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC800;&#xD574;, &#xBA87; &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0BD;&#xC785; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xB118;&#xC5B4; &#xD655;&#xC7A5; &#xD56D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB354; &#xC774;&#xC0C1; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Aptamer&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; HIV &#xC911;&#xD654; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC640; siRNA &#xBC30;&#xB2EC; &#xCC28;&#xB7C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; aptamer siRNA &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;, &#xBE44; &#xB3C5;&#xC131; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Aptamer siRNA &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; hiv-1 &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBD80;&#xD558;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; CD4(+) T &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC18C; humanized &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

L&#39;applicazione clinica di siRNA &egrave; limitato in gran parte dalla mancanza di sistemi di consegna efficiente, cellula-specifico. Gli anticorpi sono veicoli di consegna attraente per una terapia mirata a causa della loro alta specificit&agrave;. In questo studio, descriviamo l&#39;uso di un anticorpo monoclonale umanizzato (mAb), hu3S193, contro Lewis-Y (Le(y)), come un veicolo di consegna per STAT3 siRNA. Questa mAb &egrave; rapidamente interiorizzato in Le (y)-esprimendo il cancro cellule tramite riconoscimento dell&#39;antigene, e quando accoppiato a STAT3 siRNA, viene creato un potenzialmente potente agente di recapito molecolarmente mirati. Silenziamento selettivo di STAT3 &egrave; associato con soppressione del tumore. Due hu3S193 basata siRNA sistemi di consegna utilizzando siRNA STAT3 come un prototipo furono sviluppati e testati in Le (y)-cellule tumorali positive: un costrutto covalente basato su un linker disolfuro riduttiva che dovrebbe subire scissione all&#39;interno di cellule e (b) un costrutto non covalente basato su (hu3S193 d-arginine)(9) (9r) modificato. Le (y)-legame specifico e interiorizzazione dei costrutti covalenti e non covalenti sono stati confermati da citometria a flusso e microscopia confocal. Il covalenti e non covalente sistema port&ograve; alla efficiente STAT3 tacere in cellule di cancro negativo - cellule di cancro positivo (A431) ma non Le (y) - Le (y) (MDA-MB-435). Il costrutto covalente, tuttavia, necessaria co-treatment con reagenti come la clorochina o 9r che facilitano la fuga del siRNA dalla endosomes per raggiungere il silenziamento genico significativo. Il 9r modificato non covalenti costrutto indotto &sim;70% atterramento di STAT3 a concentrazioni di siRNA submicromolar quando viene utilizzato in un rapporto ottimale del veicolo-siRNA di 5:1. L&#39;atterramento di STAT3 ha portato anche a &sim;50% inibizione della proliferazione delle cellule di Le (y)-cellule positive. Non covalenti collegato STAT3 siRNA-hu3S193 ha grande promessa per atterramento mirato di STAT3 in cellule tumorali.

Umanizzato anticorpo specifico Lewis-Y basato su consegna di STAT3 siRNA.

SiRNA &#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x53D7;&#x9650;&#x5236;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x9AD8;&#x6548;&#x3001; &#x7279;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F7D;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x6297;&#x4F53;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x9AD8;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x9776;&#x5411;&#x6CBB;&#x7597;&#x5177;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F7D;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53; (&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;)&#xFF0C;hu3S193&#xFF0C;&#x5BF9;&#x5218;&#x6613;&#x65AF;-Y &#xFF08;Le(y))&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A; STAT3 siRNA &#x8FD0;&#x8F7D;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x6B64;&#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x65B9;&#x6848;&#x8FC5;&#x901F;&#x5316;&#x4E3A; Le (y)-&#x8868;&#x793A;&#x764C;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x539F;&#x8BC6;&#x522B;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x548C;&#x8026;&#x5408;&#x5230; STAT3 siRNA&#xFF0C;&#x5F53;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x5730;&#x7684;&#x5F00;&#x5C55;&#x4EE3;&#x7406;&#x3002;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6C89;&#x9ED8; STAT3 &#x7684;&#x662F;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x548C;&#x4E50; (y) &#x4E2D;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E86;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57FA;&#x4E8E; hu3S193 siRNA &#x8FD0;&#x8F7D;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F7F;&#x7528; STAT3 siRNA &#x4F5C;&#x4E3A;&#x539F;&#x578B;-&#x79EF;&#x6781;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF1A; (a) &#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x7684;&#x6784;&#x9020;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8FD8;&#x539F;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#xFF0C;&#x9884;&#x8BA1;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x5375;&#x5185;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; (b) &#x4E00;&#x4E2A;&#x975E;&#x5171;&#x4EF7;&#x6784;&#x9020;&#x57FA;&#x4E8E; (d-arginine)(9) (9r) &#x4FEE;&#x6539; hu3S193&#x3002;(Y) le-&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7ED3;&#x5408;&#x548C;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x548C;&#x975E;&#x5171;&#x4EF7;&#x6784;&#x9020;&#x3002;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x548C;&#x975E;&#x5171;&#x4EF7;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5BFC;&#x81F4; STAT3 &#x6C89;&#x9ED8; Le (y)-&#x79EF;&#x6781;&#x764C;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE; (A431) &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728; Le (y)-&#x8D1F;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;MDA-MB-435) &#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x7684;&#x6784;&#x9020;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x5171;&#x540C;&#x5904;&#x7406;&#x5982;&#x6C2F;&#x55B9;&#x6216; 9r &#x4FBF;&#x5229; siRNA &#x9003;&#x79BB; endosomes &#x5B9E;&#x73B0;&#x91CD;&#x5927;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x8BD5;&#x5242;&#x3002;9R &#x4FEE;&#x6539;&#x975E;&#x5171;&#x4EF7;&#x6784;&#x9020;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; &sim;70 %stat3 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F; submicromolar siRNA &#x6D53;&#x5EA6;&#x65F6;&#x4F7F;&#x7528;&#x5728;&#x6700;&#x4F18;&#x8F66;&#x8F86;-siRNA &#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B; 5:1&#x3002;STAT3 &#x2477; &#x4E5F;&#x5BFC;&#x81F4; &sim;50%&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684; Le (y)-&#x9633;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x975E;&#x5171;&#x4EF7;&#x94FE;&#x63A5;&#x7684; STAT3 siRNA-hu3S193 &#x5927;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F; STAT3 &#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

&#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x7684;&#x5218;&#x6613;&#x65AF;-Y &#x7279;&#x5F02;&#x6297;&#x4F53;&#x57FA;&#x4E8E; STAT3 siRNA &#x4EA4;&#x8D27;&#x3002;

The clinical application of siRNA is limited largely by the lack of efficient, cell-specific delivery systems. Antibodies are attractive delivery vehicles for targeted therapy due to their high specificity. In this study we describe the use of a humanized monoclonal antibody (mAb), hu3S193, against Lewis-Y (Le(y)), as a delivery vehicle for STAT3 siRNA. This mAb is rapidly internalized into Le(y)-expressing cancer cells via antigen recognition, and when coupled to STAT3 siRNA, a potentially powerful molecularly targeted delivery agent is created. Selective silencing of STAT3 is associated with tumor suppression. Two hu3S193 based siRNA delivery systems using STAT3 siRNA as a prototype were developed and tested in Le(y)-positive cancer cells: (a) a covalent construct based on a reductive disulfide linker that is expected to undergo cleavage within cells and (b) a noncovalent construct based on (d-arginine)(9) (9r) modified hu3S193. Le(y)-specific binding and internalization of both the covalent and noncovalent constructs were confirmed by flow cytometry and confocal microscopy. Both the covalent and the noncovalent system led to efficient STAT3 silencing in Le(y)-positive cancer cells (A431) but not in Le(y)-negative cancer cells (MDA-MB-435). The covalent construct, however, required co-treatment with reagents such as chloroquine or 9r that facilitate the escape of the siRNA from endosomes to achieve significant gene silencing. The 9r modified noncovalent construct induced âˆ¼70% STAT3 knockdown at submicromolar siRNA concentrations when used at an optimal vehicle-to-siRNA ratio of 5:1. The STAT3 knockdown also led to âˆ¼50% inhibition of cell proliferation of Le(y)-positive cells. Noncovalent linked STAT3 siRNA-hu3S193 has great promise for targeted knockdown of STAT3 in tumor cells.

Humanized Lewis-Y specific antibody based delivery of STAT3 siRNA.

L&#39;application clinique des siARN est limit&eacute;e en grande partie par l&#39;absence de syst&egrave;mes de livraison efficaces, sp&eacute;cifique &agrave; la cellule. Les anticorps sont des vecteurs attrayant pour une th&eacute;rapie cibl&eacute;e en raison de leur grande sp&eacute;cificit&eacute;. Dans cette &eacute;tude, nous d&eacute;crivons l&#39;utilisation d&#39;un anticorps monoclonal humanis&eacute; (mAb), hu3S193, contre Lewis-Y (Le(y)), comme un v&eacute;hicule de livraison pour le siARN de STAT3. Cette mAb est rapidement assimil&eacute; dans Le (y)-exprimant le cancer des cellules par l&#39;interm&eacute;diaire de reconnaissance de l&#39;antig&egrave;ne, et lorsqu&#39;elle est associ&eacute;e &agrave; des siARN de STAT3, un puissant agent de mol&eacute;culairement CIBLEE est cr&eacute;&eacute;. Un silence s&eacute;lectif de STAT3 est associ&eacute;e &agrave; la suppression tumorale. Deux hu3S193 bas&eacute; de siARN vecteurs &agrave; l&#39;aide de siARN de STAT3 comme un prototype ont &eacute;t&eacute; con&ccedil;us et test&eacute;s dans Le (y)-cellules canc&eacute;reuses positive: (a) une structure covalente bas&eacute;e sur un linker disulfure r&eacute;ductrice qui devrait subir un clivage au sein des cellules et (b) une construction non covalente bas&eacute;e sur (hu3S193 d-arginine)(9) (9r) modifi&eacute;e. Le (y)-fixation sp&eacute;cifique et internalisation des deux constructions covalentes et non covalentes ont &eacute;t&eacute; confirm&eacute;s par cytom&eacute;trie de flux et de microscopie confocale. Les liaisons covalentes et le syst&egrave;me non covalente conduit &agrave; efficace silencieux de STAT3 dans les cellules de cancer n&eacute;gatif - positif canc&eacute;reux (A431) mais pas dans Le (y) - Le (y) (MDA-MB-435). La construction de liaisons covalente, toutefois, tenu co-traitement avec r&eacute;actifs tels que la chloroquine ou 9r qui facilitent la fuite de la siRNA d&#39;endosomes pour atteindre silen&ccedil;age g&eacute;nique importante. Le 9r modifi&eacute;es non covalentes construct induit &sim;70 % STAT3 knockdown &agrave; des concentrations de siARN variant lorsqu&#39;il est utilis&eacute; &agrave; un rapport optimal de v&eacute;hicule-&agrave;-siARN de 5:1. La pr&eacute;cipitation de STAT3 a &eacute;galement conduit &agrave; &sim;50 % d&#39;inhibition de la prolif&eacute;ration cellulaire de Le (y)-cellules positives. Noncovalent li&eacute; STAT3 siARN-hu3S193 a tr&egrave;s prometteur pour l&#39;inactivation cibl&eacute;e de STAT3 dans les cellules tumorales.

Humanis&eacute; anticorps sp&eacute;cifique de Lewis-Y fonde la livraison des siARN de STAT3.

Die klinische Anwendung der SiRNA wird weitgehend durch den Mangel an effizienten, zellspezifische Tr&auml;gersysteme begrenzt. Antik&ouml;rper sind attraktive Lieferfahrzeuge f&uuml;r gezielte Therapie aufgrund ihrer hohen Spezifit&auml;t. In dieser Studie beschreiben wir die Verwendung von ein humanisierter monoklonaler Antik&ouml;rper (mAb), hu3S193, gegen Lewis-Y (Le(y)), als Lieferung Fahrzeug STAT3 siRNA. Diese mAb ist schnell verinnerlicht in Le (y)-Ausdr&uuml;cken Krebs Zellen durch Antigen-Anerkennung und Verbindung zur STAT3 SiRNA eine potentiell m&auml;chtige molekular gezielten Auslieferungsprogramm erstellt. Selektive Unterdr&uuml;ckung von STAT3 wird mit Tumor-Unterdr&uuml;ckung. Zwei hu3S193, die auf der Grundlage SiRNA-Tr&auml;gersysteme mit STAT3 SiRNA als Prototyp wurden entwickelt und getestet in Le (y)-positive Krebszellen: a kovalente Konstrukt anhand einer reduktiven Disulfid-Linker, die Spaltung innerhalb der Zellen und (b) unterzogen werden voraussichtlich ein noncovalent Konstrukt auf der Grundlage (hu3S193 d-arginine)(9) (9r) ge&auml;ndert. Le (y)-spezifische Bindung und Internalisierung der kovalenten und Konstrukte wurden durch Durchflusszytometrie und konfokale Mikroskopie best&auml;tigt. Sowohl die kovalente und System f&uuml;hrte zu effizienten STAT3 Unterdr&uuml;ckender in Le (y) - positive Krebszellen (A431) aber nicht im Le (y) - negative Krebszellen (MDA-MB-435). Das kovalente Konstrukt, ben&ouml;tigt jedoch Co-treatment mit Reagenzien wie Chloroquin oder 9r, die die Flucht der SiRNA aus Endosomen erhebliche gen zum Schweigen zu erleichtern. Die 9r modifizierte noncovalent Konstrukt induzierte &sim;70 % STAT3 Niederschlag bei Submicromolar SiRNA Konzentrationen bei einem optimalen Fahrzeug-zu-SiRNA-Verh&auml;ltnis von 5:1. Die STAT3-Niederschlag f&uuml;hrte auch zu &sim;50 % Hemmung der Zellproliferation Le (y)-positive Zellen. Verkn&uuml;pfte STAT3 SiRNA-hu3S193 hat viel versprechend f&uuml;r gezielte Niederschlag des STAT3 in Tumorzellen.

Humanisierter Lewis-Y spezifischer Antik&ouml;rper-based Delivery des STAT3 SiRNA.

SiRNA &#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x5FDC;&#x7528;&#x306F;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x914D;&#x4FE1;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6A19;&#x7684;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x914D;&#x9001;&#x8ECA;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x30D2;&#x30C8;&#x5316;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53; (mAb) &#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x30EB;&#x30A4;&#x30B9;-Y (STAT3 siRNA &#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x624B;&#x6BB5;&#x3068;&#x3057;&#x3066; Le(y))&#x3002; hu3S193 &#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E; mAb &#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x30EB; &#xFF08;y&#xFF09; &#x306B;&#x5185;&#x9762;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;-&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3093;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6297;&#x539F;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3068; STAT3 siRNA &#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x6A19;&#x7684;&#x914D;&#x4FE1;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x4F5C;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9078;&#x629E;&#x7684; STAT3 &#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;STAT3 siRNA &#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3068;&#x3059;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; hu3S193 siRNA &#x914D;&#x4FE1;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x958B;&#x767A;&#x3001;&#x30EB; (y) &#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;-&#x80AF;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF1A; (a) &#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073; (b) &#x5185;&#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3068;&#x4E88;&#x60F3;&#x3067;&#x3059;&#x9084;&#x5143;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; &#xFF08;&#x4E0A; d-arginine)(9) &#xFF08;9r) &#x5909;&#x66F4; hu3S193 &#x5171;&#x6709;&#x7684;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3002;&#x30EB; &#xFF08;y&#xFF09;-&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x975E;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x5316;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3002;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x5171;&#x6709;&#x7684;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x52B9;&#x7387;&#x7684; STAT3 &#x30EB; (y) - &#x80AF;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE; (A431&#xFF09; &#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x30EB; &#xFF08;y&#xFF09; &#x304C; - &#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE; (MDA-MB-435) &#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;co-treatment&#x3001;siRNA &#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8131;&#x51FA;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x8A66;&#x85AC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x308B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30AD;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 9r &#x306A;&#x3069;&#x5FC5;&#x8981;&#x3002;9R &#x5909;&#x66F4;&#x5171;&#x6709;&#x7684;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x8A98;&#x5C0E; &sim;70 %stat3 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x4EE5;&#x4E0B; siRNA &#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x6700;&#x9069;&#x8ECA;&#x4E21; siRNA &#x6BD4; 5:1 &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3002;STAT3 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; &#x30EB; (y) &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x7387; &sim;50 &#x306B;&#x3082;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;-&#x967D;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;&#x5171;&#x6709;&#x7684;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF; STAT3 siRNA hu3S193 STAT3 &#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x5049;&#x5927;&#x306A;&#x7D04;&#x675F;&#x306B;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;&#x5316;&#x30EB;&#x30A4;&#x30B9; Y &#x7279;&#x7570;&#x6297;&#x4F53; STAT3 siRNA &#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x3092;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;

Sirna&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC751;&#xC6A9; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC140; &#xAD00;&#xB828; &#xBC30;&#xB2EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD56D; &#xCCB4;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xBC30;&#xB2EC; &#xCC28;&#xB7C9;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC778;&#xAC04; &#xB2F5;&#xAC8C; &#xB41C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4; (mAb), hu3S193, &#xB8E8;&#xC774;&#xC2A4;-Y (STAT3 Sirna&#xC758; &#xBC30;&#xB2EC; &#xCC28;&#xB7C9;&#xC73C;&#xB85C;: le(y))&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85;. &#xC774; mAb &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xB974; (y)&#xB85C; &#xB0B4; &#xBA74;-&#xD56D; &#xC6D0; &#xC778;&#xC2DD; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC554; &#xD45C;&#xD604; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; STAT3 Sirna&#xC5D0; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790;&#xB85C; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xBC30;&#xB2EC; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. Stat3&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC785;&#xC744; &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xD0C0;&#xC785;&#xC73C;&#xB85C; STAT3 Sirna&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; hu3S193 &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; siRNA &#xC804;&#xB2EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB974; (y)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xAC70;&#xCE68;-&#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;: &#xC140; &#xBC0F; (b) &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xBC1B;&#xC744; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB41C;&#xB2E4; reductive &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xB9C1;&#xCEE4; (d-arginine)(9) (9r) &#xC218;&#xC815; hu3s193&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; noncovalent &#xAD6C;&#xBB38;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18; &#xACF5;&#xC720; &#xAD6C;&#xBB38; (1). &#xB974; (y)-&#xD2B9;&#xC815; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xACF5;&#xC720; &#xBC0F; noncovalent &#xAD6C;&#xBB38; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; cytometry confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xACF5;&#xC720;&#xC640; noncovalent &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; STAT3 &#xB974; (y)-&#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; (A431) &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xD558;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xB974; (y)-&#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; (MDA-MB-435)&#xC5D0; &#xC785;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xACF5;&#xC720; &#xAD6C;&#xC131;, &#xD074;&#xB85C;&#xB85C;&#xD038; &#xB4F1; 9r &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC785;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; endosomes&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; Sirna&#xC758; &#xD0C8;&#xCD9C;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; co-treatment&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 9R &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xB41C; noncovalent &#xAD6C;&#xBB38; &#xC720;&#xB3C4; &sim;70 %stat3 &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; submicromolar siRNA &#xB18D;&#xB3C4; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xCC28;&#xB7C9; siRNA &#xBE44;&#xC728;&#xC774; 5: 1&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;. STAT3 &#xCD5C;&#xC800; &sim;50% &#xB974; (y)&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xC8FC;&#xB3C4;-&#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC;. Noncovalent &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; STAT3 siRNA-hu3S193 &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; STAT3 &#xB300;&#xC0C1;&#xB41C; &#xCD5C;&#xC800;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD070; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;.

Humanized &#xB8E8;&#xC774;&#xC2A4; Y &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4; &#xAE30;&#xBC18; STAT3 Sirna&#xC758; &#xBC30;&#xB2EC;.

La aplicaci&oacute;n cl&iacute;nica de siRNA est&aacute; limitada en gran medida por la falta de sistemas de entrega eficientes, c&eacute;lulas espec&iacute;ficas. Los anticuerpos son vectores atractivo para terapia dirigida debido a su alta especificidad. En este trabajo describimos el uso de un anticuerpo monoclonal humanizado (mAb), hu3S193, contra Lewis-Y (Le(y)), como un veh&iacute;culo de entrega de STAT3 siRNA. Este mAb r&aacute;pidamente es internalizado en Le (y)-expresando c&aacute;ncer c&eacute;lulas mediante el reconocimiento del ant&iacute;geno, y cuando se acopla a STAT3 siRNA, se crea un agente potencialmente poderoso de entrega molecularmente dirigida. Silenciamiento selectivo de STAT3 se asocia con supresi&oacute;n tumoral. Dos sistemas de aplicaci&oacute;n de siRNA hu3S193 base utilizando STAT3 siRNA como un prototipo fueron desarrollados y probados en Le (y)-las c&eacute;lulas cancerosas positivo: un constructo covalente partiendo de un enlazador de disulfuro reductivo que se espera que se someten a la hendidura dentro de las c&eacute;lulas y (b) una construcci&oacute;n no covalente basada en (hu3S193 de d-arginine)(9) (9r) modificado. Le (y)-Uni&oacute;n espec&iacute;fica y la internalizaci&oacute;n de las construcciones de covalentes y no covalente fueron confirmados por citometr&iacute;a de flujo y microscopia confocal. Tanto el covalente y el sistema no covalente llevaron a eficiente STAT3 silenciamiento del Le (y) - c&aacute;ncer positivo (A431) pero no en Le (y) - negativo c&aacute;ncer c&eacute;lulas (MDA-MB-435). El constructo covalente, sin embargo, necesaria Co-tratamiento con reactivos como cloroquina o 9r que facilitar el escape de los siRNA de endosomas lograr significativo silenciamiento. El 9r construcci&oacute;n no covalente modificado &sim;70 inducido % ca&iacute;da de STAT3 en submicromolar siRNA concentraciones cuando se utiliza en una proporci&oacute;n &oacute;ptima de veh&iacute;culo-a-siRNA de 5:1. La ca&iacute;da de STAT3 tambi&eacute;n condujo al &sim;50% de inhibici&oacute;n de la proliferaci&oacute;n celular de Le (y)-las c&eacute;lulas positivas. No covalente enlazados STAT3 siRNA-hu3S193 tiene gran promesa para espec&iacute;fica ca&iacute;da de STAT3 en c&eacute;lulas tumorales.

Anticuerpo espec&iacute;fico de Lewis-Y humanizado basado en entrega de STAT3 siRNA.

&#x6211;&#x4EEC;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA (siRNA) &#x8FD0;&#x8F7D;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x91CD;&#x6392;&#x6D3B;&#x5316;&#x57FA;&#x56E0; 2 &#x8BA1;&#x7B97;&#x7ED3;&#x6784;&#x7075;&#x6D3B;&#x3001; &#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x6811;&#x5F62;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x4F53;&#x5185;&#x7597;&#x6548; (-) /-&gamma;c-/-hiv-1 &#x611F;&#x67D3; (&#x62B9;&#x5E03;&#x80E1;) &#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x91CD;&#x6392;&#x6D3B;&#x5316;&#x57FA;&#x56E0; 2-/-&gamma;c-/-&#x5C0F;&#x9F20; (&#x62B9;&#x5E03;&#x80E1;) &#x9759;&#x8109;&#x6CE8;&#x5C04; (&#x9759;&#x8109;&#x6CE8;&#x5C04;) &#x6811;&#x72B6; siRNA &#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x676F;&#x9E21;&#x5C3E;&#x9152;&#x7684;&#x5207;&#x5757;&#x673A;&#x57FA;&#x677F; siRNAs (dsiRNAs) &#x9488;&#x5BF9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#xFF0C;&#x6811;&#x72B6; dsiRNA &#x6CBB;&#x7597;&#x6291;&#x5236; hiv-1 &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6570;&#x91CF;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4FDD;&#x62A4;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; CD4(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8017;&#x7AED;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x540E;&#x7EED;&#x6CE8;&#x5C04;&#x540E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53CD;&#x5F39;&#x7684;&#x6811;&#x72B6; cocktailed dsiRNAs &#x5BFC;&#x81F4;&#x5B8C;&#x5168;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x6EF4;&#x3002;&#x4F53;&#x5185;&#x5206;&#x5E03;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x6811;&#x72B6;-dsiRNAs &#x4F18;&#x5148;&#x5728;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x5916;&#x5468;&#x8840;) &#x548C;&#x809D;&#x810F;&#x4E2D;&#x5806;&#x79EF;&#x5E76;&#x4E0D;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4EFB;&#x4F55;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x4E3A;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x6CBB;&#x7597;&#x7684; anti-host &#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027; siRNAs &#x7684;&#x9996;&#x6B21;&#x65F6;&#x95F4;&#x6709;&#x6548;&#x7EC4;&#x5408;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x3002;&#x6811;&#x72B6;&#x7269;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x529E;&#x6CD5;&#x56E0;&#x6B64;&#x8868;&#x793A;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x4EA4;&#x8D27;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684; siRNAs &#x7684; hiv-1 &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x7EC4;&#x5408; dsiRNAs &#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x901A;&#x8FC7;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x7BA1;&#x7406;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x5C0F;&#x9F20;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x3002;

We evaluated the in vivo efficacy of structurally flexible, cationic PAMAM dendrimers as a small interfering RNA (siRNA) delivery system in a Rag2(-)/-Î³c-/- (RAG-hu) humanized mouse model for HIV-1 infection. HIV-infected humanized Rag2-/-Î³c-/- mice (RAG-hu) were injected intravenously (i.v.) with dendrimer-siRNA nanoparticles consisting of a cocktail of dicer substrate siRNAs (dsiRNAs) targeting both viral and cellular transcripts. We report in this study that the dendrimer-dsiRNA treatment suppressed HIV-1 infection by several orders of magnitude and protected against viral induced CD4(+) T-cell depletion. We also demonstrated that follow-up injections of the dendrimer-cocktailed dsiRNAs following viral rebound resulted in complete inhibition of HIV-1 titers. Biodistribution studies demonstrate that the dendrimer-dsiRNAs preferentially accumulate in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and liver and do not exhibit any discernable toxicity. These data demonstrate for the first time efficacious combinatorial delivery of anti-host and -viral siRNAs for HIV-1 treatment in vivo. The dendrimer delivery approach therefore represents a promising method for systemic delivery of combinations of siRNAs for treatment of HIV-1 infection.

Systemic administration of combinatorial dsiRNAs via nanoparticles efficiently suppresses HIV-1 infection in humanized mice.

Nous avons &#xE9;valu&#xE9; l&#x26;#39;efficacit&#xE9; in vivo de la structure flexible, dendrim&#xE8;res PAMAM cationiques comme un syst&#xE8;me de livraison des petits ARN interf&#xE9;rents (siARN) dans un Rag2 (-) / &#x3B3;c--/ - (RAG-hu) mod&#xE8;le de souris humanis&#xE9;e pour le VIH-1 infection. Infect&#xE9;e par le VIH humanis&#xE9; Rag2-/-&#x3B3;c-/- souris (RAG-hu) ont &#xE9;t&#xE9; inject&#xE9;s par voie intraveineuse (iv) avec dendrim&#xE8;re-siRNA nanoparticules constitu&#xE9;es d&#x26;#39;un cocktail de substrats de Dicer (siRNA dsiRNAs) ciblant &#xE0; la fois transcrits viraux et cellulaires. Nous rapportons dans cette &#xE9;tude que le traitement dendrim&#xE8;re-DsiARN suppression du VIH-1 infection par plusieurs ordres de grandeur et prot&#xE9;g&#xE9; contre les virus CD4 induits (+) des cellules T d&#xE9;pl&#xE9;tion. Nous avons &#xE9;galement d&#xE9;montr&#xE9; que le suivi des injections de dsiRNAs dendrim&#xE8;re-cocktailed suivants rebond viral a entra&#xEE;n&#xE9; une inhibition compl&#xE8;te de lutte contre le VIH-1 des titres. Les &#xE9;tudes de biodistribution montrent que les dendrim&#xE8;res dsiRNAs s&#x26;#39;accumulent pr&#xE9;f&#xE9;rentiellement dans les cellules mononucl&#xE9;&#xE9;es du sang p&#xE9;riph&#xE9;rique (CMSP) et le foie et ne pr&#xE9;sentent aucune toxicit&#xE9; discernable. Ces donn&#xE9;es d&#xE9;montrent pour la premi&#xE8;re livraison efficace combinatoire d&#x26;#39;anticorps anti-virales d&#x26;#39;accueil et-siRNA pour le traitement du VIH-1 in vivo. L&#x26;#39;approche de livraison dendrim&#xE8;re repr&#xE9;sente donc une m&#xE9;thode prometteuse pour l&#x26;#39;administration syst&#xE9;mique de combinaisons de siRNA pour le traitement du VIH-1 infection.

L&#x26;#39;administration syst&#xE9;mique de DsiRNAs combinatoires Via nanoparticules supprime efficacement le VIH-1 chez les souris humanis&#xE9;es

Wir evaluieren die in-vivo Wirksamkeit von strukturell flexible, kationische PAMAM-Dendrimere als kleine interferierender RNA (SiRNA) Lieferung System in einem Rag2 (-) / - &gamma;c-/-(RAG-Hu) humanisierten Mausmodell f&uuml;r HIV-1-Infektion. HIV-infizierten humanisierte Rag2-/-&gamma;c-/-M&auml;use (RAG-Hu) wurden intraven&ouml;s injiziert (i.v.) mit Dendrimere-SiRNA-Nanopartikeln, bestehend aus einem Cocktail von Dicer Substrat SiRNAs (DsiRNAs) gezielt sowohl zellul&auml;re als auch virale Abschriften. Wir berichten in dieser Studie, dass die Dendrimere-DsiRNA-Behandlung HIV-1 Infektion durch mehrere Gr&ouml;&szlig;enordnungen unterdr&uuml;ckt und gegen die viral induzierten CD4(+) T-Zell-Ersch&ouml;pfung gesch&uuml;tzt. Wir zeigte auch, dass eine vollst&auml;ndige Hemmung der HIV-1-Antik&ouml;rper-Titer Follow-up-Injektionen die Dendrimere-cocktailed DsiRNAs, die nach viralen Rebound f&uuml;hrte. Bioverteilung Studien zeigen, dass die Dendrimere-DsiRNAs bevorzugt in peripheren mononukle&auml;ren Blutzellen (PBMCs) und Leber ansammeln und erkennbare Toxizit&auml;t nicht weisen. Diese Daten zeigen die erste Zeit wirkungsvolle kombinatorische Lieferung von anti-host und -virale SiRNAs f&uuml;r HIV-1-Behandlung in-vivo. Der Dendrimere Lieferung Ansatz stellt somit eine viel versprechende Methode f&uuml;r systemische Lieferung von Kombinationen von SiRNAs f&uuml;r die Behandlung von HIV-1-Infektion.

Systemischer Verabreichung kombinatorischen DsiRNAs &uuml;ber Nanopartikel unterdr&uuml;ckt effizient HIV-1 Infektion humanisierte M&auml;usen.

Abbiamo valutato l&#39;efficacia in vivo di dendrimeri PAMAM cationico, strutturalmente flessibile come un piccolo sistema di consegna d&#39;interferenza RNA (siRNA) in un Rag2 (-) / - &gamma;c-/-modello murino umanizzato (RAG-hu) per l&#39;infezione da HIV-1. Infezione da HIV umanizzati Rag2-/-&gamma;c-/-mice (RAG-hu) sono stati iniettati per via endovenosa (i.v.) con nanoparticelle dendrimero-siRNA composto da un cocktail di cubettatrice substrato siRNA (dsiRNAs) targeting trascrizioni virali e cellulari. Riportiamo in questo studio che il trattamento dendrimero-dsiRNA soppresso l&#39;infezione da HIV-1 da parecchi ordini di grandezza e protetto contro virale indotta deplezione CD4(+) T-cell. Abbiamo dimostrato anche che iniezioni di follow-up della dsiRNAs dendrimero cocktailed seguito rebound virale ha provocato una inibizione totale di titoli di HIV-1. Biodistribuzione studi dimostrano che il dendrimero-dsiRNAs preferenzialmente si accumulano nel fegato e cellule mononucleari del sangue periferico (PBMCs) e non presentano alcuna tossicit&agrave; percepibile. Questi dati dimostrano per la prima volta efficace combinatoria consegna di siRNA anti-host ed - virale per il trattamento di HIV-1 in vivo. L&#39;approccio di consegna dendrimero rappresenta quindi un metodo promettente per consegna sistemica di combinazioni di siRNA per il trattamento dell&#39;infezione da HIV-1.

Somministrazione sistemica di combinatoria dsiRNAs tramite nanoparticelle sopprime efficientemente infezione HIV-1 nei topi umanizzati.

&#xFF08; - &#xFF09;/-&#x3B3;C-/  - &#xFF08;RAG-HU&#xFF09;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x30D2;&#x30C8;&#x5316;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;RAG2&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;siRNA&#xFF09;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3001;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x6027;PAMAM&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002; HIV&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30D2;&#x30C8;Rag2-/-&#x3B3;c-/-&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#xFF08;RAG-HU&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x30C0;&#x30A4;&#x30B5;&#x30FC;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;siRNA&#xFF08;dsiRNAs&#xFF09;&#x306E;&#x30AB;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EB;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;-siRNA&#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x3068;&#xFF08;&#x2173;&#xFF09;&#x9759;&#x8108;&#x5185;&#x6CE8;&#x5C04;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;dsiRNA&#x51E6;&#x7406;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;HIV-1&#x6841;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;CD4&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30EA;&#x30D0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x5F8C;&#x306B;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;cocktailed dsiRNAs&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x6CE8;&#x5C04;&#x304C;HIV-1&#x6297;&#x4F53;&#x4FA1;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x5206;&#x5E03;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;dsiRNAs&#x304C;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x200B;&#x200B;&#x5358;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;PBMC&#xFF09;&#x3068;&#x809D;&#x81D3;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3057;&#x3001;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x306E;&#x6297;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3068;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3001;in vivo&#x3067;HIV-1&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;siRNA&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x306A;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x914D;&#x4FE1;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;siRNA&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306E;&#x5168;&#x8EAB;&#x9001;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;Via&#x30B3;&#x30F3;&#x30D3;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;DsiRNAs&#x306E;&#x5168;&#x8EAB;&#x6295;&#x4E0E;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x30D2;&#x30C8;&#x5316;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; rag2&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA (siRNA) &#xBC30;&#xB2EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC5F0; &#xD558; &#xACE0;, &#xC591;&#xC774;&#xC628; PAMAM dendrimers&#xC758; in vivo &#xD6A8;&#xB2A5; &#xD3C9;&#xAC00; (-) /-&gamma;c-/-&#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; (&#xAC78; &#xB808; &#xD6C4;) humanized &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;. HIV&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; humanized Rag2-/-&gamma;c-/-&#xC0DD;&#xC950; (&#xAC78; &#xB808; &#xD6C4;) &#xC815; &#xB9E5; &#xC8FC;&#xC785; &#xD588;&#xB2E4; (i.v.) dicer &#xAE30;&#xD310; siRNAs (dsiRNAs) &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBC0F; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC131;&#xC801; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE75;&#xD14C;&#xC77C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C4; dendrimer siRNA &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xACE0; dendrimer dsiRNA &#xCE58;&#xB8CC; &#xC9C4;&#xB3C4; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBA85;&#xB839;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xBC1C;&#xB41C; CD4(+) T-&#xC140; &#xACE0;&#xAC08; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xBCF4;&#xD638;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB9AC;&#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; dendrimer cocktailed Dsirnas&#xC758; &#xD6C4;&#xC18D; &#xC8FC;&#xC0AC; titers &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. Biodistribution &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; dendrimer dsiRNAs &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9D0; &#xCD08; &#xD608;&#xC561; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC; (PBMCs)&#xC640; &#xAC04;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xCD95;&#xC801; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xCE58;&#xB8CC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; anti-host &#xBC0F;-&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; Sirnas&#xC758; &#xCC98;&#xC74C; &#xC2DC;&#xAC04; &#xD6A8;&#xB2A5; &#xC870;&#xD569; &#xBC30;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Dendrimer &#xBC30;&#xB2EC; &#xC811;&#xADFC; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; Sirnas&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xBC30;&#xB2EC; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC870;&#xD569; Dsirnas&#xC758; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801; &#xAD00;&#xB9AC;&#xB294; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; humanized &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se evalu&#xF3; la eficacia in vivo de estructura flexible, dendr&#xED;meros PAMAM cati&#xF3;nicos como un peque&#xF1;o sistema de interferir en la entrega de ARN (siRNA) en un Rag2 (-) /-&#x251C; &#x2502; n-/ - (GAR-hu) modelo de rat&#xF3;n humanizado para el VIH-1. Infectados por el VIH humanizado Rag2-/-&#x3B3;c-/- los ratones (GAR-hu) fueron inyectados por v&#xED;a intravenosa (iv) con nanopart&#xED;culas siRNA dendr&#xED;mero-que consiste en un c&#xF3;ctel de siRNAs sustrato Dicer (dsiRNAs) dirigidas a las transcripciones, tanto virales como celulares. Se presenta en este estudio que el tratamiento dendr&#xED;mero-dsiRNA supresi&#xF3;n de infecci&#xF3;n VIH-1 en varios &#xF3;rdenes de magnitud y la protecci&#xF3;n contra virus CD4 inducida por (+) de c&#xE9;lulas T agotamiento. Se demostr&#xF3; adem&#xE1;s que el seguimiento de las inyecciones de los dsiRNAs dendr&#xED;mero-cocktailed despu&#xE9;s de rebote viral result&#xF3; en la inhibici&#xF3;n completa de los t&#xED;tulos de VIH-1. Los estudios de biodistribuci&#xF3;n demostrar que los dendr&#xED;meros dsiRNAs preferentemente se acumulan en las c&#xE9;lulas mononucleares de sangre perif&#xE9;rica (CMSP) y el h&#xED;gado y no exhiben ninguna toxicidad apreciable. Estos datos demuestran por primera vez eficaz de entrega de combinatoria y-virales hu&#xE9;sped anti-siRNAs para el tratamiento del VIH-1 in vivo. El enfoque de entrega dendr&#xED;mero por tanto, representa un m&#xE9;todo prometedor para la liberaci&#xF3;n sist&#xE9;mica de combinaciones de siRNAs para el tratamiento de la infecci&#xF3;n por VIH-1.

Administraci&#xF3;n sist&#xE9;mica de DsiRNAs combinatorias a trav&#xE9;s de nanopart&#xED;culas suprime eficientemente el VIH-1 en ratones humanizados

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Swiderski Piotr

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