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Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations

Despite progress in modelling human drug toxicity, many compounds fail during clinical trials due to unpredicted side effects. The cost of clinical ...

University of Edinburgh

ErbB 4 &#x53D7;&#x4F53;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x533A;&#x88C2;&#x89E3;&#x751F;&#x6210;&#x53D7;&#x5230;&#x8FC7; N &#x672B;&#x7AEF;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x7684; 80 kDa (m80) &#x819C;&#x76F8;&#x5173;&#x7247;&#x6BB5;&#x3002;&#x83B7;&#x5F97;&#x8BE5;&#x5E8F;&#x5217;&#x64CD;&#x4F5C;&#x663E;&#x793A;&#x6B64;&#x7247;&#x6BB5;&#x7684; N &#x603B;&#x7AD9;&#x5F00;&#x5934; Ser 652 ErbB-4&#x3002;&#x5F53;&#x5BF9;&#x5E94; ErbB 4 &#x6B8B;&#x7559; 646 657 12 &#x6B8B;&#x7559;&#x80BD;&#x5BF9;&#x5185;&#x91CD;&#x7EC4;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x7D20;&#x8F6C;&#x6362;&#x9176;&#xFF0C;&#x4EE3;&#x8868; 646 651 &#x548C; 652 657 &#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x788E;&#x7247;&#x83B7;&#x5F97;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x4ED6; 651 &#x548C; Ser 652 &#x4E4B;&#x524D;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF;, &#x653E;&#x7F6E;&#x5185;&#x80DE;&#x5916;&#x533A;&#x79F8;&#x79C6;&#x7EA6; 8 &#x533A;&#x57DF;&#x6B8B;&#x7559;&#x9176;&#x5207;&#x4F4D;&#x70B9;&#x4E4B;&#x95F4;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x533A;&#x5288;&#x88C2;&#x7684; ErbB 4&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6709;&#x7279;&#x70B9;&#x7684; m80 ErbB 4 &#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;ErbB 4 &#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E0E;&#x6CDB; ErbB &#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x8868;&#x660E;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027; heregulin &#x65E0;&#x5173;&#x7684;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced&#x3001; ErbB 4 &#x80DE;&#x5916;&#x533A;&#x5288;&#x88C2;&#x548C;&#x5F62;&#x6210; m80 &#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x4E25;&#x683C;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;M80 ErbB 4 &#x7247;&#x6BB5;&#x751F;&#x6210;&#x65F6;&#xFF0C;&#x4EE5; heregulin &#x6216; 12-O-&#x4F5B;-13-&#x4E59;&#x9178;&#x916F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x7247;&#x6BB5;&#x5C06;&#x4E0E;&#x5B8C;&#x597D; ErbB 2 &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6B64;&#x7247;&#x6BB5;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5173;&#x8054;&#x5B8C;&#x597D; ErbB 4 &#x5206;&#x5B50;&#x3002;

&#x80DE;&#x5916;&#x533A;&#x5288;&#x88C2;&#x7684; ErbB 4&#xFF1A; &#x5288;&#x88C2;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C; m80 &#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

Ectodomain cleavage of the ErbB-4 receptor tyrosine kinase generates a membrane-associated fragment of 80 kDa (m80) that has been subjected to N-terminal sequencing. The sequence obtained shows that the N terminus of this fragment begins with Ser-652 of ErbB-4. When a 12-residue peptide corresponding to ErbB-4 residues 646-657 was incubated with recombinant tumor necrosis factor-alpha-converting enzyme, fragments representing residues 646-651 and 652-657 were obtained. These data indicate that ectodomain cleavage of ErbB-4 occurs between His-651 and Ser-652, placing the cleavage site within the ectodomain stalk region approximately 8 residues prior to the transmembrane domain. Several experiments have characterized other aspects of the m80 ErbB-4 fragment. Inhibition of ErbB-4 tyrosine kinase activity with pan-ErbB tyrosine kinase inhibitors indicates that kinase activity is stringently required for heregulin-dependent, but not 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced, ErbB-4 ectodomain cleavage and formation of the m80 fragment. When the m80 ErbB-4 fragment is generated by cell treatment with heregulin or 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate, the fragment associates with intact ErbB-2. However, this fragment does not associate with the intact ErbB-4 molecule.

Ectodomain cleavage of ErbB-4: characterization of the cleavage site and m80 fragment.

Clivage d&#39;ectodomaine de la tyrosine kinase du r&eacute;cepteur ErbB-4 g&eacute;n&egrave;re un fragment associ&eacute;es aux membranes de 80 kDa (m80) qui a &eacute;t&eacute; soumise &agrave; la s&eacute;quence N-terminale. La s&eacute;quence obtenue montre que l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale de ce fragment commence avec Ser-652 du ErbB-4. Quand un peptide 12 r&eacute;sidus correspondant &agrave; ErbB-4 r&eacute;sidus 646-657 est incub&eacute; avec l&#39;enzyme de conversion de facteur de n&eacute;crose tumorale-alpha recombinant, fragments qui repr&eacute;sentent les r&eacute;sidus 646-651 et 652-657 ont &eacute;t&eacute; obtenus. Ces donn&eacute;es indiquent que le clivage de l&#39;ErbB-4 ectodomaine se produit entre sa-651 et Ser-652, pla&ccedil;ant le site de clivage dans les r&eacute;sidus de r&eacute;gion environ 8 ectodomaine tige avant le domaine transmembranaire. Plusieurs exp&eacute;riences ont caract&eacute;ris&eacute; les autres aspects du fragment m80 ErbB-4. L&#39;inhibition de l&#39;activit&eacute; tyrosine kinase ErbB-4 avec inhibiteurs de tyrosine kinase pan-ErbB indique que l&#39;activit&eacute; tyrosine kinase est rigoureusement n&eacute;cessaire pour heregulin-d&eacute;pendante, mais pas 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced, ErbB-4 ectodomaine clivage et de formation du fragment m80. Lorsque le fragment d&#39;ErbB-4 m80 est g&eacute;n&eacute;r&eacute; par le traitement des cellules avec heregulin ou 12-O-t&eacute;trad&eacute;canoylphorbol-13-ac&eacute;tate, le fragment associe &agrave; intact ErbB-2. Cependant, ce fragment n&#39;associe pas &agrave; la mol&eacute;cule intacte de ErbB-4.

Clivage d&#39;ectodomaine de l&#39;ErbB-4: caract&eacute;risation du site et m80 fragment clivage.

Ektodom&#xE4;ne Spaltung von ErbB-4: Charakterisierung der Spaltstelle und m80-Fragment.

Clivaggio ectodomain della chinasi della tirosina del recettore ErbB-4 genera un frammento di membrana-associato di 80 kDa (m80) che &egrave; stato sottoposto a sequenziamento N-terminale. La sequenza ottenuta dimostra che il capolinea N di questo frammento inizia con Ser-652 di ErbB-4. Quando un peptide 12-residuo corrispondente ErbB-4 residui 646-657 &egrave; stato incubato con enzima ricombinante fattore di necrosi tumorale-alfa-conversione, frammenti che rappresentano residui 646-651 e 652-657 sono stati ottenuti. Questi dati indicano che clivaggio ectodomain di ErbB-4 si verifica tra sua 651 e Ser-652, ponendo il sito di clivaggio all&#39;interno i residui di regione circa 8 gambo ectodomain prima del dominio transmembrana. Diversi esperimenti hanno caratterizzato gli altri aspetti del frammento m80 ErbB-4. Inibizione dell&#39;attivit&agrave; di chinasi della tirosina ErbB-4 con pan-ErbB inibitori della tirosina chinasi indica che l&#39;attivit&agrave; della chinasi &egrave; rigorosamente necessario per heregulin-dipendente, ma non 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced, ErbB-4 ectodomain scissione e la formazione del frammento m80. Quando il frammento ErbB-4 m80 &egrave; generato dal trattamento delle cellule con heregulin o 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetato, il frammento associa intatto ErbB-2. Tuttavia, questo frammento non associare con la molecola intatta ErbB-4.

Clivaggio ectodomain di ErbB-4: caratterizzazione del sito e m80 frammento clivaggio.

&#x5916;&#x90E8;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5375;&#x5272; ErbB 4 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E; N &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F; 80 kDa (m80) &#x306E;&#x819C;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF; ErbB 4 &#x306E; Ser 652 &#x3068;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3068;&#x304D;&#x306F; 12 &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; ErbB-4 &#x6B8B;&#x57FA; 646-657 &#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; &alpha; &#x5909;&#x63DB;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x6B8B;&#x57FA; 646-651 &#x3068; 652 657 &#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x5916;&#x90E8;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5375;&#x5272; ErbB 4 &#x306E; 651 &#x5F7C;&#x3068; Ser-652 &#x5375;&#x5272;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x5916;&#x90E8;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x830E;&#x5730;&#x57DF;&#x7D04; 8 &#x6B8B;&#x57FA;&#x5185;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13; m80 ErbB 4 &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x304C;&#x3042;&#x308B;.ErbB 4 &#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x30D1;&#x30F3; ErbB &#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x53B3;&#x3057;&#x304F; heregulin &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304C;&#x306A;&#x3044; 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced&#x3001;ErbB 4 &#x5916;&#x90E8;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x3068; m80 &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;M80 ErbB 4 &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F; heregulin &#x307E;&#x305F;&#x306F; 12 O &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C7;&#x30AB;&#x30CE;&#x30A4;&#x30EB;&#x30DB;&#x30EB; &#x30DC;&#x30FC;&#x30EB; 13 &#x9162;&#x9178;&#x30BB;&#x30EB;&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E; ErbB 2 &#x3068;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E; ErbB 4 &#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x306F;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x5916;&#x90E8;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x306E; ErbB 4&#xFF1A; &#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068; m80 &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3002;

ErbB 4 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; Ectodomain &#xBD84;&#xC5F4; &#xC0DD;&#xC131; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1;&#xC744; &#xBC1B;&#xAC8C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; 80 kDa (m80)&#xC758; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC870;&#xAC01;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC5BB;&#xC740;&#xC774; &#xB2E8;&#xD3B8;&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; ErbB 4 Ser-652&#xB85C; &#xC2DC;&#xC791; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 646-657 ErbB-4 12 &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD574;&#xB2F9; &#xD588;&#xB2E4; incubated &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC694;&#xC778; &#xC54C;&#xD30C; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB85C; 646-651 &#xBC0F; 652-657 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xB300;&#xD45C; &#xD558;&#xB294; &#xC870;&#xAC01; &#xD68D;&#xB4DD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; ErbB 4&#xC758; ectodomain &#xBD84;&#xC5F4; &#xADF8; 651 Ser-652, ectodomain &#xC2A4;&#xD1A0;&#xD0B9; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC57D; 8 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC774;&#xC804; &#xBC30;&#xCE58; &#xC0AC;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2E4;&#xD5D8; m80 ErbB 4 &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xCE21;&#xBA74; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD32C; ErbB tyrosine kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC640; ErbB 4 &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced, ErbB 4 ectodomain &#xC808;&#xB2E8;, m80 &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; heregulin &#xC885;&#xC18D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. M80 ErbB 4 &#xC870;&#xAC01;&#xC740; heregulin&#xC640; 12-O-tetradecanoylphorbol-13-&#xCD08; &#xC0B0; &#xC140; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB420; &#xB54C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; ErbB 2 &#xC870;&#xAC01; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xC870;&#xAC01;&#xC740; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; ErbB 4 &#xBD84;&#xC790;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ectodomain &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; ErbB 4: &#xBD84;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC0F; m80 &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Escote del ectodominio de la cinasa de tirosina del receptor ErbB-4 genera un fragmento asociada a membrana de 80 kDa (m80) que ha sido sometido a la secuencia N-terminal. La secuencia obtenida muestra que la terminal N de este fragmento comienza con Ser-652 de ErbB-4. Se obtuvieron cuando un p&eacute;ptido 12 residuos correspondientes a ErbB-4 residuos 646-657 se incubaron con enzima convertidora de factor de necrosis tumoral-alfa recombinante, fragmentos que representan los residuos 646-651 y 652-657. Estos datos indican que escote del ectodominio de ErbB-4 se produce entre su-651 y Ser-652, colocar el sitio de la hendidura en los tallo del ectodominio regi&oacute;n aproximadamente 8 residuos antes del dominio transmembrana. Varios experimentos han caracterizado otros aspectos del fragmento m80 ErbB-4. Inhibici&oacute;n de ErbB-4 la actividad de tirosina quinasa con pan-ErbB inhibidores de tirosina quinasa indica que la actividad tirosina quinasa es estrictamente necesaria para heregulin-dependiente, pero no 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced, ErbB-4 ectodominio escote y formaci&oacute;n del fragmento m80. Cuando el fragmento de ErbB-4 m80 es generado por el tratamiento de la c&eacute;lula con heregulin o 12-O-Tetradecanoilforbol-13-acetato, el fragmento se asocia con intacto ErbB-2. Sin embargo, este fragmento no asociado con la mol&eacute;cula intacta de ErbB-4.

Escote del ectodominio de ErbB-4: caracterizaci&oacute;n del fragmento del sitio y m80 del escote.

RNA gel analysis is essential for quality assessment of RNA preparations for subsequent analysis such as microarrays and real-time PCRs. The routinely used standard electrophoresis of RNA through formaldehyde-containing agarose gels is not only labor-intensive and time-consuming, but also involves sizeable quantities of hazardous materials. Above all, it is not sensitive, requiring more than 1 microgram of RNA for the assay. Current gene expression profiling with microarrays and real-time PCR often involves limiting amounts of RNA. It is therefore important to have a more sensitive way to analyze RNA. Here we report an improved ethidium bromide-based RNA gel analysis system with our Superload buffer that increases sensitivity to 12.5 ng of total RNA and allows RNA analysis on a regular native Tris-acetate EDTA (TAE) agarose gel.

Enhanced sensitivity RNA gel loading buffer that enables efficient RNA separation on native gels.

RNA &#x51DD;&#x80F6;&#x5206;&#x6790;&#x8D28;&#x91CF;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x968F;&#x540E;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x5982;&#x82AF;&#x7247;&#x548C;&#x5B9E;&#x65F6; PCRs &#x7684; RNA &#x7B79;&#x5907;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x542B;&#x7532;&#x919B;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3; RNA &#x7ECF;&#x5E38;&#x4F7F;&#x7528;&#x6807;&#x51C6;&#x6CD5;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x52B3;&#x52A8;&#x5BC6;&#x96C6;&#x578B;&#x548C;&#x8017;&#x65F6;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x8FD8;&#x6D89;&#x53CA;&#x5230;&#x76F8;&#x5F53;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x5371;&#x9669;&#x6750;&#x6599;&#x3002;&#x9996;&#x5148;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x654F;&#x611F;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x8D85;&#x8FC7; 1 &#x5FAE;&#x514B;&#x7684; RNA &#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x82AF;&#x7247;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x5B9E;&#x65F6;&#x8367;&#x5149;&#x5B9A;&#x91CF; PCR &#x5F80;&#x5F80;&#x6D89;&#x53CA;&#x9650;&#x5236;&#x6570;&#x91CF;&#x7684; RNA&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x8981;&#x6709;&#x66F4;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6765;&#x5206;&#x6790; RNA&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x6EB4;&#x5316;&#x6EB4;&#x57FA; RNA &#x51DD;&#x80F6;&#x5206;&#x6790;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E0E;&#x6211;&#x4EEC;&#x589E;&#x52A0;&#x81F3; 12.5 &#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x8D85;&#x8F7D;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#x7684;&#x603B; RNA &#x5434;&#x5E76;&#x5141;&#x8BB8;&#x5B9A;&#x671F;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x62DB;&#x8058;&#x4E59;&#x9178; EDTA (TAE) &#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x51DD;&#x80F6;&#x4E0A;&#x7684; RNA &#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#x589E;&#x5F3A;&#x654F;&#x611F;&#x6027; RNA &#x51DD;&#x80F6;&#x52A0;&#x8F7D;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x672C;&#x673A;&#x51DD;&#x80F6;&#x4E0A;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548; RNA &#x5206;&#x79BB;&#x3002;

Analyse de gel de l&#39;ARN est essentiel pour l&#39;&eacute;valuation de la qualit&eacute; des pr&eacute;parations d&#39;ARN pour analyse ult&eacute;rieure, tels que les puces et la PCR en temps r&eacute;el. L&#39;&eacute;lectrophor&egrave;se standard couramment utilis&eacute; d&#39;ARN par des gels d&#39;agarose contenant du formald&eacute;hyde n&#39;est pas seulement fastidieux et chronophage, mais implique &eacute;galement des quantit&eacute;s consid&eacute;rables de mati&egrave;res dangereuses. Avant tout, il n&#39;est pas sensible, exigeant plus de 1 microgramme d&#39;ARN pour le dosage. Actuel profil d&#39;expression g&eacute;nique avec des puces &agrave; ADN et PCR en temps r&eacute;el souvent consiste &agrave; limiter la quantit&eacute; d&#39;ARN. Il est donc important d&#39;avoir un moyen plus sensible pour l&#39;analyse des RNA. Nous pr&eacute;sentons un syst&egrave;me d&#39;analyse am&eacute;lior&eacute;es d&#39;&eacute;thidium retardateurs RNA gel avec notre tampon Sarah qui augmente la sensibilit&eacute; &agrave; 12,5 ng d&#39;ARN total et permet l&#39;analyse de l&#39;ARN sur un gel d&#39;agarose de Tris-ac&eacute;tate EDTA (TAE) native r&eacute;guli&egrave;re.

Enhanced tampon de chargement de gel de sensibilit&eacute; RNA qui permet une s&eacute;paration efficace de RNA sur gels natifs.

Erh&#xF6;hte Empfindlichkeit RNA Gelladepuffer RNA, die eine effiziente Trennung erm&#xF6;glicht auf nativen Gelen.

Analisi del RNA gel sono essenziale per la valutazione della qualit&agrave; delle preparazioni di RNA per successive analisi quali microarrays e PCR in tempo reale. L&#39;elettroforesi standard abitualmente usato di RNA attraverso gel dell&#39;agarosi contenenti formaldeide non &egrave; solo dispendioso e richiede molto tempo, ma coinvolge anche la considerevole quantit&agrave; di materiali pericolosi. Soprattutto, non &egrave; sensibile, che richiedono pi&ugrave; di 1 microgrammo di RNA per il dosaggio. Attuale profilo di espressione genica con microarray e Real-Time PCR spesso coinvolge limitando la quantit&agrave; di RNA. Quindi &egrave; importante avere un modo pi&ugrave; sensibile per analizzare RNA. Qui riportiamo un migliorato etidio bromuro RNA gel analisi sistema con nostro buffer Superload che aumenta la sensibilit&agrave; a 12,5 ng di RNA totale e permette l&#39;analisi di RNA su un gel di agarosio Tris-acetato-EDTA (TAE) nativo regolari.

Enhanced buffer di caricamento del gel sensibilit&agrave; RNA che permette la separazione efficiente di RNA su gel nativo.

RNA &#x306E;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x54C1;&#x8CEA;&#x8A55;&#x4FA1;&#x4EE5;&#x964D;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; Pcr &#x306E; RNA &#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E0;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x3092;&#x542B;&#x3080; agarose &#x306E;&#x30B2;&#x30EB;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x65E5;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B; RNA &#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306B;&#x3060;&#x3051;&#x624B;&#x9593;&#x3068;&#x6642;&#x9593;&#x304C;&#x304B;&#x304B;&#x308A;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x6709;&#x5BB3;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x91CF;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0A;&#x8A18;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x4EE5;&#x4E0A; 1 &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0; RNA &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x5BC6;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; PCR &#x3067;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x767A;&#x73FE; RNA &#x306E;&#x91CF;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;RNA &#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x5411;&#x4E0A;&#x30A8;&#x30C1;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0; &#x30D6;&#x30ED;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C9;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066; RNA &#x30B2;&#x30EB;&#x89E3;&#x6790;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; 12.5 &#x3078;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x79C1;&#x305F;&#x3061; Superload &#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x3092;&#x5831;&#x544A; ng &#x306E;&#x7DCF; RNA &#x306E; RNA &#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x6B63;&#x898F;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30C8;&#x30EA;&#x30B9;&#x9162;&#x9178; EDTA &#xFF08;TAE&#xFF09; agarose &#x306E;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30B2;&#x30EB;&#x3067;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A; RNA &#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x611F;&#x5EA6; RNA &#x30B2;&#x30EB;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

RNA &#xC824; &#xBD84;&#xC11D; microarrays &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCRs &#xB4F1; &#xD6C4;&#xC18D; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; RNA &#xC900;&#xBE44;&#xC758; &#xD488;&#xC9C8; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9;&#xC740; &#xC77C;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xD45C;&#xC900; &#xBC95; RNA&#xC758; agarose &#xC824; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC; &#xB984; &#xC54C; &#xB370;&#xD788;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB178;&#xB3D9; &#xC9D1;&#xC57D; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC774; &#xB9CE;&#xC774; &#xAC78;&#xB9AC;&#xB294;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC591;&#xC758; &#xC720;&#xD574; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xBB34;&#xC5C7; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB3C4;, &#xAD6C;&#xBD84;, RNA&#xC758; 1 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1; &#xADF8;&#xB7A8; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC9C4; &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; microarrays&#xC640; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR &#xC885;&#xC885; RNA&#xC758; &#xC591;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC5C5;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xBBC0;&#xB85C; RNA &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB354; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; 12.5&#xC5D0; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; Superload &#xBC84;&#xD37C;&#xB294; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xBE0C;&#xB85C;&#xBBFC; &#xD654;&#xC5D0; &#xD2F0; &#xB4D0; &#xAE30;&#xBC18; RNA &#xC824; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xCD1D; RNA&#xC758; ng &#xC77C;&#xBC18; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD2B8;&#xB9AC; &#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8; EDTA (&#xD0DC;) agarose &#xC824;&#xC5D0; RNA &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC10;&#xB3C4; RNA &#xAC94; &#xB85C;&#xB529; &#xBC84;&#xD37C;&#xB97C; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC824;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; RNA &#xBD84;&#xB9AC; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

An&aacute;lisis de gel de ARN es esencial para la evaluaci&oacute;n de la calidad de las preparaciones de RNA para posterior an&aacute;lisis como microarrays y PCR en tiempo real. La electroforesis est&aacute;ndar usada rutinariamente del ARN a trav&eacute;s de geles de agarosa que contienen formaldeh&iacute;do no s&oacute;lo es que requieren mucho trabajo y mucho tiempo, pero tambi&eacute;n implica considerables cantidades de materiales peligrosos. Sobre todo, no es sensible, que requiere m&aacute;s de 1 microgramo de ARN para el ensayo. Actual Perfil de expresi&oacute;n g&eacute;nica con microarrays y PCR en tiempo real a menudo implica limitar las cantidades de ARN. Por lo tanto es importante tener una manera m&aacute;s sensible para analizar RNA. Aqu&iacute; divulgamos un mejorado etidio bromuro RNA gel an&aacute;lisis sistema con nuestro buffer de Superload que aumenta la sensibilidad a 12.5 ng de ARN total y permite el an&aacute;lisis de ARN en gel de agarosa nativa acetato de Tris EDTA (TAE) regular.

Mejorado el tamp&oacute;n de carga de gel sensibilidad RNA que permite eficiente separaci&oacute;n de RNA en geles nativos.

DNA &#x82AF;&#x7247;&#x6280;&#x672F;&#x5DF2;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5E8F;&#x5217;&#x4FE1;&#x606F;&#xFF0C;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5DF2;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x9650;&#x4E8E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6A21;&#x5F0F;&#x751F;&#x7269;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x90FD;&#x597D;&#x5F97;&#x591A;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x9635;&#x5217;&#x6216;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FDC;&#x4EB2;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7269;&#x79CD; &#xFF1B; &#x8DE8;&#x7269;&#x79CD;&#x6742;&#x4EA4;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x725B;&#x3001; &#x732A;&#x548C;&#x72D7;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x7531;&#x591A;&#x4E2A;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x7684;&#x597D;&#x5F97;&#x591A;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x5E8F;&#x5217;&#x5185;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x517B;&#x62A4;&#x662F;&#x8DB3;&#x591F;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECE;&#x67D0;&#x4E9B;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x5206;&#x6790;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x751F;&#x6210;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x867D;&#x7136;&#x6574;&#x4F53;&#x6742;&#x4EA4;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F4E;&#x8DE8;&#x7269;&#x79CD;&#x6742;&#x4EA4;&#xFF0C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x57FA;&#x56E0;&#x4ECD;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7B49;&#x6548;&#x4E8E;&#x540C;&#x4E00;&#x7269;&#x79CD;&#x6742;&#x4EA4;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EE5;&#x7535;&#x5B50;&#x65B9;&#x5F0F;&#x5C4F;&#x853D;&#x4E0D;&#x826F;&#x6742;&#x4EA4;&#x7684;&#x63A2;&#x9488;&#xFF0C;&#x5176;&#x4F59;&#x7684;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x4E3A;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x7B97;&#x6CD5;&#x6765;&#x9009;&#x62E9;&#x53EF;&#x9760;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x5229;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x7684;&#x5339;&#x914D;/&#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x5728;&#x6BD4;&#x8F83;&#x65F6;&#x4F7F;&#x7528;&#x6240;&#x9009;&#x7684;&#x63A2;&#x5934;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8DE8;&#x7269;&#x79CD;&#x548C;&#x540C;&#x4E00;&#x7269;&#x79CD;&#x6742;&#x4EA4;&#x7684;&#x7EBF;&#x6027;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x4F7F;&#x7528;&#x968F;&#x673A;&#x9009;&#x62E9;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF; pcr &#x8DE8;&#x7269;&#x79CD;&#x6742;&#x4EA4;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x6B64;&#x5904;&#x6240;&#x793A;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x690D;&#x7269;&#x548C;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x9635;&#x5217;&#x8DE8;&#x7269;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6570;&#x636E;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

DNA microarrays have been widely used in gene expression analysis of biological processes. Due to a lack of sequence information, the applications have been largely restricted to humans and a few model organisms. Presented within this study are results of the cross-species hybridization with Affymetrix human high-density oligonucleotide arrays or GeneChip using distantly related mammalian species; cattle, pig and dog. Based on the unique feature of the Affymetrix GeneChip where every gene is represented by multiple probes, we hypothesized that sequence conservation within mammals is high enough to generate sufficient signals from some of the probes for expression analysis. We demonstrated that while overall hybridization signals are low for cross-species hybridization, a few probes of most genes still generated signals equivalent to the same-species hybridization. By masking the poorly hybridized probes electronically, the remaining probes provided reliable data for gene expression analysis. We developed an algorithm to select the reliable probes for analysis utilizing the match/mismatch feature of GeneChip. When comparing gene expression between two tissues using the selected probes, we found a linear correlation between the cross-species and same-species hybridization. In addition, we validated cross-species hybridization results by quantitative PCR using randomly selected genes. The method shown herein could be applied to both plant and animal research.

A method for cross-species gene expression analysis with high-density oligonucleotide arrays.

Puces &agrave; ADN ont &eacute;t&eacute; largement utilis&eacute;es dans l&#39;analyse de l&#39;expression g&eacute;nique des processus biologiques. En raison du manque d&#39;information sur la s&eacute;quence, les applications ont &eacute;t&eacute; en grande partie limit&eacute;es aux humains et quelques organismes mod&egrave;les. Pr&eacute;sent&eacute; dans le cadre de cette &eacute;tude sont les r&eacute;sultats de l&#39;hybridation intersp&eacute;cifique avec baies d&#39;oligonucl&eacute;otides &agrave; forte densit&eacute; humaine Affymetrix ou GeneChip utilisant des esp&egrave;ces de mammif&egrave;res peu apparent&eacute;s ; bovins, porcins et chiens. Bas&eacute; sur le caract&egrave;re unique de la Affymetrix GeneChip o&ugrave; chaque g&egrave;ne est repr&eacute;sent&eacute; par plusieurs sondes, nous &eacute;mettons l&#39;hypoth&egrave;se que la conservation de la s&eacute;quence dans les mammif&egrave;res est suffisamment &eacute;lev&eacute;e pour g&eacute;n&eacute;rer des signaux suffisamment de certains des sondes pour l&#39;analyse de l&#39;expression. Nous avons d&eacute;montr&eacute; que, tandis que les signaux d&#39;hybridation globale est faibles pour l&#39;hybridation intersp&eacute;cifique, quelques sondes de la plupart des g&egrave;nes g&eacute;n&eacute;r&eacute; encore signaux &eacute;quivalents &agrave; l&#39;hybridation de la m&ecirc;me esp&egrave;ce. En masquant les sondes mal hybrid&eacute;es par voie &eacute;lectronique, les sondes restantes a fourni des donn&eacute;es fiables pour analyse d&#39;expression g&eacute;nique. Nous avons mis au point un algorithme permettant de s&eacute;lectionner les sondes fiables pour l&#39;analyse en utilisant la fonctionnalit&eacute; de correspondance/incompatibilit&eacute; de GeneChip. Si l&#39;on compare l&#39;expression des g&egrave;nes entre les deux tissus en utilisant les sondes s&eacute;lectionn&eacute;s, nous avons trouv&eacute; une corr&eacute;lation lin&eacute;aire entre l&#39;hybridation intersp&eacute;cifique et de la m&ecirc;me esp&egrave;ce. En outre, nous avons valid&eacute; les r&eacute;sultats de l&#39;hybridation intersp&eacute;cifique par PCR quantitative &agrave; l&#39;aide de g&egrave;nes choisis au hasard. La m&eacute;thode pr&eacute;sent&eacute;e dans le pr&eacute;sent document pourrait servir &agrave; la recherche de plantes et d&#39;animaux.

Une m&eacute;thode pour l&#39;analyse de l&#39;expression g&eacute;nique intersp&eacute;cifique avec baies haute densit&eacute; d&#39;oligonucl&eacute;otide.

Verfahren zum Kreuz-Spezies Genexpressionsanalyse mit hoher Dichte Oligonukleotidarrays.

I microarrays del DNA sono stati ampiamente utilizzati nell&#39;analisi di espressione genica dei processi biologici. A causa di una mancanza di informazioni di sequenza, le applicazioni sono state in gran parte limitate agli esseri umani ed alcuni organismi modello. Presentato all&#39;interno di questo studio sono risultati di ibridazione cross-specie con Affymetrix del oligonucleotide ad alta densit&agrave; umana o GeneChip utilizzando lontanamente correlate specie di mammiferi; bovini, suini e cani. Basato sulla caratteristica unica del Affymetrix GeneChip dove ogni gene &egrave; rappresentato dalle sonde multiple, abbiamo ipotizzato che la conservazione di sequenza all&#39;interno di mammiferi &egrave; sufficientemente elevata per generare segnali sufficienti da alcune delle sonde per l&#39;analisi di espressione. Abbiamo dimostrato mentre segnali di ibridazione complessiva sono bassi per l&#39;ibridazione tra specie, alcune sonde della maggior parte dei geni generato ancora segnali equivalente per l&#39;ibridazione della stessa specie. Mascherando le sonde ibridate scarsamente elettronicamente, le restanti sonde fornito dati affidabili per l&#39;analisi di espressione genica. Abbiamo sviluppato un algoritmo per selezionare le sonde per l&#39;analisi utilizzando la funzione di match/mismatch di GeneChip affidabile. Quando si confrontano espressione genica tra due tessuti utilizzando le sonde selezionate, abbiamo trovato una correlazione lineare tra l&#39;ibridazione cross-specie e della stessa specie. Inoltre, abbiamo convalidato risultati cross-specie ibridazione mediante PCR quantitativa utilizzando geni selezionati casualmente. Il metodo illustrato nel presente documento potrebbe essere applicato alla ricerca di animali e vegetali.

Un metodo per analisi di espressione genica di cross-specie con alta densit&agrave; del oligonucleotide.

DNA &#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x5E83;&#x304F;&#x7528;&#x3044;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x60C5;&#x5831;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x4EBA;&#x9593;&#x3068;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x5185;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30B9;&#x4EBA;&#x9593;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x307E;&#x305F;&#x306F; GeneChip &#x9060;&#x7E01;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7A2E;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7570;&#x7A2E;&#x4EA4;&#x914D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;;&#x725B;&#x3001;&#x8C5A;&#x3001;&#x72AC;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E; GeneChip &#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x4FDD;&#x5168;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x5185;&#x304C;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x7528;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x304B;&#x3089;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3042;&#x308B;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x4EA4;&#x914D;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306F;&#x7570;&#x7A2E;&#x4EA4;&#x914D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4F4E;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3078;&#x306E;&#x540C;&#x3058;&#x7A2E;&#x306E;&#x4EA4;&#x914D;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x4EA4;&#x914D;&#x3055;&#x305B;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x96FB;&#x5B50;&#x7684;&#x306B;&#x30DE;&#x30B9;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;GeneChip &#x306E;&#x4E00;&#x81F4;/&#x4E0D;&#x4E00;&#x81F4;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x9593;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x7A2E;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x7A2E;&#x306E;&#x4EA4;&#x914D;&#x306E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x76F8;&#x95A2;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684; pcr &#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7570;&#x7A2E;&#x4EA4;&#x914D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x793A;&#x3059;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x3084;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x7570;&#x7A2E;&#x9593;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3002;

DNA microarrays &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xACFC;&#xC815;&#xC758; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5B4; &#xC654;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC815;&#xBCF4; &#xBD80;&#xC871;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xBA87; &#xBAA8;&#xB378; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Affymetrix &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; oligonucleotide &#xBC30;&#xC5F4; &#xB610;&#xB294; GeneChip &#xBA3C; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC885;;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC885; &#xAC04; &#xAD50; &#xC7A1;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC18C;, &#xB3FC;&#xC9C0;&#xC640; &#xAC1C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC874;&#xC740; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xAC00;&#xC124; Affymetrix GeneChip &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xAD50; &#xC7A1; &#xC2E0;&#xD638; &#xC885; &#xAC04; &#xAD50; &#xC7A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB0AE;&#xC740; &#xBC18;&#xBA74;, &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBA87; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xC0DD;&#xC131; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC19;&#xC740; &#xC885; &#xAD50; &#xC7A1;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xB09C; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD50;&#xBC30; &#xC2DC;&#xD0A8;&#xB41C; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC804;&#xC790;&#xB85C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD558; &#xC5EC; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Genechip&#xC758; &#xC77C;&#xCE58;/&#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB450; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0AC;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC04; &#xC885;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xC885; &#xAD50; &#xC7A1; &#xAC04;&#xC758; &#xC120;&#xD615; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC885; &#xAC04; &#xAD50; &#xC7A1; &#xACB0;&#xACFC; &#xC815;&#xB7C9; PCR &#xBB34;&#xC791;&#xC704;&#xB85C; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC774; &#xAC80;&#xC0AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xACFC; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; oligonucleotide &#xBC30;&#xC5F4; &#xAC04; &#xC885; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC29;&#xBC95;.

Microarrays de DNA han sido ampliamente utilizados en el an&aacute;lisis de expresi&oacute;n g&eacute;nica de los procesos biol&oacute;gicos. Debido a la falta de informaci&oacute;n de la secuencia, las aplicaciones han sido limita en gran medida a los seres humanos y algunos organismos modelo. En este estudio se presentan los resultados de la hibridaci&oacute;n entre especies con arreglos de discos de alta densidad humana de oligonucle&oacute;tidos Affymetrix o GeneChip con especies mam&iacute;feras muy relacionadas; ganado, cerdos y perros. Partiendo de la caracter&iacute;stica &uacute;nica de la Affymetrix GeneChip donde cada gen est&aacute; representada por m&uacute;ltiples sondas, presumimos que la conservaci&oacute;n de la secuencia dentro de mam&iacute;feros es lo suficientemente alta como para generar suficientes se&ntilde;ales de algunas de las sondas para el an&aacute;lisis de la expresi&oacute;n. Hemos demostrado que mientras hibridaci&oacute;n general se&ntilde;ales son bajas para la hibridaci&oacute;n entre especies, unas sondas de la mayor&iacute;a de los genes todav&iacute;a generaron se&ntilde;ales equivalentes a la hibridaci&oacute;n de la misma especie. Enmascarando las sondas hibridadas mal electr&oacute;nicamente, las sondas restantes proporcionan datos fiables para an&aacute;lisis de expresi&oacute;n g&eacute;nica. Hemos desarrollado un algoritmo para seleccionar las sondas confiables para an&aacute;lisis utilizando la caracter&iacute;stica del partido, incompatibilidad de GeneChip. Al comparar la expresi&oacute;n g&eacute;nica entre dos tejidos usando las puntas de prueba seleccionados, encontramos una correlaci&oacute;n lineal entre la hibridaci&oacute;n entre especies y de la misma especie. Adem&aacute;s, validamos resultados de hibridaci&oacute;n entre especies por PCR cuantitativa utilizando genes seleccionados al azar. El m&eacute;todo descrito en este documento podr&iacute;a ser aplicado a la investigaci&oacute;n animal y vegetal.

Un m&eacute;todo para el an&aacute;lisis de expresi&oacute;n g&eacute;nica de la especie con arreglos de discos de alta densidad del oligonucle&oacute;tido.

&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x5DF2;&#x88AB;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4E8E;&#x786E;&#x5B9A;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x9635;&#x5217;&#x662F;&#x6700;&#x6D41;&#x884C;&#x7684;&#x683C;&#x5F0F;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C40;&#x9650;&#x662F;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x5927;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x751F;&#x7269;&#x8D77;&#x59CB;&#x6750;&#x6599;&#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x4ECE;&#x5F88;&#x5C11;&#x91CF;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6750;&#x6599;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC4;&#x5408;&#x6307;&#x6570; (PCR) &#x548C;&#x7EBF;&#x6027; &#xFF08;T7 RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#xFF09; &#x653E;&#x5927;&#x7684;&#x7B80;&#x5355;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FEE;&#x6539;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4F7F;&#x7528;&#x667A;&#x80FD;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684; T7 &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7ED3;&#x624E;&#x548C; PCR &#x6269;&#x589E;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E2D;&#x7684;&#x548C;&#x5468;&#x56F4;&#x7684; PCRcDNA &#x4ECE; 30 0.5 microg &#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x603B; RNA &#x7684;&#x5355;&#x4E00; PCR &#x5434;&#x3002;PCRcDNA &#x662F;&#x4F53;&#x5916;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684; T7 RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x751F;&#x6210;&#x4E92;&#x8865; RNA (&#x9898;&#x4E3A; cRNA&#xFF09;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x6742;&#x4EA4;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x597D;&#x5F97;&#x591A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; PCR &#x6269;&#x589E;&#x4E0E;&#x5E38;&#x89C4;&#x7EBF;&#x6027;&#x6269;&#x589E;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x7387;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x7269;&#x79CD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; RNA &#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x7EBF;&#x6027;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x63A2;&#x9488;&#x53CD;&#x5E94;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5370;&#x8BC1;&#x4E86;&#x8BE5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EBF;&#x6027;&#x548C; PCR &#x65B9;&#x6CD5;&#x663E;&#x793A;&#x54EA;&#x4E9B;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8A8A;&#x672C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5E76;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7ED9;&#x5B9A;&#x7684;&#x6837;&#x672C;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x66F4;&#x5168;&#x9762;&#x5730;&#x6DB5;&#x76D6;&#x4E00;&#x4E9B;&#x56FA;&#x6709;&#x504F;&#x89C1;&#x3002;

&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x4ECE;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6750;&#x6599;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Gene expression profiling has been widely used in identifying differentially expressed genes. One of the most popular formats is oligonucleotide array. A limitation of oligonucleotide arrays is the requirement of relatively large amounts of biological starting materials for gene expression analysis. We have developed a simple method for gene expression profiling from very small amounts of biological material by combining exponential (PCR) and linear (T7 RNA polymerase) amplification. By modifying the widely used SMART protocol, we combined T7 promoter ligation and PCR amplification in one step and generated around 0.5 microg of PCRcDNA from 30 ng of total RNA in a single PCR. The PCRcDNA was in vitro transcribed by T7 RNA polymerase to generate complementary RNA (cRNA), which then was used to hybridize Affymetrix GeneChips. Our results demonstrated a linear correlation between the PCR amplification and the conventional linear amplification in gene expression ratios of individual transcript species between two different RNA preparations. The method was further validated by TaqMan reactions. Moreover, both linear and PCR methods showed some inherent bias as to which transcripts were detected, suggesting that using both in parallel may provide a more comprehensive coverage of the transcriptome present in a given sample.

A method for gene expression analysis by oligonucleotide arrays from minute biological materials.

Profil d&#39;expression g&eacute;nique a &eacute;t&eacute; largement utilis&eacute; dans l&#39;identification des g&egrave;nes diff&eacute;rentiellement exprim&eacute;s. L&#39;un des formats plus populaires est d&#39;oligonucl&eacute;otide. Une limitation de tableaux d&#39;oligonucl&eacute;otide est l&#39;exigence de quantit&eacute;s relativement importantes de mati&egrave;res premi&egrave;res biologiques pour analyse d&#39;expression g&eacute;nique. Nous avons d&eacute;velopp&eacute; une m&eacute;thode simple pour l&#39;expression des g&egrave;nes de profilage de tr&egrave;s petites quantit&eacute;s de mat&eacute;riel biologique en combinant exponentielle (PCR) et l&#39;amplification lin&eacute;aire (ARN polym&eacute;rase T7). En modifiant le protocole SMART largement utilis&eacute;, nous avons combin&eacute; ligature promoteur T7 et amplification PCR en une &eacute;tape et g&eacute;n&eacute;r&eacute;e autour de 0,5 microgrammes de PCRcDNA de 30 ng d&#39;ARN total dans une seule PCR. Le PCRcDNA est in vitro transcrits par l&#39;ARN polym&eacute;rase T7 pour g&eacute;n&eacute;rer des ARN compl&eacute;mentaire (cRNA), qui a ensuite &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour hybrider Affymetrix GeneChips. Nos r&eacute;sultats ont d&eacute;montr&eacute; une corr&eacute;lation lin&eacute;aire entre l&#39;amplification par PCR et l&#39;amplification lin&eacute;aire conventionnelle dans les ratios d&#39;expression g&eacute;nique d&iquest;esp&egrave;ces individuelles transcription entre deux pr&eacute;parations diff&eacute;rentes d&#39;ARN. La m&eacute;thode a &eacute;t&eacute; valid&eacute;e davantage de r&eacute;actions TaqMan. En outre, les deux lin&eacute;aires et les m&eacute;thodes PCR a montr&eacute; une tendance inh&eacute;rente quant aux relev&eacute;s de notes ont &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;s, ce qui sugg&egrave;re que l&#39;utilisation simultan&eacute;e en parall&egrave;le peut fournir une couverture plus compl&egrave;te de la transcriptome pr&eacute;sent dans un &eacute;chantillon donn&eacute;.

Une m&eacute;thode pour l&#39;analyse de l&#39;expression g&eacute;nique par tableaux d&#39;oligonucl&eacute;otides d&#39;autres substances biologiques minutes.

Verfahren zur Genexpressionsanalyse durch Oligonukleotid-Arrays von winzigen biologischen Materialien.

Profilo di espressione genica &egrave; stato ampiamente usato nell&#39;identificazione di geni differenzialmente espressi. Uno dei pi&ugrave; popolari formati &egrave; del oligonucleotide. Una limitazione del oligonucleotide &egrave; il requisito di relativamente grandi quantit&agrave; di materiale biologico di partenza per l&#39;analisi di espressione genica. Abbiamo sviluppato un metodo semplice per la gene expression profiling da piccole quantit&agrave; di materiale biologico dalla combinazione lineare (T7 RNA polimerasi) amplificazione ed esponenziale (PCR). Modificando il protocollo SMART ampiamente usato, abbiamo combinato la legatura del promotore T7 e amplificazione di PCR in un unico passaggio e generato circa 0,5 microg di PCRcDNA da 30 ng di RNA totale in un unico PCR. La PCRcDNA in vitro &egrave; stato trascritto da T7 RNA polimerasi RNA complementare (cRNA), che poi &egrave; stato usato per ibridare Affymetrix GeneChips di generare. I nostri risultati hanno dimostrato una correlazione lineare tra l&#39;amplificazione di PCR e l&#39;amplificazione lineare convenzionale in rapporti di espressione di gene di specie di trascrizione individuali tra due diverse preparazioni di RNA. Il metodo &egrave; stato validato ulteriormente dalle reazioni TaqMan. Inoltre, entrambi lineari e metodi di PCR ha mostrato alcuni bias inerenti quanto a cui sono state rilevate le trascrizioni, suggerendo che entrambi in parallelo utilizzando pu&ograve; fornire una copertura pi&ugrave; esauriente del transcriptome presente in un dato campione.

Un metodo per analisi di espressione genica di minuto materiali biologici del oligonucleotide.

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5E83;&#x304F;&#x767A;&#x73FE;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x4EBA;&#x6C17;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x5F62;&#x5F0F;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306F;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x306F;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5927;&#x91CF;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x51FA;&#x767A;&#x7269;&#x8CEA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6307;&#x6570; (PCR) &#x3068;&#x7DDA;&#x5F62; &#xFF08;T7 RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF09; &#x5897;&#x5E45;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5C11;&#x91CF;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7C21;&#x6613;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B9;&#x30DE;&#x30FC;&#x30C8; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;T7 &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D50;&#x7D2E;&#x304A;&#x3088;&#x3073; PCR &#x5897;&#x5E45;&#x30EF;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;0.5 0.5&#x3001;5&#x3001;50&#x3001;500 PCRcDNA &#x306E; 30 &#x304B;&#x3089;&#x307E;&#x308F;&#x308A;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x5358;&#x4E00; PCR &#x306E;&#x7DCF; RNA &#x306E; ng&#x3002;PCRcDNA&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30B9; GeneChips &#x4EA4;&#x914D;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684; RNA (cRNA) &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B; T7 RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199; in vitro &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; PCR &#x5897;&#x5E45;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6BD4;&#x3067;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30EA;&#x30CB;&#x30A2;&#x5897;&#x5E45;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x7A2E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B; RNA &#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x76F8;&#x95A2;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B; TaqMan &#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x3068; PCR &#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x4E26;&#x5217;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x30AB;&#x30D0;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x5FAE;&#x5C0F;&#x751F;&#x4F53;&#x8A66;&#x6599;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3002;

&#xC9C4; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; &#xCC28;&#xB3D9; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xC7A5; &#xC778;&#xAE30; &#xC788;&#xB294; &#xD615;&#xC2DD; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; oligonucleotide array&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Oligonucleotide &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xD55C;&#xACC4;&#xB294; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xB9CE;&#xC740; &#xC591;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC2DC;&#xC791; &#xC790;&#xB8CC; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;. &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC7AC;&#xB8CC;&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC791;&#xC740; &#xAE08;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xD615; (T7 RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;) &#xC99D;&#xD3ED; (PCR) &#xC9C0; &#xC218;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC2A4;&#xB9C8;&#xD2B8; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC218;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; T7 &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xACB0; &#xCC30; &#xBC0F; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; PCR &#xC99D;&#xD3ED;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xACE0; 30&#xC5D0;&#xC11C; Pcrcdna&#xC758; 0.5 microg &#xC8FC;&#xC704;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC77C; PCR &#xCD1D; RNA&#xC758; ng. Pcrcdna&#xB294; &#xCCB4; &#xC678; T7 RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xB2E4;&#xC74C; &#xAD50;&#xBC30; Affymetrix GeneChips &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC644; RNA (cRNA)&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; PCR &#xD655;&#xB300;&#xC640; &#xC0AC;&#xC774; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; RNA &#xC900;&#xBE44; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC131;&#xC801;&#xD45C; &#xC885;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xBE44;&#xC728; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xC120;&#xD615; &#xC99D;&#xD3ED; &#xAC04;&#xC758; &#xC120;&#xD615; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xCD94;&#xAC00; TaqMan &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC774; &#xAC80;&#xC0AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB458; &#xB2E4; &#xC120;&#xD615; PCR &#xBC29;&#xBC95; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC; &#xC77C;&#xBD80; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;&#xB294; &#xC131;&#xC801; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB41C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xB458; &#xB2E4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; transcriptome &#xC8FC;&#xC5B4;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xB354; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBD84; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC18C;&#xC7AC;&#xB85C; oligonucleotide &#xBC30;&#xC5F4; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC29;&#xBC95;.

Perfil de expresi&oacute;n g&eacute;nica ha sido ampliamente utilizado en la identificaci&oacute;n de genes expresados diferencialmente. Uno de los formatos m&aacute;s populares es la matriz de oligonucle&oacute;tidos. Una limitaci&oacute;n de matrices de oligonucle&oacute;tidos es el requisito de relativamente grandes cantidades de materiales biol&oacute;gicos de partida para el an&aacute;lisis de expresi&oacute;n g&eacute;nica. Hemos desarrollado un m&eacute;todo simple para expresi&oacute;n g&eacute;nica perfiles de cantidades muy peque&ntilde;as de material biol&oacute;gico combinando exponencial (PCR) y linear de la amplificaci&oacute;n (T7 ARN polimerasa). Modificando el protocolo inteligente ampliamente utilizado, combin&oacute; la ligadura promotor T7 y amplificaci&oacute;n por PCR en un solo paso y generan alrededor de 0.5 microg de PCRcDNA de 30 ng de ARN total en una sola PCR. El PCRcDNA fue in vitro transcrito por T7 ARN polimerasa RNA complementaria (cRNA), que luego fue utilizada para hibridar Affymetrix GeneChips de generar. Nuestros resultados demuestran una correlaci&oacute;n lineal entre la amplificaci&oacute;n por PCR y la amplificaci&oacute;n lineal convencional en los coeficientes de la expresi&oacute;n de genes de especies individuales de transcripci&oacute;n entre dos diferentes preparaciones de RNA. Adem&aacute;s, el m&eacute;todo fue validado por TaqMan reacciones. Por otra parte, tanto lineal y m&eacute;todos de PCR mostraron algunos sesgos inherentes en cuanto a que se detectaron transcripciones, sugiriendo que ambos en paralelo utilizando puede proporcionar una cobertura m&aacute;s amplia de la transcriptoma presente en una muestra determinada.

Un m&eacute;todo para el an&aacute;lisis de expresi&oacute;n g&eacute;nica por matrices de oligonucle&oacute;tidos de materiales biol&oacute;gicos minutos.

&#x5F53;&#x751F;&#x4EA7;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x9884;&#x671F;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x901A;&#x5E38;&#x88AB;&#x96C6;&#x6210;&#x5230;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7531;&#x968F;&#x673A;&#x63D2;&#x5165;&#x3002;&#x968F;&#x540E;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x662F;&#x53EF;&#x53D6;&#x7684;&#x8981;&#x77E5;&#x9053;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x62F7;&#x8D1D;&#x6570;&#x548C;&#x5176;&#x540E;&#x4EE3;&#x7684;&#x5375;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x968F;&#x673A;&#x63D2;&#x5165;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4EC5;&#x7531;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4F5C;&#x51FA;&#x4F30;&#x8BA1;&#x3002;&#x5373;&#x4F7F;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x63A2;&#x9488;&#x5B9E;&#x65F6;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5B83;&#x7ECF;&#x5E38;&#x7528;&#x4E8E;&#x91CF;&#x5316;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5927;&#x4E8E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6216;&#x591A;&#x4E2A;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x5468;&#x671F;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x63A2;&#x9488;&#x5B9A;&#x91CF; pcr &#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x8C35;&#x5984;&#x548C; hemizygote &#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x53EA;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8367;&#x5149;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x5375;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8861;&#x91CF;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8003;&#x8651;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x5185;&#x90E8;&#x63A7;&#x5236;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; DNA &#x7684;&#x9608;&#x503C;&#x5468;&#x671F; (Ct)&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; scatterplots &#x548C;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x63A8;&#x65AD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x7EAF;&#x5408;&#x4F53;&#x548C; hemizygotes &#x53EF;&#x4EE5;&#x52A0;&#x4EE5;&#x533A;&#x5206;&#x660E;&#x786E;&#x65F6;&#x591A;&#x4E2A;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x6D4B;&#x91CF;&#x548C;&#x63A2;&#x9488;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6A21;&#x578B;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6269;&#x5C55;&#x5230;&#x9700;&#x8981;&#x751A;&#x81F3;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x7CBE;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5982;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6709;&#x673A;&#x4F53;&#x7684;&#x591A;&#x500D;&#x4F53;&#x80B2;&#x79CD;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x9886;&#x57DF;&#x3002;

&#x4E00;&#x79CD;&#x786E;&#x5B9A;&#x63A2;&#x9488;&#x5B9E;&#x65F6;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x5375;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

When producing a genetically modified organism, intended genes are often integrated into a target genome by random insertions. Subsequently, it is often desirable to know the gene copy number of the transgenic organism and the zygosity of its offspring. Because of the random insertions, the estimation can be made only by quantitative measurement of the genes. Even though TaqMan real-time PCR has been used in gene expression analysis, it is routinely used to quantify differences larger than twofold or more than one PCR cycle. In this study, we employed TaqMan quantitative PCR to determine zygosity of transgenic fluorescent zebrafish in which a homozygote and a hemizygote differ by only twofold. We measured relative quantities of the transgene by taking the threshold cycle (Ct) of both the transgene and an internal control zebrafish genomic DNA. Using scatterplots and statistical inference, we demonstrated that homozygotes and hemizygotes could be differentiated unambiguously when multiple measurements were taken. We discuss the relationship between the repetitive measurements and TaqMan precision with a statistical model. The result illustrates that the method can be extended to some areas that require even higher precision such as determining the polyploidy of an organism.

A method for determining zygosity of transgenic zebrafish by TaqMan real-time PCR.

Lorsque vous g&eacute;n&eacute;rez un organisme g&eacute;n&eacute;tiquement modifi&eacute;, g&egrave;nes pr&eacute;vus sont souvent int&eacute;gr&eacute;s dans un g&eacute;nome cible par des insertions al&eacute;atoires. Par la suite, il est souvent souhaitable de conna&icirc;tre le nombre de copies du g&egrave;ne de l&#39;organisme transg&eacute;nique et la g&eacute;mellit&eacute; de sa prog&eacute;niture. En raison des insertions al&eacute;atoires, l&#39;estimation est possible seulement par la mesure quantitative des g&egrave;nes. M&ecirc;me si TaqMan Real-time PCR a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e dans l&#39;analyse de l&#39;expression g&eacute;nique, il est couramment utilis&eacute; pour quantifier les diff&eacute;rences plus grands que le double ou plus d&#39;un cycle PCR. Dans cette &eacute;tude, nous avons utilis&eacute; TaqMan PCR quantitative pour d&eacute;terminer la g&eacute;mellit&eacute; de zebrafish fluorescent transg&eacute;nique, dans lequel un homozygote et un hemizygote diff&egrave;rent par la seule double. Nous avons mesur&eacute; les quantit&eacute;s relatives du transg&egrave;ne en prenant le cycle seuil (Ct) du transg&egrave;ne et un ADN g&eacute;nomique de poisson-z&egrave;bre de contr&ocirc;le interne. &Agrave; l&#39;aide de diagrammes de dispersion et d&#39;inf&eacute;rence statistique, nous avons d&eacute;montr&eacute; que homozygotes et h&eacute;mizygotes pouvaient &ecirc;tre diff&eacute;renci&eacute;s sans ambigu&iuml;t&eacute; lorsque plusieurs mesures ont &eacute;t&eacute; prises. Nous discutons de la relation entre les mesures r&eacute;p&eacute;titives et TaqMan pr&eacute;cision avec un mod&egrave;le statistique. Le r&eacute;sultat montre que la m&eacute;thode peut &ecirc;tre &eacute;tendue &agrave; certains domaines qui exigent une pr&eacute;cision encore plus &eacute;lev&eacute;e par exemple d&eacute;terminer la polyplo&iuml;die de l&#39;organisme.

Une m&eacute;thode de d&eacute;termination de g&eacute;mellit&eacute; de zebrafish transg&eacute;nique par TaqMan PCR en temps r&eacute;el.

Verfahren zum Bestimmen der Zygotie transgene Zebrafisch mittels TaqMan-Echtzeit-PCR.

Quando si produce un organismo geneticamente modificato, geni destinati spesso sono integrati in un genoma bersaglio da inserimenti casuali. Successivamente, &egrave; spesso desiderabile per conoscere il numero di copie del gene dell&#39;organismo transgenico e l&#39;eterozigosi della sua prole. A causa di inserimenti casuali, la stima pu&ograve; essere fatta solo misurazione quantitativa dei geni. Anche se TaqMan real-time PCR &egrave; stato utilizzato in analisi di espressione genica, &egrave; ordinariamente utilizzato per quantificare le differenze pi&ugrave; grandi di duplice o pi&ugrave; di un ciclo di PCR. In questo studio, abbiamo impiegato TaqMan PCR quantitativa per determinare eterozigosi del transgenico fluorescente zebrafish in cui un omozigote e un hemizygote differiscono da soltanto duplice. Abbiamo misurato la quantit&agrave; relativa del transgene prendendo il ciclo soglia (Ct) il transgene sia di un controllo interno dello zebrafish DNA genomic. Utilizzando scatterplot e inferenza statistica, abbiamo dimostrato che gli omozigoti ed emizigoti potrebbero essere differenziati senza ambiguit&agrave; quando furono eseguite misurazioni multiple. Discutiamo il rapporto fra le misure ripetitive e precisione TaqMan con un modello statistico. Il risultato viene illustrato che il metodo pu&ograve; essere esteso ad alcune aree che richiedono maggiore precisione quali determinare la poliploidia di un organismo.

Un metodo per la determinazione di eterozigosi di zebrafish transgenici mediante TaqMan PCR in tempo reale.

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x751F;&#x7269;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x610F;&#x56F3;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306A;&#x633F;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x6570;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5B50;&#x5B6B;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;&#x578B;&#x3092;&#x77E5;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x671B;&#x307E;&#x3057;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306A;&#x633F;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x307F;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; PCR &#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x7528;&#x3044;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x65E5;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x4E8C;&#x91CD;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 1 &#x3064;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E; PCR &#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x96A0;&#x3057;&#x3082;&#x3061;&#x3068;&#x3001;hemizygote &#x304C;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x6295;&#x7A3F;&#x3092;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;&#x578B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B; TaqMan &#x91CF;&#x7684;&#x306A; PCR &#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;transgene &#x3068;&#x5185;&#x90E8;&#x7D71;&#x5236;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5; DNA &#x306E;&#x3057;&#x304D;&#x3044;&#x5024;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#xFF08;Ct&#xFF09; &#x3092;&#x53D6;&#x3063;&#x3066;&#x3001;transgene &#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x91CF;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6563;&#x5E03;&#x56F3;&#x3068;&#x7D71;&#x8A08;&#x63A8;&#x8AD6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x304C;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x6025;&#x6027;&#x3068; hemizygotes &#x660E;&#x78BA;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x53CD;&#x5FA9;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3068; TaqMan &#x7CBE;&#x5EA6;&#x7D71;&#x8A08;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x6709;&#x6A5F;&#x4F53;&#x306E;&#x500D;&#x6570;&#x6027;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; PCR &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;&#x578B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3002;

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615;&#xB41C; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC885;&#xC885; &#xBB34;&#xC791;&#xC704; &#xC0BD;&#xC785; &#xD558; &#xC5EC; &#xB300;&#xC0C1; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xD6C4;,&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xCCB4;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xC0AC; &#xBC88;&#xD638;&#xC640; &#xADF8; &#xC790;&#xC190;&#xC758; zygosity&#xB97C; &#xC54C;&#xACE0; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC784;&#xC758; &#xC0BD;&#xC785; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xCD94;&#xC815; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC11C;&#xB9CC; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. TaqMan &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xBE44;&#xB85D; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB610;&#xB294; &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; PCR &#xC8FC;&#xAE30; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD070; &#xCC28;&#xC774; &#xCC99;&#xB3C4;&#xB97C; &#xC77C;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; homozygote&#xC640; hemizygote&#xB294; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; 2 &#xC911;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xD615;&#xAD11; zebrafish&#xC758; zygosity &#xACB0;&#xC815; TaqMan &#xC591;&#xC774; &#xB9CE;&#xC740; PCR &#xACE0;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; transgene &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC81C;&#xC5B4; zebrafish genomic DNA&#xC758; &#xC784;&#xACC4;&#xAC12; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; (Ct) &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C1;&#xB300;&#xB97C; transgene &#xC218;&#xB7C9; &#xCE21;&#xC815;. Scatterplots &#xBC0F; &#xD1B5;&#xACC4;&#xC801; &#xCD94;&#xB860;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; homozygotes&#xC640; hemizygotes &#xC218; &#xBD84;&#xD654; &#xB420; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCE21;&#xC815; &#xCC0D;&#xC740; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC18;&#xBCF5; &#xCE21;&#xC815; &#xBC0F; &#xD1B5;&#xACC4; &#xBAA8;&#xB378; TaqMan &#xC815;&#xBC00;&#xB3C4; &#xAD00;&#xACC4; &#xC124;&#xBA85;. &#xACB0;&#xACFC; &#xAE30;&#xCCB4;&#xC758; polyploidy &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB4F1; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC815;&#xBC00;&#xB3C4; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xC77C;&#xBD80; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD655;&#xC7A5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

TaqMan &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; zebrafish&#xC758; zygosity&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;.

Cuando se produce un organismo gen&eacute;ticamente modificado, genes destinados a menudo est&aacute;n integrados en un genoma de destino por inserciones aleatorias. Posteriormente, a menudo es deseable conocer el n&uacute;mero de copias del gen del organismo transg&eacute;nico y el zygosity de su descendencia. Debido a las inserciones aleatorias, la estimaci&oacute;n es posible solamente por la medici&oacute;n cuantitativa de los genes. Aunque TaqMan PCR a tiempo real se ha utilizado en el an&aacute;lisis de expresi&oacute;n g&eacute;nica, habitualmente se utiliza para cuantificar las diferencias m&aacute;s grandes que el doble o m&aacute;s de un ciclo PCR. En este estudio, empleamos TaqMan PCR cuantitativa para determinar zygosity de pez cebra fluorescente transg&eacute;nico en los que un homozigoto y un hemizygote difieren por s&oacute;lo doble. Para medir cantidades relativas del transg&eacute;n tomando el ciclo umbral (Ct) de un ADN gen&oacute;mico del pez cebra de control interno y el transg&eacute;n. Usando diagramas de dispersi&oacute;n y la inferencia estad&iacute;stica, demostramos que homozigotos y hemizygotes podr&iacute;a distinguir claramente cuando se tomaron varias medidas. Discutimos la relaci&oacute;n entre las medidas repetitivas y TaqMan precisi&oacute;n con un modelo estad&iacute;stico. El resultado muestra que el m&eacute;todo puede ampliarse a algunas &aacute;reas que requieren mayor precisi&oacute;n como determinar la poliploid&iacute;a de un organismo.

Un m&eacute;todo para determinar zygosity de pez cebra transg&eacute;nico por PCR en tiempo real TaqMan.

&#x603B; RNA &#x901A;&#x8FC7;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x82AF;&#x7247;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x667A;&#x80FD;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6240;&#x91CF;&#x7684;&#x653E;&#x5927;&#x3002;

Amplification of nanogram amounts of total RNA by the SMART-based PCR method for high-density oligonucleotide microarrays.

Amplification des montants nanogramme d&#39;ARN total par la m&eacute;thode PCR bas&eacute;e sur la puce pour les puces &agrave; haute densit&eacute; d&#39;oligonucl&eacute;otide.

Verst&auml;rkung der Nanogram Mengen total RNA von der Smartcard-basierten PCR-Methode f&uuml;r High-Density Oligonucleotide Microarrays.

Amplificazione degli importi nanogrammo di RNA totale dal metodo PCR basata su SMART per i microarrays del oligonucleotide ad alta densit&agrave;.

&#x7DCF; RNA &#x306F;&#x30B9;&#x30DE;&#x30FC;&#x30C8; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; pcr &#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x91CF;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;

&#xB098;&#xB178; &#xADF8;&#xB7A8; &#xC591;&#xC758; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; oligonucleotide microarrays&#xC758; &#xC2A4;&#xB9C8;&#xD2B8; &#xAE30;&#xBC18; PCR &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD1D; RNA&#xC758; &#xC99D;&#xD3ED;.

Amplificaci&oacute;n de cantidades de nanogramos de ARN total por el m&eacute;todo PCR basadas en SMART para microarrays de alta densidad del oligonucle&oacute;tido.

&#x80F0;&#x817A;&#x817A;&#x6CE1;&#x840E;&#x7F29; (PAA) &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x80F0;&#x817A;&#x5916;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x662F;&#x5FB7;&#x56FD;&#x7267;&#x7F8A;&#x72AC;&#x80F0;&#x817A;&#x5916;&#x5206;&#x6CCC;&#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x7EE7;&#x627F;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x5747;&#x663E;&#x793A;&#x5355;&#x4E00;&#x57FA;&#x56E0;&#x5206;&#x79BB;&#x4E2D;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7684;&#x9690;&#x6027;&#x65F6;&#x5C1A;&#x662F;&#x4E34;&#x65F6;&#x673A;&#x573A;&#x7BA1;&#x7406;&#x5C40;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x81F4;&#x75C5;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C1A;&#x672A;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6807;&#x8BC6;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x5229;&#x76CA;&#x548C;/&#x6216;&#x5019;&#x9009;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x884C;&#x8054;&#x7CFB;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;384 &#x5FAE;&#x536B;&#x661F;&#x6807;&#x8BB0;&#x5206;&#x6790;&#x9020;&#x6210; 2.5 &#x6700;&#x5927;&#x4E24;&#x70B9; LOD &#x5206;&#x6570;&#x4E0A; CFA03 FH2107&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x9635;&#x5217;&#x6765;&#x751F;&#x6210;&#x6B63;&#x5E38;&#x548C;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684; pancreata &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x3002;&#x5B83;&#x63ED;&#x793A; 244 &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x4E24;&#x500D;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5927;&#x4E8E;&#x3002;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x4E94;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x63A2;&#x9488;&#x5B9E;&#x65F6;&#x8367;&#x5149;&#x5B9A;&#x91CF; RT-PCR &#x8BC1;&#x5B9E;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4F7F;&#x7528;&#x82AF;&#x7247;&#x7684;&#x8D8B;&#x52BF;&#x88AB;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x8BC4;&#x4F30;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;gp25L&#xFF0C;CFA03&#xFF0C;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x65E0;&#x6CD5;&#x7F16;&#x7801;&#x7531;&#x591A;&#x4E2A; 500-fold &#x5728;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684; pancreata &#x548C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5019;&#x9009;&#x57FA;&#x56E0;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x5E8F;&#x5217;&#x6570;&#x636E;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x8868;&#x660E;&#x9694;&#x79BB;&#x4E0E;&#x4E34;&#x65F6;&#x673A;&#x573A;&#x7BA1;&#x7406;&#x5C40;&#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;

&#x8FDE;&#x9501;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x7684;&#x80F0;&#x817A;&#x817A;&#x6CE1;&#x840E;&#x7F29;&#x7684;&#x5FB7;&#x56FD;&#x7267;&#x7F8A;&#x72AC;&#x3002;

Pancreatic acinar atrophy (PAA) is a degenerative disease of the exocrine pancreas and is the most common cause of exocrine pancreatic insufficiency in the German Shepherd Dog. Analyses of inheritance have shown that a single gene segregating in an autosomal recessive fashion is causative for PAA. To date the gene and causative mutation have not been determined. To identify a region of interest and/or candidate genes, we conducted linkage and gene expression studies. Analysis of 384 microsatellite markers resulted in a maximum two-point LOD score of 2.5 for FH2107 on CFA03. We used an oligonucleotide array to generate gene expression profiles for normal and affected pancreata. It revealed 244 genes with greater than two-fold difference in expression levels. Five genes of interest were further assessed by TaqMan quantitative real-time RT-PCR that confirmed trends observed using the microarray. One gene, gp25L, located on CFA03, was found to be downregulated by more than 500-fold in affected pancreata and was further investigated as a candidate gene. Sequence data did not reveal a mutation in the coding sequence that segregates with PAA.

Linkage analysis and gene expression profile of pancreatic acinar atrophy in the German Shepherd Dog.

Atrofia acinar pancre&aacute;tica (PAA) es una enfermedad degenerativa del p&aacute;ncreas exocrino y es la causa m&aacute;s com&uacute;n de Insuficiencia Pancre&aacute;tica Exocrina en el perro de Pastor Alem&aacute;n. An&aacute;lisis de la herencia han demostrado que un solo gen segregando en forma autos&oacute;mica recesiva es causal para la PAA. Hasta la fecha no se ha determinado el gen y la mutaci&oacute;n causativa. Para identificar una regi&oacute;n de genes de inter&eacute;s y/o candidato, realizamos estudios de expresi&oacute;n de vinculaci&oacute;n y gene. An&aacute;lisis de los marcadores del microsatellite 384 dio lugar a una puntuaci&oacute;n m&aacute;xima de LOD dos puntos de 2.5 para FH2107 en CFA03. Utilizamos una matriz de oligonucle&oacute;tidos para generar perfiles de expresi&oacute;n g&eacute;nica para pancreata normal y afectado. Revel&oacute; 244 genes con m&aacute;s de doble de diferencia en los niveles de expresi&oacute;n. TaqMan cuantitativa RT-PCR en tiempo real que confirm&oacute; tendencias observadas usando los microarrays determinaron m&aacute;s cinco genes de inter&eacute;s. Un gen, gp25L, situado en CFA03, fue encontrado para ser reguladas por m&aacute;s de 500-fold en pancreata afectado y estaba investigando como genes candidatos. Datos de la secuencia no revel&oacute; una mutaci&oacute;n en la secuencia de codificaci&oacute;n que segrega con PAA.

Acoplamiento an&aacute;lisis y gene Perfil de expresi&oacute;n de la atrofia acinar pancre&aacute;tica en el perro de Pastor Alem&aacute;n.

Atrophie acinaire pancr&eacute;atique (AAP) est une maladie d&eacute;g&eacute;n&eacute;rative du pancr&eacute;as exocrine et est la cause la plus fr&eacute;quente de l&#39;insuffisance pancr&eacute;atique exocrine chez le chien de berger allemand. Analyses d&#39;h&eacute;ritage ont montr&eacute; qu&#39;un seul g&egrave;ne de s&eacute;parer de fa&ccedil;on autosomique r&eacute;cessive est causal de l&#39;AAP. &Agrave; ce jour le g&egrave;ne et la mutation causale n&#39;ont pas &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;es. Pour identifier une r&eacute;gion des g&egrave;nes d&#39;int&eacute;r&ecirc;t et/ou de candidat, nous avons men&eacute; des &eacute;tudes sur l&#39;expression g&eacute;n&eacute;tique et le g&egrave;ne. Analyse de 384 marqueurs microsatellites a un score maximal de LOD de deux points de 2,5 pour FH2107 sur CFA03. Nous avons utilis&eacute; un oligonucl&eacute;otide pour g&eacute;n&eacute;rer des profils d&#39;expression g&eacute;nique pour pancr&eacute;as normal et touch&eacute;es. Il a r&eacute;v&eacute;l&eacute; &agrave; 244 g&egrave;nes pr&eacute;sentant plus de double diff&eacute;rence dans les niveaux d&#39;expression. Cinq g&egrave;nes d&#39;int&eacute;r&ecirc;t &eacute;taient encore &eacute;valu&eacute;s par TaqMan quantitative RT-PCR en temps r&eacute;el qui a confirm&eacute; les tendances observ&eacute;es &agrave; l&#39;aide de la biopuce. Un seul g&egrave;ne, gp25L, situ&eacute; sur CFA03, s&#39;est av&eacute;r&eacute; pour &ecirc;tre r&eacute;prim&eacute;s par plus de 500 fois dans le pancr&eacute;as touch&eacute;e et a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute; plus loin comme un g&egrave;ne candidat. Donn&eacute;es de s&eacute;quence n&#39;a pas r&eacute;v&eacute;l&eacute; une mutation dans la s&eacute;quence codante qui s&eacute;pare avec AAP.

Linkage analysis and g&egrave;ne profil d&#39;expression de l&#39;atrophie acinaire pancr&eacute;atique chez le chien de berger allemand.

Pankreas Azinus Atrophie (PAA) ist eine degenerative Erkrankung des exokrinen Pankreas und ist die h&auml;ufigste Ursache f&uuml;r exokrine Pankreasinsuffizienz in Deutschen Sch&auml;ferhundes. Analysen der Vererbung haben gezeigt, dass ein einzelnes Gen Segregieren in als autosomal rezessiv vererbte urs&auml;chliche f&uuml;r PAA. Bis heute wurden die Gene und die urs&auml;chliche Mutation nicht bestimmt. Um eine Region Interesse und/oder Kandidat Gene zu identifizieren, haben wir die Bindung und Gen-Ausdruck-Studien durchgef&uuml;hrt. Analyse von 384 Microsatellite Markierungen wurden eine maximale Zweipunkt-LOD-Score von 2,5 f&uuml;r FH2107 auf CFA03. Wir haben ein Oligonukleotid-Array um Gen-Ausdruck-Profile f&uuml;r normal und betroffenen Pancreata zu generieren. Es ergab 244 Gene mit doppelten Unterschied in Stufen gr&ouml;&szlig;er. F&uuml;nf Gene wurden weiter durch TaqMan quantitative Real-Time RT-PCR bewertet, die mit der Microarray beobachtet Trends best&auml;tigt. Ein Gen, gp25L, auf CFA03, Downregulated durch mehr als 500-fold in den betroffenen Pancreata befunden und wurde als Kandidat gen weiter untersucht. Sequenzdaten ergab keine Mutation in der kodierende Sequenz, die mit PAA abgrenzt wird.

Gest&auml;nge Analyse und Gen Ausdruck Profil der Pankreas Azinus Atrophie in der Deutsche Sch&auml;ferhund.

Atrofia acinose del pancreas (PAA) &egrave; una malattia degenerativa del pancreas esocrino ed &egrave; la causa pi&ugrave; comune di insufficienza pancreatica esocrina nel cane da pastore tedesco. Analisi dell&#39;eredit&agrave; hanno dimostrato che un singolo gene segreganti autosomico recessivo &egrave; causativo per PAA. Ad oggi il gene e la mutazione causale non sono stati determinati. Per identificare una regione di interesse e/o candidato geni, abbiamo condotto studi di espressione genica e sollevatore. Analisi dei marcatori microsatellite 384 risultarono un punteggio massimo di due punti LOD di 2.5 per FH2107 su CFA03. Abbiamo usato un array di oligonucleotidi per generare profili di espressione genica per pancreata normale e colpita. &Egrave; rivelato 244 geni con maggiore di duplice differenza nei livelli di espressione. Cinque geni di interesse sono stati ulteriormente valutati da TaqMan real-time RT-PCR quantitativa che ha confermato le tendenze osservate usando il microarray. Un gene, gp25L, che si trova su CFA03, &egrave; stato trovato per essere downregolata da pi&ugrave; di 500-fold in pancreata colpita e pi&ugrave; ulteriormente &egrave; stato studiato come un gene candidato. Dati di sequenza non hanno rivelato una mutazione nella sequenza codifica che segrega con PAA.

Linkage analysis e gene expression profile di atrofia acinose del pancreas nel cane da pastore tedesco.

&#x81B5;&#x817A;&#x623F;&#x306E;&#x840E;&#x7E2E; (PAA) &#x81B5;&#x5916;&#x5206;&#x6CCC;&#x6027;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3; &#x30FB; &#x30B7;&#x30A7;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C9;&#x72AC;&#x306E;&#x81B5;&#x5916;&#x5206;&#x6CCC;&#x4E0D;&#x5168;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7D99;&#x627F;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x52A3;&#x6027;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C; PAA &#x306E;&#x4F7F;&#x5F79;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x65E5;&#x306B;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x539F;&#x56E0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5909;&#x7570;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x3084;&#x5019;&#x88DC;&#x8005;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;384 &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30B5;&#x30C6;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C8; &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x89E3;&#x6790; FH2107 CFA03 &#x4E0A;&#x3067;&#x6700;&#x5927; 2 &#x70B9; LOD &#x30B9;&#x30B3;&#x30A2; 2.5 &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x81B5;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;244 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E; 2 &#x500D;&#x5DEE;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x3068;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x3042;&#x308B; 5 &#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B; TaqMan &#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; RT-PCR &#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306E;&#x50BE;&#x5411;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;CFA03 &#x4E0A;&#x306B;&#x3042;&#x308B; 1 &#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;gp25L&#x3001;downregulated &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EE5;&#x4E0A; 500-fold &#x3067;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x81B5;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5019;&#x88DC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x5206;&#x96E2; PAA &#x3068;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x81B5;&#x817A;&#x623F;&#x306E;&#x840E;&#x7E2E;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3; &#x30FB; &#x30B7;&#x30A7;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C9;&#x72AC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;

&#xCDCC; &#xC7A5; acinar &#xC704;&#xCD95; (PAA) exocrine &#xCDCC;&#xC758; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658; &#xC774;&#xBA70; &#xB3C5;&#xC77C; &#xC170;&#xD37C;&#xB4DC; &#xAC1C;&#xC5D0; exocrine &#xCDCC;&#xC7A5;&#xC554; &#xBD80;&#xC871;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD754;&#xD55C; &#xC6D0;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xC18D;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xC0C1; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC5F4;&#xC131; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; segregating PAA&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xB418;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xC6D0;&#xC778; &#xBCC0;&#xC774; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;. &#xAD00;&#xC2EC; &#xB610;&#xB294; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC5F0;&#xACC4; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. 384 Microsatellite &#xB9C8;&#xCEE4; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; 2.5 &#xCD5C;&#xB300; 2 &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8; LOD &#xC810;&#xC218; cfa03&#xC5D0; fh2107&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;. &#xC9C4; &#xC2DD; &#xC815;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; pancreata&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; oligonucleotide array&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xBC30; &#xCC28;&#xC774; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD070; &#xD568;&#xAED8; 244 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1D;&#xD600;. &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; 5 &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; TaqMan &#xC591;&#xC801; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; RT-PCR&#xB97C; microarray&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xCD94;&#xAC00; &#xB410;&#xB2E4;. &#xD55C; &#xC9C4;, gp25L, CFA03&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;&#xD55C; downregulated&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; pancreata &#xC774;&#xC0C1; 500-fold &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xCD94;&#xAC00; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB85C; &#xC870;&#xC0AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; PAA&#xC640; &#xBD84;&#xB9AC; &#xCF54;&#xB529; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;.

&#xC5F0;&#xACC4; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xB3C5;&#xC77C; &#xC170;&#xD37C;&#xB4DC; &#xAC1C;&#xC5D0; &#xCDCC; &#xC7A5; acinar &#xC704;&#xCD95;.

&#x5229;&#x7528;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838; (SCNT) &#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x751F;&#x6B96;&#x6548;&#x7387;&#x4F9D;&#x7136;&#x4E0D;&#x7406;&#x60F3;&#x3002;&#x5404;&#x79CD;&#x52AA;&#x529B;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#xFF0C;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x8F6C;&#x79FB; (CT) &#x514B;&#x9686;&#x514B;&#x9686;&#x805A;&#x5408; &#xFF08;NTagg&#xFF09; &#x5DF2;&#x62A5;&#x544A;&#x548C;&#x751F;&#x4EA7;&#x6D3B;&#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x3002;&#x80FD;&#x591F;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x4E86;&#x89E3;&#x671F;&#x95F4; SCNT &#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5404;&#x79CD; SCNT &#x65B9;&#x6CD5;&#x5728;&#x5206;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0A;&#x7684;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x725B;&#x7684;&#x56CA;&#x80DA;&#x751F;&#x4EA7;&#x901A;&#x8FC7;&#x6807;&#x51C6;&#x6838;&#x8F6C;&#x8BA9; (NT) CT&#x3001; NTagg&#xFF0C;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x53D7;&#x7CBE; (IVF) &#x548C;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x53D7;&#x7CBE; (AI)&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6350;&#x52A9;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x725B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x9635;&#x5217;&#x6267;&#x884C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x3002;SCNT &#xFF08;NT&#xFF0C;CT&#x3001; NTagg) &#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x4E0E;&#x4F53;&#x5916;&#x53D7;&#x7CBE;&#x548C; AI &#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F5C;&#x4E86;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;NT &#x548C; CT &#x80DA;&#x80CE;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x96BE;&#x4EE5;&#x533A;&#x5206;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;AI &#x6216;&#x4F53;&#x5916;&#x53D7;&#x7CBE;&#x80DA;&#x80CE;&#x76F8;&#x5BF9; NTagg &#x80DA;&#x80CE;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8868;&#x8FBE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x662F;&#x5927;&#x5927;&#x9AD8;&#x4E8E; NT &#x548C; CT &#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x3002;&#x6807;&#x8BC6;&#x6240;&#x6709; SCNT &#x80DA;&#x80CE;&#x548C; AI &#x6216;&#x4F53;&#x5916;&#x53D7;&#x7CBE;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8868;&#x8FBE;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x4E00;&#x534A;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x653E;&#x5BBD; SCNT &#x548C; AI &#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0E; AI &#x80DA;&#x80CE;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; SCNT &#x65B9;&#x6CD5;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x6539;&#x53D8;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x66F4;&#x52A0;&#x76F8;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#xFF0C;&#x59A5;&#x534F; SCNT &#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x5C31;&#x662F;&#x7B2C;&#x4E00;&#x5957;&#x5168;&#x9762;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x5206;&#x6790;&#x5206;&#x5B50;&#x5404;&#x79CD;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5BF9;&#x725B;&#x65E9;&#x671F;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x5168;&#x7403;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x725B;&#x56CA;&#x80DA;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Reproductive efficiency using somatic cell nuclear transfer (SCNT) technology remains suboptimal. Of the various efforts to improve the efficiency, chromatin transfer (CT) and clone-clone aggregation (NTagg) have been reported to produce live cloned animals. To better understand the molecular mechanisms of somatic cell reprogramming during SCNT and assess the various SCNT methods on the molecular level, we performed gene expression analysis on bovine blastocysts produced via standard nuclear transfer (NT), CT, NTagg, in vitro fertilization (IVF), and artificial insemination (AI), as well as on somatic donor cells, using bovine genome arrays. The expression profiles of SCNT (NT, CT, NTagg) embryos were compared with IVF and AI embryos as well as donor cells. NT and CT embryos have indistinguishable gene expression patterns. In comparison to IVF or AI embryos, the number of differentially expressed genes in NTagg embryos is significantly higher than in NT and CT embryos. Genes that were differentially expressed between all the SCNT embryos and IVF or AI embryos are identified. Compared to AI embryos, more than half of the genes found deregulated between SCNT and AI embryos appear to be the result of in vitro culture alone. The results indicate that although SCNT methods have altered differentiated somatic nuclei gene expression to more closely resemble that of embryonic nuclei, combination of insufficient reprogramming and in vitro culture condition compromise the developmental potential of SCNT embryos. This is the first set of comprehensive data for analyzing the molecular impact of various nuclear transfer methods on bovine pre-implantation embryos.

Global gene expression analysis of bovine blastocysts produced by multiple methods.

Efficacit&eacute; reproductive &agrave; l&#39;aide de la technologie de transfert nucl&eacute;aire (TNCS) de cellules somatiques reste sous-optimal. Les divers efforts pour am&eacute;liorer l&#39;efficacit&eacute;, le transfert de la chromatine (TC) et l&#39;agr&eacute;gation de clone-clone (NTagg) ont &eacute;t&eacute; signal&eacute;s pour produire des animaux clon&eacute;s. Pour mieux comprendre les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires de reprogrammation de cellules somatiques au cours du SNCT et &eacute;valuer les diff&eacute;rentes m&eacute;thodes de TNCS au niveau mol&eacute;culaire, nous avons effectu&eacute; analyse d&#39;expression g&eacute;nique sur des blastocystes bovins produits par standard transfert nucl&eacute;aire (NT), CT, NTagg, f&eacute;condation in vitro (FIV) et ins&eacute;mination artificielle (IA), ainsi que sur les cellules somatiques, &agrave; l&#39;aide de tableaux de g&eacute;nome bovin. Les profils d&#39;expression des embryons obtenus par TNCS (NT, CT, NTagg) ont &eacute;t&eacute; compar&eacute;s avec les embryons FIV et A&iuml;, mais aussi les cellules du donneur. NT et CT embryons ont des profils d&#39;expression g&eacute;nique indiscernables. En comparaison avec les embryons FIV ou AI, le nombre de g&egrave;nes diff&eacute;rentiellement exprim&eacute;s dans des embryons de NTagg est significativement plus &eacute;lev&eacute; que chez les embryons de NT et CT. Les g&egrave;nes qui sont exprim&eacute;s de fa&ccedil;on diff&eacute;rentielle entre tous les embryons obtenus par TNCS et embryons FIV ou AI sont identifi&eacute;s. Par rapport aux embryons d&#39;AI, plus de la moiti&eacute; des g&egrave;nes trouv&eacute;s d&eacute;r&eacute;glement&eacute; entre les embryons obtenus par TNCS et AI semblent &ecirc;tre le r&eacute;sultat d&#39;une culture in vitro uniquement. Les r&eacute;sultats indiquent que bien que les m&eacute;thodes TNCS ont modifi&eacute; diff&eacute;renci&eacute;s l&#39;expression des g&egrave;nes des noyaux somatiques &agrave; ressemblent davantage que des noyaux embryonnaires, combinaison de reprogrammation insuffisante et l&#39;&eacute;tat de la culture in vitro de compromettre le potentiel de d&eacute;veloppement des embryons obtenus par TNCS. Il s&#39;agit de la premi&egrave;re s&eacute;rie de donn&eacute;es compl&egrave;tes pour l&#39;analyse de l&#39;impact mol&eacute;culaire des diff&eacute;rentes m&eacute;thodes de transfert de noyaux sur l&#39;embryon pr&eacute;-implantatoire bovine.

Global gene expression analysis of bovines blastocystes produites par plusieurs m&eacute;thodes.

Reproduktive Effizienz mit somatischen Kerntransfer (SCNT) Technologie bleibt suboptimale. Die verschiedenen Bem&uuml;hungen zur Verbesserung der Effizienz wurde Chromatin-Transfer (CT) und Klon-Klon Aggregation (NTagg) berichtet, lebenden geklonte Tieren zu produzieren. Um besser zu verstehen, die molekularen Mechanismen der somatischen Umprogrammierung w&auml;hrend SCNT und bewerten die verschiedenen SCNT-Methoden auf molekularer Ebene, f&uuml;hrten wir Genexpressionsanalyse auf bovine Blastozysten produziert &uuml;ber nukleare Standard&uuml;berweisung (NT), CT, NTagg, in Vitro Befruchtung (IVF) und k&uuml;nstliche Befruchtung (AI) sowie auf somatische Spenderzellen, bovine Genom-Arrays verwenden. Der Ausdruck profile SCNT (NT, CT, NTagg) Embryonen wurden mit IVF und AI-Embryonen sowie die Spenderzellen verglichen. NT und CT Embryonen haben ununterscheidbar Genausdruck Muster. Im Vergleich zu IVF oder AI Embryonen ist die Anzahl der differentiell exprimierten Genen NTagg Embryonen deutlich h&ouml;her als im NT und CT-Embryonen. Gene, die zwischen allen SCNT Embryonen und IVF oder AI Embryonen differenziell ausgedr&uuml;ckt wurden, werden identifiziert. Im Vergleich zu AI Embryonen, scheinen mehr als die H&auml;lfte der Gene gefunden dereguliert zwischen SCNT und AI-Embryonen aus in-vitro-Kultur allein ergeben. Die Ergebnisse zeigen, dass das obwohl SCNT Methoden ver&auml;ndert haben differenzierte somatische Zellkerne Genexpression st&auml;rker &auml;hneln, dass embryonale Kerne, Kombination von unzureichender Neuprogrammierung und in-vitro-Kultur Bedingung gef&auml;hrden das entwicklungspolitischen Potenzial SCNT Embryonen. Dies ist der erste Satz von umfassenden Daten f&uuml;r die Analyse der molekularen Auswirkungen von verschiedenen Methoden der Kerntransfer auf Pr&auml;implantations Rinderembryonen.

Globale Genexpressionsanalyse von Rindern Blastozysten von mehreren Methoden produziert.

Efficienza riproduttiva utilizzando la tecnologia di trasferimento nucleare (SCNT) di cellule somatiche rimane non ottimale. I vari sforzi per migliorare l&#39;efficienza, trasferimento della cromatina (CT) e aggregazione clone-clone (NTagg) sono stati segnalati per produrre animali clonati dal vivo. Per meglio comprendere i meccanismi molecolari della riprogrammazione di cellule somatiche durante SCNT e valutare i vari metodi SCNT a livello molecolare, abbiamo eseguito analisi di espressione genica su blastocisti bovina prodotte tramite standard trasferimento nucleare (NT), CT, NTagg, in vitro fertilization (IVF) e inseminazione artificiale (AI), cos&igrave; come sulle cellule somatiche donatore, utilizzando le matrici del genoma bovino. I profili di espressione di embrioni SCNT (NT, CT, NTagg) sono stati confrontati con gli embrioni FIVET e AI cos&igrave; come le cellule del donatore. NT e CT embrioni hanno pattern di espressione genica indistinguibili. Rispetto a embrioni FIVET o IA, il numero di geni differenzialmente espressi in NTagg embrioni &egrave; significativamente superiore rispetto a NT e CT embrioni. Sono identificati geni differenzialmente espresse tra tutti gli embrioni SCNT ed embrioni FIVET o IA. Rispetto agli embrioni AI, pi&ugrave; della met&agrave; dei geni trovati deregolamentato tra embrioni SCNT e AI sembrano essere il risultato della coltura in vitro da solo. I risultati indicano che anche se hanno alterato metodi SCNT differenziato espressione genica somatica nuclei ad assomigliare pi&ugrave; molto attentamente a che dei nuclei embrionali, combinazione di riprogrammazione insufficiente e condizioni di coltura in vitro compromettere il potenziale sviluppo degli embrioni SCNT. Questo &egrave; il primo set di dati completi per analizzare l&#39;impatto molecolare dei vari metodi di trasferimento nucleare su embrioni preimpianto bovina.

Analisi di espressione genica globale di blastocisti bovina prodotta da pi&ugrave; metodi.

&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x751F;&#x6B96;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x6700;&#x9069;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5404;&#x7A2E;&#x306E;&#x52AA;&#x529B;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x8EE2;&#x9001; &#xFF08;CT&#xFF09; &#x3068;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3; &#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x96C6;&#x8A08; (NTagg) &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6; &#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x52D5;&#x7269;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4E2D;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3057;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5404;&#x7A2E;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x725B;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6A19;&#x6E96;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x9001; (NT)&#x3001;CT&#x3001;NTagg&#x3001;&#x4F53;&#x5916;&#x53D7;&#x7CBE; &#xFF08;IVF&#xFF09; &#x3068;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x6388;&#x7CBE; (AI) &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7523;&#x30A6;&#x30B7;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB; (NT&#x3001;CT&#x3001;NTagg&#xFF09; &#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x80DA;&#x4F53;&#x5916;&#x53D7;&#x7CBE;&#x304A;&#x3088;&#x3073; AI &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;NT &#x3068; CT &#x306E;&#x80DA;&#x306B;&#x306F;&#x898B;&#x5206;&#x3051;&#x304C;&#x3064;&#x304B;&#x306A;&#x3044;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F53;&#x5916;&#x53D7;&#x7CBE;&#x3084; AI &#x306E;&#x80DA;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; NTagg &#x80DA;&#x306E;&#x6570;&#x306F; NT &#x3068; CT &#x306E;&#x80DA;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x80DA;&#x4F53;&#x5916;&#x53D7;&#x7CBE;&#x307E;&#x305F;&#x306F; AI &#x9593;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AI &#x80DA;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x534A;&#x5206;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x5316;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B; AI &#x80DA;&#x9593;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x990A;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x5909;&#x3048;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3068;&#x306F;&#x3044;&#x3048;&#x3001;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x3088;&#x308A;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x80DA;&#x6838;&#x306E;&#x59A5;&#x5354;&#x304C;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x57F9;&#x990A;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x304C;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306B;&#x5206;&#x5316;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x5404;&#x7A2E;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x6CD5;&#x306E;&#x30A6;&#x30B7;&#x306E;&#x7740;&#x5E8A;&#x524D;&#x80DA;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x751F;&#x7523;&#x30A6;&#x30B7;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3002;

&#xC0DD;&#xC2DD; &#xD6A8;&#xC728; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; (SCNT) &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCC28;&#xC120; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB178;&#xB825; chromatin &#xC804;&#xC1A1; (CT) &#xBC0F; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD074;&#xB860; &#xC9D1;&#xACC4; (NTagg)&#xB294; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xB098;&#xC740; SCNT &#xB3D9;&#xC548; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xBD84;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; SCNT &#xBC29;&#xBC95; &#xD3C9;&#xAC00;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C; blastocysts &#xD45C;&#xC900; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; (NT), &#xCF54;&#xB124;&#xD2F0;&#xCEF7;, NTagg, &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xCCB4; &#xC678; &#xC218;&#xC815; (IVF), &#xC778;&#xACF5; &#xC218;&#xC815; (AI)&#xC5D0; &#xC18C;&#xACFC; &#xAC8C;&#xB188; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xC218;&#xD589;. &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xC11C; &#xCCB4; &#xC678; &#xC218;&#xC815; &#xBC0F; &#xC778;&#xACF5; &#xC9C0;&#xB2A5; &#xBC30;&#xC544; SCNT (NT, CT, NTagg)&#xB294; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xBE44;&#xAD50; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. NT &#xBC0F; CT &#xBC30;&#xC544; &#xBD84;&#xAC04; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;. IVF &#xB610;&#xB294; &#xC778;&#xACF5; &#xC9C0;&#xB2A5; &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; NTagg &#xBC30;&#xC544; &#xCC28;&#xB3D9; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xB294; NT&#xC640; CT &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xB192;&#xC740;. &#xBAA8;&#xB4E0; SCNT &#xBC30;&#xC544; IVF &#xB610;&#xB294; &#xC778;&#xACF5; &#xC9C0;&#xB2A5; &#xBC30;&#xC544; &#xC0AC;&#xC774; &#xCC28;&#xB3D9; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xACF5; &#xC9C0;&#xB2A5; &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC808;&#xBC18; &#xC774;&#xC0C1;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; SCNT &#xBC0F; AI &#xBC30;&#xC544; &#xC0AC;&#xC774; &#xADDC;&#xC81C; &#xC644;&#xD654; &#xCCB4; &#xC678; &#xBB38;&#xD654; &#xD63C;&#xC790; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; SCNT &#xBC29;&#xBC95; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBE44;&#xB85D; &#xBC30;&#xC544; &#xD575;&#xC758; &#xBD80;&#xC871; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; &#xBB38;&#xD654; &#xC870;&#xAC74; &#xC870;&#xD569; &#xC190;&#xC0C1; SCNT &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xB354; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2EE;&#xC740; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xAD6C;&#xBD84;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; &#xBC29;&#xBC95; &#xC18C; pre-implantation &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC9D1;&#xD569;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xC18C; blastocysts &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0;.

Eficiencia reproductiva, utilizando la tecnolog&iacute;a de transferencia nuclear (SCNT) de c&eacute;lulas som&aacute;ticas sigue siendo sub&oacute;ptima. De los diversos esfuerzos para mejorar la eficiencia, transferencia de cromatina (CT) y agregaci&oacute;n de clones-clone (NTagg) se han divulgado para producir animales clonados vivos. Para mejor entender los mecanismos moleculares de la reprogramaci&oacute;n de c&eacute;lulas som&aacute;ticas en c&eacute;lulas som&aacute;ticas y evaluar los distintos m&eacute;todos de c&eacute;lulas som&aacute;ticas en el nivel molecular, realizamos an&aacute;lisis de expresi&oacute;n g&eacute;nica en blastocistos bovinos producidas a trav&eacute;s de est&aacute;ndar transferencia nuclear (NT), CT, NTagg, en la fertilizaci&oacute;n in vitro (FIV) y la inseminaci&oacute;n artificial (IA), as&iacute; como en las c&eacute;lulas som&aacute;ticas donantes, con arreglos del genoma bovino. Los perfiles de expresi&oacute;n de embriones de c&eacute;lulas som&aacute;ticas (NT, CT, NTagg) se compararon con embriones FIV y AI, as&iacute; como c&eacute;lulas de un donante. NT y CT embriones tienen patrones de expresi&oacute;n g&eacute;nica indistinguibles. En comparaci&oacute;n con embriones FIV o AI, el n&uacute;mero de genes expresados diferencialmente en embriones de NTagg es significativamente superior en embriones de NT y CT. Se identifican los genes que se expresan diferencialmente entre todos los embriones de c&eacute;lulas som&aacute;ticas y embriones FIV o AI. En comparaci&oacute;n con embriones de AI, m&aacute;s de la mitad de los genes que se encuentran desregulados entre c&eacute;lulas som&aacute;ticas y AI embriones parecen ser el resultado del cultivo in vitro solamente. Los resultados indican que aunque se han modificado los m&eacute;todos SCNT distinguido expresi&oacute;n g&eacute;nica de n&uacute;cleos som&aacute;ticos que asemejan m&aacute;s a que de n&uacute;cleos embrionarios, combinaci&oacute;n de reprogramaci&oacute;n insuficiente y condici&oacute;n de cultivo in vitro comprometer el potencial de desarrollo de embriones de c&eacute;lulas som&aacute;ticas. Este es el primer conjunto de datos para analizar el impacto molecular de diversos m&eacute;todos de transferencia nuclear en embriones bovinos pre-implantaci&oacute;n.

An&aacute;lisis de expresi&oacute;n g&eacute;nica global de blastocistos bovinas producida por varios m&eacute;todos.

Les embryons pr&eacute;implantatoires produites par transfert nucl&eacute;aire de cellules somatiques (TNCS) ont vari&eacute; de potentiels de d&eacute;veloppement. La majorit&eacute; des blastocystes TNCS ne se d&eacute;veloppe pas &agrave; terme, et les m&eacute;canismes inhibiteurs de d&eacute;veloppement sont encore largement m&eacute;connus. Agr&eacute;gation des embryons clon&eacute;s a &eacute;t&eacute; tent&eacute;e pour compenser l&#39;insuffisance du d&eacute;veloppement d&#39;embryons clon&eacute;s individuels. Dans ce rapport, nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;impact de l&#39;agr&eacute;gation au stade quatre cellules du d&eacute;veloppement in vitro d&#39;embryons de bovins clon&eacute;s et expression g&eacute;n&eacute;tique des embryons. Nombre de cellules et de la vitesse de d&eacute;veloppement des agr&eacute;g&eacute;s (NTagg) et non agr&eacute;g&eacute;es des blastocystes (NT) ont &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute;es et compar&eacute;es. La formation du blastocyste apr&egrave;s l&#39;agr&eacute;gation a &eacute;t&eacute; mod&eacute;lis&eacute;e &agrave; l&#39;aide de la distribution binominal. Les r&eacute;sultats indiquent que l&#39;agr&eacute;gation favorise la formation du blastocyste, mais n&#39;augmente pas le taux global de blastocyste. En outre, utilisant microarray g&egrave;ne puce analyse 8,8 % des 8 059 g&egrave;nes analys&eacute;s &eacute;taient diff&eacute;rentiellement exprim&eacute;s entre NTagg et NT blastocystes, avec plus de 80 % des g&egrave;nes diff&eacute;rentiellement exprim&eacute;s dans les blastocystes NTagg. G&egrave;nes r&eacute;gul&eacute;s par le haut incluent ceux qui sont impliqu&eacute;s dans la transcription, la biosynth&egrave;se et la signalisation comme TDGF1, HNFA, CAV1, GLU5 et CD81. Nos r&eacute;sultats indiquent que l&#39;agr&eacute;gation &agrave; un stade pr&eacute;coce d&#39;embryons de bovins clon&eacute;s favorise le d&eacute;veloppement in vitro des embryons pr&eacute;implantatoires qui en r&eacute;sulte.

Agr&eacute;gation d&#39;embryons de bovins clon&eacute;s au stade quatre cellules stimule l&#39;expression des g&egrave;nes et le d&eacute;veloppement de l&#39;embryon in vitro.

&#x65E9;&#x671F;&#x80DA;&#x80CE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;SCNT&#xFF09; &#x4EA7;&#x751F;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;SCNT &#x56CA;&#x80DA;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x53D1;&#x5C55;&#x5230;&#x4E00;&#x8BCD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x963B;&#x788D;&#x4E86;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x5F88;&#x964C;&#x751F;&#x3002;&#x5DF2;&#x5C1D;&#x8BD5;&#x4E86;&#x514B;&#x9686;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x4EE5;&#x5F25;&#x8865;&#x4E2A;&#x522B;&#x514B;&#x9686;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x725B;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x80DA;&#x80CE;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x53D1;&#x80B2;&#x56DB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9636;&#x6BB5;&#x805A;&#x5408;&#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7F16;&#x53F7;&#x548C;&#x805A;&#x5408; (NTagg) &#x548C;&#x975E;&#x805A;&#x5408; (NT) &#x56CA;&#x80DA;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x901F;&#x5EA6;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x80DA;&#x6CE1;&#x5F62;&#x6210;&#x540E;&#x805A;&#x5408;&#x662F;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E8C;&#x9879;&#x5F0F;&#x5206;&#x5E03;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x805A;&#x5408;&#x63D0;&#x9AD8;&#x80DA;&#x6CE1;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0;&#x603B;&#x4F53;&#x56CA;&#x80DA;&#x7387;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790; 8.8%&#x7684; 8,059 &#x57FA;&#x56E0;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8868;&#x8FBE; NTagg &#x548C; NT &#x7684;&#x56CA;&#x80DA;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E0A;&#x8C03; NTagg &#x56CA;&#x80DA;&#x4E2D;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8868;&#x8FBE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; 80%&#x4EE5;&#x4E0A;&#x3002;&#x4E0A;&#x8C03;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3001; &#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5982; TDGF1&#x3001; HNFA&#x3001; CAV1&#x3001; GLU5&#x3001; &#x548C; cd81 &#x5E94;&#x7528;&#x5305;&#x62EC;&#x90A3;&#x4E9B;&#x53C2;&#x4E0E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x725B;&#x514B;&#x9686;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x9636;&#x6BB5;&#x805A;&#x5408;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4EA7;&#x751F;&#x65E9;&#x671F;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x53D1;&#x80B2;&#x3002;

&#x725B;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x80DA;&#x80CE;&#x56DB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9636;&#x6BB5;&#x805A;&#x5408;&#x523A;&#x6FC0;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x53CA;&#x4F53;&#x5916;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x3002;

Pre-implantation embryos produced by somatic cell nuclear transfer (SCNT) have varied developmental potentials. The majority of SCNT blastocysts do not develop to term, and the mechanisms inhibiting development are still largely unknown. Aggregation of cloned embryos has been attempted to compensate for the developmental deficiency of individual cloned embryos. In this report, we investigated the impact of aggregation of bovine cloned embryos at the four-cell stage on in vitro development and gene expression of the embryos. Cell numbers and development rate of aggregated (NTagg) and non-aggregated (NT) blastocysts were characterized and compared. The blastocyst formation after aggregation was modeled using the binominal distribution. The results indicate that aggregation enhances the blastocyst formation but does not increase the overall blastocyst rate. Additionally, utilizing microarray gene chip analysis 8.8% of 8,059 genes analyzed were differentially expressed between NTagg and NT blastocysts, with more than 80% of the differentially expressed genes up-regulated in the NTagg blastocysts. Up-regulated genes include those involved in transcription, biosynthesis and signaling such as TDGF1, HNFA, CAV1, GLU5, and CD81. Our results indicate that aggregation of bovine cloned embryos at an early stage promotes the in vitro development of the resulting pre-implantation embryos.

Aggregation of bovine cloned embryos at the four-cell stage stimulated gene expression and in vitro embryo development.

Pr&auml;implantations Embryonen produziert durch Kerntransfer somatischer Zellen (SCNT) haben Entwicklungs Potenziale variiert. Entwickeln sich die meisten SCNT Blastocysts nicht Begriff, und die Mechanismen, die Hemmung der Entwicklung sind noch weitgehend unbekannt. Aggregation von geklonten Embryonen hat versucht wurde, zum Ausgleich des Entwicklungsbiologie Mangels an einzelnen geklonten Embryonen. In diesem Bericht untersuchten wir die Auswirkungen der Aggregation von geklonten Embryonen im vier-Zellen-Stadium auf in-vitro-Entwicklung und Genexpression der Embryonen. Zelle Zahlen und Entwicklung Rate der aggregierten (NTagg) und nicht aggregierte (NT) Blastozysten waren charakterisiert und verglichen. Die Blastozyste-Bildung nach der Aggregation wurde mit die Binominal-Verteilung modelliert. Die Ergebnisse zeigen, dass die Aggregation die Blastozyste Bildung verbessert, aber erh&ouml;ht nicht die gesamte Blastozyste-Rate. Dar&uuml;ber hinaus wurden unter Verwendung von Microarray gen Chip Analyse 8,8 % 8.059 Gene analysiert differentiell zwischen NTagg und NT Blastozysten, mit mehr als 80 % der differentiell exprimierten Genen oben-geregelt in der NTagg-Blastozysten ge&auml;u&szlig;ert. Oben-geregelt-Gene sind in Transkription, Biosynthese und Signalisierung wie TDGF1, HNFA, CAV1, GLU5 und CD81 beteiligten. Unsere Ergebnisse zeigen, dass die Aggregation von geklonten Embryonen im Fr&uuml;hstadium die in-vitro-Entwicklung der resultierenden Pr&auml;implantations Embryonen f&ouml;rdert.

Aggregation von geklonten Embryonen im Stadium der vier-Zellen stimuliert, Genexpression und in-vitro-Embryonalentwicklung.

Embrioni preimpianto prodotti da trasferimento nucleare di cellule somatiche (SCNT) hanno variato le potenzialit&agrave; dello sviluppo. La maggior parte delle blastocisti SCNT non si sviluppa al termine, e i meccanismi di inibizione di sviluppo sono ancora in gran parte sconosciuti. Aggregazione di embrioni clonati &egrave; stato tentato per compensare il deficit di sviluppo dei singoli embrioni clonati. In questa relazione, abbiamo studiato l&#39;impatto dell&#39;aggregazione di embrioni di bovini clonati nella fase quattro cellule sullo sviluppo in vitro ed espressione genica degli embrioni. Numeri di cellulare e il tasso di sviluppo di aggregati (NTagg) e non aggregati blastocisti (NT) sono stati caratterizzati e rispetto. La formazione di blastocisti dopo l&#39;aggregazione &egrave; stata modellata utilizzando la distribuzione binominale. I risultati indicano che aggregazione aumenta la formazione di blastocisti ma non aumenta il tasso complessivo di blastocisti. Inoltre, utilizzando microarray gene chip analisi 8,8% di 8.059 geni analizzati erano differenzialmente espressi tra NTagg e NT blastocisti, con pi&ugrave; di 80% dei geni differenzialmente espressi up-regolamentati nelle blastocisti NTagg. Geni up-regolati sono quelli coinvolti nella trascrizione, Biosintesi e segnalando quali TDGF1, HNFA, CAV1, GLU5 e CD81. I nostri risultati indicano che l&#39;aggregazione di embrioni di bovini clonati in una fase precoce favorisce lo sviluppo in vitro degli embrioni preimpianto risultanti.

Aggregazione di embrioni di bovini clonati nella fase quattro cellule stimolata espressione genica e lo sviluppo dell&#39;embrione in vitro.

&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7740;&#x5E8A;&#x524D;&#x80DA;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3092;&#x5909;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x304C;&#x7528;&#x8A9E;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3057;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x4E3B;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x96C6;&#x7D04;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x80DA;&#x306E;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x80DA;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x6B20;&#x4E4F;&#x3092;&#x88DC;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A66;&#x307F;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x306F;, &#x725B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x80DA;&#x306E;&#x4F53;&#x5916;&#x767A;&#x751F;&#x56DB;&#x7D30;&#x80DE;&#x671F;&#x3067;&#x306E;&#x96C6;&#x7D04;&#x3068;&#x80DA;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6570;&#x3068;&#x96C6;&#x8A08; (NTagg) &#x3068;&#x975E;&#x96C6;&#x7D04; (NT) &#x306E;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x7387;&#x6BD4;&#x8F03;&#x30FB;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96C6;&#x8A08;&#x5F8C;&#x306E;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x4E8C;&#x9805;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96C6;&#x8A08;&#x306F;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x80DA;&#x7387;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x89E3;&#x6790; 8.8 %8,059 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684; NTagg &#x3068; NT blastocysts &#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5; NTagg &#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x767A;&#x73FE;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 80 &#xFF05; &#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x9593;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x95A2;&#x4FC2;&#x8005;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3001;&#x751F;&#x5408;&#x6210; TDGF1&#x3001;HNFA&#x3001;CAV1&#x3001;GLU5&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; CD81 &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65E9;&#x671F;&#x725B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x80DA;&#x306E;&#x96C6;&#x8A08;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x7740;&#x5E8A;&#x524D;&#x80DA;&#x306E;&#x4F53;&#x5916;&#x767A;&#x80B2;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

4 &#x7D30;&#x80DE;&#x671F;&#x3067;&#x96C6;&#x8A08;&#x3092;&#x725B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x80DA;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3068; in vitro &#x3067;&#x306E;&#x80DA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; (SCNT) &#xC81C;&#xC791;&#xD55C; pre-implantation &#xBC30;&#xC544; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; &#xBCC0;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. SCNT blastocysts&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xAE30;&#xAC04;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC640; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;. &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC0C1;&#xC744; &#xD558;&#xB824;&#xACE0; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xBC1C;&#xB2EC;&#xC5D0; 4 &#xC140; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9D1;&#xACC4; &#xBC0F; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD578;&#xB4DC;&#xD3F0; &#xBC88;&#xD638; &#xBC0F; &#xC9D1;&#xACC4; (NTagg) &#xBC0F; &#xBE44; &#xC9D1;&#xACC4; (NT) blastocysts&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xBE44;&#xAD50;. &#xC9D1;&#xACC4; &#xD6C4; blastocyst &#xD615;&#xC131; binominal &#xBC30;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC9D1;&#xACC4; blastocyst &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; blastocyst &#xC18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC; &#xD0A4; &#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; microarray&#xB97C; &#xC774;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; 8,059 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE69; &#xBD84;&#xC11D; 8.8% &#xCC28;&#xB3D9; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; &#xCD5C;&#xB300; NTagg blastocysts&#xC5D0; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xCC28;&#xB3D9; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 80% &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; NTagg &#xBC0F; NT blastocysts &#xC0AC;&#xC774;. &#xC704;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC;, &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; TDGF1, HNFA, CAV1, GLU5, CD81 &#xB4F1; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828;&#xC790; &#xD3EC;&#xD568;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC18C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9D1;&#xACC4; &#xACB0;&#xACFC; pre-implantation &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xBC1C;&#xB2EC;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4;.

4-&#xC140; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC9D1;&#xACC4; &#xC790;&#xADF9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C;.

Preimplantacionales embriones producidos por transferencia nuclear de c&eacute;lulas som&aacute;ticas (SCNT) han variado potenciales de desarrollo. La mayor&iacute;a de los blastocistos SCNT no desarrollan a t&eacute;rmino, y los mecanismos de inhibici&oacute;n de desarrollo siguen siendo en gran parte desconocidos. Agregaci&oacute;n de embriones clonados se ha intentado para compensar la deficiencia del desarrollo de los embriones clonados. En este informe, hemos investigado el impacto de la agregaci&oacute;n en la etapa de cuatro c&eacute;lulas en desarrollo in vitro de embriones bovinos clonados y expresi&oacute;n gen&eacute;tica de los embriones. N&uacute;mero de c&eacute;lulas y la tasa de desarrollo de agregados (NTagg) y no agregada (NT) blastocistos se caracteriza y en comparaci&oacute;n con. La formaci&oacute;n del blastocisto despu&eacute;s de agregaci&oacute;n fue modelada usando la distribuci&oacute;n binominal. Los resultados indican que la agregaci&oacute;n mejora la formaci&oacute;n del blastocisto pero no aumenta la tasa general de blastocisto. Adem&aacute;s, utilizando microarray gene chip an&aacute;lisis 8.8% de 8.059 genes analizados diferencialmente expresaron entre NTagg y NT blastocistos, con m&aacute;s del 80% de los genes expresados diferencialmente regulados por arriba de los blastocistos de NTagg. Genes regulados por arriba son los implicados en la transcripci&oacute;n, bios&iacute;ntesis y se&ntilde;alizaci&oacute;n como TDGF1, HNFA, CAV1, GLU5 y CD81. Nuestros resultados indican que la agregaci&oacute;n de embriones bovinos clonados en una etapa temprana promueve el desarrollo in vitro de los embriones resultantes de pre-implantaci&oacute;n.

Agregaci&oacute;n de embriones bovinos clonados en la etapa de cuatro c&eacute;lulas estimul&oacute; la expresi&oacute;n g&eacute;nica y desarrollo embrionario in vitro.

&#x5F88;&#x591A;&#x56E0;&#x7D20;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x5F71;&#x54CD;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x8F6C;&#x79FB; (SCNT) &#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x662F;&#x6350;&#x52A9;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x672C;&#x8EAB;&#x3002;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514B;&#x9686;&#x6F5C;&#x529B;&#x5DEE;&#x522B;&#x5F88;&#x5927;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5177;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x88AB;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#xFF0C;ooplasma&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x662F;&#x8010;&#x4EBA;&#x5BFB;&#x5473;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x627E;&#x51FA;&#x89C4;&#x8303;&#x7684;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE; reprogrammability &#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x662F;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x5404;&#x79CD;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x56DE;&#x987E;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x8C03;&#x67E5;&#x662F;&#x5426;&#x4E0D;&#x540C;&#x514B;&#x9686;&#x6548;&#x7387;&#x6350;&#x52A9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x5305;&#x62EC;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53BB;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;-1 (HDAC1)-2 (HDAC2) &#xFF1B;DNA &#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;-1 (DNMT1)-3a (DNMT3a)-3b (DNMT3b) &#x548C;&#x9175;&#x6BCD;&#x8517;&#x7CD6;&#x975E;&#x53D1;&#x9175;&#x7CD6;-2 (SNF2L) &#x4E09; SWI/&#x7231;&#x68EE;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x725B;&#x540C;&#x6E90;&#x3002;&#x5728;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x6536;&#x96C6;&#x4E86;&#x4ECE; 12 &#x725B;&#x4F9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6837;&#x672C;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9A;&#x91CF;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (PCR) &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x8861;&#x91CF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x6350;&#x52A9;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x9AD8;&#x3001; &#x4F4E;&#x514B;&#x9686;&#x6548;&#x7387;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E3A;&#x6D3B;&#x4EA7;&#x728A;&#x7387;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x9006;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x4F53;&#x5916;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x7387;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; HDAC2 &#x548C; SNF2L &#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x6CA1;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x663E;&#x793A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x53C2;&#x8003;&#x57FA;&#x56E0;&#x7B5B;&#x9009;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5B9A;&#x91CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x548C;&#x4E0D;&#x540C;&#x6279;&#x6B21;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x725B;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8C03;&#x63A7;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x65E0;&#x5173;&#x4E0E;&#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x9053;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x6570;&#x636E;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;

&#x8A8A;&#x672C;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x8868;&#x89C2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8C03;&#x8282;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x725B;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E0E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x514B;&#x9686;&#x6548;&#x7387;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x3002;

Among many factors that potentially affect somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryo development is the donor cell itself. Cloning potentials of somatic donor cells vary greatly, possibly because the cells have different capacities to be reprogrammed by ooplasma. It is therefore intriguing to identify factors that regulate the reprogrammability of somatic donor cells. Gene expression analysis is a widely used tool to investigate underlying mechanisms of various phenotypes. In this study, we conducted a retrospective analysis investigating whether donor cell lines with distinct cloning efficiencies express different levels of genes involved in epigenetic reprogramming including histone deacetylase-1 (HDAC1), -2 (HDAC2); DNA methyltransferase-1 (DNMT1), -3a (DNMT3a),-3b (DNMT3b), and the bovine homolog of yeast sucrose nonfermenting-2 (SNF2L), a SWI/SNF family of ATPases. Cell samples from 12 bovine donor cell lines were collected at the time of nuclear transfer experiments and expression levels of the genes were measured using quantitative polymerase chain reaction (PCR). Our results show that there are no significant differences in expression levels of these genes between donor cell lines of high and low cloning efficiency defined as live calving rates, although inverse correlations are observed between in vitro embryo developmental rates and expression levels of HDAC2 and SNF2L. We also show that selection of stable reference genes is important for relative quantification, and different batches of cells can have different gene expression patterns. In summary, we demonstrate that expression levels of these epigenome regulatory genes in bovine donor cells are not correlated with cloning potential. The experimental design and data analysis method reported here can be applied to study any genes expressed in donor cells.

Transcript levels of several epigenome regulatory genes in bovine somatic donor cells are not correlated with their cloning efficiency.

Parmi les multiples facteurs pouvant nuire au transfert nucl&eacute;aire de cellules somatiques, d&eacute;veloppement de l&#39;embryon (TNCS) est la cellule du donneur lui-m&ecirc;me. Potentiels de clonage de cellules somatiques donneur varient consid&eacute;rablement, peut-&ecirc;tre parce que les cellules ont des capacit&eacute;s diff&eacute;rentes pour &ecirc;tre reprogramm&eacute; par ooplasma. Il est donc curieux pour identifier les facteurs qui r&eacute;gulent la reprogrammability des cellules somatiques. Analyse d&#39;expression de g&egrave;ne est un outil largement utilis&eacute; pour &eacute;tudier les m&eacute;canismes sous-jacents des ph&eacute;notypes diff&eacute;rents. Dans cette &eacute;tude, nous avons effectu&eacute; une analyse r&eacute;trospective &eacute;tudie si lign&eacute;es de cellules du donneur avec diff&eacute;rentes efficacit&eacute;s clonage expriment des niveaux diff&eacute;rents de g&egrave;nes impliqu&eacute;s dans la reprogrammation &eacute;pig&eacute;n&eacute;tique dont histone d&eacute;sac&eacute;tylase-1 (HDAC1), -2 (HDAC2) ; ADN m&eacute;thyltransf&eacute;rase-1 (DNMT1),-3 a (DNMT3a),-3 b (DNMT3b) et l&#39;homologue bovine de levure sucrose nonfermenting-2 (SNF2L), une famille SWI/SNF des ATPases. Cellule de 12 lign&eacute;es de cellules de donneur bovine ont &eacute;t&eacute; &eacute;chantillonn&eacute;s lors d&#39;exp&eacute;riences de transfert nucl&eacute;aire et des niveaux d&#39;expression des g&egrave;nes ont &eacute;t&eacute; mesur&eacute;s &agrave; l&#39;aide de quantitative polymerase chain reaction (PCR). Nos r&eacute;sultats montrent qu&#39;il n&#39;y a aucune diff&eacute;rence significative entre les lign&eacute;es de cellules du donneur de haute et basse de clonage efficacit&eacute; d&eacute;finie comme le taux de mise bas en direct, bien que des corr&eacute;lations inverses sont observ&eacute;es entre l&#39;expression et le taux de d&eacute;veloppement embryonnaire in vitro des niveaux de HDAC2 et SNF2L des niveaux d&#39;expression de ces g&egrave;nes. Nous montrons &eacute;galement que la s&eacute;lection de g&egrave;nes de r&eacute;f&eacute;rence stable est importante pour la quantification relative, et diff&eacute;rents lots de cellules peuvent avoir des profils d&#39;expression g&eacute;nique diff&eacute;rents. En r&eacute;sum&eacute;, nous avons d&eacute;montr&eacute; que les niveaux d&#39;expression de ces g&egrave;nes r&eacute;gulateurs d&#39;&eacute;pig&eacute;nome dans les cellules du donneur bovine ne sont pas corr&eacute;l&eacute;es avec le potentiel de clonage. La m&eacute;thode d&#39;analyse exp&eacute;rimentale design et donn&eacute;es rapport&eacute;e ici peut &ecirc;tre appliqu&eacute;e &agrave; l&#39;&eacute;tude des g&egrave;nes exprim&eacute;s dans les cellules du donneur.

Des niveaux de transcription de plusieurs g&egrave;nes r&eacute;gulateurs d&#39;&eacute;pig&eacute;nome dans les cellules somatiques bovine ne sont pas corr&eacute;l&eacute;es avec leur efficacit&eacute; de clonage.

Zu viele Faktoren, die potenziell somatischen beeinflussen ist (SCNT) Embryonalentwicklung die Spender-Zelle selbst. Klonen Potenziale der somatischen Spenderzellen unterschiedlich, m&ouml;glicherweise weil die Zellen haben unterschiedliche F&auml;higkeiten, die durch Ooplasma umprogrammiert werden. Daher ist es faszinierend, Faktoren zu identifizieren, die die Reprogrammability des somatischen Spenderzellen zu regulieren. Genexpressionsanalyse ist ein weit verbreitetes Werkzeug zur Untersuchung der zugrunde liegenden Mechanismen der verschiedenen Ph&auml;notypen. In dieser Studie f&uuml;hrten wir eine Retrospektive Analyse untersucht, ob der Spender-Zelllinien mit verschiedenen Klonen Effizienz schnelles verschiedene Ebenen Selbstmordprogramm epigenetischen Reprogrammierung einschlie&szlig;lich Histon Deacetylase-1 (HDAC1),-2 (HDAC2); DNA Methyltransferase-1 (DNMT1),-3a (DNMT3a),-3b (DNMT3b), und die Rinder Homolog von Hefe Saccharose nonfermenting-2 (SNF2L), ein SWI/SNF-Familie von ATPasen. Zellenproben von 12 Rinder Spender-Zelllinien wurden zum Zeitpunkt der Kerntransfer Experimenten gesammelt und Stufen der Gene wurden mittels quantitativer Polymerase-Kettenreaktion (PCR) bewertet. Unsere Ergebnisse zeigen, dass es keine gro&szlig;e Unterschiede im Ausdruck dieser Gene zwischen Spender Zelllinien von hohen und niedrigen Klonierungseffizienz definiert als live Kalbung Preise, obwohl inverse Korrelationen zwischen in-vitro-Embryo Entwicklungs- und Ausdruck HDAC2 und SNF2L festgestellt werden. Wir zeigen auch, dass die Auswahl der stabile Referenz Gene ist wichtig f&uuml;r relative Quantifizierung und verschiedene Batches von Zellen k&ouml;nnen verschiedene Genausdruck Muster haben. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen zeigen wir, dass die Stufen dieser Epigenome regulatorische Gene in bovine Spenderzellen mit Klonen Potenzial nicht korreliert sind. Die experimentelle Design und Daten Analysemethode berichtet hier kann angewendet werden, um irgendwelche Gene ausgedr&uuml;ckt in Spenderzellen zu studieren.

Transkript Ebenen mehrere Epigenome regulatorische Gene in bovine somatische Spenderzellen sind mit ihren Klonierungseffizienz nicht korreliert.

Tra i molti fattori che influenzano potenzialmente il trasferimento nucleare di cellule somatiche sviluppo dell&#39;embrione (SCNT) &egrave; la cellula donatrice stessa. Potenziali di clonazione delle cellule somatiche donatore variano notevolmente, forse perch&eacute; le cellule hanno diverse capacit&agrave; per essere riprogrammato da ooplasma. Pertanto &egrave; intrigante per identificare i fattori che regolano l&#39;offrono delle cellule somatiche dei donatori. Analisi dell&#39;espressione genica &egrave; uno strumento ampiamente utilizzato per indagare i meccanismi sottostanti di diversi fenotipi. In questo studio, abbiamo condotto un&#39;analisi retrospettiva indagando se linee di cellule del donatore con efficienze clonazione distinte esprimono livelli diversi di geni coinvolti nella riprogrammazione epigenetica compreso deacetylase dell&#39;istone-(HDAC1), 1-2 (HDAC2); DNA metiltransferasi-1 (DNMT1),-3a (DNMT3a),-3b (DNMT3b) e l&#39;omologo bovino di lievito saccarosio nonfermenting-2 (SNF2L), una famiglia SWI/SNF dell&#39;ATPasi. Sono stati raccolti campioni di cellule da 12 linee di cellule del donatore bovina al tempo degli esperimenti di trasferimento nucleare e i livelli di espressione dei geni sono stati misurati utilizzando quantitative polymerase chain reaction (PCR). I nostri risultati mostrano che ci sono differenze significative nei livelli di espressione di questi geni tra linee di cellule del donatore della clonazione ad alta e bassa efficienza definita come tassi di parto dal vivo, sebbene le correlazioni inverse sono osservate tra espressione e tassi di sviluppo dell&#39;embrione in vitro livelli di HDAC2 e SNF2L. Mostriamo anche selezione dei geni di riferimento stabile &egrave; importante per la relativa quantificazione, che differenti lotti di cellule possono avere modelli di espressione del gene diverso. In sintesi, ci dimostrano che i livelli di espressione di questi geni regolatori Epigenoma nelle cellule del donatore bovina non sono correlati con la clonazione potenziale. Il design e dati analisi metodo sperimentale riportato qui pu&ograve; essere applicato per studiare eventuali geni espressi nelle cellule del donatore.

Livelli di trascrizione di diversi geni regolatori Epigenoma nelle cellule del donatore somatico bovini non sono correlati con la loro efficienza di clonazione.

&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x81EA;&#x4F53;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB; ooplasma &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x518D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3059;&#x308B;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x96FB;&#x4F4D;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; reprogrammability &#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8208;&#x5473;&#x3092;&#x305D;&#x305D;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x4F5C;&#x6210;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x5316;&#x3057;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; 1 (HDAC1)-2 (HDAC2); &#x542B;&#x3080;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3066;&#x56DE;&#x9867;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;-1 (DNMT1)-3a (DNMT3a)-3b &#xFF08;&#x305D;&#x306E;&#xFF09; &#x3068;&#x9175;&#x6BCD;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x6E90;-2 (SNF2L), Atpase &#x306E; SWI/SNF &#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30A6;&#x30B7;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB; 12 &#x30A6;&#x30B7; &#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x6642;&#x306B;&#x53CE;&#x96C6;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC; (PCR) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x91CF;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC; &#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x9006;&#x76F8;&#x95A2;&#x4F53;&#x5916;&#x80DA;&#x767A;&#x9054;&#x7387;&#x3068;&#x5F0F;&#x306E;&#x9593;&#x306E; HDAC2 &#x3068; SNF2L &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3082;&#x307F;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x304C;&#x30CF;&#x30A4;&#x3068;&#x30ED;&#x30FC;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x5206;&#x5A29;&#x7387;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x52B9;&#x7387;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x9593;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x91CF;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x304C;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30D0;&#x30C3;&#x30C1;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;.&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30A6;&#x30B7; &#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x30DD;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x3092;&#x76F8;&#x95A2;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x305F;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x89E3;&#x6790;&#x6CD5;&#x306F;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x725B;&#x306E;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x898F;&#x5236;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3068;&#x306F;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD;&#xC744; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xC694;&#xC778; &#xB4E4; &#xC911; (SCNT) &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC740; &#xC790;&#xCCB4; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC140;. &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;, &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2EC;&#xB77C;&#xC9C8; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC140; ooplasma&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC7AC;&#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xB2E4;&#xB978; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD765;&#xBBF8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; reprogrammability&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604; &#xBD84;&#xC11D; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xACE0;&#xAE30;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC; &#xC120; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylase-1 (HDAC1)-2 (HDAC2);&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; epigenetic &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC218;&#xC900; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xAC80;&#xD1A0; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xC2DC; DNA methyltransferase-1 (DNMT1)-3a (DNMT3a)-3b (DNMT3b)&#xC640; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC790;&#xB2F9; nonfermenting-2 (SNF2L) Atpases&#xC758; SWI/SNF &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC18C; &#xCCB4;. 12 &#xC18C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xC0D8;&#xD50C; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C; &#xACE0; &#xC2DD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (PCR)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD070; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5ED; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xC544; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC2DD; &#xC0AC;&#xC774; hdac2&#xACFC; snf2l&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB192;&#xACE0; &#xB0AE;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xBD84;&#xB9CC; &#xC728;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xCC38;&#xC870; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC740; &#xC0C1;&#xB300; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xBC0F; &#xC140;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC30;&#xCE58; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC18C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; epigenome &#xADDC;&#xC81C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xC81C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD558; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xBC0F; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC5EC;&#xAE30; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB300; &#xBCF8; &#xC18C; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; epigenome &#xADDC;&#xC81C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xACFC; &#xC0C1;&#xAD00; &#xD558;&#xC9C0;.

Entre muchos factores que afectan potencialmente la transferencia nuclear de c&eacute;lulas som&aacute;ticas (SCNT) embri&oacute;n desarrollo es la c&eacute;lula donante. Potenciales de la clonaci&oacute;n de c&eacute;lulas som&aacute;ticas donantes var&iacute;an mucho, posiblemente porque las c&eacute;lulas tienen diferentes capacidades para ser reprogramado por ooplasma. Por lo tanto es intrigante para identificar los factores que regulan la reprogrammability de las c&eacute;lulas som&aacute;ticas donantes. An&aacute;lisis de expresi&oacute;n g&eacute;nica es una herramienta utilizada para investigar los mecanismos subyacentes de varios fenotipos. En este estudio, se realiz&oacute; un an&aacute;lisis retrospectivo investiga si las l&iacute;neas celulares de donantes con diferentes eficiencias de clonaci&oacute;n expresan diferentes niveles de genes implicados en la reprogramaci&oacute;n epigen&eacute;tica incluyendo Histona deacetilasa-1 (HDAC1), -2 (HDAC2); Metiltransferasa de ADN-1 (DNMT1),-3a (DNMT3a),-3b (DNMT3b) y el hom&oacute;logo bovina de levadura sacarosa nonfermenting-2 (SNF2L), una familia SWI/SNF de ATPasas. Se recolectaron muestras de c&eacute;lulas de 12 l&iacute;neas de c&eacute;lulas donantes bovina en el momento de experimentos de transferencia nuclear y se midieron los niveles de expresi&oacute;n de los genes mediante la reacci&oacute;n en cadena de polimerasa cuantitativa (PCR). Nuestros resultados muestran que existen diferencias significativas en los niveles de expresi&oacute;n de estos genes entre l&iacute;neas de c&eacute;lulas de donantes de la clonaci&oacute;n alta y baja eficiencia definida como las tasas de partos vivos, aunque las correlaciones inversas se observan entre la expresi&oacute;n y las tasas de desarrollo de embriones in vitro niveles de HDAC2 y SNF2L. Tambi&eacute;n demostramos que la selecci&oacute;n de genes de referencia estable es importante para la cuantificaci&oacute;n relativa, y diferentes lotes de c&eacute;lulas pueden tener patrones de expresi&oacute;n de diferentes genes. En Resumen, demostramos que los niveles de expresi&oacute;n de estos genes reguladores de epigenoma en c&eacute;lulas de un donante bovina no se correlacionan con potencial de clonaci&oacute;n. El dise&ntilde;o y datos de an&aacute;lisis m&eacute;todo experimental divulgado aqu&iacute; puede aplicarse para estudiar cualquier genes expresados en las c&eacute;lulas del donante.

Los niveles de transcripci&oacute;n de varios genes reguladores de epigenoma en c&eacute;lulas de un donante som&aacute;tica bovina no se correlacionan con su eficacia de clonado.

Cancer du poumon est une maladie complexe impliquant de nombreux g&egrave;nes et les processus biologiques importants. Variation g&eacute;n&eacute;tique ou expression aberrante de certains oncog&egrave;nes, les g&egrave;nes suppresseurs de tumeurs et les g&egrave;nes de r&eacute;paration de l&#39;ADN pourrait &ecirc;tre li&eacute;e &agrave; l&#39;incidence et le d&eacute;veloppement. Comment faire pour trouver les facteurs pathog&egrave;nes du cancer du poumon et de son m&eacute;canisme mol&eacute;culaire de la canc&eacute;rogen&egrave;se multimodes de donn&eacute;es massive est une question essentielle &agrave; laquelle doivent r&eacute;pondre les chercheurs et les cliniciens. La technologie de bio-puce offre un d&eacute;bit &eacute;lev&eacute; et une m&eacute;thode efficace pour la recherche sur le cancer. Les derniers progr&egrave;s de la bio-puce dans la recherche sur le cancer du poumon sont r&eacute;sum&eacute;e dans cet article de revue.

[Application de bio-puce dans la recherche sur le cancer du poumon].

Lungenkrebs ist eine komplizierte Krankheit unter Beteiligung vieler Gene und wichtige biologische Prozesse. Genetische Variation oder aberrante Expression von DNA-Reparatur-Gene, einige Onkogene und Tumorsuppressorgene k&ouml;nnte mit seiner Inzidenz und Entwicklung zusammenh&auml;ngen. So finden Sie die pathogenen Faktoren von Lungenkrebs und seine Molekulare Mechanismen der mehrstufigen Karzinogenese aus massiven Daten ist eine Schl&uuml;sselfrage, die Forscher und Kliniker beantworten m&uuml;ssen. Die Bio-Chip-Technologie bietet einen hohen Durchsatz und effiziente Methode f&uuml;r die Krebsforschung. Die j&uuml;ngsten Fortschritte der Bio-Chip in der Lunge Krebsforschung ist in diesem Minireview zusammengefasst.

[Anwendung des Bio-Chips in Lung Cancer Research].

Il cancro del polmone &egrave; una malattia complessa che coinvolge molti geni e importanti processi biologici. Variazione genetica o aberrante espressione di alcuni geni di riparazione del DNA di oncogeni e geni oncosoppressori possa essere correlati alla sua incidenza e sviluppo. Come scoprire i fattori patogeni del cancro del polmone e del suo meccanismo molecolare della carcinogenesi multistadio da massicci dei dati &egrave; una questione fondamentale che devono rispondere a ricercatori e medici. La tecnologia bio-chip fornisce un elevato throughput e un metodo efficiente per la ricerca sul cancro. I pi&ugrave; recenti progressi bio-chip nella ricerca sul cancro del polmone sono riassunto in questo minireview.

[Domanda di bio-chip nella ricerca sul cancro del polmone].

&#x80BA;&#x304C;&#x3093;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x75C5;&#x6C17;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;, &#x764C;&#x6291;&#x5236;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068; DNA &#x4FEE;&#x5FA9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x7387;&#x3068;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x80BA;&#x764C;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5927;&#x91CF;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x591A;&#x6BB5;&#x968E;&#x767A;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x7814;&#x7A76;&#x8005;&#x3084;&#x81E8;&#x5E8A;&#x533B;&#x306B;&#x7B54;&#x3048;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x8CEA;&#x554F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x764C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x80BA;&#x304C;&#x3093;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x6700;&#x65B0;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x9032;&#x6357;&#x72B6;&#x6CC1;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30DF;&#x30CB;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

[&#x80BA;&#x304C;&#x3093;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;]&#x3002;

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[&#x751F;&#x7269;&#x82AF;&#x7247;&#x5728;&#x80BA;&#x764C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;]&#x3002;

Lung cancer is a complicated disease involving many genes and important biologic processes. Genetic variation or aberrant expression of some oncogenes, tumor suppressor genes and DNA repair genes might be related to its incidence and development. How to find out the pathogenic factors of lung cancer and its molecular mechanism of multistage carcinogenesis from massive data is a key question that researchers and clinicians must answer. The bio-chip technology provides a high throughput and efficient method for cancer research. The latest bio-chip progress in lung cancer research is summarized in this minireview.

[Application of bio-chip in lung cancer research].

&#xD3D0;&#xC554;&#xC740; &#xB9CE;&#xC740; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB610;&#xB294; &#xC77C;&#xBD80; oncogenes, &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC0F; DNA &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD0C8; &#xC120; &#xC2DD; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xB960; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xAD00;&#xB828; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3D0;&#xC554;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xC694;&#xC778; &#xBC0F; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB2E8;&#xACC4; &#xBC1C;&#xC554;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC640; &#xC784;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300;&#xB2F5; &#xD574;&#xC57C; &#xD558;&#xB294; &#xD575;&#xC2EC; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC774; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xCE69; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xBC0F; &#xC554; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3D0; &#xC554; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xCD5C;&#xC2E0; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xCE69; &#xC9C4;&#xD589;&#xC774;&#xC774; minireview&#xC5D0; &#xC694;&#xC57D; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

[&#xD3D0;&#xC554; &#xC554; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xCE69;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;].

C&aacute;ncer de pulm&oacute;n es una enfermedad complicada que involucra muchos genes y procesos biol&oacute;gicos importantes. Variaci&oacute;n gen&eacute;tica o la expresi&oacute;n aberrante de algunos oncogenes, genes supresores de tumores y genes de la reparaci&oacute;n del ADN se pudieron relacionar su incidencia y desarrollo. C&oacute;mo averiguar los factores pat&oacute;genos de c&aacute;ncer de pulm&oacute;n y su mecanismo molecular de la carcinog&eacute;nesis gradual de masivo de datos es una pregunta clave que deben responder a los investigadores y m&eacute;dicos. La tecnolog&iacute;a de bio-chip proporciona un alto rendimiento y un m&eacute;todo eficiente para la investigaci&oacute;n del c&aacute;ncer. Los &uacute;ltimos avances bio-chip en investigaci&oacute;n del c&aacute;ncer de pulm&oacute;n se resumen en esta minireview.

Article	Year
Ectodomain cleavage of ErbB-4: characterization of the cleavage site and m80 fragment. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 12869563	2003
Enhanced sensitivity RNA gel loading buffer that enables efficient RNA separation on native gels. BioTechniques\| PubMed ID: 14989099	2004
A method for cross-species gene expression analysis with high-density oligonucleotide arrays. Nucleic acids research\| PubMed ID: 15247326	2004
A method for gene expression analysis by oligonucleotide arrays from minute biological materials. Analytical biochemistry\| PubMed ID: 15265739	2004
A method for determining zygosity of transgenic zebrafish by TaqMan real-time PCR. Analytical biochemistry\| PubMed ID: 16061191	2005
Amplification of nanogram amounts of total RNA by the SMART-based PCR method for high-density oligonucleotide microarrays. Clinical chemistry\| PubMed ID: 16306094	2005
Linkage analysis and gene expression profile of pancreatic acinar atrophy in the German Shepherd Dog. Mammalian genome : official journal of the International Mammalian Genome Society\| PubMed ID: 16341675	2005
Global gene expression analysis of bovine blastocysts produced by multiple methods. Molecular reproduction and development\| PubMed ID: 17886272	2008
Aggregation of bovine cloned embryos at the four-cell stage stimulated gene expression and in vitro embryo development. Molecular reproduction and development\| PubMed ID: 18196553	2008
Transcript levels of several epigenome regulatory genes in bovine somatic donor cells are not correlated with their cloning efficiency. Cloning and stem cells\| PubMed ID: 19751110	2009
[Application of bio-chip in lung cancer research]. Zhongguo fei ai za zhi = Chinese journal of lung cancer\| PubMed ID: 21569652	2011

Wenli Zhou

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