preparation-of-quality-inositol-pyrophosphates

Preparation of Quality Inositol Pyrophosphates

Myo-inositol is present in nature either unmodified or in more complex phosphorylated derivates. Of the latest, the two most abundant in eukaryotic cells ...

University College London

&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x79EF;&#x6781;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0; chondrifying &#x9E21;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x80BF;&#x7624;&#x6587;&#x5316; (HDCs)&#xFF0C;&#x5982;&#x73AF;&#x5B62;&#x7D20; A (CsA) &#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x91CF;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x7CD6;&#x548C;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; Sox9 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;H(2)O(2) &#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x65B9;&#x5F0F;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4E22;&#x5931;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x6216;&#x4E25;&#x91CD;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6570;&#x76EE;&#x3002;&#x88AB;&#x51CF;&#x5C11; mRNA &#x548C; Sox9 unphosphorylated &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x5176;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E86; H(2)O(2) &#x6216; CsA&#x3002;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x51CF;&#x5C11;&#x6D3B;&#x6027;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x5374;&#x6781;&#x5176;&#x9AD8;&#x67B6;&#x7531; 1 &#x6BEB;&#x7C73; H(2)O(2) &#x6216; 2 &#x5988;&#x5988; CSA &#x78F7;&#x9178;&#x5316; MAPK &#x5BB6;&#x65CF; ERK1/2 &#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;ERK &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242; PD098059 &#x5F31;&#x6BD2;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x8D28;&#x6D88;&#x8017;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; Sox9 &#x5728; H(2)O(2) &#x6216; CsA &#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x81F3;&#x5C11;&#x5728;&#x4E00;&#x5B9A;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x6291;&#x5236;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B; ERK1/2 &#x4ECB;&#x5BFC; H(2)O(2) &#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EA6;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x53CA;&#x5728;&#x9E21; HDCs Sox9 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178; Sox9 &#x6216; ERK1/2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x5E73;&#x548C; ERK1/2 &#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x6C22;&#x6291;&#x5236;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x9E21;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x80BF;&#x7624;&#x6587;&#x5316;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x964D;&#x4F4E;&#x6D3B;&#x6027;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#xFF1A; ERK1/2 &#x548C; Sox9 &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x610F;&#x8574;&#x3002;

Calcineurin was found as a positive regulator of chondrogenesis in chondrifying chicken micromass cultures (HDCs), as cyclosporine A (CsA) reduced both the amount of cartilage and the expression of mRNAs of aggrecan and the chondrogenic transcription factor Sox9. Cartilage formation was inhibited by H(2)O(2) in a concentration-dependent manner without loss of cellular viability or severe decrease of cell number. Expression of both the mRNA and the unphosphorylated protein Sox9 was decreased, while its phosphorylation was stimulated by either H(2)O(2) or CsA. Oxidative stress decreased the activity of calcineurin but the phosphorylation of the member of MAPK family ERK1/2 was extremely elevated either by 1 mM H(2)O(2) or 2 muM CSA. The ERK inhibitor PD098059 attenuated the depletion of cartilage matrix as well as decreased the expression and phosphorylation of Sox9 in cultures treated with H(2)O(2) or CsA. Our results suggest that the chondrogenesis-inhibiting effect of H(2)O(2) is mediated, at least partly, by inhibition of calcineurin and by activation of ERK1/2. We also propose a regulatory role of calcineurin in the phosphorylation level of either ERK1/2 or Sox9 and a positive role of ERK1/2 in regulating both the expression level and the phosphorylation state of Sox9 in chicken HDCs.

Hydrogen peroxide inhibits formation of cartilage in chicken micromass cultures and decreases the activity of calcineurin: implication of ERK1/2 and Sox9 pathways.

La calcineurine a &eacute;t&eacute; trouv&eacute;e comme un r&eacute;gulateur positif de chondrogen&egrave;se dans chondrifying cultures de poulet micromass (HDCs), comme la cyclosporine A (CsA) r&eacute;duit la quantit&eacute; de cartilage et l&#39;expression des ARNm d&#39;AGGRECANE et le facteur de transcription chondrog&eacute;niques Sox9. La formation de cartilage est inhib&eacute;e par la H(2)O(2) d&#39;une mani&egrave;re dose-d&eacute;pendante sans perte de viabilit&eacute; cellulaire ou une diminution importante du nombre de cellules. Expression de l&#39;ARNm et la prot&eacute;ine lieu Sox9 a diminu&eacute;, tandis que sa phosphorylation a &eacute;t&eacute; stimul&eacute;e par H(2)O(2) ou CsA. Le stress oxydatif diminue l&#39;activit&eacute; de la calcineurine, mais la phosphorylation du membre de la famille des MAPK ERK1/2 a &eacute;t&eacute; extr&ecirc;mement &eacute;lev&eacute;e par 1 mM H(2)O(2) ou 2 maman CSA. L&#39;inhibiteur ERK PD098059 a att&eacute;nu&eacute; l&#39;appauvrissement de la couche de la matrice du cartilage ainsi que diminue l&#39;expression et la phosphorylation de Sox9 dans les cultures trait&eacute;es avec H(2)O(2) ou CsA. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que l&#39;effet inhibiteur de chondrogen&egrave;se de H(2)O(2) est, au moins en partie, par l&#39;inhibition de la calcineurine et activation de ERK1/2. Nous proposons &eacute;galement un r&ocirc;le r&eacute;gulateur de la calcineurine dans le niveau de phosphorylation de ERK1/2 ou Sox9 et un r&ocirc;le positif de ERK1/2 dans la r&eacute;gulation tant le niveau d&#39;expression et l&#39;&eacute;tat de phosphorylation de Sox9 dans poulet HDCs.

Peroxyde d&#39;hydrog&egrave;ne inhibe la formation de cartilage dans les cultures micromass poulet et diminue l&#39;activit&eacute; de la calcineurine : implication des voies ERK1/2 et Sox9.

Wasserstoffperoxid hemmt die Bildung von Knorpel in H&#xFC;hner Micromass Kulturen und vermindert die Aktivit&#xE4;t von Calcineurin: Auswirkungen von ERK1 / 2 und Sox9 Wege.

Calcineurina &egrave; stata trovata come un regolatore positivo della chondrogenesis in chondrifying culture micromass di pollo (HDCs), come la ciclosporina A (CsA) ha ridotto sia la quantit&agrave; di cartilagine e l&#39;espressione dei mRNAs aggrecan e il fattore di trascrizione chondrogenic Sox9. Formazione di cartilagine &egrave; stato inibito da H(2)O(2) in modo concentrazione-dipendente senza perdita di vitalit&agrave; cellulare o grave riduzione del numero delle cellule. Espressione di mRNA e di proteina unphosphorylated Sox9 era diminuito, mentre la fosforilazione &egrave; stata stimolata da H(2)O(2) o CsA. Lo stress ossidativo &egrave; diminuito l&#39;attivit&agrave; della calcineurina ma la fosforilazione del membro della famiglia MAPK ERK1/2 &egrave; stato estremamente elevata da 1 mM H(2)O(2) o mamma 2 CSA. L&#39;inibitore ERK PD098059 attenuato l&#39;esaurimento della matrice cartilaginea cos&igrave; come diminuito l&#39;espressione e la fosforilazione di Sox9 nelle colture trattate con H(2)O(2) o CsA. I nostri risultati suggeriscono che l&#39;effetto di inibizione della chondrogenesis di H(2)O(2) &egrave; mediata, almeno in parte, dall&#39;inibizione della calcineurina e dall&#39;attivazione di ERK1/2. Proponiamo inoltre un ruolo normativo della calcineurina il livello di fosforilazione di ERK1/2 o di Sox9 e un ruolo positivo di ERK1/2 nella regolazione sia il livello di espressione e lo stato di fosforilazione di Sox9 nel pollo HDCs.

Perossido di idrogeno inibisce la formazione di cartilagine nelle culture micromass pollo e diminuisce l&#39;attivit&agrave; della calcineurina: implicazione dei pathways ERK1/2 e Sox9.

&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3; A (CsA) &#x306F;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x306E;&#x91CF;&#x3068;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AB;&#x30F3;&#x3068;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; Sox9 &#x306E; Mrna &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x6E1B;&#x5C11;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x306E;&#x6B63;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x9D8F;&#x7D44;&#x6587;&#x5316; (Hdc) &#x306E; chondrifying &#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x30AB;&#x30BF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x306E;&#x6FC0;&#x6E1B;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306A;&#x3057;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30BF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x307E;&#x305F;&#x306F; CsA &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089; mRNA &#x304A;&#x3088;&#x3073; Sox9 &#x30DA;&#x30D7;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;ERK1/2 MAPK &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C; 1 mM &#x30AB;&#x30BF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 2 muM CSA &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4E0A;&#x6607;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ERK &#x963B;&#x5BB3;&#x5264; PD098059 &#x3067;&#x306F;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x306E;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; Sox9 &#x30AB;&#x30BF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x307E;&#x305F;&#x306F; CsA &#x6295;&#x4E0E;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30BF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x3068; ERK1/2 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068; Sox9 &#x9D8F; Hdc &#x3067;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x306B; ERK1/2 &#x307E;&#x305F;&#x306F; Sox9 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068; ERK1/2 &#x306E;&#x80AF;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.

&#x904E;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#x9D8F;&#x7D44;&#x57F9;&#x990A;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3066;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;: ERK1/2 &#x306F;&#x3001;Sox9 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x542B;&#x610F;&#x3002;

Calcineurin cyclosporine (CsA) &#xC5F0;&#xACE8;&#xC758; &#xAE08;&#xC561; &#xBC0F; mRNAs aggrecan&#xC640; chondrogenic &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; Sox9 &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xD0A8; micromass &#xBB38;&#xD654; (Hdc), chondrifying&#xC5D0;&#xC11C; chondrogenesis&#xC758; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC5F0;&#xACE8; &#xD615;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; &#xB610;&#xB294; &#xD734;&#xB300;&#xD3F0; &#xBC88;&#xD638;&#xC758; &#xC2EC;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xC5C6;&#xC774; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; H(2)O(2)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; Mrna&#xC640; unphosphorylated &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; sox9&#xC758; H(2)O(2) &#xB610;&#xB294; Csa&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC18C; calcineurin &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; MAPK &#xAC00;&#xC871; ERK1/2 &#xD68C;&#xC6D0;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; 1 mM H(2)O(2) &#xB610;&#xB294; 2 &#xC5C4;&#xB9C8; CSA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB192;&#xC740;. ERK &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; PD098059 &#xAC10;&#xC1E0; &#xC5F0;&#xACE8; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xBB38;&#xD654; H(2)O(2) &#xB610;&#xB294; CsA &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0;&#xC11C; sox9&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; calcineurin&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; ERK1/2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; H(2)O(2)&#xC758; chondrogenesis &#xC5B5;&#xC81C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC911;&#xC7AC;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xACFC; &#xCE58;&#xD0A8; Hdc&#xC5D0; Sox9 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; calcineurin ERK1/2 &#xB610;&#xB294; Sox9 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC900;&#xACFC; ERK1/2&#xC758; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC18C; &#xCE58;&#xD0A8; micromass &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACE8;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xAC10;&#xC18C; calcineurin &#xD65C;&#xB3D9;: ERK1/2&#xC640; Sox9 &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC758;&#xBBF8;.

Calcineurina se encontr&oacute; como un regulador positivo de la condrog&eacute;nesis en chondrifying las culturas pollo micromass (HDCs), como ciclosporina A (CsA) redujo la cantidad de cart&iacute;lago y la expresi&oacute;n de los mRNAs de aggrecan y el factor de transcripci&oacute;n condrog&eacute;nica Sox9. Formaci&oacute;n de cart&iacute;lago fue inhibida por h de manera dependiente de la concentraci&oacute;n sin p&eacute;rdida de viabilidad celular o severa disminuci&oacute;n del n&uacute;mero de c&eacute;lulas. Expresi&oacute;n de mRNA y la prote&iacute;na unphosphorylated Sox9 se redujo, mientras que su fosforilaci&oacute;n fue estimulada por h o CsA. El estr&eacute;s oxidativo disminuy&oacute; la actividad de calcineurina pero la fosforilaci&oacute;n de los miembros de la familia MAPK ERK1/2 fue extremadamente elevada por 1 mM h o 2 mam&aacute; CSA. El inhibidor ERK PD098059 aten&uacute;a el agotamiento de la matriz del cart&iacute;lago as&iacute; como disminuci&oacute;n de la expresi&oacute;n y la fosforilaci&oacute;n de Sox9 en cultivos tratados con h o CsA. Nuestros resultados sugieren que el efecto inhibidor condrog&eacute;nesis de h es mediado, al menos en parte, por la inhibici&oacute;n de la calcineurina y por la activaci&oacute;n de ERK1/2. Tambi&eacute;n proponemos un papel regulador de la calcineurina en el nivel de fosforilaci&oacute;n de ERK1/2 o Sox9 y un papel positivo de ERK1/2 en regular el nivel de expresi&oacute;n y el estado de fosforilaci&oacute;n de Sox9 en HDCs pollo.

Per&oacute;xido de hidr&oacute;geno, inhibe la formaci&oacute;n de cart&iacute;lago en culturas de pollo micromass y disminuye la actividad de calcineurina: implicaci&oacute;n de ERK1/2 y Sox9.

&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x6709;&#x7275;&#x8FDE;&#x5F71;&#x54CD;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x6216;&#x5173;&#x8282;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x9020;&#x6210;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x89E6;&#x53D1;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x6838;&#x9176;&#xFF0C;poly(ADP-ribose) &#x805A;&#x5408;&#x9176;-1 (&#x6CE2;&#x5170;-1&#xFF09; &#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x635F;&#x4F24;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x65E8;&#x5728;&#x8C03;&#x67E5;&#x8FC7;&#x6C27;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0; &#xFF08;100-600 microM) &#x548C;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x6C22;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD; (0.1-4 &#x6BEB;&#x7C73;) &#x5BF9;&#x6CE2;&#x5170;&#x6D3B;&#x5316;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x751F;&#x4EA7;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x5FAE;&#x6587;&#x5316; (HDC) &#x7684;&#x7F16;&#x5236;&#x4ECE;&#x9E21;&#x80A2;&#x82BD;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x79CD;&#x5F3A;&#x70C8;&#x6291;&#x5236;&#x77E9;&#x9635;&#x5F62;&#x6210;&#x7684; HDCs &#x6CBB;&#x7597;&#x7B2C; 2 &#x5929;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x7B2C; 5 &#x5929;&#x3002;&#x6CE2;&#x5170;&#x6291;&#x5236;&#x5242; 3 aminobenzamide (3-AB) &#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x77E9;&#x9635;&#x751F;&#x4EA7;&#x975E;&#x5F3A;&#x8C03;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x9632;&#x6B62;&#x9690;&#x542B;&#x7684;&#x77E9;&#x9635;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6C22;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x548C;&#x8FC7;&#x6C27;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x81F4;&#x6CE2;&#x5170;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C; poly(ADP-ribose) &#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#x3001; &#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x548C; NAD + &#x5185;&#x5BB9;&#x90FD;&#x6CA1;&#x6709;&#x6216;&#x53EA;&#x662F;&#x7565;&#x6709;&#x6539;&#x5584; 3-AB&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x8BE5; 3 AB &#x76F4;&#x63A5;&#x5F71;&#x54CD;&#x77E9;&#x9635;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x523A;&#x6FC0; poly(ADP-ribose) &#x4EE3;&#x8C22;&#x548C;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684; HDCs &#x6CE2;&#x5170;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x65E8;&#x5728;&#x6062;&#x590D;&#x77E9;&#x9635;&#x4EA7;&#x80FD;&#x7684;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0; poly(ADP-ribosyl) &#x9E21;&#x4E2D;&#x4E0B;&#x80A2;&#x82BD;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Oxidative stress has been implicated in the pathogenesis of various diseases affecting chondrogenesis or the function of articular cartilage. DNA damage caused by oxidative stress may trigger the activation of the nuclear enzyme, poly(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1) which may contribute to tissue injury. We aimed at investigating the effects of peroxynitrite (100-600 microM) and hydrogen peroxide (0.1-4 mM) on PARP activation and extracellular matrix production of high density micromass cultures (HDC) prepared from chick limb bud mesenchymal cells. We found that both oxidative species strongly inhibited matrix formation of HDCs treated on day 2 but not on day 5. The PARP inhibitor 3-aminobenzamide (3-AB) stimulated matrix production in non-stressed cells and prevented suppressed matrix production in oxidatively stressed cells. Both hydrogen peroxide and peroxynitrite induced PARP activation and poly(ADP-ribose) accumulation. Decreased proliferation, viability and NAD+ content were not or only slightly improved by 3-AB, indicating that 3-AB directly affects matrix formation. In conclusion, oxidative stress stimulates poly(ADP-ribose) metabolism and inhibits extracellular matrix production of HDCs in a PARP-dependent manner. Our findings may have implications for potential therapeutic approaches aimed at restoring the matrix production capacity of chondrogenic cells.

Oxidative stress-induced poly(ADP-ribosyl)ation in chick limb bud-derived chondrocytes.

Le stress oxydatif a &eacute;t&eacute; impliqu&eacute; dans la pathogen&egrave;se de diverses maladies affectant chondrogen&egrave;se ou la fonction du cartilage articulaire. L&eacute;sions de l&#39;ADN provoqu&eacute;e par le stress oxydatif peuvent d&eacute;clencher l&#39;activation de l&#39;enzyme nucl&eacute;aire, ribose polym&eacute;rase-1 (PARP-1) qui peut-&ecirc;tre contribuer &agrave; une l&eacute;sion tissulaire. Nous nous sommes efforc&eacute;s d&#39;&eacute;tudier les effets du peroxynitrite (microM 100-600) et de peroxyde d&#39;hydrog&egrave;ne (0,1 &agrave; 4 mM) sur l&#39;activation de PARP et production de la matrice extracellulaire des cultures de haute densit&eacute; micromass (HDC) pr&eacute;par&eacute; &agrave; partir de cellules m&eacute;senchymateuses bourgeon membre de poussin. Nous avons constat&eacute; que les deux esp&egrave;ces oxydants fortement inhibent la formation de la matrice de HDCs trait&eacute;s au jour 2, mais pas au jour 5. L&#39;inhibiteur PARP 3-aminobenzamide (3-AB) stimule la production de matrice dans des cellules non sollicit&eacute;s et emp&ecirc;ch&eacute; la production de matrice supprim&eacute;e dans des cellules stress&eacute;es par oxydation. Peroxyde d&#39;hydrog&egrave;ne et de peroxynitrique induite par activation de PARP et accumulation de ribose. Une diminution de la prolif&eacute;ration, la viabilit&eacute; et le NAD + contenu &eacute;taient pas ou seulement l&eacute;g&egrave;rement am&eacute;lior&eacute;es par 3-AB, indiquant que 3-AB affecte directement la formation de la matrice. En conclusion, le stress oxydatif stimule le m&eacute;tabolisme de ribose et inhibe la production de matrice extracellulaire de HDCs de mani&egrave;re PARP-d&eacute;pendante. Nos r&eacute;sultats pourraient avoir des r&eacute;percussions pour les approches th&eacute;rapeutiques potentielles visant &agrave; restaurer la capacit&eacute; de production de matrice de cellules chondrog&eacute;niques.

Oxidative stress induit par poly(ADP-ribosyl) ation en poussin branche d&eacute;riv&eacute;e de bourgeon chondrocytes.

Oxidativer Stress hat in der Pathogenese von verschiedenen Krankheiten, die die Chondrogenesis oder die Funktion des Gelenkknorpels verwickelt. DNA-Sch&auml;den durch oxidativen Stress kann die Aktivierung des Enzyms nukleare, poly(ADP-ribose) Polymerase-1 (PARP-1) ausl&ouml;sen, die zu Gewebeverletzungen beitragen k&ouml;nnen. Wir untersuchen die Auswirkungen der Peroxynitrite (100-600 MicroM) und Wasserstoffperoxid abzielen (0.1-4 mM) auf PARP-Aktivierung und Produktion der extrazellul&auml;ren Matrix hochdichte Micromass Kulturen (HDC) aus K&uuml;ken Gliedma&szlig;en Knospe Mesenchymale Zellen vorbereitet. Wir fanden, dass die beiden oxidativen Spezies Matrix Bildung von HDCs behandelt am Tag 2 aber nicht am Tag 5 stark gehemmt. Die PARP-Inhibitor 3-Aminobenzamide (3-AB) Matrix-Produktion in nicht-betonte Zellen stimuliert und unterdr&uuml;ckte Matrix Produktion in oxidativ gestresste Zellen verhindert. Wasserstoffperoxid und Peroxynitrite induzierte PARP-Aktivierung und poly(ADP-ribose) Ansammlung. Verminderter Proliferation, Lebensf&auml;higkeit und NAD + Inhalt wurden nicht oder nur geringf&uuml;gig verbesserte sich um 3-AB, der angibt, dass dieser 3-AB Matrix Bildung unmittelbar ber&uuml;hrt. Abschlie&szlig;end oxidativer Stress regt poly(ADP-ribose) Stoffwechsel und hemmt extrazellul&auml;ren Matrix Produktion von HDCs PARP-abh&auml;ngigen Weise. Unsere Ergebnisse m&ouml;glicherweise Auswirkungen auf m&ouml;gliche therapeutische Ans&auml;tze, die durch die Matrix-Produktionskapazit&auml;t faserreiche Zellen wiederhergestellt werden soll.

Oxidativen Stress-induced Poly(ADP-ribosyl) Ation in K&uuml;ken Extremit&auml;ten Knospe abgeleitete Chondrozyten.

Lo stress ossidativo &egrave; stato implicato nella patogenesi di varie malattie che colpiscono la funzione della cartilagine articolare o chondrogenesis. Danni al DNA causati da stress ossidativo possono innescare l&#39;attivazione dell&#39;enzima nucleare, poly(ADP-ribose) polimerasi-1 (PARP-1) che possono contribuire al danno dei tessuti. Abbiamo puntato studiando gli effetti di perossinitrito (100-600 microM) e perossido di idrogeno (0,1-4 mM) su attivazione di PARP e produzione della matrice extracellulare, di alta densit&agrave; micromass colture (HDC), preparato da cellule mesenchimali pulcino arto bud. Abbiamo trovato che entrambe le specie ossidativa fortemente ha inibito la formazione di matrice di HDCs trattati il giorno 2 ma non il giorno 5. L&#39;inibitore PARP 3-aminobenzamide (3-AB) ha stimolato la produzione di matrice nelle celle non sollecitato e impedito produzione matrix soppresso nelle cellule agli stressati. Perossido di idrogeno sia perossinitrito indotta da attivazione di PARP e accumulo di poly(ADP-ribose). Ridotta proliferazione, vitalit&agrave; e NAD + contenuto non erano o solo leggermente migliorate da 3-AB, indicando che AB-3 colpisce direttamente la formazione di matrice. In conclusione, lo stress ossidativo stimola il metabolismo poly(ADP-ribose) e inibisce la produzione di matrice extracellulare di HDCs in modo PARP-dipendente. I nostri risultati possono avere implicazioni per potenziali approcci terapeutici volti a ripristinare la capacit&agrave; di produzione di matrice delle cellule chondrogenic.

Oxidative stress-induced poly(ADP-ribosyl) ation in pulcino arto condrociti bud-derivato.

&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x3084;&#x95A2;&#x7BC0;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308B; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x6838;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30FC;&#x30B9; &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; - &#x7D44;&#x7E54;&#x640D;&#x50B7;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059; 1 (PARP-1) &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x30D1;&#x30FC;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7; &#x30CA;&#x30A4;&#x30C8; &#x30E9;&#x30A4;&#x30C8; (100-600 microM) &#x3068;&#x904E;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x305F; (0.1 4 mM) PARP &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x751F;&#x7523;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x7D44;&#x6587;&#x5316; (HDC) &#x306E;&#x30CB;&#x30EF;&#x30C8;&#x30EA;&#x80A2;&#x82BD;&#x9593;&#x8449;&#x7CFB;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x9178;&#x5316;&#x7A2E;&#x5F37;&#x304F; 2 &#x65E5;&#x76EE;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F; 5 &#x65E5;&#x76EE;&#x6271;&#x308F; Hdc &#x306E;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;PARP &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30EA;&#x30DC;&#x30FC;&#x30B9;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; (3-AB) &#x751F;&#x7523;&#x975E;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9632;&#x6B62;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;&#x904E;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#x3068;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7; &#x30CA;&#x30A4;&#x30C8; &#x30E9;&#x30A4;&#x30C8; PARP &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30EA;&#x30DC;&#x30FC;&#x30B9;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x306A;&#x3044;&#x6E1B;&#x5C11;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3001;NAD + &#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x307B;&#x3093;&#x306E;&#x5C11;&#x3057;&#x3060;&#x3051;&#x305D;&#x306E; 3 AB &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x793A;&#x3059; 3 &#x306E; AB &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30FC;&#x30B9;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x3001;Hdc &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x751F;&#x7523; PARP &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3092;&#x76EE;&#x6307;&#x3057;&#x305F;&#x6CBB;&#x7642;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x8A98;&#x8D77; poly(ADP-ribosyl) &#x60C5;&#x5831;&#x3072;&#x3088;&#x3053;&#x306E;&#x80A2;&#x82BD;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;

&#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; chondrogenesis &#xB610;&#xB294; &#xAD00;&#xC808; &#xC5F0;&#xACE8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xBCD1; &#xC778;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB2E4;. DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC774; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; poly(ADP-ribose) &#xD6A8;&#xC18C;-1 (PARP-1) &#xC870;&#xC9C1; &#xC0C1;&#xD574;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD575; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xAC8C;&#xC7AC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; peroxynitrite (100-600 microM)&#xC640; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC18C;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC; &#xBAA9;&#xC801; (0.1-4 m m) PARP &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xBCD1;&#xC544;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xB9AC; &#xBC84;&#xB4DC; &#xC911;&#xAC04; &#xC5FD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC900;&#xBE44; &#xB41C; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; micromass &#xBB38;&#xD654; (HDC)&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0;. &#xB450; &#xC0B0;&#xD654; &#xC885;&#xC758; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xD558;&#xB8E8;&#xC5D0; 2&#xB9CC; 5 &#xC77C;&#xC9F8;&#xC5D0; Hdc&#xC758; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xD615;&#xC131; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PARP &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; 3-aminobenzamide (3-AB) &#xBE44; &#xAC15;&#xC870; &#xC140;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xACE0; oxidatively &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB41C; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xBC29;&#xD574;. &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC18C;&#xC640; peroxynitrite &#xC720;&#xB3C4; PARP &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; poly(ADP-ribose) &#xCD95;&#xC801; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xAC10;&#xC18C; &#xD655;&#xC0B0;, &#xC0DD;&#xC874; &#xBC0F; NAD + &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xD588;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; &#xC57D;&#xAC04;&#xB9CC; &#xAC1C;&#xC120; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; 3-ab, &#xADF8; 3 AB&#xB294; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; poly(ADP-ribose) &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xACE0; PARP &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; Hdc&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF5;&#xC6D0; chondrogenic &#xC140;&#xC758; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xACA8;&#xB0E5; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC811;&#xADFC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC758;&#xBBF8; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xBC1C; poly(ADP-ribosyl) ation &#xBCD1;&#xC544;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xBC84;&#xB4DC; &#xD30C;&#xC0DD; chondrocytes &#xBD84;&#xC218;&#xB839;.

El estr&eacute;s oxidativo se ha implicado en la patogenia de varias enfermedades que afectan a la condrog&eacute;nesis o la funci&oacute;n del cart&iacute;lago articular. Da&ntilde;o del ADN causado por el estr&eacute;s oxidativo puede provocar la activaci&oacute;n de la enzima nuclear, ribosa polimerasa-1 (PARP-1) que puede contribuir a la lesi&oacute;n tisular. El objetivo fue investigar los efectos de peroxinitrito (100-600 microM) y per&oacute;xido de hidr&oacute;geno (0.1-4 mM) en activaci&oacute;n de PARP y producci&oacute;n de la matriz extracelular de culturas micromass de alta densidad (HDC) preparado a partir de c&eacute;lulas mesenquimales de polluelo miembro bud. Encontramos que ambas especies oxidativas fuertemente inhibici&oacute;n la formaci&oacute;n de la matriz de HDCs tratados en el d&iacute;a 2 pero no el d&iacute;a 5. El inhibidor PARP 3-Aminobenzamida (3-AB) estimula la producci&oacute;n de la matriz en c&eacute;lulas no-tensionado y hab&iacute;a prevenido producci&oacute;n suprimida de la matriz en c&eacute;lulas oxidativamente estresadas. Tanto el per&oacute;xido de hidr&oacute;geno como el peroxinitrito inducida por la activaci&oacute;n de la PARP y acumulaci&oacute;n de ribosa. Disminuci&oacute;n de la proliferaci&oacute;n, la viabilidad y el NAD + contenido no o solamente levemente mejoraron 3-AB, lo que indica 3-AB afecta directamente a la formaci&oacute;n de la matriz. En conclusi&oacute;n, el estr&eacute;s oxidativo estimula el metabolismo de la ribosa e inhibe la producci&oacute;n de la matriz extracelular de HDCs en una forma dependiente de PARP. Nuestros resultados pueden tener implicaciones para posibles enfoques terap&eacute;uticos encaminados a restablecer la capacidad de producci&oacute;n de la matriz de c&eacute;lulas condrog&eacute;nica.

Oxidative stress-inducida Poly(ADP-ribosyl) aci&oacute;n en chick miembro condrocitos derivado del brote.

Es ist bekannt, dass PMA (Phorbol-12-Isopropylmyristat-13-Acetat) klassische und neuartige Protein Kinase C Isoenzymes (cPKC Alpha, Beta, Gamma und nPKC Delta, Epsilon, Eta, Theta), w&auml;hrend das Kalzium aktivieren kann Ionen kann nur die Aktivit&auml;t der cPKC induzieren. Calcineurin verbindliches Protein (Kabine 1) geh&ouml;rt zur Gruppe der endogenen Calcineurin-Inhibitoren. Kabine 1 wird Hyperphosphorylated als Reaktion auf PKC Aktivierung und kann eine negative Rolle bei Calcineurin signalisieren. Es wurde beobachtet, dass PMA-Behandlung und die Zunahme der intrazellul&auml;ren Ca2 + zur Verringerung der Calcineurin-Aktivit&auml;t in menschlichen peripheren Blut mononukle&auml;ren Zellen beigetragen, ohne Modulierung der mRNA und Protein-Ebene von Calcineurin. PMA und Ca-Ionophor (A23187), die aktivierenden Agenten der PKC, allein angewendet oder in Kombination, deutlich erh&ouml;ht den Phosphorylierung Zustand der Kabine 1 wie durch Immunopr&auml;zipitation Kabine 1 aufgedeckt inhaltlich Phospho-Ser durch spezifische Antik&ouml;rper erkennen. GF109203X, ein Inhibitor der Klassiker und neuartige Protein Kinase C Isoenzymes, und G&ouml;6976, die selektiver Inhibitor der klassischen cPKC Isoenzymes konnten sich die Wirkung von PMA abzuschaffen oder / und Ca-Ionophor auf der Calcineurin-Aktivit&auml;t mit damit einhergehenden Umkehr der Hyperphosphorylation Kabine 1. Das Calcineurin-Kabine-1-System wurde von Rottlerin, ein Inhibitor der PKC Delta Isoenzym fehlen oder in Gegenwart von Ca-Ionophor und PMA nicht beeinflusst. Beweis f&uuml;r die herausragende Rolle der cPKC Alpha, Beta, Gamma Isoenzymes in die Hemmung von Calcineurin pr&auml;sentierten wir, wie durch PMA und Ca-Ionophor induziert. Wir zeigten auch, dass Hyperphosphorylation Kabine 1 von PMA / Ca2 +-aktivierten cPKC Isoenzymes ergab eine gleichzeitige Hemmung von Calcineurin in peripheren mononukle&auml;ren Blutzellen. Diese Resultate schlagen eine negative Rolle f&uuml;r Kabine 1 in Calcineurin Signalisierung und bieten einen m&ouml;glichen Mechanismus von Feedback-Hemmung durch Nebensprechen zwischen PKC und Calcineurin.

Die Rolle der Protein-Kinase C-Isoenzymes in der Verordnung der Calcineurin-Aktivit&auml;t in menschlichen peripheren Blut MONONUKLE&Auml;RE Zellen.

&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5; PMA &#xFF08;&#x4F5B;&#x6CE2;-12--13-&#x916F;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0B;&#xFF09; &#x53EF;&#x4EE5;&#x6FC0;&#x6D3B; (cPKC alpha&#x3001; beta &#x7248;&#x3001; &#x4F3D;&#x9A6C;&#x548C; nPKC &#x4E09;&#x89D2;&#x6D32;&#x3001; epsilon&#x3001; eta&#x3001; theta)&#x3001; &#x53E4;&#x5178;&#x548C;&#x65B0;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x540C;&#x5DE5;&#x9176;&#x540C;&#x65F6;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x53EA;&#x6709; cPKC &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (&#x673A;&#x8231; 1) &#x96B6;&#x5C5E;&#x4E8E;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x7684;&#x96C6;&#x56E2;&#x3002;&#x673A;&#x8231; 1 &#x53D8;&#x4E3A; hyperphosphorylated PKC &#x6FC0;&#x6D3B;&#x54CD;&#x5E94;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x8D77;&#x5230;&#x6D88;&#x6781;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x6709;&#x4EBA;&#x6307;&#x51FA; PMA &#x6CBB;&#x7597;&#x548C;&#x80DE;&#x5185; Ca2 + &#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x51CF;&#x5C11;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x65E0;&#x8C03;&#x8282;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x3002;PMA &#x548C; Ca-&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4EE3;&#x7406;&#x7684; PKC&#xFF0C;&#x5355;&#x72EC;&#x5E94;&#x7528;&#x6216;&#x4E24;&#x8005;&#x7ED3;&#x5408;&#xFF0C;&#x79BB;&#x5B50;&#x8F7D;&#x4F53; (A23187)&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x5C0F;&#x5C4B; 1 &#x6240;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x5C0F;&#x5C4B; 1 &#x6C89;&#x6DC0;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5176;&#x78F7; Ser &#x5185;&#x5BB9;&#x3002;GF109203X&#xFF0C;&#x7ECF;&#x5178;&#x7684;&#x548C;&#x65B0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x540C;&#x5DE5;&#x9176;&#x3001; &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x548C; G&ouml;6976&#xFF0C;&#x53E4;&#x5178; cPKC &#x540C;&#x5DE5;&#x9176;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5F97;&#x4EE5;&#x5E9F;&#x9664; PMA &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x6216; / &#x548C; Ca-&#x79BB;&#x5B50;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4E0E;&#x968F;&#x4E4B;&#x800C;&#x6765;&#x7684;&#x5C0F;&#x5C4B; 1 hyperphosphorylation &#x9006;&#x8F6C;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x3002;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;/&#x8231; 1 &#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5230; Rottlerin&#xFF0C;PKC &#x4E09;&#x89D2;&#x6D32;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x6216; Ca &#x79BB;&#x5B50;&#x8F7D;&#x4F53;&#x548C; PMA &#x7684;&#x540C;&#x5DE5;&#x9176;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86; cPKC &alpha;&#x3001; &beta;&#x3001; &gamma; &#x540C;&#x5DE5;&#x9176;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x7684;&#x7A81;&#x51FA;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#xFF0C;&#x7ECF; PMA &#x548C; Ca &#x79BB;&#x5B50;&#x8F7D;&#x4F53;&#x6240;&#x81F4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x8231;&#x5BA4; 1 PMA &#x7684; hyperphosphorylation / Ca2 +-&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; cPKC &#x540C;&#x5DE5;&#x9176;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6D88;&#x6781;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5C0F;&#x5C4B; 1 &#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53CD;&#x9988;&#x6291;&#x5236; PKC &#x548C;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x901A;&#x8FC7;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x540C;&#x5DE5;&#x9176;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x4EBA;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x4E2D;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x8840;&#x6DB2;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

It is known that PMA (phorbol-12-myristate-13-acetate) can activate the classical and novel protein kinase C isoenzymes (cPKC alpha, beta, gamma and nPKC delta, epsilon, eta, theta), while the calcium ion can induce only the activity of cPKC. Calcineurin binding protein (Cabin 1) belongs to the group of endogenous inhibitors of calcineurin. Cabin 1 becomes hyperphosphorylated in response to PKC activation and may play a negative role in calcineurin signalling. It was observed that both PMA treatment and the increase in intracellular Ca2+ contributed to the reduction of calcineurin activity in human peripheral blood mononuclear cells without modulating the mRNA and the protein levels of calcineurin. PMA and Ca-ionophore (A23187), the activating agents of PKC, applied alone or in combination, significantly increased the phosphorylation state of Cabin 1 as revealed by immunoprecipitation of Cabin 1 detecting its phospho-Ser content by specific antibodies. GF109203X, an inhibitor of the classic and the novel protein kinase C isoenzymes, and GÃ¶6976, the selective inhibitor of the classical cPKC isoenzymes were able to abolish the effect of PMA or/and Ca-ionophore on the calcineurin activity with concomitant reversal of the hyperphosphorylation of Cabin 1. The calcineurin/Cabin 1 system was not influenced by Rottlerin, an inhibitor of PKC delta isoenzyme either in the absence or in the presence of Ca-ionophore and PMA. We presented evidence for the prominent role of cPKC alpha, beta, gamma isoenzymes in the inhibition of calcineurin as induced by PMA and Ca-ionophore. We demonstrated also that hyperphosphorylation of Cabin 1 by PMA/Ca2+-activated cPKC isoenzymes resulted in a simultaneous inhibition of calcineurin in peripheral blood mononuclear cells. These results suggest a negative regulatory role for Cabin 1 in calcineurin signalling and provide a possible mechanism of feedback inhibition through cross-talk between PKC and calcineurin.

The role of protein kinase C isoenzymes in the regulation of calcineurin activity in human peripheral blood mononuclear cells.

On sait que PMA (phorbol-12-myristate-13-ac&eacute;tate) peut activer les isoenzymes classique et nouvelle prot&eacute;ine kinase C (cPKC alpha, b&ecirc;ta, gamma et nPKC delta, epsilon, LTA, th&ecirc;ta), tandis que le calcium ionique peut induire seulement l&#39;activit&eacute; des cPKC. Prot&eacute;ine de liaison de la calcineurine (1 cabine) appartient au groupe des inhibiteurs endog&egrave;nes de la calcineurine. Cabine 1 devient hyperphosphoryl&eacute;e en r&eacute;ponse &agrave; l&#39;activation de la PKC et peut jouer un r&ocirc;le n&eacute;gatif dans la signalisation de la calcineurine. Il a &eacute;t&eacute; observ&eacute; que les traitement de PMA et l&#39;augmentation de Ca2 + intracellulaire a contribu&eacute; &agrave; la r&eacute;duction de l&#39;activit&eacute; de la calcineurine en cellules mononucl&eacute;aires de sang p&eacute;riph&eacute;rique humain sans modulation de l&#39;ARNm et les niveaux de la prot&eacute;ine de la calcineurine. PMA et Ca-ionophore (A23187), les agents d&#39;activation de la PKC, appliqu&eacute; seul ou en combinaison, augment&eacute; consid&eacute;rablement l&#39;&eacute;tat de phosphorylation de la cabine 1 telle que r&eacute;v&eacute;l&eacute;e par immunopr&eacute;cipitation de la cabine 1 d&eacute;tecter son contenu phospho-Ser par les anticorps sp&eacute;cifiques. GF109203X, un inhibiteur de la classique et isoenzymes nouvelle prot&eacute;ine kinase C et G&ouml;6976, l&#39;inhibiteur s&eacute;lectif des isoenzymes cPKC classique ont &eacute;t&eacute; en mesure de supprimer l&#39;effet de la PMA ou / et Ca-ionophore sur l&#39;activit&eacute; de la calcineurine avec inversion concomitante de la hyperphosphoryl&eacute;e de cabine 1. Le syst&egrave;me de la calcineurine/cabine 1 n&#39;est pas influenc&eacute; par le Rottlerin, un inhibiteur de l&#39;isoenzyme de delta PKC en l&#39;absence ou en pr&eacute;sence de Ca-ionophore et PMA. Nous avons pr&eacute;sent&eacute; des preuves pour le r&ocirc;le important des cPKC alpha, b&ecirc;ta, isoenzymes de gamma dans l&#39;inhibition de la calcineurine comme induite par les PMA et Ca-ionophore. Nous avons d&eacute;montr&eacute; aussi que hyperphosphoryl&eacute;e de cabine 1 par AGP / Ca2 +-cPKC activ&eacute;s isoenzymes a entra&icirc;n&eacute; une inhibition simultan&eacute;e de la calcineurine en cellules mononucl&eacute;aires de sang p&eacute;riph&eacute;rique. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent un r&ocirc;le r&eacute;gulateur n&eacute;gatif pour 1 cabine dans la signalisation de la calcineurine et fournissent un m&eacute;canisme possible de r&eacute;troinhibition par diaphonie entre PKC et la calcineurine.

Le r&ocirc;le des isoenzymes de prot&eacute;ine kinase C dans la r&eacute;gulation de l&#39;activit&eacute; de la calcineurine en p&eacute;riph&eacute;rique humain cellules mononucl&eacute;aires de sang.

&Egrave; noto che la PMA (forbolo-12-Miristato-13-acetato) pu&ograve; attivare gli Isoenzimi classica e romanzo della proteina chinasi C (cPKC alfa, beta, gamma e nPKC delta, epsilon, eta, theta), mentre il calcio ione pu&ograve; indurre solo l&#39;attivit&agrave; di cPKC. Proteina calcineurina (cabina 1) appartiene al gruppo di inibitori endogeni della calcineurina. Cabina 1 diventa iperfosforilata in risposta all&#39;attivazione della PKC e pu&ograve; giocare un ruolo negativo nella segnalazione della calcineurina. &Egrave; stato osservato che sia il trattamento PMA e l&#39;aumento di Ca2 + intracellulare ha contribuito alla riduzione dell&#39;attivit&agrave; della calcineurina in cellule mononucleate di sangue periferico umano senza modulazione mRNA e i livelli di proteina della calcineurina. PMA e Ca-ionoforo (A23187), gli agenti attivanti di PKC, applicato da solo o in combinazione, aumentato significativamente lo stato di fosforilazione della cabina 1 come rivelato da immunoprecipitazione della cabina 1 rilevando il contenuto di fosfo-Ser di anticorpi specifici. GF109203X, un inibitore del classico e gli Isoenzimi romanzo della proteina chinasi C e G&ouml;6976, l&#39;inibitore selettivo di isoenzimi della classica cPKC erano in grado di sopprimere l&#39;effetto di PMA o / e Ca-ionoforo sull&#39;attivit&agrave; della calcineurina con concomitante inversione di iperfosforilazione della cabina 1. Il sistema della calcineurina/cabina 1 non &egrave; stato influenzato da rottlerina, un inibitore dell&#39;isoenzima di delta PKC in assenza o in presenza di Ca-ionoforo e PMA. Abbiamo presentato elementi di prova per il ruolo prominente di cPKC alfa, beta, isoenzimi gamma nell&#39;inibizione della calcineurina come indotta da PMA e Ca-ionoforo. Abbiamo anche dimostrato che iperfosforilazione della cabina 1 di PMA / Ca2 +-activated cPKC isoenzimi ha provocato una simultanea inibizione della calcineurina in cellule mononucleate di sangue periferico. Questi risultati suggeriscono un ruolo normativo negativo per cabina 1 nella segnalazione della calcineurina e forniscono un possibile meccanismo di inibizione feedback attraverso il cross-talk tra PKC e calcineurina.

Il ruolo degli isoenzimi di proteina chinasi C nella regolazione dell&#39;attivit&agrave; della calcineurina nel periferico umano cellule mononucleate del sangue.

PMA &#xFF08;&#x30DB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30FC;&#x30EB; 12-&#x30DF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x9178;-13-&#x30A2;&#x30BB;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C8;) &#x4E2D;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x53E4;&#x5178;&#x3068;&#x65B0;&#x898F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0; (cPKC &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3001;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x3001;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073; nPKC &#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;&#x3001;&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;, eta&#x3001;&#x30B7;&#x30FC;&#x30BF;&#xFF09; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; cPKC &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (&#x30AD;&#x30E3;&#x30D3;&#x30F3; 1&#xFF09; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x5C5E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D3;&#x30F3; 1 &#x904E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066; PKC &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PMA &#x6CBB;&#x7642;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; ca 2 + &#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3072;&#x3068;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x5358;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F; mRNA &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306A;&#x3057;&#x8CA2;&#x732E;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;PMA &#x3068; Ca &#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2; (A23187) &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5264;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x9069;&#x7528; PKC &#x306E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3001;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D3;&#x30F3; 1 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D3;&#x30F3; 1 &#x306E;&#x6C88;&#x964D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x305D;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A9; Ser &#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7279;&#x7570;&#x6297;&#x4F53;&#x691C;&#x51FA;&#x5897;&#x52A0;&#x3002;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x65B0;&#x898F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; GF109203X &#x3068; G&ouml;6976&#x3001;&#x53E4;&#x5178; cPKC &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x304C; PMA &#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;/&#x304A;&#x3088;&#x3073; Ca &#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x3092;&#x4F75;&#x7528;&#x9006;&#x8EE2;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D3;&#x30F3; 1 &#x306E;&#x30BF;&#x30A6;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30AD;&#x30E3;&#x30D3;&#x30F3; 1 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; Rottlerin&#x3001;PKC &#x30C7;&#x30EB;&#x30BF; &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x4E0D;&#x5728;&#x307E;&#x305F;&#x306F; Ca &#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x3068; PMA &#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;PMA &#x3068; Ca &#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A3C;&#x62E0; cPKC &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3001;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x3001;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE; &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x8457;&#x540D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30BF;&#x30A6; &#x30AD;&#x30E3;&#x30D3;&#x30F3; 1 PMA &#x3067;&#x306E;&#x5B9F;&#x8A3C;/ca 2 +-&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x5358;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x963B;&#x5BB3;&#x6D3B;&#x6027; cPKC &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D3;&#x30F3; 1 &#x8CA0;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3001;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30AF; PKC &#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x3072;&#x3068;&#x672B;&#x68A2;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x8840;&#x5358;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;

PMA (phorbol-12-myristate-13-&#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8;) &#xCE7C;&#xC298; &#xB3D9;&#xC548; &#xD074;&#xB798;&#xC2DD;&#xACFC; &#xC18C;&#xC124; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C isoenzymes (cPKC &#xC54C;&#xD30C;, &#xBCA0;&#xD0C0;, &#xAC10;&#xB9C8; &#xBC0F; nPKC &#xB378;&#xD0C0;, &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860;, &#xB3C4;&#xCC29; &#xC608;&#xC815; &#xC2DC;&#xAC04;, &#xC138;&#xD0C0;)&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC774;&#xC628;&#xB9CC; Cpkc&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. Calcineurin &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (&#xCE90;&#xBE48; 1) &#xC0DD; calcineurin &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD55C;&#xB2E4;. &#xCE90;&#xBE48; 1 PKC &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; hyperphosphorylated&#xAC00; &#xB418;&#xBA70; calcineurin &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PMA &#xCE58;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca2 + &#xC99D;&#xAC00;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; calcineurin &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB9D0; &#xCD08; &#xD608;&#xC561; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC758; calcineurin &#xBCC0;&#xC870; &#xC5C6;&#xC774; &#xAD00;&#xCC30;. PMA&#xC640; Ca-ionophore (A23187), &#xC870;&#xD569;, &#xB610;&#xB294; &#xD63C;&#xC790; &#xC801;&#xC6A9; PKC&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC624;&#xB450;&#xB9C9; 1&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xAD6D;&#xAC00; &#xC624;&#xB450;&#xB9C9; 1&#xC758; immunoprecipitation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACF5;&#xAC1C; &#xC778; Ser &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0;. GF109203X, &#xD074;&#xB798;&#xC2DD;&#xACFC; &#xC18C;&#xC124; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C isoenzymes&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC640; G&ouml;6976, &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; cPKC isoenzymes&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; PMA &#xD6A8;&#xACFC; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; / &#xBC0F; Ca-ionophore &#xC624;&#xB450;&#xB9C9; 1 hyperphosphorylation&#xC758; &#xBD80;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xBC18;&#xC804; calcineurin &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0;. Calcineurin/&#xCE90;&#xBE48; 1 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; Rottlerin, PKC &#xB378;&#xD0C0; isoenzyme Ca ionophore&#xC640; PMA&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xB610;&#xB294; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; &#xBC18;&#xC751; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC19;&#xC774; PMA&#xC640; Ca ionophore&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; cPKC &#xC54C;&#xD30C;, &#xBCA0;&#xD0C0;, &#xAC10;&#xB9C8; isoenzymes calcineurin &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; PMA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC624;&#xB450;&#xB9C9; 1&#xC758; &#xADF8; hyperphosphorylation &#xC2DC;&#xC5F0; / Ca2 +-&#xD65C;&#xC131;&#xD654; cPKC isoenzymes &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC5B5;&#xC81C; calcineurin &#xB9D0; &#xCD08; &#xD608;&#xC561; &#xB2E8; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; calcineurin &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC624;&#xB450;&#xB9C9; 1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB124;&#xAC70;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xADDC;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xBC0F; PKC calcineurin &#xC0AC;&#xC774; &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xD1A0;&#xD06C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xC5B5;&#xC81C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC5D0;&#xC11C; calcineurin &#xD65C;&#xB3D9; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C isoenzymes &#xC5ED;&#xD560; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC; &#xD608;&#xC561;.

Se conoce que el PMA (forbol-12--13-acetato de miristato) puede activar las isoenzimas de cl&aacute;sico y novedoso de la prote&iacute;na cinasa C (cPKC alfa, beta, gamma y nPKC delta, epsilon, eta, theta), mientras que el calcio i&oacute;nico puede inducir s&oacute;lo la actividad de cPKC. Prote&iacute;na de uni&oacute;n de la calcineurina (cabina 1) pertenece al grupo de inhibidores end&oacute;genos de la calcineurina. Caba&ntilde;a 1 se convierte hiperfosforilada en respuesta a la activaci&oacute;n de PKC y puede desempe&ntilde;ar un papel negativo en la se&ntilde;alizaci&oacute;n de la calcineurina. Se observ&oacute; que tanto tratamiento de PMA y el aumento de Ca2 + intracelular contribuyeron a la reducci&oacute;n de la actividad de calcineurina en c&eacute;lulas mononucleares de sangre perif&eacute;rica sin modular el mRNA y los niveles de la prote&iacute;na de la calcineurina. PMA y Ca-ion&oacute;foro (A23187), los agentes de activaci&oacute;n de la PKC, aplicado solo o en combinaci&oacute;n, aumentaron significativamente el estado de fosforilaci&oacute;n de 1 cabina seg&uacute;n lo revelado por inmunoprecipitaci&oacute;n de cabina 1 detectar su phospho-Ser contenido por los anticuerpos espec&iacute;ficos. GF109203X, un inhibidor de la cl&aacute;sica y las isoenzimas de nueva prote&iacute;na quinasa C y G&ouml;6976, el inhibidor selectivo de las isoenzimas de la cl&aacute;sica cPKC fueron capaces de suprimir el efecto de PMA o / y Ca-ion&oacute;foro sobre la actividad de calcineurina con inversi&oacute;n concomitante de la hiperfosforilaci&oacute;n de cabina 1. El sistema de calcineurina/cabina 1 no fue influenciado por el Rottlerin, un inhibidor de la isoenzima de la delta PKC en ausencia o en presencia de Ca-ion&oacute;foro y PMA. Presentamos evidencia del papel prominente de cPKC alfa, beta, isoenzimas de gamma en la inhibici&oacute;n de la calcineurina, como inducido por la PMA y Ca-ion&oacute;foro. Tambi&eacute;n demostramos que la hiperfosforilaci&oacute;n de 1 cabina por PMA / Ca2 +-cPKC activado isoenzimas dio lugar a una inhibici&oacute;n simult&aacute;nea de la calcineurina en c&eacute;lulas mononucleares de sangre perif&eacute;rica. Estos resultados sugieren un papel regulador negativo para 1 cabina en la se&ntilde;alizaci&oacute;n de la calcineurina y proporcionan un posible mecanismo de inhibici&oacute;n de la regeneraci&oacute;n a trav&eacute;s de diafon&iacute;a entre PKC y calcineurina.

El papel de isoenzimas de la prote&iacute;na quinasa C en la regulaci&oacute;n de la actividad de calcineurina en perif&eacute;rico humano las c&eacute;lulas mononucleares de la sangre.

&#x6211;&#x4EEC;&#x7684; chondrifying &#x9E21;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D4B;&#x91CF;&#x671F;&#x95F4;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x6587;&#x5316; (HDC) &#x80DE;&#x6D46; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x91CD;&#x5927;&#x3001; &#x77AC;&#x6001;&#x7684;&#x6D77;&#x62D4; Fura 2 &#x52A0;&#x8F7D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x5F53;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; HDC &#x6210;&#x4E3A;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x7684;&#x57F9;&#x517B;&#xFF0C;3 &#x5929;&#x3002;&#x8FD9; 140 nM &#x5CF0;&#x503C;&#x7684;&#x80DE;&#x6D46; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x662F;&#x589E;&#x52A0; Ca &#x6D8C;&#x5165;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x662F;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6216;&#x7F3A;&#x7684;&#x56E0;&#x4E3A; 0.8 m m EGTA &#x5230;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x4E0A; 2 &#x6216; 3 &#x5929;&#x52A0;&#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x51CF;&#x5C11;&#x80DE;&#x5185; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x5E9F;&#x9664; Ca2 +-&#x7E41;&#x5FD9;&#x7684;&#x4E00;&#x5929; 3 &#x548C;&#x6291;&#x5236;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x4E0D;&#x53D7;&#x63A7;&#x5236;&#x5730;&#x7684; Ca2 + &#x6D8C;&#x5165;&#x8BF1;&#x53D1;&#x7684; Ca2 + &#x79BB;&#x5B50;&#x8F7D;&#x4F53;&#x65BD;&#x52A0;&#x53CC;&#x91CD;&#x5F71;&#x54CD;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F; &#xFF1B;0.1 &#x6BEB;&#x514B;/&#x5347; A23187 &#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x800C; 5 &#x6BEB;&#x514B;/&#x5347; A23187 &#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x963B;&#x6B62;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x80DE;&#x5185; Ca &#x5546;&#x5E97;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5E76;&#x672A;&#x6709;&#x4EFB;&#x4F55;&#x91CD;&#x5927;&#x53C2;&#x4E0E; chondrifying &#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x6E38;&#x79BB; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x89C4;&#x5F8B;&#x3002;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; Ca &#x7684;&#x9499;&#x8C03;&#x7D20;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x56DE;&#x5E94;&#x5206;&#x5316;&#x9636;&#x6BB5;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x8BF1;&#x5BFC; EGTA &#x6216; A23187 &#x80DE;&#x5185; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x81EA;&#x6291;&#x5236;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x4E0E;&#x73AF;&#x5B62;&#x7D20;&#x6DD8;&#x6C70;&#x80DE;&#x6D46; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5CF0;&#x503C;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x5BF9; Ca2 + chondrifying &#x7EC6;&#x80DE;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x7528;&#x5E94;&#x8BE5;&#x662F;&#x3002;

&#x6E38;&#x79BB;&#x6E38;&#x79BB; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5206;&#x5316;&#x671F;&#x95F4;&#x5C55;&#x54C1;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF1A; &#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x4E2D;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9499;&#x4FE1;&#x53F7;&#x53EF;&#x80FD;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

We measured changes of cytosolic Ca2+ concentration during chondrogenesis, which occurs in high-density cultures (HDC) of chondrifying chicken mesenchymal cells. A significant, transient elevation was detected in Fura-2-loaded cells on day 3 of culturing, when majority of chondrogenic cells of HDC become differentiated. This 140 nM peak of cytosolic Ca2+ concentration is a result of increased Ca-influx and is indispensable to proper chondrogenesis, because addition of 0.8mM EGTA to culture medium on day 2 or 3 significantly decreased the intracellular Ca2+ concentration abolishing the Ca2+-peak of day 3 and inhibited cartilage formation. Uncontrolled Ca2+ influx evoked by a Ca2+ ionophore exerted dual effects on chondrogenesis in a concentration-dependent manner; 0.1mg/L A23187 increased, whereas 5 mg/L A23187 almost totally blocked cartilage formation. Intracellular Ca-stores seemed not to have any significant participation in the regulation of changes of cytosolic Ca2+ concentration of chondrifying cells. Activity of Ca-calmodulin-dependent protein phosphatase, calcineurin responded to changes of intracellular Ca2+ concentration induced by EGTA or A23187 in a differentiation stage-dependent manner. Since inhibition of calcineurin with cyclosporine A eliminated the peak in the cytosolic Ca2+ concentration, an active regulatory role of calcineurin on Ca2+ influx of chondrifying cells can be supposed.

Cytosolic free Ca2+ concentration exhibits a characteristic temporal pattern during in vitro cartilage differentiation: a possible regulatory role of calcineurin in Ca-signalling of chondrogenic cells.

Nous avons mesur&eacute; les variations de la concentration de Ca2 + cytosolique pendant chondrogen&egrave;se, qui se produit dans des cultures de haute densit&eacute;s (HDC) de chondrifying des cellules m&eacute;senchymateuses de poulet. Une &eacute;l&eacute;vation significative, transitoire a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e dans les cellules charg&eacute;es de Fura-2 jour 3 de culture, lorsque la majorit&eacute; des cellules chondrog&eacute;niques de HDC devenir diff&eacute;renci&eacute;e. Ce pic de 140 nM de la concentration de Ca2 + cytosolique est le r&eacute;sultat de Ca-afflux accru et est indispensable au bon chondrogen&egrave;se, parce que l&#39;addition de 0,8 mM EGTA au milieu de culture 2 ou 3 jours diminue significativement la concentration intracellulaire Ca2 + abolissant le Ca2 +-pointe de la formation de cartilage 3 et inhib&eacute; jour. Incontr&ocirc;l&eacute;e influx de Ca2 + &eacute;voqu&eacute;e par un Ca2 + ionophore exerc&eacute;e effets double sur chondrogen&egrave;se de mani&egrave;re dose-d&eacute;pendante ; 0,1 mg/L A23187 augmente, alors que 5 mg/L A23187 presque totalement bloqu&eacute; la formation du cartilage. Ca-r&eacute;serves intracellulaires semblaient ne pas avoir toute une participation importante dans la r&eacute;gulation des variations de la concentration de Ca2 + cytosolique de cellules chondrifying. L&#39;activit&eacute; de la prot&eacute;ine phosphatase de Ca-calmoduline-d&eacute;pendante, la calcineurine ont r&eacute;agi aux changements de concentration Ca2 + intracellulaire induite par l&#39;EGTA ou A23187 dans une mani&egrave;re d&eacute;pendante du stade de diff&eacute;renciation. Depuis l&#39;inhibition de la calcineurine avec la cyclosporine A &eacute;limin&eacute; le pic de la concentration cytosolique de Ca2 +, un r&ocirc;le actif de r&eacute;glementation de la calcineurine sur l&#39;influx de Ca2 + des cellules chondrifying peut supposer.

Libre Ca2 + concentration cytosolique montre un patron caract&eacute;ristique temporelle durant la diff&eacute;renciation in vitro de cartilage : un possible r&ocirc;le r&eacute;gulateur de la calcineurine en Ca-signalisation de cellules chondrog&eacute;niques.

Wir messen &Auml;nderungen der cytosolic Ca2 + Konzentration w&auml;hrend Chondrogenesis, die in High-Density Kulturen (HDC) Auftritt des chondrifying Huhn Mesenchymale Zellen. Eine bedeutende, vor&uuml;bergehende Erh&ouml;hung wurde in Fura-2 geladenen Zellen erkannt, am Tag 3 des Z&uuml;chtens, wann Mehrheit faserreiche Zellen des HDC differenziert werden. Diese 140 nM Spitze der cytosolic Ca2 +-Konzentration ist eine Folge der erh&ouml;hten Ca-Zustrom und ist unverzichtbar f&uuml;r die richtige Chondrogenesis, weil Zusatz von 0,8 mM EGTA zum Kulturmedium am Tag 2 oder 3 erheblich die intrazellul&auml;re Ca2 +-Konzentration verringert, Abschaffung der Ca2 +-Gipfel Tag 3 und gehemmter Knorpel-Formation. Unkontrollierte Ca2 + Zustrom hervorgerufen durch eine Ca2 + Ionophor ausge&uuml;bt dual Effekte auf Chondrogenesis Konzentration-abh&auml;ngigen Weise; 0,1 mg/L A23187 erh&ouml;ht, w&auml;hrend die 5 mg/L A23187 Knorpel Bildung fast v&ouml;llig blockiert. Intrazellul&auml;re Ca-Lager schien keine erhebliche Beteiligung an der Verordnung &uuml;ber &Auml;nderungen der cytosolic Ca2 + Konzentration der chondrifying Zellen haben. Aktivit&auml;t des Ca-Calmodulin-abh&auml;ngige Protein Phosphatase, Calcineurin auf &Auml;nderungen der intrazellul&auml;ren Ca2 + Konzentration induziert durch EGTA oder A23187 eine Differenzierung-B&uuml;hne-abh&auml;ngigen Weise reagiert. Seit Hemmung von Calcineurin mit Cyclosporin A eliminierten kann die Spitze der cytosolic Ca2 + Konzentration, eine aktive regulatorische Rolle von Calcineurin &uuml;ber Ca2 + Zustrom von chondrifying Zellen angenommen werden.

Zytosolische frei Ca2 + Konzentration weist ein charakteristisches zeitlichen Muster w&auml;hrend der in-vitro-Knorpel-Differenzierung: eine m&ouml;gliche regulatorische Rolle von Calcineurin in Ca-Signalisierung faserreiche Zellen.

Abbiamo misurato le modifiche della concentrazione di Ca2 + citosolico durante il chondrogenesis, che si verifica nelle culture ad alta densit&agrave; (HDC) di chondrifying cellule mesenchimali del pollo. Un&#39;elevazione transitoria, significativa &egrave; stata rilevata nelle cellule Fura-2-caricato giorno 3 di coltura, quando la maggioranza delle cellule chondrogenic di HDC diventato differenziato. Questo 140 nM picco della concentrazione di Ca2 + citosolico &egrave; un risultato di maggiore Ca-afflusso e indispensabile alla corretta chondrogenesis, perch&eacute; aggiunta di 0,8 mM EGTA al mezzo di coltura il giorno 2 o 3 diminuito in modo significativo la concentrazione Ca2 + intracellulare abolendo il Ca2 +-picco della formazione di cartilagine inibito e 3 giorno. Afflusso incontrollato del Ca2 + evocato da un Ca2 + ionoforo esercitata dual effetti su chondrogenesis in modo concentrazione-dipendente; 0,1 mg/L A23187 aumentata, mentre 5 mg/L A23187 quasi totalmente bloccato la formazione della cartilagine. Negozi di Ca intracellulare non sembravano avere alcuna significativa partecipazione nella regolazione delle variazioni della concentrazione di Ca2 + citosolico di cellule chondrifying. Attivit&agrave; della fosfatasi della proteina Ca-calmodulina-dipendente, della calcineurina ha risposto ai cambiamenti della concentrazione intracellulare del Ca2 + indotta da EGTA o A23187 in maniera dipendente dalla fase di differenziazione. Poich&eacute; l&#39;inibizione della calcineurina con ciclosporina un eliminato il picco di concentrazione Ca2 + citosolico, un ruolo attivo di regolamentazione della calcineurina su Ca2 + afflusso di cellule chondrifying pu&ograve; essere supposto.

Free Ca2 + concentrazione citosolica esibisce un caratteristico pattern temporale durante la differenziazione in vitro della cartilagine: un possibile ruolo normativo della calcineurina in Ca-segnalazione delle cellule chondrogenic.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x9D8F;&#x306E;&#x9593;&#x8449;&#x7CFB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; chondrifying &#x306E;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x57F9;&#x990A; (HDC) &#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E; ca 2 + &#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x6A19;&#x9AD8;&#x30D5;&#x30E9; 2 &#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067; HDC &#x306E;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x6642;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x3001;3 &#x65E5;&#x76EE;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E; 140 nM &#x306E;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x6642;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; ca 2 + &#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E; Ca &#x6D41;&#x5165;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;0.8 mm egta &#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x57F9;&#x5730;&#x306B;&#x6DFB;&#x52A0; 2 &#x307E;&#x305F;&#x306F; 3 &#x65E5;&#x6709;&#x610F;&#x306B; ca 2 + &#x5EC3;&#x6B62;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E; ca 2 + &#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;-&#x65E5; 3 &#x3068;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x3002;Ca 2 + &#x767A;&#x63EE;&#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2; &#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x306F;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x81EA;&#x7531;&#x306A; ca 2 + &#x6D41;&#x5165;;5 mg/L A23187 &#x306F;&#x307B;&#x307C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; 0.1 mg/L A23187 &#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; Ca &#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E; chondrifying &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; ca 2 + &#x6FC3;&#x5EA6;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x53C2;&#x52A0;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3088;&#x3046;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;Ca &#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3; egta &#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x307E;&#x305F;&#x306F; A23187 &#x3067;&#x306F;&#x5206;&#x5316;&#x6BB5;&#x968E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E; ca 2 + &#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x7B54;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x4EE5;&#x6765;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; ca 2 + &#x6FC3;&#x5EA6;&#x3001;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF; chondrifying &#x7D30;&#x80DE;&#x306E; ca 2 + &#x6D41;&#x5165;&#x306B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x305A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x904A;&#x96E2; ca 2 + &#x6FC3;&#x5EA6;&#x57F9;&#x990A;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x7684;&#x306A;&#x6642;&#x7CFB;&#x5217;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#xFF1A; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; Ca &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xB2ED; &#xC911;&#xAC04; &#xC5FD; &#xC138;&#xD3EC; chondrifying&#xC758; chondrogenesis, &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; &#xBB38;&#xD654; (HDC)&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; cytosolic Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xC774; &#xD574;&#xBC1C; &#xACE0;&#xB3C4; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; HDC&#xC758; chondrogenic &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654; &#xB420; &#xB54C;, &#xACBD;&#xC791;&#xC758; &#xB0A0; 3 Fura 2 &#xB85C;&#xB4DC; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; 140 nM &#xD53C;&#xD06C; cytosolic Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; Ca &#xC720;&#xC785;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xBA70; 2 &#xB610;&#xB294; 3 &#xC77C;&#xC5D0; 0.8 m m EGTA &#xBB38;&#xD654; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD3D0;&#xC9C0; Ca2 + &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; chondrogenesis&#xC5D0; &#xBE60;&#xB728;&#xB9B4; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;-&#xC8FC; 3 &#xBC0F; &#xC800;&#xD574; &#xC5F0;&#xACE8; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xD53C;&#xD06C;. &#xC81C;&#xC5B4; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; Ca2 + &#xC720;&#xC785; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874; &#xBC29;&#xC2DD;;&#xB294; Ca2 +&#xAC00; &#xD574;&#xC9C0; ionophore &#xB4C0;&#xC5BC; &#xD6A8;&#xACFC; chondrogenesis&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC16;&#xB294; 0.1 mg/L A23187 &#xC99D;&#xAC00;, 5mg/L a23187&#xB294; &#xAC70;&#xC758; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC5F0;&#xACE8; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; chondrifying &#xC140;&#xC758; cytosolic Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xADDC;&#xCE59;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCC38;&#xAC00;&#xB97C; &#xD558;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. Ca calmodulin &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;, calcineurin &#xBD84;&#xD654; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; EGTA &#xB610;&#xB294; a23187&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300;&#xC751; &#xD588;&#xB2E4;. Calcineurin cyclosporine &#xC81C;&#xAC70;&#xC640; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC774;&#xD6C4; cytosolic Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4;, &#xD53C;&#xD06C; calcineurin chondrifying &#xC140;&#xC758; Ca2 + &#xC720;&#xC785;&#xC5D0;&#xC758; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xADDC;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560; &#xC218; &#xC218; &#xC788;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cytosolic &#xBB34;&#xB8CC; Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4; &#xCCB4; &#xC678; &#xC5F0;&#xACE8; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD2B9;&#xC131; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xD328;&#xD134; &#xC804;&#xC2DC;: calcineurin Ca chondrogenic &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xADDC;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560;.

Para medir los cambios de concentraci&oacute;n citos&oacute;lica de Ca2 + en condrog&eacute;nesis, que se produce en cultivos de alta densidad (HDC) de chondrifying las c&eacute;lulas mesenquimales de pollo. Una elevaci&oacute;n significativa, transitoria fue detectada en c&eacute;lulas de carga Fura-2 el d&iacute;a 3 de cultivo, cuando la mayor&iacute;a de las c&eacute;lulas condrog&eacute;nica de HDC ser distinguido. Este pico de nM 140 de la concentraci&oacute;n de Ca2 + citos&oacute;lico es un resultado de mayor afluencia-Ca y es indispensable condrog&eacute;nesis adecuada, porque adem&aacute;s de 0.8mm EGTA al medio de cultivo en d&iacute;a 2 o 3 disminuyeron significativamente el Ca2 + concentraci&oacute;n intracelular abolir la Ca2 +-pico de la formaci&oacute;n de cart&iacute;lago inhibido y 3 d&iacute;as. Incontrolada Ca2 + afluencia evocada por un Ca2 + ion&oacute;foro ejerce efectos duales en condrog&eacute;nesis de manera dependiente de la concentraci&oacute;n; 0.1 mg/L A23187 aument&oacute;, mientras que 5 mg/L A23187 hab&iacute;a bloqueado casi totalmente la formaci&oacute;n de cart&iacute;lago. CA intracelulares-tiendas no parec&iacute;an tener ninguna participaci&oacute;n importante en la regulaci&oacute;n de los cambios de concentraci&oacute;n citos&oacute;lica de Ca2 + de c&eacute;lulas chondrifying. Actividad de prote&iacute;na fosfatasa de Ca-calmodulina dependiente, calcineurina respondi&oacute; a los cambios de concentraci&oacute;n Ca2 + intracelular inducida por EGTA o A23187 en forma de fase dependiente de diferenciaci&oacute;n. Desde la inhibici&oacute;n de la calcineurina con ciclosporina un eliminado el pico en la concentraci&oacute;n citos&oacute;lica de Ca2 +, un activo papel regulador de calcineurina en Ca2 + afluencia de c&eacute;lulas chondrifying puede suponer.

Libre Ca2 + concentraci&oacute;n citos&oacute;lica exhibe un patr&oacute;n temporal caracter&iacute;stico durante la diferenciaci&oacute;n in vitro de cart&iacute;lago: un posible papel regulador de la calcineurina en Ca-se&ntilde;alizaci&oacute;n de c&eacute;lulas condrog&eacute;nica.

&#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; (EC)&#xC758; &#xC7A5;&#xBCBD; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xBAA8;&#xC591; &#xBCC0;&#xD654; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;/dephosphorylation &#xD0A4; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC218;&#xCD95; &#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB41C;&#xB2E4;. EC &#xC218;&#xCD95; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xC21C;&#xD658; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC2D; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD608;&#xAD00; &#xBCBD;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xACB0;&#xACFC;. &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48;&#xC73C;&#xB85C; elicited EC &#xBD80;&#xC804; &#xB9D0;&#xB77C; microfilament &#xC7AC;&#xBC30;&#xD3EC;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. Cn&#xC758; &#xC800;&#xD574; potentiates PKC &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; EC myosin &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xB610;&#xD55C; Cn &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xADF8; calcineurin (Cn) EC &#xBD80;&#xC804; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. GFP&#xB85C; coexpressed &#xCD09;&#xB9E4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (CnA) isoforms paraformaldehyde (PFA)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xB294; cn immunofluorescent &#xD0D0;&#xC9C0; &#xACE0;&#xC815; &#xC18C; &#xD3D0; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; (BPAEC). &#xB9D0;&#xB77C; microfilaments &#xD14D;&#xC0AC;&#xC2A4; &#xB808;&#xB4DC;-phalloidin&#xB85C; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC9C4; &#xD588;&#xB2E4;. Transfections &#xB610;&#xB294; &#xCE58;&#xB8CC; cytotoxic &#xD6A8;&#xACFC; transfections&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; cytometry&#xB85C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB410;&#xB2E4;. Cn &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; (cyclosporin A&#xC640; FK506)&#xC640; BPAEC&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; EC &#xBD80;&#xC804; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140;&#xC758; &#xD68C;&#xBCF5;&#xC744; &#xBC29;&#xD574;. &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; Cn&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; cytoskeletal &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC5D0;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC140; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; CnA isoforms &#xD558;&#xC9C0; constitutively &#xD65C;&#xC131; Cna&#xC640; &#xC140; &#xD398; &#xD588;&#xB2E4; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC1E0; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xBCC0;&#xD654; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cytometry (FCM) &#xBD84;&#xC11D; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; cytotoxic &#xD6A8;&#xACFC; &#xBB34;&#xC2DC;&#xD560; &#xC218; &#xC785;&#xC99D; &#xD588;&#xB2E4;. Cn&#xC740; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; EC &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7A5;&#xC560;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cn&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xD615;&#xC131; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; overexpression constitutively &#xD65C;&#xC131; Cna&#xC758; &#xB3D9;&#xC548; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xC218;&#xCD95; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD2B8; &#xB86C; &#xBE48;-&#xC911;&#xC7AC; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xCD95;&#xC5D0; calcineurin&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; (EC) &#x7684;&#x5C4F;&#x969C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x5F62;&#x6001;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x53D7;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;/&#x9664;&#x78F7;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x548C;&#x6536;&#x7F29;&#x7684;&#x5143;&#x7D20;&#x3002;&#x6559;&#x7EDF;&#x4F1A;&#x6536;&#x7F29;&#x5230;&#x5FAA;&#x73AF;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x9699;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x5C4F;&#x969C;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;EC &#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#x8BF1;&#x53D1;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E0E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5FAE;&#x4E1D;&#x91CD;&#x65B0;&#x5206;&#x914D;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#xFF0C;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178; (Cn) &#x53C2;&#x4E0E;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x8BF1;&#x5BFC; EC &#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; Cn &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x589E;&#x5F3A; PKC &#x6D3B;&#x6027;&#x548C; EC &#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8F7B;&#x94FE;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x4E5F;&#x53D7; Cn &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;Cn coexpressed &#x4E0E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x50AC;&#x5316;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D; (CnA) &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x591A;&#x805A;&#x7532;&#x919B; (PFA) &#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x68C0;&#x6D4B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x725B;&#x80BA;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; (BPAEC)&#x3002;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5FAE;&#x4E1D;&#x5FB7;&#x514B;&#x8428;&#x65AF;&#x7EA2; phalloidin &#x67D3;&#x6709;&#x8840;&#x8FF9;&#x3002;&#x9AD8;&#x7EAF;&#x5EA6;&#x6216;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x9AD8;&#x7EAF;&#x5EA6;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x6D41;&#x5F0F;&#x3002;Cn &#x6291;&#x5236;&#x5242; (&#x73AF;&#x5B62;&#x83CC;&#x7D20; A &#x548C; FK506) BPAEC &#x6CBB;&#x7597;&#x963B;&#x788D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x8BF1;&#x5BFC; EC &#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#x6062;&#x590D;&#x3002;Cn &#x4E2D;&#x7684;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x6291;&#x5236;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x51CF;&#x6BD2;&#x7684;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x53D8;&#x5316;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x72B6;&#x53EA;&#x5F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x8F6C;&#x67D3;&#x4E00;&#x79EF;&#x6781; CnA &#x4E0E;&#x4E0D;&#x4E0E;&#x5404;&#x79CD; CnA &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x3002;&#x6D41;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA; (FCM) &#x5206;&#x6790;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8BC1;&#x660E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5FFD;&#x7565;&#x4E0D;&#x8BA1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; Cn &#x53C2;&#x4E0E;&#x4ECE;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x8BF1;&#x5BFC; EC &#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#x6062;&#x590D;&#x3002;Cn &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x9020;&#x6210;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x6536;&#x7F29;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x800C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E00;&#x6D3B;&#x52A8; CnA &#x5BFC;&#x81F4;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

&#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6536;&#x7F29;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Barrier function and shape changes of endothelial cells (EC) are regulated by phosphorylation/dephosphorylation of key signaling and contractile elements. EC contraction results in intercellular gap formation and loss of the selective vascular barrier to circulating macromolecules. EC dysfunction elicited by thrombin was found to correlate with actin microfilament redistribution. It is known that calcineurin (Cn) is involved in thrombin-induced EC dysfunction because inhibition of Cn potentiates PKC activity and the phosphorylation state of EC myosin light chain is also affected by Cn activity. Immunofluorescent detection of Cn catalytic subunit (CnA) isoforms coexpressed with GFP was visualized on paraformaldehyde (PFA) fixed bovine pulmonary artery endothelial cells (BPAEC). Actin microfilaments were stained with Texas Red-phalloidin. Cytotoxic effects of transfections or treatments and the efficiency of transfections were assessed by flow cytometry. Treatment of BPAEC with Cn inhibitors (cyclosporin A and FK506) hindered recovery of the cells from thrombin-induced EC dysfunction. Inhibition of Cn in the absence of thrombin had no effect on cytoskeletal actin filaments. We detected attenuated thrombin-induced stress fiber formation and changes in cell shape only when cells were transfected with constitutively active CnA and not with various CnA isoforms. Flow cytometry (FCM) analysis has proved that cytotoxic effect of treatments is negligible. We observed that Cn is involved in the recovery from thrombin-induced EC dysfunction. Inhibition of Cn caused prolonged contractile effect, while overexpression of constitutively active CnA resulted in reduced thrombin-induced stress fiber formation.

Role of calcineurin in thrombin-mediated endothelial cell contraction.

Les changements de forme et la fonction de barri&egrave;re des cellules endoth&eacute;liales (EC) sont r&eacute;glement&eacute;s par la phosphorylation/d&eacute;phosphorylation de signalisation cl&eacute;s et &eacute;l&eacute;ments contractiles. Contraction EC se traduit par la formation lacunaires intercellulaires et perte de la barri&egrave;re vasculaire s&eacute;lective de macromol&eacute;cules en circulation. Dysfonction EC induite par la thrombine a &eacute;t&eacute; trouv&eacute;e pour mettre en corr&eacute;lation avec la redistribution de microfilaments actine. Il est connu que la calcineurine (Cn) est impliqu&eacute;e dans la dysfonction EC induite par la thrombine parce que l&#39;inhibition du Cn potentialise l&#39;activit&eacute; PKC et l&#39;&eacute;tat de phosphorylation de la cha&icirc;ne l&eacute;g&egrave;re de myosine EC est &eacute;galement affect&eacute;e par l&#39;activit&eacute; Cn. D&eacute;tection par immunofluorescence de Cn isoformes des sous-unit&eacute;s catalytiques (ANC) coexpriment avec GFP a &eacute;t&eacute; visualis&eacute;e sur paraformald&eacute;hyde (PFA) fixe l&#39;art&egrave;re pulmonaire bovine des cellules endoth&eacute;liales (canal). Microfilaments d&#39;actine sont color&eacute;s avec Texas Red-phallo&iuml;dine. Les effets cytotoxiques des transfections ou des traitements et l&#39;efficacit&eacute; des transfections ont &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;es par cytom&eacute;trie en flux. Traitement de canal avec les inhibiteurs de la Cn (cyclosporine A et FK506) entrav&eacute; la r&eacute;cup&eacute;ration des cellules de dysfonction d&#39;EC induite par la thrombine. L&#39;inhibition du Cn en l&#39;absence de la thrombine n&#39;a aucun effet sur les filaments d&#39;actine du cytosquelette. Nous avons d&eacute;tect&eacute; formation fibre att&eacute;nu&eacute; contrainte induite par la thrombine et les changements dans la forme des cellules uniquement lorsque les cellules ont &eacute;t&eacute; transfect&eacute;es ANC constitutivement actif et non des diff&eacute;rentes isoformes de l&#39;ANC. Analyse d&#39;&eacute;coulement cytometry (FCM) a prouv&eacute; que l&#39;effet cytotoxique des traitements est n&eacute;gligeable. Nous avons observ&eacute; que le Cn est impliqu&eacute; dans la r&eacute;cup&eacute;ration de la dysfonction EC induite par la thrombine. Inhibition du Cn causant des effets contractiles prolong&eacute;e, tandis que la surexpression de l&#39;AIIC constitutivement active conduit &agrave; la formation de fibre r&eacute;duit le stress induit par la thrombine.

R&ocirc;le de la calcineurine, contraction de la cellule endoth&eacute;liale induite par la thrombine.

Phosphorylierung/Dephosphorylierung von wichtige Signal- und KONTRAKTILER Elemente Barriere-Funktion und Form-Ver&auml;nderungen der Endothelzellen (EG) geregelt. EG-Kontraktion f&uuml;hrt interzellul&auml;re L&uuml;cke Entstehung und Verlust der selektive vaskul&auml;re Barriere in zirkulierenden Makromolek&uuml;le. EG-Dysfunktion, hervorgerufen durch Thrombin wurde festgestellt, dass um mit Aktin Mikrofilamente Umverteilung zu korrelieren. Es ist bekannt, dass dieser Calcineurin (Cn) in Thrombin-induzierte EG Dysfunktion beteiligt ist, da Hemmung der Cn PKC-Aktivit&auml;t Spurenelement und Phosphorylierung Bundesland EG Myosin-Leichtketten auch, Cn-Aktivit&auml;t betroffen ist. Immunfluoreszenz Nachweisvon Cn katalytische Untereinheit (CnA)-Isoformen mit GFP coexpressed auf Paraformaldehyd (PFA) visualisiert wurde behoben bovine Lungenarterie endotheliale Zellen (BPAEC). Mikrofilamenten Aktin waren mit Texas Red-Phalloidin befleckt. Zytotoxischen Effekt Transfektionen oder Behandlungen und die Effizienz der Transfektionen wurden durch Durchflusszytometrie beurteilt. Behandlung von BPAEC mit Cn-Inhibitoren (Cyclosporin A und FK506) behindert Erholung der Zellen von Thrombin-induzierte EG Dysfunktion. Hemmung der Cn in der Abwesenheit von Thrombin hatte keine Auswirkungen auf Zytoskelett Aktin-Filamenten. Wir erkannt abgeschw&auml;chte Thrombin-induzierte Spannung Faser Formation und &Auml;nderungen in Zelle Form nur dann, wenn Zellen mit konstitutiv aktive CnA und nicht mit verschiedenen CnA-Isoformen transfected waren. Flow Cytometry (FCM) Analyse hat bewiesen, dass zytotoxische Wirkung der Behandlungen zu vernachl&auml;ssigen ist. Wir beobachteten, dass die Erholung von Thrombin-induzierte EG Dysfunktion Cn beteiligt ist. Hemmung der Cn verursacht KONTRAKTILER langanhaltend, w&auml;hrend eine &Uuml;berexpression von konstitutiv aktive CnA reduzierte Thrombin-induzierte Spannung Faser Bildung gef&uuml;hrt.

Rolle von Calcineurin in Thrombin-vermittelte Endothelzellen Kontraktion.

Cambiamenti di forma e funzione barriera delle cellule endoteliali (CE) sono regolati dalla fosforilazione/defosforilazione di segnalazione chiave e gli elementi contrattili. Contrazione CE risultati nella formazione di spacco intercellulari e la perdita della barriera selettiva vascolare a macromolecole in circolazione. Disfunzione CE ha suscitata dalla trombina &egrave; stata trovata per correlare con ridistribuzione microbava actina. &Egrave; noto che calcineurina (Cn) &egrave; coinvolto nella disfunzione CE trombina-indotta perch&eacute; l&#39;inibizione della Cn potenzia l&#39;attivit&agrave; PKC e lo stato di fosforilazione della catena leggera della miosina di CE &egrave; influenzato anche dalle attivit&agrave; di Cn. Immunofluorescenza rilevamento della subunit&agrave; catalitica (CnA) isoforme coespressi con GFP &egrave; stato visualizzato su paraformaldeide (PFA) Cn fisso bovino dell&#39;arteria polmonare delle cellule endoteliali (BPAEC). Microfilamenti di actina sono stati colorati con Texas Red-phalloidin. Gli effetti citotossici di transfezioni o trattamenti e l&#39;efficienza del transfezioni sono stati valutati tramite flusso cytometry. Trattamento di BPAEC con inibitori Cn (ciclosporina A e FK506) ostacolato il recupero delle cellule da disfunzione CE trombina-indotta. Inibizione di Cn in assenza di trombina ha avuto alcun effetto sui filamenti di actina del citoscheletro. Abbiamo rilevato formazione fibra attenuato trombina-indotta da stress e cambiamenti nella forma delle cellule solo quando le cellule sono state transfected con CnA costitutivamente attiva e non con diverse isoforme di CnA. Analisi del flusso cytometry (FCM) ha dimostrato che l&#39;effetto citotossico dei trattamenti &egrave; trascurabile. Abbiamo osservato che Cn &egrave; coinvolto nel recupero da disfunzione CE trombina-indotta. Inibizione di Cn causato prolungato effetto contrattile, mentre la sovraespressione di CnA costitutivamente attiva portato ridotto stress indotta da trombina fibra formazione.

Ruolo della calcineurina in contrazione trombina-mediata delle cellule endoteliali.

&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE; (EC) &#x306E;&#x969C;&#x58C1;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x7269;&#x4F53;&#x5F62;&#x72B6;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;/&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x30AD;&#x30FC; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x53CE;&#x7E2E;&#x8981;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;EC &#x53CE;&#x7E2E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x30AE;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3067;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x5FAA;&#x74B0;&#x3059;&#x308B;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B; EC &#x4E0D;&#x5168;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x518D;&#x914D;&#x5E03;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3; &#xFF08;Cn&#xFF09; &#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B; EC &#x6A5F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5168;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; Cn &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F; PKC &#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x3001;EC &#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x306F; Cn &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GFP &#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8FD1;&#x304F; &#xFF08;&#x4E0B;&#x6BB5;&#xFF09; &#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; (CnA) &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; &#x30D1;&#x30E9;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E0;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9; (PFA) &#x8996;&#x899A;&#x5316;&#x3055;&#x308C; Cn &#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x691C;&#x51FA;&#x30A6;&#x30B7;&#x80BA;&#x52D5;&#x8108;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE; (BPAEC) &#x3092;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306F;&#x3001;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B5;&#x30B9;&#x8D64;&#x982D;&#x9802;&#x3067;&#x67D3;&#x8272;&#x3057;&#x305F;.Transfections &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6CBB;&#x7642;&#x6BD2;&#x6027;&#x3068; transfections &#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Cn &#x963B;&#x5BB3;&#x85AC; (&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3; A &#x3068; FK506) &#x3068; BPAEC &#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B; EC &#x6A5F;&#x80FD;&#x969C;&#x5BB3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x3002;Cn &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x4E0A;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x306E;&#x307F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6052;&#x5E38;&#x6D3B;&#x6027; cna &#x3068;&#x69D8;&#x3005; &#x306A; CnA &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x5F31;&#x6BD2;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x8A98;&#x8D77;&#x5FDC;&#x529B;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3002;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC; &#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC; (FCM) &#x89E3;&#x6790;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3054;&#x304F;&#x308F;&#x305A;&#x304B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8A3C;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;Cn &#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B; EC &#x6A5F;&#x80FD;&#x969C;&#x5BB3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6052;&#x5E38;&#x6D3B;&#x6027; CnA &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x6E1B;&#x5C11;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x8A98;&#x8D77;&#x5FDC;&#x529B;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x7D50;&#x679C;&#x4E2D; Cn &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x9577;&#x5F15;&#x304F;&#x53CE;&#x7E2E;&#x52B9;&#x679C;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;

&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

Cambios de forma y funci&oacute;n de barrera de c&eacute;lulas endoteliales (CE) est&aacute;n regulados por fosforilaci&oacute;n/desfosforilaci&oacute;n clave y elementos contr&aacute;ctiles. Contracci&oacute;n de EC resulta en la formaci&oacute;n del espacio intercelular y p&eacute;rdida de la barrera vascular selectiva a macromol&eacute;culas de circulaci&oacute;n. Disfunci&oacute;n CE provocada por la trombina encontraron para correlacionar con redistribuci&oacute;n de microfilamentos de actina. Se conoce que calcineurina (Cn) participa en la disfunci&oacute;n CE inducida por trombina porque inhibici&oacute;n de Cn potencializa la actividad de la PKC y el estado de fosforilaci&oacute;n de la cadena ligera de miosina CE tambi&eacute;n es afectado por la actividad de Cn. Detecci&oacute;n inmunofluorescente de Cn isoformas de la subunidad catal&iacute;tica (CnA) coexpressed con GFP fue visualizado en paraformaldehido (PFA) fija la arteria pulmonar bovina c&eacute;lulas endoteliales (BPAEC). Microfilamentos de actina se ti&ntilde;eron con Texas rojo-Faloidina. Se evaluaron los efectos citot&oacute;xicos de transfecciones o tratamientos y la eficiencia de transfecciones mediante citometr&iacute;a de flujo. Tratamiento de BPAEC con inhibidores de la Cn (ciclosporina A y FK506) impidi&oacute; la recuperaci&oacute;n de las c&eacute;lulas de la disfunci&oacute;n CE inducida por trombina. Inhibici&oacute;n de Cn en la ausencia de la trombina no influy&oacute; en filamentos de actina del citoesqueleto. Detectamos formaci&oacute;n atenuada tensi&oacute;n inducida por trombina de la fibra y los cambios en la forma de la c&eacute;lula s&oacute;lo cuando las c&eacute;lulas fueron transfectadas con CnA constitutivamente activa y no con varias isoformas de la CnA. An&aacute;lisis de flujo cytometry (FCM) ha demostrado que el efecto citot&oacute;xico de tratamientos es despreciable. Observamos que la Cn est&aacute; implicado en la recuperaci&oacute;n de la disfunci&oacute;n CE inducida por trombina. Inhibici&oacute;n de Cn caus&oacute; efecto contr&aacute;ctil prolongado, mientras que la sobreexpresi&oacute;n de CnA constitutivamente activa dio lugar a la formaci&oacute;n de la fibra de menor tensi&oacute;n inducida por trombina.

Papel de la calcineurina en la contracci&oacute;n de la c&eacute;lula endotelial mediada por la trombina.

&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x73AF;&#x5B62;&#x7D20; (CsA) &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#xFF0C;Ca2 +-&#x9499;&#x8C03;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x78F7; Ser &#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6291;&#x5236;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5C40;&#x90E8;&#x6CBB;&#x7597;&#x94F6;&#x5C51;&#x75C5;&#x6216;&#x7279;&#x5E94;&#x6027;&#x76AE;&#x708E;&#x76AE;&#x80A4;&#x75C5;&#x5B66;&#x5B9E;&#x8DF5;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#xFF0C;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x6E90;&#x6027;&#x8868;&#x76AE;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x5BF9;&#x4E24;&#x4EBA;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#xFF0C;CsA &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5F62;&#x6210; HT168 &#x548C; WM35 RGP &#x539F;&#x53D1;&#x7076;&#x4ECE;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x7684;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;CsA 2 microM &#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E0B;&#x964D;&#x4E86; 50%&#xFF0C;&#x5E76;&#x9020;&#x6210;&#x6D77;&#x62D4; mRNA &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x88AB;&#x51CF;&#x5F31;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6539;&#x53D8;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;CsA &#x589E;&#x52A0;&#x9002;&#x5EA6;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11; HT168 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; WM35 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;CsA &#x4E5F;&#x5347;&#x9AD8; bcl-2 &#x548C; ERK1/2 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x5F15;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684; HT168 &#x523A;&#x6FC0;&#x4E0B;&#x7684; CsA&#xFF0C;&#x5F71;&#x54CD;&#x867D;&#x7136; WM35 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF0C;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;HT168 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE; beta3 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x5207;&#x6362;&#x5230;&#x6574;&#x5408;&#x7D20; beta1&#xFF0C;&#x4F46; WM35 &#x7EC6;&#x80DE;&#x6301;&#x7EED;&#x5230;&#x5FEB;&#x9012; beta3&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5BF9;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x7684;&#x591A;&#xFF0C;&#x4E00;&#x5B9A;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x73AF;&#x5B62;&#x83CC;&#x7D20; A &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x65BD;&#x52A0;&#x5BF9;&#x4EBA;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A; HT168 &#x548C; WM35 &#x7684;&#x591A;&#x91CD;&#x6548;&#x679C;&#x3002;

The immunosuppressant cyclosporine A (CsA) is a specific pharmacological inhibitor of calcineurin, the Ca2+-calmodulin activated phospho-Ser/Thr-specific protein phosphatase. Although calcineurin-inhibiting compounds are applied for local treatment of psoriasis or atopic dermatitis in dermatological practice, little is known about the functions of calcineurin in epidermis-derived malignancies. We investigated the effects of CsA on two human melanoma cell lines, the metastasis forming HT168 and WM35 established from an RGP primary lesion. CsA of 2 microM lowered the enzyme activity by 50% and caused elevation in both mRNA and protein expression of calcineurin. Cell proliferation was diminished, as well as the cellular morphology and the actin organization were altered in both cell lines. CsA increased cell death moderately in both cell lines and reduced the metabolic activity of HT168 cells, but not that of WM35 cells. CsA also elevated the expressions of both Bcl-2 and ERK1/2. Fibronectin guided migration of HT168 cells was stimulated under the effect of CsA, while that of WM35 cells was reduced, moreover, HT168 cells switched from the expression of beta3 to beta1 integrin, but WM35 cells continued to express beta3. Based on our results we propose a multiple, partly malignancy-dependent role of calcineurin in these melanoma cell lines.

Inhibition of calcineurin by cyclosporine A exerts multiple effects on human melanoma cell lines HT168 and WM35.

L&#39;immunosuppresseur cyclosporine A (CsA) est un inhibiteur sp&eacute;cifique et pharmacologique de la calcineurine, le Ca2 +-calmoduline activ&eacute; phospho-Ser/Thr-specific prot&eacute;ine phosphatase. Bien que les inhibiteurs de la calcineurine compos&eacute;s sont appliqu&eacute;es pour le traitement local du psoriasis ou la dermatite atopique dans la pratique dermatologique, on en sait peu sur les fonctions de la calcineurine en &eacute;piderme d&eacute;riv&eacute;es de tumeurs malignes. Nous avons &eacute;tudi&eacute; les effets de l&#39;ASC sur deux lign&eacute;es de cellules de m&eacute;lanome humain, la m&eacute;tastase formant HT168 et WM35, &eacute;tabli &agrave; partir d&#39;une l&eacute;sion primaire RGP. CsA de 2 microM abaiss&eacute; l&#39;activit&eacute; enzymatique de 50 % et provoqu&eacute; l&#39;&eacute;l&eacute;vation dans l&#39;expression des ARNm et de prot&eacute;ines de la calcineurine. La prolif&eacute;ration cellulaire a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite, ainsi que l&#39;organisation de l&#39;actine et de la morphologie cellulaire ont &eacute;t&eacute; modifi&eacute;es dans les deux lign&eacute;es cellulaires. CsA a augment&eacute; mod&eacute;r&eacute;ment dans les deux lign&eacute;es cellulaires la mort cellulaire et r&eacute;duit l&#39;activit&eacute; m&eacute;tabolique des cellules HT168, mais pas celui des cellules WM35. CsA a &eacute;galement &eacute;lev&eacute; l&#39;expression de Bcl-2 et ERK1/2. La fibronectine guid&eacute;e de migration des cellules de HT168 a &eacute;t&eacute; stimul&eacute;e sous l&#39;effet du CsA, tandis que celle des cellules WM35 a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite, plus, HT168 cellules pass&eacute;s de l&#39;expression de beta3 &agrave; beta1 int&eacute;grine, mais les cellules WM35 continuent &agrave; beta3 express. Bas&eacute;e sur nos r&eacute;sultats, nous vous proposons un r&ocirc;le de multiples, en partie d&eacute;pendante de tumeur maligne de la calcineurine dans ces lign&eacute;es de cellules de m&eacute;lanome.

L&#39;inhibition de la calcineurine par cyclosporine A exerce des effets multiples sur des lign&eacute;es de cellules de m&eacute;lanome humain HT168 et WM35.

Das Immunsuppressivum Cyclosporin A (CsA) ist eine spezifische pharmakologische Inhibitor der Calcineurin, die Ca2 +-Calmodulin aktiviert Phospho-Ser/Thr-spezifische Protein Phosphatase. Obwohl Calcineurin-hemmende Verbindungen zur lokalen Behandlung von Schuppenflechte oder Neurodermitis in der dermatologischen Praxis angewendet werden, ist wenig &uuml;ber die Funktionen des Calcineurin in Oberhaut abgeleitete Krebserkrankungen bekannt. Wir untersuchten die Wirkungen von CsA auf zwei menschliche Melanom-Zelllinien, die Bildung von HT168 und WM35 hergestellt aus einer prim&auml;ren L&auml;sion von RGP Metastase. CsA von 2 MicroM die Enzymaktivit&auml;t um 50 % gesenkt und H&ouml;he in mRNA und Protein-Expression von Calcineurin verursacht. Zellproliferation wurde vermindert, ebenso wie die zellul&auml;ren Morphologie und der Aktin-Organisation in beiden Zelllinien ver&auml;ndert wurden. CsA erh&ouml;ht Zelltod m&auml;&szlig;ig in beiden Zelllinien und reduziert die metabolische Aktivit&auml;t der HT168 Zellen, nicht jedoch die WM35 Zellen. CsA erh&ouml;ht auch die Ausdr&uuml;cke der Bcl-2 und ERK1/2. Fibronektin gef&uuml;hrte Zellmigration HT168 unter Einwirkung von CsA, angeregt wurde, w&auml;hrend der WM35 Zellen reduziert wurde, weiterhin dar&uuml;ber hinaus HT168 Zellen aus dem Ausdruck der beta3 auf beta1 Integrin umgestellt, aber WM35 Zellen ausdr&uuml;ckliche beta3. Basierend auf unsere Ergebnisse schlagen wir eine mehrere, teilweise B&ouml;sartigkeit-abh&auml;ngige Rolle von Calcineurin in diese Melanom-Zelllinien.

Hemmung von Calcineurin von Cyclosporin A &uuml;bt mehrere Effekte auf menschliche Melanom-Zelllinien, HT168 und WM35.

L&#39;immunosoppressore ciclosporina A (CsA) &egrave; un inibitore specifico farmacologico della calcineurina, Ca2 +-calmodulina attiva la fosfatasi specifiche fosfo-Ser/Thr proteine. Anche se l&#39;inibizione della calcineurina composti vengono applicate per il trattamento locale della psoriasi o dermatite atopica nella pratica dermatologica, poco &egrave; noto riguardo alle funzioni della calcineurina nei tumori maligni dell&#39;epidermide derivata. Abbiamo studiato gli effetti del CsA su due linee di cellule di melanoma umano, la metastasi formando HT168 e WM35 stabilito da una lesione primaria RGP. CsA di 2 microM abbassato l&#39;attivit&agrave; enzimatica del 50% e causato elevazione nell&#39;espressione di mRNA e la proteina della calcineurina. Proliferazione delle cellule &egrave; stata diminuita, cos&igrave; come la morfologia cellulare e l&#39;organizzazione di actina sono stati alterati in entrambe le linee cellulari. CsA aumentata morte cellulare moderatamente in entrambe le linee cellulari e ridotto l&#39;attivit&agrave; metabolica delle cellule HT168, ma non quello delle cellule WM35. CsA elevato anche le espressioni di Bcl-2 e di ERK1/2. Fibronectina guidata migrazione di cellule HT168 era stimolato sotto l&#39;effetto del CsA, mentre quella di cellule WM35 &egrave; stato ridotto, inoltre, le cellule HT168 impostate dall&#39;espressione di beta3 integrina beta1, ma le cellule WM35 continuarono a esprimere beta3. Basato sui nostri risultati ci proponiamo un ruolo multiple, in parte dipendente dalla malignit&agrave; della calcineurina in queste linee di cellule di melanoma.

L&#39;inibizione della calcineurina da ciclosporina A esercita molteplici effetti su linee di cellule di melanoma umano HT168 e WM35.

&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x5264;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3; A (CsA) &#x306F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;ca 2 + &#x306E;&#x3067;&#x3059;-&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3; &#x30D5;&#x30A9;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A9; Ser Thr &#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x4E7E;&#x766C;&#x3084;&#x30A2;&#x30C8;&#x30D4;&#x30FC;&#x6027;&#x76AE;&#x819A;&#x708E;&#x76AE;&#x819A;&#x79D1;&#x5B9F;&#x7FD2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5C40;&#x6240;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x8868;&#x76AE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; HT168 &#x30FB;&#x52A0;&#x5DE5;&#x3001;RGP &#x306E;&#x539F;&#x767A;&#x5DE3;&#x304B;&#x3089;&#x8A2D;&#x7ACB; WM35 &#x8EE2;&#x79FB; CsA &#x304C; 2 &#x3064;&#x306E;&#x3072;&#x3068;&#x60AA;&#x6027;&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;CsA 2 microM &#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F; 50% &#x4E0B;&#x3052;&#x3001;&#x6A19;&#x9AD8;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E; mRNA &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D44;&#x7E54;&#x4E21;&#x65B9;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x884C;&#x3067;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;CsA &#x306F;&#x3001;&#x9069;&#x5EA6;&#x306B;&#x4E21;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;HT168 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6D3B;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068; WM35 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CsA &#x306F; Bcl 2 &#x3084; ERK1/2 &#x306E;&#x5F0F;&#x3082;&#x4E0A;&#x6607;&#x3002;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089; WM35 &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x79FB;&#x884C; HT168 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E; CsA &#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x4E0B;&#x306B;&#x523A;&#x6FC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;beta3 &#x306E;&#x5F0F;&#x304B;&#x3089; beta1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x5207;&#x308A;&#x66FF;&#x3048;&#x305F; HT168 &#x7D30;&#x80DE;&#x304C; WM35 &#x7D30;&#x80DE; beta3 &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D9A;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x5F53;&#x793E;&#x306E;&#x696D;&#x7E3E;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x60AA;&#x6027;&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3; A &#x6295;&#x4E0E;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3072;&#x3068;&#x60AA;&#x6027;&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A; HT168 &#x3068; WM35 &#x4E0A;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xAE30;&#xC804;&#xC744; cyclosporine (CsA)&#xC740; calcineurin, Ca2 +&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC57D;&#xB9AC; &#xBC18;&#xC751; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;-calmodulin &#xC778; Ser/Thr &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Calcineurin &#xC5B5;&#xC81C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xAC74; &#xC120; &#xB610;&#xB294; &#xD53C;&#xBD80;&#xACFC; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; &#xC544; &#xD1A0; &#xD53C; &#xC131; &#xD53C;&#xBD80;&#xC5FC;&#xC758; &#xB85C;&#xCEEC; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC801;&#xC6A9; &#xB418;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC57D;&#xAC04; calcineurin &#xD45C; &#xD53C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; HT168 WM35 RGP &#xAE30;&#xBCF8; &#xBCD1; &#xBCC0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xB9BD;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xC774; &#xB450; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xCCB4;&#xCF54;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC;. &#xCCB4;&#xCF54; 2 Microm&#xC758; 50%&#xB85C; &#xC778;&#xD558; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; calcineurin&#xC758; Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xBC1C; &#xACE0;&#xB3C4; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xACFC; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC870;&#xC9C1; &#xB450; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC140; &#xD655;&#xC0B0; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCCB4;&#xCF54; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xB450; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xC801;&#xC808; &#xD558; &#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; HT168 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB300;&#xC0AC; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8; WM35 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;. &#xCCB4;&#xCF54;&#xC5D0;&#xB294; Bcl-2 &#xBC0F; ERK1/2&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB41C;. Fibronectin WM35 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; HT168 &#xC140; &#xAC00;&#xC774;&#xB4DC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; CsA, &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xADF9; &#xD588;&#xB2E4;, &#xB610;&#xD55C;, HT168 &#xC140; beta1 integrin beta3 &#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xD658; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; WM35 &#xC140;&#xC744; &#xACC4;&#xC18D; &#xD45C;&#xD604; beta3. &#xB530;&#xB77C; &#xC6B0;&#xB9AC; calcineurin&#xC774; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xB2E4;&#xC911;, &#xC77C;&#xBD80; &#xC885;&#xC740; &#xC885;&#xC18D;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;.

Cyclosporine A&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; calcineurin &#xC800;&#xD574; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778; HT168 &#xBC0F; wm35&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD6A8;&#xACFC;.

El inmunosupresor ciclosporina A (CsA) es un inhibidor espec&iacute;fico farmacol&oacute;gico de la calcineurina, la Ca2 +-calmodulina activa espec&iacute;ficos phospho-Ser/Thr prote&iacute;na fosfatasa. Aunque los compuestos inhibidores de calcineurina se aplican para el tratamiento local de psoriasis o dermatitis at&oacute;pica en la pr&aacute;ctica dermatol&oacute;gica, poco se sabe sobre las funciones de la calcineurina en malignidades derivados de epidermis. Investigamos los efectos de la CsA sobre dos l&iacute;neas celulares de melanoma humano, la met&aacute;stasis formando HT168 y WM35 establecido a partir de una lesi&oacute;n primaria de RGP. CsA de 2 microM redujo la actividad enzim&aacute;tica en un 50% y caus&oacute; elevaci&oacute;n en expresi&oacute;n de mRNA y la prote&iacute;na de la calcineurina. Proliferaci&oacute;n celular fue disminuida, as&iacute; como la morfolog&iacute;a celular y la organizaci&oacute;n de la actina se modificaron en ambas l&iacute;neas celulares. CsA aumentado muerte celular moderado en ambas l&iacute;neas celulares y reduce la actividad metab&oacute;lica de las c&eacute;lulas HT168, pero no de c&eacute;lulas WM35. CsA tambi&eacute;n elev&oacute; las expresiones de ERK1/2 y Bcl-2. Fibronectina guiada migraci&oacute;n de c&eacute;lulas de HT168 se vio estimulada bajo el efecto de la CsA, mientras que el de c&eacute;lulas WM35 fue reducido, adem&aacute;s, c&eacute;lulas HT168 cambiadas de la expresi&oacute;n de beta3 a integrina beta1, pero WM35 c&eacute;lulas contin&uacute;an expresa beta3. Basados en nuestros resultados, proponemos un papel en parte dependiente de malignidad m&uacute;ltiples, de la calcineurina en estas l&iacute;neas celulares de melanoma.

Inhibici&oacute;n de la calcineurina por ciclosporina A ejerce m&uacute;ltiples efectos en l&iacute;neas celulares de melanoma humano HT168 y WM35.

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x6E38;&#x79BB;&#x6E38;&#x79BB;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x65F6;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x6210;&#x7684;&#x63D0;&#x5347;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x7ECF;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x548C;&#x5B83;&#x662F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x7F3A;&#x5C11;&#x7684;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x9E21;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B; (HDC) [C.&#x9A6C;&#x5854; &middot; &#x5DF4;&#x585E;&#xFF0C;J.&#x798F;&#x5FB7;&#x3001; Z.Szijgyarto&#x3001; T.Juhasz&#xFF0C;P.Gergely&#x3001; L.Csernoch&#x3001; R.Zakany&#xFF0C;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x6E38;&#x79BB;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5C55;&#x54C1;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5206;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x7279;&#x5F81;&#xFF1A; &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x4E2D;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9499;&#x4FE1;&#x53F7;&#x53EF;&#x80FD;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9499; 44 (2008 &#x5E74;) 310 323]&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC; ATP &#x548C; ATP &#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x5A92;&#x4F53;&#x7BA1;&#x7406;&#x8BF1;&#x53D1;&#x7ECF;&#x77AC;&#x53D8;&#x5B8C;&#x5168;&#x80DE;&#x5916;&#x7ECF;&#x53CA;&#x53EA;&#x5BF9;&#x57F9;&#x517B;&#xFF0C;&#x6210;&#x7684;&#x6700;&#x7EC8;&#x627F;&#x8BFA;&#x53D1;&#x751F;&#x65F6;&#x7684;&#x7B2C; 3 &#x5929;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; Sox9 &#x9AD8;&#x67B6;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x523A;&#x6FC0;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x77E9;&#x9635;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x560C;&#x5464;&#x79BB;&#x5B50;&#x578B;&#x548C;&#x4EE3;&#x8C22;&#x578B;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x578B;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;ADP &#x548C; UDP &#x4E0D;&#x5524;&#x8D77;&#x4EFB;&#x4F55;&#x7ECF;&#x77AC;&#x53D8;&#x548C;&#x867D;&#x7136; utp &#x7F06;&#x7EBF;&#x5728; 3 &#x65E5;&#x9F84; HDC &#x65E0;&#x523A;&#x6FC0;&#x77E9;&#x9635;&#x751F;&#x4EA7;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x6E38;&#x79BB;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x77AC;&#x6001;&#x63D0;&#x5347;&#x4E86;&#x5BF9;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x82CF;&#x62C9;&#x660E;&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62;&#x6240;&#x6709; P2X &#x53D7;&#x4F53;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; P2X(4) &#x4E0D;&#x59A8;&#x788D;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;P2X(4) &#x51FA;&#x73B0;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x5206;&#x6570;&#xFF0C;&#x4EC5;&#x4ECE;&#x7B2C; 3 &#x5929;&#x7ED9;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x578B;&#x560C;&#x7684; ATP &#x4F9D;&#x8D56;&#x7ECF;&#x77AC;&#x53D8;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x6210;&#x4EE3;&#x4E2D;&#x7684; P2X(4) &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x79BB;&#x5B50;&#x578B;&#x560C;&#x53D7;&#x4F53; P2X4 &#x53C2;&#x4E0E;&#x4E86;&#x9E21;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x6210;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

We have previously demonstrated that elevation of free cytosolic Ca(2+) concentration at the time of differentiation of chondroblasts was mainly due to a Ca(2+) influx and it was indispensable to cartilage formation in chicken high density mesenchymal cell cultures (HDC) [C. Matta, J. Fodor, Z. Szijgyarto, T. Juhasz, P. Gergely, L. Csernoch, R. Zakany, Cytosolic free Ca(2+) concentration exhibits a characteristic temporal pattern during in vitro cartilage differentiation: a possible regulatory role of calcineurin in Ca-signalling of chondrogenic cells, Cell Calcium 44 (2008) 310-323]. Here, we report that chondrogenic cells secreted ATP and administration of ATP to the culture medium evoked Ca(2+) transients exclusively in the presence of extracellular Ca(2+) and only on day 3 of culturing, when the final commitment of chondroblasts occurs. Moreover, ATP caused elevated protein expression of the chondrogenic transcription factor Sox9 and stimulated cartilage matrix production. Expression pattern of different types of both ionotropic and metabotropic purinergic receptors was detected. Agonists of metabotropic receptors, ADP and UDP did not evoke any Ca(2+) transients and had no influence on cartilage formation, while UTP caused transient elevation of cytosolic Ca(2+) concentration in 3-day-old HDC without stimulating matrix production. Suramin, which blocks all P2X receptors but not P2X(4) did not impede the effects of ATP, furthermore, P2X(4) appeared in the plasma membrane fraction and gave signals with immunocytochemistry only from day 3. In summary, we suggest a role of ionotropic purinergic signalling of P2X(4) in the generation of ATP-dependent Ca(2+) transients of differentiating chondroblasts.

Ionotropic purinergic receptor P2X4 is involved in the regulation of chondrogenesis in chicken micromass cell cultures.

Nous avons d&eacute;montr&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment que l&#39;&eacute;l&eacute;vation de la concentration cytosolique libre Ca(2+) au moment de la diff&eacute;renciation des chondroblastes est due &agrave; un afflux de Ca(2+) et c&#39;&eacute;tait indispensable &agrave; la formation de cartilage dans les cultures de cellules m&eacute;senchymateuses haute densit&eacute; (HDC) [C. Matta, J. Fodor, Z. Szijgyarto, T. Juhasz, P. Gergely, L. Csernoch, R. Zakany, cytosolique expositions concentration Ca(2+) libres, une caract&eacute;ristique temporelle mod&egrave;le durant la diff&eacute;renciation in vitro de cartilage de poulet: un possible r&ocirc;le r&eacute;gulateur de la calcineurine en Ca-signalisation de chondrog&eacute;niques cellules, cellules Calcium 44 (2008) 310-323]. Nous rapportons ici, que les cellules chondrog&eacute;niques s&eacute;cr&eacute;t&eacute;e ATP et administration d&#39;ATP au milieu de culture &eacute;voqu&eacute;e Ca(2+) transitoires exclusivement en pr&eacute;sence de Ca(2+) extracellulaire et uniquement le jour 3 de culture, lorsque l&#39;engagement final de chondroblastes se produit. En outre, ATP caus&eacute; l&#39;expression de la prot&eacute;ine &eacute;lev&eacute;e du facteur de transcription chondrog&eacute;niques Sox9 et stimule la production de matrice du cartilage. Mod&egrave;le d&#39;expression des diff&eacute;rents types de fois ionotropiques et m&eacute;tabotropiques des r&eacute;cepteurs purinergiques a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;. Agonistes des r&eacute;cepteurs m&eacute;tabotropique, ADP et UDP ne provoque pas de toute Ca(2+) les transitoires et n&#39;avaient aucune influence sur la formation de cartilage, tandis que l&#39;UTP a provoqu&eacute; une &eacute;l&eacute;vation transitoire de la concentration cytosolique Ca(2+) dans HDC &acirc;g&eacute;s de 3 jours sans stimuler la production de matrice. Suramine, qui bloque les r&eacute;cepteurs P2X mais pas P2X(4) n&#39;a pas g&ecirc;n&eacute; les effets de l&#39;ATP, par ailleurs, P2X(4) est apparu dans la fraction de la membrane plasmique et a donn&eacute; des signaux avec immunocytochimie uniquement de jour 3. En r&eacute;sum&eacute;, nous sugg&egrave;rent un r&ocirc;le d&#39;ionotropiques purinergiques signalisation de P2X(4) dans la production d&#39;ATP-d&eacute;pendante Ca(2+) transitoires de diff&eacute;rencier les chondroblastes.

R&eacute;cepteurs purinergiques d&#39;ionotropiques P2X4 est impliqu&eacute; dans la r&eacute;gulation de chondrogen&egrave;se dans des cultures cellulaires micromass poulet.

Wir haben bereits bewiesen, dass die Erh&ouml;hung von freien Zytosolischer Ca(2+)-Konzentration bei der Differenzierung der Chondroblasten resultierte im Wesentlichen aus einem Zustrom von Ca(2+) und es war unerl&auml;sslich, um Knorpel-Formation in Huhn hoher Dichte Mesenchymale Zellkulturen (HDC) [C. Matta, J. Fodor, Z. Szijgyarto, T. Juhasz, s. Gergely, L. Csernoch, R. Zakany, Cytosolic kostenlose Ca(2+) Konzentration Exponate ein Merkmals zeitlichen Muster w&auml;hrend der in-vitro Knorpel Differenzierung: eine m&ouml;gliche regulatorische Rolle von Calcineurin in Ca-Signalisierung der faserreiche cells, Cell Calcium 44 (2008) 310-323]. Hier berichten wir, dass faserreiche Zellen ATP abgesondert und Verwaltung von ATP zu dem Kulturmedium Ca(2+) Transienten ausschlie&szlig;lich in Anwesenheit der extrazellul&auml;ren Ca(2+) und nur am Tag 3 hervorgerufen des Z&uuml;chtens, tritt die endg&uuml;ltige Zusage der Chondroblasten. Dar&uuml;ber hinaus ATP verursacht erh&ouml;hten Protein-Ausdruck des faserreiche Transkriptionsfaktors Sox9 und Knorpel Matrix Produktion angeregt. Expressionsmuster verschiedener ionotrope und Metabotropic Purinergic Rezeptoren wurde erkannt. Agonisten Metabotropic Rezeptoren, ADP und UDP keiner Ca(2+)-Transienten wecken und hatte keinerlei Einfluss auf die Bildung von Knorpel, w&auml;hrend UTP vor&uuml;bergehende Erh&ouml;hung von Zytosolischer Ca(2+) Konzentration in 3 Tage alten HDC ohne Stimulierung Matrix der Produktion verursacht. Suramin, die alle P2X Rezeptoren aber nicht P2X(4) blockiert nicht behindern, die Auswirkungen von ATP, dar&uuml;ber hinaus P2X(4) erschien in der Plasmamembran-Bruch und Signale mit Immunzytochemie nur ab 3.Tag gab. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen empfehlen wir eine Rolle ionotrope Purinergic Signalling des P2X(4) bei der Erzeugung von ATP-abh&auml;ngige Ca(2+) Transienten Chondroblasten zu unterscheiden.

Ionotrope Purinergic des P2X4 engagiert sich bei der Regulierung der Chondrogenesis in Huhn Micromass Zellkulturen.

Abbiamo precedentemente dimostrato che elevazione della concentrazione di Ca(2+) citosolico libero al momento della differenziazione dei condroblasti era principalmente a causa di un afflusso di Ca(2+) e che era indispensabile alla formazione di cartilagine in colture di cellule mesenchimali di pollo ad alta densit&agrave; (HDC) [C. Matta, J. Fodor, Z. Szijgyarto, T. Juhasz, P. Gergely, Csernoch L., R. Zakany, citosolico liberi Ca(2+) esposizioni concentrazione una caratteristica temporale del modello durante la differenziazione in vitro della cartilagine: un possibile ruolo normativo della calcineurina in Ca-segnalazione di chondrogenic cellule, cellula calcio 44 (2008) 310-323]. Qui, segnaliamo che le cellule chondrogenic secreta ATP e amministrazione di ATP per il terreno di coltura evocate transienti Ca(2+) esclusivamente in presenza di Ca(2+) extracellulare e solo il giorno 3 di coltura, quando si verifica l&#39;impegno finale di condroblasti. Inoltre, ATP ha causato l&#39;espressione della proteina elevati del fattore di trascrizione chondrogenic Sox9 e ha stimolato la produzione di matrice della cartilagine. &Egrave; stato rilevato il pattern di espressione dei diversi tipi di recettori purinergici sia ionotropici e metabotropici. Agonisti dei recettori transmembrana, ADP e UDP non ha fatto evocare qualsiasi Ca(2+) transitori e non avevano alcuna influenza sulla formazione della cartilagine, mentre UTP causato transitoria elevazione della concentrazione citosolica di Ca(2+) in 3-giorno-vecchio HDC senza stimolare la produzione matrix. Suramina, che blocca tutti i recettori P2X ma non P2X(4) non ostacolare gli effetti dell&#39;ATP, inoltre, P2X(4) apparso nella frazione di membrana plasmatica e ha dato segnali con immunocitochimica soltanto dal giorno 3. In sintesi, consigliamo un ruolo di ionotropici segnalazione purinergic P2X(4) nella generazione del trifosfato di Adenosina-dipendente Ca(2+) transitori di differenziare condroblasti.

Ionotropici ricevitore del purinergic P2X4 &egrave; coinvolto nella regolazione della chondrogenesis in colture di cellule di pollo micromass.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x9593;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x6642;&#x70B9;&#x3067;&#x306E;&#x6607;&#x683C;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4E3B;&#x306B;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x9D8F;&#x306E;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x9593;&#x8449;&#x7CFB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x990A; (HDC) [C. &#x30DE;&#x30C3;&#x30BF; J. Fodor Z. Szijgyarto&#x3001;T. &#x30E6;&#x30CF;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;P. Gergely, L. Csernoch&#x3001;r. Zakany&#x3001;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x57F9;&#x990A;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x7121;&#x6599;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x5C55;&#x793A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#xFF1A; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; Ca &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x5F79;&#x5272;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; 44 (2008) 310 323]&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ATP &#x306E;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x990A;&#x6B96;&#x306E;&#x307F; 3 &#x65E5;&#x76EE;&#x57F9;&#x990A;&#x57F9;&#x5730;&#x306B; ATP &#x306E;&#x7BA1;&#x7406;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;ATP &#x306F;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; Sox9 &#x306E;&#x9AD8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3001;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8868;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3; &#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30C8;&#x30ED;&#x3068;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x578B;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ADP &#x3068; UDP &#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x4EFB;&#x610F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x547C;&#x3073;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x306A;&#x3044;&#x3001;3 &#x65E5;&#x9F62; HDC &#x523A;&#x6FC0;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x751F;&#x7523;&#x306A;&#x3057;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x904E;&#x6E21; UTP &#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x4E00;&#x65B9;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;ATP &#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x652F;&#x969C;&#x306E; P2X &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x306A;&#x3044; P2X(4) &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; Suramin &#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;P2X(4) &#x306F;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x767B;&#x5834;&#x3057;&#x3060;&#x3051; 3 &#x65E5;&#x76EE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x67D3;&#x8272;&#x3067;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30C8;&#x30ED; &#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E; P2X(4) &#x9593;&#x306E;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x306E; ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30C8;&#x30ED; &#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; P2X4 &#x30C1;&#x30AD;&#x30F3;&#x7D44;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; chondroblasts&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xBB34;&#xB8CC; cytosolic Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC2B9; Ca(2+) &#xC720;&#xC785; &#xB54C;&#xBB38; &#xC774;&#xC5C8;&#xACE0; &#xADF8;&#xAC74; &#xB2ED; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; &#xC911;&#xAC04; &#xC5FD; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591; (HDC) [C. Matta, &#xC81C;&#xC774; Fodor, Z. Szijgyarto, T. Juhasz, P. Gergely, L. Csernoch, R. Zakany, Cytosolic &#xBB34;&#xB8CC; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xC804;&#xC2DC; &#xCCB4; &#xC678; &#xC5F0;&#xACE8; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC784;&#xC2DC; &#xD2B9;&#xC131; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACE8; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0;: calcineurin &#xCE98;&#xB9AC;&#xD3EC;&#xB2C8;&#xC544; chondrogenic&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xADDC;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560; &#xC140;, &#xC140; &#xCE7C;&#xC298; 44 (2008) 310-323]. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; chondrogenic &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84; &#xBE44; ATP&#xC640; ATP&#xC758; &#xAD00;&#xB9AC; &#xBB38;&#xD654; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xB97C; &#xAC16;&#xB294; Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; Ca(2+) &#xB2E8;&#xB3C5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558; &#xACE0; &#xD558;&#xB8E8;&#xC5D0; 3 &#xBC30;&#xC591;, chondroblasts&#xC758; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; &#xC57D;&#xC18D; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, ATP &#xBC1C;&#xC0DD; chondrogenic &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; sox9&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xD604; &#xBC0F; &#xC5F0;&#xACE8; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC790;&#xADF9;. Ionotropic &#xBC0F; metabotropic purinergic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xD328;&#xD134; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Metabotropic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, ADP&#xC640; UDP agonists Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC5F0;&#xC0C1; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xACE0; &#xBC18;&#xBA74; UTP &#xC790;&#xADF9; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC5C6;&#xC774; 3 &#xC77C; &#xB41C; HDC&#xC5D0; cytosolic Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xC0C1;&#xC2B9;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC5F0;&#xACE8; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. Suramin &#xBAA8;&#xB4E0; P2X &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; P2X(4)&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; ATP&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;, &#xB610;&#xD55C;, P2X(4) &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0; &#xB4F1;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0;&#xB9CC; &#xC8FC; 3&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; immunocytochemistry &#xC2E0;&#xD638; &#xC900;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, ionotropic purinergic chondroblasts &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC758; ATP &#xC885;&#xC18D; Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; &#xC138;&#xB300; P2X(4) &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ionotropic purinergic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; P2X4 chondrogenesis &#xCE58;&#xD0A8; micromass &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;.

Previamente hemos demostrado que la elevaci&oacute;n de la concentraci&oacute;n de CA citos&oacute;lico libre en el momento de diferenciaci&oacute;n de condroblastos fue principalmente debido a una afluencia de CA y era indispensable para la formaci&oacute;n de cart&iacute;lago en cultivos de c&eacute;lulas mesenquimales de alta densidad de pollo (HDC) [C. Matta, J. Fodor, Z. Szijgyarto, T. Juhasz, Gergely P., L. Csernoch, R. Zakany, citos&oacute;lica libre CA concentraci&oacute;n exhibe una caracter&iacute;stica temporal del patr&oacute;n durante la diferenciaci&oacute;n in vitro de cart&iacute;lago: un posible papel regulador de la calcineurina en Ca-se&ntilde;alizaci&oacute;n de condrog&eacute;nica c&eacute;lulas, c&eacute;lulas calcio 44 (2008) 310-323]. Aqu&iacute;, Divulgamos que condrog&eacute;nica c&eacute;lulas secretan ATP y administraci&oacute;n de ATP para medio de cultivo hab&iacute;a evocado a CA transitorios exclusivamente en presencia de CA extracelular y s&oacute;lo el d&iacute;a 3 de cultivo, cuando se produce el compromiso final de condroblastos. Por otra parte, ATP caus&oacute; la expresi&oacute;n de la prote&iacute;na elevada del factor de transcripci&oacute;n condrog&eacute;nica Sox9 y estimula la producci&oacute;n de matriz del cart&iacute;lago. Patr&oacute;n de expresi&oacute;n de diferentes tipos de receptores purin&eacute;rgicos tanto ionotr&oacute;picos y metabotr&oacute;picos fue detectada. Agonistas de receptores metabotr&oacute;picos, ADP y UDP no evocar a cualquier CA transitorios y no ten&iacute;an ninguna influencia en la formaci&oacute;n de cart&iacute;lago, mientras que UTP caus&oacute; una elevaci&oacute;n transitoria de la concentraci&oacute;n de CA citos&oacute;lico en HDC de 3 d&iacute;as de edad sin estimular producci&oacute;n de matriz. Suramina, que bloquea los receptores P2X pero no P2X(4) no impiden los efectos de la ATP, adem&aacute;s, P2X(4) apareci&oacute; en la fracci&oacute;n de la membrana plasm&aacute;tica y dio se&ntilde;ales con inmunocitoqu&iacute;mica s&oacute;lo desde el d&iacute;a 3. En Resumen, nos sugieren un papel de ionotr&oacute;picos purin&eacute;rgicos se&ntilde;alizaci&oacute;n de P2X(4) en la generaci&oacute;n de ATP-dependiente CA transitorios de diferenciar los condroblastos.

Ionotr&oacute;picos purin&eacute;rgicos receptor P2X4 est&aacute; implicada en la regulaci&oacute;n de la condrog&eacute;nesis en cultivos celulares de pollo micromass.

&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x6700;&#x8FD1;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5206;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5869;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306B;&#x82E6;&#x3057;&#x3093;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;

&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x72EC;&#x81EA;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#xFF1A;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x89E3;&#x6790;

Inositol pyrophosphates &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xBD84;&#xC790; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; pyrophosphorylation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; inositol pyrophosphates&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xD1B5;.

Inositol pyrophosphates&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xB300;&#xC0AC; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;: &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xC11D;.

Pirofosfatos inositol son una c&#xE9;lula caracterizado recientemente las mol&#xE9;culas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n responsables de la pyrophosphorylation de sustratos proteicos. Aunque probable que participan en una amplia gama de funciones celulares, el estudio de los pirofosfatos inositol ha sufrido de una falta de m&#xE9;todos de f&#xE1;cil acceso para su an&#xE1;lisis.

Pirofosfatos inositol y su complejidad &#xFA;nica metab&#xF3;lico: An&#xE1;lisis por electroforesis en gel

&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x662F;&#x6700;&#x8FD1;&#x4E3A;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5206;&#x5B50;&#x8D1F;&#x8D23;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684; pyrophosphorylation&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x53EF;&#x80FD;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5DF2;&#x906D;&#x53D7;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x73B0;&#x6210;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x548C;&#x5176;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#xFF1A; &#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Inositol pyrophosphates are a recently characterized cell signalling molecules responsible for the pyrophosphorylation of protein substrates. Though likely involved in a wide range of cellular functions, the study of inositol pyrophosphates has suffered from a lack of readily available methods for their analysis.

Inositol pyrophosphates and their unique metabolic complexity: analysis by gel electrophoresis.

Pyrophosphates inositol sont d&#x26;#39;une cellule r&#xE9;cemment caract&#xE9;ris&#xE9; des mol&#xE9;cules de signalisation responsables de la pyrophosphorylation de substrats prot&#xE9;iques. Bien que probablement impliqu&#xE9;e dans un large &#xE9;ventail de fonctions cellulaires, l&#x26;#39;&#xE9;tude des pyrophosphates inositol a souffert d&#x26;#39;un manque de m&#xE9;thodes facilement accessibles pour leur analyse.

Pyrophosphates inositol et de leur complexit&#xE9; unique m&#xE9;tabolique: Analyse par &#xE9;lectrophor&#xE8;se sur gel

Inosit Pyrophosphates sind eine vor kurzem gekennzeichnete Zelle signalisieren der Molek&uuml;le verantwortlich f&uuml;r die Pyrophosphorylation von Protein-Substraten. Obwohl wahrscheinlich eine Vielzahl von Zellfunktionen beteiligt, hat das Studium der Inosit Pyrophosphates aus einem Mangel an leicht verf&uuml;gbaren Methoden f&uuml;r deren Analyse gelitten.

Inosit Pyrophosphates und ihrer einzigartigen metabolische Komplexit&auml;t: Analyse durch Gelelektrophorese.

Pirofosfati inositolo sono una cellula recentemente caratterizzata molecole responsabili del pyrophosphorylation di substrati della proteina di segnalazione. Anche se probabilmente coinvolto in una vasta gamma di funzioni cellulari, lo studio di pirofosfati inositolo ha sofferto da una mancanza di metodi prontamente disponibili per la loro analisi.

Pirofosfati inositolo e loro complessit&agrave; unica metabolica: analisi tramite elettroforesi del gel.

&#x6211;&#x4EEC;&#x65E8;&#x5728;&#x6F84;&#x6E05;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x4F53;&#x5916;&#x6784;&#x5EFA;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x53D1;&#x751F;&#x5728; 6 &#x5929;&#x7684;&#x57F9;&#x517B;&#x671F;&#x5728;&#x9E21;&#x80A2;&#x82BD;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B; (HDC) &#x72EC;&#x7ACB; Ca &#x7684; PKC &#x540C;&#x5DE5;&#x9176;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x53CA;&#x6D3B;&#x6027;&#x88AB;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x517B;&#x6B96;&#x671F;&#x95F4;&#x4E0E;&#x9AD8;&#x5CF0;&#x5929; 2 &#x548C; 3&#xFF0C;&#x5F53;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x6210;&#x7684;&#x533A;&#x5206;&#x3002;&#x8981;&#x4E48;&#x6291;&#x5236;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x5929;&#x7136;&#x590D;&#x5408; rottlerin &#x77AC;&#x6001;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x7684; HDC 2.5&#x3001; 5 &#x6216; 10 &mu; M &#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x6216;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x916A;&#x6C28;&#x9178; shRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x6267;&#x884C;&#x3002;Rottlerin &#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x6574;&#x4F53;&#x7684; PKC &#x6D3B;&#x6027;&#x5728;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6837;&#x672C;&#x7684;&#x672A;&#x7ECF;&#x5904;&#x7406;&#x63A7;&#x5236; HDC&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x6291;&#x5236;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x662F;&#x65E0;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x4EFB;&#x4F55;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684; HDC &#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7684; PKC &#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x5728;&#x57F9;&#x517B;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x5F85;&#x9047;&#x4E0E; rottlerin&#x3002;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x663E;&#x8457;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684; PKC &#x6D3B;&#x6027;&#x3002;Rottlerin &#x548C;&#x916A;&#x6C28;&#x9178; shRNA &#x9020;&#x6210;&#x4E25;&#x91CD;&#x51CF;&#x5C11;&#x5728;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x6B64;&#x5916;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; Sox9&#xFF0C;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x5173;&#x952E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x90FD;&#x4E5F;&#x663E;&#x8457;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;Rottlerin &#x964D;&#x4F4E;&#xFF0C;&#x800C;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x9AD8;&#x67B6; ERK1/2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x523A;&#x6FC0;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x901A;&#x8FC7;&#x5F71;&#x54CD; Sox9 &#x548C; ERK1/2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x4F46; rottlerin &#x6CBB;&#x7597; HDC &#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x548C; rottlerin &#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#xFF0C;&#x5F53;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x662F;&#x5728;&#x9E21;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x3002;

We aimed to elucidate the role of the Ca-independent PKC isoenzyme PKCdelta in the regulation of spontaneous in vitro chondrogenesis occurring in a 6-day-long culturing period in chicken limb bud-derived high density cell cultures (HDC). PKCdelta expression and activity were detectable throughout the entire culturing period with a peak on days 2 and 3, when most of the chondroblasts differentiate. To inhibit the activity of PKCdelta, either the natural compound rottlerin was transiently applied to the culture medium of HDC in 2.5, 5 or 10Â Î¼M concentrations, or gene silencing was performed by using PKCdelta shRNA. Rottlerin significantly reduced the overall PKC activity in enzyme activity assays of cell-free samples of untreated control HDC, probably via the inhibition of PKCdelta. On the contrary, we were unable to detect any consistent change of PKC enzyme activity assayed in samples of HDC treated with rottlerin during culturing. PKCdelta gene silencing resulted in a significantly lower PKC activity. Both rottlerin and PKCdelta shRNA caused a severe reduction in cartilage formation, furthermore protein and phospho-protein levels of Sox9, the key transcription factor of chondrogenesis, were also significantly decreased. Rottlerin lowered, while PKCdelta gene silencing elevated the phosphorylation status of ERK1/2. Our data suggest that PKCdelta stimulates chondrogenesis via influencing Sox9 and ERK1/2 phosphorylation, but the inhibition of cartilage formation in the rottlerin-treated HDC is probably PKCdelta independent and rottlerin might have different effects when applied to cells or to an in vitro enzyme activity assay.

PKCdelta is a positive regulator of chondrogenesis in chicken high density micromass cell cultures.

L&#39;&eacute;tude visait &agrave; &eacute;lucider le r&ocirc;le de l&#39;isoenzyme PKC ind&eacute;pendante du Ca PKCdelta dans la r&eacute;gulation de spontan&eacute;e chondrogen&egrave;se in vitro se produisant dans une p&eacute;riode de culture 6-journ&eacute;e dans des cultures cellulaires de poulet branche d&eacute;riv&eacute;e de bourgeon de haute densit&eacute; (HDC). L&#39;activit&eacute; et l&#39;expression de la PKCdelta &eacute;taient d&eacute;tectables sur toute la p&eacute;riode culture avec un pic aux jours 2 et 3, lorsque la plupart des chondroblastes diff&eacute;rencier. Pour inhiber l&#39;activit&eacute; de PKCdelta, soit le de rottlerin compos&eacute; naturel a &eacute;t&eacute; transitoirement appliqu&eacute; au milieu de culture de HDC dans des concentrations de 2,5, 5 ou 10 &mu;M, ou silen&ccedil;age g&eacute;nique a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e &agrave; l&#39;aide de shARN PKCdelta. Le rottlerin a consid&eacute;rablement r&eacute;duit l&#39;activit&eacute; globale de la PKC dans les tests d&#39;activit&eacute; enzymatique des &eacute;chantillons acellulaire des t&eacute;moins non trait&eacute;s HDC, probablement par l&#39;interm&eacute;diaire de l&#39;inhibition de la PKCdelta. Au contraire, nous avons &eacute;t&eacute; incapables de d&eacute;tecter tout changement coh&eacute;rente de l&#39;activit&eacute; de l&#39;enzyme PKC dos&eacute;e dans des &eacute;chantillons de HDC trait&eacute;s avec le rottlerin au cours de la mise en culture. PKCdelta gene silencing a entra&icirc;n&eacute; une activit&eacute; significativement plus faible de la PKC. Le rottlerin tant PKCdelta shARN caus&eacute; une r&eacute;duction s&eacute;v&egrave;re dans la formation de cartilage, par ailleurs prot&eacute;ines et phosphoprot&eacute;ine de Sox9, le facteur de transcription cl&eacute; de chondrogen&egrave;se, ont consid&eacute;rablement diminu&eacute;. Le rottlerin abaiss&eacute;, alors que la PKCdelta gene silencing &eacute;lev&eacute;e de l&#39;&eacute;tat de phosphorylation de ERK1/2. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que PKCdelta stimule chondrogen&egrave;se via influen&ccedil;ant la phosphorylation Sox9 et ERK1/2, mais l&#39;inhibition de la formation de cartilage dans le trait&eacute;s le rottlerin HDC est probablement ind&eacute;pendant de PKCdelta et le rottlerin pourrait avoir des effets diff&eacute;rents lorsqu&#39;elle est appliqu&eacute;e aux cellules ou &agrave; un test d&#39;activit&eacute; enzymatique in vitro.

PKCdelta est un r&eacute;gulateur positif de chondrogen&egrave;se dans les cultures de cellules micromass poulet haute densit&eacute;.

Wir sollen die Rolle der Ca-unabh&auml;ngige PKC-Isoenzym PKCdelta bei der Regulierung der spontanen in-vitro-Chondrogenesis in einer 6 Tage lang culturing Zeit in Huhn Gliedma&szlig;en Knospe abgeleitete high-Density-Zellkulturen (HDC) zu erhellen. PKCdelta-Expression und Aktivit&auml;t waren nachweisbar w&auml;hrend der gesamten culturing Zeit mit einem Maximum an den Tagen 2 und 3, wenn die meisten von den Chondroblasten differenzieren. Um die Aktivit&auml;t des PKCdelta, entweder hemmen die nat&uuml;rliche zusammengesetzte Rottlerin vor&uuml;bergehend auf dem Kulturmedium des HDC in 2,5, 5 oder 10 &mu;M-Konzentrationen angewendet wurde, oder gen-silencing mithilfe von PKCdelta ShRNA durchgef&uuml;hrt wurde. Rottlerin reduziert deutlich die gesamte PKC-Aktivit&auml;t bei Enzym-Aktivit&auml;t-Assays zellfreien Proben der unbehandelten Kontrolle HDC, wahrscheinlich &uuml;ber die Hemmung der PKCdelta. Im Gegenteil, konnten wir nicht erkennen, dass jede konsequente &Auml;nderung der PKC-Enzym-Aktivit&auml;t normalisiert in Proben von HDC mit Rottlerin w&auml;hrend der Kultivierung behandelt. PKCdelta gen-silencing f&uuml;hrte zu einer deutlich geringeren PKC-Aktivit&auml;t. Rottlerin und PKCdelta ShRNA verursachte ein starker Reduktion in Knorpel-Formation au&szlig;erdem Protein und Phosphoprotein Ebenen von Sox9, wichtigen Transkriptionsfaktors von Chondrogenesis, wurden auch deutlich gesenkt. Rottlerin gesenkt, w&auml;hrend PKCdelta gen-silencing den Status der Phosphorylierung von ERK1/2 erhoben. Unsere Daten zeigen, dass PKCdelta Chondrogenesis stimuliert &uuml;ber Sox9 und ERK1/2 Phosphorylierung, beeinflussen aber die Hemmung der Knorpel-Formation in der Rottlerin behandelten HDC wahrscheinlich PKCdelta unabh&auml;ngige ist und Rottlerin m&ouml;glicherweise unterschiedliche Wirkungen auf Zellen oder ein in-vitro-Enzymaktivit&auml;tstest angewendet.

PKCdelta ist ein positiver Regulator der Chondrogenesis in Huhn hochdichte Micromass Zellkulturen.

Abbiamo mirato a chiarire il ruolo dell&#39;isoenzima PKC indipendente Ca PKCdelta nel regolamento del chondrogenesis in vitro spontanei che si verificano in un periodo di coltura 6-giorno-lungo in colture cellulari di pollo arto bud-derivato ad alta densit&agrave; (HDC). Attivit&agrave; e PKCdelta espressione erano rilevabili durante l&#39;intero periodo di coltura, con un picco nei giorni 2 e 3, quando la maggior parte dei condroblasti differenziare. Per inibire l&#39;attivit&agrave; di PKCdelta, o il rottlerina di composto naturale transitoriamente &egrave; stato applicato al terreno di coltura di HDC in concentrazioni &mu;M 2.5, 5 o 10, o il silenziamento genico &egrave; stato eseguito utilizzando PKCdelta shRNA. Rottlerina ha ridotto significativamente l&#39;attivit&agrave; complessiva di PKC in dosaggi attivit&agrave; enzimatica dei campioni senza cellula di controllo non trattato HDC, probabilmente tramite l&#39;inibizione della PKCdelta. Al contrario, siamo stati in grado di rilevare qualsiasi cambiamento coerenza delle attivit&agrave; dell&#39;enzima PKC dosati in campioni di HDC trattati con rottlerina durante la coltura. Silenziamento genico PKCdelta ha portato in un&#39;attivit&agrave; PKC significativamente inferiore. Sia rottlerina che PKCdelta shRNA caus&ograve; una grave riduzione nella formazione della cartilagine, inoltre proteine e livelli di fosfo-proteina di Sox9, il fattore di trascrizione chiave del chondrogenesis, sono stati anche significativamente diminuiti. Rottlerina abbassato, mentre PKCdelta silenziamento genico elevato lo stato di fosforilazione di ERK1/2. I nostri dati suggeriscono che stimola la PKCdelta chondrogenesis via influenzando la fosforilazione di Sox9 ed ERK1/2, ma l&#39;inibizione della formazione di cartilagine nell&#39;HDC rottlerina-trattato &egrave; probabilmente indipendente PKCdelta e rottlerina potrebbe avere effetti diversi quando applicata a cellule o a un saggio di attivit&agrave; enzimatica in vitro.

PKCdelta &egrave; un regolatore positivo della chondrogenesis in colture di cellule di pollo ad alta densit&agrave; micromass.

&#x6211;&#x3005; &#x306E; Ca &#x72EC;&#x7ACB; PKC &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0; PKCdelta &#x30C1;&#x30AD;&#x30F3;&#x80A2;&#x82BD;&#x6D3E;&#x751F;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE; (HDC) 6 &#x65E5;&#x9593;&#x57F9;&#x990A;&#x671F;&#x9593;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A; in vitro &#x8EDF;&#x9AA8;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x89E3;&#x660E;&#x3092;&#x76EE;&#x6307;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D; PKCdelta &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3084;&#x6D3B;&#x6027;&#x691C;&#x51FA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x3082;&#x3064;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x671F;&#x9593; 2 &#x53CA;&#x3073; 3 &#x5E74;&#x65E5;&#x4E2D;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E; PKCdelta&#x3001;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x5929;&#x7136;&#x5316;&#x5408;&#x7269; rottlerin &#x4E00;&#x904E;&#x6027; HDC 2.5&#x3001;5 &#x307E;&#x305F;&#x306F; 10 &mu; M &#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x6DB2;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; PKCdelta shRNA &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;Rottlerin &#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x643A;&#x5E2F;&#x7121;&#x6599;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x7121;&#x51E6;&#x7406; HDC&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F; PKCdelta &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x306E; PKC &#x306E;&#x5229;&#x7528;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x524A;&#x6E1B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x304B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x57F9;&#x990A;&#x4E2D;&#x306B; rottlerin &#x3068; HDC &#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x8A66;&#x91D1; PKC &#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x6271;&#x308F;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;PKCdelta &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044; PKC &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Rottlerin &#x3068; PKCdelta shRNA &#x53B3;&#x3057;&#x3044;&#x524A;&#x6E1B;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x539F;&#x56E0; Sox9&#x3001;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x306E;&#x4E3B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3082;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Rottlerin &#x306F;&#x3001;PKCdelta &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E; ERK1/2 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x6607;&#x683C;&#x4E2D;&#x306B;&#x4E0B;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;PKCdelta &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; Sox9 &#x3068; ERK1/2 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;rottlerin &#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x308B; HDC &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F; PKCdelta &#x3067;&#x3001;rottlerin &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8A66;&#x9A13;&#x7BA1;&#x5185;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

PKCdelta &#x30C1;&#x30AD;&#x30F3;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x7D44;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x306E;&#x6B63;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2ED; &#xB2E4;&#xB9AC;&#xB97C; &#xBC84;&#xB4DC; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591; (HDC)&#xC5D0;&#xC11C; 6 &#xC77C; &#xB3D9;&#xC548; &#xC790;&#xB780; &#xAE30;&#xAC04;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC790;&#xC5F0; &#xCCB4; &#xC678; chondrogenesis &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; Ca &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; PKC isoenzyme Pkcdelta&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C; &#xBAA9;&#xC801;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC740; chondroblasts&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; PKCdelta &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC77C; 2&#xC640; 3&#xC5D0; &#xD53C;&#xD06C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC790;&#xB780; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5B4;&#xB290; &#xCABD;&#xC774; &#xB4E0; PKCdelta&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC790;&#xC5F0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; rottlerin transiently 2.5, 5 &#xB610;&#xB294; 10 &mu; M &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; HDC&#xC758; &#xBB38;&#xD654; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; &#xB610;&#xB294; PKCdelta Shrna&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xD589;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35;. Rottlerin&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC804;&#xCCB4; PKC &#xC791;&#xC5C5; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC81C;&#xC5B4; HDC, &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; Pkcdelta&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xBB34;&#xB8CC; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC18C;. &#xADF8;&#xC640; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; HDC&#xC758; &#xC0D8;&#xD50C; &#xBD84;&#xC11D; PKC &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xACBD;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; rottlerin&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xB0AE;&#xC740; PKC &#xD65C;&#xB3D9; &#xACB0;&#xACFC; PKCdelta &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35;. Rottlerin &#xBC0F; PKCdelta shRNA &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC5F0;&#xACE8; &#xD615;&#xC131;, &#xB610;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC758; Sox9, chondrogenesis&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. ERK1/2 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB41C; PKCdelta &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Rottlerin &#xC778;&#xD558;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC81C;&#xC548; PKCdelta chondrogenesis Sox9 &#xBC0F; ERK1/2 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xD1B5;&#xD574; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; rottlerin &#xCC98;&#xB9AC; HDC&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACE8; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xB294; &#xC544;&#xB9C8; &#xB3C5;&#xB9BD; PKCdelta rottlerin &#xC140; &#xB610;&#xB294; &#xCCB4; &#xC678; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xBA74; &#xB2E4;&#xB978; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

PKCdelta chondrogenesis &#xCE58;&#xD0A8; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; micromass &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xB2E4;.

Se intent&oacute; dilucidar el papel de la isoenzima Ca independiente de la PKC PKCdelta en la regulaci&oacute;n de la condrog&eacute;nesis in vitro espont&aacute;nea que ocurre en un per&iacute;odo de cultivo 6-d&iacute;a-largo en cultivos de c&eacute;lulas de pollo miembro derivado del brote de alta densidad (HDC). Actividad y expresi&oacute;n de PKCdelta era perceptible durante todo el per&iacute;odo cultivo con un pico en los d&iacute;as 2 y 3, cuando la mayor&iacute;a de los condroblastos diferencia. Para inhibir la actividad de PKCdelta, ya sea el rottlerin compuesto natural transitoriamente se aplic&oacute; al medio de cultivo de HDC en concentraciones de 2.5, 5 &oacute; 10 &mu;M o silenciamiento g&eacute;nico fue realizada usando shRNA PKCdelta. Rottlerin redujo significativamente la actividad global de la PKC en ensayos de actividad de la enzima de muestras sin c&eacute;lulas de control sin tratar HDC, probablemente mediante la inhibici&oacute;n de la PKCdelta. Por el contrario, fuimos incapaces de detectar cualquier cambio constante de la actividad de la enzima PKC ensayada en muestras de HDC tratados con rottlerin durante el cultivo. Silenciamiento del gen PKCdelta dio lugar a una menor actividad de la PKC. Tanto rottlerin como PKCdelta shRNA causaron una severa reducci&oacute;n en la formaci&oacute;n de cart&iacute;lago, adem&aacute;s prote&iacute;nas y niveles de fosfo-prote&iacute;na de Sox9, el factor de transcripci&oacute;n clave de condrog&eacute;nesis, disminuyeron considerablemente. Rottlerin bajado, mientras que el silenciamiento del gen PKCdelta elev&oacute; el estado de fosforilaci&oacute;n de ERK1/2. Nuestros datos sugieren que PKCdelta estimula la condrog&eacute;nesis por influir en la fosforilaci&oacute;n de Sox9 y ERK1/2, pero la inhibici&oacute;n de la formaci&oacute;n de cart&iacute;lago en el HDC tratados con rottlerin es probablemente PKCdelta independiente y rottlerin podr&iacute;a tener efectos diferentes cuando se aplica a las c&eacute;lulas o a un ensayo de actividad enzim&aacute;tica in vitro.

PKCdelta es un regulador positivo de la condrog&eacute;nesis en cultivos celulares de pollo alta densidad micromass.

&#x5728;&#x8FC7;&#x53BB;&#x7684;&#x5341;&#x5E74;&#x76EE;&#x7779;&#x8F7D;&#x7684;&#x7206;&#x70B8;&#x7684;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x3002;IP6Ks &#x548C;&#x6700;&#x8FD1;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684; PP-IP5Ks &#x65E9;&#x671F;&#x514B;&#x9686;&#x5F97;&#x4EE5;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5DE5;&#x5177;&#x6765;&#x8C03;&#x67E5;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x5174;&#x594B;&#x9886;&#x57DF;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#xFF0C;&#x66F4;&#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x66F4;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x534F;&#x8BAE;&#x9700;&#x8981;&#x5F97;&#x5230;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x80FD;&#x591F;&#x89E3;&#x51B3;&#x548C;&#x91CF;&#x5316;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3; (Losito et al&#xFF0C;2009&#x5E74;) &#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x6539;&#x53D8;&#x4E86;&#x6211;&#x4EEC;&#x6B63;&#x5728;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD9;&#x7C7B;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5F00;&#x8F9F;&#x65B0;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x6765;&#x89E3;&#x51B3;&#x3001; &#x4FA6;&#x67E5;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x80AF;&#x5B9A;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7406;&#x60F3;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EE5;&#x83B7;&#x5F97;&#x786E;&#x5207;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x65B0;&#x673A;&#x5236;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x65B9;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x5B58;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684; pyrophosphorylated serines&#x3002;&#x5E0C;&#x671B;&#x8FD9;&#x5C06;&#x4F1A;&#x5E26;&#x6765;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x65B0;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4FEE;&#x6539;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x901A;&#x8FC7;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x786E;&#x8BA4; pyrophosphorylated serines &#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;

&#x808C;&#x9187; hexakisphosphate &#x6FC0;&#x9176; (IP6Ks) &#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The past ten years have seen a contained explosion of interest in inositol pyrophosphates. The early cloning of the IP6Ks and the more recent identification of the PP-IP5Ks have allowed the development of essential experimental tools to investigate the physiological role of inositol pyrophosphates. However, for this exciting field of research to gain momentum, simpler and more reliable research protocols need to be further developed. The ability to resolve and quantify inositol pyrophosphates using gel electrophoresis (Losito et al., 2009) has dramatically altered the way we are studying this class of molecules, opening new avenues for research. The use of this technology to resolve, detect and characterize inositol pyrophosphates extracted from cells certainly represents one desirable aim. The most crucial objective, however, is to obtain definite proof of the new mechanism of post-translational modification by identifying with biophysical methods the presence in vivo of pyrophosphorylated serines. This will hopefully precipitate the development of new ways to detect this modification, for example through the production of antibodies that specifically recognize pyrophosphorylated serines.

The signaling role of inositol hexakisphosphate kinases (IP6Ks).

Les dix derni&#xE8;res ann&#xE9;es ont vu une explosion confin&#xE9;e de l&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t pour les pyrophosphates inositol. Le clonage pr&#xE9;coce des IP6Ks et l&#x26;#39;identification plus r&#xE9;cente de la PP-IP5Ks ont permis le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;outils essentiels exp&#xE9;rimentales pour &#xE9;tudier le r&#xF4;le physiologique de pyrophosphates inositol. Toutefois, dans ce domaine prometteur de la recherche pour prendre de l&#x26;#39;&#xE9;lan, les protocoles de recherche plus simples et plus fiables doivent &#xEA;tre encore d&#xE9;velopp&#xE9;s. La capacit&#xE9; de r&#xE9;soudre et de quantifier les pyrophosphates inositol en utilisant l&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se sur gel (Losito et al., 2009) a consid&#xE9;rablement modifi&#xE9; la fa&#xE7;on dont nous &#xE9;tudions cette classe de mol&#xE9;cules, ouvrant de nouvelles avenues pour la recherche. L&#x26;#39;utilisation de cette technologie pour r&#xE9;soudre, de d&#xE9;tecter et de caract&#xE9;riser les pyrophosphates inositol extraits de cellules repr&#xE9;sente certainement un but souhaitable. L&#x26;#39;objectif le plus crucial, cependant, est d&#x26;#39;obtenir la preuve d&#xE9;finitive du nouveau m&#xE9;canisme de modification post-traductionnelle en s&#x26;#39;identifiant &#xE0; des m&#xE9;thodes biophysiques de la pr&#xE9;sence in vivo de s&#xE9;rines pyrophosphorylated. Nous esp&#xE9;rons que cela pr&#xE9;cipiter le d&#xE9;veloppement de nouveaux moyens de d&#xE9;tecter cette modification, par exemple par la production d&#x26;#39;anticorps qui reconnaissent sp&#xE9;cifiquement les s&#xE9;rines pyrophosphorylated.

Le r&#xF4;le de signalisation des kinases inositol hexakisphosphate (IP6Ks)

Die letzten zehn Jahren haben eine enthaltene Explosion des Interesses an Inosit Pyrophosphates gesehen. Das fr&uuml;he Klonen die IP6Ks und die neuere Bezeichnung des PP-IP5Ks zugelassen, dass die Entwicklung der wesentlichen experimentelle Werkzeuge, die physiologische Rolle von Inosit Pyrophosphates zu untersuchen. Allerdings m&uuml;ssen f&uuml;r dieses spannende Feld der Forschung an Dynamik gewinnen, einfacher und zuverl&auml;ssiger Forschungsprotokollen weiterentwickelt werden. Die M&ouml;glichkeit zum l&ouml;sen und quantifizieren Inosit Pyrophosphates mit Gel-Elektrophorese (Losito Et Al., 2009) hat sich dramatisch ver&auml;ndert die Art und Weise wir diese Klasse von Molek&uuml;len, studieren &ouml;ffnen neue Wege f&uuml;r die Forschung. Der Einsatz dieser Technologie zum Aufl&ouml;sen, erkennen und charakterisieren Inosit Pyrophosphates aus Zellen extrahiert stellt sicherlich eine w&uuml;nschenswerte Ziel dar. Das wichtigste Ziel ist jedoch, definitive Beweis des neuen Mechanismus des post-translationale Modifikation durch Identifikation mit biophysikalischen Methoden das Vorhandensein des Pyrophosphorylated Serinresten in-vivo zu erzielen. Dies wird hoffentlich st&uuml;rzen, die Entwicklung von neuen Wegen, um diese &Auml;nderung, zum Beispiel durch die Produktion von Antik&ouml;rpern zu erkennen, die speziell Pyrophosphorylated Serinresten erkennen.

Die signalisierende Rolle der Inosit Hexakisphosphate Kinasen (IP6Ks).

Ultimi dieci anni hanno visto un&#39;esplosione di contenuti di interesse Pirofosfati di inositolo. La clonazione presto il IP6Ks e il pi&ugrave; recente identificazione di PP-IP5Ks hanno permesso lo sviluppo di strumenti essenziali sperimentali per indagare il ruolo fisiologico di Pirofosfati di inositolo. Tuttavia, per questo interessante campo di ricerca a guadagnare slancio, devono essere ulteriormente sviluppati protocolli di ricerca pi&ugrave; semplice e pi&ugrave; affidabile. La capacit&agrave; di risolvere e quantificare pirofosfati inositolo tramite l&#39;elettroforesi del gel (Losito et al., 2009) ha drasticamente alterato il modo stiamo studiando questa classe di molecole, aprendo nuove vie per la ricerca. L&#39;uso di questa tecnologia per risolvere, individuare e caratterizzare Pirofosfati inositolo estratti dalle cellule rappresenta certamente un obiettivo auspicabile. L&#39;obiettivo pi&ugrave; importante, &egrave; tuttavia, per ottenere la prova definitiva del nuovo meccanismo di modifica alberino-di traduzione identificando con metodi biofisici della presenza in vivo del pyrophosphorylated serines. Speriamo che questo precipita lo sviluppo di nuovi modi per rilevare questa modifica, ad esempio attraverso la produzione di anticorpi che riconoscono specificamente pyrophosphorylated serines.

Il ruolo di segnalazione delle chinasi di inositolo hexakisphosphate (IP6Ks).

&#x904E;&#x53BB;10&#x5E74;&#x9593;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3078;&#x306E;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7206;&#x767A;&#x3092;&#x898B;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; IP6Ks&#x3068;PP-IP5Ks&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x52E2;&#x3044;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306A;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x306B;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x7814;&#x7A76;&#xB7;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#xFF08;Losito&#x3089;&#x3001;2009&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3057;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x98DB;&#x8E8D;&#x7684;&#x306B;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x9053;&#x3092;&#x958B;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x62BD;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x78BA;&#x304B;&#x306B;1&#x3064;&#x306E;&#x671B;&#x307E;&#x3057;&#x3044;&#x76EE;&#x7684;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;pyrophosphorylated&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x5165;&#x624B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x304C;&#x3046;&#x307E;&#x304F;&#x3044;&#x3051;&#x3070;&#x7279;&#x306B;pyrophosphorylated&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x6C88;&#x6BBF;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x516D;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#xFF08;IP6Ks&#xFF09;

&#xC9C0;&#xB09C; 10 &#xB144; &#xB3D9;&#xC548; inositol pyrophosphates&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD3ED;&#xBC1C;&#xC744; &#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xAE30; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB294; IP6Ks &#xBC0F; PP ip5ks&#xC758; &#xCD5C;&#xC2E0; &#xC2DD;&#xBCC4; inositol pyrophosphates&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xD560;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xD765;&#xBBF8; &#xC9C4; &#xC9C4;&#xD55C; &#xCD94;&#xC9C4;&#xB825;&#xC744; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xCD94;&#xAC00; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB420; &#xD544;&#xC694;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;. Inositol pyrophosphates &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; (Losito et al., 2009)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACC4;&#xB7C9;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC740; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4;&#xB3C4; &#xAC1C;&#xBC29;, &#xBD84;&#xC790;&#xC758;&#xC774; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xACF5;&#xBD80; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBC14;&#xAFE8;&#xB2E4;. &#xD655;&#xC2E4;&#xD788; &#xD574;&#xACB0;, &#xAC80;&#xC0C9; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xCD9C;&#xD55C; inositol pyrophosphates&#xC774;&#xC774; &#xAE30;&#xC220; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xBC14;&#xB78C;&#xC9C1;&#xD55C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294;, pyrophosphorylated serines&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC874;&#xC7AC; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3EC;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC0C1; &#xC218; &#xC815;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xD655;&#xC2E4; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC798;&#xD558;&#xBA74;&#xC774; &#xC218;&#xC815; &#xC608; pyrophosphorylated serines&#xB97C; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xCE68;&#xC804; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Inositol hexakisphosphate kinases (IP6Ks)&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5ED;&#xD560;.

En los &#xFA;ltimos diez a&#xF1;os ha habido una explosi&#xF3;n de contenidos de inter&#xE9;s en pirofosfatos inositol. La clonaci&#xF3;n de los principios de IP6Ks y la identificaci&#xF3;n m&#xE1;s reciente de los PP-IP5Ks han permitido el desarrollo de herramientas esenciales experimentales para investigar el papel fisiol&#xF3;gico de pirofosfatos de inositol. Sin embargo, para este apasionante campo de la investigaci&#xF3;n a cobrar impulso, m&#xE1;s sencilla y fiable los protocolos de investigaci&#xF3;n deben seguir desarroll&#xE1;ndose. La capacidad de resolver y cuantificar pirofosfatos inositol mediante electroforesis en gel (Losito et al., 2009) ha cambiado radicalmente la forma en que est&#xE1;n estudiando este tipo de mol&#xE9;culas, la apertura de nuevas v&#xED;as para la investigaci&#xF3;n. El uso de esta tecnolog&#xED;a para resolver, detectar y caracterizar pirofosfatos inositol extra&#xED;dos de las c&#xE9;lulas sin duda representa un objetivo deseable. El objetivo m&#xE1;s importante, sin embargo, es obtener una prueba definitiva del nuevo mecanismo de modificaci&#xF3;n post-traduccional mediante la identificaci&#xF3;n con los m&#xE9;todos biof&#xED;sicos de la presencia en vivo de las serinas pyrophosphorylated. Se espera que esto precipitar el desarrollo de nuevas maneras de detectar esta modificaci&#xF3;n, por ejemplo, mediante la producci&#xF3;n de anticuerpos que reconocen espec&#xED;ficamente serinas pyrophosphorylated.

La funci&#xF3;n de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de quinasas hexakisfosfato inositol (IP6Ks)

&#x65E0;&#x673A;&#x78F7;&#x9178;&#x76D0; (&#x805A;-P) &#x7531;&#x521A;&#x94FE;&#x78F7;&#x9178;&#x7EC4;&#x9AD8;&#x80FD;&#x6E90;&#x503A;&#x5238;&#x7531;&#x94FE;&#x63A5;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x5B83;&#x5728;&#x6BCF;&#x4E00;&#x4E2A;&#x751F;&#x7269;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x5E76;&#x88AB;&#x5377;&#x5165;&#x4E86;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#x78F7;&#x9178;&#x76D0;&#x5B58;&#x50A8;&#x3001; &#x51DD;&#x8840;&#x3001; &#x548C;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#xFF09;&#x3002;&#x5176;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4E3B;&#x8981;&#x5728;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7814;&#x7A76;&#x5176;&#x4F59;&#x57FA;&#x672C;&#x4E0A;&#x65E0;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x6709;&#x4EBA;&#x63D0;&#x51FA;&#x8BE5;&#x805A;&#x78F7;&#x4EE3;&#x8C22;&#x76F8;&#x8FDE;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x78F7;&#x9178;&#x7684;&#x808C;&#x9187;&#x7269;&#x79CD; (&#x808C;&#x9187; pyrophosphates)&#x3002;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x662F;&#x5176;&#x4E2D;&#x78F7;&#x9178;&#x7FA4;&#x4F53;&#x4EBA;&#x6570;&#x8D85;&#x8FC7;&#x78B3;&#x539F;&#x5B50;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x591A;&#x6676;&#x7845;-P &#x50CF;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5305;&#x542B;&#x9AD8;&#x80FD;&#x6E90;&#x503A;&#x5238;&#x548C;&#x626E;&#x6F14;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x9012;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x65E0;&#x6CD5;&#x51FA;&#x793A;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x90FD;&#x65E0;&#x6CD5;&#x5BDF;&#x89C9;&#x7684;&#x4FDD;&#x5229;&#x4F53;&#x80B2;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5206;&#x5B50;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7A81;&#x51FA;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5E76;&#x884C;&#x3002;&#x66F4;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; DDP1&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x7684; diadenosine &#x548C; diphosphoinositol phosphohydrolase&#xFF0C;&#x62E5;&#x6709;&#x5F3A;&#x5065;&#x7684;&#x591A;&#x6676;&#x7845; P endopolyphosphohydrolase &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x662F;&#x8FDB;&#x5316;&#x4FDD;&#x6301;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; Nudix &#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#xFF0C;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;DIPP1&#xFF0C;DIPP2 &#x548C; DIPP3&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E09;&#x4E2A; Ddp1 &#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x4E5F;&#x662F;&#x964D;&#x89E3;&#x805A;&#x4F53;&#x80B2;

&#x65E0;&#x673A;&#x78F7;&#x9178;&#x76D0; endopolyphosphatases &#x8FDB;&#x5316;&#x4FDD;&#x6301;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Inorganic polyphosphate (poly-P) consists of just a chain of phosphate groups linked by high energy bonds. It is found in every organism and is implicated in a wide variety of cellular processes (e.g. phosphate storage, blood coagulation, and pathogenicity). Its metabolism has been studied mainly in bacteria while remaining largely uncharacterized in eukaryotes. It has recently been suggested that poly-P metabolism is connected to that of highly phosphorylated inositol species (inositol pyrophosphates). Inositol pyrophosphates are molecules in which phosphate groups outnumber carbon atoms. Like poly-P they contain high energy bonds and play important roles in cell signaling. Here, we show that budding yeast mutants unable to produce inositol pyrophosphates have undetectable levels of poly-P. Our results suggest a prominent metabolic parallel between these two highly phosphorylated molecules. More importantly, we demonstrate that DDP1, encoding diadenosine and diphosphoinositol phosphohydrolase, possesses a robust poly-P endopolyphosphohydrolase activity. In addition, we prove that this is an evolutionarily conserved feature because mammalian Nudix hydrolase family members, the three Ddp1 homologues in human cells (DIPP1, DIPP2, and DIPP3), are also capable of degrading poly-P.

Identification of an evolutionarily conserved family of inorganic polyphosphate endopolyphosphatases.

Polyphosphate min&#xE9;ral (poly-P) se compose de seulement une cha&#xEE;ne de groupes phosphate li&#xE9;s par des liaisons &#xE0; haute &#xE9;nergie. Il se trouve dans chaque organisme et est impliqu&#xE9; dans une grande vari&#xE9;t&#xE9; de processus cellulaires (p. ex phosphate de stockage, la coagulation du sang, et la pathog&#xE9;nicit&#xE9;). Son m&#xE9;tabolisme a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9; principalement dans les bact&#xE9;ries tout en restant largement non caract&#xE9;ris&#xE9;s chez les eucaryotes. Il a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;cemment sugg&#xE9;r&#xE9; que le poly-P m&#xE9;tabolisme est li&#xE9; &#xE0; celui de tr&#xE8;s phosphoryl&#xE9;es esp&#xE8;ces inositol (pyrophosphates inositol). Pyrophosphates inositol sont des mol&#xE9;cules dans lesquelles les groupes phosphates sont plus nombreux que des atomes de carbone. Comme poly-P, ils contiennent des liaisons &#xE0; haute &#xE9;nergie et de jouer des r&#xF4;les importants dans la signalisation cellulaire. Ici, nous montrons que les mutants de levure en herbe incapables de produire pyrophosphates inositol ont des niveaux ind&#xE9;tectables de poly-P. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent un parall&#xE8;le m&#xE9;tabolique importante entre ces deux mol&#xE9;cules hautement phosphoryl&#xE9;s. Plus important encore, nous d&#xE9;montrons que DDP1, codant phosphohydrolase diad&#xE9;nosine et diphosphoinositol, poss&#xE8;de une activit&#xE9; endopolyphosphohydrolase robuste poly-P. En outre, nous montrons que cette fonctionnalit&#xE9; est &#xE9;volutif conserv&#xE9;e parce mammif&#xE8;res membres de la famille Nudix hydrolase, les trois DDP1 homologues dans les cellules humaines (DIPP1, DIPP2, et DIPP3), sont &#xE9;galement capables de d&#xE9;grader le poly-P.

Identification d&#x26;#39;une famille &#xE9;volutives conserv&#xE9;es de Endopolyphosphatases polyphosphate inorganique

Anorganische Polyphosphate (Poly-P) besteht aus nur einer Kette von Phosphatgruppen, die durch energiereiche Bindungen verkn&uuml;pft. Es findet sich in jedem Organismus und ist in einer Vielzahl zellul&auml;rer Prozesse (z.B. Phosphat Speicher, Blutgerinnung und Pathogenit&auml;t) verwickelt. Seinen Stoffwechsel wurde haupts&auml;chlich in Bakterien bleiben Sie weitgehend in den Eukaryotes uncharakterisiertes untersucht. Vor kurzem wurde vermutet, dass diese Poly-P-Stoffwechsel, die stark Phosphorylierte Inosit-Arten (Inosit Pyrophosphates) angeschlossen ist. Inosit Pyrophosphates sind Molek&uuml;le, die in denen Phosphatgruppen Kohlenstoffatome &uuml;berwiegen. Wie Poly-P sie enthalten energiereiche Bindungen und spielen eine wichtige Rolle in der Zelle zu signalisieren. Hier zeigen wir, dass angehende Hefe-Mutanten, die nicht in der Lage, Inosit Pyrophosphates zu produzieren haben nicht nachweisbar Poly-P. Unsere Ergebnisse legen nahe, eine prominente metabolische Parallele zwischen diese beiden stark phosphorylierte Molek&uuml;le. Noch wichtiger ist, beweisen wir, dass DDP1, Codierung Diadenosine und Diphosphoinositol-Phosphohydrolase, eine robuste Poly-P-Endopolyphosphohydrolase-Aktivit&auml;t besitzt. Dar&uuml;ber hinaus beweisen wir, dass dies eine evolution&auml;r konservierte Feature ist, weil S&auml;ugetier-Nudix Hydrolase Familienangeh&ouml;rigen, die drei Ddp1 Homologen in den menschlichen Zellen (DIPP1, DIPP2 und DIPP3), auch erniedrigender Poly-P. Lage sind

Kennung einer evolution&auml;r konservierte Familie anorganischer Polyphosphate Endopolyphosphatases.

Inorganico polifosfato (poly-P) &egrave; costituito da solo una catena di gruppi fosfato legati da legami ad alta energia. E si trova in ogni organismo ed &egrave; coinvolto in un&#39;ampia variet&agrave; di processi cellulari (ad esempio deposito di fosfato, la coagulazione del sangue e patogenicit&agrave;). Il metabolismo &egrave; stato studiato principalmente nei batteri, pur rimanendo in gran parte atipici negli eucarioti. Recentemente &egrave; stato suggerito che metabolismo poly-P &egrave; collegato a quello di specie altamente fosforilato inositolo (pirofosfati inositolo). Pirofosfati inositolo sono molecole in cui gruppi fosfato superano gli atomi di carbonio. Come poli-P che contengono legami ad alta energia e svolgono un ruolo importante nella segnalazione delle cellule. Qui, ci mostra che in erba mutanti lievito incapace di produrre pirofosfati inositolo hanno livelli rilevabili di poli-P. I nostri risultati suggeriscono un parallelo metabolico importante tra queste due molecole altamente fosforilate. Ancora pi&ugrave; importante, ci dimostrano che DDP1, codifica diadenosine e diphosphoinositol phosphohydrolase, possiede un&#39;attivit&agrave; di endopolyphosphohydrolase robusta poli-P. Inoltre, dimostriamo che questa &egrave; una caratteristica evolutivamente conservata perch&eacute; mammiferi Nudix idrolasi membri della famiglia, i tre omologhi Ddp1 nelle cellule umane (DIPP1, DIPP2 e DIPP3), sono anche in grado di degradare poly-P.

Identificazione di una famiglia evolutivamente conservata di inorganico polifosfato endopolyphosphatases.

&#x7121;&#x6A5F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;&#x30DD;&#x30EA;-P&#xFF09;&#x306F;&#x9AD8;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9023;&#x7D50;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x57FA;&#x306E;&#x3061;&#x3087;&#x3046;&#x3069;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x8CAF;&#x8535;&#x3001;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x56FA;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#xFF09;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x672A;&#x540C;&#x5B9A;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x3092;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306B;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;-P&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x7A2E;&#xFF08;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF09;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x57FA;&#x306F;&#x3001;&#x70AD;&#x7D20;&#x539F;&#x5B50;&#x6570;&#x3092;&#x4E0A;&#x56DE;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;-P&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x9AD8;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;-P&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x5E73;&#x884C;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;DDP1&#x306F;&#x3001;diadenosine&#x3068;diphosphoinositol&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x3001;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x30DD;&#x30EA;-P endopolyphosphohydrolase&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;Nudix&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;3 Ddp1&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#xFF08;DIPP1&#x3001;DIPP2&#x3001;&#x3068;DIPP3&#xFF09;&#x304C;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x5206;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA;-P&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8A3C;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x7121;&#x6A5F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;Endopolyphosphatases&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;

&#xBB34;&#xAE30; polyphosphate (&#xD3F4; &#xB9AC;-P) &#xB192;&#xC740; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xCC44;&#xAD8C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xCCB4;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; (&#xC608;: &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;, &#xD608;&#xC561; &#xC751;&#xACE0;, &#xACF5;&#xAC04;&#xACFC; pathogenicity)&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC;&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC0C8;&#xB86D;&#xAC70;&#xB098; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xADF8; &#xD3F4; &#xB9AC; P &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC885; &#xB192;&#xC740; phosphorylated &#xC774;&#xB178; &#xC2DC; &#xD1A8; (inositol pyrophosphates)&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Inositol pyrophosphates&#xB294; &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC22B; &#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD0C4;&#xC18C; &#xC6D0;&#xC790; &#xBD84;&#xC790;. &#xD3F4; &#xB9AC;-P &#xCC98;&#xB7FC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB192;&#xC740; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xCC44;&#xAD8C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xC140; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744;. &#xC790;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xADF8; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; inositol pyrophosphates&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD3F4; &#xB9AC;-&#xD53C;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC218;&#xCE58;&#xAC00; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xC774; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB9E4;&#xC6B0; phosphorylated &#xBD84;&#xC790; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC; &#xBCD1;&#xB82C;&#xC744; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, DDP1, &#xC778;&#xCF54;&#xB529; diadenosine &#xBC0F; diphosphoinositol phosphohydrolase&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD3F4; &#xB9AC;-P endopolyphosphohydrolase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC9C4;&#xD654; &#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; Nudix &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;, 3 Ddp1 homologues (DIPP1, DIPP2, &#xBC0F; DIPP3), &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xD3F4; &#xB9AC;. &#xAD74;&#xC695;&#xC758; &#xC99D;&#xBA85;

&#xBB34;&#xAE30; polyphosphate endopolyphosphatases&#xC758; &#xC9C4;&#xD654; &#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

Polifosfato inorg&#xE1;nico (poli-P) consta de s&#xF3;lo una cadena de grupos fosfato unidos por enlaces de alta energ&#xED;a. Se encuentra en todos los organismos y est&#xE1; implicado en una amplia variedad de procesos celulares (por ejemplo fosfato de almacenamiento, coagulaci&#xF3;n de la sangre, y la patogenicidad). Su metabolismo se ha estudiado principalmente en las bacterias sin dejar de ser en gran medida no caracterizados en las c&#xE9;lulas eucariotas. Recientemente se ha sugerido que la poli-P metabolismo est&#xE1; conectado a la de las especies altamente inositol fosforilado (pirofosfatos inositol). Pirofosfatos inositol son mol&#xE9;culas en las que los grupos fosfato son m&#xE1;s numerosos que los &#xE1;tomos de carbono. Como poli-P que contienen enlaces de alta energ&#xED;a y desempe&#xF1;an un papel importante en la se&#xF1;alizaci&#xF3;n celular. Aqu&#xED;, mostramos que los mutantes de levadura en ciernes que no pueden producir pirofosfatos inositol tener niveles indetectables de poli-P. Nuestros resultados sugieren un paralelismo metab&#xF3;lica m&#xE1;s importante entre estas dos mol&#xE9;culas altamente fosforilados. M&#xE1;s importante a&#xFA;n, nos demuestran que DDP1, que codifica fosfohidrolasa diadenosine y diphosphoinositol, posee una s&#xF3;lida actividad de poli-P endopolyphosphohydrolase. Adem&#xE1;s, se demuestra que esta es una caracter&#xED;stica conservada evolutivamente, ya miembros de la familia de mam&#xED;feros NUDIX hidrolasa, los tres Ddp1 hom&#xF3;logos en las c&#xE9;lulas humanas (DIPP1, DIPP2 y DIPP3), tambi&#xE9;n son capaces de degradar poli-P.

La identificaci&#xF3;n de un familiar conservado evolutivamente de Endopolyphosphatases polifosfato inorg&#xE1;nico

&#xACE0; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; &#xCC44;&#xAD8C; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; &#xC0BC;&#xC778;&#xC0B0; (ATP)&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xCE90;&#xB9AC;&#xC5B4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB610;&#xB294; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; monophosphate&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xC870;&#xB85C; &#xC11C; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC791;&#xB3D9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC5EC;&#xAE30; inositol pyrophosphates &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; ATP &#xB18D;&#xB3C4; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC;. Inositol pyrophosphates &#xC5C6;&#xB294; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC5ED; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xC5ED;&#xC124;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC99D;&#xAC00; &#xBD84;&#xD574; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; 4 &#xBC30;&#xB098; &#xB9CE;&#xC740; ATP&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568;. Inositol pyrophosphates &#xC8FC;&#xC694; glycolytic &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; gcr1&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC774;&#xB178; &#xC2DC; &#xD1A8; pyrophosphates &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; glycolytic/&#xC544; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC; &#xBE44;&#xC728;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558; &#xC5EC; ATP &#xB18D;&#xB3C4; &#xC870;&#xC808; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Inositol pyrophosphates&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB300;&#xC0AC; &#xC7AC;&#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874; &#xB610;&#xD55C; &#xC9C4;&#xD654; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xD3EC; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC5ED;&#xD559;&#xC5D0; &#xC774;&#xB178; &#xC2DC; &#xD1A8; pyrophosphates&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Con sus enlaces fosfato de alta energ&#xED;a, trifosfato de adenosina (ATP) es el principal portador de energ&#xED;a intracelular. Tambi&#xE9;n funciona en la mayor&#xED;a de las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n, como un donador de fosfato o un precursor de monofosfato de adenosina c&#xED;clico. Mostramos aqu&#xED; que pirofosfatos inositol participar en el control de la concentraci&#xF3;n intracelular de ATP. Las levaduras que carecen de pirofosfatos de inositol tienen mitocondrias disfuncionales, pero, parad&#xF3;jicamente, contienen cuatro veces m&#xE1;s ATP por la gluc&#xF3;lisis aumentado. Se demuestra que pirofosfatos inositol controlar la actividad de la mayor GCR1 glicol&#xED;tica factor de transcripci&#xF3;n. As&#xED;, pirofosfatos inositol regular la concentraci&#xF3;n de ATP mediante la alteraci&#xF3;n de la relaci&#xF3;n metab&#xF3;lica glicol&#xED;tica / mitocondrial. Metab&#xF3;lico reprogramaci&#xF3;n a trav&#xE9;s de pirofosfatos de inositol es un mecanismo evolutivo conservada que tambi&#xE9;n se conserva en sistemas de mam&#xED;feros.

Influencia de los pirofosfatos de inositol en la din&#xE1;mica celular de la Energ&#xED;a

&#x5176;&#x9AD8;&#x80FD;&#x78F7;&#x9178;&#x503A;&#x5238;&#x4E0E;&#x817A;&#x82F7;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178; &#xFF08;ATP&#xFF09; &#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;&#x5B83;&#x8FD8;&#x529F;&#x80FD;&#x4E2D;&#x6700;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x78F7;&#x9178;&#x6350;&#x52A9;&#x6216;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x7684;&#x524D;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x53C2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x6709;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x5931;&#x8C03;&#xFF0C;&#x4F46;&#x77DB;&#x76FE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x589E;&#x52A0;&#x7CD6;&#x9175;&#x89E3;&#x5305;&#x542B;&#x56DB;&#x500D; ATP&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x63A7;&#x5236; GCR1 &#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7CD6;&#x9175;&#x89E3;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x89C4;&#x7BA1;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6539;&#x53D8;&#x7CD6;&#x9175;&#x89E3;/&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7387;&#x3002;&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x901A;&#x8FC7;&#x4EE3;&#x8C22;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x662F;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

&#x808C;&#x9187; pyrophosphates &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80FD;&#x91CF;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

With its high-energy phosphate bonds, adenosine triphosphate (ATP) is the main intracellular energy carrier. It also functions in most signaling pathways, as a phosphate donor or a precursor for cyclic adenosine monophosphate. We show here that inositol pyrophosphates participate in the control of intracellular ATP concentration. Yeasts devoid of inositol pyrophosphates have dysfunctional mitochondria but, paradoxically, contain four times as much ATP because of increased glycolysis. We demonstrate that inositol pyrophosphates control the activity of the major glycolytic transcription factor GCR1. Thus, inositol pyrophosphates regulate ATP concentration by altering the glycolytic/mitochondrial metabolic ratio. Metabolic reprogramming through inositol pyrophosphates is an evolutionary conserved mechanism that is also preserved in mammalian systems.

Influence of inositol pyrophosphates on cellular energy dynamics.

Avec ses liaisons phosphate haute &#xE9;nergie, l&#x26;#39;ad&#xE9;nosine triphosphate (ATP) est le vecteur d&#x26;#39;&#xE9;nergie principale intracellulaire. Il fonctionne &#xE9;galement dans la plupart des voies de signalisation, en tant que donneur de phosphate ou d&#x26;#39;un pr&#xE9;curseur pour l&#x26;#39;ad&#xE9;nosine monophosphate cyclique. Nous montrons ici que les pyrophosphates inositol participer au contr&#xF4;le de la concentration intracellulaire d&#x26;#39;ATP. Les levures d&#xE9;pourvues de pyrophosphates inositol ont dysfonctionnel mitochondries, mais, paradoxalement, contiennent quatre fois plus &#xE0; cause de l&#x26;#39;ATP augmentation de la glycolyse. Nous d&#xE9;montrons que les pyrophosphates inositol contr&#xF4;ler l&#x26;#39;activit&#xE9; de l&#x26;#39;GCR1 majeure de transcription glycolytique facteur. Ainsi, les pyrophosphates inositol r&#xE9;guler la concentration en ATP en modifiant le rapport m&#xE9;tabolique glycolytique / mitochondriale. M&#xE9;tabolique reprogrammation par pyrophosphates inositol est un m&#xE9;canisme &#xE9;volutif conserv&#xE9; qui est &#xE9;galement conserv&#xE9;e dans les syst&#xE8;mes mammaliens.

Influence de pyrophosphates inositol sur Cellular Dynamics &#xE9;nergie

Mit seinen energiereichen Phosphat-Anleihen ist Adenosintriphosphat (ATP) die wichtigste intrazellul&auml;re Energietr&auml;ger. Es funktioniert auch in den meisten Signalwege, als ein Phosphat-Spender oder ein Vorl&auml;ufer f&uuml;r zyklisches Adenosinmonophosphat. Hier zeigen wir, dass sich die Kontrolle der intrazellul&auml;re ATP-Konzentration Inosit Pyrophosphates an. Hefen Inosit Pyrophosphates haben gest&ouml;rte Mitochondrien, paradoxerweise allerdings vier Mal so viel ATP wegen erh&ouml;hter Glykolyse. Wir zeigen, dass Inosit Pyrophosphates die Aktivit&auml;t des gro&szlig;en glykolytischen Transkriptionsfaktors GCR1 zu steuern. So Regeln Inosit Pyrophosphates ATP-Konzentration durch &Auml;ndern des glykolytischen/mitochondriale metabolischen Verh&auml;ltnis. Metabolische Neuprogrammierung durch Inosit Pyrophosphates ist ein evolution&auml;r konservierte Mechanismus, der auch im S&auml;ugetier-Systeme beibehalten wird.

Einfluss der Inosit Pyrophosphates auf zellul&auml;re Energie Dynamik.

Con i suoi legami fosfato ad alta energia, l&#39;adenosina trifosfato (ATP) &egrave; il vettore principale di energia intracellulare. Funziona anche nelle vie pi&ugrave; segnalazione, come un donatore di fosfato o un precursore per l&#39;adenosina monofosfato ciclico. Mostriamo qui che pirofosfati inositolo partecipano al controllo della concentrazione intracellulare di ATP. Lieviti privo di pirofosfati inositolo hanno mitocondri disfunzionali ma, paradossalmente, contengono quattro volte pi&ugrave; ATP a causa della maggiore glicolisi. Dimostriamo che pirofosfati inositolo controllano l&#39;attivit&agrave; del fattore di trascrizione glicolitico principali GCR1. Cos&igrave;, pirofosfati inositolo regolano la concentrazione di ATP alterando il rapporto metabolico glicolitico/mitocondriale. Riprogrammazione metabolica attraverso Pirofosfati di inositolo &egrave; un meccanismo evolutivo conservato che &egrave; conservato anche nei sistemi dei mammiferi.

Influenza di pirofosfati inositolo sulle dinamiche di energia cellulare.

&#x305D;&#x306E;&#x9AD8;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&#x3067;&#x3001;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;ATP&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x62C5;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x4F9B;&#x4E0E;&#x4F53;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x74B0;&#x72B6;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E00;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;ATP&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9175;&#x6BCD;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5168;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x9006;&#x8AAC;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;ATP&#x306A;&#x3069;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x89E3;&#x7CD6;&#x306E;4&#x56DE;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x304C;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7CD6;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;GCR1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;/&#x7CD6;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7387;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;ATP&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x518D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306B;&#x3082;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

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Zsolt Szijgyarto

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