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Organotypic Collagen I Assay: A Malleable Platform to Assess Cell Behaviour in a 3-Dimensional Context

Cell migration is fundamental to many aspects of biology, including development, wound healing, the cellular responses of the immune system, and ...

University of Glasgow

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The self-assembly of semiconductor quantum dots has opened up new opportunities in photonics. Quantum dots are usually described as 'artificial atoms', because electron and hole confinement gives rise to discrete energy levels. This picture can be justified from the shell structure observed as a quantum dot is filled either with excitons (bound electron-hole pairs) or with electrons. The discrete energy levels have been most spectacularly exploited in single photon sources that use a single quantum dot as emitter. At low temperatures, the artificial atom picture is strengthened by the long coherence times of excitons in quantum dots, motivating the application of quantum dots in quantum optics and quantum information processing. In this context, excitons in quantum dots have already been manipulated coherently. We show here that quantum dots can also possess electronic states that go far beyond the artificial atom model. These states are a coherent hybridization of localized quantum dot states and extended continuum states: they have no analogue in atomic physics. The states are generated by the emission of a photon from a quantum dot. We show how a new version of the Anderson model that describes interactions between localized and extended states can account for the observed hybridization.

Hybridization of electronic states in quantum dots through photon emission.

L&#39;auto-assemblage de quantiques semi-conducteurs points a ouvert de nouvelles perspectives en photonique. Points quantiques sont g&eacute;n&eacute;ralement d&eacute;crits comme &laquo; des atomes artificiels &raquo;, parce que le confinement des &eacute;lectrons et des trous donne lieu &agrave; des niveaux d&#39;&eacute;nergie discrets. Cette image peut &ecirc;tre justifi&eacute;e de la structure de la couche observ&eacute;e comme un point quantique est rempli avec les excitons (paires &eacute;lectron-trou li&eacute;) ou avec des &eacute;lectrons. Les niveaux d&#39;&eacute;nergie discrets ont &eacute;t&eacute; p&ecirc;ch&eacute;s plus spectaculairement dans des sources de photons simples qui utilisent un point quantique unique comme &eacute;metteur. &Agrave; basse temp&eacute;rature, l&#39;image de l&#39;atome artificiel est renforc&eacute;e par les temps longs de la coh&eacute;rence des excitons dans les bo&icirc;tes quantiques, qui ont motiv&eacute; l&#39;application des points quantiques en optique quantique et traitement de l&#39;information quantique. Dans ce contexte, excitons dans les bo&icirc;tes quantiques ont d&eacute;j&agrave; &eacute;t&eacute; manipul&eacute;s avec coh&eacute;rence. Nous montrons ici que les points quantiques peuvent poss&egrave;dent des &Eacute;tats &eacute;lectroniques qui vont bien au-del&agrave; du mod&egrave;le de l&#39;atome artificiel. Ces &Eacute;tats sont une hybridation coh&eacute;rente des Etats point quantique localis&eacute;e et continuum &eacute;tendu : ils n&#39;ont pas d&#39;analogue en physique atomique. Les &Eacute;tats sont g&eacute;n&eacute;r&eacute;s par l&#39;&eacute;mission d&#39;un photon par un point quantique. Nous montrons comment une nouvelle version du mod&egrave;le Anderson qui d&eacute;crit les interactions entre &Eacute;tats localis&eacute;s et prolong&eacute;s peut expliquer l&#39;hybridation observ&eacute;e.

Hybridation des &Eacute;tats &eacute;lectroniques dans les bo&icirc;tes quantiques par &eacute;mission de photon.

Die Hybridisierung von elektronischen Zust&#xE4;nden in Quantenpunkten durch Photonenemission.

L&#39;auto-assemblaggio di quantum semiconductor dots ha aperto nuove opportunit&agrave; nella fotonica. Punti quantici sono solitamente descritto come &#39;atomi artificiali&#39;, perch&eacute; il confinamento degli elettroni e foro d&agrave; luogo a livelli discreti di energia. Questa immagine pu&ograve; essere giustificata dalla struttura del guscio osservata come un quantum dot viene riempito con eccitoni (coppie elettrone-lacuna associato) o con elettroni. I livelli di energia discreti sono stati sfruttati pi&ugrave; spettacolare nelle fonti di singolo fotone che utilizzano un singolo quantum dot come emettitore. A basse temperature, l&#39;immagine dell&#39;atomo artificiale &egrave; rinforzato da tempi lunghi coerenza di eccitoni in punti quantici, motivando l&#39;applicazione di punti quantici in quantum optics and quantum information processing. In questo contesto, eccitoni in punti quantici sono gi&agrave; stati manipolati coerentemente. Mostriamo qui che punti quantici possono anche possedere stati elettronici che vanno ben oltre il modello dell&#39;atomo artificiale. Questi Stati sono una coerente ibridazione di localizzata quantum dot Stati e continuum esteso: non hanno nessun analogico in fisica atomica. Gli Stati sono generati dall&#39;emissione di un fotone da un quantum dot. Vi mostriamo come una nuova versione del modello di Anderson che descrive le interazioni tra stati estesi e localizzati pu&ograve; conto per l&#39;ibridazione osservato.

Ibridazione degli Stati elettronici in punti quantici attraverso emissione di fotoni.

&#x81EA;&#x5DF1;&#x96C6;&#x5408;&#x306E;&#x534A;&#x5C0E;&#x4F53;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x958B;&#x3044;&#x305F;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30CB;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3002;&#x96FB;&#x5B50;&#x3068;&#x6B63;&#x5B54;&#x306E;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x304C;&#x96E2;&#x6563;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x4E0A;&#x6607;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x901A;&#x5E38; &#39;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x539F;&#x5B50;&#39; &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D75;&#x306F;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x52B1;&#x8D77;&#x5B50; (&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x96FB;&#x5B50;&#x6B63;&#x5B54;&#x5BFE;) &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x96FB;&#x5B50;&#x306B;&#x6E80;&#x3061;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30A7;&#x30EB;&#x69CB;&#x9020;&#x304B;&#x3089;&#x6B63;&#x5F53;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x98DB;&#x3073;&#x98DB;&#x3073;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x6E96;&#x4F4D;&#x6700;&#x3082;&#x83EF;&#x3005;&#x3057;&#x304F;&#x30A8;&#x30DF;&#x30C3;&#x30BF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5358;&#x4E00;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5358;&#x4E00;&#x5149;&#x5B50;&#x6E90;&#x3067;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4F4E;&#x6E29;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x539F;&#x5B50;&#x753B;&#x50CF;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x91CF;&#x5B50;&#x5149;&#x5B66;&#x3068;&#x91CF;&#x5B50;&#x60C5;&#x5831;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x3084;&#x308B;&#x6C17;&#x306B;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x52B1;&#x8D77;&#x5B50;&#x306E;&#x9577;&#x3044;&#x30B3;&#x30D2;&#x30FC;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B9;&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x52B1;&#x8D77;&#x5B50;&#x306F;&#x3059;&#x3067;&#x306B;&#x30B3;&#x30D2;&#x30FC;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3082;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x539F;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;&#x9060;&#x304F;&#x884C;&#x304F;&#x96FB;&#x5B50;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306F;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x62E1;&#x5F35;&#x9023;&#x7D9A;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x30B3;&#x30D2;&#x30FC;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x4EA4;&#x914D;&#x3067;&#x3059;&#xFF1A; &#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x539F;&#x5B50;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x3067;&#x306F;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x72B6;&#x614B;&#x306F;&#x3001;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5149;&#x5B50;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x89B3;&#x6E2C;&#x306E;&#x4EA4;&#x914D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068;&#x62E1;&#x5F35;&#x72B6;&#x614B;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BD;&#x30F3; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;.

&#x5149;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x96FB;&#x5B50;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x4EA4;&#x914D;&#x3002;

&#xC790;&#xAE30; &#xC870;&#xB9BD;&#xC758; &#xBC18;&#xB3C4;&#xCCB4; &#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xD3EC;&#xD1A0;&#xB2C9;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC624;&#xD508; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xC804;&#xC790; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xBA4D; &#xAC10; &#xAE08; &#xC774;&#xC0B0; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC900;&#xC704;&#xB97C; &#xC0DD;&#xACA8;&#xB098;&#xAC8C; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#39;&#xC778;&#xACF5; &#xC6D0;&#xC790;&#39;&#xB85C; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xADF8;&#xB9BC;&#xC740; excitons (&#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xC804;&#xC790; &#xAD6C;&#xBA4D; &#xC30D;) &#xB610;&#xB294; &#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xC591;&#xC790; &#xB3C4;&#xD2B8; &#xAC00;&#xB4DD; &#xAD00;&#xCC30; &#xC178; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xB2F9;&#xD654; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xB808;&#xBCA8; &#xBBF8;&#xD130;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC591;&#xC790; &#xB3C4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAD11;&#xC790; &#xC18C;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD654;&#xB824;&#xD558; &#xAC8C; &#xC545;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB0AE;&#xC740; &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xACF5; &#xC6D0;&#xC790; &#xADF8;&#xB9BC; &#xC591;&#xC790; &#xC810;, &#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xC591;&#xC790; &#xAD11;&#xD559; &#xBC0F; &#xC591;&#xC790; &#xC815;&#xBCF4; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9;&#xC744; &#xB3D9;&#xAE30; &#xBD80;&#xC5EC;&#xC5D0; excitons&#xC758; &#xAE34; &#xC77C;&#xAD00;&#xC131; &#xBC30; &#xAC15;&#xD654; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; excitons &#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xB4E4;&#xC5D0;&#xB294; &#xC774;&#xBBF8; &#xC870;&#xC791; coherently. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xB4E4; &#xB610;&#xD55C; &#xC778;&#xACF5; &#xC6D0;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB118;&#xC5B4; &#xC804;&#xC790; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xBC0F; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; &#xC5F0;&#xC18D;&#xCCB4; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; &#xAD50; &#xC7A1;: &#xC6D0;&#xC790; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xBB34; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; &#xB4E4;&#xC740;. &#xBBF8;&#xAD6D; &#xC591;&#xC790; &#xB3C4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD11;&#xC790;&#xC758; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xBC0F; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC564;&#xB354;&#xC2A8; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC84;&#xC804; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xAD50; &#xC7A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC815; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xAD11;&#xC790; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xC790; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC911; &#xAD50; &#xC7A1;.

El autoensamblaje de cu&aacute;nticos semiconductores puntos ha abierto nuevas oportunidades en fot&oacute;nica. Puntos cu&aacute;nticos se describen generalmente como &#39;&aacute;tomos artificiales&#39;, porque electr&oacute;n y agujero encierro da lugar a niveles discretos de energ&iacute;a. Este cuadro puede justificarse de la estructura de la c&aacute;scara observada como un punto cu&aacute;ntico se llena con excitones (pares electr&oacute;n-hueco encuadernado) o con electrones. Los niveles de energ&iacute;a discretos han explotado m&aacute;s espectacularmente en fuentes de fotones individuales que utilizan un punto cu&aacute;ntico solo como emisor. A bajas temperaturas, la imagen del &aacute;tomo artificial es consolidada por los tiempos largos de la coherencia de excitones en puntos cu&aacute;nticos, motivar la aplicaci&oacute;n de puntos cu&aacute;nticos en &oacute;ptica cu&aacute;ntica y procesamiento de la informaci&oacute;n cu&aacute;ntica. En este contexto, excitones en puntos cu&aacute;nticos han ya sido manipulados coherente. Aqu&iacute; mostramos que puntos cu&aacute;nticos tambi&eacute;n pueden poseer Estados electr&oacute;nicos que van mucho m&aacute;s all&aacute; del modelo del &aacute;tomo artificial. Estos Estados son un hibridaci&oacute;n coherente de quantum localizada punto Estados y continuo extendida: no tienen anal&oacute;gico en f&iacute;sica at&oacute;mica. Los Estados son generados por la emisi&oacute;n de un fot&oacute;n de un punto cu&aacute;ntico. Mostramos c&oacute;mo puede suponer una nueva versi&oacute;n del modelo Anderson que describe las interacciones entre Estados localizados y extendidos la hibridaci&oacute;n observada.

Hibridaci&oacute;n de Estados electr&oacute;nicos en puntos cu&aacute;nticos a trav&eacute;s de la emisi&oacute;n del fot&oacute;n.

&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x540C;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C; F&ouml;rster &#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x6700;&#x5C0F;&#x5149;&#x8C31;&#x76F8;&#x58F0;&#x4E0E;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x4EC0;&#x4E48;&#x6211;&#x4EEC;&#x6240;&#x77E5;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x97F3;&#x54C1;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x5149;&#x8C31;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6210;&#x50CF;&#x6709;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x97F3;&#x54C1;&#x5BF9;&#x548C;&#x5149;&#x8C31;&#x7684;&#x76F8;&#x58F0;&#x62DB;&#x81F4;&#x5728; windows &#x4E2D;&#x56DB;&#x4E2A;&#x5149;&#x8C31;&#x6D4B;&#x91CF;&#x65F6;&#x9002;&#x5F53;&#x660E;&#x4EAE;&#x53D7;&#x4F17;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x53D7;&#x5230;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x4E0E;&#x6210;&#x50CF;&#x5149;&#x8C31;&#x8BA1;&#x91CF;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF; (FLIM) &#x8981;&#x6C42;&#x6350;&#x52A9;&#x8367;&#x5149;&#x53EA;&#x6D4B;&#x91CF;&#xFF0C;&#x6392;&#x653E;&#x7684;&#x627F;&#x5151;&#x4EBA;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED3;&#x5408; ECFP/&#x91D1;&#x661F;&#x5BF9;&#x5149;&#x8C31;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6210;&#x50CF;&#x80F6;&#x7247;&#x97F3;&#x54C1;&#x7684;&#x7EA2;&#x79FB;&#x7684;&#x65B0;&#x578B; TagRFP/mPlum &#x97F3;&#x54C1;&#x5BF9;&#x6211;&#x4EEC;&#x56E0;&#x800C;&#x5F97;&#x4EE5;&#x6700;&#x5927;&#x9650;&#x5EA6;&#x5730;&#x4E4B;&#x95F4;&#x540C;&#x65F6;&#x514B;&#x670D;&#x4F4E;&#x91CF;&#x5B50;&#x4EA7;&#x91CF;&#x7684;&#x8FDC;&#x7EA2;&#x8272;&#x627F;&#x5151;&#x4EBA; mPlum &#x6211;&#x4EEC;&#x9009;&#x62E9;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BFB;&#x51FA; TagRFP/mPlum &#x5206;&#x5B50;&#x95F4;&#x97F3;&#x54C1;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x6C47;&#x62A5;&#x540E;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;&#x548C; ECFP/&#x91D1;&#x661F; Cameleon &#x70E6;&#x607C;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x76D1;&#x6D4B;&#x9499;&#x77AC;&#x53D8;&#x7684;&#x540C;&#x4E00;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x7684; Ras GTP ase &#x6D3B;&#x5316;&#x5C0F;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x3002;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x5149;&#x8C31;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6210;&#x50CF; ECFP/&#x7EF4;&#x7EB3;&#x65AF;&#x4E0E;&#x9AD8;&#x901F;&#x80F6;&#x7247;&#x97F3;&#x54C1;&#x7684; TagRFP/mPlum &#x56E0;&#x6B64;&#x53EF;&#x4EE5;&#x589E;&#x52A0;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x5149;&#x8C31;&#x5E26;&#x5BBD;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x591A;&#x4E2A;&#x97F3;&#x54C1;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x7684;&#x9C81;&#x68D2;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x80F6;&#x7247;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x5E73;&#x7B49; stoichiometries &#x7684;&#x4F9B;&#x3001; &#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x62A5;&#x544A;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x97F3;&#x54C1;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;

&#x591A;&#x8DEF;&#x590D;&#x7528;&#x7684;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF0C;&#x56FE;&#x50CF;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;

We report what to our knowledge is a novel approach for simultaneous imaging of two different FÃ¶rster resonance energy transfer (FRET) sensors in the same cell with minimal spectral cross talk. Previous methods based on spectral ratiometric imaging of the two FRET sensors have been limited by the availability of suitably bright acceptors for the second FRET pair and the spectral cross talk incurred when measuring in four spectral windows. In contrast to spectral ratiometric imaging, fluorescence lifetime imaging (FLIM) requires measurement of the donor fluorescence only and is independent of emission from the acceptor. By combining FLIM-FRET of the novel red-shifted TagRFP/mPlum FRET pair with spectral ratiometric imaging of an ECFP/Venus pair we were thus able to maximize the spectral separation between our chosen fluorophores while at the same time overcoming the low quantum yield of the far red acceptor mPlum. Using this technique, we could read out a TagRFP/mPlum intermolecular FRET sensor for reporting on small Ras GTP-ase activation in live cells after epidermal growth factor stimulation and an ECFP/Venus Cameleon FRET sensor for monitoring calcium transients within the same cells. The combination of spectral ratiometric imaging of ECFP/Venus and high-speed FLIM-FRET of TagRFP/mPlum can thus increase the spectral bandwidth available and provide robust imaging of multiple FRET sensors within the same cell. Furthermore, since FLIM does not require equal stoichiometries of donor and acceptor, this approach can be used to report on both unimolecular FRET biosensors and protein-protein interactions with the same cell.

Multiplexed FRET to image multiple signaling events in live cells.

Nous rapportons ce qui &agrave; notre connaissance est une nouvelle approche pour l&#39;imagerie simultan&eacute;e de diff&eacute;rents deux capteurs r&eacute;sonance F&ouml;rster &eacute;nergie transfert (FRET) dans la m&ecirc;me cellule avec minime spectrale de la diaphonie. Les m&eacute;thodes pr&eacute;c&eacute;dentes bas&eacute;es sur l&#39;imagerie spectrale ratiom&eacute;trique des deux capteurs frette ont &eacute;t&eacute; limit&eacute;s par la disponibilit&eacute; des accepteurs suffisamment lumineuses pour la deuxi&egrave;me paire FRET et de la diaphonie spectrale encourus lors de la mesure &agrave; quatre fen&ecirc;tres spectrales. Contrairement &agrave; l&#39;imagerie spectrale ratiom&eacute;trique, fluorescence lifetime imaging (FLIM) requiert la mesure de la fluorescence du donneur seulement et est ind&eacute;pendante de l&#39;&eacute;mission de l&#39;accepteur. En combinant le FLIM-frette de la paire de TagRFP/mPlum frette roman rouge-d&eacute;cal&eacute; avec l&#39;imagerie spectrale ratiom&eacute;trique d&#39;une paire ECFP/Venus, nous avons ainsi pu maximiser la s&eacute;paration spectrale entre nos fluorophores choisis &agrave; la fois surmonter le rendement quantique faible de la mPlum de l&#39;accepteur rouge sombre. En utilisant cette technique, nous pourrions a donn&eacute; lecture d&#39;un capteur de frette intermol&eacute;culaire TagRFP/mPlum pour avoir signal&eacute; lors de l&#39;activation de Ras GTP-ase petite dans des cellules vivantes apr&egrave;s stimulation du facteur de croissance &eacute;pidermique et un capteur ECFP/Venus Cameleon vous inqui&eacute;tez pas pour la surveillance des transitoires de calcium dans les cellules m&ecirc;mes. La combinaison de l&#39;imagerie spectrale ratiom&eacute;trique de ECFP/V&eacute;nus et FLIM-FRET &agrave; grande vitesse de TagRFP/mPlum peut donc augmenter la largeur de bande spectrale disponible et fournir une imagerie robuste de multiples capteurs FRET dans la m&ecirc;me cellule. En outre, puisque FLIM n&#39;exige pas les stoechiom&eacute;tries &eacute;gales du donneur et accepteur, cette approche permet de signaler sur unimol&eacute;culaire frette biocapteurs et interactions de prot&eacute;ine-prot&eacute;ine avec la m&ecirc;me cellule.

Multiplex&eacute; frette &agrave; l&#39;image de plusieurs &eacute;v&eacute;nements de signalisation dans des cellules vivantes.

Wir berichten, was wir wissen ist ein neuartiger Ansatz f&uuml;r gleichzeitige Darstellung von zwei verschiedenen F&ouml;rster Resonanz Energie Transfer (FRET) Sensoren in der gleichen Zelle mit minimalen spektrale Cross-Talk. Vorherige Methoden basierend auf spektrale ratiometrisch Bildgebung der zwei FRET-Sensoren waren durch die Verf&uuml;gbarkeit entsprechend hell Acceptors f&uuml;r das zweite Paar der Bund und die spektrale Cross-Talk entstandenen Messungen im vier spektralen Fenster begrenzt. Im Gegensatz zur spektralen ratiometrisch Bildgebung, Fluoreszenz-Lebensdauer-imaging (FLIM) Messung der Fluoreszenz Spender nur erfordert und ist unabh&auml;ngig von Emissionen aus der Akzeptor. Durch die Kombination von FLIM-Bund des neuartigen Rot-verschoben TagRFP/mPlum FRET Paares mit spektralen ratiometrisch Bildgebung eines Paars aus ECFP/Venus konnten wir so die spektrale Trennung zwischen unseren gew&auml;hlten Fluorophore und gleichzeitig die &Uuml;berwindung der niedrigen Quantenausbeute von weit rot Akzeptor-mPlum zu maximieren. Mit diesem Verfahren konnten wir einen TagRFP/mPlum intermolekulare FRET-Sensor f&uuml;r die Berichterstattung &uuml;ber kleine Ras GTP-ase-Aktivierung in lebenden Zellen nach epidermalen Wachstumsfaktor-Stimulation und eine ECFP/Venus Cameleon FRET-Sensor zur &Uuml;berwachung von Kalzium Transienten in denselben Zellen auslesen. Die Kombination der spektralen ratiometrisch Bildgebung ECFP/Venus und Hochgeschwindigkeits-FLIM-Bund der TagRFP/mPlum kann somit erh&ouml;hen die spektrale Bandbreite zur Verf&uuml;gung und bieten robuste Bildgebung von mehreren FRET-Sensoren in der gleichen Zelle. Dar&uuml;ber hinaus da FLIM gleiche Zusammensetzungen von Spender und Empf&auml;nger nicht erforderlich ist, kann dieser Ansatz verwendet werden Bericht &uuml;ber UNIMOLEKULARE FRET Biosensoren und Protein-Protein Interaktionen mit der gleichen Zelle.

Multiplex FRET zum Bild mehrere Signalling Ereignisse in lebenden Zellen.

Riportiamo ci&ograve; che a nostra conoscenza &egrave; un approccio innovativo per l&#39;acquisizione simultanea di due differenti F&ouml;rster risonanza energy transfer (FRET) sensori nella stessa cella con minima spettrale cross talk. Precedenti metodi basati sull&#39;imaging raziometrici spettrale dei due sensori FRET sono stati limitati dalla disponibilit&agrave; di accettori opportunamente brillante per la seconda coppia FRET e lo spettrale cross talk sostenute durante la misurazione in quattro finestre spettrali. Contrariamente a imaging spettrale raziometrici, vita di fluorescenza (FLIM) di imaging richiede la misurazione della fluorescenza donatore solo ed indipendente delle emissioni l&#39;accettore. Combinando FLIM-FRET della coppia di romanzo rosso-spostato TagRFP/mPlum FRET con imaging raziometrici spettrale di una coppia di ECFP/Venus cos&igrave; siamo stati in grado di massimizzare la separazione spettrale tra nostri fluorofori scelti mentre allo stesso tempo superare il rendimento quantico basso dell&#39;accettore lontano rosso mPlum. Utilizzando questa tecnica, potessimo leggere fuori un sensore FRET intermolecolare TagRFP/mPlum per la segnalazione su piccola attivazione del Ras GTP-ase in cellule vive dopo stimolazione del fattore di crescita epidermico e un sensore per il monitoraggio di transitori di calcio all&#39;interno delle cellule stesse ECFP/Venus Cameleon FRET. La combinazione di imaging spettrale raziometrici ECFP/Venus e FLIM-FRET ad alta velocit&agrave; di TagRFP/mPlum pu&ograve; cos&igrave; aumentare la larghezza di banda spettrale disponibile e fornire robusto imaging of multiple FRET sensori all&#39;interno della cella stessa. Inoltre, poich&eacute; FLIM non richiedono uguale stoichiometries del donatore e accettore, questo approccio pu&ograve; essere utilizzato per segnalare su entrambi unimolecolare FRET biosensori e interazioni della proteina-proteina con la stessa cella.

Multiplex FRET a pi&ugrave; eventi di segnalazione in cellule vive di immagine.

&#x6211;&#x3005; 2 &#x3064;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; &#x30FB;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x4F1D;&#x9054; (FRET) &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x6700;&#x5C0F;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30AF;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x30BB;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x4F55;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x30EC;&#x30B7;&#x30AA; &#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F; 2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8; &#x30DA;&#x30A2;&#x3068; 4 &#x3064;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; windows &#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x767A;&#x751F;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9; &#x30FB; &#x30C8;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x9069;&#x5F53;&#x306B;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x306E;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x30EC;&#x30B7;&#x30AA; &#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; (FLIM) &#x306F;&#x306E;&#x307F;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x653E;&#x5C04;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;FLIM-&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B7;&#x30D5;&#x30C8; TagRFP/mPlum &#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8; &#x30DA;&#x30A2;&#x306E;&#x751F;&#x3055;/&#x91D1;&#x661F;&#x30DA;&#x30A2;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x30EC;&#x30B7;&#x30AA; &#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x9078;&#x3070;&#x308C;&#x305F; fluorophores &#x9060;&#x8D64;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF; mPlum &#x306E;&#x4F4E;&#x91CF;&#x5B50;&#x53CE;&#x7387;&#x3092;&#x514B;&#x670D;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x9593;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x5206;&#x96E2;&#x3092;&#x6700;&#x5927;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;TagRFP/mPlum &#x5C0F; Ras GTP ase &#x6D3B;&#x6027;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x751F;&#x3055;/&#x91D1;&#x661F; Cameleon &#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x5F8C;&#x5831;&#x544A;&#x7528;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3092;&#x8AAD;&#x307F;&#x53D6;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5229;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x5E2F;&#x57DF;&#x5E45;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30BB;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x3055;/&#x30F4;&#x30A3;&#x30FC;&#x30CA;&#x30B9;&#x3068; TagRFP/mPlum &#x306E;&#x9AD8;&#x901F; FLIM &#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x30EC;&#x30B7;&#x30AA; &#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;FLIM &#x306F;&#x7B49;&#x3057;&#x3044; stoichiometries &#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x5358;&#x5206;&#x5B50; FRET &#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x5831;&#x544A;&#x66F8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x591A;&#x91CD;&#x306E;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC744; &#xC774;&#xB780; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; F&ouml;rster &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; (&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;) &#xC13C;&#xC11C;&#xC758; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xD1A0;&#xD06C;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC140;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; FRET &#xC13C;&#xC11C;&#xC758; &#xC601;&#xC0C1; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xBE44;&#xC728; &#xAE30;&#xC900;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xC708;&#xB3C4;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815;&#xD560; &#xB54C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD55C; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xD1A0;&#xD06C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC30D; &#xC801;&#xB2F9; &#xD558; &#xAC8C; &#xBC1D;&#xC740; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xBE44;&#xC728; &#xAE30;&#xC900; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; (FLIM) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xD615;&#xAD11;&#xB9CC;&#xC758; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; &#xC218;&#xB77D;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. ECFP/&#xAE08;&#xC131; &#xC30D;&#xC758; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xBE44;&#xC728; &#xAE30;&#xC900; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; FLIM-&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC18C;&#xC124; &#xB808;&#xB4DC; &#xC774;&#xB3D9; TagRFP/mPlum &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC30D; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xBA40;&#xB9AC; &#xBE68;&#xAC04; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; Mplum&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xC591;&#xC790; &#xC218;&#xC728;&#xC744; &#xADF9;&#xBCF5; &#xD558; &#xACE0; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; fluorophores &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xCD5C;&#xB300;&#xD654; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC740; &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC790;&#xADF9;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xACFC;&#xB3C4; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; ECFP/&#xAE08;&#xC131; Cameleon &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC13C;&#xC11C; &#xD6C4; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; Ras GTP-ase &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; TagRFP/mPlum intermolecular FRET &#xC13C;&#xC11C; &#xBC16;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77D;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. ECFP/&#xBE44;&#xB108;&#xC2A4;&#xC640; TagRFP/Mplum&#xC758; &#xACE0;&#xC18D; FLIM &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;&#xC758; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xBE44;&#xC728; &#xAE30;&#xC900; &#xC601;&#xC0C1;&#xC758; &#xC870;&#xD569; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xB300;&#xC5ED;&#xD3ED;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70;, &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC140; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; FRET &#xC13C;&#xC11C;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC601;&#xC0C1; &#xC81C;&#xACF5;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC774;&#xD6C4; FLIM &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC218;&#xB77D;&#xC790;&#xC758; &#xB3D9;&#xB4F1;&#xD55C; stoichiometries &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;,&#xC774; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC740; unimolecular &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; biosensors&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xB2E4;&#xC911;&#xD654; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;.

Divulgamos lo que a nuestro conocimiento es un nuevo enfoque para la proyecci&oacute;n de imagen simult&aacute;nea de dos diferentes F&ouml;rster Resonancia energ&iacute;a transferencia (FRET) sensores en la misma celda con m&iacute;nima espectral diafon&iacute;a. Anteriores m&eacute;todos basados en la proyecci&oacute;n de imagen espectral radiom&eacute;trica de los sensores de traste dos han sido limitados por la disponibilidad de aceptadores convenientemente brillantes para el segundo par de traste y la diafon&iacute;a espectral incurridos al medir en cuatro ventanas espectrales. En contraste con la proyecci&oacute;n de imagen espectral radiom&eacute;trica, vida de fluorescencia im&aacute;genes (FLIM) requiere la medici&oacute;n de la fluorescencia de donantes s&oacute;lo y es independiente de la emisi&oacute;n del aceptador. Combinando FLIM-FRET del novela par TagRFP/mPlum traste desplazada en rojo con la proyecci&oacute;n de imagen radiom&eacute;trica espectral de un par ECFP/Venus as&iacute; fuimos capaces de maximizar la separaci&oacute;n espectral entre nuestros fluor&oacute;foros solicitadas al mismo tiempo superar el rendimiento cu&aacute;ntico bajo de la mPlum aceptador mucho rojo. Usando esta t&eacute;cnica, nos podr&iacute;amos leer un sensor de traste intermolecular de TagRFP/mPlum para informar sobre la activaci&oacute;n de Ras GTP-ase peque&ntilde;o en c&eacute;lulas vivas despu&eacute;s de estimulaci&oacute;n de factor de crecimiento epid&eacute;rmico y un sensor de ECFP/Venus Cameleon traste para monitoreo de oscilaciones de calcio dentro de las c&eacute;lulas de la mismas. La combinaci&oacute;n de la proyecci&oacute;n de imagen espectral radiom&eacute;trica de ECFP/Venus y FLIM-FRET alta velocidad de TagRFP/mPlum as&iacute; puede aumentar el ancho de banda espectral disponible y proporcionar im&aacute;genes robusta de m&uacute;ltiples sensores de traste dentro de la misma c&eacute;lula. Adem&aacute;s, puesto que el FLIM no requiere stoichiometries iguales del donante y del receptor, este enfoque puede utilizarse para informar sobre tanto unimolecular traste biosensores y las interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na con la misma c&eacute;lula.

Multiplexados FRET imagen de m&uacute;ltiples eventos de se&ntilde;alizaci&oacute;n en c&eacute;lulas vivas.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#x548C;&#x52A0;&#x901F;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x5207;&#x7247;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF; (FLIM) &#x591A;&#x4E95;&#x677F;&#x8BFB;&#x5361;&#x5668;&#x9AD8;&#x5185;&#x5BB9;&#x5206;&#x6790; &#xFF08;HCA&#xFF09;&#x3002;&#x8BE5;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5229;&#x7528; Nipkow &#x5149;&#x76D8;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x89C6;&#x56FE;&#x5B57;&#x6BB5;&#x4E2D;&#x6267;&#x884C;&#x65E0;&#x76D1;&#x7763;&#x7684;&#x7279;&#x5730;&#x4E0E;&#x81EA;&#x52A8;&#x5BF9;&#x7126;&#x3001; &#x81EA;&#x52A8;&#x91C7;&#x96C6;&#x53C2;&#x6570;&#x7684;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x548C;&#x81EA;&#x52A8;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x5176;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x6765;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x67D3;&#x6599;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x3001; &#x56FA;&#x5B9A;&#x548C;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x80F6;&#x7247;&#x97F3;&#x54C1;&#x3002;

&#x9AD8;&#x901F;&#x65E0;&#x76D1;&#x7763;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x7126;&#x591A;&#x4E95;&#x677F;&#x9605;&#x8BFB;&#x5668;&#x4E3A;&#x9AD8;&#x7684;&#x5185;&#x5BB9;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

We report an automated optically sectioning fluorescence lifetime imaging (FLIM) multiwell plate reader for high content analysis (HCA) in drug discovery and accelerated research in cell biology. The system utilizes a Nipkow disc confocal microscope and performs unsupervised FLIM with autofocus, automatic setting of acquisition parameters and automated localisation of cells in the field of view. We demonstrate its applications to test dye solutions, fixed and live cells and FLIM-FRET.

High speed unsupervised fluorescence lifetime imaging confocal multiwell plate reader for high content analysis.

Nous rapportons un automatis&eacute; optiquement sectionnement fluorescence lifetime imaging lecteur de plaque multipuits (FLIM) pour l&#39;analyse de contenu &eacute;lev&eacute; (HCA) dans la d&eacute;couverte et acc&eacute;l&eacute;rer la recherche en biologie cellulaire. Le syst&egrave;me utilise un microscope confocal de disque de Nipkow et ex&eacute;cute sans surveillance FLIM avec autofocus, r&eacute;glage automatique des param&egrave;tres d&#39;acquisition et de localisation automatis&eacute;e des cellules dans le champ de vision. Nous d&eacute;montrer ses demandes visant &agrave; exp&eacute;rimenter des solutions de colorants, fixe et vivre les cellules et FLIM-FRET.

Haute vitesse sans surveillance fluorescence lifetime imaging lecteur de plaque multipuits confocal pour l&#39;analyse de contenu &eacute;lev&eacute;.

Wir berichten &uuml;ber eine automatisierte optisch Schneide-Fluoreszenz-Lebensdauer imaging (FLIM) MULTIWELLPLATTE Reader f&uuml;r high-Content-Analysen (HCA) in Drogeentdeckung und beschleunigten Forschung in Zellbiologie. Das System nutzt ein Nipkow-Scheibe Konfokales Mikroskop und f&uuml;hrt unbeaufsichtigt FLIM mit Autofokus, automatische Einstellung der Erwerb Parameter und automatische Lokalisierung Zellen in das Blickfeld. Wir demonstrieren ihre Anwendungen Farbstoff-L&ouml;sungen testen, festen und lebende Zellen und FLIM-FRET.

High-Speed unbeaufsichtigt Fluoreszenz-Lebensdauer imaging konfokale MULTIWELLPLATTE Reader f&uuml;r hohe Inhaltsanalyse.

Riportiamo una durata di fluorescenza otticamente taglio automatizzato imaging lettore piastra trasportatrici (FLIM) per l&#39;alto contenuto analisi (HCA) nella scoperta della droga e accelerata ricerca in biologia cellulare. Il sistema utilizza un microscopio confocale del disc di Nipkow ed esegue senza supervisione FLIM con messa a fuoco automatica, impostazione automatica dei parametri di acquisizione e localizzazione automatica delle cellule nel campo visivo. Noi dimostrare le sue applicazioni per testare soluzioni di colorante, fisse e vivono le cellule e FLIM-FRET.

Vita di fluorescenza non supervisionato ad alta velocit&agrave; imaging confocale lettore vetrini per analisi del contenuto di alta.

&#x5275;&#x85AC;&#x3068;&#x52A0;&#x901F;&#x7814;&#x7A76;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66; (FLIM) multiwell &#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; &#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x9AD8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x5206;&#x6790; &#xFF08;HCA&#xFF09; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x65AD;&#x9762;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F; Nipkow &#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3067;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AB;&#x30B9;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30A4;&#x30B8;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30FB; &#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x81EA;&#x52D5;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6559;&#x5E2B;&#x306A;&#x3057;&#x306E; FLIM &#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x8272;&#x7D20;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068; FLIM &#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;

&#x9AD8;&#x901F;&#x6559;&#x5E2B;&#x306A;&#x3057;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x5BFF;&#x547D;&#x306F;&#x9AD8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x5206;&#x6790;&#x7528;&#x306E;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x306E; multiwell &#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; &#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC18D;&#xB41C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xB294; &#xC790;&#xB3D9;&#xB41C; &#xAD11;&#xD559; &#xB2E8;&#xBA74;&#xD654; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; (FLIM) multiwell &#xACA9;&#xD310;&#xB36E;&#xAC1C; &#xB9AC;&#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xBD84;&#xC11D; (HCA)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xACFC; Nipkow &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xAE30;&#xC758; &#xD544;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC790;&#xB3D9; &#xCD08;&#xC810;, &#xC218;&#xC9D1; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xC790;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC140;&#xC758; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xB41C; &#xD604;&#xC9C0;&#xD654;&#xC640; &#xC790;&#xC728;&#xB41C; FLIM&#xC744; &#xC218;&#xD589;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB294; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xACE0;&#xC815; &#xBC0F; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xBC0F; FLIM &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;.

&#xACE0;&#xC18D; &#xC790;&#xB3D9;&#xB41C; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xB192;&#xC740; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xBD84;&#xC11D; confocal multiwell &#xACA9;&#xD310;&#xB36E;&#xAC1C; &#xB9AC;&#xB354; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;.

Divulgamos una vida de fluorescencia &oacute;pticamente seccionamiento automatizado lector de pocillos de la placa (FLIM) para el an&aacute;lisis de contenido de alta (HCA) de la proyecci&oacute;n de imagen en el descubrimiento de f&aacute;rmacos y acelerada la investigaci&oacute;n en biolog&iacute;a celular. El sistema utiliza un microscopio confocal de disco de Nipkow y realiza FLIM sin supervisi&oacute;n con enfoque autom&aacute;tico, ajuste autom&aacute;tico de los par&aacute;metros de adquisici&oacute;n y localizaci&oacute;n automatizada de las c&eacute;lulas en el campo de visi&oacute;n. Nosotros demostrar sus aplicaciones para probar soluciones de tinte, fijo y viven las c&eacute;lulas y FLIM-FRET.

Vida de fluorescencia sin supervisi&oacute;n de alta velocidad lector de placas de pocillos confocal para alto contenido de an&aacute;lisis de imagen.

&#x89C2;&#x5BDF;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x5206;&#x5B50;&#x884C;&#x4E3A;&#x671F;&#x95F4;&#x764C;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5165;&#x4FB5;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x6211;&#x4EEC;&#x7406;&#x89E3;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C55;&#x793A; RhoA &#x6D3B;&#x52A8;&#x5728;&#x80F0;&#x817A;&#x764C;&#x7684;&#x6D3B;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x80F6;&#x7247;&#x97F3;&#x54C1; &#xFF08;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;) &#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x9996;&#x6B21;&#x3002;&#x521B;&#x9F20;&#x6807;&#x5728;&#x80F0;&#x817A;&#x5BFC;&#x7BA1;&#x817A;&#x764C; (PDAC) &#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; p53 &#x7684;&#x9A71;&#x52A8; &#xFF08;p53(R172H))&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x5728;&#x524D;&#x7F18; RhoA &#x6D3B;&#x6027;&#x9AD8;&#x79BB;&#x6563;&#x5206;&#x6570;&#x548C;&#x80CC;&#x9762;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x5728;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x6C60;&#x7684;&#x79EF;&#x6781; RhoA &#x6CA1;&#x65E0;&#x521B; p53(fl) &#x6316;&#x7A7A; PDAC &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5173;&#x8054;&#x5176;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5DEE;&#x521B;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; dasatanib&#xFF0C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x4E0A;&#x6838;&#x51C6;&#x7684;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x4FB5;&#x88AD;&#x4EE3;&#x7406;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5904;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x5728;&#x6B64;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BF4;&#x660E;&#x7A7A;&#x95F4;&#x8C03;&#x8282; RhoA &#x529F;&#x80FD;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;Dasatanib &#x6291;&#x5236; RhoA &#x5728; p53(R172H) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x4E24;&#x6781;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x679C;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95; RhoA &#x6D3B;&#x52A8;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x4F53;&#x5185;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x6240;&#x793A; RhoA &#x4E0D;&#x4EC5;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x8FD8;&#x8BE5;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE; RhoA &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5176;&#x5168;&#x7403;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x89C4;&#x4F8B;&#xFF0C;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x63A7;&#x5236;&#x5165;&#x4FB5;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x80F6;&#x7247;&#x70E6;&#x607C;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5728;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E2D;&#x751F;&#x6D3B;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x5206;&#x6790;&#x52A8;&#x6001;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x663E;&#x793A;&#x5982;&#x4F55;&#x79BB;&#x6563;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5206;&#x5B50;&#x6C60;&#x53EF;&#x80FD;&#x5DEE;&#x5F02;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7684;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x4FB5;&#x88AD;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x524D;&#x666F;&#x3002;

&#x7A7A;&#x95F4;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; p53 &#x7684;&#x80F0;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5165;&#x4FB5;&#x671F;&#x95F4;&#x8C03;&#x8282; RhoA &#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

The ability to observe changes in molecular behavior during cancer cell invasion in vivo remains a major challenge to our understanding of the metastatic process. Here, we demonstrate for the first time, an analysis of RhoA activity at a subcellular level using FLIM-FRET (fluorescence lifetime imaging microscopy-fluorescence resonance energy transfer) imaging in a live animal model of pancreatic cancer. In invasive mouse pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) cells driven by mutant p53 (p53(R172H)), we observed a discrete fraction of high RhoA activity at both the leading edge and rear of cells in vivo which was absent in two-dimensional in vitro cultures. Notably, this pool of active RhoA was absent in noninvasive p53(fl) knockout PDAC cells, correlating with their poor invasive potential in vivo. We used dasatanib, a clinically approved anti-invasive agent that is active in this model, to illustrate the functional importance of spatially regulated RhoA. Dasatanib inhibited the activity of RhoA at the poles of p53(R172H) cells in vivo and this effect was independent of basal RhoA activity within the cell body. Taken together, quantitative in vivo fluorescence lifetime imaging illustrated that RhoA is not only necessary for invasion, but also that subcellular spatial regulation of RhoA activity, as opposed to its global activity, is likely to govern invasion efficiency in vivo. Our findings reveal the utility of FLIM-FRET in analyzing dynamic biomarkers during drug treatment in living animals, and they also show how discrete intracellular molecular pools might be differentially manipulated by future anti-invasive therapies.

Spatial regulation of RhoA activity during pancreatic cancer cell invasion driven by mutant p53.

La capacit&#xE9; &#xE0; observer des changements dans le comportement mol&#xE9;culaire lors de l&#x26;#39;invasion des cellules canc&#xE9;reuses in vivo reste un d&#xE9;fi majeur pour notre compr&#xE9;hension du processus m&#xE9;tastatique. Ici, nous d&#xE9;montrons pour la premi&#xE8;re fois, une analyse de l&#x26;#39;activit&#xE9; de RhoA &#xE0; un niveau subcellulaire utilisant FLIM-FRET (fluorescence imagerie par microscopie de fluorescence &#xE0; vie Resonance Energy Transfer) d&#x26;#39;imagerie dans un mod&#xE8;le animal vivant d&#x26;#39;un cancer du pancr&#xE9;as. En envahissantes souris pancr&#xE9;atiques canalaires ad&#xE9;nocarcinome (PDAC) entra&#xEE;n&#xE9;s par les cellules p53 mutante (p53 (R172H)), nous avons observ&#xE9; une fraction discr&#xE8;te de RhoA de haute activit&#xE9; &#xE0; la fois l&#x26;#39;avant-garde et &#xE0; l&#x26;#39;arri&#xE8;re des cellules in vivo, qui &#xE9;tait absent en deux dimensions in vitro cultures. Notamment, ce bassin de RhoA actif &#xE9;tait absent dans p53 non invasive (fl) des cellules knock-out PDAC, en corr&#xE9;lation avec leur potentiel invasif in vivo les pauvres. Nous avons utilis&#xE9; dasatanib, une clinique a approuv&#xE9; un agent anti-invasif qui est actif dans ce mod&#xE8;le, pour illustrer l&#x26;#39;importance fonctionnelle de RhoA dans l&#x26;#39;espace r&#xE9;glement&#xE9;. Dasatanib inhib&#xE9; l&#x26;#39;activit&#xE9; de RhoA dans les p&#xF4;les de p53 (R172H) des cellules in vivo et cet effet &#xE9;tait ind&#xE9;pendant de l&#x26;#39;activit&#xE9; basale RhoA dans le corps de la cellule. Pris dans leur ensemble, quantitative l&#x26;#39;imagerie in vivo de vie de fluorescence montr&#xE9; que RhoA est non seulement n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;invasion, mais aussi que la r&#xE9;glementation subcellulaire spatiale de l&#x26;#39;activit&#xE9; de RhoA, par opposition &#xE0; son activit&#xE9; globale, est susceptible de r&#xE9;gir l&#x26;#39;efficacit&#xE9; in vivo l&#x26;#39;invasion. Nos r&#xE9;sultats r&#xE9;v&#xE8;lent l&#x26;#39;utilit&#xE9; de FLIM-FRET dans l&#x26;#39;analyse de biomarqueurs dynamiques pendant le traitement chez les animaux vivants, et ils montrent aussi comment discrets intracellulaires piscines mol&#xE9;culaires pourraient &#xEA;tre diff&#xE9;rentiellement manipul&#xE9; par les futures th&#xE9;rapies anti-invasifs.

R&#xE8;glement spatiale de l&#x26;#39;activit&#xE9; de RhoA Pendant l&#x26;#39;invasion des cellules cancer du pancr&#xE9;as Pouss&#xE9; par la p53 mutante

Die M&ouml;glichkeit, &Auml;nderungen im molekularen Verhalten w&auml;hrend Krebs Zelle Invasion in-vivo zu beobachten bleibt eine gro&szlig;e Herausforderung f&uuml;r unser Verst&auml;ndnis des metastasierenden Prozesses. Hier zeigen wir zum ersten Mal, eine Analyse der RhoA Aktivit&auml;t auf eine subzellul&auml;re Ebene mithilfe von FLIM-FRET (Fluoreszenz Lifetime imaging Mikroskopie-Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer) Bildgebung in einem Leben Tiermodell von Bauchspeicheldr&uuml;senkrebs. Invasive Maus Zellen pankreatische duktale Adenokarzinom (PDAC) getrieben von mutierten p53 (p53(R172H)), wir beobachteten eine diskrete Bruchteil der hohe RhoA-Aktivit&auml;t an der Spitze und hinten von Zellen in-vivo die abwesend war in zweidimensionalen in-vitro-Kulturen. Vor allem, diesen Pool an aktiven RhoA fehlte in nicht-invasive p53(fl) k.o. PDAC Zellen, Korrelation mit ihren Armen invasive Potential in-vivo. Wir verwendeten Dasatanib, einen klinisch zugelassenen anti-invasive Agent, der in diesem Modell die funktionelle Bedeutung des r&auml;umlich geregelten RhoA veranschaulichen aktiv ist. Dasatanib gehemmt die Aktivit&auml;t von RhoA an den Polen der p53(R172H) Zellen in-vivo und dieser Effekt war unabh&auml;ngig von basalen RhoA-Aktivit&auml;t innerhalb der Zelle K&ouml;rper. Zusammengenommen, quantitative in Vivo illustriert Fluoreszenz-Lebensdauer-Bildgebung, dass RhoA ist nicht nur notwendig f&uuml;r Invasion, sondern auch subzellulare r&auml;umliche Verordnung RhoA Aktivit&auml;t, im Gegensatz zu ihrer weltweiten T&auml;tigkeit, ist wahrscheinlich zu regieren Einmarsch Effizienz in-vivo. Unsere Ergebnisse zeigen den Nutzen der FLIM-Bund bei der Analyse von dynamischen Biomarker w&auml;hrend medikament&ouml;se Behandlung bei lebenden Tieren, und sie zeigen auch wie diskrete intrazellul&auml;re Molekulare Becken k&ouml;nnte durch zuk&uuml;nftige anti-invasive Therapien differentiell manipuliert werden.

R&auml;umliche Regelung der RhoA T&auml;tigkeit w&auml;hrend Bauchspeicheldr&uuml;senkrebs Zelle Invasion von mutierten p53 getrieben.

La capacit&agrave; di osservare i cambiamenti nel comportamento molecolare durante l&#39;invasione delle cellule di cancro in vivo rimane una sfida importante per la nostra comprensione del processo metastatico. Qui, noi dimostrare per la prima volta, un&#39;analisi dell&#39;attivit&agrave; di RhoA a livello subcellulare utilizzando FLIM-FRET imaging (vita di fluorescenza imaging microscopia di fluorescenza resonance energy transfer) in un modello animale diretta del cancro del pancreas. In mouse invasivo adenocarcinoma pancreatico duttale (PDAC) cellule guidato da p53 mutante (p53(R172H)), abbiamo osservato una discreta frazione di alta attivit&agrave; RhoA leading edge e posteriore delle cellule in vivo, che era assente in colture in vitro bidimensionale. In particolare, questo pool di RhoA attivo era assente in cellule di PDAC ko p53(fl) non invasiva, correlazione con la loro scarsa potenzialit&agrave; invasiva in vivo. Abbiamo usato dasatanib, un agente anti-invasive clinicamente che &egrave; attivo in questo modello, per illustrare l&#39;importanza funzionale di RhoA spazialmente regolamentato. Dasatanib inibito l&#39;attivit&agrave; di RhoA ai poli del p53(R172H) cellule in vivo e questo effetto &egrave; stato indipendente del basale RhoA attivit&agrave; all&#39;interno del corpo cellulare. Presi insieme, quantitativa in vivo imaging di vita di fluorescenza illustrato che RhoA &egrave; non solo necessario per invasione, ma anche quello sottocellulare regolamento spaziale di attivit&agrave; RhoA, in contrasto con la sua attivit&agrave; globale, &egrave; probabile che governano l&#39;efficienza di invasione in vivo. I nostri risultati rivelano l&#39;utilit&agrave; dei FLIM-FRET nell&#39;analizzare i biomarcatori dinamici durante il trattamento farmacologico in animali viventi, e mostrano anche come discrete piscine molecolare intracellulare potrebbe essere manipolato differenzialmente da terapie future anti-invasive.

Regolamento spaziale di RhoA attivit&agrave; durante invasione di cellule cancro al pancreas guidato da p53 mutante.

in vivo&#x3067;&#x306E;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6319;&#x52D5;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x79FB;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3078;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x8AB2;&#x984C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x81B5;&#x81D3;&#x764C;&#x306E;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;FLIM-FRET&#xFF08;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF09;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x578B;p53&#xFF08;p53&#x306E;&#xFF08;R172H&#xFF09;&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x99C6;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4F4E;&#x4FB5;&#x8972;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x81B5;&#x7BA1;&#x817A;&#x764C;&#xFF08;PDAC&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;in vitro&#x3067;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5148;&#x5C0E;&#x7AEF;&#x3068;&#x5F8C;&#x90E8;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x9AD8;&#x3044;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x96E2;&#x6563;&#x7684;&#x306A;&#x5272;&#x5408;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x6587;&#x5316;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;RhoA&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x4FB5;&#x8972;&#x6027;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;&#x306A;p53&#x306E;&#xFF08;&#x30D5;&#x30ED;&#x30EA;&#x30C0;&#x5DDE;&#xFF09;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;PDAC&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;RhoA&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;dasatanib&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x627F;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x6D78;&#x6F64;&#x5264;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Dasatanib&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;p53&#x306E;&#x6975;&#xFF08;R172H&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;RhoA&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x672C;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x306F;&#x3001;RhoA&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x4FB5;&#x7565;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x53CD;&#x5BFE;&#x3057;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x4FB5;&#x5165;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4ECA;&#x56DE;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x52D5;&#x7269;&#x3067;&#x306E;&#x85AC;&#x7269;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E2D;&#x306B;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;FLIM-FRET&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x96E2;&#x6563;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x5DEE;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x306E;&#x6297;&#x4F4E;&#x4FB5;&#x8972;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5909;&#x7570;&#x578B;p53&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x99C6;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x81B5;&#x81D3;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x6642;&#x306E;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x898F;&#x5236;

&#xBCC0;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xBD84;&#xC790; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE68;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xB2A5;&#xB825; &#xC804;&#xC774;&#xC131; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xB3C4;&#xC804; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC98;&#xC74C; subcellular &#xC218;&#xC900;&#xC758; FLIM &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; (&#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCDCC;&#xC7A5;&#xC554;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; RhoA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE68;&#xB7B5; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCDCC; &#xC7A5; ductal &#xC120; (PDAC) &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; p53&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xB3D9; (p53(R172H)), &#xC55E; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; RhoA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBD84;&#xC218; &#xBC0F; &#xACB0; &#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC140;&#xC758; &#xD6C4;&#xBA74; &#xAD00;&#xCC30; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC678; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xD65C;&#xC131; Rhoa&#xC774;&#xC774; &#xD480; &#xACB0; &#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; &#xD2B9;&#xD788;, vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBD88; &#xC30D; &#xD55C; &#xCE68;&#xB7B5; &#xC801; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xACFC; &#xBE44; &#xCE68; &#xD22C; &#xC801;&#xC778; p53(fl) &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; PDAC &#xC140;&#xC5D0;. Dasatanib, &#xACF5;&#xAC04;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; Rhoa&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;&#xC774; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2B9;&#xC778;&#xB41C; anti-invasive &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Dasatanib p53(R172H) &#xC140; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; Rhoa&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC140; &#xBCF8;&#xBB38; &#xB0B4; &#xAE30;&#xC800; RhoA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4;. Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC591;&#xC801; &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC77C;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD2B8; RhoA, &#xCE68;&#xACF5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; RhoA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; subcellular &#xACF5;&#xAC04; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;, &#xCE68;&#xACF5; &#xD6A8;&#xC728; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xBC30; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB192;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC57D;&#xBB3C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB3D9;&#xC801; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; FLIM-&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBD84;&#xC790; &#xD480; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xCC28;&#xB3D9; &#xBBF8;&#xB798; anti-invasive &#xC694;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC791; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCDCC;&#xC7A5;&#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE68;&#xACF5; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; p53&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; RhoA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xADDC;&#xC815;.

La capacidad de observar los cambios en el comportamiento molecular durante la invasi&#xF3;n de las c&#xE9;lulas cancerosas in vivo sigue siendo un reto importante para nuestra comprensi&#xF3;n del proceso metast&#xE1;sico. En este caso, hemos demostrado por primera vez, un an&#xE1;lisis de la actividad de RhoA a nivel subcelular utilizando Flim-FRET (microscop&#xED;a de fluorescencia de imagen de por vida-resonancia de fluorescencia la transferencia de energ&#xED;a) de im&#xE1;genes en un modelo animal en vivo de c&#xE1;ncer de p&#xE1;ncreas. En invasoras rat&#xF3;n de adenocarcinoma pancre&#xE1;tico ductal (PDAC) impulsados &#x200B;&#x200B;por c&#xE9;lulas mutantes de p53 (p53 (R172H)), se observ&#xF3; una fracci&#xF3;n discreta de alta actividad de RhoA, tanto en el borde delantero y trasero de las c&#xE9;lulas in vivo que estuvo ausente en dos dimensiones in vitro culturas. En particular, este grupo de activos RhoA estuvo ausente en p53 no invasiva (FL), las c&#xE9;lulas knockout PDAC, en correlaci&#xF3;n con su potencial pobres invasiva in vivo. Se utiliz&#xF3; dasatanib, una cl&#xED;nica aprobada anti-invasiva agente que est&#xE1; activa en este modelo, para ilustrar la importancia funcional de RhoA espacialmente regulado. Dasatanib inhiben la actividad de RhoA en los polos de p53 (R172H) las c&#xE9;lulas in vivo, y este efecto fue independiente de la actividad de RhoA basal dentro del cuerpo celular. Tomados en conjunto, cuantitativo de im&#xE1;genes in vivo de fluorescencia vida ilustra que RhoA no s&#xF3;lo es necesaria para la invasi&#xF3;n, sino tambi&#xE9;n que la regulaci&#xF3;n subcelular espacial de la actividad de RhoA, en oposici&#xF3;n a su actividad global, es probable que gobiernan la eficiencia invasi&#xF3;n in vivo. Nuestros resultados ponen de manifiesto la utilidad de Flim-FRET en el an&#xE1;lisis de biomarcadores din&#xE1;micos durante el tratamiento de drogas en animales vivos, y tambi&#xE9;n mostrar c&#xF3;mo discretos piscinas moleculares intracelulares podr&#xED;a ser diferente manipulados por el futuro de lucha contra la invasi&#xF3;n terapias.

Reglamento espacial de la actividad de RhoA Durante la invasi&#xF3;n de c&#xE9;lulas del c&#xE1;ncer pancre&#xE1;tico Impulsado por mutantes de p53

Tumoren und zugeh&ouml;rigen Stroma manifestieren und mechanische Eigenschaften, die Krebs zu f&ouml;rdern. Der Gewebe-Steifheit Mechanosensation aktiviert die Rho/ROCK-Pathway Actomyosin-vermittelten zellul&auml;ren Spannung um Kraft Gleichgewicht wiederherzustellen erh&ouml;hen. Um festzustellen, wie Actomyosin Spannung Gewebe-Hom&ouml;ostase und Tumor-Entwicklung auswirken, haben wir bedingt aktiv ROCK2 Maus Haut. ROCK-Aktivierung erh&ouml;ht Gewebe Steifigkeit &uuml;ber erh&ouml;hte Kollagen. &Beta;-Catenin, ein zentrales Element der Mechanotranscription Wege, wurde beim ROCK-Aktivierung zu nuklearen Anreicherung, transcriptional Aktivierung und konsequente Zellproliferation und Verdickung der Haut stabilisiert. Hemmung von Actomyosin Kontraktilit&auml;t durch Sperrung LIMK oder Myosin-ATPase abgeschw&auml;cht Erkl&auml;rungsmodelle, wie FAK-Hemmung. Tumor-Anzahl, Wachstum und Fortschritt ROCK-Aktivierung, stieg durch w&auml;hrend ROCK-Blockade hemmenden, war Nicht&uuml;bernahme Actomyosin-vermittelten zellul&auml;ren Spannung und konsequente Kollagen Absetzung als signifikante Tumor-F&ouml;rderer.

Actomyosin-vermittelten zellul&auml;ren Spannung treibt erh&ouml;hte Gewebe Steifigkeit und &beta;-Catenin Aktivierung epidermalen Hyperplasie und Tumor-Wachstum veranlassen.

Tumori e stroma associata manifesto di propriet&agrave; meccaniche che promuovono il cancro. Mechanosensation di rigidit&agrave; del tessuto attiva il pathway ROCK Rho per aumentare la tensione cellulare mediata da actomiosina per ristabilire l&#39;equilibrio della forza. Per determinare come tensione di actomiosina colpisce lo sviluppo di tumore e omeostasi del tessuto, abbiamo espresso ROCK2 condizionalmente attivo nella pelle del mouse. Attivazione di roccia elevata rigidit&agrave; dei tessuti tramite aumentata collagene. &Beta;-catenina, un elemento chiave delle vie mechanotranscription, &egrave; stata stabilizzata mediante l&#39;attivazione di roccia che porta all&#39;accumulo nucleare, attivazione trascrizionale e conseguente iperproliferazione e ispessimento della pelle. Inibire la contrattilit&agrave; actomiosina bloccando LIMK o miosina ATPasi attenuato queste risposte, come ha fatto l&#39;inibizione FAK. Progressione, crescita e numero di tumore erano aumentati di attivazione ROCK, mentre il blocco di roccia era inibitorio, implicando tensione cellulare actomiosina-mediata e deposizione di collagene conseguente come promotori tumorali significative.

Tensione cellulare mediata da actomiosina unit&agrave; tessuto maggiore rigidit&agrave; e &beta;-catenina attivazione per indurre la crescita di tumore e iperplasia epidermica.

&#x80BF;&#x7624;&#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x57FA;&#x8D28;&#x6E05;&#x5355;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x764C;&#x75C7;&#x7684;&#x529B;&#x5B66;&#x6027;&#x80FD;&#x3002;Mechanosensation &#x7EC4;&#x7EC7;&#x521A;&#x5EA6;&#x6FC0;&#x6D3B; Rho/&#x5CA9;&#x9014;&#x5F84;&#x589E;&#x52A0;&#x8089;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F20;&#x529B;&#x6765;&#x6062;&#x590D;&#x529B;&#x5E73;&#x8861;&#x3002;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x8089;&#x7D27;&#x5F20;&#x5982;&#x4F55;&#x5F71;&#x54CD;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x7A33;&#x6001;&#x4E0E;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x793A;&#x6709;&#x6761;&#x4EF6;&#x5730;&#x79EF;&#x6781; ROCK2 &#x9F20;&#x6807;&#x76AE;&#x80A4;&#x4E2D;&#x3002;&#x5CA9;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x52A0;&#x80F6;&#x539F;&#x63D0;&#x5347;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x521A;&#x5EA6;&#x3002;&Beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#xFF0C;mechanotranscription &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x8981;&#x7D20;&#x88AB;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x5CA9;&#x77F3;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6838;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3001; &#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x800C;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x589E;&#x6B96;&#x884C;&#x4E3A;&#x548C;&#x76AE;&#x80A4;&#x589E;&#x539A;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x963B;&#x6B62; LIMK &#x6216; ATPase &#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x8089;&#x6536;&#x7F29;&#x529B;&#x51CF;&#x6BD2;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7B54;&#x590D;&#xFF0C;&#x4E00;&#x6837;&#x9ECF;&#x7740;&#x6591;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x80BF;&#x7624;&#x6570;&#x91CF;&#x3001; &#x589E;&#x957F;&#x548C;&#x8FDB;&#x5C55;&#x90FD;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x5CA9;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x800C;&#x5CA9;&#x5C01;&#x9501;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x7275;&#x8FDE;&#x8089;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F20;&#x529B;&#x548C;&#x968F;&#x540E;&#x80F6;&#x539F;&#x6C89;&#x79EF;&#x4E3A;&#x91CD;&#x5927;&#x80BF;&#x7624;&#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#x3002;

&#x8089;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F20;&#x529B;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x521A;&#x5EA6;&#x548C; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x8868;&#x76AE;&#x589E;&#x751F;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x3002;

Tumors and associated stroma manifest mechanical properties that promote cancer. Mechanosensation of tissue stiffness activates the Rho/ROCK pathway to increase actomyosin-mediated cellular tension to re-establish force equilibrium. To determine how actomyosin tension affects tissue homeostasis and tumor development, we expressed conditionally active ROCK2 in mouse skin. ROCK activation elevated tissue stiffness via increased collagen. Î²-catenin, a key element of mechanotranscription pathways, was stabilized by ROCK activation leading to nuclear accumulation, transcriptional activation, and consequent hyperproliferation and skin thickening. Inhibiting actomyosin contractility by blocking LIMK or myosin ATPase attenuated these responses, as did FAK inhibition. Tumor number, growth, and progression were increased by ROCK activation, while ROCK blockade was inhibitory, implicating actomyosin-mediated cellular tension and consequent collagen deposition as significant tumor promoters.

Actomyosin-mediated cellular tension drives increased tissue stiffness and Î²-catenin activation to induce epidermal hyperplasia and tumor growth.

Les tumeurs et les propri&#xE9;t&#xE9;s associ&#xE9;es manifestes stroma m&#xE9;caniques qui favorisent le cancer. M&#xE9;canosensibilit&#xE9; de la rigidit&#xE9; des tissus active la voie Rho / ROCK pour augmenter actomyosine m&#xE9;di&#xE9;e par la tension cellulaire &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;quilibre la force de r&#xE9;tablir. Pour d&#xE9;terminer comment la tension actomyosine affecte l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie tissulaire et le d&#xE9;veloppement tumoral, nous avons exprim&#xE9; ROCK2 conditionnellement active dans la peau de souris. Activation ROCK tissus rigidit&#xE9; &#xE9;lev&#xE9;e par augmentation du collag&#xE8;ne. &#x3B2;-cat&#xE9;nine, un &#xE9;l&#xE9;ment cl&#xE9; des voies de mechanotranscription, a &#xE9;t&#xE9; stabilis&#xE9; par l&#x26;#39;activation ROCK conduisant &#xE0; l&#x26;#39;accumulation nucl&#xE9;aire, l&#x26;#39;activation transcriptionnelle, et une hyperprolif&#xE9;ration cons&#xE9;quente et &#xE9;paississement de la peau. Contractilit&#xE9; actomyosine inhibition par le blocage ou la myosine ATPase limk att&#xE9;nu&#xE9; ces r&#xE9;ponses, comme l&#x26;#39;a fait l&#x26;#39;inhibition FAK. Nombre des tumeurs, la croissance et la progression ont &#xE9;t&#xE9; augment&#xE9;s par l&#x26;#39;activation ROCK, ROCK tout blocus &#xE9;tait inhibitrice, impliquant actomyosine m&#xE9;diation cellulaire et la tension de d&#xE9;p&#xF4;ts de collag&#xE8;ne par cons&#xE9;quent que les promoteurs de tumeurs importantes.

Actomyosine m&#xE9;diation cellulaire tension rigidit&#xE9; des tissus durs accrue et &#x3B2;-cat&#xE9;nine d&#x26;#39;activation pour provoquer l&#x26;#39;hyperplasie &#xE9;pidermique et la croissance tumorale

&#x764C;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;&#x9593;&#x8CEA;&#x30DE;&#x30CB;&#x30D5;&#x30A7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x3002;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x525B;&#x6027;&#x306E;Mechanosensation&#x306F;&#x3001;Rho / ROCK&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x518D;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x529B;&#x306E;&#x5747;&#x8861;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x4ECB;&#x5728;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7DCA;&#x5F35;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x5F35;&#x529B;&#x304C;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x306B;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x304B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x3067;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x3067;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;ROCK2&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x3092;&#x7D4C;&#x7531;&#x3057;&#x3066;ROCK&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x4E0A;&#x6607;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x786C;&#x3055;&#x3002; &#x3B2;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;mechanotranscription&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8981;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;ROCK&#x306E;&#x6838;&#x5185;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x904E;&#x5270;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x76AE;&#x819A;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x80A5;&#x539A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; FAK&#x963B;&#x5BB3;&#x304C;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;LIMK&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;ATPase&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3002; ROCK&#x306E;&#x5C01;&#x9396;&#x304C;&#x963B;&#x5BB3;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x9593;&#x306B;&#x816B;&#x760D;&#x6570;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9032;&#x884C;&#x306F;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x4ECB;&#x5728;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7DCA;&#x5F35;&#x3068;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x6C88;&#x7740;&#x3092;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3001;ROCK&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30A2;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x4ECB;&#x5728;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F35;&#x529B;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x7D44;&#x7E54;&#x525B;&#x6027;&#x3068;&#x8868;&#x76AE;&#x904E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3B2;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;

&#xC885;&#xC591;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAE30;&#xC9C8; &#xC554; &#xD64D;&#xBCF4; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC131;&#xC9C8;&#xC744; &#xB9E4;&#xB2C8; &#xD398;&#xC2A4;&#xD2B8;. Mechanosensation &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xACBD;&#xC9C1;&#xC131;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xD798; &#xADE0;&#xD615;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xAE34;&#xC7A5; actomyosin &#xC911;&#xC7AC; Rho/&#xBC14;&#xC704; &#xD1B5;&#xB85C;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Actomyosin &#xAE34;&#xC7A5; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xBC0F; &#xC885;&#xC591; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD53C;&#xBD80; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD65C;&#xC131; ROCK2 &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD45C;&#xD604;. &#xB77D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC99D;&#xAC00; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC870;&#xC9C1; &#xAC15;&#xC131; &#xB192;&#xC740;. &Beta;-catenin, mechanotranscription &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xB85D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC120;&#xB3C4; &#xD575; &#xCD95;&#xC801;, transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xACB0;&#xACFC; hyperproliferation &#xBC0F; &#xD53C;&#xBD80; &#xB450;&#xAECD;&#xAC8C; &#xD558; &#xC5EC; &#xC548;&#xC815;&#xD654;. &#xD30D; &#xC800;&#xD574; &#xD588;&#xB358; &#xAC83; &#xCC98;&#xB7FC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC751;&#xB2F5; &#xAC10;&#xC1E0; LIMK myosin ATPase &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558; &#xC5EC; actomyosin &#xC218;&#xCD95; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC885;&#xC591; &#xC218; &#xC131;&#xC7A5;&#xACFC; &#xC9C4;&#xD589; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; &#xB85D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC14;&#xC704; &#xBD09;&#xC1C4;&#xB294; &#xAE08;&#xC9C0;, &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xAE34;&#xC7A5;&#xACFC; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC885;&#xC591; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xD544;&#xC5F0;&#xC801;&#xC778; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC99D; &#xCC29; actomyosin &#xC911;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xB8E8;.

&#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xAE34;&#xC7A5; actomyosin &#xC911;&#xC7AC; &#xC99D;&#xAC00; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xACBD;&#xC9C1;&#xACFC; &beta;-catenin &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD45C; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;.

Los tumores y las correspondientes propiedades mec&#xE1;nicas del estroma manifiesto que promueven el c&#xE1;ncer. Mechanosensation de la rigidez de los tejidos activa la v&#xED;a Rho / ROCA para aumentar la actomiosina mediada por la tensi&#xF3;n celular al equilibrio de fuerzas volver a establecer. Para determinar c&#xF3;mo la tensi&#xF3;n afecta a la actomiosina la homeostasis del tejido y el desarrollo del tumor, expresamos de forma condicional ROCK2 activo en la piel del rat&#xF3;n. ROCA rigidez activaci&#xF3;n tejido elevada a trav&#xE9;s de col&#xE1;geno aumentado. &#x3B2;-catenina, un elemento clave de las v&#xED;as mechanotranscription, fue estabilizado por la activaci&#xF3;n de rock que conduce a la acumulaci&#xF3;n nuclear, la activaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n, y la hiperproliferaci&#xF3;n consecuente y engrosamiento de la piel. La inhibici&#xF3;n de la contractilidad actomiosina mediante el bloqueo de LIMK o de miosina ATPasa atenuado estas respuestas, al igual que la inhibici&#xF3;n de FAK. El n&#xFA;mero de tumores, el crecimiento y la progresi&#xF3;n se incrementaron por la activaci&#xF3;n de roca, mientras que el bloqueo roca era inhibitoria, lo que implica la actomiosina mediada por la tensi&#xF3;n celular y la consiguiente deposici&#xF3;n de col&#xE1;geno como promotores tumorales importantes.

Actomiosina mediada por la tensi&#xF3;n celular impulsa aumento de la rigidez del tejido y la activaci&#xF3;n de &#x3B2;-catenina para inducir la hiperplasia epid&#xE9;rmica y el crecimiento tumoral

&#x5728;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FDB;&#x6B65;&#x4F7F;&#x819C;&#x6269;&#x6563;&#x7814;&#x7A76;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x957F;&#x5927;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6210;&#x50CF;&#x5728;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x9650;&#x4E8E;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x3002;&#x73B0;&#x5728;&#xFF0C;&#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x62DF;&#x6210;&#x50CF;&#x662F;&#x6D3B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x9010;&#x6B65;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x5C16;&#x89D2;&#x4E0A;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8F6C;&#x53D8;&#x63A8;&#x52A8;&#x4E86;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x5BA1;&#x614E;&#x786E;&#x5B9A;&#x8BB8;&#x591A;&#x53D1;&#x5C55;&#x53CA;&#x75C5;&#x7406;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F9D;&#x9760;&#x4E0E;&#x764C;&#x75C7;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5F71;&#x50CF;&#x7684;&#x6700;&#x8FD1;&#x8FDB;&#x5C55;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F3A;&#x8C03;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8F7B;&#x677E;&#x5730;&#x7ED3;&#x5408;&#x9057;&#x4F20;&#x6A21;&#x578B;&#x548C;&#x8865;&#x5145;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7684;&#x8BC4;&#x6CE8;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x8003;&#x8651;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x8FA9;&#x79F0;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5982;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7684;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x548C;&#x5916;&#x690D;&#x4F53;&#x57F9;&#x517B;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x603B;&#x662F;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x76EE;&#x524D;&#x75BE;&#x75C5;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x8303;&#x5F0F;&#x8F6C;&#x5411;&#x5728;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

&#x6210;&#x50CF;&#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5728;&#x4F53;&#x5185; &mdash; &mdash; &#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E0A;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

Advances in fluorescence microscopy have enabled the study of membrane diffusion, cell adhesion and signal transduction at the molecular level in living cells grown in culture. By contrast, imaging in living organisms has primarily been restricted to the localization and dynamics of cells in tissues. Now, imaging of molecular dynamics is on the cusp of progressing from cell culture to living tissue. This transition has been driven by the understanding that the microenvironment critically determines many developmental and pathological processes. Here, we review recent progress in fluorescent protein imaging in vivo by drawing primarily on cancer-related studies in mice. We emphasize the need for techniques that can be easily combined with genetic models and complement fluorescent protein imaging by providing contextual information about the cellular environment. In this Commentary we will consider differences between in vitro and in vivo experimental design and argue for an approach to in vivo imaging that is built upon the use of intermediate systems, such as 3-D and explant culture models, which offer flexibility and control that is not always available in vivo. Collectively, these methods present a paradigm shift towards the molecular-level investigation of disease and therapy in animal models of disease.

Imaging molecular dynamics in vivo--from cell biology to animal models.

Les progr&#xE8;s de la microscopie &#xE0; fluorescence ont permis l&#x26;#39;&#xE9;tude de la diffusion membranaire, l&#x26;#39;adh&#xE9;sion cellulaire et de transduction du signal au niveau mol&#xE9;culaire dans les cellules vivantes en culture. En revanche, l&#x26;#39;imagerie dans les organismes vivants a &#xE9;t&#xE9; principalement limit&#xE9; &#xE0; la localisation et la dynamique des cellules dans les tissus. Maintenant, l&#x26;#39;imagerie de la dynamique mol&#xE9;culaire est sur le point de progresser &#xE0; partir de culture cellulaire pour les tissus vivants. Cette transition a &#xE9;t&#xE9; tir&#xE9;e par la compr&#xE9;hension que le microenvironnement d&#xE9;termine critique de nombreux processus d&#xE9;veloppementaux et pathologiques. Ici, nous passons en revue les progr&#xE8;s r&#xE9;cents dans l&#x26;#39;imagerie in vivo la prot&#xE9;ine fluorescente en s&#x26;#39;appuyant principalement sur le cancer-connexes &#xE9;tudes chez la souris. Nous soulignons la n&#xE9;cessit&#xE9; pour les techniques qui peuvent &#xEA;tre facilement combin&#xE9;s avec des mod&#xE8;les g&#xE9;n&#xE9;tiques et de compl&#xE9;ter l&#x26;#39;imagerie prot&#xE9;ine fluorescente en fournissant des informations contextuelles sur l&#x26;#39;environnement cellulaire. Dans ce commentaire nous allons examiner les diff&#xE9;rences entre in vitro et in vivo dans la conception exp&#xE9;rimentale et de plaider en faveur d&#x26;#39;une approche de l&#x26;#39;imagerie in vivo qui est construit sur l&#x26;#39;utilisation des syst&#xE8;mes interm&#xE9;diaires, tels que 3-D et des mod&#xE8;les de culture d&#x26;#39;explants, qui offrent une flexibilit&#xE9; et de contr&#xF4;le qui n&#x26;#39;est pas toujours disponible in vivo. Collectivement, ces m&#xE9;thodes pr&#xE9;sentent un changement de paradigme vers la recherche au niveau mol&#xE9;culaire de la maladie et le traitement dans les mod&#xE8;les animaux de la maladie.

Imaging Dynamics mol&#xE9;culaire in vivo - de la biologie cellulaire &#xE0; des mod&#xE8;les animaux

Fortschritte in der Fluoreszenzmikroskopie aktiviert haben, die Studie der Membran-Diffusion, Zelle Adh&auml;sion und Signal-Transduktion auf molekularer Ebene in lebenden Zellen in Kultur angebaut. Im Gegensatz dazu wurde Bildgebung in lebenden Organismen in erster Linie zur Lokalisierung und Dynamik der Zellen im Gewebe beschr&auml;nkt. Bildgebung der Molekulardynamik ist jetzt an der Schwelle des Umstiegs von Zellkultur auf lebendes Gewebe. Dieser &Uuml;bergang wurde durch das Verst&auml;ndnis getrieben, dass das Mikromilieu kritisch viele Entwicklungs- und pathologische Prozesse bestimmt. Hier &uuml;berpr&uuml;fen wir die j&uuml;ngsten Fortschritte im fluoreszierenden Proteins in vivo imaging, von Zeichnung in erster Linie auf Krebs-in Verbindung stehenden Studien an M&auml;usen. Wir betonen die Notwendigkeit der Techniken, die mit genetischen Modellen leicht kombinierbar und fluoreszierenden Proteins Bildgebung durch kontextbezogene Informationen &uuml;ber die zellul&auml;ren Umgebung zu erg&auml;nzen. In diesem Kommentar Wir betrachten Unterschiede zwischen in-vitro und in vivo Versuchsanordnung und pl&auml;dieren f&uuml;r einen Ansatz zur in-vivo Bildgebung, die auf die Verwendung von Mittelstufe-Systemen wie 3-d aufbaut und Explant Kultur Modelle, die bieten Flexibilit&auml;t und Kontrolle, die nicht immer verf&uuml;gbar ist in-vivo. Diese Methoden stellen gemeinsam einen Paradigmenwechsel in Richtung der Untersuchung molekularer Ebene von Krankheit und Therapie in Tiermodellen der Krankheit.

Bildgebung Molekulare Dynamik in-vivo--aus Zellbiologie an Tiermodellen.

I progressi nella microscopia di fluorescenza hanno permesso la studio della diffusione di membrana, la trasduzione del segnale e adesione delle cellule a livello molecolare nelle cellule viventi, cresciuto nella cultura. Al contrario, imaging negli organismi viventi principalmente &egrave; stato limitato per la localizzazione e la dinamica delle cellule nei tessuti. Ora, imaging di dinamica molecolare &egrave; sulla cuspide della progressione da coltura delle cellule di tessuto vivente. Questa transizione &egrave; stata guidata dalla comprensione che il microambiente determina criticamente molti processi patologici e di sviluppo. Qui, passiamo in rassegna recenti progressi nella proteina fluorescente di imaging in vivo da disegno principalmente su studi legati al cancro nei topi. Sottolineiamo la necessit&agrave; di tecniche che possono essere facilmente combinati con i modelli genetici e complemento imaging proteina fluorescente fornendo informazioni contestuali sull&#39;ambiente cellulare. In questo commento considerare le differenze tra il disegno sperimentale in vitro e in vivo e ci sostengono per un approccio all&#39;imaging in vivo che si basa sull&#39;utilizzo di sistemi intermedi, come 3D e modelli di cultura di espianto, che offrono flessibilit&agrave; e controllo che non &egrave; sempre disponibile in vivo. Collettivamente, questi metodi presentano un cambiamento di paradigma verso l&#39;inchiesta a livello molecolare della malattia e della terapia in modelli animali di malattia.

Dinamica Imaging molecolare in vivo - dalla biologia cellulare in modelli animali.

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Vivo&#xC5D0;&#xC11C;-&#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC601;&#xC0C1; &#xBD84;&#xC790; &#xC5ED;&#xD559;.

Los avances en la microscop&#xED;a de fluorescencia han permitido el estudio de la difusi&#xF3;n de la membrana, la adhesi&#xF3;n celular y la transducci&#xF3;n de se&#xF1;ales a nivel molecular en las c&#xE9;lulas vivas cultivadas en cultivo. Por el contrario, las im&#xE1;genes en los organismos vivos ha sido restringido principalmente a la localizaci&#xF3;n y la din&#xE1;mica de las c&#xE9;lulas en los tejidos. Ahora, las im&#xE1;genes de din&#xE1;mica molecular est&#xE1; en la c&#xFA;spide del progreso del cultivo de c&#xE9;lulas de los tejidos vivos. Esta transici&#xF3;n ha sido impulsada por el entendimiento de que el microambiente determina cr&#xED;ticamente muchos procesos de desarrollo y patol&#xF3;gicos. En este art&#xED;culo examinamos los &#xFA;ltimos avances en imagen prote&#xED;na fluorescente in vivo, utilizando prioritariamente los estudios relacionados con el c&#xE1;ncer en ratones. Hacemos hincapi&#xE9; en la necesidad de t&#xE9;cnicas que pueden ser f&#xE1;cilmente combinados con modelos gen&#xE9;ticos y complementar la prote&#xED;na fluorescente de im&#xE1;genes, proporcionando informaci&#xF3;n contextual sobre el entorno celular. En este comentario vamos a considerar las diferencias entre in vitro e in vivo en el dise&#xF1;o experimental y abogan por un enfoque de im&#xE1;genes in vivo que se basa en el uso de sistemas intermedios, como el 3-D y los modelos de cultivo de explantes, que ofrecen una flexibilidad y control que no siempre est&#xE1; disponible en vivo. En conjunto, estos m&#xE9;todos presentan un cambio de paradigma hacia la investigaci&#xF3;n a nivel molecular de la enfermedad y la terapia en modelos animales de enfermedad.

Imagen Molecular Dynamics en Vivo - de la biolog&#xED;a celular a los modelos animales

&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x5E73;&#x9762;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7814;&#x7A76;&#x65B9;&#x9762;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x8BB8;&#x591A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x6539;&#x7F16;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x6280;&#x672F;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E09;&#x7EF4;&#x6A21;&#x578B;&#x7F29;&#x5C0F;&#x5DEE;&#x8DDD;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x75BE;&#x75C5;&#x8FDB;&#x5C55;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528; F&ouml;rster &#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x5178;&#x578B;&#x7684; RhoGTPases Cdc42&#x3001; Rac &#x548C; RhoA &#x65F6;&#x7A7A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x540C;&#x6B65;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x690E;&#x95F4;&#x76D8;&#x7A81;&#x51FA;&#x7684; Rac &#x6FC0;&#x6D3B;&#x524D;&#x7684;&#x521D;&#x59CB; RhoA &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x8FD9;&#x540C;&#x65F6;&#x97F3;&#x54C1;&#x65B9;&#x6CD5;&#x9610;&#x91CA;&#x4E86;&#x4E25;&#x5BC6;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x8C03;&#x8282; RhoGTPase &#x6D3B;&#x6027;&#x534F;&#x8C03;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x8FC1;&#x79FB;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E09;&#x7EF4;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x80F6;&#x7247;&#x97F3;&#x54C1;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5728;&#x54EA; RhoA &#x6D3B;&#x52A8;&#x53D7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x53E6;&#x4E00;&#x5C42;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x5728;&#x5165;&#x4FB5;&#x4F53;&#x5185;&#x671F;&#x95F4;&#x6216;&#x4E09;&#x7EF4;&#x77E9;&#x9635;&#x5185; RhoA &#x7A7A;&#x95F4;&#x7BA1;&#x5236;&#x6210;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5904;&#x4E8E;&#x524D;&#x6CBF;&#x7684;&#x79BB;&#x6563;&#x5206;&#x6570;&#x548C;&#x540E;&#x9762;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x7A7A;&#x95F4;&#x8C03;&#x8282; RhoA &#x662F;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x5728;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x4F53;&#x5916;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x3002;&#x8FD9;&#x72EC;&#x7279; RhoA &#x5728;&#x5165;&#x4FB5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7EF4;&#x5EA6;&#x7684;&#x4E24;&#x6781;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C03;&#x8282;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5148;&#x4F8B;&#xFF0C;&#x5176;&#x4ED6; RhoGTPases &#x6216;&#x4FE1;&#x53F7;&#x86CB;&#x767D;&#x4E5F;&#x53EF;&#x80FD;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8C03;&#x8282; con &#x6587;&#x672C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x5165;&#x4FB5;&#x7B49;&#x5173;&#x952E;&#x751F;&#x7269;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

&#x764C;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5165;&#x4FB5;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;&#x7279;&#x5730;&#x97F3;&#x54C1;&#x7A7A;&#x95F4;&#x6210;&#x50CF;&#x4F53;&#x5185;&#x53D1;&#x73B0; 3D &#x73AF;&#x5883;&#x89C4;&#x7BA1; RhoGTPase &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

Many conceptual advances in biology have been achieved by experimental studies using planar two-dimensional cell culture systems. Recent adaptations of molecular techniques to three-dimensional model systems are bridging the gap in our understanding of biological events in vitro and in vivo in the study of disease progression. Recently, in vitro studies using FÃ¶rster resonance energy transfer (FRET) have shown that the prototypical RhoGTPases Cdc42, Rac and RhoA are temporally and spatially synchronized during cell migration, with initial RhoA activity inducing protrusion prior to activation of Rac. This simultaneous FRET approach illustrates the tight control and dynamic regulation of RhoGTPase activity necessary for coordinated cell migration in vitro. Here, we discuss our recent work using FLIM-FRET analysis in a three-dimensional setting to reveal another layer of regulation in which RhoA activity is governed by the extracellular microenvironment. We demonstrate that RhoA is spatially regulated into discrete fractions of activity at the leading edge and rear of cells during invasion in vivo or within three-dimensional matrices. Significantly, this spatial regulation of RhoA was absent in two-dimensional in vitro settings. This distinct sub-cellular regulation of RhoA at the poles of invading cells in three-dimensions sets a precedent that other RhoGTPases or signaling proteins may also be differentially regulated in a con-text-dependent manner during key biological processes such as invasion.

FLIM-FRET imaging in vivo reveals 3D-environment spatially regulates RhoGTPase activity during cancer cell invasion.

Beaucoup de progr&#xE8;s conceptuels de la biologie ont &#xE9;t&#xE9; obtenus par des &#xE9;tudes exp&#xE9;rimentales utilisant planes bidimensionnelles syst&#xE8;mes de culture cellulaire. Adaptations r&#xE9;centes des techniques mol&#xE9;culaires pour des syst&#xE8;mes mod&#xE8;les en trois dimensions sont &#xE0; combler le foss&#xE9; dans notre compr&#xE9;hension des ph&#xE9;nom&#xE8;nes biologiques in vitro et in vivo dans l&#x26;#39;&#xE9;tude de la progression de la maladie. R&#xE9;cemment, des &#xE9;tudes in vitro utilisant le transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie F&#xF6;rster par r&#xE9;sonance (FRET) ont montr&#xE9; que les RhoGTPases prototypiques Cdc42, Rac et RhoA sont temporellement et spatialement synchronis&#xE9;es lors de la migration cellulaire, avec protrusion RhoA induisant activit&#xE9; initiale avant l&#x26;#39;activation de Rac. Cette approche illustre simultan&#xE9;e FRET le contr&#xF4;le strict et la r&#xE9;gulation dynamique de l&#x26;#39;activit&#xE9; RhoGTPase n&#xE9;cessaire pour la migration des cellules coordonn&#xE9;e in vitro. Ici, nous discutons de nos travaux r&#xE9;cents utilisant FLIM-FRET analyse dans un environnement en trois dimensions pour r&#xE9;v&#xE9;ler une autre couche de la r&#xE9;glementation dans lequel l&#x26;#39;activit&#xE9; est r&#xE9;gie par RhoA le microenvironnement extracellulaire. Nous d&#xE9;montrons que RhoA est spatialement r&#xE9;gul&#xE9;e en fractions distinctes de l&#x26;#39;activit&#xE9; &#xE0; la fine pointe et &#xE0; l&#x26;#39;arri&#xE8;re des cellules lors de l&#x26;#39;invasion in vivo ou dans des matrices tridimensionnelles. Significativement, cette r&#xE9;gulation spatiale de RhoA &#xE9;tait absent en deux dimensions dans les milieux in vitro. Cette distincte sub-cellulaire r&#xE9;gulation de RhoA dans les p&#xF4;les de l&#x26;#39;invasion des cellules en trois dimensions cr&#xE9;e un pr&#xE9;c&#xE9;dent qui RhoGTPases autres prot&#xE9;ines de signalisation ou peut &#xE9;galement &#xEA;tre r&#xE9;gul&#xE9;s diff&#xE9;remment d&#x26;#39;une mani&#xE8;re con-texte-d&#xE9;pendante au cours des processus biologiques fondamentaux tels que l&#x26;#39;invasion.

FLIM-FRET imagerie in vivo r&#xE9;v&#xE8;le 3D-Environnement r&#xE9;glemente l&#x26;#39;activit&#xE9; spatialement RhoGTPase Pendant invasion des cellules canc&#xE9;reuses

Muchos avances conceptuales de la biolog&#xED;a se han logrado por estudios experimentales utilizando planas bidimensionales sistemas de cultivo celular. Adaptaciones recientes de t&#xE9;cnicas moleculares para sistemas modelo en tres dimensiones son la reducci&#xF3;n de la brecha en nuestra comprensi&#xF3;n de los acontecimientos biol&#xF3;gicos in vitro e in vivo en el estudio de la progresi&#xF3;n de la enfermedad. Recientemente, en estudios in vitro con transferencia de energ&#xED;a F&#xF6;rster resonancia (FRET) han demostrado que los RhoGTPases protot&#xED;picos Cdc42, Rac y RhoA es temporal y espacialmente sincronizada durante la migraci&#xF3;n celular, con protrusi&#xF3;n inducci&#xF3;n inicial de RhoA actividad previa a la activaci&#xF3;n de Rac. Esta simult&#xE1;nea FRET enfoque ilustra el estricto control y regulaci&#xF3;n din&#xE1;mica de la actividad RhoGTPase necesaria para la migraci&#xF3;n de c&#xE9;lulas in vitro coordinada. En este caso, hablamos de nuestro trabajo reciente que utiliza Flim-FRET an&#xE1;lisis en un entorno tridimensional para revelar otra capa de regulaci&#xF3;n en la que se rige la actividad de RhoA por el microambiente extracelular. Se demuestra que RhoA es espacialmente regulado en fracciones separadas de la actividad a la vanguardia y la parte trasera de las c&#xE9;lulas durante la invasi&#xF3;n in vivo o dentro de matrices tridimensionales. Cabe destacar que esta regulaci&#xF3;n espacial de RhoA estuvo ausente en dos dimensiones en entornos in vitro. Esta distinta subcelular regulaci&#xF3;n de RhoA en los polos de invadir las c&#xE9;lulas en tres dimensiones sienta un precedente que otros RhoGTPases o prote&#xED;nas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n tambi&#xE9;n pueden ser regulados diferencialmente de manera con-texto-dependiente durante los procesos biol&#xF3;gicos clave, como la invasi&#xF3;n.

Flim-FRET im&#xE1;genes in vivo revela 3D y el medio ambiente espacialmente regula la actividad RhoGTPase Durante la invasi&#xF3;n de c&#xE9;lulas cancer&#xED;genas

Viele konzeptionelle Fortschritte in der Biologie wurden durch experimentelle Untersuchungen mit planaren zweidimensionalen Zellkultursysteme erreicht. Den letzten Anpassungen molekularer Techniken zur dreidimensionalen Modellsysteme sind die L&uuml;cke in unserem Verst&auml;ndnis der biologischen Ereignisse in vitro und in vivo Studie des Krankheitsfortschritts &uuml;berbr&uuml;cken. Vor kurzem, in-vitro-Studien mit F&ouml;rster-Resonanz-Energie-Transfer (FRET) zufolge ist die prototypische RhoGTPases Cdc42, Rac und RhoA zeitlich und r&auml;umlich w&auml;hrend Zellmigration, mit anf&auml;nglichen RhoA-Aktivit&auml;t induzieren Vorsprung vor Aktivierung des Rac synchronisiert werden. Diese gleichzeitige FRET-Ansatz veranschaulicht die strenge Kontrolle und dynamische Regelung der RhoGTPase T&auml;tigkeit f&uuml;r koordinierte Zellmigration in-vitro-notwendig. Hier diskutieren wir unsere j&uuml;ngsten Arbeiten mit FLIM-FRET-Analyse in einer dreidimensionalen Umgebung, um eine weitere Ebene der Verordnung in welche RhoA Aktivit&auml;t extrazellul&auml;rer Mikromilieu unterliegt. Wir zeigen, dass RhoA r&auml;umlich in diskrete Br&uuml;che der T&auml;tigkeit an der Spitze und hinten der Zellen, w&auml;hrend Invasion in-vivo oder in dreidimensionale Matrizen geregelt ist. Bezeichnenderweise diese r&auml;umliche Verordnung von RhoA fehlte in zweidimensionalen in-vitro-Einstellungen. Dieser unterschiedliche subzellulare Regulierung von RhoA an den Polen der Invasionstruppen Zellen in drei Dimensionen einen Pr&auml;zedenzfall, dass andere RhoGTPases oder signalisierende Proteine kann auch differentiell reguliert Con-Text-abh&auml;ngigen Weise w&auml;hrend der wichtigsten biologischen Prozessen wie Einfall.

FLIM-FRET imaging in-vivo zeigt 3D-Umgebung r&auml;umlich regelt RhoGTPase T&auml;tigkeit w&auml;hrend Krebs Zelle Invasion.

Molti progressi concettuali in biologia sono stati ottenuti da studi sperimentali, utilizzando sistemi di coltura planare delle cellule bidimensionali. Recenti adattamenti delle tecniche molecolari di sistemi modello tridimensionale sono colmare il divario nella nostra comprensione degli eventi biologici in vitro e in vivo nello studio della progressione della malattia. Recentemente, studi in vitro usando F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET) hanno dimostrato che il prototipo RhoGTPases Cdc42, Rac e RhoA sono temporalmente e spazialmente sincronizzato durante la migrazione delle cellule, con attivit&agrave; di RhoA iniziale che inducono protrusione prima dell&#39;attivazione di Rac. Questo approccio FRET simultaneo viene illustrato il controllo stretto e regolazione dinamica di RhoGTPase attivit&agrave; necessarie per la migrazione cellulare coordinata in vitro. Qui, discuteremo il nostro recente lavoro utilizzando analisi FLIM-FRET in un ambiente tridimensionale per rivelare un altro strato di regolamento in cui RhoA attivit&agrave; &egrave; disciplinata dal microambiente extracellulare. Dimostriamo che RhoA spazialmente &egrave; regolata in discrete frazioni di attivit&agrave; all&#39;avanguardia e posteriore delle cellule durante l&#39;invasione in vivo o all&#39;interno di matrici tridimensionali. Significativamente, questo regolamento spaziale di RhoA era assente nelle impostazioni in vitro bidimensionale. Questo distinto regolamento subcellulare di RhoA presso i poli di invadere le cellule in tre dimensioni costituisce un precedente che altri RhoGTPases o segnalazione proteine differenzialmente possono anche essere regolata in modo con-testo-dipendente durante i processi biologici fondamentali come invasione.

FLIM-FRET imaging in vivo rivela 3D-ambiente spazialmente regola l&#39;attivit&agrave; di RhoGTPase durante l&#39;invasione delle cellule di cancro.

&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;&#x3001;&#x5E73;&#x9762;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x7CFB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x306F;&#x3001;&#x75BE;&#x60A3;&#x9032;&#x884C;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x4E8B;&#x8C61;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306E;&#x30AE;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30B8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;in vitro&#x8A66;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;RhoGTPases Cdc42&#x306E;&#x3001;Rac&#x304A;&#x3088;&#x3073;RhoA&#x306E;&#x306F;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#xB7;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x524D;&#x306E;Rac&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3078;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x8A98;&#x5C0E;&#x7A81;&#x8D77;&#x3067;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x6642;&#x306B;&#x540C;&#x671F;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306A;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x5354;&#x8ABF;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;RhoGTPase&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;FRET&#x304C;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;RhoA&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x652F;&#x914D;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5225;&#x306E;&#x5C64;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x306E;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3067;FLIM-FRET&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;RhoA&#x306E;&#x304C;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x4FB5;&#x653B;&#x6642;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5185;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A8;&#x30C3;&#x30B8;&#x3068;&#x5F8C;&#x90E8;&#x306B;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x500B;&#x5225;&#x306E;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x3001;RhoA&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x306E;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3067;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;&#x306B;&#x306F;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x4FB5;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x6975;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RhoA&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x72EC;&#x7279;&#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x643A;&#x5E2F;&#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;RhoGTPases&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5DEE;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x9593;&#x306B;CON-&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5148;&#x4F8B;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

FLIM-FRET&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30DC;&#x3067;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x306E;&#x9593;&#x306B;RhoGTPase&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x7A7A;&#x9593;3&#x6B21;&#x5143;&#x74B0;&#x5883;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

&#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xAC1C;&#xB150;&#xC801; &#xC9C4;&#xBCF4; &#xD3C9;&#xBA74; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xBC95; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAC01; &#xC0C9; &#xD55C; &#xCCB4; &#xC678; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; vivo &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC04;&#xACA9;&#xC744; &#xBA54;&#xC6B0;&#xAE30;&#xB294;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xCCB4; &#xC678; &#xC5F0;&#xAD6C; F&ouml;rster &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6D0;&#xD615; RhoGTPases Cdc42, Rac&#xC640; RhoA &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xBC0F; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC911; &#xB3CC;&#xCD9C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; Rac&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; RhoA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xC2DC; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xAF49; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBC0F; &#xC870;&#xC815;&#xB41C; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; RhoGTPase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xADDC;&#xCE59;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC791;&#xD488; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB294; RhoA &#xD65C;&#xB3D9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; microenvironment&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC728; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xB97C; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC124;&#xC815;&#xC5D0; FLIM-&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB17C;&#xC758; &#xD55C;&#xB2E4;. Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE68;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB610;&#xB294; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBD84;&#xC218;&#xC640; &#xC140;&#xC758; &#xB4B7;&#xBA74;&#xC5D0; RhoA &#xADDC;&#xC81C; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD06C;&#xAC8C;, Rhoa&#xC758; &#xACF5;&#xAC04; &#xADDC;&#xC815;&#xC774; &#xACB0; &#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE68;&#xC785; &#xD558;&#xB294; 3 &#xCC28;&#xC6D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140;&#xC758; &#xC804;&#xADF9;&#xC5D0;&#xC11C; Rhoa&#xC758; sub-cellular &#xADDC;&#xC815; &#xC124;&#xC815; &#xC120;&#xB840;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; RhoGTPases &#xB610;&#xB294; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC774; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xADDC;&#xC81C; &#xCF58; &#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE68;&#xACF5; &#xB4F1; &#xD575;&#xC2EC; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xB3D9;&#xC548;.

FLIM-&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1D;&#xD600; 3D &#xD658;&#xACBD; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE68;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; RhoGTPase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

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Ewan J. Mcghee

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