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Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1  While microcontact printing ...

Washington University in St. Louis

&#x968F;&#x673A;&#x7A81;&#x53D8;&#x5927;&#x7535;&#x5BFC; &#xFF08;MscL&#xFF09; &#x52A0;&#x4E0A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5C4F;&#x5E55;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x901A;&#x9053;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;&#x62DF;&#x8BAE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x6A21;&#x578B;&#x6D47;&#x6CE8;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x4E92;&#x8865;&#x4E92;&#x52A8;&#x8FDB;&#x884C;&#x8FC7;&#x8BC4;&#x4F30;&#xFF0C;&#x548C;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x533A;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x663E;&#x8457;&#x6539;&#x53D8;&#x9891;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5927;&#x91CF;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x62DF;&#x8BAE;&#x7684; S1 &#x87BA;&#x65CB;&#x7EBF;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6709;&#x51E0;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;&#x4F7F; MscL &#x66F4;&#x96BE;&#x4EE5;&#x95E8;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x8868;&#x660E; MscL &#x4E0E;&#x6B8B;&#x7559;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x53CC;&#x5C42;&#x8102;&#x8D28; headgroups &#x611F;&#x89C9;&#x7D27;&#x5F20;&#x3002;&#x89C1;&#x5230;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x8FDB;&#x5316;&#x8D77;&#x6E90;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x3002;

&#x751F;&#x6210;&#x4E0E;&#x4ECE;&#x5927;&#x7535;&#x5BFC;&#xFF0C;MscL &#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x673A;&#x68B0;&#x6E20;&#x9053;&#x5927;&#x7A81;&#x53D8;&#x5E93;&#x7684;&#x8BC4;&#x4EF7;&#xFF1A; &#x5BF9;&#x901A;&#x9053;&#x95E8;&#x63A7;&#x548C;&#x8FDB;&#x5316;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Random mutagenesis of the mechanosensitive channel of large conductance (MscL) from Escherichia coli coupled with a high-throughput functional screen has provided new insights into channel structure and function. Complementary interactions of conserved residues proposed in a computational model for gating have been evaluated, and important functional regions of the channel have been identified. Mutational analysis shows that the proposed S1 helix, despite having several highly conserved residues, can be heavily mutated without significantly altering channel function. The pattern of mutations that make MscL more difficult to gate suggests that MscL senses tension with residues located near the lipid headgroups of the bilayer. The range of phenotypical changes seen has implications for a proposed model for the evolutionary origin of mechanosensitive channels.

Generation and evaluation of a large mutational library from the Escherichia coli mechanosensitive channel of large conductance, MscL: implications for channel gating and evolutionary design.

Mutagen&#xE8;se al&#xE9;atoire du canal m&#xE9;cano de grande conductance (MscL) d&#x26;#39;Escherichia coli associ&#xE9;s &#xE0; un &#xE9;cran haute-d&#xE9;bit fonctionnelle a fourni de nouvelles perspectives dans la structure et la fonction de canal. Interactions compl&#xE9;mentaires de r&#xE9;sidus conserv&#xE9;s propos&#xE9;es dans un mod&#xE8;le de calcul pour ouverture de porte ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;valu&#xE9;s, et d&#x26;#39;importantes r&#xE9;gions fonctionnelles du canal ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s. L&#x26;#39;analyse des mutations montre que l&#x26;#39;h&#xE9;lice propos&#xE9;e S1, malgr&#xE9; plusieurs r&#xE9;sidus hautement conserv&#xE9;s, peuvent &#xEA;tre fortement mut&#xE9; sans alt&#xE9;rer de mani&#xE8;re significative la fonction du canal. Le motif de mutations qui MscL plus difficile &#xE0; grille indique que la tension MscL sens avec les r&#xE9;sidus situ&#xE9;s &#xE0; proximit&#xE9; des groupes de t&#xEA;te de la bicouche lipidique. La gamme de changements ph&#xE9;notypiques observ&#xE9;es a des implications pour un mod&#xE8;le propos&#xE9; pour l&#x26;#39;origine &#xE9;volutive des canaux m&#xE9;canosensibles.

G&#xE9;n&#xE9;ration et de l&#x26;#39;&#xE9;valuation d&#x26;#39;une grande biblioth&#xE8;que mutationnelle de la Manche Escherichia coli m&#xE9;canosensibles de grande conductance, MscL: Implications pour Gating Manche et la conception &#xE9;volutive

Generierung und Auswertung einer gro&#xDF;en Mutations-Bibliothek aus dem Escherichia coli mechanosensitiven Kanal mit gro&#xDF;er Leitf&#xE4;higkeit, MsCl: Implikationen f&#xFC;r die Kanal-Gating und evolution&#xE4;res Design.

Mutagenesi casuale del canale mechanosensitive di grande conduttanza (MscL) da Escherichia coli, accoppiato con un alto-rendimento funzionale schermo ha fornito nuove intuizioni canale struttura e funzione. Sono state valutate le interazioni complementari dei residui conservati proposti in un modello computazionale per gating e importanti regioni funzionali del canale sono stati identificati. Analisi mutazionale dimostra che l&#39;elica S1 proposta, pur avendo diversi residui altamente conservati, pu&ograve; essere pesantemente mutata senza alterare significativamente la funzione di canale. Il pattern di mutazioni che rendono pi&ugrave; difficile al cancello di MscL suggerisce che MscL rileva tensioni con residui situati vicino i headgroups dei lipidi del doppio strato. La gamma di variazioni fenotipiche visto ha implicazioni per un modello proposto per l&#39;origine evolutiva dei canali mechanosensitive.

Generazione e valutazione di una grande biblioteca mutazionale dal canale Escherichia coli mechanosensitive di grande conduttanza, MscL: implicazioni per la progettazione di controllo ed evolutivo di canale.

&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068;&#x76F8;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x200B;&#x200B;&#xFF08;MSCL&#xFF09;&#x306E;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x9818;&#x57DF;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;S1&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x304C;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;MSCL&#x304C;&#x3088;&#x308A;&#x56F0;&#x96E3;&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;headgroups&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3068;&#x305D;&#x306E;MSCL&#x611F;&#x899A;&#x306E;&#x7DCA;&#x5F35;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x8D77;&#x6E90;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xB7;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x542B;&#x610F;&#xFF1A;&#x5927;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x200B;&#x200B;&#x3001;MSCL&#x304B;&#x3089;&#x5927;&#x5909;&#x7570;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3068;&#x8A55;&#x4FA1;

&#xC784;&#xC758;&#xC758; mutagenesis &#xD070; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; (MscL) &#xB192;&#xC740; &#xC2A4;&#xB8E8;&#xD48B; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD654;&#xBA74;&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; mechanosensitive &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xCC44;&#xB110; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xC804;&#xC0B0; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xBCF4;&#xC644; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC601;&#xC5ED; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Mutational &#xBD84;&#xC11D; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB192;&#xC740; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; S1 &#xB098;&#xC120; &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xBB34; &#xAC81; &#xAC8C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. MscL &#xAC8C;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB354; &#xC5B4;&#xB835;&#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD328;&#xD134;&#xC740; MscL &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC740; bilayer &#xC9C0;&#xC9C8; headgroups &#xBD80;&#xADFC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7A5;&#xB825;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF8; phenotypical &#xBCC0;&#xACBD; &#xBC94;&#xC704;&#xB294; mechanosensitive &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654; &#xADFC;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC758;&#xBBF8;&#xB97C; &#xAC16;&#xB294;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xB300;&#xC640; &#xD070; &#xC804;&#xB3C4;&#xC131;, Mscl&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; mechanosensitive &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xD615; mutational &#xB3C4;&#xC11C;&#xAD00;&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00;: &#xCC44;&#xB110; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBC0F; &#xC9C4;&#xD654; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC758;&#xBBF8;.

Mutag&#xE9;nesis aleatoria del canal mecanosensible de gran conductancia (MsCl) de Escherichia coli, junto con una evaluaci&#xF3;n funcional de alto rendimiento ha proporcionado nuevos conocimientos sobre la estructura y la funci&#xF3;n del canal. Interacciones complementarias de residuos conservados propuestas en un modelo computacional para gating han sido evaluadas, y de importantes regiones funcionales del canal han sido identificados. El an&#xE1;lisis mutacional muestra que la h&#xE9;lice S1 propuesto, a pesar de tener varios residuos altamente conservados, pueden ser fuertemente mutado sin alterar significativamente la funci&#xF3;n del canal. El patr&#xF3;n de mutaciones que hacen m&#xE1;s dif&#xED;cil MsCl puerta sugiere que la tensi&#xF3;n sentidos MsCl con residuos situados cerca de los grupos de cabeza de l&#xED;pidos de la bicapa. La gama de cambios fenot&#xED;picos observados tiene implicaciones para una propuesta de modelo para el origen evolutivo de los canales de mecanosensibles.

Generaci&#xF3;n y Evaluaci&#xF3;n de una biblioteca grande mutacional del Canal de la Escherichia Coli mecanosensibles de gran conductancia, MsCl: Implicaciones para el canal gating y dise&#xF1;o evolutivo

&#x603B;&#x5316;&#x5B66;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; (Ec-MscL&#xFF09; &#x548C;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC; (Tb-MscL&#xFF09; &#x751F;&#x6210; multimilligram &#x5927;&#x7535;&#x5BFC;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x3002;&#x5B9E;&#x884C;&#x5141;&#x8BB8;&#x5316;&#x5B66;&#x7ED3;&#x624E;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x88AB;&#x8499;&#x7248;&#x4E0E;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x65E0;&#x529F;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x4FA7;&#x94FE;&#x529F;&#x80FD;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x3002;&#x5408;&#x6210;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230; 2,2,2-&#x4E09;&#x6C1F;&#x4E59;&#x9187;&#x548C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x8FDB;&#x5165;&#x56CA;&#x6CE1;&#x819C;&#x3002;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x8868;&#x660E;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D;&#x819C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x5F55;&#x97F3;&#x663E;&#x793A;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5408;&#x6210; Ec MscL &#x6709;&#x7535;&#x5BFC;&#x3001; &#x538B;&#x529B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E0E; substate &#x5206;&#x5E03;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#x540E;&#x7684;&#x5408;&#x6210; Tb MscL &#x8FD8;&#x663E;&#x793A;&#x7535;&#x5BFC;&#x548C;&#x538B;&#x529B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5408;&#x6210;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x975E;&#x5929;&#x7136;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#xFF0C;&#x7EB3;&#x5165;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x3002;

&#x603B;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x5408;&#x6210;&#x4E0E;&#x673A;&#x68B0;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x548C;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;

Total chemical protein synthesis was used to generate multimilligram quantities of the mechanosensitive channel of large conductance from Escherichia coli (Ec-MscL) and Mycobacterium tuberculosis (Tb-MscL). Cysteine residues introduced to allow chemical ligation were masked with cysteine-reactive molecules, resulting in side chain functional groups similar to those of the wild-type protein. Synthetic channel proteins were transferred to 2,2,2-trifluoroethanol and reconstituted into vesicle membranes. Fluorescent imaging of vesicles showed that channel proteins were membrane-localized. Single-channel recordings showed that reconstituted synthetic Ec-MscL has conductance, pressure dependence, and substate distribution similar to those of the recombinant channel. Reconstituted synthetic Tb-MscL also displayed conductance and pressure dependence similar to that of the recombinant protein. Possibilities for the incorporation of unnatural amino acids and biophysical probes, and applications of such synthetic ion channel analogs, are discussed.

Total chemical synthesis and electrophysiological characterization of mechanosensitive channels from Escherichia coli and Mycobacterium tuberculosis.

Totale la synth&#xE8;se des prot&#xE9;ines produit chimique a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour g&#xE9;n&#xE9;rer des quantit&#xE9;s multimilligram du canal m&#xE9;cano de grande conductance d&#x26;#39;Escherichia coli (EC-MscL) et Mycobacterium tuberculosis (TB-MscL). R&#xE9;sidus cyst&#xE9;ine introduite pour permettre une ligature chimique ont &#xE9;t&#xE9; masqu&#xE9;s par la cyst&#xE9;ine-r&#xE9;actifs mol&#xE9;cules, r&#xE9;sultant en groupes de cha&#xEE;nes lat&#xE9;rales fonctionnelles similaires &#xE0; celles de la prot&#xE9;ine de type sauvage. Prot&#xE9;ines des canaux de synth&#xE8;se ont &#xE9;t&#xE9; transf&#xE9;r&#xE9;s &#xE0; 2,2,2-trifluoro&#xE9;thanol et reconstitu&#xE9; dans des membranes des v&#xE9;sicules. L&#x26;#39;imagerie de fluorescence des v&#xE9;sicules a montr&#xE9; que des prot&#xE9;ines des canaux &#xE9;taient membrane localis&#xE9;e. Monocanal enregistrements montre que reconstitu&#xE9; synth&#xE9;tique Ec-MscL a la conductance, la d&#xE9;pendance de pression, et la distribution sous-&#xE9;tat similaire &#xE0; ceux de la cha&#xEE;ne recombinante. Reconstitu&#xE9; synth&#xE9;tique Tb-MscL &#xE9;galement affich&#xE9; la conductance et la d&#xE9;pendance de pression similaire &#xE0; celle de la prot&#xE9;ine recombinante. Possibilit&#xE9;s pour l&#x26;#39;incorporation de acides amin&#xE9;s non naturels et des sondes biophysiques, et les applications de ces analogues synth&#xE9;tiques de canaux ioniques, sont discut&#xE9;s.

Synth&#xE8;se chimique totale et caract&#xE9;risation &#xE9;lectrophysiologique des canaux m&#xE9;canosensibles partir d&#x26;#39;Escherichia coli et Mycobacterium tuberculosis

Insgesamt chemische Synthese und elektrophysiologische Charakterisierung von mechanosensitiven Kan&#xE4;le aus Escherichia coli und Mycobacterium tuberculosis.

Sintesi chimica di proteine totali &egrave; stato utilizzato per generare quantit&agrave; multimilligram del canale mechanosensitive di conduttanza grande da Escherichia coli (Ec-MscL) e Mycobacterium tuberculosis (Tb-MscL). Residui di cisteina introdotti per consentire legatura chimica erano mascherati con molecole di cisteina-reattive, con conseguente lato catena gruppi funzionali analoghe a quelle della proteina wild-type. Le proteine canale sintetico furono trasferite a 2,2,2-trifluoroethanol e ricostituite in membrane della vescicola. Imaging fluorescenti delle vescicole ha mostrato che le proteine canale sono stati localizzati a membrana. Single-channel registrazioni hanno dimostrato che ricostituito sintetici CE-MscL ha conduttanza, dipendenza dalla pressione e distribuzione substatale simili a quelli del canale ricombinante. Tb-MscL sintetici ricostituiti anche visualizzato conduttanza e la dipendenza di pressione simile a quella della proteina ricombinante. Possibilit&agrave; per l&#39;incorporazione di amminoacidi innaturali e sonde biofisiche e applicazioni di tali analoghi canali ioni sintetici, sono discussi.

Totale sintesi chimica e caratterizzazione elettrofisiologica dei canali mechanosensitive da Escherichia coli e Mycobacterium tuberculosis.

&#x5168;&#x5316;&#x5B66;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#xFF08;EC-MSCL&#xFF09;&#x3068;&#x7D50;&#x6838;&#xFF08;TB-MSCL&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x200B;&#x200B;&#x306E;multimilligram&#x91CF;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B2;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5074;&#x9396;&#x5B98;&#x80FD;&#x57FA;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x5206;&#x5B50;&#x3067;&#x30DE;&#x30B9;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5408;&#x6210;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;2,2,2  - &#x30C8;&#x30EA;&#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30ED;&#x30A8;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x79FB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x819C;&#x306B;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x80DE;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x819C;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#xB7;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#xB7;&#x30EC;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5408;&#x6210;EC-MSCL&#x306F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;&#x5727;&#x529B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x30B5;&#x30D6;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002; TB-MSCL&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5408;&#x6210;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x5727;&#x529B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x975E;&#x5929;&#x7136;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x6DF7;&#x5165;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5408;&#x6210;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x8AAC;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3084;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x5316;&#x5B66;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;

&#xCD1D; &#xD654;&#xD559; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xB294; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; (Ec MscL) &#xBC0F; Mycobacterium &#xACB0;&#xD575; (Tb MscL)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD070; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4;&#xC758; mechanosensitive &#xCC44;&#xB110; multimilligram &#xC591;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD654;&#xD559; &#xACB0; &#xCC30; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xB3C4;&#xC785; &#xCE21;&#xBA74; &#xCCB4;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC83;&#xACFC; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xBD84;&#xC790; &#xCDE8;&#xAE09; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD569;&#xC131; &#xCC44;&#xB110; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2,2,2 trifluoroethanol&#xB85C; &#xC804;&#xC1A1; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;. &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; vesicles&#xC758; &#xCC44;&#xB110; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB9C9; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xB179;&#xC74C; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;&#xB41C; &#xD569;&#xC131; Ec Mscl&#xB294; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4;, &#xC555;&#xB825; &#xC758;&#xC874; &#xBC0F; substate &#xBC30;&#xD3EC; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAC83;&#xACFC; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;&#xB41C; &#xD569;&#xC131; Tb MscL &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC555;&#xB825; &#xC758;&#xC874;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD80;&#xC790;&#xC5F0; &#xC2A4;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC124;&#xB9BD;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xD569;&#xC131; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD1D; &#xD654;&#xD559; &#xD569;&#xC131;&#xACFC; mechanosensitive &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; electrophysiological &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;.

La s&#xED;ntesis total de prote&#xED;nas qu&#xED;mico se utiliz&#xF3; para generar cantidades multimilligram del canal mecanosensible de gran conductancia de Escherichia coli (EC-MsCl) y Mycobacterium tuberculosis (TB-MsCl). Los residuos de ciste&#xED;na introducido para permitir la ligaci&#xF3;n qu&#xED;mica fueron enmascarados con mol&#xE9;culas reactivas en ciste&#xED;na, resultando en grupos de cadena lateral funcionales similares a las de la prote&#xED;na de tipo salvaje. Prote&#xED;nas sint&#xE9;ticas canal se transfirieron a 2,2,2-trifluoroetanol y se reconstituy&#xF3; en las membranas de ves&#xED;culas. Imagen fluorescente de ves&#xED;culas mostraron que las prote&#xED;nas de los canales fueron membrana localizada. Monocanal grabaciones mostraron que reconstituida sint&#xE9;tico Ec-MsCl tiene conductancia, dependencia de la presi&#xF3;n, y subestatales distribuci&#xF3;n similar a las del canal recombinante. Reconstituido sint&#xE9;tico Tb-MsCl tambi&#xE9;n muestra la dependencia de la conductancia y presi&#xF3;n similar a la de la prote&#xED;na recombinante. Las posibilidades para la incorporaci&#xF3;n de amino&#xE1;cidos no naturales y las sondas biof&#xED;sicos, y las aplicaciones de estos an&#xE1;logos sint&#xE9;ticos de los canales i&#xF3;nicos, se discuten.

S&#xED;ntesis qu&#xED;mica total y caracterizaci&#xF3;n electrofisiol&#xF3;gica de los canales de mecanosensibles de Escherichia coli y Mycobacterium tuberculosis

&#x7845;&#x7247;&#x7684;&#x516B;&#x4E2A;&#x5355;&#x72EC;&#x53EF;&#x5BFB;&#x5740;&#x8D85;&#x5FAE;&#x578B;&#x5B54;&#x7528;&#x4E8E;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x91CD;&#x6784;&#x548C;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x5F55;&#x97F3;&#x3002;&#x81EA;&#x65CB;&#x5BF9;&#x542B;&#x6C1F;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E86;&#x6BD4;&#x7845;&#x70F7;&#x66F4;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x7EDD;&#x7F18;&#x3001; &#x758F;&#x6C34;&#x63A5;&#x53E3;&#x3002;&#x603B;&#x7535;&#x5BB9;&#x7684;&#x819C;&#x662F; &lt; 10 pF&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5B83;&#x6613;&#x4E8E;&#x7535;&#x5BB9;&#x53D8;&#x5316;&#x4E2D; 50-250 microm &#x76F4;&#x5F84;&#x5B54;&#x7684;&#x6613;&#x7528;&#x6027;&#x548C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x53CC;&#x5C42;&#x5F62;&#x6210; &#xFF1B; &#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x6D4B;&#x8BD5;&#xFF0C;&#x6765;&#x8BC4;&#x4F30;&#x53CC;&#x5C42;&#x5F62;&#x6210;&#x53EA;&#x6709;&#x90A3;&#x4E9B; &gt; 100 microm &#x5BFC;&#x81F4;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x53CC;&#x5C42;&#x88AB;&#x5F62;&#x6210;&#x652F;&#x6301;&#x5C42;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x8102;&#x8D28;&#x5728;&#x7528;&#x753B;&#x7B14; &#xFF1B; decane &#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7136;&#x540E;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6DFB;&#x52A0;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x5C42;&#x7684;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x9632;&#x6B62;&#x84B8;&#x53D1;&#x3002;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x4E95;&#x5EFA;&#x73BB;&#x7483;&#x677F;&#x6750;&#x6613;&#x4E8E;&#x7EC4;&#x88C5;&#x548C;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x6D41;&#x4F53;&#x7684;&#x6D41;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7814;&#x7A76;&#x5229;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x8840;&#x8102;&#x548C;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x5305;&#x62EC;&#x53EF;&#x9006;&#x4FDD;&#x7A0E;&#x7684;&#x7845;&#x6A61;&#x80F6; (PDMS)&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x4F7F;&#x6574;&#x4E2A;&#x8BBE;&#x5907;&#x80FD;&#x591F;&#x6D17;&#x51C0;&#x5E76;&#x91CD;&#x7528;&#x3002;&#x603B;&#x7535;&#x6C14;&#x566A;&#x58F0;&#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#x662F;&#x8DB3;&#x591F;&#x4F4E;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x5141;&#x8BB8;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x51B3;&#x8BAE;&#x3002;&#x6210;&#x529F;&#x901A;&#x9053;&#x63D2;&#x5165;&#x4E86;&#x89C2;&#x5BDF;&#x4E0E;&#x81EA;&#x6211;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x8F7D;&#x4F53; (alamethicin) &#x4EE5;&#x53CA;&#x590D;&#x6742;&#x3001; &#x56CA;&#x6CE1;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x901A;&#x9053; &#xFF08;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;GlyR&#xFF09;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x53CC;&#x5C42;&#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x79CD;&quot;&#x514D;&#x63D0;&#x5F0F;&quot;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6EB6;&#x5242;&#x4E2D;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x65CB;&#x8F6C;&#x6D82;&#x5C42;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x6676;&#x5706;&#x7247;&#x3001; &#x6652;&#x5E72;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&quot;&#x4E09;&#x660E;&#x6CBB;&quot;&#x7684;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x4E0A;&#x9762;&#x548C;&#x4E0B;&#x9762;&#x7684;&#x6C2E;&#x5316;&#x5C42;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x7535;&#x6C14;&#x6027;&#x80FD;&#x7B26;&#x5408;&#x53CC;&#x5C42;&#x53D1;&#x73B0;&#x548C;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E86; alamethicin &#x5F55;&#x97F3;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E0D;&#x517C;&#x5BB9;&#x4E0E;&#x56CA;&#x6CE1;&#x542B;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x3002;

&#x91CD;&#x6784;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x5728;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x652F;&#x6301;&#x7845;&#x7A8D;&#x3002;

A silicon wafer with eight individually addressable microfabricated orifices was used for ion channel reconstitution and single-channel recording. A spin-on fluoropolymer created an insulating, hydrophobic interface that was more stable than silane. Total capacitance of the membranes was <10 pF, making it easy to evaluate bilayer formation by capacitance change. Orifices of 50-250 microm diameter were tested for ease and stability of bilayer formation; only those >100 microm resulted in ion channel function. Bilayers were formed over an agarose supporting layer by application of lipid in decane with a paintbrush; a second layer of agarose could then be added to stabilize the structure and prevent evaporation. Microfluidic wells were constructed on glass plates for ease of assembly and visualization of fluid flow, as well as high-resolution microscopy for studies using fluorescent lipids and channels. The microfluidics consisted of reversibly bonded silicone rubber (PDMS), so that the entire device could be washed and reused. Total electrical noise in the device was low enough to permit single-channel resolution. Successful channel insertions were observed with a self-assembling ionophore (alamethicin) as well as a complex, vesicle-associated mammalian channel (human glycine receptor, GlyR). A "hands-free" approach to bilayer formation was also tested, where lipid in solvent was applied to the wafer by spin-coating, dried, and then "sandwiched" between layers of agarose above and below the nitride. Electrical properties consistent with bilayers were observed and alamethicin recordings were obtained, however this method is not compatible with the fusion of vesicles containing mammalian channels.

Reconstitution of ion channels in agarose-supported silicon orifices.

Une plaquette de silicium avec huit orifices adressables individuellement microfabriqu&#xE9;s est utilis&#xE9;e pour la reconstitution de canal ionique et un seul canal d&#x26;#39;enregistrement. Un spin-sur fluoropolym&#xE8;re cr&#xE9;&#xE9; un isolant, l&#x26;#39;interface hydrophobe qui a &#xE9;t&#xE9; plus stable que le silane. La capacit&#xE9; totale des membranes &#xE9;tait &#x26;lt;10 pF, ce qui rend facile &#xE0; &#xE9;valuer la formation bicouche par le changement de capacit&#xE9;. Les orifices de diam&#xE8;tre de 50-250 microm&#xE8;tre ont &#xE9;t&#xE9; test&#xE9;s pour la facilit&#xE9; et la stabilit&#xE9; de la formation bicouche, seulement ceux&#x26;gt; 100 microm abouti &#xE0; la fonction du canal ionique. Bicouches sont form&#xE9;es sur une couche d&#x26;#39;agarose support par application de lipide dans le d&#xE9;cane avec un pinceau, une deuxi&#xE8;me couche d&#x26;#39;agarose peut ensuite &#xEA;tre ajout&#xE9; &#xE0; stabiliser la structure et emp&#xEA;cher l&#x26;#39;&#xE9;vaporation. Microfluidique puits ont &#xE9;t&#xE9; construits sur des plaques de verre pour faciliter l&#x26;#39;assemblage et la visualisation de l&#x26;#39;&#xE9;coulement du fluide, ainsi que microscopie &#xE0; haute r&#xE9;solution pour les &#xE9;tudes utilisant des lipides fluorescents et des canaux. Les microfluidique compos&#xE9; de caoutchouc de silicone de fa&#xE7;on r&#xE9;versible li&#xE9; (PDMS), de telle sorte que l&#x26;#39;ensemble du dispositif peut &#xEA;tre lav&#xE9; et r&#xE9;utilis&#xE9;. Totale de bruit &#xE9;lectrique dans le dispositif &#xE9;tait suffisamment faible pour permettre &#xE0; canal unique de r&#xE9;solution. Insertions de canal re&#xE7;us ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e avec un ionophore auto-assemblante (alam&#xE9;thicine) ainsi que d&#x26;#39;un complexe, des v&#xE9;sicules canal associ&#xE9; mammif&#xE8;re (humaine glycine r&#xE9;cepteur, GlyR). Un &#xAB;mains libres&#xBB; en mati&#xE8;re de formation bicouche a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; test&#xE9;, o&#xF9; des lipides dans un solvant a &#xE9;t&#xE9; appliqu&#xE9; &#xE0; la tranche par spin-coating, s&#xE9;ch&#xE9;, puis en &#x26;quot;sandwich&#x26;quot; entre les couches d&#x26;#39;agarose ci-dessus et en dessous du nitrure. Les propri&#xE9;t&#xE9;s &#xE9;lectriques compatibles avec les bicouches ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s et les enregistrements ont &#xE9;t&#xE9; obtenus alam&#xE9;thicine, mais cette m&#xE9;thode n&#x26;#39;est pas compatible avec la fusion des v&#xE9;sicules contenant des canaux de mammif&#xE8;res.

Reconstitution des canaux ioniques dans des orifices de silicium Agarose soutenus par

Eine Silizium-Wafer mit acht einzeln adressierbare Microfabricated &Ouml;ffnungen wurde f&uuml;r Einkanal-Aufnahme und Ion Kanal Rekonstitution verwendet. Ein Spin-on Fluorpolymer erstellt eine isolierende, Hydrophobe Oberfl&auml;che, die stabiler als Silan war. Gesamt Kapazit&auml;t der Membranen wurde &lt; 10 pF, erleichtert das auswerten Bilayer bildung kapazitiv &auml;ndern. K&ouml;rper&ouml;ffnungen 50-250 Microm durchmesser f&uuml;r leichtigkeit und stabilit&auml;t Bilayer-formation; getestet wurden nur diejenigen &gt; 100 Microm resultierte in Ionen-Kanal-Funktion. Doppelschichten bildeten sich durch Anwendung von Lipid in Decan mit einem Pinsel &uuml;ber eine Agarose Schicht zu unterst&uuml;tzen; eine zweite Schicht Agarose konnte dann hinzugef&uuml;gt werden, stabilisieren die Struktur und Verdunstung zu verhindern. Mikrofluidische Brunnen wurden auf Glasplatten f&uuml;r einfache Montage und Visualisierung der Fl&uuml;ssigkeitsstr&ouml;mung sowie hochaufl&ouml;sende Mikroskopie f&uuml;r Studien mit fluoreszierenden Lipiden und Kan&auml;le gebaut. Die Mikrofluidik bestand umkehrbar geklebte Silikonkautschuk (PDMS), so dass das gesamte Ger&auml;t gewaschen und wiederverwendet werden konnte. Gesamt elektrisches Rauschen im Ger&auml;t war niedrig genug, um Einkanal-Aufl&ouml;sung zu erm&ouml;glichen. Erfolgreiche Kanal Einf&uuml;gungen wurden mit einem selbstorganisierende Ionophor (Alamethicin) sowie einen komplexen, Vesikel-assoziiertes S&auml;ugetier-Kanal (menschliche Glycin-Rezeptor, GlyR) beobachtet. Ein &quot;Hands-free&quot; Ansatz Bilayer-Formation wurde auch getestet, wo Lipid in L&ouml;sungsmittel wurde angewandt auf den Wafer durch Spin-Coating, getrocknet und dann &quot;eingequetscht&quot; zwischen Schichten von Agarose oben und unten das Nitrid. Einklang mit Doppelschichten elektrische Eigenschaften wurden beobachtet und Alamethicin Aufnahmen wurden erzielt, diese Methode ist jedoch nicht kompatibel mit der Fusion von Vesikeln, S&auml;ugetier-Kan&auml;le enth&auml;lt.

Rekonstitution von Ionenkan&auml;len in Agarose-unterst&uuml;tzte Silizium K&ouml;rper&ouml;ffnungen.

Un wafer di silicio con otto microfabricated individualmente indirizzabili orifizi &egrave; stato utilizzato per la ricostituzione del canale ionico e registrazione monocanale. Un fluoropolimero spin-on creato un&#39;interfaccia isolante, idrorepellente che era pi&ugrave; stabile rispetto silani. Capacit&agrave; totale delle membrane &egrave; stato &lt; pF 10, rendendo pi&ugrave; semplice valutare la formazione di doppio strato di capacitanza cambiamento. orifizi del diametro di 50-250 microm sono stati testati per la facilit&agrave; e la stabilit&agrave; della formazione del doppio strato; solo quelli &amp;gt; 100 microm portato in funzione dei canali ionici. Bilayer si formarono sopra un&#39;agarosi strato di supporto di applicazione di lipidi in decano (idrocarburo) con un pennello; un secondo strato di agarosio potrebbe quindi essere aggiunto per stabilizzare la struttura e prevenire l&#39;evaporazione. Microfluidica pozzi sono stati costruiti su lastre di vetro per la facilit&agrave; di montaggio e visualizzazione del flusso del fluido, cos&igrave; come la microscopia ad alta risoluzione per gli studi che utilizzano canali e lipidi fluorescente. La microfluidica consisteva reversibilmente legato gomma di silicone (PDMS), cos&igrave; che l&#39;intero dispositivo potrebbe essere lavato e riutilizzato. Rumore elettrico totale nel dispositivo era abbastanza basso per consentire la risoluzione del singolo canale. Inserimenti di successo del canale sono stati osservati con un auto-assemblanti ionoforo (alamethicin) cos&igrave; come un complesso, vescicola-associato canale dei mammiferi (recettore umano glicina, GlyR). &Egrave; stato testato anche un approccio &quot;hands-free&quot; per la formazione del doppio strato, dove lipidi in solvente era applicato a wafer di spin-coating, essiccato e poi &quot;sandwich&quot; tra strati di agarosio sopra e sotto il nitruro. Sono state osservate propriet&agrave; elettriche coerenti con bilayer e alamethicin registrazioni sono stati ottenuti, tuttavia questo metodo non &egrave; compatibile con la fusione delle vescicole contenenti canali dei mammiferi.

Ricostituzione dei canali ionici in orifizi silicio supportati da agarosi.

8&#x500B;&#x3005;&#x306B;&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30B9;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5FAE;&#x7D30;&#x52A0;&#x5DE5;&#x30AA;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30B9;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30EA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30A6;&#x30A7;&#x30FC;&#x30CF;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8A18;&#x9332;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30AA;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E9;&#x30F3;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x7D76;&#x7E01;&#x3001;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x819C;&#x306E;&#x7DCF;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306F;&#x3001;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x26;lt;10 pF&#x306E;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 50&#x304B;&#x3089;250&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x5F84;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x3057;&#x3084;&#x3059;&#x3055;&#x3068;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x8A66;&#x9A13;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x306E;&#x307F;&#x26;gt; 100&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x3001;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x306F;&#x3001;&#x7D75;&#x7B46;&#x3068;&#x30C7;&#x30AB;&#x30F3;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AC;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x652F;&#x6301;&#x5C64;&#x4E0A;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;;&#x30A2;&#x30AC;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306E;&#x5C64;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x84B8;&#x767A;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x306E;&#x4E95;&#x6238;&#x306F;&#x3001;&#x6D41;&#x4F53;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x8102;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7814;&#x7A76;&#x7528;&#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3068;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x677F;&#x4E0A;&#x306B;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x5168;&#x4F53;&#x3092;&#x6D17;&#x6D44;&#x3057;&#x3001;&#x518D;&#x5229;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30B7;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x30B4;&#x30E0;&#xFF08;PDMS&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x7DCF;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x306A;&#x30CE;&#x30A4;&#x30BA;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x4F4E;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#xFF08;&#x30A2;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF09;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5C0F;&#x80DE;&#x95A2;&#x9023;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;&#x30D2;&#x30C8;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;GlyR&#xFF09;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3078;&#x306E; &#x26;quot;&#x30CF;&#x30F3;&#x30BA;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x26;quot;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6EB6;&#x5A92;&#x4E2D;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x3092;&#x4E7E;&#x71E5;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A6;&#x30A7;&#x30FC;&#x30CF;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x7A92;&#x5316;&#x7269;&#x306E;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x30A2;&#x30AC;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5C64;&#x306E;&#x9593;&#x306B; &#x26;quot;&#x631F;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x26;quot;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x96FB;&#x6C17;&#x7279;&#x6027;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x30A2;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30B7;&#x30F3;&#x8A18;&#x9332;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3068;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x30A2;&#x30AC;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B7;&#x30EA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30AA;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30B9;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;

8 &#xAC1C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC5B4;&#xB4DC;&#xB808;&#xC2A4; &#xC9C0;&#xC815; &#xAC00;&#xB2A5; &#xFE59; orifices&#xC640; &#xC2E4;&#xB9AC;&#xCF58; &#xC6E8;&#xC774;&#xD37C;&#xB294; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xB179;&#xD654;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC2A4;&#xD540;-&#xC628; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xD2F1; silane &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; &#xB2E8; &#xC5F4;, &#xC18C;&#xC218; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC758; &#xCD1D; &#xCEE4;&#xD328;&#xC2DC;&#xD134;&#xC2A4;&#xB294; &lt; 10pf &#xCEE4;&#xD328;&#xC2DC;&#xD134;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xD654;. 50-250 microm &#xC9C1;&#xACBD; Orifices &#xC27D;&#xACE0; bilayer &#xD615;&#xC131;;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558; &#xC5EC; bilayer &#xD615;&#xC131; &#xD3C9;&#xAC00;&#xB97C; &#xC27D;&#xAC8C; &#xB4E4;&#xB9CC; &amp;gt; 100 microm &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xB2A5;. Bilayers &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBD93;;&#xC640; decane&#xC5D0;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xB294; agarose&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; agarose&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC99D;&#xBC1C; &#xBC29;&#xC9C0;&#xB97C; &#xCD94;&#xAC00;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xC138; &#xC2A4; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xD615;&#xAD11; &#xC9C0;&#xC9C8;&#xACFC; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xC27D;&#xACE0; &#xC720;&#xCCB4; &#xD750;&#xB984;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC720;&#xB9AC; &#xC811;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xAC74;&#xC124; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC138;&#xCC99; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC218;&#xB97C; microfluidics &#xC5ED; &#xBCF4; &#xC138; &#xC2E4;&#xB9AC;&#xCF58; &#xACE0;&#xBB34; (PDMS)&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD1D; &#xC804;&#xAE30; &#xC7A1;&#xC74C; &#xC18C;&#xC790;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xB0AE;&#xC740;. &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xCC44;&#xB110; &#xC0BD;&#xC785;, &#xC18C;&#xD3EC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xCC44;&#xB110; (&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, GlyR) &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAC16;&#xACE0; ionophore (alamethicin)&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC6A9; &#xB9E4;&#xC5D0;&#xB294; &#xC2A4;&#xD540; &#xCF54;&#xD305; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6E8;&#xC774;&#xD37C;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;, &#xAC74;&#xC870;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &quot;&#xC0CC;&#xB4DC;&#xC704;&#xCE58;&quot;&#xB294; &#xB098;&#xC774;&#xD2B8; &#xB77C; &#xC774;&#xB4DC; &#xC544;&#xB798;&#xC640; &#xC704;&#xC758; agarose&#xC758; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; &#xC0AC;&#xC774; &#xC5B4;&#xB514; bilayer &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &quot;&#xD578; &#xC988; &#xD504;&#xB9AC;&quot; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB3C4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC804;&#xAE30;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131; bilayers&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD588;&#xB2E4; &#xAD00;&#xCC30; &#xBC0F; alamethicin &#xB179;&#xC74C; &#xAC00;&#xC838;&#xC628;,&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; vesicles &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xCC44;&#xB110;&#xC774; &#xB4E4;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xD4E8;&#xC804;&#xC640; &#xD638;&#xD658; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Agarose &#xC9C0;&#xC6D0; &#xC2E4;&#xB9AC;&#xCF58; orifices&#xC5D0; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;.

Una oblea de silicio con ocho orificios microfabricated individualmente direccionables se utiliz&#xF3; para la reconstituci&#xF3;n del canal de iones y la grabaci&#xF3;n de un solo canal. Un spin-on fluoropol&#xED;mero creado un aislante, interfase hidrof&#xF3;bica que era m&#xE1;s estable que el silano. Capacidad total de las membranas fue &#x26;lt;10 pF, por lo que es f&#xE1;cil de evaluar la formaci&#xF3;n de dos capas por el cambio de capacitancia. Los orificios de 50 a 250 micras de di&#xE1;metro fueron probados para la facilidad y la estabilidad de la formaci&#xF3;n de dos capas, y s&#xF3;lo los&#x26;gt; 100 micras resultado en funci&#xF3;n del canal i&#xF3;nico. Bicapas se form&#xF3; sobre una capa de agarosa de apoyo mediante la aplicaci&#xF3;n de l&#xED;pidos en decano con una brocha, una segunda capa de agarosa podr&#xED;a entonces ser a&#xF1;adido para estabilizar la estructura y evitar la evaporaci&#xF3;n. Microfluidic pozos fueron construidos en placas de vidrio para la facilidad de montaje y visualizaci&#xF3;n de flujo de fluido, as&#xED; como microscop&#xED;a de alta resoluci&#xF3;n para los estudios que utilizan l&#xED;pidos fluorescentes y canales. Los microflu&#xED;dica constaba de forma reversible unido caucho de silicona (PDMS), de modo que todo el dispositivo podr&#xED;a ser lavados y reutilizados. Ruido total el&#xE9;ctrica en el dispositivo era lo suficientemente bajo como para permitir un solo canal de resoluci&#xF3;n. El &#xE9;xito de las inserciones de canal se observaron con un ion&#xF3;foro auto-montaje (alamethicin), as&#xED; como un complejo, ves&#xED;cula asociada a canal de mam&#xED;feros (humano receptor de glicina, GlyR). Un &#x26;quot;manos libres&#x26;quot; enfoque a la formaci&#xF3;n de bicapa se ensay&#xF3; tambi&#xE9;n, donde los l&#xED;pidos en disolvente se aplic&#xF3; a la oblea por recubrimiento por rotaci&#xF3;n, se sec&#xF3; y, a continuaci&#xF3;n &#x26;quot;sandwich&#x26;quot; entre las capas de agarosa por encima y por debajo del nitruro. Las propiedades el&#xE9;ctricas consistentes con bicapas se observaron y grabaciones alamethicin se obtuvieron, sin embargo este m&#xE9;todo no es compatible con la fusi&#xF3;n de ves&#xED;culas que contienen canales de mam&#xED;feros.

La reconstituci&#xF3;n de los canales i&#xF3;nicos en la agarosa apoyados por orificios de silicio

&#xD070; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; (MscL)&#xC758; mechanosensitive &#xCC44;&#xB110;&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xB17C;&#xB780;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xACB0;&#xACFC;, &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAD6C;&#xC870;&#xAC00;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: Mycobacterium &#xACB0;&#xD575; &#xCCB4; (Tb), &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xCCB4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, t b-MscL (2OAR)&#xC758; &#xC218;&#xC815; &#xB41C; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xC6D0;&#xB798; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; (1MSL). &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xB098; &#xB780;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xC57C; Tb MscL &#xC6D0;&#xD615; &#x9EC4; &#xBC0F; &#xC6D0;&#xB798; &#xC218;&#xD589;&#xB41C; &#xBD84;&#xC790; &#xC5ED;&#xD559; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; Tb Mscl&#xC758; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5F4; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC758;&#xBBF8;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCEEC; &#xC774;&#xBA70; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; MscL &#xBAA8;&#xB378;&#xACFC; &#xAC1C;&#xC815; &#xB41C; &#xACB0;&#xD575; MscL &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC54C;&#xD30C; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xBC88;&#xB4E4; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xCC44;&#xD0DD; &#xD55C;&#xB2E4;.

MscL &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xAC1C;&#xC815;&#xB41C; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La estructura del dominio C-terminal del canal mecanosensible de gran conductancia (MsCl) ha generado controversia considerable. Como resultado, las estructuras se han propuesto varias para esta regi&#xF3;n: la estructura cristalina original (1MSL) del hom&#xF3;logo Mycobacterium tuberculosis (Tb), un modelo del hom&#xF3;logo de Escherichia coli, y, m&#xE1;s recientemente, una estructura cristalina revisada de Tb-MsCl (2OAR). Para comprender cu&#xE1;les de estas estructuras representa una conformaci&#xF3;n fisiol&#xF3;gica, que mide el impacto de las mutaciones en el dominio C-terminal de la estabilidad t&#xE9;rmica de Tb-MsCl utilizando dicro&#xED;smo circular y realizar simulaciones de din&#xE1;mica molecular de la original y las estructuras de cristal revisadas de Tb- MsCl. Nuestros resultados implican que esta regi&#xF3;n es helicoidal y adopta una conformaci&#xF3;n paquete alfa-helicoidal similar a la observada en el modelo de E. coli y la MsCl revisado Tb-MsCl estructura cristalina.

Confirmaci&#xF3;n de la Revisi&#xF3;n dominio C-terminal de la estructura cristalina MsCl

&#x5927;&#x7535;&#x5BFC; &#xFF08;MscL&#xFF09; &#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x901A;&#x9053;&#x7684; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5F15;&#x8D77;&#x4E86;&#x5DE8;&#x5927;&#x4E89;&#x8BAE;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x8BE5;&#x5730;&#x533A;&#x5DF2;&#x63D0;&#x51FA;&#x51E0;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF1A; &#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x80BA;&#x7ED3;&#x6838;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269; (Tb) &#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x540C;&#x6E90;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;Tb-MscL (2OAR) &#x4FEE;&#x8BA2;&#x540E;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x539F;&#x59CB;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784; (1MSL)&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x6784;&#x8868;&#x793A;&#x751F;&#x7406;&#x6784;&#x8C61;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86; Tb MscL &#x4F7F;&#x7528;&#x5706;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x548C;&#x539F;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x62DF;&#x548C; Tb MscL &#x7684;&#x8BA2;&#x6B63;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x5230;&#x5BF9;&#x70ED;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5730;&#x533A;&#x662F;&#x87BA;&#x65CB;&#x548C;&#x91C7;&#x7528;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; MscL &#x6A21;&#x578B;&#x548C;&#x8BA2;&#x6B63;&#x7684; Tb MscL &#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684; &alpha; &#x87BA;&#x65CB;&#x675F;&#x6784;&#x8C61;&#x3002;

&#x786E;&#x8BA4; MscL &#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x8BA2;&#x6B63;&#x7684; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x3002;

The structure of the C-terminal domain of the mechanosensitive channel of large conductance (MscL) has generated significant controversy. As a result, several structures have been proposed for this region: the original crystal structure (1MSL) of the Mycobacterium tuberculosis homolog (Tb), a model of the Escherichia coli homolog, and, most recently, a revised crystal structure of Tb-MscL (2OAR). To understand which of these structures represents a physiological conformation, we measured the impact of mutations to the C-terminal domain on the thermal stability of Tb-MscL using circular dichroism and performed molecular dynamics simulations of the original and the revised crystal structures of Tb-MscL. Our results imply that this region is helical and adopts an alpha-helical bundle conformation similar to that observed in the E. coli MscL model and the revised Tb-MscL crystal structure.

Confirming the revised C-terminal domain of the MscL crystal structure.

La structure du domaine C-terminal du canal m&#xE9;cano de grande conductance (MscL) a suscit&#xE9; une controverse importante. En cons&#xE9;quence, plusieurs structures ont &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9;es pour cette r&#xE9;gion: la structure cristalline d&#x26;#39;origine (1MSL) de l&#x26;#39;homologue de Mycobacterium tuberculosis (Tb), un mod&#xE8;le de l&#x26;#39;homologue d&#x26;#39;Escherichia coli, et, plus r&#xE9;cemment, une structure cristalline r&#xE9;vis&#xE9;e de Tb-MscL (2OAR). Pour comprendre lequel de ces structures repr&#xE9;sente une conformation physiologique, nous avons mesur&#xE9; l&#x26;#39;impact des mutations dans le domaine C-terminal sur la stabilit&#xE9; thermique de Tb-MscL utilisant le dichro&#xEF;sme circulaire et de r&#xE9;aliser des simulations de dynamique mol&#xE9;culaire de l&#x26;#39;original et les structures cristallines r&#xE9;vis&#xE9;es de Tb- MscL. Nos r&#xE9;sultats impliquent que cette r&#xE9;gion est h&#xE9;lico&#xEF;dal et adopte une conformation en h&#xE9;lice alpha paquet similaire &#xE0; celle observ&#xE9;e dans le mod&#xE8;le E. coli MscL et la structure cristalline r&#xE9;vis&#xE9; Tb-MscL.

Confirmant l&#x26;#39;r&#xE9;vis&#xE9;e domaine C-terminal de la structure cristalline MscL

Die Struktur der C-terminalen Dom&auml;ne des Kanals Mechanosensitive der gro&szlig;en Leitwert (MscL) hat erhebliche Kontroverse erzeugt. Als Ergebnis wurden mehrere Strukturen f&uuml;r diese Region vorgeschlagen: die urspr&uuml;ngliche Kristallstruktur (1MSL) von der Mycobacterium-Tuberkulose-Homolog (Tb), ein Modell der Escherichia coli Homolog, und vor kurzem eine &uuml;berarbeitete Kristallstruktur von Tb-MscL (2OAR). Um zu verstehen, die diese Strukturen eine physiologische Konformation darstellt, messen wir die Auswirkungen von Mutationen der C-terminalen Dom&auml;ne auf die thermische Stabilit&auml;t des Tb-MscL mit Circulardichroismus und ausgef&uuml;hrte Molekulardynamik-Simulationen des Originals und den &uuml;berarbeiteten Kristallstrukturen von Tb-MscL. Unsere Ergebnisse implizieren, dass diese Region Kegelrad und eine Alpha-Kegelrad B&uuml;ndel Konformation &auml;hnlich wie das E. Coli MscL-Modell und die &uuml;berarbeitete Kristallstruktur von Tb-MscL beobachtet nimmt.

Best&auml;tigen die &uuml;berarbeitete C-terminalen Dom&auml;ne des MscL Kristallstruktur.

La struttura del dominio C-terminale del canale mechanosensitive di grande conduttanza (MscL) ha generato notevoli polemiche. Di conseguenza, diverse strutture sono state proposte per questa regione: l&#39;originale struttura di cristallo (1MSL) dell&#39;omologo Mycobacterium tubercolosi (Tb), un modello dell&#39;omologo di Escherichia coli e, pi&ugrave; recentemente, una struttura di cristallo riveduta di Tb-MscL (2OAR). Per capire quale di queste strutture rappresenta una conformazione fisiologica, abbiamo misurato l&#39;impatto delle mutazioni al dominio C-terminale sulla stabilit&agrave; termica di Tb-MscL mediante Dicroismo circolare e dinamica molecolare eseguite simulazioni dell&#39;originale e le strutture di cristallo riveduta di Tb-MscL. I nostri risultati implicano che questa regione &egrave; elicoidale e adotta una conformazione bundle alfa-elicoidale simile a quello osservato nel modello MscL di e. coli e la struttura di cristallo Tb-MscL riveduta.

Confermando il dominio C-terminale riveduto della struttura di cristallo di MscL.

&#x5927;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x200B;&#x200B;&#xFF08;MSCL&#xFF09;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8AD6;&#x4E89;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x5143;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#xFF08;1MSL&#xFF09;&#xFF08;TB&#xFF09;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;TB-MscL&#x306E;&#x6539;&#x8A02;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#xFF08;2OAR&#xFF09;&#x3002;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x304B;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5186;&#x504F;&#x5149;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;TB-MscL&#x306E;&#x71B1;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;C-&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x5143;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x6539;&#x8A02;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;Tb&#x3092;&#x3001; MSCL&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;MSCL&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x6539;&#x8A02;&#x3055;&#x308C;&#x305F;TB-MSCL&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x3B1;-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

MSCL&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6539;&#x8A02;C&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;

Hier beschreiben wir neue Methodik, die direkte Microcontact Druck von Octadecyltrichlorosilane auf Glasdeckgl&auml;ser gefolgt von ein Abgleich mit einer Ethylenglykol beendet Trichloroalkane Silan erm&ouml;glicht; Dies erzeugt Muster mit Regionen, die zu f&ouml;rdern und verhindern Proteinadsorption und erm&ouml;glichen eine Kontrolle des Zellwachstums.

Direktdruck von Trichlorosilanes auf Glas f&uuml;r selektive Protein Adsorption und Zelle Wachstum.

Qui descriviamo la nuova metodologia che consente la stampa diretta microcontatto di octadecyltrichlorosilane sulle lamelle di vetro seguita da recupero con un glicole etilenico terminato trichloroalkane silano; Questo produce modelli con regioni che promuovono e impediscono l&#39;adsorbimento di proteine e permettono per il controllo della crescita cellulare.

Stampa diretta di tetraclorosilano su vetro per la crescita delle cellule e di adsorbimento selettivo della proteina.

&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x65B0;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5141;&#x8BB8;&#x76F4;&#x63A5;&#x5370;&#x5237;&#x672F;&#x7684; octadecyltrichlorosilane &#x5230;&#x73BB;&#x7483;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x8DDF;&#x56DE;&#x586B;&#x7528;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x7EC8;&#x6B62; trichloroalkane &#x7845;&#x70F7; &#xFF1B;&#x8FD9;&#x5C31;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x540C;&#x533A;&#x57DF;&#x6765;&#x63D0;&#x5021;&#x548C;&#x9632;&#x6B62;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5438;&#x9644;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

&#x76F4;&#x63A5;&#x5370;&#x82B1;&#x5DE5;&#x827A; trichlorosilanes &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x5438;&#x9644;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x73BB;&#x7483;&#x4E0A;&#x3002;

Here we describe new methodology that allows for direct microcontact printing of octadecyltrichlorosilane onto glass coverslips followed by backfilling with an ethylene glycol terminated trichloroalkane silane; this produces patterns with regions that promote and prevent protein adsorption and allow for control of cell growth.

Direct printing of trichlorosilanes on glass for selective protein adsorption and cell growth.

Nous d&#xE9;crivons ici une nouvelle m&#xE9;thodologie qui permet de l&#x26;#39;impression par microcontact directe de octad&#xE9;cyltrichlorosilane sur des lamelles de verre suivies par remblayage avec un &#xE9;thyl&#xE8;ne glycol fin trichloroalkane silane, ce qui produit les mod&#xE8;les avec les r&#xE9;gions qui font la promotion et de pr&#xE9;venir l&#x26;#39;adsorption des prot&#xE9;ines et permettent un contr&#xF4;le de la croissance cellulaire.

Impression directe de trichlorosilanes sur verre pour la prot&#xE9;ine adsorption s&#xE9;lective et la croissance cellulaire

&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E9;&#x30F3;trichloroalkane&#x3092;&#x7D42;&#x4E86;&#x3057;&#x3001;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x57CB;&#x3081;&#x623B;&#x3057;&#x3001;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x88FD;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30EA;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x4E0A;&#x306B;&#x30AA;&#x30AF;&#x30BF;&#x30C7;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30B7;&#x30E9;&#x30F3;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3001;&#x9632;&#x3050;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5438;&#x7740;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5438;&#x7740;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x7528;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x306B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30B7;&#x30E9;&#x30F3;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x5370;&#x5237;

&#xC5EC;&#xAE30; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xC885;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xC5D0;&#xD2F8;&#xB80C; &#xAE00;&#xB9AC;&#xCF5C; trichloroalkane silane;&#xC640; &#xBC31;&#xD544; &#xC720;&#xB9AC; coverslips&#xC5D0; octadecyltrichlorosilane&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; microcontact &#xC778;&#xC1C4;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860; &#xC124;&#xBA85; &#xC774; &#xD64D;&#xBCF4; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD761;&#xCC29;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC601;&#xC5ED;&#xC73C;&#xB85C; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Trichlorosilanes &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD761;&#xCC29; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC778;&#xC1C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Aqu&#xED; se describe una nueva metodolog&#xED;a que permite la impresi&#xF3;n directa de microcontacto octadecyltrichlorosilane sobre cubreobjetos de vidrio seguido por el relleno con un glicol de etileno terminado trichloroalkane silano; esto produce patrones con las regiones que promueven y evitar la adsorci&#xF3;n de prote&#xED;nas y permitir el control del crecimiento celular.

Impresi&#xF3;n directa de Trichlorosilanes de vidrio para la adsorci&#xF3;n selectiva de prote&#xED;nas y el crecimiento celular

&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x89C1;&#x89E3;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x548C;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x56DE;&#x5E94;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x6781;&#x5C11;&#x6570;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6E20;&#x9053;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x786E;&#x5B9A;&#x3001; &#x514B;&#x9686;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E3A;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6;&#x5305;&#x542B;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x7684;&#x5C0F;&#x7535;&#x5BFC; (MscS) &#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x901A;&#x9053;&#x901A;&#x9053;&#x57DF;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7; (bCNG) &#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x578B;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x521D;&#x59CB;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x514B;&#x9686;&#x9009;&#x5B9A;&#x6B64;&#x901A;&#x9053;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x3001; &#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x6D4B;&#x91CF;&#x6765;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x76F4;&#x63A5;&#x54CD;&#x5E94;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x548C;&#x6E17;&#x900F; downshock &#x7528;&#x4E8E;&#x8868;&#x660E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7F3A;&#x4E4F; mechanosensitivity&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6DF1;&#x5165;&#x4E86;&#x89E3;&#x7EC6;&#x83CC;&#x751F;&#x7406;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6E20;&#x9053;&#x5C06;&#x9AD8;&#x7B49;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7814;&#x7A76;&#x4EBA;&#x5458;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x914D;&#x4F53;&#x95E8;&#x63A7;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053; (LGICs) &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x4E3A; LGICs&#xFF0C;&#x5C06;&#x5F88;&#x96BE;&#x5BF9;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x6E20;&#x9053;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x5960;&#x5B9A;&#x4E86;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;bCNG &#x9891;&#x9053;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6709;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7;&#x548C;&#x5FAA;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x8C03;&#x5236;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x771F;&#x6838;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4FE1;&#x4F7F;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x3002;

&#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7; (bCNG) &#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;

Studies of bacterial ion channels have provided significant insights into the structure-function relationships of mechanosensitive and voltage-gated ion channels. However, to date, very few bacterial channels that respond to small molecules have been identified, cloned, and characterized. Here, we use bioinformatics to identify a novel family of bacterial cyclic nucleotide-gated (bCNG) ion channels containing a channel domain related by sequence homology to the mechanosensitive channel of small conductance (MscS). In this initial report, we clone selected members of this channel family, use electrophysiological measurements to verify their ability to directly gate in response to cyclic nucleotides, and use osmotic downshock to demonstrate their lack of mechanosensitivity. In addition to providing insight into bacterial physiology, these channels will provide researchers with a useful model system to investigate the role of ligand-gated ion channels (LGICs) in the signaling processes of higher organisms. The identification of these channels provides a foundation for structural and functional studies of LGICs that would be difficult to perform on mammalian channels. Moreover, the discovery of bCNG channels implies that bacteria have cyclic nucleotide-gated and cyclic nucleotide-modulated ion channels, which are analogous to the ion channels involved in eukaryotic secondary messenger signaling pathways.

Identification and experimental verification of a novel family of bacterial cyclic nucleotide-gated (bCNG) ion channels.

Les &#xE9;tudes des canaux ioniques bact&#xE9;riennes ont fourni des informations importantes sur les relations structure-fonction des canaux ioniques m&#xE9;canosensibles et voltage-d&#xE9;pendants. Toutefois, &#xE0; ce jour, tr&#xE8;s peu de cha&#xEE;nes bact&#xE9;riennes qui r&#xE9;pondent &#xE0; de petites mol&#xE9;cules ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;es, clon&#xE9;es et caract&#xE9;ris&#xE9;es. Ici, nous utilisons la bioinformatique pour identifier une nouvelle famille de bact&#xE9;ries nucl&#xE9;otides cycliques-d&#xE9;pendants canaux ioniques (bCNG) contenant un domaine de canal li&#xE9;s par une homologie de s&#xE9;quence avec le canal m&#xE9;cano de la conductance de petite taille (MSCS). Dans ce rapport initial, nous cloner certains membres de cette famille de canal, utiliser des mesures &#xE9;lectrophysiologiques afin de v&#xE9;rifier leur capacit&#xE9; &#xE0; directement la porte en r&#xE9;ponse aux nucl&#xE9;otides cycliques, et d&#x26;#39;utiliser downshock osmotique de d&#xE9;montrer leur manque de m&#xE9;canosensibilit&#xE9;. En plus de fournir un aper&#xE7;u de la physiologie bact&#xE9;rienne, ces cha&#xEE;nes offrira aux chercheurs avec un syst&#xE8;me de mod&#xE8;le utile pour &#xE9;tudier le r&#xF4;le des canaux ioniques ligand-d&#xE9;pendants (LGIC) dans les processus de signalisation des organismes sup&#xE9;rieurs. L&#x26;#39;identification de ces canaux fournit une base pour des &#xE9;tudes structurales et fonctionnelles de LGIC qui seraient difficiles &#xE0; r&#xE9;aliser sur les canaux de mammif&#xE8;res. En outre, la d&#xE9;couverte des canaux bCNG implique que les bact&#xE9;ries ont nucl&#xE9;otides cycliques et cycliques gated canaux ioniques nucl&#xE9;otide-modul&#xE9;s, qui sont analogues aux canaux ioniques impliqu&#xE9;s dans les voies eucaryotes messagers secondaires de signalisation.

Identification et v&#xE9;rification exp&#xE9;rimentale d&#x26;#39;une nouvelle famille de bact&#xE9;ries nucl&#xE9;otides cycliques-d&#xE9;pendants canaux ioniques (bCNG)

Studium der bakteriellen Ionenkan&auml;le haben bedeutende Einblicke in die Struktur-Funktionsbeziehungen von Mechanosensitive und Spannung-Gating Ionenkan&auml;le bereitgestellt. Jedoch haben bis heute nur sehr wenige bakterielle Kan&auml;le, die auf kleinen Molek&uuml;len reagieren identifiziert, geklont gepr&auml;gt und wurde. Hier wird Bioinformatik verwendet, um eine neuartige Familie von bakteriellen zyklische Nukleotid-Gating (bCNG)-Ionenkan&auml;le, die mit eine Kanal-Dom&auml;ne von Sequenz-Homologie zum Kanal Mechanosensitive des kleiner Leitwert (MscS) mit Bezug zu identifizieren. In diesem ersten Bericht wir ausgew&auml;hlte Mitglieder dieser Familie Kanal zu klonen, elektrophysiologische Messungen verwenden, um ihre F&auml;higkeit, direkt als Reaktion auf zyklischen Nukleotide Tor zu &uuml;berpr&uuml;fen und osmotische Downshock verwenden, um ihren Mangel an mechanosensitive zu demonstrieren. Zus&auml;tzlich zu den Einblick in bakterielle Physiologie, werden diese Kan&auml;le Forscher mit n&uuml;tzlichen Modellsystem zur Untersuchung der Rolle der ligandengesteuerte Ionenkan&auml;le (LGICs) Signalisierung h&ouml;here Organismen ablaufenden Prozesse gew&auml;hrleisten. Die Identifizierung dieser Kan&auml;le bietet eine Grundlage f&uuml;r strukturelle und funktionelle Studien &uuml;ber LGICs, die schwer auf S&auml;ugetier-Kan&auml;le durchzuf&uuml;hren w&auml;re. Dar&uuml;ber hinaus bedeutet die Entdeckung von bCNG Kan&auml;len, dass Bakterien haben zyklische Nukleotid-Gating und zyklische Nukleotid moduliert Ionenkan&auml;le, die analog zu der Ionenkan&auml;le eukaryotischen sekund&auml;re Bote Signalisierung Bahnen beteiligt sind.

Identifizierung und experimentelle Verifikation der eine neue Familie von Ionenkan&auml;len bakterielle zyklische Nukleotid-Gating (bCNG).

Gli studi di canali ionici batteriche hanno fornito significativi approfondimenti le relazioni struttura-funzione di mechanosensitive e canali ionici voltaggio-dipendenti. Tuttavia, ad oggi, pochissimi canali batteriche che rispondono a piccole molecole hanno stati identificati, clonati e caratterizzati. Qui, usiamo la bioinformatica per identificare una famiglia romanzo di scanalature dello ione batterica cyclic nucleotide-gated (bCNG) contenente un dominio canale correlato da omologia di sequenza al canale mechanosensitive di piccola conduttanza (MscS). In questa relazione iniziale, abbiamo clone selezionati membri di questa famiglia di canale, utilizzare misure elettrofisiologiche per verificare la loro capacit&agrave; di gate direttamente in risposta ai nucleotidi ciclici e utilizzare downshock osmotico per dimostrare la loro mancanza di mechanosensitivity. Oltre a fornire approfondita della fisiologia batterica, questi canali fornir&agrave; i ricercatori con un sistema modello utile per indagare il ruolo delle scanalature ligand-gated dello ione (LGICs) nei processi di segnalazione degli organismi superiori. L&#39;identificazione di questi canali fornisce una base per gli studi strutturali e funzionali di LGICs che sarebbe difficile da eseguire sui canali dei mammiferi. Inoltre, la scoperta dei canali bCNG implica che i batteri hanno ciclico ciclico e nucleotide-gated nucleotide-modulato scanalature dello ione, che sono analoghe ai canali ionici coinvolti nella eucariotica Messaggero secondario vie di segnalazione.

Identificazione e verifica sperimentale di una famiglia romanzo di scanalature dello ione batterica cyclic nucleotide-gated (bCNG).

&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x3068;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x307E;&#x3067;&#x306B;&#x3001;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5C11;&#x6570;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x200B;&#x200B;&#xFF08;MSCS&#xFF09;&#x306B;&#x914D;&#x5217;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#xFF08;bCNG&#xFF09;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x306A;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6D78;&#x900F;downshock&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x7B49;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;LGICs&#xFF09;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x8005;&#x306B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x4E0A;&#x3067;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;LGICs&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;bCNG&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x304C;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x4E8C;&#x6B21;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x5909;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#xFF08;bCNG&#xFF09;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3068;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x691C;&#x8A3C;

&#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; mechanosensitive &#xBC0F; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;-&#xAE30;&#xB2A5; &#xAD00;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xBC18;&#xC751; &#xD558;&#xB294; &#xC544;&#xC8FC; &#xBA87;&#xBA87; &#xC138;&#xADE0; &#xCC44;&#xB110; &#xC2DD;&#xBCC4;, &#xBCF5;&#xC81C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; homology&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; (MscS)&#xC758; mechanosensitive &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xCC44;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC138;&#xADE0; &#xC21C;&#xD658;-&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; (bCNG) &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xAC00;&#xC871; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;. &#xC774; &#xCD08;&#xAE30; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xCC44;&#xB110; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xBCF5;&#xC81C; electrophysiological &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; &#xC9C1;&#xC811; &#xAC8C;&#xC774;&#xD2B8; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xC0BC; &#xD22C; downshock &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; mechanosensitivity&#xC758; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;. &#xC138;&#xADE0; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCC44;&#xB110; &#xB192;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; (LGICs)&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC6D0;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xAC83;&#xC774; Lgics&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, bCNG &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xAC00; &#xC9C4; &#xD575; 2 &#xCC28; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xC720;&#xC0AC; &#xC21C;&#xD658;-&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xBC0F; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xBCC0;&#xC870; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xC758;&#xBBF8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC21C;&#xD658;-&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; (bCNG) &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD655;&#xC778;.

Los estudios de los canales i&#xF3;nicos bacterianos han proporcionado importantes conocimientos sobre las relaciones estructura-funci&#xF3;n de canales i&#xF3;nicos mecanosensibles y la tensi&#xF3;n de la gated-. Sin embargo, hasta la fecha, los canales bacterianas muy pocos que responden a peque&#xF1;as mol&#xE9;culas se han identificado, clonado y caracterizado. Aqu&#xED;, nosotros usamos la bioinform&#xE1;tica para identificar a una nueva familia de bacterias de nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos canales i&#xF3;nicos (bCNG) que contienen un dominio de canales relacionados por homolog&#xED;a de secuencia con el canal de la conductancia peque&#xF1;a mecanosensible (MSC). En este informe inicial, clonar los miembros seleccionados de esta familia de canales, utilice las mediciones electrofisiol&#xF3;gicas para verificar su capacidad de puerta directamente en respuesta a los nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos, y el uso downshock osm&#xF3;tica para demostrar su falta de sensibilidad mec&#xE1;nica. Adem&#xE1;s de proporcionar una visi&#xF3;n de la fisiolog&#xED;a bacteriana, estos canales tambi&#xE9;n proporcionar a los investigadores un modelo &#xFA;til para investigar el papel de los canales i&#xF3;nicos activados por ligando (LGICs) en los procesos de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de los organismos superiores. La identificaci&#xF3;n de estos canales ofrece una base para los estudios estructurales y funcionales de LGICs que ser&#xED;an dif&#xED;ciles de realizar en los canales de los mam&#xED;feros. Adem&#xE1;s, el descubrimiento de canales bCNG implica que las bacterias tienen c&#xED;clicos nucle&#xF3;tido-bloqueados y nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos moduladas en los canales i&#xF3;nicos, que son an&#xE1;logos a los canales de iones implicados en eucariotas v&#xED;as mensajeras secundarias de se&#xF1;alizaci&#xF3;n.

Identificaci&#xF3;n y verificaci&#xF3;n experimental de una nueva familia de bacterias de nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos-dependientes (bCNG) los canales i&#xF3;nicos

6 &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; 19 &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; monophosphate &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;, &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xAD50; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC21C;&#xC11C; &#xC815;&#xB82C; &#xBC0F; 3610 homology &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBD84;&#xC11D;&#xB9CC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xAC00;&#xC871;, &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;, &#xB610;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870; &#xAC04;&#xC758; &#xC57D;&#xD55C; &#xAD00;&#xACC4;&#xB294; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; monophosphate &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD8C;&#xD55C; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xAD6C;&#xC870; homology &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAD8C;&#xD55C;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xB41C; homology&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB610;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870;: &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559; &#xBC0F; &#xC0C1; &#xB3D9; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCEA0;&#xD504;/cGMP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC774;&#xD574; &#xD558;.

La relaci&#xF3;n entre la secuencia, estructura y funci&#xF3;n se examin&#xF3; mediante la comparaci&#xF3;n de diecinueve dominios c&#xED;clicos nucle&#xF3;tidos monofosfato de uni&#xF3;n de estructura conocida a partir de seis familias funcionales diferentes. Se hacen comparaciones por la estructura y la alineaci&#xF3;n de secuencias y mediante la generaci&#xF3;n de 3610 modelos de homolog&#xED;a. Este an&#xE1;lisis sugiere que s&#xF3;lo hay debilidad de las relaciones entre las familias funcionales, la secuencia, y / o estructura. Sin embargo, hemos identificado que para dominios monofosfato c&#xED;clico de uni&#xF3;n de nucle&#xF3;tidos estructuras privilegiadas de la plantilla se producen para el modelado de homolog&#xED;a. La existencia de estructuras de plantilla privilegiados, capaces de crear modelos precisos de una amplia familia de prote&#xED;nas, puede conducir a la mejora de los protocolos de homolog&#xED;a de modelado.

Secuencia o estructura: El uso de la bioinform&#xE1;tica y el modelado de homolog&#xED;a para entender las relaciones funcionales en CAMP / cGMP DOMINIOS DE UNI&#xD3;N

&#x901A;&#x8FC7;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5341;&#x4E5D;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x4ECE;&#x516D;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7ED3;&#x6784;&#x68C0;&#x67E5;&#x5E8F;&#x5217;&#x3001; &#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x987A;&#x5E8F;&#x7684;&#x5BF9;&#x9F50;&#x65B9;&#x5F0F;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7; 3610 &#x540C;&#x6E90;&#x6A21;&#x578B;&#x751F;&#x6210;&#xFF0C;&#x4F1A;&#x4F5C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x672C;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4EC5;&#x6709;&#x5F31;&#x5173;&#x7CFB;&#x529F;&#x80FD;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3001; &#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x548C;/&#x6216;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x786E;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x7279;&#x6743;&#x7684;&#x6A21;&#x677F;&#x7ED3;&#x6784;&#x53D1;&#x751F;&#x540C;&#x6E90;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x3002;&#x7279;&#x6743;&#x7684;&#x6A21;&#x677F;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x80FD;&#x591F;&#x521B;&#x5EFA;&#x7CBE;&#x786E;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6539;&#x8FDB;&#x540C;&#x6E90;&#x5EFA;&#x6A21;&#x534F;&#x8BAE;&#x3002;

&#x5E8F;&#x5217;&#x6216;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF1A; &#x4F7F;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x548C;&#x540C;&#x6E90;&#x5EFA;&#x6A21;&#x4E86;&#x89E3;&#x8425;/cGMP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;

The relationship between sequence, structure, and function is examined by comparing nineteen cyclic nucleotide monophosphate binding domains of known structure from six different functional families. Comparisons are made by structure and sequence alignment and through the generation of 3610 homology models. This analysis suggests there are only weak relationships between functional families, sequence, and/or structure. However, we have identified that for cyclic nucleotide monophosphate binding domains privileged template structures occur for homology modeling. The existence of privileged template structures, capable of creating accurate modeling for a broad family of proteins, may lead to improved homology modeling protocols.

Sequence or structure: using bioinformatics and homology modeling to understand functional relationships in cAMP/cGMP binding domains.

La relation entre la s&#xE9;quence, la structure et la fonction est examin&#xE9;e en comparant dix-neuf domaines monophosphate cyclique de liaison nucl&#xE9;otidique de structure connue de six diff&#xE9;rentes familles fonctionnelles. Des comparaisons sont faites par la structure et l&#x26;#39;alignement de s&#xE9;quences et &#xE0; travers la g&#xE9;n&#xE9;ration de 3610 mod&#xE8;les par homologie. Cette analyse sugg&#xE8;re qu&#x26;#39;il ya seulement la faiblesse des relations entre les familles fonctionnelles, les s&#xE9;quences et / ou la structure. Toutefois, nous avons d&#xE9;termin&#xE9; que pour cycliques domaines nucl&#xE9;otide monophosphate contraignantes structures mod&#xE8;les privil&#xE9;gi&#xE9;s se produire pour la mod&#xE9;lisation par homologie. L&#x26;#39;existence de structures de mod&#xE8;les privil&#xE9;gi&#xE9;s, capables de cr&#xE9;er une mod&#xE9;lisation pr&#xE9;cise pour une grande famille de prot&#xE9;ines, peut conduire &#xE0; l&#x26;#39;am&#xE9;lioration des protocoles de mod&#xE9;lisation par homologie.

S&#xE9;quence ou de structure: Utilisation de la bioinformatique et la mod&#xE9;lisation par homologie de comprendre les relations fonctionnelles au camp / cGMP domaines de liaison

Die Beziehung zwischen Sequenz, Struktur und Funktion wird durch den Vergleich von neunzehn zyklische Nukleotid Monophosphat Bindung Dom&auml;nen der bekannten Struktur aus sechs verschiedenen funktionalen Familien untersucht. Vergleiche werden durch Struktur und Reihenfolge Ausrichtung und durch die Erzeugung von 3610 Homologie-Modelle hergestellt. Diese Analyse schl&auml;gt vor, es gibt nur schwache Beziehungen zwischen funktionalen Familien, Sequenz und/oder -Struktur. Jedoch haben wir, die f&uuml;r zyklische Nukleotid-Monophosphat-Bindung-Dom&auml;nen identifiziert, die privilegierten Vorlage Strukturen f&uuml;r Homologie Modellierung auftreten. Die Existenz von privilegierten Vorlage Strukturen erzeugen genaue Modellierung f&uuml;r eine breite Familie von Proteinen, kann zu verbesserter Homologie Modellierung Protokolle f&uuml;hren.

Reihenfolge oder Struktur: mit Hilfe der Bioinformatik und Homologie Modellierung um funktionelle Beziehungen in cAMP/cGMP-Bindung Dom&auml;nen zu verstehen.

La relazione tra sequenza, struttura e funzione &egrave; esaminata confrontando diciannove domini di associazione monofosfato di nucleotide ciclico della struttura conosciuta da sei famiglie funzionali differenti. I confronti sono fatti di allineamento di sequenza e struttura e attraverso la generazione di modelli di omologia 3610. Questa analisi suggerisce che ci sono solo deboli relazioni tra famiglie funzionali, sequenza e/o struttura. Tuttavia, abbiamo identificato che per i domini di associazione monofosfato nucleotide ciclico strutture modello privilegiato si verificano per la modellazione di omologia. L&#39;esistenza di strutture modello privilegiato, capace di creare accurata modellazione per una vasta famiglia di proteine, pu&ograve; portare a maggiore omologia protocolli di modellazione.

Sequenza o struttura: utilizzare bioinformatica e modellistica di omologia per comprendere relazioni funzionali in domini di associazione cAMP/cGMP.

&#x914D;&#x5217;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306F;&#x3001;6&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x304B;&#x3089;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x306E;19&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4E00;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x914D;&#x5217;&#x30A2;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3055;&#x3068;3610&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3001;&#x914D;&#x5217;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x306F;&#x5F31;&#x3044;&#x95A2;&#x4FC2;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4E00;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7279;&#x6A29;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x7279;&#x6A29;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x304C;&#x3001;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x914D;&#x5217;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x69CB;&#x9020;&#xFF1A;CAMP / cGMP&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;

&#x5E26;&#x56FE;&#x6848;&#x7684;&#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7684;&#x819C; (SAMs) &#x5DF2;&#x88AB;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x4E0E;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5370;&#x5237;&#x672F;&#x662F;&#x751F;&#x4EA7;&#x56FE;&#x6848;&#x886C;&#x5E95;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B80;&#x5355;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x975E;&#x5E38;&#x8017;&#x65F6;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x5F88;&#x591A;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x4E13;&#x4E1A;&#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x91CD;&#x7528;&#x56FE;&#x6848;&#x886C;&#x5E95;&#x6700;&#x9AD8;&#x8FBE; 15 &#x500D;&#xFF0C;&#x8282;&#x7701;&#x4E86;&#x65F6;&#x95F4;&#x548C;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x8D44;&#x6E90;&#x3002;

&#x56DE;&#x6536;&#x5229;&#x7528;&#x56FE;&#x6848;&#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7684;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x3002;

Patterned self-assembled monolayers (SAMs) have been widely utilized for the study of cellular growth and behavior. While microcontact printing is a straightforward method of producing patterned substrates, the process is time consuming and requires the use of many techniques and specialized equipment. Here we present a method by which patterned substrates can be reused up to 15 times, saving both time and valuable resources.

Recycling and reusing patterned self-assembled monolayers for cell culture.

&#xC0; motifs monocouches auto-assembl&#xE9;es (SAM) ont &#xE9;t&#xE9; largement utilis&#xE9;s pour l&#x26;#39;&#xE9;tude de la croissance cellulaire et le comportement. Alors que l&#x26;#39;impression par microcontact est une m&#xE9;thode simple de produire des motifs substrats, le processus prend du temps et n&#xE9;cessite l&#x26;#39;utilisation de nombreuses techniques et des &#xE9;quipements sp&#xE9;cialis&#xE9;s. Nous pr&#xE9;sentons ici une m&#xE9;thode par laquelle motifs substrats peuvent &#xEA;tre r&#xE9;utilis&#xE9;s jusqu&#x26;#39;&#xE0; 15 fois, &#xE9;conomisant ainsi du temps et des ressources pr&#xE9;cieuses.

Recyclage et r&#xE9;utilisation &#xE0; motifs monocouches auto-assembl&#xE9;es de la culture cellulaire

Gemusterte assembled Monolayers (SAMs) haben weithin f&uuml;r die Erforschung der zellul&auml;ren Wachstum und Verhalten verwendet worden. W&auml;hrend Microcontact Drucken eine einfache Methode zur Herstellung von gemusterter Untergr&uuml;nden ist, wird der Prozess ist zeitaufw&auml;ndig und erfordert den Einsatz vieler Techniken und spezielle Ausr&uuml;stung. Hier pr&auml;sentieren wir eine Methode, die durch die gemusterte Substrate bis zu 15 Mal wiederverwendet werden k&ouml;nnen, spart Zeit und wertvolle Ressourcen.

Recycling und Wiederverwendung von gemusterten assembled Monolayers f&uuml;r Zellkultur.

Fantasia monostrati auto-assemblati (SAMs) sono state ampiamente utilizzate per lo studio della crescita cellulare e del comportamento. Mentre stampa microcontatto &egrave; un semplice metodo di produzione di substrati di fantasia, il processo richiede tempo e richiede l&#39;uso di molte tecniche e attrezzature specializzate. Qui vi presentiamo un metodo mediante il quale fantasia substrati possono essere riutilizzati fino a 15 volte, risparmiando tempo e risorse preziose.

Riciclo e riutilizzo di patterned monostrati auto-assemblati per la coltura cellulare.

&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x5C64;&#xFF08;SAM&#xFF09;&#x304C;&#x5E83;&#x304F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x306E;&#x5370;&#x5237;&#x304C;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x88FD;&#x9020;&#x3059;&#x308B;&#x7C21;&#x5358;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x6642;&#x9593;&#x304C;&#x304B;&#x304B;&#x308A;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x3084;&#x7279;&#x6B8A;&#x306A;&#x88C5;&#x7F6E;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x57FA;&#x677F;&#x306F;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x3068;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x7BC0;&#x7D04;&#x3057;&#x3001;15&#x56DE;&#x307E;&#x3067;&#x518D;&#x5229;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x7528;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x518D;&#x5229;&#x7528;

&#xAF43;&#xBB34;&#xB2AC; &#xC870;&#xB9BD;&#xB41C; monolayers (SAMs) &#xB110;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xD589;&#xB3D9; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Microcontact &#xC778;&#xC1C4; &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xB41C; &#xAE30;&#xD310; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC774; &#xC18C;&#xBAA8; &#xD558; &#xACE0; &#xB9CE;&#xC740; &#xAE30;&#xC220;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC218; &#xC7A5;&#xBE44;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD574;&#xC57C;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xB41C; &#xAE30;&#xD310; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCD5C;&#xB300; 15 &#xBC30; &#xC2DC;&#xAC04; &#xBC0F; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xC790;&#xC6D0; &#xC808;&#xC57D;.

&#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC0AC;&#xC6A9; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD14C;&#xD06C;&#xB180;&#xB85C;&#xC9C0; monolayers &#xAF43;&#xBB34;&#xB2AC;.

Con dibujos monocapas auto-ensambladas (SAMs) han sido ampliamente utilizados para el estudio del crecimiento celular y la conducta. Aunque la impresi&#xF3;n microcontacto es un m&#xE9;todo sencillo de producir estampado sustratos, el proceso requiere mucho tiempo y requiere el uso de muchas t&#xE9;cnicas y equipo especializado. Aqu&#xED; presentamos un m&#xE9;todo por el cual patr&#xF3;n sustratos puede ser reutilizado hasta 15 veces m&#xE1;s, ahorrando tiempo y recursos valiosos.

Reciclaje y Reutilizaci&#xF3;n de Patrones de monocapas auto-ensambladas para el cultivo celular

&#x5DF2;&#x67E5;&#x660E;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x6539;&#x53D8;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x673A;&#x68B0;&#x9891;&#x9053;&#x5C0F;&#x7535;&#x5BFC; &#xFF08;MscS&#xFF09; &#x7684;&#x884C;&#x4E3A; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5C01;&#x95ED;&#x4E0E;&#x5F00;&#x653E;&#x56FD;&#x5BB6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x8FC7;&#x6E21;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x76F4;&#x63A5;&#x53C2;&#x4E0E;&#x6362;&#x80FD;&#x5668;&#x7684;&#x7D27;&#x5F20;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x62DF;&#x9884;&#x6D4B;&#x5173;&#x952E;&#x8102;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; MscS &#x7684;&#x5C01;&#x95ED;&#x72B6;&#x6001;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#x901A;&#x8FC7;&#x5BF9; MscS &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5728;&#x8102;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6B8B;&#x7559;&#x4E86;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BF9;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x6267;&#x884C;&#x6E17;&#x900F; downshock &#x5316;&#x9A8C;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x8102;&#x8D28;&#x9065;&#x611F;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x4E03;&#x4E2A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x548C;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x8DE8;&#x819C;&#x87BA;&#x65CB;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x662F;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x819C;&#x7684;&#x754C;&#x9762;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x5904;&#x4E8E;&#x5173;&#x95ED;&#x72B6;&#x6001;&#x7684; MscS&#xFF0C;&#x8102;&#x53CC;&#x5C42;&#x7684;&#x5F3A;&#x70C8;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F1A;&#x9762;&#x4E34;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5F00;&#x653E;&#x548C;&#x51CF;&#x654F;&#x72B6;&#x6001;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x53CC;&#x5C42;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x4E0E;&#x8102;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x51FA;&#x73B0;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x6D77;&#x5CE1;&#x81F3;&#x611F;&#x7D27;&#x5F20;&#x5C40;&#x52BF;&#x4E0D;&#x540C;&#x751F;&#x7406;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x5C0F;&#x7535;&#x5BFC;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x901A;&#x9053;&#x5B9A;&#x4E49;&#x5F20;&#x529B;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Mutations that alter the phenotypic behavior of the Escherichia coli mechanosensitive channel of small conductance (MscS) have been identified; however, most of these residues play critical roles in the transition between the closed and open states of the channel and are not directly involved in lipid interactions that transduce the tension response. In this study, we use molecular dynamic simulations to predict critical lipid interacting residues in the closed state of MscS. The physiological role of these residues was then investigated by performing osmotic downshock assays on MscS mutants where the lipid interacting residues were mutated to alanine. These experiments identified seven residues in the first and second transmembrane helices as lipid-sensing residues. The majority of these residues are hydrophobic amino acids located near the extracellular interface of the membrane. All of these residues interact strongly with the lipid bilayer in the closed state of MscS, but do not face the bilayer directly in structures associated with the open and desensitized states of the channel. Thus, the position of these residues relative to the lipid membrane appears related to the ability of the channel to sense tension in its different physiological states.

Defining the role of the tension sensor in the mechanosensitive channel of small conductance.

Des mutations qui modifient le comportement ph&#xE9;notypique de la cha&#xEE;ne d&#x26;#39;Escherichia coli m&#xE9;canosensible de la conductance de petite taille (MSCS) ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s, mais la plupart de ces r&#xE9;sidus jouent un r&#xF4;le crucial dans la transition entre les &#xE9;tats ferm&#xE9; et ouvert de la cha&#xEE;ne et ne sont pas directement impliqu&#xE9;s dans les lipides interactions qui transduisent la r&#xE9;ponse de tension. Dans cette &#xE9;tude, nous utilisons simulations de dynamique mol&#xE9;culaire pour pr&#xE9;dire critiques r&#xE9;sidus lipidiques interaction dans l&#x26;#39;&#xE9;tat ferm&#xE9; de MSCS. Le r&#xF4;le physiologique de ces r&#xE9;sidus a ensuite &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9; en effectuant des tests sur des mutants downshock osmotiques MSCS o&#xF9; les r&#xE9;sidus lipidiques ont &#xE9;t&#xE9; mut&#xE9;s en interaction &#xE0; l&#x26;#39;alanine. Ces exp&#xE9;riences identifi&#xE9; sept r&#xE9;sidus dans les h&#xE9;lices transmembranaires premier et deuxi&#xE8;me lipide-d&#xE9;tection r&#xE9;sidus. La majorit&#xE9; de ces r&#xE9;sidus acides amin&#xE9;s hydrophobes sont situ&#xE9;s pr&#xE8;s de l&#x26;#39;interface de la membrane extracellulaire. Tous ces r&#xE9;sidus interagissent fortement avec la bicouche lipidique dans l&#x26;#39;&#xE9;tat ferm&#xE9; de MSCS, mais ne sont pas confront&#xE9;s directement dans la bicouche des structures associ&#xE9;es &#xE0; des &#xE9;tats ouvert et d&#xE9;sensibilis&#xE9;s de la cha&#xEE;ne. Ainsi, la position de ces r&#xE9;sidus relatifs &#xE0; la membrane lipidique appara&#xEE;t li&#xE9;e &#xE0; la capacit&#xE9; du canal de la tension de sens dans ses diff&#xE9;rents &#xE9;tats physiologiques.

D&#xE9;finir le r&#xF4;le de capteur de tension dans la Manche m&#xE9;canosensibles de faible conductance

Mutationen, die das ph&auml;notypische Verhalten von Escherichia coli Mechanosensitive Kanal des kleinen Leitwert (MscS) ver&auml;ndern wurden identifiziert; jedoch die meisten dieser R&uuml;ckst&auml;nde spielen eine kritische Rolle im &Uuml;bergang zwischen den geschlossenen und offenen Staaten des Kanals und engagieren sich nicht direkt in Lipid-Interaktionen, die die Spannung Antwort zur&uuml;ckwirken. In dieser Studie verwenden wir Molekulare dynamische Simulationen kritische Lipid Interaktion R&uuml;ckst&auml;nde in geschlossenem Zustand der MscS vorherzusagen. Die physiologische Rolle dieser R&uuml;ckst&auml;nde wurde dann untersucht, durch Ausf&uuml;hren von osmotischen Downshock Proben von MscS-Mutanten, wo die interagierenden Lipid-R&uuml;ckst&auml;nde zu Alanin mutiert waren. Diese Experimente identifiziert sieben R&uuml;ckst&auml;nde in die ersten und zweiten Transmembran-Helices als Lipid-Sensorik R&uuml;ckst&auml;nde. Die meisten dieser R&uuml;ckst&auml;nde sind hydrophobe Aminos&auml;uren, die in der N&auml;he der extrazellul&auml;ren Oberfl&auml;che der Membran. Alle diese R&uuml;ckst&auml;nde stark mit der Lipid-Bilayer in geschlossenem Zustand der MscS interagieren, sondern stehen nicht die Bilayer direkt in Strukturen, die die offenen und desensibilisiert Zust&auml;nden des Kanals zugeordnet. Die Position dieser R&uuml;ckst&auml;nde im Verh&auml;ltnis zu der Lipidmembran erscheint daher im Zusammenhang mit der F&auml;higkeit des Kanals zu Sinn Spannungen in den verschiedenen physiologischen Zust&auml;nden.

Bestimmung der Rolle des Sensors Spannung im Kanal Mechanosensitive des kleiner Leitwert.

Sono state identificate mutazioni che alterano il comportamento fenotipico del canale Escherichia coli mechanosensitive di piccola conduttanza (MscS); Tuttavia, la maggior parte di questi residui giocano un ruolo fondamentale nella transizione tra gli stati aperti e chiusi del canale e non sono direttamente coinvolta in interazioni lipidi che trasducono la risposta di tensione. In questo studio, utilizziamo simulazioni di dinamiche molecolare per predire la critico dei lipidi interagendo residui nello stato chiuso di MscS. Il ruolo fisiologico di questi residui fu poi indagato eseguendo dosaggi downshock osmotico MscS mutanti dove i residui di interazione dei lipidi sono stati mutati di alanina. Questi esperimenti identificato sette residui nei primi e il secondo del transmembrane eliche come rilevazione del lipido residui. La maggior parte di questi residui &egrave; aminoacidi idrofobici situati vicino l&#39;interfaccia extracellulare della membrana. Tutti questi residui di interagire fortemente con il doppio strato lipidico nello stato chiuso di MscS, ma non faccia il doppio strato direttamente nelle strutture associate agli stati aperti e desensibilizzati del canale. Cos&igrave;, la posizione di questi residui rispetto la membrana lipidica appare correlata alla capacit&agrave; del canale di tensione senso nei suoi diversi stati fisiologici.

Definizione del ruolo del sensore di tensione nel canale mechanosensitive di piccola conduttanza.

&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x200B;&#x200B;&#xFF08;MSCS&#xFF09;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x958B;&#x3044;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x9593;&#x306E;&#x9077;&#x79FB;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x8102;&#x8CEA;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x5F35;&#x529B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x4F1D;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MSCS&#x306E;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5206;&#x5B50;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x3057;&#x305F;&#x306E;Mscs&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x6D78;&#x900F;downshock&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x3092;&#x611F;&#x77E5;&#x3059;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7B2C;&#x4E00;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;7&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x819C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3001;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306F;&#x3001;MSCS&#x306E;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x3068;&#x5F37;&#x304F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8131;&#x611F;&#x4F5C;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x306B;&#x76F4;&#x9762;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x200B;&#x200B;&#x819C;&#x306B;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x5F35;&#x529B;&#x3092;&#x611F;&#x77E5;&#x3059;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC791;&#xC740; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; (MscS)&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; mechanosensitive &#xCC44;&#xB110;&#xC758; phenotypic &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD3D0;&#xC1C4; &#xBC0F; &#xC624;&#xD508; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xAC04; &#xC804;&#xD658;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558; &#xACE0; &#xAE34;&#xC7A5; &#xC751;&#xB2F5; transduce &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC9C8; Mscs&#xC758; &#xB2EB;&#xD78C;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC608;&#xCE21; &#xD558; &#xBD84;&#xC790; &#xB3D9;&#xC801; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xB2E4;&#xC74C; MscS &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC744; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4;&#xC5D0; &#xC0BC; &#xD22C; downshock &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBC0F; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xD3EC;&#xD568; 7 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC740; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC774; &#xB9C9;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xBD80;&#xADFC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; Mscs&#xC758; &#xB2EB;&#xD78C;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayer &#xAC15;&#xD558;&#xAC8C; &#xC791;&#xC6A9;&#xD560; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC29;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; desensitized &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; bilayer &#xC5BC;&#xAD74;&#xC744; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xAC10;&#xAC01; &#xAE34;&#xC7A5; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC791;&#xC740; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4;&#xC758; mechanosensitive &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE34;&#xC7A5; &#xC13C;&#xC11C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las mutaciones que alteran el comportamiento fenot&#xED;pico de la canal de Escherichia coli mecanosensible de la conductancia peque&#xF1;a (MSC) han sido identificados, sin embargo, la mayor parte de estos residuos juegan un papel cr&#xED;tico en la transici&#xF3;n entre los estados cerrado y abierto del canal y que no est&#xE1;n directamente involucrados en los l&#xED;pidos interacciones que transduce la respuesta tensi&#xF3;n. En este estudio, usamos simulaciones de din&#xE1;mica molecular para predecir la interacci&#xF3;n de los residuos cr&#xED;ticos de l&#xED;pidos en el estado cerrado de MSCS. El papel fisiol&#xF3;gico de estos residuos se investig&#xF3; a continuaci&#xF3;n, mediante la realizaci&#xF3;n de ensayos osm&#xF3;ticos downshock en mutantes MSCS donde los residuos que interact&#xFA;an l&#xED;pidos fueron mutados a alanina. Estos experimentos identificaron siete residuos en las h&#xE9;lices transmembrana primera y segunda como de detecci&#xF3;n de l&#xED;pidos residuos. La mayor&#xED;a de estos residuos son amino&#xE1;cidos hidr&#xF3;fobos situados cerca de la interfaz extracelular de la membrana. Todos estos residuos interact&#xFA;an fuertemente con la bicapa de l&#xED;pido en el estado cerrado de MSCs, pero no frente a la bicapa directamente en estructuras asociadas con los estados abierto y desensibilizado del canal. As&#xED;, la posici&#xF3;n de estos residuos en relaci&#xF3;n con la membrana lip&#xED;dica parece estar relacionado con la capacidad del canal a la tensi&#xF3;n sentido en sus diferentes estados fisiol&#xF3;gicos.

Definici&#xF3;n del papel del sensor de tensi&#xF3;n en el Canal de la conductancia peque&#xF1;a mecanosensibles

&#xC9C0;&#xC6D0; &#xB418;&#xB294; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayers (SLBs) &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayers&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5B4; &#xC654;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; SLBs &#xC9C0;&#xC9C8; bilayer&#xC640; &#xAE30;&#xD310; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; inhomogeneities&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xD1B5;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC5D0;&#xD2F8;&#xB80C; &#xAE00;&#xB9AC;&#xCF5C; &#xC885;&#xB8CC; &#xC870;&#xB9BD;&#xB41C; monolayers (SAMs) &#xC704;&#xC5D0; &#xAF43;&#xBB34;&#xB2AC; SLBs &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; microcontact &#xC778;&#xC1C4; &#xC0AC;&#xC6A9;. SAMs &#xAE00;&#xB9AC;&#xCF5C; &#xC885;&#xB8CC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D; biomolecules &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC18C;&#xD3EC; &#xB4F1;&#xC758; &#xD761; &#xAD11;&#xB3C4;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xAF43;&#xBB34;&#xB2AC; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayer &#xC601;&#xC5ED; &#xD45C;&#xBA74; &#xD328;&#xD134;&#xD654; hexadecanethiol &#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC9C0;&#xC9C8; monolayers&#xB85C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &alpha; hemolysin &#xD070; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xADF8; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayer &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0BD;&#xC785; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Microcontact tetraethylene &#xAE00;&#xB9AC;&#xCF5C; &#xD14C;&#xD06C;&#xB180;&#xB85C;&#xC9C0; monolayers&#xC5D0; &#xAF43;&#xBB34;&#xB2AC; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayers&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC778;&#xC1C4;.

&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x8102;&#x53CC;&#x5C42; (SLBs) &#x5F62;&#x6210;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E0D;&#x540C;&#x886C;&#x5E95;&#x4E0A;&#x5DF2;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x5728;&#x8102;&#x53CC;&#x5C42;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x6570; SLBs &#x60A3;&#x6709;&#x7531;&#x4E8E;&#x8102;&#x8D28;&#x53CC;&#x5C42; &#xFF08;&#x819C;&#x4E0E;&#x886C;&#x5E95;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4E0D;&#x5747;&#x5300;&#x6027;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x907F;&#x514D;&#x8FD9;&#x4E00;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7528;&#x4E8E;&#x5370;&#x5237;&#x672F;&#x521B;&#x5EFA;&#x56FE;&#x6848;&#x7684; SLBs &#x5728;&#x4E59;&#x70EF;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x7EC8;&#x6B62;&#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x819C; (SAMs)&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x5DF2;&#x793A;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x7EC8;&#x6B62; SAMs &#x62B5;&#x5236;&#x751F;&#x7269;&#x5206;&#x5B50;&#x5305;&#x62EC;&#x8102;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7684;&#x5438;&#x6536;&#x7387;&#x3002;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x56FE;&#x6848;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x53CC;&#x5C42;&#x533A;&#x57DF;&#x9694;&#x5F00;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x7684;&#x56FE;&#x6848;&#x7684; hexadecanethiol &#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x5F62;&#x6210;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&alpha;-&#x6EB6;&#x8840;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5927;&#x578B;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5C06;&#x4F18;&#x5148;&#x63D2;&#x5165;&#x5230;&#x57FA;&#x677F;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x53CC;&#x5C42;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;

&#x521B;&#x5EFA;&#x56DB;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x819C;&#x4E0A;&#x7684;&#x56FE;&#x6848;&#x7684;&#x8102;&#x53CC;&#x5C42;&#x7684;&#x5370;&#x5237;&#x672F;&#x3002;

Supported lipid bilayers (SLBs) formed on many different substrates have been widely used in the study of lipid bilayers. However, most SLBs suffer from inhomogeneities due to interactions between the lipid bilayer and the substrate. In order to avoid this problem, we have used microcontact printing to create patterned SLBs on top of ethylene-glycol-terminated self-assembled monolayers (SAMs). Glycol-terminated SAMs have previously been shown to resist absorbance of biomolecules including lipid vesicles. In our system, patterned lipid bilayer regions are separated by lipid monolayers, which form over the patterned hexadecanethiol portions of the surface. Furthermore, we demonstrate that Î±-hemolysin, a large transmembrane protein, inserts preferentially into the lipid bilayer regions of the substrate.

Microcontact printing for creation of patterned lipid bilayers on tetraethylene glycol self-assembled monolayers.

Bicouches lipidiques support&#xE9;es (SLBS) form&#xE9;s sur de nombreux substrats diff&#xE9;rents ont &#xE9;t&#xE9; largement utilis&#xE9;s dans l&#x26;#39;&#xE9;tude des bicouches lipidiques. Cependant, la plupart souffrent de SLBS inhomog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9;s dues &#xE0; des interactions entre la bicouche lipidique et le substrat. Afin d&#x26;#39;&#xE9;viter ce probl&#xE8;me, nous avons utilis&#xE9; pour cr&#xE9;er l&#x26;#39;impression par microcontact SLBS motifs sur le dessus de l&#x26;#39;&#xE9;thyl&#xE8;ne-glycol &#xE0; terminaison monocouches auto-assembl&#xE9;es (SAM). SAM glycol &#xE0; terminaison ont &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment montr&#xE9; pour r&#xE9;sister &#xE0; l&#x26;#39;absorbance de biomol&#xE9;cules, y compris des v&#xE9;sicules lipidiques. Dans notre syst&#xE8;me, &#xE0; motifs r&#xE9;gions bicouches lipidiques sont s&#xE9;par&#xE9;s par des monocouches lipidiques, qui forment sur les parties &#xE0; motifs hexadecanethiol de la surface. En outre, nous d&#xE9;montrons que &#x3B1;-h&#xE9;molysine, une prot&#xE9;ine transmembranaire grande, inserts de pr&#xE9;f&#xE9;rence dans les r&#xE9;gions bicouches lipidiques du substrat.

Impression microcontact pour la cr&#xE9;ation de bicouches lipidiques &#xE0; motifs sur t&#xE9;tra&#xE9;thyl&#xE8;neglycol monocouches auto-assembl&#xE9;es

Unterst&uuml;tzte Lipid-Doppelschichten (SLBs) auf vielen verschiedenen Substraten gebildet wurden weitgehend in der Studie von Lipid-Doppelschichten verwendet. Jedoch leiden die meisten SLBs Inhomogenit&auml;ten durch Interaktionen zwischen der Lipid-Bilayer und Substrat. Um dieses Problem zu vermeiden, haben wir Microcontact Druck verwendet, gemusterte SLBs auf Ethylen-Glykol-terminierte assembled Monolayers (SAMs) zu erstellen. Glykol-terminierte SAMs wurden zuvor gezeigt, die Absorption von Biomolek&uuml;len einschlie&szlig;lich Lipid Vesicles zu widerstehen. In unserem System sind gemusterte Lipid Bilayer Regionen durch Lipid Monolayers, getrennt, die &uuml;ber die gemusterten Hexadecanethiol Teile der Oberfl&auml;che bilden. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass &alpha;-Hemolysin, eine gro&szlig;e Transmembraneprotein bevorzugt in der Lipid-Bilayer-Regionen des Substrates einf&uuml;gt.

MicroContact Druck und Erstellung von gemusterten Lipid-Doppelschichten auf Tetraethylene Glykol assembled Monolayers.

Supportati lipidici (SLBs) formate su molti substrati diversi sono stati ampiamente utilizzati nello studio di lipidici. Tuttavia, la maggior parte delle SLBs soffrono di disomogeneit&agrave; a causa delle interazioni tra il doppio strato lipidico e il substrato. Per evitare questo problema, abbiamo usato stampa microcontatto per creare SLBs modellato sulla cima di monostrati auto-assemblati con terminazione etilene-glicole (SAMs). SAMs glicole-terminato in precedenza hanno dimostrata di resistere assorbanza di biomolecole compreso le vescicole lipidiche. Nel nostro sistema, regioni doppio strato lipidico fantasia sono separati da strati monomolecolari lipidica, che si formano sulle parti di superficie poligonale hexadecanethiol. Inoltre, dimostriamo che &alpha;-emolisina, una grande proteina transmembrana, inserti preferenzialmente nelle regioni doppio strato lipidico del substrato.

Stampa microcontatto per creazione di fantasia lipidici su monostrati auto-assemblati glicole tetraethylene.

&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x819C;&#xFF08;SLB&#x306E;&#xFF09;&#x304C;&#x5E83;&#x304F;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;SLB&#x306F;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x3068;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x4E0D;&#x5747;&#x4E00;&#x6027;&#x306B;&#x82E6;&#x3057;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D42;&#x7AEF;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#xFF08;SAM&#xFF09;&#x306F;&#x4E0A;&#x306B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;SLB&#x306E;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D42;&#x7AEF;SAM&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x8102;&#x8CEA;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x751F;&#x4F53;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5438;&#x5149;&#x5EA6;&#x3092;&#x30EC;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;hexadecanethiol&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x4E0A;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x8102;&#x8CEA;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x3067;&#x533A;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x3B1;-&#x6EB6;&#x8840;&#x7D20;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C8;&#x6750;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x4E0A;&#x306B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x306E;&#x4F5C;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;

Soportados bicapas lip&#xED;dicas (SLBS) formadas en muchos sustratos diferentes han sido ampliamente utilizados en el estudio de bicapas lip&#xED;dicas. Sin embargo, la mayor&#xED;a de SLBS sufren de inhomogeneidades debido a las interacciones entre la bicapa lip&#xED;dica y el sustrato. Con el fin de evitar este problema, se han utilizado para crear la impresi&#xF3;n microcontacto SLBS estampadas en la parte superior de etileno-glicol-terminados en monocapas autoensambladas (SAM). SAM terminados glicol-han sido previamente demostrado para resistir la absorci&#xF3;n de biomol&#xE9;culas, incluyendo las ves&#xED;culas lip&#xED;dicas. En nuestro sistema, estampadas regiones bicapa de l&#xED;pidos se separan por monocapas de l&#xED;pidos, que se forman sobre las porciones estampadas hexadecanotiol de la superficie. Adem&#xE1;s, se demuestra que &#x3B1;-hemolisina, una prote&#xED;na transmembrana grande, inserta preferentemente en las regiones bicapa lip&#xED;dica de la sustrato.

Microcontacto de impresi&#xF3;n para la creaci&#xF3;n de la bicapa lip&#xED;dica de entramado de tetraetilenglicol glicol monocapas auto-ensambladas

&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x5E76;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7EC6;&#x83CC;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7; (bCNG) &#x7684;&#x5C0F;&#x7535;&#x5BFC; (MscS) &#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x9891;&#x9053;&#x4E9A;&#x79D1;&#x3002;BCNG &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x57DF;&#x5C55;&#x54C1;&#x5230;&#x673A;&#x68B0;&#x4E9A;&#x79D1;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x5148;&#x524D;&#x5DF2;&#x7528;&#x4E8E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6807;&#x5FD7;&#x95E8;&#x673A;&#x68B0;&#x5E94;&#x529B;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x5730;&#x533A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x80FD;&#x62EF;&#x6551;&#x4ECE;&#x6E17;&#x900F; downshock Escherichiacoli&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x67E5;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E5D;&#x4E2A; bCNG &#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E;&#x5168;&#x957F; bCNG &#x6E20;&#x9053;&#x90FD;&#x65E0;&#x6CD5;&#x633D;&#x6551;&#x4F4E;&#x6E17;&#x5E94;&#x529B;&#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6709;&#x9650;&#x7684; mechanosensation &#x662F;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x4E2D;&#x53D6;&#x51FA;&#x65F6;&#x8FD8;&#x539F;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; MscS &#x5BB6;&#x65CF;&#x7684; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x901A;&#x9053;&#x95E8;&#x63A7;&#x548C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7A81;&#x51FA;&#x88AB;&#x5C01;&#x95ED;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x523A;&#x6FC0;&#x8D85;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x673A;&#x68B0;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053; (bCNG)&#xFF1A; &#x6D1E;&#x5BDF;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x5728;&#x5C0F;&#x7535;&#x5BFC;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x901A;&#x9053;&#x95E8;&#x63A7;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

We have recently identified and characterized the bacterial cyclic nucleotide gated (bCNG) subfamily of the larger mechanosensitive channel of small conductance (MscS) superfamily of ion channels. The channel domain of bCNG channels exhibits significant sequence homology to the mechanosensitive subfamily of MscS in the regions that have previously been used as a hallmark for channels that gate in response to mechanical stress. However, we have previously demonstrated that three of these channels are unable to rescue Escherichiacoli from osmotic downshock. Here, we examine an additional nine bCNG homologues and further demonstrate that the full-length bCNG channels are unable to rescue E. coli from hypoosmotic stress. However, limited mechanosensation is restored upon removal of the cyclic nucleotide binding domain. This indicates that the C-terminal domain of the MscS superfamily can drive channel gating and further highlight the ability of a superfamily of ion channels to be gated by multiple stimuli.

Mechanosensitive behavior of bacterial cyclic nucleotide gated (bCNG) ion channels: Insights into the mechanism of channel gating in the mechanosensitive channel of small conductance superfamily.

Nous avons r&#xE9;cemment identifi&#xE9; et caract&#xE9;ris&#xE9; la flore bact&#xE9;rienne des nucl&#xE9;otides cycliques gated (bCNG) sous-famille de la plus grande cha&#xEE;ne de la conductance m&#xE9;canosensible petite (MSCS) superfamille des canaux ioniques. Le domaine de canal de canaux bCNG pr&#xE9;sente une homologie de s&#xE9;quence significative avec la sous-famille m&#xE9;canosensible de MSCS dans les r&#xE9;gions qui ont d&#xE9;j&#xE0; &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s comme une caract&#xE9;ristique pour les canaux qui porte en r&#xE9;ponse au stress m&#xE9;canique. Cependant, nous l&#x26;#39;avons d&#xE9;j&#xE0; d&#xE9;montr&#xE9; que trois de ces canaux sont incapables de sauver Escherichiacoli de downshock osmotique. Ici, nous examinons neuf autres homologues bCNG et d&#xE9;montrent en outre que les canaux bCNG pleine longueur sont incapables de sauver E. coli de stress hypoosmotique. Toutefois, m&#xE9;canosensibilit&#xE9; limit&#xE9;e est restaur&#xE9;e lors de l&#x26;#39;enl&#xE8;vement du domaine de liaison de nucl&#xE9;otides cycliques. Ce qui indique que le domaine C-terminal de la superfamille MSC peuvent conduire de d&#xE9;clenchement de canal et en outre mettre en &#xE9;vidence la capacit&#xE9; d&#x26;#39;un superfamille des canaux ioniques &#xE0; &#xEA;tre ferm&#xE9;e par des stimuli multiples.

Comportement m&#xE9;canosensible bact&#xE9;riennes des nucl&#xE9;otides cycliques Gated canaux ioniques (bCNG): le point sur le m&#xE9;canisme de vannage Manche dans la Manche m&#xE9;canosensible Superfamille faible conductance

Wir haben vor kurzem identifiziert und zur Unterfamilie der bakteriellen zyklische Nukleotid Gating (bCNG) von den gr&ouml;&szlig;eren Mechanosensitive-Kanal kleiner Leitwert (MscS)-Superfamilie von Ionenkan&auml;len gekennzeichnet. Die Kanal-Dom&auml;ne von bCNG Kan&auml;len weist erhebliche Sequenz-Homologie zu den Mechanosensitive-Unterfamilie der MscS in den Regionen, die zuvor als ein Markenzeichen f&uuml;r Kan&auml;le verwendet wurden, die als Reaktion auf mechanische Beanspruchung Tor. Jedoch haben wir bereits bewiesen, dass drei dieser Kan&auml;le nicht in der Lage sind, Escherichiacoli aus osmotische Downshock zu retten. Hier untersuchen wir eine zus&auml;tzliche neun bCNG Homologen und weiter demonstrieren, die in bCNG-Kan&auml;le nicht in der Lage, E. Coli Hypoosmotic Stress zu retten. Begrenzte Mechanosensation ist, nach der Entfernung der zyklische Nukleotid verbindliche Dom&auml;ne wiederhergestellt. Dies bedeutet, dass die C-terminalen Dom&auml;ne der MscS-Superfamilie Kanal Anschnitt-fahren und markieren Sie weiter die M&ouml;glichkeit eine Superfamilie von Ionenkan&auml;len, durch mehrere Stimuli Gating werden kann.

Mechanosensitive Verhalten der bakteriellen zyklische Nukleotid Gating (bCNG)-Ionenkan&auml;le: Einblicke in den Mechanismus der Kanal Anspritzung im Mechanosensitive Kanal kleiner Leitwert-Superfamilie.

Recentemente abbiamo identificato e caratterizzato la sottofamiglia batterica gated nucleotide ciclico (bCNG) del canale pi&ugrave; grande mechanosensitive della superfamiglia piccola conduttanza (MscS) dei canali ionici. Il dominio del canale di bCNG canali presenta omologia di sequenza significativa alla sottofamiglia mechanosensitive di MscS nelle regioni che hanno gi&agrave; utilizzate come un segno distintivo per i canali che cancello in risposta alle sollecitazioni meccaniche. Tuttavia, abbiamo dimostrato in precedenza che tre di questi canali sono in grado di salvare Escherichiacoli da osmotico downshock. Qui, esaminiamo un ulteriore nove bCNG omologhi e dimostrare ulteriormente che i canali full-length bCNG sono in grado di salvare e. coli da stress hypoosmotic. Tuttavia, mechanosensation limitata viene ripristinato dopo l&#39;espianto del dominio associazione nucleotide ciclico. Questo indica che il dominio C-terminale della superfamiglia MscS pu&ograve; guidare canale gating ed evidenziare ulteriormente la capacit&agrave; di una superfamiglia di canali ionici di essere gestita da pi&ugrave; stimoli.

Comportamento Mechanosensitive di nucleotide ciclico batterica gated scanalature dello ione (bCNG): intuizioni nel meccanismo del canale gating nel canale mechanosensitive di Superfamiglia piccola conduttanza.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#xFF08;MSCS&#xFF09;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF08;bCNG&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x305F;&#x3002; bCNG&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5730;&#x57DF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MSCS&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x914D;&#x5217;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;3&#x304C;&#x6D78;&#x900F;downshock&#x304B;&#x3089;Escherichiacoli&#x3092;&#x6551;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;9 bCNG&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;bCNG&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x4F4E;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3092;&#x6551;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;mechanosensation&#x306F;&#x3001;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x6642;&#x306B;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;MSCS&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x63A8;&#x9032;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306A;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5C0F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#xFF1A;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF08;bCNG&#xFF09;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x884C;&#x52D5;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xCD5C;&#xADFC; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xBB38;&#xC774; (bCNG) &#xC544; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; (MscS) superfamily&#xC758; &#xD070; mechanosensitive &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD2B9;&#xC9D5;. BCNG &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xCC44;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xCC44;&#xB110; &#xAC8C;&#xC774;&#xD2B8; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC01; &#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB41C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; Mscs&#xC758; mechanosensitive &#xC544;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; homology &#xC804;&#xC2DC;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0;&#xC774; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; 3 &#xC0BC; &#xD22C; downshock&#xC5D0;&#xC11C; Escherichiacoli&#xB97C; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD558;&#xB294; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD94;&#xAC00; 9 bCNG homologues &#xAC80;&#xC0AC; &#xCD94;&#xAC00; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; bCNG &#xCC44;&#xB110; hypoosmotic &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC744; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; mechanosensation &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. MscS superfamily&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xCC44;&#xB110; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xD558; &#xACE0; &#xB354;&#xC6B1; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBB38;&#xC774; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; superfamily&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Mechanosensitive &#xB3D9;&#xC791; &#xC138;&#xADE0; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xC758; &#xBB38;&#xC774; (bCNG) &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;: &#xCC44;&#xB110; &#xC791;&#xC740; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; superfamily&#xC758; mechanosensitive &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;.

Recientemente, hemos identificado y caracterizado la bacteria de nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos cerrada (bCNG) subfamilia del canal m&#xE1;s grande de la conductancia peque&#xF1;a mecanosensible (MSC) superfamilia de los canales i&#xF3;nicos. El dominio del canal de los canales bCNG exhibe una homolog&#xED;a de secuencia significativa a la subfamilia mecanosensible de MSCs en las regiones que se han utilizado previamente como un sello para los canales que la puerta en respuesta a la tensi&#xF3;n mec&#xE1;nica. Sin embargo, hemos demostrado anteriormente que tres de estos canales no son capaces de rescatar a Escherichia coli de downshock osm&#xF3;tica. Aqu&#xED;, examinamos otros nueve hom&#xF3;logos bCNG y demostrar a&#xFA;n m&#xE1;s que los canales de bCNG de larga duraci&#xF3;n no son capaces de rescatar a E. coli de la tensi&#xF3;n hipoosm&#xF3;tica. Sin embargo, mechanosensation limitada se restaura despu&#xE9;s de la retirada del dominio de uni&#xF3;n de nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos. Esto indica que el dominio C-terminal de la superfamilia de MSCs puede conducir canal gating y a&#xFA;n m&#xE1;s de relieve la capacidad de una superfamilia de los canales i&#xF3;nicos de ser cerrada por est&#xED;mulos m&#xFA;ltiples.

Comportamiento de los mecanosensible bacterianas nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos (Gated bCNG) Canales i&#xF3;nicos: conocer el mecanismo de apertura de puerta del canal en el Canal de la superfamilia de la conductancia mecanosensibles Peque&#xF1;a

La chimie des surfaces: Une nouvelle m&#xE9;thode pour cr&#xE9;er des motifs complexes sur l&#x26;#39;or substrats est signal&#xE9;. Substrats ont &#xE9;t&#xE9; fonctionnalis&#xE9;s avec nitroveratryl prot&#xE9;g&#xE9; par l&#x26;#39;acide carboxylique et &#xE0; terminaison hydroxy monom&#xE8;res thiol et model&#xE9; avec un syst&#xE8;me de photolithographie &#xE9;criture directe pour produire des gradients complexes de groupes fonctionnels. En outre, deux mol&#xE9;cules d&#x26;#39;amines ont &#xE9;t&#xE9; successivement coupl&#xE9; sur le substrat sous le contr&#xF4;le de l&#x26;#39;espace.

D&#xE9;masquer Photolithographie: une mani&#xE8;re polyvalente sur le site-s&#xE9;lective des substrats d&#x26;#39;or de mod&#xE8;le

Oberfl&auml;chen-Chemie: eine neue Methode f&uuml;r die Erstellung von komplexe Mustern auf gold Substraten wird berichtet. Substrate wurden funktionalisierten mit Nitroveratryl gesch&uuml;tzten Carbons&auml;ure und hydroxy-terminierte Thiol-Monomere und gemustert mit einem direkten Schreibzugriff Fotolithografie-System zu komplexen funktionellen Gruppe Farbverl&auml;ufe zu erzeugen. Dar&uuml;ber hinaus wurden zwei Aminogruppen Molek&uuml;le nacheinander auf dem Substrat unter r&auml;umliche Kontrolle gekoppelt.

Entlarvung Fotolithografie: Eine vielseitige M&ouml;glichkeit, Website-selektiv-Muster Gold Substrate.

Chimica di superficie: un nuovo metodo per la creazione di modelli complessi su substrati d&#39;oro &egrave; segnalato. Substrati sono stati funzionalizzati con acido carbossilico protetto da nitroveratryl e monomeri idrossi-terminati tiolo e modellati con un sistema di scrittura diretta fotolitografia per produrre gradienti di gruppo funzionale complesso. Inoltre, due molecole di ammina erano accoppiati in sequenza sul substrato sotto controllo spaziale.

Smascherando fotolitografia: Un modo Versatile per substrati sito selettivamente modello Gold.

&#x8868;&#x9762;&#x5316;&#x5B66;&#xFF1A; &#x62A5;&#x9053;&#x91D1;&#x886C;&#x5E95;&#x4E0A;&#x521B;&#x5EFA;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x886C;&#x5E95;&#x4E0E; nitroveratryl &#x4FDD;&#x62A4;&#x7FA7;&#x9178;&#x548C;&#x7F9F;&#x57FA;&#x5DEF;&#x57FA;&#x5355;&#x4F53;&#x5B98;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x76F4;&#x5199;&#x5149;&#x523B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4EA7;&#x751F;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7EC4;&#x6E10;&#x53D8;&#x56FE;&#x6848;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x80FA;&#x5206;&#x5B50;&#x6309;&#x987A;&#x5E8F;&#x7A7A;&#x95F4;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x7684;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x52A0;&#x4E0A;&#x3002;

&#x63ED;&#x7A7F;&#x5149;&#x523B;&#xFF1A; &#x901A;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x5411;&#x7F51;&#x7AD9;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x6A21;&#x5F0F;&#x9EC4;&#x91D1;&#x886C;&#x5E95;&#x3002;

Surface chemistry: A new method for creating complex patterns on gold substrates is reported. Substrates were functionalized with nitroveratryl-protected carboxylic acid and hydroxy-terminated thiol monomers and patterned with a direct-write photolithography system to produce complex functional group gradients. In addition, two amine molecules were sequentially coupled on the substrate under spatial control.

Unmasking Photolithography: A Versatile Way to Site-Selectively Pattern Gold Substrates.

&#x8868;&#x9762;&#x5316;&#x5B66;&#xFF1A;&#x91D1;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x3067;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x57FA;&#x677F;&#x306F;nitroveratryl&#x3067;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x672B;&#x7AEF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x5B98;&#x80FD;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5B98;&#x80FD;&#x57FA;&#x306E;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x66F8;&#x304D;&#x8FBC;&#x307F;&#x30EA;&#x30BD;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x5206;&#x5B50;&#x304C;&#x9023;&#x7D9A;&#x3057;&#x3066;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;

&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x91D1;&#x57FA;&#x677F;&#x306B;&#x4FBF;&#x5229;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF1A;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30BD;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30AF;&#x89E3;&#x9664;

&#xD45C;&#xBA74; &#xD654;&#xD559;: &#xACE8;&#xB4DC; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xD310; carboxylic &#xC0B0; nitroveratryl &#xBCF4;&#xD638;&#xC640; hydroxy &#xC885;&#xB8CC; thiol &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4; functionalized &#xACE0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xADF8;&#xB8F9; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC9C1;&#xC811; &#xC4F0;&#xAE30; &#xC0AC;&#xC9C4; &#xD3C9;&#xD310; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xACFC; &#xAF43;&#xBB34;&#xB2AC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC544;&#xBBFC; &#xBD84;&#xC790; &#xACF5;&#xAC04; &#xC81C;&#xC5B4; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xD569; &#xD588;&#xB2E4;.

Unmasking &#xC0AC;&#xC9C4; &#xD3C9;&#xD310;: &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xD328;&#xD134; &#xACE8;&#xB4DC; &#xAE30;&#xD310;.

La qu&#xED;mica de superficie: Un nuevo m&#xE9;todo para la creaci&#xF3;n de patrones complejos de oro en los sustratos se informa. Los sustratos se funcionalizado con nitroveratryl protegido &#xE1;cido carbox&#xED;lico y terminados en hidroxilo y tiol mon&#xF3;meros modelada con un sistema de fotolitograf&#xED;a directa-escritura para producir complejos gradientes de grupos funcionales. Adem&#xE1;s, dos mol&#xE9;culas de amina se copul&#xF3; secuencialmente sobre el substrato bajo control espacial.

Desenmascarando Fotolitograf&#xED;a: una forma vers&#xE1;til de manera selectiva sitio sustratos patr&#xF3;n oro

Monostrati auto-assemblati (SAMs) sono ampiamente utilizzati per confinare le proteine e le cellule di un modello per studiare il comportamento e i processi cellulari. Al fine di esplorare pienamente alcuni di questi fenomeni, &egrave; necessario controllare la crescita delle cellule e confinamento per diverse settimane. Qui vi presentiamo un metodo semplice che proteine e confinamento cellulare ad un pattern pu&ograve; essere mantenute per pi&ugrave; di 35 giorni. Questo rappresenta un aumento significativo nella stabilit&agrave; del modello rispetto ai precedenti sistemi monostrato ed &egrave; realizzato usando un monomero di glicole ammide-collegati su 50 &Aring; &Aring; lamelle di vetro rivestito in oro titanio/100. Inoltre, questo studio fornisce una visione nel metodo della degradazione di SAM ed esclude interfacciale miscelazione dei monomeri e fioritura della adlayer come meccanismi principali per la degradazione di SAM.

Maggiore stabilit&agrave; di monostrati auto-assemblati glicole-terminato per la coltura di fantasia cellulare a lungo termine.

Assembled Monolayers (SAMs) sind weit verbreitet, Proteinen und Zellen zu einem Muster zu beschr&auml;nken um zellul&auml;re Prozesse und Verhalten zu studieren. Um einige dieser Ph&auml;nomene zu erforschen, ist es notwendig, Zellwachstum und Entbindung f&uuml;r mehrere Wochen zu kontrollieren. Hier pr&auml;sentieren wir eine einfache Methode, die mit der Protein und zellul&auml;re Bettruhe ein Muster f&uuml;r mehr als 35 Tagen gehalten werden k&ouml;nnen. Dies entspricht ein deutliches Muster Stabilit&auml;t im Vergleich zu fr&uuml;heren Monolayer-Systemen und wird mit einem Amid-chromosomale Glykol-Monomer auf 50 &Aring; Titan/100 &Aring; Gold-&uuml;berzogenen Glasdeckgl&auml;ser erreicht. Dar&uuml;ber hinaus diese Studie gibt Einblick in die Methode der SAM-Abbau und schlie&szlig;t die Grenzfl&auml;chenspannung Mischen von den Monomeren und bl&uuml;hen von der Adlayer als wichtige Mechanismen f&uuml;r SAM-Abbau.

Erh&ouml;hte Stabilit&auml;t der Glykol-terminierte assembled Monolayers f&uuml;r langfristige gemusterten Zellkultur.

&#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7684;&#x819C; (SAMs) &#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4E8E;&#x9650;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x56FE;&#x6848;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x548C;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x4EE5;&#x5145;&#x5206;&#x4E86;&#x89E3;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x73B0;&#x8C61;&#xFF0C;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x661F;&#x671F;&#x7684;&#x7981;&#x95ED;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E00;&#x79CD;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9694;&#x79BB;&#x6A21;&#x5F0F;&#x53EF;&#x7EF4;&#x6301;&#x8D85;&#x8FC7; 35 &#x5929;&#x3002;&#x8FD9;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x6A21;&#x5F0F;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x5355;&#x5C42;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x94FE;&#x63A5;&#x9170;&#x80FA;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x5355;&#x4F53;&#x4E0A; 50 &Aring; &#x949B;/100 &#x57C3;&#x91D1;&#x9540;&#x819C;&#x73BB;&#x7483;&#x7684;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6D1E;&#x5BDF; SAM &#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5305;&#x62EC;&#x754C;&#x9762;&#x7684;&#x5355;&#x4F53;&#x6DF7;&#x5408;&#x548C;&#x76DB;&#x5F00;&#x7684; adlayer &#x4F5C;&#x4E3A; SAM &#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x7EC8;&#x6B62;&#x957F;&#x671F;&#x5E26;&#x56FE;&#x6848;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x819C;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;

Self-assembled monolayers (SAMs) are widely used to confine proteins and cells to a pattern in order to study cellular processes and behavior. In order to fully explore some of these phenomena, it is necessary to control cell growth and confinement for several weeks. Here we present a simple method by which protein and cellular confinement to a pattern can be maintained for more than 35 days. This represents a significant increase in pattern stability compared to previous monolayer systems and is achieved by using an amide-linked glycol monomer on 50 Ã… titanium/100 Ã… gold-coated glass coverslips. In addition, this study provides insight into the method of SAM degradation and excludes interfacial mixing of the monomers and blooming of the adlayer as major mechanisms for SAM degradation.

Article	Year
Generation and evaluation of a large mutational library from the Escherichia coli mechanosensitive channel of large conductance, MscL: implications for channel gating and evolutionary design... The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 12670944	2003
Total chemical synthesis and electrophysiological characterization of mechanosensitive channels from Escherichia coli and Mycobacterium tuberculosis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 15041744	2004
Reconstitution of ion channels in agarose-supported silicon orifices. Biosensors & bioelectronics\| PubMed ID: 17098413	2007
Confirming the revised C-terminal domain of the MscL crystal structure. Biophysical journal\| PubMed ID: 18326638	2008
Direct printing of trichlorosilanes on glass for selective protein adsorption and cell growth. Molecular bioSystems\| PubMed ID: 18493643	2008
Identification and experimental verification of a novel family of bacterial cyclic nucleotide-gated (bCNG) ion channels. Biochimica et biophysica acta\| PubMed ID: 20529663	2010
Sequence or structure: using bioinformatics and homology modeling to understand functional relationships in cAMP/cGMP binding domains. Molecular bioSystems\| PubMed ID: 20567776	2010
Recycling and reusing patterned self-assembled monolayers for cell culture. Chemical communications (Cambridge, England)\| PubMed ID: 21049122	2011
Defining the role of the tension sensor in the mechanosensitive channel of small conductance. Biophysical journal\| PubMed ID: 21767486	2011
Microcontact printing for creation of patterned lipid bilayers on tetraethylene glycol self-assembled monolayers. Langmuir : the ACS journal of surfaces and colloids\| PubMed ID: 21866896	2011
Mechanosensitive behavior of bacterial cyclic nucleotide gated (bCNG) ion channels: Insights into the mechanism of channel gating in the mechanosensitive channel of small conductance superfa... Biochemical and biophysical research communications\| PubMed ID: 22206667	2012
Unmasking Photolithography: A Versatile Way to Site-Selectively Pattern Gold Substrates. Angewandte Chemie (International ed. in English)\| PubMed ID: 22271352	2012
Increased Stability of Glycol-Terminated Self-Assembled Monolayers for Long-Term Patterned Cell Culture. Langmuir : the ACS journal of surfaces and colloids\| PubMed ID: 22316394	2012

Joshua A. Maurer

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