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Quantifying Agonist Activity at G Protein-coupled Receptors

When an agonist activates a population of G protein-coupled receptors (GPCRs), it elicits a signaling pathway that culminates in the response of the cell ...

University of California

&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x662F;&#x5426;&#x878D;&#x5408;&#x7684; G(16) &#x7684; &alpha; &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; (Galpha(16)) &#x53EF;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x8FBE;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; G (i)-&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5373; CX (3) C &#x4F53;&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50; 1 &#xFF08;CX(3)CR1) &#x548C; M(2)&#xFF0C;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;Cx (3) CR1 &#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x522B;&#x8868;&#x793A;&#x5355; (3) CR1 CX &#x6216; CX (3) CR1 &#x548C; Galpha(16) &#x6BD4; CX(3)CR1-Galpha(16) &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x7ECF;&#x3001; &#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20; E(2) &#x4EE3;&#x589E;&#x5E45;&#x5927;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;&#x5728;&#x8868;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x5206;&#x522B;&#x8868;&#x793A;&#x5355;&#x72EC;&#x7684; M(2) &#x6216; M(2) &#x548C; Galpha(16) M(2)-Galpha(16) &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x8BF1;&#x53D1;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20; E(2) &#x4EE3;&#x662F;&#x66F4;&#x5927;&#x3002;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E; G Galpha(16) (q)-&#x8026;&#x5408;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5373;&#x5C3E;&#x52A0;&#x538B;&#x7D20; II &#x53D7;&#x4F53;&#x548C;&#x53D7;&#x4F53; M(1)&#xFF0C;&#x6709;&#x5173;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4E0E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8868;&#x793A;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x80DE;&#x5185;&#x7ECF;&#x548C;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20; E(2) &#x4EE3;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x589E;&#x5E45;&#x3002;&#x5728;&#x8868;&#x8FBE;&#x5C3E;&#x52A0;&#x538B;&#x7D20; II receptor-Galpha(16) &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20; E(2) &#x4EE3;&#x5C55;&#x51FA;&#x6BD4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x7ECF;&#x589E;&#x52A0;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684; EC(50) &#x503C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x523A;&#x6FC0; receptor-Galpha(16) &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x4E0B;&#x6E38;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x660E; receptor-Galpha(16) &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x5B64;&#x513F; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x548C; G (i) &#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;-&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;

&#x5728;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x548C;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20; E2 &#x4EE3;&#x589E;&#x52A0;&#x523A;&#x6FC0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53; Galpha16 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

We examined whether fusion proteins of G protein-coupled receptors with the alpha subunit of G(16) (Galpha(16)) could activate downstream signals. We expressed fusion proteins of G(i)-coupled receptors, i.e. CX(3)C chemokine receptor 1 (CX(3)CR1) and M(2) receptor, in Chinese hamster ovary cells. An agonist for CX(3)CR1 induced greater increases in intracellular Ca(2+) and prostaglandin E(2) generation in cells expressing CX(3)CR1-Galpha(16) fusion protein than in cells expressing CX(3)CR1 alone or both CX(3)CR1 and Galpha(16) separately. Similarly, agonist-induced prostaglandin E(2) generation was greater in cells expressing M(2)-Galpha(16) fusion protein than ones expressing M(2) alone or both M(2) and Galpha(16) separately. In cells expressing fusion proteins with Galpha(16) of G(q)-coupled receptors, i.e. urotensin II receptor and M(1) receptor, the relevant agonists induced similar increases in intracellular Ca(2+) and prostaglandin E(2) generation as in ones expressing the receptor alone. In cells expressing urotensin II receptor-Galpha(16) fusion protein, prostaglandin E(2) generation exhibited a lower EC(50) value than the intracellular Ca(2+) increase. These results indicate that agonist-stimulated receptor-Galpha(16) fusion proteins are coupled to downstream signaling pathways, and suggest that receptor-Galpha(16) fusion proteins may be useful for screening for ligands of orphan G protein-coupled receptors and G(i)-coupled receptors.

Stimulation of increases in intracellular calcium and prostaglandin E2 generation in Chinese hamster ovary cells expressing receptor-Galpha16 fusion proteins.

Nous avons examin&eacute; si la fusion prot&eacute;ines de G protein-coupled receptors avec la sous-unit&eacute; alpha de G(16) (Galpha(16)) pourrait activer les signaux en aval. Nous avons exprim&eacute; des prot&eacute;ines de fusion de G (i)-coupl&eacute; des r&eacute;cepteurs, c&#39;est-&agrave;-dire CX (3) C r&eacute;cepteur de chimiokine 1 (CX(3)CR1) et m r&eacute;cepteur, cellules ovariennes de hamster chinois. Un agoniste CX (3) CR1 induit une plus grande augmentation intracellulaire heterodimeric et prostaglandine e g&eacute;n&eacute;ration dans les cellules exprimant la prot&eacute;ine de fusion de CX(3)CR1-Galpha(16) que dans les cellules exprimant CX (3) CR1 seul ou CR1 CX (3) et Galpha(16) s&eacute;par&eacute;ment. De m&ecirc;me, g&eacute;n&eacute;ration e induite par un agoniste de la prostaglandine &eacute;tait plus &eacute;lev&eacute;e dans les cellules exprimant la prot&eacute;ine de fusion de M(2)-Galpha(16) que ceux exprimant seul m ou m et Galpha(16) s&eacute;par&eacute;ment. Dans les cellules exprimant des prot&eacute;ines de fusion avec Galpha(16) de G (q)-r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s, c&#39;est-&agrave;-dire du r&eacute;cepteur de l&#39;urotensine II et r&eacute;cepteur du greff&eacute;e, les agonistes pertinents induite par des augmentations semblables d&#39;intracellulaire heterodimeric et prostaglandine e comme dans celles exprimant le r&eacute;cepteur seul. Dans les cellules exprimant la prot&eacute;ine de fusion de l&#39;urotensine II receptor-Galpha(16), g&eacute;n&eacute;ration de prostaglandine e pr&eacute;sentaient une valeur EC(50) plus faible que l&#39;augmentation de heterodimeric intracellulaire. Ces r&eacute;sultats indiquent que les prot&eacute;ines de fusion receptor-Galpha(16) stimul&eacute;e par l&#39;agoniste sont coupl&eacute;s &agrave; des voies de signalisation en aval et sugg&egrave;rent que les prot&eacute;ines de fusion de receptor-Galpha(16) peuvent &ecirc;tre utiles pour le d&eacute;pistage pour les ligands des r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s &agrave; la prot&eacute;ine d&#39;orphelin G et G (i)-r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s.

Stimulation des augmentations d&#39;intracellulaire calcium et prostaglandine E2 dans l&#39;ovaire de hamster chinois de cellules exprimant du r&eacute;cepteur-Galpha16 prot&eacute;ines de fusion.

Die Stimulation der Erh&#xF6;hung des intrazellul&#xE4;ren Calcium und Prostaglandin E2 Generation in der chinesischen Hamster-Eierstock-Zellen, die Rezeptor-Fusionsproteine &#x200B;&#x200B;Galpha16.

Abbiamo esaminato se fusione delle proteine dei recettori accoppiati a proteine G con la subunit&agrave; alfa del G(16) (Galpha(16)) potrebbe attivare segnali a valle. Abbiamo espresso le proteine di fusione di G (i)-accoppiato di recettori, cio&egrave; C CX (3) chemokine receptor 1 (CX(3)CR1) e M(2) recettore, in cellule di ovaio di criceto cinese. Un agonista per CX (3) CR1 indotta aumenta maggiore nella generazione di E(2) Ca(2+) e prostaglandina intracellulare in cellule che esprimono la proteina di fusione di CX(3)CR1-Galpha(16) che in cellule che esprimono CX (3) CR1 da solo o CR1 CX (3) e Galpha(16) separatamente. Analogamente, prostaglandina agonista-indotta E(2) generazione era maggiore nelle cellule che esprimono la proteina di fusione di M(2)-Galpha(16) rispetto a quelli che esprimono solo M(2) o M(2) e Galpha(16) separatamente. In cellule che esprimono proteine di fusione con Galpha(16) di G (q)-recettori accoppiati, cio&egrave; urotensin II recettore e del recettore M(1), gli agonisti pertinenti indotta da analoghi aumenti intracellulare Ca(2+) e prostaglandina E(2) generazione come quelli che esprimono il recettore da solo. In cellule che esprimono la proteina di fusione di urotensin II receptor-Galpha(16), generazione di prostaglandina E(2) esposto un valore EC(50) inferiore rispetto all&#39;incremento Ca(2+) intracellulare. Questi risultati indicano che ha stimolato agonista receptor-Galpha(16) proteine di fusione sono accoppiate a vie di segnalazione a valle e suggeriscono che le proteine di fusione di receptor-Galpha(16) possono essere utile per lo screening di ligandi dei recettori accoppiati a proteine G orfano e G (i)-accoppiato recettori.

Stimolazione degli aumenti in intracellulare calcio e prostaglandina E2 generazione nell&#39;ovaio di criceto cinese di cellule che esprimono proteine di fusione del recettore-Galpha16.

&#x30D5;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F; &alpha; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; G(16) &#x306E; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (Galpha(16)) &#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061; G &#xFF08;&#x79C1;&#xFF09; &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;-&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061; CX (3) C &#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC; 1 (CX(3)CR1) &#x3068; M(2) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0; &#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x3002;CX &#xFF08;3&#xFF09; CR1 &#x306E;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8; CX (3) CR1 &#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x307E;&#x305F;&#x306F; CX (3) CR1 &#x3068; Galpha(16) &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3088;&#x308A;&#x3082; CX(3)CR1-Galpha(16) &#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x3092;&#x53CD;&#x6642;&#x8A08;&#x56DE;&#x308A;&#x4E16;&#x4EE3;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x304C;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x3092;&#x53CD;&#x6642;&#x8A08;&#x56DE;&#x308A;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5358;&#x72EC;&#x3067; M(2) &#x307E;&#x305F;&#x306F; M(2) &#x3068; Galpha(16) &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B; M(2)-Galpha(16) &#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x5927;&#x304D;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;G Galpha(16) (q) &#x3068;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;-&#x7D50;&#x5408;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x30A6;&#x30ED;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3; II &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068; M(1) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x3092;&#x53CD;&#x6642;&#x8A08;&#x56DE;&#x308A;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x53D7;&#x5BB9;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3002;&#x30A6;&#x30ED;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3; II receptor-Galpha(16) &#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x3092;&#x53CD;&#x6642;&#x8A08;&#x56DE;&#x308A;&#x4E16;&#x4EE3;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x5897;&#x52A0;&#x3088;&#x308A;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044; EC(50) &#x5024;&#x3092;&#x51FA;&#x5C55;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x523A;&#x6FC0; receptor-Galpha(16) &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;receptor-Galpha(16) &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; &#x30AA;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068; G (i) &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3059;-&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3002;

&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0; &#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3; E2 &#x4E16;&#x4EE3;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; Galpha16 &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD4E8;&#xC804; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC;&#xD55C; G(16)&#xC758; &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (Galpha(16)) &#xD558;&#xB958; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; G (i)&#xC758; &#xC735;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604;-&#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, &#xC989; CX (3) C chemokine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; 1 &#xC218;&#xC6A9; (CX(3)CR1) &#xBC0F; M(2) &#xCCB4;, &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;. CX (3) cr1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC140; CX (3) CR1 &#xD63C;&#xC790; &#xB610;&#xB294; &#xB458; &#xB2E4; CX (3) CR1 &#xBC0F; galpha(16)&#xB97C; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xB2E4; CX(3)CR1-Galpha(16) &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xC2A4;&#xD0C0; &#xAE00;&#xB780; &#xB518; E(2) &#xC138;&#xB300;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD070; &#xC99D;&#xAC00; &#xC720;&#xBC1C;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC720;&#xB3C4; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xAE00;&#xB780; &#xB518; E(2) &#xC138;&#xB300; &#xD63C;&#xC790; M(2) &#xB610;&#xB294; M(2)&#xC640; galpha(16)&#xC744; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; M(2)-Galpha(16) &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; &#xD070; &#xD588;&#xB2E4;. Galpha(16) G (q)&#xC640; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0;-&#xACB0;&#xD569;&#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, &#xC989; urotensin II &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBC0F; M(1) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, &#xAD00;&#xB828; agonists &#xD63C;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xCC98;&#xB7FC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xAE00;&#xB780; &#xB518; E(2) &#xC138;&#xB300;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC720;&#xBC1C;. Urotensin II receptor-Galpha(16) &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xAE00;&#xB780; &#xB518; E(2) &#xC138;&#xB300; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB0AE;&#xC740; EC(50) &#xAC12;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC790;&#xADF9; receptor-Galpha(16) &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xACE0; receptor-Galpha(16) &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; ligands&#xC758; &#xACE0;&#xC544; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; G (i)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;-&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xACB0;&#xD569;.

&#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298;&#xACFC; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xAE00;&#xB780; &#xB518; E2 &#xC0DD;&#xC131;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC790;&#xADF9; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xD604; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; Galpha16 &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;.

Se examin&oacute; si la fusi&oacute;n prote&iacute;nas de receptores acoplados a prote&iacute;nas G con la subunidad alfa de G(16) (Galpha(16)) pod&iacute;a activar se&ntilde;ales de aguas abajo. Expresamos prote&iacute;nas de fusi&oacute;n de G (i)-junto a los receptores, es decir, CX (3) C chemokine receptor 1 (receptor CX(3)CR1) y M(2), en c&eacute;lulas de ovario de h&aacute;mster chino. Un agonista para CX (3) CR1 indujo aumentos mayores en intracelular CA y prostaglandina e (2) generaci&oacute;n en las c&eacute;lulas que expresan la prote&iacute;na de fusi&oacute;n de CX(3)CR1-Galpha(16) que en las c&eacute;lulas que expresan CX (3) CR1 solo o CR1 CX (3) y Galpha(16) por separado. Del mismo modo, generaci&oacute;n de agonista-inducida de la prostaglandina e (2) fue mayor en las c&eacute;lulas que expresan la prote&iacute;na de fusi&oacute;n M(2)-Galpha(16) que expresar solo M(2) o M(2) y Galpha(16) por separado. En las c&eacute;lulas que expresan prote&iacute;nas de fusi&oacute;n con Galpha(16) de G (q)-receptores acoplados, es decir, urotensin II receptor y M(1) receptor, los agonistas pertinentes indujo aumentos similares en intracelular CA y prostaglandina e (2) la generaci&oacute;n como en los que expresan el receptor solo. En las c&eacute;lulas que expresan la prote&iacute;na de fusi&oacute;n urotensin II receptor-Galpha(16), generaci&oacute;n de prostaglandina e (2) exhibi&oacute; un valor EC(50) menor que el aumento de CA intracelular. Estos resultados indican que el agonista-estimulado receptor-Galpha(16) prote&iacute;nas de fusi&oacute;n est&aacute;n acopladas a v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n aguas abajo y sugieren que las prote&iacute;nas de fusi&oacute;n de receptor-Galpha(16) pueden ser &uacute;tiles para la detecci&oacute;n de ligandos de receptores acoplados a prote&iacute;na hu&eacute;rfano G y G (i)-junto a los receptores.

Estimulaci&oacute;n de los aumentos en intracelular calcio y prostaglandina E2 generaci&oacute;n en ovario de h&aacute;mster chino c&eacute;lulas que expresan prote&iacute;nas de fusi&oacute;n del receptor-Galpha16.

G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53; (GPCRs) &#x662F;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5927;&#x5BB6;&#x65CF;&#x4E4B;&#x4E00;&#xFF0C;&#x662F;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x6700;&#x8FD1;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E00;&#x5927;&#x6279;&#x6C14;&#x76F8;&#x5316;&#x5B66;&#x8FD8;&#x539F;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x914D;&#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x5C1A;&#x672A;&#x67E5;&#x660E;&#x5BF9;&#x8BB8;&#x591A;&#x4EBA;&#x6765;&#x8BF4;&#x3002;&#x5DF2;&#x91C7;&#x7528;&#x5404;&#x79CD;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8BC6;&#x522B;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x5B64;&#x513F; GPCRs&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ECD;&#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x4E00;&#x822C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5230;&#x5C4F;&#x5E55;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD; GPCRs&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F; G (i) &#x7684;&#x914D;&#x4F53;-&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7814;&#x7A76;&#x662F;&#x5426;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5229;&#x7528;&#x914D;&#x4F53;&#x7B5B;&#x9009;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x79CD;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x6B64;&#x76EE;&#x7684; GPCRs &#x4E0E; G &#x86CB;&#x767D; &alpha; &#x4E9A;&#x57FA; (Galpha) &#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x8FD9;&#x7BC7;&#x6587;&#x7AE0;&#x7684;&#x91CD;&#x70B9;&#x662F;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x5185;&#x5BB9;&#xFF1A; (1) &#x6C14;&#x76F8;&#x5316;&#x5B66;&#x8FD8;&#x539F;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C; GPCRs&#xFF0C;(2) &#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x5B64;&#x513F; GPCRs&#xFF0C;(3) &#x8868;&#x5F81;&#x6C14;&#x76F8;&#x5316;&#x5B66;&#x8FD8;&#x539F; Galpha &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x53CA; (4) &#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x5B64;&#x513F; GPCRs &#x4F7F;&#x7528;&#x6C14;&#x76F8;&#x5316;&#x5B66;&#x8FD8;&#x539F; Galpha &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

&#x7B5B;&#x9009;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; G &#x86CB;&#x767D;&#x7684; &alpha; &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E0E;&#x914D;&#x4F53;&#x3002;

G protein-coupled receptors (GPCRs) constitute one of the largest families of genes in the human genome, and are the largest targets for drug development. Although a large number of GPCR genes have recently been identified, ligands have not yet been identified for many of them. Various assay systems have been employed to identify ligands for orphan GPCRs, but there is still no simple and general method to screen for ligands of such GPCRs, particularly of G(i)-coupled receptors. We have examined whether fusion proteins of GPCRs with G protein alpha subunit (Galpha) could be utilized for ligand screening and showed that the fusion proteins provide an effective method for the purpose. This article focuses on the followings: (1) characterization of GPCR genes and GPCRs, (2) identification of ligands for orphan GPCRs, (3) characterization of GPCR-Galpha fusion proteins, and (4) identification of ligands for orphan GPCRs using GPCR-Galpha fusion proteins.

Ligand screening system using fusion proteins of G protein-coupled receptors with G protein alpha subunits.

Les r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines G (RCPG) constituent l&#39;une des plus grandes familles de g&egrave;nes dans le g&eacute;nome humain et sont la cible plus importante pour le d&eacute;veloppement de m&eacute;dicaments. Bien qu&#39;un grand nombre de g&egrave;nes GPCR ont &eacute;t&eacute; r&eacute;cemment identifi&eacute;, des ligands n&#39;ont pas encore &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s pour beaucoup d&#39;entre eux. Divers syst&egrave;mes de dosage ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;es pour identifier les ligands pour orphelin RCPG, mais il n&#39;y a encore aucune m&eacute;thode simple et g&eacute;n&eacute;rale &agrave; l&#39;&eacute;cran pour les ligands de ces RCPG, particuli&egrave;rement de G (i)-r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s. Nous avons examin&eacute; si les prot&eacute;ines de fusion des RCPG avec la sous-unit&eacute; alpha de la prot&eacute;ine G (Galpha) pourraient &ecirc;tre utilis&eacute;s pour le d&eacute;pistage de ligand et a montr&eacute; que les prot&eacute;ines de fusion fournissent une m&eacute;thode efficace pour l&#39;objectif. Cet article se concentre sur les points suivants: (1) la caract&eacute;risation des g&egrave;nes GPCR et RCPG, (2) identification des ligands pour orphelin RCPG, (3) la caract&eacute;risation des prot&eacute;ines de fusion de GPCR-Galpha et (4) l&#39;identification des ligands pour les orphelins des RCPG utilisant des prot&eacute;ines de fusion de GPCR-Galpha.

Ligand d&eacute;pistage syst&egrave;me utilisant des prot&eacute;ines de fusion de G protein-coupled receptors avec sous-unit&eacute;s alpha de prot&eacute;ine G.

G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) bilden eine der gr&ouml;&szlig;ten Familien der Gene im menschlichen Genom und sind die gr&ouml;&szlig;ten Ziele f&uuml;r die Medikamentenentwicklung. Obwohl eine gro&szlig;e Anzahl von GPCR Gene vor kurzem identifiziert wurden, wurden Liganden nicht noch f&uuml;r viele von ihnen identifiziert. Verschiedene Assay-Systeme haben zum Identifizieren von Liganden f&uuml;r Waise GPCRs besch&auml;ftigt gewesen, aber es gibt noch keine einfache und allgemeine Methode zum Bildschirm f&uuml;r die Liganden von solchen GPCRs, insbesondere der G (i)-gekoppelte Rezeptoren. Wir haben untersucht, ob Schmelzverfahrensproteine von GPCR mit G-Protein-alpha-Untereinheit (Galpha) f&uuml;r Ligand Screening eingesetzt und zeigten, dass die Fusionsproteine eine effektive Methode f&uuml;r den Zweck bieten werden k&ouml;nnte. Dieser Artikel konzentriert sich auf die folgenden Elemente sein: (1) Charakterisierung von GPCR-Gene und GPCRs, (2) Identifikation des Liganden f&uuml;r Waise GPCRs, (3) Charakterisierung von GPCR-Galpha Schmelzverfahrensproteine und (4) Identifikation von Liganden f&uuml;r orphan-GPCRs mithilfe von GPCR-Galpha Schmelzverfahrensproteine.

Ligand screening-System mit Schmelzverfahrensproteine von G-Protein-gekoppelter Rezeptoren mit G-Protein-alpha-Untereinheiten.

Recettori accoppiati a proteine G (GPCR) costituiscono una delle pi&ugrave; grandi famiglie di geni nel genoma umano e sono i pi&ugrave; grandi obiettivi per lo sviluppo di farmaci. Anche se un gran numero di geni GPCR &egrave; state recentemente identificato, ligandi non sono ancora state identificate per molti di loro. Vari sistemi di dosaggio sono stati impiegati per identificare ligandi orfano GPCR, ma non c&#39;&egrave; ancora nessun metodo semplice e generale a schermo per ligandi di tali GPCR, particolarmente della G (i)-accoppiato recettori. Abbiamo esaminato se le proteine di fusione di GPCR con subunit&agrave; di alfa della proteina G (Galpha) potrebbero essere utilizzate per lo screening del ligando e ha dimostrate che le proteine di fusione forniscano un metodo efficace per lo scopo. Questo articolo si concentra su quanto segue: (1) caratterizzazione dei geni GPCR e GPCR, (2) l&#39;identificazione di ligandi per orfano GPCR, (3) caratterizzazione delle proteine di fusione GPCR-Galpha e (4) l&#39;identificazione di ligandi per orfani GPCR utilizzando proteine di fusione GPCR-Galpha.

Ligando screening sistema utilizzando proteine di fusione di recettori accoppiati a proteine G con subunit&agrave; alfa G di proteina.

G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;Gpcr&#xFF09; &#x306B;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;1 &#x3064;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x6570;&#x306E; GPCR &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x307E;&#x3060;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3; Gpcr &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; ligands &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x7279;&#x306B; G &#xFF08;&#x79C1;&#xFF09; &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; Gpcr &#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306B;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;-&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3002;Gpcr &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; (Galpha) &#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8A18;&#x4E8B;&#x306F;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#xFF1A; GPCR &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068; Gpcr&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3; Gpcr (3) (4) &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; ligands &#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x304A;&#x3088;&#x3073; GPCR S3d02 &#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; ligands &#x306E;&#x540C;&#x5B9A; (2) &#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; (1) &#x5B64;&#x5150; GPCR S3d02 &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; Gpcr&#x3002;

&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x7CFB;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3002;

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GPCRs) &#xC778;&#xAC04; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xAC00;&#xC871; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xC57D; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xBAA9;&#xD45C;. GPCR &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB2E4; &#xC218;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; ligands&#xC774; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xBCC4; ligands GPCRs, &#xACE0;&#xC544;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xACE0;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC544;&#xC9C1; G (i)&#xC758; &#xD2B9;&#xD788; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; GPCRs ligands&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95; &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0;-&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xACB0;&#xD569;. &#xC5EC;&#xBD80; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (Galpha)&#xC640; Gpcrs&#xC758; &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC81C;&#xACF5; &#xBAA9;&#xC801;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC; &#xC218; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC11C;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD94;&#xACE0;: GPCR &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; GPCRs, &#xACE0;&#xC544; GPCRs, GPCR Galpha &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC704;&#xD574; ligands&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; (4) (3) &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; ligands&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; (2) (1) &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xACE0;&#xC544; GPCRs GPCR Galpha &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

&#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC735;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Receptores de acoplados a prote&iacute;na G (GPCRs) constituyen una de las m&aacute;s grandes familias de genes en el genoma humano y son los m&aacute;s grandes objetivos para el desarrollo de f&aacute;rmacos. Aunque recientemente se han identificado un gran n&uacute;mero de genes GPCR, ligandos todav&iacute;a no se han identificado para muchos de ellos. Varios sistemas de ensayo han sido empleados para identificar ligandos para el hu&eacute;rfano GPCRs, pero todav&iacute;a no hay ning&uacute;n m&eacute;todo simple y general a la pantalla por ligandos de tales GPCRs, particularmente de G (i)-junto a los receptores. Hemos examinado si prote&iacute;nas de fusi&oacute;n de GPCRs con la subunidad alfa de la prote&iacute;na G (Galpha) podr&iacute;an ser utilizadas para la detecci&oacute;n de ligando y demostr&oacute; que las prote&iacute;nas de fusi&oacute;n proporcionan un m&eacute;todo eficaz para el prop&oacute;sito. Este art&iacute;culo se centra en los siguientes: (1) caracterizaci&oacute;n de genes GPCR y GPCRs, (2) identificaci&oacute;n de ligandos para el hu&eacute;rfano GPCRs, (3) caracterizaci&oacute;n de prote&iacute;nas de fusi&oacute;n GPCR-Galpha y (4) identificaci&oacute;n de ligandos para hu&eacute;rfanos GPCRs utilizando prote&iacute;nas de fusi&oacute;n GPCR-Galpha.

Ligando con subunidades alfa de la prote&iacute;na G de prote&iacute;nas de fusi&oacute;n de receptores acoplados a prote&iacute;na G del sistema.

&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x7684;&#x6C2E;&#x82A5;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4F7F;&#x7528;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;[3 H] &#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; M(2) &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0E; N-methylscopolamine (NMS)&#x3002;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x82A5;&#x5B50;&#x6C14;&#x4E0E;&#x534A;&#x6700;&#x5927;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x5728; 24 microM &#x548C; 0.16 min(-1) &#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x53D1;&#x751F;&#x9020;&#x6210; [3 H] NMS &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728;&#x6444;&#x6C0F; 37 &#x5EA6;&#xFF0C;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x3001; &#x4E00;&#x9636;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x5404;&#x79CD;&#x914D;&#x4F53;&#x5BF9; M(2) &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x7684;&#x82A5;&#x672B;&#x9171;&#x3002;N methylscopolamine &#x548C; 4-(trimethylamino)-2-butynyl-(3-chlorophenyl)carbamate (&#x7F8E;&#x601D;-A-343) &#x7ADE;&#x4E89;&#x6027;&#x51CF;&#x7F13;&#x7387;&#x7684;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#xFF0C;&#x800C;&#x7531; gallamine &#x6291;&#x5236;&#x8FBE;&#x5230;&#x6D53;&#x5EA6;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x539F;&#x6307;&#x793A;&#x53D8;&#x6784;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]-pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole (&#x8D62; 51708) &#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x5728; 0 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6709;&#x5F88;&#x5C11;&#x6216;&#x6CA1;&#x6709;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5171;&#x4EF7;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x82A5;&#x672B;&#x9171;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86; [3 H] NMS &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F30;&#x8BA1;&#x662F;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x82A5;&#x5B50;&#x6C14;&#x7684; aziridinium &#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x89E3;&#x79BB;&#x5E38;&#x6570;&#x4E3A; 12.3 microM&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x7236;&#x82A5;&#x672B;&#x548C;&#x9152;&#x7CBE;&#x6C34;&#x89E3;&#x4EA7;&#x7269;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x82A5;&#x672B;&#x9171;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684; orthosteric &#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x5C0F;&#x7F51;&#x7AD9;&#x9488;&#x5BF9;&#x4EB2;&#x706D;&#x6D3B;&#x7387;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x662F;&#x5224;&#x522B;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4ECE; allosterism &#x7684;&#x7ADE;&#x4E89;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x3002;

&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x7684;&#x82A5;&#x672B;&#x9171;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x5728; M(2) &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x53D8;&#x6784;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

We explored the interaction of a nitrogen mustard derivative of acetylcholine with the human M(2) muscarinic receptor expressed in Chinese hamster ovary cells using the muscarinic radioligand, [3H]N-methylscopolamine (NMS). Acetylcholine mustard caused a concentration-dependent, first-order loss of [3H]NMS binding at 37 degrees C, with the half-maximal rate constant occurring at 24 microM and a maximal rate constant of 0.16 min(-1). We examined the effects of various ligands on the rate of alkylation of M(2) receptors by acetylcholine mustard. N-methylscopolamine and 4-(trimethylamino)-2-butynyl-(3-chlorophenyl)carbamate (McN-A-343) competitively slowed the rate of alkylation, whereas the inhibition by gallamine reached a plateau at high concentrations, indicating allosteric inhibition. In contrast, 17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]-pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole (WIN 51708) had no effect. We also measured the inhibition of [3H]NMS binding by acetylcholine mustard at 0 degrees C, conditions under which there is little or no detectable covalent binding. In these experiments, the dissociation constant of the aziridinium ion of acetylcholine mustard was estimated to be 12.3 microM. In contrast, the parent mustard and alcoholic hydrolysis product of acetylcholine mustard were without effect. Our results show that measurement of the effects of ligands on the rate of inactivation of the orthosteric site by a small site-directed electrophile is a powerful method for discriminating competitive inhibition from allosterism.

Use of acetylcholine mustard to study allosteric interactions at the M(2) muscarinic receptor.

Nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;interaction d&#39;un d&eacute;riv&eacute; de l&#39;azote moutarde d&#39;ac&eacute;tylcholine avec r&eacute;cepteur muscarinique capteur humain exprim&eacute; dans des cellules ovariennes de hamster chinois &agrave; l&#39;aide de radioligand muscarinique, [3 H] N-m&eacute;thylscopolamine (NMS). Moutarde ac&eacute;tylcholine a caus&eacute; une perte de concentration-d&eacute;pendante, de premier ordre de [3 H] NMS &agrave; 37 degr&eacute;s C, avec la constante de vitesse de maximale se produisant &agrave; microM 24 et une constante de la vitesse maximale de 0,16 min(-1). Nous avons examin&eacute; les effets de divers ligands sur le taux d&#39;alkylation des r&eacute;cepteurs m de moutarde de l&#39;ac&eacute;tylcholine. N-m&eacute;thylscopolamine et 4-(trimethylamino)-2-butynyl-(3-chlorophenyl)carbamate (McN-A-343) comp&eacute;titifs ralentissent le rythme de l&#39;alkylation, tandis que l&#39;inhibition par gallamine atteint un plateau &agrave; concentrations &eacute;lev&eacute;es, indiquant une inhibition allost&eacute;rique. En revanche, 17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]-pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole (WIN 51708) n&#39;avait aucun effet. Nous avons aussi mesur&eacute; l&#39;inhibition de la fixation de [3 H] NMS par moutarde ac&eacute;tylcholine &agrave; 0 degr&eacute;s C, les conditions dans lesquelles il y a peu ou pas de liaison covalente d&eacute;tectable. Dans ces exp&eacute;riences, la constante de dissociation de l&#39;ion aziridinium de la moutarde ac&eacute;tylcholine a &eacute;t&eacute; estim&eacute;e &agrave; 12,3 microM. En revanche, la moutarde de parent et le produit d&#39;hydrolyse alcoolique de moutarde ac&eacute;tylcholine furent sans effet. Nos r&eacute;sultats montrent que la mesure des effets des ligands sur le taux d&#39;inactivation du site orthosteric par une petite &eacute;lectrophile dirig&eacute;e est une m&eacute;thode puissante pour discriminer l&#39;inhibition comp&eacute;titive de l&#39;allost&eacute;rie.

Utilisation de la moutarde ac&eacute;tylcholine pour &eacute;tudier les interactions allost&eacute;riques &agrave; capteur r&eacute;cepteur muscarinique.

Wir untersuchten die Interaktion eines Derivats Stickstoff Senf von Acetylcholin mit den menschlichen Muskarinischer m-Rezeptor ausgedr&uuml;ckt in chinesischer Hamster Eierstock Zellen mithilfe der Muskarinischer Radioligand, [3H] N-Methylscopolamine (NMS). Acetylcholin Senf verursacht einen Konzentration abh&auml;ngige, erster Ordnung Verlust der [3H]-NMS-Bindung bei 37 Grad C, mit die H&auml;lfte-maximale Geschwindigkeitskonstante am 24 MicroM und eine maximale Geschwindigkeitskonstante von 0,16 min(-1). Wir untersuchten die Wirkung von verschiedenen Liganden auf die Rate der Alkylierung von m-Rezeptoren durch Acetylcholin-Senf. N-Methylscopolamine und 4-(trimethylamino)-2-butynyl-(3-chlorophenyl)carbamate (McN-A-343) verlangsamt konkurrierend die Rate der Alkylierung, w&auml;hrend die Hemmung von Gallamine ein Plateau in hohen Konzentrationen erreicht, die allosterische Hemmung. 17-Beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]-pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole (gewinnen 51708) hatte dagegen keine Auswirkung. Wir Ma&szlig; auch die Hemmung der [3H]-NMS-Bindung von Acetylcholin Senf bei 0 Grad C, unter welchen Bedingungen es wenig oder keine nachweisbaren kovalente Bindung. In diesen Experimenten wurde die Dissoziationskonstante von der Aziridinium-Ion Acetylcholin Senf auf 12,3 MicroM werden gesch&auml;tzt. Im Gegensatz dazu waren die &uuml;bergeordneten Senf und alkoholische Hydrolyse-Produkt von Acetylcholin Senf ohne Wirkung. Unsere Ergebnisse zeigen, dass die Messung der Auswirkungen von Liganden auf die Rate der Inaktivierung der Orthosteric-Website durch eine kleine Site-verwiesene Elektrophil ist eine leistungsf&auml;hige Methode f&uuml;r anspruchsvolle kompetitive Hemmung von Allosterism.

Verwendung von Acetylcholin Senf allosterische Interaktionen bei der m-Muskarinischer-Rezeptor zu studieren.

Abbiamo esplorato l&#39;interazione di un derivato di azoto senape di acetilcolina con l&#39;umano del recettore muscarinico M(2) con espresso nelle cellule di ovaio di criceto cinese usando il radioattivo muscarinico, [3h] N-methylscopolamine (NMS). Senape acetilcolina ha causato una perdita di concentrazione-dipendente, il primo ordine di associazione [3h] NMS a 37 gradi C, con la costante di velocit&agrave; mezza massimale che si verificano a microM 24 e una costante tasso massimo di 0,16 min(-1). Abbiamo esaminato gli effetti di vari ligandi sul tasso di alchilazione di recettori M(2) di senape di acetilcolina. N-methylscopolamine e 4-(trimethylamino)-2-butynyl-(3-chlorophenyl)carbamate (McN-A-343) competitivo rallentato il tasso di alchilazione, considerando che l&#39;inibizione di gallamine raggiunto un plateau ad alte concentrazioni, che indica l&#39;inibizione allosterica. Al contrario, 17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]-pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole (vincere 51708) ha avuto alcun effetto. Abbiamo anche misurato l&#39;inibizione del legame [3h] NMS di senape acetilcolina a 0 gradi C, condizioni in cui c&#39;&egrave; poco o nessun legame covalente rilevabile. In questi esperimenti, la costante di dissociazione dello ione aziridinium di senape di acetilcolina &egrave; stata stimata per essere 12,3 microM. Al contrario, il genitore senape e prodotto di idrolisi alcolica di senape acetilcolina furono senza effetto. I nostri risultati mostrano che misura degli effetti di ligandi sul tasso di inattivazione del sito orthosteric da un piccolo diretto sito elettrofilo &egrave; un potente metodo per discriminare inibizione competitiva da allosterism.

Uso di senape di acetilcolina per studiare le interazioni allosteric presso il recettore muscarinico M(2).

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; [3 H] &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0; &#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E; M(2) &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x7A92;&#x7D20;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x63A2;&#x691C; N-methylscopolamine &#xFF08;NMS&#xFF09;&#x3002;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3; &#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9; [3 H] NMS &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; 37 &#x2103; &#x3067;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3001;&#x4E00;&#x6B21;&#x640D;&#x5931; 24 microM &#x3068; 0.16 min(-1) &#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x534A;&#x6700;&#x5927;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;M(2) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316;&#x7387;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5404;&#x7A2E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3; &#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AC;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C8;&#x30FC;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; N-methylscopolamine &#x3068; 4-(trimethylamino)-2-butynyl-(3-chlorophenyl)carbamate (McN-A-343&#xFF09; &#x7AF6;&#x4E89;&#x7684;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316;&#x7387;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x920D;&#x5316;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]-pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole (51708) &#x306B;&#x52DD;&#x3064;&#x306B;&#x306F;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3; &#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9; 0 &#x2103; &#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x307E;&#x3063;&#x305F;&#x304F;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; [3 H] NMS &#x7D50;&#x5408;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;, &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3; &#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E; aziridinium &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x5B9A;&#x6570; 12.3 microM &#x3068;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x89AA;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x7269;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3; &#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9;&#x306A;&#x3057;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x6E2C;&#x5B9A; orthosteric &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x76E3;&#x7763;&#x6C42;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x6709;&#x6A5F;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x8B58;&#x5225;&#x6CD5;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x7AF6;&#x4E89;&#x963B;&#x5BB3;&#x56DE;&#x8EE2;&#x8EF8;&#x304B;&#x3089;&#x3002;

&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3; &#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9; M(2) &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xC218;&#xC6A9; muscarinic radioligand [3h]&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04; M(2) muscarinic &#xCCB4;&#xC640; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0;&#xC758; &#xC9C8;&#xC18C; &#xACA8;&#xC790; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; N-methylscopolamine (NMS). &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xACA8;&#xC790; 24 Microm&#xACFC; 0.16 min(-1)&#xC758; &#xCD5C;&#xB300; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBC18; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;&#xC640; &#xB18D;&#xB3C4; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xCC98;&#xC74C; &#xC8FC;&#xBB38; [3h] NMS &#xBC14;&#xC778;&#xB529; 37&#xB3C4; C&#xC5D0;&#xC11C; &#xC190;&#xC2E4; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC5EC; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xACA8;&#xC790; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C; M(2) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; ligands&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC80;&#xC0AC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. N-methylscopolamine &#xBC0F; 4-(trimethylamino)-2-butynyl-(3-chlorophenyl)carbamate (McN-A-343) &#xACBD;&#xC7C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB454;&#xD654; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C;, &#xC18D;&#xB3C4; gallamine&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xC810;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; allosteric &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, 17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]-pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole (&#xC774;&#xAE38; 51708) &#xC544;&#xBB34; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; 0&#xB3C4; C&#xB97C; &#xAC70;&#xC758; &#xB610;&#xB294; &#xC804;&#xD600; &#xAC10;&#xC9C0; &#xACF5;&#xC720; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC740; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xACA8;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; [3h] NMS &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xACA8;&#xC790;&#xC758; aziridinium &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC218; 12.3 microM &#xCD94;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xBD80;&#xBAA8; &#xACA8;&#xC790;&#xC640; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xACA8;&#xC790;&#xC758; &#xC54C;&#xCF54;&#xC62C; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xC81C;&#xD488; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC5C6;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC791;&#xC740; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; electrophile&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; orthosteric &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; ligands&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xCE21;&#xC815;&#xC740; &#xCC28;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; allosterism&#xC5D0;&#xC11C; &#xACBD;&#xC7C1; &#xC800;&#xD574;.

M(2) muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; allosteric &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xACA8;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Exploramos la interacci&oacute;n de un derivado de mostaza nitrogenada de acetilcolina con el receptor muscar&iacute;nico del M(2) humano expresado en c&eacute;lulas de ovario de h&aacute;mster chino usando el radioligando muscar&iacute;nico, [3 H] N-methylscopolamine (NMS). Mostaza de acetilcolina caus&oacute; una p&eacute;rdida dependiente de la concentraci&oacute;n, de primer orden de la Uni&oacute;n de [3 H] NMS a 37 grados C, con la constante de velocidad de media-m&aacute;ximo en 24 microM y una constante de la velocidad m&aacute;xima de 0.16 minuto. Examinamos los efectos de varios ligandos sobre la tasa de alquilaci&oacute;n de M(2) receptores por mostaza de acetilcolina. N-methylscopolamine y 4-(trimethylamino)-2-butynyl-(3-chlorophenyl)carbamate (McN-A-343) competitivo hab&iacute;an disminuido la tasa de alquilaci&oacute;n, mientras que la inhibici&oacute;n por trietioduro alcanz&oacute; una meseta en altas concentraciones, indicando la inhibici&oacute;n alost&eacute;rica. Por el contrario, 17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]-pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole (51708 ganar) no tuvo efecto. Tambi&eacute;n medimos la inhibici&oacute;n de la Uni&oacute;n de [3 H] NMS por mostaza de acetilcolina a 0 grados C, condiciones en las que hay poca o ninguna uni&oacute;n covalente detectable. En estos experimentos, la constante de disociaci&oacute;n del ion del aziridinium de mostaza de acetilcolina se estima que 12,3 microM. En cambio, la mostaza de padres y producto de la hidr&oacute;lisis alcoh&oacute;lica de mostaza de acetilcolina eran sin efecto. Nuestros resultados muestran que la medici&oacute;n de los efectos de los ligandos en la tasa de inactivaci&oacute;n del sitio orthosteric por un peque&ntilde;o electr&oacute;filo dirigida es un m&eacute;todo eficaz para discriminar inhibici&oacute;n competitiva de allosterism.

Uso de mostaza de la acetilcolina para estudiar interacciones alost&eacute;ricos en M(2) receptor muscar&iacute;nico.

&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x662F;&#x5426; aziridinium &#x79BB;&#x5B50;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x6C2E;&#x82A5;&#x884D;&#x751F;&#x7269; &#xFF08;4-[(2-bromoethyl) &#x7532;&#x57FA;&#x6C28;&#x57FA;]-2-butynyl N-(3-&#x6C2F;&#x82EF;&#x57FA;) &#x6C28;&#x57FA;&#x7532;&#x9178;&#x916F; &#xFF1B;BR384) &#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7F8E;&#x601D;-A-343 (4-(trimethyl-amino)-2-butynyl N-(3-chlorophenyl)carbamate) &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;allosterically &#x6216; orthosterically &#x4E0E; M(2) &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684; M(2) &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x88AB;&#x5B75;&#x5316;&#x4E0E; aziridinium &#x79BB;&#x5B50;&#x7684; BR384 &#x4E3A;&#x5404;&#x79CD;&#x5B75;&#x5316;&#x65F6;&#x95F4;&#x7F8E;&#x601D;-A-343 &#x6216;&#x5176;&#x4ED6;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684; orthosteric &#x548C;&#x53D8;&#x6784;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x3002;&#x5220;&#x9664;&#x540E;&#x672A;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684; [H (3)] &#x7ED1;&#x5B9A; N methylscopolamine &#x5269;&#x4F59; unalkylated &#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x4EB2;&#x548C;&#x5E38;&#x6570;&#x3001; &#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x548C;&#x4F9D;&#x4ECE;&#x5E38;&#x91CF;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x6570;&#x5B66;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x4F30;&#x8BA1;&#x3002;&#x7531; BR384 &#x53D7;&#x4F53;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x662F;&#x7B26;&#x5408;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E24;&#x6B65;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x540E;&#x8FC5;&#x901F;&#x52BF;&#x5747;&#x529B;&#x654C; &#xFF08;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E00;&#xFF09;&#xFF0C;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0E; aziridinium &#x79BB;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x590D;&#x6742;&#x6210;&#x4E3A;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x4E0E;&#x7B2C;&#x4E00;&#x987A;&#x5E8F;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x7684;&#x5173;&#x4E8E; 0.95min(-1) &#xFF08;&#x6B65;&#x9AA4; 2&#xFF09;&#x3002;&#x7F8E;&#x601D;-A-343&#x3001; &#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x548C; N methylscopolamine &#x7ADE;&#x4E89;&#x6027;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x8F6C;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x7684; BR384 &#x4ECE;&#x4FDD;&#x62A4; M(2) &#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x5728;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x3001; &#x53D8;&#x6784;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;&#x3001; gallamine &#x548C;&#x8D62; 51,708 (17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole)&#xFF0C;allosterically &#x6291;&#x5236;&#x6216;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6548;&#x679C;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x7531; BR384 &#x53D7;&#x4F53;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6709;&#x597D;&#x4F30;&#x8BA1;&#x4ECE;&#x53D7;&#x4F53;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x548C; [H (3)] N methylscopolamine &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x4F4D;&#x79FB;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x5E38;&#x6570;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x534F;&#x8BAE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; BR384 &#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; orthosteric &#x7F51;&#x7AD9; M(2) &#x53D7;&#x4F53;&#x548C;&#x7F8E;&#x601D;-A-343 &#x53EF;&#x9006;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x8F68;&#x8FF9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x53D8;&#x6784;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x53D7;&#x5230;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x5E38;&#x89C4;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5C40;&#x9650;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x4EE5;&#x52A0;&#x4EE5;&#x4FEE;&#x6539;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5728;&#x9664;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x4E9A;&#x578B;&#x53D7;&#x4F53;&#x53D8;&#x6784;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;

&#x8C03;&#x67E5;&#x4E0E;&#x4F7F;&#x7528;&#x5176;&#x6C2E;&#x82A5;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x7684; M2 &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7F8E;&#x601D;-A-343&#x3002;

We investigated whether the aziridinium ion formed from a nitrogen mustard derivative (4-[(2-bromoethyl)methyl-amino]-2-butynyl N-(3-chlorophenyl)carbamate; BR384) structurally related to McN-A-343 (4-(trimethyl-amino)-2-butynyl N-(3-chlorophenyl)carbamate) interacts allosterically or orthosterically with the M(2) muscarinic receptor. Chinese hamster ovary cells expressing the human M(2) muscarinic receptor were incubated with the aziridinium ion of BR384 in combination with McN-A-343 or other known orthosteric and allosteric ligands for various incubation times. After removing unreacted ligands, we measured the binding of [(3)H]N-methylscopolamine to residual unalkylated receptors. Affinity constants, rate constants for alkylation, and cooperativity constants were estimated for the interacting ligands using a mathematical model. Receptor alkylation by BR384 was consistent with a two-step process. After rapidly equilibrating with the receptor (step one), the aziridinium ion-receptor complex became covalently linked with a first order rate constant of about 0.95min(-1) (step two). McN-A-343, acetylcholine and N-methylscopolamine competitively protected the M(2) receptor from irreversible alkylation by BR384. In contrast, the allosteric modulators, gallamine and WIN 51,708 (17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole), allosterically inhibited or had no effect on, respectively, receptor alkylation by BR384. There was good agreement between affinity constants estimated from the kinetics of receptor alkylation and by displacement of [(3)H]N-methylscopolamine binding. Our results suggest that BR384 covalently binds to the orthosteric site of the M(2) receptor and that McN-A-343 binds reversibly at the same locus. Our method of analyzing allosteric interactions does not suffer from the limitations of more conventional approaches and can be adapted to detect allosteric interactions at receptors other than the muscarinic subtypes.

Investigating the interaction of McN-A-343 with the M2 muscarinic receptor using its nitrogen mustard derivative.

Nous avons examin&eacute; si l&#39;ion aziridinium form&eacute; &agrave; partir d&#39;un d&eacute;riv&eacute; de l&#39;azote de moutarde (4-[(2-bromoethyl)-m&eacute;thyl amino] -2 - BUTYNYLE N-(3-chloroph&eacute;nyl) carbamate ; BR384) structurellement apparent&eacute;s aux McN-A-343 (4-(trimethyl-amino)-2-BUTYNYLE N-(3-chlorophenyl)carbamate) interagit de fa&ccedil;on allost&eacute;rique ou orthosterically avec les r&eacute;cepteurs muscariniques m. Cellules ovariennes de hamster chinois exprimant le r&eacute;cepteur muscarinique de capacit&eacute; humain ont &eacute;t&eacute; incub&eacute;es avec l&#39;ion aziridinium de BR384 en combinaison avec McN-A-343 ou autre orthosteric connu et des ligands allost&eacute;riques pour diverses p&eacute;riodes d&#39;incubation. Apr&egrave;s avoir enlev&eacute; des ligands n&#39;ayant pas r&eacute;agis, nous avons mesur&eacute; la liaison de la [3 H] N-m&eacute;thylscopolamine aux r&eacute;cepteurs unalkylated r&eacute;siduelles. Constantes d&#39;affinit&eacute;, les constantes de vitesse pour l&#39;alkylation et coop&eacute;rativit&eacute; constantes ont &eacute;t&eacute; estim&eacute;es pour les ligands qui interagissent &agrave; l&#39;aide d&#39;un mod&egrave;le math&eacute;matique. Alkylation des r&eacute;cepteurs par BR384 correspondait &agrave; un processus en deux &eacute;tapes. Apr&egrave;s &eacute;quilibration rapide avec le r&eacute;cepteur (&eacute;tape 1), l&#39;aziridinium complexe ion-r&eacute;cepteur est devenu li&eacute; par covalence avec une premier ordre constante de vitesse sur 0.95min(-1) (&eacute;tape 2). McN-A-343, l&#39;ac&eacute;tylcholine et N-m&eacute;thylscopolamine comp&eacute;titifs contre le r&eacute;cepteur m alkylation irr&eacute;versible par BR384. En contraste, les modulateurs allost&eacute;riques, gallamine et gagner 51 708 (17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole), allost&eacute;riquement inhib&eacute;e ou n&#39;avait aucun effet sur, respectivement, l&#39;alkylation du r&eacute;cepteur par BR384. Il y avait de bon accord entre les constantes d&#39;affinit&eacute; estim&eacute;e &agrave; partir de la cin&eacute;tique d&#39;alkylation de r&eacute;cepteurs et par le d&eacute;placement de [3 H] N-m&eacute;thylscopolamine. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les BR384 lie par covalence sur le site orthosteric du r&eacute;cepteur m et que McN-A-343 se lie de fa&ccedil;on r&eacute;versible au m&ecirc;me locus. Notre m&eacute;thode d&#39;analyse des interactions allost&eacute;riques ne souffre pas les limites des approches plus classiques et peut &ecirc;tre adapt&eacute; pour d&eacute;tecter des interactions allost&eacute;riques au niveau des r&eacute;cepteurs autre que les sous-types muscariniques.

Enqu&ecirc;te sur l&#39;interaction de McN-A-343 avec le r&eacute;cepteur muscarinique M2 &agrave; l&#39;aide de son d&eacute;riv&eacute; de moutarde d&#39;azote.

Wir untersuchten, ob das Aziridinium-Ion von einem Stickstoff Senf-Derivat gebildet (4-[(2-bromoethyl)-Methyl-amino]-2 - Butynyl N - Carbamat (3-chlorphenyl); BR384) strukturell verwandt zu McN-A-343 (4--(trimethyl-amino)-2-Butynyl-N-(3-chlorophenyl)carbamate) interagiert phosphorylierter oder Orthosterically mit den Muskarinischer m-Rezeptor. Chinesischer Hamster Eierstock Zellen zum Ausdruck des menschlichen Muskarinischer m-Rezeptors wurden mit der Aziridinium Ion von BR384 in Kombination mit McN-A-343 oder andere bekannte Orthosteric und allosterische Liganden f&uuml;r verschiedene Inkubationszeiten inkubiert. Nach dem Entfernen von Spurenverunreinigungen Ligands, gemessen wir die Bindung von [(3) H] N-Methylscopolamine, residual unalkylated Rezeptoren. Affinit&auml;t Konstanten, Geschwindigkeitskonstanten f&uuml;r Alkylierung und Kooperativit&auml;t Konstanten wurden f&uuml;r die interagierenden Liganden mit einem mathematisches Modell gesch&auml;tzt. Rezeptor-Alkylierung von BR384 entsprach ein zweistufiger Prozess. Nach schnell betr&uuml;ge mit den Rezeptor (Schritt eins), der Aziridinium wurde Ion-Rezeptor-Komplex mit einem ersten Auftrag Geschwindigkeitskonstante von &uuml;ber 0.95min(-1) (Schritt 2) kovalent verkn&uuml;pft. McN-A-343, Acetylcholin und N-Methylscopolamine konkurrierend den m-Rezeptor vor irreversiblen Alkylierung von BR384 gesch&uuml;tzt. In Kontrast, allosterische Modulatoren, Gallamine und gewinnen 51.708 (17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole), phosphorylierter gehemmt oder hatte keine Wirkung, bzw. Rezeptor Alkylierung von BR384. Es gab gutes Abkommen zwischen Affinit&auml;t Konstanten aus der Kinetik der Rezeptor-Alkylierung und durch Verschiebung der N-Methylscopolamine-Bindung [(3) H] gesch&auml;tzt. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass BR384 kovalent an die Orthosteric-Seite des m-Rezeptor bindet und McN-A-343 reversibel an der gleichen Locus bindet. Unsere Methode der Analyse allosterischer Interaktionen leidet nicht die Grenzen der konventionellen Ans&auml;tze und kann allosterische Interaktionen an Rezeptoren als Muskarinischer Subtypen erkennen angepasst werden.

Untersucht das Zusammenspiel von McN-A-343 mit der Muskarinischer M2-Rezeptor mit Hilfe seiner Stickstoff Senf-Derivat.

Abbiamo valutato se lo ione aziridinium formata da un derivato di azoto senape (4-[(2-bromoethyl) metil-ammino] -2 - butynyl N-(3-clorofenil) carbammato; BR384) strutturalmente correlati a McN-A-343 (N-(3-chlorophenyl)carbamate)-(trimethyl-amino)-2-butynyl 4 interagisce allosterically o orthosterically con il M(2) del recettore muscarinico. Le cellule di ovaio criceto cinese che esprime l&#39;umana recettore del m(2) muscarinico sono state incubate con lo ione di aziridinium di BR384 in combinazione con McN-A-343 o altri noti orthosteric e ligandi allosterici per vari tempi di incubazione. Dopo la rimozione di ligandi non reagiti, abbiamo misurato l&#39;associazione [3 h] N-methylscopolamine ai recettori unalkylated residui. Costanti di affinit&agrave;, costanti di velocit&agrave; per alchilazione e cooperativit&agrave; costanti sono stati stimati per i ligandi interagiscono utilizzando un modello matematico. Alchilazione del ricevitore di BR384 era coerente con un processo in due fasi. Dopo aver rapidamente equilibrate con il recettore (passo uno), il aziridinium complesso ione-recettore &egrave; diventato covalentemente collegato con prima ordine tasso costante di circa 0.95min(-1) (fase due). McN-A-343, acetilcolina e N-methylscopolamine protette competitivo del recettore M(2) da alchilazione irreversibile da BR384. In contrasto, i modulatori allosterici, gallamine e vincere 51.708 (17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole), allosterically inibita o ha avuto alcun effetto su, rispettivamente, alchilazione del ricevitore di BR384. C&#39;era il buon accordo tra costanti di affinit&agrave; stimato dalla cinetica di alchilazione del recettore e dallo spostamento di [(3) H] N-methylscopolamine associazione. I nostri risultati suggeriscono che BR384 si lega covalentemente al sito orthosteric del recettore M(2) e che McN-A-343 si lega reversibilmente presso il locus stesso. Il nostro metodo di analizzare le interazioni allosteric non soffrono i limiti degli approcci pi&ugrave; convenzionali e pu&ograve; essere adattata per rilevare interazioni allosteric a recettori diversi sottotipi muscarinici.

Studiando l&#39;interazione di McN-A-343 con il recettore muscarinico M2 utilizzando il suo derivato azoto senape.

Aziridinium &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x7A92;&#x7D20;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9;&#x6D3E;&#x751F;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F; (4-[(2-bromoethyl) &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;]-2 - &#x30D6;&#x30C1;&#x30CB;&#x30EB; N-(3-&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;) &#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;;BR384) &#x306F;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B; McN-A-343 &#x306B;&#x95A2;&#x9023; (4-(trimethyl-amino)-2-&#x30D6;&#x30C1;&#x30CB;&#x30EB; N-(3-chlorophenyl)carbamate) &#x5BFE;&#x8A71;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x5236;&#x5FA1;&#x307E;&#x305F;&#x306F; M(2) &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068; orthosterically&#x3002;&#x3072;&#x3068; M(2) &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0; &#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#x7D30;&#x80DE; BR384 &#x306E; aziridinium &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; McN-A-343 &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E; orthosteric &#x3068;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672A;&#x53CD;&#x5FDC;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;[3 H] &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F; N-methylscopolamine &#x6B8B;&#x7559; unalkylated &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3002;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x5B9A;&#x6570;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x3068;&#x5354;&#x540C;&#x6027;&#x306E;&#x5B9A;&#x6570;&#x6570;&#x5B66;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316; BR384 &#x306F; 2 &#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x5668; (&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7; 1)&#x3001;aziridinium &#x5BA4;&#x6E29;&#x5F8C;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x6CE8;&#x6587;&#x7387;&#x5B9A;&#x6570; 0.95min(-1) (&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7; 2) &#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7AF6;&#x4E89;&#x529B;&#x306E;&#x3042;&#x308B; McN-A-343, &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068; N methylscopolamine M(2) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316; BR384 &#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x5909;&#x8ABF;&#x5668;&#x3001;&#x30AC;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x52DD;&#x3064; 51,708 &#xFF08;17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole) &#x306F;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x52B9;&#x679C;&#x306A;&#x3057;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316; BR384 &#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;[3 H] &#x306E;&#x5909;&#x4F4D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x304B;&#x3089;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5408;&#x610F;&#x304C;&#x826F;&#x3044; N methylscopolamine &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x306E; BR384 M(2) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E; orthosteric &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x3001;McN-A-343 &#x5143;&#x306B;&#x623B;&#x305B;&#x308B;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x540C;&#x3058;&#x8ECC;&#x8DE1;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306F;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x304B;&#x3089;&#x82E6;&#x3057;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

McN-A-343 &#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x305D;&#x306E;&#x7A92;&#x7D20;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9;&#x5FAE;&#x5206;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; M2 &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x5668;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; aziridinium &#xC774;&#xC628; &#xC9C8;&#xC18C; &#xACA8;&#xC790; &#xD30C;&#xC0DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xC131; &#xC5EC;&#xBD80; &#xC870;&#xC0AC; (4-[(2-bromoethyl) &#xBA54; &#xD2F8; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;]-2-butynyl N-(3-chlorophenyl) carbamate; BR384) &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; McN-A-343 (4-(trimethyl-amino)-2-butynyl N-(3-chlorophenyl)carbamate) allosterically &#xC791;&#xC6A9; &#xB610;&#xB294; orthosterically M(2) muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; M(2) muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC778;&#xD050;&#xBCA0;&#xC774;&#xC158; &#xBC88; McN-A-343 &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; orthosteric &#xBC0F; allosteric ligands &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; br384&#xC758; aziridinium &#xC774;&#xC628; incubated &#xD588;&#xB2E4;. [(3) H] &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; unreacted ligands &#xC81C;&#xAC70;&#xD55C; &#xD6C4; &#xC794;&#xC5EC; unalkylated &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; N-methylscopolamine. &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;, &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xBC0F; cooperativity &#xC0C1;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xD559;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; ligands &#xCD94;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. Br384&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C;&#xB294; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (1 &#xB2E8;&#xACC4;)&#xC640; equilibrating&#xB294; aziridinium &#xD6C4; &#xC774;&#xC628;-&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4; &#x70AD; 0.95min(-1) (2 &#xB2E8;&#xACC4;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC8FC;&#xBB38; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. McN-A-343, &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0;&#xACFC; N-methylscopolamine br384&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; M(2) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xD638;. &#xB300;&#xBE44;, allosteric &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;, gallamine &#xBC0F; 51,708 &#xC774;&#xAE30;&#xC5D0; (17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole), allosterically &#xC800;&#xD574; &#xB610;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC5D0;, &#xAC01;&#xAC01;, br384&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C;. &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xCD94;&#xC815;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C;&#xC640; [(3) H] N methylscopolamine &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xBCC0;&#xC704;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC774; &#xC88B;&#xC740; &#xACC4;&#xC57D;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; BR384 &#x70AD; M(2) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; orthosteric &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; McN-A-343 &#xC5ED; &#xAC19;&#xC740; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Allosteric &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xC640; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC758; &#xD55C;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xD1B5;&#xC744; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; muscarinic &#xD558;&#xC704; &#xC774;&#xC678;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; allosteric &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

McN-A-343&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; M2 muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC9C8;&#xC18C; &#xACA8;&#xC790; &#xD30C;&#xC0DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Investigamos si el ion aziridinium formado a partir de un derivado de mostaza nitrogenada (4-[(2-bromoethyl) amino-metil] -2 - butynyl N-(3-clorofenil) carbamato; BR384) relacionado estructuralmente con McN-A-343 (4-(trimethyl-amino)-2-butynyl N-(3-chlorophenyl)carbamate) allosterically interact&uacute;a o orthosterically con el receptor muscar&iacute;nico de M(2). C&eacute;lulas de ovario de h&aacute;mster chino que expresan el receptor muscar&iacute;nico del M(2) humano se incubaron con el ion de aziridinium de BR384 en combinaci&oacute;n con McN-A-343 u otro conocido orthosteric y alost&eacute;ricos ligandos para diferentes tiempos de incubaci&oacute;n. Despu&eacute;s de quitar los ligandos sin reaccionar, medimos la Uni&oacute;n de [3 H] N-methylscopolamine a los receptores unalkylated residuales. Constantes de afinidad, constantes de velocidad de alquilaci&oacute;n y constantes de cooperatividad estimaron para los interacci&oacute;n ligandos utilizando un modelo matem&aacute;tico. Alquilaci&oacute;n del receptor por BR384 era constante con un proceso de dos pasos. Despu&eacute;s de equilibrio r&aacute;pidamente con el receptor (paso uno), de la aziridinium ion-receptor complejo se convirti&oacute; covalente con una primera constante de velocidad de orden de sobre 0.95min(-1) (paso dos). McN-A-343, acetilcolina y N-methylscopolamine protegen competitivamente el receptor M(2) de alquilaci&oacute;n irreversible por BR384. En contraste, los moduladores alost&eacute;ricos, trietioduro y ganar 51.708 (17-beta-hydroxy-17-alpha-ethynyl-5-alpha-androstano[3,2-beta]pyrimido[1,2-alpha]benzimidazole), allosterically inhibida o no tuvo ning&uacute;n efecto, respectivamente, alquilaci&oacute;n del receptor por BR384. Hubo un buen acuerdo entre constantes de afinidad de la cin&eacute;tica de alquilaci&oacute;n del receptor y por desplazamiento de [3 H] N-methylscopolamine enlace. Nuestros resultados sugieren que BR384 se une covalentemente al sitio orthosteric del receptor M(2) y que McN-A-343 se une reversiblemente en el mismo lugar geom&eacute;trico. Nuestro m&eacute;todo de analizar las interacciones alost&eacute;ricos no sufre de las limitaciones de los enfoques m&aacute;s convencionales y puede ser adaptado para detectar interacciones alost&eacute;ricos en receptores distintos de los subtipos muscar&iacute;nicos.

Investigar la interacci&oacute;n de McN-A-343 con receptor muscar&iacute;nico M2 con su derivado de mostaza nitrogenada.

&#x8C03;&#x67E5;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x836F;&#x7269;&#x5982;&#x4F55;&#x6539;&#x53D8;&#x5B9A;&#x70B9;&#x4EB2;&#x4E0E;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x662F;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x5438;&#x6BD2;&#x884C;&#x4E3A;&#x6709;&#x7ADE;&#x4E89;&#x529B;&#x6216; allosterically&#xFF0C;&#x53EA;&#x8981;&#x4EB2;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x800C;&#x95FB;&#x540D;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x4EB2;&#x6838;&#x6B8B;&#x7559;&#x9644;&#x8FD1;&#x548C; orthosteric &#x7684; M(1) &#x548C; M(2) &#x7684;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x8BC6;&#x522B;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x82A5;&#x5B50;&#x6C14;&#x548C; 4-[(2-bromoethyl)methyl-amino]-2-butynyl-N-(3-chlorophenyl)carbamate &#xFF08;BR384&#xFF09; &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x53E3;&#x888B;&#x5185;&#x3002;BR384 &#x662F;&#x6C2E;&#x82A5;&#x6A21;&#x62DF;&#x7684; [4-[[N-(3-chlorophenyl)carbamoyl]oxy]-2-butynyl]trimethylammonium &#x6C2F; (&#x7F8E;&#x601D;-A-343&#xFF09;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x5929;&#x95E8;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x5728; M(1) (Asp105) &#x548C;&#x5929;&#x51AC;&#x9170;&#x80FA; M(2) (Asp103) &#x4F53;&#x5728;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x56E0;&#x53D7;&#x4F53;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x82A5;&#x672B;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6E29;&#x548C;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x4ECD;&#x7136;&#x53D1;&#x751F;&#x5728; M(2) D103N &#x7684;&#x82A5;&#x5B50;&#x6C14;&#x6D53;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x3002;&#x7531; BR384 &#x53D7;&#x4F53;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x4E5F;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x6291;&#x5236; M(1) D105N &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E00;&#x4E9B;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x4ECD;&#x7136;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x9AD8;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x5927;&#x9662;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;BR384 &#x8FC5;&#x901F;&#x70F7;&#x57FA; M(2) D103N &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x5176;&#x4EB2;&#x548C;&#x51CF;&#x81F3;&#x5341;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E00;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x4EBA;&#x3002;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x7684; BR384 M(2) D103N &#x662F;&#x7ADE;&#x4E89;&#x6027;&#x6291;&#x5236; N methylscopolamine &#x548C; allosterically gallamine &#x53D7;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EB2;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E9B; D103N&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x4E86;&#x7531; BR384 M(2) &#x53D7;&#x4F53;&#x70F7;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5C0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; BR384 alkylates &#x81F3;&#x5C11;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6B8B;&#x7559;&#x4E0D;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x5929;&#x95E8;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x5728; M(1) &#x548C; M(2) &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3002;&#x8FD9;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x5185;&#x6216;&#x9644;&#x8FD1; orthosteric &#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x91CC;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F; gallamine &#x7684;&#x53D8;&#x6784;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;

&#x9644;&#x8FD1;&#x7684; M1 &#x548C; M2 &#x7684;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53; orthosteric &#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x4EB2;&#x6838;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x8BF1;&#x53D8;&#xFF1A; &#x6C2E;&#x82A5;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x548C;&#x7F8E;&#x601D;-A-343 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0A;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x3002;

Investigating how a test drug alters the reaction of a site-directed electrophile with a receptor is a powerful method for determining whether the drug acts competitively or allosterically, provided that the binding site of the electrophile is known. In this study, therefore, we mutated nucleophilic residues near and within the orthosteric pockets of M(1) and M(2) muscarinic receptors to identify where acetylcholine mustard and 4-[(2-bromoethyl)methyl-amino]-2-butynyl-N-(3-chlorophenyl)carbamate (BR384) bind covalently. BR384 is the nitrogen mustard analog of [4-[[N-(3-chlorophenyl)carbamoyl]oxy]-2-butynyl]trimethylammonium chloride (McN-A-343). Mutation of the highly conserved aspartic acid in M(1) (Asp105) and M(2) (Asp103) receptors to asparagine largely prevented receptor alkylation by acetylcholine mustard, although modest alkylation still occurred at M(2) D103N at high concentrations of the mustard. Receptor alkylation by BR384 was also greatly inhibited in the M(1) D105N mutant, but some alkylation still occurred at high concentrations of the compound. In contrast, BR384 rapidly alkylated the M(2) D103N mutant. Its affinity was reduced to one tenth, however. The alkylation of M(2) D103N by BR384 was competitively inhibited by N-methylscopolamine and allosterically inhibited by gallamine. Mutation of a variety of other nucleophilic residues, some in combination with D103N, had little effect on M(2) receptor alkylation by BR384. Our results suggest that BR384 alkylates at least one residue other than the conserved aspartic acid at the ligand-binding site of M(1) and M(2) receptors. This additional residue seems to be located within or near the orthosteric-binding pocket and is not part of the allosteric site for gallamine.

Mutagenesis of nucleophilic residues near the orthosteric binding pocket of M1 and M2 muscarinic receptors: effect on the binding of nitrogen mustard analogs of acetylcholine and McN-A-343.

&Eacute;tudier comment une drogue de test modifie la r&eacute;action d&#39;un &eacute;lectrophile dirig&eacute;e avec un r&eacute;cepteur est une m&eacute;thode puissante pour d&eacute;terminer le m&eacute;dicament actes concurrentiels ou de fa&ccedil;on allost&eacute;rique, pourvu que le site de liaison de l&#39;&eacute;lectrophile est connu. Dans cette &eacute;tude, par cons&eacute;quent, nous avons mut&eacute; nucl&eacute;ophiles r&eacute;sidus pr&egrave;s et dans les poches d&#39;orthosteric des r&eacute;cepteurs muscariniques greff&eacute;e et la capacit&eacute; d&#39;identifier o&ugrave; moutarde ac&eacute;tylcholine et 4-[(2-bromoethyl)methyl-amino]-2-butynyl-N-(3-chlorophenyl)carbamate (BR384) lient de fa&ccedil;on covalente. BR384 est l&#39;analogue de la moutarde d&#39;azote du [4-[[N-(3-chlorophenyl)carbamoyl]oxy]-2-butynyl]trimethylammonium chlorure (McN-A-343). Mutation de l&#39;acide aspartique hautement conserv&eacute;e dans 1 (Asp105) et octah&eacute;dralement (Asp103) des r&eacute;cepteurs &agrave; l&#39;asparagine emp&ecirc;ch&eacute; en grande partie l&#39;alkylation du r&eacute;cepteur par l&#39;ac&eacute;tylcholine moutarde, bien que modeste alkylation est encore survenu m D103N &agrave; des concentrations &eacute;lev&eacute;es de la moutarde. Alkylation de r&eacute;cepteurs de BR384 est aussi grandement inhib&eacute;e chez le mutant D105N greff&eacute;e, mais certains alkylation encore a eu lieu &agrave; des concentrations &eacute;lev&eacute;es de ce compos&eacute;. En revanche, BR384 alkyl&eacute;s rapidement le mutant D103N m. Son affinit&eacute; a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite &agrave; un dixi&egrave;me, cependant. L&#39;alkylation de m D103N de BR384 a &eacute;t&eacute; inhib&eacute;e de fa&ccedil;on comp&eacute;titive par N-m&eacute;thylscopolamine et inhib&eacute;e de mani&egrave;re allost&eacute;rique par gallamine. Mutation d&#39;une vari&eacute;t&eacute; d&#39;autres r&eacute;sidus nucl&eacute;ophiles, certains en combinaison avec le D103N, avait peu d&#39;effet sur l&#39;alkylation de r&eacute;cepteur du capteur par BR384. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la BR384 alkyle de r&eacute;sidus au moins une autre que de l&#39;acide aspartique conserv&eacute; sur le site de liaison du ligand des r&eacute;cepteurs 1 et m. Ce r&eacute;sidu suppl&eacute;mentaire semble &ecirc;tre situ&eacute; dans ou pr&egrave;s de la poche de liaison d&#39;orthosteric et ne fait pas partie du site allost&eacute;rique pour gallamine.

Mutagen&egrave;se des r&eacute;sidus nucl&eacute;ophiles pr&egrave;s de la poche de liaison orthosteric des r&eacute;cepteurs muscariniques M1 et M2 : effet sur la liaison d&#39;analogues de la moutarde d&#39;azote de l&#39;ac&eacute;tylcholine et McN-A-343.

Untersuchen, wie eine Test Medikament &auml;ndert die Reaktion von einer Site-verwiesene Elektrophil mit ein Rezeptor ist eine leistungsf&auml;hige Methode zur Feststellung, ob die Droge kompetitiv oder phosphorylierter, wirkt, sofern die Bindungsstelle f&uuml;r das Elektrophil bekannt ist. In dieser Studie mutierten wir daher Nukleophile R&uuml;ckst&auml;nde in der N&auml;he und in die Orthosteric-Taschen der Zusammenlegung und m muskarinische Rezeptoren zu identifizieren, wo Acetylcholin-Senf und 4-[(2-bromoethyl)methyl-amino]-2-butynyl-N-(3-chlorophenyl)carbamate (BR384) kovalent gebunden. BR384 ist die Stickstoff Senf-Analog [4-[[N-(3-chlorophenyl)carbamoyl]oxy]-2-butynyl]trimethylammonium Chlorid (McN-A-343). Mutation des stark konservierten Asparagins&auml;ure Zusammenlegung (Asp105) und m (Asp103)-Rezeptoren an Asparagin verhindert weitgehend Rezeptor-Alkylierung von Acetylcholin Senf, obwohl bescheiden Alkylierung an m D103N in hohen Konzentrationen der Senf noch aufgetreten ist. Rezeptor-Alkylierung von BR384 war auch sehr in der Zusammenlegung D105N Mutant gehemmt, aber einige Alkylierung trat noch in hohen Konzentrationen der Substanz. Im Gegensatz dazu alkylierte BR384 schnell den m-D103N-Mutanten. Seine Affinit&auml;t wurde auf ein Zehntel, jedoch reduziert. Die Alkylierung von m-D103N von BR384 war kompetitiv gehemmt durch N-Methylscopolamine und phosphorylierter durch Gallamine gehemmt. Mutation einer Vielzahl von andere Nukleophile R&uuml;ckst&auml;nde, einige in Kombination mit D103N, hatte wenig Auswirkung auf m-Rezeptor-Alkylierung von BR384. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass die BR384 mindestens ein R&uuml;ckstand als die konservierten Asparagins&auml;ure am Standort Ligand-Bindung der Zusammenlegung und m-Rezeptoren alkylates. Diese zus&auml;tzliche R&uuml;ckst&auml;nde scheint sich innerhalb oder nahe der Orthosteric-Bindung-Tasche zu sein und ist nicht Teil der allosterische Website f&uuml;r Gallamine.

Mutagenese Nukleophile R&uuml;ckst&auml;nde in der N&auml;he der Orthosteric-Bindung-Tasche von M1 und M2 muskarinische Rezeptoren: Auswirkungen auf die Bindung von Stickstoff Senf Analoga von Acetylcholin und McN-A-343.

Indagare come una test di droga altera la reazione di un elettrofilo sito diretto con un recettore &egrave; un metodo potente per determinare se il farmaco agisce competitivamente o allosterically, a condizione che il sito di legame dell&#39;elettrofilo &egrave; noto. In questo studio, pertanto, abbiamo mutato nucleofila residui nei pressi e all&#39;interno le tasche di orthosteric di M(1) e M(2) i recettori muscarinici per identificare dove acetilcolina senape e 4-[(2-bromoethyl)methyl-amino]-2-butynyl-N-(3-chlorophenyl)carbamate (BR384) legare covalentemente. BR384 &egrave; l&#39;analogo di azoto senape del [4-[[N-(3-chlorophenyl)carbamoyl]oxy]-2-butynyl]trimethylammonium cloruro (McN-A-343). Mutazione dell&#39;acido aspartico altamente conservato in M(1) (Asp105) e M(2) (Asp103) recettori per l&#39;asparagina in gran parte impedito alchilazione del recettore di senape di acetilcolina, anche se modesto alchilazione ancora si &egrave; verificato a M(2) D103N a concentrazioni elevate della senape. Alchilazione del ricevitore di BR384 era anche notevolmente inibita in mutante M(1) D105N, ma ancora si &egrave; verificato qualche alchilazione ad alte concentrazioni del composto. Al contrario, BR384 alchilati rapidamente il mutante M(2) D103N. L&#39;affinit&agrave; &egrave; stato ridotto a un decimo, tuttavia. L&#39;alchilazione di M(2) D103N di BR384 era competitivamente inibita da N-methylscopolamine e allosterically inibito da gallamine. Mutazione di una variet&agrave; di altri residui nucleofila, alcuni in combinazione con D103N, ha avuto poco effetto su alchilazione del recettore M(2) da BR384. I nostri risultati suggeriscono che BR384 alchilazione almeno un residuo diverso da quello dell&#39;acido aspartico conservata presso il sito di ligand-legantesi dei recettori M(1) e M(2). Questo ulteriore residuo sembra essere situato all&#39;interno o in prossimit&agrave; della tasca orthosteric-associazione e non fa parte del sito allosterico per gallamine.

Mutagenesi di residui nucleofila vicino la tasca di associazione orthosteric dei recettori muscarinici M1 e M2: effetto sul legame degli analoghi di azoto senape di acetilcolina e McN-A-343.

&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x85AC;&#x3092;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6307;&#x793A;&#x6C42;&#x96FB;&#x5B50;&#x5264;&#x3067;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6C42;&#x96FB;&#x5B50;&#x5264;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x85AC;&#x7AF6;&#x4E89;&#x7684;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x3001;&#x884C;&#x70BA;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6C42;&#x6838;&#x6B8B;&#x57FA;&#x8FD1;&#x508D;&#x3068;&#x3069;&#x3053;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3; &#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9;&#x3068; 4-[(2-bromoethyl)methyl-amino]-2-butynyl-N-(3-chlorophenyl)carbamate (BR384) &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B; M(1) &#x3068; M(2) &#x306E;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E; orthosteric &#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x5185;&#x5909;&#x7570;&#x3002;&#x7A92;&#x7D20;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9; &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0; [4-[[N-(3-chlorophenyl)carbamoyl]oxy]-2-butynyl]trimethylammonium &#x5869;&#x5316; (McN-A-343)&#x3002; BR384 &#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3055;&#x3084;&#x304B;&#x306A;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316; M(2) D103N &#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x307E;&#x3060;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7BC0;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178; M(1) (Asp105) &#x3068; M(2) (Asp103) &#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x4E3B;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3002;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316; BR384 &#x3082;&#x5927;&#x5E45; M(1) D105N &#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;BR384 &#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B; M(2) D103N &#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306F;&#x305F;&#x3060;&#x3057; 1/10 &#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;M(2) D103N &#x306B;&#x3088;&#x308B; BR384 &#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7AF6;&#x4E89;&#x529B;&#x306E;&#x3042;&#x308B; N-methylscopolamine &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x30AC;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x6C42;&#x6838;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3001;D103N &#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x5909;&#x7570; M(2) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316; BR384 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066; &#x3002;BR384 &#x4FDD;&#x5B58;&#x306E;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x3067; M(1) &#x3068; M(2) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x4EE5;&#x5916;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 1 &#x3064;&#x306E;&#x6B8B;&#x6E23;&#x3092; alkylates &#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x6B8B;&#x6E23;&#x5185;&#x307E;&#x305F;&#x306F; orthosteric &#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x601D;&#x308F;&#x308C;&#x3001;&#x30AC;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

M1 &#x3068; M2 &#x306E;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E; orthosteric &#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x8FD1;&#x304F;&#x6C42;&#x6838;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;: &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068; McN-A-343 &#x306E;&#x7A92;&#x7D20;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C9;&#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3002;

&#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; electrophile &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xBC18;&#xC751; &#xC870;&#xC0AC;&#xB294; electrophile&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xC57D;&#xBB3C; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; allosterically, &#xC791;&#xB3D9; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC778;&#xADFC; orthosteric &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8; 4-[(2-bromoethyl)methyl-amino]-2-butynyl-N-(3-chlorophenyl)carbamate (BR384)&#xC640; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xACA8;&#xC790; &#x70AD; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xD655;&#xC778;&#xC744; M(1)&#xC640; M(2) muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;. Br384&#xB294; &#xC9C8;&#xC18C; &#xACA8;&#xC790; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; [4-[[N-(3-chlorophenyl)carbamoyl]oxy]-2-butynyl]trimethylammonium &#xC5FC;&#xD654; (McN-A-343). &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; aspartic &#xC0B0; M(1) (Asp105)&#xACFC; &#xC544;&#xC2A4;&#xD30C;&#xB77C;&#xAE34;&#xC744; M(2) (Asp103) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACA8;&#xC790;, &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C;&#xB97C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBC29;&#xD574; &#xBE44;&#xB85D; &#xACB8;&#xC190; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xACA8;&#xC790;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; M(2) d103n&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Br384&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C; M(1) D105N &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC800;&#xD574;&#xB294; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC77C;&#xBD80; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C;&#xB294; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, br384&#xB294; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; M(2) D103N &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; alkylated. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xADF8; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; 1/10 &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. BR384, M(2) d103n&#xC758; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; N-methylscopolamine&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; allosterically gallamine&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; D103N&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xBD80; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; br384&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; M(2) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCCE4;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; BR384 alkylates M(1) &#xBC0F; M(2) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; aspartic &#xC0B0; &#xC774;&#xC678;&#xC758; &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC774; &#xC774;&#xB0B4; &#xB610;&#xB294; orthosteric &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8; &#xADFC;&#xCC98; &#xAC83; &#xAC19;&#xACE0; allosteric &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; gallamine&#xC5D0; &#xC18D;&#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

M 1&#xACFC; M2 muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; orthosteric &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8; &#xADFC;&#xCC98; &#xB2D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; mutagenesis: &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0;&#xACFC; McN-A-343&#xC758; &#xC9C8;&#xC18C; &#xACA8;&#xC790; &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;.

Investigar c&oacute;mo una drogas de prueba alteran la reacci&oacute;n de un electr&oacute;filo dirigida con un receptor es un m&eacute;todo eficaz para determinar si la droga act&uacute;a competitivamente o allosterically, siempre y cuando se conoce el sitio de uni&oacute;n de la electr&oacute;filo. En este estudio, por lo tanto, hemos transformado nucle&oacute;fila residuos cerca a los bolsillos de orthosteric de M(1) y M(2) de los receptores muscar&iacute;nicos para identificar donde unen covalentemente mostaza de acetilcolina y 4-[(2-bromoethyl)methyl-amino]-2-butynyl-N-(3-chlorophenyl)carbamate (BR384). BR384 es el an&aacute;logo de la mostaza nitrogenada de [cloruro 4-[[N-(3-chlorophenyl)carbamoyl]oxy]-2-butynyl]trimethylammonium (McN-A-343). Mutaci&oacute;n del &aacute;cido asp&aacute;rtico altamente conservado en M(1) (Asp105) y M(2) (Asp103) los receptores a la asparragina en gran medida evitar alquilaci&oacute;n receptor acetilcolina mostaza, aunque modesta alquilaci&oacute;n a&uacute;n se produjo en M(2) D103N en las altas concentraciones de la mostaza. Alquilaci&oacute;n del receptor de BR384 tambi&eacute;n fue inhibida en el mutante M(1) D105N, pero algunos alquilaci&oacute;n ocurri&oacute; a&uacute;n en altas concentraciones del compuesto. En cambio, BR384 r&aacute;pidamente alquilados al mutante M(2) D103N. Su afinidad se redujo a una d&eacute;cima parte, sin embargo. La alquilaci&oacute;n de M(2) D103N por BR384 fue inhibida competitivamente por N-methylscopolamine y allosterically inhibida por trietioduro. Mutaci&oacute;n de una variedad de otros residuos nucleof&iacute;lica, algunos en combinaci&oacute;n con D103N, tuvo poco efecto en la alquilaci&oacute;n de receptor M(2) por BR384. Nuestros resultados sugieren que la BR384 alkylates por lo menos un residuo que no sea el &aacute;cido asp&aacute;rtico conservado en el sitio ligando de receptores M(1) y M(2). Este residuo adicional parece ubicarse dentro o cerca del bolsillo de Uni&oacute;n orthosteric y no constituye parte del sitio alost&eacute;rico para trietioduro.

Mutag&eacute;nesis de residuos nucle&oacute;fila cerca del bolsillo de uni&oacute;n de orthosteric de los receptores muscar&iacute;nicos M1 y M2: efecto en la Uni&oacute;n de an&aacute;logos de la mostaza nitrogenada de acetilcolina y McN-A-343.

&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x7406;&#x8BBA;&#x4F30;&#x7B97;&#x89C2;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x4EB2;&#x7F18;&#x5173;&#x7CFB; &#xFF08;K(obs)) &#x548C; orthosteric &#x4E2D;&#x914D;&#x4F53;&#x5C55;&#x793A;&#x672C;&#x6784;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7406;&#x8BBA;&#x5728;&#x4E3B;&#x52A8; &epsilon; &#x5185;&#x5728;&#x529F;&#x6548;&#xFF09; &#x5305;&#x62EC;&#x88AB;&#x5360;&#x9886;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5206;&#x6570;&#x7684;&#x53C2;&#x6570;&#x548C;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8; &#xFF08;&epsilon;(i)) &#x56FD;&#x5BB6;&#x548C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x53C2;&#x6570;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x81EA;&#x7531;&#x53D7;&#x4F53;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x5206;&#x6570; &#xFF08;&epsilon;(sys)) &#x548C;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8; &#xFF08;&epsilon;(i-sys)) &#x56FD;&#x5BB6;&#x3002;&#x603B;&#x7684;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x523A;&#x6FC0;&#x65B9;&#x6848;&#x8868;&#x793A;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x81EA;&#x7531;&#x548C;&#x88AB;&#x5360;&#x9886;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x603B;&#x548C;&#x3002;&#x4FEE;&#x6539;&#x540E;&#x7684;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x88AB;&#x5F00;&#x53D1;&#x8868;&#x793A;&#x54CD;&#x5E94;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x603B;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x7269;&#x6D41;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6B64;&#x51FD;&#x6570;&#x5305;&#x542B;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x548C;&#x6548;&#x679C; &#xFF08;K(obs) &#x548C; &tau;&#xFF09;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x53C2;&#x6570;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x81EA;&#x7531;&#x53D7;&#x4F53;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&tau;(sys) &#x6210;&#x6B63;&#x6BD4;&#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x53C2;&#x6570;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x53C2;&#x6570;&#x662F;&#x6210;&#x6B63;&#x6BD4;&#x7684;&#x514D;&#x8D39;&#x5206;&#x6570; &#xFF08;&tau;(i-sys)) &#x548C;&#x5360;&#x9886; (&tau;(i)) &#x53D7;&#x4F53;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x6D3B;&#x52A8; orthosteric &#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x5E38;&#x6570;&#x7684;&#x4F30;&#x8BA1;&#x6570; &#xFF08;K(b)) &#x548C;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8; &#xFF08;&#x53D7;&#x4F53; K(a)) &#x56FD;&#x5BB6;&#x76F8;&#x5F53;&#x4E8E; &tau;K(obs)/&tau;(sys) &#x548C; &tau;(i)K(obs)/&tau;(i-sys)&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x662F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x673A;&#x4EFF;&#x771F;&#x6280;&#x672F;&#x4E0E;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x5B83;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E; M(2) &#x548C; M(3) &#x7684;&#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x504F;&#x89C1;&#x7684;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x5728;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x3002;

Agonism &#x4E0E;&#x9006; agonism &#x5728;&#x540C;&#x6784;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x5206;&#x6790;&#xFF1A; &#x4F30;&#x8BA1;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x53D7;&#x4F53;&#x56FD;&#x5BB6; orthosteric &#x914D;&#x4F53;&#x4EB2;&#x548C;&#x5E38;&#x6570;&#x3002;

We describe a modification of receptor theory for the estimation of observed affinities (K(obs)) and relative efficacies of orthosteric ligands in functional assays that exhibit constitutive activity. Our theory includes parameters for the fractions of the occupied receptor population in the active (intrinsic efficacy, Îµ) and inactive (Îµ(i)) states and analogous parameters for the fractions of the free receptor population in the active (Îµ(sys)) and inactive (Îµ(i-sys)) states. The total stimulus represents the summation of the active states of the free and occupied receptor populations. A modified operational model is developed that expresses the response as a logistic function of the total stimulus. This function includes the standard parameters related to affinity and efficacy (K(obs) and Ï„) as well as a parameter proportional to the activity of the free receptor complex, Ï„(sys). Two related parameters are proportional to the fraction of the free (Ï„(i-sys)) and occupied (Ï„(i)) receptor populations in the inactive state. We show that the estimates of the affinity constants of orthosteric ligands for the active (K(b)) and inactive (K(a)) states of the receptor are equivalent to Ï„K(obs)/Ï„(sys) and Ï„(i)K(obs)/Ï„(i-sys), respectively. We verify our method with computer simulation techniques and apply it to the analysis of M(2) and M(3) muscarinic receptors. Our method is applicable in the analysis of ligand bias in drug discovery programs.

Analysis of agonism and inverse agonism in functional assays with constitutive activity: estimation of orthosteric ligand affinity constants for active and inactive receptor states.

On d&#xE9;crit une modification de la th&#xE9;orie des r&#xE9;cepteurs pour l&#x26;#39;estimation des affinit&#xE9;s observ&#xE9;es (K (obs)) et l&#x26;#39;efficacit&#xE9; relative de ligands dans des dosages orthost&#xE9;riques fonctionnels qui pr&#xE9;sentent une activit&#xE9; constitutive. Notre th&#xE9;orie inclut des param&#xE8;tres pour les fractions de la population de r&#xE9;cepteurs occup&#xE9;s &#xE0; la population active (efficacit&#xE9; intrins&#xE8;que, e) et inactif (&#x3B5; (i)) des &#xC9;tats et des param&#xE8;tres analogues pour les fractions de la population de r&#xE9;cepteurs libres dans la population active (&#x3B5; (syst&#xE8;me)) et inactifs (&#x3B5; (i-sys)) stipule. Le stimulus total repr&#xE9;sente la somme des &#xE9;tats actifs des populations de r&#xE9;cepteurs libres et occup&#xE9;s. Un mod&#xE8;le modifi&#xE9; op&#xE9;rationnelle est d&#xE9;velopp&#xE9;e qui exprime la r&#xE9;ponse en fonction logistique de l&#x26;#39;impulsion totale. Cette fonction comprend les param&#xE8;tres normalis&#xE9;s relatifs &#xE0; affinit&#xE9; et l&#x26;#39;efficacit&#xE9; (K (obs) et &#x3C4;) ainsi que d&#x26;#39;un param&#xE8;tre proportionnel &#xE0; l&#x26;#39;activit&#xE9; du complexe r&#xE9;cepteur libre, &#x3C4; (syst&#xE8;me). Deux param&#xE8;tres sont li&#xE9;s proportionnelle &#xE0; la fraction de la libert&#xE9; (&#x3C4; (i-sys)) et occup&#xE9; (&#x3C4; (i)) populations de r&#xE9;cepteurs &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat inactif. Nous montrons que les estimations des constantes d&#x26;#39;affinit&#xE9; de ligands pour les actifs orthost&#xE9;riques (K (b)) et inactifs (K (a)) des &#xE9;tats de le r&#xE9;cepteur sont &#xE9;quivalents &#xE0; &#x3C4;K (obs) / &#x3C4; (sys) et &#x3C4; (i) K (obs) / &#x3C4; (i-sys), respectivement. Nous v&#xE9;rifions notre m&#xE9;thode avec les techniques de simulation par ordinateur et de l&#x26;#39;appliquer &#xE0; l&#x26;#39;analyse de M (2) et M (3) les r&#xE9;cepteurs muscariniques. Notre m&#xE9;thode est applicable dans l&#x26;#39;analyse des biais ligand dans les programmes de d&#xE9;couverte de m&#xE9;dicaments.

Analyse des agonisme et agonisme inverse dans les essais fonctionnels avec une activit&#xE9; constitutive: Estimation des constantes orthost&#xE9;riques ligand d&#x26;#39;affinit&#xE9; pour les &#xC9;tats r&#xE9;cepteur actif et inactif

Wir beschreiben eine Modifikation der Rezeptor-Theorie f&uuml;r die Sch&auml;tzung der beobachteten Affinit&auml;ten (K(obs)) und relative Leistungsnachteile Orthosteric Liganden bei funktionelle Assays, die konstitutive Aktivit&auml;t aufweisen. Unsere Theorie enth&auml;lt Parameter f&uuml;r die Teile der Bev&ouml;lkerung besetzten Rezeptor in den aktiven (intrinsische Wirksamkeit, &epsilon;) und inaktive (&epsilon;(i)) Staaten und Analog Parameter f&uuml;r die Br&uuml;che der freien Rezeptor-Bev&ouml;lkerung in den aktiven (&epsilon;(sys)) und inaktiv (&epsilon;(i-sys)) Staaten. Der gesamte Reiz stellt die Summe der aktiven Status der freien und besetzten Rezeptor Bev&ouml;lkerungen. Ein ver&auml;nderter funktionsf&auml;higes Modell entwickelt, das die Antwort als logistische Funktion des gesamten Stimulus ausdr&uuml;ckt. Diese Funktion umfasst die standard-Parameter mit Bezug zu Affinit&auml;t und Wirksamkeit (K(obs) und &tau;) sowie einen Parameter proportional auf die T&auml;tigkeit der freien Rezeptor-Komplex, &tau;(sys). Zwei verwandte Parameter sind proportional zu den Bruch der freien (&tau;(i-sys)) und besetzte (&tau;(i))-Rezeptor-Populationen in den inaktiven Zustand. Wir zeigen, dass die Sch&auml;tzungen der Affinit&auml;t Konstanten der Orthosteric Liganden f&uuml;r das aktive (K(b)) und inaktiv (K(a)) Staaten des Rezeptors entsprechen dem &tau;K(obs)/&tau;(sys) und &tau;(i)K(obs)/&tau;(i-sys), beziehungsweise. Wir &uuml;berpr&uuml;fen unsere Methode mit Computer-Simulation-Techniken und wenden sie die Analyse von m und M(3) muskarinische Rezeptoren. Unsere Methode ist anwendbar bei der Analyse der Ligand Bias in der Droge-Entdeckung-Programme.

Analyse der Agonismus und inverse Agonismus bei funktionelle Assays mit konstitutiven Aktivit&auml;t: Absch&auml;tzung der Orthosteric Ligand Affinit&auml;t Konstanten f&uuml;r aktive und inaktive Rezeptor Staaten.

Descriviamo una modificazione della teoria del recettore per la stima delle affinit&agrave; osservati (K(obs)) e relativa efficacia di ligandi orthosteric in analisi funzionale che presentano attivit&agrave; costitutiva. Nostra teoria include i parametri per le frazioni della popolazione occupata del recettore (efficacia intrinseca, &epsilon;): attivo e inattivo (analoghi parametri per le frazioni della popolazione libera recettore attivo e &epsilon;(i)) Stati (&epsilon;(sys)) e inattivo (Stati &epsilon;(i-sys)). Lo stimolo totale rappresenta la sommatoria degli stati attivi delle popolazioni dei recettori liberi e occupati. Viene sviluppato un modello operativo modificato che esprime la risposta come una funzione logistica dello stimolo totale. Questa funzione include i parametri standard correlati per affinit&agrave; ed efficacia (K(obs) e &tau;) cos&igrave; come un parametro proporzionale all&#39;attivit&agrave; del recettore libero complesso, &tau;(sys). Due relativi parametri sono proporzionali alla frazione dei liberi (&tau;(i-sys)) e occupato (popolazioni delle &tau;(i)) del recettore nello stato inattivo. Mostriamo che le stime delle costanti di affinit&agrave; di ligandi orthosteric per attivo (K(b)) e inattivo (Stati K(a)) del recettore sono equivalenti a &tau;K(obs)/&tau;(sys) e &tau;(i)K(obs)/&tau;(i-sys), rispettivamente. Verifichiamo il nostro metodo con tecniche di simulazione al computer e si applicano per l&#39;analisi dei recettori muscarinici M(2) e M(3). Il nostro metodo &egrave; applicabile nell&#39;analisi di bias ligando nei programmi di drug discovery.

Analisi di agonismo e agonismo inverso in analisi funzionale con attivit&agrave; costitutiva: stima delle costanti di affinit&agrave; ligando orthosteric per gli Stati del recettore attivi e inattivi.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#xFF08;K&#xFF08;OBS&#xFF09;&#xFF09;&#x3068;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;orthosteric&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7406;&#x8AD6;&#x306E;&#x4FEE;&#x6B63;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7406;&#x8AD6;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#xFF08;&#x3B5;&#xFF08;SYS&#xFF09;&#xFF09;&#x3067;&#x7121;&#x6599;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x5206;&#x753B;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5360;&#x6709;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306E;&#x753B;&#x5206;&#xFF08;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3001;&#x3B5;&#xFF09;&#x3068;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#xFF08;&#x3B5;&#xFF08;i&#xFF09;&#xFF09;&#x3092;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x305F;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#xFF08;&#x3B5;&#xFF08;I-SYS&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3002;&#x5408;&#x8A08;&#x523A;&#x6FC0;&#x306F;&#x7121;&#x6599;&#x3067;&#x3001;&#x5360;&#x6709;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x7DCF;&#x548C;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x904B;&#x7528;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5168;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x30ED;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#xFF08;K&#xFF08;OBS&#xFF09;&#x3001;&#x3C4;&#xFF09;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x81EA;&#x7531;&#x306A;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3057;&#x305F;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x3001;&#x3C4;&#xFF08;SYS&#xFF09;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3064;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#xFF08;&#x3C4;&#xFF08;I-SYS&#xFF09;&#xFF09;&#x3068;&#x5360;&#x6709;&#xFF08;&#x3C4;&#xFF08;i&#xFF09;&#xFF09;&#x306F;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x500B;&#x4F53;&#x6570;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306B;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;i&#xFF09;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF08;K&#xFF08;b&#xFF09;&#xFF09;&#x3068;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF08;K&#xFF08;a&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;orthosteric&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x5024;&#x306F;&#x3C4;K&#x306B;&#x76F8;&#x5F53;&#x3059;&#x308B;&#xFF08;OBS&#xFF09;/&#x3C4;&#xFF08;sys&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x3C4;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;K&#xFF08;OBS&#xFF09;/&#x3C4;&#xFF08;I-sys&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BF;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;M&#xFF08;2&#xFF09;&#x3068;M&#xFF08;3&#xFF09;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x63D0;&#x6848;&#x624B;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5275;&#x85AC;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9006;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#xFF1A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;Orthosteric&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xB3D9;&#xC9C8;&#xC131; (K(obs)) &#xBC0F; orthosteric ligands &#xC81C;&#xC815; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300; &#xC804;&#xAC1C;&#xAC00; &#xCD94;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC774;&#xB860; &#xC218;&#xC815; &#xC124;&#xBA85;. (&#xB0B4;&#xC7A5; &#xD6A8;&#xB2A5;, &epsilon;) &#xD65C;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC810;&#xB839;&#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xB860; &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; (&epsilon;(i)) &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBC0F; &#xD65C;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB34;&#xB8CC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; (&epsilon;(sys)) &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; (&epsilon;(i-sys)) &#xC0C1;&#xD0DC;. &#xCD1D; &#xC790;&#xADF9; &#xC790;&#xC720;&#xB86D;&#xACE0; &#xC810;&#xB839; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xD569;&#xACC4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xB41C; &#xC6B4;&#xC601; &#xBAA8;&#xB378;&#xC740; &#xCD1D; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xB85C;&#xC9C0;&#xC2A4;&#xD2F1; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC774; &#xD568;&#xC218; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xBB34;&#xB8CC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0;, &tau;(sys)&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xBE44;&#xB840;&#xD558;&#xC5EC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xB2A5; (k(obs)&#xC640; &tau;)&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD45C;&#xC900; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB294; &#xC790;&#xC720;&#xC758; &#xBD84; &#xC728;&#xC5D0; &#xBE44;&#xB840; &#xAD00;&#xB828; (&tau;(i-sys)) &#xC810;&#xB839; (&tau;(i)) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAD6C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD65C;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; orthosteric ligands&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xCD94;&#xC815; &#xD45C;&#xC2DC; (K(b)) &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; (&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; K(a)) &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB294; &#xAC01;&#xAC01; &Tau;k(obs)/&tau;(sys)&#xC640; &tau;(i)K(obs)/&tau;(i-sys), &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCEF4;&#xD4E8;&#xD130; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; M(2) &#xBC0F; M(3) muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Agonism &#xBC0F; &#xC81C;&#xC815; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC5ED; agonism&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;: orthosteric ligand &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xD65C;&#xC131; &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD94;&#xC815;.

Se describe una modificaci&#xF3;n de la teor&#xED;a del receptor para la estimaci&#xF3;n de las afinidades observadas (K (OBS)) y la eficacia relativa de los ligandos orthosteric en ensayos funcionales que muestran actividad constitutiva. Nuestra teor&#xED;a incluye par&#xE1;metros para las fracciones de la poblaci&#xF3;n ocupada en el receptor de la sustancia activa (eficacia intr&#xED;nseca, &#x3B5;) e inactiva (Estados &#x3B5; (i)) y par&#xE1;metros an&#xE1;logos para las fracciones de la poblaci&#xF3;n receptora libre en el activo (&#x3B5; (sistema)) y los inactivos (&#x3B5; (i-sis)) estados. El est&#xED;mulo total representa la suma de los estados activos de las poblaciones de receptores libres y ocupadas. Un modelo modificado operativo se desarrolla, que expresa la respuesta como una funci&#xF3;n log&#xED;stica del est&#xED;mulo total. Esta funci&#xF3;n incluye los par&#xE1;metros est&#xE1;ndar relacionados con la afinidad y la eficacia (K (obs) y &#x3C4;), as&#xED; como un par&#xE1;metro proporcional a la actividad del complejo receptor libre, &#x3C4; (sistema). Dos par&#xE1;metros relacionados son proporcionales a la fracci&#xF3;n de los libres (&#x3C4; (i-sis)) y ocupados (&#x3C4; (i)) poblaciones de receptores en el estado inactivo. Se demuestra que las estimaciones de las constantes de afinidad de los ligandos para los orthosteric activos (K (b)) e inactivos (K (a)) estados de los receptores son equivalentes a &#x3C4;K (OBS) / &#x3C4; (sistema) y &#x3C4; (i) K (OBS) / &#x3C4; (i-sis), respectivamente. Comprobamos nuestro m&#xE9;todo con las t&#xE9;cnicas de simulaci&#xF3;n por ordenador y aplicarlo al an&#xE1;lisis de M (2) y M (3) los receptores muscar&#xED;nicos. Nuestro m&#xE9;todo es aplicable en el an&#xE1;lisis de sesgo ligando en los programas de descubrimiento de f&#xE1;rmacos.

An&#xE1;lisis de los ag&#xF3;nicos y agonismo inverso en ensayos funcionales con actividad constitutiva: Estimaci&#xF3;n de Orthosteric constantes de afinidad de ligando para los Estados receptores activos e inactivos

On d&#xE9;crit une modification de la th&#xE9;orie de r&#xE9;cepteur qui permet &#xE0; l&#x26;#39;estimation de constantes d&#x26;#39;affinit&#xE9; relative pour l&#x26;#39;&#xE9;tat inactif d&#x26;#39;un U r&#xE9;cepteur coupl&#xE9; aux prot&#xE9;ines. Notre approche comprend les param&#xE8;tres traditionnels de l&#x26;#39;affinit&#xE9; observ&#xE9;e (K (obs)) et l&#x26;#39;efficacit&#xE9; (fraction de complexe ligand-r&#xE9;cepteur &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat actif, &#x3B5;) et introduit le concept de la fraction du complexe ligand-r&#xE9;cepteur &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat inactif (intrins&#xE8;que l&#x26;#39;inactivit&#xE9;, &#x3B5; (i)). La relation entre l&#x26;#39;activation du r&#xE9;cepteur et de la concentration en ligand est connu sous le nom de relance, et le mod&#xE8;le op&#xE9;rationnel exprime la r&#xE9;ponse comme une fonction logistique du stimulus. La fonction ci comprend K (obs) et l&#x26;#39;&#x3C4; param&#xE8;tre, qui est proportionnelle &#xE0; &#x3B5;. On introduit le param&#xE8;tre &#x3C4; (i), qui est proportionnelle &#xE0; &#x3B5; (i). Nous avons pr&#xE9;c&#xE9;demment montr&#xE9; que le produit, K (obs) &#x3C4;, d&#x26;#39;un agoniste, exprim&#xE9;e par rapport &#xE0; celle d&#x26;#39;un autre (activit&#xE9; relative intrins&#xE8;que, RA (i)), est une mesure relative de la constante d&#x26;#39;affinit&#xE9; pour l&#x26;#39;&#xE9;tat actif du r&#xE9;cepteur . Dans ce rapport, nous montrons que le produit, K (obs) &#x3C4; (i), d&#x26;#39;un agoniste, exprim&#xE9;e par rapport &#xE0; celle d&#x26;#39;un autre (l&#x26;#39;inactivit&#xE9; par rapport intrins&#xE8;que, RI (i)), est une mesure relative de la constante d&#x26;#39;affinit&#xE9; pour la &#xE9;tat inactif du r&#xE9;cepteur. Nous utilisons des techniques de simulation par ordinateur afin de v&#xE9;rifier notre analyse et d&#x26;#39;appliquer notre m&#xE9;thode &#xE0; l&#x26;#39;analyse des donn&#xE9;es publi&#xE9;es sur l&#x26;#39;activit&#xE9; agoniste &#xE0; la M (3) des r&#xE9;cepteurs muscariniques. Notre m&#xE9;thode doit avoir une large application dans l&#x26;#39;analyse des biais agoniste dans les programmes de d&#xE9;couverte de m&#xE9;dicaments et dans l&#x26;#39;estimation d&#x26;#39;une mesure plus fondamentale relative de l&#x26;#39;efficacit&#xE9; (RA (i) / RI (i)).

Analyse des r&#xE9;ponses fonctionnelles &#xE0; G r&#xE9;cepteurs coupl&#xE9;s aux prot&#xE9;ines: Estimation des constantes d&#x26;#39;affinit&#xE9; relative pour l&#x26;#39;Etat r&#xE9;cepteur inactif

Wir beschreiben eine Modifikation der Rezeptor-Theorie, die Absch&auml;tzung der relativen Affinit&auml;t-Konstanten f&uuml;r den inaktiven Zustand von ein G-Protein-gekoppelter Rezeptor erm&ouml;glicht. Unser Ansatz umfasst die traditionelle Parameter der beobachteten Affinit&auml;t (K(obs)) und Wirksamkeit (Bruchteil der Ligand-Rezeptor-Komplex im aktiven Zustand, &epsilon;) und f&uuml;hrt das Konzept der Bruchteil der Ligand-Rezeptor-Komplex in den inaktiven Zustand (intrinsische Inaktivit&auml;t, &epsilon;(i)). Die Beziehung zwischen Rezeptor-Aktivierung und die Liganden-Konzentration ist bekannt als der Reiz und das operative Modell dr&uuml;ckt die Antwort als eine logistische Funktion des Konjunkturpakets. Die letztere Funktion enth&auml;lt K(obs) und die Parameter &tau;, die proportional zur &epsilon;. Wir f&uuml;hren die Parameter &tau;(i), die ist proportional zur &epsilon;(i). Wir haben bereits gezeigt, dass das Produkt, K (Obs) &tau;, der ein Agonist, ausgedr&uuml;ckt im Verh&auml;ltnis zu dem eines anderen (intrinsische relative Aktivit&auml;t, RA(i)), ist ein relatives Ma&szlig; f&uuml;r die Affinit&auml;t Konstante f&uuml;r den aktiven Zustand des Rezeptors. In diesem Bericht zeigen wir, dass das Produkt, K(obs)&tau;(i), der ein Agonist, ausgedr&uuml;ckt im Verh&auml;ltnis zu dem eines anderen (intrinsische relative Inaktivit&auml;t, RI(i)), ist ein relatives Ma&szlig; f&uuml;r die Affinit&auml;t Konstante f&uuml;r den inaktiven Zustand des Rezeptors. Wir verwenden Computer Simulationstechniken &uuml;berpr&uuml;fen unsere Analyse und unsere Methode zur Analyse der ver&ouml;ffentlichten Daten Agonist Aktivit&auml;ten am M(3) Muskarinischer Rezeptor anwenden. Unsere Methode h&auml;tte weit verbreitete Anwendung bei der Analyse der Agonist Voreingenommenheit in Droge-Entdeckung-Programmen und bei der Sch&auml;tzung eine grundlegendere relatives Ma&szlig; der Wirksamkeit (RA(i)/RI(i)).

Analyse von funktionalen Antworten beim G-Protein-gekoppelte Rezeptoren: Absch&auml;tzung der relativen Affinit&auml;t Konstanten f&uuml;r den inaktiven Rezeptor-Status.

Descriviamo una modificazione della teoria del ricevitore che consente la stima delle costanti relativa affinit&agrave; per lo stato inattivo di un recettori accoppiati a proteine G. Il nostro approccio include i tradizionali parametri di affinit&agrave; osservati (K(obs)) e l&#39;efficacia (frazione del complesso ligando-recettore nello stato attivo, &epsilon;) e introduce il concetto di frazione del complesso ligando-recettore nello stato inattivo (inattivit&agrave; intrinseca, &epsilon;(i)). Il rapporto tra l&#39;attivazione del recettore e la concentrazione del ligando &egrave; conosciuto come lo stimolo, e il modello operativo esprime la risposta come una funzione logistica dello stimolo. La funzione di quest&#39;ultima include K(obs) e il parametro &tau;, che &egrave; proporzionale a &epsilon;. Vi presentiamo il parametro &tau;(i), che &egrave; proporzionale alla &epsilon;(i). In precedenza abbiamo dimostrato che il prodotto, &tau; K (obs), di un agonista, espresso rispetto a quello di un altro (attivit&agrave; intrinseca relativa, RA(i)), &egrave; una misura relativa della costante di affinit&agrave; per lo stato attivo del recettore. In questa relazione, ci mostrano che il prodotto, K(obs)&tau;(i), di un agonista, espresso rispetto a quello di un altro (intrinseca relativa inattivit&agrave;, RI(i)), &egrave; una misura relativa della costante di affinit&agrave; per lo stato inattivo del recettore. Utilizziamo tecniche di simulazione al computer per verificare la nostra analisi e applicare il nostro metodo per l&#39;analisi dei dati pubblicati su attivit&agrave; agonista per il recettore muscarinico M(3). Il nostro metodo dovrebbe avere applicazione diffusa nell&#39;analisi di bias agonista in programmi di drug discovery e la stima di una misura relativa pi&ugrave; fondamentale di efficacia (RA(i)/RI(i)).

Analisi delle risposte funzionali a recettori accoppiati a proteine G: stima delle costanti relativa affinit&agrave; per lo stato del recettore inattivo.

&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x7406;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4EB2;&#x548C;&#x5E38;&#x6570;&#x7684;&#x4F30;&#x8BA1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5305;&#x62EC;&#x4F20;&#x7EDF;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4EB2;&#x548C;&#x53C2;&#x6570; &#xFF08;K(obs)) &#x548C;&#x6548;&#x679C; &#xFF08;&#x5728;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&epsilon; &#x914D;&#x4F53;-&#x53D7;&#x4F53;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x5206;&#x6570;) &#x548C;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x914D;&#x4F53;-&#x53D7;&#x4F53;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001; &#xFF08;&#x5185;&#x90E8;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&epsilon;(i)) &#x5206;&#x6570;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;.&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x914D;&#x4F53;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x79F0;&#x4E3A;&#x523A;&#x6FC0;&#x548C;&#x4E1A;&#x52A1;&#x6A21;&#x578B;&#x8868;&#x793A;&#x54CD;&#x5E94;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x7269;&#x6D41;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x540E;&#x8005;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5305;&#x62EC; K(obs) &#x548C;&#x53C2;&#x6570; &tau;&#xFF0C;&#x540E;&#x8005;&#x662F; &epsilon; &#x6210;&#x6B63;&#x6BD4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F15;&#x5165;&#x53C2;&#x6570; &tau;(i)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F; &epsilon;(i) &#x6210;&#x6B63;&#x6BD4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#xFF0C;K (obs) &tau;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6FC0;&#x52A8;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7684; &#xFF08;&#x76F8;&#x5BF9;&#x7684;&#x56FA;&#x6709;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;RA(i))&#xFF0C;&#x662F;&#x4E3A;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x5E38;&#x6570;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#xFF0C;K(obs)&tau;(i)&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x53E6;&#x4E00; &#xFF08;&#x5185;&#x5728;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;RI(i))&#xFF0C;&#x662F;&#x4E3A;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x5E38;&#x6570;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x8BA1;&#x7B97;&#x673A;&#x6A21;&#x62DF;&#x6280;&#x672F;&#x6765;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x5BF9;&#x5728; M(3) &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5DF2;&#x53D1;&#x5E03;&#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E94;&#x8BE5;&#x6709;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x5728;&#x5206;&#x6790;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x504F;&#x89C1;&#x5728;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x4F30;&#x8BA1;&#x7684;&#x66F4;&#x57FA;&#x672C;&#x91CF;&#x7684;&#x6548;&#x679C; &#xFF08;RA(i)/RI(i))&#x3002;

&#x5728; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#xFF1A; &#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x53D7;&#x4F53;&#x72B6;&#x6001;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4EB2;&#x548C;&#x5E38;&#x6570;&#x7684;&#x4F30;&#x8BA1;&#x3002;

We describe a modification of receptor theory that enables the estimation of relative affinity constants for the inactive state of a G protein-coupled receptor. Our approach includes the traditional parameters of observed affinity (K(obs)) and efficacy (fraction of ligand-receptor complex in the active state, Îµ) and introduces the concept of the fraction of the ligand-receptor complex in the inactive state (intrinsic inactivity, Îµ(i)). The relationship between receptor activation and the ligand concentration is known as the stimulus, and the operational model expresses the response as a logistic function of the stimulus. The latter function includes K(obs) and the parameter Ï„, which is proportional to Îµ. We introduce the parameter Ï„(i), which is proportional to Îµ(i). We have previously shown that the product, K(obs)Ï„, of one agonist, expressed relative to that of another (intrinsic relative activity, RA(i)), is a relative measure of the affinity constant for the active state of the receptor. In this report, we show that the product, K(obs)Ï„(i), of one agonist, expressed relative to that of another (intrinsic relative inactivity, RI(i)), is a relative measure of the affinity constant for the inactive state of the receptor. We use computer simulation techniques to verify our analysis and apply our method to the analysis of published data on agonist activity at the M(3) muscarinic receptor. Our method should have widespread application in the analysis of agonist bias in drug discovery programs and in the estimation of a more fundamental relative measure of efficacy (RA(i)/RI(i)).

Analysis of functional responses at G protein-coupled receptors: estimation of relative affinity constants for the inactive receptor state.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7406;&#x8AD6;&#x306E;&#x4FEE;&#x6B63;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#xFF08;K&#xFF08;OBS&#xFF09;&#xFF09;&#x3068;&#x52B9;&#x679C;&#xFF08;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; - &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x3001;&#x3B5;&#xFF09;&#x306E;&#x4F1D;&#x7D71;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3001;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; - &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x753B;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3001;&#x3B5;&#xFF08;i&#xFF09;&#xFF09;&#x3092;&#x3002;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306F;&#x523A;&#x6FC0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x904B;&#x7528;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x30ED;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306F;&#x3B5;&#x306B;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3057;&#x3066;K&#xFF08;OBS&#xFF09;&#x3068;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x3C4;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3B5;&#xFF08;i&#xFF09;&#x306B;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3059;&#x308B;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x3C4;&#xFF08;i&#xFF09;&#x3092;&#x3001;&#x3054;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#xFF08;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001;RA&#xFF08;I&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x76F8;&#x5BFE;&#x5024;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x3055;1&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;K&#xFF08;OBS&#xFF09;&#x3C4;&#x306F;&#x3001;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;1&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x3001;K&#xFF08;OBS&#xFF09;&#x306F;&#x3C4;&#xFF08;i&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x3001;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#xFF08;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3001;RI&#xFF08;I&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x76F8;&#x5BFE;&#x5024;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x3055;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;M&#xFF08;3&#xFF09;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3067;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x516C;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x672C;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BF;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x63D0;&#x6848;&#x624B;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5275;&#x85AC;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3068;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x5C3A;&#x5EA6;&#xFF08;RA&#xFF08;I&#xFF09;/ RI&#xFF08;I&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3067;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#xFF1A;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x89AA;&#x548C;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xAE30;&#xC220; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC774;&#xB860; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xCD94;&#xC815; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC218;&#xC815;. &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC758; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95; (K(obs)) &#xBC0F; &#xD6A8;&#xB2A5; (&#xD65C;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC778; &epsilon; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;-&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;)&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC; (&#xB0B4;&#xC7A5; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;, &epsilon;(i)) &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;-&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBD84;&#xC218;&#xC758; &#xAC1C;&#xB150;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0;. &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xB18D;&#xB3C4; &#xAD00;&#xACC4;&#xB294; &#xC790;&#xADF9; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B4;&#xC601; &#xBAA8;&#xB378; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xB85C;&#xC9C0;&#xC2A4;&#xD2F1; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C;. &#xD6C4;&#xC790;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD3EC;&#xD568; K(obs) &#xBC0F; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &tau; &epsilon;&#xC5D0; &#xBE44;&#xB840;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &epsilon;(i)&#xC5D0; &#xBE44;&#xB840; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &tau;(i)&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC81C;&#xD488;, &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD55C; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC911; K (obs) &tau; &#xD45C;&#xC2DC; (&#xB0B4;&#xC7A5; &#xC0C1;&#xB300; &#xD65C;&#xB3D9;, RA(i)), &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xCE21;&#xC815;&#xAC12;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xD55C; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;, K(obs)&tau;(i) &#xBCF4;&#xC5EC; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; (&#xB0B4;&#xC7A5; &#xC0C1;&#xB300; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;, RI(i)), &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xCE21;&#xC815;&#xAC12;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; M(3) muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xAC8C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558; &#xCEF4;&#xD4E8;&#xD130; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xB2A5; (ra(i)/ri(i))&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xB300; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD574;&#xC57C;.

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;: &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xCD94;&#xC815;.

Se describe una modificaci&#xF3;n de la teor&#xED;a del receptor que permite la estimaci&#xF3;n de las constantes de afinidad relativa por el estado inactivo de una prote&#xED;na G-receptor acoplado. Nuestro m&#xE9;todo incluye los par&#xE1;metros tradicionales de afinidad observado (K (obs)) y eficacia (fracci&#xF3;n de complejo ligando-receptor en el estado activo, &#x3B5;) e introduce el concepto de la fracci&#xF3;n del complejo ligando-receptor en el estado inactivo (intr&#xED;nseca inactividad, &#x3B5; (i)). La relaci&#xF3;n entre la activaci&#xF3;n del receptor y la concentraci&#xF3;n de ligando que se conoce como el est&#xED;mulo, y el modelo operacional expresa la respuesta como una funci&#xF3;n log&#xED;stica del est&#xED;mulo. La funci&#xF3;n de este &#xFA;ltimo incluye K (obs) y el par&#xE1;metro &#x3C4;, que es proporcional a &#x3B5;. Se introduce el par&#xE1;metro &#x3C4; (i), que es proporcional a &#x3B5; (i). Anteriormente hemos demostrado que el producto, K (obs) &#x3C4;, de un agonista, expresada en relaci&#xF3;n con la de otro (actividad relativa intr&#xED;nseca, RA (i)), es una medida relativa de la constante de afinidad para el estado activo del receptor . En este informe, se muestra que el producto, K (obs) &#x3C4; (i), de un agonista, expresada en relaci&#xF3;n con la de otro (relativa inactividad intr&#xED;nseca, RI (i)), es una medida relativa de la constante de afinidad para el estado inactivo del receptor. Utilizamos t&#xE9;cnicas de simulaci&#xF3;n por ordenador para comprobar el an&#xE1;lisis y aplicar nuestro m&#xE9;todo para el an&#xE1;lisis de los datos publicados sobre la actividad agonista de la M (3) de los receptores muscar&#xED;nicos. Nuestro m&#xE9;todo debe tener una amplia aplicaci&#xF3;n en el an&#xE1;lisis del sesgo de agonista en los programas de descubrimiento de f&#xE1;rmacos y en la estimaci&#xF3;n de una medida relativa m&#xE1;s fundamental de la eficacia (AR (i) / RI (i)).

An&#xE1;lisis de las respuestas funcionales en el G receptores acoplados a prote&#xED;nas: Estimaci&#xF3;n de las constantes de afinidad relativa por el Estado receptor inactivo

Article	Year
Stimulation of increases in intracellular calcium and prostaglandin E2 generation in Chinese hamster ovary cells expressing receptor-Galpha16 fusion proteins. Journal of biochemistry\| PubMed ID: 15173199	2004
Ligand screening system using fusion proteins of G protein-coupled receptors with G protein alpha subunits. Neurochemistry international\| PubMed ID: 17659814	2007
Use of acetylcholine mustard to study allosteric interactions at the M(2) muscarinic receptor. The Journal of pharmacology and experimental therapeutics\| PubMed ID: 18682569	2008
Investigating the interaction of McN-A-343 with the M2 muscarinic receptor using its nitrogen mustard derivative. Biochemical pharmacology\| PubMed ID: 19913516	2010
Mutagenesis of nucleophilic residues near the orthosteric binding pocket of M1 and M2 muscarinic receptors: effect on the binding of nitrogen mustard analogs of acetylcholine and McN-A-343. Molecular pharmacology\| PubMed ID: 20643905	2010
Analysis of agonism and inverse agonism in functional assays with constitutive activity: estimation of orthosteric ligand affinity constants for active and inactive receptor states. The Journal of pharmacology and experimental therapeutics\| PubMed ID: 21576379	2011
Analysis of functional responses at G protein-coupled receptors: estimation of relative affinity constants for the inactive receptor state. The Journal of pharmacology and experimental therapeutics\| PubMed ID: 21576380	2011

Hinako Suga

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