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Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

International School for Advanced Studies

Consiglio Nazionale delle Ricerche

&#xCE7C;&#xC298;&#xC758; &#xACFC;&#xB3C4; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xBC0F; &#xC774;&#xD6C4; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC640; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC2E0;&#xACBD; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC131;&#xC219;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. SK &#xD615;&#xC2DD;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xCE7C;&#xC298; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCE7C;&#xB968; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB9C9; &#xD765;&#xBD84;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xACE0; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC18D;&#xC131;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;&#xC774;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xCC28;&#xB840;&#xB85C; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778;, &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; hyperpolarization &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; SK &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. &#xC774; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xADDC;&#xC81C; &#xCE7C;&#xC298; &#xACFC;&#xB3C4; spatiotemporal &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC774;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC801;&#xD569; &#xD558;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0;&#xC11C; SK &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC774; &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Purkinje &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; ontogenesis&#xC640; SK &#xCC44;&#xB110; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC950; &#xC18C; &#xB1CC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xD588;&#xB2E4;. Electrophysiological &#xB179;&#xC74C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC57D;&#xB9AC; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; (&#xC950; &#xC18C; &#xB1CC; &#xC870;&#xAC01;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBBF8; &#xC219; Purkinje &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; I(AHP)) &#xD604;&#xC7AC;&#xB294; afterhyperpolarizing&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1D;&#xD600;. &#xC774; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xCC44;&#xB110; subunits sk2&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; &#xBC0F; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;. &#xCD9C;&#xC0DD; &#xC2DC; &#xB192;&#xC740; &#xAC83;&#xACFC; &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB450; &#xC0B0; &#xD6C4; &#xC0DD;&#xD65C;&#xC758; &#xCCAB; 3 &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC774; &#xADDC;&#xC81C;&#xB294; I(AHP) &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; SK2 &#xCC44;&#xB110; &#xC131;&#xC778;, Purkinje &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xC601;, &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xBC1C;&#xC0AC; &#xD328;&#xD134; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC640; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC99D;&#xAC70;&#xC640; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; SK &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;.

&#xAC1C;&#xBC1C; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; Ca2 +-K + &#xCC44;&#xB110; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xC950; Purkinje &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x9499;&#x77AC;&#x53D8;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x548C;&#x4EE5;&#x540E;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5C0F;&#x7535;&#x5BFC;&#x9499;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x94BE;&#x901A;&#x9053;&#x7684; SK &#x7C7B;&#x578B;&#x8C03;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x592E;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x5C04;&#x51FB;&#x5C5E;&#x6027;&#x51B3;&#x5B9A;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x6D53;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x6FC0;&#x6D3B; SK &#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x964D;&#x4F4E;&#x9499;&#x6D41;&#x5165;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CD;&#x9988;&#x673A;&#x5236;&#x9002;&#x5408;&#x4E8E;&#x8C03;&#x8282;&#x9499;&#x77AC;&#x53D8;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;SK &#x901A;&#x9053;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F97;&#x5230;&#x89E3;&#x51B3;&#x4E3A;&#x6B62;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5BF9;&#x4E2A;&#x4F53;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; SK &#x6E20;&#x9053;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x5C0F;&#x8111;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x4FA7;&#x91CD;&#x4E8E;&#x6D66;&#x80AF;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x836F;&#x7406;&#x5DE5;&#x5177;&#x7ED3;&#x5408;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x5F55;&#x97F3;&#x5DF2;&#x9996;&#x6B21;&#x53D1;&#x73B0;&#x5B58;&#x5728;&#x5F53;&#x524D; afterhyperpolarizing &#xFF08;I(AHP)) &#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x5C0F;&#x8111;&#x7247;&#x672A;&#x6210;&#x719F;&#x6D66;&#x80AF;&#x91CE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x57FA;&#x7840;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x57FA;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; SK2 &#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x548C;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x51FA;&#x751F;&#x65F6;&#x8981;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x968F;&#x540E;&#x4E0B;&#x964D;&#x5934; 3 &#x5468;&#x7684;&#x4EA7;&#x540E;&#x751F;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5404;&#x7EA7;&#x8868;&#x660E;&#x5176;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x8FD9;&#x53D1;&#x80B2;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x662F;&#x4E0E; I(AHP) &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C; SK2 &#x901A;&#x9053;&#x5728;&#x5851;&#x9020;&#x5E74;&#x8F7B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x6210;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x6D66;&#x80AF;&#x91CE;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x81EA;&#x53D1;&#x653E;&#x7535;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x7A81;&#x51FA;&#x4F5C;&#x7528;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8BC1;&#x636E;&#x548C; SK &#x901A;&#x9053;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;

&#x53D1;&#x80B2;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x5C0F;&#x7535;&#x5BFC; Ca2 +-K + &#x901A;&#x9053;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x5927;&#x9F20;&#x6D66;&#x80AF;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x529F;&#x80FD;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

Calcium transients play an important role in the early and later phases of differentiation and maturation of single neurons and neuronal networks. Small-conductance calcium-activated potassium channels of the SK type modulate membrane excitability and are important determinants of the firing properties of central neurons. Increases in the intracellular calcium concentration activate SK channels, leading to a hyperpolarization of the membrane potential, which in turn reduces the calcium inflow into the cell. This feedback mechanism is ideally suited to regulate the spatiotemporal occurrence of calcium transients. However, the role of SK channels in neuronal development has not been addressed so far. We have concentrated on the ontogenesis and function of SK channels in the developing rat cerebellum, focusing particularly on Purkinje neurons. Electrophysiological recordings combined with specific pharmacological tools have revealed for the first time the presence of an afterhyperpolarizing current (I(AHP)) in immature Purkinje cells in rat cerebellar slices. The channel subunits underlying this current were identified as SK2 and localized by in situ hybridization and subunit-specific antibodies. Their expression level was shown to be high at birth and subsequently to decline during the first 3 weeks of postnatal life, both at the mRNA and protein levels. This developmental regulation was tightly correlated with the expression of I(AHP) and the prominent role of SK2 channels in shaping the spontaneous firing pattern in young, but not in adult, Purkinje neurons. These results provide the first evidence of the developmental regulation and function of SK channels in central neurons.

Developmental regulation of small-conductance Ca2+-activated K+ channel expression and function in rat Purkinje neurons.

Transitoires calciques jouent un r&ocirc;le important dans les phases pr&eacute;coces et plus tard de la diff&eacute;renciation et la maturation des neurones et les r&eacute;seaux neuronaux. Canaux de faible conductance activ&eacute;s par le calcium potassium du type SK modulent l&#39;excitabilit&eacute; membranaire et sont des d&eacute;terminants importants des propri&eacute;t&eacute;s de mise &agrave; feu des neurones centraux. Augmentation de la concentration de calcium intracellulaire active les canaux SK, conduisant &agrave; une hyperpolarisation de la membrane potentielle, qui r&eacute;duit l&#39;afflux de calcium dans la cellule. Ce m&eacute;canisme de r&eacute;troaction est id&eacute;alement con&ccedil;u pour r&eacute;glementer la pr&eacute;sence spatio-temporelle des transitoires calciques. Toutefois, le r&ocirc;le des canaux SK dans le d&eacute;veloppement neuronal n&#39;a pas &eacute;t&eacute; abord&eacute; jusqu&#39;&agrave; pr&eacute;sent. Nous nous sommes concentr&eacute;s sur l&#39;ontogen&egrave;se et la fonction des canaux SK dans le cervelet de rat en d&eacute;veloppement, en mettant l&#39;accent particuli&egrave;rement sur les neurones de Purkinje. Combin&eacute;s avec des outils pharmacologiques sp&eacute;cifiques des enregistrements &eacute;lectrophysiologiques ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; pour la premi&egrave;re fois la pr&eacute;sence d&#39;un courant d&#39;afterhyperpolarizing (I(AHP)) dans les cellules de Purkinje immatures en tranches de cervelet de rat. Les sous-unit&eacute;s du canal sous-jacent de ce courant ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es comme SK2 et localis&eacute;es par hybridation in situ et des anticorps sp&eacute;cifiques de la sous-unit&eacute;. Leur niveau d&#39;expression a &eacute;t&eacute; montr&eacute; pour &ecirc;tre &eacute;lev&eacute; &agrave; la naissance et par la suite &agrave; d&eacute;cliner pendant les 3 premi&egrave;res semaines de vie postnatale, tant au niveau de l&#39;ARNm et de prot&eacute;ines. Cette r&eacute;gulation du d&eacute;veloppement est &eacute;troitement corr&eacute;l&eacute;e avec l&#39;expression de I(AHP) et le r&ocirc;le important que jouent les canaux SK2 &agrave; fa&ccedil;onner le patron de d&eacute;charge spontan&eacute;e chez les jeunes, mais pas dans les neurones adultes, de Purkinje. Ces r&eacute;sultats fournissent la premi&egrave;re preuve de la r&eacute;gulation du d&eacute;veloppement et de la fonction des canaux SK dans les neurones centraux.

R&eacute;gulation d&eacute;veloppementale de faible conductance Ca2 +-activ&eacute; l&#39;expression des canaux K + et la fonction dans les neurones de Purkinje de rat.

Developmental Regulierung von kleinen Leitwert Ca2 +-aktivierten K +-Kanal Expression und Funktion bei Ratten Purkinje Neuronen.

Transitori di calcio giocano un ruolo importante in fasi precoce e successivamente di differenziazione e maturazione dei singoli neuroni e reti neuronali. Canali del potassio calcio-attivati piccolo-conduttanza del tipo SK modulano l&#39;eccitabilit&agrave; di membrana e sono importanti fattori determinanti delle propriet&agrave; infornamento dei neuroni centrali. Aumenti della concentrazione di calcio intracellulare attivano canali SK, portando ad un hyperpolarization del potenziale di membrana, che a sua volta riduce l&#39;afflusso di calcio nella cellula. Questo meccanismo di feedback &egrave; ideale per regolare l&#39;occorrenza spatiotemporal transitori di calcio. Tuttavia, il ruolo dei canali SK nello sviluppo neuronale non &egrave; stato affrontato finora. Ci siamo concentrati sull&#39;ontogenesi e la funzione dei canali SK nel cervelletto di topo in via di sviluppo, concentrandosi particolarmente sui neuroni del Purkinje. Registrazioni elettrofisiologiche combinati con specifici strumenti farmacologici hanno rivelato per la prima volta la presenza di una corrente di afterhyperpolarizing (I(AHP)) in cellule di Purkinje immature in fette cerebellari di ratto. Le subunit&agrave; del canale sottostante questa corrente furono identificate come SK2 e localizzate da subunit&agrave; specifici anticorpi e l&#39;ibridazione in situ. Loro livello di espressione &egrave; stato indicato per essere elevata alla nascita e successivamente a declinare durante le prime 3 settimane di vita postnatale, sia ai livelli di mRNA e proteine. Questo regolamento dello sviluppo era strettamente correlato con l&#39;espressione di I(AHP) e il ruolo importante dei canali SK2 nel plasmare il modello di infornamento spontaneo nei giovani, ma non in adulti, neuroni del Purkinje. Questi risultati forniscono la prima prova del regolamento sullo sviluppo e la funzione dei canali SK nei neuroni centrali.

Regolamento sullo sviluppo del piccolo-conduttanza Ca2 +-attivato K + espressione di canale e la funzione nei neuroni del Purkinje ratto.

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x308C;&#x4EE5;&#x964D;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x3068;&#x5358;&#x4E00;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x7DB2;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3067;&#x518D;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SK &#x578B;&#x306E;&#x5C0F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x819C;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3001;&#x4E2D;&#x67A2;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x706B;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x5897;&#x52A0;&#x306E; SK &#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3001;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x904E;&#x5206;&#x6975;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF; &#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x904E;&#x6E21;&#x73FE;&#x8C61;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x767A;&#x751F;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;SK &#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x795E;&#x7D4C;&#x767A;&#x751F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x500B;&#x4F53;&#x767A;&#x751F;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B; SK &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5C0F;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D7;&#x30EB;&#x30AD;&#x30F3;&#x30A8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x305F;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x9332;&#x97F3;&#x3001;afterhyperpolarizing &#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x5B58;&#x5728; (&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5C0F;&#x8133;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x672A;&#x719F;&#x30D7;&#x30EB;&#x30AD;&#x30F3;&#x30A8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; I(AHP))&#x3002; &#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4E9C;&#x5358;&#x4F4D; SK2 &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F; in situ &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x7279;&#x7570;&#x6297;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3002;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x9AD8;&#x51FA;&#x751F;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x6700;&#x521D;&#x306E; 3 &#x9031;&#x9593;&#x306E;&#x7523;&#x5F8C;&#x306E;&#x751F;&#x6D3B;&#x4E21;&#x65B9; mRNA &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x898F;&#x5236; I(AHP) &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068; SK2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x82E5;&#x8005;&#x3001;&#x5927;&#x4EBA;&#x3001;&#x30D7;&#x30EB;&#x30AD;&#x30F3;&#x30A8;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x81EA;&#x767A;&#x767A;&#x706B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x8457;&#x540D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3068; SK &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x4E2D;&#x67A2;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5C0F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9; ca 2 + &#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x5236;&#x5FA1;-K + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; &#x30D7;&#x30EB;&#x30AD;&#x30F3;&#x30A8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Oscilaciones de calcio juegan un papel importante en las fases tempranas y m&aacute;s adelante de la diferenciaci&oacute;n y maduraci&oacute;n de las neuronas individuales y redes neuronales. Canales de potasio de peque&ntilde;o-conductancia activados por calcio del tipo SK modulan la excitabilidad de la membrana y son determinantes importantes de las propiedades de disparo de las neuronas centrales. Aumentos en la concentraci&oacute;n de calcio intracelular activan canales SK, conduce a una hiperpolarizaci&oacute;n de la membrana potencial, que a su vez reduce la entrada de calcio en la c&eacute;lula. Este mecanismo de retroalimentaci&oacute;n es ideal para regular la ocurrencia espaciotemporal de oscilaciones de calcio. Sin embargo, el papel de los canales SK en desarrollo neuronal no ha sido tratado hasta ahora. Nos hemos concentrado en la ontog&eacute;nesis y la funci&oacute;n de canales SK en el cerebelo de rata en desarrollo, centr&aacute;ndose particularmente en las neuronas de Purkinje. Las grabaciones electrofisiol&oacute;gicas combinadas con herramientas farmacol&oacute;gicas espec&iacute;ficas han revelado por primera vez la presencia de un afterhyperpolarizing actual (I(AHP)) en las c&eacute;lulas de Purkinje inmaduras en rebanadas cerebelosa de rata. Las subunidades del canal subyacente a esta corriente se identificaron como SK2 y localizadas por hibridaci&oacute;n in situ y anticuerpos espec&iacute;ficos para la subunidad. Su nivel de expresi&oacute;n fue demostrado para ser elevado al nacer y posteriormente a declinar durante las primeras 3 semanas de vida postnatal, tanto en los niveles de mRNA y prote&iacute;na. Este reglamento desarrollo firmemente se correlacion&oacute; con la expresi&oacute;n de I(AHP) y el destacado papel de canales SK2 en formar el patr&oacute;n de disparo espont&aacute;neo en j&oacute;venes, pero no en adultas, neuronas de Purkinje. Estos resultados proporcionan la primera evidencia de la regulaci&oacute;n del desarrollo y la funci&oacute;n de canales SK en las neuronas centrales.

Reglamento de desarrollo de peque&ntilde;as-conductancia Ca2 +-activa la expresi&oacute;n de canales de K + y de funci&oacute;n en las neuronas de Purkinje de rata.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5982;&#x4F55;&#x95FB;&#x5230;&#xFF1F;&#x6C14;&#x5473;&#x4FE1;&#x606F;&#x4ECE;&#x73AF;&#x5883;&#x5982;&#x4F55;&#x770B;&#x5F85;&#x6211;&#x4EEC;&#x77E5;&#x8BC6;&#x5927;&#x5927;&#x62E5;&#x6709;&#x5148;&#x8FDB;&#x4EE5;&#x6765;&#x7684;&#x5927;&#x7EA6; 1,000 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x6C14;&#x5473;&#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x9057;&#x4F20;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#xFF0C;&#x548C;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x7814;&#x7A76;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x7406;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x6211;&#x4EEC;&#x95FB;&#x5230;&#x6B63;&#x5728;&#x51FA;&#x73B0;&#x3002;

&#x55C5;&#x89C9;&#xFF1A; &#x4ECE;&#x5230;&#x7684;&#x55C5;&#x89C9;&#x76AE;&#x5C42;&#x7684;&#x6C14;&#x5473;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

How do we smell? Our knowledge of how odor information from the environment is perceived has greatly advanced since the discovery of approximately 1,000 genes for odorant receptors in the mammalian genome. From the combination of molecular-genetic, electrophysiological, and optical imaging studies a better understanding of how we smell is emerging.

Olfaction: from odorant molecules to the olfactory cortex.

Comment pouvons-nous sentir? Notre connaissance de la fa&#xE7;on dont l&#x26;#39;information odeur de l&#x26;#39;environnement est per&#xE7;u a grandement progress&#xE9; depuis la d&#xE9;couverte d&#x26;#39;environ 1.000 g&#xE8;nes de r&#xE9;cepteurs olfactifs dans le g&#xE9;nome des mammif&#xE8;res. De la combinaison des &#xE9;tudes d&#x26;#39;imagerie mol&#xE9;culaire-g&#xE9;n&#xE9;tique, &#xE9;lectrophysiologiques, et d&#x26;#39;optique de mieux comprendre la fa&#xE7;on dont nous sentons se dessine.

Olfaction: &#xE0; partir de mol&#xE9;cules odorantes vers le cortex olfactif

Geruchssinn: von Duftmolek&#xFC;le zum olfaktorischen Kortex.

Come odore? Nostra conoscenza di come sono percepiti informazioni odore dall&#39;ambiente ha avanzato notevolmente dalla scoperta di circa 1.000 geni per recettori odorant nel genoma dei mammiferi. Dalla combinazione di genetico-molecolare, una migliore comprensione di come noi odore sta emergendo elettrofisiologica e studi di imaging ottico.

Olfatto: dalle molecole odorant alla corteccia olfattiva.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x81ED;&#x3044;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x304B;&#xFF1F;&#x74B0;&#x5883;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5302;&#x3044;&#x60C5;&#x5831;&#x304C;&#x77E5;&#x899A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x5185;&#x306E;&#x55C5;&#x899A;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D04;1,000&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x4EE5;&#x6765;&#x767A;&#x5C55;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5149;&#x5B66;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x304B;&#x3089;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5302;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x304C;&#x6D6E;&#x4E0A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x55C5;&#x899A;&#xFF1A;&#x5302;&#x3044;&#x5206;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x55C5;&#x899A;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3078;

&#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xB0C4;&#xC0C8;&#xB97C; &#xB9E1;&#xC744; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00;? &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0C4;&#xC0C8; &#xC815;&#xBCF4; &#xC778;&#xC2DD; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC744; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; odorant &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC57D; 1000 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xBD80;&#xD130; &#xACE0;&#xAE09;. &#xBD84;&#xC790; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC5D0;&#xC11C; electrophysiological &#xBC0F; &#xAD11;&#xD559; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC2E0;&#xD765;&#xC740; &#xC774;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xB0C4;&#xC0C8;&#xB97C; &#xB9E1;&#xC744;.

&#xD6C4;&#xAC01;&#xC774;: &#xD6C4; &#xAC01; &#xD53C; &#xC9C8; odorant &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C;

&#xBF;C&#xF3;mo huele? Nuestro conocimiento de c&#xF3;mo la informaci&#xF3;n olor del ambiente que se percibe ha avanzado mucho desde el descubrimiento de cerca de 1.000 genes de receptores olfativos en el genoma de los mam&#xED;feros. De la combinaci&#xF3;n de los estudios de imagen molecular gen&#xE9;tica, electrofisiol&#xF3;gicas y &#xF3;pticas una mejor comprensi&#xF3;n de c&#xF3;mo olemos est&#xE1; emergiendo.

Olfato: a partir de las mol&#xE9;culas odor&#xED;feras a la corteza olfativa

&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; [K(+)] &#x548C; [Rb(+)] KcsA &#x901A;&#x9053;&#x7684; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x7ED3;&#x6784;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6D1E;&#x5BDF; K(+) &#x6E20;&#x9053;&#x5982;&#x4F55;&#x53EF;&#x80FD;&#x5B9E;&#x73B0;&#x9AD8;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x548C;&#x9AD8; K(+) &#x8FC7;&#x5883;&#x7387;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x8FDB;&#x8D26;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x5B54;&#x5185;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x79BB;&#x5B50;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86; kappa-&#x828B;&#x87BA;&#x6BD2;&#x7D20; PVIIA (kappa PVIIA&#xFF09; &#x5230; K(+) &#x548C; Rb(+) &#x7684;&#x6447;&#x5E8A; K(+) &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E86;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x7684;&#x5408;&#x7406;&#x5316;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7B5B;&#x9009;&#x5165;&#x4F4F;&#x6B64; 6TM &#x6E20;&#x9053;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9884;&#x6D4B;&#x4ECE; KcsA &#x7ED3;&#x6784;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;kappa PVIIA &#x7684;&#x6447;&#x5E8A; K(+) &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5C01;&#x95ED;&#x4E0E;&#x5F00;&#x653E;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;K(+) &#x65F6;&#x53EA;&#x6709; permeant &#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x80DE;&#x5916; [K(+)] &#x8DCC;&#x5E45; kappa PVIIA &#x4EB2;&#x548C;&#x5173;&#x95ED;&#x6E20;&#x9053;&#x901A;&#x8FC7;&#x51CF;&#x5C11;&quot;&#x5728;&#x7EBF;&quot;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x7387;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5BF9;&#x5757;&#x7684;&#x516C;&#x5F00;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x53EA;&#x662F;&#x53D7;&#x5230;&#x80DE;&#x5185;&#x7684; [K(+)] &#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x80DE;&#x5916; [Rb(+)] &#x5F71;&#x54CD;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5C01;&#x95ED;&#x7684;&#x5F00;&#x653E;&#x901A;&#x9053;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x968F;&#x7740;&#x80DE;&#x5916; [Rb(+)] &#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;(a) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5C01;&#x95ED;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x7A0D;&#x6709;&#x52A8;&#x6447;&#x83B7;&#x5F97;&#x66F4;&#x5FEB;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#xFF0C;&#x548C; (b) &#x6253;&#x5F00;&#x901A;&#x9053;&#x5757;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x548C;&#x6700;&#x4F4E;&#x7684;&#x5757;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x51FA;&#x73B0;&#x65F6;&#x6BDB;&#x5B54;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EC5;&#x901A;&#x8FC7; Rb(+) &#x6765;&#x586B;&#x5145;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;permeant &#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#x51B3;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5360;&#x7528;&#x548C;&#x4ECE;&#x4E2D;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4EA4;&#x4E92; kappa PVIIA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x901A;&#x9053;&#x5B54;&#x5185;&#x7684; permeant ion(s) &#x53EF;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x836F;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x3002;

Kappa-&#x828B;&#x87BA;&#x6BD2;&#x7D20; PVIIA &#x6447;&#x5E8A; K + &#x901A;&#x9053;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x5B54;&#x5185;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C; K + &#x548C; Rb + &#x8FDB;&#x8D26;&#x3002;

The x-ray structure of the KcsA channel at different [K(+)] and [Rb(+)] provided insight into how K(+) channels might achieve high selectivity and high K(+) transit rates and showed marked differences between the occupancies of the two ions within the ion channel pore. In this study, the binding of kappa-conotoxin PVIIA (kappa-PVIIA) to Shaker K(+) channel in the presence of K(+) and Rb(+) was investigated. It is demonstrated that the complex results obtained were largely rationalized by differences in selectivity filter occupancy of this 6TM channels as predicted from the structural work on KcsA. kappa-PVIIA inhibition of the Shaker K(+) channel differs in the closed and open state. When K(+) is the only permeant ion, increasing extracellular [K(+)] decreases kappa-PVIIA affinity for closed channels by decreasing the "on" binding rate, but has no effect on the block of open channels, which is influenced only by the intracellular [K(+)]. In contrast, extracellular [Rb(+)] affects both closed- and open-channel binding. As extracellular [Rb(+)] increases, (a) binding to the closed channel is slightly destabilized and acquires faster kinetics, and (b) open channel block is also destabilized and the lowest block seems to occur when the pore is likely filled only by Rb(+). These results suggest that the nature of the permeant ions determines both the occupancy and the location of the pore site from which they interact with kappa-PVIIA binding. Thus, our results suggest that the permeant ion(s) within a channel pore can determine its functional and pharmacological properties.

Binding of kappa-conotoxin PVIIA to Shaker K+ channels reveals different K+ and Rb+ occupancies within the ion channel pore.

La structure du chenal KcsA &agrave; diff&eacute;rentes [k (+)] et [Rb(+)] &eacute;claire comment les canaux k (+) peut r&eacute;aliser une s&eacute;lectivit&eacute; &eacute;lev&eacute;e et des taux &eacute;lev&eacute;s de transport en commun de k (+) et a montr&eacute; des diff&eacute;rences marqu&eacute;es entre les taux d&#39;occupation des deux ions dans le pore du canal ionique. Dans cette &eacute;tude, la fixation de la kappa-conotoxine PVIIA (kappa-PVIIA) au canal Shaker k (+) en pr&eacute;sence de k (+) et Rb(+) a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e. Il est d&eacute;montr&eacute; que complexes rationalis&eacute; les r&eacute;sultats obtenus ont &eacute;t&eacute; en grande partie par des diff&eacute;rences dans l&#39;occupation de filtre de s&eacute;lectivit&eacute; de ce canaux 6TM tel que pr&eacute;dit de la charpente sur KcsA. inhibition de la Kappa-PVIIA du canal Shaker k (+) se distingue dans l&#39;&eacute;tat ferm&eacute; et ouvert. Lorsque k (+) est l&#39;ion uniquement par p&eacute;n&eacute;tration, hausse [k (+)] extracellulaire diminue kappa-PVIIA affinit&eacute; pour ferm&eacute; canaux en diminuant le taux de liaison &laquo; marche &raquo;, mais n&#39;a aucun effet sur le bloc de canaux, ce qui d&eacute;pend uniquement de k (+ l&#39;intracellulaire [)]. En revanche, extracellulaire [Rb(+)] affecte les deux liaison de canaux ferm&eacute;s et ouverts. [Rb(+)] extracellulaire augmente, b la liaison vers le canal interne est un peu d&eacute;stabilis&eacute;e et acquiert cin&eacute;tiques plus rapides et bloc b chenal est &eacute;galement d&eacute;stabilis&eacute; et le bloc plus bas semble se produire lorsque le pore est probablement rempli seulement par Rb(+). Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la nature des ions perm&eacute;ants d&eacute;termine le taux d&#39;occupation et de l&#39;emplacement du site du pore d&#39;o&ugrave; ils interagissent avec la liaison de la kappa-PVIIA. Ainsi, nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les ions par p&eacute;n&eacute;tration dans un pore du canal peuvent d&eacute;terminer ses propri&eacute;t&eacute;s pharmacologiques et fonctionnelles.

Liaison de kappa-conotoxine PVIIA de canaux K + de Shaker r&eacute;v&egrave;le diff&eacute;rentes occupations de K + et Rb + dans le pore du canal ionique.

Die Bindung von kappa-Conotoxin PVIIA Shaker K +-Kan&#xE4;le zeigt verschiedene K + und Rb + Belegungen im Ionenkanal Pore.

La struttura dei raggi x del canale KcsA presso diversi [K(+)] e [Rb(+)] fornito approfondita come K(+) canali potrebbero raggiungere alta selettivit&agrave; e alti tassi di transito K(+) e ha mostrato marcate differenze tra le utenze dei due ioni entro il poro del canale ionico. In questo studio, &egrave; stata studiata l&#39;associazione di kappa-conotossina PVIIA (kappa-PVIIA) al canale Shaker K(+) in presenza di K(+) e Rb(+). &Egrave; dimostrato che i complessi risultati ottenuti erano in gran parte razionalizzati da differenze nell&#39;occupazione filtro selettivit&agrave; di questo canali 6TM come predetto dal lavoro strutturale su KcsA. inibizione di Kappa-PVIIA del canale Shaker K(+) differisce nello stato chiuso e aperto. Quando K(+) &egrave; lo ione permeant solo, aumento extracellulare kappa-PVIIA di [K(+)] diminuzioni affinit&agrave; per chiusura canali diminuendo il tasso di associazione &quot;in&quot;, ma non ha alcun effetto sul blocco dei canali aperti, che &egrave; influenzato solo da intracellulare [K(+)]. Al contrario, extracellulare [Rb(+)] colpisce entrambi associazione canale chiuso e aperto. Come [Rb(+)] extracellulare aumenta, (a) associazione per il canale chiuso &egrave; leggermente destabilizzato e acquisisce cinetica pi&ugrave; veloce e blocco canale b aperto &egrave; anche destabilizzato e il blocco pi&ugrave; basso sembra verificarsi quando il poro &egrave; probabilmente riempito solo da Rb(+). Questi risultati suggeriscono che la natura degli ioni permeant determina sia l&#39;occupazione e la posizione del sito poro da cui essi interagiscono con l&#39;associazione kappa-PVIIA. Cos&igrave;, i nostri risultati suggeriscono che la ion(s) permeant all&#39;interno di un poro del canale possono determinare le propriet&agrave; funzionali e farmacologiche.

Associazione di kappa-conotossina PVIIA a canali Shaker K + rivela diverse utenze K + e Rb + entro il poro del canale ionico.

&#x7570;&#x306A;&#x308B; [&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;] &#x3068; [Rb(+)] KcsA &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; x &#x7DDA;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x9AD8;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9AD8;&#x3044;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x901A;&#x904E;&#x7387;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3057;&#x3001;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5B54;&#x5185;&#x5360;&#x6709;&#x7387;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x306B;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x30AB;&#x30C3;&#x30D1; &#x30B3;&#x30CE;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; PVIIA (&#x30AB;&#x30C3;&#x30D1;-PVIIA&#xFF09; &#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x3001;Rb(+) &#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x30B7;&#x30A7;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x3053;&#x306E; 6TM &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; KcsA &#x4F5C;&#x696D;&#x6642;&#x9593;&#x69CB;&#x9020;&#x304B;&#x3089;&#x4E88;&#x60F3;&#x901A;&#x308A;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF;&#x30FC;&#x5360;&#x6709;&#x7387;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5408;&#x7406;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30A7;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D1; PVIIA &#x963B;&#x5BB3;&#x3067;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30BA;&#x30C9;&#x3068;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x307F;&#x4E0B;&#x6D41;&#x5074;&#x3078;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x9589;&#x3058;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916; [&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;] &#x6E1B;&#x5C11;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D1; PVIIA &#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x300C;&#x30AA;&#x30F3;&#x300D;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x7387;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;&#x306E;&#x307F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; [&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;] &#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916; [Rb(+)] &#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x9589;&#x9396;&#x3068;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916; [Rb(+)] &#x304C;&#x5897;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x9589;&#x9396;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; (a) &#x5C11;&#x3057;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x9AD8;&#x901F;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x3092;&#x8CB7;&#x53CE;&#x3057; (b) &#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3082;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3001;&#x6700;&#x4F4E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DD;&#x30A2; Rb(+) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x307F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3044;&#x3063;&#x3071;&#x3044;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3068;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3089;&#x3057;&#x3044;&#x3002;&#x4E0B;&#x6D41;&#x5074;&#x3078;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x304C;&#x5360;&#x6709;&#x7387;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x308C;&#x304B;&#x3089;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D1; PVIIA &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x53D6;&#x308A;&#x5DFB;&#x304F;&#x7D30;&#x5B54;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x4E0B;&#x6D41;&#x5074;&#x3078;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5B54;&#x5185;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30AB;&#x30C3;&#x30D1; &#x30B3;&#x30CE;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; PVIIA &#x30B7;&#x30A7;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC; K + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5B54;&#x5185;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B; K + &#x3068; Rb + &#x5360;&#x6709;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB2E4;&#xB978; [K(+)]&#xC640; [Rb(+)] KcsA &#xCC44;&#xB110;&#xC758; x-&#xC120; &#xAD6C;&#xC870; K(+) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xB192;&#xC740; K(+) &#xC804;&#xC1A1; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218;&#xC640; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xAE30; &#xACF5; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC774;&#xC628; occupancies &#xD45C;&#xC2DC; &#xCC28;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC250;&#xC774; &#xCEE4; K(+) &#xCC44;&#xB110; K(+)&#xC640; rb(+)&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xCE74;&#xD30C; conotoxin PVIIA (&#xCE74;&#xD30C; PVIIA) &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC5BB;&#xC740;&#xC73C;&#xB85C; KcsA &#xAD6C;&#xC870; &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xCE21;&#xC774; 6TM &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xD544;&#xD130; &#xC778; &#xCC28;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD569;&#xB9AC;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCE74;&#xD30C; PVIIA &#xC5B5;&#xC81C; &#xC250;&#xC774; &#xCEE4; K(+) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD3D0;&#xC1C4;&#xC640; &#xAC1C;&#xBC29; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. K(+)&#xB9CC; permeant &#xC774;&#xC628; &#xB54C; &quot;&#xC5D0;&quot; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC904;&#xC5EC; &#xCC44;&#xB110; &#xD3D0;&#xC1C4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; [K(+)] &#xAC10;&#xC18C; &#xCE74;&#xD30C; PVIIA &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; [K(+)]&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC11C;&#xB9CC; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC29; &#xCC44;&#xB110; &#xBE14;&#xB85D;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; [Rb(+)] &#xBAA8;&#xB450; &#xD3D0;&#xC1C4; &#xD558; &#xACE0;-&#xCC44;&#xB110; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC774; &#xC801;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; [Rb(+)] &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; (a) &#xB2EB;&#xD78C; &#xCC44;&#xB110; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC57D;&#xAC04; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xBE60;&#xB978; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xD68D;&#xB4DD; (b) &#xC624;&#xD508; &#xCC44;&#xB110; &#xBE14;&#xB85D;&#xB3C4; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB0AE;&#xC740; &#xBE14;&#xB85D; &#xAE30; &#xACF5; rb(+)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC11C;&#xB9CC; &#xCC44;&#xC6CC;&#xC9C8; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC778;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; permeant &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC778; &#xACE0; &#xCE74;&#xD30C; PVIIA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAE30; &#xACF5; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC704;&#xCE58; &#xACB0;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAC80;&#xC0C9; &#xACB0;&#xACFC; &#xCC44;&#xB110; &#xAE30; &#xACF5; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; permeant ion(s)&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCE74;&#xD30C; conotoxin PVIIA &#xC250;&#xC774; &#xCEE4; K + &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xAE30; &#xACF5; &#xB0B4;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; K +&#xC640; Rb + occupancies&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

La estructura de la radiograf&iacute;a de la canal de la emisora KcsA en diferentes [k] y [Rb(+)] proporciona la penetraci&oacute;n en c&oacute;mo k canales podr&iacute;an lograr alta selectividad y tasas de tr&aacute;nsito de altas capacidad y mostraron marcadas diferencias entre las ocupaciones de los dos iones en el poro del canal i&oacute;nico. En este estudio, se investig&oacute; el atascamiento de kappa-Conotoxina PVIIA (kappa-PVIIA) al canal Shaker k en presencia de capacidad y Rb(+). Est&aacute; demostrado que el complejos resultados obtenidos se racionalizaron en gran parte por diferencias en la ocupaci&oacute;n de filtro de selectividad de este 6TM canales como prevista del trabajo estructural sobre la emisora KcsA. inhibici&oacute;n de Kappa-PVIIA del canal Shaker k diferencia en el estado cerrado y abierto. Cuando k es el ion s&oacute;lo Florescente, aumentando extracelular [k] disminuye kappa-PVIIA afinidad para cerrado canales disminuyendo la tasa de enlace &quot;en&quot;, pero no tiene ning&uacute;n efecto en el bloque de canales abiertos, que est&aacute; influenciado por el intracelular [k]. Por el contrario, extracelular [Rb(+)] afecta ambos enlace canal cerrado y abierto. [Rb(+)] extracelular aumenta, (a) el enlace al canal cerrado es un poco desestabilizado y adquiere cin&eacute;tica m&aacute;s r&aacute;pido y bloque (b) Abra el canal tambi&eacute;n est&aacute; desestabilizado y el bloque m&aacute;s bajo parece ocurrir cuando el poro se llena probablemente solamente por Rb(+). Estos resultados sugieren que la naturaleza de los iones Florescente determina tanto la ocupaci&oacute;n y la ubicaci&oacute;n del sitio poro que interact&uacute;an con el atascamiento de kappa-PVIIA. As&iacute;, nuestros resultados sugieren que la ion(s) Florescente dentro de un poro de canal puede determinar sus propiedades farmacol&oacute;gicas y funcionales.

Uni&oacute;n de kappa-Conotoxina PVIIA coctelera K + canales revela diferentes ocupaciones de K + y Rb + en el poro del canal i&oacute;nico.

&#x7281;&#x9F3B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8BB8;&#x591A;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x7D20;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x7281;&#x9F3B;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7F16;&#x7801;&#x5230;&#x76F4;&#x63A5;&#x4F20;&#x8F93;&#x5230;&#x914D;&#x5957;&#x7684;&#x55C5;&#x7403;&#x7684;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x884C;&#x4E3A;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x8D44;&#x6599;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6A21;&#x578B;&#x7535;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x5E95;&#x7281;&#x9F3B;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x6A21;&#x4EFF;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x7684;&#x5F53;&#x524D;&#x5C5E;&#x6027;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5728;&#x5176;&#x9644;&#x8FD1;&#x672C;&#x673A;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x5C04;&#x51FB;&#x884C;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x6700;&#x5C11;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x53C2;&#x6570;&#x3002;&#x6570;&#x636E;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x5F55;&#x97F3;&#x4E0E;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x6216;&#x7535;&#x6D41;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#x4ECE;&#x9F20;&#x6807;&#x5E95;&#x7281;&#x9F3B;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x6025;&#x6027;&#x5207;&#x7247;&#x7684;&#x7B79;&#x5907;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3002;&#x4ECE;-50-70 mV &#x548C;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53D1;&#x5C04;&#x7684;&#x4E0D;&#x5C11;&#x4E8E; 2-10 pA &#x8BF1;&#x5BFC;&#x8865;&#x836F;&#x5F53;&#x524D;&#x6CE8;&#x5C04;&#x5230;&#x4F11;&#x606F;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x53D1;&#x5C04;&#x9891;&#x7387;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x6CE8;&#x5165;&#x5F53;&#x524D;&#x5F88;&#x597D;&#x7684;&#x7C73;&#x6C0F;&#x65B9;&#x7A0B;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5B8C;&#x5168;&#x8F6C;&#x8F7D;&#x4E86;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x53EF;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x7EC4;&#x5408;&#x4E0E;&#x672A;&#x6765;&#x7684;&#x578B;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5C06;&#x5305;&#x62EC;&#x9F20;&#x6807;&#x7281;&#x9F3B;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5C42;&#x53E0;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;

&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x4E0E;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7281;&#x9F3B;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x6025;&#x6027;&#x5207;&#x7247;&#x7684;&#x7B79;&#x5907;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3002;

The vomeronasal system is involved in the detection of pheromones in many mammals. Vomeronasal sensory neurons encode the behaviorally relevant information into action potentials that are directly transmitted to the accessory olfactory bulb. We developed a model of the electrical activity of mouse basal vomeronasal sensory neurons, which mimics both the voltage-gated current properties and the firing behavior of these neurons in their near-native state, using a minimal number of parameters. Data were obtained by recordings with the whole-cell voltage-clamp or current-clamp techniques from mouse basal vomeronasal sensory neurons in acute slice preparations. The resting potential ranged from -50 to -70 mV, and current injections of less than 2-10 pA induced tonic firing in most neurons. The experimentally determined firing frequency as a function of injected current was well described by a Michaelis-Menten equation and was exactly reproduced by the model, which could be used in combination with future models that will include details of the mouse vomeronasal transduction cascade.

Electrophysiological properties and modeling of murine vomeronasal sensory neurons in acute slice preparations.

Le syst&#xE8;me vom&#xE9;ronasal est impliqu&#xE9; dans la d&#xE9;tection des ph&#xE9;romones chez de nombreux mammif&#xE8;res. Vomeronasal neurones sensoriels coder l&#x26;#39;information pertinente dans comportemental des potentiels d&#x26;#39;action qui sont directement transmises &#xE0; la bulbe olfactif accessoire. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un mod&#xE8;le de l&#x26;#39;activit&#xE9; &#xE9;lectrique de la souris basales Vomeronasal neurones sensoriels, qui imite la fois les propri&#xE9;t&#xE9;s voltage-d&#xE9;pendants actuelles et le comportement de tir de ces neurones dans leur quasi-native Etat, en utilisant un nombre minimal de param&#xE8;tres. Les donn&#xE9;es ont &#xE9;t&#xE9; obtenues par des enregistrements avec l&#x26;#39;ensemble des cellules du voltage-clamp ou actuels-clamp techniques de souris basales Vomeronasal neurones sensoriels dans des pr&#xE9;parations de tranche aigu&#xEB;. Le potentiel de repos varie de -50 &#xE0; -70 mV, et les injections de courant inf&#xE9;rieures &#xE0; 2-10 pA induite tonique de tir dans la plupart des neurones. La fr&#xE9;quence d&#xE9;termin&#xE9;e exp&#xE9;rimentalement de tir en fonction du courant inject&#xE9; a &#xE9;t&#xE9; bien d&#xE9;crite par une &#xE9;quation de Michaelis-Menten et a &#xE9;t&#xE9; exactement reproduits par le mod&#xE8;le, ce qui pourrait &#xEA;tre utilis&#xE9; en combinaison avec les futurs mod&#xE8;les qui incluent les d&#xE9;tails de la cascade de transduction de la souris vom&#xE9;ronasal.

Propri&#xE9;t&#xE9;s &#xE9;lectrophysiologiques et Mod&#xE9;lisation des murins Vomeronasal neurones sensoriels dans des pr&#xE9;parations de tranche aigu&#xEB;

Das Vomeronasal System ist die Erkennung von Pheromonen bei vielen S&auml;ugetieren beteiligt. Vomeronasal sensorische Neuronen codieren behaviorally relevante Informationen in Aktionspotentiale, die direkt an das Zubeh&ouml;r Riechkolben &uuml;bertragen werden. Wir entwickelten ein Modell f&uuml;r die elektrische Aktivit&auml;t der Maus basale Vomeronasal sensorische Neuronen, die die Spannung-Gating aktuellen Eigenschaften und das Verhalten ausl&ouml;sen dieser Neuronen in ihrem fast Native imitiert, mit einer minimalen Anzahl von Parametern. Daten wurden durch Aufnahmen mit dem ganz-Zell-Spannung-Klemme oder Klemm-aktuelle Techniken von Maus basale Vomeronasal sensorische Neuronen in akuten Segment Zubereitungen erzielt. Die ruhenden Potential reichte von-50 bis-70 mV sowie aktuelle Injektionen von weniger als 2-10 pA induzierte St&auml;rkungsmittel in den meisten Neuronen feuern. Die experimentell bestimmte feuern-Frequenz als Funktion der aktuellen injiziert wurde auch von einer Michaelis-Menten-Gleichung beschrieben und wurde genau reproduziert, indem das Modell, das in Kombination mit zuk&uuml;nftigen Modellen verwendet werden k&ouml;nnte, die Details der Maus Vomeronasal Transduktion Kaskade enthalten wird.

Elektrophysiologische Eigenschaften und Modellierung von murinen Vomeronasal sensorische Neuronen in akuten Segment Zubereitungen.

Il sistema vomeronasale &egrave; coinvolto nella rilevazione di feromoni in molti mammiferi. I neuroni sensoriali vomeronasal codificano l&#39;informazione comportamentale pertinenti in potenziali d&#39;azione che vengono trasmessi direttamente al bulbo olfattivo accessorio. Abbiamo sviluppato un modello di attivit&agrave; elettrica dei neuroni sensoriali vomeronasal basale di mouse, che imita le propriet&agrave; correnti tensione-gated sia il comportamento di cottura di questi neuroni nel loro stato nativo vicino, utilizzando un numero minimo di parametri. Dati sono stati ottenuti da registrazioni con il morsetto tensione a cellule intere o tecniche di corrente-clamp da mouse vomeronasal basale sensoriale neuroni in fetta acuta preparati. Il potenziale di riposo variavano da -50 a-70 mV e corrente iniezioni di meno di 2-10 pA indotta da infornamento tonico nella maggior parte dei neuroni. La frequenza di infornamento sperimentalmente determinato come una funzione di iniettata corrente &egrave; stato ben descritto da un&#39;equazione di Michaelis-Menten ed &egrave; stata riprodotta esattamente dal modello, che potrebbe essere utilizzato in combinazione con i modelli futuri che includer&agrave; dettagli della cascata di trasduzione del mouse vomeronasal.

Propriet&agrave; elettrofisiologiche e modellazione dei neuroni sensoriali vomeronasal murino in preparazioni fetta acuta.

&#x92E4;&#x9F3B;&#x7CFB;&#x306F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x92E4;&#x9F3B;&#x611F;&#x899A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x526F;&#x55C5;&#x7403;&#x306B;&#x4F1D;&#x9054;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x884C;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x6700;&#x5C0F;&#x6570;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x96FB;&#x6D41;&#x7279;&#x6027;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x706B;&#x52D5;&#x4F5C;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x92E4;&#x9F3B;&#x611F;&#x899A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x6027;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x6A19;&#x672C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x57FA;&#x5E95;&#x92E4;&#x9F3B;&#x611F;&#x899A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x30BB;&#x30EB;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x3084;&#x96FB;&#x6D41;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6CD5;&#x3067;&#x8A18;&#x9332;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x9759;&#x6B62;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306F;-50&#x304B;&#x3089;-70 mV&#x306E;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x767A;&#x706B;&#x672A;&#x6E80;&#x306E;2&#x304B;&#x3089;10 pA&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30C8;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x6CE8;&#x5165;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6CE8;&#x5165;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x767A;&#x706B;&#x983B;&#x5EA6;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x30DF;&#x30AB;&#x30A8;&#x30EA;&#x30B9; - &#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x306E;&#x5F0F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3068;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x92E4;&#x9F3B;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x200B;&#x200B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x518D;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3068;&#x6025;&#x6027;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x6A19;&#x672C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x92E4;&#x9F3B;&#x611F;&#x899A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;

Vomeronasal &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD398;&#xB85C;&#xBAAC;&#xC758; &#xAC10;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;. Vomeronasal &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0; &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#x55C5;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558;&#xB294; &#xD589;&#xB3D9; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC73C;&#xB85C; &#xD589;&#xB3D9; &#xAD00;&#xB828; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xC18C; &#xAC1C;&#xC218;&#xC758; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xD604;&#xC7AC; &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xBC1C;&#xC0AC; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBAA8;&#xBC29;&#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAE30;&#xC800; vomeronasal &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC804;&#xAE30; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xB610;&#xB294; &#xAE09;&#xC131; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAE30;&#xC800; vomeronasal &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xB958; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAE30;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xB179;&#xC74C; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5BB;&#xC740; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD734;&#xC2DD; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;-70 mV, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBBF8;&#xB9CC; 2 10 pA &#xC720;&#xB3C4; &#xD1A0; &#xB2C9; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0AC;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xC8FC;&#xC0AC;-50&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xC5F4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815;&#xB41C; &#xD574; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC758; &#xD568;&#xC218; &#xC8FC;&#xC785; &#xD604;&#xC7AC; Michaelis Menten &#xBC29;&#xC815;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC798; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; vomeronasal &#xBCC0;&#xD658; &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC;&#xC758; &#xC138;&#xBD80; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBBF8;&#xB798; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC7AC;&#xD604; &#xB410;&#xB2E4;.

Electrophysiological &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; &#xAE09;&#xC131; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0;&#xC11C; murine vomeronasal &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;.

El sistema vomeronasal est&#xE1; implicado en la detecci&#xF3;n de las feromonas en muchos mam&#xED;feros. Vomeronasal las neuronas sensoriales codificar la informaci&#xF3;n relevante en su comportamiento potenciales de acci&#xF3;n que se transmiten directamente al bulbo olfativo accesorio. Hemos desarrollado un modelo de la actividad el&#xE9;ctrica de las neuronas sensoriales del rat&#xF3;n basales vomeronasal, que imita las propiedades actuales de ambas dependientes de voltaje y el comportamiento de la descarga de estas neuronas en su estado casi nativo, utilizando un n&#xFA;mero m&#xED;nimo de par&#xE1;metros. Los datos fueron obtenidos por las grabaciones con el conjunto de c&#xE9;lulas o de fijaci&#xF3;n de voltaje de corriente-clamp t&#xE9;cnicas de rat&#xF3;n basales neuronas sensoriales vomeronasal en los preparativos trozo agudos. El potencial de reposo vari&#xF3; -50 a -70 mV, y las inyecciones de corriente de menos de 2-10 pA t&#xF3;nica inducida por cocci&#xF3;n en la mayor&#xED;a de las neuronas. La frecuencia de cocci&#xF3;n determinado experimentalmente como una funci&#xF3;n de la corriente inyectada fue bien descrito por una ecuaci&#xF3;n de Michaelis-Menten y se reproduce exactamente por el modelo, que podr&#xED;a ser utilizado en combinaci&#xF3;n con los futuros modelos que se incluyen los detalles de la cascada de transducci&#xF3;n de rat&#xF3;n vomeronasal.

Las propiedades electrofisiol&#xF3;gicas y el modelado de las neuronas murinas vomeronasales sensoriales en los preparativos trozo agudas

&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7; (CNG) &#x901A;&#x9053;&#x76F4;&#x63A5;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x53D1;&#x73B0;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x6746;&#x3001; &#x9525;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x5728;&#x89C6;&#x89C9;&#x548C;&#x55C5;&#x89C9;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#xFF0C;CNG &#x6E20;&#x9053;&#x8FDB;&#x884C;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x7535;&#x6D41;&#x4E3B;&#x8981;&#x7531;&#x94A0;&#x548C;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x89E3;&#x611F;&#x5B98;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x3002;&#x5728;&#x55C5;&#x89C9;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x9499;&#x4E0E;&#x9499;&#x8C03;&#x7D20;&#x7ED3;&#x5408;&#x65BD;&#x52A0;&#x5BF9; CNG &#x901A;&#x9053;&#x662F;&#x8D1F;&#x8D23;&#x5FEB;&#x901F;&#x9002;&#x5E94;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x8D1F;&#x9762;&#x53CD;&#x9988;&#x3002;&#x5DF2;&#x77E5;&#x516D;&#x79CD;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; CNG &#x901A;&#x9053;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x89C6;&#x89C9;&#x969C;&#x788D;&#x7531;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x6746;&#x6216;&#x9525; CNG &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x3002;

&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x611F;&#x89C9;&#x4F20;&#x5BFC;&#x3002;

Cyclic nucleotide-gated (CNG) channels, directly activated by the binding of cyclic nucleotides, were first discovered in retinal rods, cones and olfactory sensory neurons. In the visual and olfactory systems, CNG channels mediate sensory transduction by conducting cationic currents carried primarily by sodium and calcium ions. In olfactory transduction, calcium in combination with calmodulin exerts a negative feedback on CNG channels that is the main molecular mechanism responsible for fast adaptation in olfactory sensory neurons. Six mammalian CNG channel genes are known and some human visual disorders are caused by mutations in retinal rod or cone CNG genes.

Cyclic nucleotide-gated ion channels in sensory transduction.

Nucl&#xE9;otides cycliques-d&#xE9;pendants (GNC), les canaux activ&#xE9;s directement par la liaison de nucl&#xE9;otides cycliques, ont d&#x26;#39;abord &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;couvert en b&#xE2;tonnets de la r&#xE9;tine, les c&#xF4;nes et les neurones sensoriels olfactifs. Dans les syst&#xE8;mes visuels et olfactifs, canaux CNG m&#xE9;diation transduction sensorielle en proc&#xE9;dant &#xE0; des courants cationiques men&#xE9;es principalement par des ions sodium et de calcium. Dans la transduction olfactive, de calcium en association avec la calmoduline exerce une r&#xE9;troaction n&#xE9;gative sur les canaux CNG qui est le principal m&#xE9;canisme mol&#xE9;culaire responsable de l&#x26;#39;adaptation rapide dans les neurones sensoriels olfactifs. Six g&#xE8;nes de mammif&#xE8;res canal CNG sont connus et certains troubles visuels de l&#x26;#39;homme sont caus&#xE9;es par des mutations dans les g&#xE8;nes tige r&#xE9;tine ou GNC c&#xF4;ne.

Cycliques canaux ioniques d&#xE9;pendants dans Nucleotide-transduction sensorielle

Zyklische Nukleotid-Gating (CNG) Kan&auml;le, direkt durch die Bindung der zyklischen Nukleotide, aktiviert wurden erstmals in Netzhaut St&auml;bchen, Zapfen und olfaktorischen sensorischen Neuronen entdeckt. In die visuelle und olfaktorische Systeme vermitteln CNG-Kan&auml;le sensorische Transduktion durch die Durchf&uuml;hrung von kationischer Str&ouml;mungen getragen vor allem von Natrium- und Calcium-Ionen. In olfaktorische Signaltransduktion &uuml;bt Kalzium in Kombination mit Calmodulin ein negatives Feedback auf CNG-Kan&auml;le, die die wichtigsten molekularen Mechanismen, die f&uuml;r schnelle Anpassung im olfaktorischen sensorischen Neuronen verantwortlich ist. Sechs S&auml;ugetier-CNG-Kanal-Gene sind bekannt, und einige menschlichen Sehst&ouml;rungen sind verursacht durch Mutationen in Netzhaut Stab- oder Kegel-CNG-Genen.

Zyklische Nukleotid-Gating Ionenkan&auml;le in sensorischen Transduktion.

Cyclic nucleotide-gated (CNG) canali attivati direttamente dall&#39;associazione dei nucleotidi ciclici, sono stati scoperti in coni retinici della retina, coni e neuroni sensoriali olfattivi. Nei sistemi visivi e olfattivi, canali CNG mediano trasduzione sensoriale conducendo correnti cationiche trasportate principalmente dagli ioni sodio e calcio. Nella trasduzione olfattiva, calcio in combinazione con calmodulina esercita un feedback negativo su canali CNG che &egrave; il principale meccanismo molecolare responsabile dell&#39;adattamento veloce nei neuroni sensoriali olfattivi. Sei mammiferi geni canali CNG sono noti e alcuni disturbi visivi umane sono causate da mutazioni nei geni CNG asta o cono della retina.

Canali Cyclic nucleotide-gated dello ione nella trasduzione sensoriale.

&#x76F4;&#x63A5;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#xFF08;CNG&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x68D2;&#x3001;&#x9310;&#x4F53;&#x3068;&#x55C5;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x8996;&#x899A;&#x3068;&#x55C5;&#x899A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CNG&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x904B;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x611F;&#x899A;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x55C5;&#x899A;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306F;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x901F;&#x3044;&#x9069;&#x5FDC;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;CNG&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8CA0;&#x5E30;&#x9084;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x516D;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;CNG&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8996;&#x899A;&#x969C;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x3084;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;CNG&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x611F;&#x899A;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;

&#xC8FC;&#xAE30;&#xC801;-&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; (CNG) &#xCC44;&#xB110;, &#xC9C1;&#xC811; &#xC21C;&#xD658; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC774; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xB9C9;&#xB300;, &#xC6D0;&#xBFD4; &#xBC0F; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC98;&#xC74C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xAC01;&#xACFC; &#xD6C4; &#xAC01; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; CNG &#xCC44;&#xB110; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC804;&#xB958; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968;&#xACFC; &#xCE7C;&#xC298; &#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xB97C; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC10;&#xAC01; &#xC804;&#xB2EC; &#xC911;&#xC7AC;. &#xD6C4; &#xAC01; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; calmodulin&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C;&#xC298; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; CNG &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xC694; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBE60;&#xB978; &#xC801;&#xC751;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. 6 &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; CNG &#xCC44;&#xB110; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC77C;&#xBD80; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01; &#xC7A5;&#xC560; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB610;&#xB294; &#xCF58; CNG &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC10;&#xAC01; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;.

Nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos-dependientes (GNC), directamente los canales activados por la uni&#xF3;n de nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos, fueron descubiertas por primera vez en bastones de la retina, los conos y las neuronas sensoriales olfativas. En los sistemas visual y olfativa, los canales CNG mediar la transducci&#xF3;n sensorial mediante la realizaci&#xF3;n de las corrientes cati&#xF3;nicas realizadas principalmente por iones de sodio y calcio. En la transducci&#xF3;n olfativa, el calcio en combinaci&#xF3;n con la calmodulina ejerce una retroalimentaci&#xF3;n negativa en los canales de GNC que es el principal mecanismo molecular responsable de la adaptaci&#xF3;n r&#xE1;pida de las neuronas sensoriales olfativas. Seis genes de mam&#xED;feros de los canales de GNC son conocidos y algunos trastornos visuales humanos son causados &#x200B;&#x200B;por mutaciones en los genes de la retina o la barra de cono de GNC.

Nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos canales i&#xF3;nicos en la transducci&#xF3;n sensorial

&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8FC5;&#x901F;&#x9002;&#x5E94;&#x91CD;&#x590D;&#x6027;&#x6C14;&#x5473;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x6C14;&#x5473;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x4F1A;&#x5728;&#x8425;&#x5730;&#xFF0C;&#x6C14;&#x5473;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x751F;&#x4EA7;&#x540E;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x91CD;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x7531; Ca2 + &#x8D1F;&#x53CD;&#x9988;&#x8C03;&#x5236;-&#x9499;&#x8C03;&#x7D20; (Ca2 +-&#x51F8;&#x8F6E;&#xFF09; &#x7684;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7; (CNG) &#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;Ca2 + &#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x4E8C;&#x916F;&#x9176; (PDE) &#x5728;&#x9002;&#x5E94;&#x4E86;&#x6CA1;&#x6709;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#x8BB0;&#x5F55;&#x7535;&#x6D41;&#x5230;&#x9F20;&#x6807;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8BF1;&#x53D1; photorelease 8-Br-&#x8425;&#x5730;&#xFF0C;&#x8425;&#x5730;&#x901A;&#x5E38;&#x7528;&#x4F5C;&#x6297;&#x6C34;&#x89E3;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x548C;&#x5DF2;&#x77E5;&#x4E3A;&#x5F3A;&#x6548;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x55C5; CNG &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x4E4B;&#x5904;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x6027; photoreleases &#x6216; 8-Br-&#x8425;&#x8425;&#x5730;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x9002;&#x5E94;&#x884C;&#x52A8;&#x4E86;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x523A;&#x6FC0;&#x8BA1;&#x5212;&#x3002;&#x5728;&#x573A; PDE &#x6291;&#x5236; IBMX&#xFF0C;&#x786E;&#x8BA4; PDE &#x6D3B;&#x52A8;&#x589E;&#x52A0;&#x4E0D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x53CD;&#x5E94;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x63A7;&#x5236;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x7531; 8-Br-&#x8425;&#x5730;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x751F;&#x7406;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6C14;&#x5473;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x603B;&#x7535;&#x6D41;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x7EC4;&#x6210;&#x7535;&#x6D41;&#x8FDB;&#x884C;&#x7531; Na + &#x548C; Ca2 + &#x901A;&#x8FC7; CNG &#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x7531; Ca2 +-&#x6FC0;&#x6D3B; Cl-&#x5F53;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6267;&#x884C;&#x63A7;&#x5236;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5728;&#x9006;&#x8F6C;&#x6F5C;&#x529B;&#x7684; Cl-&#x8BBE;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x79BB;&#x5B50;&#x66FF;&#x6362;&#xFF0C;&#x5728;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x63A7;&#x80A1;&#x6F5C;&#x529B;&#x503C;-50 mV&#x3002;&#x9002;&#x5E94;&#x8861;&#x91CF;&#x8FD8;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11; Ca2 +-&#x6FC0;&#x6D3B; Cl &#x7535;&#x6D41;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x776B;&#x91CD;&#x590D;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; Ca2 + &#x4E0E;&#x95EA;&#x5149;&#x5149;&#x89E3;&#x7684;&#x7B3C; Ca2 +&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;Ca2 +-&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; Cl-&#x901A;&#x9053;&#x4E0D;&#x8C03;&#x6574;&#x548C;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x4E2D;&#x6709;&#x6CA1;&#x6709; Cl &#x67AF;&#x7AED;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x776B;&#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x91CD;&#x590D;&#x523A;&#x6FC0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x9002;&#x5E94;&#x3002;

&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x9002;&#x5E94;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x78F7;&#x9178;&#x4E8C;&#x916F;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

Vertebrate olfactory sensory neurons rapidly adapt to repetitive odorant stimuli. Previous studies have shown that the principal molecular mechanisms for odorant adaptation take place after the odorant-induced production of cAMP, and that one important mechanism is the negative feedback modulation by Ca2+-calmodulin (Ca2+-CaM) of the cyclic nucleotide-gated (CNG) channel. However, the physiological role of the Ca2+-dependent activity of phosphodiesterase (PDE) in adaptation has not been investigated yet. We used the whole-cell voltage-clamp technique to record currents in mouse olfactory sensory neurons elicited by photorelease of 8-Br-cAMP, an analogue of cAMP commonly used as a hydrolysis-resistant compound and known to be a potent agonist of the olfactory CNG channel. We measured currents in response to repetitive photoreleases of cAMP or of 8-Br-cAMP and we observed similar adaptation in response to the second stimulus. Control experiments were conducted in the presence of the PDE inhibitor IBMX, confirming that an increase in PDE activity was not involved in the response decrease. Since the total current activated by 8-Br-cAMP, as well as that physiologically induced by odorants, is composed not only of current carried by Na+ and Ca2+ through CNG channels, but also by a Ca2+-activated Cl- current, we performed control experiments in which the reversal potential of Cl- was set, by ion substitution, at the same value of the holding potential, -50 mV. Adaptation was measured also in these conditions of diminished Ca2+-activated Cl- current. Furthermore, by producing repetitive increases of ciliary's Ca2+ with flash photolysis of caged Ca2+, we showed that Ca2+-activated Cl- channels do not adapt and that there is no Cl- depletion in the cilia. All together, these results indicate that the activity of ciliary PDE is not required for fast adaptation to repetitive stimuli in mouse olfactory sensory neurons.

Fast adaptation in mouse olfactory sensory neurons does not require the activity of phosphodiesterase.

Vert&#xE9;br&#xE9;s neurones sensoriels olfactifs de s&#x26;#39;adapter rapidement aux stimuli olfactifs r&#xE9;p&#xE9;titives. Des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures ont montr&#xE9; que les principaux m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires de l&#x26;#39;adaptation odorant avoir lieu apr&#xE8;s la production odorant induite par l&#x26;#39;AMPc, et qu&#x26;#39;un m&#xE9;canisme important est la modulation r&#xE9;troaction n&#xE9;gative par le Ca2 +-calmoduline (Ca2 +-CaM) de la nucl&#xE9;otide cyclique-d&#xE9;pendants (GNC ) du canal. Cependant, le r&#xF4;le physiologique de la Ca2 +-d&#xE9;pendante l&#x26;#39;activit&#xE9; de la phosphodiest&#xE9;rase (PDE) dans l&#x26;#39;adaptation n&#x26;#39;a pas encore &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;. Nous avons utilis&#xE9; l&#x26;#39;ensemble des cellules du voltage-clamp technique pour enregistrer les courants chez la souris les neurones sensoriels olfactifs provoqu&#xE9;e par photos&#xE9;paration de 8-Br-AMPc, un analogue de l&#x26;#39;AMPc couramment utilis&#xE9; comme un compos&#xE9; r&#xE9;sistant &#xE0; l&#x26;#39;hydrolyse et connu pour &#xEA;tre un puissant agoniste de l&#x26;#39;olfactif canal CNG. Des courants en r&#xE9;ponse &#xE0; photoreleases r&#xE9;p&#xE9;titives de AMPc ou de 8-Br-AMPc et on observe l&#x26;#39;adaptation similaire en r&#xE9;ponse au stimulus seconde. Des exp&#xE9;riences de contr&#xF4;le ont &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9;es en pr&#xE9;sence de l&#x26;#39;inhibiteur de PDE IBMX, confirmant que l&#x26;#39;augmentation de l&#x26;#39;activit&#xE9; PDE n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9; dans la diminution de la r&#xE9;ponse. Depuis le courant total activ&#xE9; par 8-Br-AMPc, ainsi que celle physiologiquement induite par odorants, est compos&#xE9; non seulement du courant port&#xE9; par Na + et Ca2 + par des canaux CNG, mais aussi par une Ca2 + activ&#xE9; par Cl-courant, nous avons effectu&#xE9; un contr&#xF4;le exp&#xE9;riences dans lesquelles le potentiel d&#x26;#39;inversion du Cl-a &#xE9;t&#xE9; mis, par substitution d&#x26;#39;ions, &#xE0; la m&#xEA;me valeur du potentiel de maintien, -50 mV. L&#x26;#39;adaptation a &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;e &#xE9;galement dans ces conditions de diminution de Ca 2 +-Cl-activ&#xE9; en cours. En outre, en produisant des augmentations r&#xE9;p&#xE9;titives de ciliaire de Ca2 + avec photolyse &#xE9;clair de cage Ca2 +, nous avons montr&#xE9; que Ca2 + activ&#xE9;s par Cl-canaux ne s&#x26;#39;adaptent pas et qu&#x26;#39;il n&#x26;#39;ya pas de Cl-&#xE9;puisement dans les franges. Tous ensemble, ces r&#xE9;sultats indiquent que l&#x26;#39;activit&#xE9; de PDE ciliaire n&#x26;#39;est pas n&#xE9;cessaire pour une adaptation rapide &#xE0; des stimuli r&#xE9;p&#xE9;titifs dans olfactif de la souris les neurones sensoriels.

Adaptation rapide dans olfactif de la souris neurones sensoriels ne n&#xE9;cessite pas l&#x26;#39;activit&#xE9; de la phosphodiest&#xE9;rase

Vertebrate olfaktorische sensorische Neuronen passen sich schnell an sich wiederholende Odoriermittel Reize. Fr&uuml;here Studien haben gezeigt, dass die wichtigsten molekularen Mechanismen Odoriermittel Anpassung nach der Odorant-induzierte Produktion des Lagers stattfinden, und dass ein wichtige Mechanismus die Negative R&uuml;ckkopplung-Modulation von Ca2 ist +-Calmodulin (Ca2 +-CaM) die zyklische Nukleotid-Gating (CNG)-Kanals. Jedoch die physiologische Rolle des Ca2 +-abh&auml;ngige Aktivit&auml;t der Phosphodiesterase (PDE) in Adaption wurde noch nicht untersucht. Wir nutzen die ganze Zelle Spannung Klemm-Technik Rekord Str&ouml;mungen in Maus olfaktorischen sensorischen Neuronen hervorgerufen durch Photorelease des 8-Br-cAMP, ein Analogon des Lagers h&auml;ufig als ein hydrolysebest&auml;ndiges Verbindung verwendet und bezeichnet ein potenter Agonist des olfaktorischen CNG-Kanals zu sein. Wir gemessen Str&ouml;mungen als Reaktion auf sich wiederholende Photoreleases des Lagers oder der 8-Br-cAMP und wir beobachteten &auml;hnliche Anpassung in Reaktion auf den zweiten Reiz. Regelungs-Experimente wurden durchgef&uuml;hrt, in Anwesenheit der PDE-Hemmer IBMX, best&auml;tigt, dass eine Zunahme der PDE-Aktivit&auml;t in der Antwort-R&uuml;ckgang nicht beteiligt war. Da der Summenstrom aktiviert durch 8-Br-cAMP, ebenso wie die physiologisch induziert durch Geruchsstoffe, nicht nur der Strom von Na + und Ca2 + durch die CNG-Kan&auml;le, sondern auch durch eine Ca2 besteht +-aktiviert Cl-Strom, f&uuml;hrten wir Regelungs-Experimente, in denen das Umkehr-Potenzial der Cl -, durch Ionen-Substitution auf den gleichen Wert f&uuml;r das Betriebs-Potenzial festgelegt,-50 mV. Anpassung wurde auch gemessen, unter diesen Bedingungen der verminderte Ca2 +-Cl-Strom aktiviert. Dar&uuml;ber hinaus durch die Herstellung von sich wiederholenden Erh&ouml;hungen der Zilien &#39;s Ca2 + mit Flash Photolyse von K&auml;fig Ca2 +, wir zeigten, dass Ca2 +-aktivierten Cl-Kan&auml;le passen nicht an und dass es keine Cl-Ersch&ouml;pfung in die Flimmerh&auml;rchen. Alle zusammen, zeigen diese Ergebnisse, dass die Aktivit&auml;t der Zilien PDE f&uuml;r schnelle Anpassung an sich wiederholende Reize in Maus olfaktorischen sensorischen Neuronen nicht ben&ouml;tigt.

Schnelle Anpassung in Maus olfaktorischen sensorischen Neuronen erfordert nicht die Aktivit&auml;t der Phosphodiesterase.

Vertebrati neuroni sensoriali olfattivi adattano rapidamente a stimoli ripetitivi odorant. Studi precedenti hanno mostrato che i principali meccanismi molecolari per adattamento odorant avvengono dopo la produzione odorant-indotta dell&#39;accampamento, e che un meccanismo importante &egrave; la modulazione di feedback negativo di Ca2 +-calmodulina (Ca2 +-CaM) del canale di cyclic nucleotide-gated (CNG). Tuttavia, il ruolo fisiologico di Ca2 +-dipendente da attivit&agrave; della fosfodiesterasi (PDE) nell&#39;adattamento non &egrave; stato ancora studiato. Abbiamo utilizzato la tecnica di cellule intere tensione-morsetto a registrare correnti in olfattive neuroni sensoriali del mouse provocati dal photorelease di 8-Br-cAMP, un analogo dell&#39;accampamento comunemente usato come un composto resistente all&#39;idrolisi e noto per essere un potente agonista del canale CNG olfattivo. Abbiamo misurato le correnti in risposta a photoreleases ripetitive di campo o di 8-Br-cAMP e abbiamo osservato simile adattamento in risposta allo stimolo secondo. In presenza dell&#39;inibitore PDE IBMX, confermando che un aumento dell&#39;attivit&agrave; PDE non era coinvolto nella diminuzione risposta sono stati condotti esperimenti di controllo. Poich&eacute; la corrente totale attivata da 8-Br-cAMP, come pure che fisiologicamente indotta da odorifere, &egrave; composta non solo della corrente trasportata da Na + e Ca2 + attraverso i canali CNG, ma anche da un Ca2 +-attivato Cl-corrente, abbiamo eseguito esperimenti di controllo in cui &egrave; stato impostato il potenziale di inversione di Cl-, dalla sostituzione di ioni, presso lo stesso valore del potenziale azienda-50 mV. Adattamento &egrave; stata misurata anche in queste condizioni di diminuita Ca2 +-attivato Cl-corrente. Inoltre, producendo aumenti ripetitivi del ciliare di Ca2 + con flash fotolisi di Ca2 + in gabbia, abbiamo mostrato che Ca2 +-Cl-canali attivati non adattarsi e che non non c&#39;&egrave; nessun Cl-deplezione di ciglia. Tutti insieme, questi risultati indicano che l&#39;attivit&agrave; di PDE ciliare non &egrave; richiesto per veloce adattamento agli stimoli ripetitivi nei neuroni sensoriali olfattivi del mouse.

Veloce adattamento nei neuroni sensoriali olfattivi del mouse non richiede l&#39;attivit&agrave; della fosfodiesterasi.

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+&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;Cl-&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;&#x9069;&#x5FDC;&#x200B;&#x200B;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x306E;Cl-&#x67AF;&#x6E07;&#x304C;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306E;PDE&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x53CD;&#x5FA9;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x9AD8;&#x901F;&#x9069;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9AD8;&#x901F;&#x9069;&#x5FDC;&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30B8;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;

&#xCC99;&#xCD94; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC801;&#xC778; odorant &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC801;&#xC751;. &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xCEA0;&#xD504;&#xC758; odorant &#xC720;&#xB3C4; &#xC81C;&#xC870;&#xC77C; odorant &#xC801;&#xC751;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC790;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; Ca2 +&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xBCC0;&#xC870;-calmodulin (Ca2 +-&#xCEA0;) &#xC21C;&#xD658;-&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; (CNG) &#xCC44;&#xB110;&#xC758;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Ca2 +&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560;-&#xD3EC;&#xC2A4; (PDE) &#xC801;&#xC751;&#xC5D0;&#xC758; &#xC885;&#xC18D; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xC870;&#xC0AC; &#xB418;&#xC9C0;. &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xD6C4; &#xAC01; CNG &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xCEA0;&#xD504;&#xC758; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; 8 Br &#xCEA0;&#xD504;&#xC758; photorelease&#xB85C; elicited &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xB85D; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCEA0;&#xD504; &#xB610;&#xB294; 8-Br-&#xCEA0;&#xD504;&#xC758; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC801;&#xC778; photoreleases&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC801;&#xC751; &#xAD00;&#xCC30;. &#xC81C;&#xC5B4; &#xC2E4;&#xD5D8; PDE &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; IBMX, PDE &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC00; &#xC751;&#xB2F5; &#xAC10;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xD655;&#xC778;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. 8-Br-&#xCEA0;&#xD504;, &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; odorants&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC21C;&#xC218;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xCD1D; &#xC804;&#xB958; &#xC804;&#xB958; Ca2 +&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; Na +&#xACFC; Ca2 + CNG &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xD589;&#xC758; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;-Cl &#xC804;&#xB958; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC9C0;&#xC8FC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC758; &#xAC19;&#xC740; &#xAC12;&#xC5D0; &#xC774;&#xC628; &#xB300;&#xCCB4; &#xD558; &#xC5EC; Cl-&#xC758; &#xBC18;&#xC804; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xC124;&#xC815; &#xB41C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC218;&#xD589;-50 mV. &#xC801;&#xC751;&#xB3C4; &#xC800;&#xD558; Ca2 +&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;-Cl &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xC5EC;&#xC758; Ca2 +&#xC758; &#xAC07;&#xD78C; Ca2 + &#xD50C;&#xB798;&#xC2DC; photolysis&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; Ca2 +-&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; Cl-&#xCC44;&#xB110; &#xC801;&#xC751; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0;&#xB294; Cl &#xACE0;&#xAC08; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB450; &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC18D;&#xB208;&#xC379; PDE &#xB3D9;&#xC791;&#xC740; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC801;&#xC778; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xBE60;&#xB978; &#xC801;&#xC751;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBE60;&#xB978; &#xC801;&#xC751; &#xD3EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Vertebrados las neuronas sensoriales olfativas se adaptan r&#xE1;pidamente a los est&#xED;mulos olfativos repetitivas. Estudios previos han demostrado que los principales mecanismos moleculares de adaptaci&#xF3;n olor llevar&#xE1; a cabo despu&#xE9;s de que la producci&#xF3;n de olor inducida por AMPc, y que un mecanismo importante es la modulaci&#xF3;n de retroalimentaci&#xF3;n negativa por Ca2 +-calmodulina (Ca 2 +-CAM) de la de nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos-cerrada (GNC ) del canal. Sin embargo, el papel fisiol&#xF3;gico de la Ca 2 +-dependiente de la actividad de la fosfodiesterasa (PDE) en la adaptaci&#xF3;n no se ha investigado todav&#xED;a. Se utiliz&#xF3; el conjunto de c&#xE9;lulas voltaje-clamp t&#xE9;cnica para registrar las corrientes en las neuronas sensoriales olfativas rat&#xF3;n inducida por photorelease de 8-Br-cAMP, un an&#xE1;logo de cAMP usa com&#xFA;nmente como un compuesto resistente a la hidr&#xF3;lisis y conocido por ser un potente agonista de la olfativa GNC canal. Se midi&#xF3; corrientes en respuesta a photoreleases repetitivos de AMPc o de 8-Br-cAMP y se observ&#xF3; adaptaci&#xF3;n similar en respuesta al est&#xED;mulo segundos. Los experimentos de control se llevaron a cabo en presencia de la PDE IBMX inhibidor, lo que confirma que un aumento en la actividad de PDE no estaba implicado en la disminuci&#xF3;n de la respuesta. Dado que la corriente total activado por 8-Br-cAMP, as&#xED; como que fisiol&#xF3;gicamente inducida por sustancias odor&#xED;feras, est&#xE1; compuesto no s&#xF3;lo de corriente transportada por Na + y Ca2 + a trav&#xE9;s de los canales de CNG, sino tambi&#xE9;n por un +-activated Cl-actual Ca2, se realiz&#xF3; el control experimentos en los que el potencial reversi&#xF3;n de Cl-fue fijado, por sustituci&#xF3;n de iones, en el mismo valor de la potencial de mantenimiento, -50 mV. La adaptaci&#xF3;n tambi&#xE9;n se midi&#xF3; en estas condiciones de disminuci&#xF3;n de la Ca2 +-activated Cl-actual. Adem&#xE1;s, mediante la producci&#xF3;n de aumentos repetitivas de Ca2 + con ciliar de flash fot&#xF3;lisis de enjaulado Ca2 +, se demostr&#xF3; que Ca2 +-Cl-activados los canales no se adaptan y que no hay Cl-agotamiento en los cilios. En conjunto, estos resultados indican que la actividad de la PDE ciliar no se requiere una r&#xE1;pida adaptaci&#xF3;n a los est&#xED;mulos sensoriales de rat&#xF3;n repetitivas en las neuronas olfativas.

Adaptaci&#xF3;n r&#xE1;pida en las neuronas olfativas sensoriales de rat&#xF3;n no requiere la actividad de la fosfodiesterasa

&#x9499;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6C2F;&#x901A;&#x9053;&#x662F;&#x55C5;&#x89C9;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6C14;&#x5473;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; (OSNs) &#x7684;&#x55C5;&#x89C9;&#x53D7;&#x4F53; intraciliary Ca &#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x5BFC;&#x81F4; Ca &#x901A;&#x8FC7;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7; (CNG) &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5165;&#x53E3;&#x3002;Ca &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E00;&#x4E2A; Cl &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x901A;&#x5F80;&#x5C04;&#x6D41; Cl &#x7684;&#x7EA4;&#x6BDB;&#xFF0C;&#x4ECE; OSN &#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x6269;&#x589E;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x8FD9; Cl &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x53EF;&#x671B;&#x800C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x53CA;&#x7684;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E; bestrophins &#x80FD;&#x591F;&#x5F62;&#x6210;&#x5F02;&#x6E90;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684; Ca &#x6FC0;&#x6D3B; Cl &#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5206;&#x6790;&#x4E86; bestrophins &#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x55C5;&#x4E0A;&#x76AE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x8868;&#x73B0;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709;&#x9F20;&#x6807; bestrophin-2 (mBest2) &#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;-&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;mBest2 &#x6709;&#x4EBA;&#x5728; OSNs &#x4E2D;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5316;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;mBest2 &#x662F;&#x8868;&#x793A;&#x5173;&#x4E8E;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x7684; OSNs&#xFF0C;&#x8BE5;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x55C5;&#x89C9;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0E;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684; CNGA2 &#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D; colocalized&#x3002;&#x4ECE;&#x672C;&#x673A;&#x6E20;&#x9053;&#x4E2D;&#x6811;&#x7A81;&#x65CB;&#x94AE;/&#x7EA4;&#x6BDB;&#x7684;&#x9F20;&#x6807; OSNs Ca &#x6FC0;&#x6D3B; Cl &#x7535;&#x6D41;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x4E0E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; mBest2 &#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E86;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x6E17;&#x900F;&#x5E8F;&#x5217;&#x3001; &#x5C0F;&#x4F30;&#x8BA1;&#x7684;&#x5355;&#x901A;&#x9053; conductances&#x3001; &#x4E00;&#x4E2A;&#x6570;&#x91CF;&#x7EA7;&#xFF0C;Ca &#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x5DEE;&#x5F02;&#x548C;&#x540C;&#x4E00;&#x4FA7;&#x7279;&#x5B9A;&#x5835;&#x585E;&#x7684;&#x5E38;&#x7528;&#x6765;&#x6291;&#x5236;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6C14;&#x5473;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca Cl &#x5F53;&#x524D;&#x5728; OSNs&#xFF0C;niflumic &#x9178;&#xFF0C;&#x548C; 4-acetamido-4&#39;-isothiocyanato-stilben-2,2&#39;-disulfonate &#x4E24;&#x4E2A; Cl &#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242; (&#x5750;)&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;mBest2 &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x597D;&#x7684;&#x5019;&#x9009;&#x6B63;&#x5728;&#x55C5;&#x9499;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6C2F;&#x901A;&#x9053;&#x5206;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;

Bestrophin-2 &#x662F;&#x53C2;&#x4E0E;&#x55C5;&#x89C9;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x9499;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6C2F;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x3002;

Ca-activated Cl channels are an important component of olfactory transduction. Odor binding to olfactory receptors in the cilia of olfactory sensory neurons (OSNs) leads to an increase of intraciliary Ca concentration by Ca entry through cyclic nucleotide-gated (CNG) channels. Ca activates a Cl channel that leads to an efflux of Cl from the cilia, contributing to the amplification of the OSN depolarization. The molecular identity of this Cl channel remains elusive. Recent evidence has indicated that bestrophins are able to form Ca-activated Cl channels in heterologous systems. Here we have analyzed the expression of bestrophins in the mouse olfactory epithelium and demonstrated that only mouse bestrophin-2 (mBest2) was expressed. Single-cell RT-PCR showed that mBest2 was expressed in OSNs but not in supporting cells. Immunohistochemistry revealed that mBest2 was expressed on the cilia of OSNs, the site of olfactory transduction, and colocalized with the main CNGA2 channel subunit. Electrophysiological properties of Ca-activated Cl currents from native channels in dendritic knob/cilia of mouse OSNs were compared with those induced by the expression of mBest2 in HEK-293 cells. We found the same anion permeability sequence, small estimated single-channel conductances, a Ca sensitivity difference of one order of magnitude, and the same side-specific blockage of the two Cl channel blockers commonly used to inhibit the odorant-induced Ca-activated Cl current in OSNs, niflumic acid, and 4-acetamido-4'-isothiocyanato-stilben-2,2'-disulfonate (SITS). Therefore, our data suggest that mBest2 is a good candidate for being a molecular component of the olfactory Ca-activated Cl channel.

Bestrophin-2 is a candidate calcium-activated chloride channel involved in olfactory transduction.

Ca activ&#xE9;s par les canaux Cl sont une composante importante de la transduction olfactive. Odeur liant &#xE0; des r&#xE9;cepteurs olfactifs dans les franges de neurones sensoriels olfactifs (ARS) conduit &#xE0; une augmentation de la concentration de Ca intraciliary par l&#x26;#39;entr&#xE9;e de Ca par les nucl&#xE9;otides cycliques-d&#xE9;pendants (GNC) canaux. Ca active un canal Cl qui m&#xE8;ne &#xE0; un efflux de Cl de cils, ce qui contribue &#xE0; l&#x26;#39;amplification de la d&#xE9;polarisation OSN. L&#x26;#39;identit&#xE9; mol&#xE9;culaire de ce canal Cl reste insaisissable. Des preuves r&#xE9;centes ont indiqu&#xE9; que bestrophins sont capables de former des canaux Cl Ca-activ&#xE9;s dans des syst&#xE8;mes h&#xE9;t&#xE9;rologues. Ici, nous avons analys&#xE9; l&#x26;#39;expression de bestrophins dans l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium olfactif de la souris et la souris ont d&#xE9;montr&#xE9; que seulement bestrophin-2 (mBest2) a &#xE9;t&#xE9; exprim&#xE9;. Une seule cellule RT-PCR a montr&#xE9; que mBest2 a &#xE9;t&#xE9; exprim&#xE9;e en ARS, mais pas dans des cellules de soutien. L&#x26;#39;immunohistochimie a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que mBest2 a &#xE9;t&#xE9; exprim&#xE9;e sur les cils des ARS, le site de la transduction olfactive, et colocalis&#xE9;s avec les principaux sous-unit&#xE9; CNGA2 canal. Propri&#xE9;t&#xE9;s &#xE9;lectrophysiologiques des courants Cl Ca activ&#xE9;s par des canaux indig&#xE8;nes dans le bouton dendritique / cils ARS souris ont &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9;s avec ceux induits par l&#x26;#39;expression de mBest2 en cellules HEK-293. Nous avons trouv&#xE9; la s&#xE9;quence m&#xEA;me anion perm&#xE9;abilit&#xE9;, petites estim&#xE9;s &#xE0; canal unique conductances, une diff&#xE9;rence de sensibilit&#xE9; Ca d&#x26;#39;un ordre de grandeur, et le m&#xEA;me c&#xF4;t&#xE9; sp&#xE9;cifique de blocage des deux inhibiteurs des canaux Cl couramment utilis&#xE9;s pour inhiber l&#x26;#39;odorant-induite par le Ca-Cl activ&#xE9; actuelle dans ARS, l&#x26;#39;acide niflumique, et 4-ac&#xE9;tamido-4&#x26;#39;-isothiocyanato-stilben-2, 2&#x26;#39;-disulfonate (SITS). Par cons&#xE9;quent, nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que mBest2 est un bon candidat pour &#xEA;tre un composant mol&#xE9;culaire du canal Cl-Ca activ&#xE9;e olfactive.

Bestrophin-2 est un canal chlorure activ&#xE9; par le calcium candidat impliqu&#xE9;es dans la transduction olfactive

Ca aktivierte Cl-Kan&auml;le sind ein wichtiger Bestandteil des olfaktorischen Signaltransduktion. Geruch Bindung an olfaktorischen Rezeptoren in die Flimmerh&auml;rchen der olfaktorischen sensorischen Neuronen (OSNs) f&uuml;hrt zu einer Erh&ouml;hung der intraciliary Ca-Konzentration von Ca-Eintrag durch zyklische Nukleotid-Gating (CNG) Kan&auml;le. Ca aktiviert einen Cl-Kanal, der f&uuml;hrt zu einer Efflux von Cl aus der Zilien, einen Beitrag zu der Verst&auml;rkung der die OSN Depolarisierung. Die molekulare Identit&auml;t dieses Cl-Kanals bleibt. Neuere Belege hat darauf hingewiesen, dass Bestrophins Ca aktiviert Cl-Kan&auml;le in heterologen Systemen bilden k&ouml;nnen. Hier haben wir den Ausdruck des Bestrophins in der Maus olfaktorischen Epithel analysiert und nachgewiesen, dass einzige Maus Bestrophin-2 (mBest2) wurde zum Ausdruck gebracht. Einzeller-RT-PCR zeigte, dass dieser mBest2 in OSNs aber nicht bei der Unterst&uuml;tzung der Zellen zum Ausdruck kam. Immunhistochemie ergab, dass mBest2 war auf die Flimmerh&auml;rchen OSNs, Ortsbild des olfaktorischen Signaltransduktion, ausgedr&uuml;ckt und colocalized mit den wichtigsten CNGA2-Kanal-Untereinheit. Elektrophysiologische Eigenschaften des aktivierten Ca Cl Bemessungsstr&ouml;me von systemeigenen Kan&auml;le in dendritischen Regler/Zilien der Maus OSNs wurden mit denen von den Ausdruck des mBest2 in den HEK-293-Zellen induziert verglichen. Wir fanden Anion Durchl&auml;ssigkeit Reihenfolge, kleine gesch&auml;tzte Einkanal-Conductances, Ca Empfindlichkeit Unterschied eine Gr&ouml;&szlig;enordnung und derselben Seite-spezifische verhinderte die zwei Cl-Kanal-Blocker, h&auml;ufig verwendet, um die Odoriermittel induziert Ca aktivierte Cl aktuelle in OSNs, Niflumic S&auml;ure und 4-acetamido-4&#39;-isothiocyanato-stilben-2,2&#39;-disulfonate hemmen (sitzt). Daher deuten unsere Daten, dass mBest2 ein guter Kandidat f&uuml;r Molekulare Komponente des olfaktorischen Ca aktivierte Cl-Kanals.

Bestrophin-2 ist ein Kandidat-aktivierte Kalzium-Chlorid-Kanal olfaktorischen Signaltransduktion beteiligt.

CA-attivato canali Cl sono una componente importante della trasduzione olfattiva. Associazione odore ai recettori olfattivi nelle ciglia dei neuroni sensoriali olfattivi (OSNs) porta ad un aumento della concentrazione di Ca intraciliary dalla voce Ca attraverso canali di (CNG) nucleotide-gated cicliche. CA attiva un canale del Cl che conduce ad un efflusso di Cl dalle ciglia, che contribuiscono per l&#39;amplificazione della depolarizzazione dell&#39;OSN. L&#39;identit&agrave; molecolare di questo canale Cl resta sfuggente. Prova recente ha indicato che bestrophins sono in grado di formare canali attivati dal Ca Cl in sistemi eterologo. Qui abbiamo analizzato l&#39;espressione di bestrophins nell&#39;epitelio olfattivo del mouse e ha dimostrato che solo mouse bestrophin-2 (mBest2) &egrave; stato espresso. Cella singola RT-PCR ha mostrato che mBest2 &egrave; stato espresso in OSNs, ma non in cellule di supporto. Immunohistochemistry ha rivelato che mBest2 era espresso sulle ciglia di OSNs, il sito di trasduzione olfattiva e colocalized con la subunit&agrave; di canale CNGA2 principale. Propriet&agrave; elettrofisiologiche delle correnti Cl Ca-attivato da canali nativi in dendritiche manopola/ciglia del mouse OSNs sono stati confrontati con quelli indotti dall&#39;espressione di mBest2 in cellule HEK-293. Abbiamo trovato la stessa sequenza di permeabilit&agrave; anione, stimato monocanale piccolo conductances, una differenza di sensibilit&agrave; Ca di un ordine di grandezza e il blocco stesso lato specifiche dei bloccanti dei canali del Cl due comunemente utilizzati per inibire l&#39;odorant-indotta Ca-attivato Cl corrente in OSNs, niflumic acid e 4-acetamido-4&#39;-isothiocyanato-stilben-2,2&#39;-disulfonate (si siede). Pertanto, i nostri dati suggeriscono che mBest2 &egrave; un buon candidato per essere una componente molecolare del canale olfattivo Cl Ca-attivato.

Bestrophin-2 &egrave; un canale del cloro attivati dal calcio candidato coinvolto nella trasduzione olfattiva.

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x55C5;&#x899A;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306E;&#x55C5;&#x899A;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x81ED;&#x6C17;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;OSNs&#xFF09;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#xFF08;CNG&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;Ca&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;intraciliary Ca&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; CA&#x306F;&#x3001;OSN&#x306E;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x304B;&#x3089;Cl&#x306E;&#x6D41;&#x51FA;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x306E;Cl&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;CL&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;bestrophins&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x7A2E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Ca&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x55C5;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;bestrophins&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3060;&#x3051;bestrophin-2&#xFF08;mBest2&#xFF09;&#x304C;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;RT-PCR&#x306F;mBest2&#x304C;OSNs&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x652F;&#x6301;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x3067;&#x306F;&#x3001;mBest2&#x304C;OSNs&#x306E;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x3001;&#x55C5;&#x899A;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x4E0A;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;CNGA2&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6A39;&#x72B6;&#x30CE;&#x30D6;/&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;OSNs&#x306E;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x306E;Ca&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;Cl&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;HEK-293&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;mBest2&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x540C;&#x3058;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x63A8;&#x5B9A;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;&#x4E00;&#x6841;&#x306E;Ca&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x5DEE;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x306B;&#x55C5;&#x899A;&#x8A98;&#x767A;Ca&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;Cl&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x540C;&#x3058;&#x5074;&#x306B;&#x7279;&#x6709;&#x306E;&#x9589;&#x585E;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;OSNs&#x3001;&#x30CB;&#x30D5;&#x30EB;&#x30E0;&#x9178;&#x3001;4  - &#x30A2;&#x30BB;&#x30C8;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;-4&#x26;#39;-&#x30A4;&#x30BD;&#x30C1;&#x30AA;&#x30B7;&#x30A2;&#x30CA;&#x30C8;-stilben-2&#x3001;2&#x26;#39;-&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30F3;&#xFF08;&#x5EA7;&#x308B;&#xFF09;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;mBest2&#x306F;&#x3001;&#x55C5;&#x899A;&#x306E;Ca&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x826F;&#x3044;&#x5019;&#x88DC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

Bestrophin-2&#x306F;&#x55C5;&#x899A;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x5019;&#x88DC;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;

Cl &#xCC44;&#xB110; Ca &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4; &#xAC01; &#xBCC0;&#xD658;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294;. &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0; (OSNs) &#xC12C;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD6C4; &#xAC01; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xB0C4;&#xC0C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC21C;&#xD658;-&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; (CNG) &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ca &#xD56D;&#xBAA9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; intraciliary Ca &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xB9AC;&#xB4DC;. Ca OSN depolarization&#xC758; &#xD655;&#xB300;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0;&#xC11C; Cl&#xC758; &#xACBD;&#xACFC;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; Cl &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; Cl &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131; &#xC560;&#xB9E4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB294; bestrophins &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; Ca &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl &#xCC44;&#xB110; &#xD615;&#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xD45C;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD6C4; &#xAC01; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0; bestrophins&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xACFC;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; bestrophin-2 (mBest2)&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; RT-PCR &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xADF8; mBest2 OSNs &#xC140;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xC220; &#xADF8; mBest2 OSNs, &#xD6C4; &#xAC01; &#xBCC0;&#xD658; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xC8FC;&#xC694; CNGA2 &#xCC44;&#xB110; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; colocalized&#xB294; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. HEK 293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Mbest2&#xC758; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xB41C; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC190;&#xC7A1;&#xC774;/&#xC18D;&#xB208;&#xC379; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; Osns&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xCC44;&#xB110; Ca &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl &#xC804;&#xB958; electrophysiological &#xC18D;&#xC131; &#xBE44;&#xAD50; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC19;&#xC740; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;, &#xC791;&#xC740; &#xC608;&#xC0C1;&#xB41C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; conductances, &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30; &#xC21C;&#xC11C;&#xC758; Ca &#xAC10;&#xB3C4; &#xCC28;&#xC774; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB294; odorant &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; Ca &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl OSNs, niflumic acid, &#xBC0F; 4-acetamido-4&#39;-isothiocyanato-stilben-2,2&#39;-disulfonate&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; Cl &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C; &#xAC19;&#xC740; &#xCE21;&#xBA74; &#xD2B9;&#xC815; &#xB9C9;&#xD798; &#xBC1C;&#xACAC; (&#xC549;&#xC544;). &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; mBest2 &#xD6C4; &#xAC01; Ca &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC88B;&#xC740; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Bestrophin-2&#xC740; &#xD6C4; &#xAC01; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC5FC;&#xD654; &#xCE7C;&#xC298; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCC44;&#xB110;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ca-Cl canales activados son un componente importante de la transducci&#xF3;n olfativa. Olor uni&#xF3;n a los receptores olfativos de los cilios de las neuronas sensoriales olfativas (OSN) conduce a un aumento de la concentraci&#xF3;n de Ca intraciliary por la entrada de Ca a trav&#xE9;s de nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos-dependientes (GNC) los canales. Ca activa un canal Cl que conduce a un flujo de salida de Cl de los cilios, contribuyendo a la amplificaci&#xF3;n de la despolarizaci&#xF3;n OSN. La identidad molecular de este canal Cl sigue siendo dif&#xED;cil de alcanzar. La evidencia reciente ha indicado que bestrophins son capaces de formar Ca canales activados Cl en sistemas heter&#xF3;logos. Aqu&#xED; hemos analizado la expresi&#xF3;n de bestrophins en el epitelio olfatorio del rat&#xF3;n y demostr&#xF3; que el rat&#xF3;n s&#xF3;lo bestrofina-2 (mBest2) se expres&#xF3;. Sola c&#xE9;lula de RT-PCR mostr&#xF3; que mBest2 se expres&#xF3; en OSN pero no en c&#xE9;lulas de soporte. La inmunohistoqu&#xED;mica revel&#xF3; que mBest2 se expres&#xF3; en los cilios de las OSN, el sitio de la transducci&#xF3;n olfativa, y colocalized con la subunidad del canal principal CNGA2. Propiedades electrofisiol&#xF3;gicas de las corrientes de Cl Ca activados por los canales nativos de mando dendr&#xED;ticas / los cilios de las OSN de rat&#xF3;n fueron comparados con los inducidos por la expresi&#xF3;n de mBest2 en c&#xE9;lulas HEK-293. Hemos encontrado la secuencia de ani&#xF3;n misma permeabilidad, peque&#xF1;as estimados de un solo canal conductancias, una diferencia de sensibilidad de Ca de un orden de magnitud, y el mismo lado espec&#xED;fica bloqueo de los dos bloqueadores de los canales Cl com&#xFA;nmente utilizados para inhibir el olor inducida por Ca-Cl activado actual en OSN, &#xE1;cido nifl&#xFA;mico y 4-acetamido-4&#x26;#39;-isotiocianato-stilben-2, 2&#x26;#39;-disulfonato (SITS). Por lo tanto, nuestros datos sugieren que mBest2 es un buen candidato para ser un componente molecular del canal Cl olfativa Ca-activado.

Bestrofina-2 es un candidato de calcio activados por los canales de cloro implicados en la transducci&#xF3;n olfativa

&#x5F53;&#x524D;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca(2+) Cl(-) &#x6784;&#x6210;&#x5F53;&#x524D;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4F20;&#x5BFC;&#x7684;&#x5F88;&#x5927;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x55C5;&#x89C9;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x6C14;&#x5473;&#x7684;&#x4EA7;&#x751F;&#x589E;&#x52A0;&#x8425;&#x5730;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6; &#xFF1B;&#x7ECF;&#x8FDB;&#x5165; CNG &#x6E20;&#x9053;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5F53;&#x524D;&#x7684; Cl(-)&#x3002;&#x5B8C;&#x6574;&#x5C0F;&#x9F20;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca(2+) Cl(-)&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x76F4;&#x63A5;&#x6FC0;&#x6D3B; CNG &#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x95EA;&#x5149;&#x5149;&#x89E3;&#x7684;&#x7B3C;&#x7684;&#x8425;&#x6216; 8-Br-&#x8425;&#x5730;&#x548C;&#x8861;&#x91CF;&#x5F53;&#x524D;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E0E;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x91CF;&#x591A;&#x76F8;&#x7535;&#x6D41;&#x5728;&#x4E0A;&#x5347;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x5728;-50 mV&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x4E0A;&#x5347;&#x9636;&#x6BB5;&#x6210;&#x4E3A;&#x5355;&#x76F8;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x80DE;&#x5916;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x5728; + 50 mV&#xFF0C;&#x6216;&#x5F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684; Cl(-) &#x7684;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x88AB;&#x53D6;&#x800C;&#x4EE3;&#x4E4B;&#x7684;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x9178; Cl(-) &#x6F5C;&#x5728;&#x5747;&#x8861;&#x8F6C;&#x5411;-50 mV&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x9F20;&#x6807;&#x5B8C;&#x597D;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x7684;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x9636;&#x6BB5;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E; Cl(-) &#x5F53;&#x524D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x540C;&#x6837;&#x4E0E;&#x5148;&#x524D;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x79BB;&#x4F53;&#x7684;&#x86D9;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x3002;&#x9971;&#x548C;&#x7535;&#x6D41;&#x7531; Cl(-) &#x7684;&#x603B;&#x767E;&#x5206;&#x6BD4;&#x4F30;&#x8BA1;&#x5728;&#x4E24;&#x4E2A;&#x65B9;&#x9762;&#xFF1A; 1&#xFF09; &#x901A;&#x8FC7;&#x6D4B;&#x91CF;&#x6700;&#x5927;&#x7684;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7535;&#x6D41;&#x548C; 2) &#x963B;&#x6B62; niflumic &#x9178; Cl(-) &#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F30;&#x8BA1; 1 &#x6BEB;&#x7C73;&#x80DE;&#x5916;&#x7ECF;&#x53CA;&#x5BF9;&#x79F0; Cl(-) &#x6D53;&#x5EA6; Cl(-) &#x7EC4;&#x4EF6;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6784;&#x6210;&#x8FBE; 90%&#x7684;&#x603B;&#x7535;&#x6D41;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x5982;&#x4F55;&#x89E3;&#x5F00;&#x5F53;&#x524D;&#x4E0A;&#x5347;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684; CNG &#x548C; Ca(2+) &#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;

&#x65F6;&#x7A7A;&#x53D1;&#x5C55;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7;&#x548C; Ca2 +-&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6FC0;&#x6D3B; Cl &#x7535;&#x6D41;&#x3002;

A Ca(2+)-activated Cl(-) current constitutes a large part of the transduction current in olfactory sensory neurons. The binding of odorants to olfactory receptors in the cilia produces an increase in cAMP concentration; Ca(2+) enters into the cilia through CNG channels and activates a Cl(-) current. In intact mouse olfactory sensory neurons little is known about the kinetics of the Ca(2+)-activated Cl(-) current. Here, we directly activated CNG channels by flash photolysis of caged cAMP or 8-Br-cAMP and measured the current response with the whole cell voltage-clamp technique in mouse neurons. We measured multiphasic currents in the rising phase of the response at -50 mV. The current rising phase became monophasic in the absence of extracellular Ca(2+), at +50 mV, or when most of the intracellular Cl(-) was replaced by gluconate to shift the equilibrium potential for Cl(-) to -50 mV. These results show that the second phase of the current in mouse intact neurons is attributed to a Cl(-) current activated by Ca(2+), similarly to previous results on isolated frog cilia. The percentage of the total saturating current carried by Cl(-) was estimated in two ways: 1) by measuring the maximum secondary current and 2) by blocking the Cl(-) channel with niflumic acid. We estimated that in the presence of 1 mM extracellular Ca(2+) and in symmetrical Cl(-) concentrations the Cl(-) component can constitute up to 90% of the total current response. These data show how to unravel the CNG and Ca(2+)-activated Cl(-) component of the current rising phase.

Temporal development of cyclic nucleotide-gated and Ca2+ -activated Cl- currents in isolated mouse olfactory sensory neurons.

Un Ca (2 +)-actif Cl (-) de courant constitue une partie importante de la transduction du courant dans olfactifs neurones sensoriels. La liaison des substances odorantes &#xE0; des r&#xE9;cepteurs olfactifs dans les franges produit une augmentation de la concentration de l&#x26;#39;AMPc; Ca (2 +) p&#xE9;n&#xE8;tre dans le cils par les voies au GNC et active un Cl (-) en cours. En intactes souris neurones sensoriels olfactifs peu est connu sur la cin&#xE9;tique de la Ca (2 +) des Cl activ&#xE9; (-) en cours. Ici, nous avons activ&#xE9; directement canaux CNG par photolyse &#xE9;clair de l&#x26;#39;AMPc en cage ou 8-Br-AMPc et mesur&#xE9; la r&#xE9;ponse en courant avec la cellule technique de voltage-clamp ensemble des neurones de souris. Nous avons mesur&#xE9; des courants multiphasiques dans la phase ascendante de la r&#xE9;ponse &#xE0; -50 mV. La phase de mont&#xE9;e du courant est devenue monophasique en l&#x26;#39;absence de Ca (2 +), &#xE0; 50 mV, ou lorsque la majeure partie du Cl intracellulaire (-) a &#xE9;t&#xE9; remplac&#xE9; par le gluconate de d&#xE9;placer le potentiel d&#x26;#39;&#xE9;quilibre pour Cl (-) &#xE0; -50 mV . Ces r&#xE9;sultats montrent que la deuxi&#xE8;me phase du courant dans les neurones de souris intactes est attribu&#xE9; &#xE0; un Cl (-) courant activ&#xE9; par le Ca (2 +), m&#xEA;me &#xE0; des r&#xE9;sultats ant&#xE9;rieurs sur les cils isol&#xE9; de grenouille. Le pourcentage du courant de saturation total transport&#xE9; par Cl (-) a &#xE9;t&#xE9; estim&#xE9; de deux fa&#xE7;ons: 1) en mesurant le courant secondaire maximum et 2) en bloquant le Cl (-) le canal avec de l&#x26;#39;acide niflumique. Nous avons estim&#xE9; que, dans la pr&#xE9;sence de 1 mM Ca extracellulaire (2 +) et dans sym&#xE9;triques Cl (-) des concentrations de Cl (-) composant peut constituer jusqu&#x26;#39;&#xE0; 90% de la r&#xE9;ponse totale de courant. Ces donn&#xE9;es montrent comment d&#xE9;m&#xEA;ler le GNC et Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-), composante de la phase de mont&#xE9;e du courant.

&#xC9;volution temporelle des nucl&#xE9;otides cycliques-d&#xE9;pendants et Ca2 + activ&#xE9;s par Cl-courants dans isol&#xE9;es olfactif de la souris neurones sensoriels

Eine aktuelle Ca(2+) aktivierte Cl(-) bildet einen gro&szlig;en Teil der Signaltransduktion im olfaktorischen sensorischen Neuronen. Das Binden von Ger&uuml;chen zu olfaktorischen Rezeptoren in die Flimmerh&auml;rchen erzeugt einen Anstieg der cAMP-Konzentration; Ca(2+) tritt in die Flimmerh&auml;rchen durch CNG-Kan&auml;le und eine aktuelle Cl(-) aktiviert. In intakten Maus olfaktorischen sensorischen Neuronen ist wenig &uuml;ber die Kinetik der Ca(2+) aktivierte Cl(-) aktuelle bekannt. Hier wir direkt aktiviert CNG-Kan&auml;le mit Flash-Photolyse von K&auml;fig cAMP oder 8-Br-cAMP und die aktuelle Antwort mit der ganzen Zelle Spannung Klemm-Technik in Maus-Neuronen gemessen. Wir Ma&szlig;en Multiphasic Str&ouml;mungen in der steigenden Phase der Reaktion bei-50 mV. Die aktuelle steigende Phase wurde monophasisch in Ermangelung extrazellul&auml;re Ca(2+), bei + 50 mV, oder wann die meisten der intrazellul&auml;ren Cl(-) wurde durch Gluconat Verlagerung das potenziellen Gleichgewicht f&uuml;r Cl(-) auf-50 mV. Diese Ergebnisse zeigen, dass die zweite Phase des aktuellen in Maus intakten Neuronen eine Cl(-) aktuelle aktiviert durch Ca(2+), &auml;hnlich zu fr&uuml;heren Ergebnissen auf isolierte Frosch Zilien zugerechnet wird. Der Prozentsatz der Summe S&auml;ttigung Strom von Cl(-) getragen wurde gesch&auml;tzt auf zwei Arten: 1) durch Messung der maximalen Sekund&auml;rstrom und 2) durch Blockierung des Cl(-) Kanals mit Niflumic S&auml;ure. Wir gesch&auml;tzt, dass in Gegenwart von 1 mM extrazellul&auml;re Ca(2+) und symmetrische Cl(-) Konzentrationen der Cl(-) Komponente bis zu 90 % der gesamten aktuellen Antwort darstellen kann. Diese Daten zeigen, wie die CNG und Cl(-) Ca(2+) aktivierte Komponente der aktuellen steigende Phase zu entwirren.

Zeitliche Entwicklung der zyklische Nukleotid-Gating und Ca2 +-Cl-Str&ouml;mungen in isolierten Maus olfaktorischen sensorischen Neuronen aktiviert.

Un Cl(-) Ca(2+)-attivato attuale costituisce una grande parte della trasduzione corrente nei neuroni sensoriali olfattivi. L&#39;associazione di odorizzazione ai recettori olfattivi in ciglia produce un aumento della concentrazione di cAMP; CA(2+) entra in ciglia attraverso canali CNG e attiva una corrente Cl(-). Nei neuroni sensoriali olfattivi intatto del mouse poco si sa circa la cinetica del Cl(-) attivato Ca(2+) corrente. Qui, abbiamo attivato direttamente canali CNG da flash fotolisi dell&#39;accampamento in gabbia o 8-Br-cAMP e misurata la risposta corrente con la tecnica del morsetto tensione intera cellula nei neuroni del mouse. Abbiamo misurato multiphasic correnti in fase di aumento della risposta a -50 mV. L&#39;attuale fase di lievitazione &egrave; diventato monofasica in assenza di Ca(2+) extracellulare, al + 50 mV, o quando la maggior parte del Cl(-) intracellulare &egrave; stato sostituito da gluconato di spostare il potenziale di equilibrio per Cl(-) di -50 mV. Questi risultati mostrano che la seconda fase della corrente in neuroni intatto del mouse &egrave; attribuita a un Cl(-) corrente attivato da Ca(2+), analogamente ai precedenti risultati su ciglia rana isolato. La percentuale del totale saturando la corrente trasportata da Cl(-) &egrave; stata stimata in due modi: 1) per misurare la massima corrente secondaria e 2) per bloccare il canale di Cl(-) con acido di niflumic. Abbiamo stimato che, in presenza di 1 Ca(2+) mM extracellulare e simmetrica Cl(-) concentrazioni il Cl(-) componente pu&ograve; costituire fino al 90% della risposta corrente totale. Questi dati mostrano come dipanare la componente CNG e attivato Ca(2+) Cl(-) dell&#39;attuale fase nascente.

Sviluppo temporale del cyclic nucleotide-gated e Ca2 +-attivato Cl-correnti nei neuroni sensoriali olfattivi isolato del mouse.

&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;Cl&#xFF08; - &#xFF09;&#x73FE;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306E;&#x55C5;&#x899A;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x4ED8;&#x81ED;&#x5264;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;cAMP&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x3001;CNG&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306B;&#x5165;&#x308B;&#x3068;Cl&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B; - &#x96FB;&#x6D41;&#xFF08;A&#xFF09;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#xFF08; - &#xFF09;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x3001;Ca&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5869;&#x7D20;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30C9;cAMP&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;8-BR-cAMP&#x306E;&#x3067;CNG&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;-50 mV&#x3067;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x7ACB;&#x3061;&#x4E0A;&#x304C;&#x308A;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x591A;&#x9762;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x7ACB;&#x3061;&#x4E0A;&#x304C;&#x308A;&#x76F8;&#x306F;50 mV&#x3067;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;Ca&#x306E;&#x6709;&#x7121;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3067;&#x5358;&#x76F8;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;Cl&#xFF08; - &#xFF09;Cl&#x306E;&#x5E73;&#x8861;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3092;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30F3;&#x9178;&#x5869;&#x306B;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F; -  -50 mV&#x306B;&#xFF08;&#xFF09; &#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x9694;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AB;&#x30A8;&#x30EB;&#x306E;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x4E0A;&#x306E;&#x524D;&#x56DE;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;Cl&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x5869;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x904B;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x304C;&#x98FD;&#x548C;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x200B;&#x200B;&#x308C;&#x305F;&#xFF1A;Cl&#x3092;&#xFF08;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#xFF09;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x4E8C;&#x6B21;&#x96FB;&#x6D41;&#x304A;&#x3088;&#x3073;2&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;1&#xFF09; - &#xFF09;&#x30CB;&#x30D5;&#x30EB;&#x30E0;&#x9178;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;Cl&#x304C;&#xFF08; - &#xFF09;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x96FB;&#x6D41;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;90&#xFF05;&#x307E;&#x3067;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x6211;&#x3005;&#x306F;1 mM&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;&#x5BFE;&#x79F0;&#x7684;&#x306A;Cl&#x306E;&#x3068;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x7ACB;&#x3061;&#x4E0A;&#x304C;&#x308A;&#x76F8;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;CNG&#x3068;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9694;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;Ca2 +&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;Cl-&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x767A;&#x5C55;

Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xD604;&#xC7AC; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC7AC; &#xBCC0;&#xD658;&#xC758; &#xD070; &#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xAD6C;&#xC131;. &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; &#xD6C4; &#xAC01; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; odorants&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; &#xCEA0;&#xD504; &#xB18D;&#xB3C4;; Ca(2+) CNG &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; &#xC785;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xD604;&#xC7AC; cl(-)&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC57D;&#xAC04; &#xD604;&#xC7AC; Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; cl(-)&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC9C1;&#xC811; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; &#xCEA0;&#xD504; &#xB610;&#xB294; 8-Br-&#xCEA0;&#xD504;&#xC758; &#xD50C;&#xB798;&#xC2DC; photolysis&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; CNG &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB274;&#xB7F0; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAE30;&#xC220;&#xB85C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;-50&#xC5D0;&#xC11C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; multiphasic &#xC804;&#xB958; &#xCE21;&#xC815; mV. &#xD604;&#xC7AC; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; + 50&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; Ca(2+) &#xC5C6;&#xC774; monophasic mV, &#xB610;&#xB294; &#xAD6C; &#xB8E8; &#xCF58;-50 cl(-)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xD3C9;&#xD615; &#xC774;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; cl(-)&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xAD50;&#xCCB4; &#xB54C; &#xBBA4;&#xC9C1; &#xBE44;&#xB514;&#xC624;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD604;&#xC7AC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4; Cl(-) &#xD604;&#xC7AC; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xAC1C;&#xAD6C;&#xB9AC; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; &#xC774;&#xC804; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xC720;&#xC0AC; &#xD558; &#xAC8C; Ca(2+), &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB54C;&#xBB38; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; cl(-)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC6B4;&#xBC18; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xD760;&#xBED1; &#xC816; &#xAC8C; &#xCD1D; &#xBE44;&#xC728; &#xCD94;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;: 1)&#xC73C;&#xB85C; &#xCD5C;&#xB300; 2 &#xCC28; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; 2) &#xC5EC; niflumic &#xC0B0; Cl(-) &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 1 m m &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; ca(2+)&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xB300;&#xCE6D; Cl(-) &#xB18D;&#xB3C4; Cl(-) &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xCD1D; &#xD604;&#xC7AC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xCD5C;&#xB300; 90%&#xAE4C;&#xC9C0;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC218;&#xB97C; &#xCD94;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; CNG&#xC640; Cl(-) Ca(2+) &#xD65C;&#xC131; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD574;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC21C;&#xD658;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; Ca2 +-Cl-&#xC804;&#xB958; &#xC808;&#xC5F0;&#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

A Ca (2 +)-activado Cl (-) actual constituye una gran parte de la transducci&#xF3;n de corriente en las neuronas sensoriales olfativas. La uni&#xF3;n de los odorantes a los receptores olfativos de los cilios produce un aumento en la concentraci&#xF3;n de cAMP, Ca (2 +) entra en los cilios a trav&#xE9;s de canales de GNC y activa un Cl (-) actual. En intactas las neuronas olfativas sensoriales de rat&#xF3;n se conoce poco sobre la cin&#xE9;tica de la Ca (2 +) activada por Cl (-) actual. En este sentido, impulsados &#x200B;&#x200B;directamente por los canales de GNC flash fot&#xF3;lisis de cAMP enjaulados o 8-Br-cAMP y se mide la respuesta actual con la de c&#xE9;lulas enteras voltaje-clamp t&#xE9;cnica en las neuronas de rat&#xF3;n. Se midi&#xF3; corrientes multif&#xE1;sicas en la fase ascendente de la respuesta a -50 mV. La corriente de fase ascendente se convirti&#xF3; monof&#xE1;sica en ausencia de extracelular Ca (2 +), a 50 mV, o cuando la mayor parte del Cl intracelular (-) se sustituye por gluconato para desplazar el potencial de equilibrio para el Cl (-) a -50 mV . Estos resultados muestran que la segunda fase de la corriente en neuronas de rat&#xF3;n intactas se atribuye a un Cl (-) la corriente activada por Ca (2 +), de manera similar a los resultados anteriores sobre los cilios rana aislado. El porcentaje de saturaci&#xF3;n de la corriente total transportada por Cl (-) se estim&#xF3; en dos formas: 1) mediante la medici&#xF3;n de la corriente m&#xE1;xima secundaria y 2) mediante el bloqueo de la Cl (-) del canal con &#xE1;cido nifl&#xFA;mico. Se estima que en presencia de 1 mM de Ca extracelular (2 +) y en sim&#xE9;tricas Cl (-) la concentraci&#xF3;n de Cl (-) componente puede constituir hasta el 90% de la respuesta corriente total. Estos datos muestran c&#xF3;mo desentra&#xF1;ar el GNC y Ca (2 +) activada por Cl (-), componente de la actual fase ascendente.

Desarrollo temporal de nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos-dependientes y Ca2 +-activated Cl-Corrientes en ratones aislados neuronas sensoriales olfativas

Bestrophins &#x662F;&#x6700;&#x8FD1;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684; Cl(-) &#x9891;&#x9053;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ED3;&#x6784;&#x5316;&#x4FE1;&#x606F;&#x53EF;&#x7528;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;Bestrophins &#x529F;&#x80FD;&#x597D;&#x5B88;&#x6052;&#x7684; Asp &#x5BCC;&#x9053;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E8C;&#x7518;&#x9187;&#x7684;&#x603B;&#x7AD9; &#xFF08;Asp &#x5BCC;&#x57DF;&#xFF09;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x540C;&#x6E90;&#x7684; Ca2 +-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x56FE;&#x6848;&#xFF0C;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x5927;&#x7535;&#x5BFC; Ca2 +-&#x4E0E;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7; K + &#x901A;&#x9053; &#xFF08;BK(Ca))&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;Asp &#x5BCC;&#x57DF;&#x4E5F;&#x662F;&#x5019;&#x9009; Ca2 + bestrophins &#x4E2D;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8003;&#x8651;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x9020;&#x4EBA;&#x7C7B; bestrophin-1 (Best1) Asp &#x5BCC;&#x57DF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6A21;&#x677F;&#x4F7F;&#x7528;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x53CD;&#x5E94;&#x7D20;-1 x &#x5C04;&#x7EBF;&#x7ED3;&#x6784;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x62DF;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6;&#x7ED1;&#x5B9A; Ca2 + &#x7684; Asp&#x3001; Glu &#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9884;&#x6D4B;&#x5230;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5176;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A5;&#x7740;&#x8981;&#x5728;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x540C;&#x6E90;&#x9F20;&#x6807; bestrophin-2 Asp &#x5BCC;&#x57DF;&#x4E2D;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x6240;&#x9009;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x62DF;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x9884;&#x6D4B; Asp &#x5BCC;&#x57DF;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C; D301A &#x548C; D304A &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#x5B9E;&#x9645;&#x4E0A;&#x505A;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x9020;&#x6210;&#x5927;&#x91CF;&#x51CF;&#x5C11; Ca2 + &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;-&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; Cl(-) &#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;&#x5B8C;&#x5168;&#x7B26;&#x5408;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5176;&#x4ED6;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;E306A&#xFF0C;D312A) &#x6CA1;&#x6709;&#x51CF;&#x5C11; Ca2 +-&#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x5F53;&#x524D;&#x4E0E;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;

&#x7531; Ca2 + bestrophins &#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#xFF1A; &#x7406;&#x8BBA;&#x4E0E;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

Bestrophins are a recently discovered family of Cl(-) channels, for which no structural information is available. Some family members are activated by increased intracellular Ca2+ concentration. Bestrophins feature a well conserved Asp-rich tract in their COOH terminus (Asp-rich domain), which is homologous to Ca2+-binding motifs in human thrombospondins and in human big-conductance Ca2+- and voltage-gated K+ channels (BK(Ca)). Consequently, the Asp-rich domain is also a candidate for Ca2+ binding in bestrophins. Based on these considerations, we constructed homology models of human bestrophin-1 (Best1) Asp-rich domain using human thrombospondin-1 X-ray structure as a template. Molecular dynamics simulations were used to identify Asp and Glu residues binding Ca2+ and to predict the effects of their mutations to alanine. We then proceeded to test selected mutations in the Asp-rich domain of the highly homologous mouse bestrophin-2. The mutants expressed in HEK-293 cells were investigated by electrophysiological experiments using the whole-cell voltage-clamp technique. Based on our molecular modeling results, we predicted that Asp-rich domain has two defined binding sites and that D301A and D304A mutations may impact the binding of the metal ions. The experiments confirmed that these mutations do actually affect the function of the protein causing a large decrease in the Ca2+-activated Cl(-) current, fully consistent with our predictions. In addition, other studied mutations (E306A, D312A) did not decrease Ca2+-activated Cl(-) current in agreement with modeling results.

Regulation of bestrophins by Ca2+: a theoretical and experimental study.

Bestrophins sommes une famille r&#xE9;cemment d&#xE9;couvert de Cl (-) cha&#xEE;nes, pour lesquelles aucune information structurelle est disponible. Certains membres de la famille sont activ&#xE9;s par le Ca2 + intracellulaire accrue de concentration. Bestrophins comportent un bien conserv&#xE9;s Asp-riche tractus dans leur extr&#xE9;mit&#xE9; COOH-terminale (Asp-domaine riche en), qui est homologue &#xE0; Ca 2 + de motifs de liaison en thrombospondines homme et chez l&#x26;#39;homme grande conductance Ca 2 + - et voltage-d&#xE9;pendant K + canaux (BK (Ca) ). Par cons&#xE9;quent, le domaine riche en Asp est &#xE9;galement un candidat pour Ca2 + obligatoire dans bestrophins. Sur la base de ces consid&#xE9;rations, nous avons construit des mod&#xE8;les d&#x26;#39;homologie de l&#x26;#39;homme bestrophin-1 (Best1) Asp domaine riche en utilisant humaine thrombospondine-1 X-ray structure comme un mod&#xE8;le. Simulations de dynamique mol&#xE9;culaire ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;es pour identifier les r&#xE9;sidus Glu Asp et contraignant Ca2 + et de pr&#xE9;dire les effets de leurs mutations &#xE0; l&#x26;#39;alanine. Nous avons ensuite proc&#xE9;d&#xE9; &#xE0; tester mutations s&#xE9;lectionn&#xE9;es dans le domaine Asp-riche de la forte homologie souris bestrophin-2. Les mutants exprim&#xE9;s dans les cellules HEK-293 ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;es par des exp&#xE9;riences &#xE9;lectrophysiologiques utilisant l&#x26;#39;ensemble des cellules du voltage-clamp technique. Sur la base de nos r&#xE9;sultats de la mod&#xE9;lisation mol&#xE9;culaire, nous avons pr&#xE9;dit que Asp domaine riche en poss&#xE8;de deux sites de liaison d&#xE9;finies et que D301A et D304A mutations peuvent influer sur la fixation des ions m&#xE9;talliques. Les exp&#xE9;riences ont confirm&#xE9; que ces mutations ne fait affecter le fonctionnement de la prot&#xE9;ine provoquant une diminution importante de la Ca2 +-Cl activ&#xE9; (-) en cours, pleinement compatible avec nos pr&#xE9;visions. En outre, d&#x26;#39;autres mutations &#xE9;tudi&#xE9;es (E306A, D312A) n&#x26;#39;a pas diminu&#xE9; Ca2 +-Cl activ&#xE9; (-) en cours en accord avec les r&#xE9;sultats de mod&#xE9;lisation.

R&#xE8;glement de Bestrophins par Ca2 +: une &#xE9;tude th&#xE9;orique et exp&#xE9;rimentale

Bestrophins sind einer vor kurzem entdeckten Familie Cl(-) Kan&auml;le, f&uuml;r die keine strukturelle Informationen verf&uuml;gbar ist. Einige Familienmitglieder werden durch erh&ouml;hten intrazellul&auml;ren Ca2 + Konzentration aktiviert. Bestrophins verf&uuml;gen &uuml;ber ein gut erhaltene Asp-Reich-Darm-Trakt in ihre COOH-Endstation (Asp-reiche Dom&auml;ne), das homologe zu Ca2 +-bindende Motive im menschlichen Thrombospondine und in menschlichen gro&szlig;en Leitwert Ca2 +- und Spannung-Gating K +-Kan&auml;le (BK(Ca)). Folglich ist die Asp-Reich-Domain auch ein Kandidat f&uuml;r Ca2 +-Bindung in Bestrophins. Auf der Grundlage dieser &Uuml;berlegungen, errichteten wir Homologie Modelle der menschlichen Bestrophin-1 (Best1) Asp-reiche Dom&auml;ne menschlichen Thrombospondin-1-x-ray-Struktur als Vorlage verwenden. Molekulardynamik-Simulationen wurden verwendet, um Asp und Glu R&uuml;ckst&auml;nde Binden von Ca2 + zu identifizieren und die Auswirkungen ihrer Mutationen zu Alanin. Wir fuhr dann fort, ausgew&auml;hlte Mutationen im Bereich Asp-Reich der hochgradig homologe Maus Bestrophin-2 zu testen. Die Mutanten, ausgedr&uuml;ckt in HEK-293-Zellen wurden von elektrophysiologischen Experimenten mit der ganz-Zell-Spannung-Clamp-Technik untersucht. Auf der Grundlage der Modellierungsergebnisse unserer Molekulare, voraus wir, dass Asp-reiche Dom&auml;ne verf&uuml;gt &uuml;ber zwei definierten Bindungsstellen und D301A und D304A Mutationen, die Bindung der Metallionen auswirken k&ouml;nnen. Die Experimente best&auml;tigt, dass diese Mutationen tats&auml;chlich beeintr&auml;chtigen die Funktion des Proteins verursacht einen gro&szlig;en R&uuml;ckgang der Ca2 +-aktivierten Cl(-) Strom, vollst&auml;ndig im Einklang mit unseren Vorhersagen. Dar&uuml;ber hinaus andere untersuchten Mutationen (E306A, D312A) nicht verringern Ca2 +-aktiviert Cl(-) aktuelle im Einvernehmen mit der Modellierung der Ergebnisse.

Regulierung des Bestrophins von Ca2 +: eine theoretische und experimentelle Studie.

Bestrophins sono una famiglia di recente scoperta di Cl(-) canali, per cui non strutturali sono disponibili informazioni. Alcuni membri della famiglia sono attivati da aumentata concentrazione intracellulare Ca2 +. Bestrophins presentano un tratto Asp-ricco ben conservato nel loro capolinea COOH (dominio-Asp-ricchi), che &egrave; omologo al Ca2 +-associazione motivi in thrombospondins umano e umano grande conduttanza Ca2 +- e tensione-gated di canali K + (BK(Ca)). Di conseguenza, il dominio Asp-ricco &egrave; inoltre un candidato per l&#39;associazione Ca2 + in bestrophins. In base a queste considerazioni, abbiamo costruito modelli di omologia di umana bestrophin-1 (Best1) Asp-ricco dominio umano trombospondina-1 struttura di raggi x come un modello. Simulazioni dinamiche molecolari sono stati utilizzati per identificare residui Asp e Glu associazione Ca2 + e prevedere gli effetti delle loro mutazioni di alanina. Abbiamo poi proceduto alla prova selezionate mutazioni nel dominio Asp-ricco del mouse altamente omologhe bestrophin-2. I mutanti espressi in cellule HEK-293 sono stati studiati dagli esperimenti elettrofisiologici utilizzando la tecnica del morsetto tensione a cellule intere. Basato sui nostri risultati di modellazione molecolare, avevamo previsto che Asp-ricco dominio ha due siti di legame definito e che mutazioni D301A e D304A possono influenzare l&#39;associazione degli ioni del metalli. Gli esperimenti hanno confermato che queste mutazioni realmente influenzare la funzione della proteina causando una grande diminuzione del Ca2 +-activated Cl(-) corrente, pienamente coerente con le nostre previsioni. Inoltre, altre mutazioni studiate (E306A, D312A) non ha fatto diminuire Ca2 +-attivato Cl(-) corrente in accordo con risultati di modellazione.

Regolamento di bestrophins dal Ca2 +: uno studio teorico e sperimentale.

&#xFF08; - &#xFF09;&#x306F;&#x69CB;&#x9020;&#x60C5;&#x5831;&#x304C;&#x5229;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3001;Bestrophins&#x306F;Cl&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;Ca2 +&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3068;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;K +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;BK&#xFF08;&#x30AB;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30CB;&#x30A2;&#x5DDE;&#xFF09; -  Bestrophins&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;thrombospondins&#x3067;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;Ca2 +&#x306E;Ca2 +&#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3068;&#x76F8;&#x540C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;COOH&#x672B;&#x7AEF;&#xFF08;ASP&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF09;&#x3067;&#x3088;&#x304F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Asp-&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x8DEF;&#x3092;&#x5099;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#xFF09;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;ASP-&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5019;&#x88DC;&#x200B;&#x200B;+ bestrophins&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8003;&#x616E;&#x4E8B;&#x9805;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30DC;&#x30B9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;-1&#x306E;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;X&#x7DDA;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;bestrophin-1&#x30D2;&#x30C8;&#xFF08;Best1&#xFF09;&#x306E;Asp-&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408;Asp&#x304A;&#x3088;&#x3073;Glu&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;+&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6B21;&#x306B;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;bestrophin-2&#x306E;Asp-&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9032;&#x3093;&#x3060;&#x3002; HEK-293&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x5168;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x305D;&#x306E;ASP&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x6301;&#x3061;&#x3001;D301A&#x3068;D304A&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3068;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x969B;&#x306E;Ca2 +&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x3068;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#xFF08;E306A&#x3001;D312A&#xFF09;&#x306F;&#x3001;Ca2 +&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5869;&#x7D20;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x306E;Ca2 +&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;Bestrophins&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#xFF1A;&#x305D;&#x306E;&#x7406;&#x8AD6;&#x3068;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;

Bestrophins&#xB294; Cl(-) &#xCC44;&#xB110;, &#xAD6C;&#xC870; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xC81C;&#xD488;&#xAD70; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBA87;&#xBA87;&#xC758; &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC740; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Bestrophins &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xB3D9;&#xC885; Ca2 +&#xC740; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; COOH &#xC885;&#xC810; (Asp &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;)&#xC5D0; &#xC798; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; Asp &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xAD00;-&#xC778;&#xAC04;&#xC758; thrombospondins&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD070; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; Ca2 +&#xC758; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;-&#xBC0F; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; K + &#xCC44;&#xB110; (BK(Ca)). &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; Asp &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB610;&#xD55C; Ca2 + &#xBC14;&#xC778;&#xB529; bestrophins&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACE0;&#xB824; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; thrombospondin 1 x-&#xC120; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; bestrophin-1 (Best1) Asp &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; homology &#xBAA8;&#xB378; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xB3D9;&#xC5ED;&#xD559; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; Ca2 + Asp&#xC640; Glu &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC744; &#xADF8;&#xB4E4; &#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC608;&#xCE21; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB192;&#xC740; &#xB3D9;&#xC885; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; bestrophin 2&#xC758; Asp &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC9C4;&#xD589;. HEK 293 &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; electrophysiological &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; Asp &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC904; &#xC218; &#xC788;&#xB294; D301A &#xBC0F; D304A &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC608;&#xCE21; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD655;&#xC778; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Ca2 +&#xC758; &#xD070; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;-&#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xC804;&#xB958;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC608;&#xCE21;&#xC640; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB2E4;&#xB978; &#xACF5;&#xBD80; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (E306A, D312A)&#xB294; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4E4;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; Ca2 +-Cl(-) &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xD604;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;.

Bestrophins Ca2 +&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;: &#xC774;&#xB860;&#xC801;, &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801; &#xC5F0;&#xAD6C;.

Bestrophins son una familia recientemente descubierta de Cl (-) canales, para los cuales no se dispone de informaci&#xF3;n estructural. Algunos miembros de la familia son activados por Ca2 + intracelular aumento de la concentraci&#xF3;n. Bestrophins cuentan con una bien conservada Asp-rico tracto en su extremo COOH (Asp-rico dominio), que es hom&#xF3;loga a Ca2 + vinculante motivos en thrombospondins humanos y en humanos de gran conductancia de Ca2 + - y K dependiente de voltaje + canales (BK (Ca) ). En consecuencia, el dominio de Asp-rica es tambi&#xE9;n un candidato para la uni&#xF3;n de Ca2 + en el bestrophins. Con base en estas consideraciones, se construyeron modelos de homolog&#xED;a de bestrofina humana-1 (Best1) Asp-rica de dominio con humanos trombospondina-1 rayos X la estructura como una plantilla. Simulaciones de din&#xE1;mica molecular se utilizaron para identificar los residuos Asp y Glu uni&#xF3;n de Ca2 + y para predecir los efectos de sus mutaciones a alanina. A continuaci&#xF3;n, procedi&#xF3; a probar las mutaciones seleccionadas en el dominio de Asp-ricos de la gran homolog&#xED;a del rat&#xF3;n bestrofina-2. Los mutantes expresados &#x200B;&#x200B;en c&#xE9;lulas HEK-293 fueron investigados por experimentos electrofisiol&#xF3;gicos usando la totalidad de c&#xE9;lulas voltaje-clamp t&#xE9;cnica. En base a los resultados de los modelos moleculares, predijo que Asp-rica de dominio tiene dos sitios de uni&#xF3;n definidos y que D301A y D304A mutaciones pueden afectar la uni&#xF3;n de los iones met&#xE1;licos. Los experimentos confirmaron que estas mutaciones no afectan en realidad la funci&#xF3;n de la prote&#xED;na que causa una gran disminuci&#xF3;n en el Ca2 +-activated Cl (-) actual, plenamente coherente con nuestras predicciones. Adem&#xE1;s, otras mutaciones estudiadas (E306A, D312A) no disminuy&#xF3; de Ca2 +-activated Cl (-) la corriente de acuerdo con los resultados del modelo.

Reglamento de la Bestrophins de Ca2 +: un estudio te&#xF3;rico y experimental

&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6C2F;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x653E;&#x5927;&#x673A;&#x5236;&#x6765;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6C14;&#x5473;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6C14;&#x5473;&#x4E2D;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6D89;&#x53CA;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7;&#x901A;&#x9053;&#x5F00;&#x653E;&#x548C;&#x7ECF;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x7684;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x68AF;&#x7EA7;&#x3002;&#x7ECF;&#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x5F53;&#x524D;&#x751F;&#x4EA7;&#x5916;&#x6392;&#x7684; Cl(-) &#x79BB;&#x5B50;&#x548C;&#x653E;&#x5927;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x3002;Ca(2+) &#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x662F;&#x4ECD;&#x9065;&#x9065;&#x65E0;&#x671F;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4E00;&#x4E9B; bestrophins &#x5DF2;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca(2+) Cl(-) &#x9891;&#x9053;&#x65F6;&#x8868;&#x793A;&#x5F02;&#x6E90;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x55C5;&#x89C9;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;bestrophin-2 (Best2) &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x540D;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x8868;&#x793A;&#x6B63;&#x5728;&#x55C5;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca(2+) Cl(-) &#x901A;&#x9053;&#x5206;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x7F3A;&#x4E4F; Best2 &#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E3A; Best2 &#x76F8;&#x6BD4;&#x55C5;&#x6C14;&#x5473;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x53CD;&#x5E94;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca(2+) Cl(-) &#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) &#x53CA; (KO) &#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x786E;&#x8BA4; Best2 &#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7EA4;&#x6BDB;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6C14;&#x5473;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C; Ca(2+) &#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x7535;&#x6D41;&#x4E0D;&#x662F; WT &#x548C; KO &#x5C0F;&#x9F20;&#x4E4B;&#x95F4;&#x663E;&#x8457;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;Best2 &#x4F3C;&#x4E4E;&#x5E76;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x55C5;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5206;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x9700;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684; Best2 &#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x4E2D;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;

&#x4ECE;&#x7F3A;&#x4E4F; bestrophin 2 &#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x9499;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6C2F;&#x901A;&#x9053;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;

Olfactory sensory neurons use a chloride-based signal amplification mechanism to detect odorants. The binding of odorants to receptors in the cilia of olfactory sensory neurons activates a transduction cascade that involves the opening of cyclic nucleotide-gated channels and the entry of Ca(2+) into the cilia. Ca(2+) activates a Cl(-) current that produces an efflux of Cl(-) ions and amplifies the depolarization. The molecular identity of Ca(2+)-activated Cl(-) channels is still elusive, although some bestrophins have been shown to function as Ca(2+)-activated Cl(-) channels when expressed in heterologous systems. In the olfactory epithelium, bestrophin-2 (Best2) has been indicated as a candidate for being a molecular component of the olfactory Ca(2+)-activated Cl(-) channel. In this study, we have analysed mice lacking Best2. We compared the electrophysiological responses of the olfactory epithelium to odorant stimulation, as well as the properties of Ca(2+)-activated Cl(-) currents in wild-type (WT) and knockout (KO) mice for Best2. Our results confirm that Best2 is expressed in the cilia of olfactory sensory neurons, while odorant responses and Ca(2+)-activated Cl(-) currents were not significantly different between WT and KO mice. Thus, Best2 does not appear to be the main molecular component of the olfactory channel. Further studies are required to determine the function of Best2 in the cilia of olfactory sensory neurons.

Calcium-activated chloride currents in olfactory sensory neurons from mice lacking bestrophin-2.

Olfactifs neurones sensoriels utiliser un m&#xE9;canisme de base de chlorure de signal d&#x26;#39;amplification pour d&#xE9;tecter substances odorantes. La liaison des substances odorantes &#xE0; des r&#xE9;cepteurs dans les franges de neurones sensoriels olfactifs active une cascade de transduction qui implique l&#x26;#39;ouverture de nucl&#xE9;otides cycliques-d&#xE9;pendants canaux et l&#x26;#39;entr&#xE9;e de Ca (2 +) dans les cils. Ca (2 +) active un Cl (-) de courant qui produit un efflux de Cl (-) des ions et amplifie la d&#xE9;polarisation. L&#x26;#39;identit&#xE9; mol&#xE9;culaire de Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) canaux est encore loin d&#x26;#39;, bien que certains bestrophins a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; que la fonction en tant que Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) les canaux lorsqu&#x26;#39;il est exprim&#xE9; dans des syst&#xE8;mes h&#xE9;t&#xE9;rologues. Dans l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium olfactif, bestrophin-2 (Best2) a &#xE9;t&#xE9; indiqu&#xE9; comme &#xE9;tant un candidat pour un composant mol&#xE9;culaire du olfactive Ca (2 +)-actif Cl (-) de canal. Dans cette &#xE9;tude, nous avons analys&#xE9; les souris d&#xE9;pourvues de Best2. Nous avons compar&#xE9; les r&#xE9;ponses &#xE9;lectrophysiologiques de l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium olfactif &#xE0; la stimulation odorante, ainsi que les propri&#xE9;t&#xE9;s de Ca (2 +) des Cl activ&#xE9; (-) les courants chez les souris de type sauvage (WT) et knock-out (KO) pour Best2. Nos r&#xE9;sultats confirment que Best2 est exprim&#xE9; dans les franges de neurones sensoriels olfactifs, tandis que les r&#xE9;ponses odorantes et Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) les courants n&#x26;#39;&#xE9;taient pas significativement diff&#xE9;rents entre WT et souris KO. Ainsi, Best2 ne semble pas &#xEA;tre la composante principale de la cha&#xEE;ne mol&#xE9;culaire olfactive. D&#x26;#39;autres &#xE9;tudes sont n&#xE9;cessaires pour d&#xE9;terminer la fonction de Best2 dans les franges de neurones sensoriels olfactifs.

Courants chlorure de calcium-activ&#xE9;s dans olfactifs neurones sensoriels de souris d&#xE9;ficientes en Bestrophin-2

Olfaktorische sensorische Neuronen verwenden ein Verst&auml;rkungsmechanismus Chlorid basierenden Signal um Geruchsstoffe zu erkennen. Das Binden von Ger&uuml;chen an Rezeptoren in die Flimmerh&auml;rchen der olfaktorischen sensorischen Neuronen aktiviert eine Transduktion-Kaskade, bei der die &Ouml;ffnung der zyklische Nukleotid-Gating-Kan&auml;le und das Inkrafttreten des Ca(2+) die Flimmerh&auml;rchen. Ca(2+) wird eine aktuelle Cl(-), die ein Efflux Cl(-) Ionen produziert und verst&auml;rkt die Depolarisierung aktiviert. Die molekulare Identit&auml;t Cl(-) Ca(2+) aktivierte Kan&auml;le ist noch nicht abzusehen, obwohl einige Bestrophins gezeigt worden sind, die Funktion als Ca(2+) aktivierte Cl(-) Kan&auml;le in heterologen Systemen ausgedr&uuml;ckt. F&uuml;r Molekulare Komponente des olfaktorischen Ca(2+) aktivierte Cl(-) Kanals hat in der olfaktorischen Epithel Bestrophin-2 (Best2) als Kandidat aufgezeigt worden. In dieser Studie haben wir mit M&auml;usen fehlt Best2 analysiert. Wir verglichen die elektrophysiologischen Reaktionen von den olfaktorischen Epithel Odoriermittel Stimulation sowie die Eigenschaften des Ca(2+) aktivierte Cl(-) Str&ouml;mungen in Wildtyp (WT) und Knockout (KO)-M&auml;use f&uuml;r Best2. Unsere Ergebnisse best&auml;tigen, dass die Best2 in die Flimmerh&auml;rchen olfaktorischen sensorischen Neuronen, ausgedr&uuml;ckt wird, w&auml;hrend Odoriermittel Antworten und Ca(2+) aktivierte Cl(-) Str&ouml;mungen nicht signifikant verschieden zwischen WT und KO-M&auml;usen waren. So scheint Best2 nicht die molekulare Hauptkomponente des olfaktorischen Kanals werden. Weitere Studien sind erforderlich, um die Funktion des Best2 in die Flimmerh&auml;rchen der olfaktorischen sensorischen Neuronen zu bestimmen.

Kalzium aktivierte Chlorid Str&ouml;mungen im olfaktorischen sensorischen Neuronen von M&auml;usen fehlt Bestrophin-2.

I neuroni sensoriali olfattivi utilizzano un meccanismo di amplificazione del segnale basata su cloruro di rilevare odorifere. L&#39;associazione di odorizzazione i recettori le ciglia dei neuroni sensoriali olfattivi attiva una cascata di trasduzione che prevede l&#39;apertura di canali di nucleotide-gated cicliche e l&#39;entrata di Ca(2+) le ciglia. CA(2+) attiva una corrente di Cl(-) che produce un efflusso di ioni Cl(-) e amplifica la depolarizzazione. L&#39;identit&agrave; molecolare dei canali attivati dal Ca(2+) Cl(-) &egrave; ancora sfuggente, anche se alcuni bestrophins hanno dimostrato di funzionare come canali Cl(-)-Ca(2+)-attivato quando espressi in sistemi eterologo. Nell&#39;epitelio olfattivo, bestrophin-2 (Best2) &egrave; stato indicato come candidato per essere una componente molecolare del canale attivato Ca(2+) Cl(-) olfattivo. In questo studio, abbiamo analizzato i topi mancanti Best2. Abbiamo confrontato le risposte elettrofisiologiche dell&#39;epitelio olfattivo alla stimolazione odorant, cos&igrave; come le propriet&agrave; delle correnti Cl(-) Ca(2+)-attivato nel wild-type (WT) e topi knockout (KO) per Best2. I nostri risultati confermano che Best2 &egrave; espresso nelle ciglia dei neuroni sensoriali olfattivi, mentre odorant risposte e attivato Ca(2+) Cl(-) correnti non erano significativamente differenti tra topi WT e KO. Cos&igrave;, Best2 non sembra essere il principale componente molecolare del canale olfattivo. Sono necessari ulteriori studi per determinare la funzione di Best2 nelle ciglia dei neuroni sensoriali olfattivi.

Correnti di cloruro di calcio-attivato nei neuroni sensoriali olfattivi da topi privi di bestrophin-2.

&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5302;&#x3044;&#x7269;&#x8CEA;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5869;&#x5316;&#x7269;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5897;&#x5E45;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x4ED8;&#x81ED;&#x5264;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306B;CA&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x90E8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;Cl&#x306E;&#x6D41;&#x51FA;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#xFF08; - &#xFF09;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3059;&#x308B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x3001;Cl&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7570;&#x7A2E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08; - &#xFF09;&#xFF08; - &#xFF09;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;bestrophins&#x304C;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5869;&#x7D20;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x4F9D;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x55C5;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;bestrophin-2&#xFF08;Best2&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x55C5;&#x899A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;Cl&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5019;&#x88DC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Best2&#x3092;&#x6B20;&#x640D;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;Best2&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#xFF08;KO&#xFF09;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF08;WT&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5302;&#x3044;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x55C5;&#x899A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;CA&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;Best2&#x306F;&#x3001;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3089;&#x304F;&#x5302;&#x3044;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5869;&#x7D20;&#xFF08; - &#xFF09;&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;WT&#x3068;KO&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9593;&#x3067;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Best2&#x306F;&#x3001;&#x55C5;&#x899A;&#x8DEF;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x304C;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306E;Best2&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Bestrophin-2&#x3092;&#x6B20;&#x640D;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5869;&#x5316;&#x96FB;&#x6D41;

&#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0; &#xC5FC;&#xD654; &#xAE30;&#xBC18; &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; odorants&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0;. Odorants &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xCC44;&#xB110; &#xC5F4;&#xACE0; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; ca(2+)&#xC758; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBCC0;&#xD658; &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ca(2+)&#xB294; Cl(-) &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xACBD;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xACE0; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558;&#xB294; depolarization Cl(-) &#xD604;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; id&#xB294; &#xC77C;&#xBD80; bestrophins Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xCC44;&#xB110; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xC560;&#xB9E4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6C4; &#xAC01; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0;&#xC11C; bestrophin-2 (Best2) &#xD6C4; &#xAC01; Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC950; Best2 &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC6B0;&#xB9AC; Best2 odorant &#xC790;&#xADF9;, &#xD6C4; &#xAC01; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC758; electrophysiological &#xC751;&#xB2F5; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; Cl(-) Ca(2+) &#xD65C;&#xC131; &#xC804;&#xB958; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT) &#xBC0F; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; (KO) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC18D;&#xC131; &#xBE44;&#xAD50;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD655;&#xC778; Best2 odorant &#xC751;&#xB2F5; &#xBC0F; Cl(-) Ca(2+) &#xD65C;&#xC131; &#xC804;&#xB958; &#xD588;&#xB2E4; WT &#xBC0F; &#xCF54; &#xC950; &#xC0AC;&#xC774; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Best2 &#xD6C4; &#xAC01; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC218;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xAC00; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; Best2 &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Bestrophin-2 &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC5FC;&#xD654; &#xCE7C;&#xC298; &#xD65C;&#xC131; &#xC804;&#xB958;.

Neuronas sensoriales olfativas utilizar un mecanismo de se&#xF1;ales a base de cloruro de amplificaci&#xF3;n para detectar sustancias odor&#xED;feras. La uni&#xF3;n de los odorantes a los receptores en los cilios de las neuronas sensoriales olfativas se activa una cascada de transducci&#xF3;n que implica la apertura de los nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos-canales con compuertas y la entrada de Ca (2 +) en los cilios. Ca (2 +) activa un Cl (-) la corriente que produce un flujo de salida de Cl (-) iones y amplifica la despolarizaci&#xF3;n. La identidad molecular de Ca (2 +) activada por Cl (-) canales es todav&#xED;a dif&#xED;cil de alcanzar, aunque algunos bestrophins han demostrado que funcionan como Ca (2 +) activada por Cl (-) canales cuando se expresan en sistemas heter&#xF3;logos. En el epitelio olfatorio, bestrofina-2 (Best2) ha sido indicado como un candidato para ser un componente molecular del olfato Ca (2 +) activada por Cl (-) del canal. En este estudio, hemos analizado los ratones que carecen Best2. Se compararon las respuestas electrofisiol&#xF3;gicas del epitelio olfativo a la estimulaci&#xF3;n olor, as&#xED; como las propiedades de Ca (2 +) activada por Cl (-) las corrientes en los ratones de tipo salvaje (WT) y knockout (KO) para Best2. Nuestros resultados confirman que Best2 se expresa en los cilios de las neuronas sensoriales olfativas, mientras que las respuestas de olor y Ca (2 +) activada por Cl (-) las corrientes no fueron significativamente diferentes entre el TE y ratones KO. As&#xED;, Best2 no parece ser el principal componente molecular del canal olfatorio. Se requieren estudios adicionales para determinar la funci&#xF3;n de Best2 de los cilios de las neuronas sensoriales olfativas.

Activados por calcio-Corrientes de cloruro en las neuronas sensoriales olfativas de ratones que carecen bestrofina-2

Ca(2+) &#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x51E0;&#x79CD;&#x751F;&#x7406;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x55C5;&#x89C9;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x53D1;&#x6325;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5176;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x76EE;&#x524D;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x6210;&#x5458;&#x8DE8;&#x819C; 16 &#xFF08;TMEM16&#xFF0C;&#x4E5F;&#x547D;&#x540D;&#x4E3A; anoctamin&#xFF09; &#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x5F62;&#x5F0F;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca(2+) Cl(-) &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x55C5;&#x89C9;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x63D0;&#x8BAE; TMEM16b/anoctamin2&#xFF0C;Ca(2+) &#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x9891;&#x9053;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5206;&#x5B50;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x5C1A;&#x672A;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x672C;&#x673A;&#x548C;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7528;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x672C;&#x673A;&#x901A;&#x9053;&#x9694;&#x79BB;&#x5C0F;&#x9F20;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x548C;&#x4E0E;&#x9F20;&#x6807; TMEM16b/anoctamin2 &#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5B83;&#x4EEC;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76F4;&#x63A5;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x53EF;&#x91CD;&#x73B0;&#x7ECF;&#x80DE;&#x5185;&#x6D53;&#x5EA6;&#x8DF3;&#x7B3C;&#x7ECF; photorelease &#x7D22;&#x53D6;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x80DE;&#x5916;&#x963B;&#x585E;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x548C;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;Cl(-) &#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242; niflumic &#x9178;&#x3001; 5-&#x785D;&#x57FA;-2-(3 phenylpropylamino) &#x82EF;&#x7532;&#x9178; (NPPB) &#x548C;&#x5206;&#x5E03;&#x5F0F;&#x5165;&#x4FB5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5728;&#x819C;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x4FA7;&#x5E94;&#x7528;&#x9020;&#x6210;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8861;&#x91CF;&#x5916;&#x90E8;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#xFF0C;&#x5E76;&#x900F;&#x9732;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;&#x67D0;&#x4E9B;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x6F5C;&#x5728;&#x9006;&#x8F6C;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x5316;&#x4E0E;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x73AF;&#x5316;&#x9176; III &#x5728;&#x55C5;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x6B63; TMEM16b/anoctamin2&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x4E2D;&#x6D4B;&#x5F97;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x662F;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x662F;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x548C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E; TMEM16b/anoctamin2 &#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x672C;&#x673A;&#x55C5; Ca(2+) &#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x5F53;&#x524D;&#x4E3B;&#x8981;&#x4E9A;&#x3002;

&#x9499;&#x6D53;&#x5EA6;&#x8DF3;&#x8F6C;&#x663E;&#x793A;&#x9F20;&#x6807;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C; TMEM16b &#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE; 293T &#x7EC6;&#x80DE;&#x9499;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6C2F;&#x79BB;&#x5B50;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x3002;

Ca(2+)-activated Cl(-) channels play relevant roles in several physiological processes, including olfactory transduction, but their molecular identity is still unclear. Recent evidence suggests that members of the transmembrane 16 (TMEM16, also named anoctamin) family form Ca(2+)-activated Cl(-) channels in several cell types. In vertebrate olfactory transduction, TMEM16b/anoctamin2 has been proposed as the major molecular component of Ca(2+)-activated Cl(-) channels. However, a comparison of the functional properties in the whole-cell configuration between the native and the candidate channel has not yet been performed. In this study, we have used the whole-cell voltage-clamp technique to measure functional properties of the native channel in mouse isolated olfactory sensory neurons and compare them with those of mouse TMEM16b/anoctamin2 expressed in HEK 293T cells. We directly activated channels by rapid and reproducible intracellular Ca(2+) concentration jumps obtained from photorelease of caged Ca(2+) and determined extracellular blocking properties and anion selectivity of the channels. We found that the Cl(-) channel blockers niflumic acid, 5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)benzoic acid (NPPB) and DIDS applied at the extracellular side of the membrane caused a similar inhibition of the two currents. Anion selectivity measured exchanging external ions and revealed that, in both types of currents, the reversal potential for some anions was time dependent. Furthermore, we confirmed by immunohistochemistry that TMEM16b/anoctamin2 largely co-localized with adenylyl cyclase III at the surface of the olfactory epithelium. Therefore, we conclude that the measured electrophysiological properties in the whole-cell configuration are largely similar, and further indicate that TMEM16b/anoctamin2 is likely to be a major subunit of the native olfactory Ca(2+)-activated Cl(-) current.

Calcium concentration jumps reveal dynamic ion selectivity of calcium-activated chloride currents in mouse olfactory sensory neurons and TMEM16b-transfected HEK 293T cells.

Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) canaux jouent un r&#xF4;le pertinentes dans plusieurs processus physiologiques, y compris la transduction olfactive, mais leur identit&#xE9; mol&#xE9;culaire n&#x26;#39;est pas encore clair. Des donn&#xE9;es r&#xE9;centes sugg&#xE8;rent que les membres du transmembranaire 16 (TMEM16, &#xE9;galement nomm&#xE9; anoctamin) forme la famille Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) des canaux dans plusieurs types cellulaires. Dans la transduction olfactive des vert&#xE9;br&#xE9;s, TMEM16b/anoctamin2 a &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9; comme la principale composante mol&#xE9;culaire de Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) canaux. Cependant, une comparaison des propri&#xE9;t&#xE9;s fonctionnelles de la configuration &#xE0; cellules enti&#xE8;res entre l&#x26;#39;origine et le canal candidat n&#x26;#39;a pas encore &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9;e. Dans cette &#xE9;tude, nous avons utilis&#xE9; l&#x26;#39;ensemble des cellules du voltage-clamp technique pour mesurer les propri&#xE9;t&#xE9;s fonctionnelles du canal natif chez la souris isol&#xE9; olfactifs neurones sensoriels et les comparer avec ceux de la souris TMEM16b/anoctamin2 exprim&#xE9; dans des cellules HEK 293T. Nous activ&#xE9; directement par les canaux rapide et reproductible intracellulaire de Ca (2 +) sauts de concentration obtenus &#xE0; partir de photos&#xE9;paration cage Ca (2 +) et d&#xE9;termin&#xE9;es extracellulaires des propri&#xE9;t&#xE9;s de blocage et la s&#xE9;lectivit&#xE9; des canaux d&#x26;#39;anions. On a constat&#xE9; que l&#x26;#39;Cl (-) de blocage des canaux acide niflumique, 5-nitro-2-(3-ph&#xE9;nylpropylamino) acide benzo&#xEF;que (NPPB) et DIDS appliqu&#xE9;s sur le c&#xF4;t&#xE9; de la membrane extracellulaire provoque une inhibition similaire des deux courants. S&#xE9;lectivit&#xE9; anionique mesur&#xE9;e &#xE9;change d&#x26;#39;ions externes et a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que, dans les deux types de courants, le potentiel d&#x26;#39;inversion pour certains anions &#xE9;tait d&#xE9;pendant du temps. En outre, nous avons confirm&#xE9; par immunohistochimie que TMEM16b/anoctamin2 en grande partie co-localis&#xE9;s avec ad&#xE9;nylcyclase III &#xE0; la surface de l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium olfactif. Par cons&#xE9;quent, nous concluons que les propri&#xE9;t&#xE9;s mesur&#xE9;es &#xE9;lectrophysiologiques dans la configuration cellule enti&#xE8;re sont largement similaires, et indiquent en outre que TMEM16b/anoctamin2 est susceptible d&#x26;#39;&#xEA;tre une sous-unit&#xE9; majeure de l&#x26;#39;indig&#xE8;ne Ca olfactive (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) en cours.

Sauts de concentration de calcium Reveal s&#xE9;lectivit&#xE9; ionique dynamique des courants de chlorure de calcium-activ&#xE9;s dans olfactif de la souris les neurones sensoriels et TMEM16b transfect&#xE9;es cellules HEK 293T

Ca(2+) aktivierte Cl(-) Kan&auml;le relevante Rollen in verschiedene physiologische Prozesse, einschlie&szlig;lich olfaktorischen Signaltransduktion, spielen, aber ihre molekulare Identit&auml;t ist noch unklar. J&uuml;ngste Hinweise, dass Mitglieder der Transmembran 16 (TMEM16, auch ANO1 genannt) Familie Form Cl(-) Ca(2+) aktivierte Kan&auml;le in mehreren-Typen Handy. In vertebrate olfaktorischen Signaltransduktion wurde TMEM16b/anoctamin2 als molekulare Hauptkomponente der Cl(-) Ca(2+) aktivierte Kan&auml;le vorgeschlagen. Jedoch hat ein Vergleich der funktionellen Eigenschaften in der ganz-Zell Konfiguration zwischen systemeigenen und dem Kandidaten-Kanal noch nicht durchgef&uuml;hrt wurde. In dieser Studie haben wir die ganze Zelle Spannung Klemm-Technik verwendet, um funktionelle Eigenschaften des nativen Kanals in Maus isoliert olfaktorischen sensorischen Neuronen zu messen und vergleichen Sie sie mit der Maus TMEM16b/anoctamin2 in HEK 293T Zellen ausgedr&uuml;ckt. Wir aktiviert direkt Kan&auml;le durch schnelle und reproduzierbare intrazellul&auml;re Ca(2+) Konzentration Spr&uuml;nge aus Photorelease der K&auml;fig Ca(2+) und extrazellul&auml;re blockierende Eigenschaften und Anion Selektivit&auml;t der Kan&auml;le bestimmt. Wir fanden, dass die Cl(-) Kanal Blocker Niflumic S&auml;ure, 5-Nitro - 2-(3-Phenylpropylamino) Benzoes&auml;ure (NPPB) und did angewendet an der extrazellul&auml;ren Seite der Membran verursacht eine &auml;hnliche Hemmung der zwei Str&ouml;me. Anion Selektivit&auml;t Austausch von externe Ionen gemessen und ergab, dass beide Arten von Str&ouml;mungen, die Umkehrung Potenzial f&uuml;r einige Anionen zeitabh&auml;ngig war. Dar&uuml;ber hinaus best&auml;tigt wir durch Immunhistochemie, dass TMEM16b/anoctamin2 mit Fehlfunktion Guanylatcyclase III an der Oberfl&auml;che des olfaktorischen Epithel weitgehend co-localized. Daher schlie&szlig;en wir, dass die gemessenen elektrophysiologischen Eigenschaften in der ganz-Zell Konfiguration weitgehend &auml;hnlich sind, und weiter darauf hinweisen, dass TMEM16b/anoctamin2 eine gro&szlig;e Untereinheit des die native olfaktorischen Ca(2+) aktivierte Cl(-) aktuelle sein d&uuml;rfte.

Kalzium-Konzentration-Spr&uuml;nge zeigen dynamische Ion Selektivit&auml;t aktivierte Kalzium-Chlorid Str&ouml;mungen in Maus olfaktorischen sensorischen Neuronen und TMEM16b transfected HEK 293T Zellen.

Attivato CA(2+) Cl(-) canali giocano un ruolo rilevante in diversi processi fisiologici, tra cui trasduzione olfattiva, ma la loro identit&agrave; molecolare non &egrave; ancora chiaro. Recenti evidenze suggeriscono che membri dei canali attivati Ca(2+) Cl(-) forma familiare (TMEM16, anche denominato anoctamin) 16 transmembrana in diversi tipi di cella. In vertebrati trasduzione olfattiva, TMEM16b/anoctamin2 &egrave; stato proposto come l&#39;importante componente molecolare dei canali attivati da Ca(2+) Cl(-). Tuttavia, un confronto tra le propriet&agrave; funzionali nella configurazione di cellule intere tra i nativi e il canale del candidato non &egrave; stato ancora eseguito. In questo studio, abbiamo utilizzato la tecnica di cellule intere tensione-pinza per misurare le propriet&agrave; funzionali del canale nativo nei neuroni sensoriali olfattivi del mouse isolato e confrontarle con quelle del mouse TMEM16b/anoctamin2 espresso nelle HEK 293T cellule. Abbiamo attivato direttamente canali di rapido e riproducibile Ca(2+) intracellulare concentrazione salti ottenuti da photorelease di Ca(2+) in gabbia e determinato extracellulare blocco propriet&agrave; e anione selettivit&agrave; dei canali. Abbiamo scoperto che l&#39;acido di niflumic di bloccanti del canale Cl(-), 5-nitro - 2-(3-phenylpropylamino) benzoico acido (NPPB) e DIDS applicato al lato extracellulare della membrana ha causato un&#39;inibizione simile delle due correnti. Selettivit&agrave; anionico misurato lo scambio di ioni esterni e ha rivelato che, in entrambi i tipi di correnti, l&#39;inversione del potenziale per alcuni anioni era tempo dipendente. Inoltre, abbiamo confermato dall&#39;immunoistochimica co-ha che TMEM16b/anoctamin2 in gran parte localizzato con adenil ciclasi III alla superficie dell&#39;epitelio olfattivo. Pertanto, concludere che le propriet&agrave; elettrofisiologiche misurate nella configurazione di cellule intere sono in gran parte simili e ulteriormente indicano che TMEM16b/anoctamin2 &egrave; probabile che sia una subunit&agrave; maggiore del nativo olfattive attivato Ca(2+) Cl(-) corrente.

Calcio concentrazione salti rivelano selettivit&agrave; dinamica dello ione di correnti di cloruro di calcio-attivato in neuroni sensoriali olfattivi del mouse e TMEM16b-transfected HEK 293T cellule.

&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5869;&#x7D20;&#xFF08; - &#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x55C5;&#x899A;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30FC;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x8CAB;&#x901A;16&#xFF08;TMEM16&#x3001;&#x307E;&#x305F;anoctamin&#x540D;&#x524D;&#xFF09;&#x5BB6;&#x65CF;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#xFF08; - &#xFF09;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x55C5;&#x899A;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x3001;TMEM16b/anoctamin2&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x6210;&#x5206;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3001;&#x5019;&#x88DC;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x9593;&#x306E;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x69CB;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x55C5;&#x899A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;HEK 293T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x767A;&#x73FE;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;TMEM16b/anoctamin2&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5168;&#x30BB;&#x30EB;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3068;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x906E;&#x65AD;&#x7279;&#x6027;&#x306E;photorelease&#x3068;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;&#x30CB;&#x30D5;&#x30EB;&#x30E0;&#x9178;&#x3001;5  - &#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;-2  - &#xFF08;3  -  phenylpropylamino&#xFF09;&#x5B89;&#x606F;&#x9999;&#x9178;&#xFF08;NPPB&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x819C;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x3067;&#x9069;&#x7528;DIDS&#x3064;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;Cl&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3068;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30A2;&#x30CB;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x9006;&#x8EE2;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306F;&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;TMEM16b/anoctamin2&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x55C5;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EA;&#x30EB;&#x30B7;&#x30AF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;III&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#xFF08; - &#xFF09;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x69CB;&#x6210;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x200B;&#x200B;&#x305F;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;TMEM16b/anoctamin2&#x306F;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x55C5;&#x899A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;TMEM16b&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;HEK 293T&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5869;&#x5316;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

Cl(-) &#xCC44;&#xB110; Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4; &#xAC01; &#xBCC0;&#xD658; &#xB4F1; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; 16 (TMEM16, anoctamin&#xC774; &#xB77C;&#xACE0;&#xB3C4; &#xD568;) &#xAC00;&#xC871; &#xD615;&#xD0DC; Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xCC44;&#xB110; &#xBA64;&#xBC84; &#xD615;&#xC2DD; &#xC140; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;. &#xCC99;&#xCD94; &#xD6C4; &#xAC01; &#xBCC0;&#xD658;, TMEM16b/anoctamin2 Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC640; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xCC44;&#xB110; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xAD6C;&#xC131; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xB294; &#xC544;&#xC9C1; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC808;&#xC5F0; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xBCF8; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; TMEM16b/anoctamin2 HEK 293T &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xBE44;&#xAD50; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xC7AC;&#xD604;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xC810;&#xD504; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; ca(2+)&#xC758; photorelease&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xACE0; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xCC28;&#xB2E8; &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; Cl(-) &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C; niflumic &#xC0B0;, 5-&#xB2C8;&#xD2B8;&#xB85C;-2-(3-phenylpropylamino) &#xBCA4;&#xC870;&#xC0B0; (NPPB) DIDS &#xB9C9;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xB450; &#xC804;&#xB958; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xC678;&#xBD80; &#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0;, &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC804;&#xB958;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xBD80; &#xC74C;&#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBC18;&#xC804;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB984;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; TMEM16b/anoctamin2&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; &#xD6C4; &#xAC01; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; adenylyl cyclase III&#xC640; co-localized &#xAE30;&#xC220;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xACB0;&#xB860; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; electrophysiological &#xC18D;&#xC131; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xACE0; &#xCD94;&#xAC00; TMEM16b/anoctamin2&#xB294; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD6C4; &#xAC01; Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB420; &#xAC83; &#xC784;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCE7C;&#xC298; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC810;&#xD504; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; TMEM16b &#xD398; HEK 293T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC5FC;&#xD654; &#xCE7C;&#xC298; &#xD65C;&#xC131; &#xC804;&#xB958; &#xB3D9;&#xC801; &#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xACF5;&#xAC1C;.

Ca (2 +) activada por Cl (-) los canales juegan un papel relevante en varios procesos fisiol&#xF3;gicos, incluyendo la transducci&#xF3;n olfativa, pero su identidad molecular a&#xFA;n no est&#xE1; claro. La evidencia reciente sugiere que los miembros de la transmembrana de 16 (TMEM16, tambi&#xE9;n llamado anoctamin) de la familia la forma de Ca (2 +) activada por Cl (-) canales en varios tipos de c&#xE9;lulas. En la transducci&#xF3;n olfativa vertebrado, TMEM16b/anoctamin2 ha sido propuesto como el principal componente molecular de Ca (2 +)-activado Cl (-) canales. Sin embargo, una comparaci&#xF3;n de las propiedades funcionales en la configuraci&#xF3;n de c&#xE9;lula completa entre el nativo y el canal de candidato a&#xFA;n no se ha realizado. En este estudio, hemos utilizado el conjunto de c&#xE9;lulas voltaje-clamp t&#xE9;cnica para medir las propiedades funcionales del canal nativo en el rat&#xF3;n aislado neuronas sensoriales olfativas, y compararlas con las de rat&#xF3;n TMEM16b/anoctamin2 expresado en c&#xE9;lulas HEK 293T. Hemos activado directamente por los canales de calcio intracelular r&#xE1;pido y reproducible (2 +) saltos de concentraci&#xF3;n obtenidos a partir de photorelease de la jaula de Ca (2 +) y de determinadas propiedades extracelulares de bloqueo y la selectividad de los canales de aniones. Hemos encontrado que el Cl (-) bloqueadores de los canales de &#xE1;cido nifl&#xFA;mico, 5-nitro-2-(3-fenilpropilamino) de &#xE1;cido benzoico (NPPB) y DIDS aplicadas en el lado extracelular de la membrana causado una inhibici&#xF3;n similar de las dos corrientes. La selectividad de aniones mide el intercambio de iones externos y revel&#xF3; que, en ambos tipos de corrientes, la inversi&#xF3;n potencial de algunos aniones fue dependiente del tiempo. Por otra parte, se confirm&#xF3; mediante t&#xE9;cnicas de inmunohistoqu&#xED;mica que TMEM16b/anoctamin2 en gran medida co-localizada con la adenilil ciclasa III, en la superficie del epitelio olfatorio. Por lo tanto, se concluye que las propiedades medidas electrofisiol&#xF3;gicas en la configuraci&#xF3;n de c&#xE9;lulas enteras son muy similares, e indican que TMEM16b/anoctamin2 es probable que sea una subunidad principal de la nativa Ca olfatorio (2 +) activada por Cl (-) actual.

Saltos concentraci&#xF3;n de calcio i&#xF3;nico Reveal Selectividad din&#xE1;mica de las corrientes de cloruro de calcio activados en las neuronas sensoriales olfativas de rat&#xF3;n y TMEM16b transfecci&#xF3;n de c&#xE9;lulas HEK 293T

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Regulation of bestrophins by Ca2+: a theoretical and experimental study. PloS one\| PubMed ID: 19262692	2009
Calcium-activated chloride currents in olfactory sensory neurons from mice lacking bestrophin-2. The Journal of physiology\| PubMed ID: 19622610	2009
Calcium concentration jumps reveal dynamic ion selectivity of calcium-activated chloride currents in mouse olfactory sensory neurons and TMEM16b-transfected HEK 293T cells. The Journal of physiology\| PubMed ID: 20837642	2010

Anna Boccaccio

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