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Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

International School for Advanced Studies

&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6C2F;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x653E;&#x5927;&#x673A;&#x5236;&#x6765;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6C14;&#x5473;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6C14;&#x5473;&#x4E2D;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6D89;&#x53CA;&#x73AF;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x95E8;&#x63A7;&#x901A;&#x9053;&#x5F00;&#x653E;&#x548C;&#x7ECF;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x7684;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x68AF;&#x7EA7;&#x3002;&#x7ECF;&#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x5F53;&#x524D;&#x751F;&#x4EA7;&#x5916;&#x6392;&#x7684; Cl(-) &#x79BB;&#x5B50;&#x548C;&#x653E;&#x5927;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x3002;Ca(2+) &#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x662F;&#x4ECD;&#x9065;&#x9065;&#x65E0;&#x671F;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4E00;&#x4E9B; bestrophins &#x5DF2;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca(2+) Cl(-) &#x9891;&#x9053;&#x65F6;&#x8868;&#x793A;&#x5F02;&#x6E90;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x55C5;&#x89C9;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;bestrophin-2 (Best2) &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x540D;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x8868;&#x793A;&#x6B63;&#x5728;&#x55C5;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca(2+) Cl(-) &#x901A;&#x9053;&#x5206;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x7F3A;&#x4E4F; Best2 &#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E3A; Best2 &#x76F8;&#x6BD4;&#x55C5;&#x6C14;&#x5473;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x53CD;&#x5E94;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca(2+) Cl(-) &#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) &#x53CA; (KO) &#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x786E;&#x8BA4; Best2 &#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7EA4;&#x6BDB;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6C14;&#x5473;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C; Ca(2+) &#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x7535;&#x6D41;&#x4E0D;&#x662F; WT &#x548C; KO &#x5C0F;&#x9F20;&#x4E4B;&#x95F4;&#x663E;&#x8457;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;Best2 &#x4F3C;&#x4E4E;&#x5E76;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x55C5;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5206;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x9700;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684; Best2 &#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x4E2D;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;

&#x4ECE;&#x7F3A;&#x4E4F; bestrophin 2 &#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x9499;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6C2F;&#x901A;&#x9053;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;

Olfactory sensory neurons use a chloride-based signal amplification mechanism to detect odorants. The binding of odorants to receptors in the cilia of olfactory sensory neurons activates a transduction cascade that involves the opening of cyclic nucleotide-gated channels and the entry of Ca(2+) into the cilia. Ca(2+) activates a Cl(-) current that produces an efflux of Cl(-) ions and amplifies the depolarization. The molecular identity of Ca(2+)-activated Cl(-) channels is still elusive, although some bestrophins have been shown to function as Ca(2+)-activated Cl(-) channels when expressed in heterologous systems. In the olfactory epithelium, bestrophin-2 (Best2) has been indicated as a candidate for being a molecular component of the olfactory Ca(2+)-activated Cl(-) channel. In this study, we have analysed mice lacking Best2. We compared the electrophysiological responses of the olfactory epithelium to odorant stimulation, as well as the properties of Ca(2+)-activated Cl(-) currents in wild-type (WT) and knockout (KO) mice for Best2. Our results confirm that Best2 is expressed in the cilia of olfactory sensory neurons, while odorant responses and Ca(2+)-activated Cl(-) currents were not significantly different between WT and KO mice. Thus, Best2 does not appear to be the main molecular component of the olfactory channel. Further studies are required to determine the function of Best2 in the cilia of olfactory sensory neurons.

Calcium-activated chloride currents in olfactory sensory neurons from mice lacking bestrophin-2.

Olfactifs neurones sensoriels utiliser un m&#xE9;canisme de base de chlorure de signal d&#x26;#39;amplification pour d&#xE9;tecter substances odorantes. La liaison des substances odorantes &#xE0; des r&#xE9;cepteurs dans les franges de neurones sensoriels olfactifs active une cascade de transduction qui implique l&#x26;#39;ouverture de nucl&#xE9;otides cycliques-d&#xE9;pendants canaux et l&#x26;#39;entr&#xE9;e de Ca (2 +) dans les cils. Ca (2 +) active un Cl (-) de courant qui produit un efflux de Cl (-) des ions et amplifie la d&#xE9;polarisation. L&#x26;#39;identit&#xE9; mol&#xE9;culaire de Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) canaux est encore loin d&#x26;#39;, bien que certains bestrophins a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; que la fonction en tant que Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) les canaux lorsqu&#x26;#39;il est exprim&#xE9; dans des syst&#xE8;mes h&#xE9;t&#xE9;rologues. Dans l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium olfactif, bestrophin-2 (Best2) a &#xE9;t&#xE9; indiqu&#xE9; comme &#xE9;tant un candidat pour un composant mol&#xE9;culaire du olfactive Ca (2 +)-actif Cl (-) de canal. Dans cette &#xE9;tude, nous avons analys&#xE9; les souris d&#xE9;pourvues de Best2. Nous avons compar&#xE9; les r&#xE9;ponses &#xE9;lectrophysiologiques de l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium olfactif &#xE0; la stimulation odorante, ainsi que les propri&#xE9;t&#xE9;s de Ca (2 +) des Cl activ&#xE9; (-) les courants chez les souris de type sauvage (WT) et knock-out (KO) pour Best2. Nos r&#xE9;sultats confirment que Best2 est exprim&#xE9; dans les franges de neurones sensoriels olfactifs, tandis que les r&#xE9;ponses odorantes et Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) les courants n&#x26;#39;&#xE9;taient pas significativement diff&#xE9;rents entre WT et souris KO. Ainsi, Best2 ne semble pas &#xEA;tre la composante principale de la cha&#xEE;ne mol&#xE9;culaire olfactive. D&#x26;#39;autres &#xE9;tudes sont n&#xE9;cessaires pour d&#xE9;terminer la fonction de Best2 dans les franges de neurones sensoriels olfactifs.

Courants chlorure de calcium-activ&#xE9;s dans olfactifs neurones sensoriels de souris d&#xE9;ficientes en Bestrophin-2

Olfaktorische sensorische Neuronen verwenden ein Verst&auml;rkungsmechanismus Chlorid basierenden Signal um Geruchsstoffe zu erkennen. Das Binden von Ger&uuml;chen an Rezeptoren in die Flimmerh&auml;rchen der olfaktorischen sensorischen Neuronen aktiviert eine Transduktion-Kaskade, bei der die &Ouml;ffnung der zyklische Nukleotid-Gating-Kan&auml;le und das Inkrafttreten des Ca(2+) die Flimmerh&auml;rchen. Ca(2+) wird eine aktuelle Cl(-), die ein Efflux Cl(-) Ionen produziert und verst&auml;rkt die Depolarisierung aktiviert. Die molekulare Identit&auml;t Cl(-) Ca(2+) aktivierte Kan&auml;le ist noch nicht abzusehen, obwohl einige Bestrophins gezeigt worden sind, die Funktion als Ca(2+) aktivierte Cl(-) Kan&auml;le in heterologen Systemen ausgedr&uuml;ckt. F&uuml;r Molekulare Komponente des olfaktorischen Ca(2+) aktivierte Cl(-) Kanals hat in der olfaktorischen Epithel Bestrophin-2 (Best2) als Kandidat aufgezeigt worden. In dieser Studie haben wir mit M&auml;usen fehlt Best2 analysiert. Wir verglichen die elektrophysiologischen Reaktionen von den olfaktorischen Epithel Odoriermittel Stimulation sowie die Eigenschaften des Ca(2+) aktivierte Cl(-) Str&ouml;mungen in Wildtyp (WT) und Knockout (KO)-M&auml;use f&uuml;r Best2. Unsere Ergebnisse best&auml;tigen, dass die Best2 in die Flimmerh&auml;rchen olfaktorischen sensorischen Neuronen, ausgedr&uuml;ckt wird, w&auml;hrend Odoriermittel Antworten und Ca(2+) aktivierte Cl(-) Str&ouml;mungen nicht signifikant verschieden zwischen WT und KO-M&auml;usen waren. So scheint Best2 nicht die molekulare Hauptkomponente des olfaktorischen Kanals werden. Weitere Studien sind erforderlich, um die Funktion des Best2 in die Flimmerh&auml;rchen der olfaktorischen sensorischen Neuronen zu bestimmen.

Kalzium aktivierte Chlorid Str&ouml;mungen im olfaktorischen sensorischen Neuronen von M&auml;usen fehlt Bestrophin-2.

I neuroni sensoriali olfattivi utilizzano un meccanismo di amplificazione del segnale basata su cloruro di rilevare odorifere. L&#39;associazione di odorizzazione i recettori le ciglia dei neuroni sensoriali olfattivi attiva una cascata di trasduzione che prevede l&#39;apertura di canali di nucleotide-gated cicliche e l&#39;entrata di Ca(2+) le ciglia. CA(2+) attiva una corrente di Cl(-) che produce un efflusso di ioni Cl(-) e amplifica la depolarizzazione. L&#39;identit&agrave; molecolare dei canali attivati dal Ca(2+) Cl(-) &egrave; ancora sfuggente, anche se alcuni bestrophins hanno dimostrato di funzionare come canali Cl(-)-Ca(2+)-attivato quando espressi in sistemi eterologo. Nell&#39;epitelio olfattivo, bestrophin-2 (Best2) &egrave; stato indicato come candidato per essere una componente molecolare del canale attivato Ca(2+) Cl(-) olfattivo. In questo studio, abbiamo analizzato i topi mancanti Best2. Abbiamo confrontato le risposte elettrofisiologiche dell&#39;epitelio olfattivo alla stimolazione odorant, cos&igrave; come le propriet&agrave; delle correnti Cl(-) Ca(2+)-attivato nel wild-type (WT) e topi knockout (KO) per Best2. I nostri risultati confermano che Best2 &egrave; espresso nelle ciglia dei neuroni sensoriali olfattivi, mentre odorant risposte e attivato Ca(2+) Cl(-) correnti non erano significativamente differenti tra topi WT e KO. Cos&igrave;, Best2 non sembra essere il principale componente molecolare del canale olfattivo. Sono necessari ulteriori studi per determinare la funzione di Best2 nelle ciglia dei neuroni sensoriali olfattivi.

Correnti di cloruro di calcio-attivato nei neuroni sensoriali olfattivi da topi privi di bestrophin-2.

&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5302;&#x3044;&#x7269;&#x8CEA;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5869;&#x5316;&#x7269;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5897;&#x5E45;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x4ED8;&#x81ED;&#x5264;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x74B0;&#x72B6;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306B;CA&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x90E8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;Cl&#x306E;&#x6D41;&#x51FA;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#xFF08; - &#xFF09;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3059;&#x308B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x3001;Cl&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7570;&#x7A2E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08; - &#xFF09;&#xFF08; - &#xFF09;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;bestrophins&#x304C;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5869;&#x7D20;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x4F9D;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x55C5;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;bestrophin-2&#xFF08;Best2&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x55C5;&#x899A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;Cl&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5019;&#x88DC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Best2&#x3092;&#x6B20;&#x640D;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;Best2&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#xFF08;KO&#xFF09;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF08;WT&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5302;&#x3044;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x55C5;&#x899A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;CA&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;Best2&#x306F;&#x3001;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3089;&#x304F;&#x5302;&#x3044;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5869;&#x7D20;&#xFF08; - &#xFF09;&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;WT&#x3068;KO&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9593;&#x3067;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Best2&#x306F;&#x3001;&#x55C5;&#x899A;&#x8DEF;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x304C;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306E;Best2&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Bestrophin-2&#x3092;&#x6B20;&#x640D;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5869;&#x5316;&#x96FB;&#x6D41;

&#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0; &#xC5FC;&#xD654; &#xAE30;&#xBC18; &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; odorants&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0;. Odorants &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xCC44;&#xB110; &#xC5F4;&#xACE0; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; ca(2+)&#xC758; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBCC0;&#xD658; &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ca(2+)&#xB294; Cl(-) &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xACBD;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xACE0; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558;&#xB294; depolarization Cl(-) &#xD604;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; id&#xB294; &#xC77C;&#xBD80; bestrophins Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xCC44;&#xB110; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xC560;&#xB9E4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6C4; &#xAC01; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0;&#xC11C; bestrophin-2 (Best2) &#xD6C4; &#xAC01; Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC950; Best2 &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC6B0;&#xB9AC; Best2 odorant &#xC790;&#xADF9;, &#xD6C4; &#xAC01; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC758; electrophysiological &#xC751;&#xB2F5; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; Cl(-) Ca(2+) &#xD65C;&#xC131; &#xC804;&#xB958; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT) &#xBC0F; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; (KO) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC18D;&#xC131; &#xBE44;&#xAD50;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD655;&#xC778; Best2 odorant &#xC751;&#xB2F5; &#xBC0F; Cl(-) Ca(2+) &#xD65C;&#xC131; &#xC804;&#xB958; &#xD588;&#xB2E4; WT &#xBC0F; &#xCF54; &#xC950; &#xC0AC;&#xC774; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Best2 &#xD6C4; &#xAC01; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC218;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xAC00; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;&#xC5D0; Best2 &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Bestrophin-2 &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC5FC;&#xD654; &#xCE7C;&#xC298; &#xD65C;&#xC131; &#xC804;&#xB958;.

Neuronas sensoriales olfativas utilizar un mecanismo de se&#xF1;ales a base de cloruro de amplificaci&#xF3;n para detectar sustancias odor&#xED;feras. La uni&#xF3;n de los odorantes a los receptores en los cilios de las neuronas sensoriales olfativas se activa una cascada de transducci&#xF3;n que implica la apertura de los nucle&#xF3;tidos c&#xED;clicos-canales con compuertas y la entrada de Ca (2 +) en los cilios. Ca (2 +) activa un Cl (-) la corriente que produce un flujo de salida de Cl (-) iones y amplifica la despolarizaci&#xF3;n. La identidad molecular de Ca (2 +) activada por Cl (-) canales es todav&#xED;a dif&#xED;cil de alcanzar, aunque algunos bestrophins han demostrado que funcionan como Ca (2 +) activada por Cl (-) canales cuando se expresan en sistemas heter&#xF3;logos. En el epitelio olfatorio, bestrofina-2 (Best2) ha sido indicado como un candidato para ser un componente molecular del olfato Ca (2 +) activada por Cl (-) del canal. En este estudio, hemos analizado los ratones que carecen Best2. Se compararon las respuestas electrofisiol&#xF3;gicas del epitelio olfativo a la estimulaci&#xF3;n olor, as&#xED; como las propiedades de Ca (2 +) activada por Cl (-) las corrientes en los ratones de tipo salvaje (WT) y knockout (KO) para Best2. Nuestros resultados confirman que Best2 se expresa en los cilios de las neuronas sensoriales olfativas, mientras que las respuestas de olor y Ca (2 +) activada por Cl (-) las corrientes no fueron significativamente diferentes entre el TE y ratones KO. As&#xED;, Best2 no parece ser el principal componente molecular del canal olfatorio. Se requieren estudios adicionales para determinar la funci&#xF3;n de Best2 de los cilios de las neuronas sensoriales olfativas.

Activados por calcio-Corrientes de cloruro en las neuronas sensoriales olfativas de ratones que carecen bestrofina-2

Ca(2+) &#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x51E0;&#x79CD;&#x751F;&#x7406;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x55C5;&#x89C9;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x53D1;&#x6325;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5176;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x76EE;&#x524D;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x6210;&#x5458;&#x8DE8;&#x819C; 16 &#xFF08;TMEM16&#xFF0C;&#x4E5F;&#x547D;&#x540D;&#x4E3A; anoctamin&#xFF09; &#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x5F62;&#x5F0F;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca(2+) Cl(-) &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x55C5;&#x89C9;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x63D0;&#x8BAE; TMEM16b/anoctamin2&#xFF0C;Ca(2+) &#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x9891;&#x9053;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5206;&#x5B50;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x5C1A;&#x672A;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x672C;&#x673A;&#x548C;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7528;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x672C;&#x673A;&#x901A;&#x9053;&#x9694;&#x79BB;&#x5C0F;&#x9F20;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x548C;&#x4E0E;&#x9F20;&#x6807; TMEM16b/anoctamin2 &#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5B83;&#x4EEC;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76F4;&#x63A5;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x53EF;&#x91CD;&#x73B0;&#x7ECF;&#x80DE;&#x5185;&#x6D53;&#x5EA6;&#x8DF3;&#x7B3C;&#x7ECF; photorelease &#x7D22;&#x53D6;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x80DE;&#x5916;&#x963B;&#x585E;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x548C;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;Cl(-) &#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242; niflumic &#x9178;&#x3001; 5-&#x785D;&#x57FA;-2-(3 phenylpropylamino) &#x82EF;&#x7532;&#x9178; (NPPB) &#x548C;&#x5206;&#x5E03;&#x5F0F;&#x5165;&#x4FB5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5728;&#x819C;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x4FA7;&#x5E94;&#x7528;&#x9020;&#x6210;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8861;&#x91CF;&#x5916;&#x90E8;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#xFF0C;&#x5E76;&#x900F;&#x9732;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;&#x67D0;&#x4E9B;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x6F5C;&#x5728;&#x9006;&#x8F6C;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x5316;&#x4E0E;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x73AF;&#x5316;&#x9176; III &#x5728;&#x55C5;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x6B63; TMEM16b/anoctamin2&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x4E2D;&#x6D4B;&#x5F97;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x662F;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x662F;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x548C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E; TMEM16b/anoctamin2 &#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x672C;&#x673A;&#x55C5; Ca(2+) &#x6FC0;&#x6D3B; Cl(-) &#x5F53;&#x524D;&#x4E3B;&#x8981;&#x4E9A;&#x3002;

&#x9499;&#x6D53;&#x5EA6;&#x8DF3;&#x8F6C;&#x663E;&#x793A;&#x9F20;&#x6807;&#x55C5;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C; TMEM16b &#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE; 293T &#x7EC6;&#x80DE;&#x9499;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6C2F;&#x79BB;&#x5B50;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x3002;

Ca(2+)-activated Cl(-) channels play relevant roles in several physiological processes, including olfactory transduction, but their molecular identity is still unclear. Recent evidence suggests that members of the transmembrane 16 (TMEM16, also named anoctamin) family form Ca(2+)-activated Cl(-) channels in several cell types. In vertebrate olfactory transduction, TMEM16b/anoctamin2 has been proposed as the major molecular component of Ca(2+)-activated Cl(-) channels. However, a comparison of the functional properties in the whole-cell configuration between the native and the candidate channel has not yet been performed. In this study, we have used the whole-cell voltage-clamp technique to measure functional properties of the native channel in mouse isolated olfactory sensory neurons and compare them with those of mouse TMEM16b/anoctamin2 expressed in HEK 293T cells. We directly activated channels by rapid and reproducible intracellular Ca(2+) concentration jumps obtained from photorelease of caged Ca(2+) and determined extracellular blocking properties and anion selectivity of the channels. We found that the Cl(-) channel blockers niflumic acid, 5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)benzoic acid (NPPB) and DIDS applied at the extracellular side of the membrane caused a similar inhibition of the two currents. Anion selectivity measured exchanging external ions and revealed that, in both types of currents, the reversal potential for some anions was time dependent. Furthermore, we confirmed by immunohistochemistry that TMEM16b/anoctamin2 largely co-localized with adenylyl cyclase III at the surface of the olfactory epithelium. Therefore, we conclude that the measured electrophysiological properties in the whole-cell configuration are largely similar, and further indicate that TMEM16b/anoctamin2 is likely to be a major subunit of the native olfactory Ca(2+)-activated Cl(-) current.

Calcium concentration jumps reveal dynamic ion selectivity of calcium-activated chloride currents in mouse olfactory sensory neurons and TMEM16b-transfected HEK 293T cells.

Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) canaux jouent un r&#xF4;le pertinentes dans plusieurs processus physiologiques, y compris la transduction olfactive, mais leur identit&#xE9; mol&#xE9;culaire n&#x26;#39;est pas encore clair. Des donn&#xE9;es r&#xE9;centes sugg&#xE8;rent que les membres du transmembranaire 16 (TMEM16, &#xE9;galement nomm&#xE9; anoctamin) forme la famille Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) des canaux dans plusieurs types cellulaires. Dans la transduction olfactive des vert&#xE9;br&#xE9;s, TMEM16b/anoctamin2 a &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9; comme la principale composante mol&#xE9;culaire de Ca (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) canaux. Cependant, une comparaison des propri&#xE9;t&#xE9;s fonctionnelles de la configuration &#xE0; cellules enti&#xE8;res entre l&#x26;#39;origine et le canal candidat n&#x26;#39;a pas encore &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9;e. Dans cette &#xE9;tude, nous avons utilis&#xE9; l&#x26;#39;ensemble des cellules du voltage-clamp technique pour mesurer les propri&#xE9;t&#xE9;s fonctionnelles du canal natif chez la souris isol&#xE9; olfactifs neurones sensoriels et les comparer avec ceux de la souris TMEM16b/anoctamin2 exprim&#xE9; dans des cellules HEK 293T. Nous activ&#xE9; directement par les canaux rapide et reproductible intracellulaire de Ca (2 +) sauts de concentration obtenus &#xE0; partir de photos&#xE9;paration cage Ca (2 +) et d&#xE9;termin&#xE9;es extracellulaires des propri&#xE9;t&#xE9;s de blocage et la s&#xE9;lectivit&#xE9; des canaux d&#x26;#39;anions. On a constat&#xE9; que l&#x26;#39;Cl (-) de blocage des canaux acide niflumique, 5-nitro-2-(3-ph&#xE9;nylpropylamino) acide benzo&#xEF;que (NPPB) et DIDS appliqu&#xE9;s sur le c&#xF4;t&#xE9; de la membrane extracellulaire provoque une inhibition similaire des deux courants. S&#xE9;lectivit&#xE9; anionique mesur&#xE9;e &#xE9;change d&#x26;#39;ions externes et a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que, dans les deux types de courants, le potentiel d&#x26;#39;inversion pour certains anions &#xE9;tait d&#xE9;pendant du temps. En outre, nous avons confirm&#xE9; par immunohistochimie que TMEM16b/anoctamin2 en grande partie co-localis&#xE9;s avec ad&#xE9;nylcyclase III &#xE0; la surface de l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium olfactif. Par cons&#xE9;quent, nous concluons que les propri&#xE9;t&#xE9;s mesur&#xE9;es &#xE9;lectrophysiologiques dans la configuration cellule enti&#xE8;re sont largement similaires, et indiquent en outre que TMEM16b/anoctamin2 est susceptible d&#x26;#39;&#xEA;tre une sous-unit&#xE9; majeure de l&#x26;#39;indig&#xE8;ne Ca olfactive (2 +)-Cl activ&#xE9; (-) en cours.

Sauts de concentration de calcium Reveal s&#xE9;lectivit&#xE9; ionique dynamique des courants de chlorure de calcium-activ&#xE9;s dans olfactif de la souris les neurones sensoriels et TMEM16b transfect&#xE9;es cellules HEK 293T

Ca(2+) aktivierte Cl(-) Kan&auml;le relevante Rollen in verschiedene physiologische Prozesse, einschlie&szlig;lich olfaktorischen Signaltransduktion, spielen, aber ihre molekulare Identit&auml;t ist noch unklar. J&uuml;ngste Hinweise, dass Mitglieder der Transmembran 16 (TMEM16, auch ANO1 genannt) Familie Form Cl(-) Ca(2+) aktivierte Kan&auml;le in mehreren-Typen Handy. In vertebrate olfaktorischen Signaltransduktion wurde TMEM16b/anoctamin2 als molekulare Hauptkomponente der Cl(-) Ca(2+) aktivierte Kan&auml;le vorgeschlagen. Jedoch hat ein Vergleich der funktionellen Eigenschaften in der ganz-Zell Konfiguration zwischen systemeigenen und dem Kandidaten-Kanal noch nicht durchgef&uuml;hrt wurde. In dieser Studie haben wir die ganze Zelle Spannung Klemm-Technik verwendet, um funktionelle Eigenschaften des nativen Kanals in Maus isoliert olfaktorischen sensorischen Neuronen zu messen und vergleichen Sie sie mit der Maus TMEM16b/anoctamin2 in HEK 293T Zellen ausgedr&uuml;ckt. Wir aktiviert direkt Kan&auml;le durch schnelle und reproduzierbare intrazellul&auml;re Ca(2+) Konzentration Spr&uuml;nge aus Photorelease der K&auml;fig Ca(2+) und extrazellul&auml;re blockierende Eigenschaften und Anion Selektivit&auml;t der Kan&auml;le bestimmt. Wir fanden, dass die Cl(-) Kanal Blocker Niflumic S&auml;ure, 5-Nitro - 2-(3-Phenylpropylamino) Benzoes&auml;ure (NPPB) und did angewendet an der extrazellul&auml;ren Seite der Membran verursacht eine &auml;hnliche Hemmung der zwei Str&ouml;me. Anion Selektivit&auml;t Austausch von externe Ionen gemessen und ergab, dass beide Arten von Str&ouml;mungen, die Umkehrung Potenzial f&uuml;r einige Anionen zeitabh&auml;ngig war. Dar&uuml;ber hinaus best&auml;tigt wir durch Immunhistochemie, dass TMEM16b/anoctamin2 mit Fehlfunktion Guanylatcyclase III an der Oberfl&auml;che des olfaktorischen Epithel weitgehend co-localized. Daher schlie&szlig;en wir, dass die gemessenen elektrophysiologischen Eigenschaften in der ganz-Zell Konfiguration weitgehend &auml;hnlich sind, und weiter darauf hinweisen, dass TMEM16b/anoctamin2 eine gro&szlig;e Untereinheit des die native olfaktorischen Ca(2+) aktivierte Cl(-) aktuelle sein d&uuml;rfte.

Kalzium-Konzentration-Spr&uuml;nge zeigen dynamische Ion Selektivit&auml;t aktivierte Kalzium-Chlorid Str&ouml;mungen in Maus olfaktorischen sensorischen Neuronen und TMEM16b transfected HEK 293T Zellen.

Attivato CA(2+) Cl(-) canali giocano un ruolo rilevante in diversi processi fisiologici, tra cui trasduzione olfattiva, ma la loro identit&agrave; molecolare non &egrave; ancora chiaro. Recenti evidenze suggeriscono che membri dei canali attivati Ca(2+) Cl(-) forma familiare (TMEM16, anche denominato anoctamin) 16 transmembrana in diversi tipi di cella. In vertebrati trasduzione olfattiva, TMEM16b/anoctamin2 &egrave; stato proposto come l&#39;importante componente molecolare dei canali attivati da Ca(2+) Cl(-). Tuttavia, un confronto tra le propriet&agrave; funzionali nella configurazione di cellule intere tra i nativi e il canale del candidato non &egrave; stato ancora eseguito. In questo studio, abbiamo utilizzato la tecnica di cellule intere tensione-pinza per misurare le propriet&agrave; funzionali del canale nativo nei neuroni sensoriali olfattivi del mouse isolato e confrontarle con quelle del mouse TMEM16b/anoctamin2 espresso nelle HEK 293T cellule. Abbiamo attivato direttamente canali di rapido e riproducibile Ca(2+) intracellulare concentrazione salti ottenuti da photorelease di Ca(2+) in gabbia e determinato extracellulare blocco propriet&agrave; e anione selettivit&agrave; dei canali. Abbiamo scoperto che l&#39;acido di niflumic di bloccanti del canale Cl(-), 5-nitro - 2-(3-phenylpropylamino) benzoico acido (NPPB) e DIDS applicato al lato extracellulare della membrana ha causato un&#39;inibizione simile delle due correnti. Selettivit&agrave; anionico misurato lo scambio di ioni esterni e ha rivelato che, in entrambi i tipi di correnti, l&#39;inversione del potenziale per alcuni anioni era tempo dipendente. Inoltre, abbiamo confermato dall&#39;immunoistochimica co-ha che TMEM16b/anoctamin2 in gran parte localizzato con adenil ciclasi III alla superficie dell&#39;epitelio olfattivo. Pertanto, concludere che le propriet&agrave; elettrofisiologiche misurate nella configurazione di cellule intere sono in gran parte simili e ulteriormente indicano che TMEM16b/anoctamin2 &egrave; probabile che sia una subunit&agrave; maggiore del nativo olfattive attivato Ca(2+) Cl(-) corrente.

Calcio concentrazione salti rivelano selettivit&agrave; dinamica dello ione di correnti di cloruro di calcio-attivato in neuroni sensoriali olfattivi del mouse e TMEM16b-transfected HEK 293T cellule.

&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5869;&#x7D20;&#xFF08; - &#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x55C5;&#x899A;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30FC;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x8CAB;&#x901A;16&#xFF08;TMEM16&#x3001;&#x307E;&#x305F;anoctamin&#x540D;&#x524D;&#xFF09;&#x5BB6;&#x65CF;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#xFF08; - &#xFF09;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x55C5;&#x899A;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x3001;TMEM16b/anoctamin2&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x6210;&#x5206;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3001;&#x5019;&#x88DC;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x9593;&#x306E;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x69CB;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x55C5;&#x899A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;HEK 293T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x767A;&#x73FE;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;TMEM16b/anoctamin2&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5168;&#x30BB;&#x30EB;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3068;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x906E;&#x65AD;&#x7279;&#x6027;&#x306E;photorelease&#x3068;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;&#x30CB;&#x30D5;&#x30EB;&#x30E0;&#x9178;&#x3001;5  - &#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;-2  - &#xFF08;3  -  phenylpropylamino&#xFF09;&#x5B89;&#x606F;&#x9999;&#x9178;&#xFF08;NPPB&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x819C;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x3067;&#x9069;&#x7528;DIDS&#x3064;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;Cl&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3068;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30A2;&#x30CB;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x9006;&#x8EE2;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306F;&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;TMEM16b/anoctamin2&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x55C5;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EA;&#x30EB;&#x30B7;&#x30AF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;III&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#xFF08; - &#xFF09;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x69CB;&#x6210;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x200B;&#x200B;&#x305F;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;TMEM16b/anoctamin2&#x306F;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x55C5;&#x899A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Cl&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x55C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;TMEM16b&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;HEK 293T&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5869;&#x5316;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

Cl(-) &#xCC44;&#xB110; Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4; &#xAC01; &#xBCC0;&#xD658; &#xB4F1; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; 16 (TMEM16, anoctamin&#xC774; &#xB77C;&#xACE0;&#xB3C4; &#xD568;) &#xAC00;&#xC871; &#xD615;&#xD0DC; Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xCC44;&#xB110; &#xBA64;&#xBC84; &#xD615;&#xC2DD; &#xC140; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;. &#xCC99;&#xCD94; &#xD6C4; &#xAC01; &#xBCC0;&#xD658;, TMEM16b/anoctamin2 Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC640; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xCC44;&#xB110; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xAD6C;&#xC131; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xB294; &#xC544;&#xC9C1; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC808;&#xC5F0; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xBCF8; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; TMEM16b/anoctamin2 HEK 293T &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xBE44;&#xAD50; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xC7AC;&#xD604;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xC810;&#xD504; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; ca(2+)&#xC758; photorelease&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xACE0; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xCC28;&#xB2E8; &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; Cl(-) &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C; niflumic &#xC0B0;, 5-&#xB2C8;&#xD2B8;&#xB85C;-2-(3-phenylpropylamino) &#xBCA4;&#xC870;&#xC0B0; (NPPB) DIDS &#xB9C9;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xB450; &#xC804;&#xB958; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xC678;&#xBD80; &#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0;, &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC804;&#xB958;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xBD80; &#xC74C;&#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBC18;&#xC804;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB984;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; TMEM16b/anoctamin2&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; &#xD6C4; &#xAC01; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; adenylyl cyclase III&#xC640; co-localized &#xAE30;&#xC220;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xACB0;&#xB860; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; electrophysiological &#xC18D;&#xC131; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xACE0; &#xCD94;&#xAC00; TMEM16b/anoctamin2&#xB294; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD6C4; &#xAC01; Ca(2+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Cl(-) &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB420; &#xAC83; &#xC784;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCE7C;&#xC298; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC810;&#xD504; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD6C4; &#xAC01; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; TMEM16b &#xD398; HEK 293T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC5FC;&#xD654; &#xCE7C;&#xC298; &#xD65C;&#xC131; &#xC804;&#xB958; &#xB3D9;&#xC801; &#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xACF5;&#xAC1C;.

Ca (2 +) activada por Cl (-) los canales juegan un papel relevante en varios procesos fisiol&#xF3;gicos, incluyendo la transducci&#xF3;n olfativa, pero su identidad molecular a&#xFA;n no est&#xE1; claro. La evidencia reciente sugiere que los miembros de la transmembrana de 16 (TMEM16, tambi&#xE9;n llamado anoctamin) de la familia la forma de Ca (2 +) activada por Cl (-) canales en varios tipos de c&#xE9;lulas. En la transducci&#xF3;n olfativa vertebrado, TMEM16b/anoctamin2 ha sido propuesto como el principal componente molecular de Ca (2 +)-activado Cl (-) canales. Sin embargo, una comparaci&#xF3;n de las propiedades funcionales en la configuraci&#xF3;n de c&#xE9;lula completa entre el nativo y el canal de candidato a&#xFA;n no se ha realizado. En este estudio, hemos utilizado el conjunto de c&#xE9;lulas voltaje-clamp t&#xE9;cnica para medir las propiedades funcionales del canal nativo en el rat&#xF3;n aislado neuronas sensoriales olfativas, y compararlas con las de rat&#xF3;n TMEM16b/anoctamin2 expresado en c&#xE9;lulas HEK 293T. Hemos activado directamente por los canales de calcio intracelular r&#xE1;pido y reproducible (2 +) saltos de concentraci&#xF3;n obtenidos a partir de photorelease de la jaula de Ca (2 +) y de determinadas propiedades extracelulares de bloqueo y la selectividad de los canales de aniones. Hemos encontrado que el Cl (-) bloqueadores de los canales de &#xE1;cido nifl&#xFA;mico, 5-nitro-2-(3-fenilpropilamino) de &#xE1;cido benzoico (NPPB) y DIDS aplicadas en el lado extracelular de la membrana causado una inhibici&#xF3;n similar de las dos corrientes. La selectividad de aniones mide el intercambio de iones externos y revel&#xF3; que, en ambos tipos de corrientes, la inversi&#xF3;n potencial de algunos aniones fue dependiente del tiempo. Por otra parte, se confirm&#xF3; mediante t&#xE9;cnicas de inmunohistoqu&#xED;mica que TMEM16b/anoctamin2 en gran medida co-localizada con la adenilil ciclasa III, en la superficie del epitelio olfatorio. Por lo tanto, se concluye que las propiedades medidas electrofisiol&#xF3;gicas en la configuraci&#xF3;n de c&#xE9;lulas enteras son muy similares, e indican que TMEM16b/anoctamin2 es probable que sea una subunidad principal de la nativa Ca olfatorio (2 +) activada por Cl (-) actual.

Saltos concentraci&#xF3;n de calcio i&#xF3;nico Reveal Selectividad din&#xE1;mica de las corrientes de cloruro de calcio activados en las neuronas sensoriales olfativas de rat&#xF3;n y TMEM16b transfecci&#xF3;n de c&#xE9;lulas HEK 293T

Article	Year
Calcium-activated chloride currents in olfactory sensory neurons from mice lacking bestrophin-2. The Journal of physiology\| PubMed ID: 19622610	2009
Calcium concentration jumps reveal dynamic ion selectivity of calcium-activated chloride currents in mouse olfactory sensory neurons and TMEM16b-transfected HEK 293T cells. The Journal of physiology\| PubMed ID: 20837642	2010

Claudia Sagheddu

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