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Ice-Cap: A Method for Growing <em>Arabidopsis</em> and Tomato Plants in 96-well Plates for High-Throughput Genotyping

It is becoming common for plant scientists to develop projects that require the genotyping of large numbers of plants. The first step in any genotyping ...

University of Wisconsin-Madison

La transduction du signal des voies qui cytocin&#xE8;se de contr&#xF4;le dans les usines sont largement caract&#xE9;ris&#xE9;es. Ici, nous apportons la preuve g&#xE9;n&#xE9;tique qui mitogen-activated kinases prot&#xE9;ine kinase kinase (MAPKKKs) jouent un r&#xF4;le dans le contr&#xF4;le de la division cellulaire des plantes. En utilisant une approche inverse g&#xE9;n&#xE9;tique, nous avons isol&#xE9; les plantes portant les all&#xE8;les des g&#xE8;nes knock-out MAPKKK Arabidopsis ANP1, les ANP2 et ANP3. Les unique qui en r&#xE9;sulte-mutants plantes ne pr&#xE9;sentaient pas de ph&#xE9;notypes anormaux; &#xE9;videntes deux des trois double-mutantes combinaisons affich&#xE9;es d&#xE9;fauts dans la division cellulaire et la croissance, et la combinaison triple-mutant n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; transmis soit par des gam&#xE8;tes m&#xE2;les ou femelles. Les ph&#xE9;notypes mol&#xE9;culaires et structurales affich&#xE9;es par les doubles mutants de soutenir un mod&#xE8;le dans lequel la famille de l&#x26;#39;ANP MAPKKKs r&#xE9;gule positivement la division cellulaire et la croissance et peut r&#xE9;guler n&#xE9;gativement les r&#xE9;actions au stress.

Un Arabidopsis mitogen-activated kinase kinase g&#xE8;ne de la prot&#xE9;ine kinase de la famille Encode essentiels des r&#xE9;gulateurs positifs de la cytokin&#xE8;se

Ein Arabidopsis Mitogen-aktivierte Proteinkinase-Kinase-Kinase-Genfamilie kodiert wesentlichen positive Regulatoren der Cytokinese.

Le vie di trasduzione del segnale che controllano la Citocinesi nelle piante sono in gran parte atipici. Qui, forniamo prove genetiche che chinasi di proteina mitogene-attivata della chinasi della chinasi (MAPKKKs) svolgono un ruolo nel controllo della divisione delle cellule vegetali. Utilizzando un approccio genetico-reverse, abbiamo isolato piante che trasportano gli alleli ad eliminazione diretta dei geni Arabidopsis MAPKKK ANP1, ANP2 e ANP3. Le piante di singolo-mutante risultante non visualizzato alcun evidenti fenotipi anormali; due delle tre combinazioni di double-mutante visualizzato difetti nella divisione cellulare e la crescita; e la combinazione triplo-mutante non &egrave; stata trasmessa attraverso i gameti maschili o femminili. I fenotipi molecolari e strutturali visualizzati da mutanti doppie supportano un modello in cui la famiglia ANP di MAPKKKs positivamente regola la crescita e divisione delle cellule e pu&ograve; regolare negativamente le risposte di stress.

Una famiglia genica Arabidopsis proteina mitogene-attivata della chinasi della chinasi della chinasi codifica essenziali regolatori positivi della Citocinesi in.

&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x672A;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;MAPKKKs&#xFF09;&#x306F;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;MAPKKK&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;ANP1&#x3001;ANP2&#x3001;&#x3068;ANP3&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x690D;&#x7269;&#x3092;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3068;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;3&#x3064;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306E;2;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x690D;&#x7269;&#x306F;&#x660E;&#x767D;&#x306A;&#x7570;&#x5E38;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305A;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;&#x7537;&#x6027;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5973;&#x6027;&#x306E;&#x914D;&#x5076;&#x5B50;&#x306E;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9001;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306F;MAPKKKs&#x306E;ANP&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306F;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3068;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3001;&#x8CA0;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x6B63;&#x96FB;&#x5727;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;

&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x65E0;&#x63A7;&#x5236;&#x690D;&#x7269;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176; (MAPKKKs) &#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x63A7;&#x5236;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3001; &#x9694;&#x79BB;&#x643A;&#x5E26;&#x7684; ANP1&#x3001; ANP2 &#x548C; ANP3 &#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; MAPKKK &#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x3002;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x690D;&#x7269;&#x663E;&#x793A;&#x6CA1;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5F02;&#x5E38;&#x8868;&#x578B; &#xFF1B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E09;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x7EC4;&#x5408;&#x663E;&#x793A;&#x7F3A;&#x9677;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x548C;&#x751F;&#x957F; &#xFF1B;&#x800C;&#x4E09;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7EC4;&#x5408;&#x4E0D;&#x4F20;&#x64AD;&#x901A;&#x8FC7;&#x7537;&#x6027;&#x6216;&#x5973;&#x6027;&#x7684;&#x914D;&#x5B50;&#x3002;&#x663E;&#x793A;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x8868;&#x578B;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x7684; MAPKKKs ANP &#x5BB6;&#x5EAD;&#x79EF;&#x6781;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x548C;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x53EF;&#x4EA7;&#x751F;&#x8D1F;&#x9762;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x5BB6;&#x65CF;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x79EF;&#x6781;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7684;&#x673A;&#x6784;&#x3002;

The signal transduction pathways that control cytokinesis in plants are largely uncharacterized. Here, we provide genetic evidence that mitogen-activated protein kinase kinase kinases (MAPKKKs) play a role in the control of plant cell division. Using a reverse-genetic approach, we isolated plants carrying knockout alleles of the Arabidopsis MAPKKK genes ANP1, ANP2, and ANP3. The resulting single-mutant plants displayed no obvious abnormal phenotypes; two of the three double-mutant combinations displayed defects in cell division and growth; and the triple-mutant combination was not transmitted through either male or female gametes. The molecular and structural phenotypes displayed by the double mutants support a model in which the ANP family of MAPKKKs positively regulates cell division and growth and may negatively regulate stress responses.

An Arabidopsis mitogen-activated protein kinase kinase kinase gene family encodes essential positive regulators of cytokinesis.

&#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; cytokinesis&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; kinases (MAPKKKs) &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2DD;&#xBB3C; Arabidopsis MAPKKK &#xC720;&#xC804;&#xC790; ANP1, ANP2, &#xBC0F; anp3&#xC758; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xB300;&#xB9BD;&#xC744; &#xB4E4;&#xACE0; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB9AC;&#xBC84;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xADF8; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC5C6;&#xC74C; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xACE0;&#xAE30;; 3 &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC870;&#xD569;&#xC758; &#xB450; &#xD45C;&#xC2DC; &#xACB0;&#xD568; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xBC0F; &#xC131;&#xC7A5;; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC870;&#xD569;&#xC740; &#xB0A8;&#xC131; &#xB610;&#xB294; &#xC5EC;&#xC131; gametes&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xC1A1; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790;&#xC640; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xACE0;&#xAE30;&#xB294; Mapkkks&#xC758; ANP &#xAC00;&#xC871; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xBC0F; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xBC0F; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Arabidopsis &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC00;&#xC871; cytokinesis&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las v&#xED;as de transducci&#xF3;n de que la citocinesis de control en las plantas son en gran parte sin caracterizar. Aqu&#xED;, nos proporcionan la prueba gen&#xE9;tica que activadas por mit&#xF3;genos prote&#xED;na quinasa quinasa quinasa (MAPKKKs) juegan un papel en el control de la divisi&#xF3;n celular de las plantas. Utilizando un enfoque de gen&#xE9;tica inversa, se aislaron las plantas portadoras de alelos octavos de final de los genes de Arabidopsis MAPKKK ANP1 y ANP2 y ANP3. Las resultantes de un solo plantas mutantes no mostraron fenotipos anormales evidentes, dos de las tres combinaciones de doble mutantes muestran defectos en la divisi&#xF3;n celular y crecimiento, y la combinaci&#xF3;n triple mutante no se transmite a trav&#xE9;s de cualquiera de los gametos masculinos o femeninos. Los fenotipos moleculares y estructurales de los dobles mutantes apoyar un modelo en el que la familia de la ANP MAPKKKs regula positivamente la divisi&#xF3;n celular y el crecimiento y la negativa podr&#xE1; regular las respuestas al estr&#xE9;s.

Un Arabidopsis quinasa activada por mit&#xF3;genos prote&#xED;na quinasa quinasa Familia gen codifica esenciales reguladores positivos de la citocinesis

&#x58F0;&#x97F3;&#x529F;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5B66;&#x57FA;&#x7840;&#x8BBE;&#x65BD;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x662F;&#x4E3A;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3002;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x6D88;&#x8017;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x690D;&#x7269;&#x4E2D;&#x5BCC;&#x6709;&#x6210;&#x6548;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x4E00;&#x76F4;&#x5229;&#x7528;&#x8F6C;&#x79FB; DNA (T-DNA) &#x4ECE;&#x519C;&#x6746;&#x83CC;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x63D2;&#x5165;&#x8BF1;&#x53D8;&#x5242;&#x3002;T-DNA &#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BF1;&#x53D8;&#x5242;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5047;&#x8BBE;&#x4E4B;&#x4E00;&#x662F;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x7684;&#x63D2;&#x5165;&#x8FD9;&#x4E9B; DNA &#x5206;&#x5B50;&#x53D1;&#x751F;&#x968F;&#x673A;&#x9009;&#x5B9A;&#x7684;&#x5730;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76F4;&#x63A5;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86; T-DNA &#x63D2;&#x5165;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x8F6C;&#x5316;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x79CD;&#x7FA4;&#x5206;&#x5E03;&#x3002;&#x5F00;&#x5934;&#x7684;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (PCR) &#x7A0B;&#x5E8F;&#x8FDB;&#x884C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7F16;&#x5F55;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x56DB; 65 kb &#x6BB5;&#x5185;&#x63D2;&#x5165;&#x7684;&#x6240;&#x6709; T DNA &#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x7CBE;&#x786E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A; 47 T DNA &#x63D2;&#x5165;&#xFF0C;30%&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x8BB0;&#x5F55;&#x4E86; T-DNA &#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x56DB;&#x4E1D;&#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x7684;&#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x63D2;&#x5165;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684; T-DNA &#x5C4F;&#x5E55;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x6620;&#x5C04;&#x7684;&#x4FA7;&#x7FFC;&#x4ECE;&#x4E2A;&#x522B; T DNA &#x8F6C;&#x5316;&#x7684;&#x884C;&#x63D2;&#x5165;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; 583 &#x968F;&#x673A;&#x9009;&#x62E9; T DNA &#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x968F;&#x673A;&#x9009;&#x62E9; T DNA &#x63D2;&#x5165; 35%&#x662F;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x5E8F;&#x5217;&#x5360;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684; 44%&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5C0F;&#x504F;&#x5411;&#x4E8E;&#x6062;&#x590D; T DNA &#x63D2;&#x5165;&#x57FA;&#x56E0;&#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x504F;&#x89C1;&#x5E76;&#x4E0D;&#x9650;&#x5236;&#x5728;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x7B56;&#x7565;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x63D2;&#x5165;&#x8BF1;&#x53D8;&#x5242;&#x4F5C;&#x4E3A; T DNA &#x7684;&#x6548;&#x7528;&#x3002;

T-DNA &#x63D2;&#x5165;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x548C;&#x9971;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

A key component of a sound functional genomics infrastructure is the availability of a knockout mutant for every gene in the genome. A fruitful approach to systematically knockingout genes in the plant Arabidopsis thaliana has been the use of transferred-DNA (T-DNA) from Agrobacterium tumefaciens as an insertional mutagen. One of the assumptions underlying the use of T-DNA as a mutagen is that the insertion of these DNA elements into the Arabidopsis genome occurs at randomly selected locations. We have directly investigated the distribution of T-DNA insertions sites in populations of transformed Arabidopsis using two different approaches. To begin with, we utilized a polymerase chain reaction (PCR) procedure to systematically catalog the precise locations of all the T-DNA elements inserted within a 65 kb segment of chromosome IV. Of the 47 T-DNA insertions identified, 30% were found within the coding regions of genes. We also documented the insertion of T-DNA elements within the centromeric region of chromosome IV. In addition to these targeted T-DNA screens, we also mapped the genomic locations of 583 randomly chosen T-DNA elements by sequencing the genomic DNA flanking the insertion sites from individual T-DNA-transformed lines. 35% of these randomly chosen T-DNA insertions were located within the coding regions of genes. For comparison, coding sequences account for 44% of the Arabidopsis genome. Our results demonstrate that there is a small bias towards recovering T-DNA insertions within intergenic regions. However, this bias does not limit the utility of T-DNA as an effective insertional mutagen for use in reverse-genetic strategies.

Characterization of T-DNA insertion sites in Arabidopsis thaliana and the implications for saturation mutagenesis.

Un &#xE9;l&#xE9;ment cl&#xE9; d&#x26;#39;une bonne infrastructure de g&#xE9;nomique fonctionnelle est la disponibilit&#xE9; d&#x26;#39;un mutant knock-out pour chaque g&#xE8;ne dans le g&#xE9;nome. Une approche fructueuse de fa&#xE7;on syst&#xE9;matique knockingout g&#xE8;nes dans la plante Arabidopsis thaliana a &#xE9;t&#xE9; l&#x26;#39;utilisation de transfert d&#x26;#39;ADN-(ADN-T) d&#x26;#39;Agrobacterium tumefaciens comme un agent mutag&#xE8;ne d&#x26;#39;insertion. L&#x26;#39;une des hypoth&#xE8;ses sous-jacentes &#xE0; l&#x26;#39;utilisation de l&#x26;#39;ADN-T comme un agent mutag&#xE8;ne est que l&#x26;#39;insertion de ces &#xE9;l&#xE9;ments d&#x26;#39;ADN dans le g&#xE9;nome d&#x26;#39;Arabidopsis se produit &#xE0; des endroits choisis au hasard. Nous avons &#xE9;tudi&#xE9; la distribution directe des sites d&#x26;#39;insertions d&#x26;#39;ADN-T dans les populations d&#x26;#39;Arabidopsis transform&#xE9;es en utilisant deux approches diff&#xE9;rentes. Pour commencer, nous avons utilis&#xE9; une r&#xE9;action en cha&#xEE;ne par polym&#xE9;rase (PCR) pour cataloguer syst&#xE9;matiquement les emplacements pr&#xE9;cis de tous les &#xE9;l&#xE9;ments d&#x26;#39;ADN-T ins&#xE9;r&#xE9; dans un segment de 65 kb de IV chromosome. Sur les 47 insertions d&#x26;#39;ADN-T identifi&#xE9;s, 30% ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s dans les r&#xE9;gions codantes de g&#xE8;nes. Nous avons &#xE9;galement document&#xE9; l&#x26;#39;insertion de l&#x26;#39;ADN-T des &#xE9;l&#xE9;ments au sein de la r&#xE9;gion centrom&#xE9;rique du chromosome IV. En plus de ces cibles d&#x26;#39;ADN-T &#xE9;crans, nous avons &#xE9;galement cartographi&#xE9; les sites g&#xE9;nomiques de 583 choisis au hasard d&#x26;#39;ADN-T des &#xE9;l&#xE9;ments par s&#xE9;quen&#xE7;age de l&#x26;#39;ADN g&#xE9;nomique flanquant les sites d&#x26;#39;insertion de lignes individuelles de l&#x26;#39;ADN-T-transform&#xE9;es. 35% de ces choisis au hasard insertions d&#x26;#39;ADN-T ont &#xE9;t&#xE9; localis&#xE9;s dans les r&#xE9;gions codantes de g&#xE8;nes. A titre de comparaison, les s&#xE9;quences codantes repr&#xE9;sentent 44% du g&#xE9;nome d&#x26;#39;Arabidopsis. Nos r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent qu&#x26;#39;il ya un l&#xE9;ger biais vers la r&#xE9;cup&#xE9;ration d&#x26;#39;ADN-T des insertions dans les r&#xE9;gions interg&#xE9;niques. Cependant, ce biais ne limite pas l&#x26;#39;utilit&#xE9; de l&#x26;#39;ADN-T comme un agent mutag&#xE8;ne efficace d&#x26;#39;insertion pour une utilisation en sens inverse-g&#xE9;n&#xE9;tiques des strat&#xE9;gies.

Caract&#xE9;risation de sites d&#x26;#39;insertion ADN-T chez Arabidopsis thaliana et les implications pour la mutagen&#xE8;se &#xE0; saturation

Charakterisierung von T-DNA Insertionsstellen in Arabidopsis thaliana und die Auswirkungen auf S&#xE4;ttigungsmutagenese.

Un componente chiave di un&#39;infrastruttura di suono genomica funzionale &egrave; la disponibilit&agrave; di un mutante di knockout per ogni gene nel genoma. Un approccio fruttuoso sistematicamente knockingout geni della pianta Arabidopsis thaliana &egrave; stato l&#39;uso di DNA trasferito (T-DNA) da Agrobacterium tumefaciens come un mutageno inserzionale. Una delle ipotesi sottostanti l&#39;uso di T-DNA come un mutageno &egrave; che l&#39;inserimento di questi elementi di DNA nel genoma Arabidopsis si verifica in luoghi selezionati in modo casuale. Abbiamo studiato direttamente la distribuzione dei siti di T-DNA inserimenti nelle popolazioni di Arabidopsis trasformate utilizzando due diversi approcci. Per cominciare, abbiamo utilizzato una procedura di reazione a catena (PCR) polimerasi per catalogare sistematicamente le posizioni precise di tutti gli elementi di T-DNA inseriti all&#39;interno di un segmento del cromosoma IV di 65 kb. Delle 47 inserzioni T-DNA identificate, 30% sono stati trovati all&#39;interno le regioni codificanti dei geni. Abbiamo anche documentato l&#39;inserimento di elementi di T-DNA all&#39;interno della regione centromerica del cromosoma IV. Oltre a questi schermi T-DNA mirati, abbiamo mappato anche le posizioni di 583 elementi scelti a caso di T-DNA genomiche di sequenziamento del DNA genomico che fiancheggiano l&#39;inserimento siti da singole linee T-DNA-trasformato. 35% di questi inserimenti scelti casualmente T-DNA sono stati situati entro le regioni codificanti dei geni. Per confronto, codifica sequenze rappresentano il 44% del genoma Arabidopsis. I nostri risultati dimostrano che c&#39;&egrave; un piccolo pregiudizio verso recupero inserimenti T-DNA all&#39;interno delle regioni intergenic. Tuttavia, questo pregiudizio non limita l&#39;utilit&agrave; del T-DNA come un efficacia mutageno inserzionale per uso nelle strategie di genetiche inversa.

Caratterizzazione dei siti inserimento T-DNA in Arabidopsis thaliana e le implicazioni per la mutagenesi di saturazione.

&#x30B5;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B2;&#x30CE;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x5185;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306B;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;knockingout&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x76CA;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x633F;&#x5165;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x539F;&#x6027;&#x7269;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C4;&#x30E1;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B7;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x8EE2;&#x9001;-DNA&#xFF08;T-DNA&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x539F;&#x6027;&#x7269;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;T-DNA&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x524D;&#x63D0;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;DNA&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x304C;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5834;&#x6240;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;2&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;T-DNA&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x59CB;&#x307E;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;IV&#x306E;65&#x30AD;&#x30ED;&#x30D0;&#x30A4;&#x30C8;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x5185;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;T-DNA&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x30AB;&#x30BF;&#x30ED;&#x30B0;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC;&#xFF08;PCR&#xFF09;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;47 T-DNA&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x306E;&#x3001;30&#xFF05;&#x304C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x9818;&#x57DF;&#x5185;&#x306B;&#x898B;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;IV&#x306E;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x9818;&#x57DF;&#x5185;&#x306B;T-DNA&#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x8A18;&#x9332;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x7D5E;&#x3063;&#x305F;T-DNA&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;T-DNA&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x633F;&#x5165;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;DNA&#x3092;&#x914D;&#x5217;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;583&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;T-DNA&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306B;&#x9078;&#x3070;&#x308C;&#x305F;T-DNA&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x306E;35&#xFF05;&#x304C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x9818;&#x57DF;&#x5185;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;44&#xFF05;&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9593;&#x9818;&#x57DF;&#x5185;&#x306B;T-DNA&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x6226;&#x7565;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x633F;&#x5165;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x539F;&#x6027;&#x7269;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;T-DNA&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

T-DNA&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x98FD;&#x548C;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x542B;&#x610F;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;

&#xC0AC;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC720;&#xC804;&#xCCB4;&#xD559; &#xC778;&#xD504;&#xB77C;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC01; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xBB3C; Arabidopsis thaliana&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; knockingout &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC775;&#xD55C; &#xC811;&#xADFC; insertional mutagen&#xB85C; &#xADFC; tumefaciens&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC1A1; DNA (T-DNA) &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Mutagen&#xC73C;&#xB85C; T DNA&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAC00;&#xC815; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xAC00; Arabidopsis &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; DNA &#xC694;&#xC18C; &#xC0BD;&#xC785; &#xBB34;&#xC791;&#xC704;&#xB85C; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC9C1;&#xC811; T DNA &#xC0BD;&#xC785; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; Arabidopsis&#xC758; &#xC778;&#xAD6C; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB85C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB824;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 4&#xC758; 65 kb &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xB0B4;&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; T DNA &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xCE74;&#xD0C8;&#xB85C;&#xADF8;&#xC5D0; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (PCR) &#xC808;&#xCC28; &#xD65C;&#xC6A9;. 47 T DNA &#xC0BD;&#xC785; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC758; 30%&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xCF54;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 4&#xC758; centromeric &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB0B4; T DNA &#xC694;&#xC18C; &#xC0BD;&#xC785; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB300;&#xC0C1;&#xB41C; T DNA &#xD654;&#xBA74; &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBCC4; T DNA &#xBCC0;&#xD615; &#xB77C;&#xC778; &#xC0BD;&#xC785; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; genomic DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC8C;&#xB188; 583 &#xBB34;&#xC791;&#xC704;&#xB85C; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; T DNA &#xC694;&#xC18C; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xB9E4;&#xD551;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBB34;&#xC791;&#xC704;&#xB85C; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; T DNA &#xC0BD;&#xC785;&#xC758; 35% &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xCF54;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED; &#xB0B4;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xCF54;&#xB529; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; Arabidopsis &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; 44%&#xB97C; &#xCC28;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; intergenic &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; T DNA &#xC0BD;&#xC785; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;&#xAC00; &#xC785;&#xC99D;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4; &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC720;&#xC804; &#xC804;&#xB7B5;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; insertional mutagen&#xC73C;&#xB85C; T DNA&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xB97C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Arabidopsis thaliana&#xC640; &#xCC44;&#xB3C4; mutagenesis &#xC758;&#xBBF8; T DNA &#xC0BD;&#xC785; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;.

Un componente clave de una s&#xF3;lida infraestructura de gen&#xF3;mica funcional es la disponibilidad de un mutante knockout para todos los genes en el genoma. Un enfoque fruct&#xED;fero knockingout sistem&#xE1;ticamente genes en la planta Arabidopsis thaliana ha sido el uso de transferirse-ADN (ADN-T) de Agrobacterium tumefaciens como un mut&#xE1;geno insercional. Una de las hip&#xF3;tesis que sustentan el uso de T-ADN como un mut&#xE1;geno es que la inserci&#xF3;n de estos elementos de ADN en el genoma de Arabidopsis se produce en los lugares elegidos al azar. Hemos investigado directamente la distribuci&#xF3;n de los sitios de T-DNA inserciones en las poblaciones de Arabidopsis transformado mediante dos enfoques diferentes. Para empezar, se utiliz&#xF3; una reacci&#xF3;n en cadena de la polimerasa (PCR), el procedimiento para catalogar de manera sistem&#xE1;tica la ubicaci&#xF3;n exacta de todos los elementos de T-ADN insertado dentro de un segmento de 65 KB de la IV cromosoma. De los 47 inserciones de ADN-T identificados, 30% se encuentra dentro de las regiones codificantes de los genes. Asimismo, hemos documentado la inserci&#xF3;n de elementos de ADN-T dentro de la regi&#xF3;n centrom&#xE9;rica del cromosoma IV. Adem&#xE1;s de estas espec&#xED;ficas de ADN-T pantallas, tambi&#xE9;n han secuenciado los sitios gen&#xF3;micos de 583 elegidas al azar de ADN-T elementos por secuenciaci&#xF3;n del ADN gen&#xF3;mico que flanquean los sitios de inserci&#xF3;n de las l&#xED;neas individuales de ADN-T-transformadas. 35% de estos elegidos al azar de ADN-T inserciones se encuentra dentro de las regiones codificantes de los genes. Por comparaci&#xF3;n, las secuencias codificantes representan el 44% del genoma de Arabidopsis. Nuestros resultados demuestran que hay un peque&#xF1;o sesgo hacia la recuperaci&#xF3;n de ADN-T dentro de las regiones interg&#xE9;nicas inserciones. Sin embargo, este sesgo no limita la utilidad del ADN-T como un mut&#xE1;geno insercional eficaz para su uso en sentido inverso-gen&#xE9;ticos estrategias.

Caracterizaci&#xF3;n de los sitios de inserci&#xF3;n de T-ADN en Arabidopsis thaliana y sus consecuencias para la mutag&#xE9;nesis de saturaci&#xF3;n

&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7528;&#x4E8E;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x5206;&#x6790;&#x8C03;&#x67E5; MAP3K epsilon 1 &#x548C; MAP3K epsilon 2&#xFF0C;&#x4E00;&#x5BF9;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x5357;&#x82A5;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x690D;&#x7269;&#x7EAF;&#x5408; map3k epsilon 1 &#x6216; map3k epsilon 2 &#x663E;&#x793A;&#x6CA1;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x578B;&#xFF0C;&#x800C;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x7EC4;&#x5408;&#x9020;&#x6210;&#x82B1;&#x7C89;&#x6740;&#x4F24;&#x529B;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x96CC;&#x914D;&#x5B50;&#x4F53;&#x7684;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x7EC4;&#x5408;&#x4F20;&#x8F93;&#x662F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x3002;&#x56DB;&#x5206;&#x4F53;&#x5206;&#x6790;&#x4F7F;&#x7528;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x6267;&#x884C;&#x56DB;&#x65B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x8868;&#x660E;&#x82B1;&#x7C89;&#x81F4;&#x547D;&#x578B;&#x9694;&#x79BB;&#x4E0E; map3k epsilon 1 &#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2; &#xFF1B; map3k epsilon 2 &#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x82B1;&#x7C89;&#x7C92;&#x53D1;&#x5C55;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x8FDD;&#x89C4;&#x540E;&#x82B1;&#x7C89;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (YFP) &#x4E00;&#x3001; &#x5206;&#x6790;&#xFF1A; &#x4F7F;&#x7528;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x5206;&#x998F;&#x7684; MAP3Kepsilon1 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x793A;&#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; MAP3Kepsilon1 &#x7684;&#x5F88;&#x5927;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; MAP3Kepsilon1 &#x4E3A;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x82B1;&#x7C89;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x6240;&#x9700;&#x3002;

&#x9700;&#x8981;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x82B1;&#x7C89;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0; MAP3K epsilon 1 &#x548C; MAP3K epsilon 2&#x3002;

We have used reverse-genetic analysis to investigate the function of MAP3K epsilon 1 and MAP3K epsilon 2, a pair of closely related Arabidopsis thaliana genes that encode protein kinases. Plants homozygous for either map3k epsilon 1 or map3k epsilon 2 displayed no apparent mutant phenotype, whereas the double-mutant combination caused pollen lethality. Transmission of the double-mutant combination through the female gametophyte was normal. Tetrad analysis performed using the Arabidopsis quartet mutation demonstrated that the pollen-lethal phenotype segregated at meiosis with the map3k epsilon 1;map3k epsilon 2 genotype. We used transmission electron microscopy to determine that double-mutant pollen grains develop plasma membrane irregularities following pollen mitosis I. Analysis of the subcellular localization of a yellow fluorescent protein (YFP):MAP3Kepsilon1 fusion protein using confocal microscopy and biochemical fractionation indicated that a substantial portion of the MAP3Kepsilon1 present in Arabidopsis cells is localized to the plasma membrane. Taken together, our results suggest that MAP3Kepsilon1 is required for the normal functioning of the plasma membrane in developing Arabidopsis pollen.

The protein kinase genes MAP3K epsilon 1 and MAP3K epsilon 2 are required for pollen viability in Arabidopsis thaliana.

Nous avons utilis&#xE9; inverse g&#xE9;n&#xE9;tique analyse afin de d&#xE9;terminer la fonction de MAP3K epsilon 1 et MAP3K epsilon 2, une paire de g&#xE8;nes &#xE9;troitement li&#xE9;s d&#x26;#39;Arabidopsis thaliana qui codent pour des prot&#xE9;ines kinases. Plantes homozygotes pour soit map3k epsilon 1 ou map3k epsilon 2 ne pr&#xE9;sentait aucun ph&#xE9;notype mutant apparente, alors que la combinaison double-mutant caus&#xE9; l&#xE9;talit&#xE9; pollen. Transmission de la combinaison double-mutant &#xE0; travers le gam&#xE9;tophyte femelle &#xE9;tait normal. L&#x26;#39;analyse effectu&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;aide T&#xE9;trade la mutation quatuor Arabidopsis a d&#xE9;montr&#xE9; que le ph&#xE9;notype du pollen l&#xE9;tal s&#xE9;par&#xE9;s lors de la m&#xE9;iose avec l&#x26;#39;epsilon map3k 1; map3k epsilon 2 g&#xE9;notype. Nous avons utilis&#xE9; la microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; transmission afin de d&#xE9;terminer ce que les grains de pollen double-mutantes d&#xE9;velopper irr&#xE9;gularit&#xE9;s membrane plasmique apr&#xE8;s la mitose analyse du pollen I. de la localisation subcellulaire d&#x26;#39;une prot&#xE9;ine fluorescente jaune (YFP): MAP3Kepsilon1 prot&#xE9;ine de fusion en utilisant la microscopie confocale et fractionnement biochimique a indiqu&#xE9; que une partie substantielle du pr&#xE9;sent dans les cellules d&#x26;#39;Arabidopsis MAP3Kepsilon1 est localis&#xE9;e &#xE0; la membrane plasmique. Pris dans leur ensemble, nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que MAP3Kepsilon1 est n&#xE9;cessaire pour le fonctionnement normal de la membrane plasmique dans le d&#xE9;veloppement du pollen d&#x26;#39;Arabidopsis.

La prot&#xE9;ine kinase g&#xE8;nes MAP3K Epsilon 1 et Epsilon 2 MAP3K sont n&#xE9;cessaires pour la viabilit&#xE9; du pollen chez Arabidopsis thaliana

Wir haben umgekehrt-genetische Analyse untersuchen die Funktion der MAP3K Epsilon 1 und MAP3K Epsilon 2, zwei eng miteinander verbundene Arabidopsis Thaliana-Gene, die kodieren Proteinkinasen eingesetzt. Pflanzen homozygot f&uuml;r map3k Epsilon 1 oder map3k Epsilon 2 angezeigt keine offensichtlichen mutant Ph&auml;notypus, w&auml;hrend die Doppel-Mutant-Kombination Bl&uuml;tenstaub Letalit&auml;t verursacht. &Uuml;bertragung der Doppel-Mutant-Kombination durch die weiblichen Gametophyt war normal. Vierergruppe Analyse mithilfe der Arabidopsis durchgef&uuml;hrt, dass Quartett-Mutation nachgewiesen, dass der Bl&uuml;tenstaub-t&ouml;dliche Ph&auml;notyp bei Meiose mit der map3k-Epsilon 1 segregiert; map3k Epsilon 2 Genotyp. Wir Transmissionselektronenmikroskopie verwendet, um festzustellen, dass Doppel-Mutant Pollenk&ouml;rner Plasmamembran Unregelm&auml;&szlig;igkeiten nach Bl&uuml;tenstaub Mitose I. Analyse der subzellul&auml;ren Lokalisierung eines gelben fluoreszierenden Proteins (YFP) entwickeln: MAP3Kepsilon1 Schmelzverfahren Protein mit confocal Mikroskopie und biochemische Fraktionierung darauf hingewiesen, dass ein erheblicher Teil der MAP3Kepsilon1 in Arabidopsis Zellen an der Plasmamembran lokalisiert ist. Zusammengenommen deuten unsere Ergebnisse MAP3Kepsilon1 f&uuml;r das normale Funktionieren der Plasmamembran bei der Entwicklung von Arabidopsis Bl&uuml;tenstaub ben&ouml;tigt wird.

Die Protein-Kinase-Gene MAP3K-Epsilon 1 und MAP3K Epsilon 2 sind erforderlich f&uuml;r Bl&uuml;tenstaub Lebensf&auml;higkeit in Arabidopsis Thaliana.

Abbiamo utilizzato l&#39;analisi genetica inversa per indagare la funzione di MAP3K epsilon 1 e MAP3K epsilon 2, un paio di strettamente correlati Arabidopsis thaliana geni che codificano le chinasi di proteina. Piante omozigoti per map3k epsilon 1 o map3k epsilon 2 non visualizzato nessun apparente fenotipo mutante, considerando che la combinazione di doppio-mutante provocato letalit&agrave; di polline. Trasmissione della combinazione doppio mutante attraverso il gametofito femminile era normale. Analisi tetrade eseguita utilizzando l&#39;Arabidopsis mutazione quartetto ha dimostrato che il fenotipo letale polline segregata a meiosi con l&#39;epsilon map3k 1; map3k genotipo epsilon 2. Abbiamo usato la microscopia elettronica della trasmissione per determinare che granelli di polline double-mutante sviluppano membrana plasmatica irregolarit&agrave; mitosi polline I. analisi della localizzazione sottocellulare di una proteina fluorescente gialla (YFP): proteina di fusione MAP3Kepsilon1 mediante microscopia confocale e biochimica frazionamento indicato che una parte sostanziale della MAP3Kepsilon1 presente nelle cellule di Arabidopsis &egrave; localizzata alla membrana del plasma. Presi insieme, i nostri risultati suggeriscono che la MAP3Kepsilon1 &egrave; necessaria per il normale funzionamento della membrana del plasma nello sviluppo di polline di Arabidopsis.

L&#39;epsilon di proteina chinasi geni MAP3K 1 e MAP3K epsilon 2 sono richiesti per la vitalit&agrave; del polline in Arabidopsis thaliana.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;MAP3K&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;1&#x3068;MAP3K&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;2&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306A;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;MAP3K&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;1&#x307E;&#x305F;&#x306F;MAP3K&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;2&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;&#x4F53;&#x690D;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x82B1;&#x7C89;&#x81F4;&#x6B7B;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96CC;&#x6027;&#x914D;&#x5076;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306E;&#x9001;&#x4FE1;&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; MAP3K&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;2&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x578B;&#x3001;&#x56DB;&#x5206;&#x5B50;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x82B1;&#x7C89;&#x81F4;&#x6B7B;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x304C;MAP3K&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;1&#x3068;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x3067;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x30AB;&#x30EB;&#x30C6;&#x30C3;&#x30C8;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x82B1;&#x7C89;&#x7C92;&#x304C;&#x9EC4;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;YFP&#xFF09;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x6027;&#x306E;&#x82B1;&#x7C89;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;I.&#x5206;&#x6790;&#x5F8C;&#x306E;&#x8840;&#x6F3F;&#x819C;&#x306E;&#x51F9;&#x51F8;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x900F;&#x904E;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3084;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x5206;&#x753B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;MAP3Kepsilon1&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x90E8;&#x5206;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;MAP3Kepsilon1&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;MAP3Kepsilon1&#x304C;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x82B1;&#x7C89;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;MAP3K&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;1&#x3068;MAP3K&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;2&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x82B1;&#x7C89;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3001;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xC5ED; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xC870;&#xC0AC; MAP3K &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; 1&#xACFC; MAP3K &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; 2, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; Arabidopsis thaliana &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD55C; &#xC30D;&#xC758; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD574; &#xC654;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xBB3C; map3k &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; 1 &#xB610;&#xB294; map3k &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; 2 homozygous &#xC5C6;&#xC74C; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD615; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xB354;&#xBE14; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC870;&#xD569; &#xC6D0;&#xC778; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xCE58; &#xC0AC; &#xC728;. &#xC5EC;&#xC131; gametophyte &#xD1B5;&#xD574; &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC870;&#xD569;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xC815;&#xC0C1; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. Tetrad &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; Arabidopsis&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xD589; &#xC911; &#xC8FC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; phenotype meiosis map3k &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; 1&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC28;&#xBCC4;; map3k &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; 2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD615;. &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xACE1;&#xBB3C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4; (YFP) &#xD558;&#xB294; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; subcellular &#xC9C0; &#xBC29;&#xD654;&#xC758; I. &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBD80;&#xC815; &#xD655;&#xC778; &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: MAP3Kepsilon1 &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xB958;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xC2DC; Arabidopsis &#xC140;&#xC5D0; map3kepsilon1&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBD80;&#xBD84; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; MAP3Kepsilon1 Arabidopsis &#xD654;&#xBD84; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC791;&#xB3D9;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Arabidopsis thaliana&#xC5D0;&#xC11C; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; MAP3K &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; 1 &#xBC0F; MAP3K &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; 2&#xB294;.

Hemos utilizado inversa gen&#xE9;tica an&#xE1;lisis para investigar la funci&#xF3;n de MAP3K &#xE9;psilon 1 y MAP3K &#xE9;psilon 2, un par de genes estrechamente relacionados de Arabidopsis thaliana que codifican prote&#xED;nas quinasas. Las plantas homocig&#xF3;ticas, ya sea para map3k &#xE9;psilon 1 o 2 map3k &#xE9;psilon no mostr&#xF3; fenotipo mutante aparente, mientras que la combinaci&#xF3;n de doble mutante provocado muerte polen. La transmisi&#xF3;n de la combinaci&#xF3;n de doble mutante a trav&#xE9;s del gametofito femenino era normal. An&#xE1;lisis de T&#xE9;trada realiz&#xF3; mediante la mutaci&#xF3;n cuarteto de Arabidopsis demostrado que el fenotipo de polen letal segregados en la meiosis con la &#xE9;psilon map3k 1; map3k genotipo Epsilon 2. Se utiliz&#xF3; la microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de transmisi&#xF3;n para determinar que los granos de polen doble mutante desarrollan una irregularidad de la membrana plasm&#xE1;tica despu&#xE9;s de la mitosis de polen I. An&#xE1;lisis de la localizaci&#xF3;n subcelular de la prote&#xED;na amarilla fluorescente (YFP): MAP3Kepsilon1 prote&#xED;na de fusi&#xF3;n mediante microscop&#xED;a confocal y fraccionamiento bioqu&#xED;mico indic&#xF3; que una parte sustancial de la presente MAP3Kepsilon1 en las c&#xE9;lulas de Arabidopsis se localiza en la membrana plasm&#xE1;tica. Tomados en conjunto, los resultados sugieren que MAP3Kepsilon1 se requiere para el funcionamiento normal de la membrana plasm&#xE1;tica en el desarrollo de polen de Arabidopsis.

La prote&#xED;na quinasa genes MAP3K Epsilon 1 y MAP3K Epsilon 2 son requeridos para la viabilidad del polen en Arabidopsis thaliana

&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; (&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;) &#x57FA;&#x56E0; MEKK1 &#x5BF9;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x7275;&#x8FDE;&#x5230;&#x7684; map &#x6FC0;&#x9176;&#x5728;&#x56DE;&#x5E94;&#x97AD;&#x6BDB;&#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80BD; flg22 MPK3 &#x548C; MPK6 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x643A;&#x5E26; T DNA &#x6316;&#x7A7A;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; MEKK1 &#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; MPK3 &#x6216; MPK6 MPK4 flg22 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; MEKK1 &#x6FC0;&#x9176;&#x53D7;&#x635F;&#x7248;&#x672C;&#x6267;&#x884C;&#x5B9E;&#x9A8C; (K361M) &#x8868;&#x660E; MEKK1 &#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x4E3A;&#x8BF1;&#x5BFC; flg22 MPK4 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6216;&#x5176;&#x4ED6;&#x5B8F;&#x89C2; FLS2 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;MEKK1 &#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x7ED3;&#x6784;&#x4F5C;&#x7528;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3001; &#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5176;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;mekk1 &#x6572;&#x9664;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x4E25;&#x91CD;&#x77EE;&#x5316;&#x8868;&#x578B;&#x3001; &#x6784;&#x80FC;&#x80DD;&#x8D28;&#x6C89;&#x79EF;&#x548C;&#x6784;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x77EE;&#x578B;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x7531;&#x4EFB;&#x4E00; MEKK1 mekk1 &#x6316;&#x7A7A;&#x690D;&#x7269;&#x4E2D;&#x5F15;&#x5165;&#x6551;&#x51FA; &#xFF08;K361M&#xFF09; &#x6784;&#x9020;&#x6216;&#x964D;&#x4F4E;&#x6C34;&#x6768;&#x9178;&#x7684; nahG &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5F53;&#x7528;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5904;&#x7406;&#xFF0C;K361M &#x690D;&#x7269;&#x7A0D;&#x5FAE;&#x5BB9;&#x6613;&#x906D;&#x53D7;&#x5F31;&#x6BD2;&#x682A;&#x7684;&#x91CE;&#x706B;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x7684;&#x8FC7;&#x654F;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE; MEKK1 &#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x690D;&#x7269;&#x6297;&#x75C5;&#x6027;&#x8FD9;&#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; MEKK1 &#x4E0A;&#x6E38;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x75C5;&#x539F;&#x53CD;&#x5E94;&#x901A;&#x8DEF;&#x8D1F;&#x8C03;&#x8282;&#x5668; MPK4&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981; MEKK1 &#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

MEKK1 &#x662F;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x690D;&#x7269;&#x4E2D;&#x8BF1;&#x5BFC; flg22 MPK4 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x3002;

The Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) gene MEKK1 encodes a mitogen-activated protein kinase kinase kinase that has been implicated in the activation of the map kinases MPK3 and MPK6 in response to the flagellin elicitor peptide flg22. In this study, analysis of plants carrying T-DNA knockout alleles indicated that MEKK1 is required for flg22-induced activation of MPK4 but not MPK3 or MPK6. Experiments performed using a kinase-impaired version of MEKK1 (K361M) showed that the kinase activity of MEKK1 may not be required for flg22-induced MPK4 activation or for other macroscopic FLS2-mediated responses. MEKK1 may play a structural role in signaling, independent of its protein kinase activity. mekk1 knockout mutants display a severe dwarf phenotype, constitutive callose deposition, and constitutive expression of pathogen response genes. This dwarf phenotype was largely rescued by introduction into mekk1 knockout plants of either the MEKK1 (K361M) construct or a nahG transgene that degrades salicylic acid. When treated with pathogenic bacteria, the K361M plants were slightly more susceptible to an avirulent strain of Pseudomonas syringae and showed a delayed hypersensitive response, suggesting a role for MEKK1 kinase activity in this aspect of plant disease resistance. Our results indicate that MEKK1 acts upstream of MPK4 as a negative regulator of pathogen response pathways, a function that may not require MEKK1's full kinase activity.

MEKK1 is required for flg22-induced MPK4 activation in Arabidopsis plants.

Le Arabidopsis (Arabidopsis thaliana), le g&#xE8;ne code pour une kinase MEKK1 mitogen-activated protein kinase kinase qui a &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9;e dans l&#x26;#39;activation des MAP kinases et MPK3 MPK6 en r&#xE9;ponse au peptide flagelline &#xE9;liciteur flg22. Dans cette &#xE9;tude, l&#x26;#39;analyse des plantes portant les all&#xE8;les de knock-out d&#x26;#39;ADN-T a indiqu&#xE9; que MEKK1 est n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;activation induite par flg22 de MPK4 mais pas MPK3 ou MPK6. Les exp&#xE9;riences effectu&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;une version r&#xE9;duite de la kinase MEKK1 (K361M) ont montr&#xE9; que l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase de MEKK1 ne peut &#xEA;tre tenu pour flg22 induite par l&#x26;#39;activation MPK4 ou pour d&#x26;#39;autres macroscopiques FLS2 r&#xE9;ponses m&#xE9;di&#xE9;es. MEKK1 peut jouer un r&#xF4;le structurel dans la signalisation, ind&#xE9;pendamment de son activit&#xE9; prot&#xE9;ine kinase. MEKK1 mutants knockout pr&#xE9;sentent un ph&#xE9;notype nain s&#xE9;v&#xE8;re, d&#xE9;p&#xF4;t de callose constitutive, et l&#x26;#39;expression constitutive de g&#xE8;nes de la r&#xE9;ponse des agents pathog&#xE8;nes. Ce ph&#xE9;notype nain a &#xE9;t&#xE9; largement sauv&#xE9; par l&#x26;#39;introduction dans MEKK1 plantes huiti&#xE8;mes de finale de la MEKK1 soit (K361M) construire ou d&#x26;#39;un transg&#xE8;ne nahG qui d&#xE9;grade l&#x26;#39;acide salicylique. Lorsqu&#x26;#39;ils sont trait&#xE9;s par des bact&#xE9;ries pathog&#xE8;nes, les plantes &#xE9;taient K361M un peu plus sensible &#xE0; une souche avirulente de Pseudomonas syringae et a montr&#xE9; une r&#xE9;ponse tardive hypersensible, ce qui sugg&#xE8;re un r&#xF4;le pour l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase MEKK1 dans cet aspect de la r&#xE9;sistance aux maladies des plantes. Nos r&#xE9;sultats indiquent que MEKK1 actes en amont de MPK4 comme un r&#xE9;gulateur n&#xE9;gatif des voies de r&#xE9;ponse des agents pathog&#xE8;nes, une fonction qui ne peut pas exiger l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase de MEKK1 compl&#xE8;te.

MEKK1 est requis pour Flg22 induite par activation dans MPK4 des plantes d&#x26;#39;Arabidopsis

Das Arabidopsis (Arabidopsis Thaliana) Gen MEKK1 codiert eine Mitogen-aktivierte Protein Kinase Kinase-Kinase, die in der Aktivierung der Karte Kinasen MPK3 und MPK6 als Reaktion auf die Flagellin-Milbe-Peptid-flg22 verwickelt hat. In dieser Studie zufolge Analyse von Pflanzen, die T-DNA k.o. Allele tragen MEKK1 f&uuml;r flg22-induzierte Aktivierung des MPK4 aber nicht MPK3 oder MPK6 erforderlich ist. Experimente durchgef&uuml;hrt, eine Kinase-beeintr&auml;chtigt Version von MEKK1 (K361M) zeigte, dass die Kinaseaktivit&auml;t von MEKK1 m&ouml;glicherweise nicht erforderlich f&uuml;r die flg22-induzierte MPK4 Aktivierung oder f&uuml;r andere makroskopischen FLS2-vermittelten Reaktionen. MEKK1 kann eine strukturelle Rolle Signalisierung, unabh&auml;ngig von seiner Protein-Kinase-Aktivit&auml;t. mekk1 Knockout-Mutanten zeigen eine schwere Zwerg Ph&auml;notypus, konstitutive Callose Ablagerung und konstitutive Expression von Pathogen Antwort Genen. Diese Zwerg-Ph&auml;notyp wurde weitgehend gerettet durch Einf&uuml;hrung in mekk1 ko Pflanzen entweder die MEKK1 (K361M) Konstrukt oder ein NahG Transgene, die Salicyls&auml;ure degradiert. Nach Behandlung mit pathogenen Bakterien, die K361M-Pflanzen waren etwas anf&auml;lliger f&uuml;r eine avirulent Belastung von Pseudomonas Syringae und zeigte eine verz&ouml;gerte &Uuml;berempfindlichkeit Response, schl&auml;gt eine Rolle f&uuml;r die MEKK1-Kinase-Aktivit&auml;t in diesem Teilbereich der Pflanze Krankheitsresistenz. Unsere Ergebnisse zeigen, dass MEKK1 Handlungen oberhalb der MPK4 als einen negativen Regulator der Erreger Antwort Wege, eine Funktion, die nicht MEKK1 erfordern volle &#39;s Kinaseaktivit&auml;t.

MEKK1 ist erforderlich f&uuml;r die flg22-induzierte MPK4-Aktivierung in Arabidopsis-Pflanzen.

Il gene di Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) MEKK1 codifica una chinasi della chinasi di chinasi mitogene-attivata della proteina &egrave; stato implicato nell&#39;attivazione della chinasi di mappa MPK3 e MPK6 in risposta alla flagellina elicitori peptide flg22. In questo studio, analisi delle piante che trasportano gli alleli knockout T-DNA ha indicato che MEKK1 &egrave; richiesto per l&#39;attivazione indotta da flg22 di MPK4 ma non MPK3 o MPK6. Gli esperimenti condotti utilizzando una versione ridotta della chinasi MEKK1 (K361M) ha mostrato che l&#39;attivit&agrave; della chinasi di MEKK1 non pu&ograve; essere richiesto per l&#39;attivazione di MPK4 flg22-indotta o per altre risposte macroscopiche FLS2-mediata. MEKK1 pu&ograve; svolgere un ruolo strutturale segnalazione, indipendente dalla sua attivit&agrave; della chinasi di proteina. mutanti knockout MEKK1 visualizzare un fenotipo grave Nana e deposizione di callosio costitutiva espressione costitutiva dei geni di risposta del patogeno. Questo fenotipo nano in gran parte fu salvato dall&#39;introduzione nelle piante knockout mekk1 di entrambi il MEKK1 (K361M) costrutto o un transgene nahG che degrada l&#39;acido salicilico. Quando trattati con batteri patogeni, le piante K361M erano leggermente pi&ugrave; sensibili a un ceppo avirulente di Pseudomonas syringae e ha mostrato una risposta ipersensibilit&agrave; ritardata, suggerendo un ruolo per l&#39;attivit&agrave; della chinasi MEKK1 in questo aspetto della resistenza alle malattie vegetali. I nostri risultati indicano che MEKK1 atti a Monte di MPK4 come un regolatore negativo di percorsi di risposta di agente patogeno, una funzione che non richiedono MEKK1 di piena attivit&agrave; della chinasi.

MEKK1 &egrave; richiesto per l&#39;attivazione di MPK4 flg22-indotta nelle piante di Arabidopsis.

&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#xFF08;Arabidopsis thaliana&#xFF09;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;MEKK1&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30A8;&#x30EA;&#x30B7;&#x30BF;&#x30FC;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;flg22&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;MAP&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;MPK3&#x3068;MPK6&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;T-DNA&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;MEKK1&#x304C;flg22&#x8A98;&#x8D77;MPK4&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;MPK3&#x307E;&#x305F;&#x306F;MPK6&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; MEKK1&#xFF08;K361M&#xFF09;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x4E0D;&#x81EA;&#x7531;&#x306A;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MEKK1&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;flg22&#x8A98;&#x8D77;MPK4&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x5DE8;&#x8996;&#x7684;FLS2&#x5A92;&#x4ECB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MEKK1&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; MEKK1&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x5EA6;&#x306E;&#x77EE;&#x6027;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3001;&#x69CB;&#x6210;&#x30AB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6C88;&#x7740;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x7684;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x77EE;&#x6027;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;MEKK1&#xFF08;K361M&#xFF09;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B5;&#x30EA;&#x30C1;&#x30EB;&#x9178;&#x3092;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3055;&#x305B;&#x308B;nahG&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;MEKK1&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6551;&#x52A9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;K361M&#x690D;&#x7269;&#x306F;Pseudomonas syringae&#x306E;&#x975E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x83CC;&#x682A;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3084;&#x3084;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3068;&#x9045;&#x5EF6;&#x904E;&#x654F;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x75C5;&#x5BB3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x5C40;&#x9762;&#x3067;MEKK1&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;MEKK1 MPK4&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;MEKK1&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

MEKK1&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Flg22&#x8A98;&#x8D77;MPK4&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;

Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) &#xC720;&#xC804;&#xC790; MEKK1 flagellin elicitor &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; flg22&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xB3C4; kinases mpk3&#xC640; mpk6&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD0A4;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC11D; T DNA &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xB300;&#xB9BD;&#xC744; &#xC6B4;&#xBC18; &#xD558;&#xB294; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC758; MEKK1 &#xD558;&#xC9C0; MPK3 &#xB610;&#xB294; MPK6 mpk4&#xC758; flg22 &#xC720;&#xB3C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xC9C0;&#xC801;. &#xB2C8; &#xC7A5;&#xC560; MEKK1 &#xBC84;&#xC804;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8; (K361M) mekk1&#xC758; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; flg22 &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; MPK4 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xAC70;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; FLS2 &#xC911;&#xC7AC; &#xC751;&#xB2F5; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. MEKK1 &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. mekk1 &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xB09C;&#xC7C1;&#xC774; &#xD615;, &#xC81C;&#xC815; callose &#xC99D; &#xCC29; &#xBC0F; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC751;&#xB2F5; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC81C;&#xC815; &#xC2DD;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB09C;&#xC7C1;&#xC774; &#xD615; &#xC911; mekk1&#xC758; mekk1 &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558; &#xC5EC; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAD6C;&#xC870; (K361M) &#xAD6C;&#xC870; &#xB610;&#xB294; &#xC0B4;&#xB9AC;&#xC2E4;&#xC0B0;&#xC758; &#xC0B0; &#xC131; &#xC800;&#xD558; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; nahG transgene. &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xBA74; K361M &#xC2DD;&#xBB3C; &#xB179; syringae&#xC758; avirulent &#xAE34;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC57D;&#xAC04; &#xB354; &#xCDE8;&#xC57D; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xB41C; &#xACFC;&#xBBFC; &#xBC18;&#xC751;, &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC800;&#xD56D;&#xC758;&#xC774; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; MEKK1 &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC751;&#xB2F5; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB85C; &#xC11C; mpk4&#xC758; MEKK1 &#xD589;&#xC704; &#xC0C1;&#xB958;, MEKK1 &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xB294; &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;.

Mekk1&#xB294; &#xC2DD;&#xBB3C; Arabidopsis&#xC758; flg22&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; MPK4 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) MEKK1 gen codifica una quinasa activada por mit&#xF3;genos prote&#xED;na quinasa quinasa que ha sido implicado en la activaci&#xF3;n de las MAP quinasas MPK3 MPK6 y en respuesta al p&#xE9;ptido inductor flg22 flagelina. En este estudio, el an&#xE1;lisis de las plantas portadoras de T-DNA de los alelos knockout indic&#xF3; que se requiere para la MEKK1 flg22 inducida por la activaci&#xF3;n de la MPK4 pero no MPK3 o MPK6. Los experimentos realizados utilizando una versi&#xF3;n alterada de la quinasa-MEKK1 (K361M) mostr&#xF3; que la actividad quinasa de MEKK1 puede no ser necesaria para la flg22 inducida por la activaci&#xF3;n MPK4 o para otros macrosc&#xF3;picos FLS2 las respuestas mediadas. MEKK1 puede jugar un papel estructural en la se&#xF1;alizaci&#xF3;n, independientemente de su actividad de la prote&#xED;na quinasa. MEKK1 mutantes knockout mostrar un fenotipo enano severa, la deposici&#xF3;n de calosa constitutiva, y la expresi&#xF3;n constitutiva de genes de respuesta de pat&#xF3;genos. Este fenotipo enano fue rescatado en gran parte por la introducci&#xF3;n en las plantas MEKK1 octavos de final de cualquiera de la MEKK1 (K361M) construir o un transg&#xE9;n nahG que degrada el &#xE1;cido salic&#xED;lico. Cuando se tratan con bacterias pat&#xF3;genas, las plantas K361M eran ligeramente m&#xE1;s susceptibles a una cepa virulenta de Pseudomonas syringae y mostr&#xF3; una respuesta de hipersensibilidad retardada, lo que sugiere un papel para la actividad quinasa MEKK1 en este aspecto de la resistencia a enfermedades de las plantas. Nuestros resultados indican que MEKK1 actos aguas arriba de MPK4 como un regulador negativo de las v&#xED;as de respuesta del pat&#xF3;geno, una funci&#xF3;n que no puede requerir la actividad de la quinasa completa de MEKK1.

MEKK1 se requiere para Flg22 inducida por la activaci&#xF3;n MPK4 en plantas de Arabidopsis

&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x793E;&#x4F1A;&#x8D44;&#x6E90;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A; WiscDsLox &#x96C6;&#x5408;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4E2D;&#x6267;&#x884C;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6B64;&#x8D44;&#x6E90;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x4F7F;&#x7528;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x5357;&#x82A5;&#x751F;&#x6001;&#x578B;&#x54E5;&#x4F26;&#x6BD4;&#x4E9A;&#x7684; 10,459 T DNA &#x884C;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A; T DNA &#x63D2;&#x5165;&#x7684;&#x4FA7;&#x7FFC;&#x5E8F;&#x5217;&#x6807;&#x8BB0;&#x5DF2;&#x5B58;&#x653E;&#x5728;&#x516C;&#x5171;&#x6570;&#x636E;&#x5E93;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4ECE;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x751F;&#x7269;&#x8D44;&#x6E90;&#x4E2D;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x884C;&#x7684;&#x79CD;&#x5B50;&#x662F;&#x5F53;&#x524D;&#x53EF;&#x7528;&#x3002;&#x7528;&#x4E8E;&#x521B;&#x5EFA;&#x6B64;&#x65B0;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684; pDsLox &#x5411;&#x91CF;&#x5305;&#x542B; Ds &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x548C; Cre/Lox &#x91CD;&#x7EC4;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A; WiscDsLox &#x7EBF;&#x56E0;&#x6B64;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x52A8;&#x5458;&#x7684; Ds &#x5143;&#x7D20;&#x6267;&#x884C;&#x672C;&#x5730;&#x9971;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x53D1;&#x5C04;&#x53F0;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;T-DNA &#x548C;&#x6362;&#x4F4D;&#x7684; Ds &#x5143;&#x7D20;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684; Cre Lox &#x91CD;&#x7EC4;&#x5E94;&#x542F;&#x7528;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x533A;&#x57DF;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x5730;&#x7684;&#x7684;&#x5220;&#x9664;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210; WiscDsLox &#x96C6;&#x5408;&#x5E76;&#x4F7F;&#x7528;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7BA1;&#x9053;&#xFF0C;&#x7B80;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; (L.) Hyenh&#x3002;&#x884C;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x4FE1;&#x606F;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x4E3A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7528;&#x6237;&#x7684; WiscDsLox T-DNA &#x884C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6709;&#x5173;&#x6B64;&#x96C6;&#x5408;&#x7684;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x80CC;&#x666F;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6765;&#x5F62;&#x5BB9; Ds &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x548C; Cre/Lox &#x5143;&#x7D20; WiscDsLox &#x884C;&#x6B63;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5C06;&#x5728;&#x672A;&#x6765;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

WiscDsLox T-DNA &#x96C6;&#x5408;&#xFF1A; &#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF; T DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x7BA1;&#x7EBF;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x7684;&#x793E;&#x4F1A;&#x8D44;&#x6E90;&#x3002;

We have developed a new community resource, called the WiscDsLox collection, for performing reverse-genetic analysis in arabidopsis. This resource is composed of 10,459 T-DNA lines generated using the Arabidopsis thaliana ecotype Columbia. The flanking sequence tag for each T-DNA insertion has been deposited in public databases, and seed for each line is currently available from the Arabidopsis Biological Resource Center. The pDsLox vector used to create this new population contains a Ds transposon and Cre/Lox recombination sites. Each WiscDsLox line therefore has the potential to serve as a launch-pad for performing local saturation mutagenesis by mobilization of the Ds element. In addition, Cre-Lox recombination between the T-DNA and a transposed Ds element should enable targeted deletion of specific genomic regions. We generated the WiscDsLox collection using an improved high-throughput pipeline that streamlines analysis of large numbers of independent Arabidopsis thaliana (L.) Hyenh. lines. In this paper we describe the details of this novel method and also provide potential users of WiscDsLox T-DNA lines with useful background information about this collection. Experiments to characterize the utility of the Ds transposon and Cre/Lox elements present in the WiscDsLox lines are in progress and will be reported in the future.

The WiscDsLox T-DNA collection: an arabidopsis community resource generated by using an improved high-throughput T-DNA sequencing pipeline.

Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une ressource nouvelle communaut&#xE9;, appel&#xE9;e la collection WiscDsLox, pour effectuer l&#x26;#39;analyse g&#xE9;n&#xE9;tique inverse chez Arabidopsis. Cette ressource est compos&#xE9;e de 10.459 T-ADN lignes g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;es en utilisant l&#x26;#39;Arabidopsis thaliana &#xE9;cotype Columbia. La balise s&#xE9;quence flanquante pour chaque insertion ADN-T a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;pos&#xE9; dans les bases de donn&#xE9;es publiques, et des semences pour chaque ligne est actuellement disponible &#xE0; partir du Centre de Ressources Biologiques Arabidopsis. Le vecteur pDsLox utilis&#xE9; pour cr&#xE9;er cette nouvelle population contient un transposon Ds et des sites de recombinaison Cre / Lox. Chaque ligne WiscDsLox a donc le potentiel pour servir de rampe de lancement pour effectuer mutagen&#xE8;se &#xE0; saturation locale par la mobilisation de l&#x26;#39;&#xE9;l&#xE9;ment Ds. En outre, Cre-Lox recombinaison entre l&#x26;#39;ADN-T et un &#xE9;l&#xE9;ment transposable Ds devrait permettre la suppression cibl&#xE9;e des r&#xE9;gions g&#xE9;nomiques sp&#xE9;cifiques. Nous avons g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; la collecte WiscDsLox l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;un meilleur haut-d&#xE9;bit du pipeline qui rationalise l&#x26;#39;analyse d&#x26;#39;un grand nombre d&#x26;#39;Arabidopsis thaliana ind&#xE9;pendante (L.) Hyenh. lignes. Dans cet article, nous d&#xE9;crivons les d&#xE9;tails de cette nouvelle m&#xE9;thode et aussi de fournir aux utilisateurs potentiels de l&#x26;#39;ADN-T WiscDsLox lignes avec des informations g&#xE9;n&#xE9;rales utiles &#xE0; propos de cette collection. Des exp&#xE9;riences visant &#xE0; caract&#xE9;riser l&#x26;#39;utilit&#xE9; du transposon Ds et Cre / Lox &#xE9;l&#xE9;ments pr&#xE9;sents dans les lignes WiscDsLox sont en cours et seront pr&#xE9;sent&#xE9;s dans l&#x26;#39;avenir.

Le WiscDsLox ADN-T Collection: une ressource communautaire Arabidopsis G&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;un am&#xE9;lior&#xE9;e &#xE0; haut d&#xE9;bit ADN-T pipeline de s&#xE9;quen&#xE7;age

Wir haben eine neue Gemeinschaft-Ressource mit dem Namen der WiscDsLox-Auflistung f&uuml;r r&uuml;ckw&auml;rts-genetische Analysen in Arabidopsis entwickelt. Diese Ressource besteht aus 10.459 T-DNA-Linien mit der Arabidopsis Thaliana &Ouml;kotyp Columbia generiert. Das flankierenden Sequenz-Tag f&uuml;r jedes T-DNA-Insertion in &ouml;ffentlichen Datenbanken hinterlegt wurde, und Samen f&uuml;r jede Textzeile ist derzeit aus der Arabidopsis Biological Resource Center. PDsLox Vektors zur Erstellung dieser neuen Bev&ouml;lkerung enth&auml;lt eine Ds-Transposon und Cre/Lox-Rekombination-Sites. Jeder WiscDsLox-Zeile hat daher das Potenzial, als Sprungbrett f&uuml;r die Ausf&uuml;hrung von lokalen S&auml;ttigung Mutagenese durch Mobilisierung des Ds-Elements zu dienen. Dar&uuml;ber hinaus sollten Cre-loxP zwischen der T-DNA und einem umgesetzten Ds Element gezielte L&ouml;schung von spezifischen genomischen Regionen aktivieren. Wir generiert die WiscDsLox-Auflistung, die mithilfe einer verbesserten Hochdurchsatz-Pipeline, die Analyse einer gro&szlig;en Zahl von unabh&auml;ngigen Arabidopsis Thaliana (L.) optimiert Hyenh. Linien. In diesem Papier wir die Details dieser neuartigen Methode zu beschreiben und auch potenzielle Nutzer von WiscDsLox T-DNA Linien mit n&uuml;tzlichen Hintergrundinformationen zu dieser Sammlung. Experimente zur Charakterisierung des Dienstprogramms Ds Transposon und Cre/Lox-Elemente in den WiscDsLox Linien sind in Arbeit und werden in Zukunft gemeldet vorhanden.

Die WiscDsLox T-DNA-Sammlung: eine Arabidopsis-Community-Ressource mithilfe einer verbesserten Hochdurchsatz-T-DNA-Sequenzierung-Pipeline generiert.

Abbiamo sviluppato una nuova risorsa della Comunit&agrave;, chiamata l&#39;insieme di WiscDsLox, per l&#39;esecuzione di analisi genetica inversa in arabidopsis. Questa risorsa &egrave; composta di 10.459 linee di T-DNA generati utilizzando l&#39;Arabidopsis thaliana ecotipo Columbia. L&#39;etichetta di accompagnamento sequenza per ogni inserimento di T-DNA &egrave; stato depositato in banche dati pubbliche e semi per ogni linea sono attualmente disponibile dal centro di risorse biologiche Arabidopsis. Il vettore pDsLox utilizzato per creare questa nuova popolazione contiene un trasposone Ds e siti di ricombinazione di Cre/Lox. Ogni linea di WiscDsLox quindi ha il potenziale per servire come un trampolino di lancio per l&#39;esecuzione di mutagenesi saturazione locale di mobilitazione dell&#39;elemento Ds. Inoltre, ricombinazione Cre-Lox tra il T-DNA e un elemento Ds trasposto dovrebbe attivare l&#39;eliminazione mirati di specifiche regioni genomiche. Abbiamo generato insieme WiscDsLox tramite una pipeline di alto-rendimento migliorata che semplifica l&#39;analisi di un gran numero di indipendente thaliana di Arabidopsis (L.) Hyenh. linee. In questo libro abbiamo descrivere i dettagli di questo nuovo metodo e fornire anche potenziali utenti di T-DNA WiscDsLox linee con informazioni utili su questa collezione. Esperimenti per caratterizzare l&#39;utilit&agrave; del trasposone Ds e Cre/Lox elementi presenti in WiscDsLox linee sono in corso e verranno segnalati in futuro.

La collezione di WiscDsLox T-DNA: una risorsa di comunit&agrave; di arabidopsis generata utilizzando una migliorata high-throughput T-DNA sequencing pipeline.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x3001;WiscDsLox&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x751F;&#x614B;&#x578B;&#x30B3;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A2;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;10459 T-DNA&#x306E;&#x884C;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;T-DNA&#x633F;&#x5165;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x914D;&#x5217;&#x30BF;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x516C;&#x5171;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x5806;&#x7A4D;&#x3057;&#x3001;&#x5404;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7A2E;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x751F;&#x7269;&#x907A;&#x4F1D;&#x8CC7;&#x6E90;&#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x5229;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x96C6;&#x56E3;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;pDsLox&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;DS&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3068;Cre /&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404;WiscDsLox&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;DS&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x98FD;&#x548C;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x767A;&#x5C04;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x79D8;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;T-DNA&#x3068;&#x8EE2;&#x7F6E;DS&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x306F;&#x3001;Cre-lox&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x524A;&#x9664;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#xFF08;L.&#xFF09;Hyenh&#x5927;&#x91CF;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x7C21;&#x7D20;&#x5316;&#x3057;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D1;&#x30A4;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;WiscDsLox&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x884C;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x80CC;&#x666F;&#x60C5;&#x5831;&#x3068;WiscDsLox T-DNA&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30E6;&#x30FC;&#x30B6;&#x306B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; WiscDsLox&#x884C;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;Ds&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3068;Cre /&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x304C;&#x9032;&#x884C;&#x4E2D;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x5C06;&#x6765;&#x7684;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

WiscDsLox T-DNA&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#xFF1A;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;T-DNA&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D1;&#x30A4;&#x30D7;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;

Arabidopsis&#xC758; &#xB9AC;&#xBC84;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xC218;&#xD589;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; WiscDsLox &#xCEEC;&#xB809;&#xC158; &#xB77C;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCEE4;&#xBBA4;&#xB2C8;&#xD2F0; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC2A4;&#xB294; Arabidopsis thaliana ecotype &#xCF5C; &#xB7FC; &#xBE44;&#xC544;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; 10,459 T DNA &#xB77C;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Flanking &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xD0DC;&#xADF8; &#xAC01; T DNA &#xC0BD;&#xC785;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACF5;&#xACF5; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC785;&#xAE08; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC640; Arabidopsis &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC790;&#xC6D0; &#xC13C;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC01; &#xC904;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC528;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; pDsLox &#xBCA1;&#xD130; Ds transposon&#xACFC; Cre/&#xD6C8;&#xC81C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC01; WiscDsLox &#xB77C;&#xC778;&#xC740; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; Ds &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xB3D9;&#xC6D0; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C0;&#xBC29; &#xCC44;&#xB3C4; mutagenesis &#xC218;&#xD589;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xC0AC;&#xB300; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, T DNA&#xC640; &#xC804;&#xCE58; Ds &#xC694;&#xC18C; &#xAC04;&#xC758; Cre Lox &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD2B9;&#xC815; &#xAC8C;&#xB188; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xB41C; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; Arabidopsis thaliana (&#xB098;) &#xB2E4; &#xC218;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xAC04;&#xC18C;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xD30C;&#xC774;&#xD504;&#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; WiscDsLox &#xCEEC;&#xB809;&#xC158; &#xC0DD;&#xC131; Hyenh. &#xB77C;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB17C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC138;&#xBD80; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBC30;&#xACBD; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C;&#xC774; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; WiscDsLox T-DNA&#xC758; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;. Ds transposon &#xBC0F; &#xB77C;&#xC778; &#xC9C4;&#xD589;&#xC911;&#xC774; &#xACE0; &#xB098;&#xC911;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; Wiscdslox&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; Cre/&#xD6C8;&#xC81C; &#xC131;&#xBD84;&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC2E4;&#xD5D8;.

WiscDsLox T DNA &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;: &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; T DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xD30C;&#xC774;&#xD504;&#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; arabidopsis &#xCEE4;&#xBBA4;&#xB2C8;&#xD2F0; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC2A4;.

Hemos desarrollado un nuevo recurso comunitario, llam&#xF3; a la colecci&#xF3;n WiscDsLox, para la realizaci&#xF3;n de an&#xE1;lisis de gen&#xE9;tica inversa en Arabidopsis. Este recurso se compone de 10.459 l&#xED;neas de T-DNA generados mediante la Arabidopsis thaliana ecotipo Columbia. La etiqueta de secuencia de acompa&#xF1;amiento para cada inserci&#xF3;n de T-ADN se ha depositado en bases de datos p&#xFA;blicas, y las semillas de cada l&#xED;nea se encuentra actualmente disponible en el Centro de Recursos Biol&#xF3;gicos Arabidopsis. El vector pDsLox utilizado para crear esta nueva poblaci&#xF3;n contiene un transpos&#xF3;n Ds y Cre / Lox sitios de recombinaci&#xF3;n. Cada l&#xED;nea WiscDsLox por lo tanto, tiene el potencial de servir como plataforma de lanzamiento para realizar mutag&#xE9;nesis de saturaci&#xF3;n local, por la movilizaci&#xF3;n del elemento Ds. Adem&#xE1;s, Cre-Lox recombinaci&#xF3;n entre el ADN-T y un elemento adaptado Ds debe activar la eliminaci&#xF3;n selectiva de regiones gen&#xF3;micas espec&#xED;ficas. Hemos generado la colecci&#xF3;n WiscDsLox utilizando una mejora de alto rendimiento oleoducto que optimiza el an&#xE1;lisis de un gran n&#xFA;mero de Arabidopsis thaliana independiente (L.) Hyenh. l&#xED;neas. En este trabajo se describen los detalles de este nuevo m&#xE9;todo y tambi&#xE9;n proporcionar a los usuarios potenciales de WiscDsLox T-DNA de l&#xED;neas con informaci&#xF3;n &#xFA;til acerca de esta colecci&#xF3;n. Los experimentos para caracterizar la utilidad del transpos&#xF3;n Ds y Cre / Lox elementos presentes en las l&#xED;neas WiscDsLox est&#xE1;n en curso y se informar&#xE1; en el futuro.

El T-ADN WiscDsLox Colecci&#xF3;n: un recurso de la Comunidad de Arabidopsis genera utilizando una mejorada de alto rendimiento de T-ADN de canalizaci&#xF3;n de Secuenciaci&#xF3;n

&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3001; &#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x65B9;&#x6CD5;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x8C03;&#x67E5;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; &#xFF08;&#x56FE;&#xFF09; &#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; MPK6 &#x6574;&#x4E2A;&#x53D1;&#x5C55;&#x6240;&#x8D77;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x690D;&#x7269;&#x7684; MPK6 &#x663E;&#x793A; T DNA &#x7A7A;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7EAF;&#x5408;&#x964D;&#x4F4E;&#x7537;&#x6027;&#x751F;&#x80B2;&#x529B;&#x548C;&#x5F02;&#x5E38;&#x82B1;&#x836F;&#x53D1;&#x80B2;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;mpk6 &#x5DE5;&#x5382;&#x6240;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x79CD;&#x5B50;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x542B;&#x6709;&#x4ECE;&#x5176;&#x79CD;&#x76AE;&#x7834;&#x88C2;&#x4E86;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x3002;&#x529F;&#x80FD;&#x5197;&#x4F59;&#xFF0C;&#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x7248;&#x672C;&#x7684; MPK6 &#x6784;&#x9020;&#x7684;&#x7EE7;&#x627F;&#x6CD5;&#x7684;&#x89C4;&#x5B9A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x6BCD;&#x9898;&#x6539;&#x4E3A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217; AEF &#x5730;&#x5740;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x690D;&#x7269;&#x901A;&#x8FC7; MPK6 &#x672C;&#x673A;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE; MPK6AEF &#x53D1;&#x73B0;&#x4EA7;&#x751F;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x7684;&#x6C14;&#x5B54;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6C14;&#x5B54;&#x9635;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684; MPK6 &#x6700;&#x8FD1;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4F5C;&#x7528;&#x76F8;&#x4E00;&#x81F4;&#x3002;&#x65B0;&#x578B;&#x82B1;&#x5349;&#x8868;&#x578B;&#x5F02;&#x5E38;&#x843C;&#x7247;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x6709;&#x4EBA;&#x5728; MPK6AEF &#x884C;&#x3002;MPK6 &#x672C;&#x673A;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528; YFP MPK6 &#x878D;&#x5408;&#x7684;&#x6784;&#x9020;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x8868;&#x8FBE;&#x89C2;&#x5BDF;&#x6574;&#x4E2A;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x690D;&#x7269;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408; MPK6 &#x5728;&#x591A;&#x4E2A;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;YFP MPK6 &#x6784;&#x9020;&#x627E;&#x6765;&#x62EF;&#x6551;&#x751F;&#x80B2;&#x8868;&#x578B;&#x7684; mpk6 &#x7A7A;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4FDD;&#x7559;&#x5176;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x6307;&#x51FA;&#x690D;&#x7269;&#x8868;&#x8FBE; YFP MPK6 &#x663E;&#x793A;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x9876;&#x7AEF;&#x4F18;&#x52BF;&#x548C;&#x82B1;&#x5E8F;&#x50AC;&#x719F;&#x7684;&#x7F29;&#x77ED;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; YFP &#x6807;&#x8BB0;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684; MPK6 &#x4E2D;&#x5F71;&#x54CD;&#x82B1;&#x5E8F;&#x53D1;&#x5C55;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x82B1;&#x836F;&#x53D1;&#x80B2;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x672C;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; MPK6 &#x53C2;&#x4E0E;&#x8C03;&#x63A7;&#x690D;&#x7269;&#x53D1;&#x80B2;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;

&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; MAP &#x6FC0;&#x9176; MPK6 &#x53C2;&#x4E0E;&#x82B1;&#x836F;&#x3001; &#x82B1;&#x5E8F;&#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x3002;

Loss-of-function, dominant-negative, and change-of-function genetic approaches were used to investigate the role played by the Arabidopsis mitogen-activated protein (MAP) kinase MPK6 throughout development. Plants homozygous for T-DNA null alleles of MPK6 displayed reduced male fertility and abnormal anther development. In addition, a portion of the seed produced by mpk6 plants was found to contain embryos that had burst out of their seed coats. To address potential functional redundancy, a dominant-negative version of MPK6 was constructed by changing the TEY activation loop motif to the amino acid sequence AEF. Plants expressing MPK6AEF via the MPK6 native promoter were found to produce excessive stomata, consistent with the recently described role of MPK6 in stomatal patterning. A novel floral phenotype characterized by abnormal sepal development was also observed in MPK6AEF lines. The gene expression pattern of the MPK6 native promoter was determined using a YFP-MPK6 fusion construct, and expression was observed throughout most plant tissues, consistent with a role for MPK6 in multiple developmental processes. The YFP-MPK6 construct was found to rescue the fertility phenotype of mpk6 null alleles, indicating that the fusion protein retains its biological activity. It was also observed, however, that plants expressing YFP-MPK6 displayed reduced apical dominance and a shortening of inflorescence internodes. These results suggest that the YFP tag modifies the activity of MPK6 in a manner that affects inflorescence development but not anther development. Taken together, the present results indicate that MPK6 is involved in the regulation of multiple aspects of plant development.

Mutational evidence that the Arabidopsis MAP kinase MPK6 is involved in anther, inflorescence, and embryo development.

Perte de fonction, dominante-n&#xE9;gative, et le changement de fonction des approches g&#xE9;n&#xE9;tiques ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;es pour &#xE9;tudier le r&#xF4;le jou&#xE9; par l&#x26;#39;Arabidopsis mitogen-activated protein (MAP) kinase MPK6 au long du d&#xE9;veloppement. Plantes homozygotes pour les all&#xE8;les nuls d&#x26;#39;ADN-T de la fertilit&#xE9; MPK6 affich&#xE9; masculine r&#xE9;duit et d&#xE9;veloppement de l&#x26;#39;anth&#xE8;re anormale. En outre, une partie de la semence produite par les plantes mpk6 s&#x26;#39;est r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; contenir des embryons qui avaient fait irruption hors de leurs t&#xE9;guments. &#xC0; traiter le potentiel de redondance fonctionnelle, une version n&#xE9;gative dominante d&#x26;#39;MPK6 a &#xE9;t&#xE9; construit en changeant le motif d&#x26;#39;activation TEY boucle &#xE0; la s&#xE9;quence d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s AArF. Les plantes exprimant MPK6AEF par le promoteur natif MPK6 ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s &#xE0; produire stomates excessive, compatible avec le r&#xF4;le r&#xE9;cemment d&#xE9;crit des MPK6 dans la structuration des stomates. Un nouveau ph&#xE9;notype floral caract&#xE9;ris&#xE9; par le d&#xE9;veloppement anormal des s&#xE9;pales a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e dans les lignes MPK6AEF. Le profil d&#x26;#39;expression g&#xE9;nique du promoteur natif MPK6 a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;e en utilisant une construction YFP-MPK6 fusion, et d&#x26;#39;expression a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e tout au long de la plupart des tissus v&#xE9;g&#xE9;taux, compatible avec un r&#xF4;le pour MPK6 dans plusieurs processus de d&#xE9;veloppement. La construction YFP-MPK6 a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; pour sauver le ph&#xE9;notype de la fertilit&#xE9; mpk6 all&#xE8;les nuls, ce qui indique que la prot&#xE9;ine de fusion conserve son activit&#xE9; biologique. Il a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e, cependant, que les plantes exprimant YFP-MPK6 affich&#xE9; r&#xE9;duit la dominance apicale et un raccourcissement des entre-n&#x153;uds inflorescence. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que la balise YFP modifie l&#x26;#39;activit&#xE9; de MPK6 d&#x26;#39;une mani&#xE8;re qui affecte le d&#xE9;veloppement inflorescence, mais pas le d&#xE9;veloppement des anth&#xE8;res. Pris dans leur ensemble, les r&#xE9;sultats actuels indiquent que MPK6 est impliqu&#xE9;e dans la r&#xE9;gulation des multiples aspects du d&#xE9;veloppement des plantes.

Preuve mutation qui l&#x26;#39;Arabidopsis MAP Kinase MPK6 est impliqu&#xE9; dans Anth&#xE8;re, Inflorescence, et le d&#xE9;veloppement embryonnaire

Verlust der Funktion, Dominant-negativen und der &Auml;nderungsfunktion genetische Ans&auml;tze wurden verwendet, um die Rolle der Arabidopsis Mitogen-aktivierte Protein (MAP) Kinase MPK6 in der gesamten Entwicklung zu untersuchen. Pflanzen homozygot f&uuml;r T-DNA-null-Allele des MPK6 angezeigt reduziert m&auml;nnliche Fruchtbarkeit und abnorme Anthere Entwicklung. Dar&uuml;ber hinaus wurde ein Teil des Samens von mpk6 Pflanzen produziert Embryonen enthalten, die ihre Samen-M&auml;ntel zerbrechen und hatte gefunden. Adresse-Potenzial, die funktionelle Redundanz, eine Dominant-negativen-Version des MPK6 erstellt wurde, durch &Auml;ndern des TEY Aktivierung Schleife Motivs auf die amino-S&auml;ure-Sequenz AEF. Pflanzen zum Ausdruck MPK6AEF &uuml;ber die MPK6 native Projekttr&auml;ger wurden gefunden, um &uuml;berm&auml;&szlig;ige Spalt&ouml;ffnungen, konsistent mit der k&uuml;rzlich beschriebene Rolle der MPK6 in stomatal Musterung zu produzieren. Ein neuartiger floral Ph&auml;notyp zeichnet sich durch abnorme Kelchblatt Entwicklung wurde auch in MPK6AEF Linien beobachtet. Das Muster des Gen-Ausdrucks des Projekttr&auml;gers MPK6 native wurde mit einem YFP-MPK6-Fusion-Konstrukt ermittelt und Ausdruck wurde beobachtet, w&auml;hrend die meisten Pflanzengewebe, mit eine Rolle f&uuml;r MPK6 in mehreren Entwicklungsprozesse. Das YFP-MPK6-Konstrukt wurde festgestellt, dass um die Fruchtbarkeit-Ph&auml;notyp mpk6 null-Allele, darauf hinweist, dass das Schmelzverfahren Protein seine biologischen Aktivit&auml;t beh&auml;lt zu retten. Es wurde jedoch auch beobachtet, dass Pflanzen Ausdr&uuml;cken YFP-MPK6 reduzierten Apical Dominanz und eine Verk&uuml;rzung des Bl&uuml;tenstandes Internodien angezeigt. Diese Ergebnisse legen nahe, dass das Tag YFP die Aktivit&auml;t von MPK6 in einer Weise &auml;ndert, die Bl&uuml;tenstand Entwicklung aber nicht Anthere Entwicklung beeinflusst. Zusammengenommen deuten die vorliegenden Ergebnisse, dass MPK6 die Verordnung mehrere Aspekte der Pflanzenentwicklung beteiligt ist.

Teilhabende Beweise, dass das Arabidopsis MAP-Kinase MPK6 Anthere, Bl&uuml;tenstand und Embryo Entwicklung beteiligt ist.

Perdita di funzione, dominante-negativo e cambiamento di funzione approcci genetici sono stati utilizzati per indagare il ruolo svolto dalla proteina mitogene-attivata Arabidopsis chinasi (mappa) MPK6 durante lo sviluppo. Piante omozigoti per alleli null T-DNA di MPK6 visualizzato ridotta fertilit&agrave; maschile e sviluppo anormale antera. Inoltre, una parte del seme prodotto da piante di mpk6 &egrave; stata trovata per contenere gli embrioni che avevano scoppiato fuori dal loro cappotti di seme. Potenziale di indirizzo ridondanza funzionale, una versione dominante negativo di MPK6 &egrave; stato costruito modificando il motivo del ciclo di attivazione TEY alla sequenza amino acida AEF. Piante che esprimono MPK6AEF tramite il promotore nativo di MPK6 sono stati trovati per produrre eccessiva stomi, coerenti con il recentemente descritto ruolo di MPK6 nel patterning stomatica. Un romanzo fenotipo floreale caratterizzato da sepalo anormale sviluppo inoltre &egrave; stato osservato nelle linee di MPK6AEF. Il modello di espressione del gene del promotore nativo MPK6 &egrave; stato determinato utilizzando un costrutto di fusione YFP-MPK6, ed espressione &egrave; stata osservata in tutta la maggior parte dei tessuti vegetali, coerenti con un ruolo per MPK6 in molteplici processi di sviluppo. Il costrutto di YFP-MPK6 &egrave; stato trovato a salvare il fenotipo di fertilit&agrave; di mpk6 alleli null, che indica che la proteina di fusione mantiene la sua attivit&agrave; biologica. &Egrave; stato anche osservato, tuttavia, che piante esprimendo YFP-MPK6 visualizzato ridotta Dominanza apicale e un accorciamento di internodi infiorescenza. Questi risultati suggeriscono che l&#39;etichetta YFP modifica l&#39;attivit&agrave; di MPK6 in un modo che colpisce lo sviluppo infiorescenza, ma non lo sviluppo antera. Presi insieme, i risultati attuali indicano che MPK6 &egrave; coinvolto nella regolazione di molteplici aspetti dello sviluppo della pianta.

Mutational prove che la chinasi di Arabidopsis mappa MPK6 &egrave; coinvolto nello sviluppo antera, infiorescenza ed embrione.

&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x3001;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;MAP&#xFF09;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;MPK6&#x304C;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x305F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; MPK6&#x306E;T-DNA&#x30CC;&#x30EB;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;&#x6027;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;&#x7537;&#x6027;&#x4E0D;&#x598A;&#x3068;&#x7570;&#x5E38;&#x846F;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;MPK6&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7A2E;&#x5B50;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x7A2E;&#x76AE;&#x304B;&#x3089;&#x98DB;&#x3073;&#x51FA;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x80DA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5197;&#x9577;&#x6027;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;MPK6&#x306E;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x306E;AEF&#x306B;TEY&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x5909;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MPK6&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;MPK6AEF&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x690D;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x6C17;&#x5B54;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;MPK6&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x904E;&#x5EA6;&#x306E;&#x6C17;&#x5B54;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x843C;&#x7247;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x82B1;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3082;MPK6AEF&#x7DDA;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;MPK6&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;MPK6&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;YFP-MPK6&#x878D;&#x5408;&#x69CB;&#x7BC9;&#x7269;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5F0F;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x7D44;&#x7E54;&#x5168;&#x4F53;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; YFP-MPK6&#x69CB;&#x7BC9;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x305D;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;MPK6&#x30CC;&#x30EB;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E0D;&#x598A;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x6551;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;YFP-MPK6&#x8868;&#x793A;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x690D;&#x7269;&#x306F;&#x9802;&#x82BD;&#x512A;&#x52E2;&#x3068;&#x82B1;&#x5E8F;&#x4F38;&#x9577;&#x306E;&#x77ED;&#x7E2E;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3001;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;YFP&#x30BF;&#x30B0;&#x306F;&#x82B1;&#x5E8F;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x846F;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;MPK6&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x4FEE;&#x98FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;MPK6&#x306F;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x5074;&#x9762;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x5909;&#x7570;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;MAP&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;MPK6&#x306F;&#x846F;&#x3001;&#x82B1;&#x5E8F;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3068;&#x3001;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;

&#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC2E4;, &#xC9C0;&#xBC30; &#xC74C;&#xC218; &#xBC0F; &#xBCC0;&#xACBD; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC811;&#xADFC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; Arabidopsis &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (&#xC9C0;&#xB3C4;) &#xB2C8; mpk6&#xAC00; &#xC5F0;&#xAE30;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xBB3C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; mpk6&#xC758; T-DNA null &#xB300;&#xB9BD; homozygous &#xB0A8;&#xC131; &#xBD88; &#xC784; &#xBC0F; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xAF43; &#xBC25; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xAC10;&#xC18C;. &#xB610;&#xD55C;, mpk6 &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xC528;&#xC557;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC528;&#xC557; &#xCF54;&#xD2B8; &#xBC16;&#xC73C;&#xB85C; &#xD30C;&#xC5F4; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC30;&#xC544;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xC18C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC911;&#xBCF5;, mpk6&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBC84;&#xC804; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; AEF TEY &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB8E8;&#xD504; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC74;&#xC124; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. MPK6 &#xAE30;&#xBCF8; &#xBAA8;&#xD130;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; mpk6aef&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD55C; stomata, stomatal &#xD328;&#xD134;&#xD654;&#xC5D0; mpk6&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC124;&#xBA85;&#xB41C; &#xC5ED;&#xD560; &#xC77C;&#xCE58; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; sepal &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC18C;&#xC124; &#xAF43; &#xD615;&#xB3C4; MPK6AEF &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. MPK6 &#xAE30;&#xBCF8; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134; YFP MPK6 &#xD4E8;&#xC804; &#xAD6C;&#xBB38;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DD; &#xC77C;&#xAD00;&#xC131; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; mpk6&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. YFP MPK6 &#xAD6C;&#xBB38; mpk6 null &#xB300;&#xB9BD;, &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC720;&#xC9C0;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;&#xC758; &#xB2E4; &#xC0B0; &#xD615; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;,, &#xC2DD;&#xBB3C; YFP MPK6 &#xD45C;&#xD604; &#xAC10;&#xC18C; apical &#xC9C0;&#xBC30;&#xC640; &#xAF43;&#xC774; &#xD54C; internodes&#xC758; &#xB2E8;&#xCD95; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; YFP &#xD0DC;&#xADF8; &#xC218;&#xC815; &#xAF43;&#xC774; &#xD54C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xAF43; &#xBC25; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xB294; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; mpk6&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; MPK6 &#xC2DD;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xB2EC;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCE21;&#xBA74;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xAD00;&#xB828; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Mutational &#xC99D;&#xAC70; Arabidopsis &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; MPK6 &#xAF43; &#xBC25;, &#xAF43;&#xC774; &#xD54C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBC30;&#xC544; &#xBC1C;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La p&#xE9;rdida de la funci&#xF3;n, dominante-negativa, y el cambio de la funci&#xF3;n de los enfoques gen&#xE9;ticos han sido utilizados para investigar el papel desempe&#xF1;ado por la Arabidopsis activadas por mit&#xF3;genos (MAP) quinasa MPK6 lo largo del desarrollo. Las plantas homocigotos para alelos nulos de T-ADN de MPK6 muestran reducci&#xF3;n de la fertilidad masculina y desarrollo de la antera anormal. Adem&#xE1;s, una porci&#xF3;n de la semilla producida por mpk6 plantas se encontr&#xF3; que conten&#xED;a embriones que hab&#xED;an salido de sus capas de semillas. Para hacer frente a la redundancia funcional potencial, una versi&#xF3;n dominante negativo de MPK6 se construy&#xF3; cambiando el motivo de activaci&#xF3;n bucle TEY a la AEF secuencia de amino&#xE1;cidos. Las plantas que expresan a trav&#xE9;s de la promotora MPK6AEF MPK6 nativa se encontr&#xF3; que producen exceso de estomas, en consonancia con el papel de la recientemente descrita MPK6 en los patrones de los estomas. Un nuevo fenotipo floral caracterizado por el desarrollo anormal de los s&#xE9;palos tambi&#xE9;n se observ&#xF3; en l&#xED;neas MPK6AEF. El patr&#xF3;n de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica del promotor MPK6 nativa se determin&#xF3; usando un YFP-MPK6 construcci&#xF3;n de la fusi&#xF3;n, y la expresi&#xF3;n se observ&#xF3; a lo largo de la mayor&#xED;a de los tejidos de las plantas, en consonancia con el papel de MPK6 en m&#xFA;ltiples procesos de desarrollo. El constructo YFP-MPK6 se encontr&#xF3; para rescatar el fenotipo de la fertilidad mpk6 alelos nulos, lo que indica que la prote&#xED;na de fusi&#xF3;n retiene su actividad biol&#xF3;gica. Tambi&#xE9;n se observ&#xF3;, sin embargo, que las plantas que expresan YFP-MPK6 muestra reduce la dominancia apical y un acortamiento de los entrenudos inflorescencia. Estos resultados sugieren que la etiqueta YFP modifica la actividad de MPK6 de una manera que afecta al desarrollo inflorescencia pero no el desarrollo antera. En conjunto, los resultados indican que MPK6 est&#xE1; implicado en la regulaci&#xF3;n de los m&#xFA;ltiples aspectos de desarrollo de la planta.

La evidencia de mutaci&#xF3;n que la Arabidopsis MAP quinasa MPK6 est&#xE1; involucrado en la antera, inflorescencia, y el desarrollo embrionario

Abbiamo sviluppato in precedenza un sistema high-throughput chiamato &#39;Calotta&#39; per la coltivazione di piantine di Arabidopsis in un formato a 96 pozzetti e rapidamente raccogliendo il tessuto per la successiva estrazione del DNA e tipizzazione. Mentre il metodo originariamente descritto calotta di ghiaccio &egrave; uno strumento efficace per high-throughput genotyping, una lacuna della prima versione della calotta di ghiaccio &egrave; che sviluppo del semenzale ottimale dipende altamente specifiche condizioni ambientali. Qui descriviamo alcuni miglioramenti tecnici al metodo calotta di ghiaccio che lo rendono molto pi&ugrave; robusto e forniscono un protocollo dettagliato per l&#39;implementazione del metodo.

Protocollo: Un metodo migliorato di high-throughput per la generazione di campioni di tessuto in formato 96 pozzetti per genotipizzazione vegetale (calotta 2.0).

Nous avons d&#xE9;j&#xE0; d&#xE9;velopp&#xE9; un syst&#xE8;me &#xE0; haut d&#xE9;bit appel&#xE9; &#xAB;Ice-Cap&#xBB; pour de plus en plus jeunes plants d&#x26;#39;Arabidopsis dans un format de 96 puits et rapidement recueillir des tissus pour l&#x26;#39;extraction ult&#xE9;rieure de l&#x26;#39;ADN et le g&#xE9;notypage. Alors que le d&#xE9;crit &#xE0; l&#x26;#39;origine de glace-Cap m&#xE9;thode est un outil efficace pour g&#xE9;notypage &#xE0; haut d&#xE9;bit, une lacune de la premi&#xE8;re version de la calotte glaciaire, c&#x26;#39;est que la croissance des semis optimale est fortement d&#xE9;pendante des conditions environnementales sp&#xE9;cifiques. Nous d&#xE9;crivons ici plusieurs am&#xE9;liorations techniques &#xE0; la m&#xE9;thode de glace-Cap qui font qu&#x26;#39;il est beaucoup plus robuste et de fournir un protocole d&#xE9;taill&#xE9; pour la mise en &#x153;uvre de la m&#xE9;thode.

Protocole: Un Am&#xE9;lioration haut d&#xE9;bit M&#xE9;thode pour g&#xE9;n&#xE9;rer des &#xE9;chantillons de tissus en format de 96 puits pour le g&#xE9;notypage des plantes (Ice Cap-2.0)

Entwickelten wir zuvor eine Hochdurchsatz-genannt &#39;Eiskappe&#39; f&uuml;r den Anbau von Arabidopsis S&auml;mlinge in einem 96-Well-Format und schnell sammeln Gewebe f&uuml;r sp&auml;tere DNA-Extraktion und Genotypisierung. W&auml;hrend die urspr&uuml;nglich beschriebene Eiskappe Methode ein wirksames Instrument f&uuml;r Hochdurchsatz-Genotypisierung, ist ein Manko der ersten Version der Eiskappe, dass optimale S&auml;mlingwachstum stark abh&auml;ngig von bestimmten Umweltbedingungen. Hier beschreiben wir einige technische Verbesserungen der Eiskappe-Methode, die machen es viel robuster und bieten ein ausf&uuml;hrliches Protokoll f&uuml;r die Implementierung der Methode.

Protokoll: Eine verbesserte Hochdurchsatz-Methode zum Generieren von Gewebeproben in 96-Well-Format f&uuml;r Pflanze Genotypisierung (Eiskappe 2.0).

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53EB;&#x505A; &#39;&#x51B0;&#x5E3D;&#39; 96 &#x4E95;&#x683C;&#x5F0F;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x80B2;&#x82D7;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x6536;&#x96C6;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x968F;&#x540E; DNA &#x7684;&#x63D0;&#x53D6;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5206;&#x578B;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x6700;&#x521D;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x51B0;&#x5E3D;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5206;&#x578B;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x51B0;&#x5E3D;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7248;&#x672C;&#x7684;&#x7F3A;&#x70B9;&#x4E4B;&#x4E00;&#x662F;&#x6700;&#x4F18;&#x5E7C;&#x82D7;&#x751F;&#x957F;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6280;&#x672F;&#x7ED9;&#x51B0;&#x5E3D;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5B83;&#x66F4;&#x52A0;&#x5065;&#x58EE;&#x548C;&#x4E3A;&#x5B9E;&#x65BD;&#x8BE5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x534F;&#x8BAE;&#x3002;

&#x534F;&#x8BAE;&#xFF1A; &#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x5206;&#x578B; (&#x51B0;&#x5E3D; 2.0) 96 &#x4E95;&#x683C;&#x5F0F;&#x751F;&#x6210;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6837;&#x672C;&#x3002;

We previously developed a high-throughput system called 'Ice-Cap' for growing Arabidopsis seedlings in a 96-well format and rapidly collecting tissue for subsequent DNA extraction and genotyping. While the originally described Ice-Cap method is an effective tool for high-throughput genotyping, one shortcoming of the first version of Ice-Cap is that optimal seedling growth is highly dependent on specific environmental conditions. Here we describe several technical improvements to the Ice-Cap method that make it much more robust and provide a detailed protocol for implementing the method.

Protocol: An improved high-throughput method for generating tissue samples in 96-well format for plant genotyping (Ice-Cap 2.0).

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;96&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x5B9F;&#x751F;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;DNA&#x62BD;&#x51FA;&#x3068;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x53CE;&#x96C6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E; &#x26;quot;&#x30A2;&#x30A4;&#x30B9;&#xB7;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x26;quot;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F53;&#x521D;&#x306F;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30A4;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x6CD5;&#x306F;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A2;&#x30A4;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x6B20;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x82D7;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x6761;&#x4EF6;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x4F5C;&#x308A;&#x3001;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30A4;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x65B9;&#x5F0F;&#x306B;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x306A;&#x6539;&#x5584;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#xFF1A;&#x690D;&#x7269;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x7528;96&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x7D44;&#x7E54;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x6CD5;&#xFF08;&#x30A2;&#x30A4;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;2.0&#xFF09;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; 96-&#xC798; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; Arabidopsis &#xBB18; &#xBAA9; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xD6C4;&#xC18D; DNA &#xCD94;&#xCD9C; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xD615;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xC218;&#xC9D1; &#39; &#xC5BC;&#xC74C; &#xBAA8;&#xC790; &#39; &#xB77C;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC6D0;&#xB798; &#xC124;&#xBA85;&#xB41C; Ice Cap &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC720;&#xC804;&#xD615; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAD6C;, Ice Cap&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBC84;&#xC804;&#xC758; 1 &#xACB0;&#xC810;&#xC740; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xBAA8; &#xC885; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC774;&#xB2E4; &#xD2B9;&#xC815; &#xD658;&#xACBD; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xAD6C;&#xD604; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C1;&#xC138;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; Ice Cap &#xBC29;&#xBC95; &#xAE30;&#xC220; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xAE30;&#xC220;.

&#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;:&#xB294; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xBC29;&#xBC95; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC720;&#xC804;&#xD615; (Ice Cap 2.0) 96-&#xC798; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Anteriormente hemos desarrollado un sistema de alto rendimiento llamada &#x26;quot;capa de hielo&#x26;quot; para el crecimiento de pl&#xE1;ntulas de Arabidopsis en un formato de 96 pocillos y r&#xE1;pido de recopilaci&#xF3;n de tejido para su posterior extracci&#xF3;n de ADN y el genotipado. Mientras que el descrito originalmente capa de hielo m&#xE9;todo es una herramienta eficaz para el genotipado de alto rendimiento, una deficiencia de la primera versi&#xF3;n de la capa de hielo es que el crecimiento de pl&#xE1;ntulas &#xF3;ptimo depende en gran medida las condiciones ambientales espec&#xED;ficas. Aqu&#xED; se describen varias mejoras t&#xE9;cnicas en el m&#xE9;todo de capa de hielo que lo hacen mucho m&#xE1;s robusto y proporcionar un protocolo detallado para la aplicaci&#xF3;n del m&#xE9;todo.

Protocolo: Un Mejor M&#xE9;todo de alto rendimiento para la generaci&#xF3;n de muestras de tejido en el formato de 96 pocillos para la genotipificaci&#xF3;n de la planta (Ice Cap 2.0)

&#x9676;&#x74F7;&#x7816;&#x7C98;&#x7ED3;&#x5242; &#xFF08;&#x7528;&#x4E8E;&#x57FA;&#x56E0;&#x9776;&#x5411;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5C40;&#x90E8;&#x75C5;&#x53D8;&#x4E2D;&#x7EC4;) &#x662F;&#x7528;&#x4E8E;&#x6807;&#x8BC6;&#x6267;&#x884C;&#x4E2D;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x690D;&#x7269;&#x65E2;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x9676;&#x74F7;&#x7816;&#x7C98;&#x7ED3;&#x5242;&#x9879;&#x76EE;&#x9700;&#x8981;&#x6295;&#x5165;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x548C;&#x8D44;&#x6E90;&#x6765;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4EBA;&#x53E3;&#x548C;&#x7B5B;&#x9009;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x8BBE;&#x65BD;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4FEE;&#x6539;&#x540E;&#x7684;&#x9676;&#x74F7;&#x7816;&#x7C98;&#x7ED3;&#x5242;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E;&#x4E86;&#x6267;&#x884C;&#x7A81;&#x53D8;&#x7B5B;&#x67E5;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6295;&#x8D44;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x5C55; iTILLING &#x7684;&#x52A8;&#x673A;&#x662F;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5176;&#x5B9E;&#x9645;&#x7684;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x6765;&#x8FC5;&#x901F;&#x6267;&#x884C;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x80CC;&#x666F;&#x3002;&#x4E0E; iTILLING&#xFF0C;mutagenized &#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E;&#x4E86;&#x7BA1;&#x7406;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x884C;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x52B3;&#x52A8;&#x529B;&#x4ECE;&#x6536;&#x96C6;&#x6563;&#x88C5; M2 &#x79CD;&#x5B50;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x6267;&#x884C; 96 &#x4E95;&#x683C;&#x5F0F;&#x4E3A;&#x8BF1;&#x53D8;&#x9009;&#x80B2;&#x3001; &#x7EC4;&#x7EC7;&#x6536;&#x96C6;&#x548C;&#x63D0;&#x53D6; DNA M2 &#x5E7C;&#x82D7;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x662F;&#x7136;&#x540E;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7194;&#x70B9;&#x66F2;&#x7EBF;&#x5206;&#x6790;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x4EA7;&#x7269;&#x3002;&#x4E2A;&#x522B;&#x690D;&#x7269;&#x643A;&#x5E26;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5174;&#x8DA3;&#x4ECE; 96 &#x4E95;&#x751F;&#x957F;&#x677F;&#x8F6C;&#x5230;&#x571F;&#x58E4;&#x3002;&#x4E00;&#x4F4D;&#x79D1;&#x5B66;&#x5BB6;&#x5728;&#x4E0D;&#x5C11;&#x4E8E; 4 &#x4E2A;&#x6708;&#x5373;&#x53EF;&#x5B8C;&#x6210; iTILLING &#x5C4F;&#x5E55;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x6D4B;&#x8BD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD0;&#x7528; (&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;) &#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x690D;&#x7269;&#x5408;&#x5B50; mekk1-1 &#xFF08;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x6FC0;&#x9176; 1 MAPK/ERK) &#x7A81;&#x53D8;&#x5E76;&#x8FD8;&#x8FDB;&#x884C; MEKK1 &#x6551;&#x63F4;&#x6784;&#x9020; iTILLING&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x5C4F;&#x5E55;&#x7684;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684; MEKK2 &#x548C; MEKK3 &#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E86;&#x4E94;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; MEKK2 &#x548C; MEKK3&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x5185; 20 kb mekk1 1 T DNA &#x63D2;&#x5165;&#x7684;&#x4E03;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x91CD;&#x590D;&#x7684;&#x8FED;&#x4EE3;&#x7684; iTILLING &#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6216;&#x591A;&#x4E2A;&#x4E32;&#x8054;&#x91CD;&#x590D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;

iTILLING&#xFF1A; &#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4E2D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7A81;&#x53D8;&#x91C7;&#x53D6;&#x4E2A;&#x6027;&#x5316;&#x7684;&#x505A;&#x6CD5;&#x3002;

TILLING (for Targeting Induced Local Lesions IN Genomes) is a well-established method for identifying plants carrying point mutations in genes of interest. A traditional TILLING project requires a significant investment of time and resources to establish the mutant population and screening infrastructure. Here, we describe a modified TILLING procedure that substantially reduces the investment needed to perform mutation screening. Our motivation for developing iTILLING was to make it practical for individual laboratories to rapidly perform mutation screens using specialized genetic backgrounds. With iTILLING, M2 seeds are collected in bulk from the mutagenized population of plants, greatly reducing the labor needed to manage the mutant lines. Growth of the M2 seedlings for mutation screening, tissue collection, and DNA extraction are all performed in 96-well format. Mutations are then identified using high-resolution melt-curve analysis of gene-specific polymerase chain reaction products. Individual plants carrying mutations of interest are transferred from the 96-well growth plates to soil. One scientist can complete an iTILLING screen in less than 4 months. As a proof-of-principle test, we applied iTILLING to Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) plants that were homozygous for the mekk1-1 (for MAPK/ERK kinase kinase 1) mutation and also carried a MEKK1 rescue construct. The goal of our screen was to identify mutations in the closely linked MEKK2 and MEKK3 loci. We obtained five mutations in MEKK2 and seven mutations in MEKK3, all located within 20 kb of the mekk1-1 T-DNA insertion. Using repeated iterations of the iTILLING process, mutations in three or more tandemly duplicated genes could be generated.

iTILLING: a personalized approach to the identification of induced mutations in Arabidopsis.

TILLING (pour le ciblage des l&#xE9;sions induites par locaux Dans les g&#xE9;nomes) est une m&#xE9;thode bien &#xE9;tablie pour identifier les plantes porteuses de mutations ponctuelles dans les g&#xE8;nes d&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t. Un projet de TILLING traditionnelle n&#xE9;cessite un investissement important de temps et de ressources pour &#xE9;tablir la population mutante et des infrastructures de d&#xE9;pistage. Ici, nous d&#xE9;crivons une proc&#xE9;dure TILLING modifi&#xE9;e qui r&#xE9;duit consid&#xE9;rablement l&#x26;#39;investissement n&#xE9;cessaire pour r&#xE9;aliser un d&#xE9;pistage de mutation. Notre motivation pour d&#xE9;velopper iTILLING &#xE9;tait de rendre pratique pour les laboratoires individuels &#xE0; effectuer rapidement des &#xE9;crans de mutation &#xE0; l&#x26;#39;aide sp&#xE9;cialis&#xE9;s origines g&#xE9;n&#xE9;tiques. Avec iTILLING, graines M2 sont collect&#xE9;es en vrac de la population mutag&#xE9;nis&#xE9; de plantes, r&#xE9;duisant consid&#xE9;rablement le travail n&#xE9;cessaire pour g&#xE9;rer les lign&#xE9;es mutantes. La croissance des plants M2 pour le d&#xE9;pistage de mutation, la collecte de tissus, et l&#x26;#39;extraction d&#x26;#39;ADN sont tous r&#xE9;alis&#xE9;s en format 96 puits. Les mutations sont ensuite identifi&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;aide de haute r&#xE9;solution &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat fondu courbe d&#x26;#39;analyse de produits sp&#xE9;cifiques du g&#xE8;ne polym&#xE9;rase Chain Reaction. Les plantes individuelles porteuses de mutations d&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t sont transf&#xE9;r&#xE9;s &#xE0; partir des plaques de croissance de 96 puits dans le sol. Un scientifique peut compl&#xE9;ter un &#xE9;cran iTILLING en moins de 4 mois. Comme un test de validation de principe, nous avons appliqu&#xE9; &#xE0; iTILLING (Arabidopsis thaliana) Arabidopsis plantes qui &#xE9;taient homozygotes pour la MEKK1-1 (pour MAPK / ERK kinase kinase 1) mutation et &#xE9;galement r&#xE9;alis&#xE9; une op&#xE9;ration de sauvetage MEKK1 construire. Le but de notre &#xE9;cran &#xE9;tait d&#x26;#39;identifier des mutations dans les MEKK2 et MEKK3 &#xE9;troitement li&#xE9;s loci. Nous avons obtenu cinq mutations dans MEKK2 et sept mutations dans MEKK3, tous situ&#xE9;s dans les 20 ko de l&#x26;#39;insertion MEKK1-1 ADN-T. Utilisation de multiples it&#xE9;rations du processus iTILLING, des mutations dans trois g&#xE8;nes ou plus en tandem double pourrait &#xEA;tre g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;e.

ITILLING: une approche personnalis&#xE9;e pour l&#x26;#39;identification des mutations induites chez Arabidopsis

TILLING (f&uuml;r Targeting Induced Local L&auml;sionen IN Genomen) ist eine allgemein anerkannte Methode zur Identifizierung von Pflanzen, die mit Punkt-Mutationen in Genen von Interesse. Ein traditionelles TILLING-Projekt erfordert eine bedeutende Investition von Zeit und Ressourcen zur Etablierung mutant Bev&ouml;lkerung und Screening-Infrastruktur. Hier beschreiben wir eine modifizierte TILLING-Prozedur, die die Mutation Screening durchf&uuml;hren erforderlichen Investitionen erheblich reduziert. Unsere Motivation f&uuml;r die Entwicklung von iTILLING wurde um es praktisch f&uuml;r einzelne Laboratorien Mutation Bildschirme verwenden spezielle genetische Hintergr&uuml;nde schnell durchf&uuml;hren. Mit iTILLING sind mutagenized Bev&ouml;lkerung der Pflanzen stark reduziert die Arbeit ben&ouml;tigt, um die Mutanten Linien M2 Samen in gro&szlig;en Mengen gesammelt. Wachstum der S&auml;mlinge M2 f&uuml;r Mutation Screening, Gewebe-Auflistung und DNA-Extraktion werden in 96-Well-Format ausgef&uuml;hrt. Die Mutationen sind dann mit hochaufl&ouml;senden Schmelze-Kurvenanalyse Gen-spezifischen Polymerase-Kettenreaktion-Produkte. Einzelpflanzen mit Mutationen des Interesses werden von den Wachstum 96-Well-Platten zum Boden &uuml;bertragen. Ein Wissenschaftler kann einen iTILLING-Bildschirm in weniger als 4 Monaten abgeschlossen werden. Als Beweis-des-Prinzip Test wir iTILLING auf Arabidopsis (Arabidopsis Thaliana) Pflanzen, die homozygot f&uuml;r die Mutation mekk1-1 (f&uuml;r MAPK/ERK-Kinase-Kinase 1) wurden und auch ein MEKK1-Rettung-Konstrukt angewendet. Das Ziel von unserem Bildschirm war Mutationen in der eng verbundenen MEKK2 und MEKK3 Loci identifiziert. Wir erhielten f&uuml;nf Mutationen im MEKK2 und sieben Mutationen im MEKK3, alle gelegen innerhalb der mekk1-1 T-DNA Einf&uuml;gung 20 kb. Mit wiederholte Iterationen des iTILLING Prozesses, konnten Mutationen in drei oder mehr tandemly duplizierten Genen generiert werden.

iTILLING: eine personalisierte Ansatz zur Identifizierung der induzierten Mutationen in Arabidopsis.

TILLING (per Targeting Induced Local lesioni IN genomi) &egrave; un metodo consolidato per l&#39;identificazione di piante che trasportano le mutazioni puntiformi nei geni di interesse. Un progetto TILLING tradizionale richiede un notevole investimento di tempo e risorse per stabilire la popolazione mutante e infrastruttura di screening. Qui, descriviamo una procedura TILLING modificata che riduce notevolmente gli investimenti necessari per eseguire lo screening della mutazione. La nostra motivazione per lo sviluppo di iTILLING era di rendere pratico per singoli laboratori eseguire rapidamente schermi mutazione utilizzando specializzati background genetico. Con iTILLING, M2 semi sono raccolti in massa della popolazione mutagenized delle piante, riducendo notevolmente il lavoro necessario per gestire le linee mutanti. Crescita dei semenzali M2 per lo screening della mutazione, tessuto insieme ed estrazione del DNA sono tutte eseguite in formato a 96 pozzetti. Vengono quindi identificate mutazioni utilizzando l&#39;analisi della curva di fusione ad alta risoluzione dei prodotti di reazione a catena della polimerasi di gene-specific. Singole piante portatrici di mutazioni di interesse vengono trasferiti dalle piastre a 96 pozzetti crescita al suolo. Uno scienziato pu&ograve; completare uno schermo iTILLING in meno di 4 mesi. Come un test di prova di principio, abbiamo applicato iTILLING piante di Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) che erano omozigoti per la mutazione mekk1-1 (per la chinasi della chinasi MAPK/ERK 1) e inoltre ha trasportato un costrutto di salvataggio MEKK1. L&#39;obiettivo del nostro schermo era di identificare mutazioni in loci MEKK2 e MEKK3 strettamente collegati. Abbiamo ottenuto cinque mutazioni in MEKK2 e sette mutazioni in MEKK3, tutti situati all&#39;interno di 20 kb di inserimento mekk1-1 T-DNA. Utilizzando ripetute iterazioni del processo iTILLING, mutazioni nei geni tandemly ripetuti tre o pi&ugrave; potrebbero essere generate.

iTILLING: un approccio personalizzato per l&#39;identificazione di mutazioni indotte in Arabidopsis.

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iTILLING&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x306E;&#x53CD;&#x5FA9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;3&#x3064;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x91CD;&#x8907;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

ITILLING&#xFF1A;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306B;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BD;&#x30CA;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;

TILLING (&#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; &#xC720;&#xBC1C; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBCD1; &#xBCC0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC8C;&#xB188;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC6B4;&#xBC18; &#xD558;&#xB294; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xAE30;&#xCD08;&#xAC00; &#xD2BC;&#xD2BC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; TILLING &#xD504;&#xB85C;&#xC81D;&#xD2B8; &#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xAD6C;&#xC640; &#xAC80;&#xC5F4; &#xC778;&#xD504;&#xB77C;&#xB97C; &#xAD6C;&#xCD95; &#xD558;&#xB294; &#xC790;&#xC6D0;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xD22C;&#xC790;&#xB97C; &#xC694;&#xAD6C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD22C;&#xC790;&#xB97C; &#xC904;&#xC5EC; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; TILLING &#xD504;&#xB85C;&#xC2DC;&#xC800;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Itilling&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB3D9;&#xAE30; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0; &#xC804;&#xBB38;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xBC30;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E4;&#xC6A9;&#xC801; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD588;&#xB2E4;. ITILLING&#xC640; M2 &#xC528;&#xC557; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC758; mutagenized &#xC778;&#xAD6C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xAD00;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB178;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xB7C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218;&#xC9D1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC80;&#xC0AC;, &#xC870;&#xC9C1; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158; &#xBC0F; DNA &#xCD94;&#xCD9C; M2 &#xBB18; &#xBAA9;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xBAA8;&#xB450; 96-&#xC798; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD00;&#xB828; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC6A9;&#xC735; &#xACE1;&#xC120; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB2E4;&#xC74C;. &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB4E4;&#xACE0; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xD1A0;&#xC591; 96-&#xC798; &#xC131;&#xC7A5; &#xD310;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC1A1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD55C; &#xACFC;&#xD559;&#xC790;&#xAC00; 4 &#xAC1C;&#xC6D4; &#xBBF8;&#xB9CC;&#xC5D0; iTILLING &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC644;&#xB8CC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xB9AC; &#xC99D;&#xBA85; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC; homozygous mekk1-1 (MAPK/ERK &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 1)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xC2E4;&#xC2DC; MEKK1 &#xAD6C;&#xC870; &#xAD6C;&#xBB38; Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0; iTILLING &#xC801;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; MEKK2 &#xBC0F; MEKK3 loci&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; mekk2&#xC5D0;&#xC11C; 5 &#xAC1C;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; MEKK3, mekk1-1 T DNA &#xC0BD;&#xC785;&#xC758; 20 kb &#xB0B4; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; 7 &#xAC1C;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCDE8;&#xB4DD;. ITILLING &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xBC18;&#xBCF5;&#xB41C; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC138; &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; tandemly &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC131; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

iTILLING: Arabidopsis &#xC720;&#xBC1C;&#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xCDA4;&#xD615;&#xB41C; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;.

TILLING (de orientaci&#xF3;n inducida lesiones locales en los genomas) es un m&#xE9;todo bien establecido para la identificaci&#xF3;n de las plantas portadoras de mutaciones puntuales en los genes de inter&#xE9;s. Un proyecto TILLING tradicional requiere una importante inversi&#xF3;n de tiempo y recursos para establecer la poblaci&#xF3;n mutante y la infraestructura de detecci&#xF3;n. A continuaci&#xF3;n, describimos un procedimiento TILLING modificado que reduce sustancialmente la inversi&#xF3;n necesaria para llevar a cabo la detecci&#xF3;n de mutaciones. Nuestra motivaci&#xF3;n para el desarrollo de iTILLING era para que sea pr&#xE1;ctico para los laboratorios individuales para llevar a cabo con rapidez pantallas sobre mutaciones especializados antecedentes gen&#xE9;ticos. Con iTILLING, semillas M2 se recogen en la mayor parte de la poblaci&#xF3;n mutagenizada de las plantas, reduciendo el trabajo necesario para gestionar las l&#xED;neas mutantes. El crecimiento de las plantas M2 para la detecci&#xF3;n de mutaciones, la recogida de tejidos, y la extracci&#xF3;n de ADN son todas realizadas en formato de 96 pocillos. Las mutaciones se identificaron utilizando entonces de alta resoluci&#xF3;n en fusi&#xF3;n curva de an&#xE1;lisis de genes espec&#xED;ficos de los productos de reacci&#xF3;n en cadena de polimerasa. Las plantas individuales que llevan mutaciones de inter&#xE9;s son transferidos desde las placas de crecimiento 96-y al suelo. Un cient&#xED;fico puede completar una pantalla de iTILLING en menos de 4 meses. Como prueba de la prueba de principio, se aplic&#xF3; a iTILLING (Arabidopsis thaliana) de Arabidopsis plantas que eran homocigotos para la MEKK1-1 (para MAPK / ERK quinasa quinasa 1) la mutaci&#xF3;n y tambi&#xE9;n llev&#xF3; a la construcci&#xF3;n de un rescate MEKK1. El objetivo de nuestra pantalla fue identificar las mutaciones en los estrechamente vinculados MEKK2 y MEKK3 loci. Se obtuvieron cinco mutaciones en MEKK2 y siete mutaciones en MEKK3, todos ellos situados dentro de los 20 kb de la inserci&#xF3;n MEKK1-1 T-ADN. Utilizando m&#xFA;ltiples iteraciones del proceso iTILLING, las mutaciones en tres o m&#xE1;s genes en t&#xE1;ndem duplicados se podr&#xED;a generar.

ITILLING: un enfoque personalizado a la identificaci&#xF3;n de las mutaciones inducidas en Arabidopsis

Sammlungen von Arabidopsis Thaliana bestellt Zeilen mit zugeordnete T-DNA-Einf&uuml;gungen eine wichtige Ressource f&uuml;r Pflanze Wissenschaftler Durchf&uuml;hrung genetische Untersuchungen geworden. Fr&uuml;here Berichte gaben an, dass die T-DNA Einf&uuml;gung Linien k&ouml;nnen chromosomale Translokationen der T-DNA Einf&uuml;gung Website zugeordnet haben, aber die Pr&auml;valenz von diese Umlagerungen nicht gut dokumentiert. Um die Frequenz zu bestimmen mit der Umsiedlung in eine weit verbreitete Sammlung von T-DNA Einf&uuml;gung Zeilen vorhanden sind, analysierten wir 64 unabh&auml;ngige Leitungen aus der Salk T-DNA-mutant-Auflistung. Chromosomale Translokationen wurden bei 12 der Befragten 64 Linien (19 %) festgestellt. Zwei Proben wurden verwendet, um die T-DNA-Linien f&uuml;r Umsiedlung des Bildschirms: Bl&uuml;tenstaub Lebensf&auml;higkeit und genomweiten genetische Zuordnung. Obwohl die Messung der Bl&uuml;tenstaub Lebensf&auml;higkeit eine indirekte Bildschirm f&uuml;r das Vorhandensein einer Translokation ist, wurden alle 11 der T-DNA Linien zeigen eine abnorme Bl&uuml;tenstaub-Ph&auml;notyp festgestellt, dass eine Translokation bei Analyse der genetischen Zuordnung enthalten. Ein normalen Bl&uuml;tenstaub-Ph&auml;notyp garantiert jedoch nicht, ohne eine Translokation. Wir beobachteten eine T-DNA-Linie mit normalen Pollen, die dennoch eine Translokation hatte basierend auf genetische Zuordnung Ergebnisse. Eine zus&auml;tzliche Ph&auml;nomen, das wir durch unsere genetische Zuordnung-Experimenten beobachtet wurde, dass die T-DNA-Kreuzungen auf die 5&#39;-und 3&#39;-Seiten eines gezielten Gens k&ouml;nnen in einigen F&auml;llen genetisch voneinander trennen. Zwei Zeilen in unserer Umfrage angezeigt diese &#39; t-DNA Grenzen Separate&#39; Ph&auml;nomen. Experimentelle Verfahren f&uuml;r das screening von T-DNA-Linien f&uuml;r das Vorhandensein von Chromosomenanomalien effizient werden vorgestellt und diskutiert.

Chromosomale Translokationen sind ein weit verbreitetes Ph&auml;nomen in der Arabidopsis Thaliana T-DNA Einf&uuml;gung Linien.

&#x5E8F;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x96C6;&#x5408;&#x5305;&#x542B;&#x6620;&#x5C04;&#x7684; T DNA &#x63D2;&#x5165;&#x7684;&#x884C;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8D44;&#x6E90;&#x690D;&#x7269;&#x79D1;&#x5B66;&#x5BB6;&#x5F00;&#x5C55;&#x9057;&#x4F20;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x8868;&#x660E; T-DNA &#x63D2;&#x5165;&#x884C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x6613;&#x4F4D;&#x4E0E; T-DNA &#x63D2;&#x5165;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4F46;&#x662F;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F97;&#x5230;&#x5145;&#x5206;&#x8BB0;&#x8F7D;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x91CD;&#x6392;&#x7684;&#x6D41;&#x884C;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x76EE;&#x524D;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684; T-DNA &#x63D2;&#x5165;&#x884C;&#x96C6;&#x5408;&#x4E2D;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x4ECE; Salk T DNA &#x7A81;&#x53D8;&#x96C6;&#x5408; 64 &#x72EC;&#x7ACB;&#x884C;&#x3002;12 64 &#x7EBF;&#x8F83;&#x4E0A;&#x5E74;&#x540C;&#x671F; (19%) &#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E86;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7684;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;&#x4E24;&#x79CD;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7528;&#x4E8E;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684; T-DNA &#x884C;&#xFF1A; &#x82B1;&#x7C89;&#x548C;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x9057;&#x4F20;&#x56FE;&#x8C31;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x82B1;&#x7C89;&#x751F;&#x6D3B;&#x529B;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x662F;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x95F4;&#x63A5;&#x5C4F;&#x5E55;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x5F02;&#x5E38;&#x82B1;&#x7C89;&#x8868;&#x578B;&#x7684; T-DNA &#x7EBF;&#x6761;&#x7684;&#x6240;&#x6709; 11 &#x88AB;&#x90FD;&#x53D1;&#x73B0;&#x542B;&#x6709;&#x6613;&#x4F4D;&#x65F6;&#x4F7F;&#x7528;&#x9057;&#x4F20;&#x56FE;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6B63;&#x5E38;&#x82B1;&#x7C89;&#x8868;&#x578B;&#x4E0D;&#x4FDD;&#x8BC1;&#x6CA1;&#x6709;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4E00;&#x79CD;&#x4E0E;&#x6B63;&#x5E38;&#x82B1;&#x7C89;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x8FC7;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x6613;&#x4F4D; T DNA &#x884C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x9057;&#x4F20;&#x6D4B;&#x7ED8;&#x6210;&#x679C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x56FE;&#x8C31;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x989D;&#x5916;&#x73B0;&#x8C61;&#x662F; T DNA &#x8DEF;&#x53E3; 5&#39;-3&#39;-&#x53CC;&#x65B9;&#x7684;&#x9776;&#x5411;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x53EF;&#x4EE5;&#x57FA;&#x56E0;&#x5F7C;&#x6B64;&#x5206;&#x5F00;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x548C;&#x3002;&#x4E24;&#x6761;&#x7EBF;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x6B64;&#x4E0D;&#x8981; DNA &#x8FB9;&#x754C;&#x5355;&#x72EC; &#39; &#x73B0;&#x8C61;&#x3002;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x6709;&#x6548;&#x7B5B;&#x67E5;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684;&#x5B58;&#x5728; T DNA &#x884C;&#x63D0;&#x51FA;&#x548C;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x3002;

&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x6613;&#x4F4D;&#x662F;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x5357;&#x82A5; T DNA &#x63D2;&#x5165;&#x884C;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E38;&#x89C1;&#x73B0;&#x8C61;&#x3002;

Ordered collections of Arabidopsis thaliana lines containing mapped T-DNA insertions have become an important resource for plant scientists performing genetic studies. Previous reports have indicated that T-DNA insertion lines can have chromosomal translocations associated with the T-DNA insertion site, but the prevalence of these rearrangements has not been well documented. To determine the frequency with which translocations are present in a widely-used collection of T-DNA insertion lines, we analyzed 64 independent lines from the Salk T-DNA mutant collection. Chromosomal translocations were detected in 12 of the 64 lines surveyed (19%). Two assays were used to screen the T-DNA lines for translocations: pollen viability and genome-wide genetic mapping. Although the measurement of pollen viability is an indirect screen for the presence of a translocation, all 11 of the T-DNA lines showing an abnormal pollen phenotype were found to contain a translocation when analyzed using genetic mapping. A normal pollen phenotype does not, however, guarantee the absence of a translocation. We observed one T-DNA line with normal pollen that nevertheless had a translocation based on genetic mapping results. One additional phenomenon that we observed through our genetic mapping experiments was that the T-DNA junctions on the 5'- and 3'-sides of a targeted gene can genetically separate from each other in some cases. Two of the lines in our survey displayed this 'T-DNA borders separate' phenomenon. Experimental procedures for efficiently screening T-DNA lines for the presence of chromosomal abnormalities are presented and discussed.

Chromosomal translocations are a common phenomenon in Arabidopsis thaliana T-DNA insertion lines.

Collections ordonn&#xE9;es de lignes d&#x26;#39;Arabidopsis thaliana contenant mapp&#xE9;s insertions d&#x26;#39;ADN-T sont devenus une ressource importante pour les scientifiques de plantes de la sc&#xE8;ne des &#xE9;tudes g&#xE9;n&#xE9;tiques. Les rapports pr&#xE9;c&#xE9;dents ont indiqu&#xE9; que les lignes d&#x26;#39;insertion ADN-T peut avoir des translocations chromosomiques associ&#xE9;es avec le site d&#x26;#39;insertion ADN-T, mais la pr&#xE9;valence de ces r&#xE9;arrangements n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; bien document&#xE9;s. Pour d&#xE9;terminer la fr&#xE9;quence avec laquelle les translocations sont pr&#xE9;sents dans une collection largement utilis&#xE9; de lign&#xE9;es d&#x26;#39;insertion ADN-T, nous avons analys&#xE9; 64 lignes ind&#xE9;pendantes de la Salk ADN-T une collection de mutants. Translocations chromosomiques ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;es dans 12 des 64 lignes interrog&#xE9;s (19%). Deux essais ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour cribler les lignes d&#x26;#39;ADN-T pour des translocations: la viabilit&#xE9; du pollen et l&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome cartographie g&#xE9;n&#xE9;tique. Bien que la mesure de la viabilit&#xE9; du pollen est un &#xE9;cran indirecte de la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;une translocation, tous les 11 des lignes d&#x26;#39;ADN-T montrant un ph&#xE9;notype du pollen anormaux ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s pour contenir une translocation lorsqu&#x26;#39;ils sont analys&#xE9;s en utilisant la cartographie g&#xE9;n&#xE9;tique. Un ph&#xE9;notype du pollen normal n&#x26;#39;a pas, cependant, de garantir l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;une translocation. Nous avons observ&#xE9; un ADN-T en ligne avec le pollen normal que n&#xE9;anmoins eu une translocation &#xE0; partir des r&#xE9;sultats de cartographie g&#xE9;n&#xE9;tique. Un ph&#xE9;nom&#xE8;ne suppl&#xE9;mentaire que l&#x26;#39;on observe &#xE0; travers les essais de cartographie g&#xE9;n&#xE9;tique est que les jonctions d&#x26;#39;ADN-T sur les 5&#x26;#39;-3&#x26;#39;-et c&#xF4;t&#xE9;s d&#x26;#39;un g&#xE8;ne cible peut g&#xE9;n&#xE9;tiquement s&#xE9;parer les uns des autres dans certains cas. Deux des lignes de notre enqu&#xEA;te affich&#xE9; ce ph&#xE9;nom&#xE8;ne des fronti&#xE8;res d&#x26;#39;ADN-T s&#xE9;par&#xE9;e &#xBB;. Les proc&#xE9;dures exp&#xE9;rimentales pour le d&#xE9;pistage efficace d&#x26;#39;ADN-T des lignes pour la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;anomalies chromosomiques sont pr&#xE9;sent&#xE9;s et discut&#xE9;s.

Translocations chromosomiques sont un ph&#xE9;nom&#xE8;ne courant dans les lignes chez Arabidopsis Thaliana insertion ADN-T

Ordinato raccolte di Arabidopsis thaliana righe contenenti gli inserimenti di T-DNA mappati sono diventati una risorsa importante per gli scienziati di pianta eseguendo studi genetici. Rapporti precedenti hanno indicato che linee di inserimento del T-DNA possono avere traslocazioni cromosomiche associate al sito di inserimento del T-DNA, ma la prevalenza di questi riarrangiamenti non &egrave; stata ben documentata. Per determinare la frequenza con cui le traslocazioni sono presenti in un insieme di linee di inserimento del T-DNA ampiamente utilizzato, abbiamo analizzato 64 linee indipendenti dalla collezione Salk T-DNA mutante. Traslocazioni cromosomiche sono state rilevate in 12 delle 64 linee intervistate (19%). Due dosaggi sono stati utilizzati per lo screening delle linee di T-DNA per traslocazioni: vitalit&agrave; del polline e la mappatura genetica genome-wide. Anche se la misura della vitalit&agrave; del polline &egrave; uno schermo indiretto per la presenza di una traslocazione, 11 tutte le linee di T-DNA che mostrano un fenotipo anormale di polline sono stati trovati per contenere una traslocazione quando analizzato usando la mappatura genetica. Un fenotipo normale polline non, tuttavia, garantisce l&#39;assenza di una traslocazione. Abbiamo osservato una linea di T-DNA con polline normale che tuttavia aveva una traslocazione basata sulla genetica mappatura risultati. Un ulteriore fenomeno che abbiamo osservato attraverso i nostri esperimenti di mappatura genetica era che le giunzioni di T-DNA sui lati 5&#39;-e 3&#39;-di un gene bersaglio geneticamente possono separare gli uni dagli altri in alcuni casi. Due delle linee nel nostro sondaggio visualizzato questo separato di confini &#39; t-DNA&#39; fenomeno. Procedure sperimentali per lo screening in modo efficiente linee T-DNA per la presenza di anomalie cromosomiche sono presentate e discussi.

Traslocazioni cromosomiche sono un fenomeno comune nelle linee di inserimento di Arabidopsis thaliana T-DNA.

&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3055;&#x308C;&#x305F;T-DNA&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x884C;&#x306E;&#x9806;&#x5E8F;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x79D1;&#x5B66;&#x8005;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x524D;&#x56DE;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;T-DNA&#x633F;&#x5165;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;T-DNA&#x633F;&#x5165;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x518D;&#x914D;&#x7F6E;&#x306E;&#x6709;&#x75C5;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x6587;&#x66F8;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306F;&#x3001;T-DNA&#x633F;&#x5165;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5185;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x983B;&#x5EA6;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30BD;&#x30FC;&#x30AF;T-DNA&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;64&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x884C;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306F;&#x3001;&#x8ABF;&#x67FB;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306E;64&#x884C;&#x4E2D;12&#x4F8B;&#xFF08;19&#xFF05;&#xFF09;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x82B1;&#x7C89;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF1A;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;T-DNA&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x82B1;&#x7C89;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306E;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x753B;&#x9762;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x82B1;&#x7C89;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x793A;&#x3059;T-DNA&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x884C;11&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x82B1;&#x7C89;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x82B1;&#x7C89;&#x3092;1 T-DNA&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x73FE;&#x8C61;&#x304C;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;5&#x26;#39;-&#x304A;&#x3088;&#x3073;3&#x26;#39;-&#x5074;&#x306B;T-DNA&#x306E;&#x63A5;&#x5408;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x4E92;&#x3044;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3067;&#x306F;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;2&#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E; &#x26;quot;T-DNA&#x30DC;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x5225;&#x26;quot;&#x73FE;&#x8C61;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7570;&#x5E38;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;T-DNA&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;T-DNA&#x633F;&#x5165;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x73FE;&#x8C61;&#x3067;&#x3042;&#x308B;

Arabidopsis thaliana&#xC758; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158; &#xC8FC;&#xBB38; &#xB9E4;&#xD551;&#xB41C; T DNA &#xC0BD;&#xC785; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC904;&#xC740; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xACFC;&#xD559;&#xC790; &#xB4E4;&#xC740; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC218;&#xD589;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC790;&#xC6D0; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xB294; T-DNA &#xC0BD;&#xC785; &#xB77C;&#xC778; T DNA &#xC0BD;&#xC785; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; translocations&#xC744; &#xAC00;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xC720;&#xD589;&#xC744; &#xC798; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0; &#xD45C;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. Translocations T DNA &#xC0BD;&#xC785; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;&#xC5D0;&#xB294; &#xBE48;&#xB3C4; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC194; &#xD06C; T DNA &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; 64 &#xB3C5;&#xB9BD; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; translocations 12 &#xC870;&#xC0AC; &#xB300;&#xC0C1; 64 &#xC904; (19%)&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD654;&#xBA74; translocations&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; T DNA &#xB77C;&#xC778; &#xB370; &#xB450; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;: &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; &#xBC0F; &#xAC8C;&#xB188; &#xC804;&#xCCB4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB9E4;&#xD551;. &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xCE21;&#xC815;&#xC740; &#xC804; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xD654;&#xBA74; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xD615; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; T DNA &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; 11 &#xC804; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB9E4;&#xD551;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD3EC;&#xD568;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xD615;&#xC740; &#xC804; &#xBD80;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xD55C; &#xC804; &#xC88C;&#xB97C; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8;&#xC640; T DNA &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC720;&#xC804; &#xAD00;&#xCC30; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9E4;&#xD551;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC720;&#xC804; &#xB9E4;&#xD551; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xB294; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xD604;&#xC0C1; &#xC600;&#xC8E0; T DNA &#xC811;&#xD569;&#xBD80;&#xC5D0; 5&#39;-3&#39;-&#xBA74; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC124;&#xBB38; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xB450;&#xC774; &#39; T DNA &#xD14C;&#xB450;&#xB9AC; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#39; &#xD604;&#xC0C1;. &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; T DNA &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC808;&#xCC28;&#xB294; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB418; &#xACE0; &#xB17C;&#xC758;.

&#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; translocations&#xB294; Arabidopsis thaliana T DNA &#xC0BD;&#xC785; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD604;&#xC0C1;.

Colecciones ordenadas de las l&#xED;neas de Arabidopsis thaliana que contienen asignadas inserciones de ADN-T se han convertido en un recurso importante para los cient&#xED;ficos que realizan estudios gen&#xE9;ticos de las plantas. Informes anteriores han indicado que el T-DNA de l&#xED;neas de inserci&#xF3;n puede tener translocaciones cromos&#xF3;micas asociadas con el sitio de inserci&#xF3;n de T-ADN, pero la prevalencia de estos reordenamientos no ha sido bien documentado. Para determinar la frecuencia con que las translocaciones est&#xE1;n presentes en una colecci&#xF3;n ampliamente utilizado de las l&#xED;neas de inserci&#xF3;n de T-ADN, se analizaron 64 l&#xED;neas independientes de la Salk T-DNA de la colecci&#xF3;n mutante. Translocaciones cromos&#xF3;micas fueron detectados en 12 de las 64 l&#xED;neas de encuestados (19%). Dos ensayos se utiliza para la inspecci&#xF3;n de las l&#xED;neas T-DNA de translocaciones: la viabilidad del polen y de todo el genoma de mapeo gen&#xE9;tico. Aunque la medici&#xF3;n de la viabilidad del polen es una pantalla indirecta de la presencia de una translocaci&#xF3;n, todas las l&#xED;neas 11 de T-ADN que muestran un fenotipo polen anormal se encontr&#xF3; que contienen una translocaci&#xF3;n cuando se analiz&#xF3; utilizando el mapeo gen&#xE9;tico. Un fenotipo polen normal no obstante, garantizar la ausencia de una translocaci&#xF3;n. Hemos observado una l&#xED;nea de T-ADN con el polen normal que sin embargo ten&#xED;a una translocaci&#xF3;n sobre la base de resultados de los mapas gen&#xE9;ticos. Un fen&#xF3;meno adicional que se observ&#xF3; a trav&#xE9;s de nuestros experimentos de mapeo gen&#xE9;tico fue que las uniones de ADN-T en los 5&#x26;#39;-3 &#x26;#39;y los lados de un gen dirigido gen&#xE9;ticamente pueden separar unos de otros en algunos casos. Dos de las l&#xED;neas de nuestra encuesta muestran este fen&#xF3;meno de T-ADN de las fronteras por separado &#x26;quot;. Los procedimientos experimentales para la eficiente detecci&#xF3;n del ADN-T para las l&#xED;neas de la presencia de anomal&#xED;as cromos&#xF3;micas se presentan y discuten.

Article	Year
An Arabidopsis mitogen-activated protein kinase kinase kinase gene family encodes essential positive regulators of cytokinesis. The Plant cell\| PubMed ID: 12034900	2002
Characterization of T-DNA insertion sites in Arabidopsis thaliana and the implications for saturation mutagenesis. Omics : a journal of integrative biology\| PubMed ID: 12143962	2002
The protein kinase genes MAP3K epsilon 1 and MAP3K epsilon 2 are required for pollen viability in Arabidopsis thaliana. The Plant journal : for cell and molecular biology\| PubMed ID: 16965555	2006
MEKK1 is required for flg22-induced MPK4 activation in Arabidopsis plants. Plant physiology\| PubMed ID: 17142480	2007
The WiscDsLox T-DNA collection: an arabidopsis community resource generated by using an improved high-throughput T-DNA sequencing pipeline. Journal of plant research\| PubMed ID: 17186119	2007
Mutational evidence that the Arabidopsis MAP kinase MPK6 is involved in anther, inflorescence, and embryo development. Journal of experimental botany\| PubMed ID: 17519351	2007
Protocol: An improved high-throughput method for generating tissue samples in 96-well format for plant genotyping (Ice-Cap 2.0). Plant methods\| PubMed ID: 17565700	2007
iTILLING: a personalized approach to the identification of induced mutations in Arabidopsis. Plant physiology\| PubMed ID: 20668060	2010
Chromosomal translocations are a common phenomenon in Arabidopsis thaliana T-DNA insertion lines. The Plant journal : for cell and molecular biology\| PubMed ID: 21143679	2010

Patrick J. Krysan

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