direct-detection-acetate-forming-activity-enzyme-acetate

Direct Detection of the Acetate-forming Activity  of the Enzyme Acetate Kinase

Acetate kinase, a member of the acetate and sugar kinase-Hsp70-actin (ASKHA) enzyme superfamily1-5, is responsible for the reversible phosphorylation of ...

Clemson University

&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x5B8C;&#x5168;&#x5B88;&#x6052;&#x5728; &beta;-&#x7C7B;&#x78B3;&#x9178;&#x9150;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F4D;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x7531;&#x7A33;&#x6001;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x66F4;&#x6362;&#x53D8;&#x4F53;&#x4ECE; archaeon &#x7532;&#x9178;&#x7532;&#x70F7;&#x6746;&#x83CC; thermoautotrophicum &#x7684;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7248;&#x7C7B;&#x9176; (Cab) &#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9A7E;&#x9A76;&#x5BA4;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x7684; k(cat)/K(m) &#x503C;&#x53EA;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x7684; CO(2) &#x6C34;&#x5316;&#x6B65;&#xFF0C;&#x4E24;&#x6B65;&#x950C;&#x6C22;&#x6C27;&#x5316;&#x673A;&#x7406;&#x800C; k(cat) &#x4E5F;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x4ECE;&#x8D28;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6B65;&#x9AA4; (K.S.&#x53F2;&#x5BC6;&#x65AF;&#x3001; N.J.Cosper C.Stalhandske A.&middot; &#x65AF;&#x79D1;&#x7279;&#xFF0C;&#x3001; J.G.&#x6E21;&#x8F6E;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#xFF0C;J.&#x9709;&#x83CC;&#x3002;182:6605-6613&#xFF0C;2000&#x5E74;&#xFF09;&#x3002;Cab &#x7684;&#x6700;&#x8FD1;&#x89E3;&#x51B3;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x663E;&#x793A;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x6C22;&#x952E;&#x7684; Asp-34&#xFF0C;&#x8DDD;&#x79BB;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x6B64;&#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x8D28;&#x5B50;&#x8FD0;&#x8F93;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528; (P.&#x6ED1;&#x3001; K.S.&#x53F2;&#x5BC6;&#x65AF;&#x3001; T.M.&#x827E;&#x5F17;&#x68EE;&#x3001; J.G.&#x6E21;&#x8F6E;&#xFF0C;D.C.&#x91CC;&#x65AF;&#xFF0C;J.Biol.&#x5316;&#x5B66; 276:10299-10305&#xFF0C;2001 &#x5E74;&#xFF09;&#x3002;Asp 34 &#x53D8;&#x79CD;&#x7684; k(cat)/K(m) &#x503C;&#x88AB;&#x5C11;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4E0D;&#x5230;&#x591A;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x652F;&#x6301;&#x6B64; CO(2) &#x6C34;&#x5316;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;K(cat) &#x548C; k(cat)/K(m) &#x7684;&#x503C;&#x4E3A;&#x53D8;&#x4F53;&#x5E73;&#x884C;&#x8DCC;&#x5E45;&#x6392;&#x9664;&#x4EFB;&#x4F55;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x5728;&#x8D28;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6B65;&#x9AA4; &#xFF1B; &#x5173;&#x4E8E;&#x89D2;&#x8272; Asp 34&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;D34A &#x53D8;&#x91CF;&#x7684; k(cat) &#x5316;&#x5B66;&#x7531;&#x66F4;&#x6362; 2-(N-morpholino&#xFF09; &#x6551;&#x51FA; propanesulfonic &#x9178;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#x4E0E;&#x54AA;&#x5511; ph &#x503C; 7.2&#xFF0C;&#x8D28;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6B65;&#x9AA4;&#x5B88;&#x6052;&#x95E8;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x652F;&#x6301;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;Cab &#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6C22;&#x952E;&#x4E5F;&#x663E;&#x793A; Asp 34 Arg-36&#x3002;Arg 36 &#x53D8;&#x79CD;&#x4E86;&#x76F8;&#x5BF9;&#x90A3;&#x4E9B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6B8B;&#x4F59;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x804C;&#x80FD;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x7684;&#x81F3;&#x5C11; 4.5 &#x7684; k(cat) &#x548C; k(cat)/K(m) &#x7684;&#x503C;&#x3002;&#x54AA;&#x5511;&#x6CA1;&#x80FD;&#x6551; k(cat) R36A &#x5907;&#x9009;&#x6848;&#x6587; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x90E8;&#x5206;&#x6551;&#x63F4;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x53C2;&#x6570;&#x7684;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E0E;&#x80CD; HCl &#x6307;&#x793A;&#x6B64;&#x6B8B;&#x7559; guanido &#x96C6;&#x56E2;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

&#x5B88;&#x6052;&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x5728;&#x53E4;&#x83CC; &beta; &#x7C7B;&#x78B3;&#x9178;&#x9150;&#x9176;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x673A;&#x5236;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The roles of an aspartate and an arginine, which are completely conserved in the active sites of beta-class carbonic anhydrases, were investigated by steady-state kinetic analyses of replacement variants of the beta-class enzyme (Cab) from the archaeon Methanobacterium thermoautotrophicum. Previous kinetic analyses of wild-type Cab indicated a two-step zinc-hydroxide mechanism of catalysis in which the k(cat)/K(m) value depends only on the rate constants for the CO(2) hydration step, whereas k(cat) also depends on rate constants from the proton transfer step (K. S. Smith, N. J. Cosper, C. Stalhandske, R. A. Scott, and J. G. Ferry, J. Bacteriol. 182:6605-6613, 2000). The recently solved crystal structure of Cab shows the presence of a buffer molecule within hydrogen bonding distance of Asp-34, implying a role for this residue in the proton transport step (P. Strop, K. S. Smith, T. M. Iverson, J. G. Ferry, and D. C. Rees, J. Biol. Chem. 276:10299-10305, 2001). The k(cat)/K(m) values of Asp-34 variants were decreased relative to those of the wild type, although not to an extent which supports an essential role for this residue in the CO(2) hydration step. Parallel decreases in k(cat) and k(cat)/K(m) values for the variants precluded any conclusions regarding a role for Asp-34 in the proton transfer step; however, the k(cat) of the D34A variant was chemically rescued by replacement of 2-(N-morpholino)propanesulfonic acid buffer with imidazole at pH 7.2, supporting a role for the conserved aspartate in the proton transfer step. The crystal structure of Cab also shows Arg-36 with two hydrogen bonds to Asp-34. Arg-36 variants had both k(cat) and k(cat)/K(m) values that were decreased at least 250-fold relative to those of the wild type, establishing an essential function for this residue. Imidazole was unable to rescue the k(cat) of the R36A variant; however, partial rescue of the kinetic parameter was obtained with guanidine-HCl indicating that the guanido group of this residue is important.

Roles of the conserved aspartate and arginine in the catalytic mechanism of an archaeal beta-class carbonic anhydrase.

Les r&#xF4;les d&#x26;#39;un aspartate et une arginine, qui sont compl&#xE8;tement conserv&#xE9;s dans les sites actifs de b&#xEA;ta-classe anhydrases carbonique, ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;es par l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#x26;#39;&#xE9;quilibre des analyses cin&#xE9;tiques de variantes de remplacement de l&#x26;#39;enzyme b&#xEA;ta-classe (cabine) &#xE0; partir de l&#x26;#39;thermoautotrophicum archaeon Methanobacterium. Les pr&#xE9;c&#xE9;dentes analyses cin&#xE9;tiques de type sauvage ont indiqu&#xE9; une cabine &#xE0; deux &#xE9;tapes de zinc-hydroxyde de m&#xE9;canisme de la catalyse, o&#xF9; k (cat) / K (m) la valeur ne d&#xE9;pend que des constantes de vitesse de l&#x26;#39;&#xE9;tape d&#x26;#39;hydratation de CO (2), alors que k ( cat) d&#xE9;pend aussi de constantes de vitesse de l&#x26;#39;&#xE9;tape de transfert de proton (KS Smith, NJ Cosper, C. Stalhandske, RA Scott, et JG Ferry, J. Bacteriol. 182:6605-6613, 2000). La structure cristalline de la cabine r&#xE9;cemment r&#xE9;solu montre la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;une mol&#xE9;cule &#xE0; distance de tampon de liaison hydrog&#xE8;ne Asp-34, ce qui implique un r&#xF4;le de ce r&#xE9;sidu dans l&#x26;#39;&#xE9;tape de transport de protons (p meulage, KS Smith, MC Iverson, JG traversier, et DC Rees, J. Biol. Chem. 276:10299-10305, 2001). Les k (cat) / K (m) les valeurs de Asp-34 variantes ont diminu&#xE9; par rapport &#xE0; ceux du type sauvage, mais pas dans une mesure qui prend en charge un r&#xF4;le essentiel pour ce r&#xE9;sidu dans le CO &#xE9;tape d&#x26;#39;hydratation (2). Baisses parall&#xE8;les de k (chat) et k (cat) / K (m) des valeurs pour les variantes exclue des conclusions quant &#xE0; un r&#xF4;le pour Asp-34 &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tape de transfert de proton, mais le k (cat) de la variante D34A &#xE9;tait chimiquement secouru par remplacement de 2 - (N-morpholino) propanesulfonique tampon acide avec de l&#x26;#39;imidazole &#xE0; un pH de 7,2, supportant un r&#xF4;le de l&#x26;#39;aspartate conserv&#xE9;e dans l&#x26;#39;&#xE9;tape de transfert de protons. La structure cristalline de la cabine montre &#xE9;galement Arg-36 avec deux liaisons hydrog&#xE8;ne &#xE0; Asp-34. Arg-36 variantes avaient &#xE0; la fois k (chat) et k (cat) / K (m) les valeurs qui ont &#xE9;t&#xE9; diminu&#xE9; par rapport au moins 250 fois &#xE0; celles du type sauvage, en &#xE9;tablissant une fonction essentielle pour ce r&#xE9;sidu. Imidazole a &#xE9;t&#xE9; incapable de sauver le k (cat) de la variante R36A, mais de sauvetage partielle du param&#xE8;tre cin&#xE9;tique a &#xE9;t&#xE9; obtenu avec de la guanidine-HCl indiquant que le groupe guanido de ce r&#xE9;sidu est important.

R&#xF4;les de l&#x26;#39;aspartate et l&#x26;#39;arginine conserv&#xE9;e dans le m&#xE9;canisme catalytique d&#x26;#39;une Archaea b&#xEA;ta-classe l&#x26;#39;anhydrase carbonique

Rollen der konservierten Aspartat und Arginin in der katalytischen Mechanismus eines Archaea-beta-Klasse Carboanhydrase.

I ruoli di un aspartato e un&#39;arginina, che sono completamente conservate nei siti attivi di beta-classe anhydrases carbonica, sono stati studiati mediante analisi cinetiche steady-state di varianti di sostituzione dell&#39;enzima beta-classe (Cab) dall&#39;ipertermofilo Methanobacterium thermoautotrophicum. Precedente analisi cinetiche del selvaggio-tipo Cab indicano un meccanismo di idrossido di zinco in due fasi di catalisi in cui il valore di k(cat)/K(m) dipende solo le costanti di velocit&agrave; per la fase di idratazione mentre, considerando che la k(cat) dipende anche dalle costanti di velocit&agrave; del passaggio di trasferimento del protone (K. S. Smith, N. J. Cosper, C. Stalhandske, Scott A. R. e J. G. FerryBacteriol j. 182:6605-6613, 2000). La struttura di cristallo recentemente risolto del Cab indica la presenza di una molecola di buffer all&#39;interno di Asp-34, distanza di legame idrogeno che implica un ruolo per questo residuo in fase di trasporto il protone (P. Strop, K. S. Smith, T. M. Iverson, J. G. Ferry e D. C. Rees, j Biol Chem 276:10299-10305, 2001). I valori di k(cat)/K(m) di Asp-34 varianti sono diminuiti rispetto a quelli del tipo selvatico, anche se non in una misura che sostiene un ruolo essenziale per questo residuo nel passaggio mentre idratazione. Paralleli diminuisce i valori k(cat) e k(cat)/K(m) per le varianti precluso qualsiasi conclusioni per quanto riguarda un ruolo per Asp-34 in fase di trasferimento del protone; Tuttavia, la k(cat) della variante D34A chimicamente fu salvata dalla sostituzione di 2-(N-oligonucleotides) propanosulfonico Tampone acido con imidazolo a pH 7,2, un ruolo di supporto per l&#39;aspartato conservata in fase di trasferimento del protone. La struttura di cristallo del Cab Mostra anche Arg-36 con due legami idrogeno per Asp-34. Arg-36 varianti hanno avute valori sia k(cat) e k(cat)/K(m) che erano diminuiti almeno 250-fold rispetto a quelle del tipo selvatico, stabilendo una funzione essenziale per questo residuo. Imidazolo &egrave; riuscito a salvare il k(cat) della variante R36A; Tuttavia, salvataggio parziale del parametro cinetico &egrave; stato ottenuto con guanidina-HCl che indica che il gruppo guanido di questo residuo &egrave; importante.

Ruoli del conservato aspartato e arginina nel meccanismo catalitico di un archaeal beta-classe anidrasi carbonica.

&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x3B2;-&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x70AD;&#x9178;anhydrases&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C6;&#x30EB;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C6;&#x30EB;&#x578B;&#x304B;&#x3089;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;CAB&#xFF09;&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D6;&#x306E;&#x524D;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;K&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;K&#xFF08;&#x732B;&#xFF09;/ K&#xFF08;m&#xFF09;&#x306E;&#x5024;&#x306E;&#x307F;&#x304C;CO&#xFF08;2&#xFF09;&#x6C34;&#x548C;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x89E6;&#x5A92;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x4E8C;&#x6BB5;&#x968E;&#x4E9C;&#x925B;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x3001;&#xFF08;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x732B;&#xFF09;&#x3082;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x624B;&#x9806;&#xFF08;KS&#x30B9;&#x30DF;&#x30B9;&#x3001;NJ Cosper&#x3001;C. Stalhandske&#x3001;RA&#x30B9;&#x30B3;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;JG&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30FC;&#x3001;J.&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x3002;182:6605-6613&#x3001;2000&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D6;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3057;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x6BB5;&#x968E;&#xFF08;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;P.&#x3001;KS&#x30B9;&#x30DF;&#x30B9;&#x3001;TM&#x30A2;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x30BD;&#x30F3;&#x3001;JG&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30FC;&#x3001;&#x305D;&#x3057;&#x3066;DC&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;ASP-34&#x306E;&#x6C34;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x8DDD;&#x96E2;&#x5185;&#x306E;&#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#xB7;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;J. Biol&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x3002;276:10299-10305&#x3001;2001&#xFF09;&#x3002;&#x306E;Asp-34&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;k&#xFF08;&#x732B;&#xFF09;/ K&#xFF08;m&#xFF09;&#x306E;&#x5024;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306B;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x305F;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;CO&#xFF08;2&#xFF09;&#x6C34;&#x548C;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;K&#xFF08;&#x732B;&#xFF09;&#x3068;k&#xFF08;&#x732B;&#xFF09;/ K&#xFF08;m&#xFF09;&#x306E;&#x5024;&#x306E;&#x4E26;&#x5217;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;Asp-34&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;D34A&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;K&#xFF08;&#x732B;&#xFF09;&#x306F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3059;&#x308B;&#x3001;pH7.2&#x3067;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C0;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;N-&#x30E2;&#x30EB;&#x30DB;&#x30EA;&#x30CE;&#xFF09;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30F3;&#x9178;&#x7DE9;&#x885D;&#x6DB2; -  2&#x306E;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6551;&#x51FA;&#x3002;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D6;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;ASP-34&#x306B;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x6C34;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x306E;Arg-36&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306E;Arg-36&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;K&#xFF08;&#x732B;&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;250&#x500D;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;K&#xFF08;&#x732B;&#xFF09;/ K&#xFF08;m&#xFF09;&#x306E;&#x5024;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C0;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;R36A&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;K&#xFF08;&#x732B;&#xFF09;&#x3092;&#x6551;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;&#x6551;&#x6E08;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30B8;&#x30F3;-HCl&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30C9;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;

&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;&#x3B2;-&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x70AD;&#x9178;&#x8131;&#x6C34;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;

Aspartate &#xBC0F; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC;, &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xD0C4;&#xC18C; anhydrases&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874;&#xC740; &#xC644;&#xC804;&#xD788;, &#xC5ED;&#xD560; archaeon Methanobacterium thermoautotrophicum&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xD6A8;&#xC18C; (Cab)&#xC758; &#xAD50;&#xCCB4; &#xBCC0;&#xC885;&#xC758; &#xC548;&#xC815; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC0AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xD0DD;&#xC2DC;&#xC758; &#xC774;&#xC804; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; &#xD45C;&#xC2DC; k(cat)/K(m) &#xAC12;&#xC740; CO(2) &#xC218; &#xD654; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xB530;&#xB77C; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC758; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xC544;&#xC5F0; &#xC218;&#xC0B0;&#xD654; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; k(cat) (K. S. &#xC2A4;&#xBBF8;&#xC2A4;, N. J. Cosper, C. Stalhandske, R. A. &#xC2A4;&#xCF67;, J. G. &#xD398;&#xB9AC; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;J. Bacteriol&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. 182:6605-6613, 2000). &#xD0DD;&#xC2DC;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xD574;&#xACB0;&#xB41C; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC218;&#xC18C; &#xACB0;&#xD569; Asp 34 &#xAC70;&#xB9AC; &#xB0B4;&#xC758; &#xBC84;&#xD37C; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; (&#xD53C; &#xD601; &#xC9C0;, K. S. &#xC2A4;&#xBBF8;&#xC2A4;, T. M. &#xC544;&#xC774;&#xBC84;&#xC2A8;, J. G. &#xD398;&#xB9AC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; D. C. Rees J. Biol. &#xD654;&#xD559; 276:10299-10305, 2001). Asp-34 &#xBCC0;&#xC885;&#xC758; k(cat)/K(m) &#xAC12; &#xBE44;&#xB85D; CO(2) &#xC218; &#xD654; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC9C0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBCC0;&#xD615;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; k(cat) &#xBC0F; k(cat)/K(m) &#xAC12;&#xC5D0; &#xBCD1;&#xB82C; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC30;&#xC81C; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xB2E8;&#xACC4;;&#xC5D0;&#xC11C; Asp-34&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xACB0;&#xB860; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, D34A &#xBCC0;&#xC885; k(cat) &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD50;&#xCCB4;&#xC758; 2-(N morpholino)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xB41C; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; aspartate&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC9C0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; pH 7.2&#xC5D0; &#xC774;&#xBBF8;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; propanesulfonic &#xC0B0; &#xBC84;&#xD37C;. &#xD0DD;&#xC2DC;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; Asp-34 &#xB450; &#xC218;&#xC18C; &#xCC44;&#xAD8C; Arg-36&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Arg-36 &#xBCC0;&#xC885; k(cat) &#xBC0F; k(cat)/K(m) &#xAC12;&#xC744; 250-fold &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4;&#xC774; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xBBF8; R36A &#xBCC0;&#xC885;; k(cat)&#xB97C; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC6B4;&#xB3D9; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84; &#xAD6C;&#xC870; guanidine Hcl&#xC774;&#xC774; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; guanido &#xADF8;&#xB8F9;&#xC740; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD568;&#xAED8; &#xCDE8;&#xB4DD; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; aspartate archaeal &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xD0C4;&#xC0B0; &#xD0C8;&#xC218; &#xCD09;&#xB9E4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

Las funciones de un aspartato y arginina una, que se conserva por completo en los sitios activos de la beta-clase anhidrasas carb&#xF3;nica, fueron investigadas por el estado estacionario an&#xE1;lisis cin&#xE9;ticos de variantes de sustituci&#xF3;n de la enzima beta-clase (Cab) desde el thermoautotrophicum archaeon Methanobacterium. Anterior an&#xE1;lisis cin&#xE9;ticos de tipo salvaje cabina indica una de dos pasos de zinc-hidr&#xF3;xido mecanismo de la cat&#xE1;lisis en la que el K (cat) / K (m) valor depende s&#xF3;lo de las constantes de velocidad para el CO (2) paso de hidrataci&#xF3;n, mientras que k ( gato) tambi&#xE9;n depende de las constantes de velocidad de la etapa de transferencia de protones (KS Smith, Cosper Nueva Jersey, Stalhandske C, Scott RA, y JG Ferry, J. Bacteriol. 182:6605-6613, 2000). La estructura cristalina recientemente resuelto de la cabina muestra la presencia de una mol&#xE9;cula de tamp&#xF3;n dentro de la distancia de enlace de hidr&#xF3;geno de Asp-34, lo que implica un papel de este residuo en la etapa de transporte de protones (Strop P., KS Smith, Iverson TM, Ferry JG, y DC Rees, J. Biol.. Chem. 276:10299-10305, 2001). Los k (cat) / K (m) valores de Asp-34 variantes se redujo con respecto a los del tipo salvaje, aunque no en un grado que soporta un papel esencial para este residuo en el CO (2) paso de hidrataci&#xF3;n. Disminuciones paralelas de k (gato) y K (gato) / valores de K (m) para las variantes impide cualquier conclusi&#xF3;n sobre el papel de Asp-34 en la etapa de transferencia de protones, sin embargo, la k (CAT) de la variante D34A era qu&#xED;micamente rescatado por la sustituci&#xF3;n de 2 - (N-morfolino) propanosulf&#xF3;nico tamp&#xF3;n con imidazol a pH 7,2, apoyando un papel para el aspartato conservado en la etapa de transferencia de protones. La estructura cristalina de la cabina tambi&#xE9;n muestra Arg-36 con dos enlaces de hidr&#xF3;geno a Asp-34. Arg-36 variantes tenido tanto k (CAT) y K (cat) / K (m) los valores que se disminuy&#xF3; relativa de al menos 250 veces a los del tipo salvaje, se crea una funci&#xF3;n esencial para este residuo. Imidazol fue incapaz de rescatar el k (cat) de la variante R36A, sin embargo, el rescate parcial del par&#xE1;metro cin&#xE9;tica se obtuvo con guanidina-HCl que indica que el grupo guanido de este residuo es importante.

Funciones de la aspartato y arginina conservada en el mecanismo catal&#xED;tico de un Arqueales Beta clase anhidrasa carb&#xF3;nica

&#x7EC6;&#x83CC;&#x9176;&#x4E59;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; (AK) &#x548C;&#x4E59;&#x9170; &#xFF08;PTA&#xFF09; &#x7A97;&#x4F53;&#x4E3A;&#x4E2D;&#x592E;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4E59;&#x9170;&#x8F85;&#x9176; A (acetyl-CoA) &#x4ECE;&#x4E59;&#x9178;&#x916F;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x6216;&#x4EE3;&#x4ECE;&#x8FC7;&#x5269; acetyl-CoA &#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x5047;&#x5B9A; AK &#x57FA;&#x56E0;&#x73B0;&#x5DF2;&#x67E5;&#x660E;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x771F;&#x6838;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3002;&#x5728;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB;&#x548C;&#x75AB;&#x9709;&#x79CD;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x5DF2;&#x5728;&#x975E;&#x9175;&#x6BCD;&#x771F;&#x83CC;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x771F;&#x83CC;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x89D2; AK &#x901A;&#x8DEF;&#x7684; AK &#x5F62;&#x5F0F;&#x6CA1;&#x6709;&#x7CBE;&#x5BF9;&#x82EF;&#x4E8C;&#x7532;&#x9178;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;AK &#x5F62;&#x6210;&#x901A;&#x8DEF; D xylulose 5-&#x78F7;&#x9178; phosphoketolase (XFP)&#xFF0C;&#x4EE5;&#x524D;&#x4E5F;&#x66FE;&#x53D1;&#x73B0;&#x53EA;&#x6709;&#x5728;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x5728;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#xFF0C;PTA &#x65E2; XFP &#x53D1;&#x73B0;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x7684; AK&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x771F;&#x6838;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5DF2;&#x7EB3;&#x5165;&#x7EC6;&#x83CC;&#x9176; AK &#x81F3;&#x5C11;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;

&#x4E59;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#xFF1A; &#x4E0D;&#x53EA;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x9176;&#x3002;

The bacterial enzymes acetate kinase (AK) and phosphotransacetylase (PTA) form a key pathway for synthesis of the central metabolic intermediate acetyl coenzyme A (acetyl-CoA) from acetate or for generation of ATP from excess acetyl-CoA. Putative AK genes have now been identified in some eukaryotic microbes. In Chlamydomonas reinhardtii and Phytophthora species, AK forms a pathway with PTA. AK has also been identified in non-yeast fungi but these fungi do not have PTA. Instead, AK forms a pathway with D-xylulose 5-phosphate phosphoketolase (XFP), a pathway that was also previously found only in bacteria. In Entamoeba histolytica, neither PTA nor XFP was found as a partner for AK. Thus, eukaryotic microbes seem to have incorporated the 'bacterial' enzyme AK into at least three different metabolic pathways.

Acetate kinase: not just a bacterial enzyme.

L&#x26;#39;ac&#xE9;tate kinase bact&#xE9;rienne enzymes (AK) et phosphotransac&#xE9;tylase (PTA) former une voie cl&#xE9; pour la synth&#xE8;se de l&#x26;#39;centrale interm&#xE9;diaire m&#xE9;tabolique ac&#xE9;tyle coenzyme A (CoA-ac&#xE9;tyl) &#xE0; partir d&#x26;#39;ac&#xE9;tate ou de l&#x26;#39;ATP pour la production d&#x26;#39;exc&#xE8;s de l&#x26;#39;ac&#xE9;tyl-CoA. Putatifs g&#xE8;nes AK ont maintenant &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s dans certains microbes eucaryotes. En Chlamydomonas reinhardtii et esp&#xE8;ces de Phytophthora, AK forme une voie avec des PTA. AK a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9; dans la non-levure champignons, mais ces champignons n&#x26;#39;ont pas PTA. Au lieu de cela, AK forme une voie avec le D-xylulose 5-phosphate phosphoc&#xE9;tolase (XFP), une voie qui a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment constat&#xE9; que chez les bact&#xE9;ries. En Entamoeba histolytica, ni ZEP, ni XFP a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; en tant que partenaire pour AK. Ainsi, les microbes eucaryotes semblent avoir int&#xE9;gr&#xE9; la &#xAB;bact&#xE9;rienne&#x26;quot; enzyme AK en au moins trois diff&#xE9;rentes voies m&#xE9;taboliques.

Ac&#xE9;tate kinase: pas seulement un enzyme bact&#xE9;rienne

Die bakterielle Enzyme-Acetat-Kinase (AK) und Phosphotransacetylase (PTA) bilden einen wichtigen Weg f&uuml;r die Synthese des zentralen metabolische Mittelstufe Acetyl Coenzym A (Acetyl-CoA) aus Acetat oder f&uuml;r die Erzeugung von ATP von &uuml;bersch&uuml;ssigen Acetyl-CoA. Vermeintliche AK-Gene wurden jetzt in einigen eukaryotic Mikroben identifiziert. Chlamydomonas Reinhardtii und Phytophthora-Arten haben die AK-Formen, die ein Weg mit PTA. AK auch in nicht-Hefepilze aber diese Pilze identifiziert wurde keine PTA. AK bildet stattdessen einen Weg mit D-Xylulose-5-Phosphat Phosphoketolase (XFP), ein Weg, der fr&uuml;her auch nur in Bakterien gefunden wurde. Entamoeba Histolytica wurde weder PTA noch XFP f&uuml;r AK als Partner gefunden. Somit scheinen eukaryotische Mikroben Enzyms &#39;bakterielle&#39; AK in mindestens drei verschiedenen Stoffwechselwege eingeflossen.

Acetat-Kinase: nicht nur ein bakterielles Enzym.

Gli enzimi batterici acetato chinasi (AK) e phosphotransacetylase (PTA) forma un percorso chiave per la sintesi della centrale metabolica intermedio acetil coenzima A (acetil-CoA) da acetato o per la generazione del trifosfato di Adenosina da acetil-CoA in eccesso. Geni putativi di AK sono stati identificati in alcuni microbi eucarioti. In Chlamydomonas reinhardtii e specie di Phytophthora, forme AK che un percorso con PTA AK &egrave; stato identificato anche nel non-lievito funghi ma questi funghi non hanno PTA. Invece, AK costituisce un percorso con D-xilulosio 5-fosfato phosphoketolase (XFP), un percorso che &egrave; stato trovato anche in precedenza solo nei batteri. Di Entamoeba histolytica, PTA n&eacute; XFP fu trovato come partner per AK. Cos&igrave;, i microbi eucarioti sembrano hanno incorporato l&#39;enzima &#39;batterica&#39; AK in almeno tre differenti vie metaboliche.

Chinasi di acetato: non solo un enzima batterico.

&#x7D30;&#x83CC;&#x9175;&#x7D20;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C6;&#x30FC;&#x30C8;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;AK&#xFF09;&#x3068;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#xFF08;PTA&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x9162;&#x9178;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;CoA&#x304B;&#x3089;ATP&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;A&#xFF08;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;CoA&#xFF09;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x63A8;&#x5B9A;AK&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x3068;&#x75AB;&#x75C5;&#x7A2E;&#x3067;&#x3001;&#x30A2;&#x30E9;&#x30B9;&#x30AB;&#x5DDE;PTA&#x3068;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; AK&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x975E;&#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x83CC;&#x306F;PTA&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;AK&#x306F;&#x3001;D-&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;5  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;XFP&#xFF09;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x7D30;&#x83CC;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306B;&#x306F;&#x3001;PTA&#x3084;XFP&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x3082;AK&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x771F;&#x6838;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;3&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B; &#x26;#39;&#x7D30;&#x83CC;&#x26;#39;&#x9175;&#x7D20;AK&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x308B;&#x3002;

&#x9162;&#x9178;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF1A;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x7D30;&#x83CC;&#x9175;&#x7D20;

&#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8; &#xD0A4; (AK) &#xBC0F; phosphotransacetylase (PTA) &#xC591;&#xC2DD; &#xC8FC;&#xC694; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC911;&#xC559; &#xB300;&#xC0AC; &#xC911;&#xAC04; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF54;&#xC5D4;&#xC790;&#xC784; A (&#xD2F8;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xD569;&#xC131; &#xB610;&#xB294; &#xCD08;&#xACFC; &#xD2F8;&#xC5D0;&#xC11C; ATP&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;. &#xC9C0;&#xAE08; &#xC0C1; AK &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC77C;&#xBD80; &#xC9C4; &#xD575; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Chlamydomonas reinhardtii Phytophthora &#xC885;&#xC5D0;&#xC11C; AK &#xC591;&#xC2DD;&#xC744; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; AK&#xC640; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC544;&#xB2CC; &#xB204; &#xB8E9; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACF0; &#xD321;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD559;&#xBD80;&#xBAA8;&#xB97C; &#xAC16;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC2E0;, AK D xylulose 5-&#xC778;&#xC0B0; phosphoketolase (XFP) &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC640; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD615;&#xC131; &#xD55C;&#xB2E4;. Entamoeba histolytica &#xD559;&#xBD80;&#xBAA8;&#xB3C4; XFP &#xBC1C;&#xACAC; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB85C; &#xC11C; AK&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC9C4; &#xD575; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xAC83; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xB978; &#xB300;&#xC0AC; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#39;&#xC138;&#xADE0;&#39; &#xD6A8;&#xC18C; ak&#xB85C; &#xD1B5;&#xD569; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD08; &#xC0B0; &#xD0A4;: &#xBFD0; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC138;&#xADE0; &#xD6A8;&#xC18C;.

La quinasa enzimas bacterianas acetato (AK) y phosphotransacetylase (PTA) forman una v&#xED;a clave para la s&#xED;ntesis de la central de intermedio metab&#xF3;lico acetil coenzima A (acetil-CoA) en acetato o para la generaci&#xF3;n de ATP a partir de exceso de acetil-CoA. Putativos genes AK ahora se han identificado en algunos microbios eucariotas. En Chlamydomonas reinhardtii y las especies de Phytophthora, AK constituye una v&#xED;a con la PTA. AK tambi&#xE9;n se ha identificado en hongos distintas de la levadura, pero estos hongos no tienen PTA. En su lugar, AK constituye una v&#xED;a con D-5-fosfato xilulosa fosfocetolasa (XFP), una v&#xED;a que tambi&#xE9;n fue con anterioridad que s&#xF3;lo se encuentra en las bacterias. En Entamoeba histolytica, ni del PTA ni XFP se encontr&#xF3; como un socio para AK. As&#xED;, los microbios eucariotas parecen haber incorporado la &#x26;#39;bacteriano&#x26;#39; enzima AK en al menos tres v&#xED;as metab&#xF3;licas diferentes.

Acetato quinasa: no s&#xF3;lo una enzima bacteriana

[ACS &#xFF1B; &#x918B;&#x9178;&#xFF1A; CoA &#x8FDE;&#x63A5;&#x9176; (AMP &#x5F62;&#x6210;)&#x3001; EC 6.2.1.1] acetyl-CoA AMP &#x6210;&#x5F62;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x4E24;&#x6B65;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x5411; acetyl-CoA &#x918B;&#x9178;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x662F;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x5F62;&#x6210;&#x5305;&#x62EC;&#x8424;&#x706B;&#x866B;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x3001; &#x975E;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x80BD;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x548C;&#x9170;&#x57FA;&#x82B3;&#x57FA; CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;/&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x7684;&#x9176;&#x8D85;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9176;&#x5177;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x4F4E;&#x5E8F;&#x5217;&#x517B;&#x62A4;&#x548C;&#x5229;&#x7528;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x6750;&#x6599;&#x7684;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x7684;&#x57DF;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x9650;&#x5236;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E86;&#x89E3;&#x57FA;&#x8D28;&#x4E2D;&#x66F4;&#x8FDC;&#x4EB2;&#x9176;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x4E2D;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x6C99;&#x95E8;&#x83CC;&#x529B; ACS &#x548C;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD; ACS1 &#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x5141;&#x8BB8;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8C03;&#x67E5;&#x57FA;&#x677F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C; ACS &#x4E2D;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728; S.&#x529B; ACS &#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E19;&#x7EC4;&#x7684;&#x817A;&#x82F7; 5&#39;-propylphosphate&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6A21;&#x4EFF;&#x9170;&#x57FA;-&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E8E;&#x758F;&#x6C34;&#x7684;&#x53E3;&#x888B;&#x91CC;&#x3002;Methanothermobacter thermautotrophicus Z245 ACS (MT ACS1&#xFF09; &#x7684;&#x5EFA;&#x6A21; S.&#x9175;&#x6BCD; ACS &#x7ED3;&#x6784;&#x663E;&#x793A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BC1;&#x660E;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x5BF9;&#x9F50;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6307;&#x793A;&#x64B0;&#x5199;&#x6307;&#x8BA4;&#x918B;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x91CC;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x6B8B;&#x6E23;&#x5F88;&#x4FDD;&#x5B88;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x56DB;&#x4E2A;&#x6B8B;&#x7559;&#x3001; Ile312&#x3001; Thr313&#x3001; Val388&#x3001; &#x548C; MT Trp416-ACS1&#xFF0C;&#x9488;&#x5BF9;&#x6539;&#x5EFA;&#xFF0C;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x505A;&#x7684;&#x786E;&#x5F62;&#x6210;&#x4E59;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9635;&#x5730;&#x6539;&#x5EFA;&#x5927;&#x5927;&#x6539;&#x53D8;&#x9176;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x918B;&#x9178;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5229;&#x7528;&#x7684;&#x9170;&#x57FA;&#x5E95;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;Trp416 &#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BB9;&#x7EB3;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x9170;&#x57FA;&#x94FE;&#x957F;&#x5EA6;&#x7684;&#x9996;&#x8981;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

Acetyl-CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x7684;&#x9170;&#x57FA;&#x57FA;&#x7247;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

AMP-forming acetyl-CoA synthetase [ACS; acetate:CoA ligase (AMP-forming), EC 6.2.1.1] catalyzes the activation of acetate to acetyl-CoA in a two-step reaction. This enzyme is a member of the adenylate-forming enzyme superfamily that includes firefly luciferase, nonribosomal peptide synthetases, and acyl- and aryl-CoA synthetases/ligases. Although the structures of several superfamily members demonstrate that these enzymes have a similar fold and domain structure, the low sequence conservation and diversity of the substrates utilized have limited the utility of these structures in understanding substrate binding in more distantly related enzymes in this superfamily. The crystal structures of the Salmonella enterica ACS and Saccharomyces cerevisiae ACS1 have allowed a directed approach to investigating substrate binding and catalysis in ACS. In the S. enterica ACS structure, the propyl group of adenosine 5'-propylphosphate, which mimics the acyl-adenylate intermediate, lies in a hydrophobic pocket. Modeling of the Methanothermobacter thermautotrophicus Z245 ACS (MT-ACS1) on the S. cerevisiae ACS structure showed similar active site architecture, and alignment of the amino acid sequences of proven ACSs indicates that the four residues that compose the putative acetate binding pocket are well conserved. These four residues, Ile312, Thr313, Val388, and Trp416 of MT-ACS1, were targeted for alteration, and our results support that they do indeed form the acetate binding pocket and that alterations at these positions significantly alter the enzyme's affinity for acetate as well as the range of acyl substrates that can be utilized. In particular, Trp416 appears to be the primary determinant for acyl chain length that can be accommodated in the binding site.

Characterization of the acyl substrate binding pocket of acetyl-CoA synthetase.

AMP formant l&#x26;#39;ac&#xE9;tyl-CoA synth&#xE9;tase [ACS; ac&#xE9;tate: CoA ligase (AMP formant), CE 6.2.1.1] catalyse l&#x26;#39;activation de l&#x26;#39;ac&#xE9;tate d&#x26;#39;ac&#xE9;tyl-CoA dans une r&#xE9;action en deux &#xE9;tapes. Cette enzyme est une partie de la superfamille enzymatique ad&#xE9;nylate-formage qui comprend la lucif&#xE9;rase de luciole, synth&#xE9;tases non ribosomiques peptidiques, et l&#x26;#39;acyl-CoA et aryle-synth&#xE9;tases ou des ligases. Bien que les structures de plusieurs membres de la superfamille de d&#xE9;montrer que ces enzymes ont un pli et de structure semblables de domaine, la conservation de la s&#xE9;quence &#xE0; faible et la diversit&#xE9; des substrats utilis&#xE9;s ont limit&#xE9; l&#x26;#39;utilit&#xE9; de ces structures dans la compr&#xE9;hension de la liaison du substrat des enzymes plus lointainement apparent&#xE9;e &#xE0; cette superfamille. Les structures cristallines de l&#x26;#39;AEC Salmonella enterica et ACS1 Saccharomyces cerevisiae ont permis une approche dirig&#xE9;e &#xE0; enqu&#xEA;ter sur la liaison au substrat et la catalyse dans les SCA. Dans la structure S. enterica ACS, le groupe propyle de l&#x26;#39;ad&#xE9;nosine 5&#x26;#39;-propylphosphate, qui imite l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire acyl-cyclase, se trouve dans une poche hydrophobe. Mod&#xE9;lisation de l&#x26;#39;ACS Methanothermobacter thermautotrophicus Z245 (MT-ACS1) sur la structure de S. cerevisiae ACS a montr&#xE9; similaire architecture du site actif, et l&#x26;#39;alignement des s&#xE9;quences d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s de preuves SCA indique que les quatre r&#xE9;sidus qui composent la poche de l&#x26;#39;ac&#xE9;tate putatif de liaison sont bien conserv&#xE9;es . Ces quatre r&#xE9;sidus, Ile312, les Thr313, de Val388 et Trp416 de MT-ACS1, ont &#xE9;t&#xE9; cibl&#xE9;s pour la modification, et nos r&#xE9;sultats confirment qu&#x26;#39;ils ne forment en effet la poche de l&#x26;#39;ac&#xE9;tate de liaison et que des modifications &#xE0; ces postes modifier de mani&#xE8;re significative l&#x26;#39;affinit&#xE9; de l&#x26;#39;enzyme de l&#x26;#39;ac&#xE9;tate de ainsi que la gamme de substrats acyle qui peuvent &#xEA;tre utilis&#xE9;s. En particulier, Trp416 semble &#xEA;tre le principal facteur d&#xE9;terminant pour la longueur de la cha&#xEE;ne acyle qui peuvent &#xEA;tre log&#xE9;s dans le site de liaison.

Caract&#xE9;risation de la poche de liaison de substrat Acyl ac&#xE9;tyl-CoA synth&#xE9;tase

AMP-bildenden Acetyl-CoA-Synthetase [ACS; Acetat: CoA-Ligase (AMP-bildenden), EG 6.2.1.1] katalysiert die Aktivierung von Acetat zu Acetyl-CoA in einer zweistufigen Reaktion. Dieses Enzym ist Mitglied der Adenylat-bildende Enzym &Uuml;berfamilie, die Gl&uuml;hw&uuml;rmchen Luciferase und nichtribosomale Peptid-Synthetases und Aryl-Coenzym a Synthetases/Verkn&uuml;pfung enth&auml;lt. Obwohl die Strukturen von mehreren Mitgliedern der &Uuml;berfamilie zu demonstrieren, dass diese Enzyme haben eine &auml;hnliche Falte und Dom&auml;nenstruktur, die niedrige Reihenfolge Erhaltung und Vielfalt der Substrate genutzt haben das Dienstprogramm dieser Strukturen im Verst&auml;ndnis Substrat binden in mehr weitl&auml;ufig Verwandte Enzyme in dieser &Uuml;berfamilie begrenzt. Die Kristallstrukturen von Salmonella Enterica ACS und Saccharomyces Cerevisiae ACS1 haben einen gerichteten Ansatz zur Untersuchung von Substrat Bindung und Katalyse in ACS erlaubt. In der S. Enterica ACS-Struktur, die Propyl-Gruppe von Adenosin 5&#39;-Propylphosphate, die imitiert des Acyl-Adenylat-Zwischenprodukt, liegt in einer hydrophoben Tasche. Modellierung der Methanothermobacter Thermautotrophicus Z245 ACS (MT-ACS1) auf S. Cerevisiae ACS Struktur zeigte &auml;hnliche aktive Website-Architektur und Ausrichtung die Aminos&auml;ure-Sequenzen der bew&auml;hrten ACSs angibt, dass die vier R&uuml;ckst&auml;nde, die die vermeintliche Acetat Bindung Tasche verfassen gut konserviert werden. Diese vier R&uuml;ckst&auml;nde, Ile312, Thr313, Val388 und Trp416 der MT-ACS1, wurden gezielt f&uuml;r Ver&auml;nderung und unsere Ergebnisse zu unterst&uuml;tzen, dass sie tats&auml;chlich die Acetat-Bindung-Tasche bilden und &Auml;nderungen an diesen Positionen erheblich &auml;ndern das Enzym Affinit&auml;t f&uuml;r Acetat sowie den Bereich der Acyl-Substrate, die genutzt werden k&ouml;nnen. Insbesondere scheint Trp416 die prim&auml;re Determinante f&uuml;r Acil Kettenl&auml;nge zu sein, die in die Bindungsstelle untergebracht werden k&ouml;nnen.

Charakterisierung der Acil Bedruckstoff Bindung Tasche von Acetyl-CoA-Synthetase.

Sintetasi di acetil-CoA formando AMP [ACS; ligasi acetato: CoA (AMP-formante), CE 6.2.1.1] catalizza l&#39;attivazione dell&#39;acetato di acetil-CoA in una reazione a due fasi. Questo enzima &egrave; un membro dell&#39;adenilato-formando superfamiglia di enzimi che include luciferasi firefly, sintetasi del peptide di nonribosomal e acil - e aril-CoA sintetasi/ligasi. Anche se le strutture dei diversi membri della superfamiglia dimostrano che questi enzimi hanno una piega simile e struttura di dominio, la sequenza bassa conservazione e diversit&agrave; dei substrati utilizzati hanno limitato l&#39;utilit&agrave; di queste strutture nel substrato di intesa vincolante degli enzimi pi&ugrave; lontanamente correlate a questa superfamiglia. Le strutture di cristallo della Salmonella enterica ACS e Saccharomyces cerevisiae ACS1 hanno permesso un approccio diretto ad indagare il legame del substrato e catalisi in ACS. Nella S. enterica struttura dell&#39;ACS, il gruppo propile di adenosina 5&#39;-propylphosphate, che imita l&#39;intermedio acil adenilato, si trova in una tasca idrofobica. Modellazione del Methanothermobacter thermautotrophicus Z245 ACS (MT-ACS1) su S. cerevisiae ACS struttura mostr&ograve; architettura simile sito attivo e allineamento delle sequenze dell&#39;amminoacido di comprovata ACSs indica che i quattro residui che compongono la tasca di legame putativo acetato sono ben conservati. Questi quattro residui, Ile312, Thr313, Val388 e Trp416 di MT-ACS1, sono stati mirati per alterazione, e i nostri risultati supportano infatti formano la tasca di legame acetato e che alterazioni in queste posizioni alterano significativamente affinit&agrave; dell&#39;enzima per acetato come pure la gamma di substrati acilico che pu&ograve; essere utilizzata. In particolare, Trp416 sembra essere il determinante primario per la lunghezza della catena acil che pu&ograve; essere ospitato nel sito di associazione.

Caratterizzazione della tasca associazione acil substrato della sintetasi di acetil-CoA.

AMP&#x5F62;&#x6210;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;-CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;[ACS;&#xFF1A;&#x9162;&#x9178;CoA&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;AMP&#x5F62;&#x6210;&#xFF09;&#x3001;EC 6.2.1.1]&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3067;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;-CoA&#x3078;&#x306E;&#x9162;&#x9178;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30BF;&#x30EB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x975E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x53CA;&#x3073;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x3001;&#x30A2;&#x30EA;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;/&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x751F;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x500D;&#x3068;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x914D;&#x5217;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6027;&#x3068;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x9060;&#x7E01;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9;&#x83CC;ACS&#x3068;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#xB7;&#x30BB;&#x30EC;&#x30D3;&#x30B7;&#x30A8;&#xFF08;Saccharomyces cerevisiae&#xFF09;&#x306E;ACS1&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;ACS&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306B;&#x5411;&#x3051;&#x305F;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; S. enterica&#x306E;ACS&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;-&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3057;&#x305F;5&#x26;#39;-propylphosphate&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EB;&#x57FA;&#x306F;&#x3001;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; S. cerevisiae&#x306E;ACS&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x83CC;thermautotrophicus Z245 ACS&#xFF08;MT-ACS1&#xFF09;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x5B9F;&#x7E3E;&#x306E;&#x3042;&#x308B;ACS&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x30A2;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;&#x9162;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;4&#x3064;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;4&#x3064;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3001;Ile312&#x3001;Thr313&#x3001;Val388&#x3001;&#x53CA;&#x3073;MT-ACS1&#x306E;Trp416&#x306F;&#x3001;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x3001;&#x3068;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x304C;&#x5B9F;&#x969B;&#x306B;&#x9162;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x9162;&#x9178;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x5229;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;Trp416&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x53CE;&#x5BB9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x9396;&#x9577;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x601D;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x3002;

&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xD2F8; &#xD569;&#xC131; &#xC570;&#xD504; &#xD615;&#xC131; [ACS; &#xCD08; &#xC0B0;: CoA &#xB9AC;&#xAC00; (&#xC570;&#xD504; &#xD615;&#xC131;) EC 6.2.1.1] 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0; &#xD2F8; &#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; catalyzes. &#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; adenylate &#xD615;&#xC131; &#xC704;&#xC6D0; &#xD6A8;&#xC18C; superfamily &#xAC1C; &#xB625; &#xBC8C;&#xB808; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C;, nonribosomal &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; synthetases acyl aryl CoA synthetases/ligases&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; superfamily &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xAC00; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xBC30; &#xBC0F; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870;, &#xB0AE;&#xC740; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC874; &#xBC0F; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC774;&#xC774; superfamily &#xB354; &#xBA3C; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC774;&#xD574; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0; &#xC81C;&#xD55C;. &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; enterica ACS &#xBC0F; Saccharomyces cerevisiae ACS1 &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870; &#xC870;&#xC0AC; &#xAE30;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; ACS&#xC5D0; &#xCD09;&#xB9E4;&#xB97C; &#xC9C1;&#xC811;&#xB41C; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. S. enterica ACS &#xAD6C;&#xC870; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; 5&#39;-propylphosphate&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xBC29;&#xD55C; acyl adenylate &#xC911;&#xAE09;, &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC5D0; &#xC788;&#xB2E4;. Methanothermobacter thermautotrophicus Z245 ACS (MT ACS1)&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; S. cerevisiae ACS&#xC5D0; &#xAD6C;&#xC870; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98; &#xC8FC;&#xBA70; &#xC785;&#xC99D; &#xB41C; Acss&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xB9DE;&#xCDA4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; putative &#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3EC;&#xCF13;&#xC744; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC798; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;, Ile312, Thr313, Val388, &#xBC0F; Trp416 MT-ACS1, &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD45C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8; &#xD615;&#xC131; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD06C;&#xAC8C; acyl &#xAE30;&#xD310; &#xD65C;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC94;&#xC704; &#xBC0F; &#xCD08; &#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC9C0;&#xC6D0;. &#xD2B9;&#xD788; Trp416 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; acyl &#xCCB4;&#xC778; &#xAE38;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;&#xC774; &#xB420; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4;.

&#xD2F8; &#xD569;&#xC131;&#xC758; acyl &#xAE30;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

AMP formador de acetil-CoA sintetasa [AEC; acetato: CoA ligasa (AMP formador), CE 6.2.1.1] cataliza la activaci&#xF3;n de acetato de acetil-CoA en una reacci&#xF3;n en dos etapas. Esta enzima es un miembro de la superfamilia enzima adenilato formador que incluye luciferasa de luci&#xE9;rnaga, sintetasas no ribosomales pept&#xED;dicos, y-acilo y arilo-CoA sintetasas o ligasas. Aunque las estructuras de varios miembros de la superfamilia demostrar que estas enzimas tienen un pliegue similar y la estructura de dominio, la conservaci&#xF3;n de la secuencia baja y la diversidad de los sustratos utilizados han limitado la utilidad de estas estructuras en la comprensi&#xF3;n de la uni&#xF3;n del sustrato de las enzimas m&#xE1;s alejadas de esta superfamilia. Las estructuras cristalinas de la AEC Salmonella enterica y ACS1 Saccharomyces cerevisiae han permitido un enfoque dirigido a la investigaci&#xF3;n de uni&#xF3;n a sustratos y cat&#xE1;lisis en el SCA. En la estructura de S. enterica ACS, el grupo propilo de la adenosina 5&#x26;#39;-propylphosphate, que imita el intermedio acil-ciclasa, se encuentra en un bolsillo hidrof&#xF3;bico. El modelado del Methanothermobacter thermautotrophicus Z245 AEC (MT-ACS1) sobre la estructura de Saccharomyces S. ACS mostr&#xF3; arquitectura similar sitio activo, y la alineaci&#xF3;n de las secuencias de amino&#xE1;cidos de probada SCA indica que los cuatro residuos que componen el bolsillo acetato de uni&#xF3;n putativo est&#xE1;n bien conservadas . Estos cuatro residuos, Ile312 y Thr313, la Val388 y Trp416 de MT-ACS1, fueron objeto de alteraci&#xF3;n, y nuestros resultados apoyan que de hecho forman la bolsa de acetato de uni&#xF3;n y las alteraciones que en estas posiciones alteran de manera significativa la afinidad de la enzima para el acetato, as&#xED; como la gama de sustratos de acilo que pueden ser utilizados. En particular, Trp416 parece ser el determinante principal de longitud de cadena acilo que pueden ser alojados en el sitio de uni&#xF3;n.

Caracterizaci&#xF3;n de la bolsa de sustrato acil La uni&#xF3;n de la acetil-CoA Sintetasa

&#x79CD;&#x9525;&#x4F53;&#x8868;&#x793A;&#x4E24;&#x4E2A; hexokinases&#xFF0C;&#x6709; 98%&#x5B8C;&#x5168;&#x76F8;&#x540C;&#xFF0C;&#x5373; TbHK1 &#x548C; TbHK2.&#x7EAF;&#x5408;&#x7A7A; TbHK2/procyclic &#x5F62;&#x5F0F;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5C55;&#x89C8;&#x589E;&#x52A0;&#x6210;&#x500D;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x7684;&#x6539;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5DF1;&#x7CD6;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x4E24;&#x500D;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4; TbHK1 &#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x5206;&#x522B;&#x4E3A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6; hexokinases &#x4E0E;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x548C; ATP &#x7684; + /-0.02 &#x6BEB;&#x7C73; 0.09 &#x548C; 0.28 + /-0.1 m m&#xFF0C;&#x660E;&#x663E;&#x516C;&#x91CC;&#x503C;&#x3002;TbHK1 &#x7684; k(cat) &#x503C;&#x662F; 2.9 x&#xFF09; min(-1)&#x3002;TbHK1 &#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x7518;&#x9732;&#x7CD6;&#x3001; &#x679C;&#x7CD6;&#x3001; 2-&#x8131;&#x6C27;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x3001; &#x6C28;&#x57FA;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x76D0;&#x9178;&#x76D0;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x886C;&#x5E95;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;TbHK1 &#x6291;&#x5236;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x3001; &#x6708;&#x6842;&#x9178;&#x3001; &#x8089;&#x8C46;&#x853B;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6B63;&#x5728;&#x6700;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x8102;&#x9178; &#xFF08;75.8&#x3001; 784&#x3001; &#x548C; 62.4 microM&#xFF0C;50%&#x6291;&#x5236;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5206;&#x522B;)&#x3002;&#x4E0E; TbHK1&#xFF0C;&#x91CD;&#x7EC4; TbHK2 &#x7F3A;&#x4E4F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x4E03; 10 TbHK1 &#x548C; TbHK2 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5728;&#x4E8E; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x5185; 18 &#x79CD;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x3002;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5C06;&#x6620;&#x5C04; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x5C3E;&#x5DF4;&#x57DF;&#x95F4;&#x88C2;&#x9176;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7684;&#x57FA;&#x677F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x540E;&#x9176;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x9644;&#x8FD1;&#x3002;&#x6700;&#x540E; 18 &#x79CD;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684; TbHK2 &#x66FF;&#x6362;&#x4E3A;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684; TbHK1 &#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x76F8;&#x53CD;&#x6536;&#x76CA;&#x7387;&#x79EF;&#x6781;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6027;&#x8D28;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684; TbHK1.&#x3001; C-&#x672B;&#x7AEF;&#x7684; TbHK1 &#x66FF;&#x6362; TbHK2 &#x5C3E;&#x53EF;&#x706D;&#x6D3B;&#x7684;&#x9176;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; C-&#x672B;&#x7AEF;&#x7684; TbHK1 &#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5DF1;&#x7CD6;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6539;&#x53D8;&#x7684; C-&#x672B;&#x7AEF;&#x7684; TbHK2&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x6316;&#x7A7A;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5176;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

&#x7B2C;&#x4E8C;&#x79CD;&#x9525;&#x4F53;&#x5DF1;&#x7CD6;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7531; 18 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178; C-&#x672B;&#x7AEF;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;

Trypanosoma brucei expresses two hexokinases that are 98% identical, namely, TbHK1 and TbHK2. Homozygous null TbHK2-/- procyclic-form parasites exhibit an increased doubling time, a change in cell morphology, and, surprisingly, a twofold increase in cellular hexokinase activity. Recombinant TbHK1 enzymatic activity is similar to that of other hexokinases, with apparent Km values for glucose and ATP of 0.09 +/- 0.02 mM and 0.28 +/- 0.1 mM, respectively. The k(cat) value for TbHK1 is 2.9 x 10(4) min(-1). TbHK1 can use mannose, fructose, 2-deoxyglucose, and glucosamine as substrates. In addition, TbHK1 is inhibited by fatty acids, with lauric, myristic, and palmitic acids being the most potent (with 50% inhibitory concentrations of 75.8, 78.4, and 62.4 microM, respectively). In contrast to TbHK1, recombinant TbHK2 lacks detectable enzymatic activity. Seven of the 10 amino acid differences between TbHK1 and TbHK2 lie within the C-terminal 18 amino acids of the polypeptides. Modeling of the proteins maps the C-terminal tails near the interdomain cleft of the enzyme that participates in the conformational change of the enzyme upon substrate binding. Replacing the last 18 amino acids of TbHK2 with the corresponding residues of TbHK1 yields an active recombinant protein with kinetic properties similar to those of TbHK1. Conversely, replacing the C-terminal tail of TbHK1 with the TbHK2 tail inactivates the enzyme. These findings suggest that the C-terminal tail of TbHK1 is important for hexokinase activity. The altered C-terminal tail of TbHK2, along with the phenotype of the knockout parasites, suggests a distinct function for the protein.

Activity of a second Trypanosoma brucei hexokinase is controlled by an 18-amino-acid C-terminal tail.

Trypanosoma brucei exprime deux hexokinases qui sont 98% identique, &#xE0; savoir TbHK1 et TbHK2. Nulle homozygote TbHK2-/ - procyclique-forme des parasites pr&#xE9;sentent un temps de doublement accrue, un changement dans la morphologie des cellules, et, chose surprenante, une augmentation du double dans la t&#xE9;l&#xE9;phonie cellulaire hexokinase activit&#xE9;. Recombinant activit&#xE9; enzymatique TbHK1 est similaire &#xE0; celle de hexokinases autres, avec des valeurs apparentes Km pour le glucose et l&#x26;#39;ATP de 0,09 + / - 0,02 mM et 0,28 + / - 0,1 mM, respectivement. La k (cat) la valeur pour TbHK1 est de 2,9 x 10 (4) min (-1). TbHK1 peut utiliser le mannose, le fructose, le 2-d&#xE9;soxyglucose, et la glucosamine comme substrats. En outre, TbHK1 est inhib&#xE9;e par les acides gras, avec des acides laurique, myristique, palmitique et &#xEA;tre le plus puissant (avec 50% des concentrations inhibitrices de 75,8, 78,4 et 62,4 microM, respectivement). Contrairement &#xE0; TbHK1, recombinant TbHK2 manque d&#xE9;tectable activit&#xE9; enzymatique. Sept des 10 acides amin&#xE9;s diff&#xE9;rents entre TbHK1 et TbHK2 se situent dans les 18 C-terminales des acides amin&#xE9;s des polypeptides. Mod&#xE9;lisation des prot&#xE9;ines mappe les queues C-terminales pr&#xE8;s de la fente interdomaine de l&#x26;#39;enzyme qui participe &#xE0; la modification de conformation de l&#x26;#39;enzyme lors de la liaison substrat. Le remplacement des 18 derniers acides amin&#xE9;s de TbHK2 avec les r&#xE9;sidus correspondants de TbHK1 donne une prot&#xE9;ine recombinante active ayant des propri&#xE9;t&#xE9;s cin&#xE9;tiques semblables &#xE0; celles de TbHK1. Inversement, le remplacement de la queue C-terminale de la queue avec TbHK1 TbHK2 inactive l&#x26;#39;enzyme. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que la queue C-terminale de TbHK1 est important pour l&#x26;#39;activit&#xE9; hexokinase. Le alt&#xE9;r&#xE9;e queue C-terminale de la TbHK2, avec le ph&#xE9;notype des parasites &#xE0; &#xE9;limination directe, sugg&#xE8;re une fonction distincte de la prot&#xE9;ine.

Activit&#xE9; d&#x26;#39;une deuxi&#xE8;me hexokinase de Trypanosoma brucei est contr&#xF4;l&#xE9;e par un 18-amino-acide C-terminal de queue

Trypanosoma Brucei dr&uuml;ckt zwei Hexokinases, die 98 % identisch, n&auml;mlich TbHK1 und TbHK2. homozygot null TbHK2-/-prozyklischen-Form Parasiten zeigen eine erh&ouml;hte Verdoppelung Zeit, eine &Auml;nderung der Zellmorphologie und, &uuml;berraschenderweise, eine Verdoppelung in zellul&auml;ren Hexokinase-Aktivit&auml;t. Rekombinante TbHK1 enzymatische Aktivit&auml;t ist &auml;hnlich dem von anderen Hexokinases, mit scheinbaren Km-Werte f&uuml;r Glucose und ATP 0,09 +/-0,02 mM und 0,28 +/-0,1 mM. Der k(cat)-Wert f&uuml;r TbHK1 ist 2,9 X 10 Absatz 4 min(-1). TbHK1 k&ouml;nnen Mannose, Fruktose, 2-Deoxyglucose und Glucosamin als Substrate. Au&szlig;erdem wird TbHK1 von Fetts&auml;uren, Laurins&auml;ure, Myristins&auml;ure und Palmitins&auml;ure S&auml;uren wird st&auml;rkste gehemmt (mit 50 % hemmende Konzentrationen von 75,8, 78,4 und 62,4 MicroM, beziehungsweise). Im Gegensatz zu TbHK1 fehlt rekombinante TbHK2 nachweisbar enzymatische Aktivit&auml;t. Sieben der 10 Aminos&auml;ure Unterschiede zwischen TbHK1 und TbHK2 liegen in der C-terminalen 18 Aminos&auml;uren von den Polypeptiden. Modellierung der Proteine ordnet die C-terminale Schw&auml;nze in der N&auml;he der Dom&auml;nen-mediane Spalte, der das Enzym, das an die Konformations&auml;nderungen &Auml;nderung des Enzyms auf Substrat Bindung beteiligt ist. Ersetzen die entsprechende R&uuml;ckst&auml;nde des TbHK1 die letzten 18 Aminos&auml;uren der TbHK2 ergibt ein aktive rekombinantes Protein mit kinetischen Eigenschaften &auml;hnlich denen von TbHK1. umgekehrt, anstelle den C-terminalen Schwanz des TbHK1 mit der TbHK2 Schwanz das Enzym inaktiviert. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass der C-terminalen Schwanz des TbHK1 f&uuml;r Hexokinase-Aktivit&auml;t wichtig. Das ver&auml;nderte C-terminalen Ende TbHK2, zusammen mit der Ph&auml;notyp der k.o. Parasiten, schl&auml;gt eine distinct-Funktion f&uuml;r das Protein.

Aktivit&auml;t von einer zweiten Trypanosoma Brucei Hexokinase wird durch eine 18-Aminos&auml;ure C-terminalen Schwanz gesteuert.

Trypanosoma brucei esprime due esochinasi che sono 98% identici, vale a dire, TbHK1 e TbHK2. omozigoti parassiti degli TbHK2-/-prociclico-forma null presentano un maggiore tempo di raddoppio, un cambiamento nella morfologia cellulare e, sorprendentemente, un duplice aumento dell&#39;attivit&agrave; cellulare esochinasi. L&#39;attivit&agrave; enzimatica ricombinante TbHK1 &egrave; simile a quella di altre esochinasi, con apparenti valori Km per il glucosio e ATP di 0,09 + /-0,02 mM e 0,28 + /-0,1 mM, rispettivamente. Il valore di k(cat) per TbHK1 &egrave; 2,9 x recano min(-1). TbHK1 possibile utilizzare mannosio, fruttosio, 2-deossiglucosio e glucosamina come substrati. Inoltre, TbHK1 &egrave; inibito da acidi grassi, laurico, miristico e palmitico, essendo il pi&ugrave; potente (con 50% concentrazioni inibitorie di 75,8, 78.4 e 62,4 microM, rispettivamente). In contrasto con TbHK1, TbHK2 ricombinante manca di attivit&agrave; enzimatica rilevabile. Sette dei 10 amminoacido differenze tra TbHK1 e TbHK2 si trovano all&#39;interno del C-terminale 18 aminoacidi dei polipeptidi. Modellazione delle proteine mappe le code C-terminali vicino la schisi interdomain dell&#39;enzima che partecipa al cambiamento conformazionale dell&#39;enzima dell&#39;associazione di substrato. Sostituendo l&#39;ultima 18 amminoacidi di TbHK2 con i corrispondenti residui di TbHK1 produce una proteina ricombinante attiva con propriet&agrave; cinetiche simili a quelle di TbHK1. al contrario, sostituendo la coda C-terminale di TbHK1 con la coda TbHK2 inattiva l&#39;enzima. Questi risultati suggeriscono che la coda C-terminale di TbHK1 &egrave; importante per l&#39;attivit&agrave; di esochinasi. La coda C-terminale alterata di TbHK2, insieme con il fenotipo dei parassiti ko, suggerisce una funzione distinta per la proteina.

Attivit&agrave; di un secondo Trypanosoma brucei esochinasi &egrave; controllata da una coda C-terminale 18-amminoacido.

&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x306F;98&#xFF05;&#x540C;&#x4E00;&#x3067;&#x3042;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;hexokinases&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;TbHK1&#x3068;TbHK2&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;&#x30CC;&#x30EB;TbHK2  -  /  - &#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30B5;&#x30DF;&#x30F3;&#x5F62;&#x5F0F;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306F;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x500D;&#x52A0;&#x6642;&#x9593;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3001;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;2&#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002; 0.02 mM&#x304A;&#x3088;&#x3073;0.28 + /  -   -  0.1 mM&#x306E;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;TbHK1&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;+ / 0.09&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;ATP&#x306E;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;Km&#x5024;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;hexokinases&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TbHK1&#x306E;k&#xFF08;&#x732B;&#xFF09;&#x306E;&#x5024;&#x306F;2.9&#xD7;10&#xFF08;4&#xFF09;&#x5206;&#xFF08;-1&#xFF09;&#x3067;&#x3059;&#x3002; TbHK1&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;2  - &#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x53CA;&#x3073;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B5;&#x30DF;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;TbHK1&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30A6;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30DF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C1;&#x30F3;&#x9178;&#x306F;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6700;&#x3082;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#xFF08;50&#xFF05;&#x963B;&#x5BB3;75.8&#x3001;78.4&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;62.4&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x3001;&#x3068;&#xFF09;&#x3002; TbHK1&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;TbHK2&#x306F;&#x3001;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; TbHK1&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;18&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x4EE5;&#x5185;&#x3067;TbHK2&#x5618;&#x306E;&#x9593;&#x306B;10&#x500B;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306E;&#x30BB;&#x30D6;&#x30F3;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x6642;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30AF;&#x30EC;&#x30D5;&#x30C8;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x5C3E;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TbHK1&#x5229;&#x56DE;&#x308A;TbHK1&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3068;TbHK2&#x306E;&#x6700;&#x5F8C;&#x306E;18&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3092;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;TbHK2&#x5C3E;TbHK1&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x5C3E;&#x90E8;&#x3092;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;TbHK1&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x30C6;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x30D8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;TbHK2&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;C&#x672B;&#x7AEF;&#x30C6;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x7B2C;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x30D8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;18&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x30C6;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Trypanosoma brucei &#xD45C;&#xD604; &#xB450; hexokinases 98% &#xB3D9;&#xC77C;, &#xC989;, TbHK1 &#xBC0F; TbHK2. Homozygous null TbHK2/procyclic &#xC591;&#xC2DD; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC804;&#xC2DC; &#xC99D;&#xAC00; 2 &#xBC30; &#xC2DC;&#xAC04;, &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBCC0;&#xD654; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; hexokinase &#xD65C;&#xB3D9; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; TbHK1 &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xAC01;&#xAC01; 0.09 &plusmn; 0.02 m M&#xC640; 0.1 m m, + 0.28&#xC758; ATP&#xC640; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Km &#xAC12;&#xC774; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; hexokinases &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Tbhk1&#xC758; k(cat) &#xAC12;&#xC740; 2.9 x 10(4) min(-1). TbHK1 &#xC2A4;&#xACFC; &#xB2F9;, 2-deoxyglucose, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAE00;&#xB8E8;&#xCF54;&#xC0AC;&#xBBFC;&#xC744; &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, TbHK1 lauric myristic, &#xBC0F; &#xD314; &#xBBF8;&#xD2B8; &#xC0B0;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB418; &#xACE0; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; (75.8, 78.4, 62.4 Microm&#xC758; 50% &#xC5B5;&#xC81C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xAC01;&#xAC01;). TbHK1, &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; TbHK2 &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB2E4;. 7 Tbhk1&#xC640; TbHK2 &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; 10 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xCC28;&#xC774;&#xC810;&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB0B4; &#xAC70;&#xC9D3;&#xB9D0;&#xC740; polypeptides&#xC758; 18 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xAE30;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC6B0;&#xC120; &#xBD84;&#xC5F4; &#xADFC;&#xCC98; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB9E4;&#xD551;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC18D;&#xC131;&#xC758; TbHK1. &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xD65C;&#xC131; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD574;&#xB2F9; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; Tbhk1&#xC640; Tbhk2&#xC758; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; 18 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xAD50;&#xCCB4;, &#xD6A8;&#xC18C; &#xC0DD;&#xAE34;&#xB2E4; TbHK2 &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC640; Tbhk1&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xB97C; &#xAD50;&#xCCB4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; Tbhk1&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xAF2C;&#xB9AC; hexokinase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; phenotype &#xD568;&#xAED8; TbHK2, &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBE44;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; Trypanosoma brucei hexokinase &#xD65C;&#xB3D9; 18 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Trypanosoma brucei expresa dos hexoquinasas que son 98% id&#xE9;nticos, a saber, TbHK1 y TbHK2. Nula homocigotos TbHK2-/ - de forma proc&#xED;clica-par&#xE1;sitos presentan un tiempo de duplicaci&#xF3;n mayor, un cambio en la morfolog&#xED;a de las c&#xE9;lulas, y, sorprendentemente, un incremento del doble en el celular, la actividad hexoquinasa. Recombinante actividad enzim&#xE1;tica TbHK1 es similar a la de hexoquinasas otros, con los valores de Km aparentes para la glucosa y el ATP de 0,09 + / - 0,02 mM y 0,28 + / - 0,1 mM, respectivamente. El k (CAT) de valor para TbHK1 es de 2,9 x 10 (4) min (-1). TbHK1 puede utilizar fructosa manosa,, 2 desoxiglucosa, y la glucosamina como sustratos. Adem&#xE1;s, TbHK1 es inhibida por los &#xE1;cidos grasos, con los &#xE1;cidos l&#xE1;urico, mir&#xED;stico, palm&#xED;tico y siendo el m&#xE1;s potente (con concentraciones inhibitoria del 50% de 75,8, 78,4 y 62,4 mM, respectivamente). En contraste con TbHK1, recombinante TbHK2 carece de actividad enzim&#xE1;tica detectable. Siete de los 10 amino&#xE1;cidos diferencias entre TbHK1 y TbHK2 mentira dentro de los C-terminal de 18 amino&#xE1;cidos de los polip&#xE9;ptidos. Modelado de las prote&#xED;nas asigna las colas C-terminal cerca de la hendidura interdominio de la enzima que participa en el cambio conformacional de la enzima tras la uni&#xF3;n del sustrato. Sustituci&#xF3;n de los &#xFA;ltimos 18 amino&#xE1;cidos de TbHK2 con los correspondientes residuos de TbHK1 produce una prote&#xED;na recombinante activo con propiedades similares a las cin&#xE9;ticas de TbHK1. A la inversa, en sustituci&#xF3;n de la cola C-terminal de la cola con TbHK1 TbHK2 inactiva la enzima. Estos hallazgos sugieren que la cola C-terminal de TbHK1 es importante para la actividad hexoquinasa. La alteraci&#xF3;n del C-terminal de la cola de TbHK2, junto con el fenotipo de los par&#xE1;sitos knockout, sugiere una funci&#xF3;n distinta de la prote&#xED;na.

Actividad de un segundo hexoquinasa Trypanosoma brucei es controlado por un 18-amino-&#xE1;cido C-terminal de la cola

Bien que le methanoarchaea aceticlastic Methanosarcina et Methanosaeta emploient diff&#xE9;rentes enzymes pour catalyser la premi&#xE8;re &#xE9;tape de la m&#xE9;thanog&#xE9;n&#xE8;se aceticlastic, il a longtemps &#xE9;t&#xE9; suppos&#xE9; que le reste de la voie &#xE9;tait la m&#xEA;me. L&#x26;#39;analyse de la s&#xE9;quence du g&#xE9;nome a r&#xE9;cemment compl&#xE9;t&#xE9; des Methanosaeta thermophila confirme que la majorit&#xE9; des &#xE9;tapes fondamentales de la voie sont similaires chez les deux genres, mais des diff&#xE9;rences frappantes ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;couverts dans le transfert d&#x26;#39;&#xE9;lectrons et de conservation de l&#x26;#39;&#xE9;nergie. En outre, la pr&#xE9;sence de g&#xE8;nes codant des enzymes de la voie r&#xE9;duction du CO (2) dans le Msa. thermophila g&#xE9;nome sugg&#xE8;re la possibilit&#xE9; que Methanosaeta pourrait &#xEA;tre plus diversifi&#xE9;e m&#xE9;taboliquement qu&#x26;#39;on ne le pensait. Ainsi, l&#x26;#39;analyse du g&#xE9;nome de la Msa. thermophila pr&#xE9;sente nouvelles avenues de recherche pour ce m&#xE9;thanog&#xE8;ne oubli&#xE9; et nous rappelle les questions qui restent encore sans r&#xE9;ponse au sujet de la m&#xE9;thanog&#xE9;n&#xE8;se aceticlastic &#xE0; la fois dans Methanosaeta et Methanosarcina.

Methanosaeta, le m&#xE9;thanog&#xE8;ne de passe oubli&#xE9;?

Obwohl die Aceticlastic Methanoarchaea Methanosarcina und Methanosaeta verschiedene Enzyme, den ersten Schritt des Aceticlastic Methanbildung katalysieren besch&auml;ftigen, hat es lange angenommen worden, dass der Rest des Weges das gleiche war. Analyse der k&uuml;rzlich abgeschlossenen Genom-Sequenz von Methanosaeta Thermophila best&auml;tigt, dass die Mehrheit der Kern Schritte des Signalweges &auml;hneln sich beide Gattungen, aber markante Unterschiede in Elektronen-Transfer und Energie-Erhaltung entdeckt worden. Dar&uuml;ber hinaus ist das Vorhandensein von Genen, die Enzyme f&uuml;r die CO(2)-Reduzierung-Pathway in der Msa-Codierung. Thermophila Genoms legt die M&ouml;glichkeit, dass Methanosaeta m&ouml;glicherweise mehr metabolisch vielf&auml;ltig als bisher angenommen. Also Genomanalyse der Msa. Thermophila pr&auml;sentiert neue Wege der Forschung f&uuml;r diese vergessenen Methanogen und erinnert uns an die Fragen, die noch &uuml;ber Aceticlastic Methanbildung in Methanosaeta und Methanosarcina unbeantwortet bleiben.

Methanosaeta, die vergessene Methanogen?

&#x867D;&#x7136; aceticlastic methanoarchaea &#x7403;&#x83CC;&#x548C; Methanosaeta &#x91C7;&#x7528;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9176;&#x6765;&#x50AC;&#x5316; aceticlastic &#x4EA7;&#x7532;&#x70F7;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x5B83;&#x957F;&#x671F;&#x4EE5;&#x6765;&#x4E00;&#x76F4;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x8DEF;&#x5F84;&#x7684;&#x5176;&#x4F59;&#x90E8;&#x5206;&#x662F;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;Methanosaeta &#x55DC;&#x70ED;&#x6700;&#x8FD1;&#x5B8C;&#x6210;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#x6B65;&#x9AA4;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x90FD;&#x662F;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x5C5E;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x548C;&#x80FD;&#x91CF;&#x5B88;&#x6052;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E86;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9488;&#x5BF9;&#x5728; Msa CO(2) &#x51CF;&#x5C11;&#x9014;&#x5F84;&#x9176;&#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x55DC;&#x70ED;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8868;&#x660E; Methanosaeta &#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6BD4;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x7684;&#x65B0;&#x9648;&#x4EE3;&#x8C22;&#x66F4;&#x591A;&#x6837;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x751F;&#x6D3B;&#x6D25;&#x8D34;&#x3002;&#x55DC;&#x70ED;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x6B64;&#x88AB;&#x9057;&#x5FD8;&#x7684;&#x4EA7;&#x7532;&#x70F7;&#x7EC6;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x9192;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x7136;&#x672A;&#x6709;&#x7B54;&#x6848;&#x6709;&#x5173; Methanosaeta &#x548C;&#x7403;&#x83CC; aceticlastic &#x7532;&#x70F7;&#x3002;

Methanosaeta&#xFF0C;&#x88AB;&#x9057;&#x5FD8;&#x7684;&#x4EA7;&#x7532;&#x70F7;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5417;&#xFF1F;

Although the aceticlastic methanoarchaea Methanosarcina and Methanosaeta employ different enzymes to catalyze the first step of aceticlastic methanogenesis, it has long been assumed that the remainder of the pathway was the same. Analysis of the recently completed genome sequence of Methanosaeta thermophila confirms that the majority of core steps of the pathway are similar in both genera, but striking differences have been discovered in electron transfer and energy conservation. In addition, the presence of genes encoding enzymes for the CO(2) reduction pathway in the Msa. thermophila genome suggests the possibility that Methanosaeta might be more metabolically diverse than previously thought. Thus, genome analysis of Msa. thermophila presents new research avenues for this forgotten methanogen and reminds us of the questions that still remain unanswered about aceticlastic methanogenesis in both Methanosaeta and Methanosarcina.

Methanosaeta, the forgotten methanogen?

&#x817A;&#x82F7;&#x9178; (AMP)-&#x5F62;&#x6210; acetyl-CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176; &#xFF08;ACS &#xFF1B; &#x918B;&#x9178;&#xFF1A; CoA &#x8FDE;&#x63A5;&#x9176; (AMP &#x5F62;&#x6210;)&#x3001; EC 6.2.1.1&#xFF09; &#x5C31;&#x662F;&#x918B;&#x9178;&#x8F6C;&#x6362;&#x4E3A; acetyl-CoA&#xFF0C;&#x57FA;&#x672C;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4EA4;&#x754C;&#x5904;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x548C;&#x5206;&#x89E3;&#x4EE3;&#x8C22;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x9176;&#x3002;&#x5047;&#x5B9A;&#x77ED;&#x671F;&#x548C;&#x4E2D;&#x671F;&#x94FE;&#x9170; CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x5F62;&#x6210;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x8FDB;&#x5316;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5176;&#x4ED6;&#x9170; CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x3002;&#x5185;&#x6B64;&#x8FDB;&#x5316;&#xFF0C;&#x53E4;&#x83CC;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E00;&#x5143;&#xFF0C;&#x5206;&#x4E3A;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x53E4;&#x83CC;&#x5E8F;&#x5217;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x53E4;&#x83CC;&#x9176;&#xFF0C;&#x4ECE; Methanothermobacter thermautotrophicus &#xFF08;&#x6307;&#x5B9A;&#x4E3A; MT ACS1&#xFF09; ACS &#x548C; ACS Archaeoglobus fulgidus &#xFF08;&#x6307;&#x5B9A;&#x4E3A; AF-ACS2&#xFF09;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9176;&#x6709;&#x975E;&#x5E38;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;MT ACS1 &#x5DF2;&#x8FD1; 11-fold &#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x548C;&#x4E0E;&#x4E59;&#x9178;&#x4E19;&#x9178;&#xFF0C;&#x7531;&#x591A;&#x6570;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x5171;&#x4EAB;&#x5C5E;&#x6027;&#x6BD4; 14-fold &#x66F4;&#x9AD8;&#x50AC;&#x5316;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;AF ACS2 &#x6709;&#x53EA; 2.3-fold &#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x6548;&#x7387;&#x6BD4;&#x4E59;&#x9178;&#x4E19;&#x9178;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x6709;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7684;&#x662F;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x76F8;&#x540C;&#x7684; MT ACS1 &#x918B;&#x9178;&#x548C;&#x8FD1; 10 &#x500D;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x4E3A;&#x4E19;&#x9178;&#x7684; MT ACS1 &#x4EB2;&#x548C;&#x7684;&#x4E19;&#x9178;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;MT ACS1 &#x4EC5;&#x9650;&#x4E8E;&#x918B;&#x9178;&#x548C;&#x4E19;&#x9178;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9170;&#x57FA;&#x5E95;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x800C; AF ACS2 &#x8FD8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5229;&#x7528;&#x518D;&#x76F4;&#x548C;&#x5206;&#x652F;&#x94FE;&#x9170;&#x57FA;&#x5E95;&#x3002;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x5206;&#x6790;&#x3001; &#x5E8F;&#x5217;&#x6BD4;&#x5BF9;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x5EFA;&#x6A21;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x57FA;&#x677F;&#x504F;&#x597D;&#x548C;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x57FA;&#x677F;&#x8303;&#x56F4;&#x7684; AF-ACS2 &#x4E0E; MT ACS1 &#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

AMP &#x6210;&#x5F62; acetyl-CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x5728;&#x53E4;&#x751F;&#x83CC;&#x5728;&#x5E95;&#x7269;&#x5229;&#x7528;&#x663E;&#x793A;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x3002;

Adenosine monophosphate (AMP)-forming acetyl-CoA synthetase (ACS; acetate:CoA ligase (AMP-forming), EC 6.2.1.1) is a key enzyme for conversion of acetate to acetyl-CoA, an essential intermediate at the junction of anabolic and catabolic pathways. Phylogenetic analysis of putative short and medium chain acyl-CoA synthetase sequences indicates that the ACSs form a distinct clade from other acyl-CoA synthetases. Within this clade, the archaeal ACSs are not monophyletic and fall into three groups composed of both bacterial and archaeal sequences. Kinetic analysis of two archaeal enzymes, an ACS from Methanothermobacter thermautotrophicus (designated as MT-ACS1) and an ACS from Archaeoglobus fulgidus (designated as AF-ACS2), revealed that these enzymes have very different properties. MT-ACS1 has nearly 11-fold higher affinity and 14-fold higher catalytic efficiency with acetate than with propionate, a property shared by most ACSs. However, AF-ACS2 has only 2.3-fold higher affinity and catalytic efficiency with acetate than with propionate. This enzyme has an affinity for propionate that is almost identical to that of MT-ACS1 for acetate and nearly tenfold higher than the affinity of MT-ACS1 for propionate. Furthermore, MT-ACS1 is limited to acetate and propionate as acyl substrates, whereas AF-ACS2 can also utilize longer straight and branched chain acyl substrates. Phylogenetic analysis, sequence alignment and structural modeling suggest a molecular basis for the altered substrate preference and expanded substrate range of AF-ACS2 versus MT-ACS1.

AMP-forming acetyl-CoA synthetases in Archaea show unexpected diversity in substrate utilization.

L&#x26;#39;ad&#xE9;nosine monophosphate (AMP) formant l&#x26;#39;ac&#xE9;tyl-CoA synth&#xE9;tase (ACS, l&#x26;#39;ac&#xE9;tate de: CoA ligase (AMP-formation), CE 6.2.1.1) est une enzyme cl&#xE9; pour la conversion de l&#x26;#39;ac&#xE9;tate en ac&#xE9;tyl-CoA, un interm&#xE9;diaire essentiel &#xE0; la jonction des st&#xE9;ro&#xEF;des anabolisants et les voies cataboliques. L&#x26;#39;analyse phylog&#xE9;n&#xE9;tique des s&#xE9;quences putatives &#xE0; cha&#xEE;ne courte et moyenne acyl-CoA synth&#xE9;tase indique que la forme SCA un clade distinct des autres acyl-CoA synth&#xE9;tases. Dans ce clade, le SCA Archaea ne sont pas monophyl&#xE9;tiques et se r&#xE9;partissent en trois groupes compos&#xE9;s de deux s&#xE9;quences bact&#xE9;riennes et archaea. L&#x26;#39;analyse cin&#xE9;tique de deux enzymes d&#x26;#39;arch&#xE9;es, une ACS &#xE0; partir Methanothermobacter thermautotrophicus (d&#xE9;sign&#xE9; en tant que MT-ACS1) et un ACS de Archaeoglobus fulgidus (d&#xE9;sign&#xE9; comme AF-ACS2), ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que ces enzymes ont des propri&#xE9;t&#xE9;s tr&#xE8;s diff&#xE9;rentes. MT-ACS1 a pr&#xE8;s de 11 fois plus grande affinit&#xE9; et 14 fois plus &#xE9;lev&#xE9; d&#x26;#39;efficacit&#xE9; catalytique avec de l&#x26;#39;ac&#xE9;tate qu&#x26;#39;avec le propionate, une propri&#xE9;t&#xE9; partag&#xE9;e par la plupart SCA. Toutefois, AF-ACS2 a une affinit&#xE9; seulement 2,3 fois plus &#xE9;lev&#xE9;e et l&#x26;#39;efficacit&#xE9; catalytique avec de l&#x26;#39;ac&#xE9;tate qu&#x26;#39;avec le propionate. Cette enzyme pr&#xE9;sente une affinit&#xE9; pour le propionate qui est presque identique &#xE0; celle du MT-ACS1 de l&#x26;#39;ac&#xE9;tate de et pr&#xE8;s dix fois sup&#xE9;rieure &#xE0; l&#x26;#39;affinit&#xE9; de MT-ACS1 pour propionate. En outre, MT-ACS1 est limit&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;ac&#xE9;tate et le propionate de substrats acyles, tandis que AF-ACS2 pouvez &#xE9;galement utiliser plus droites et ramifi&#xE9;es substrats acyle &#xE0; cha&#xEE;ne. L&#x26;#39;analyse phylog&#xE9;n&#xE9;tique, alignement de s&#xE9;quences et la mod&#xE9;lisation structurelle sugg&#xE8;rent une base mol&#xE9;culaire pour la pr&#xE9;f&#xE9;rence de substrat modifi&#xE9;e et &#xE9;largie gamme de substrats de l&#x26;#39;AF-ACS2 contre MT-ACS1.

AMP-formation d&#x26;#39;ac&#xE9;tyl-CoA synth&#xE9;tases chez les arch&#xE9;es Montrer la diversit&#xE9; inattendue dans l&#x26;#39;utilisation du substrat

Adenosinmonophosphat (AMP)-Bildung von Acetyl-CoA-Synthetase (ACS; Acetat: CoA-Ligase (AMP-bildenden), EG 6.2.1.1) ist ein Schl&uuml;sselenzym f&uuml;r die Konvertierung von Acetat zu Acetyl-CoA, ein wesentlicher Zwischenprodukt an der Kreuzung der anabolen und katabolischen Wege. Phylogenetische Analyse der vermeintliche kurz- und mittelfristig Kette-Acyl-CoA-Synthetase-Sequenzen zeigt, dass die ACSs eine unterschiedliche Klade aus anderen-Acyl-CoA-Synthetases bilden. Innerhalb dieser Klade die reitenden ACSs sind nicht monophyletisch und lassen sich in drei Gruppen von Bakterien und Archaea Sequenzen komponiert. Kinetische Analyse der beiden reitenden Enzyme, ein ACS aus Methanothermobacter Thermautotrophicus (bezeichnet als MT-ACS1) und ein ACS aus Archaeoglobus Fulgidus (bezeichnet als AF-ACS2), ergab, dass diese Enzyme sehr unterschiedliche Eigenschaften haben. MT-ACS1 hat fast 11-fold h&ouml;here Affinit&auml;t und 14-fold h&ouml;here katalytische Effizienz mit Acetat als mit propionat, eine Eigenschaft, die von den meisten ACSs geteilt. AF-ACS2 hat jedoch nur 2.3-fold h&ouml;here Affinit&auml;t und katalytische Effizienz mit Acetat als mit propionat. Dieses Enzym hat eine Affinit&auml;t f&uuml;r propionat, die fast identisch mit der MT-ACS1 f&uuml;r Acetat und fast um das Zehnfache h&ouml;her als die Affinit&auml;t des MT-ACS1 f&uuml;r propionat ist. Dar&uuml;ber hinaus ist MT-ACS1 als Acil Substrate, Acetat und propionat beschr&auml;nkt, w&auml;hrend AF-ACS2 auch mehr geraden und verzweigten Kette Acil Substrate nutzen kann. Phylogenetische Analyse, Sequenzalignment und strukturelle Modellierung vorschlagen molekulare Grundlage f&uuml;r die ge&auml;nderte Substrat Pr&auml;ferenz und erweiterten Substrat Reichweite des AF-ACS2 gegen MT-ACS1

AMP-Bildung von Acetyl-CoA-Synthetases in Archaeen zeigen unerwartete Vielfalt im Substrat-Auslastung.

Adenosina monofosfato (AMP)-formando sintetasi di acetil-CoA (ACS; ligasi acetato: CoA (AMP-formante), CE 6.2.1.1) &egrave; un enzima chiave per la conversione di acetato in acetil-CoA, un intermedio essenziale all&#39;incrocio delle vie anabolici e catabolici. Analisi filogenetica delle sequenze di putativo catena corta e media acil-CoA sintetasi indicano che il ACSs formano un clade distinto da altri sintetasi di acil-CoA. All&#39;interno di questo clade, il archaeal ACSs non sono monofiletici e rientrano in tre gruppi composti da sequenze batteriche e di archaeal. Analisi cinetica di due enzimi di archaeal, un ACS da Methanothermobacter thermautotrophicus (indicato come MT-ACS1) e un ACS da Archaeoglobus fulgidus (indicato come AF-ACS2), ha rivelato che questi enzimi hanno propriet&agrave; molto diverse. MT-ACS1 ha quasi 11-fold maggiore affinit&agrave; e 14-fold maggiore efficienza catalitica con acetato rispetto con propionato, una propriet&agrave; condivisa da pi&ugrave; ACSs. Tuttavia, AF-ACS2 ha solo 2.3-fold maggiore affinit&agrave; ed efficienza catalitica con acetato rispetto con propionato. Questo enzima ha un&#39;affinit&agrave; per il propionato che &egrave; quasi identico a quello di MT-ACS1 per acetato e quasi dieci volte superiore rispetto l&#39;affinit&agrave; del MT-ACS1 propionato. Inoltre, MT-ACS1 &egrave; limitato a acetato e propionato come substrati acil, considerando che AF-ACS2 pu&ograve; anche utilizzare substrati acil catena pi&ugrave; dritto e ramificato. Analisi filogenetica, allineamento di sequenza e modellazione strutturale suggeriscono una base molecolare per la preferenza di substrato alterato e substrato estesa gamma di AF-ACS2 versus ACS1 MT.

Sintetasi di acetil-CoA formando AMP in Archaea Visualizza inaspettata diversit&agrave; nell&#39;utilizzazione del substrato.

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E00;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;AMP&#xFF09;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;ACS;&#xFF1A;&#x9162;&#x9178;CoA&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;AMP&#x5F62;&#x6210;&#xFF09;&#x3001;EC 6.2.1.1&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x5316;&#x306E;&#x63A5;&#x5408;&#x90E8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;-CoA&#x306B;&#x9162;&#x9178;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9375;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7570;&#x5316;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3002;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x77ED;&#x4E2D;&#x9396;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ACS&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30AF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30AF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x5185;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;ACS&#x306F;&#x5358;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x3068;&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;3&#x3064;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x5206;&#x985E;&#x3002; 2&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x83CC;thermautotrophicus&#xFF08;MT-ACS1&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x83CC;Archaeoglobus fulgidus&#xFF08;AF-ACS2&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x3001;ACS&#x304B;&#x3089;ACS&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x89E3;&#x6790;&#x3002; MT-ACS1&#x306F;&#x3001;&#x7D04;11&#x500D;&#x9AD8;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9178;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9162;&#x9178;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x3067;14&#x500D;&#x9AD8;&#x3044;&#x89E6;&#x5A92;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;ACS&#x3067;&#x5171;&#x6709;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;AF-ACS2&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9178;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9162;&#x9178;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;2.3&#x500D;&#x9AD8;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x9162;&#x9178;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9178;&#x7528;&#x306E;MT-ACS1&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x7D04;10&#x500D;&#x9AD8;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x306B;MT-ACS1&#x3068;&#x307B;&#x307C;&#x540C;&#x3058;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9178;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; AF-ACS2&#x3082;&#x9577;&#x3044;&#x76F4;&#x9396;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x679D;&#x9396;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x6750;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;MT-ACS1&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x9162;&#x9178;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9178;&#x306B;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7CFB;&#x7D71;&#x89E3;&#x6790;&#x3001;&#x914D;&#x5217;&#x30A2;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x597D;&#x307F;&#x3068;AF-ACS2&#x5BFE;MT-ACS1&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;AMP&#x5F62;&#x6210;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x8CEA;&#x5229;&#x7528;&#x306B;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;

&#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; monophosphate (AMP)-&#xCD08; &#xC0B0; &#xD2F8;, &#xADFC;&#xC721; &#xBC0F; catabolic &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xAD50;&#xCC28;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC911;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xD2F8; &#xD569;&#xC131; (ACS, &#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8;: CoA &#xB9AC;&#xAC00; (&#xC570;&#xD504; &#xD615;&#xC131;) EC 6.2.1.1) &#xD615;&#xC131;. Phylogenetic &#xBD84;&#xC11D; &#xC0C1; &#xC9E7;&#xACE0; &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778; acyl CoA &#xD569;&#xC131; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; ACSs &#xD615;&#xC131; &#xB2E4;&#xB978; acyl CoA synthetases&#xC5D0;&#xC11C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; clade &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; clade&#xB294; archaeal ACSs monophyletic&#xB294; &#xB0B4; &#xC138;&#xADE0; &#xBC0F; archaeal &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC138; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; archaeal &#xD6A8;&#xC18C;, Methanothermobacter thermautotrophicus (MT ACS1 &#xC9C0;&#xC815;)&#xC5D0;&#xC11C; ACS&#xC640; ACS Archaeoglobus fulgidus (AF-acs2&#xB85C; &#xC9C0;&#xC815;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC1D;&#xD600;&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC18D;&#xC131;. MT-acs1&#xB294; &#xAC70;&#xC758; 11-fold &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; propionate, &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; ACSs &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xC720; &#xC18D;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xCD08; &#xC0B0; 14-fold &#xB192;&#xC740; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD6A8;&#xC728;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, AF acs2&#xB294;&#xB9CC; 2.3-fold &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xD504;&#xB85C; &#xD53C; &#xC628; &#xC0B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xCD08; &#xC0B0; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD6A8;&#xC728;. &#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8; &#xC0B0; acs1&#xC758; &#xAC70;&#xC758; &#xB3D9;&#xC77C; &#xD558; &#xACE0; propionate &#xC0B0; acs1&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xAC70;&#xC758; &#xC5F4; &#xBC30; &#xB192;&#xC740; &#xD504;&#xB85C; &#xD53C; &#xC628; &#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;. &#xB610;&#xD55C;, MT acs1&#xB294; &#xCD08; &#xC0B0; &#xBC0F; &#xD504;&#xB85C; &#xD53C; &#xC628; &#xC0B0; acyl &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC18;&#xBA74; AF ACS2 &#xC218; &#xB610;&#xD55C; &#xB354; &#xC774;&#xC0C1; &#xC9C1;&#xC120; &#xBC0F; &#xBD84;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC778; acyl &#xAE30;&#xD310; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Phylogenetic &#xBD84;&#xC11D;, &#xC5F4; &#xC815;&#xB82C; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xAE30;&#xD310; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC124;&#xC815; &#xBC0F; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; &#xAE30;&#xD310; &#xBC94;&#xC704;&#xC758; AF-ACS2 &#xB9C8;&#xC6B4;&#xD2B8; ACS1 &#xB300; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACE0;&#xC138;&#xADE0;&#xC5D0; &#xD2F8; synthetases &#xC570;&#xD504; &#xD615;&#xC131; &#xAE30;&#xD310; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xB960;&#xC5D0; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Monofosfato de adenosina (AMP)-formando acetil-CoA sintetasa (ACS; acetato: CoA ligasa (AMP formador), CE 6.2.1.1) es una enzima clave para la conversi&#xF3;n de acetato de acetil-CoA, un intermedio esencial en la uni&#xF3;n de anab&#xF3;lico y de las v&#xED;as catab&#xF3;licas. El an&#xE1;lisis filogen&#xE9;tico de las secuencias putativas de cadena corta y mediana acil-CoA sintetasa indica que la forma de SCA un clado de otros acil-CoA sintetasas. Dentro de este clado, la SCA archaeal no son monofil&#xE9;tico y se dividen en tres grupos compuestos por dos secuencias de bacterias y arqueas. El an&#xE1;lisis cin&#xE9;tico de dos enzimas, una Arqueales ACS de Methanothermobacter thermautotrophicus (designado como MT-ACS1) y un AEC del Archaeoglobus fulgidus (designado como AF-ACS2), revel&#xF3; que estas enzimas tienen propiedades muy diferentes. MT-ACS1 tiene casi 11 veces mayor afinidad y 14 veces mayor eficiencia catal&#xED;tica con acetato de que con propionato, una propiedad compartida por la mayor&#xED;a de ACS. Sin embargo, la FA-ACS2 tiene afinidad s&#xF3;lo 2.3 veces m&#xE1;s alta y la eficiencia catal&#xED;tica con acetato de que con propionato. Esta enzima tiene una afinidad por el propionato de que es casi id&#xE9;ntica a la de MT-ACS1 para el acetato y casi diez veces mayor que la afinidad de MT-ACS1 para propionato. Adem&#xE1;s, MT-ACS1 se limita a acetato y propionato como sustratos de acilo, mientras que AF-ACS2 tambi&#xE9;n pueden utilizar sustratos de cadena lineal y ramificada ya acilo. El an&#xE1;lisis filogen&#xE9;tico, la alineaci&#xF3;n de secuencias y modelado estructural sugieren una base molecular para la preferencia de sustrato alterado y la gama m&#xE1;s amplia de sustrato de la FA-ACS2 frente MT ACS1.

Formaci&#xF3;n de AMP-Acetil-CoA sintetasas en Archaea mostrar la diversidad inesperada en la utilizaci&#xF3;n de sustratos

Trypanosoma brucei harbors two hexokinases (TbHK1 and TbHK2) that are 98% identical at the amino acid level. We previously found that recombinant TbHK1 (rTbHK1) has hexokinase activity, while rTbHK2 has not, a finding attributed to differences in the C-termini of the proteins. Sequence analysis suggests that the C-termini of TbHKs are part of a newly identified conserved motif found in other eukaryotic hexokinases. Here, we have explored the role of tail residues in the differences in catalytic activity between TbHK1 and TbHK2. Our studies reveal that tail residues D454, F462, M466, and N469 are essential for HK activity while both I458 and V468 are required for catalysis and substrate specificity. To activate rTbHK2, all of the residues important for activity in rTbHK1 (D454, V458, F462, M466, V468, and N469) were required. These results indicate that the overall structure of the C-terminal tail influences the HK activity of rTbHK1.

Residues in an ATP binding domain influence sugar binding in a trypanosome hexokinase.

&#x79CD;&#x9525;&#x4F53;&#x6E2F;&#x53E3;&#x90FD;&#x5728;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6C34;&#x5E73;&#x76F8;&#x540C;&#x7684; 98%&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A; hexokinases &#xFF08;TbHK1 &#x548C; TbHK2&#xFF09;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8BE5;&#x91CD;&#x7EC4; TbHK1 (rTbHK1) &#x6709;&#x5DF1;&#x7CD6;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x800C; rTbHK2 &#x4E0D;&#xFF0C;&#x6709;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; C &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; C-&#x603B;&#x7AD9;&#x7684; TbHKs &#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x771F;&#x6838; hexokinases &#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x65B0;&#x53D1;&#x73B0;&#x5B88;&#x6052;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709; TbHK1 &#x548C; TbHK2 &#x4E4B;&#x95F4;&#x63A2;&#x8BA8;&#x5C3E;&#x4E2D;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#x5C3E;&#x5DF4;&#x6B8B;&#x7559; D454&#x3001; F462&#x3001; M466&#x3001; N469 &#x6E2F;&#x5143;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x800C; I458 &#x548C; V468 &#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x548C;&#x5E95;&#x7269;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x8981;&#x6FC0;&#x6D3B; rTbHK2&#xFF0C;&#x5176;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5728; rTbHK1 (D454&#x3001; V458&#x3001; F462&#x3001; M466&#x3001; V468 &#x548C; N469) &#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; C-&#x672B;&#x7AEF;&#x7684;&#x603B;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684; rTbHK1 &#x6E2F;&#x5143;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x7ED3;&#x5408;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x5F71;&#x54CD;&#x7CD6;&#x9525;&#x5DF1;&#x7CD6;&#x6FC0;&#x9176;&#x4E2D;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;

Trypanosoma brucei h&#xE9;berge deux hexokinases (TbHK1 et TbHK2) qui sont 98% identique au niveau des acides amin&#xE9;s. Nous avons d&#xE9;j&#xE0; constat&#xE9; que recombinant TbHK1 (rTbHK1) a une activit&#xE9; hexokinase, tandis que rTbHK2 n&#x26;#39;a pas, un constat attribu&#xE9; &#xE0; des diff&#xE9;rences dans les C-terminales des prot&#xE9;ines. L&#x26;#39;analyse des s&#xE9;quences sugg&#xE8;re que les C-terminales de TbHKs font partie d&#x26;#39;un motif nouvellement identifi&#xE9;e conserv&#xE9;e dans d&#x26;#39;autres hexokinases eucaryotes. Ici, nous avons explor&#xE9; le r&#xF4;le des r&#xE9;sidus de la queue dans les diff&#xE9;rences dans l&#x26;#39;activit&#xE9; catalytique entre TbHK1 et TbHK2. Nos &#xE9;tudes r&#xE9;v&#xE8;lent que les r&#xE9;sidus de la queue, les D454 F462, les M466 et N469 sont essentiels pour l&#x26;#39;activit&#xE9; HK alors que les deux I458 et V468 sont n&#xE9;cessaires pour la catalyse et une sp&#xE9;cificit&#xE9; de substrat. Pour activer rTbHK2, tous les r&#xE9;sidus importants pour l&#x26;#39;activit&#xE9; dans rTbHK1 (D454, V458, F462, M466, V468, et N469) ont &#xE9;t&#xE9; n&#xE9;cessaires. Ces r&#xE9;sultats indiquent que la structure globale de la queue C-terminale influence l&#x26;#39;activit&#xE9; HK de rTbHK1.

R&#xE9;sidus dans un ATP Binding Domain sucre reliure Influence dans un Hexokinase trypanosomes

Trypanosoma Brucei birgt zwei Hexokinases (TbHK1 und TbHK2), die 98 % identisch auf die Aminos&auml;ure-Niveau sind. Zuvor fanden wir, dass rekombinante TbHK1 (rTbHK1) hat Hexokinase Aktivit&auml;t, w&auml;hrend rTbHK2 nicht, eine Erkenntnis, die Unterschiede in die C-Termini der Proteine zugeschrieben hat. Sequenzanalyse legt nahe, dass die C-Termini der TbHKs eine neu identifizierte konservierten Motiv gefunden in anderen eukaryotischen Hexokinases geh&ouml;ren. Hier haben wir die Rolle der Schwanz R&uuml;ckst&auml;nde in den Unterschieden in katalytische Aktivit&auml;t zwischen TbHK1 und TbHK2 untersucht. Unsere Untersuchungen zeigen, dass Schwanz R&uuml;ckst&auml;nde D454, F462, M466 und N469 notwendig f&uuml;r HK-Aktivit&auml;t, sind w&auml;hrend I458 und V468 f&uuml;r Katalyse und Substrat Besonderheiten erforderlich sind. RTbHK2, alle R&uuml;ckst&auml;nde zu aktivieren wichtig f&uuml;r die Aktivit&auml;t im rTbHK1 (D454, V458 F462, M466, V468 und N469) waren erforderlich. Diese Ergebnisse zeigen, dass die allgemeine Struktur der C-terminalen Schwanz die HK-Aktivit&auml;t des rTbHK1 beeinflusst.

R&uuml;ckst&auml;nde in eine ATP-bindende Dom&auml;ne beeinflussen Zucker Bindung in einem gei&szlig;eltragenden Hexokinase.

Trypanosoma brucei porti due esochinasi (TbHK1 e TbHK2) che sono il 98% identico a livello dell&#39;amminoacido. In precedenza abbiamo trovato quello ricombinante TbHK1 (rTbHK1) ha attivit&agrave; esochinasi, mentre rTbHK2 non, ha una constatazione attribuita alle differenze in C-termini delle proteine. Analisi di sequenza suggeriscono che la C-termini di TbHKs sono parte di un motivo conservato recentemente identificato trovato in altri eucarioti esochinasi. Qui, abbiamo esplorato il ruolo dei residui di coda nelle differenze nell&#39;attivit&agrave; catalitica tra TbHK1 e TbHK2. I nostri studi rivelano che residui di coda D454, F462, M466 e N469 sono essenziali per l&#39;attivit&agrave; HK mentre entrambi I458 e V468 sono necessari per la catalisi e substrato specificit&agrave;. Per attivare la rTbHK2, tutti i residui importanti per l&#39;attivit&agrave; in rTbHK1 (D454, V458, F462, M466, V468 e N469) erano necessari. Questi risultati indicano che la struttura complessiva della coda C-terminale influenza l&#39;attivit&agrave; HK di rTbHK1.

Residui in un dominio di legame ATP influenzano associazione dello zucchero in un&#39;esochinasi trypanosome.

&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;98&#xFF05;&#x540C;&#x4E00;&#x3067;&#x3042;&#x308B;2 hexokinases&#xFF08;TbHK1&#x3068;TbHK2&#xFF09;&#x3092;&#x62B1;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;rTbHK2&#x306F;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;TbHK1&#xFF08;rTbHK1&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30D8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x3001;&#x767A;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x914D;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;TbHKs&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;hexokinases&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;TbHK1&#x3068;TbHK2&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x5C3E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6A21;&#x7D22;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;I458&#x3068;V468&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3068;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9593;&#x3001;&#x5C3E;&#x6B8B;&#x57FA;D454&#x3001;F462&#x3001;M466&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;N469&#x306F;HK&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; rTbHK2&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;rTbHK1&#xFF08;D454&#x3001;V458&#x3001;F462&#x3001;M466&#x3001;V468&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;N469&#xFF09;&#x3067;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;C&#x672B;&#x7AEF;&#x5C3E;&#x90E8;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;rTbHK1&#x306E;HK&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x30D8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;ATP&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x7CD6;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;

Trypanosoma brucei &#xD56D;&#xB9CC; 98% &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; hexokinases (TbHK1 &#xBC0F; TbHK2). &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xADF8; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; TbHK1 (rTbHK1)&#xB294; hexokinase &#xD65C;&#xB3D9;, Rtbhk2&#xB294;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; C &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xCC3E;&#xB294; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC81C;&#xC548; Tbhks&#xC758; C &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xB2E4;&#xB978; &#xC9C4; &#xD575; hexokinases&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD655;&#xC778;&#xB41C; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; Tbhk1&#xC640; TbHK2 &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xC5D0; &#xAF2C;&#xB9AC; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC0B4;&#xD3B4; &#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xAF2C;&#xB9AC; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; D454, F462, M466, &#xBC0F; N469 i458&#xC640; V468 &#xCD09;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xB294; &#xD64D;&#xCF69; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; Rtbhk2&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; Rtbhk1&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; (D454, V458, F462, M466, V468, &#xBC0F; N469) &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC758; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870; Rtbhk1&#xC758; &#xD64D;&#xCF69; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC124;&#xD0D5; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; trypanosome hexokinase&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;.

Trypanosoma brucei alberga dos hexoquinasas (TbHK1 y TbHK2) que son 98% id&#xE9;nticos a nivel de amino&#xE1;cidos. Hemos determinado anteriormente que TbHK1 recombinante (rTbHK1) tiene una actividad hexoquinasa, mientras que rTbHK2 no tiene, la constataci&#xF3;n de atribuirse a diferencias en los C-terminal de las prote&#xED;nas. An&#xE1;lisis de la secuencia sugiere que los C-terminal de TbHKs son parte de un motivo recientemente identificado conservada que se encuentra en otros hexoquinasas eucariotas. En este sentido, han explorado el papel de los residuos de cola en las diferencias en la actividad catal&#xED;tica entre TbHK1 y TbHK2. Nuestros estudios revelan que los residuos de cola, la D454 F462 y M466, y N469 son esenciales para la actividad de Hong Kong, mientras tanto I458 y V468 son necesarios para la cat&#xE1;lisis y la especificidad de sustrato. Para activar rTbHK2, todos los residuos importantes para la actividad en rTbHK1 (D454, V458, F462, M466, V468, y N469) se requiere. Estos resultados indican que la estructura global de la cola C-terminal influye en la actividad de HK rTbHK1.

Los residuos en una uni&#xF3;n de ATP dominio de uni&#xF3;n del az&#xFA;car influencia en una hexoquinasa Tripanosoma

&#x9170; AMP &#x6210;&#x5F62;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684; adenylating &#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x4E24;&#x6B65;&#x53CD;&#x5E94;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7FA7;&#x9178;&#x76D0;&#x4E0E;&#x6765;&#x81EA; ATP &#x6C34;&#x89E3;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x80FD;&#x91CF;&#x3002;X &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x5DF2;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x6210;&#x5458;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0E;&#x751F;&#x5316;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6DF1;&#x5165;&#x63A2;&#x8BA8;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9176;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x9176;&#x4F7F;&#x7528;&#x57DF;&#x65CB;&#x8F6C; 140 &#x5EA6;&#x6765;&#x91CD;&#x65B0;&#x914D;&#x7F6E;&#x5355;&#x4E2A;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x6765;&#x50AC;&#x5316;&#x4E24;&#x90E8;&#x5206;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x5EA7;&#x7684;&#x7403;&#x83CC; acetivorans &#x65B0;&#x4E2D;&#x94FE;&#x8102;&#x9170; CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x4E09;&#x79CD;&#x886C;&#x5E95;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x8BB8;&#x591A;&#x5B88;&#x6052;&#x6B8B;&#x7559;&#x5728; AMP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x672C;&#x3002;CoA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x88AB;&#x6BD4;&#x4F5C; acetyl-CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x548C; 4 &#x53E3;&#x888B;-chlorobenzoate:CoA &#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x3002;&#x6700;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x65B0;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x9170;&#x57FA;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x9170;&#x57FA;&#x82B3;&#x57FA; CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x8FDB;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;M.acetivorans &#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7ED3;&#x6784;&#x4ECE;&#x9170; CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x7684;&#x9170;&#x57FA;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x6BD4;&#x8F83;&#x6807;&#x8BC6;&#x7528;&#x4E8E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x94FE;&#x7FA7;&#x9178;&#x7684;&#x6D45;&#x5C42;&#x53E3;&#x888B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x89C1;&#x89E3;&#x5F3A;&#x8C03;&#x9AD8;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x9170;&#x57FA;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x9886;&#x57DF;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5927;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x4E2D;&#x3002;

&#x4ECE;&#x7403;&#x83CC; acetivorans &#x9170; CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x7684; 2.1 A &#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x5C0F;&#x5206;&#x652F;&#x9170;&#x57FA;&#x5E95;&#x5907;&#x7528;&#x9170;&#x57FA;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x3002;

The acyl-AMP forming family of adenylating enzymes catalyze two-step reactions to activate a carboxylate with the chemical energy derived from ATP hydrolysis. X-ray crystal structures have been determined for multiple members of this family and, together with biochemical studies, provide insights into the active site and catalytic mechanisms used by these enzymes. These studies have shown that the enzymes use a domain rotation of 140 degrees to reconfigure a single active site to catalyze the two partial reactions. We present here the crystal structure of a new medium chain acyl-CoA synthetase from Methanosarcina acetivorans. The binding pocket for the three substrates is analyzed, with many conserved residues present in the AMP binding pocket. The CoA binding pocket is compared to the pockets of both acetyl-CoA synthetase and 4-chlorobenzoate:CoA ligase. Most interestingly, the acyl-binding pocket of the new structure is compared with other acyl- and aryl-CoA synthetases. A comparison of the acyl-binding pocket of the acyl-CoA synthetase from M. acetivorans with other structures identifies a shallow pocket that is used to bind the medium chain carboxylates. These insights emphasize the high sequence and structural diversity among this family in the area of the acyl-binding pocket.

The 2.1 A crystal structure of an acyl-CoA synthetase from Methanosarcina acetivorans reveals an alternate acyl-binding pocket for small branched acyl substrates.

La famille acyl-AMP de formation d&#x26;#39;enzymes catalysent deux adenylating &#xE9;tape r&#xE9;actions pour activer un carboxylate avec l&#x26;#39;&#xE9;nergie chimique provenant de l&#x26;#39;hydrolyse d&#x26;#39;ATP. X-ray structures cristallines ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;es pour plusieurs membres de cette famille et, de concert avec les &#xE9;tudes biochimiques, donnent un aper&#xE7;u dans le site actif et les m&#xE9;canismes catalytiques utilis&#xE9;s par ces enzymes. Ces &#xE9;tudes ont montr&#xE9; que les enzymes utiliser une rotation de 140 degr&#xE9;s de domaine pour reconfigurer un seul site actif pour catalyser les deux r&#xE9;actions partielles. Nous pr&#xE9;sentons ici la structure cristalline d&#x26;#39;une cha&#xEE;ne de moyennes nouvelle acyl-CoA synth&#xE9;tase de acetivorans Methanosarcina. La poche de liaison pour les trois substrats est analys&#xE9;, avec de nombreux r&#xE9;sidus conserv&#xE9;s pr&#xE9;sents dans la poche liaison de l&#x26;#39;AMP. Le CoA poche de liaison est compar&#xE9;e &#xE0; la fois les poches de l&#x26;#39;ac&#xE9;tyl-CoA synth&#xE9;tase et le 4-chlorobenzoate de: CoA ligase. Le plus int&#xE9;ressant, la poche acyl-contraignant de la nouvelle structure est compar&#xE9;e &#xE0; synth&#xE9;tases acyl-CoA et aryl-autres. Une comparaison de la poche acyl-obligatoire de la synth&#xE9;tase acyl-CoA &#xE0; partir acetivorans M. avec d&#x26;#39;autres structures identifie une poche peu profonde qui est utilis&#xE9;e pour lier les carboxylates &#xE0; cha&#xEE;ne moyenne. Ces id&#xE9;es l&#x26;#39;accent sur la s&#xE9;quence de haute et de la diversit&#xE9; structurelle au sein de cette famille dans la r&#xE9;gion de la poche acyl-contraignant.

Le 2.1 Une structure cristalline d&#x26;#39;un acyl-CoA synth&#xE9;tase de Methanosarcina Acetivorans r&#xE9;v&#xE8;le un suppl&#xE9;ant Acyl-contraignant pour les petites Pocket ramifi&#xE9;s substrats acyl

Die Acyl-AMP bilden Familie Adenylating Enzyme katalysieren zweistufigen Reaktionen um ein carboxylat mit der chemischen Energie abgeleitet von ATP-Hydrolyse zu aktivieren. X-ray Kristallstrukturen wurden f&uuml;r mehrere Mitglieder dieser Familie ermittelt und zusammen mit biochemischen Studien, einen Einblick in die aktive Website und katalytische Mechanismen durch diese Enzyme. Diese Studien haben gezeigt, dass die Enzyme eine Dom&auml;ne Drehung von 140 Grad verwenden, um einen einzelnen Standort aktiv um die zwei partiellen Reaktionen katalysieren neu konfigurieren. Wir pr&auml;sentieren hier die Kristallstruktur von einer neuen Mittelketten-Acyl-CoA-Synthase aus Methanosarcina Acetivorans. Die Bindung-Tasche f&uuml;r die drei Substrate wird analysiert, mit vielen konservierte R&uuml;ckst&auml;nde in der AMP Bindung Tasche vorhanden. Die CoA-Bindung-Tasche ist im Vergleich zu den Taschen von Acetyl-CoA-Synthetase und 4-Chlorobenzoate:CoA-Ligase. Sehr interessant ist, wird die Tasche Acyl-Bindung der neuen Struktur mit anderen und Aryl-Coenzym a-Synthetases verglichen. Ein Vergleich der Acyl-Bindung Tasche von der Acyl-CoA-Synthase aus M. Acetivorans mit anderen Strukturen bezeichnet eine flache Tasche, mit dem die Mittelketten-Carboxylates binden. Diese Einsichten betonen die hohe Sequenz und Strukturvielfalt unter dieser Familie im Bereich der Acyl-Bindung Tasche.

Die 2,1 A Kristallstruktur von ein-Acyl-CoA-Synthase aus Methanosarcina Acetivorans zeigt eine Alternative Acyl-Bindung-Tasche f&uuml;r kleine verzweigte Acil Substrate.

La famiglia formando acil-AMP di enzimi adenylating catalizza reazioni in due fasi per attivare un carbossilato con l&#39;energia chimica derivata dall&#39;idrolisi dell&#39;ATP. Strutture di cristallo dei raggi x sono stati determinati per pi&ugrave; membri di questa famiglia e, insieme a studi di biochimica, forniscono intuizioni il sito attivo e meccanismi catalitici utilizzati da questi enzimi. Questi studi hanno dimostrato che gli enzimi utilizzano una rotazione di dominio di 140 gradi per riconfigurare un singolo sito attivo per catalizzare le due reazioni parziali. Vi presentiamo qui la struttura cristallina di un nuovo sintetasi di acil-CoA catena media da Methanosarcina acetivorans. Tasca vincolante per i tre substrati &egrave; analizzata, con molti residui conservati presenti nella tasca associazione AMP. La tasca di legame CoA viene confrontata con le tasche di sintetasi di acetil-CoA e di 4-chlorobenzoate:CoA ligasi. Pi&ugrave; interessante, la tasca acil-associazione della nuova struttura viene confrontata con altri sintetasi acil - e aril-CoA. Un confronto tra la tasca acil-associazione la sintetasi di acil-CoA da M. acetivorans con altre strutture identifica una tasca superficiale che viene utilizzata per associare i carboxylates catena media. Queste intuizioni sottolineano l&#39;alta sequenza e diversit&agrave; strutturali tra questa famiglia nella zona della tasca acil-associazione.

Il 2.1 una struttura di cristallo di una sintetasi di acil-CoA da Methanosarcina acetivorans rivela una tasca acil-associazione alternativa per substrati piccolo acil ramificato.

adenylating&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;-AMP&#x5F62;&#x6210;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x306F;&#x3001;ATP&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x304B;&#x3089;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5316;&#x5B66;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;2&#x3064;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x3002; X&#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x89E6;&#x5A92;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;140&#x5EA6;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x56DE;&#x8EE2;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;Methanosarcina acetivorans&#x304B;&#x3089;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x4E2D;&#x9396;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 3&#x3064;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;AMP&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3067;&#x3001;&#x5206;&#x6790;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; CoA&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF1A;CoA&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;4  - &#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x3001;&#x30A2;&#x30EA;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6301;&#x3064;M. acetivorans&#x304B;&#x3089;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x9396;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x6D45;&#x3044;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x306F;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x9AD8;&#x3044;&#x914D;&#x5217;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

2.1 Methanosarcina Acetivorans&#x304B;&#x3089;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x578B;&#x5206;&#x5C90;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

Acyl &#xC570;&#xD504; &#xD615;&#xC131; &#xAC00;&#xC871; adenylating &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD654;&#xD559; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB97C; ATP &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB418;&#xB294; &#xCE74;&#xBCF5;&#xC2E4;&#xC0B0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xCD09;&#xB9E4;. X-&#xC120; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xAC00;&#xC774; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xB9E4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD6A8;&#xC18C; 140&#xB3C4;&#xC758; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD68C;&#xC804;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB450; &#xBD80;&#xBD84; &#xBC18;&#xC751; &#xCD09;&#xB9E4;&#xB97C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xAD6C;&#xC131;&#xD560; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xC5EC;&#xAE30; Methanosarcina acetivorans&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778; acyl CoA &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;. 3 &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8; &#xB9CE;&#xC740; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC570;&#xD504; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xBD84;&#xC11D; &#xC774;&#xB2E4;. CoA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3EC;&#xCF13; &#xD2F8; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; 4&#xC758; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;-chlorobenzoate:CoA &#xB9AC;&#xAC00;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; acyl &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8; &#xB2E4;&#xB978; acyl aryl CoA synthetases&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xAD50; acyl &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; M. acetivorans acyl CoA &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778; carboxylates&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC595;&#xC740; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825; &#xB192;&#xC740; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; acyl &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC758; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xAC00;&#xC871; &#xAC04;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xAC15;&#xC870;.

2.1 A &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; Methanosarcina acetivorans acyl CoA &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xAE30; acyl &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xCCB4; acyl &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

La familia formadora de acil-AMP de las enzimas catalizan adenylating de dos pasos para activar las reacciones de un carboxilato con la energ&#xED;a qu&#xED;mica derivada de la hidr&#xF3;lisis de ATP. De rayos X las estructuras cristalinas se han determinado para varios miembros de esta familia y, junto con estudios bioqu&#xED;micos, proporcionar informaci&#xF3;n en el sitio activo y los mecanismos catal&#xED;ticos utilizados por estas enzimas. Estos estudios han mostrado que las enzimas utilizar un dominio rotaci&#xF3;n de 140 grados para reconfigurar un sitio activo &#xFA;nico para catalizar las dos reacciones parciales. En este trabajo presentamos la estructura cristalina de una nueva cadena media de la acil-CoA sintetasa de acetivorans Methanosarcina. El bolsillo de uni&#xF3;n de los tres sustratos se analiza, con muchos residuos conservados presentes en el bolsillo de AMP vinculante. El bolsillo CoA uni&#xF3;n se compara con los bolsillos de ambos acetil-CoA sintetasa y 4-clorobenzoato: CoA ligasa. Lo m&#xE1;s interesante es el bolsillo de acil-uni&#xF3;n de la nueva estructura se compara con otras sintetasas acil-y aril-CoA. Una comparaci&#xF3;n de la bolsa de acil-uni&#xF3;n de la sintetasa de acil-CoA de Acetivorans M. con otras estructuras identifica un bolsillo superficial que se utiliza para enlazar los carboxilatos de cadena media. Estas ideas hincapi&#xE9; en la secuencia de alta y la diversidad estructural entre esta familia en el &#xE1;rea de la bolsa de acil-vinculante.

El 2,1 una estructura cristalina de un acil-CoA sintetasa de Methanosarcina acetivorans revela un suplente de Acil-vinculante de bolsillo para peque&#xF1;os sustratos acil ramificados

&#x77ED;&#x671F;&#x548C;&#x4E2D;&#x671F;&#x94FE;&#x9170;&#x8F85;&#x9176; A (&#x9170; CoA) &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x9170; CoA &#x4ECE;&#x9170;&#x57FA;&#x57FA;&#x7247;&#x3001; ATP&#x3001; CoA &#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x901A;&#x8FC7;&#x9176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9170; AMP &#x4E2D;&#x95F4;&#x8FDB;&#x884C;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x5316;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E24;&#x6B65;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4ECE;&#x4EA7;&#x7532;&#x70F7; archaeon &#x7403;&#x83CC; acetivorans &#x6B64;&#x9176;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x4E2D;, &#x94FE;&#x8102;&#x9170; CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x6307;&#x5B9A; Macs(Ma) &#x5229;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5176;&#x9996;&#x9009;&#x7684;&#x57FA;&#x677F;&#x9170; CoA &#x5408;&#x6210; 2-&#x7532;&#x57FA;&#x4E01;&#x9178;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5229;&#x7528;&#x918B;&#x9178;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x4E0D;&#x80FD;&#x50AC;&#x5316; acetoclastic &#x7532;&#x70F7; M.acetivorans &#x4E2D;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;&#x5F53;&#x4E19;&#x9178;&#x6216;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E0D;&#x5229;&#x4E8E;&#x9170;&#x57FA;&#x5E95;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x5982;&#x4E01;&#x9178;&#x3001; 2-methylpropionate &#x6216; 2-methylvalerate&#xFF0C;&#x88AB;&#x5229;&#x7528;&#x65F6;&#xFF0C;&#x8102;&#x9170; CoA &#x4E0D;&#x751F;&#x4EA7;&#x6216;&#x5236;&#x4F5C;&#x4E86;&#x5728;&#x964D;&#x4F4E;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x9170; AMP &#x548C; PP(i) &#x83B7;&#x91CA; CoA&#xFF0C;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x800C;&#x5B58;&#x5728; CoA&#xFF0C;&#x4E2D;&#x95F4;&#x88AB;&#x5206;&#x89E3;&#x6210; AMP &#x548C;&#x9170;&#x57FA;&#x5E95;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; PP(i) &#x516C;&#x5E03;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x867D;&#x7136;&#x9170; CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x80FD;&#x529B;&#x5229;&#x7528;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5E95;&#x7269;&#x53CD;&#x5E94;&#x9170;&#x57FA;&#x817A;&#x82F7;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x9002;&#x5408;&#x7684;&#x786B;&#x916F;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6B65;&#x3002;Macs(Ma) &#x7ED3;&#x6784;&#x8868;&#x660E;&#x5047;&#x5B9A;&#x9170;&#x57FA;&#x57FA;&#x7247;&#x548C; CoA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x3002;&#x516D;&#x6B8B;&#x7559;&#x62DF;&#x5F62;&#x6210;&#x9170;&#x57FA;&#x57FA;&#x7247;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x91CC;&#xFF0C;Lys(256)&#x3001; Cys(298)&#x3001; Gly(351)&#x3001; Trp(259)&#x3001; Trp(237) &#x548C; Trp(254)&#xFF0C;&#x88AB;&#x9488;&#x5BF9;&#x6539;&#x5EFA;&#x3002;&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x9176;&#x53D8;&#x79CD;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x516D;&#x6B8B;&#x7559;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x9170;&#x57FA;&#x57FA;&#x7247;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x751A;&#x81F3;&#x4FDD;&#x5B88;&#x6539;&#x5EFA;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x4ECE;&#x7403;&#x83CC; acetivorans &#x53E4;&#x83CC;&#x4E2D;&#x94FE;&#x9170;&#x8F85;&#x9176; A &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

Short- and medium-chain acyl coenzyme A (acyl-CoA) synthetases catalyze the formation of acyl-CoA from an acyl substrate, ATP, and CoA. These enzymes catalyze mechanistically similar two-step reactions that proceed through an enzyme-bound acyl-AMP intermediate. Here we describe the characterization of a member of this enzyme family from the methane-producing archaeon Methanosarcina acetivorans. This enzyme, a medium-chain acyl-CoA synthetase designated Macs(Ma), utilizes 2-methylbutyrate as its preferred substrate for acyl-CoA synthesis but cannot utilize acetate and thus cannot catalyze the first step of acetoclastic methanogenesis in M. acetivorans. When propionate or other less favorable acyl substrates, such as butyrate, 2-methylpropionate, or 2-methylvalerate, were utilized, the acyl-CoA was not produced or was produced at reduced levels. Instead, acyl-AMP and PP(i) were released in the absence of CoA, whereas in the presence of CoA, the intermediate was broken down into AMP and the acyl substrate, which were released along with PP(i). These results suggest that although acyl-CoA synthetases may have the ability to utilize a broad range of substrates for the acyl-adenylate-forming first step of the reaction, the intermediate may not be suitable for the thioester-forming second step. The Macs(Ma) structure has revealed the putative acyl substrate- and CoA-binding pockets. Six residues proposed to form the acyl substrate-binding pocket, Lys(256), Cys(298), Gly(351), Trp(259), Trp(237), and Trp(254), were targeted for alteration. Characterization of the enzyme variants indicates that these six residues are critical in acyl substrate binding and catalysis, and even conservative alterations significantly reduced the catalytic ability of the enzyme.

Characterization of an archaeal medium-chain acyl coenzyme A synthetase from Methanosarcina acetivorans.

Court et &#xE0; cha&#xEE;ne moyenne acyle coenzyme A (CoA-acyle) synth&#xE9;tases catalyser la formation de l&#x26;#39;acyl-CoA &#xE0; partir d&#x26;#39;un substrat acyle, ATP, et CoA. Ces enzymes catalysent m&#xE9;caniquement similaires en deux &#xE9;tapes des r&#xE9;actions qui passent par une enzyme li&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;acyl-AMP interm&#xE9;diaire. Nous d&#xE9;crivons ici la caract&#xE9;risation d&#x26;#39;un membre de cette famille d&#x26;#39;enzymes de la acetivorans produisant du m&#xE9;thane archaeon Methanosarcina. Cette enzyme, une cha&#xEE;ne moyenne en acyl-CoA synth&#xE9;tase d&#xE9;sign&#xE9; Mac (Ma), utilise le 2-m&#xE9;thylbutyrate de son substrat pr&#xE9;f&#xE9;r&#xE9; pour l&#x26;#39;acyl-CoA synth&#xE8;se mais ne peut pas utiliser l&#x26;#39;ac&#xE9;tate et ne peut donc catalyser la premi&#xE8;re &#xE9;tape de m&#xE9;thanog&#xE9;n&#xE8;se acetoclastic dans acetivorans M.. Lorsque propionate ou l&#x26;#39;autre des substrats acyle moins favorables, tels que le butyrate, le 2-m&#xE9;thylpropionate, ou 2-m&#xE9;thylval&#xE9;rate, ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s, l&#x26;#39;acyl-CoA n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; produit ou a &#xE9;t&#xE9; produite &#xE0; des niveaux r&#xE9;duits. Au lieu de cela, l&#x26;#39;acyl-AMP et le PP (i) ont &#xE9;t&#xE9; lib&#xE9;r&#xE9;s en l&#x26;#39;absence de CoA, alors que dans la pr&#xE9;sence de CoA, l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;compos&#xE9; en AMP et le substrat acyle, qui ont &#xE9;t&#xE9; diffus&#xE9;es en m&#xEA;me temps avec le PP (i). Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que, bien que l&#x26;#39;acyl-CoA synth&#xE9;tases peut avoir la possibilit&#xE9; d&#x26;#39;utiliser une large gamme de substrats pour l&#x26;#39;&#xE9;tape de l&#x26;#39;acyl-cyclase-formant d&#x26;#39;abord de la r&#xE9;action, l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire peut ne pas &#xEA;tre appropri&#xE9; pour l&#x26;#39;&#xE9;tape thioester formant seconde. Le Mac (Ma) la structure a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; la acyle putatif poches substrat-CoA et contraignant. Six r&#xE9;sidus propos&#xE9;es pour former le substrat acyle de liaison poche, Lys (256), Cys (298), Gly (351), Trp (259), Trp (237), et Trp (254), ont &#xE9;t&#xE9; cibl&#xE9; pour la modification. Caract&#xE9;risation des variants d&#x26;#39;enzymes indique que ces six r&#xE9;sidus sont essentiels pour la liaison au substrat acyle et de la catalyse, et m&#xEA;me des modifications conservatrices consid&#xE9;rablement r&#xE9;duit la capacit&#xE9; catalytique de l&#x26;#39;enzyme.

Caract&#xE9;risation d&#x26;#39;un Archaeal &#xE0; cha&#xEE;ne moyenne acyl coenzyme A synth&#xE9;tase de Acetivorans Methanosarcina

Kurz- und mittelkettige Acyl-Coenzym A (Coenzym a) Synthetases katalysieren die Bildung von Coenzym a aus einer Acil Bedruckstoff, ATP und CoA. Diese Enzyme katalysieren mechanistisch &auml;hnlich zweistufigen-Reaktionen, die durch ein Enzym gebundene Acyl-AMP-Zwischenprodukt fortzufahren. Hier beschreiben wir die Charakterisierung eines Mitglieds dieses Enzym-Familie aus dem Methan produzieren Archaeon Methanosarcina Acetivorans. Dieses Enzym, ein Medium-Chain Acyl-CoA-Synthetase bezeichneten Macs(Ma), nutzt 2-Methylbutyrate als seine bevorzugte Substrat f&uuml;r die Synthese von Coenzym a aber k&ouml;nnen nicht nutzen Acetat und daher kann nicht den ersten Schritt des Acetoclastic Methanbildung in M. Acetivorans katalysieren. Beim propionat oder anderen ung&uuml;nstigeren Acyl-Substraten, wie Butyrat, 2-Methylpropionate oder 2-Methylvalerate, in Betrieb genommen wurden, das Coenzym a wurde nicht hergestellt oder mit verminderter H&auml;ufigkeit produziert wurde. Stattdessen wurden Acyl-AMP und PP(i) in Ermangelung von CoA, freigelassen, w&auml;hrend in Anwesenheit von CoA, das Zwischenprodukt aufgegliedert wurde in AMP und Acil Substrat, die zusammen mit PP(i) ver&ouml;ffentlicht wurden. Diese Ergebnisse legen nahe, dass obwohl Coenzym Synthetases die F&auml;higkeit, eine Vielzahl von Substraten f&uuml;r den Acyl-Adenylat-bildenden ersten Schritt der Reaktion Nutzen haben k&ouml;nnen, das Zwischenprodukt nicht verwendbar f&uuml;r den Thioester-bildenden zweiten Schritt sein kann. Die Macs(Ma)-Struktur hat ergeben, dass die vermeintliche Acil Bedruckstoff und CoA binden Taschen. Sechs vorgeschlagen, die Acil Bedruckstoff-Bindung Tasche, Lys(256), Cys(298), Gly(351), Trp(259), Trp(237) und Trp(254), bilden R&uuml;ckst&auml;nde wurden gezielt f&uuml;r Ver&auml;nderung. Charakterisierung der Enzym-Varianten gibt, dass diese sechs R&uuml;ckst&auml;nde kritisch in Acil Bedruckstoff Bindung und Katalyse sind und sogar konservative Ver&auml;nderungen deutlich die katalytische F&auml;higkeit des Enzyms reduziert.

Charakterisierung der ein Archaea-Medium-Chain Acyl-Coenzym A-Synthase aus Methanosarcina Acetivorans.

Sintetasi di catena corta e media acil coenzima A (acil-CoA) catalizzano la formazione di acil-CoA da un substrato acil, ATP e CoA. Questi enzimi catalizzano reazioni meccanicistico simili in due fasi che procede attraverso un intermedio acil enzima-bound-AMP. Qui descriviamo la caratterizzazione di un membro di questa famiglia di enzimi dalla produzione di metano ipertermofilo Methanosarcina acetivorans. Questo enzima, una sintetasi catena media acil-CoA designato Macs(Ma), utilizza 2-metilbutirrato come suo preferito substrato per la sintesi di acil-CoA, ma non &egrave; possibile utilizzare acetato e cos&igrave; non pu&ograve; catalizzare il primo passo della metanogenesi acetoclastic in acetivorans M.. Quando propionato o altri substrati acil meno favorevoli, come butirrato, 2-methylpropionate o 2-methylvalerate, sono stati utilizzati, l&#39;acil-CoA non &egrave; stata prodotta o &egrave; stato prodotto a livelli ridotti. Invece, acil-AMP e PP(i) sono stati rilasciati in assenza del CoA, mentre in presenza di CoA, intermedia &egrave; stato suddiviso in AMP e il substrato acil, che sono stati rilasciati insieme a PP(i). Questi risultati suggeriscono che sebbene sintetasi di acil-CoA possono avere la capacit&agrave; di utilizzare una vasta gamma di substrati per l&#39;acil adenilato-formazione primo passo della reazione, l&#39;intermedio potrebbe non essere adatto per il secondo passo-tioesteri-formante. La struttura Macs(Ma) ha rivelato le tasche di putativo acil CoA-associazione e substrato. Sei residui proposti per formare la tasca di substrato-associazione acil, Lys(256), Cys(298), Gly(351), Trp(259), Trp(237) e Trp(254), sono stati mirati per alterazione. Caratterizzazione di varianti dell&#39;enzima indica che questi sei residui sono critici in catalisi e associazione substrato acil e alterazioni anche conservatore ha ridotto significativamente la capacit&agrave; catalitica dell&#39;enzima.

Caratterizzazione di una sintetasi di archaeal catena media acil coenzima A da Methanosarcina acetivorans.

&#x77ED;&#xB7;&#x4E2D;&#x9396;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;A&#xFF08;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#xFF09;&#x306F;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3001;ATP&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;CoA&#x304B;&#x3089;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;-AMP&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9032;&#x3080;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x305F;2&#x3064;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x751F;&#x7523;&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;Methanosarcina acetivorans&#x304B;&#x3089;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;Mac&#x3092;&#xFF08;Ma&#xFF09;&#x306B;&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E2D;&#x9396;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;-CoA&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x597D;&#x307E;&#x3057;&#x3044;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;2  - &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x916A;&#x9178;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x9162;&#x9178;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x306E;&#x3067;&#x3001;M. acetivorans&#x3067;acetoclastic&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x916A;&#x9178;&#x3001;2  - &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x3001;2  -  methylvalerate&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9178;&#x5869;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x4E0D;&#x5229;&#x306A;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x6750;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x304C;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x305F;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x751F;&#x7523;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5229;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3002; CoA&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x304C;PP&#xFF08;I&#xFF09;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;AMP&#x3068;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x677F;&#x306B;&#x5206;&#x304B;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;-AMP&#x3068;PP&#x306F;&#x3001;&#xFF08;i&#xFF09;&#x3001;CoA&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;-CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6BB5;&#x968E;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30DE;&#x30C3;&#x30AF;&#xFF08;Ma&#xFF09;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x6750;&#x3068;CoA&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#x3001;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#xFF08;256&#xFF09;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;298&#xFF09;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;351&#xFF09;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#xFF08;259&#xFF09;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#xFF08;237&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Trp&#xFF08;254&#xFF09;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;6&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x3001;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x7D20;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;6&#x3064;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x4E0A;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x80FD;&#x3092;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;

Methanosarcina Acetivorans&#x304B;&#x3089;&#x53E4;&#x4E2D;&#x9396;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xC9E7;&#xC740; &#xBC0F; &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778; acyl &#xCF54;&#xC5D4;&#xC790;&#xC784; A (acyl CoA) synthetases acyl &#xAE30;&#xD310;, ATP, &#xBC0F; CoA acyl Coa&#xC758; &#xD615;&#xC131; &#xCD09;&#xB9E4;. &#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; acyl &#xC570;&#xD504; &#xC911;&#xAC04; &#xC9C4;&#xD589; mechanistically &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xCD09;&#xB9E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBA54;&#xD0C4; &#xC0DD;&#xC0B0; archaeon Methanosarcina acetivorans&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC124;&#xBA85;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778; acyl CoA &#xD569;&#xC131; Macs(Ma) &#xC9C0;&#xC815;, 2 methylbutyrate acyl CoA &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB294; &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCD08; &#xC0B0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; M. acetivorans&#xC5D0;&#xC11C; acetoclastic methanogenesis&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD504;&#xB85C; &#xD53C; &#xC628; &#xC0B0; &#xB610;&#xB294; &#xC0B0;, 2-methylpropionate, 2-methylvalerate &#xB4F1; &#xB2E4;&#xB978; &#xB35C; &#xC720;&#xB9AC;&#xD55C; acyl &#xAE30;&#xD310; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;, acyl CoA &#xC81C;&#xC791; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xB610;&#xB294; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC791; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC2E0;, acyl &#xC570;&#xD504; &#xBC0F; PP(i) CoA, &#xC874;&#xC7AC; &#xC911;&#xAC04;&#xC740; &#xC138;&#xBD84;&#xD654; &#xC570;&#xD504;&#xC640; acyl &#xAE30;&#xD310; PP(i) &#xD568;&#xAED8; &#xBC1C;&#xD45C; &#xB41C; &#xBC18;&#xBA74; Coa&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; acyl CoA synthetases &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4; acyl adenylate &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC911;&#xAC04;&#xC774; thioester&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Macs(Ma) &#xAD6C;&#xC870; &#xC0C1; acyl &#xAE30;&#xD310; &#xBC0F; CoA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. 6 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD615;&#xC131; acyl &#xAE30;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;, Lys(256), Cys(298), Gly(351), Trp(259), Trp(237), &#xBC0F; Trp(254), &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD45C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD6A8;&#xC18C; &#xBCC0;&#xC885;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; 6 &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; acyl &#xAE30;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xCD09;&#xB9E4;, &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xACE0;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB2A5;&#xB825; &#xAC10;&#xC18C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Methanosarcina acetivorans&#xC5D0;&#xC11C; archaeal &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778; acyl &#xCF54;&#xC5D4;&#xC790;&#xC784; A &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Corto y de cadena media acil coenzima A (acil-CoA) sintetasas catalizan la formaci&#xF3;n de acil-CoA a partir de un sustrato de acilo, ATP, y CoA. Estas enzimas catalizan mec&#xE1;nicamente similares de dos pasos reacciones que proceden a trav&#xE9;s de una enzima unida a acil-AMP intermedio. Aqu&#xED; se describe la caracterizaci&#xF3;n de un miembro de esta familia de enzimas de la producci&#xF3;n de metano acetivorans archaeon Methanosarcina. Esta enzima, una cadena media de acil-CoA sintetasa designado Mac (Ma), utiliza 2-metilbutirato como su sustrato preferido para la s&#xED;ntesis de la acil-CoA, pero no puede utilizar acetato y por lo tanto no pueden catalizar el primer paso de metanog&#xE9;nesis acetoclastic en Acetivorans M.. Cuando propionato u otros sustratos acilo menos favorables, tales como el butirato, 2-metilpropi&#xF3;nico, o 2-metilvalerato, se utilizaron, la acil-CoA no se produce o se produce a niveles reducidos. En su lugar, acil-AMP y PP (i) fueron liberados en la ausencia de CoA, mientras que en presencia de CoA, el intermedio se descompone en AMP y el sustrato acilo, que fueron liberados junto con PP (i). Estos resultados sugieren que, aunque la acil-CoA sintetasas pueden tener la capacidad de utilizar una amplia gama de sustratos para el primer paso acil-ciclasa formador de la reacci&#xF3;n, el compuesto intermedio puede no ser adecuado para la etapa de tio&#xE9;ster-formando segundos. El Mac (Ma) ha revelado la estructura del sustrato acil supuesta bolsillos-CoA y el compromiso. Seis residuos propuesto para formar el sustrato acilo de uni&#xF3;n bolsillo, Lys (256), Cys (298), Gly (351), Trp (259), Trp (237), y Trp (254), fueron objeto de alteraci&#xF3;n. Caracterizaci&#xF3;n de las variantes de la enzima indica que estos seis residuos son cr&#xED;ticos en la uni&#xF3;n del sustrato acilo y cat&#xE1;lisis, e incluso alteraciones conservadores redujo significativamente la capacidad catal&#xED;tica de la enzima.

Caracterizaci&#xF3;n de una Arqueales de cadena media de acil coenzima A sintetasa de acetivorans Methanosarcina

Aceticlastic methanoarchaeon Methanosaeta concilii GP6&#xFF0C;3,008,626-bp &#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x548C; 18,019 bp &#x5BC4;&#x751F;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x548C;&#x5C55;&#x54C1;&#x4ECE; Methanosaeta &#x55DC;&#x70ED;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5185;&#x5BB9;&#x76F8;&#x5F53;&#x5927;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;

&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; Methanosaeta concilii&#xFF0C;aceticlastic &#x4EA7;&#x7532;&#x70F7;&#x7684;&#x4E13;&#x5BB6;&#x3002;

The genome sequence of the aceticlastic methanoarchaeon Methanosaeta concilii GP6, comprised of a 3,008,626-bp chromosome and an 18,019-bp episome, has been determined and exhibits considerable differences in gene content from that of Methanosaeta thermophila.

Complete genome sequence of Methanosaeta concilii, a specialist in aceticlastic methanogenesis.

La s&#xE9;quence du g&#xE9;nome de l&#x26;#39;aceticlastic concilii methanoarchaeon Methanosaeta GP6, compos&#xE9; d&#x26;#39;un chromosome 3008626-pb et un &#xE9;pisome 18019 pb, a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;e et pr&#xE9;sente des diff&#xE9;rences consid&#xE9;rables dans le contenu des g&#xE8;nes de celle de Methanosaeta thermophila.

S&#xE9;quence compl&#xE8;te du g&#xE9;nome Methanosaeta Concilii, un sp&#xE9;cialiste en M&#xE9;thanisation Aceticlastic

Die Genom-Sequenz von Aceticlastic Methanoarchaeon Methanosaeta Concilii GP6, bestehend aus einer 3.008.626-bp-Chromosom und ein Episome 18.019-bp festgestellt wurde und betr&auml;chtliche Unterschiede in der Gen-Inhalt von der Methanosaeta Thermophila Exponate.

Vollst&auml;ndige Genom-Sequenz von Methanosaeta Concilii, Spezialist f&uuml;r Aceticlastic Methanbildung.

La sequenza del genoma dell&#39;aceticlastic methanoarchaeon Methanosaeta concilii GP6, composta da un cromosoma 3.008.626-bp e un episome 18.019-bp, &egrave; stata determinata e presenta notevoli differenze nel contenuto del gene da quello di Methanosaeta thermophila.

Sequenza completa del genoma dei concilii Methanosaeta, specialista in aceticlastic metanogenesi.

3008626-BP&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x3068;18019-bp&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;aceticlastic methanoarchaeon Methanosaeta concilii GP6&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x914D;&#x5217;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;Methanosaeta&#x30B5;&#x30FC;&#x30E2;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5185;&#x5BB9;&#x306B;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x76F8;&#x9055;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Methanosaeta Concilii&#x3001;Aceticlastic&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30DA;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x914D;&#x5217;

Aceticlastic methanoarchaeon Methanosaeta concilii 3,008,626 bp &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC640; 18,019 bp episome&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; GP6 &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; Methanosaeta thermophila&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C4; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00;.

Methanosaeta concilii, aceticlastic methanogenesis&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC804;&#xBB38;&#xAC00;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;.

La secuencia del genoma de la aceticlastic Concilii methanoarchaeon Methanosaeta GP6, compuesto por un cromosoma 3.008.626 pares de bases y un episoma 18.019 pares de bases, se ha determinado y muestra considerables diferencias en el contenido de genes de la de Methanosaeta thermophila.

Article	Year
Roles of the conserved aspartate and arginine in the catalytic mechanism of an archaeal beta-class carbonic anhydrase. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 12107142	2002
Acetate kinase: not just a bacterial enzyme. Trends in microbiology\| PubMed ID: 16678422	2006
Characterization of the acyl substrate binding pocket of acetyl-CoA synthetase. Biochemistry\| PubMed ID: 16981708	2006
Activity of a second Trypanosoma brucei hexokinase is controlled by an 18-amino-acid C-terminal tail. Eukaryotic cell\| PubMed ID: 17028241	2006
Methanosaeta, the forgotten methanogen? Trends in microbiology\| PubMed ID: 17320399	2007
AMP-forming acetyl-CoA synthetases in Archaea show unexpected diversity in substrate utilization. Archaea (Vancouver, B.C.)\| PubMed ID: 17350930	2007
Residues in an ATP binding domain influence sugar binding in a trypanosome hexokinase. Biochemical and biophysical research communications\| PubMed ID: 17996732	2008
The 2.1 A crystal structure of an acyl-CoA synthetase from Methanosarcina acetivorans reveals an alternate acyl-binding pocket for small branched acyl substrates. Proteins\| PubMed ID: 19544569	2009
Characterization of an archaeal medium-chain acyl coenzyme A synthetase from Methanosarcina acetivorans. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 20851904	2010
Complete genome sequence of Methanosaeta concilii, a specialist in aceticlastic methanogenesis. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 21571998	2011

Kerry S. Smith

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