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Skeletal Muscle Gender Dimorphism from Proteomics

Gross contraction in skeletal muscle is primarily determined by a relatively small number of contractile proteins, however this tissue is also remarkably ...

Smith College

&#xAC10;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xC794;&#xC5EC; presynaptic Ca2 + &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xC99D;&#xAC00;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC740; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E8;&#xAE30;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC801;&#xC751; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;. &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC560; &#xBC8C; &#xCE60;&#xC5D0;&#xC640; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAC15;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; Munc13 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC801;&#xC751; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xD0A4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB85C; &#xB4F1;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C;, Munc13-1 ubMunc13-2 &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; calmodulin (&#xCEA0;) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC0F; Ca2 +&#xC744; &#xD3EC;&#xD568;-&#xC794;&#xC5EC; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; exocytotic &#xAE30;&#xACC4;&#xB97C; transduces &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC885;&#xC18D;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC774; Munc13 isoforms &#xCEA0;. Photoaffinity&#xB294; stoichiometric &#xBCF4;&#xC5EC; (PAL) &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC0F; Ca2 +&#xC5D0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; Munc13 &#xD30C;&#xC0DD; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;,-&#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xBE44; &#xBCF4;&#xC874; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; Munc13 &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;, bMunc13 2, Munc13 3&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC758; &#xC885;&#xC18D; &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;. PAL &#xAE30;&#xBC18; Ca2 + &#xC801;&#xC815; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xBAA8;&#xB4E0; Munc13 isoforms &#xC26C;&#xACE0; &#xB2E8;&#xAE30; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131; &#xD604;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; Ca2 + &#xC13C;&#xC11C;/&#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC900; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB0AE;&#xC740; Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xBBF8; &#xCEA0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD600;.

Photoaffinity &#xB77C;&#xBCA8; Munc13 calmodulin &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x77ED;&#x671F;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x4F20;&#x611F;&#x548C;&#x6B8B;&#x4F59;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D; Ca2 + &#x6C34;&#x5E73;&#x77ED;&#x6682;&#x589E;&#x52A0;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x57FA;&#x672C;&#x804C;&#x80FD;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x9884;&#x5145;&#x548C;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x8C03;&#x5236;&#xFF0C;Munc13 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x3002;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x4E0A;&#xFF0C;Munc13-1 &#x548C; ubMunc13-2 &#x5305;&#x542B;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C; Ca2 + &#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x9499; (CaM)-&#x8FD9;&#x4E9B; Munc13 &#x4E9A;&#x578B;&#x4E0E;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6784;&#x6210;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x6B8B;&#x4F59; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x5230;&#x7A81;&#x89E6;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; Munc13 &#x6D3E;&#x751F;&#x6A21;&#x578B;&#x591A;&#x80BD;&#x5728;&#x5149;&#x4EB2;&#x548C;&#x6807;&#x8BB0; (PAL) &#x5B9E;&#x9A8C;&#x6765;&#x8BC1;&#x660E;&#x7A7A;&#x6C14;&#x8FC7;&#x91CF;&#x53CA; Ca2 +-&#x4F9D;&#x8D56;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x6210;&#x5458;&#x7684; Munc13 &#x7CFB;&#x5217;&#x3001; bMunc13-2 &#x548C; Munc13-3&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0A;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x975E;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E; PAL &#x7684; Ca2 + &#x6EF4;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x663E;&#x793A;&#x6240;&#x6709; Munc13 &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x53EF;&#x4EE5;&#x90FD;&#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x590D;&#x6742;&#x4E0E;&#x51F8;&#x8F6E;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5728;&#x4F4E; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x9759;&#x606F;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x5F3A;&#x8C03;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E92;&#x52A8;&#x4E2D;&#x77ED;&#x671F;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x73B0;&#x8C61;&#x7684; Ca2 + &#x4F20;&#x611F;&#x5668;/&#x6548;&#x5E94;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x6B63;&#x4E0A;&#x65B9;&#x3002;

Munc13-&#x9499;&#x8C03;&#x7D20;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5149;&#x4EB2;&#x548C;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

Sensing of and response to transient increases in the residual presynaptic Ca2+ levels are important adaptive mechanisms that define the short-term plasticity characteristics of neurons. Due to their essential function in synaptic vesicle priming and in the modulation of synaptic strength, Munc13 proteins have emerged as key regulators of these adaptive mechanisms. Indeed, Munc13-1 and ubMunc13-2 contain a conserved calmodulin (CaM) binding site and the Ca2+ -dependent interaction of these Munc13 isoforms with CaM constitutes a molecular mechanism that transduces residual Ca2+ signaling to the synaptic exocytotic machinery. Here, we used Munc13-derived model peptides in photoaffinity labeling (PAL) experiments to demonstrate the stoichiometric and Ca2+ -dependent CaM binding of the other members of the Munc13 family, bMunc13-2 and Munc13-3, via structurally distinct non-conserved binding sites. A PAL-based Ca2+ titration assay revealed that all Munc13 isoforms can form a complex with CaM already at low Ca2+ concentrations just above resting levels, underscoring the Ca2+ sensor/effector function of this interaction in short-term synaptic plasticity phenomena.

Characterization of the Munc13-calmodulin interaction by photoaffinity labeling.

D&eacute;tection d&#39;et de r&eacute;ponse aux augmentations transitoires dans les niveaux r&eacute;siduels pr&eacute;synaptiques de Ca2 + sont des m&eacute;canismes adaptatifs importants qui d&eacute;finissent les caract&eacute;ristiques &agrave; court terme de la plasticit&eacute; des neurones. En raison de leur fonction essentielle dans l&#39;amor&ccedil;age de la v&eacute;sicule synaptique et dans la modulation de la force synaptique, Munc13 prot&eacute;ines sont apparus comme des r&eacute;gulateurs cl&eacute;s de ces m&eacute;canismes d&#39;adaptation. En effet, Munc13-1 et ubMunc13-2 contiennent une conserv&eacute;e calmoduline (CaM) liant le Ca2 + et site-interaction d&eacute;pendante de ces isoformes Munc13 avec CaM constitue un m&eacute;canisme mol&eacute;culaire qui transduit signalisation Ca2 + r&eacute;siduelle &agrave; la machinerie exocytotique synaptique. Ici, nous avons utilis&eacute; des peptides d&eacute;riv&eacute;s Munc13 mod&egrave;les en photoaffinit&eacute; d&#39;&eacute;tiquetage (PAL) exp&eacute;riences pour d&eacute;montrer le stoechiom&eacute;trique et Ca2 +-d&eacute;pendante liaison CaM des autres membres de la famille Munc13, bMunc13-2 et de Munc13-3, via les sites de structurellement diff&eacute;rente de liaison non conserv&eacute;e. Un test de titrage base PAL Ca2 + a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que toutes les isoformes Munc13 peuvent former un complexe avec CaM d&eacute;j&agrave; &agrave; faibles concentrations de Ca2 + juste au-dessus des niveaux, soulignant la fonction de capteur/effectrice Ca2 + de cette interaction dans des ph&eacute;nom&egrave;nes de plasticit&eacute; synaptique &agrave; court terme de repos.

Caract&eacute;risation de l&#39;interaction Munc13-calmoduline par photoaffinit&eacute;.

Abtasten von und Reaktion auf vor&uuml;bergehender Anstieg der die verbleibenden pr&auml;synaptischen Ca2 + Ebenen sind wichtige adaptive Mechanismen, die die kurzfristige Plastizit&auml;t-Eigenschaften der Neuronen zu definieren. Aufgrund ihrer Hauptfunktion in synaptische Vesikel Grundierung und die Modulation des synaptischen St&auml;rke entstanden die Munc13 Proteine als wichtige regulierende adaptive Mechanismen. In der Tat, Munc13-1 und ubMunc13-2 enthalten eine konservierte Calmodulin (CaM) verbindliche Website und die Ca2 +-abh&auml;ngigen Wechselwirkung von diesen Munc13-Isoformen mit CaM stellt einen molekularen Mechanismus, der transduces residual Ca2 + Signalisierung der synaptischen exocytotic Maschinen. Hier verwendet wir Modell Munc13-abgeleitete Peptide in Photoaffinity Kennzeichnung (PAL) Experimente der st&ouml;chiometrischen demonstrieren und Ca2 +-abh&auml;ngige CaM-Bindung der anderen Mitglieder der Munc13 Familie, bMunc13-2 und Munc13-3, &uuml;ber strukturell unterschiedliche, nicht konservierte Bindungsstellen. Ein PAL-basierte Ca2 + Titrierung Assay ergab, dass alle Munc13 Isoformen einen Komplex mit CaM bereits bei niedrigen Ca2 +-Konzentrationen oberhalb ruhelosigkeit Ebenen, unterstreicht die Ca2 +-Sensor/Effektor-Funktion dieser Interaktion in kurzfristige synaptische Plastizit&auml;t Ph&auml;nomene bilden k&ouml;nnen.

Charakterisierung der Munc13-Calmodulin-Interaktion durch Photoaffinity zu bezeichnen.

Rilevamento di e risposta a un aumento transitorio nella presinaptico Ca2 + livelli residuali sono importanti meccanismi adattativi che definiscono le caratteristiche di plasticit&agrave; a breve termine dei neuroni. A causa della loro funzione essenziale nell&#39;innesco della vescicola sinaptica e nella modulazione della forza sinaptica, Munc13 proteine sono emersi come regolatori chiave di questi meccanismi adattativi. Infatti, Munc13-1 e ubMunc13-2 contengono un conservato calmodulina (CaM) binding sito e Ca2 +-dipendente dalla interazione di queste isoforme Munc13 con CaM costituisce un meccanismo molecolare che transduces residua Ca2 + segnalazione al macchinario questo sinaptico. Qui, abbiamo usato peptidi modello Munc13-derivato in photoaffinity di etichettatura (PAL) esperimenti per dimostrare il rapporto stechiometrico e Ca2 +-dipendente associazione CaM degli altri membri della famiglia Munc13, bMunc13-2 e Munc13-3, tramite i siti di legame non conservate strutturalmente distinti. Un dosaggio di titolazione basata su PAL Ca2 + ha rivelato che tutte le isoforme di Munc13 pu&ograve; formare un complesso con CaM gi&agrave; a basse concentrazioni di Ca2 + appena di sopra di livelli, sottolineando la funzione di sensore/attuatore Ca2 + di questa interazione nei fenomeni di plasticit&agrave; sinaptica a breve termine di riposo.

Caratterizzazione dell&#39;interazione Munc13-calmodulina etichettando photoaffinity.

&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x6B8B;&#x7559;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D; ca 2 + &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x77ED;&#x671F;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x7279;&#x6027;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x91CD;&#x8981;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5FC5;&#x9808;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F37;&#x5EA6;&#x5909;&#x8ABF;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3001;Munc13 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x9069;&#x5FDC;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x4E3B;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D6E;&#x4E0A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x78BA;&#x304B;&#x306B;&#x3001;Munc13 1 &#x3068; ubMunc13 2 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073; ca 2 + &#x7D50;&#x5408;&#x4FDD;&#x5B58;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3; (CaM) &#x3092;&#x542B;&#x3080;-&#x30AB;&#x30E0;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089; Munc13 &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x6B8B;&#x7559; ca 2 + &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x653E;&#x51FA;&#x6A5F;&#x68B0;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x3001;&#x7406;&#x8AD6;&#x7A7A;&#x71C3;&#x6BD4;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B; (PAL) &#x5B9F;&#x9A13;&#x304A;&#x3088;&#x3073; ca 2 + &#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5149;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB; &#x30C6;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; Munc13 &#x7531;&#x6765;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;-&#x975E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; Munc13 3&#x3001;bMunc13 2&#x3001;Munc13 &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x30AB;&#x30E0;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PAL &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E; ca 2 + &#x6EF4;&#x5B9A;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066; Munc13 &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; ca 2 + &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;/&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3053;&#x306E;&#x77ED;&#x671F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x73FE;&#x8C61;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x9759;&#x6642;&#x306E;&#x771F;&#x4E0A;&#x65E2;&#x306B;&#x4F4E; ca 2 + &#x6FC3;&#x5EA6;&#x30AB;&#x30E0;&#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Munc13 &#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30C7;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5149;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB; &#x30C6;&#x30A3;&#x30FC; &#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

Detecci&oacute;n de y respuesta a aumentos transitorios en los presin&aacute;pticos Ca2 + niveles residuales son importantes mecanismos adaptativos que definen las caracter&iacute;sticas a corto plazo de la plasticidad de las neuronas. Debido a su funci&oacute;n esencial en el cebado de la ves&iacute;cula sin&aacute;ptica y en la modulaci&oacute;n de fuerza sin&aacute;ptica, prote&iacute;nas Munc13 han surgido como reguladores claves de estos mecanismos adaptativos. De hecho, Munc13-1 y ubMunc13-2 contienen un conservado calmodulina (CaM) enlace de sitio y el Ca2 +-interacci&oacute;n dependiente de estas isoformas de Munc13 con CaM constituye un mecanismo molecular que absorbe residual Ca2 + se&ntilde;alizaci&oacute;n al mecanismo exocit&oacute;tico sin&aacute;ptico. Aqu&iacute;, utilizamos p&eacute;ptidos derivados de Munc13 modelo photoaffinity etiquetado (PAL) experimentos para demostrar la estequiom&eacute;trica y Ca2 +-dependiente vinculante de la leva de los dem&aacute;s miembros de la familia de Munc13, bMunc13-2 y Munc13-3, a trav&eacute;s de sitios de Uni&oacute;n no conservada estructuralmente distintos. Un ensayo de valoraci&oacute;n basadas en PAL Ca2 + revel&oacute; que todos Munc13 isoformas pueden forman un complejo con CaM ya a bajas concentraciones del Ca2 + justo por encima de niveles, lo que subraya la funci&oacute;n de sensor/efector de Ca2 + de esta interacci&oacute;n en fen&oacute;menos de plasticidad sin&aacute;ptica a corto plazo de descanso.

Caracterizaci&oacute;n de la interacci&oacute;n Munc13-calmodulina por photoaffinity etiquetado.

&#x7F3A;&#x4E4F;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x86CB;&#x767D; (PLP) &#x7684;&#x5C0F;&#x9F20; DM20 &#x5728;&#x5C11;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3A;&#x75C9;&#x631B;&#x6027;&#x622A;&#x762B; (SPG-2&#xFF09; &#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x771F;&#x6B63;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x5176;&#x8F74;&#x7A81;&#x548C;&#x9AD3;&#x9798;&#x4F46;&#x5C55;&#x54C1;&#x53D7;&#x635F;&#x8F74;&#x7A81;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x9010;&#x6E10;&#x9000;&#x5316;&#xFF0C;&#x5F88;&#x96BE;&#x5F52;&#x548E;&#x4E8E;&#x4E00;&#x79CD;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE; PLP(null) &#x9AD3;&#x9798;&#x7684;&#x8F85;&#x52A9;&#x5206;&#x5B50;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; DM20 &#x7684; PLP &#x635F;&#x5931;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x548C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x66F4;&#x591A;&#x6DF1;&#x5165;&#x4E86;&#x89E3;&#x6B64;&#x75BE;&#x75C5;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F74;&#x7A81;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x51DD;&#x80F6;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; &gt; 160 &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x819C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x4EE5;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x9AD3;&#x9798;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x7684;&#x6210;&#x4EBA; PLP(null) &#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x4F5C;&#x4E4B;&#x524D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E09;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; septin &#x5BB6;&#x65CF;&#x4E2D;&#x4E30;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x4F46;&#x70DF;&#x9170;&#x80FA;&#x817A;&#x560C;&#x5464;&#x4E8C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (NAD +) &#x8981;&#x51CF;&#x5C11;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x9176; sirtuin 2 (SIRT2) &#x662F;&#x51E0;&#x4E4E;&#x4E0D;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;SIRT2 &#x8868;&#x793A;&#x6574;&#x4E2A;&#x5C11;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBF;&#x88AD;&#xFF0C;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x7535;&#x955C;&#x6280;&#x672F;&#x63ED;&#x793A;&#x5176;&#x4E0E;&#x9AD3;&#x9798;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;SIRT2 &#x5728; PLP(null) &#x4E2D;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x662F;&#x8F6C;&#x5F55;&#x540E;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x5DE5;&#x515A;/DM20 &#x9700;&#x8981;&#x4E3A;&#x5176;&#x8FD0;&#x8F93;&#x5230;&#x9AD3;&#x9798;&#x8F66;&#x53A2;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6B63;&#x5E38; SIRT2 &#x6D3B;&#x52A8;&#x53D7; NAD + / NADH &#x6BD4;&#x7387;&#xFF0C;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x88AB;&#x9057;&#x5F03;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EE3;&#x8C22;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x652F;&#x6301;&#xFF0C;&#x7531;&#x5C11;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

&#x9AD3;&#x9798;&#x86CB;&#x767D;&#x662F; sirtuin &#x7684;&#x8FDB;&#x5165;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x9AD3;&#x9798; 2 &#x4F20;&#x8F93;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x3002;

Mice lacking the expression of proteolipid protein (PLP)/DM20 in oligodendrocytes provide a genuine model for spastic paraplegia (SPG-2). Their axons are well myelinated but exhibit impaired axonal transport and progressive degeneration, which is difficult to attribute to the absence of a single myelin protein. We hypothesized that secondary molecular changes in PLP(null) myelin contribute to the loss of PLP/DM20-dependent neuroprotection and provide more insight into glia-axonal interactions in this disease model. By gel-based proteome analysis, we identified >160 proteins in purified myelin membranes, which allowed us to systematically monitor the CNS myelin proteome of adult PLP(null) mice, before the onset of disease. We identified three proteins of the septin family to be reduced in abundance, but the nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+)-dependent deacetylase sirtuin 2 (SIRT2) was virtually absent. SIRT2 is expressed throughout the oligodendrocyte lineage, and immunoelectron microscopy revealed its association with myelin. Loss of SIRT2 in PLP(null) was posttranscriptional, suggesting that PLP/DM20 is required for its transport into the myelin compartment. Because normal SIRT2 activity is controlled by the NAD+/NADH ratio, its function may be coupled to the axo-glial metabolism and the long-term support of axons by oligodendrocytes.

Proteolipid protein is required for transport of sirtuin 2 into CNS myelin.

Souris d&eacute;pourvues de l&#39;expression de la prot&eacute;ine prot&eacute;olipidique (PLP) / DM20 dans les oligodendrocytes pr&eacute;voient un v&eacute;ritable mod&egrave;le de parapl&eacute;gie spastique (SPG-2). Leurs axones sont bien my&eacute;linis&eacute;es mais pi&egrave;ce atteinte transport axonal et d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence progressive, ce qui est difficile d&#39;attribuer &agrave; l&#39;absence d&#39;une prot&eacute;ine unique de la my&eacute;line. Nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que secondaires changements mol&eacute;culaires dans la my&eacute;line PLP(null) contribuent &agrave; la perte de la neuroprotection DM20/PLP-d&eacute;pendantes et donnent un aper&ccedil;u plus des interactions gliales-axonales dans ce mod&egrave;le de la maladie. Par analyse du prot&eacute;ome &agrave; base de gel, nous avons identifi&eacute; &gt; 160 prot&eacute;ines dans des membranes de my&eacute;line purifi&eacute;e, qui nous a permis de surveiller syst&eacute;matiquement le prot&eacute;ome de my&eacute;line CNS de souris adultes de PLP(null), avant l&#39;apparition de la maladie. Nous avons identifi&eacute; trois prot&eacute;ines de la famille septin d&ucirc; &ecirc;tre r&eacute;duite en abondance, mais le nicotinamide ad&eacute;nine dinucl&eacute;otide (NAD +)-d&eacute;pendante d&eacute;sac&eacute;tylase SIRTUINE 2 (SIRT2) a &eacute;t&eacute; pratiquement absente. SIRT2 est exprim&eacute;e tout au long de la lign&eacute;e de l&#39;oligodendrocyte et immunomicroscopie &eacute;lectronique a r&eacute;v&eacute;l&eacute; sa liaison avec la my&eacute;line. Perte de SIRT2 en PLP(null) &eacute;tait post-transcriptionnel, sugg&eacute;rant que les PLP/DM20 est n&eacute;cessaire &agrave; son transport dans le compartiment de la my&eacute;line. Parce que l&#39;activit&eacute; normale de SIRT2 est contr&ocirc;l&eacute;e par le NAD + / ratio NADH, sa fonction peut &ecirc;tre coupl&eacute;e au m&eacute;tabolisme axo-glial et le soutien &agrave; long terme des axones par les oligodendrocytes.

Prot&eacute;ine prot&eacute;olipidique est requis pour le transport de SIRTUINE 2 dans la my&eacute;line CNS.

M&auml;usen fehlt des Ausdrucks Proteolipid-Protein (PLP) / DM20 in Oligodendrozyten stellen ein echtes Modell f&uuml;r die Spastische Paraplegie (SPG-2). Ihre Axone sind gut Markhaltige, doch Ausstellung behindert axonale Transport und progressive Degeneration, die schwierig, ohne einen einzigen Myelin-Protein zuzuschreiben ist. Wir die Hypothese, dass Sekund&auml;re molekulare Ver&auml;nderungen in PLP(null) Myelin zum Verlust der PLP/DM20-abh&auml;ngige Neuroprotektion beitragen und mehr Einblick in Glia-axonale Interaktionen in dieser Krankheit-Modell. Durch Gel-basierten Proteom-Analyse, wir identifiziert &gt; 160 Proteine in gereinigtem Myelin-Membranen, die uns erlaubt, systematisch die CNS Myelin Proteom der Erwachsenen PLP(null)-M&auml;usen, vor dem Einsetzen der Krankheit zu &uuml;berwachen. Wir identifizierten drei Proteine aus der Familie der Septin in H&uuml;lle und F&uuml;lle, aber das Nicotinamid-adenin-dinucleotid (NAD +) reduziert werden-abh&auml;ngige Deacetylase Sirtuine 2 (SIRT2) war praktisch nicht vorhanden. SIRT2 dr&uuml;ckt sich in der gesamten Linie Oligodendrozyt und Immunoelectron Mikroskopie offenbarte seine Verkn&uuml;pfung mit Myelin. Verlust des SIRT2 in PLP(null) war Posttranscriptionale, darauf hindeutet, dass PLP/DM20 f&uuml;r den Transport in das Batteriefach Myelin erforderlich ist. Da die normaler SIRT2-Aktivit&auml;t durch die NAD gesteuert wird + / NADH-Verh&auml;ltnis, seine Funktion kann die Axo-Gliazellen Stoffwechsel und die langfristige Unterst&uuml;tzung der Axone von Oligodendrozyten gekoppelt werden.

Proteolipid-Protein ist f&uuml;r den Transport von Sirtuine 2 in CNS Myelin erforderlich.

Topi cui manca l&#39;espressione della proteina proteolipid (PLP) DM20 negli oligodendrociti forniscono un modello genuino per la paraplegia spastica (SPG-2). Loro assoni sono mielinizzati bene ma mostra alterato trasporto assonale e degenerazione progressiva, che &egrave; difficile attribuire all&#39;assenza di una proteina della mielina singolo. Abbiamo ipotizzato che cambiamenti molecolari secondarie nella mielina PLP(null) contribuiscono alla perdita di PLP/DM20-dipendente neuroprotezione e forniscono pi&ugrave; approfondita della glia-assonale interazioni in questo modello di malattia. Di base di gel proteome analysis, abbiamo identificato &amp;gt; 160 proteine nelle membrane mielinica purificata, che ci ha permesso di monitorare sistematicamente il CNS mielina proteome di topi adulti PLP(null), prima della comparsa della malattia. Abbiamo identificato tre proteine della famiglia septin per essere ridotto in abbondanza, ma la nicotinammide adenina dinucleotide (NAD +)-dipendente deacetylase sirtuine 2 (SIRT2) era praticamente assente. SIRT2 &egrave; espresso in tutto il lignaggio Oligodendrocita e immunoelectron microscopy ha rivelato la sua associazione con guaina mielinica. Perdita di SIRT2 in PLP(null) era posttranscriptional, suggerendo che PLP/DM20 &egrave; necessaria per il trasporto nel vano mielina. Poich&eacute; la normale attivit&agrave; SIRT2 &egrave; controllato da NAD + rapporto NADH, la sua funzione pu&ograve; essere accoppiata al metabolismo axo-gliale e il supporto a lungo termine degli assoni da oligodendrociti.

Proteolipid proteina &egrave; necessaria per il trasporto di sirtuine 2 nella mielina CNS.

Proteolipid &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (PLP) &#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306B;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;/DM20 &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x672C;&#x7269;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x75D9;&#x6027;&#x5BFE;&#x9EBB;&#x75FA; &#xFF08;SPG-2)&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x6709;&#x9AC4;&#x304C;&#x5C55;&#x793A;&#x8EF8;&#x7D22;&#x8F38;&#x9001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5C5E;&#x6027;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x9AC4;&#x9798;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x9032;&#x884C;&#x6027;&#x5909;&#x6027;&#x969C;&#x5BB3;&#x3002;PLP/DM20 &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B0;&#x30EA;&#x30A2;&#x7D30;&#x80DE;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3082;&#x3063;&#x3068;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5909;&#x5316; PLP(null) &#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x3002;&#x30B2;&#x30EB; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x76EE; 160 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#x9AC4;&#x9798;&#x819C;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x767A;&#x75C7;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x306E;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E; PLP(null) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306B;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; 3 &#x3064;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x30EA;&#x30F3; (NAD +&#xFF09; &#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30D7;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;-&#x4F9D;&#x5B58;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C1;&#x30E5;&#x30A4;&#x30F3; 2 (SIRT2) &#x306F;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x4E0A;&#x4F11;&#x307F;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SIRT2 &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x7CFB;&#x7D71;&#x5168;&#x4F53;&#x3067;&#x3001;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x96FB;&#x9855;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SIRT2 PLP(null) &#x3067;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F; PLP/DM20 &#x304C;&#x305D;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x901A;&#x5E38;&#x306E; SIRT2 &#x6D3B;&#x52D5; NAD &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x305F;&#x3081; c++/cli NADH &#x6BD4;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D50;&#x5408;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD; axo &#x30B0;&#x30EA;&#x30A2;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3068;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x3002;

Proteolipid &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C1;&#x30E5;&#x30A4;&#x30F3; 2 CNS &#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Proteolipid &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (PLP)&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC950; / DM20 oligodendrocytes&#xC5D0; &#xACBD;&#xB828; &#xC801;&#xC778; &#xD558;&#xBC18;&#xC2E0; (SPG-2)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xD488; &#xBAA8;&#xB378; &#xC81C;&#xACF5;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC740; &#xC798; myelinated &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC804;&#xC2DC; &#xC7A5;&#xC560;&#xAC00; axonal &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; myelin &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xACB0;&#xD54D;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xC810;&#xC9C4;&#xC801; &#xBCC0;&#xC131;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC00;&#xC124; &#xBCF4;&#xC870; &#xBD84;&#xC790; &#xBCC0;&#xD654; PLP(null) myelin PLP/DM20 &#xC885;&#xC18D; neuroprotection&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA85;&#xACFC; axonal &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC824; &#xAE30;&#xBC18; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634; &#xBD84;&#xC11D; &amp;gt; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xC804;&#xC5D0; &#xC131;&#xC778; PLP(null) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC758; CNS myelin &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC815;&#xD654; myelin &#xB9C9; 160 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. 3 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD48D;&#xBD80;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC544;&#xBBF8;&#xB4DC; &#xC544;&#xB370;&#xB2CC; &#xB514;&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; (NAD +) &#xAC10;&#xC18C; septin &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;-&#xC885;&#xC18D; deacetylase sirtuin 2 (SIRT2) &#xC0AC;&#xC2E4;&#xC0C1; &#xACB0; &#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. Sirt2&#xC740; oligodendrocyte &#xACC4;&#xBCF4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD45C;&#xD604; &#xB418; &#xACE0; immunoelectron &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xACF5;&#xAC1C; myelin&#xC758; &#xC5F0;&#xAD00;. Plp(null)&#xC5D0;&#xC11C; sirt2&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; posttranscriptional, PLP/dm20&#xC740; myelin &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xBC18; SIRT2 &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; NAD&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB418;&#xBBC0;&#xB85C; + NADH &#xBE44;&#xC728;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; oligodendrocytes&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; axo &#xAD50; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C;.

Proteolipid &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; CNS myelin&#xC5D0; sirtuin 2&#xC758; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ratones que carecen de la expresi&oacute;n de la prote&iacute;na del proteol&iacute;pido (PLP) / DM20 en oligodendrocitos prever un modelo genuino de paraplegia esp&aacute;stica (SPG-2). Sus axones son bien mielinizados pero exposici&oacute;n deteriorado transporte axonal y degeneraci&oacute;n progresiva, que es dif&iacute;cil atribuir a la ausencia de una prote&iacute;na de la mielina sola. Presumimos que cambios moleculares secundarios en mielina PLP(null) contribuyan a la p&eacute;rdida de neuroprotecci&oacute;n PLP/DM20-dependiente y proporcionan m&aacute;s informaci&oacute;n sobre interacciones gliales-axonal en este modelo de la enfermedad. Por el an&aacute;lisis del proteoma de base de gel, identificamos &gt; 160 prote&iacute;nas en las membranas de la mielina purificada, que permiti&oacute; controlar sistem&aacute;ticamente el proteoma de mielina de CNS de ratones adultos de PLP(null), antes del inicio de la enfermedad. Se identificaron tres prote&iacute;nas de la familia septin a reducirse en abundancia, pero el nicotinamida adenina dinucle&oacute;tido (NAD +)-dependiente deacetilasa Sirtuina 2 (SIRT2) estuvo pr&aacute;cticamente ausente. SIRT2 se expresa a trav&eacute;s del linaje oligodendrocyte y microscopia del immunoelectron revelaron su asociaci&oacute;n con mielina. P&eacute;rdida de SIRT2 en PLP(null) fue postranscripcional, sugiriendo que PLP/DM20 es necesaria para su transporte en el compartimiento de la mielina. Como actividad normal de la SIRT2 es controlada por el NAD + / relaci&oacute;n NADH, su funci&oacute;n puede acoplarse al metabolismo axo-glial y el apoyo a largo plazo de axones por oligodendrocitos.

Prote&iacute;na del proteol&iacute;pido es necesaria para el transporte de Sirtuina 2 en mielina CNS.

Munc13 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x662F;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x542F;&#x52A8;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x548C;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x73B0;&#x8C61;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6B8B;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5BF9;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x542F;&#x52A8;&#x4E0E;&#x77ED;&#x671F;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x94FE;&#x63A5;&#x53D8;&#x5316;&#x7279;&#x70B9; Munc13 &#x4E0E;&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D; (CaM) &#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; Ca(2+) &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x80BD; photoprobes &#x6DB5;&#x76D6;&#x7684;&#x65E2;&#x5B9A;&#x7684; Munc13 &#x5149;&#x4EB2;&#x548C;&#x6807;&#x8BB0; (PAL) &#x7684;&#x51F8;&#x8F6E;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x7684; photoadducts &#x7ED3;&#x6784;&#x8868;&#x5F81;&#x7684; CaM-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E3B;&#x9898;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x521B;&#x65B0;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x6D41;&#x7A0B;&#xFF1A; &#x60F0;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x51F8;&#x8F6E;&#x548C;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x53D1;&#x73B0;&#x5904;&#x4E8E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;Munc13s &#x51F8;&#x8F6E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6BCD;&#x758F;&#x6C34;&#x951A;&#x6E23;&#x63A5;&#x89E6;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7684; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3;&#x5728;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x671F;&#x95F4;&#x80BD;&#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x83B7;&#x5F97;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x4EA4;&#x8054;&#x51F8;&#x8F6E; Munc13 &#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x4ECE;&#x80BD;&#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E92;&#x8865;&#x7684;&#x4EA4;&#x8054;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EA6;&#x675F;&#x6761;&#x4EF6;&#x88AB;&#x96C6;&#x6210;&#x5230;&#x4F4E;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x51F8;&#x8F6E; Munc13 &#x591A;&#x80BD;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6570;&#x636E;&#x662F;&#x6700;&#x597D;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x517C;&#x5BB9;&#x5EFA;&#x5236;&#x7531;&#x51F8;&#x8F6E;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7ED3;&#x5408;&#x80BD;&#x6240;&#x5F97;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5408;&#x9176;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x53CD;&#x5411;&#x5E73;&#x884C;&#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7; 1-5-8 &#x4E2D;&#x6240;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x51F8;&#x8F6E; Munc13 1 &#x548C; ubMunc13-2 &#x6BCD;&#x9898;&#x3002;&#x5173;&#x4E8E;&#x51F8;&#x8F6E; Munc13 &#x591A;&#x80BD;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4FE1;&#x606F;&#x5C06;&#x4FBF;&#x5229;&#x7684; Munc13 &#x53D8;&#x79CD;&#x4E0E;&#x4EB2;&#x548C;&#x51F8;&#x8F6E;&#x6539;&#x53D8;&#x8BBE;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x63A8;&#x52A8; Munc13 &#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x53CA;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#x7ED3;&#x6784;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x4EA4;&#x8054;&#x4E0E;&#x8D28;&#x8C31;&#x7684;&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D; Munc13 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

Munc13 proteins are essential regulators of synaptic vesicle priming and play a key role in adaptive synaptic plasticity phenomena. We recently identified and characterized the Ca(2+)-dependent interaction of Munc13 and calmodulin (CaM) as the molecular mechanism linking changes in residual Ca(2+) concentrations to presynaptic vesicle priming and short-term plasticity. Here, we used peptidic photoprobes covering the established CaM-binding motif of Munc13 for photoaffinity labeling (PAL) of CaM, followed by structural characterization of the covalent photoadducts. Our innovative analytical workflow based on isotopically labeled CaM and mass spectrometry revealed that, in the bound state, the hydrophobic anchor residue of the CaM-binding motif in Munc13s contacts two distinct methionine residues in the C-terminal domain of CaM. To address the orientation of the peptide during binding, we obtained additional distance constraints from the mass spectrometric analysis of chemically cross-linked CaM-Munc13 peptide adducts. The constraints from both complementary cross-linking approaches were integrated into low-resolution three-dimensional structure models of the CaM-Munc13 peptide complexes. Our experimental data are best compatible with the structure of the complex formed by CaM and a CaM-binding peptide derived from neuronal NO synthase and show that Munc13-1 and ubMunc13-2 bind to CaM in an antiparallel orientation through a 1-5-8 motif. The structural information about the CaM-Munc13 peptide complexes will facilitate the design of Munc13 variants with altered CaM affinity and thereby advance the detailed functional analysis of the role of Munc13 proteins in synaptic transmission and plasticity.

Structural insights into the calmodulin-Munc13 interaction obtained by cross-linking and mass spectrometry.

Munc13 prot&eacute;ines sont des r&eacute;gulateurs essentiels d&#39;appr&ecirc;tage des v&eacute;sicules synaptiques et jouent un r&ocirc;le cl&eacute; dans les ph&eacute;nom&egrave;nes de plasticit&eacute; synaptique adaptative. R&eacute;cemment, nous avons identifi&eacute; et caract&eacute;ris&eacute; l&#39;interaction de Ca(2+) d&eacute;pendant de Munc13 et la calmoduline (CaM), comme les changements qui relie les m&eacute;canisme mol&eacute;culaire des concentrations r&eacute;siduelles de Ca(2+) &agrave; l&#39;amor&ccedil;age des v&eacute;sicules pr&eacute;synaptiques et plasticit&eacute; &agrave; court terme. Ici, nous avons utilis&eacute; photoprobes peptidiques couvrant le motif Munc13 CaM-liaison &eacute;tabli pour photoaffinit&eacute; &eacute;tiquetage (PAL) de la came, suivie de la caract&eacute;risation structurale de la photoadduits covalente. Notre workflow analytique innovante bas&eacute;e sur CaM isotopiquement &eacute;tiquet&eacute; et spectrom&eacute;trie de masse a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que, dans l&#39;&Eacute;tat li&eacute;, le r&eacute;sidu d&#39;ancrage hydrophobe du motif CaM-liaison en Munc13s contact avec deux r&eacute;sidus m&eacute;thionine distinctes dans le domaine C-terminal de la CaM. Pour r&eacute;gler l&#39;orientation du peptide lors de l&#39;affectation, nous avons obtenu des contraintes de distance suppl&eacute;mentaire de l&#39;analyse par spectrom&eacute;trie de masse des CaM-Munc13 r&eacute;ticul&eacute; chimiquement peptide adduits. Les contraintes de ces deux approches compl&eacute;mentaires de r&eacute;ticulation ont &eacute;t&eacute; int&eacute;gr&eacute;s dans des mod&egrave;les de structure tridimensionnelle basse r&eacute;solution des complexes peptide Munc13-CaM. Nos donn&eacute;es exp&eacute;rimentales sont plues compatibles avec la structure du complexe form&eacute; par CaM et un peptide de CaM-liaison ne d&eacute;riv&eacute; neuronale synthase et montrent que Munc13-1 et ubMunc13-2 se lient &agrave; la CaM dans une orientation antiparall&egrave;le &agrave; un 1-5-8 motif. Les informations structurelles sur les complexes de peptide de CaM-Munc13 facilitera la conception des variantes Munc13 avec une affinit&eacute; CaM alt&eacute;r&eacute;e et ainsi faire avancer l&#39;analyse fonctionnelle d&eacute;taill&eacute;e du r&ocirc;le des prot&eacute;ines Munc13 dans la transmission synaptique et plasticit&eacute;.

Structurels aper&ccedil;us de l&#39;interaction de la calmoduline-Munc13 obtenus par r&eacute;ticulation spectrom&eacute;trie de masse.

Munc13-Proteine sind wesentliche Regulatoren der synaptische Vesikel Grundierung und spielen eine Schl&uuml;sselrolle in adaptive synaptische Plastizit&auml;t Ph&auml;nomene. Wir haben vor kurzem identifiziert und charakterisiert das Ca(2+) abh&auml;ngige Zusammenspiel von Munc13 und Calmodulin (CaM) Verkn&uuml;pfung &Auml;nderungen der molekularen Mechanismen in residual Ca(2+) Konzentrationen an pr&auml;synaptische Vesikel Grundierung und kurzfristige Plastizit&auml;t. Hier haben wir peptidischen Photoprobes &uuml;ber das etablierte CaM-Bindung-Motiv der Munc13 f&uuml;r Photoaffinity Kennzeichnung (PAL) CAM, gefolgt von strukturelle Charakterisierung der kovalente Photoadducts verwendet. Unsere innovative analytischen Workflows basierend auf isotopischer beschriftete CaM und Massenspektrometrie ergab, dass im gebundenen Zustand, hydrophobe Anker R&uuml;ckst&auml;nde von der CaM-Bindung-Motiv in Munc13s zwei unterschiedliche Methionin-R&uuml;ckst&auml;nde in der C-terminalen Dom&auml;ne von CaM Kontakte. Um die Ausrichtung des Peptids w&auml;hrend der Bindung zu l&ouml;sen, erhalten wir zus&auml;tzliche Entfernung Einschr&auml;nkungen der massenspektrometrischen Analyse der chemisch vernetzte CaM-Munc13 Peptid Addukte. Die Einschr&auml;nkungen von beiden komplement&auml;ren Strahlenvernetzung Methoden wurden in niedrig aufl&ouml;sende dreidimensionale Strukturmodelle der CaM-Munc13-Peptid-komplexe integriert. Unsere experimentellen Daten am besten kompatibel mit der Struktur des Komplexes geformt von CaM und CaM-Bindung Peptid abgeleitet neuronale keinen-Synthase und zeigen, dass Munc13-1 und ubMunc13-2 Cam eine antiparallele Ausrichtung durch eine 1-5-8 binden Motiv. Die Strukturinformationen &uuml;ber die CaM-Munc13-Peptid-komplexe erleichtert das Design der Munc13 Varianten mit ver&auml;nderten CaM-Affinit&auml;t und damit f&ouml;rdern die detaillierte funktionale Analyse der Rolle der Munc13 Proteine in synaptischen &Uuml;bertragung und Plastizit&auml;t.

Strukturelle Einblicke in die Calmodulin-Munc13-Interaktion, die durch Vernetzung und Massen-Spektrometrie.

Munc13 proteine sono essenziali regolatori di innesco della vescicola sinaptica e giocano un ruolo fondamentale nei fenomeni di plasticit&agrave; sinaptica adattivo. Recentemente abbiamo identificato e caratterizzato l&#39;interazione Ca(2+)-dipendente di Munc13 e calmodulina (CaM) modificato il meccanismo molecolare che collega in concentrazioni Ca(2+) residui di innesco della vescicola presinaptica e plasticit&agrave; a breve termine. Qui, abbiamo usato photoprobes peptidici copertura stabilito CaM-associazione motivo di Munc13 photoaffinity etichettatura (PAL) di CaM, seguita dalla caratterizzazione strutturale del photoadducts covalenti. Il nostro innovativo analitica workflow basato su CaM isotopicamente etichettati e spettrometria di massa ha rivelato che, in stato associato, i residui idrofobi ancoraggio del motivo in Munc13s CaM-associazione contatto due residui di metionina distinti nel dominio C-terminale della camma. Per affrontare l&#39;orientamento del peptide durante l&#39;associazione, abbiamo ottenuto i vincoli di distanza aggiuntiva dall&#39;analisi di spettrometria di massa di reticolato chimicamente CaM-Munc13 peptide addotti. Vincoli da entrambi gli approcci cross-linking complementari sono stati integrati in modelli struttura tridimensionale a bassa risoluzione dei complessi peptide CaM-Munc13. Nostri dati sperimentali sono migliori compatibili con la struttura del complesso formato da CaM e un peptide CaM-associazione non derivati da neuronale sintasi e mostrare che si legano Munc13-1 e ubMunc13-2 a camma in un orientamento antiparallelo attraverso un 1-5-8 motif. Le informazioni strutturali sui complessi peptide CaM-Munc13 saranno facilitare la progettazione di Munc13 varianti con alterata affinit&agrave; di CaM e quindi avanzare la dettagliata analisi funzionale del ruolo delle proteine Munc13 nella trasmissione sinaptica e plasticit&agrave;.

Intuizioni strutturali dell&#39;interazione calmodulina-Munc13 ottenuto mediante spettrometria di massa e cross-linking.

Munc13 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3001;&#x9069;&#x5FDC;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x73FE;&#x8C61;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x8B58;&#x5225;&#x3001;Munc13 &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30C7;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3; &#xFF08;CaM&#xFF09; &#x306E; Ca(2+) &#x4F9D;&#x5B58;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6B8B;&#x7559;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x77ED;&#x671F;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Munc13 &#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F; CaM &#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x5149;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB; &#x30C6;&#x30A3;&#x30FC; &#x30E9;&#x30D9;&#x30EB; &#xFF08;PAL&#xFF09; &#x306E;&#x30AB;&#x30E0;&#x3001;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408; photoadducts &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30D6; photoprobes &#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x304D;&#x30AB;&#x30E0;&#x3068;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x9769;&#x65B0;&#x7684;&#x306A;&#x89E3;&#x6790;&#x7684;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x6E08;&#x307F;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x6B8B;&#x6E23; CaM &#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; Munc13s &#x3067;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x5225;&#x500B;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3067;&#x30AB;&#x30E0;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x63A5;&#x89E6;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x4E2D;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5411;&#x304D;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x8FFD;&#x52A0;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306E;&#x5236;&#x7D04;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x67B6;&#x6A4B;&#x30AB;&#x30E0; Munc13 &#x306E;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x304B;&#x3089;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x67B6;&#x6A4B;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5236;&#x7D04;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30E0; Munc13 &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x4F4E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F53;&#x793E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30AB;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;CaM &#x7D50;&#x5408;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6D3E;&#x751F;&#x304B;&#x3089;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x6700;&#x9AD8;&#x3067;&#x3001;Munc13 1 &#x3068; ubMunc13 2 &#x30AB;&#x30E0;&#x306B; 1-5-8 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x53CD;&#x5E73;&#x884C;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3002;&#x30AB;&#x30E0; Munc13 &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8A2D;&#x8A08;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AB;&#x30E0; &#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068; Munc13 &#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x30FB;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Munc13 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x9032;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x67B6;&#x6A4B;&#x3068;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30C7;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3; Munc13 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3002;

Munc13 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xBABB;&#xC4F0;&#xAC8C;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xBA70; &#xC801;&#xC751; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131; &#xD604;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xC794;&#xC5EC; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; presynaptic &#xC18C;&#xD3EC; &#xBABB;&#xC4F0;&#xAC8C; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xAE30;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC5F0;&#xACB0; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; munc13&#xC640; calmodulin (&#xCEA0;) Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; peptidic photoprobes photoaffinity &#xB808;&#xC774;&#xBE14; (PAL)&#xC758; &#xCEA0;, &#xB4A4;&#xC5D0; &#xACF5;&#xC720; photoadducts&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; munc13&#xC758; &#xC124;&#xB9BD;&#xB41C; &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xB2E4;&#xB8E8;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD601;&#xC2E0;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; &#xC6CC;&#xD06C;&#xD50C;&#xB85C;&#xC6B0; isotopically &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xB41C; &#xCEA0; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xAE30;&#xBC18;, &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; munc13s&#xC5D0; &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC575;&#xCEE4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xCEA0;&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xBCC4;&#xAC1C; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5BB;&#xC740; &#xCD94;&#xAC00; &#xAC70;&#xB9AC; &#xC81C;&#xC57D; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xD574;&#xC62C;&#xB41C; &#xCEA0;-munc13&#xC758; &#xB300;&#xB7C9; spectrometric &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C;. &#xBCF4;&#xC644; &#xAC00;&#xAD50; &#xBC29;&#xBC95; &#xBAA8;&#xB450;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC57D; &#xCEA0; Munc13 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xD638;&#xD658; &#xCEA0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C;&#xC640; &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC544;&#xBB34; synthase &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xACE0;&#xB294; Munc13 1, ubMunc13 2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xCEA0; 1-5-8&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; antiparallel &#xBC29;&#xD5A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;. &#xCEA0; Munc13 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xC815;&#xBCF4; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xCEA0; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; Munc13 &#xBCC0;&#xC885; &#xC124;&#xACC4; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC804;&#xC5D0; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xC18C;&#xC131; Munc13 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;.

&#xAC00;&#xAD50; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5BB;&#xC740; calmodulin Munc13 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;.

Munc13 prote&iacute;nas son reguladores esenciales de cebado de la ves&iacute;cula sin&aacute;ptica y desempe&ntilde;an un papel clave en fen&oacute;menos de plasticidad sin&aacute;ptica adaptativa. Recientemente se identificaron y caracterizaron la interacci&oacute;n Ca(2+)-dependiente de calmodulina (CaM) y de Munc13 como los cambios de vinculaci&oacute;n del mecanismo molecular en las concentraciones de CA residuales para cebado de ves&iacute;cula presin&aacute;ptica y plasticidad a corto plazo. Aqu&iacute;, utilizamos photoprobes pept&iacute;dicos cubriendo el motivo de uni&oacute;n a CaM establecido de Munc13 para photoaffinity etiquetado (PAL) de la leva, seguido por la caracterizaci&oacute;n estructural de la photoadducts covalente. Nuestro flujo de trabajo anal&iacute;tico innovador basado en CaM isot&oacute;picamente etiquetada y espectrometr&iacute;a de masas revel&oacute; que, en el estado consolidado, el residuo de anclaje hidrof&oacute;bico del motivo CaM-enlace en Munc13s en contacto con dos residuos de distinta de la metionina en el dominio c-terminal de la leva. Para hacer frente a la orientaci&oacute;n del p&eacute;ptido durante la encuadernaci&oacute;n, obtuvimos las limitaciones de distancia adicional del an&aacute;lisis espectrometr&iacute;a de masa de qu&iacute;micamente reticulado CaM-Munc13 aductores de p&eacute;ptido. Las limitaciones de ambos enfoques complementarios del cross-linking se integraron en modelos de baja resoluci&oacute;n de estructura tridimensional de los complejos p&eacute;ptido de CaM-Munc13. Nuestros datos experimentales son m&aacute;s compatibles con la estructura del complejo formado por CaM y un p&eacute;ptido de uni&oacute;n a CaM no derivan neuronal sintasa y mostrar que Munc13-1 y ubMunc13-2 se unen a CaM en una orientaci&oacute;n antiparalela a trav&eacute;s de un 8-5-1 adorno. La informaci&oacute;n estructural sobre los complejos p&eacute;ptido de CaM-Munc13 facilitar&aacute; el dise&ntilde;o de variantes de Munc13 con afinidad alterada de CaM y as&iacute; avanzar en el an&aacute;lisis funcional detallado del papel de las prote&iacute;nas Munc13 en la transmisi&oacute;n sin&aacute;ptica y plasticidad.

Informaci&oacute;n estructural sobre la interacci&oacute;n de la calmodulina-Munc13 obtenidos por espectrometr&iacute;a de masa y cross-linking.

Ca(2+) calmodulin (&#xCEA0;)&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xC870;&#xC808; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;, &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xD4E8;&#xC804;&#xC5D0; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, Ca(2+) &#xCEA0; &#xBABB;&#xC4F0;&#xAC8C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Munc13 1, ubMunc13-2 &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC794;&#xC5EC; Ca(2+) &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C; &#xC870;&#xC808;. &#xC6B0;&#xB9AC; Munc13-1&#xB294; 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; &#xBAA8;&#xBC14;&#xC77C; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xB4C8;, &#xC18C;&#xC124; 1-5-8 &#xC6D4; 26 &#xC77C; &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xCEA0; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; Ca(2+) (4)-&#xCEA0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD588;&#xB2E4;. Photoaffinity &#xB77C;&#xBCA8; &#xB370;&#xC774;&#xD130; ubMunc13 2 isoform&#xC640; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC19;&#xC740; &#xBAA8;&#xB4C8;&#xD615; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C;. N &#xBAA8;&#xB4C8; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC808;&#xBC18; &#xB85C;&#xB4DC; Munc13/Ca(2+) (2)-&#xCEA0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; EGTA &#xD568;&#xAED8; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Munc13 isoforms Ca(2+) &#xADDC;&#xC81C; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; C &#xBAA8;&#xB4C8; nanomolar&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; Munc13/Ca(2+)-&#xCEA0; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4C8;&#xD615; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC124;&#xBA85; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; [Ca(2+)](i), N &#xBAA8;&#xB4C8; micromolar [ca(2+)](i)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC13C;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;. &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; munc13&#xC758; Ca(2+)/&#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xAC00; &#xB2E8;&#xAE30; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xBCC0;&#xC870;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xBD84;&#xC790; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xAD6C;&#xC131;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Munc13/calmodulin &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4C8;&#xD615; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;: Ca2 + &#xBC0F; &#xB2E8;&#xAE30; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC5D0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;.

&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D; (CaM) &#x901A;&#x8FC7;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7ECF;&#x5DF2;&#x7A81;&#x51FA;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x8D29;&#x5356;&#x3001; &#x8FD0;&#x8F93;&#x3001; &#x548C;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;Ca(2+) &#x51F8;&#x8F6E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x542F;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; Munc13 1 &#x548C; ubMunc13-2 &#x4E2D;&#x7684;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x89C4;&#x5B9A;&#x6B8B;&#x4F59;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7A81;&#x89E6;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89E3;&#x51B3;&#x4E86;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x57DF;&#x529F;&#x80FD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684; 1-5-8-26 &#x51F8;&#x8F6E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6BCD;&#x9898;&#x4E0E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x79FB;&#x52A8;&#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x5757;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6D89;&#x53CA;&#x51F8;&#x8F6E;&#x57DF; Munc13-1&#xFF0C;&#x7ECF; 4-&#x51F8;&#x8F6E;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5149;&#x4EB2;&#x548C;&#x6807;&#x7B7E;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x6A21;&#x5757;&#x5316;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x5728; ubMunc13-2 &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x4E0E;&#x590D;&#x6742;&#x3002;N &#x6A21;&#x5757;&#x53EF;&#x4E0E; EGTA &#x5206;&#x89E3;&#x5230;&#x534A;&#x52A0;&#x8F7D; Munc13/Ca(2+) 2 &#x51F8;&#x8F6E;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7A97;&#x4F53;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x53EF;&#x4EE5; Munc13/Ca(2+)-&#x51F8;&#x8F6E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x51E1; C &#x6A21;&#x5757;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5728; nanomolar &#x4E0A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x6A21;&#x5757;&#x5316;&#x6027;&#x8D28;&#x6765;&#x89E3;&#x91CA;&#x8FD9;&#x4E9B; Munc13 &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x7ECF;&#x89C4;&#x7BA1; [Ca(2+)](i)&#xFF0C;&#x800C; N &#x6A21;&#x5757;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4F20;&#x611F;&#x5668; &#xFF1B; &#x5728; micromolar [Ca(2+)](i)&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD; Ca(2+)/CaM-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684; Munc13 &#x53EF;&#x80FD;&#x6784;&#x6210;&#x77ED;&#x671F;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x7684;&#x7279;&#x6027; Ca(2+) &#x4F9D;&#x8D56;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x5206;&#x5B50;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

Munc13/&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x6A21;&#x5757;&#x5316;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF1A; Ca2 + &#x53CA;&#x77ED;&#x671F;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x4E2D;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x529F;&#x80FD;&#x53CC;&#x89C4;&#x7BA1;&#x63AA;&#x65BD;&#x3002;

Ca(2+) signalling in neurons through calmodulin (CaM) has a prominent function in regulating synaptic vesicle trafficking, transport, and fusion. Importantly, Ca(2+)-CaM binds a conserved region in the priming proteins Munc13-1 and ubMunc13-2 and thus regulates synaptic neurotransmitter release in neurons in response to residual Ca(2+) signals. We solved the structure of Ca(2+)(4)-CaM in complex with the CaM-binding domain of Munc13-1, which features a novel 1-5-8-26 CaM-binding motif with two separated mobile structural modules, each involving a CaM domain. Photoaffinity labelling data reveal the same modular architecture in the complex with the ubMunc13-2 isoform. The N-module can be dissociated with EGTA to form the half-loaded Munc13/Ca(2+)(2)-CaM complex. The Ca(2+) regulation of these Munc13 isoforms can therefore be explained by the modular nature of the Munc13/Ca(2+)-CaM interactions, where the C-module provides a high-affinity interaction activated at nanomolar [Ca(2+)](i), whereas the N-module acts as a sensor at micromolar [Ca(2+)](i). This Ca(2+)/CaM-binding mode of Munc13 likely constitutes a key molecular correlate of the characteristic Ca(2+)-dependent modulation of short-term synaptic plasticity.

Modular architecture of Munc13/calmodulin complexes: dual regulation by Ca2+ and possible function in short-term synaptic plasticity.

Ca(2+) signalisation dans les neurones par le biais de la calmoduline (CaM) a une fonction importante dans la r&eacute;gulation du trafic de v&eacute;sicule synaptique, le transport et fusion. Important, Ca(2+)-CaM lie une r&eacute;gion conserv&eacute;e dans les prot&eacute;ines d&#39;amor&ccedil;age Munc13-1 et ubMunc13-2 et r&eacute;gule ainsi la lib&eacute;ration des neurotransmetteurs synaptiques dans les neurones en r&eacute;ponse &agrave; des signaux Ca(2+) r&eacute;siduelles. Nous avons r&eacute;solu la structure de Ca(2+) 4-CaM en complexe avec le domaine de liaison &agrave; CaM Munc13-1, qui dispose d&#39;un motif de liaison CaM 1-5-8-26 nouveaux avec deux modules structurels mobiles s&eacute;par&eacute;s, chacun portant sur un domaine de CaM. Photoaffinit&eacute; &eacute;tiquetage donn&eacute;es r&eacute;v&egrave;lent la m&ecirc;me architecture modulaire dans le complexe avec l&#39;isoforme ubMunc13-2. Le N-module peut &ecirc;tre dissoci&eacute; avec EGTA pour former le complexe de 2-CaM Munc13/Ca(2+) moiti&eacute; charg&eacute;es. La r&eacute;gulation de la Ca(2+) de ces isoformes Munc13 donc s&#39;explique par la nature modulaire des interactions Munc13/Ca(2+)-CaM, o&ugrave; le C-module fournit une interaction de haute affinit&eacute; activ&eacute;e &agrave; nanomolaires [Ca(2+)](i), tandis que le N-module agit comme un capteur &agrave; micromolaires [Ca(2+)](i). Ce mode de liaison/CaM-Ca(2+) de Munc13 probable constitue un corr&eacute;lat mol&eacute;culaire cl&eacute; de la modulation d&eacute;pendant Ca(2+) caract&eacute;ristique de la plasticit&eacute; synaptique &agrave; court terme.

L&#39;architecture modulaire de Munc13/calmoduline complexes : double r&eacute;gulation par Ca2 + et r&ocirc;le possible dans la plasticit&eacute; synaptique &agrave; court terme.

Ca(2+) Signalisierung in Neuronen durch Calmodulin (CaM) hat eine herausragende Funktion bei der Regulierung synaptische Vesikel Handel, Transport und Fusion. Wichtigsten Ca(2+)-CaM bindet eine konservierte Region in die Grundierung-Proteine Munc13-1 und ubMunc13-2 und somit regelt synaptische Neurotransmitter Freigabe in Neuronen als Reaktion auf die verbleibende Ca(2+) Signale. Wir l&ouml;sen die Struktur der Ca(2+) 4-CaM im Komplex mit der CaM bindende Dom&auml;ne des Munc13-1, die ein neuartiges 1-5-8-26 CaM-Bindung Motiv mit zwei getrennten mobile strukturelle Modulen, jedes mit eine CaM-Dom&auml;ne verf&uuml;gt. Photoaffinity Kennzeichnung Daten zeigen die gleiche modulare Architektur in dem Komplex mit dem ubMunc13-2-Isoform. Das N-Modul kann in Form der H&auml;lfte geladen Munc13/Ca(2+)-2-CaM-Komplex mit EGTA losgel&ouml;st werden. Die Ca(2+)-Verordnung &uuml;ber diese Munc13-Isoformen kann daher durch den modularen Charakter der Munc13/Ca(2+)-CaM Wechselwirkungen, wo das C-Modul eine hoher Affinit&auml;t Interaktion Nanomolar nicht aktiviert bietet erkl&auml;rt werden [Ca(2+)](i), w&auml;hrend das N-Modul als ein Sensor am micromolar [Ca(2+)](i) fungiert. Diese Ca(2+)/CaM-Bindungsmodus des Munc13 wahrscheinlich bildet eine wichtige Molekulare Korrelat von der charakteristischen Ca(2+)-abh&auml;ngige Modulation von kurzfristigen synaptische Plastizit&auml;t.

Modulare Architektur der Munc13/Calmodulin-komplexe: dual-Verordnung von Ca2 + und m&ouml;gliche Funktion in der kurzfristigen synaptische Plastizit&auml;t.

CA(2+) segnalazione nei neuroni attraverso la calmodulina (CaM) ha una funzione importante nella regolazione della vescicola sinaptica traffico, trasporti e fusion. Importante, Ca(2+)-CaM si associa una regione conservata delle proteine di adescamento Munc13-1 e ubMunc13-2 e quindi regola il rilascio di neurotrasmettitore sinaptico nei neuroni in risposta a segnali Ca(2+) residui. Abbiamo risolto la struttura di Ca(2+) (4)-CaM nel complesso con il dominio di CaM-associazione di Munc13-1, che presenta un motivo di CaM-associazione romanzo 1-5-8-26 con due separati moduli strutturali mobili, ciascuno che coinvolgono un dominio CaM. Photoaffinity etichettatura dati rivelano la stessa architettura modulare nel complesso con l&#39;isoforma ubMunc13-2. Il modulo N pu&ograve; essere dissociato con EGTA per formare la met&agrave;-caricato Munc13/Ca(2+) (2)-complesso CaM. Il regolamento Ca(2+) di queste isoforme Munc13 pertanto pu&ograve; essere spiegato dalla natura modulare delle interazioni Munc13/Ca(2+)-CaM, dove il modulo C prevede un&#39;interazione ad alta affinit&agrave; attivata presso nanomolari [Ca(2+)](i), mentre il N-modulo agisce come un sensore al micromolare [Ca(2+)](i). Questa modalit&agrave; di Ca(2+)/CaM-associazione di Munc13 probabilmente costituisce una chiave molecolare in correlazione della caratteristica modulazione della plasticit&agrave; sinaptica a breve termine Ca(2+)-dipendente.

L&#39;architettura modulare di Munc13/calmodulina complessi: doppia regolazione di Ca2 + e possibile funzione nella plasticit&agrave; sinaptica a breve termine.

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3; (CaM) &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x8457;&#x540D;&#x306A;&#x95A2;&#x6570;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;Ca(2+) &#x30AB;&#x30E0; &#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; Munc13 1 &#x304A;&#x3088;&#x3073; ubMunc13 2 &#x306E;&#x7BC0;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x6B8B;&#x7559;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; (4) &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;-Munc13-1 &#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC; 1-5-8-26 CaM &#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; 2 &#x3064;&#x304C;&#x7279;&#x5FB4;&#x306E; CaM &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E; CaM &#x5206;&#x96E2;&#x30E2;&#x30D0;&#x30A4;&#x30EB;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x5404;&#x30AB;&#x30E0; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB; &#x30C6;&#x30A3;&#x30FC; &#x30E9;&#x30D9;&#x30EB; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x540C;&#x3058;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30E9;&#x30FC;&#x578B;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3067; ubMunc13 2 &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;N &#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x534A;&#x5206;&#x304C;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9; Munc13/Ca(2+) &#xFF08;2&#xFF09; &#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B; egta &#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x3067;&#x89E3;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;-&#x30AB;&#x30E0; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; Munc13 &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x8ABF;&#x7BC0; C &#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x30CA;&#x30CE;&#x30E2;&#x30EB; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3001;Munc13/Ca(2+)-&#x30AB;&#x30E0;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30E9;&#x30FC;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3067;&#x304D;&#x308B; [&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3001;N &#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3067;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x52D5;&#x4F5C;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3002;&#x3053;&#x306E; Ca(2+)/CaM &#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9; Munc13 &#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x306E;&#x77ED;&#x671F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306E; Ca(2+) &#x4F9D;&#x5B58;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x5206;&#x5B50;&#x76F8;&#x95A2;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Munc13/&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30E9;&#x30FC; &#x30FB; &#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;: &#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x3088;&#x308B; ca 2 + &#x3068;&#x77ED;&#x671F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3002;

CA en las neuronas a trav&eacute;s de la calmodulina (CaM) tiene una funci&oacute;n importante en la regulaci&oacute;n de la ves&iacute;cula sin&aacute;ptica tr&aacute;fico, transporte y fusi&oacute;n. Importante, Ca(2+)-CaM une a una regi&oacute;n conservada en las prote&iacute;nas de cebado Munc13-1 y ubMunc13-2 y as&iacute; regula la liberaci&oacute;n de neurotransmisores sin&aacute;ptica en neuronas en respuesta a se&ntilde;ales de CA residuales. Resolvimos la estructura del CA 4-CaM en complejo con el dominio de uni&oacute;n a CaM de Munc13-1, que cuenta con un motivo de uni&oacute;n a CaM 1-5-8-26 novela con dos m&oacute;dulos estructurales m&oacute;viles separados, cada una con un dominio de la CaM. Photoaffinity etiquetados datos revelan la misma arquitectura modular en el complejo con la isoforma ubMunc13-2. El m&oacute;dulo N puede ser disociado con EGTA para formar el complejo de 2-CaM Munc13/Ca(2+) media carga. La regulaci&oacute;n de la CA de estas isoformas de Munc13 por lo tanto puede explicarse por la naturaleza modular de las interacciones Munc13/Ca(2+)-CaM, donde el m&oacute;dulo C proporciona una interacci&oacute;n de alta afinidad al nanomolar [Ca(2+)](i), mientras que el m&oacute;dulo N act&uacute;a como un sensor de micromolar [Ca(2+)](i). Este modo de Ca(2+)/CaM-enlace de Munc13 probablemente constituye un clave molecular correlativo de la modulaci&oacute;n caracter&iacute;stica de Ca(2+)-dependiente de la plasticidad sin&aacute;ptica a corto plazo.

Arquitectura modular de Munc13/calmodulina complejos: doble regulaci&oacute;n por Ca2 + y posible funci&oacute;n en la plasticidad sin&aacute;ptica a corto plazo.

Nedd4 1 &#x306F;&#x3001;&#x300C;&#x795E;&#x7D4C;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x767A;&#x9054; downregulated &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x300D;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A; E3 &#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x30EA; &#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3002;&#x5F93;&#x6765;&#x3068;&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E; Nedd4 1 &#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Nedd4 1 &#x304C;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C8;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Nedd4 1&#x3001;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E; TNIK&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Rap2A Rap2A &#x306E; Nedd4 1 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x5236;&#x5FA1;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; Nedd4 1 Rap2 &#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; TNIK &#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3057;&#x3001;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C8;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B; Rap2A &#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Nedd4-1/Rap2A/TNIK &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x6954;&#x5F62;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x30EA; &#x30AC;&#x30FC;&#x30BC; Nedd4 1 Rap2A &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3002;

Nedd4-1 &#x662F;&quot;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x524D;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x53D1;&#x80B2;&#x7F16;&#x7801;&#x86CB;&#x767D;&quot;&#x548C;&#x6700;&#x4E30;&#x5BCC; E3 &#x6CDB;&#x7D20;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x5728;&#x5E38;&#x89C4;&#x548C;&#x6709;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684; Nedd4-1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; Nedd4 1 &#x679D;&#x6676;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;Nedd4-1&#x3001; &#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; TNIK &#x548C; Rap2A &#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x63A7;&#x5236;&#x7684; Rap2A Nedd4-1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x6CDB;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x3002;Nedd4-1 &#x6CDB;&#x6291;&#x5236; Rap2A &#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; TNIK &#x5BB6;&#x65CF;&#x7684; Rap2 &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x679D;&#x6676;&#x751F;&#x957F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA; Nedd4-1/Rap2A/TNIK &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x8C03;&#x8282;&#x8F74;&#x7A81;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x6811;&#x679D;&#x72B6;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;

Rap2A Nedd4-1 &#x6CDB;&#x7D20;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x63A7;&#x5236;&#x8F74;&#x7A81;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

Nedd4-1 is a "neuronal precursor cell expressed and developmentally downregulated protein" and among the most abundant E3 ubiquitin ligases in mammalian neurons. In analyses of conventional and conditional Nedd4-1-deficient mice, we found that Nedd4-1 plays a critical role in dendrite formation. Nedd4-1, the serine/threonine kinase TNIK, and Rap2A form a complex that controls Nedd4-1-mediated ubiquitination of Rap2A. Ubiquitination by Nedd4-1 inhibits Rap2A function, which reduces the activity of Rap2 effector kinases of the TNIK family and promotes dendrite growth. We conclude that a Nedd4-1/Rap2A/TNIK signaling pathway regulates neurite growth and arborization in mammalian neurons.

Regulation of Rap2A by the ubiquitin ligase Nedd4-1 controls neurite development.

Nedd4-1 est une &laquo; cellule pr&eacute;curseur neuronal exprim&eacute;e et r&eacute;prim&eacute;s prot&eacute;ine &raquo; cognitif et parmi les plus abondantes E3 ubiquitine ligases dans les neurones chez les mammif&egrave;res. Dans les analyses des souris de Nedd4-1-deficient conventionnels et conditionnelles, nous avons constat&eacute; que Nedd4-1 joue un r&ocirc;le essentiel dans la formation de dendrite. Nedd4-1, la s&eacute;rine/thr&eacute;onine kinase TNIK et Rap2A forment un complexe qui contr&ocirc;le l&#39;ubiquitination de Rap2A v&eacute;hicul&eacute;e par Nedd4-1. L&#39;ubiquitination de Nedd4-1 inhibe la fonction Rap2A, qui r&eacute;duit l&#39;activit&eacute; des kinases effecteur Rap2 de la famille TNIK et favorise la croissance dendritique. Nous concluons qu&#39;une voie de signalisation de Nedd4-1/Rap2A/TNIK r&eacute;gule la croissance des neurites et ces neurones chez les mammif&egrave;res.

R&egrave;glement de Rap2A par l&#39;ubiquitine ligase Nedd4-1 contr&ocirc;le d&eacute;veloppement des neurites.

Nedd4-1 ist ein &quot;Vorl&auml;ufer der neuronalen Zelle ausgedr&uuml;ckt und entwicklungspolitisch Downregulated Protein&quot; und unter den am h&auml;ufigsten vorkommenden E3-Ubiquitin-Verkn&uuml;pfung in den S&auml;ugetier-Neuronen. In Analysen von konventionellen und bedingte Nedd4-1-defizienten M&auml;usen fanden wir, dass Nedd4-1 Dendrit Bildung eine wichtige Rolle spielt. Nedd4-1, Serin/Threonin-Kinase TNIK und Rap2A bilden einen Komplex, der Nedd4-1-vermittelter Ubiquitination des Rap2A steuert. Ubiquitination von Nedd4-1 hemmt Rap2A-Funktion, die reduziert der Aktivit&auml;t des Rap2-Effektor-Kinasen aus der Familie der TNIK und f&ouml;rdert das Wachstum der Dendrit. Wir schlie&szlig;en, dass ein Nedd4-1/Rap2A/TNIK-Signalweges Neurit Wachstums- und Arborization in den S&auml;ugetier-Neuronen regelt.

Regulierung des Rap2A von der Ubiquitin Ligase Nedd4-1 steuert Neurit Entwicklung.

NEDD4-1 &egrave; un &quot;cellule precursori neuronali espresse ed evolutivamente downregolata proteina&quot; e tra i pi&ugrave; abbondanti E3 ubiquitina ligasi nei neuroni dei mammiferi. Nelle analisi di convenzionali e condizionali topi Nedd4-1-carenti, abbiamo trovato che Nedd4-1 gioca un ruolo fondamentale nella formazione di dendrite. NEDD4-1, la serina/treonina chinasi TNIK e Rap2A formano un complesso che controlla ubiquitination Nedd4-1-mediata di Rap2A. Ubiquitination Nedd4-1 inibisce la funzione di Rap2A, che riduce l&#39;attivit&agrave; della chinasi effettrici Rap2 della famiglia TNIK e promuove la crescita di dendrite. Possiamo concludere che una via di segnalazione Nedd4-1/Rap2A/TNIK regola la crescita dei neuriti e arborization nei neuroni dei mammiferi.

Regolamento di Rap2A dall&#39;ubiquitina ligasi Nedd4-1 controlla lo sviluppo dei neuriti.

Nedd4-1&#xC740; &quot;&#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xC870; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xD604; &#xBC0F; &#xBC1C;&#xB2EC; downregulated &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&quot; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; E3 &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; ligases &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370;. &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xACE0; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; Nedd4 1 &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC950;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBC1C;&#xACAC; Nedd4 1 dendrite&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. Nedd4-1, &#xB2C8; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; TNIK, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; rap2a&#xC758; Rap2A ubiquitination Nedd4 1 &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC591;&#xC2DD;. Nedd4-1 Ubiquitination Rap2 &#xC774;&#xD399;&#xD130; kinases TNIK &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xACE0; dendrite &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; Rap2A &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. Nedd4-1/Rap2A/TNIK &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C; neurite &#xC131;&#xC7A5;&#xACFC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; arborization &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB9AC;&#xAC00; Nedd4 1, rap2a&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; neurite &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nedd4-1 es una &quot;c&eacute;lula neuronal precursor expresado y desarrollo o prote&iacute;na&quot; y entre las m&aacute;s abundantes E3 ligasas de ubiquitina en neuronas mam&iacute;feras. En an&aacute;lisis de ratones Nedd4-1-deficientes convencionales y condicionales, encontramos que Nedd4-1 juega un papel fundamental en la formaci&oacute;n de la dendrita. Nedd4-1, la serina/treonina quinasa TNIK y Rap2A forman un complejo que controla Nedd4-1-mediada por ubiquitinaci&oacute;n de Rap2A. Ubiquitinaci&oacute;n por Nedd4-1 inhibe la funci&oacute;n Rap2A, que reduce la actividad de quinasas de Rap2 efectoras de la familia TNIK y promueve el crecimiento de la dendrita. Concluimos que una v&iacute;a de se&ntilde;alizaci&oacute;n Nedd4-1/Rap2A/TNIK regula el crecimiento de la neurita y arborizaci&oacute;n en las neuronas mam&iacute;feras.

Article	Year
Characterization of the Munc13-calmodulin interaction by photoaffinity labeling. Biochimica et biophysica acta\| PubMed ID: 17049382	2006
Proteolipid protein is required for transport of sirtuin 2 into CNS myelin. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience\| PubMed ID: 17634366	2007
Structural insights into the calmodulin-Munc13 interaction obtained by cross-linking and mass spectrometry. Biochemistry\| PubMed ID: 19492809	2009
Modular architecture of Munc13/calmodulin complexes: dual regulation by Ca2+ and possible function in short-term synaptic plasticity. The EMBO journal\| PubMed ID: 20010694	2010
Regulation of Rap2A by the ubiquitin ligase Nedd4-1 controls neurite development. Neuron\| PubMed ID: 20159449	2010

Kalina Dimova

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