Fabrication of Amperometric Electrodes

Carbon fiber electrodes are crucial for the detection of catecholamine release from vesicles in single cells for amperometry measurements.  Here, we ...

Saint Louis University School of Medicine

&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x5206;&#x6CCC;&#x7279;&#x70B9;&#x6700;&#x8FD1;&#x6210;&#x7ACB;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB; (MPC 9/3 L)&#x3002;MPC 9/3 L &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53C2;&#x4E0E; Ca2 + &#x7684;&#x5F88;&#x591A;-&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x8981;&#x53D1;&#x8868;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; Ca2 +-&#x6D8C;&#x5165;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x5F53;&#x8F6C;&#x67D3;&#x91CD;&#x7EC4; N &#x578B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x57FA; alpha1B&#x3001; beta2a&#x3001; alpha2delta (Cav2.2)&#xFF0C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x793A;&#x9C81;&#x68D2; Ca2 + &#x7535;&#x6D41; &omega;-&#x828B;&#x87BA;&#x6BD2;&#x7D20; GVIA &#x6240;&#x963B;&#x6B62;&#x7684;&#x3002;N &#x578B; Ca2 + &#x7535;&#x6D41;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8FC5;&#x901F;&#x589E;&#x52A0;&#x819C;&#x7535;&#x5BB9;&#x7684; MPC 9/3 L &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; Ca2 + &#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x6302;&#x94A9;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x80DE;&#x4E2D;&#x55DC;&#x94EC;&#x62A5;&#x544A;&#x6216; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x7A81;&#x89E6;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; &#xFF08;synprint&#xFF09; &#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x50CF;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5BF9; N &#x578B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x90FD;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;MPC 9/3 L &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x67D3; LC &#x578B; (alpha1C&#x3001; beta2a&#x3001; alpha2delta&#x3001; Cav1.2&#xFF09; &#x6216; &#xFF08;alpha1G&#x3001; beta2a&#x3001; alpha2delta&#x3001; Cav3.1) &#x7684; T &#x578B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x57FA;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x8981;&#x53D1;&#x8868; synprint &#x7AD9;&#x70B9;&#x3001; &#x8868;&#x793A;&#x9002;&#x5F53; Ca2 + &#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;&#x652F;&#x6301;&#x5FEB;&#x901F;&#x80DE;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64; MPC 9/3 L &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3A;&#x80DE;&#x6CA1;&#x6709;&#x5E76;&#x53D1;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x6E20;&#x9053;&#x6350;&#x6B3E;&#x8868;&#x793A;&#x7279;&#x5B9A; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x72EC;&#x7279;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6A21;&#x5F0F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x533A;&#x5206;&#x4E0D;&#x540C;&#x6E20;&#x9053; Ca2 + Ca2 + &#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;

&#x91CD;&#x7EC4;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x652F;&#x6301;&#x9F20;&#x6807;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;

We have characterized a recently established mouse pheochromocytoma cell line (MPC 9/3L) as a useful model for studying neurotransmitter release and neuroendocrine secretion. MPC 9/3L cells express many of the proteins involved in Ca2+-dependent neurotransmitter release but do not express functional endogenous Ca2+-influx pathways. When transfected with recombinant N-type Ca2+ channel subunits alpha1B,beta2a,alpha2delta (Cav2.2), the cells expressed robust Ca2+ currents that were blocked by omega-conotoxin GVIA. Activation of N-type Ca2+ currents caused rapid increases in membrane capacitance of the MPC 9/3L cells, indicating that the Ca2+ influx was linked to exocytosis of vesicles similar to that reported in chromaffin or PC12 cells. Synaptic protein interaction (synprint) sites, like those found on N-type Ca2+ channels, are thought to link voltage-dependent Ca2+ channels to SNARE proteins involved in synaptic transmission. Interestingly, MPC 9/3L cells transfected with either LC-type (alpha1C, beta2a, alpha2delta, Cav1.2) or T-type (alpha1G, beta2a, alpha2delta, Cav3.1) Ca2+ channel subunits, which do not express synprint sites, expressed appropriate Ca2+ currents that supported rapid exocytosis. Thus MPC 9/3L cells provide a unique model for the study of exocytosis in cells expressing specific Ca2+ channels of defined subunit composition without complicating contributions from endogenous channels. This model may help to distinguish the roles that different Ca2+ channels play in Ca2+-dependent secretion.

Expression of recombinant calcium channels support secretion in a mouse pheochromocytoma cell line.

Nous avons caract&#xE9;ris&#xE9; une lign&#xE9;e de souris a r&#xE9;cemment cr&#xE9;&#xE9; un ph&#xE9;ochromocytome cellule (MPC 9/3L) comme un mod&#xE8;le utile pour &#xE9;tudier la lib&#xE9;ration de neurotransmetteurs et la s&#xE9;cr&#xE9;tion neuroendocrine. MPC cellules 9/3L exprimer la plupart des prot&#xE9;ines impliqu&#xE9;es dans la lib&#xE9;ration de neurotransmetteurs Ca2 +-d&#xE9;pendante, mais n&#x26;#39;expriment pas endog&#xE8;ne fonctionnelle Ca2 + influx de voies. Lorsque transfect&#xE9;es avec la prot&#xE9;ine recombinante de type N de canaux Ca2 + sous-unit&#xE9;s alpha1B, beta2a, alpha2delta (CaV2.2), les cellules expriment robustes Ca2 + courants qui ont &#xE9;t&#xE9; bloqu&#xE9;s par des om&#xE9;ga-conotoxine GVIA. L&#x26;#39;activation de type N Ca2 + courants a entra&#xEE;n&#xE9; une augmentation rapide de la capacitance de la membrane des cellules 9/3L MPC, indiquant que le Ca2 + influx a &#xE9;t&#xE9; li&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;exocytose de v&#xE9;sicules semblables &#xE0; celle rapport&#xE9;e dans chromaffines ou les cellules PC12. Synaptic prot&#xE9;ines d&#x26;#39;interaction (synprint) sites, comme ceux qu&#x26;#39;on trouve sur le type N canaux Ca2 +, semblent &#xE9;tablir un lien entre voltage-d&#xE9;pendants canaux Ca2 + aux prot&#xE9;ines SNARE impliqu&#xE9;s dans la transmission synaptique. Fait int&#xE9;ressant, MPC cellules transfect&#xE9;es avec 9/3L soit de type LC (alpha1C, beta2a, alpha2delta, Cav1.2) ou de type T (alpha1G, beta2a, alpha2delta, Cav3.1) Ca2 sous-unit&#xE9;s Canal +, qui ne sont pas exprimer des sites synprint, exprim&#xE9; appropri&#xE9;es Ca2 + courants qui ont soutenu l&#x26;#39;exocytose rapide. Par cons&#xE9;quent MPC cellules 9/3L fournir un mod&#xE8;le unique pour l&#x26;#39;&#xE9;tude de l&#x26;#39;exocytose dans les cellules exprimant sp&#xE9;cifiques des canaux Ca2 + de composition sous-unit&#xE9; d&#xE9;finie, sans compliquer les contributions des cha&#xEE;nes endog&#xE8;nes. Ce mod&#xE8;le peut aider &#xE0; distinguer les r&#xF4;les que les diff&#xE9;rents canaux Ca 2 + jouent en Ca2 +-d&#xE9;pendante la s&#xE9;cr&#xE9;tion.

Expression des canaux calciques recombinants soutenir la s&#xE9;cr&#xE9;tion dans une lign&#xE9;e cellulaire de souris Ph&#xE9;ochromocytome

Die Expression von rekombinanten Calcium-Kan&#xE4;le unterst&#xFC;tzen Sekretion in einem Maus-Ph&#xE4;ochromozytom-Zelllinie.

Noi abbiamo caratterizzato una linea cellulare di recente costituzione del mouse feocromocitoma (MPC L 9/3) come un utile modello per studiare il rilascio di neurotrasmettitore e neuroendocrina secrezione. MPC L 9/3 cellule esprimono molte delle proteine coinvolte nella Ca2 +-dipendente neurotrasmettitore rilascio ma non esprimono funzionale endogena Ca2 +-vie di afflusso. Quando transfected con ricombinante N-type Ca2 + canale subunit&agrave; alpha1B, beta2a, alpha2delta (Cav2.2), le cellule espresso robuste Ca2 + correnti che sono state bloccate dalla omega-conotossina GVIA. Attivazione di correnti di tipo N Ca2 + ha causato aumenti repentini nella capacit&agrave; di membrana del MPC cellule L 9/3, che indica che l&#39;afflusso di Ca2 + &egrave; stato legato per esocitosi di vescicole simili a quella riportata nel cromaffini o cellule PC12. Siti di interazione (synprint) della proteina sinaptica, come quelle che si trovano su canali tipo N Ca2 +, sono pensati per collegare canali Ca2 + voltaggio-dipendenti per rullante proteine coinvolte nella trasmissione sinaptica. &Egrave; interessante notare, MPC L 9/3 celle transfected con LC-tipo (alpha1C, beta2a, alpha2delta, Cav1.2) o T-tipo (alpha1G, beta2a, alpha2delta, Cav3.1) Ca2 + subunit&agrave; di canale, che non esprimono synprint siti, espresso appropriate Ca2 + correnti che supportato esocitosi rapida. Cos&igrave; MPC L 9/3 celle forniscono un unico modello per lo studio della esocitosi nelle cellule che esprimono specifici canali Ca2 + di composizione definita subunit&agrave; senza complicare contributi da canali endogeni. Questo modello pu&ograve; aiutare a distinguere i ruoli che diversi canali Ca2 + giocano in Ca2 +-dipendente dalla secrezione.

Espressione dei canali del calcio ricombinante supportano la secrezione in una linea cellulare di feocromocitoma del mouse.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8910;&#x8272;&#x7D30;&#x80DE;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#xFF08;MPC 9/3L&#xFF09;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; MPC 9/3L&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;Ca2 +&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;Ca 2 +-&#x6D41;&#x5165;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;N&#x578B;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;alpha1B&#x3001;beta2a&#x3001;alpha2delta&#xFF08;Cav2.2&#xFF09;&#x3067;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x3C9;-&#x30B3;&#x30CE;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;GVIA&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5805;&#x7262;&#x306A;Ca2 +&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; N-&#x578B;Ca2 +&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x304C;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;PC12&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x793A;&#x3059;MPC 9/3L&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x819C;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306E;&#x6025;&#x6FC0;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;N&#x578B;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF08;synprint&#xFF09;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;SNARE&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;MPC 9/3L&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;LC&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#xFF08;alpha1C&#x3001;beta2a&#x3001;alpha2delta&#x3001;Cav1.2&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;synprint&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;T-&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#xFF08;alpha1G&#x3001;beta2a&#x3001;alpha2delta&#x3001;Cav3.1&#xFF09;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x9069;&#x5207;&#x306A;Ca2 +&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;MPC 9/3L&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x8907;&#x96D1;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;Ca2 +&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x5206;&#x6CCC;&#x306B;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8910;&#x8272;&#x7D30;&#x80DE;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C; &#xBC0F; neuroendocrine &#xBD84; &#xBE44; &#xACF5;&#xBD80;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xB85C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC124;&#xB9BD;&#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; pheochromocytoma &#xC140; &#xB77C;&#xC778; (MPC 9/3 L) &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE08; &#xD1B5; &#xC704; 9/3 L &#xC140; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; Ca2 +&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740;-&#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xC0DD; Ca2 +-&#xC720;&#xC785; &#xACBD;&#xB85C;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; N &#xD615; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; alpha1B, beta2a, alpha2delta &#xD398; &#xB54C; (Cav2.2) &#xC140; &#xD45C;&#xD604; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; Ca2 + &#xC804;&#xB958; &#xC624;&#xBA54;&#xAC00; conotoxin GVIA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD588;&#xB2E4;. N &#xD615; Ca2 +&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB9C9; &#xCEE4;&#xD328;&#xC2DC;&#xD134;&#xC2A4; MPC&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC778; 9/3 L &#xC140;, Ca2 + &#xC720;&#xC785; vesicles &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; exocytosis &#xC5F0;&#xACB0; &#xD588;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB610;&#xB294; PC12 &#xC138;&#xD3EC;. N &#xD615; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD55C; &#xAC83;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; (synprint) &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; SNARE &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, MPC 9/3 L &#xC140; LC &#xD0C0;&#xC785; (alpha1C, beta2a, alpha2delta, Cav1.2) &#xB610;&#xB294; T-&#xD0C0;&#xC785; (alpha1G, beta2a, alpha2delta, Cav3.1)&#xC640; synprint &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; subunits, &#xD398;, &#xC801;&#xC808; &#xD55C; Ca2 + &#xC804;&#xB958; &#xBE60;&#xB978; exocytosis &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD45C;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; MPC 9/3 L &#xC140; exocytosis &#xC0DD; &#xCC44;&#xB110; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xAE30;&#xBD80;&#xAE08;&#xC744; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xAD6C;&#xC131;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0;&#xC720; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA8;&#xB378; &#xB2E4;&#xB978; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; Ca2 + &#xC7AC;&#xC0DD; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774;-&#xC885;&#xC18D; &#xBD84; &#xBE44;.

&#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD615; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; pheochromocytoma &#xC140; &#xC120; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hemos caracterizado un feocromocitoma de reciente creaci&#xF3;n del rat&#xF3;n l&#xED;nea celular (MPC 9/3L) como un modelo &#xFA;til para estudiar la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores y la secreci&#xF3;n neuroendocrina. MPC c&#xE9;lulas 9/3L expresar muchas de las prote&#xED;nas implicadas en la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores de Ca2 +-dependiente, pero no expresan end&#xF3;gena funcional de Ca2 +-afluencia v&#xED;as. Cuando transfectadas con recombinante de tipo N de canales Ca2 + subunidades alpha1B, beta2a, alpha2delta (Cav2.2), las c&#xE9;lulas expresaron fuertes corrientes de Ca2 + que fueron bloqueadas por GVIA omega-conotoxina. La activaci&#xF3;n de tipo N Ca2 + corrientes caus&#xF3; un r&#xE1;pido aumento en la capacitancia de la membrana de las c&#xE9;lulas MPC 9/3L, indicando que el influjo de Ca2 + fue ligado a exocitosis de ves&#xED;culas similares a la descrita en cromaf&#xED;n o c&#xE9;lulas PC12. De interacci&#xF3;n de prote&#xED;nas sin&#xE1;pticas (synprint) los sitios, como las que se encuentran en la N-tipo de canales de Ca2 +, se cree que vincular dependientes de voltaje canales de Ca2 + a las prote&#xED;nas SNARE que participan en la transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica. Curiosamente, MPC c&#xE9;lulas transfectadas con cualquiera 9/3L LC-tipo (alpha1C, beta2a, alpha2delta, Cav1.2) o de tipo T (alpha1G, beta2a, alpha2delta, Cav3.1) Ca2 + subunidades de canal, que no expresan los sitios synprint, expres&#xF3; apropiadas corrientes de Ca2 + que apoyaron la exocitosis r&#xE1;pida. De este modo MPC c&#xE9;lulas 9/3L proporcionar un modelo &#xFA;nico para el estudio de la exocitosis en c&#xE9;lulas que expresan canales de Ca2 + espec&#xED;ficos de la composici&#xF3;n de la subunidad definida sin la complicaci&#xF3;n de las contribuciones de los canales end&#xF3;genos. Este modelo puede ayudar a distinguir los roles que los diferentes canales de Ca2 + desempe&#xF1;an en la Ca2 +-dependiente de la secreci&#xF3;n.

Expresi&#xF3;n de los canales de calcio recombinantes apoyar la secreci&#xF3;n de una l&#xED;nea de c&#xE9;lulas feocromocitoma

&#x97E6;&#x5F17;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5BF9;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x6B65;&#x6001;&#x3001; &#x5171;&#x6D4E;&#x5931;&#x8C03;&#x3001; &#x8F7B;&#x5EA6;&#x8FD0;&#x52A8;&#x591A;&#x52A8;&#x4E0D;&#x5747;&#x5300;&#x7F16;&#x7EC7;&#x548C;&#x5076;&#x5C14;&#xFF0C;-&#x9635;&#x631B;&#x53D1;&#x4F5C;&#x3002;G &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x518D;&#x52A0;&#x4E0A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5185;&#x5FC3;&#x6574;&#x6D41; K + &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;GIRK2&#xFF0C;&#x5F15;&#x8D77;&#x770B;&#x5230;&#x97E6;&#x5F17;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x75C7;&#x72B6;&#x3002;&#x4E3B;&#x8981;&#x88AB;&#x53D7;&#x5927;&#x8111;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9886;&#x57DF;&#x3002;&#x5C0F;&#x8111;&#x9897;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x4E0D;&#x4E45;&#x540E;&#x51FA;&#x751F;&#x548C;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x80FD;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x8111;&#x5185;&#x9ED1;&#x8D28;&#x4E25;&#x91CD;&#x67AF;&#x7AED;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x7BC7;&#x6587;&#x7AE0;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x8BA8;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8; GIRK &#x6E20;&#x9053;&#x53D1;&#x73B0;&#x672C;&#x673A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x6216;&#x5F15;&#x5165;&#x8868;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EA6;&#x68C0;&#x8BA8;&#x4E86;&#x4E24;&#x79CD;&#x673A;&#x578B;&#xFF0C;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x97E6;&#x5F17;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x7EC6;&#x8282;&#x3002;

&#x97E6;&#x5F17;&#x9F20;&#x6807;&#x5C0F;&#x8111;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;

Mice with the weaver mutation exhibit an uneven weave to their gait, ataxia, mild locomotor hyperactivity and, occasionally, tonic-clonic seizures. A single amino acid mutation in a G-protein coupled, inwardly rectifying K+ channel, GIRK2, gives rise to the symptoms seen in the weaver mice. Two areas of the brain are primarily affected. Cerebellar granule cell neurons die soon after birth and dopaminergic neurons are severely depleted in the substantia nigra. In this article we review recent studies of wild-type and mutant GIRK channels found in native cells or introduced into expression systems. We also review two models that explain some of the details leading to the neuronal cell death observed in weaver mice.

Cell death in weaver mouse cerebellum.

Souris avec la mutation tisserand pr&#xE9;sentent une in&#xE9;gale armure &#xE0; leur d&#xE9;marche, l&#x26;#39;ataxie, hyperactivit&#xE9; locomotrice doux et, occasionnellement, des crises tonico-cloniques. Une mutation d&#x26;#39;un seul acide amin&#xE9; dans une coupl&#xE9; aux prot&#xE9;ines G, &#xE0; rectification entrante canal K +, GIRK2, donne lieu &#xE0; des sympt&#xF4;mes observ&#xE9;s chez les souris tisserand. Deux zones du cerveau sont les premi&#xE8;res touch&#xE9;es. Cervelet neurones cellulaires granulaires meurent peu apr&#xE8;s la naissance et les neurones dopaminergiques sont gravement appauvris dans la substantia nigra. Dans cet article nous passons en revue des &#xE9;tudes r&#xE9;centes de canaux Girk de type sauvage et mutant trouv&#xE9;s dans les cellules natives ou introduites dans les syst&#xE8;mes d&#x26;#39;expression. Nous examinons aussi les deux mod&#xE8;les qui expliquent quelques-uns des d&#xE9;tails menant &#xE0; la mort cellulaire neuronale observ&#xE9;e chez les souris tisserand.

Mort cellulaire dans le cervelet de souris Weaver

Der Zelltod in weaver Maus Kleinhirn.

I topi con la mutazione di tessitore esibiscono un intreccio irregolare alla loro andatura, atassia, lieve iperattivit&agrave; dell&#39;apparato locomotore e, occasionalmente, crisi tonico-cloniche. Una mutazione di singolo amminoacido in una proteina G accoppiata, interiormente che rettifica il canale K +, GIRK2, d&agrave; luogo a sintomi visti nei topi tessitore. Due aree del cervello sono principalmente interessati. I neuroni delle cellule cerebellari granulo muoiono poco dopo la nascita e dopaminergico neuroni sono gravemente impoveriti nella substantia nigra. In questo articolo passiamo in rassegna gli studi recenti di wild-type e mutanti canali GIRK trovati nelle cellule native o introdotti sistemi di espressione. Passiamo in Rassegna anche due modelli che spiegano alcuni dei dettagli che portano alla morte delle cellule neuronali osservata nei topi tessitore.

Morte delle cellule nel cervelletto di topo tessitore.

&#x30A6;&#x30A3;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x4E0D;&#x5747;&#x4E00;&#x306A;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x6B69;&#x884C;&#x306B;&#x7E54;&#x308A;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x5931;&#x8ABF;&#x3001;&#x8EFD;&#x5EA6;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x4EA2;&#x9032;&#x3068;&#x3001;&#x6642;&#x6298;&#x3001;&#x5F37;&#x76F4;&#x9593;&#x4EE3;&#x767A;&#x4F5C;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x5185;&#x5411;&#x304D;K +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3001;GIRK2&#x6574;&#x6D41;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A3;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x75C7;&#x72B6;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3002;&#x8133;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C0F;&#x8133;&#x9846;&#x7C92;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x51FA;&#x751F;&#x5F8C;&#x307E;&#x3082;&#x306A;&#x304F;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x9ED2;&#x8CEA;&#x306B;&#x67AF;&#x6E07;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8A18;&#x4E8B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x7CFB;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x578B;GIRK&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x30A6;&#x30A3;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A6;&#x30A3;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5C0F;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;

&#xC704; &#xBC84; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC804;&#xC2DC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC78;&#xC74C; &#xAC78;&#xC774;, &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC2E4; &#xC870; &#xC99D;, &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xC6B4;&#xC804; &#xACFC;&#xB2E4; &#xACE0;&#xB974;&#xC9C0; &#xC9C1;&#xC870; &#xBC0F; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD1A0; &#xB2C9;&#xC758; clonic &#xBC1C;&#xC791;. G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, &#xC704; &#xBC84; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xC0C1;&#xC744; &#xC0DD;&#xACA8;&#xB098;&#xAC8C; &#xB0B4;&#xC2EC; K + &#xCC44;&#xB110;, GIRK2, &#xC815;&#xB958;. &#xB450;&#xB1CC;&#xC758; &#xB450; &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC18C; &#xB1CC;&#xACFC; &#xB9BD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xD0C4;&#xC0DD;&#xACFC; dopaminergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; substantia nigra&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2EC;&#xAC01; &#xD558; &#xAC8C; &#xACE0;&#xAC08; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xACE7; &#xC8FD;. &#xC774; &#xBB38;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xBC0F; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; GIRK &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB610;&#xB294; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB3C4;&#xC785;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAC80;&#xD1A0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC704; &#xBC84; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744; &#xC120;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xBD80; &#xC815;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xAC80;&#xD1A0;.

&#xC704; &#xBC84; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC18C; &#xB1CC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;.

Los ratones con la mutaci&#xF3;n presentan una desigual tejedora tejido a su paso, ataxia, hiperactividad locomotora leve y, ocasionalmente, convulsiones t&#xF3;nico-cl&#xF3;nicas. Una mutaci&#xF3;n de un solo amino&#xE1;cido en un acoplado a prote&#xED;nas G, interiormente rectificar canal de K +, GIRK2, da lugar a los s&#xED;ntomas observados en los ratones tejedora. Dos &#xE1;reas del cerebro son los m&#xE1;s afectados. Cerebelo neuronas de c&#xE9;lulas granulares mueren poco despu&#xE9;s del nacimiento y de las neuronas dopamin&#xE9;rgicas se encuentran gravemente diezmadas en la sustancia negra. En este art&#xED;culo se revisan los estudios recientes de los canales GIRK de tipo salvaje y mutante que se encuentran en las c&#xE9;lulas nativas o introducidas en los sistemas de expresi&#xF3;n. Realizamos una revisi&#xF3;n de dos modelos que explican algunos de los detalles que conducen a la muerte neuronal observada en los ratones tejedor.

La muerte celular en el cerebelo de rat&#xF3;n Weaver

&#x7A81;&#x89E6;&#x524D; N &#x578B; Ca2 + &#x901A;&#x9053; alpha1B CaV2.2&#xFF09; &#x8BA4;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7F51;&#x7F57; &#xFF08;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143; 25 &#x53D7;&#x4F53;&#xFF09; &#x590D;&#x6742;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x901A;&#x8FC7;&#x57DF; II &#x548C; III alpha1B &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x80DE;&#x5185;&#x73AF;&#x8DEF;&#x4E0A;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x86CB;&#x767D; (synprint) &#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;Syntaxin &#x5728; N &#x578B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x9700;&#x8981;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x5FEB;&#x901F;&#x80DE; Ca2 + &#x79BB;&#x5B50;&#x6D8C;&#x5165;&#x4E00;&#x76F4;&#x76F8;&#x5F53;&#x5927;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x4E3B;&#x9898;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE;&#x91CD;&#x7EC4; alpha1B Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x5220;&#x9664; synprint &#x7F51;&#x7AD9;&#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; alpha1B &#x6216; synprint &#x7F3A;&#x5931;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x77AC;&#x6001;&#x67D3;&#x9F20;&#x6807; &#xFF08;MPC&#xFF09; &#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB; 9/3 L&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x523A;&#x6FC0;&#x80DE;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x5206;&#x6CCC;&#x88AB;&#x8BF1;&#x53D1;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5916;&#x90E8;&#x8F6C;&#x67D3; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x57FA;&#x3002;&#x7535;&#x6D41;&#x7535;&#x538B;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x53CA;&#x7A81;&#x53D8;&#x578B; alpha1B &#x542B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x603B; Ca2 + &#x6761;&#x76EE;&#x662F;&#x7A0D;&#x5927;&#x4E00;&#x70B9;&#x7684; synprint &#x5220;&#x9664;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x65F6; Ca2 + &#x8FDB;&#x5165;&#x88AB;&#x89C4;&#x8303;&#x5316;&#x4E3A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x548C;&#x9650;&#x4E8E;&#x5177;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C; Ca2 + &#x6761;&#x76EE; &#xFF08;&#x5927;&#x7EA6; 150 x 10(6) Ca2 + &#x79BB;&#x5B50;/pF &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5927;&#x5C0F;&#xFF09; &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3001; &#x603B;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x5206;&#x6CCC;&#xFF0C;&#x7531;&#x7535;&#x5BB9;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x90FD;&#x6709;&#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x51CF;&#x5C11;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x793A;&#x7684; synprint &#x5220;&#x9664;&#x7A81;&#x53D8;&#x6E20;&#x9053;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6E20;&#x9053;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x5185;, &#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11; alpha1B synprint &#x7F3A;&#x5931;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x4E9A;&#x57FA;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; synprint &#x7F51;&#x7AD9;&#x5411;&#x80DE; Ca2 + &#x901A;&#x8FC7; alpha1B &#x542B; Ca2 + &#x6E20;&#x9053;&#x6D8C;&#x5165;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x8026;&#x5408;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

&#x5220;&#x9664;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x86CB;&#x767D;&#x4E92;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9; (CaV2.2) N &#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;

Presynaptic N-type Ca2+ channels (CaV2.2, alpha1B) are thought to bind to SNARE (SNAP-25 receptor) complex proteins through a synaptic protein interaction (synprint) site on the intracellular loop between domains II and III of the alpha1B subunit. Whether binding of syntaxin to the N-type Ca2+ channels is required for coupling Ca2+ ion influx to rapid exocytosis has been the subject of considerable investigation. In this study, we deleted the synprint site from a recombinant alpha1B Ca2+ channel subunit and transiently transfected either the wild-type alpha1B or the synprint deletion mutant into mouse pheochromocytoma (MPC) cell line 9/3L, a cell line that has the machinery required for rapid stimulated exocytosis but lacks endogenous voltage-dependent Ca2+ channels. Secretion was elicited by activation of exogenously transfected Ca2+ channel subunits. The current-voltage relationship was similar for the wild-type and mutant alpha1B-containing Ca2+ channels. Although total Ca2+ entry was slightly larger for the synprint deletion channel, compared with the wild-type channel, when Ca2+ entry was normalized to cell size and limited to cells with similar Ca2+ entry (approximately 150 x 10(6) Ca2+ ions/pF cell size), total secretion and the rate of secretion, determined by capacitance measurements, were significantly reduced in cells expressing the synprint deletion mutant channels, compared with wild-type channels. Furthermore, the amount of endocytosis was significantly reduced in cells with the alpha1B synprint deletion mutant, compared with the wild-type subunit. These results suggest that the synprint site is necessary for efficient coupling of Ca2+ influx through alpha1B-containing Ca2+ channels to exocytosis.

Deletion of the synaptic protein interaction site of the N-type (CaV2.2) calcium channel inhibits secretion in mouse pheochromocytoma cells.

Pr&#xE9;synaptiques de type N canaux Ca2 + (CaV2.2, alpha1B) sont consid&#xE9;r&#xE9;s de se lier &#xE0; SNARE (SNAP-25 r&#xE9;cepteur) les prot&#xE9;ines complexes gr&#xE2;ce &#xE0; une interaction prot&#xE9;ine synaptique (synprint) site sur la boucle intracellulaire entre les domaines II et III de la sous-unit&#xE9; alpha1B. Que ce soit la liaison de la syntaxine aux N de type canaux Ca2 + est n&#xE9;cessaire pour le couplage d&#x26;#39;ions Ca2 + influx &#xE0; l&#x26;#39;exocytose rapide a fait l&#x26;#39;objet d&#x26;#39;une enqu&#xEA;te approfondie. Dans cette &#xE9;tude, nous avons supprim&#xE9; le site &#xE0; partir d&#x26;#39;un recombinant synprint alpha1B Ca2 + canal sous-unit&#xE9; et transfect&#xE9;es de fa&#xE7;on transitoire, soit l&#x26;#39;alpha1B de type sauvage ou la suppression synprint mutant dans un ph&#xE9;ochromocytome souris (MPC) lign&#xE9;e cellulaire 9/3L, une lign&#xE9;e cellulaire qui a la machinerie n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;exocytose stimul&#xE9; rapide, mais manque de endog&#xE8;nes voltage-d&#xE9;pendants canaux Ca2 +. La s&#xE9;cr&#xE9;tion a &#xE9;t&#xE9; provoqu&#xE9;e par l&#x26;#39;activation de Ca2 + transfect&#xE9;es de mani&#xE8;re exog&#xE8;ne sous-unit&#xE9;s de canaux. La relation courant-tension a &#xE9;t&#xE9; similaire pour les sauvages et mutantes alpha1B contenant les canaux Ca2 +. Bien que totale de Ca 2 + entr&#xE9;e est l&#xE9;g&#xE8;rement plus grand pour le canal de suppression synprint, par rapport &#xE0; la cha&#xEE;ne de type sauvage, lorsque Ca 2 + entr&#xE9;e a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;talonn&#xE9;e par rapport &#xE0; la taille des cellules et limit&#xE9;e &#xE0; des cellules avec similaire Ca 2 + entr&#xE9;e (environ 150 x 10 (6) Ca 2 + ions ou de cellules pF Taille), la s&#xE9;cr&#xE9;tion total et le taux de s&#xE9;cr&#xE9;tion d&#xE9;termin&#xE9;e par les mesures de capacit&#xE9;, ont &#xE9;t&#xE9; sensiblement r&#xE9;duite dans des cellules exprimant des canaux de suppression synprint mutantes, par rapport &#xE0; des canaux de type sauvage. En outre, le montant de l&#x26;#39;endocytose a &#xE9;t&#xE9; significativement r&#xE9;duite dans les cellules avec le mutant alpha1B synprint suppression, par rapport &#xE0; la sous-unit&#xE9; de type sauvage. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que le site synprint est n&#xE9;cessaire pour un couplage efficace de Ca2 + influx par alpha1B contenant canaux Ca2 + &#xE0; l&#x26;#39;exocytose.

Suppression du site d&#x26;#39;interaction prot&#xE9;ine synaptique de la Manche calciques de type N (CaV2.2) inhibe la s&#xE9;cr&#xE9;tion de cellules de ph&#xE9;ochromocytome de souris

Die Deletion des synaptischen Protein-Interaktion des N-Typ (CaV2.2) Calcium-Kanal-Sekretion inhibiert in Maus-Ph&#xE4;ochromozytom-Zellen.

Presinaptiche canali tipo N Ca2 + (CaV2.2, alpha1B) sono pensati di legarsi alle proteine del complesse SNARE (SNAP-25 receptor) attraverso un sito di interazione (synprint) della proteina sinaptica sul loop intracellulare tra domini II e III della subunit&agrave; alpha1B. Se &egrave; necessaria per l&#39;accoppiamento afflusso di ioni Ca2 + per esocitosi rapida associazione di Sintaxina ai canali tipo N Ca2 + &egrave; stata oggetto di indagine considerevole. In questo studio, abbiamo eliminato il sito synprint da una subunit&agrave; ricombinanti alpha1B Ca2 + canale e transitoriamente transfected sia il selvaggio-tipo alpha1B o il mutante di delezione di synprint in cellule di feocromocitoma (MPC) del mouse la linea 9/3 L, una linea cellulare che ha i macchinari necessari per esocitosi rapida stimolata ma manca endogeni canali Ca2 + voltaggio-dipendenti. La secrezione &egrave; stata provocata dall&#39;attivazione della subunit&agrave; esogenicamente transfected Ca2 + canale. La relazione corrente-tensione era simile per i wild-type e mutanti contenenti alpha1B Ca2 + canali. Sebbene totale Ca2 + voce era leggermente pi&ugrave; grande per il canale di eliminazione synprint, confrontato con il canale wild-type, quando Ca2 + entrata &egrave; stata normalizzata alla dimensione delle celle e limitata a cellule con entrata Ca2 + simile (circa 150 x 10 Ca2 + ioni/pF cell size), secrezione totale e il tasso di secrezione, determinato da misure di capacit&agrave;, sono sensibilmente ridotti nelle cellule che esprimono i canali mutanti di delezione synprint, rispetto al wild-type canali. Inoltre, la quantit&agrave; di endocitosi &egrave; stata significativamente ridotta nelle cellule con il mutante di delezione alpha1B synprint, confrontato con la subunit&agrave; di tipo selvatico. Questi risultati suggeriscono che il sito synprint &egrave; necessario per l&#39;accoppiamento efficiente di Ca2 + afflusso attraverso canali Ca2 + alpha1B contenenti esocitosi.

Eliminazione del sito di interazione della proteina sinaptica del canale del calcio di tipo N (CaV2.2) inibisce la secrezione in cellule di feocromocitoma del mouse.

&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;N&#x578B;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;CaV2.2&#x3001;alpha1B&#xFF09;&#x306F;alpha1B&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;II&#x3068;III&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x4E0A;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF08;synprint&#xFF09;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;SNARE&#xFF08;SNAP-25&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF09;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; N&#x578B;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;+&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6D41;&#x5165;&#x306F;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x8910;&#x8272;&#x7D30;&#x80DE;&#x816B;&#xFF08;MPC&#xFF09;&#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;9/3L&#x3001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3078;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;alpha1B&#x307E;&#x305F;&#x306F;synprint&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3092;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;alpha1B Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;synprint&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x3001;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5206;&#x6CCC;&#x306F;&#x5916;&#x751F;&#x7684;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96FB;&#x6D41; - &#x96FB;&#x5727;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;alpha1B&#x542B;&#x6709;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x7DCF;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x306F;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#xFF08;&#x7D04;150&#xD7;10&#xFF08;6&#xFF09;&#x306E;Ca2 +&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;/ pF&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x30BB;&#x30EB;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306B;&#x6B63;&#x898F;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3001;synprint&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x82E5;&#x5E72;&#x5927;&#x304D;&#x3081;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#xFF09;&#x3001;&#x9759;&#x96FB;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5408;&#x8A08;&#x5206;&#x6CCC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x6CCC;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;synprint&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x91CF;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;alpha1B synprint&#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;synprint&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;+&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;alpha1B&#x542B;&#x6709;&#x306E;Ca 2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

N-&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#xFF08;CaV2.2&#xFF09;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8910;&#x8272;&#x7D30;&#x80DE;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;

Presynaptic N &#xD615; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; (CaV2.2, alpha1B) &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB8E8;&#xD504; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; II &#xBC0F; III&#xC5D0; alpha1B &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC0AC;&#xC774; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; (synprint) &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC62C; &#xBB34; (&#xC2A4;&#xB0C5;-25 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB41C;&#xB2E4;. Syntaxin N &#xD615; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC778;&#xC9C0; &#xBE60;&#xB978; exocytosis&#xC744; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; Ca2 + &#xC774;&#xC628; &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC218; &#xC0AC;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC774; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; alpha1B Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; synprint &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AD;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; transiently &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; (MPC) pheochromocytoma &#xC140; &#xB77C;&#xC778; 9/3 L, &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; exocytosis&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xAE30;&#xACC4;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC0DD; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xBD80;&#xC871; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; alpha1B &#xB610;&#xB294; synprint &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD398;. &#xBD84; &#xBE44;&#xB294; exogenously transfected Ca2 + &#xCC44;&#xB110; subunits&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB85C; elicited. &#xC804;&#xB958;-&#xC804;&#xC555; &#xAD00;&#xACC4;&#xB294; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xBC0F; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; alpha1B &#xB4E4;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9;&#xC740; &#xC140; &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; &#xC815;&#xC0C1;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9; (&#xC57D; 150 x &#xC2DC;&#xBBFC;&#xAD8C;&#xC774; Ca2 + &#xC774;&#xC628;/pF &#xC140; &#xD06C;&#xAE30;)&#xC640; &#xC140;, &#xCD1D; &#xBD84; &#xBE44; &#xBD84; &#xBE44;, &#xCEE4;&#xD328;&#xC2DC;&#xD134;&#xC2A4; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB97C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC140; synprint &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCC44;&#xB110; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; &#xCD1D; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9;&#xC740; &#xC57D;&#xAC04; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; synprint &#xC0AD;&#xC81C; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB354; &#xD070;&#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;. &#xB610;&#xD55C;, endocytosis &#xAE08;&#xC561; alpha1B synprint &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC18C; &#xD06C;&#xAC8C;&#xB294; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; synprint &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; exocytosis&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; alpha1B Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ca2 + &#xC720;&#xC785;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

(CaV2.2) N-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; pheochromocytoma &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

Presin&#xE1;pticos de tipo N-canales de Ca2 + (Cav2.2, alpha1B) se cree que se unen a SNARE (SNAP-25 receptores), las prote&#xED;nas complejas a trav&#xE9;s de una interacci&#xF3;n de la prote&#xED;na sin&#xE1;ptica (synprint) sitio en el bucle intracelular entre los dominios II y III de la subunidad alpha1B. Si la uni&#xF3;n de syntaxin a las de tipo N Ca2 + canales se requiere para el acoplamiento de Ca2 + afluencia de iones para exocitosis r&#xE1;pida ha sido objeto de investigaci&#xF3;n considerable. En este estudio, se elimin&#xF3; el sitio synprint de un recombinante alpha1B subunidad del canal de Ca2 + y transfectadas transitoriamente ya sea el alpha1B de tipo salvaje o la supresi&#xF3;n synprint mutante en feocromocitoma rat&#xF3;n (MPC) la l&#xED;nea celular 9/3L, una l&#xED;nea celular que cuenta con la maquinaria necesaria para la exocitosis r&#xE1;pida estimulada, pero carece end&#xF3;genas dependientes de voltaje canales de Ca2 +. La secreci&#xF3;n fue provocada por la activaci&#xF3;n de Ca2 + ex&#xF3;gena transfectadas subunidades de los canales. La relaci&#xF3;n corriente-voltaje fue similar para los de tipo salvaje y mutante alpha1B que contienen los canales de Ca2 +. Aunque total de Ca2 + entrada era ligeramente m&#xE1;s grande para el canal de supresi&#xF3;n synprint, en comparaci&#xF3;n con el canal de tipo salvaje, cuando entrada de Ca2 + se normaliz&#xF3; a tama&#xF1;o de la celda y se limita a las c&#xE9;lulas con similares entrada de Ca2 + (aproximadamente 150 x 10 (6) iones Ca2 + o c&#xE9;lulas pF tama&#xF1;o), la secreci&#xF3;n total y la tasa de secreci&#xF3;n, determinada por mediciones de capacitancia, se redujo significativamente en c&#xE9;lulas que expresan los canales de deleci&#xF3;n synprint mutantes, en comparaci&#xF3;n con los canales de tipo salvaje. Adem&#xE1;s, la cantidad de endocitosis se redujo significativamente en las c&#xE9;lulas con el alpha1B synprint mutante de deleci&#xF3;n, en comparaci&#xF3;n con la subunidad de tipo salvaje. Estos resultados sugieren que el sitio synprint es necesario para el acoplamiento eficiente de Ca2 + a trav&#xE9;s de afluencia alpha1B contienen Ca2 + canales a exocitosis.

La eliminaci&#xF3;n del sitio de interacci&#xF3;n de prote&#xED;nas Synaptic del canal de calcio tipo N (Cav2.2) inhibe la secreci&#xF3;n de c&#xE9;lulas de feocromocitoma de rat&#xF3;n

&#x7A81;&#x89E6; (&#x6F84;&#x6D77;) &#x6211;&#x662F; Ca2 +-&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x516C;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x4E3A; Ca2 +-&#x8C03;&#x8282;&#x53D8;&#x9001;&#x5668;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E89;&#x8BAE;&#x4ECD;&#x8FBE; syt I &#x662F;&#x5426;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FD0;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x4F5C;&#x7528;&#x5E76;&#x5728;&#x5269;&#x4F59;&#x7684;&#x6F84;&#x6D77;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x662F;&#x5426;&#x8FD8;&#x4F5C;&#x4E3A; Ca2 + &#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210;&#x4E0D;&#x65AD;&#x8868;&#x793A;&#x77ED;&#x53D1;&#x5939; RNA (shRNA) &#x4EE5;&#x6C89;&#x9ED8;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6F84;&#x6D77; PC12 &#x7EC6;&#x80DE; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x6211;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x660E;&#x6240;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6F84;&#x6D77;&#x6211;&#x7279;&#x522B;&#x5B89;&#x9759;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6574;&#x5408;&#x6211;&#x76F8;&#x6BD4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7A7A; shRNA &#x77E2;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x7684; shRNA-&#x6F84;&#x6D77;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E3B;&#x8981;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6F84;&#x6D77;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6F84;&#x6D77;&#x4E5D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D7;&#x5230;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x662F;&#x9677;&#x9631; (&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N ethylmaleimide &#x654F;&#x611F;&#x56E0;&#x5B50;&#x9644;&#x4EF6;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53;) &#x86CB;&#x767D; syt I &#x6C34;&#x5E73;&#x65F6;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x88AB;&#x649E;&#x5012;&#x3002;&#x9759;&#x606F; Ca2 + &#x548C;&#x523A;&#x6FC0; Ca2 + &#x6D8C;&#x5165;&#x7528; fura-2 &#x6620;&#x50CF;&#x5E76;&#x4E0D;&#x6539;&#x53D8;&#x5728;&#x6F84;&#x6D77;&#x6211;&#x51FB;&#x5012;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x8BF1;&#x53D1;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x7684;&#x78B3;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5B89;&#x57F9;&#x548C;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D6;&#x6D88;&#x3002;&#x6211;&#x6551;&#x51FA;&#x91CA;&#x653E;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x5728;&#x6F84;&#x6D77;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6F84;&#x6D77;&#x6211;&#x51FB;&#x5012;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5728;&#x6F84;&#x6D77;&#x6211;&#x51FB;&#x5012;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x51CF;&#x5C11;&#x5F3A;&#x70C8;&#x6697;&#x793A;&#x6F84;&#x6D77;&#x6211;&#x662F;&#x6E05;&#x695A;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5B83;&#x4E0D;&#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5728; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D7;&#x6FC0;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x548C;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x80FD;&#x5DF2;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x53D8;&#x9001;&#x5668;&#x7684;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x91CA;&#x653E; Ca2 + &#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x6211;&#x5728;&#x5927;&#x9F20; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x6291;&#x5236; Ca2 +-&#x8BF1;&#x53D1;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;

Synaptotagmin (syt) I is a Ca2+-binding protein that is well accepted as a major sensor for Ca2+-regulated release of transmitter. However, controversy remains as to whether syt I is the only protein that can function in this role and whether the remaining syt family members also function as Ca2+ sensors. In this study, we generated a PC12 cell line that continuously expresses a short hairpin RNA (shRNA) to silence expression of syt I by RNA interference. Immunoblot and immunocytochemistry experiments demonstrate that expression of syt I was specifically silenced in cells that stably integrate the shRNA-syt I compared with control cells stably transfected with the empty shRNA vector. The other predominantly expressed syt isoform, syt IX, was not affected, nor was the expression of the SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor) proteins when syt I levels were knocked down. Resting Ca2+ and stimulated Ca2+ influx imaged with fura-2 were not altered in syt I knockdown cells. However, evoked release of catecholamine detected by carbon fiber amperometry and HPLC was significantly reduced, although not abolished. Human syt I rescued the release events in the syt I knockdown cells. The reduction of stimulated catecholamine release in the syt I knockdown cells strongly suggests that although syt I is clearly involved in catecholamine release, it is not the only protein to regulate stimulated release in PC12 cells, and another protein likely has a role as a Ca2+ sensor for regulated release of transmitter.

Stable gene silencing of synaptotagmin I in rat PC12 cells inhibits Ca2+-evoked release of catecholamine.

Synaptotagmine (syt) I est un Ca2 +-binding protein qui est bien accept&#xE9; comme un capteur majeur pour Ca2 +-r&#xE9;glement&#xE9; lib&#xE9;ration du transmetteur. Cependant, la controverse demeure quant &#xE0; savoir si je syt est la seule prot&#xE9;ine qui peut fonctionner dans ce r&#xF4;le et si les autres membres de la famille SYT &#xE9;galement fonctionner comme Ca2 + capteurs. Dans cette &#xE9;tude, nous avons g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; une lign&#xE9;e cellulaire PC12 qui exprime en permanence une &#xE9;pingle &#xE0; cheveux courts ARN (shRNA) pour faire taire l&#x26;#39;expression de la syt I par interf&#xE9;rence ARN. Exp&#xE9;riences d&#x26;#39;immunoblot et immunocytochimie d&#xE9;montrer que l&#x26;#39;expression de la syt I a &#xE9;t&#xE9; sp&#xE9;cifiquement silence dans les cellules qui int&#xE8;grent de mani&#xE8;re stable le shRNA-syt I par rapport aux cellules contr&#xF4;les transfect&#xE9;es de fa&#xE7;on stable avec le vecteur shRNA vide. L&#x26;#39;autre majoritairement exprim&#xE9; syt isoforme, syt IX, n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; affect&#xE9;e, ni l&#x26;#39;expression de l&#x26;#39;anse (soluble N-&#xE9;thylmal&#xE9;imide sensible r&#xE9;cepteur de prot&#xE9;ine facteur d&#x26;#39;attachement) des prot&#xE9;ines lors de la syt I niveaux ont &#xE9;t&#xE9; renvers&#xE9;s. Repos et Ca2 + Ca 2 + stimul&#xE9;e afflux imag&#xE9;es avec fura-2 n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; modifi&#xE9;es dans les cellules syt knockdown E. Toutefois, la lib&#xE9;ration de cat&#xE9;cholamines &#xE9;voqu&#xE9;e d&#xE9;tect&#xE9;e par amp&#xE9;rom&#xE9;trie en fibre de carbone et HPLC a &#xE9;t&#xE9; consid&#xE9;rablement r&#xE9;duite, mais pas aboli. Syt humain j&#x26;#39;ai sauv&#xE9; les &#xE9;v&#xE9;nements de rel&#xE2;chement dans les cellules SYT les knockdown I. La r&#xE9;duction de la lib&#xE9;ration de cat&#xE9;cholamines stimul&#xE9;e dans le syt I cellules knock-down sugg&#xE8;re fortement que syt bien que je est clairement impliqu&#xE9; dans la lib&#xE9;ration de cat&#xE9;cholamines, ce n&#x26;#39;est pas la seule prot&#xE9;ine de r&#xE9;glementer la lib&#xE9;ration stimul&#xE9;e dans les cellules PC12, et une autre prot&#xE9;ine a probablement un r&#xF4;le de Ca2 + Capteur de pour la lib&#xE9;ration r&#xE9;glement&#xE9;s de l&#x26;#39;&#xE9;metteur.

Gene Silencing stable de I synaptotagmine dans les cellules PC12 de rat inhibe Ca2 +-&#xE9;voqu&#xE9;e lib&#xE9;ration de cat&#xE9;cholamines

Synaptotagmin (Syt) I ist ein Ca2 +-bindende Protein, das als gro&szlig;en Sensor f&uuml;r Ca2 + gut angenommen wird-reguliert Version des Senders. Kontroverse bleibt jedoch, ob Syt I ist das einzige Protein, das in dieser Rolle und ob die &uuml;brigen Familienmitglieder Syt Funktion auch als Ca2 + Sensoren funktionieren kann. In dieser Studie haben wir eine PC12-Zelllinie, die st&auml;ndig eine kurze Haarnadel RNA (ShRNA) zum Ausdruck der Syt Schweigen ausdr&uuml;ckt generiert I von RNA-Interferenz. Immunoblot und Immunzytochemie Experimente veranschaulichen diesen Ausdruck von Syt, die ich speziell in Zellen, die die ShRNA-Syt stabil zu integrieren, die ich mit Kontrolle verglichen, die Zellen stabil mit dem leeren ShRNA-Vektor transfected Schweigen war. Die andere &uuml;berwiegend exprimierten Syt Isoform, Syt IX war nicht betroffen, noch war die Expression der Proteine (l&ouml;sliche N-Ethylmaleimid-Sensitive-Faktor-Anlage Protein-Rezeptor) SNARE wenn Syt ich Ebenen wurden abgerissen. Ruhelosigkeit, Ca2 + und stimulierte Ca2 + Zustrom abgebildet mit Fura-2 waren nicht in Syt ich Niederschlag Zellen ver&auml;ndert. Evozierte Freisetzung von Katecholamin von Kohlefaser-Amperometry und HPLC erkannt wurde jedoch deutlich reduziert, obwohl nicht abgeschafft. Menschliche Syt ich rettete die Freigabe-Ereignisse in der Syt ich Niederschlag Zellen. Die Reduzierung der stimulierte Katecholamin-Ver&ouml;ffentlichung in der Syt ich Niederschlag Zellen stark legt nahe, dass zwar Syt ich eindeutig verwickelt in Katecholamin-Version, es ist nicht das einzige Protein stimuliert Freisetzung in PC12 Zellen regulieren, und wahrscheinlich ein anderes Protein eine Rolle als Ca2 + Sensor f&uuml;r geregelten Freigabe des Senders hat.

Stabile gen-silencing von Synaptotagmin ich Ratte PC12 Zellen hemmt Ca2 +-Freisetzung von Katecholamin hervorgerufen.

RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi) &#x5DF2;&#x8FC5;&#x901F;&#x6210;&#x4E3A;&#x975E;&#x5E38;&#x5F3A;&#x5927;&#x6280;&#x672F;&#x4E13;&#x95E8;&#x6291;&#x5236;&#x6216;&#x6253;&#x5012;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x9886;&#x57DF;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x795E;&#x7ECF;&#x79D1;&#x5B66;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x53D7;&#x60E0; RNAi &#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5B83;&#x5DF2;&#x6709;&#x7FD4;&#x5B9E;&#x4E0D;&#x540C;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; Rna (siRNAs) &#x548C;&#x5C0F;&#x53D1;&#x5939; Rna &#xFF08;shRNAs&#xFF09; &#x5DEE;&#x522B;&#x5F88;&#x5927;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x548C;&#x51C6;&#x5219;&#x548C;&#x7B97;&#x6CD5;&#x6709;&#x6548; siRNAs &#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x5F88;&#x591A;&#x5173;&#x6CE8;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F97;&#x5230;&#x4E86;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x8D5E;&#x8D4F;&#x5355;&#x4E00; shRNA &#x8868;&#x8FBE;&#x8D28;&#x7C92;&#x8FD8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4EA7;&#x751F;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x6765;&#x81EA;&#x540C;&#x4E00;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x800C;&#x5F02;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6700;&#x5C0F;&#x5230;&#x8F6C;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x72EC;&#x7ACB;&#xFF0C;&#x5728;&#x7A33;&#x5B9A;&#x67D3; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D8;&#x5316;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x5F3A;&#x8C03;&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x6570;&#xFF0C;&#x5F53;&#x8BD5;&#x56FE;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#xFF0C;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5B66;&#x4E60;&#x7684;&#x5206;&#x7EA7;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;

RNA &#x5E72;&#x6270;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D8;&#x5F02;&#x6027;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x67D3; shRNA &#x8D28;&#x7C92;&#x3002;

RNA interference (RNAi) has quickly become a very powerful technique for specifically suppressing or knocking down the expression of any desired gene. Many fields of research, including neuroscience, have benefitted from RNAi methods. It has been well documented that different small interfering RNAs (siRNAs) and small hairpin RNAs (shRNAs) vary greatly in terms of their effectiveness, and much attention has been focused on guidelines and algorithms for the selection of effective siRNAs. However, it has not been widely appreciated that a single shRNA-expressing plasmid can also produce widely varying levels of knockdown in different stably transfected cell lines derived from the same transfection. Here we report that knockdown of three distinct target proteins varies from minimal to almost complete in independent, stably transfected PC12 cell lines. This variability in knockdown among cell lines emphasizes the importance of characterizing a number of cell lines when attempting to establish stable knockdown cell lines, but also offers the possibility of studying the effects of graded levels of protein expression.

Variability in RNA interference in neuroendocrine PC12 cell lines stably transfected with an shRNA plasmid.

L&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN (ARNi) est rapidement devenu une technique tr&#xE8;s puissante pour supprimer ou sp&#xE9;cifiquement abattre l&#x26;#39;expression de tout g&#xE8;ne d&#xE9;sir&#xE9;. De nombreux champs de recherche, y compris les neurosciences, ont b&#xE9;n&#xE9;fici&#xE9; de m&#xE9;thodes ARNi. Il a &#xE9;t&#xE9; bien document&#xE9; que les diff&#xE9;rents petits ARN interf&#xE9;rents (siRNA) et des ARN en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux (petites shRNAs) varient consid&#xE9;rablement en termes de leur efficacit&#xE9;, et beaucoup d&#x26;#39;attention a &#xE9;t&#xE9; concentr&#xE9;e sur les lignes directrices et des algorithmes pour la s&#xE9;lection de siRNA efficaces. Cependant, il n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; largement appr&#xE9;ci&#xE9; qu&#x26;#39;un seul shRNA-plasmide exprimant peut &#xE9;galement produire des niveaux tr&#xE8;s vari&#xE9;s de knockdown dans diff&#xE9;rentes lign&#xE9;es cellulaires transfect&#xE9;es de fa&#xE7;on stable provenant de la transfection m&#xEA;me. Nous rapportons ici que knockdown de trois prot&#xE9;ines cibles distinctes varie de minime &#xE0; presque compl&#xE8;te dans les ind&#xE9;pendants, PC12 transfect&#xE9;es de fa&#xE7;on stable des lign&#xE9;es cellulaires. Cette variabilit&#xE9; dans knockdown parmi les lign&#xE9;es cellulaires souligne l&#x26;#39;importance de la caract&#xE9;risation d&#x26;#39;un certain nombre de lign&#xE9;es de cellules lors d&#x26;#39;une tentative d&#x26;#39;&#xE9;tablir des lign&#xE9;es stables de cellules knock-down, mais offre &#xE9;galement la possibilit&#xE9; d&#x26;#39;&#xE9;tudier les effets de divers degr&#xE9;s d&#x26;#39;expression de prot&#xE9;ines.

La variabilit&#xE9; dans l&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN dans les lignes cellulaires neuroendocriniennes PC12 transfect&#xE9;es de fa&#xE7;on stable avec un plasmide ShRNA

RNA-Interferenz (RNAi) ist eine sehr leistungsf&auml;hige Technik f&uuml;r speziell unterdr&uuml;cken oder umzuwerfen Ausdruck jedes gew&uuml;nschte gen schnell geworden. Vielen Bereichen der Forschung, einschlie&szlig;lich der Neurowissenschaften, haben von RNAi Methoden profitiert. Es ist gut dokumentiert, dass verschiedene kleine interferierender RNAs (SiRNAs) und kleine Haarnadel RNAs (ShRNAs) sind sehr in Bezug auf ihre Wirksamkeit unterschiedlich und viel Aufmerksamkeit sich auf Leitlinien und Algorithmen f&uuml;r die Auswahl der effektiven SiRNAs konzentriert. Jedoch hat es nicht weit gesch&auml;tzt worden, dass ein einzelnes ShRNA-Ausdr&uuml;cken Plasmid auch unterschiedliche Mengen von Niederschlag in verschiedenen Stabil transfizierte Zellinien abgeleitet von den gleichen Transfection haben kann. Hier berichten wir, dass Niederschlag von drei unterschiedlichen Zielproteinen variiert von minimal bis die fast vollst&auml;ndige in unabh&auml;ngige, stabil transfected PC12-Zelllinien. Diese Variabilit&auml;t der Niederschlag unter Zelllinien unterstreicht die Bedeutung der Charakterisierung verschiedener Zelllinien, beim Versuch der best&auml;ndigen Niederschlag Zellformen zu etablieren, sondern bietet auch die M&ouml;glichkeit der Untersuchung der Auswirkungen des fortschreitenden Stufen der Proteinexpression.

Variabilit&auml;t der RNA-Interferenz in neuroendokrinen PC12-Zelllinien, die stabil mit einem ShRNA transfected.

Interferenza del RNA (RNAi) &egrave; diventata rapidamente una tecnica molto potente per specificamente sopprimendo o abbattere l&#39;espressione di qualsiasi gene desiderato. Molti campi di ricerca, tra cui neuroscienze, hanno beneficiato di RNAi metodi. &Egrave; stato ben documentato che diversi piccoli RNAs d&#39;interferenza (siRNAs) e tornante piccolo RNAs (shRNAs) variano notevolmente in termini di loro efficacia, e molta attenzione &egrave; stata focalizzata su linee guida e gli algoritmi per la selezione di siRNA efficace. Tuttavia, esso &egrave; non stato ampiamente apprezzato che un singolo che esprimono shRNA plasmidi possono anche produrre livelli di atterramento in linee differenti delle cellule transfected stabile derivato dalla transfezione stessa ampiamente variabili. Qui riportiamo quello atterramento di tre proteine bersaglio distinti che varia da minimo a quasi completa in indipendente, stabile transfected linee cellulari PC12. Questa variabilit&agrave; nell&#39;atterramento tra linee cellulari sottolinea l&#39;importanza di che caratterizza un certo numero di linee cellulari quando si tenta di stabilire linee cellulari stabili di atterramento, ma offre anche la possibilit&agrave; di studiare gli effetti di graduata livelli di espressione della proteina.

Variabilit&agrave; nel RNA interference in linee di cellule neuroendocrine PC12 stabile transfected con un plasmide shRNA.

RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3050;&#x306B;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x624B;&#x6CD5;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;&#x79D1;&#x5B66;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x542B;&#x3080;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5206;&#x91CE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;RNAi&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304B;&#x3089;&#x6069;&#x6075;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x6587;&#x66F8;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5225;&#x306E;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;siRNA&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;RNA&#xFF08;shRNA&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x306E;&#x70B9;&#x3067;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x6CE8;&#x76EE;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;siRNA&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x6CE8;&#x76EE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5E83;&#x304F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;shRNA&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x304C;&#x5E83;&#x304F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x5225;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3067;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;3&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6A19;&#x7684;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x307C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;PC12&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3067;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x304B;&#x3089;&#x5909;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x306F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3088;&#x3046;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x884C;&#x6570;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x50BE;&#x659C;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;shRNA&#x306E;&#x3067;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;PC12&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;

RNA &#xAC04;&#xC12D; (RNAi) &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xC544;&#xB798;&#xB85C; &#xB450;&#xB4DC;&#xB9AC;&#xB294; &#xC18C;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAE30;&#xBC95; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC5F0;&#xAD6C;, &#xC2E0;&#xACBD; &#xACFC;&#xD559;, &#xB4F1;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0;&#xC11C; RNAi &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; benefitted &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xC791;&#xC740; &#xBC29;&#xD574; RNAs (siRNAs)&#xC640; &#xC791;&#xC740; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; RNAs (shRNAs)&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD558; &#xACE0; &#xB9CE;&#xC740; &#xAD00;&#xC2EC; &#xC9C0;&#xCE68; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; Sirnas&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC798; &#xBB38;&#xC11C;&#xD654; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83; &#xD558;&#xC9C0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB2E8;&#xC77C; shRNA &#xD45C;&#xD604; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; transfection&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC548;&#xC815;&#xC801; transfected &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB610;&#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xC800; 3 &#xBCF4;&#xACE0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC70;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD398; PC12 &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;. &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xC911; &#xCD5C;&#xC800;&#xAC00;&#xC774; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB3C4; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB824;&#xACE0; &#xD560; &#xB54C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xB4F1;&#xAE09;&#xB41C; &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;.

Neuroendocrine PC12 &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; RNA &#xBC29;&#xD574;&#xC758; &#xAC00;&#xBCC0;&#xC131;&#xC740; &#xC548;&#xC815;&#xC801; shRNA &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC640; &#xD398;.

ARN de interferencia (ARNi) ha convertido r&#xE1;pidamente en una t&#xE9;cnica muy poderosa para suprimir o espec&#xED;ficamente derribar la expresi&#xF3;n de cualquier gen deseado. Muchos campos de investigaci&#xF3;n, incluyendo la neurociencia, se han beneficiado de los m&#xE9;todos de RNAi. Ha sido bien documentado que los diferentes peque&#xF1;os RNAs de interferencia (siRNAs) y ARN peque&#xF1;os horquilla (shRNAs) var&#xED;an mucho en cuanto a su eficacia, y mucha atenci&#xF3;n se ha centrado en las directrices y los algoritmos para la selecci&#xF3;n de siRNAs eficaces. Sin embargo, no ha sido ampliamente apreciar&#xE1; que una sola ARNhc-expresi&#xF3;n de pl&#xE1;smido tambi&#xE9;n puede producir ampliamente diferentes niveles de precipitaci&#xF3;n en diferentes l&#xED;neas de c&#xE9;lulas transfectadas establemente derivados de la transfecci&#xF3;n mismo. Aqu&#xED; mostramos que el derribo de tres prote&#xED;nas diana diferentes var&#xED;a de un m&#xED;nimo para completar casi independientes, PC12 transfectadas establemente l&#xED;neas celulares. Esta variabilidad en desmontables entre l&#xED;neas celulares destaca la importancia de la caracterizaci&#xF3;n de un n&#xFA;mero de l&#xED;neas de c&#xE9;lulas cuando se intenta establecer l&#xED;neas celulares estables desmontables, sino que tambi&#xE9;n ofrece la posibilidad de estudiar los efectos de niveles variables de expresi&#xF3;n de la prote&#xED;na.

La variabilidad en la interferencia de ARN en las l&#xED;neas de c&#xE9;lulas neuroendocrinas PC12 transfectadas establemente con el pl&#xE1;smido una

&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x5728;&#x65E2;&#x5B9A;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x3001; &#x53BB;&#x7532;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20; (NE)&#x3001; &#x795E;&#x7ECF;&#x80BD; Y (NPY) &#x4E0E; ATP &#x4ECE;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02; coreleased&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x6211;&#x4E3B;&#x7ECF;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7A81;&#x89E6; (&#x6F84;&#x6D77;) &#x89C4;&#x7BA1;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8D28;&#x7C92;&#x7684; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x6280;&#x672F;&#x7528;&#x6765;&#x4E13;&#x95E8;&#x548C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6C89;&#x9ED8;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6F84;&#x6D77;&#x6211;&#x5728;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x3002;&#x800C;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x7684; NPY &#x548C;&#x560C;&#x5464;&#x88AB;&#x5E9F;&#x9664;&#xFF0C;&#x523A;&#x6FC0;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA; (CA) &#x91CA;&#x653E;&#x53EA;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x7EA6; 50%&#x3002;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7F9F;&#x5316;&#x9176;&#xFF0C;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x5408;&#x6210;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x901F;&#x7387;&#x9650;&#x5236;&#x9176;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x867D;&#x7136;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5355;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 50%&#x3002;&#x8BC4;&#x4F30;&#x662F;&#x5426; NPY &#x548C; Ca &#x90FD;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x6C34;&#x6CE1;&#x548C;&#x662F;&#x5426;&#x6F84;&#x6D77;&#x53D1;&#x89C9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x542B;&#x6709; NPY &#x548C; CA &#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x6280;&#x672F;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x8BE5;&#x6F84;&#x6D77;&#x6211; colocalized &#x4E0E;&#x5927;&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x56CA;&#x6CE1;&#x3001; NPY&#xFF0C;&#x548C; Ca&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;CAs &#x548C; NPY colocalized &#x4E0E;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x548C;&#x5927;&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x56CA;&#x6CE1;&#x3002;&#x5927;&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x56CA;&#x6CE1;&#x662F;&#x7EFC;&#x5408;&#x7684;&#x548C;&#x53EF;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x7167;&#x7247;&#x663E;&#x793A;&#x91CA;&#x653E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x6F84;&#x6D77;&#x7684;&#x6211;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x90FD;&#x7B26;&#x5408;&#x6F84;&#x6D77;&#x8C03;&#x8282;&#x53D8;&#x9001;&#x5668;&#x7684;&#x5FAE;&#x5206;&#x91CA;&#x653E;&#x6211;&#x3002;

&#x6211;&#x5728; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7ED3;&#x679C;&#x5DEE;&#x522B;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x53D1;&#x5C04;&#x673A;&#x4E2D;&#x91CA;&#x653E;&#x7A33;&#x5B9A; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x3002;

In sympathetic neurons, it is well-established that the neurotransmitters, norepinephrine (NE), neuropeptide Y (NPY), and ATP are differentially coreleased from the same neurons. In this study, we determined whether synaptotagmin (syt) I, the primary Ca(2+) sensor for regulated release, could function as the protein that differentially regulates release of these neurotransmitters. Plasmid-based RNA interference was used to specifically and stably silence expression of syt I in a model secretory cell line. Whereas stimulated release of NPY and purines was abolished, stimulated catecholamine (CA) release was only reduced by approximately 50%. Although expression levels of tyrosine hydroxylase, the rate-limiting enzyme in the dopamine synthesis pathway, was unaffected, expression of the vesicular monoamine transporter 1 was reduced by 50%. To evaluate whether NPY and CAs are found within the same vesicles and whether syt I is found localized to each of these NPY- and CA-containing vesicles, we used immunocytochemistry to determine that syt I colocalized with large dense core vesicles, with NPY, and with CAs. Furthermore, both CAs and NPY colocalized with one another and with large dense core vesicles. Electron micrographs show that large dense core vesicles are synthesized and available for release in cells that lack syt I. These results are consistent with syt I regulating differential release of transmitters.

Stable RNA interference of synaptotagmin I in PC12 cells results in differential regulation of transmitter release.

Dans les neurones sympathiques, il est bien &#xE9;tabli que les neurotransmetteurs, la nor&#xE9;pin&#xE9;phrine (NE), le neuropeptide Y (NPY) et l&#x26;#39;ATP sont diff&#xE9;rentiellement coreleased de ces m&#xEA;mes neurones. Dans cette &#xE9;tude, nous avons d&#xE9;termin&#xE9; si synaptotagmine (syt) I, le principal Ca (2 +) de capteur pour la lib&#xE9;ration r&#xE9;glement&#xE9;, pourrait fonctionner comme la prot&#xE9;ine qui r&#xE9;gule de fa&#xE7;on diff&#xE9;rentielle la lib&#xE9;ration de ces neurotransmetteurs. &#xC0; base de plasmide d&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;expression silence sp&#xE9;cifiquement et de mani&#xE8;re stable de la syt I dans une lign&#xE9;e cellulaire mod&#xE8;le s&#xE9;cr&#xE9;toire. Consid&#xE9;rant que la lib&#xE9;ration stimul&#xE9;e de NPY et de purines a &#xE9;t&#xE9; aboli, stimul&#xE9; cat&#xE9;cholamines (CA) communiqu&#xE9; n&#x26;#39;a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;duit que d&#x26;#39;environ 50%. Bien que les niveaux d&#x26;#39;expression de la tyrosine hydroxylase, l&#x26;#39;enzyme limitant la vitesse dans la voie de synth&#xE8;se de la dopamine, n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; affect&#xE9;e, l&#x26;#39;expression de la monoamine transporteur v&#xE9;siculaire 1 a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;duit de 50%. &#xC0; &#xE9;valuer si NPY et AR sont trouv&#xE9;s dans les v&#xE9;sicules et syt m&#xEA;mes si I est trouv&#xE9;e localis&#xE9;e &#xE0; chacun de ces v&#xE9;sicules de NPY-et-AR contenant, on utilise pour d&#xE9;terminer que immunocytochimie syt I colocalis&#xE9;e avec de grandes v&#xE9;sicules de base denses, avec NPY, et avec AR. En outre, &#xE0; la fois les CA et NPY colocalis&#xE9;s avec l&#x26;#39;autre et avec de grandes v&#xE9;sicules &#xE0; c&#x153;ur dense. Les micrographies &#xE9;lectroniques montrent que les grands v&#xE9;sicules &#xE0; c&#x153;ur dense sont synth&#xE9;tis&#xE9;s et disponible pour la lib&#xE9;ration dans les cellules qui n&#x26;#39;ont pas syt I. Ces r&#xE9;sultats sont coh&#xE9;rents avec la syt I de r&#xE9;gulation lib&#xE9;ration diff&#xE9;rentielle des &#xE9;metteurs.

Stable interf&#xE9;rence ARN de synaptotagmine I R&#xE9;sultats cellules PC12 dans le r&#xE8;glement diff&#xE9;rentiel de la lib&#xE9;ration du transmetteur

Im sympathischen Neuronen ist es etabliert, dass die Neurotransmitter Norepinephrin (NE), Neuropeptid Y (NPY) und ATP differentiell aus die gleichen Neuronen coreleased sind. In dieser Studie haben wir festgestellt, ob Synaptotagmin (Syt) ich, der Ca(2+)-Prim&auml;rsensor geregelten Version funktionieren k&ouml;nnte, als das Protein, differentiell Freisetzung von diesen Neurotransmittern regelt. RNA-Interferenz Plasmid-basierte wurde verwendet, um speziell und stabil Schweigen Ausdruck von Syt ich in einem Modell sekretorischen Zellen-Linie. W&auml;hrend die stimulierte Freisetzung von NPY und Purine abgeschafft wurde, wurde angeregt Katecholamine (CA) Version nur um ca. 50 % reduziert. Stufen der Tyrosin-Hydroxylase, das geschwindigkeitsbestimmende Enzym in der Dopamin-Synthese-Weg, war, zwar nicht betroffen war Ausdruck der vesikul&auml;ren Monoamin-Transporter 1 um 50 % reduziert. Um festzustellen, ob NPY und CAs innerhalb der gleichen Bl&auml;schen gefunden werden und ob Syt ich gefunden wird, zu jedem dieser NPY und CA-haltige Vesikel lokalisiert, wir Immunzytochemie zur Bestimmung dieser Syt colocalized ich mit gro&szlig;em dichten Kern Vesikel, mit NPY und mit CAs. Dar&uuml;ber hinaus colocalized CAs und NPY mit einander und mit gro&szlig;em dichten Kern Bl&auml;schen. Electron-Aufnahmen zeigen, dass gro&szlig;e dichten Kern Bl&auml;schen synthetisierten und f&uuml;r sind release in Zellen, die Syt fehlt I. Diese Ergebnisse stehen im Einklang mit Syt ich Regulierung differenzielle Freisetzung von Transmittern.

Stabile RNA-Interferenz von Synaptotagmin lassen ich in PC12 Zellen f&uuml;hrt zu differenziellen Verordnung des Senders.

Nei neuroni simpatici, &egrave; ben noto che i neurotrasmettitori, noradrenalina (NE), neuropeptide Y (NPY) e ATP differenzialmente sono coreleased dai neuroni stessi. In questo studio, abbiamo determinato se SHP2 (syt) I, il sensore Ca(2+) primario per rilascio regolamentato, potrei funzione come le proteine differenzialmente che regola il rilascio di questi neurotrasmettitori. Interferenza del RNA del plasmide-base &egrave; stato utilizzato per specificamente e stabile silenzio espressione di syt I in un modello secretivo cella linea. Considerando che stimolato rilascio di NPY e purine &egrave; stata abolita, rilascio delle catecolamine stimolata (CA) &egrave; stato ridotto solo da circa il 50%. Anche se i livelli di espressione di tirosina idrossilasi, l&#39;enzima di limitazione della velocit&agrave; nella via di sintesi della dopamina, &egrave; stato influenzato, espressione del trasportatore vescicolare di monoamine 1 &egrave; stato ridotto del 50%. Per valutare se NPY e CAs si trovano all&#39;interno della stesse vescicole e se syt &egrave; trovato localizzato a ciascuna di queste vescicole contenenti NPY e CA, abbiamo usato immunocitochimica per determinare tale syt colocalized con vescicole grande nucleo denso, con NPY e con CAs. Inoltre, entrambi i CAs e NPY colocalized uno con l&#39;altro e con vescicole grande nucleo denso. Microscopio mostrano che le vescicole nucleo denso grandi sono sintetizzati e disponibili per rilasciare in cellule che mancano di syt I. Questi risultati sono coerenti con syt I regolazione differenziale rilascio dei trasmettitori.

Interferenza del RNA stabile di SHP2 I risultati le cellule PC12 in regolamento differenziale del trasmettitore rilasciare.

&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7D4C;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x3001;&#x30CE;&#x30EB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;NE&#xFF09;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;Y&#xFF08;NPY&#xFF09;&#x3068;&#x3001;ATP&#x304C;&#x540C;&#x3058;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5DEE;coreleased&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BF;&#x30B0;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;SYT&#xFF09;&#x79C1;&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x4E3B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x5DEE;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;SYT I&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x5B89;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B;&#x6C88;&#x9ED9;&#x5F0F;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; NPY&#x3068;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x653E;&#x51FA;&#x304C;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;CA&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x7D04;50&#xFF05;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5F8B;&#x901F;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;1&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;50&#xFF05;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002; NPY&#x3068;CA&#x306F;&#x540C;&#x3058;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;SYT&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x79C1;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;NPY-&#x53CA;&#x3073;CA&#x542B;&#x6709;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x200B;&#x200B;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x306F;NPY&#x3068;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30B3;&#x30A2;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;SYT&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001; CA&#x3067;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;CA&#x3068;NPY&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x304A;&#x4E92;&#x3044;&#x306B;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30B3;&#x30A2;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3002;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5199;&#x771F;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30B3;&#x30A2;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3092;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;SYT&#x79C1;&#x306F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30BF;&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x6574;&#x5408;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;SYT I.&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30BF;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;PC12&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BF;&#x30B0;&#x30DF;&#x30F3;I&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;RNA&#x5E72;&#x6E09;

&#xAD50;&#xAC10; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8;, &#xB178;&#xB974; (NE), neuropeptide Y (NPY)&#xACFC; ATP &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; coreleased &#xCC28;&#xB3D9; &#xC798; &#xC124;&#xB9BD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; synaptotagmin (syt) &#xB098;, &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xC790;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; Ca(2+) &#xC13C;&#xC11C;&#xB294; &#xCC28;&#xB3D9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;&#xD560; &#xC218; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC;&#xC774; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xC5EC;&#xBD80; &#xACB0;&#xC815;. RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE68;&#xBB35; &#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; syt&#xC758; &#xBAA8;&#xB378; &#xBD84;&#xC5D0; &#xB098; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;. &#xBC18;&#xBA74; NPY&#xC640; purines &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; (CA) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB9CC; &#xC57D; 50%&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; hydroxylase, &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xD569;&#xC131; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC81C;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xBAA8;&#xB178; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; 1 &#xC2DD; 50%&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. NPY&#xC640; CAs &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC548;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC5EC;&#xBD80; &#xBC0F; syt NPY&#xC640; CA &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAC01; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; syt &#xACB0;&#xC815; immunocytochemistry &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC5EC;&#xBD80; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB098; &#xD070; &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4; &#xC18C;&#xD3EC;, NPY, &#xBC0F; Ca colocalized. &#xB610;&#xD55C;, Ca&#xC640; NPY &#xB300;&#xD615; &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4; vesicles&#xC640; &#xC11C;&#xB85C; &#xD568;&#xAED8; colocalized. &#xB300;&#xD615; &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB294; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC1FC; &#xB098; syt &#xBD80;&#xC871; &#xC140;&#xC5D0; &#xB193;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; syt&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30;&#xC758; &#xCC28;&#xB3D9; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xADDC;&#xC81C; &#xB098;.

Synaptotagmin&#xC758; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; RNA &#xAC04;&#xC12D; PC12 &#xC138;&#xD3EC; &#xACB0;&#xACFC;: &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30;&#xC758; &#xCC28;&#xB4F1; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB098; &#xCD9C;&#xC2DC;.

En las neuronas simp&#xE1;ticas, que est&#xE1; bien establecido que los neurotransmisores, la noradrenalina (NA), el neurop&#xE9;ptido Y (NPY) y el ATP son diferencialmente coreleased de las mismas neuronas. En este estudio, determinamos si sinaptotagmina (syt) Yo, el principal de Ca (2 +) del sensor de descarga regulada, podr&#xED;a funcionar como la prote&#xED;na que regula diferencialmente la liberaci&#xF3;n de estos neurotransmisores. Pl&#xE1;smido basado en la interferencia de ARN se utiliza para la expresi&#xF3;n de silencio en concreto y de forma estable de syt I en una l&#xED;nea de modelo de c&#xE9;lula secretora. Considerando que la liberaci&#xF3;n estimulada de NPY y purinas fue abolida, estimulado catecolaminas (CA) de liberaci&#xF3;n s&#xF3;lo se redujo en aproximadamente un 50%. Aunque los niveles de expresi&#xF3;n de la tirosina hidroxilasa, la enzima limitante de la velocidad en la ruta de s&#xED;ntesis de dopamina, no se vio afectada, la expresi&#xF3;n del transportador vesicular monoamina 1 se redujo en un 50%. Para evaluar si NPY y entidades emisoras de certificados se encuentran dentro de las ves&#xED;culas mismos y syt si yo se encuentra localizada en cada una de estas ves&#xED;culas NPY-CA y que contienen, se utiliz&#xF3; inmunocitoqu&#xED;mica para determinar que syt I colocalized con grandes ves&#xED;culas n&#xFA;cleo denso, con NPY, y con CA. Adem&#xE1;s, tanto las CA y NPY colocalized uno con el otro y con grandes ves&#xED;culas n&#xFA;cleo denso. Las micrograf&#xED;as electr&#xF3;nicas muestran que grandes ves&#xED;culas n&#xFA;cleo denso se sintetizan y disponible para la liberaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas que carecen de syt I. Estos resultados son consistentes con syt I regula la liberaci&#xF3;n de transmisores de diferencial.

Estable la interferencia de ARN de sinaptotagmina I en PC12 c&#xE9;lulas da como resultado la regulaci&#xF3;n diferencial de la liberaci&#xF3;n del transmisor

&#x9178;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x9065;&#x611F; (Asic) &#x662F;&#x4E00;&#x5BB6;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x8D28;&#x5B50;&#x95E8;&#x63A7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x5728;&#x6709;&#x5BB3;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x611F;&#x89C9;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; ASIC1a &#x662F;&#x53EA;&#x6709;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#xFF0C;&#x636E;&#x8BF4;&#x662F;&#x6E17;&#x900F;&#x5230;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x7ECF;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x7EDD;&#x5BF9;&#x89C4;&#x6A21;&#x76EE;&#x524D;&#x8FD8;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x5149;&#x5EA6;&#x6CD5;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x7ECF;&#x8D21;&#x732E;&#x603B;&#x7535;&#x6D41;&#x901A;&#x8FC7;&#x672C;&#x673A;&#x548C;&#x91CD;&#x7EC4; ASIC1a &#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x9E21;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x8BE5;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x4E2D;&#x578B;&#x8BF1;&#x53D1;&#x963F;&#x7C73;&#x6D1B;&#x5229;&#x548C; psalmotoxin 1 &#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x6539;&#x53D8; fura 2 &#x8367;&#x5149;&#x65F6;&#x7ECF;&#x6D74;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x91CD;&#x7EC4; ASIC1a &#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E5F;&#x672A;&#x80FD;&#x5728;&#x8367;&#x5149;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6BD4;&#x672C;&#x673A;&#x9891;&#x9053;&#x7684;&#x5341;&#x500D;&#x7684;&#x5927;&#x7535;&#x6D41;&#x901A;&#x8FC7; over-expressed &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x603B;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x8FD9;&#x4E00;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x7684;&#x4EA7;&#x751F;&#x53EF;&#x8861;&#x91CF;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6210;&#x50CF;&#x9886;&#x57DF;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x52A0;&#x8F7D; Ca(2+) &#x9065;&#x611F;&#x67D3;&#x6599;&#x8367;&#x5149;-4&#xFF0C;&#x5E76;&#x53D1;&#x73B0;&#x8BE5;&#x9178;&#x5316;&#x589E;&#x52A0; [Ca(2+)](i) &#x5728;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5C11;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6211;&#x4EEC;&#x6574;&#x4E2A;&#x89C6;&#x573A;&#x6210;&#x50CF;&#x6570;&#x636E;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x540C;&#x610F; ASIC1a &#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x81EA;&#x7531;&#x7ECF;&#x6D77;&#x62D4;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6570;&#x636E;&#x5F3A;&#x70C8;&#x6311;&#x6218;&#x8BA4;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7; ASIC1a &#x53D7;&#x4F53;&#x672C;&#x8EAB;&#x7ECF;&#x6761;&#x76EE;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5411;&#x6B64;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;

&#x672C;&#x673A;&#x548C;&#x91CD;&#x7EC4; ASIC1a &#x53D7;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C; Ca2 + &#x6761;&#x76EE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5FFD;&#x7565;&#x4E0D;&#x8BA1;&#x3002;

Acid Sensing Ion Channels (ASICs) are a family of proton-gated cation channels that play a role in the sensation of noxious stimuli. Of these, ASIC1a is the only family member that is reported to be permeable to Ca(2+), although the absolute magnitude of the Ca(2+) current is unclear. Here, we used patch-clamp photometry to determine the contribution of Ca(2+) to total current through native and recombinant ASIC1a receptors. We found that acidification of the extracellular medium evoked amiloride and psalmotoxin 1-sensitive currents in isolated chick dorsal root ganglion neurons and human embryonic kidney cells, but did not alter fura-2 fluorescence when the bath concentration of Ca(2+) was close to that found in normal physiological conditions. Further, activation of recombinant ASIC1a receptors also failed to produce measurable changes in fluorescence despite of the fact that the total cation current through the over-expressed receptor was ten-fold larger than that of the native channels. Finally, we imaged a field of intact DRG neurons loaded with the Ca(2+)-sensing dye Fluo-4, and found that acidification increased [Ca(2+)](i) in a small population of cells. Thus, although our whole-field imaging data agree with previous studies that activation of ASIC1a receptors can potentially cause elevations in intracellular free Ca(2+), our single cell data strongly challenges the view that Ca(2+) entry through the ASIC1a receptor itself contributes to this response.

Native and recombinant ASIC1a receptors conduct negligible Ca2+ entry.

Acid Sensing Ion Channels (ASIC) sont une famille de canaux cationiques proton-d&#xE9;pendants qui jouent un r&#xF4;le dans la sensation de stimuli nocifs. Parmi ceux-ci, ASIC1a est le membre de la famille seule qui est signal&#xE9; &#xE0; &#xEA;tre perm&#xE9;able au Ca (2 +), bien que la magnitude absolue de la Ca (2 +) actuelle n&#x26;#39;est pas claire. Ici, nous avons utilis&#xE9; de patch-clamp photom&#xE9;trie afin de d&#xE9;terminer la contribution de Ca (2 +) au total courant &#xE0; travers les r&#xE9;cepteurs ASIC1A native et recombinante. Nous avons constat&#xE9; que l&#x26;#39;acidification de l&#x26;#39;amiloride milieu extracellulaire &#xE9;voqu&#xE9; et psalmotoxin 1-sensibles dans les courants isol&#xE9;s chiches dorsale neurones ganglionnaires de la racine et cellules r&#xE9;nales embryonnaires humaines, mais ne modifie pas la fluorescence fura-2 lorsque la concentration du bain de Ca (2 +) &#xE9;tait proche de que l&#x26;#39;on trouve dans les conditions physiologiques normales. En outre, l&#x26;#39;activation des r&#xE9;cepteurs ASIC1A recombinants &#xE9;galement pas r&#xE9;ussi &#xE0; produire des changements de fluorescence mesurables en d&#xE9;pit du fait que le cation courant total &#xE0; travers le r&#xE9;cepteur surexprim&#xE9;e est dix fois plus grande que celle des canaux natifs. Enfin, nous imager un champ de neurones DRG intactes charg&#xE9; avec le Ca (2 +) &#xE0; d&#xE9;tection de colorant Fluo-4, et a constat&#xE9; que l&#x26;#39;acidification accrue [Ca (2 +)] (i) dans une petite population de cellules. Ainsi, bien que nos donn&#xE9;es d&#x26;#39;imagerie entier sur le terrain d&#x26;#39;accord avec des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures que l&#x26;#39;activation des r&#xE9;cepteurs ASIC1A peut potentiellement causer des &#xE9;l&#xE9;vations de la libre intracellulaire de Ca (2 +), nos donn&#xE9;es de la cellule unique conteste fermement l&#x26;#39;id&#xE9;e que Ca (2 +) par le biais du r&#xE9;cepteur ASIC1a elle-m&#xEA;me contribue &#xE0; cette r&#xE9;ponse.

R&#xE9;cepteur ASIC1A native et recombinante Mener n&#xE9;gligeable Ca2 + Entr&#xE9;e

Acid Sensing Ion Channels (ASICs) sind eine Familie der Proton-Gating kation-Kan&auml;le, die in die Sensation sch&auml;dliche Reize eine Rolle spielen. Von diesen ist ASIC1a das nur Familienmitglied, das gemeldet wird, Ca(2+), luftdurchl&auml;ssig sein, wobei die Absolute Helligkeit des aktuellen Ca(2+) unklar ist. Hier haben wir Patch-Clamp-Photometrie verwendet, um zu bestimmen, den Beitrag des Ca(2+) zum Gesamtstrom durch native und rekombinante ASIC1a Rezeptoren. Wir fanden die Versauerung der extrazellul&auml;ren mittlere evozierte Amilorids und Psalmotoxin 1-Sensitive Str&ouml;mungen in isolierten K&uuml;ken Dorsal Root Ganglion Neuronen und menschlichen embryonalen Nierenzellen, aber Fura-2 Fluoreszenz nicht ge&auml;ndert werden, wenn die Bad-Konzentration von Ca(2+) in der N&auml;he, die unter normalen physiologischen Bedingungen gefunden wurde. Dar&uuml;ber hinaus konnte Aktivierung von rekombinanten ASIC1a-Rezeptoren auch messbare Ver&auml;nderungen in Fluoreszenz trotz der Tatsache zu produzieren, um das Zehnfache gr&ouml;&szlig;er als die der native Kan&auml;le sei das gesamte kation Strom durch den over-expressed-Rezeptor. Schlie&szlig;lich abgebildet wir ein Feld der intakt DRG-Neuronen mit der Ca(2+)-Sensorik Farbstoff Fluo-4 geladen und gefunden, dass &Uuml;bers&auml;uerung erh&ouml;ht [Ca(2+)](i) in einer kleinen Population von Zellen. So, obwohl unsere gesamte-Feld-Bilddaten mit fr&uuml;heren Studien stimmen zu, dass die Aktivierung ASIC1a-Rezeptoren potenziell Erhebungen in intrazellul&auml;ren freien Ca(2+) verursachen kann, Herausforderungen unserer einzelnen Zellendaten stark die Ansicht, die Ca(2+) Eintrag durch den ASIC1a-Rezeptor selbst tr&auml;gt zu dieser Antwort.

Native und rekombinante ASIC1a-Rezeptoren f&uuml;hren vernachl&auml;ssigbar Ca2 + Eintrag.

Acido Sensing canali ionici (ASIC) sono una famiglia di canali protone-gated cazione che giocano un ruolo nella sensazione di stimoli nocivi. Di questi, ASIC1a &egrave; il membro della famiglia solo che &egrave; segnalato per essere permeabile a Ca(2+), anche se non &egrave; chiara la magnitudine assoluta della corrente Ca(2+). Qui, abbiamo utilizzato la fotometria patch-clamp per determinare il contributo di Ca(2+) alla corrente totale attraverso i recettori ASIC1a nativi e ricombinanti. Abbiamo trovato che l&#39;acidificazione dell&#39;amiloride evocati medium extracellulare e psalmotoxin 1-sensibili correnti in pulcino isolato dorsal root ganglion neuroni e cellule renali embrionali umane, ma non alterava fura-2 fluorescenza quando la concentrazione del bagno di Ca(2+) era vicino a quello trovata in condizioni fisiologiche normali. Ulteriormente, l&#39;attivazione di recettori ASIC1a ricombinanti anche omesso di produrre cambiamenti misurabili in fluorescenza nonostante il fatto che il catione totale corrente attraverso il recettore sovraespresso era dieci volte pi&ugrave; grande di quello dei canali nativi. Infine, abbiamo fotografato un campo di intatti neuroni DRG caricato con il colorante Ca(2+)-sensing Fluo-4 e ha trovato che l&#39;acidificazione aumentata [Ca(2+)](i) in una piccola popolazione di cellule. Cos&igrave;, anche se i nostri dati di imaging intero-campo d&#39;accordo con precedenti studi che l&#39;attivazione di recettori ASIC1a pu&ograve; potenzialmente causare elevazioni in Ca(2+) libero intracellulare, nostri dati cella singola sfida fortemente che Ca(2+) voce attraverso il recettore ASIC1a s&eacute; contribuisce a questa risposta.

Nativi e ricombinanti ASIC1a recettori conducono trascurabile Ca2 + voce.

&#x9178;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;ASIC&#x306E;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x6709;&#x5BB3;&#x306A;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x611F;&#x899A;&#x3067;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;ASIC1a&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7D76;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x4E00;&#x54E1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5929;&#x7136;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;ASIC1a&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x306B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6E2C;&#x5149;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30CB;&#x30EF;&#x30C8;&#x30EA;&#x80CC;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x6027;&#x814E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x57F9;&#x5730;&#x8A98;&#x767A;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x3068;psalmotoxin 1&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x9178;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;Ca&#x306E;&#x6D74;&#x6FC3;&#x5EA6;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x30D5;&#x30E9;-2&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x305D;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;ASIC1a&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7DCF;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;10&#x500D;&#x5927;&#x304D;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Ca&#x3067;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;DRG&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x67D3;&#x6599;&#x306B;&#x307F;&#x305F;Fluo-4&#x3092;&#x64AE;&#x50CF;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x9178;&#x6027;&#x5316;&#x306E;[Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;]&#xFF08;i&#xFF09;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5C0F;&#x96C6;&#x56E3;&#x3067;&#x4E0A;&#x6607;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5168;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x306E;&#x64AE;&#x50CF;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x304C;ASIC1a&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306B;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;ASIC1a&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x304C;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x904A;&#x96E2;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5148;&#x884C;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;&#x81EA;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5929;&#x7136;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;ASIC1a&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x7121;&#x8996;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;

&#xC0B0; &#xC131; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; (Asic)&#xB294; &#xC720;&#xD574; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xC13C; &#xC138;&#xC774; &#xC158;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xBB38;&#xC774; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAC00;&#xC871;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; ASIC1a Ca(2+) &#xC804;&#xB958;&#xC758; &#xC808;&#xB300; &#xADDC;&#xBAA8;&#xB294; &#xBD84;&#xBA85; Ca(2+)&#xC5D0; &#xC735; &#xD654; &#xB420; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC84C;&#xB2E4; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAD11;&#xB3C4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; ASIC1a &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD55C; &#xCD1D; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; ca(2+)&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xBCD1;&#xC544;&#xB9AC; &#xC9C0; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC911;&#xAC04; evoked amiloride &#xBC0F; psalmotoxin&#xC758; &#xADF8; &#xC0B0;&#xC131;&#xD654; 1 &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC804;&#xB958; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; ca(2+)&#xC758; &#xBAA9;&#xC695; &#xB18D;&#xB3C4; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB420; &#xB54C; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; fura 2 &#xD615;&#xAD11;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; ASIC1a &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC0AC;&#xC2E4; &#xC804;&#xCCB4; &#xC591;&#xC774;&#xC628; over-expressed &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD604;&#xC7AC; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xCC44;&#xB110; &#xBCF4;&#xB2E4; 10 &#xBC30; &#xD070;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xCE21;&#xC815; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xB3C4; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; Ca(2+) &#xAC10;&#xC9C0; &#xC5FC;&#xB8CC; Fluo-4 &#xD568;&#xAED8; &#xB85C;&#xB4DC; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xC0B0;&#xC131;&#xD654; &#xC99D;&#xAC00; [Ca(2+)](i) &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; DRG &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xD544;&#xB4DC;&#xB97C; &#xBA87; &#xAD70;&#xB370;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xBE44;&#xB85D; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xD544;&#xB4DC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC640; ASIC1a &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBB34;&#xB8CC; ca(2+)&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB3C4; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xB3D9;&#xC758; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xB3C4;&#xC804; &#xBCF4;&#xAE30; Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9; &#xC790;&#xCCB4; ASIC1a &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;.

&#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; ASIC1a &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xBB34;&#xC2DC;&#xD560; &#xC218; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9; &#xC2E4;&#xC2DC;.

&#xC1;cido canales i&#xF3;nicos de detecci&#xF3;n (ASIC) son una familia de canales de cationes de protones-dependientes que desempe&#xF1;an un papel en la sensaci&#xF3;n de los est&#xED;mulos nocivos. De &#xE9;stos, ASIC1a es el &#xFA;nico miembro de la familia que se informa a ser permeable a Ca (2 +), aunque la magnitud absoluta de la Ca (2 +) actual no est&#xE1; claro. En este caso, hemos utilizado la fotometr&#xED;a de patch-clamp para determinar la contribuci&#xF3;n de Ca (2 +) a la corriente total a trav&#xE9;s de receptores ASIC1a nativas y recombinantes. Hemos encontrado que la acidificaci&#xF3;n del medio extracelular amilorida evocado y un psalmotoxin sensibles a las corrientes en las neuronas aisladas de pollo dorsal ganglio de la ra&#xED;z y c&#xE9;lulas renales embrionarias humanas, pero no alter&#xF3; fura-2 fluorescencia cuando la concentraci&#xF3;n del ba&#xF1;o de Ca (2 +) estaba cerca de que se encuentra en condiciones fisiol&#xF3;gicas normales. Adem&#xE1;s, la activaci&#xF3;n de receptores recombinantes ASIC1a tambi&#xE9;n fall&#xF3; para producir cambios medibles en la fluorescencia a pesar del hecho de que el cati&#xF3;n de corriente total a trav&#xE9;s del receptor sobreexpresado era diez veces mayor que la de los canales nativos. Finalmente, fotografiado un campo de las neuronas DRG intactas cargado con el Ca (2 +) de detecci&#xF3;n de colorante Fluo-4, y se encontr&#xF3; que la acidificaci&#xF3;n aumentado [Ca (2 +)] (i) en una peque&#xF1;a poblaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas. Por lo tanto, a pesar de nuestros de todo el campo de datos de im&#xE1;genes de acuerdo con estudios previos que la activaci&#xF3;n de los receptores de ASIC1a potencialmente pueden causar elevaciones en el calcio intracelular libre (2 +), los datos de una sola c&#xE9;lula con fuerza desaf&#xED;a la idea de que el Ca (2 +) entrada a trav&#xE9;s del receptor de ASIC1a en s&#xED; misma contribuye a esta respuesta.

Receptores ASIC1a nativos y recombinantes Conducta Insignificante entrada de Ca2 +

Synaptotagmins &#xFF08;syt&#xFF09; Ca2 + &#x4E2D;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;-&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x88AB;&#x5F52;&#x4E8E;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F; Ca2 +-&#x5982;&#x6F84;&#x6D77;&#x4E00;&#x3001; &#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6F84;&#x6D77;&#x56DB;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC; Ca2 + &#x4F9D;&#x8D56;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;-&#x72EC;&#x7ACB;&#x9F3B;&#x606F;&#x8089;&#x4E00;&#x76F4;&#x5728;&#x53C2;&#x4E0E;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x5B9A;&#x5BF9;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x6F84;&#x6D77;&#x56DB;&#x5F71;&#x54CD;&#x90FD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x6F84;&#x6D77;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6211;&#x3002;

&#x56DB;&#x3001; &#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0A;&#x8C03;&#x6291;&#x5236; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5177;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x4E2D;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x6211;&#x51FB;&#x5012;&#x3002;

The function of synaptotagmins (syt) in Ca2+-dependent transmitter release has been attributed primarily to Ca2+-dependent isoforms such as syt I. Recently, syt IV, an inducible Ca2+-independent isoform has been implicated in transmitter release. We postulated that the effects of syt IV on transmitter release are dependent on the expression of syt I.

Upregulation of synaptotagmin IV inhibits transmitter release in PC12 cells with targeted synaptotagmin I knockdown.

La fonction de synaptotagmins (syt) en Ca2 +-d&#xE9;pendante la lib&#xE9;ration du transmetteur a &#xE9;t&#xE9; principalement attribuable &#xE0; Ca2 +-d&#xE9;pendante isoformes comme syt I. R&#xE9;cemment, syt IV, un promoteur inductible Ca2 +-ind&#xE9;pendante isoforme a &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9; dans la lib&#xE9;ration du transmetteur. Nous avons postul&#xE9; que les effets de la syt IV sur la lib&#xE9;ration du transmetteur sont tributaires de l&#x26;#39;expression de la syt I.

R&#xE9;gulation &#xE0; la hausse des synaptotagmine IV inhibe la lib&#xE9;ration de transmetteur dans les cellules PC12 avec synaptotagmine Knockdown cibl&#xE9;e je

Die Funktion des Synaptotagmins (Syt) in Ca2 +-abh&auml;ngige Sender Freigabe hat zugeschrieben worden, in erster Linie auf Ca2 +-abh&auml;ngige Isoformen wie Syt I. vor kurzem, Syt IV, ein durch Induktion Ca2 +-unabh&auml;ngige Isoform hat verwickelt worden, im Sender-Release. Wir postuliert, dass die Auswirkungen der Syt IV auf Sender Freigabe der Ausdruck der Syt abh&auml;ngen ich.

Hochregulation von Synaptotagmin IV hemmt Sender Release im PC12 Zellen mit gezielten Synaptotagmin ich Niederschlag.

La funzione di synaptotagmins (syt) in Ca2 +-rilascio del trasmettitore dipendenti &egrave; stata attribuita principalmente al Ca2 +-dipendente isoforme come syt I. recentemente, syt IV, un viscoelastico Ca2 +-isoforma indipendente &egrave; stata implicata nel rilascio del trasmettitore. Abbiamo postulato che gli effetti della syt IV sul rilascio del trasmettitore sono dipendenti l&#39;espressione della syt io.

Sovraregolazione di SHP2 IV inibisce il rilascio del trasmettitore in cellule PC12 con SHP2 mirati che atterramento.

Ca2 +&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;synaptotagmins&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#xFF08;SYT&#xFF09;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;SYT I.&#x3068;&#x3057;&#x3066;Ca2 +&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4E3B;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;SYT IV&#x306F;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x306E;Ca 2 +&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30BF;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;SYT IV&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;SYT I&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x4EEE;&#x5B9A;

&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BF;&#x30B0;&#x30DF;&#x30F3;IV&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BF;&#x30B0;&#x30DF;&#x30F3;I&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3068;PC12&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;

Synaptotagmins (syt)&#xC5D0;&#xC11C; Ca2 +&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;-&#xC885;&#xC18D; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xC8FC;&#xB85C; Ca2 +&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;-syt I. &#xCD5C;&#xADFC;, syt 4 &#xC138;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; Ca2 +&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC885;&#xC18D; isoforms-&#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; isoform &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; syt IV&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; syt &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D; postulated &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB098;.

Synaptotagmin IV&#xC758; Upregulation &#xC5B5;&#xC81C; &#xB300;&#xC0C1;&#xB41C; synaptotagmin&#xC640; PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xB098; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758;.

La funci&#xF3;n de sinaptotagminas (syt) en Ca2 +-dependiente la liberaci&#xF3;n del transmisor ha sido atribuida principalmente a Ca2 + dependientes de isoformas como syt I. Recientemente, syt IV, un inducible Ca2 +-independiente isoforma ha sido implicado en la liberaci&#xF3;n del transmisor. Se postula que los efectos de syt IV sobre la liberaci&#xF3;n del transmisor son dependientes de la expresi&#xF3;n de syt I.

Article	Year
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Deletion of the synaptic protein interaction site of the N-type (CaV2.2) calcium channel inhibits secretion in mouse pheochromocytoma cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 15471993	2004
Stable gene silencing of synaptotagmin I in rat PC12 cells inhibits Ca2+-evoked release of catecholamine. American journal of physiology. Cell physiology\| PubMed ID: 16467400	2006
Variability in RNA interference in neuroendocrine PC12 cell lines stably transfected with an shRNA plasmid. Journal of neuroscience methods\| PubMed ID: 17767962	2007
Stable RNA interference of synaptotagmin I in PC12 cells results in differential regulation of transmitter release. American journal of physiology. Cell physiology\| PubMed ID: 17913838	2007
Native and recombinant ASIC1a receptors conduct negligible Ca2+ entry. Cell calcium\| PubMed ID: 19185346	2009
Upregulation of synaptotagmin IV inhibits transmitter release in PC12 cells with targeted synaptotagmin I knockdown. BMC neuroscience\| PubMed ID: 20735850	2010

Amy B. Harkins

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