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Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

Dartmouth College

A33 &#x6297;&#x539F;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5C0F;&#x80A0;&#x548C;&#x7ED3;&#x80A0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x5230;&#x7D27;&#x4EA4;&#x754C;&#x5904;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8D85;&#x5BB6;&#x65CF;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6C7D;&#x8F66;&#x548C;&#x7259;&#x4E70;&#x52A0;&#x5176;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x548C;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5DF2;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5229;&#x7528;&#x5176;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7ED3;&#x80A0;&#x80BF;&#x7624;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E2D;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x6297;&#x539F;&#x4E5F;&#x662F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x80A0;&#x9053;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5728;&#x957F;&#x8FBE; 6 &#x5468;&#x7684;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7076;&#x7684;&#x80A0;&#x80BF;&#x7624;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x4FDD;&#x7559; A33 &#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x8FC7;&#x7684;&#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x4E24;&#x6B65;&#xFF0C;pretargeted &#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x8BFA;&#x8A00;&#x3002;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3001; &#x79FB;&#x52A8;&#x548C;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8BC1;&#x660E;&#x6297;&#x539F;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4E0D;&#x52A8;&#x548C;&#x6781;&#x6C38;&#x4E45;&#x4FDD;&#x7559;&#x5176;&#x8868;&#x9762;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4E3A;&#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#x5B83;&#x7684;&#x534A;&#x8870;&#x671F;&#x5927;&#x4E8E; 2 &#x5929;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x91CA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E0D;&#x5BFB;&#x5E38;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8; A33 &#x662F;&#x7D27;&#x4EA4;&#x754C;&#x5904;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#xFF0C;&#x4E0B;&#x9762;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x7B80;&#x5355;&#x5C5E;&#x6027;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7BA1;&#x7406;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x548C;&#x4E0D;&#x5BFB;&#x5E38;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x8981;&#x7A7F;&#x900F;&#x56FA;&#x4F53;&#x80BF;&#x7624;&#x957F;&#x671F;&#x4FDD;&#x7559;&#x3002;

A33 &#x6297;&#x539F;&#x663E;&#x793A;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

The A33 antigen is a cell surface glycoprotein of the small intestine and colonic epithelium with homology to tight junction-associated proteins of the immunoglobulin superfamily, including CAR and JAM. Its restricted tissue localization and high level of expression have led to its use as a target in colon cancer immunotherapy. Although the antigen is also present in normal intestine, radiolabeled antibodies against A33 are selectively retained by tumors in the gut as well as in metastatic lesions for as long as 6 weeks. Accordingly, we have studied the trafficking and kinetic properties of the antigen to determine its promise in two-step, pretargeted therapies. The localization, mobility, and persistence of the antigen were investigated, and this work has demonstrated that the antigen is both highly immobile and extremely persistent-retaining its surface localization for a turnover halflife of greater than 2 days. In order to explain these unusual properties, we explored the possibility that A33 is a component of the tight junction. The simple property of surface persistence, described here, may contribute to the prolonged retention of the clinically administered antibodies, and their uncommon ability to penetrate solid tumors.

A33 antigen displays persistent surface expression.

L&#x26;#39;antig&#xE8;ne A33 est une glycoprot&#xE9;ine de surface cellulaire de l&#x26;#39;intestin gr&#xEA;le et &#xE9;pith&#xE9;lium du c&#xF4;lon avec une homologie &#xE0; la jonction serr&#xE9;s associ&#xE9;s &#xE0; des prot&#xE9;ines de la superfamille des immunoglobulines, y compris la RCA et le JAM. Sa localisation tissulaire restreinte et un haut niveau d&#x26;#39;expression ont conduit &#xE0; son utilisation comme cible dans l&#x26;#39;immunoth&#xE9;rapie du cancer du c&#xF4;lon. Bien que l&#x26;#39;antig&#xE8;ne est &#xE9;galement pr&#xE9;sent dans l&#x26;#39;intestin normale, d&#x26;#39;anticorps radiomarqu&#xE9;s contre A33 sont s&#xE9;lectivement retenu par des tumeurs dans l&#x26;#39;intestin ainsi que dans les m&#xE9;tastases aussi longtemps que 6 semaines. En cons&#xE9;quence, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; les propri&#xE9;t&#xE9;s de trafic et cin&#xE9;tique de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne pour d&#xE9;terminer sa promesse en deux &#xE9;tapes, les th&#xE9;rapies pretargeted. La localisation, la mobilit&#xE9;, et la persistance de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;s, et ce travail a d&#xE9;montr&#xE9; que l&#x26;#39;antig&#xE8;ne est &#xE0; la fois immobile et tr&#xE8;s tr&#xE8;s persistant en conservant sa localisation &#xE0; la surface pour un chiffre d&#x26;#39;affaires de demi-vie sup&#xE9;rieure &#xE0; 2 jours. Afin d&#x26;#39;expliquer ces propri&#xE9;t&#xE9;s inhabituelles, nous avons explor&#xE9; la possibilit&#xE9; que A33 est une composante de la jonction serr&#xE9;e. La propri&#xE9;t&#xE9; simple de la persistance de surface, d&#xE9;crite ici, peut contribuer &#xE0; la r&#xE9;tention prolong&#xE9;e des anticorps administr&#xE9;s en clinique, et leur capacit&#xE9; rare de p&#xE9;n&#xE9;trer les tumeurs solides.

A33 Antig&#xE8;ne de surface Affiche expression persistante

Das A33-Antigen ist eine Zelle Oberfl&auml;che Glykoprotein der D&uuml;nndarm und Kolon Epithel mit Homologie zu enge Kreuzung-assoziierte Proteine der Immunglobulin-Superfamilie, wie Auto und Jak Seine eingeschr&auml;nkte Gewebe Lokalisierung und hohen Ausdruck f&uuml;hrten zu seiner Verwendung als Ziel in Doppelpunkt-Krebs-Immuntherapie. Obwohl das Antigen auch in normalen Darm vorhanden ist, werden radioaktive Antik&ouml;rper gegen A33 selektiv von Tumoren im Darm ebenso wie bei metastasierendem L&auml;sionen solange wie 6 Wochen beibehalten. Dementsprechend haben wir die Menschenhandel und kinetischen Eigenschaften des Antigens bestimmen ihr Versprechen in zwei Schritten, pretargeted Therapien untersucht. Die Lokalisierung, die Mobilit&auml;t und die Persistenz des Antigens wurden untersucht, und diese Arbeit hat gezeigt, dass das Antigen sehr unbeweglich und extrem dauerhafte Beibehaltung seiner Oberfl&auml;che Lokalisierung f&uuml;r eine Umsatz-Halflife von mehr als 2 Tage. Um diese ungew&ouml;hnlichen Eigenschaften erkl&auml;ren, erkunden wir die M&ouml;glichkeit, dass die A33 ein Bestandteil der tight Junction ist. Die blo&szlig;e Eigenschaft von Oberfl&auml;chen Persistenz, hier beschriebene kann zu der verl&auml;ngerte Eigentumsvorbehalt die klinisch administrierten Antik&ouml;rper und ihre ungew&ouml;hnliche F&auml;higkeit, solide Tumoren dringen beitragen.

A33 Antigen zeigt best&auml;ndige Oberfl&auml;che Ausdruck.

L&#39;antigene A33 &egrave; una glicoproteina di superficie delle cellule del piccolo intestino e del colon epitelio con omologia delle proteine associate all&#39;incrocio stretto della superfamiglia delle immunoglobuline, tra cui auto e Jam Sua localizzazione tessuto limitato e l&#39;alto livello di espressione hanno portato al suo uso come destinazione in immunoterapia del cancro del colon. Anche se l&#39;antigene &egrave; presente anche nella normale intestino, radioattivi anticorpi contro A33 vengono mantenuti selettivamente da tumori nell&#39;intestino cos&igrave; come nelle lesioni metastatiche per la durata di 6 settimane. Di conseguenza, abbiamo studiato le propriet&agrave; traffico e cinetiche dell&#39;antigene per determinare la sua promessa in due fasi, terapie pretargeted. La localizzazione, la mobilit&agrave; e la persistenza dell&#39;antigene sono stati studiati, e questo lavoro ha dimostrato che l&#39;antigene &egrave; altamente immobile ed estremamente persistente, mantenendo la superficie localizzazione per halflife un fatturato superiore a 2 giorni. Al fine di spiegare queste propriet&agrave; insolite, abbiamo esplorato la possibilit&agrave; che la A33 &egrave; una componente della giunzione stretta. La semplice propriet&agrave; di persistenza superficiale, qui descritto, pu&ograve; contribuire per la conservazione prolungata di anticorpi clinicamente amministrati e la loro capacit&agrave; rara di penetrare i tumori solidi.

A33 antigene Visualizza persistente espressione superficiale.

A33&#x6297;&#x539F;&#x306F;&#x3001;CAR&#x3068;JAM&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x200B;&#x200B;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x200B;&#x200B;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x8178;&#x3068;&#x5927;&#x8178;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x3068;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6297;&#x539F;&#x306F;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x8178;&#x5185;&#x306B;&#x3082;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;A33&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6A19;&#x8B58;&#x6297;&#x4F53;&#x304C;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x9650;&#x308A;&#x3001;6&#x9031;&#x9593;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8178;&#x5185;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x8EE2;&#x79FB;&#x5DE3;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;pretargeted&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3084;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3001;&#x30E2;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x6027;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x304C;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x52D5;&#x304B;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;2&#x65E5;&#x9593;&#x306E;&#x58F2;&#x4E0A;&#x9AD8;&#x306E;&#x534A;&#x6E1B;&#x671F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x3092;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x7DAD;&#x6301;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;A33&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x200B;&#x200B;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x8981;&#x7D20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x63A2;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x6C38;&#x7D9A;&#x6027;&#x306E;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x6295;&#x4E0E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x4FDD;&#x6301;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x56FA;&#x5F62;&#x816B;&#x760D;&#x3092;&#x8CAB;&#x901A;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x307E;&#x308C;&#x306A;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;

A33&#x6297;&#x539F;&#x306F;&#x3001;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

A33 &#xD56D; &#xC6D0;&#xC744; &#xC18C;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xCC28;&#xC640; &#xC7BC;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; superfamily&#xC758; &#xAF49; &#xC811;&#xD569; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD638;&#xBAB0;&#xB85C;&#xC9C0;&#xC640; &#xC800; &#xC2B9; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC870;&#xC9C1; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC640; &#xC2DD; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xACB0; &#xC7A5; &#xC554; immunotherapy&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0C8;&#xB2E4;. &#xD56D; &#xC6D0;&#xC740; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xCC3D; &#xC790;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC;, a33&#xC5D0; &#xB300;&#xD558;&#xC5EC; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xB41C; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB3C4; &#xD55C; 6 &#xC8FC; &#xC624;&#xB798; &#xC804;&#xC774;&#xC131; &#xBCD1; &#xBCC0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC3D; &#xC790;&#xC5D0; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB530;&#xB77C; &#xC6B0;&#xB9AC; 2 &#xB2E8;&#xACC4;, pretargeted &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; antigen&#xC758; &#xBC00;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC9C0;&#xD654; &#xC131;&#xACFC; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC758; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC774; &#xC77C; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC744; &#xB192;&#xC740; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC774;&#xAE30; &#xD798; &#xB4DC;&#xB294; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC601;&#xAD6C; &#xC720;&#xC9C0;&#xB294; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; 2 &#xC77C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD070; &#xD68C;&#xC804;&#xC728; halflife&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8; &#xD45C;&#xBA74; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD2B9;&#xC774; &#xD55C; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; A33 &#xAE34;&#xBC00; &#xC811;&#xD569;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xD0D0;&#xD5D8;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xB41C; &#xD45C;&#xBA74; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131;&#xC758; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC18D;&#xC131; &#xC784;&#xC0C1; &#xAD00;&#xB9AC; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC885;&#xC591; &#xCE68;&#xD22C; &#xB4DC;&#xBB38; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBCF4;&#xC874;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

A33 &#xD56D; &#xC6D0;&#xC744; &#xC601;&#xAD6C; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD;&#xC774; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El ant&#xED;geno A33 es una glicoprote&#xED;na de superficie de c&#xE9;lulas del intestino delgado y el epitelio del colon con homolog&#xED;a con estrechos asociados uni&#xF3;n-prote&#xED;nas de la superfamilia de las inmunoglobulinas, incluyendo CAR y JAM. Su localizaci&#xF3;n tisular restringida y el alto nivel de expresi&#xF3;n se han llevado a su uso como un objetivo en la inmunoterapia del c&#xE1;ncer de colon. Aunque el ant&#xED;geno est&#xE1; presente tambi&#xE9;n en el intestino normal, anticuerpos radiomarcados contra A33 son selectivamente retenidos por los tumores en el intestino, as&#xED; como en las lesiones metast&#xE1;sicas durante tanto tiempo como 6 semanas. En consecuencia, se han estudiado las propiedades de la trata y la cin&#xE9;tica del ant&#xED;geno para determinar su promesa en dos etapas, las terapias pretargeted. La localizaci&#xF3;n, la movilidad y la persistencia del ant&#xED;geno fueron investigados, y este trabajo ha demostrado que el ant&#xED;geno es altamente inm&#xF3;vil y extremadamente persistente retenci&#xF3;n de su localizaci&#xF3;n superficial para un volumen de negocio de mayor vida media de 2 d&#xED;as. Para explicar estas caracter&#xED;sticas inusuales, hemos explorado la posibilidad de que A33 es un componente de la uni&#xF3;n estrecha. La propiedad simple de persistencia superficie, que se describe aqu&#xED;, puede contribuir a la retenci&#xF3;n prolongada de los anticuerpos cl&#xED;nicamente administrados, y su capacidad para penetrar infrecuente tumores s&#xF3;lidos.

A33 ant&#xED;geno de superficie Muestra expresi&#xF3;n persistente

&#x7A77;&#x4EBA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6E17;&#x900F;&#x662F;&#x6210;&#x529F;&#x6297;&#x4F53;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x5B9E;&#x4F53;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x5927;&#x969C;&#x788D;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x4F5C;&#x51FA;&#x5404;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x836F;&#x7269;&#x6539;&#x5584;&#x6E17;&#x900F;&#x548C;&#x66DD;&#x5149;&#x5747;&#x5300;&#x6027;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x5C5E;&#x6027;&#x5916;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x836F;&#x7269;&#xFF0C;&#x6297;&#x4F53;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x6570;&#x5B66;&#x6A21;&#x578B;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x548C;&#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#x589E;&#x957F;&#x7387;&#x5927;&#x5927;&#x5F71;&#x54CD;&#x6E17;&#x900F;&#x3002;&#x56FA;&#x6709;&#x6297;&#x539F;&#x5C5E;&#x6027;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x5F88;&#x96BE;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53EF;&#x80FD;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x4E3A;&#x6E17;&#x900F;&#x7684;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5176;&#x8D21;&#x732E;&#x8BC4;&#x4F30;&#x6240;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x7A7F;&#x900F;&#x7403;&#x65F6;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6297;&#x539F;&#x5C5E;&#x6027;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x5404;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x764C;&#x80DA;&#x6297;&#x539F;&#x4E0E; A33&#xFF0C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x6E17;&#x900F;&#x56FE;&#x8C31;&#x8FDB;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x597D;&#x4E0E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x9884;&#x6D4B;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x540C;&#x610F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x663E;&#x793A;&#x901A;&#x8FC7;&#x9009;&#x62E9;&#x6162;&#x6162;&#x5185;&#x5728;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x672A;&#x8868;&#x793A;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x62DB;&#x8058;&#x6BD2;&#x6027;&#x5242;&#x91CF;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7EA7;&#x522B;&#x6700;&#x597D;&#x5B9E;&#x73B0;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5230;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6297;&#x4F53;&#x6297;&#x539F;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x7FFB;&#x6216;&#x8FC7;&#x5269;&#x7684;&#x73B0;&#x72B6;&#x4F1A;&#x62DB;&#x81F4;&#x5B9E;&#x9645;&#x6210;&#x672C;&#x65B9;&#x9762;&#x6E17;&#x900F;&#x6DF1;&#x5EA6;-&#x6709;&#x6548;&#x7597;&#x6CD5;&#x6CBB;&#x7597;&#x5B9E;&#x4F53;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

&#x5BF9;&#x80BF;&#x7624;&#x7403;&#x4FB5;&#x5F7B;&#x6297;&#x4F53;&#x6297;&#x539F;&#x66F4;&#x66FF;&#x7387;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Poor tissue penetration is a significant obstacle to the development of successful antibody drugs for immunotherapy of solid tumors, and diverse alterations to the properties of antibody drugs have been made to improve penetration and homogeneity of exposure. However, in addition to properties of the antibody drug, mathematical models of antibody transport predict that the antigen expression level and turnover rate significantly influence penetration. As intrinsic antigen properties are likely to be difficult to modify, they may set inherent limits to penetration. Accordingly, in this study, we assess their contribution by evaluating the distance to which antibodies penetrate spheroids when these antigen properties are systematically varied. Additionally, the penetration profiles of antibodies against carcinoembryonic antigen and A33, two targets of clinical interest, are compared. The results agree well with the quantitative predictions of the model and show that localizing antibody to distal regions of tumors is best achieved by selecting slowly internalized targets that are not expressed above the level necessary for recruiting a toxic dose of therapeutic. Each antibody-bound antigen molecule that is turned over or present in excess incurs a real cost in terms of penetration depth-a limiting factor in the development of effective therapies for treating solid tumors.

Effect of antigen turnover rate and expression level on antibody penetration into tumor spheroids.

La p&#xE9;n&#xE9;tration tissulaire pauvres est un obstacle important au d&#xE9;veloppement de m&#xE9;dicaments anticorps efficaces pour l&#x26;#39;immunoth&#xE9;rapie des tumeurs solides, et des alt&#xE9;rations diverses aux propri&#xE9;t&#xE9;s des m&#xE9;dicaments anticorps ont &#xE9;t&#xE9; faits pour am&#xE9;liorer la p&#xE9;n&#xE9;tration et l&#x26;#39;homog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; de l&#x26;#39;exposition. Cependant, en plus des propri&#xE9;t&#xE9;s du m&#xE9;dicament anticorps, des mod&#xE8;les math&#xE9;matiques de transport d&#x26;#39;anticorps pr&#xE9;disent que le niveau d&#x26;#39;expression d&#x26;#39;antig&#xE8;ne et le taux de roulement influencer de mani&#xE8;re significative la p&#xE9;n&#xE9;tration. Comme les propri&#xE9;t&#xE9;s intrins&#xE8;ques d&#x26;#39;antig&#xE8;nes sont susceptibles d&#x26;#39;&#xEA;tre difficile &#xE0; modifier, ils peuvent fixer des limites inh&#xE9;rentes &#xE0; la p&#xE9;n&#xE9;tration. En cons&#xE9;quence, dans cette &#xE9;tude, nous &#xE9;valuons leur contribution en &#xE9;valuant la distance &#xE0; laquelle anticorps p&#xE9;n&#xE8;trent sph&#xE9;ro&#xEF;des lorsque ces propri&#xE9;t&#xE9;s antig&#xE9;niques sont syst&#xE9;matiquement modifi&#xE9;s. En outre, les profils de p&#xE9;n&#xE9;tration des anticorps dirig&#xE9;s contre l&#x26;#39;antig&#xE8;ne carcinoembryonnaire et A33, deux cibles d&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t clinique, sont compar&#xE9;s. Les r&#xE9;sultats sont en bon accord avec les pr&#xE9;dictions quantitatives du mod&#xE8;le et de montrer que la localisation d&#x26;#39;anticorps dans les r&#xE9;gions distales des tumeurs est le mieux r&#xE9;alis&#xE9; en s&#xE9;lectionnant des cibles lentement int&#xE9;rioris&#xE9;es qui ne sont pas exprim&#xE9;es au-dessus du niveau n&#xE9;cessaire pour le recrutement d&#x26;#39;une dose toxique de th&#xE9;rapeutique. Chaque mol&#xE9;cule d&#x26;#39;antig&#xE8;ne li&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;anticorps qui est remis ou pr&#xE9;senter en exc&#xE8;s encourt un co&#xFB;t r&#xE9;el en termes de p&#xE9;n&#xE9;tration en profondeur un facteur limitant dans le d&#xE9;veloppement de th&#xE9;rapies efficaces pour traiter les tumeurs solides.

Effet du taux de rotation et le niveau d&#x26;#39;expression Antig&#xE8;ne sur la p&#xE9;n&#xE9;tration d&#x26;#39;anticorps en sph&#xE9;ro&#xEF;des tumoraux

Schlechte Gewebe eindringen ist ein signifikantes Hindernis f&uuml;r die Entwicklung erfolgreicher Antik&ouml;rpermedikamente zur Immuntherapie solider Tumoren und diverse &Auml;nderungen an den Eigenschaften der Antik&ouml;rpermedikamente zur Verbesserung der Penetration und Homogenit&auml;t der Exposition vorgenommen wurden. Jedoch, abgesehen von den Eigenschaften der Antik&ouml;rper-Wirkstoff mathematische Modelle der Antik&ouml;rper-Transport prognostizieren, dass die Antigen-Ausdrucksebene und Umsatz deutlich bewerten Durchdringung zu beeinflussen. Als systeminterne Antigen Eigenschaften wahrscheinlich schwer zu &auml;ndern sind, k&ouml;nnen sie auf Durchdringung inh&auml;rente Grenzen festgelegt. Dementsprechend in dieser Studie bewerten wir ihren Beitrag durch die Entfernung zu der Antik&ouml;rper Sph&auml;roide durchdringen, wenn diese Antigen-Eigenschaften sind systematisch vielf&auml;ltig auswerten. Dar&uuml;ber hinaus werden die Profile Eindringen von Antik&ouml;rpern gegen carcinoembryonales Antigen und A33, zwei Ziele von klinischen Interesse, verglichen. Die Ergebnisse stimmen gut mit den quantitativen Vorhersagen des Modells und zeigen, dass die Lokalisierung von Antik&ouml;rper zu distalen Regionen von Tumoren am besten erreicht wird, durch die Auswahl langsam verinnerlichten Ziele, die nicht &uuml;ber dem Niveau f&uuml;r die Rekrutierung einer toxischen Dosis von therapeutischen notwendig ausgedr&uuml;ckt sind. Jeder Antik&ouml;rper gebundene Antigen-Molek&uuml;l, das &uuml;bergeben wird oder Gegenwart im &Uuml;berma&szlig; verursacht einen realen Kosten in Bezug auf die Durchdringung Tiefe-ein limitierender Faktor bei der Entwicklung von wirksamen Therapien zur Behandlung von solide Tumoren.

Effekt des Antigens Umsatz Rate und Ausdruck auf Antik&ouml;rper das Eindringen in den Tumor Sph&auml;roide.

Tessuto scarsa penetrazione &egrave; un ostacolo significativo per lo sviluppo di farmaci di successo dell&#39;anticorpo per l&#39;immunoterapia dei tumori solidi, e sono state apportate diverse modifiche alle propriet&agrave; dei farmaci dell&#39;anticorpo per migliorare la penetrazione e l&#39;omogeneit&agrave; di esposizione. Tuttavia, oltre alle propriet&agrave; del farmaco anticorpo, modelli matematici di trasporto anticorpo predicono che il livello di espressione dell&#39;antigene e fatturato tasso significativamente influenzare la penetrazione. Come propriet&agrave; intrinseca dell&#39;antigene sono suscettibili di essere difficile da modificare, si possono impostare limiti inerenti alla penetrazione. Di conseguenza, in questo studio, valutiamo il loro contributo valutando la distanza a cui gli anticorpi penetrano sferoidi quando queste propriet&agrave; antigene sistematicamente sono molteplici. Inoltre, i profili di penetrazione degli anticorpi contro l&#39;antigene carcino-embrionario e A33, due destinazioni di interesse clinico, vengono confrontati. I risultati concordano bene con le previsioni quantitative del modello e visualizza che localizzazione anticorpo nelle regioni distali dei tumori &egrave; meglio raggiunto selezionando lentamente interiorizzati obiettivi che non sono espressi di sopra del livello necessario per l&#39;assunzione di una dose tossica di terapeutica. Ogni molecola legata all&#39;anticorpo antigene che &egrave; capovolta o presenti in eccesso comporta un costo in termini di penetrazione profondit&agrave;, un fattore limitante nello sviluppo di terapie efficaci per il trattamento dei tumori solidi di reale.

Effetto del livello di espressione e tasso di fatturato dell&#39;antigene sulla penetrazione dell&#39;anticorpo in sferoidi di tumore.

&#x60AA;&#x3044;&#x7D44;&#x7E54;&#x3078;&#x306E;&#x6D78;&#x900F;&#x306F;&#x3001;&#x56FA;&#x5F62;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x6297;&#x4F53;&#x533B;&#x85AC;&#x306E;&#x767A;&#x5C55;&#x306B;&#x591A;&#x5927;&#x306A;&#x969C;&#x5BB3;&#x3068;&#x3001;&#x6D78;&#x900F;&#x3084;&#x9732;&#x51FA;&#x306E;&#x5747;&#x4E00;&#x6027;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x6570;&#x5B66;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x96E2;&#x8077;&#x7387;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x6D78;&#x900F;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x56F0;&#x96E3;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x4FB5;&#x5165;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x6027;&#x304C;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x56DE;&#x8EE2;&#x6955;&#x5186;&#x4F53;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x8CAB;&#x901A;&#x3059;&#x308B;&#x8DDD;&#x96E2;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x764C;&#x80CE;&#x5150;&#x6027;&#x6297;&#x539F;&#x3068;A33&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x6D78;&#x900F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x304C;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3068;&#x3088;&#x304F;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x9060;&#x4F4D;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x6700;&#x5584;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x6BD2;&#x6027;&#x7528;&#x91CF;&#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x3066;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#x5185;&#x9762;&#x5316;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x6D78;&#x900F;&#x56FA;&#x5F62;&#x816B;&#x760D;&#x3092;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x6DF1;&#x3055;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x9762;&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x3092;&#x62DB;&#x304D;&#x306B;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5404;&#x6297;&#x4F53;&#x7D50;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

&#x816B;&#x760D;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x3078;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x96E2;&#x8077;&#x7387;&#x3068;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;

&#xBD88; &#xC30D; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xCE68;&#xD22C; &#xACE0;&#xCCB4; &#xC885;&#xC591;&#xC758; immunotherapy&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC758;&#xC57D;&#xD488;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC78;&#xB9BC;&#xB3CC;&#xC774; &#xACE0; &#xCE68;&#xD22C;&#xC640; &#xB178;&#xCD9C;&#xC758; &#xB3D9;&#xC9C8;&#xC131;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC758;&#xC57D;&#xD488;&#xC758; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD56D; &#xCCB4; &#xC758;&#xC57D;&#xD488;&#xC758; &#xC18D;&#xC131;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xC218;&#xD559;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378; &#xC608;&#xCE21; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900; &#xBC0F; &#xB9E4;&#xCD9C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCE68;&#xD22C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;. &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC18D;&#xC131;&#xC740; &#xC218;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B8; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xCE68;&#xD22C;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xC7AC; &#xB41C; &#xD55C;&#xACC4;&#xB97C; &#xC124;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB530;&#xB77C;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC788;&#xB294; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC18D;&#xC131;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD558; &#xACE0; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; spheroids&#xC744; &#xAD00;&#xD1B5; &#xD558;&#xB294; &#xAC70;&#xB9AC;&#xB97C; &#xACC4;&#xC0B0; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD3C9;&#xAC00;. &#xB610;&#xD55C;, carcinoembryonic antigen&#xC640; A33, &#xC784;&#xC0C1; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xCE68;&#xD22C; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C; &#xBE44;&#xAD50; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xC608;&#xCE21; &#xC798; &#xB3D9;&#xC758; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xD56D; &#xCCB4; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xB3C5;&#xC131; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC218;&#xC900; &#xC704;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xCC9C;&#xCC9C;&#xD788; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2EC;&#xC131; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xAC01; &#xC778;&#xACC4;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD56D; &#xCCB4; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBD84;&#xC790; &#xB610;&#xB294; &#xCD08;&#xACFC; &#xC9C4;&#xC9DC;&#xB97C; &#xB2E8;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC885;&#xC591; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC694;&#xBC95;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC81C;&#xD55C; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xAE4A;&#xC774;&#xB294; &#xCE68;&#xD22C; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC6A9;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC885;&#xC591; spheroids&#xB85C; &#xCE68;&#xD22C; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xD56D; &#xC6D0; &#xB9E4;&#xCD9C;&#xC561; &#xBE44;&#xC728;&#xACFC; &#xC2DD; &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;.

Penetraci&#xF3;n en el tejido pobre es un obst&#xE1;culo importante para el desarrollo de f&#xE1;rmacos de anticuerpos con &#xE9;xito para la inmunoterapia de los tumores s&#xF3;lidos, y diversas alteraciones en las propiedades de los f&#xE1;rmacos de anticuerpos se han hecho para mejorar la penetraci&#xF3;n y la homogeneidad de la exposici&#xF3;n. Sin embargo, adem&#xE1;s de las propiedades del f&#xE1;rmaco anticuerpo, los modelos matem&#xE1;ticos de transporte anticuerpo predecir que el nivel de expresi&#xF3;n del ant&#xED;geno y tasa de rotaci&#xF3;n influyen significativamente la penetraci&#xF3;n. Como las propiedades intr&#xED;nsecas de ant&#xED;geno es probable que sean dif&#xED;ciles de modificar, se puede establecer l&#xED;mites inherentes a la penetraci&#xF3;n. Por consiguiente, en este estudio, evaluar su contribuci&#xF3;n mediante la evaluaci&#xF3;n de la distancia a la que los anticuerpos penetran esferoides cuando estas propiedades antig&#xE9;nicas son sistem&#xE1;ticamente variadas. Adem&#xE1;s, los perfiles de penetraci&#xF3;n de los anticuerpos contra el ant&#xED;geno carcinoembrionario y A33, dos objetivos de inter&#xE9;s cl&#xED;nico, se comparan. Los resultados concuerdan con las predicciones cuantitativas del modelo y muestran que la localizaci&#xF3;n de anticuerpos a las regiones distales de los tumores se logra mejor mediante la selecci&#xF3;n de objetivos poco a poco interiorizado que no se expresan por encima del nivel necesario para la contrataci&#xF3;n de una dosis t&#xF3;xica de la terap&#xE9;utica. Cada anticuerpo-ant&#xED;geno unido mol&#xE9;cula que es entregado o presentes en exceso incurre un coste real en t&#xE9;rminos de profundidad de penetraci&#xF3;n, un factor limitante en el desarrollo de terapias eficaces para el tratamiento de tumores s&#xF3;lidos.

Efecto de la tasa de ant&#xED;geno El volumen de negocios y nivel de expresi&#xF3;n en la penetraci&#xF3;n de anticuerpos en esferoides tumorales

&#xC5EC;&#xAE30; &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; IgG scFv bifunctional &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; Igg&#xC758; &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778;&#xC758; C-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC548;&#xC815; Scfv&#xB294; &#xD4E8;&#xC988;&#xAC00; bispecific &#xD56D; &#xCCB4; (bsAb) &#xD615;&#xC2DD;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xC6D0;&#xC2A4;&#xD15D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xD654; &#xB54C;&#xB97C; bsAb &#xAC01; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xBD80;&#xBAA8;&#xC758; &#xB3D9;&#xC9C8;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; Igg&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC548;&#xC815;&#xC131; vivo&#xC5D0;&#xC11C; IgG &#xAC19;&#xC740; &#xC885;&#xC591;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xD53C; &#xC815;&#xB9AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE5B;&#xACFC; &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xC1E0;&#xC0AC;&#xC2AC;; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB294; scFv &#xB610;&#xB294; &#xC2EC;&#xC9C0;&#xC5B4; &#xB354; &#xC791;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC640; Igg&#xC758; &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778;&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xC9C0; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;&#xC774; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;, &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xB610;&#xB294; Igg&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC5EC;&#xAE30;&#xB294; Igg&#xC758; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778; IgG &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xD55C; scFv &#xD568;&#xAED8; &#xD655;&#xC7A5; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD615;&#xC2DD;&#xC740; &#xAE30;&#xB2A5; bsAbs &#xAC74;&#xC124;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD45C;&#xC900;&#xD654; &#xB41C; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBAA8;&#xB4C8;&#xD615; IgG scFv bispecific &#xD56D; &#xCCB4; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;scFv&#x306F;IgG-scFv&#x304C;&#x4E8C;&#x5B98;&#x80FD;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;IgG&#x306E;&#x8EFD;&#x9396;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E8C;&#x91CD;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#xFF08;bsAb&#xFF09;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x30EF;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;bsAb&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x89AA;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x3001;&#x5C55;&#x793A;&#x306E;IgG&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;in vivo&#x3067;&#x306E;IgG&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6A19;&#x7684;&#x816B;&#x760D;&#x3068;&#x8840;&#x4E2D;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; scFv&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;IgG&#x306E;&#x8EFD;&#x9396;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x8EFD;&#x9396;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x91CD;&#x9396;&#x9593;&#x306E;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3084;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; IgG&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;IgG&#x306E;&#x8EFD;&#x9396;&#x304C;IgG&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305A;&#x306B;&#x3001;scFv&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x62E1;&#x5F35;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5F62;&#x5F0F;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;bsAbs&#x306E;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30E9;&#x30FC;&#x306E;IgG-scFv&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;

&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5411;&#x521B;&#x5EFA; IgG &#x6297;&#x4F53;&#x53CC;&#x529F;&#x80FD;&#x6297;&#x4F53; igg &#x6297;&#x4F53;&#x8F7B;&#x94FE; C-&#x5DF4;&#x58EB;&#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x4FDD;&#x9669;&#x4E1D;&#x70E7;&#x65AD;&#x7684;&#x53CC;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53; &#xFF08;bsAb&#xFF09; &#x683C;&#x5F0F;&#x3002;&#x5F53;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x4E00;&#x6B65;&#x6CD5;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#xFF0C;bsAb &#x4FDD;&#x7559;&#x4EB2;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x57DF;&#x3001; &#x5C55;&#x54C1; IgG &#x6837;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C;&#x6F14;&#x793A;&#x4F53;&#x5185; IgG &#x6837;&#x80BF;&#x7624;&#x9776;&#x5411;&#x548C;&#x8840;&#x901A;&#x5173;&#x3002;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x6269;&#x5C55;&#x7684; IgG &#x6297;&#x4F53;&#x6216;&#x751A;&#x81F3;&#x66F4;&#x5C0F;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x548C;&#x8F7B;&#x94FE; C-&#x5DF4;&#x58EB;&#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x6270;&#x4E71;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5F62;&#x6210;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8F7B;&#x3001; &#x91CD;&#x94FE; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3001; &#x7A33;&#x5B9A;&#x6216;&#x4F53;&#x5185; IgG &#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8F7B;&#x94FE;&#x5EF6;&#x957F;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD; IgG &#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x683C;&#x5F0F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6807;&#x51C6;&#x5316;&#x5E73;&#x53F0;&#x7684;&#x529F;&#x80FD; bsAbs &#x7684;&#x5EFA;&#x8BBE;&#x3002;

&#x4E00;&#x79CD;&#x6A21;&#x5757;&#x5316;&#x7684; IgG &#x6297;&#x4F53;&#x53CC;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x62D3;&#x6251;&#x3002;

Here we present a bispecific antibody (bsAb) format in which a disulfide-stabilized scFv is fused to the C-terminus of the light chain of an IgG to create an IgG-scFv bifunctional antibody. When expressed in mammalian cells and purified by one-step protein A chromatography, the bsAb retains parental affinities of each binding domain, exhibits IgG-like stability and demonstrates in vivo IgG-like tumor targeting and blood clearance. The extension of the C-terminus of the light chain of an IgG with an scFv or even a smaller peptide does appear to disrupt disulfide bond formation between the light and heavy chains; however, this does not appear to affect binding, stability or in vivo properties of the IgG. Thus, we demonstrate here that the light chain of an IgG can be extended with an scFv without affecting IgG function and stability. This format serves as a standardized platform for the construction of functional bsAbs.

A modular IgG-scFv bispecific antibody topology.

Ici pr&#xE9;senter un anticorps bisp&#xE9;cifique (BSAB) format dans lequel un scFv disulfure-stabilis&#xE9; est fusionn&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale de la cha&#xEE;ne l&#xE9;g&#xE8;re d&#x26;#39;une IgG de cr&#xE9;er un anticorps IgG-scFv bifonctionnel. Lorsqu&#x26;#39;elle est exprim&#xE9;e dans les cellules de mammif&#xE8;res et purifi&#xE9; par une &#xE9;tape de la prot&#xE9;ine A chromatographie, la BSAB conserve affinit&#xE9;s parentales de chaque domaine de liaison, des expositions IgG-comme la stabilit&#xE9; et d&#xE9;montre in vivo IgG-like ciblage de la tumeur et d&#x26;#39;&#xE9;puration du sang. L&#x26;#39;extension de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale de la cha&#xEE;ne l&#xE9;g&#xE8;re d&#x26;#39;une IgG avec un scFv ou m&#xEA;me un petit peptide ne semblent perturber la formation de pont disulfure entre les cha&#xEE;nes l&#xE9;g&#xE8;res et lourdes, mais cela ne semble pas affecter la liaison, la stabilit&#xE9; ou in vivo propri&#xE9;t&#xE9;s de l&#x26;#39;IgG. Ainsi, nous d&#xE9;montrons ici que la cha&#xEE;ne l&#xE9;g&#xE8;re d&#x26;#39;un IgG peut &#xEA;tre &#xE9;tendu avec un scFv sans affecter la fonction IgG et la stabilit&#xE9;. Ce format sert de plate-forme normalis&#xE9;e pour la construction de BsAb fonctionnels.

Un modulaire IgG-scFv bisp&#xE9;cifique Anticorps topologie

Hier pr&auml;sentieren wir ein Bispezifischer Antik&ouml;rper (BsAb) Format, in denen ein Disulfid-stabilisierte ScFv verschmolzen wird, der C-Terminus der leichten Kette von einer IgG einen Bifunktionelles IgG-ScFv-Antik&ouml;rper zu erstellen. Wenn in den S&auml;ugetier-Zellen ausgedr&uuml;ckt und durch einstufige Protein eine Chromatographie gereinigt, die BsAb beh&auml;lt elterliche Affinit&auml;ten jeder Bindung-Dom&auml;ne, IgG-wie Stabilit&auml;t und demonstriert in-vivo-IgG-artigen Tumor-targeting und Blut-Abfertigung. Die Verl&auml;ngerung der C-Terminus der leichten Kette von einer IgG mit einem ScFv oder sogar ein kleiner Peptid erscheint Disulfid-Bond-Bildung zwischen den leichten und schweren Ketten zu st&ouml;ren; Dies erscheint jedoch nicht verbindliche, Stabilit&auml;t oder in-vivo-Eigenschaften von IgG beeinflussen. Daher zeigen wir hier, dass die leichte Kette von einer IgG mit einem ScFv erweitert werden kann, ohne dass IgG-Funktion und Stabilit&auml;t. Dieses Format dient als eine standardisierte Plattform f&uuml;r den Bau von funktionalen BsAbs.

Eine modulare IgG-ScFv Bispezifischer Antik&ouml;rper Topologie.

Presentiamo qui un formato (bsAb) Anticorpo bispecific in cui si fonde un scFv disolfuro-stabilizzato al C-terminale della catena leggera di un IgG per creare un anticorpo di IgG-scFv bifunzionale. Quando espresso in cellule di mammifero e purificata dalla proteina in un solo passaggio una cromatografia, la bsAb mantiene affinit&agrave; parentale di ogni dominio di legame, IgG-come stabilit&agrave; e vengono illustrati liquidazione targeting e sangue in vivo-IgG-come tumore. L&#39;estensione del C-terminale della catena leggera di una IgG con un scFv o addirittura un piccolo peptide sembrano ostacolare la formazione di legami disolfuro tra le catene leggere e pesanti; Tuttavia, questo non sembra influire sulla propriet&agrave; in vivo delle IgG, stabilit&agrave; o associazione. Cos&igrave;, noi dimostrare qui che la catena leggera di un IgG pu&ograve; essere esteso con un scFv senza compromettere la stabilit&agrave; e la funzione di IgG. Questo formato serve come piattaforma standard per la costruzione di bsAbs funzionale.

Una topologia di anticorpi bispecific IgG-scFv modulare.

Aqu&#xED; se presenta un anticuerpo biespec&#xED;fico (bsAb) formato en el que un scFv disulfuro estabilizado se fusiona con el C-terminal de la cadena ligera de una IgG para crear un anticuerpo IgG-scFv bifuncional. Cuando se expresa en c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros y purificada por la prote&#xED;na de un solo paso una cromatograf&#xED;a, la bsAb mantiene afinidades de los padres de cada dominio de uni&#xF3;n, exposiciones IgG-como la estabilidad y la muestra en vivo de IgG-como la orientaci&#xF3;n del tumor y la depuraci&#xF3;n de la sangre. La extensi&#xF3;n del C-terminal de la cadena ligera de una IgG con un scFv o incluso un peque&#xF1;o p&#xE9;ptido parece perturbar la formaci&#xF3;n de enlaces disulfuro entre la luz y las cadenas pesadas, sin embargo, esto no parece afectar a la estabilidad de uni&#xF3;n, o in vivo propiedades de la IgG. Por lo tanto, hemos demostrado aqu&#xED; que la cadena ligera de la IgG se puede ampliar con un scFv sin afectar la funci&#xF3;n de IgG y la estabilidad. Este formato sirve como una plataforma estandarizada para la construcci&#xF3;n de BSABS funcionales.

Un modular de IgG-anticuerpos scFv biespec&#xED;fico Topolog&#xED;a

&#x5D0E;&#x5C96;&#x4E0D;&#x5E73;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x5E8F;&#x5217;&#x529F;&#x80FD;&#x666F;&#x89C2;&#x4F7F;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6027;&#x8D28;&#x5E76;&#x5728;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x91CC;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x529F;&#x80FD;&#x590D;&#x6742;&#x5316;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x5E93;&#x591A;&#x6837;&#x5316;&#x5FC5;&#x987B;&#x8DB3;&#x591F;&#x6591;&#x9A73;&#x5F7B;&#x5E95;&#x6837;&#x672C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x8BB2;&#x5F97;&#x901A;&#x7684;&#x9608;&#x503C;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x6982;&#x7387;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x529F;&#x80FD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x53D6;&#x5F97;&#x5E73;&#x8861;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE; Ig &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x5E93;&#x63A2;&#x7D22;&#x5E8F;&#x5217;&#x529F;&#x80FD;&#x666F;&#x89C2;&#x7B5B;&#x67E5;&#x5206;&#x5B50;&#x8BC6;&#x522B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x3002;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E09;&#x57DF;&#x7528;&#x6765;&#x63A2;&#x7D22;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5E8F;&#x5217;&#x591A;&#x6837;&#x5316;&#x6218;&#x7565;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF1A; &#x7ED3;&#x6784;&#x91CD;&#x8981;&#x9635;&#x5730;&#x5185;&#x7684; paratope &#x5730;&#x533A;&#x548C; (b) (a) &#x90E8;&#x5206;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x517B;&#x62A4;&#x91CF;&#x8EAB;&#x5B9A;&#x505A;&#x6A21;&#x4EFF;&#x5047;&#x5B9A; paratope &#x9635;&#x5730;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;Paratope &#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x91CD;&#x8981;&#x804C;&#x52A1;&#x786E;&#x5B9A;&#x901A;&#x8FC7;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3001; &#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x90E8;&#x5206;&#x6216;&#x5B8C;&#x5168;&#x4FDD;&#x5B88;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x3002;&#x5B9E;&#x73B0;&#x5B9A;&#x5236;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E86;&#x4E00;&#x5957;&#x659C;&#x7684;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x4EA7;&#x751F;&#x5927;&#x7EA6;&#x5339;&#x914D;&#x6297;&#x4F53;&#x4E92;&#x8865;&#x786E;&#x5B9A;&#x5730;&#x533A;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E; triphosphoramidite &#x7684;&#x65BD;&#x5DE5;&#x8D39;&#x7528;&#x5206;&#x914D;&#x7684;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E09;&#x79CD;&#x5E93;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x5143;&#x7D20;&#xFF1A; &#x968F;&#x673A;&#x5E93;&#x3001; &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x4E2D;&#x504F;&#x5411;&#x5FB7;&#x5FAA;&#x73AF;&#x53EA;&#x548C;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x5730;&#x65B9;&#xFF0C;&#x6709;&#x7684;&#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#x548C;&#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#x7684; 11 &#x4E2A;&#x804C;&#x4F4D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#x542F;&#x53D1;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x504F;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5171;&#x7528;&#x7684;&#x5E93;&#x4E3A;&#x5355;&#x7BA1;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ADE;&#x4E89;&#xFF0C;&#x9009;&#x62E9;&#x4E0E;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x7C98;&#x5408;&#x5242;&#x7684;&#x4E03;&#x4E2A;&#x76EE;&#x6807;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x6E90;&#x81EA;&#x4E8E;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0A;&#x6709;&#x504F;&#x89C1;&#x3001; &#x5B9A;&#x5236;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x5E93;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684; 21 &#x65E0;&#x6027;&#x7CFB; 19&#x3002;&#x5BF9;&#x9009;&#x5B9A;&#x514B;&#x9686;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x652F;&#x6301;&#x5B9A;&#x5236;&#x7EC4;&#x5408;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x504F;&#x5DEE;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5E93;&#x4E95;&#x548C;&#x4E0D;&#x5584;&#x8868;&#x8FBE;&#x514B;&#x9686;&#x9009;&#x62E9;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x9610;&#x660E;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x504F;&#x5DEE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x7A33;&#x5B9A;&#x548C; CDR &#x7EC4;&#x6210;&#x504F;&#x89C1;&#x4E30;&#x5BCC;&#x8054;&#x7F16;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x529F;&#x80FD;&#x666F;&#x89C2;&#x3002;

The rugged protein sequence-function landscape complicates efforts, both in nature and in the laboratory, to evolve protein function. Protein library diversification must strike a balance between sufficient variegation to thoroughly sample alternative functionality versus the probability of mutant destabilization below an expressible threshold. In this work, we explore the sequence-function landscape in the context of screening for molecular recognition from an Ig scaffold library. The fibronectin type III domain is used to explore the impact of two sequence diversification strategies: (a) partial wild-type conservation at structurally important positions within the paratope region and (b) tailored amino acid composition mimicking antibody binding-site composition at putative paratope positions. Structurally important positions within the paratope region were identified through stability, structural, and phylogenetic analyses and partially or fully conserved in sequence. To achieve tailored antibody-like diversity, we designed a set of skewed nucleotide mixtures yielding codons approximately matching the distribution observed in antibody complementarity-determining regions without incurring the expense of triphosphoramidite-based construction. These design elements were explored via comparison of three library designs: a random library, a library with wild-type bias in the DE loop only and tyrosine-serine diversity elsewhere, and a library with wild-type bias at 11 positions and the antibody-inspired amino acid distribution. Using pooled libraries for direct competition in a single tube, selection and maturation of binders to seven targets yielded 19 of 21 clones that originated from the structurally biased, tailored-diversity library design. Sequence analysis of the selected clones supports the importance of both tailored compositional diversity and structural bias. In addition, selection of both well and poorly expressed clones from two libraries further elucidated the impact of structural bias.

Stability and CDR composition biases enrich binder functionality landscapes.

La prot&#xE9;ine sauvage s&#xE9;quence fonction du paysage complique les efforts, tant dans la nature et en laboratoire, pour &#xE9;voluer la fonction des prot&#xE9;ines. La diversification biblioth&#xE8;que de prot&#xE9;ines doit trouver un &#xE9;quilibre entre panachure suffisante pour bien d&#xE9;guster une fonctionnalit&#xE9; alternative contre la probabilit&#xE9; de d&#xE9;stabilisation mutant dessous d&#x26;#39;un seuil exprimable. Dans ce travail, nous explorons le paysage s&#xE9;quence fonction dans le cadre du d&#xE9;pistage pour la reconnaissance mol&#xE9;culaire &#xE0; partir d&#x26;#39;une biblioth&#xE8;que Ig &#xE9;chafaud. La fibronectine de type III de domaine est utilis&#xE9; pour explorer l&#x26;#39;impact de deux strat&#xE9;gies de diversification de s&#xE9;quence: (a) partielle de type sauvage de conservation &#xE0; des positions structurellement importants au sein de la r&#xE9;gion paratope et (b) la composition en acides amin&#xE9;s imitant mesure de liaison d&#x26;#39;anticorps place la composition au paratope putative positions. Positions structurellement importants au sein de la r&#xE9;gion ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s paratope gr&#xE2;ce &#xE0; la stabilit&#xE9;, de structure, et des analyses phylog&#xE9;n&#xE9;tiques et partiellement ou totalement conserv&#xE9;e dans la s&#xE9;quence. Pour atteindre adapt&#xE9;e anticorps comme la diversit&#xE9;, nous avons con&#xE7;u un ensemble de m&#xE9;langes asym&#xE9;triques nucl&#xE9;otidiques produisant environ codons correspondant &#xE0; la r&#xE9;partition observ&#xE9;e dans d&#x26;#39;anticorps d&#xE9;terminant la compl&#xE9;mentarit&#xE9; des r&#xE9;gions sans assumer la d&#xE9;pense de triphosphoramidite bas&#xE9;e sur la construction. Ces &#xE9;l&#xE9;ments de design ont &#xE9;t&#xE9; explor&#xE9;s par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire de comparaison de trois mod&#xE8;les de la biblioth&#xE8;que: une biblioth&#xE8;que al&#xE9;atoire, une biblioth&#xE8;que de type sauvage biais dans la boucle DE seule et de la tyrosine-s&#xE9;rine diversit&#xE9; ailleurs, et une biblioth&#xE8;que de type sauvage biais &#xE0; 11 positions et l&#x26;#39;anticorps- inspir&#xE9;e de distribution d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s. Utilisation des biblioth&#xE8;ques regroup&#xE9;es pour concurrence directe dans un seul tube, la s&#xE9;lection et la maturation des liants &#xE0; sept objectifs a abouti &#xE0; 19 sur 21 clones qui proviennent de l&#x26;#39;structurellement biais&#xE9;, conception de la biblioth&#xE8;que adapt&#xE9;e la diversit&#xE9;. L&#x26;#39;analyse des s&#xE9;quences des clones s&#xE9;lectionn&#xE9;s soutient l&#x26;#39;importance de la diversit&#xE9; &#xE0; la fois de la composition sur mesure et une distorsion structurelle. En outre, la s&#xE9;lection des fois bien et mal exprim&#xE9; clones &#xE0; partir de deux biblioth&#xE8;ques de plus amples explications de l&#x26;#39;impact de partialit&#xE9; structurelle.

De stabilit&#xE9; et de biais de composition du CDR Enrichir Paysages fonctionnalit&#xE9;s Binder

Die robuste Protein-Sequenz-Funktion-Landschaft erschwert die Bem&uuml;hungen, sowohl im Labor als auch in der Natur Proteinfunktion zu entwickeln. Protein-Bibliothek Diversifizierung muss ein Gleichgewicht zwischen ausreichend Panaschierung auf gr&uuml;ndlich Probe alternative Funktionen gegen die Wahrscheinlichkeit der mutant Destabilisierung unterhalb einer ausdr&uuml;ckbar. In dieser Arbeit untersuchen wir die Sequenz-Funktion-Landschaft im Rahmen des Screenings f&uuml;r molekulare Erkennung aus einer Ig-Ger&uuml;st-Bibliothek. Die Fibronektin-Typ-III-Dom&auml;ne wird verwendet, um die Auswirkungen der beiden Sequenz Diversifikationsstrategien erkunden: (a) teilweise Wildtyp-Erhaltung bei strukturell wichtige Positionen innerhalb der Paratope Region und (b) zugeschnitten Aminos&auml;urezusammensetzung imitiert Antik&ouml;rper-Bindungsstelle Komposition an vermeintliche Paratope Positionen. Strukturell wichtige Positionen innerhalb der Paratope-Region waren gekennzeichnet durch Stabilit&auml;t, strukturellen und Phylogenetische Analysen und teilweise oder vollst&auml;ndig konserviert in Folge. Um ma&szlig;geschneiderte Antik&ouml;rper-&auml;hnliche Vielfalt zu erreichen, haben wir eine Reihe von verzerrter Nukleotid-Mischungen, die Gewinnung Codons ungef&auml;hr passend die Verteilung in Antik&ouml;rper Bestimmung der Komplementarit&auml;t Regionen beobachtet werden, ohne dass die Kosten der Baustoffe auf Triphosphoramidite entwickelt. Diese Design-Elemente wurden durch Vergleich der drei Bibliothek Designs erforscht: ein random-Bibliothek, eine Bibliothek mit Wildtyp Verzerrungen bei der DE-Schleife nur und Tyrosin-Serin Vielfalt an anderer Stelle und eine Bibliothek mit Wildtyp Neigung bei 11 Positionen und die Antik&ouml;rper-inspiriert von Aminos&auml;ure-Verteilung. Mit gepoolte Bibliotheken f&uuml;r direkte Konkurrenz in einem einzigen Rohr, ergab Auswahl und Reifung von Bindemittel zu sieben Zielen 19 der 21-Klone, die vom Design strukturell voreingenommen, zugeschnitten-Vielfalt Bibliothek stammen. Sequenzanalyse der ausgew&auml;hlten Klone unterst&uuml;tzt die Bedeutung von ma&szlig;geschneiderten kompositorischen Vielfalt und strukturelle Voreingenommenheit. Dar&uuml;ber hinaus verdeutlicht die Auswahl sowohl gut als auch schlecht ausgedr&uuml;ckt Klone aus zwei Bibliotheken weiter wirkt sich strukturelle Neigung.

Stabilit&auml;t und CDR Zusammensetzung Vorurteile bereichern Bindemittel Funktionalit&auml;t Landschaften.

Il paesaggio di funzione di sequenza proteica robusto complica gli sforzi, sia in natura che in laboratorio, di evolvere la funzione della proteina. Diversificazione libreria proteine dovr&agrave; trovare un equilibrio tra sufficiente variegatura alla funzionalit&agrave; alternativa accuratamente campione contro la probabilit&agrave; di destabilizzazione mutante di sotto di una soglia esprimibile. In questo lavoro, esploriamo il paesaggio di sequenza-funzione nel contesto dello screening per il riconoscimento molecolare da una libreria di impalcatura di Ig. Il dominio della fibronectina tipo III &egrave; utilizzato per esplorare l&#39;impatto delle strategie di diversificazione sequenza due: (a) parziale conservazione del selvaggio-tipo a strutturalmente importanti posizioni all&#39;interno della regione di paratope e (b) su misura composizione aminoacidica imitando la composizione sito di legame dell&#39;anticorpo alla paratope presunte posizioni. Strutturalmente importanti posizioni all&#39;interno della regione di paratope sono stati identificati attraverso analisi filogenetica e strutturali di stabilit&agrave; e parzialmente o completamente conservate in sequenza. Per realizzare su misura anticorpo-come diversit&agrave;, abbiamo progettato una serie di miscele di nucleotide inclinate producendo codoni corrispondenti circa la distribuzione osservata nelle regioni di complementarit&agrave;-determinazione dell&#39;anticorpo senza incorrere in spese di costruzione a base di triphosphoramidite. Questi elementi di design sono stati esplorati tramite comparazione di tre disegni di libreria: una libreria casuale, una biblioteca con selvaggio-tipo bias in DE loop solo e diversit&agrave; di tirosina-serina altrove e una libreria con selvaggio-tipo bias a 11 posizioni e la distribuzione dell&#39;amminoacido anticorpo-ispirato. Utilizzando le librerie nel pool per concorrenza diretta in un unico tubo, selezione e maturazione dei leganti a sette obiettivi ceduto 19 di 21 cloni che ha provenuto dal design libreria strutturalmente prevenuto, diversit&agrave; su misura. Analisi di sequenza dei cloni selezionati sostiene l&#39;importanza di diversit&agrave; compositiva su misura e di distorsione strutturale. Inoltre, selezione dei cloni di bene e male espressi da due librerie chiarito ulteriormente l&#39;effetto di distorsione strutturale.

Stabilit&agrave; e CDR composizione biases arricchire paesaggi funzionalit&agrave; binder.

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- &#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x3092;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3068;&#x6297;&#x4F53;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x3002; 1&#x672C;&#x306E;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x7AF6;&#x4E89;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;7&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x5264;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x3068;&#x6210;&#x719F;&#x306F;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306B;&#x7531;&#x6765;&#x3059;&#x308B;19&#x301C;21&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C9;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x4E21;&#x65B9;&#x3088;&#x304F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x60AA;&#x3044;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;CDR&#x7D44;&#x6210;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x306F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x98A8;&#x666F;&#x3092;&#x8C4A;&#x304B;&#x306B;

&#xAC70;&#xCE5C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xD568;&#xC218; &#xD48D;&#xACBD; &#xB178;&#xB825;, &#xC790;&#xC5F0; &#xBC0F; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC9C4;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF5;&#xC7A1;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xBCC0;&#xD654; &#xD45C;&#xD604;&#xD560; &#xC218; &#xC784;&#xACC4;&#xAC12; &#xC544;&#xB798; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBD88;&#xC548;&#xC758; &#xD655;&#xB960; &#xB300; &#xCCA0;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0D8;&#xD50C; &#xB300;&#xCCB4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC7A1; &#xC0C9; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xADE0;&#xD615;&#xC744; &#xACF5;&#xACA9; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC791;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Ig &#xBE44; &#xACC4; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC790; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC758; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xD568;&#xC218; &#xD48D;&#xACBD;&#xC744; &#xD0D0;&#xD5D8;. Fibronectin &#xC720;&#xD615; III &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB450; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB2E4;&#xBCC0;&#xD654; &#xC804;&#xB7B5;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294;: (a) &#xBD80;&#xBD84; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBCF4;&#xC874; paratope &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC0F; (b) &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xB294; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC870;&#xC131; &#xC0C1; paratope &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC791;&#xACE1;&#xC744; &#xD749;&#xB0B4; &#xB0B8;. Paratope &#xC601;&#xC5ED; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC704;&#xCE58; &#xB610;&#xB294; &#xC21C;&#xC11C;&#xC5D0; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC874; &#xC548;&#xC815;&#xC131;, &#xAD6C;&#xC870;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; phylogenetic &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB9DE;&#xCDA4;&#xD615;&#xB41C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC800;&#xC870;&#xD55C; codons &#xC57D; triphosphoramidite &#xAE30;&#xBC18; &#xAC74;&#xC124;&#xC758; &#xBE44;&#xC6A9;&#xC744; &#xB4E4;&#xC774;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xD56D; &#xCCB4; complementarity &#xACB0;&#xC815; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xBD84;&#xD3EC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xAD34;&#xC0C1; &#xD55C; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC9D1;&#xD569; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD0D0;&#xD5D8; &#xD588;&#xB2E4;: &#xBB34;&#xC791;&#xC704; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;, &#xB4DC; &#xB8E8;&#xD504;&#xB9CC;&#xACFC; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;, &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4; &#xB3C4;&#xC11C;&#xAD00;&#xACFC; 11 &#xC704;&#xCE58;&#xC640; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC601;&#xAC10; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xBD84;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;. &#xD480;&#xB9C1;&#xB41C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD29C;&#xBE0C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC744; &#xC704;&#xD574;, &#xC120;&#xD0DD; &#xD558; &#xACE0; 7 &#xAC1C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB354;&#xC758; &#xC131;&#xC219; &#xB098;&#xC654;&#xACE0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD55C;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xC6B0;&#xCE5C;, &#xB9DE;&#xCDA4;&#xD615; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; 21 &#xD074;&#xB860;&#xC758; 19. &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xD074;&#xB860;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xB9DE;&#xCDA4;&#xD615;&#xB41C; &#xC791;&#xACE1; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;. &#xB610;&#xD55C;, 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xB3C4;&#xC11C;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC798; &#xD558; &#xACE0; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD074;&#xB860; &#xC120;&#xD0DD; &#xCD94;&#xAC00; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5; &#xD574;&#xBA85;.

&#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xBC0F; CDR &#xAD6C;&#xC131; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4; &#xBC14;&#xC778;&#xB354; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD48D;&#xACBD;&#xC744; &#xD48D;&#xC694;&#xB86D;&#xAC8C;.

La prote&#xED;na resistente secuencia de la funci&#xF3;n panorama complica los esfuerzos, tanto en naturaleza como en el laboratorio, para evolucionar la funci&#xF3;n de prote&#xED;nas. La diversificaci&#xF3;n de la prote&#xED;na biblioteca debe encontrar un equilibrio entre variegaci&#xF3;n suficiente para probar a fondo la funcionalidad de alternativa frente a la probabilidad de desestabilizaci&#xF3;n mutante debajo de un umbral expresable. En este trabajo, se explora el paisaje secuencia de funciones en el contexto de la detecci&#xF3;n de reconocimiento molecular de una biblioteca Ig andamio. La fibronectina tipo III de dominio se utiliza para explorar el impacto de dos estrategias de diversificaci&#xF3;n de la secuencia: (a) parcial de tipo salvaje de conservaci&#xF3;n en las posiciones importantes de la estructura dentro de la regi&#xF3;n paratopo y (b) la composici&#xF3;n de amino&#xE1;cidos a medida simulando la uni&#xF3;n del anticuerpo in situ la composici&#xF3;n en paratopo supuesta posiciones. Estructuralmente posiciones importantes dentro de la regi&#xF3;n paratopo fueron identificados gracias a la estabilidad, estructurales y de an&#xE1;lisis filogen&#xE9;ticos y conservada parcial o totalmente en la secuencia. Para lograr la medida de anticuerpos como la diversidad, hemos dise&#xF1;ado un conjunto de mezclas de nucle&#xF3;tidos sesgadas que dan aproximadamente los codones que coinciden con la distribuci&#xF3;n observada de anticuerpos en la determinaci&#xF3;n de la complementariedad-regiones, sin incurrir en el gasto de triphosphoramidite basado en la construcci&#xF3;n. Estos elementos de dise&#xF1;o fueron explorados a trav&#xE9;s de la comparaci&#xF3;n de tres dise&#xF1;os de la biblioteca: una biblioteca al azar, una biblioteca con un sesgo de tipo silvestre en el bucle DE solamente y tirosina-serina la diversidad en otras partes, y una biblioteca con un sesgo de tipo salvaje en 11 posiciones y el anticuerpo inspirado distribuci&#xF3;n de amino&#xE1;cidos. Uso de las bibliotecas agrupadas en la competencia directa en un solo tubo, la selecci&#xF3;n y la maduraci&#xF3;n de las carpetas a siete objetivos cedi&#xF3; 19 de 21 clones que se originaron en la estructuralmente sesgado, dise&#xF1;o de la biblioteca a medida-la diversidad. An&#xE1;lisis de la secuencia de los clones seleccionados apoya la importancia de la diversidad a medida tanto de la composici&#xF3;n y el sesgo estructural. Adem&#xE1;s, la selecci&#xF3;n de ambos bien y mal expresado clones de dos bibliotecas m&#xE1;s dilucidado el impacto del sesgo estructural.

Estabilidad y sesgos CDR Composici&#xF3;n Enrich Paisajes Binder funcionalidad

&#x541E;&#x566C;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7; Fc&gamma; &#x53D7;&#x4F53;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6297;&#x4F53;&#x8C03;&#x7406;&#x7684;&#x6750;&#x6599;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6548;&#x5E94;&#x51FD;&#x6570;&#x8868;&#x660E;&#x4F1A;&#x5927;&#x5927;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x611F;&#x67D3;&#x53EF;&#x8C03;&#x8282;&#x6297;&#x4F53;&#x805A;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x8C03;&#x8282;&#x6297;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x80FD;&#x5224;&#x65AD;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6548;&#x5E94;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E2D;&#x548C;&#x6216;&#x6EF4;&#x5EA6;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x673A;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x66F4;&#x5145;&#x5206;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8D28;&#x91CF;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x9C81;&#x68D2;&#x548C;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x6D41;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x541E;&#x566C;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x4E34;&#x5E8A;&#x6807;&#x672C;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x91C7;&#x7528;&#x8868;&#x793A;&#x8BB8;&#x591A; Fc &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EBF;&#xFF1A; &#x5305;&#x62EC;&#x6291;&#x5236;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x548C;&#x9AD8;&#x548C;&#x4F4E;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x53D7;&#x4F53; &mdash; &mdash; &#x5141;&#x8BB8;&#x590D;&#x6742;&#x8868;&#x578B;&#x6765;&#x52A0;&#x4EE5;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x3001; &#x57FA;&#x4E8E;&#x6D41;&#x7684;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8861;&#x91CF;&#x6570;&#x7EC4;&#x5305;&#x62EC;&#x6D41;&#x611F;&#x3001; &#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53CA;&#x767B;&#x9769;&#x70ED;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x541E;&#x566C;&#x7684;&#x9002;&#x5E94;&#x6027;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x541E;&#x566C;&#x529F;&#x80FD;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x683C;&#x5F0F;&#x5141;&#x8BB8;&#x540C;&#x65F6;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5177;&#x4F53; Fc&gamma;-&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x578B;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5B83;&#x7528;&#x4E8E;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x80FD;&#x529B;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x522B;&#x975E;&#x5E38;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x6D4B;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x75AB;&#x82D7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6297;&#x4F53;&#x6837;&#x672C;&#x62DB;&#x52DF;&#x6B64;&#x5173;&#x952E;&#x6548;&#x5E94;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;

&#x5F3A;&#x5065;&#x3001; &#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x541E;&#x566C;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x4E34;&#x5E8A;&#x6837;&#x672C;&#x3002;

Phagocytosis can be induced via the engagement of FcÎ³ receptors by antibody-opsonized material. Furthermore, the efficiency of antibody-induced effector functions has been shown to be dramatically modulated by changes in antibody glycosylation. Because infection can modulate antibody glycans, which in turn modulate antibody functions, assays capable of determining the induction of effector functions rather than neutralization or titer provide a valuable opportunity to more fully characterize the quality of the adaptive immune response. Here we describe a robust and high-throughput flow cytometric assay to define the phagocytic activity of antigen-specific antibodies from clinical samples. This assay employs a monocytic cell line that expresses numerous Fc receptors: including inhibitory and activating, and high and low affinity receptors--allowing complex phenotypes to be studied. We demonstrate the adaptability of this high-throughput, flow-based assay to measure antigen-specific antibody-mediated phagocytosis against an array of viruses, including influenza, HIV, and dengue. The phagocytosis assay format further allows for simultaneous analysis of cytokine release, as well as determination of the role of specific FcÎ³-receptor subtypes, making it a highly useful system for parsing differences in the ability of clinical and vaccine induced antibody samples to recruit this critical effector function.

A robust, high-throughput assay to determine the phagocytic activity of clinical antibody samples.

La phagocytose peut &#xEA;tre induite par l&#x26;#39;engagement des r&#xE9;cepteurs Fcy par l&#x26;#39;anticorps-opsonis&#xE9; mat&#xE9;riel. En outre, l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de l&#x26;#39;anticorps induits par des fonctions effectrices a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; d&#x26;#39;&#xEA;tre dramatiquement modul&#xE9;e par des changements dans la glycosylation des anticorps. Parce que l&#x26;#39;infection peut moduler glycanes d&#x26;#39;anticorps, ce qui &#xE0; son tour modulent des fonctions d&#x26;#39;anticorps, des dosages permettant de d&#xE9;terminer l&#x26;#39;induction des fonctions effectrices plut&#xF4;t que la neutralisation ou titre de fournir une occasion pr&#xE9;cieuse de mieux caract&#xE9;riser la qualit&#xE9; de la r&#xE9;ponse immunitaire adaptative. Nous d&#xE9;crivons ici un dosage en flux robuste et &#xE0; haut d&#xE9;bit par cytom&#xE9;trie de d&#xE9;finir l&#x26;#39;activit&#xE9; phagocytaire de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne-anticorps sp&#xE9;cifiques &#xE0; partir d&#x26;#39;&#xE9;chantillons cliniques. Ce test utilise une lign&#xE9;e cellulaire monocytaire, qui exprime de nombreux r&#xE9;cepteurs Fc: y compris inhibiteur et d&#x26;#39;activation, et des r&#xE9;cepteurs de haute affinit&#xE9; et faible - qui permet ph&#xE9;notypes complexes pour &#xEA;tre &#xE9;tudi&#xE9;s. Nous d&#xE9;montrer l&#x26;#39;adaptabilit&#xE9; de ce haut-d&#xE9;bit, bas&#xE9; sur les flux de dosage pour mesurer l&#x26;#39;antig&#xE8;ne sp&#xE9;cifique m&#xE9;di&#xE9;e par les anticorps phagocytose contre un r&#xE9;seau de virus, y compris la grippe, le VIH, et la dengue. Le format de dosage phagocytose permet en outre de l&#x26;#39;analyse simultan&#xE9;e de la lib&#xE9;ration de cytokines, ainsi que la d&#xE9;termination du r&#xF4;le des r&#xE9;cepteurs sp&#xE9;cifiques Fcy-sous-types, ce qui en fait un syst&#xE8;me tr&#xE8;s utile pour les diff&#xE9;rences d&#x26;#39;analyse de la capacit&#xE9; des cliniques et le vaccin &#xE9;chantillons d&#x26;#39;anticorps induits par le recrutement de cette critique fonction effectrice.

Un robuste, &#xE0; haut d&#xE9;bit essai pour d&#xE9;terminer l&#x26;#39;activit&#xE9; phagocytaire des &#xE9;chantillons d&#x26;#39;anticorps cliniques

Phagozytose kann durch Antik&ouml;rper-opsonized Material &uuml;ber das Engagement des Fc&gamma; Rezeptoren induziert werden. Dar&uuml;ber hinaus hat sich die Effizienz der Antik&ouml;rper induziert Effektor-Funktionen gezeigt drastisch durch Ver&auml;nderungen in der Antik&ouml;rper Glycosylation moduliert werden. Da Infektion modulieren kann Proben Antik&ouml;rper Glykane, die wiederum Antik&ouml;rper Funktionen modulieren, f&auml;hig die Induktion von Effektor-Funktionen zu bestimmen, anstatt Neutralisierung oder Titer bieten eine wertvolle Gelegenheit, die Qualit&auml;t der adaptiven Immunantwort mehr vollst&auml;ndig zu charakterisieren. Hier beschreiben wir eine robuste und Hochdurchsatz-Flow Cytometric Assay um die phagozytische Aktivit&auml;t der Antigen-spezifische Antik&ouml;rper vom klinischen Proben zu definieren. Diese Probe besch&auml;ftigt eine monozyt&auml;ren Zelllinie, die zahlreiche Fc-Rezeptoren ausdr&uuml;ckt: einschlie&szlig;lich hemmende und aktivierende, und hohe und niedrige Affinit&auml;t Rezeptoren--so dass komplexe Ph&auml;notypen untersucht werden. Wir demonstrieren die Anpassungsf&auml;higkeit dieser Hochdurchsatz, flussbasierte Probe Antigen-spezifische Antik&ouml;rper-vermittelte Phagozytose ein Array von Viren, Grippe, HIV und Dengue-Fieber messen. Das Phagozytose-Assay-Format weiter erm&ouml;glicht die simultane Analyse von Cytokine Freigabe, sowie die Bestimmung der Rolle der spezifischen Fc&gamma;-Rezeptor-Subtypen, so dass es ein sehr n&uuml;tzliches System f&uuml;r die Analyse der Unterschiede in der F&auml;higkeit des klinischen und Impfstoff induzierte Antik&ouml;rper Proben dieser kritischen Effektor-Funktion zu rekrutieren.

Eine robuste, Hochdurchsatz-Assay die phagozytische Aktivit&auml;t der Antik&ouml;rper klinische Proben zu bestimmen.

Fagocitosi possono essere indotta tramite il coinvolgimento dei recettori fcy da anticorpo-opsonized materiale. Inoltre, l&#39;efficienza delle funzioni effettrici anticorpo-indotta ha dimostrato di essere drammaticamente modulata dai cambiamenti nella glicosilazione dell&#39;anticorpo. Poich&eacute; l&#39;infezione pu&ograve; modulare anticorpo glicani, che a loro volta modulano le funzioni dell&#39;anticorpo, dosaggi in grado di determinare l&#39;induzione delle funzioni effettrici anzich&eacute; neutralizzazione o titolo forniscono una preziosa occasione per caratterizzare pi&ugrave; pienamente la qualit&agrave; della risposta immunitaria adattativa. Qui descriviamo un dosaggio cytometric di flusso robusto e ad alta velocit&agrave; per definire l&#39;attivit&agrave; fagocitaria di anticorpi specifici per l&#39;antigene da campioni clinici. Questo test si avvale di una linea cellulare monocitica che esprime numerosi recettori Fc: tra cui recettori inibitorio e attivazione e ad alta e bassa affinit&agrave; - permettendo fenotipi complessi essere studiato. Noi di dimostrare l&#39;adattabilit&agrave; di questo dosaggio ad alta velocit&agrave;, basata sul flusso per misurare la fagocitosi mediata da anticorpi antigene-specifiche contro la matrice di virus, influenza, HIV e dengue. Il formato assay fagocitosi ulteriormente permette analisi simultanea di rilascio di citochine, come pure la determinazione del ruolo di specifici sottotipi di recettori fcy, rendendolo un sistema molto utile per l&#39;analisi di differenze nella capacit&agrave; di clinico e vaccino indotto campioni anticorpo per reclutare questa funzione effector critico.

Un robusto, high-throughput test per determinare l&#39;attivit&agrave; fagocitaria dei campioni clinici dell&#39;anticorpo.

&#x8CAA;&#x98DF;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;-&#x30AA;&#x30D7;&#x30BD;&#x30CB;&#x30F3;&#x5316;&#x6750;&#x6599;&#x306B;&#x3088;&#x308B;Fc&#x3B3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x4FC2;&#x5408;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x98DB;&#x8E8D;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306F;&#x3001;&#x9806;&#x756A;&#x306B;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x7CD6;&#x9396;&#x3092;&#x3001;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4E2D;&#x548C;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x529B;&#x4FA1;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x9069;&#x5FDC;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x691C;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x8CAA;&#x98DF;&#x80FD;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x3067;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3059;&#x308B; - &#x963B;&#x5BB3;&#x3068;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x9AD8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F4E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#xFF1A;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x6570;&#x306E;Fc&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x5358;&#x7403;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x3001;HIV&#x3001;&#x30C7;&#x30F3;&#x30B0;&#x71B1;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6027;&#x98DF;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8CAA;&#x98DF;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3059;&#x308B;&#x81E8;&#x5E8A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x6297;&#x4F53;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;Fc&#x3B3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3002;

&#x81E8;&#x5E8A;&#x6297;&#x4F53;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x8CAA;&#x98DF;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x3067;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;

&#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD56D; &#xCCB4; &#xCE68; &#xC18C;&#xC7AC; Fc&gamma; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD56D; &#xCCB4; &#xC720;&#xB3C4; effector &#xAE30;&#xB2A5; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD56D; &#xCCB4; glycosylation&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870; &#xB41C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xCC28;&#xB840;&#xB85C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808;, &#xD56D; &#xCCB4; glycans effector &#xAE30;&#xB2A5; &#xC720;&#xB3C4; &#xC911;&#xD654; &#xB610;&#xB294; &#xB354;&#xC6B1; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xD488;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xACB0;&#xC815; &#xC218; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC784;&#xC0C1; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; phagocytic &#xD65C;&#xB3D9; &#xC815;&#xC758;&#xB97C; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD750;&#xB984; cytometric &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xACE0;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; Fc &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; monocytic &#xC140; &#xB77C;&#xC778;: &#xAE08;&#xC9C0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB192;&#xACE0; &#xB0AE;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;-&#xACF5;&#xBD80; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xACE0;&#xAE30; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC801;&#xC751;&#xC131;&#xC774; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9;, &#xD50C;&#xB85C;&#xC6B0; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;, &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790;, &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;, &#xB385;&#xAE30;&#xC5F4; &#xB4F1;&#xC758; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;-&#xC911;&#xC7AC; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD615;&#xC2DD; &#xCD94;&#xAC00; &#xC784;&#xC0C1; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xD2B9;&#xC815; Fc&gamma; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD558;&#xC704; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xBC0F; cytokine &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xBC31;&#xC2E0; &#xC720;&#xBC1C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0D8;&#xD50C; &#xBAA8;&#xC9D1;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744;.

&#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC784;&#xC0C1; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; phagocytic &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La fagocitosis puede ser inducida a trav&#xE9;s de la participaci&#xF3;n de los receptores Fc gamma por anticuerpos opsonizado material. Adem&#xE1;s, la eficacia de los anticuerpos inducidos por las funciones efectoras ha demostrado ser dram&#xE1;ticamente modulada por cambios en la glicosilaci&#xF3;n de anticuerpos. Dado que la infecci&#xF3;n puede modular glicanos de anticuerpos, que a su vez modulan las funciones de anticuerpos, ensayos capaces de determinar la inducci&#xF3;n de las funciones efectoras en lugar de neutralizaci&#xF3;n o t&#xED;tulo de proporcionar una oportunidad valiosa para caracterizar m&#xE1;s plenamente la calidad de la respuesta inmune adaptativa. Aqu&#xED; se describe un ensayo de flujo de s&#xF3;lidos y de alto rendimiento de citometr&#xED;a de definir la actividad fagoc&#xED;tica de los ant&#xED;genos espec&#xED;ficos de anticuerpos a partir de muestras cl&#xED;nicas. Este ensayo emplea una l&#xED;nea celular de monocitos que expresa numerosos receptores Fc: incluyendo inhibidores y activadores, y los receptores de alta afinidad y baja - lo que permite fenotipos complejos que deben estudiarse. Se demuestra la capacidad de adaptaci&#xF3;n de este alto rendimiento, basado en el flujo de ensayo para medir el ant&#xED;geno espec&#xED;fico de la fagocitosis mediada por anticuerpos contra una gran variedad de virus, incluyendo la gripe, el VIH y el dengue. El formato de ensayo de fagocitosis adem&#xE1;s permite el an&#xE1;lisis simult&#xE1;neo de la liberaci&#xF3;n de citoquinas, as&#xED; como la determinaci&#xF3;n de la funci&#xF3;n de espec&#xED;ficos receptores Fc gamma-subtipos, por lo que es un sistema altamente &#xFA;til para las diferencias de an&#xE1;lisis en la capacidad de las muestras de anticuerpos inducidos por la vacuna y cl&#xED;nicos para reclutar esta cr&#xED;tico funci&#xF3;n efectora.

Un robusto, de alto rendimiento de ensayo para determinar la actividad fagoc&#xED;tica de las muestras cl&#xED;nicas de anticuerpos

&#x6D77;&#x85FB;&#x9178;&#x88C2;&#x89E3;&#x9176;&#x9176;&#x6CBB;&#x7597;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5728;&#x56CA;&#x6027;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#x6C14;&#x9053;&#x8868;&#x793A;&#x672A;&#x6765;&#x4E2D;&#x7684;&#x4EE3;&#x7406;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6709;&#x6548;&#x5730; deimmunize &#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x4E00;&#x540D;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x6301;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DE5;&#x7A0B;-&#x805A;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x5316;&#x6218;&#x7565;&#x5B9E;&#x65BD;&#x3002;&#x7531;&#x6B63;&#x4EA4;&#x7684;&#x9A6C;&#x6765;&#x9170;&#x4E9A;&#x80FA;&#x786B;&#x9187;&#x8026;&#x5408;&#x5316;&#x5B66;&#x5EFA;&#x9020;&#xFF0C;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x5408;&#x7406;&#x3001; &#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x805A;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x5316;&#x53D8;&#x79CD;&#x3002;&#x968F;&#x673A;&#x805A;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x5316;&#x7684;&#x7531; NHS &#x916F;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5316;&#x5B66;&#x9176;&#xFF0C;&#x4E0E; A1 &#x4E09;&#x6D77;&#x85FB;&#x9178;&#x88C2;&#x89E3;&#x9176;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x5355;&#x805A;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x5316;&#x751F;&#x4EA7;&#x4FDD;&#x6301;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x671D;&#x6A21;&#x578B;&#x8868;&#x5C42;&#x7684;&#x5171;&#x8F6D;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187; variant &#x5C55;&#x51FA;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x9636;&#x6BB5;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x83CC;&#x85FB;&#x9178;&#x76D0;&#xFF0C;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x6700;&#x7EC8;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x6027;&#x7684;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x9176;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F53;&#x5916;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7814;&#x7A76;&#x4E0E;&#x9176;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x514D;&#x75AB;&#x65B0;&#x897F;&#x5170;&#x5154;&#x548C;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x5E93;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x6743;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x63A7;&#x5236;&#x5FD7;&#x613F;&#x8005;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x9176;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x8981;&#x8FDC;&#x4F4E;&#x4E8E;&#x9633;&#x6027;&#x3002;&#x5F3A;&#x8C03;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x5B9E;&#x9645;&#x6548;&#x7528;&#xFF0C;&gt; 90%&#x7684;&#x4FE1;&#x5F92;&#x3001; &#x7C98;&#x6DB2;&#x3001; &#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x819C;&#x88AB;&#x4ECE;&#x975E;&#x751F;&#x7269;&#x8868;&#x9762;&#x540E;&#x4E00;&#x5C0F;&#x65F6;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E0E;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x7684;&#x53D8;&#x79CD;&#xFF0C;&#x800C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9176;&#x5728;&#x5E76;&#x884C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x5220;&#x9664;&#x53EA;&#x6709; 75%&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x3002;&#x603B;&#x7684;&#x6765;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x5355;&#x805A;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x5316;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0; A1 &#x81F3;&#x7B2C;&#x4E09;&#x8282;&#x6D77;&#x85FB;&#x9178;&#x88C2;&#x89E3;&#x9176;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E00;&#x79CD;&#x9176;&#x4E0E;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x6027;&#x80FD;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x4EA7;&#x751F;&#x8010;&#x836F;&#x6027;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5EA6;&#x91CF;&#x6807;&#x51C6;&#x3002;

&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D77;&#x85FB;&#x9178;&#x88C2;&#x89E3;&#x9176;-PEG &#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x5C55;&#x89C8;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x51CF;&#x5C11;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

Alginate lyase enzymes represent prospective biotherapeutic agents for treating bacterial infections, particularly in the cystic fibrosis airway. To effectively deimmunize one therapeutic candidate while maintaining high level catalytic proficiency, a combined genetic engineering-PEGylation strategy was implemented. Rationally designed, site-specific PEGylation variants were constructed by orthogonal maleimide-thiol coupling chemistry. In contrast to random PEGylation of the enzyme by NHS-ester mediated chemistry, controlled mono-PEGylation of A1-III alginate lyase produced a conjugate that maintained wild type levels of activity towards a model substrate. Significantly, the PEGylated variant exhibited enhanced solution phase kinetics with bacterial alginate, the ultimate therapeutic target. The immunoreactivity of the PEGylated enzyme was compared to a wild type control using in vitro binding studies with both enzyme-specific antibodies, from immunized New Zealand white rabbits, and a single chain antibody library, derived from a human volunteer. In both cases, the PEGylated enzyme was found to be substantially less immunoreactive. Underscoring the enzyme's potential for practical utility, >90% of adherent, mucoid, Pseudomonas aeruginosa biofilms were removed from abiotic surfaces following a one hour treatment with the PEGylated variant, whereas the wild type enzyme removed only 75% of biofilms in parallel studies. In aggregate, these results demonstrate that site-specific mono-PEGylation of genetically engineered A1-III alginate lyase yielded an enzyme with enhanced performance relative to therapeutically relevant metrics.

Genetically engineered alginate lyase-PEG conjugates exhibit enhanced catalytic function and reduced immunoreactivity.

Enzymes lyase d&#x26;#39;alginate repr&#xE9;sentent &#xE9;ventuels agents bioth&#xE9;rapeutiques pour traiter les infections bact&#xE9;riennes, en particulier dans les voies a&#xE9;riennes fibrose kystique. Pour bien deimmunize un candidat th&#xE9;rapeutique tout en maintenant le niveau de comp&#xE9;tence &#xE9;lev&#xE9; catalytique, un combin&#xE9; g&#xE9;nie g&#xE9;n&#xE9;tique-PEGylation strat&#xE9;gie a &#xE9;t&#xE9; mise en &#x153;uvre. Con&#xE7;u de fa&#xE7;on rationnelle, les variantes propres &#xE0; chaque site PEGylation ont &#xE9;t&#xE9; construits par la chimie couplage orthogonal mal&#xE9;imide-thiol. &#xC0; la diff&#xE9;rence de p&#xE9;gylation al&#xE9;atoire de l&#x26;#39;enzyme par la chimie m&#xE9;di&#xE9;e NHS-ester, contr&#xF4;l&#xE9;e mono-PEGylation de A1-III alginate lyase produite un conjugu&#xE9; qui maintient des niveaux de type sauvage de l&#x26;#39;activit&#xE9; sur un substrat mod&#xE8;le. De mani&#xE8;re significative, la variante p&#xE9;gyl&#xE9; expos&#xE9; am&#xE9;lior&#xE9;es cin&#xE9;tique en phase de solution avec de l&#x26;#39;alginate bact&#xE9;rienne, la cible th&#xE9;rapeutique ultime. L&#x26;#39;immunor&#xE9;activit&#xE9; de l&#x26;#39;enzyme p&#xE9;gyl&#xE9;e a &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9; &#xE0; un contr&#xF4;le de type sauvage en utilisant des &#xE9;tudes de liaison in vitro avec les deux anticorps sp&#xE9;cifiques d&#x26;#39;enzymes, de vaccin&#xE9;s lapins blancs de Nouvelle-Z&#xE9;lande, et une biblioth&#xE8;que d&#x26;#39;anticorps &#xE0; cha&#xEE;ne unique, provenant d&#x26;#39;un volontaire de l&#x26;#39;homme. Dans les deux cas, l&#x26;#39;enzyme p&#xE9;gyl&#xE9;e a &#xE9;t&#xE9; jug&#xE9; nettement moins immunor&#xE9;active. Soulignant le potentiel de l&#x26;#39;enzyme de l&#x26;#39;utilit&#xE9; pratique,&#x26;gt; 90% des adh&#xE9;rents, muco&#xEF;des, les biofilms de Pseudomonas aeruginosa ont &#xE9;t&#xE9; retir&#xE9;s de surfaces abiotiques la suite d&#x26;#39;un traitement d&#x26;#39;une heure avec la variante p&#xE9;gyl&#xE9;, alors que l&#x26;#39;enzyme de type sauvage enlev&#xE9; seulement 75% de biofilms dans des &#xE9;tudes parall&#xE8;les. Dans l&#x26;#39;ensemble, ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que le site sp&#xE9;cifique mono-p&#xE9;gylation de alginate lyase g&#xE9;n&#xE9;tiquement A1-III a abouti &#xE0; une enzyme avec des performances am&#xE9;lior&#xE9;es par rapport &#xE0; th&#xE9;rapeutiquement param&#xE8;tres pertinents.

G&#xE9;n&#xE9;tiquement modifi&#xE9;s alginate lyase-PEG conjugu&#xE9;s pi&#xE8;ce am&#xE9;lior&#xE9;e fonction catalytique et r&#xE9;duit immunor&#xE9;activit&#xE9;

Alginat-Lyase-Enzyme darstellen prospektive biotherapeutische Agenten zur Behandlung von bakterielle Infektionen, insbesondere in der Mukoviszidose-Fluglinie. Um effektiv einen therapeutischen Kandidaten deimmunize unter Beibehaltung der hohen Niveau katalytische Kenntnisse, wurde eine kombinierte Gentechnik-PEGylierung-Strategie umgesetzt. Rational konstruiert, standortspezifische PEGylierung Varianten wurden von orthogonale Maleimide-Thiol Kupplung Chemie errichtet. Im Gegensatz zu zuf&auml;lligen PEGylierung des Enzyms von NHS-Ester vermittelte Chemie produziert kontrollierte Mono-PEGylierung von A1-III-Alginat-Lyase ein Konjugat, die Aktivit&auml;t gegen&uuml;ber einem Modell-Substrat Wildtyp beibehalten. Bezeichnenderweise ausgestellt pegylierte Variante verbesserte L&ouml;sung Phase Kinetik mit bakteriellen Alginat, das ultimative therapeutische Ziel. Die Immunoreactivity des Enzyms pegylierte war ein Wildtyp-Steuerelement mithilfe von in-vitro-Bindungsstudien mit Enzym-spezifische Antik&ouml;rper, von immunisierten Neuseeland wei&szlig;en Hasen, und eine einzelne Kette Antik&ouml;rperbibliothek, abgeleitet von einem Menschen gegen&uuml;ber Freiwilligen. In beiden F&auml;llen das pegylierte Enzym erwies sich wesentlich weniger sind. Das Enzym unterstreicht das Potenzial f&uuml;r praktische Nutzen &gt; 90 % der Anh&auml;nger, schleimig, Pseudomonas Aeruginosa Biofilme aus abiotischen Oberfl&auml;chen nach einer einst&uuml;ndigen Behandlung mit der Variante pegylierte entfernt wurden, das Wildtyp-Enzym nur 75 % der Biofilme in parallelen Studien beseitigt. Diese Ergebnisse zeigen insgesamt, dass standortspezifische Mono-PEGylierung von gentechnisch A1-III zeitigten Alginat-Lyase Enzym mit verbesserter Leistung relativ therapeutisch relevanter Kennzahlen.

Gentechnisch Alginat Lyase-PEG Konjugaten Ausstellung erh&ouml;ht katalytische Funktion und verringert Immunoreactivity.

Enzimi liasi alginato rappresentano potenziali agenti bioterapeutici per trattare le infezioni batteriche, soprattutto nelle vie aeree la fibrosi cistica. Per deimmunize in modo efficace un candidato terapeutico mantenendo alto livello proficiency catalitico, &egrave; stata implementata una strategia combinata di ingegneria genetica-PEGylation. Razionalmente progettati, site-specific PEGylation varianti furono costruiti dalla chimica giunto ortogonale con-tiolo. In contrasto con casuale PEGylation dell&#39;enzima di NHS-estere mediata chimica, mono-PEGylation controllata della liasi di alginato A1-III prodotto un coniugato che mantenuto selvaggio tipo livelli di attivit&agrave; verso un substrato di modello. Significativamente, la variante peghilato esposta soluzione avanzata fase cinetica con alginato batterica, l&#39;ultimo obiettivo terapeutico. L&#39;immunoreattivit&agrave; dell&#39;enzima pegilato &egrave; stato paragonato a un controllo di tipo selvatico mediante studi di binding in vitro con enzimi specifici anticorpi, da conigli Nuova Zelanda Bianca immunizzati e una libreria di anticorpo catena singola, derivata da un essere umano volontario. In entrambi i casi, l&#39;enzima pegilato &egrave; stato trovato per essere sostanzialmente meno immunoreattivi. Potenziale per utilit&agrave; pratica, sottolineando l&#39;enzima del &amp;gt; 90% degli aderenti, mucoide, Pseudomonas aeruginosa biofilms sono stati rimossi dalle superfici abiotiche seguendo un trattamento di un&#39;ora con la variante pegilato, considerando che l&#39;enzima wild type rimosso solo il 75% di biofilm in studi paralleli. Nel complesso, questi risultati dimostrano che mono-PEGylation site-specific di geneticamente ingegnerizzati A1-III liasi alginato ha reso un enzima con prestazioni migliorate rispetto alla metrica terapeuticamente rilevanti.

Alginato geneticamente ingegnerizzati liasi-PEG coniugati exhibit enhanced funzione catalitica e ridotta immunoreattivit&agrave;.

&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x30EA;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x56A2;&#x80DE;&#x6027;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x75C7;&#x6C17;&#x9053;&#x3067;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x306E;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x5019;&#x88DC;&#x8005;&#x3092;deimmunize&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5DE5;&#x5B66;-PEG&#x5316;&#x6226;&#x7565;&#x304C;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5408;&#x7406;&#x7684;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;PEG&#x5316;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x4EA4;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9; - &#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x5316;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x305F;&#x3002; NHS-&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x5316;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306A;PEG&#x5316;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;A1-III&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x30EA;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x30E2;&#x30CE;PEG&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E5;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;PEG&#x5316;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x5869;&#x3001;&#x7A76;&#x6975;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6DB2;&#x76F8;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; PEG&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x30DC;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x514D;&#x75AB;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B8;&#x30FC;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x767D;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x3001;&#x5358;&#x9396;&#x6297;&#x4F53;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x4E21;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;in vitro&#x7D50;&#x5408;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5BFE;&#x7167;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;PEG&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9F;&#x7528;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x4E26;&#x5217;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;75&#xFF05;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x3001;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;&#x63A5;&#x7740;&#x6027;&#x3001;&#x7C98;&#x6DB2;&#x3001;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x26;gt; 90&#xFF05;&#x3001;PEG&#x5316;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;1&#x6642;&#x9593;&#x51E6;&#x7406;&#x5F8C;&#x306E;&#x975E;&#x751F;&#x7269;&#x8868;&#x9762;&#x304B;&#x3089;&#x524A;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96C6;&#x8A08;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;A1-III&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x30EA;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30E2;&#x30CE;PEG&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x304C;&#x5411;&#x4E0A;&#x3057;&#x305F;&#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x30EA;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;-PEG&#x30B3;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E5;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x89E6;&#x5A92;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x306E;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3092;&#x51FA;&#x5C55;

Alginate lyase &#xD6A8;&#xC18C; &#xD2B9;&#xD788; &#xB0AD; &#xC131; &#xC12C;&#xC720; &#xC99D; &#xAE30;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC138;&#xADE0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xBE44; biotherapeutic &#xC694;&#xC6D0;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xB97C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; deimmunize&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC804; &#xACF5;&#xD559; PEGylation &#xC804;&#xB7B5; &#xAD6C;&#xD604; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD569;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C;, &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xBCC4; PEGylation &#xBCC0;&#xC885; &#xC9C1;&#xAD50; maleimide thiol &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xD654;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC74;&#xC124; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBCF4; &#xAC74;&#xAD6D;-&#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xC911;&#xC7AC; &#xD654;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC784;&#xC758;&#xC758; PEGylation &#xB2EC;&#xB9AC; alginate lyase A1-III&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBAA8;&#xB178; PEGylation &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378; &#xAE30;&#xD310; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xACF5;&#xC561; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xD06C;&#xAC8C; PEGylated &#xBCC0;&#xC885; &#xC138;&#xADE0; alginate, &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBAA9;&#xD45C;&#xC640; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xC704;&#xC0C1; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xC804;&#xC2DC;. Immunoreactivity PEGylated &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBA74;&#xC5ED;&#xB41C; &#xB274;&#xC9C8;&#xB79C;&#xB4DC; &#xD770; &#xD1A0;&#xB07C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCCB4;&#xC778; &#xD56D; &#xCCB4; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC790;&#xC6D0; &#xBD09;&#xC0AC;. &#xB450; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBAA8;&#xB450; PEGylated &#xD6A8;&#xC18C; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB35C; immunoreactive &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. &#xAC15;&#xC870; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC2E4;&#xC6A9;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; &amp;gt; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBCD1;&#xB82C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; biofilms&#xC758; 75%&#xB9CC; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; PEGylated &#xBCC0;&#xC885; 1 &#xC2DC;&#xAC04; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; abiotic &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC810;&#xCC29;, mucoid, &#xB179; &#xB18D; &#xADE0; biofilms&#xC758; 90% &#xC81C;&#xAC70; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9D1;&#xACC4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD574;&#xB2F9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xBCC4; &#xBAA8;&#xB178; PEGylation &#xC785;&#xC99D; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;&#xB41C; A1-III&#xC758; alginate lyase therapeutically &#xAD00;&#xB828; &#xD1B5;&#xACC4;&#xB97C; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC131;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xAD74;&#xBCF5;.

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;&#xB41C; alginate lyase &#xD398;&#xADF8; conjugates &#xC804;&#xC2DC; &#xCD09;&#xB9E4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD558; &#xACE0; immunoreactivity&#xC744; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Enzimas de alginato liasa representan posibles agentes bioterap&#xE9;uticos para el tratamiento de infecciones bacterianas, particularmente en las v&#xED;as respiratorias la fibrosis qu&#xED;stica. Para deimmunize efectivamente un candidato terap&#xE9;utico mientras se mantiene al nivel de competencia catal&#xED;tica de alta, una combinaci&#xF3;n de la ingenier&#xED;a gen&#xE9;tica-PEGilaci&#xF3;n estrategia fue implementada. Dise&#xF1;o racional y espec&#xED;ficos de las variantes PEGilaci&#xF3;n fueron construidas por la qu&#xED;mica de acoplamiento ortogonal maleimida-tiol. En contraste con PEGilaci&#xF3;n al azar de la enzima por la qu&#xED;mica mediada NHS-&#xE9;ster, controlado mono-PEGilaci&#xF3;n de A1-III alginato liasa producido un conjugado que mantiene los niveles de tipo salvaje de la actividad hacia un sustrato modelo. Significativamente, la variante PEGilado exhibi&#xF3; mejoradas cin&#xE9;tica en fase de soluci&#xF3;n con alginato bacteriano, el objetivo terap&#xE9;utico final. La inmunorreactividad de la enzima PEGilada se compar&#xF3; con un control de tipo salvaje utilizando en los estudios de uni&#xF3;n in vitro con ambos anticuerpos a enzimas espec&#xED;ficas, de inmunizados conejos blancos de Nueva Zelanda, y una biblioteca de anticuerpos de cadena &#xFA;nica, derivadas de un voluntario humano. En ambos casos, la enzima PEGilada se encontr&#xF3; que era sustancialmente menor inmunorreactiva. Subrayando el potencial de la enzima de utilidad pr&#xE1;ctica,&#x26;gt; 90% de los adherentes, las biopel&#xED;culas de Pseudomonas aeruginosa mucoides, fueron retirados de las superficies abi&#xF3;ticas siguiendo un tratamiento de una hora con la variante pegilado, mientras que la enzima de tipo silvestre eliminado s&#xF3;lo el 75% de las biopel&#xED;culas en estudios paralelos. En conjunto, estos resultados demuestran que el sitio-espec&#xED;fico de mono-PEGilaci&#xF3;n de la ingenier&#xED;a gen&#xE9;tica alginato liasa A1-III dio una enzima con un rendimiento mejorado con respecto a las m&#xE9;tricas terap&#xE9;uticamente relevantes.

Gen&#xE9;ticamente Modificados alginato liasa PEG-conjugados Prueba de funci&#xF3;n mejorada catal&#xED;tica y la inmunorreactividad reducido

&#x5D4C;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5938;&#x53E3;&#x8BF4;&#x5230;&#x836F;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7B49;&#x9886;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC6;&#x83CC;&#x9170; sortase A &#x53CA;&#x5176;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x878D;&#x5408;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x65F6;&#x4F20;&#x7EDF;&#x57FA;&#x56E0;&#x878D;&#x5408;&#x5931;&#x8D25;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x7528;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5916;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x624E;&#x5E76;&#x4FDD;&#x7559;&#x529F;&#x80FD; &mdash; &mdash; &#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x9C81;&#x68D2;&#x548C;&#x7B80;&#x6613;&#x6027;&#x8D28;&#x4E0E;&#x62A5;&#x544A;&#x6210;&#x529F;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x57DF; 10 &#x5BF9;&#x3002;

Sortase A.&#x50AC;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x878D;&#x5408;

Chimeric proteins boast widespread use in areas ranging from cell biology to drug delivery. Post-translational protein fusion using the bacterial transpeptidase sortase A provides an attractive alternative when traditional gene fusion fails. We describe use of this enzyme for in vitro protein ligation and report the successful fusion of 10 pairs of protein domains with preserved functionality--demonstrating the robust and facile nature of this reaction.

Protein-protein fusion catalyzed by sortase A.

Prot&#xE9;ines chim&#xE9;riques vanter l&#x26;#39;utilisation g&#xE9;n&#xE9;ralis&#xE9;e dans des domaines allant de la biologie cellulaire &#xE0; la livraison de drogue. La prot&#xE9;ine de fusion post-traductionnelle en utilisant le sortase transpeptidase bact&#xE9;rienne A fournit une alternative int&#xE9;ressante lorsque la fusion du g&#xE8;ne traditionnelle &#xE9;choue. Nous d&#xE9;crivons l&#x26;#39;utilisation de cette enzyme dans la ligature in vitro des prot&#xE9;ines et de signaler la fusion r&#xE9;ussie de 10 paires de domaines prot&#xE9;iques conserv&#xE9;s avec des fonctionnalit&#xE9;s - &#xE0; d&#xE9;montrer la nature robuste et facile de cette r&#xE9;action.

Fusion catalys&#xE9;e prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine par sortase Une

Chim&auml;re Proteinen r&uuml;hmen weit verbreiteten Einsatz in Bereichen wie Zellbiologie Medikamentenabgabe. POSTTRANSLATIONELLE Protein-Fusion mit die bakterielle Transpeptidase Sortase A bietet, eine attraktive alternative, wenn traditionelle gen Fusion fehlschl&auml;gt. Wir beschreiben die Verwendung dieses Enzyms f&uuml;r in-vitro-Eiwei&szlig;-Verbindung und die erfolgreiche Verschmelzung von 10 Paar Protein-Gebiete mit erhaltenen Funktionalit&auml;t--Nachweis des robusten und oberfl&auml;chlichen Charakters dieser Reaktion zu melden.

Katalysiert durch Sortase A. Protein-Protein-fusion

Le proteine chimeric vantano uso diffuso in aree che vanno dalla biologia cellulare alla consegna della droga. Fusione di alberino-di traduzione della proteina utilizzando il batterica transpeptidasi sortase A fornisce che una fusione del gene attraente alternativa quando tradizionale non riesce. Ci descrivono l&#39;uso di questo enzima per la legatura di proteine in vitro e segnalare la riuscita fusione di 10 coppie di domini della proteina con conservata funzionalit&agrave; - dimostrando la natura robusta e facile di questa reazione.

Fusione della proteina-proteina, catalizzata da sortase A.

&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x85AC;&#x7269;&#x9001;&#x9054;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x5206;&#x91CE;&#x3067;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x3092;&#x8A87;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DA;sortase&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x878D;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x878D;&#x5408;&#x304C;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x305F;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x4EE3;&#x66FF;&#x624B;&#x6BB5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B2;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x3001;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;10&#x7D44;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x5831;&#x544A; - &#x3053;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x6027;&#x3068;&#x5BB9;&#x6613;&#x306A;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Sortase&#x89E6;&#x5A92;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x878D;&#x5408;

Chimeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xC790;&#xB791; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E2; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD4E8;&#xC804; &#xC138;&#xADE0; transpeptidase sortase A&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xB54C; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xCCB4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC735;&#xD569; &#xC2E4;&#xD328;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCCB4; &#xC678; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0; &#xCC30;&#xC774;&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DC;&#xC5F0;&#xC774; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xC190;&#xC26C;&#xC6B4; &#xC790;&#xC5F0; &#xBCF4;&#xC874; &#xAE30;&#xB2A5;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; 10 &#xC30D;&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xC735;&#xD569;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0;.

1. Sortase&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD4E8;&#xC804;

Las prote&#xED;nas quim&#xE9;ricas cuentan con un amplio uso en &#xE1;reas que van desde la biolog&#xED;a celular a la administraci&#xF3;n de f&#xE1;rmacos. Despu&#xE9;s de la traducci&#xF3;n de prote&#xED;na de fusi&#xF3;n con el sortase transpeptidasa bacteriana Una ofrece una alternativa atractiva al gen de fusi&#xF3;n tradicional falla. Se describe el uso de esta enzima en la ligadura de la prote&#xED;na in vitro e informar de la fusi&#xF3;n exitosa de los 10 pares de dominios de la prote&#xED;na con funcionalidad conservada - demostrando la naturaleza robusta y f&#xE1;cil de esta reacci&#xF3;n.

La prote&#xED;na-prote&#xED;na de fusi&#xF3;n catalizada por sortase Un

&#x9664;&#x4E86;&#x4E2D;&#x548C;&#x3001; &#x6297;&#x4F53;&#x8C03;&#x89E3;&#x5176;&#x4ED6;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6297;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x541E;&#x566C;&#x529F;&#x80FD; &#xFF08;ADCP&#xFF09; &#x6297;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x4F5C;&#x7528; (ADCC)&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8865;&#x5145;&#x6C89;&#x79EF;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5B83;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x9010;&#x6B65;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x662F;&#x51CF;&#x5C11; ADCC &#x548C; ADCP &#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x672A;&#x77E5;&#x8FD9;&#x4E00;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; FcR &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x76F8;&#x5F53;&#x5927;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x8FC7;&#x53BB;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x4E0A;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A; mDCs &#x548C;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x9AD8;&#x67B6; Fc&gamma;RI &#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x6025;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5E76;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; Fc&gamma;RII &#x548C; Fc&gamma;RIIIa &#x5728;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Fc&gamma;RII &#x4EC5;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5C01;&#x9501;&#x662F;&#x5173;&#x8054;&#x5728; ADCP &#x6D3B;&#x52A8;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; Fc&gamma;RII &#x4E2D;&#x592E;&#x4F5C;&#x7528;&#x8C03;&#x8282; ADCP &#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x662F;&#x5173;&#x8054; FcR &#x8868;&#x8FBE;&#x5BF9;&#x541E;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x4F53;&#x8C03;&#x7406;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5728;&#x9010;&#x6B65; hiv-1 &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6E05;&#x9664;&#x5931;&#x8D25;&#x4F5C;&#x51FA;&#x56DE;&#x5E94;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x6B21;&#x6570;&#x3002;

&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684; Fc &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x5728;&#x957F;&#x671F;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-1 &#x4E2A;&#x4EBA;&#x53D7;&#x635F;&#x6297;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x541E;&#x566C;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

In addition to neutralization, antibodies mediate other antiviral activities including antibody-dependent cellular phagocytosis (ADCP), antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC), as well as complement deposition. While it is established that progressive HIV infection is associated with reduced ADCC and ADCP, the underlying mechanism for this loss of function is unknown. Here we report considerable changes in FcR expression over the course of HIV infection on both mDCs and monocytes, including elevated FcÎ³RI expression in acute HIV infection and reduced expression of FcÎ³RII and FcÎ³RIIIa in chronic HIV infection. Furthermore, selective blockade of FcÎ³RII alone was associated with a loss in ADCP activity, suggesting that FcÎ³RII plays a central role in modulating ADCP. Overall, HIV infection is associated with a number of changes in FcR expression on phagocytic cells that are associated with changes in their ability to respond to antibody-opsonized targets, potentially contributing to a failure in viral clearance in progressive HIV-1 infection.

Decreased Fc receptor expression on innate immune cells is associated with impaired antibody-mediated cellular phagocytic activity in chronically HIV-1 infected individuals.

Adem&#xE1;s de neutralizaci&#xF3;n, los anticuerpos mediar otras actividades antivirales incluyendo dependiente de anticuerpos fagocitosis celular (ADCP), anticuerpos citotoxicidad celular dependiente (ADCC), as&#xED; como la deposici&#xF3;n del complemento. Si bien se establece que la infecci&#xF3;n por VIH progresiva se asocia con una reducci&#xF3;n de ADCC y ADCP, el mecanismo subyacente de la p&#xE9;rdida de la funci&#xF3;n es desconocida. Aqu&#xED; mostramos los cambios considerables en la expresi&#xF3;n de receptores Fc en el curso de la infecci&#xF3;n por VIH en ambos mDCs y monocitos, incluyendo la expresi&#xF3;n elevada Fc&#x3B3;RI en la infecci&#xF3;n aguda por VIH y la reducci&#xF3;n de expresi&#xF3;n de Fc&#x3B3;RII y Fc&#x3B3;RIIIa en la infecci&#xF3;n cr&#xF3;nica por el VIH. Por otra parte, el bloqueo selectivo de Fc&#x3B3;RII sola se asoci&#xF3; con una p&#xE9;rdida de actividad ADCP, lo que sugiere que Fc&#x3B3;RII juega un papel central en la modulaci&#xF3;n de ADCP. En general, la infecci&#xF3;n por VIH se asocia con una serie de cambios en la expresi&#xF3;n de receptores Fc en las c&#xE9;lulas fagoc&#xED;ticas que se asocian con cambios en su capacidad para responder a los anticuerpos opsonizadas objetivos, contribuyendo potencialmente a un fallo en la eliminaci&#xF3;n del virus en la progresiva infecci&#xF3;n VIH-1.

Disminuci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n del receptor Fc en las c&#xE9;lulas inmunitarias innatas se asocia con una alteraci&#xF3;n de la actividad mediada por anticuerpos celular fagoc&#xED;tica en cr&#xF3;nica por VIH-1 Las personas infectadas

En plus de la neutralisation, d&#x26;#39;anticorps m&#xE9;diation autres activit&#xE9;s antivirale comprenant phagocytose d&#xE9;pendante des anticorps cellulaire (ADCP), un anticorps cytotoxicit&#xE9; cellulaire d&#xE9;pendante (ADCC), ainsi que le d&#xE9;p&#xF4;t du compl&#xE9;ment. Alors qu&#x26;#39;il est &#xE9;tabli que l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH est progressive associ&#xE9;e &#xE0; une diminution ADCC et l&#x26;#39;ADCP, le m&#xE9;canisme sous-jacent de cette perte de la fonction est inconnue. Nous rapportons ici des changements consid&#xE9;rables dans l&#x26;#39;expression FcR au cours de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH sur les deux MDC et les monocytes, y compris FcyRI expression &#xE9;lev&#xE9;e dans l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH aigu&#xEB; et une expression r&#xE9;duite de Fc&#x3B3;RII et FcyRIIIA en infection chronique au VIH. En outre, le blocage s&#xE9;lectif des Fc&#x3B3;RII seule a &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9; &#xE0; une perte d&#x26;#39;activit&#xE9; ADCP, ce qui sugg&#xE8;re que Fc&#x3B3;RII joue un r&#xF4;le central dans la modulation de l&#x26;#39;ADCP. Dans l&#x26;#39;ensemble, l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH est associ&#xE9;e &#xE0; un certain nombre de changements dans l&#x26;#39;expression FcR sur les cellules phagocytaires qui sont associ&#xE9;s &#xE0; des changements dans leur capacit&#xE9; &#xE0; r&#xE9;pondre aux anticorps opsonis&#xE9;es objectifs, susceptibles de contribuer &#xE0; un &#xE9;chec de la clairance virale chez progressive infection VIH-1.

Diminution de l&#x26;#39;expression des r&#xE9;cepteurs Fc sur les cellules immunitaires inn&#xE9;es avec facult&#xE9;s affaiblies est associ&#xE9;e &#xE0; des anticorps m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;activit&#xE9; phagocytaire cellulaire dans chroniquement VIH-1 Les personnes infect&#xE9;es

Neben Neutralisierung Antik&ouml;rper vermitteln anderen antiviralen Aktivit&auml;ten, einschlie&szlig;lich Antik&ouml;rper-abh&auml;ngige zellulare Phagozytose (ADCP), Antik&ouml;rper-abh&auml;ngige zellul&auml;ren Zytotoxizit&auml;t (ADCC), sowie Ablagerung zu erg&auml;nzen. W&auml;hrend feststeht, dass progressive HIV-Infektion reduzierte ADCC und ADCP zugeordnet ist, ist der zugrunde liegende Mechanismus f&uuml;r diesen Verlust der Funktion unbekannt. Hier berichten wir erhebliche &Auml;nderungen in FcR Ausdruck im Laufe der HIV-Infektion auf beide mDCs und Monozyten, einschlie&szlig;lich erh&ouml;hte Fc&gamma;RI Ausdruck in akute HIV-Infektion und Ausdruck von Fc&gamma;RII und Fc&gamma;RIIIa in der chronischen HIV-Infektion reduziert. Selektive Blockade der Fc&gamma;RII allein war verbunden mit einem Verlust in ADCP-Aktivit&auml;t, die darauf hindeutet, dass Fc&gamma;RII bei modulierenden ADCP eine zentrale Rolle spielt. Insgesamt ist die HIV-Infektion verbunden mit einer Reihe von &Auml;nderungen in FcR Ausdruck auf phagozytische Zellen, die mit &Auml;nderungen in ihrer F&auml;higkeit zur Bew&auml;ltigung von Antik&ouml;rper-opsonized Ziele, m&ouml;glicherweise auf einen Fehler in virale Clearance in progressive HIV-1 Infektion beitragen.

Verminderte Fc-Rezeptor-Ausdruck auf angeborene immune Zellen ist beeintr&auml;chtigt antik&ouml;rpervermittelten phagozytische Zellaktivit&auml;t bei chronisch HIV-1 infizierten Personen zugeordnet.

Oltre alla neutralizzazione, anticorpi mediano altre attivit&agrave; antivirali, tra cui la fagocitosi cellulare anticorpo-dipendente (ADCP), citotossicit&agrave; cellulare anticorpo-dipendente (ADCC), cos&igrave; come completano di deposizione. Mentre si &egrave; stabilito che l&#39;infezione da HIV progressiva &egrave; associato con ridotto ADCC e ADCP, il meccanismo sottostante per questa perdita di funzione &egrave; sconosciuto. Qui riportiamo notevoli cambiamenti nell&#39;espressione FcR nel corso dell&#39;infezione da HIV su entrambi MDC e monociti, tra cui elevata espressione Fc&gamma;RI nell&#39;infezione di HIV acuta e ridotta espressione di Fc&gamma;RII e Fc&gamma;RIIIa nell&#39;infezione cronica da HIV. Inoltre, blocco selettivo di Fc&gamma;RII da solo &egrave; stato associato con una perdita di attivit&agrave; ADCP, suggerendo che Fc&gamma;RII svolge un ruolo centrale nella modulazione ADCP. Nel complesso, l&#39;infezione da HIV &egrave; associato con un certo numero di cambiamenti nell&#39;espressione FcR su cellule fagocitiche che sono associati con i cambiamenti nella loro capacit&agrave; di rispondere agli obiettivi dell&#39;anticorpo-opsonized, potenzialmente contribuire a un fallimento nella clearance virale nell&#39;infezione da HIV-1 progressivo.

Diminuzione dell&#39;espressione dei recettori Fc sulle cellule del sistema immunitario innate &egrave; associato con compromissione anticorpo-mediata fagocitaria attivit&agrave; cellulare in cronicamente infettata di HIV-1 individui.

&#x4E2D;&#x548C;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CAA;&#x98DF;&#xFF08;ADCP&#xFF09;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#xFF08;ADCC&#xFF09;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x88DC;&#x4F53;&#x6C88;&#x7740;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4ED6;&#x306E;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x9032;&#x6B69;&#x7684;&#x306A;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;ADCC&#x304A;&#x3088;&#x3073;ADCP&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593;&#x306F;&#x3001;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x6027;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3068;&#x6162;&#x6027;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;Fc&#x3B3;RII&#x304A;&#x3088;&#x3073;Fc&#x3B3;RIIIa&#x3092;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x91CF;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3067;&#x4E0A;&#x6607;Fc&#x3B3;RI&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x6A39;&#x72B6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5358;&#x7403;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x306E;FcR&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Fc&#x3B3;RII&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x906E;&#x65AD;&#x306F;Fc&#x3B3;RII&#x306F;&#x3001;&#x5909;&#x8ABF;ADCP&#x3067;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;ADCP&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x304C;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306B;&#x9032;&#x884C;&#x6027;&#x306E;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x969C;&#x5BB3;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3001;&#x30AA;&#x30D7;&#x30BD;&#x30CB;&#x30F3;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8CAA;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E0A;&#x306E;FcR&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x6570;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;Fc&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x6162;&#x6027;&#x7684;&#x306B;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x500B;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x969C;&#x5BB3;&#x6297;&#x4F53;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8CAA;&#x98DF;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

&#xC911;&#xD654;, &#xC678; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC2DD; &#xADE0; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC758;&#xC874; &#xC138;&#xD3EC; &#xC791;&#xC6A9; (ADCP) &#xD56D; &#xCCB4; &#xC758;&#xC874; &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131; (ADCC)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xB978; &#xD56D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC644; &#xD558;&#xB294; &#xC99D; &#xCC29;. &#xC9C4;&#xBCF4;&#xC801;&#xC778; HIV&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; ADCC &#xBC0F; ADCP &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD568;&#xC218;&#xC758;&#xC774; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBAA8;&#xB450; Mdcs&#xC5D0; HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; FcR &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; monocytes&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE09;&#xC131; HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; Fc&gamma;RI &#xC2DD; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC18C; &#xB9CC;&#xC131; HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0;&#xC11C; Fc&gamma;RII &#xBC0F; Fc&gamma;riiia&#xC758; &#xD45C;&#xD604;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD63C;&#xC790; Fc&gamma;rii&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xBD09;&#xC1C4;&#xB294; ADCP &#xD65C;&#xB3D9;, Fc&gamma;RII &#xBCC0;&#xC870; ADCP&#xC5D0; &#xC911;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xC190;&#xC2E4;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xAC10;&#xC5FC; &#xD56D; &#xCCB4; &#xCE68; &#xB300;&#xC0C1;, &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C4;&#xBCF4;&#xC801;&#xC778; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC815;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC2E4;&#xD328;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300;&#xC751; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB41C; phagocytic &#xC140;&#xC5D0; FcR &#xC2DD;&#xC758; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC6A9; &#xC218;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC18C; Fc &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC2DD; &#xC7A5;&#xC560; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC911;&#xC7AC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; phagocytic &#xD65C;&#xB3D9; &#xB9CC;&#xC131; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xAC1C;&#xC778;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x975E;&#x514D;&#x75AB;&#x6297;&#x4F53;&#x7247;&#x6BB5;&#x5E93;&#x4EA7;&#x751F;&#x6297;&#x539F;&#x86CB;&#x767D;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x524D;&#x77BB;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x3001; &#x5F71;&#x50CF;&#x5B66;&#x3001; &#x8BCA;&#x65AD;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x5242;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5E93;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5173;&#x4E8E;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x4ECE;&#x5FAA;&#x73AF;&#x514D;&#x75AB;&#x6C47;&#x8F91; &#x300B;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x771F;&#x6B63;&#x5E7C;&#x7A1A;&#x3001; &#x751F;&#x6B96;&#x5E8F;&#x5217;&#x3001; &#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x53EF;&#x80FD;&#x53CD;&#x6620;&#x5220;&#x9664;&#x7684; autoreactive &#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E0D;&#x592A;&#x9002;&#x5408;&#x9694;&#x79BB;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x514B;&#x9686;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6297;&#x539F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5FAA;&#x73AF;&#x6297;&#x4F53;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x9700;&#x8981;&#x4E5F;&#x8BB8;&#x6709;&#x7528;&#x5728;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x51E1;&#x4E0A;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x53E5;&#x67C4;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x5927;&#x578B;&#x975E;&#x514D;&#x75AB;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x5E93;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8D2B;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x80FD;&#x591F;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5230;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E0E; orthologs &#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x3002;&#x53E6;&#x5916;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6B64;&#x975E;-&#x5E7C;&#x7A1A;&#x7684;&#x3001; &#x975E;&#x514D;&#x75AB;&#x5E93;&#x53EF;&#x6355;&#x83B7;&#x6297;&#x4F53;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x4EE3;&#x8868;&#x90E8;&#x5206;&#x4E2D;&#x7684;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8;&#x5176;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x8FDB;&#x884C;&#x65E9;&#x671F; pre-screens &#x9884;&#x6D4B;&#x672A;&#x6765;&#x6CBB;&#x7597;&#x5B66;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x6027;&#x548C;&#x627E;&#x5230;&#x4E34;&#x5E8A;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7597;&#x6CD5;&#x4E0E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x503E;&#x5411;&#x4E0E;&#x5E93;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5C0F;&#x9762;&#x677F;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x3002;

&#x5229;&#x7528;&#x4E2D;&#x975E;&#x514D;&#x75AB;&#x6297;&#x4F53;&#x5E93;&#x6765;&#x9884;&#x6D4B;&#x6297;&#x539F;&#x6027;&#x7684;&#x504F;&#x89C1;&#x3002;

Non-immune human antibody fragment libraries have generated antigen-binding proteins useful as prospective research, imaging, diagnostic and therapeutic agents. However, because the generation of such libraries relies on cloning antibody sequences from the circulating immune repertoire rather than truly naÃ¯ve, germline sequences, their composition may reflect the deletion of autoreactive sequences, making them less suited for isolating binding clones to human antigens, but perhaps useful in applications where an in vitro handle on representative circulating antibody diversity is desired. Here we demonstrate that a large non-immune human scFv library is relatively depleted of sequences capable of recognizing human antigens as compared with orthologs antigens. Additionally, because this non-naÃ¯ve, non-immune library may capture a representative section of antibody diversity, we explore its possible utility in conducting early pre-screens to predict the antigenicity of prospective therapeutics and find a correlation between the clinical immunogenicity of a small panel of protein therapeutics with their propensity for interacting with the library.

Exploiting bias in a non-immune human antibody library to predict antigenicity.

Non-immunes humaines biblioth&#xE8;ques de fragments d&#x26;#39;anticorps ont g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; liaison &#xE0; l&#x26;#39;antig&#xE8;ne des prot&#xE9;ines utiles que la recherche prospective, de l&#x26;#39;imagerie, agents diagnostiques et th&#xE9;rapeutiques. Cependant, parce que la g&#xE9;n&#xE9;ration de ces biblioth&#xE8;ques s&#x26;#39;appuie sur des s&#xE9;quences d&#x26;#39;anticorps clonage du r&#xE9;pertoire immuns circulants plut&#xF4;t que vraiment na&#xEF;fs, les s&#xE9;quences des lign&#xE9;es germinales, leur composition peuvent refl&#xE9;ter la suppression de s&#xE9;quences autor&#xE9;actifs, ce qui les rend moins aptes pour isoler des clones de liaison aux antig&#xE8;nes de l&#x26;#39;homme, mais peut-&#xEA;tre utile dans les applications o&#xF9; une poign&#xE9;e de vitro sur la diversit&#xE9; des anticorps circulants repr&#xE9;sentant est souhait&#xE9;e. Nous d&#xE9;montrons ici que d&#x26;#39;un grand non-immune biblioth&#xE8;que humaine scFv est relativement pauvre des s&#xE9;quences capables de reconna&#xEE;tre des antig&#xE8;nes humains par rapport &#xE0; des antig&#xE8;nes orthologues. En outre, parce que ce non-na&#xEF;ve, non-immune biblioth&#xE8;que peut capturer une section repr&#xE9;sentative de la diversit&#xE9; des anticorps, nous explorons son utilit&#xE9; possible dans la conduite de d&#xE9;but pr&#xE9;-&#xE9;crans pour pr&#xE9;dire l&#x26;#39;antig&#xE9;nicit&#xE9; de la th&#xE9;rapeutique potentiels et de trouver une corr&#xE9;lation entre l&#x26;#39;immunog&#xE9;nicit&#xE9; clinique d&#x26;#39;une petite panel de prot&#xE9;ines th&#xE9;rapeutiques avec leur propension &#xE0; interagir avec la biblioth&#xE8;que.

Exploiter Bias dans une biblioth&#xE8;que non-immune anticorps humain pour pr&#xE9;dire Antig&#xE9;nicit&#xE9;

Nicht-Immune menschlicher Antik&ouml;rper-Fragment-Bibliotheken haben Antigen-bindende Proteine als prospektive Forschung, imaging, diagnostische und therapeutische Agenten erzeugt. Da die Erzeugung solcher Bibliotheken beruht Klonen Antik&ouml;rper Sequenzen aus dem zirkulierenden immun Repertoire anstatt wirklich naiv, Germline Sequenzen, ihrer Zusammensetzung k&ouml;nnen reflektieren die Streichung von autoreaktive Sequenzen, so dass sie weniger geeignet zum Isolieren von Bindung Klone zu menschlichen Antigene, aber vielleicht n&uuml;tzlich in Anwendungen, wo eine in-vitro-Handle auf repr&auml;sentativen zirkulierende Antik&ouml;rper Vielfalt erw&uuml;nscht ist. Hier zeigen wir, dass eine gro&szlig;e nicht-immunen Menschen ScFv-Bibliothek relativ Sequenzen erkennen menschlichen Antigene im Vergleich Orthologen Antigene aufgebraucht ist. Zus&auml;tzlich, da diese nicht-naiv, nicht-immunen Bibliothek erfassen kann einen repr&auml;sentativen Abschnitt der Antik&ouml;rper-Vielfalt, entdecken wir seinen m&ouml;glichen Nutzen bei der Durchf&uuml;hrung von fr&uuml;hen Pre-screens um Vorhersagen der Antigenit&auml;t potenzielle Therapeutika und eine Korrelation zwischen der klinischen Immunogenit&auml;t eines kleinen Bereichs des Protein Therapeutics ihre Neigung f&uuml;r die Interaktion mit der Bibliothek zu finden.

Ausnutzung der Voreingenommenheit in einer nicht-immunen menschlicher Antik&ouml;rper-Bibliothek Antigenit&auml;t vorherzusagen.

Librerie di frammento di anticorpo umano non-immune hanno generato antigen-binding proteins utile come ricerca prospettico, imaging, agenti diagnostici e terapeutici. Tuttavia, poich&eacute; la generazione di tali librerie si basa sulla clonazione dell&#39;anticorpo sequenze da repertorio immune circolo piuttosto che veramente ingenuo, sequenze di germline, loro composizione possono riflettere l&#39;eliminazione delle sequenze autoreattivi, rendendoli meno adatto per l&#39;isolamento di cloni di associazione agli antigeni umani, ma forse utili nelle applicazioni dove un handle in vitro su rappresentante circolanti diversit&agrave; anticorpale &egrave; desiderato. Qui dimostriamo che una libreria di grandi dimensioni scFv umana non immune &egrave; relativamente impoverita di sequenze in grado di riconoscere antigeni umani rispetto agli antigeni di orthologs. Inoltre, perch&eacute; questa non-na&iuml;ve, biblioteca non immune pu&ograve; catturare una sezione rappresentativa della diversit&agrave; anticorpale, esploriamo la sua possibile utilit&agrave; nel condurre Alimentadores presto per prevedere l&#39;antigenicit&agrave; di potenziali terapie e trovare una correlazione tra la clinica immunogenicit&agrave; di un piccolo pannello di terapie di proteine con la loro propensione per l&#39;interazione con la libreria.

Sfruttando il bias in una libreria non immune anticorpo umano a predire antigenicit&agrave;.

&#x975E;&#x514D;&#x75AB;&#x30D2;&#x30C8;&#x6297;&#x4F53;&#x65AD;&#x7247;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306F;&#x3001;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3001;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x8A3A;&#x65AD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6CBB;&#x7642;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x306F;&#x5FAA;&#x74B0;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x30EC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x672C;&#x5F53;&#x306B;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x3001;&#x751F;&#x6B96;&#x7CFB;&#x5217;&#x914D;&#x5217;&#x304B;&#x3089;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x6297;&#x4F53;&#x914D;&#x5217;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x5358;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3042;&#x307E;&#x308A;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x306A;&#x5FAA;&#x74B0;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;in vitro&#x30CF;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x304C;&#x671B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x975E;&#x514D;&#x75AB;&#x30D2;&#x30C8;scFv&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x30AA;&#x30EB;&#x30BD;&#x30ED;&#x30B0;&#x6297;&#x539F;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30D2;&#x30C8;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x975E;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x3001;&#x975E;&#x514D;&#x75AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306E;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x306A;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x3080;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x6027;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30D7;&#x30EC;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x969B;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x30E6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3057;&#x3001;&#x5C0F;&#x898F;&#x6A21;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x50BE;&#x5411;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x306E;&#x30D1;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002;

&#x6297;&#x539F;&#x6027;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x514D;&#x75AB;&#x30D2;&#x30C8;&#x6297;&#x4F53;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;

&#xBE44; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC778;&#xAC04; &#xD56D; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xD3B8; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xC608;&#xBE44; &#xC5F0;&#xAD6C;, &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;, &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC694;&#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBB36;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xC131;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xBBC0;&#xB85C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC21C;&#xD658; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB808; &#xD37C; &#xD1A0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC9C4;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C;, &#xBC88;&#xC9F8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; autoreactive &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;, &#xB35C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB97C; &#xBC18;&#xC601; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xC5B4;&#xB514; &#xB300;&#xD45C;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD578;&#xB4E4;&#xC744; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xC21C;&#xD658; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xD070; &#xBE44; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC778;&#xAC04; scFv &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; orthologs &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC778;&#xC2DD; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC774; &#xC544;&#xB2CC;-&#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C;, &#xBE44; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xCEA1;&#xCC98;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD56D; &#xCCB4; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC758; &#xB300;&#xD45C;&#xC801;&#xC778; &#xC139;&#xC158; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD559; antigenicity&#xC744; &#xC608;&#xCE21; &#xD558; &#xACE0; &#xC791;&#xC740; &#xD328;&#xB110; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC131;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC81C;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; immunogenicity &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC744; &#xD558; &#xC870;&#xAE30; pre-screens &#xC2E4;&#xC2DC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xC758; &#xD0D0;&#xD5D8;.

Antigenicity &#xC608;&#xCE21; &#xBE44; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC778;&#xAC04; &#xD56D; &#xCCB4; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC545;&#xC6A9;.

No inmunes bibliotecas de fragmentos de anticuerpos humanos han generado de uni&#xF3;n ant&#xED;geno-prote&#xED;nas &#xFA;tiles como investigaci&#xF3;n prospectiva, formaci&#xF3;n de im&#xE1;genes, agentes de diagn&#xF3;stico y terap&#xE9;uticos. Sin embargo, debido a la generaci&#xF3;n de bibliotecas de este tipo se basa en la clonaci&#xF3;n de secuencias de anticuerpos circulantes del repertorio inmunol&#xF3;gico en vez de realmente ingenuos, las secuencias de la l&#xED;nea germinal, que su composici&#xF3;n puede reflejar la supresi&#xF3;n de las secuencias autorreactivos, haci&#xE9;ndolos menos adecuados para el aislamiento de los clones de uni&#xF3;n a los ant&#xED;genos humanos, pero tal vez &#xFA;til en aplicaciones donde un mango en vitro sobre la diversidad de anticuerpos circulantes representante se desea. Aqu&#xED; nos demuestran que un gran no inmune humano biblioteca scFv est&#xE1; relativamente agotado de secuencias capaces de reconocer ant&#xED;genos humanos, en comparaci&#xF3;n con los ant&#xED;genos orthologs. Adem&#xE1;s, debido a esta falta de ingenuo, no inmune biblioteca puede capturar una secci&#xF3;n representativa de la diversidad de los anticuerpos, se explora su posible utilidad en la realizaci&#xF3;n de los primeros pre-pantallas para predecir la antigenicidad de la terap&#xE9;utica de los posibles y encontrar una correlaci&#xF3;n entre la inmunogenicidad de una peque&#xF1;a cl&#xED;nica grupo de prote&#xED;nas terap&#xE9;uticas con su propensi&#xF3;n a interactuar con la biblioteca.

La explotaci&#xF3;n de sesgo en una biblioteca de anticuerpos no-inmune humano para predecir la antigenicidad

&#x867D;&#x7136;&#x4E2D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6D88;&#x6BD2;&#x4FDD;&#x62A4;&#x514D;&#x53D7;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x53D8;&#x91CF;&#x7684;&#x57DF;&#xFF0C;&#x6297;&#x4F53;&#x5E38;&#x91CF;&#x57DF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x3001; &#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x514D;&#x75AB;&#x529F;&#x80FD;&#x94FE;&#x63A5;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x79CD;&#x624B;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x70C8;&#x6027;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7279;&#x6027;&#x3002;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x4ECE;&#x80BF;&#x7624;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x548C;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8FD9;&#x4E00;&#x673A;&#x5236;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x8D1F;&#x8D23;&#x4FDD;&#x62A4;&#x5728; RV144 &#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x75AB;&#x82D7;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x6295;&#x673A;&#x7684;&#x57DF;&#x5DF2;&#x65E5;&#x76CA;&#x8D4F;&#x6790;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6548;&#x5E94;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x68C0;&#x8BA8;&#x603B;&#x7ED3;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B; extraneutralizing &#x7684;&#x4F53;&#x6DB2;&#x514D;&#x75AB;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5728;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E2D;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x548C;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75AB;&#x82D7;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BF9;&#x4FDD;&#x62A4;&#x514D;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x8FDB;&#x5C55;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6548;&#x5E94;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x65B9;&#x9762;&#x53D6;&#x5F97;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x9884;&#x9632;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x63A7;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x65B0;&#x5174;&#x6982;&#x5FF5;&#x3002;

While neutralizing antibodies can provide sterilizing protection from HIV infection via their variable domains, the antibody constant domain provides a functional link between innate and adaptive immunity and offers a means to harness the potent antiviral properties of a wide spectrum of innate immune effector cells. There has been a growing appreciation of the role of these effector mechanisms across fields from cancer immunotherapy to autoimmunity and infectious disease, as well as speculation that this mechanism may be responsible for the protection observed in the RV144 HIV vaccine trial. This review summarizes these extraneutralizing humoral immune activities, progress in defining the importance of these effector mechanisms during progression in HIV infection, and the potential impact that such vaccine-induced immune responses may have on protection from infection.

Emerging Concepts on the Role of Innate Immunity in the Prevention and Control of HIV Infection.

Bien que les anticorps neutralisants peuvent fournir st&#xE9;rilisation protection contre l&#x26;#39;infection du VIH par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire de leurs domaines variables, le domaine constant d&#x26;#39;anticorps fournit un lien fonctionnel entre l&#x26;#39;immunit&#xE9; inn&#xE9;e et adaptative et offre un moyen d&#x26;#39;exploiter les puissantes propri&#xE9;t&#xE9;s antivirales d&#x26;#39;un large &#xE9;ventail de l&#x26;#39;immunit&#xE9; inn&#xE9;e des cellules effectrices. Il ya eu une prise de conscience croissante du r&#xF4;le de ces m&#xE9;canismes effecteurs &#xE0; travers champs de l&#x26;#39;immunoth&#xE9;rapie du cancer &#xE0; l&#x26;#39;auto-immunit&#xE9; et des maladies infectieuses, ainsi que la sp&#xE9;culation que ce m&#xE9;canisme pourrait &#xEA;tre responsable de la protection observ&#xE9;e dans l&#x26;#39;essai RV144 vaccin contre le VIH. Cette revue r&#xE9;sume ces activit&#xE9;s extraneutralizing humorales immunitaires, les progr&#xE8;s dans la d&#xE9;finition de l&#x26;#39;importance de ces m&#xE9;canismes effecteurs lors de la progression de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH, et l&#x26;#39;impact potentiel que ces vaccins-r&#xE9;ponses immunitaires induites par peut avoir sur la protection contre l&#x26;#39;infection.

Concepts &#xE9;mergents sur le r&#xF4;le de l&#x26;#39;immunit&#xE9; inn&#xE9;e dans la pr&#xE9;vention et le contr&#xF4;le de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH

W&auml;hrend neutralisierenden Antik&ouml;rpern sterilisieren Schutz vor HIV-Infektionen &uuml;ber ihre Variablen Dom&auml;nen bieten kann, die Antik&ouml;rper Konstante Dom&auml;ne stellt eine funktionelle Verbindung zwischen angeborenen und erworbenen Immunit&auml;t und bietet eine M&ouml;glichkeit, die starken antiviralen Eigenschaften ein breites Spektrum von angeborenen Immunsystem Effektorzellen nutzbar zu machen. Es wurde eine wachsende Wertsch&auml;tzung der Rolle dieser Effektor-Mechanismen &uuml;ber Felder von Krebs-Immuntherapie zur Autoimmunit&auml;t sowie Infektionskrankheiten und Spekulationen, die diesen Mechanismus f&uuml;r den Schutz in der RV144 HIV-Impfstoff Studie beobachtete verantwortlich sein kann. Diesen Bericht fasst diese extraneutralizing humoralen immun Aktivit&auml;ten, Fortschritte bei definieren die Bedeutung dieser Effektor-Mechanismen w&auml;hrend Fortschreiten in HIV-Infektionen und die m&ouml;glichen Auswirkungen, die solche Immunantworten induziert durch Impfstoff zum Schutz vor Infektionen haben k&ouml;nnten.

Neue Konzepte &uuml;ber die Rolle der angeborenen Immunit&auml;t in der Pr&auml;vention und Kontrolle von HIV-Infektionen.

Mentre neutralizzando gli anticorpi pu&ograve; fornire sterilizzante protezione dall&#39;infezione da HIV tramite loro domini variabili, il dominio costante dell&#39;anticorpo fornisce un collegamento funzionale tra l&#39;immunit&agrave; innata e adattiva e offre un mezzo per sfruttare le potenti propriet&agrave; antivirali di un ampio spettro di cellule effettrici immunitarie innate. C&#39;&egrave; stato un crescente apprezzamento del ruolo di questi meccanismi effettori attraverso campi da immunoterapia cancro per autoimmunit&agrave; e malattie infettive, come pure speculazioni che questo meccanismo pu&ograve; essere responsabile per la protezione osservata nel vaccino RV144 HIV prova. Questa recensione riassume questi extraneutralizing attivit&agrave; immunitaria umorale, progressi nel definire l&#39;importanza di questi meccanismi effettori durante la progressione nell&#39;infezione da HIV e il potenziale impatto che tali risposte immunitarie indotta da vaccino pu&ograve; avere sulla protezione dall&#39;infezione.

Concetti emergenti sul ruolo dell&#39;immunit&agrave; innata nella prevenzione e controllo dell&#39;infezione da HIV.

&#x4E2D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x53EF;&#x5909;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3092;&#x6BBA;&#x83CC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x3068;&#x9069;&#x5FDC;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x6BB5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x764C;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x304B;&#x3089;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x3068;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;RV144&#x306E;HIV&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x61B6;&#x6E2C;&#x306B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x5168;&#x4F53;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x611F;&#x8B1D;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;extraneutralizing&#x4F53;&#x6DB2;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3001;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x969B;&#x306B;&#x9032;&#x884C;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x4E88;&#x9632;&#x3068;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6982;&#x5FF5;

&#xC911;&#xD654; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xBCC0;&#xC218; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B4; &#xADE0; &#xBCF4;&#xD638;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294;, &#xB3D9;&#xC548; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xC218; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBC0F; &#xC801;&#xC751;&#xD615; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB9C1;&#xD06C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC758; &#xC801; &#xC815;&#xB7C9; &#xD56D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xB2E8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; effector &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xAC10;&#xC0AC; autoimmunity &#xC804;&#xC5FC; &#xC131; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C;&#xC774; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; RV144 HIV &#xBC31;&#xC2E0; &#xD3C9;&#xAC00;&#xD310; &#xAD00;&#xCC30; &#xBCF4;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC774; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCD94;&#xCE21; &#xC554; immunotherapy&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0; extraneutralizing &#xCCB4;&#xC561; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD65C;&#xB3D9;, HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xACFC; &#xBC31;&#xC2E0; &#xC720;&#xB3C4; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xAC19;&#xC740; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC73C;&#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xBCF4;&#xD638;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE60; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xD5A5;&#xC5D0; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; effector &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589; &#xC694;&#xC57D; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC608;&#xBC29;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xBC0F; HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xB098;&#xC624;&#xB294; &#xAC1C;&#xB150;.

Mientras que los anticuerpos neutralizantes puede proporcionar protecci&#xF3;n contra la esterilizaci&#xF3;n de la infecci&#xF3;n por VIH a trav&#xE9;s de sus dominios variables, el dominio constante de anticuerpo proporciona un v&#xED;nculo funcional entre la inmunidad innata y adaptativa y ofrece un medio para aprovechar las potentes propiedades antivirales de un amplio espectro de las c&#xE9;lulas efectoras inmunes innatas. Ha habido un creciente reconocimiento de la funci&#xF3;n de estos mecanismos efectores a trav&#xE9;s de los campos de la inmunoterapia del c&#xE1;ncer a la autoinmunidad y las enfermedades infecciosas, as&#xED; como la especulaci&#xF3;n de que este mecanismo puede ser responsable de la protecci&#xF3;n observada en el ensayo de una vacuna RV144 VIH. Esta revisi&#xF3;n resume estas actividades extraneutralizing inmune humoral, el progreso en la definici&#xF3;n de la importancia de estos mecanismos efectores durante la progresi&#xF3;n de la infecci&#xF3;n por el VIH y el impacto potencial que estas inducidos por la vacuna la respuesta inmune puede tener sobre la protecci&#xF3;n de la infecci&#xF3;n.

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Margaret E. Ackerman

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