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Purification and Visualization of Influenza A Viral Ribonucleoprotein Complexes

The influenza A viral genome consists of eight negative-sense, single stranded RNA molecules, individually packed with multiple copies of the influenza A ...

University of British Columbia - UBC

Retinoschisin &#x662F; 24 kDa &#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x548C;&#x53CC;&#x6781;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5927;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x94FE;&#x63A5; multisubunit &#x590D;&#x6742;&#x3002;&#x5B83;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4FDD;&#x6301;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x7A81;&#x89E6;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x57FA;&#x56E0;&#x8D85;&#x8FC7; 125 &#x4E0D;&#x540C;&#x7A81;&#x53D8;&#x672A;&#x5173;&#x8054; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x7684;&#x5C11;&#x5E74;&#x5288;&#xFF0C;&#x65E9;&#x671F;&#x53D1;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x9EC4;&#x6591;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x7537;&#x6027;&#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BC6;&#x522B;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; retinoschisin &#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x548C;&#x6F84;&#x6E05;&#x8D1F;&#x8D23;&#x5C11;&#x5E74; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x8868;&#x8FBE;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x3001; &#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x94FE;&#x63A5;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; retinoschisin&#x3001; 15 &#x5230; Ser Cys &#x53D8;&#x79CD;&#x548C; 12 &#x4E0E;&#x75BE;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5206;&#x5B50;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6; Cys &#x6B8B;&#x7559;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x95F4;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x3001; &#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x548C; retinoschisin &#x4E0D;&#x80FD;&#x63D2;&#x5165;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x6CCC;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x662F;&#x5728; retinoschisin &#x51FD;&#x6570;&#x4E2D;&#x635F;&#x5931;&#x8D1F;&#x8D23;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x7684; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x7684;&#x5C11;&#x5E74;&#x5288;&#x3002;

&#x8D1F;&#x8D23; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x7ED3;&#x6784;&#x3001; &#x4E9A;&#x57FA;&#x5927;&#x4F1A;&#x548C; retinoschisin &#x7684;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x52A0;&#x5DE5;&#x3002;

Retinoschisin is a 24-kDa discoidin domain-containing protein that is secreted from photoreceptor and bipolar cells as a large disulfide-linked multisubunit complex. It functions as a cell adhesion protein to maintain the cellular organization and synaptic structure of the retina. Over 125 different mutations in the RS1 gene are associated with X-linked juvenile retinoschisis, the most common form of early onset macular degeneration in males. To identify molecular determinants important for retinoschisin structure and function and elucidate molecular and cellular mechanisms responsible for X-linked juvenile retinoschisis, we have analyzed the expression, protein folding, disulfide-linked subunit assembly, intracellular localization, and secretion of wild-type retinoschisin, 15 Cys-to-Ser variants and 12 disease-linked mutants. Our studies, together with molecular modeling of the discoidin domain, identify Cys residues involved in intramolecular and intermolecular disulfide bonds essential for protein folding and subunit assembly. We show that misfolding of the discoidin domain, defective disulfide-linked subunit assembly, and inability of retinoschisin to insert into the endoplasmic reticulum membrane as part of the protein secretion process are three primary mechanisms responsible for the loss in the function of retinoschisin as a cell adhesion protein and the pathogenesis of X-linked juvenile retinoschisis.

Defective discoidin domain structure, subunit assembly, and endoplasmic reticulum processing of retinoschisin are primary mechanisms responsible for X-linked retinoschisis.

Retinoschisin est une prot&eacute;ine de domaine contenant discoidin 24 kDa qui est s&eacute;cr&eacute;t&eacute;e par les photor&eacute;cepteurs et les cellules bipolaires comme un grand multisubunit disulfure li&eacute;s complexe. Il fonctionne comme une prot&eacute;ine d&#39;adh&eacute;sion cellulaire pour maintenir l&#39;organisation cellulaire et structure synaptique de la r&eacute;tine. Plus de 125 mutations diff&eacute;rentes du g&egrave;ne RS1 sont associ&eacute;es &agrave; retinoschisis juv&eacute;nile li&eacute;e &agrave; le X, la forme la plus courante de la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence maculaire apparition pr&eacute;coce chez les m&acirc;les. Pour identifier les d&eacute;terminants mol&eacute;culaires importantes pour la fonction et la structure retinoschisin et &eacute;lucider les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires et cellulaires responsables retinoschisis juv&eacute;nile li&eacute;e &agrave; le X, nous avons analys&eacute; l&#39;expression, Assembl&eacute;e de prot&eacute;ine pliant, disulfure li&eacute;e &agrave; le X de sous-unit&eacute;, localisation intracellulaire et s&eacute;cr&eacute;tion de retinoschisin sauvage, 15 variantes Cys-&agrave;-Ser et mutants de maladie li&eacute;e &agrave; le X 12. Nos &eacute;tudes, ainsi que de la mod&eacute;lisation mol&eacute;culaire du domaine discoidin, identifient les r&eacute;sidus Cys impliqu&eacute;es dans les liaisons disulfures intramol&eacute;culaires et intermol&eacute;culaires essentiels pour l&#39;assemblage de pliage et de la sous-unit&eacute; prot&eacute;ique. Nous montrons que mauvais repliement du domaine discoidin, Assembl&eacute;e de sous-unit&eacute; de disulfure li&eacute; d&eacute;fectueux et incapacit&eacute; de retinoschisin &agrave; ins&eacute;rer dans la membrane du r&eacute;ticulum endoplasmique dans le cadre du processus de s&eacute;cr&eacute;tion prot&eacute;ique est les trois principaux m&eacute;canismes responsables de la perte de la fonction de retinoschisin comme une prot&eacute;ine d&#39;adh&eacute;sion cellulaire et la pathogen&egrave;se de retinoschisis juv&eacute;nile li&eacute;e &agrave; le X.

La structure de domaine d&eacute;fectueux discoidin, sous-unit&eacute; assemblage et traitement de r&eacute;ticulum endoplasmique de retinoschisin sont les principaux m&eacute;canismes responsables de retinoschisis li&eacute;e &agrave; le X.

Defekte Discoidin Dom&#xE4;nenstruktur, Untereinheit der Montage und Verarbeitung von endoplasmatischen Retikulum retinoschisin sind prim&#xE4;re Mechanismen, die f&#xFC;r X-chromosomale Retinoschisis.

Retinoschisin &egrave; una 24-settore del discoidin dominio contenenti proteina di kDa che viene secreto da fotorecettori e cellule bipolari come un grande multisubunit disolfuro collegato complesso. Funziona come una proteina di adesione delle cellule per mantenere l&#39;organizzazione cellulare e la struttura sinaptica della retina. Oltre 125 diverse mutazioni nel gene RS1 sono associate Retinoschisi giovanile X-linked, la forma pi&ugrave; comune della degenerazione maculare ad esordio precoce nei maschi. Per identificare i determinanti molecolari importante per funzione e struttura retinoschisin e chiarire i meccanismi molecolari e cellulari responsabili di Retinoschisi giovanile legata al X, abbiamo analizzato l&#39;espressione, proteine pieghevole, disolfuro collegato subunit&agrave; assembly, localizzazione intracellulare e secrezione di selvaggio-tipo retinoschisin, 15 varianti di Cys-Ser e 12 mutanti malattia legata al X. I nostri studi, insieme con la modellistica molecolare del del discoidin, identificano i residui Cys coinvolti in legami disolfuro intramolecolari ed intermolecolari essenziale per montaggio pieghevole e subunit&agrave; proteiche. Mostriamo che misfolding del discoidin, assemblaggio di subunit&agrave; disolfuro legato difettosi e incapacit&agrave; di retinoschisin da inserire nella membrana del reticolo endoplasmatico come parte del processo di secrezione della proteina sono tre meccanismi principali responsabili per la perdita della funzione di retinoschisin come una proteina di adesione delle cellule e la patogenesi della Retinoschisi giovanile legata al X.

Struttura di dominio del settore difettoso del discoidin, assemblaggio di subunit&agrave; ed elaborazione di reticolo endoplasmatico di retinoschisin sono principali meccanismi responsabili Retinoschisi legata al X.

Retinoschisin &#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x53CC;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306F;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9; multisubunit &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5206;&#x6CCC;&#x3055;&#x308C;&#x308B; 24 kDa discoidin &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;125 &#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5909;&#x7570; RS1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x5C11;&#x5E74;&#x306E;&#x8F2A;&#x90ED;&#x3001;&#x65E9;&#x671F;&#x767A;&#x75C7;&#x306E;&#x9EC4;&#x6591;&#x5909;&#x6027;&#x75C7;&#x306E;&#x7537;&#x6027;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Retinoschisin &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x82E5;&#x5E74;&#x6027;&#x7DB2;&#x819C;&#x5206;&#x96E2;&#x75C7;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30FB;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5F0F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x3001;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; retinoschisin&#x3001;15 Cys Ser &#x4E9C;&#x7A2E;&#x3001;12 &#x75C5;&#x6C17;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B; discoidin &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x3068;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E; discoidin &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;&#x6B20;&#x9665;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x819C;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x6CCC;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x633F;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068; retinoschisin &#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; 3 &#x3064;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD; retinoschisin &#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x82E5;&#x5E74;&#x6027;&#x7DB2;&#x819C;&#x5206;&#x96E2;&#x75C7;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6B20;&#x9665; discoidin &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020; retinoschisin &#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x52A0;&#x5DE5;&#x30FB; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x7DB2;&#x819C;&#x5206;&#x96E2;&#x75C7;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Retinoschisin&#xB294; &#xB300;&#xD615; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC5F0;&#xACB0; multisubunit &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130;&#xC640; &#xC591;&#xADF9; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84; &#xBE44; &#xB418;&#xB294; 24-kDa discoidin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC9C1; &#xBC0F; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 125 &#xB2E4;&#xB978; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; RS1 &#xC720;&#xC804;&#xC790; X &#xC5F0;&#xACB0; &#xCCAD;&#xC18C;&#xB144; retinoschisis, &#xB0A8;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD08;&#xAE30; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xD669; &#xBC18; &#xBCC0;&#xC131;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xD0DC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Retinoschisin &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xCCAD;&#xC18C;&#xB144; retinoschisis X &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2DD;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD3F4;&#xB529;, &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC870;&#xB9BD;, &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; retinoschisin, 15 Cys Ser &#xBCC0;&#xC885;&#xACFC; 12 &#xC9C8;&#xBCD1; &#xAD00;&#xB828; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. Discoidin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xD568;&#xAED8; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; Cys&#xC758; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; intramolecular intermolecular &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xCC44;&#xAD8C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD3F4;&#xB529; &#xBC0F; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC38;&#xC5EC;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xCCAD;&#xC18C;&#xB144; retinoschisis X &#xC5F0;&#xACB0;&#xC758; pathogenesis retinoschisin &#xD568;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC758; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC8FC;&#xC694; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; misfolding discoidin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC870;&#xB9BD;&#xACFC; retinoschisin&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84; &#xBE44; &#xACFC;&#xC815;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xB85C; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; &#xD558;&#xB294; &#xBB34; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DC;.

&#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; discoidin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870;, &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC870;&#xB9BD;&#xACFC; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xCC98;&#xB9AC; retinoschisin&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; X&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; retinoschisis&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC740;.

Retinoschisin es una prote&iacute;na que contiene el dominio de discoidin 24-kDa que es secretada de fotorreceptor y c&eacute;lulas bipolares como un multisubunit disulfuro-ligados grande complejo. Funciona como una prote&iacute;na de adhesi&oacute;n celular para mantener la organizaci&oacute;n celular y la estructura sin&aacute;ptica de la retina. M&aacute;s de 125 diversas mutaciones en el gene de RS1 se asocian con retinoschisis juvenil X-ligado, la forma m&aacute;s com&uacute;n de degeneraci&oacute;n macular de temprana aparici&oacute;n en varones. Para identificar los determinantes moleculares importantes para la funci&oacute;n y la estructura retinoschisin y dilucidar los mecanismos moleculares y celulares responsables de retinoschisis juvenil X-ligado, hemos analizado la expresi&oacute;n, Asamblea de prote&iacute;na plegable, disulfuro-ligados subunidad, localizaci&oacute;n intracelular y secreci&oacute;n de tipo retinoschisin, 15 variantes de Cys-a-Ser y 12 enfermedad x-ligada mutantes. Nuestros estudios, junto con el modelado molecular del dominio discoidin, identifican residuos Cys en enlaces de disulfuro intramolecular y intermolecular esenciales para Asamblea plegable y la subunidad de la prote&iacute;na. Demostramos que mal plegamiento de la incapacidad de retinoschisin para insertar en la membrana del ret&iacute;culo endoplasm&aacute;tico como parte del proceso de secreci&oacute;n de prote&iacute;nas, dominio discoidin y montaje defectuoso subunidad disulfuro-ligados es tres principales mecanismos responsables de la p&eacute;rdida de la funci&oacute;n de retinoschisin como una prote&iacute;na de adhesi&oacute;n celular y la patogenesia de retinoschisis juvenil X-ligado.

Estructura de dominios discoidin defectuoso, Asamblea de la subunidad y ret&iacute;culo endopl&aacute;smico procesamiento de retinoschisin son mecanismos primarios responsables de retinoschisis X-ligado.

&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; retinoschisin&#xFF0C;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E3A; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5288;&#x88C2;&#xFF0C;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x65E9;&#x53D1;&#x6027;&#x9EC4;&#x6591;&#x53D8;&#x6027;&#x7537;&#x6027;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x5185;&#x5C42;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x548C;&#x89C6;&#x91CE;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E25;&#x91CD;&#x635F;&#x5931;&#x8D1F;&#x8D23;&#x3002;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x662F;&#x7EC4;&#x88C5;&#x548C;&#x540C;&#x6E90;&#x5BE1;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4ECE;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x53CC;&#x6781;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x4E24;&#x4FA7;&#x662F;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684; 39 &#x548C; 5 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178; 157-&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x9178;&#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x5F00;&#x59CB;&#x4E86;&#x89E3;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5982;&#x4F55;&#x5173;&#x4E4E;&#x5176;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x548C; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5288;&#x88C2;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x7531; SDS &#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x3001; &#x6C89;&#x964D;&#x901F;&#x5EA6;&#x548C;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7C98;&#x63A5;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x5B58;&#x5728;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x7684; octamer&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x516B;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x57FA;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x7684; Cys(59)-Cys(223) &#x5206;&#x5B50;&#x95F4;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x3002;&#x4E9A;&#x57FA;&#x5728; octamer &#x5185;&#x7684;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5206;&#x4E3A;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC; Cys(40)-Cys(40) &#x503A;&#x5238;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x9760;&#x6492;&#x8C0E;&#x57CE;&#x5916;&#x6307;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E3B;&#x8981;&#x4FA7;&#x7FFC;&#x6BB5;&#x51FD;&#x6570;&#x4E2D;&#x7684;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 octamerization &#x7684;&#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x3002;&#x5185;&#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x5BF9; &#xFF08;Cys(63)-Cys(219) &#x548C; Cys(110)-Cys(142)) &#x7A97;&#x4F53;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#xFF0C;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178; (Cys(83)) &#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x5176;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6270;&#x4E71;&#x4E9A;&#x57FA;&#x5927;&#x4F1A;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5288;&#x88C2;&#xFF0C;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x7684;&#x7EC4;&#x88C5;&#x6210;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x94FE;&#x63A5; homo octamer &#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1&#xFF0C;&#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5288;&#x88C2;&#xFF0C;&#x5173;&#x8054;&#x5B58;&#x5728;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x8054;&#x7CFB; octamer&#x3002;

RS1, also known as retinoschisin, is an extracellular protein that plays a crucial role in the cellular organization of the retina. Mutations in RS1 are responsible for X-linked retinoschisis, a common, early-onset macular degeneration in males that results in a splitting of the inner layers of the retina and severe loss in vision. RS1 is assembled and secreted from photoreceptors and bipolar cells as a homo-oligomeric protein complex. Each subunit consists of a 157-amino acid discoidin domain flanked by two small segments of 39 and 5 amino acids. To begin to understand how the structure of RS1 relates to its role in retinal cell adhesion and X-linked retinoschisis, we have determined the subunit organization and disulfide bonding pattern of RS1 by SDS gel electrophoresis, velocity sedimentation, and mass spectrometry. Our results indicate that RS1 exists as a novel octamer in which the eight subunits are joined together by Cys(59)-Cys(223) intermolecular disulfide bonds. Subunits within the octamer are further organized into dimers mediated by Cys(40)-Cys(40) bonds. These cysteines lie just outside the discoidin domain indicating that these flanking segments primarily function in the octamerization of RS1. Within the discoidin domain, two cysteine pairs (Cys(63)-Cys(219) and Cys(110)-Cys(142)) form intramolecular disulfide bonds that are important in protein folding, and one cysteine (Cys(83)) exists in its reduced state. Because mutations that disrupt subunit assembly cause X-linked retinoschisis, the assembly of RS1 into a disulfide-linked homo-octamer appears to be critical for its function as a retinal cell adhesion protein.

RS1, a discoidin domain-containing retinal cell adhesion protein associated with X-linked retinoschisis, exists as a novel disulfide-linked octamer.

RS1, &eacute;galement connu sous le nom retinoschisin, est une prot&eacute;ine extracellulaire qui joue un r&ocirc;le crucial dans l&#39;organisation cellulaire de la r&eacute;tine. RS1 des mutations sont responsables de retinoschisis li&eacute; &agrave; le X, une d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence maculaire commune, pr&eacute;coce chez les m&acirc;les qui se traduit par un d&eacute;doublement des couches internes de la r&eacute;tine et une s&eacute;v&egrave;re perte de vision. RS1 est assembl&eacute; et s&eacute;cr&eacute;t&eacute;e par les photor&eacute;cepteurs et les cellules bipolaires comme un complexe de prot&eacute;ines homo-oligom&egrave;re. Chaque sous-unit&eacute; se compose d&#39;un domaine de discoidin acides amin&eacute;s 157 flanqu&eacute; de deux petits segments d&#39;acides amin&eacute;s 39 et 5. Pour commencer &agrave; comprendre comment la structure de RS1 est li&eacute;e &agrave; son r&ocirc;le dans l&#39;adh&eacute;rence des cellules r&eacute;tiniennes et retinoschisis li&eacute; &agrave; le X, nous avons d&eacute;termin&eacute; l&#39;organisation de la sous-unit&eacute; et le mod&egrave;le de liaison disulfure de RS1 par &eacute;lectrophor&egrave;se sur gel SDS, s&eacute;dimentation de v&eacute;locit&eacute; et spectrom&eacute;trie de masse. Nos r&eacute;sultats indiquent que RS1 comme un octam&egrave;re roman dans lequel les huit sous-unit&eacute;s sont r&eacute;unies par Cys(59)-Cys(223) ponts disulfures intermol&eacute;culaire. Sous-unit&eacute;s dans l&#39;octam&egrave;re sont &eacute;galement organis&eacute;es en dim&egrave;res m&eacute;di&eacute;es par des liaisons Cys(40)-Cys(40). Ces cyst&eacute;ines se trouvent juste &agrave; l&#39;ext&eacute;rieur du domaine du discoidin indiquant que ces segments d&#39;accompagnement principalement fonctionnent dans l&#39;octamerization de RS1. Dans le domaine du discoidin, deux paires de cyst&eacute;ine (obligations de disulfure intramol&eacute;culaire de forme Cys(63)-Cys(219) et Cys(110)-Cys(142)) qui sont importantes dans le repliement des prot&eacute;ines et une cyst&eacute;ine (Cys(83)) existe dans son &eacute;tat r&eacute;duit. Mutations qui perturbent l&#39;assemblage de sous-unit&eacute;s provoquer retinoschisis li&eacute; &agrave; le X, l&#39;assemblage de RS1 dans un homo-octam&egrave;re ax&eacute;es sur le disulfure semble critique pour sa fonction d&#39;une prot&eacute;ine d&#39;adh&eacute;sion cellulaire de la r&eacute;tine.

RS1, une cellule de la r&eacute;tine contenant un domaine discoidin prot&eacute;ine d&#39;adh&eacute;sion associ&eacute;e &agrave; retinoschisis li&eacute; &agrave; le X, existe comme un roman octam&egrave;re disulfure li&eacute;e &agrave; le X.

RS1, ein Discoidin-Domain-Retinal enth&#xE4;lt Zelladh&#xE4;sionsprotein mit X-chromosomal Retinoschisis zugeordnet ist, existiert ein neues Disulfid-gebundene Octamer.

RS1, noto anche come retinoschisin, &egrave; una proteina extracellulare che gioca un ruolo cruciale nell&#39;organizzazione cellulare della retina. Le mutazioni RS1 sono responsabili di Retinoschisi legata al X, una degenerazione macula comune, ad esordio precoce nei maschi che si traduce in una scissione degli strati interni della retina e grave perdita di visione. RS1 &egrave; assemblato e secreto da fotorecettori e cellule bipolari come un complesso della proteina oligomerica homo. Ogni subunit&agrave; &egrave; costituita da di un 157-amino acido discoidin fiancheggiato da due piccoli segmenti di 39 e 5 aminoacidi. Per cominciare a capire come la struttura della RS1 si riferisce al suo ruolo nell&#39;adesione delle cellule retiniche e Retinoschisi legata al X, abbiamo determinato la subunit&agrave; organizzazione e modello di legame disolfuro di RS1 da SDS elettroforesi del gel, sedimentazione di velocit&agrave; e spettrometria di massa. I nostri risultati indicano che la RS1 esiste come un romanzo octamer in cui le otto subunit&agrave; sono unite da ponti disolfuro intermolecolari Cys(59)-Cys(223). Subunit&agrave; entro il octamer sono ulteriormente organizzate in dimeri mediati da legami Cys(40)-Cys(40). Queste cisteine si trovano appena fuori del discoidin che indica che questi segmenti di accompagnamento principalmente la funzione in octamerization di RS1. All&#39;interno del discoidin, due coppie di cisteina (Cys(63)-Cys(219) e Cys(110)-Cys(142)) legami disolfuro intramolecolari forma che sono importanti per il protein folding e una cisteina (Cys(83)) esiste allo stato ridotto. Poich&eacute; le mutazioni che interrompono l&#39;assemblaggio di subunit&agrave; causano Retinoschisi legata al X, l&#39;Assemblea di RS1 in un homo-octamer disolfuro collegato sembra essere critica per la sua funzione come una proteina di adesione delle cellule retiniche.

RS1, una settore del discoidin dominio-contenente della retina cellule proteine di adesione associata Retinoschisi legata al X, esiste come un romanzo octamer disolfuro collegato.

RS1 &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; retinoschisin&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RS1 &#x5909;&#x7570; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x7DB2;&#x819C;&#x5206;&#x96E2;&#x75C7;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x3068;&#x91CD;&#x5EA6;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x30D3;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306E;&#x5185;&#x5074;&#x306E;&#x5C64;&#x306E;&#x5206;&#x5272;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x65E9;&#x671F;&#x767A;&#x75C7;&#x9EC4;&#x6591;&#x5909;&#x6027;&#x7537;&#x6027;&#x3067;&#x62C5;&#x5F53;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RS1 &#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3001;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x53CC;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8; &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x6CCC;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F; 39 &#x3068; 5 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; 2 &#x3064;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x4E26;&#x3076; 157 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178; discoidin &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RS1 &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3068; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x7DB2;&#x819C;&#x5206;&#x96E2;&#x75C7;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3057;&#x59CB;&#x3081;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D44;&#x7E54;&#x3068; SDS &#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;, &#x901F;&#x5EA6;&#x6C88;&#x964D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B; RS1 &#x306E;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;RS1 8 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B; Cys(59)-Cys(223) &#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x304C;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5C0F;&#x8AAC; 8 &#x91CF;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;8 &#x91CF;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; Cys(40)-Cys(40) &#x50B5;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x6574;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x4E3B;&#x306B;&#x4E26;&#x3076; RS1 &#x306E; octamerization &#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; discoidin &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3060;&#x3051;&#x5916;&#x3046;&#x305D;&#x3002;Discoidin &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x3067;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3; &#x30DA;&#x30A2; &#xFF08;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A; Cys(63)-Cys(219) &#x3068; Cys(110)-Cys(142)) &#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x50B5;&#x3001;1 &#x3064;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3; &#xFF08;Cys(83)) &#x305D;&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x5909;&#x7570; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x7DB2;&#x819C;&#x5206;&#x96E2;&#x75C7;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306F;&#x3001;8 &#x91CF;&#x306F;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9; &#x30DB;&#x30E2;-&#x4F53;&#x306B; RS1 &#x7DB2;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RS1&#x3001;discoidin &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7DB2;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x7DB2;&#x819C;&#x5206;&#x96E2;&#x75C7;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9; 8 &#x306E;&#x91CF;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RS1, &#xC77C;&#xCEEC;&#xC5B4; retinoschisin, &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. Rs1&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xC774; X&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; retinoschisis&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xBC1C;&#xBCD1; &#xCD08;&#xAE30; &#xD669; &#xBC18; &#xBCC0;&#xC131; &#xB0A8;&#xC131;&#xC5D0; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xACFC; &#xC2DC;&#xB825;&#xC5D0; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xC190;&#xC2E4;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xB97C; &#xBD84;&#xD560; &#xD558;&#xB294; &#xACB0;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. RS1 &#xC870;&#xB9BD; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD638;&#xBAA8; oligomeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xB1CC;&#xC640; &#xC591;&#xADF9; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84; &#xBE44;. &#xAC01; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB294; 39, 5 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xBC8C; 157 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; discoidin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. RS1 &#xAD6C;&#xC870; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBC0F; X&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; retinoschisis&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC870;&#xC9C1; &#xBC0F; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569; &#xD328;&#xD134;&#xC758; RS1 SDS &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;, &#xCE68; &#xAC15; &#xC18D;&#xB3C4;, &#xBC0F; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; RS1 8 &#xAC1C;&#xC758; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; Cys(59)-Cys(223) intermolecular &#xC774;&#xD669;&#xD654;&#xB85C; &#xD568;&#xAED8; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xC18C;&#xC124; octamer&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB294; octamer &#xB0B4; &#xCD94;&#xAC00; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; &#xC911;&#xC7AC; Cys(40)-Cys(40) &#xCC44;&#xAD8C;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC774; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xCE21;&#xBA74; RS1 octamerization&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; discoidin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xBC16;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC70;&#xC9D3;&#xB9D0;. Discoidin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB450; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC30D; (&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD3F4;&#xB529;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; Cys(63)-Cys(219) &#xBC0F; Cys(110)-Cys(142)) &#xC591;&#xC2DD; intramolecular &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xCC44;&#xAD8C; &#xBC0F; 1 &#xAC1C;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; (Cys(83)) &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBC29;&#xD574; &#xBCC0;&#xC774; X&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; retinoschisis&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; RS1 &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD638;&#xBAA8; octamer&#xC5D0; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RS1, discoidin &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; X&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; retinoschisis&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC18C;&#xC124; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC5F0;&#xACB0; octamer&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RS1, tambi&eacute;n conocido como retinoschisin, es una prote&iacute;na extracelular que desempe&ntilde;a un papel crucial en la organizaci&oacute;n celular de la retina. Las mutaciones en el RS1 son responsables de retinoschisis X-ligado, una degeneraci&oacute;n macular com&uacute;n, de aparici&oacute;n temprana en los hombres que da lugar a partir de las capas internas de la retina y p&eacute;rdida severa de la visi&oacute;n. RS1 est&aacute; ensamblada y secretada de fotorreceptores y las c&eacute;lulas bipolares como un complejo proteico homo-oligom&eacute;rico. Cada subunidad se compone de un dominio de 157-amino &aacute;cido discoidin flanqueado por dos peque&ntilde;os segmentos de 5 y 39 amino&aacute;cidos. Para comenzar a comprender c&oacute;mo la estructura de RS1 se relaciona con su papel en la adhesi&oacute;n de c&eacute;lulas retinianas y retinoschisis X-ligado, hemos determinado la organizaci&oacute;n de la subunidad y patr&oacute;n de la vinculaci&oacute;n del disulfuro de RS1 por electroforesis SDS, sedimentaci&oacute;n de velocidad y espectrometr&iacute;a de masas. Nuestros resultados indican que el RS1 existe como un oct&aacute;mero de novela en la que las ocho subunidades se unen entre s&iacute; por enlaces de disulfuro intermoleculares de Cys(59)-Cys(223). Subunidades en el oct&aacute;mero m&aacute;s se organizan en d&iacute;meros mediadas por bonos de Cys(40)-Cys(40). Estas ciste&iacute;nas se encuentran a las afueras del dominio discoidin, que indica que estos flanqueando segmentos principalmente funcionan en el octamerization de RS1. Dentro del dominio de discoidin, dos pares de ciste&iacute;na (Cys(63)-Cys(219) y Cys(110)-Cys(142)) enlaces de disulfuro intramolecular de forma que son importantes en el plegamiento de la prote&iacute;na y una ciste&iacute;na (Cys(83)) existe en su estado reducido. Debido a las mutaciones que alteran la Asamblea de la subunidad causan retinoschisis X-ligado, la Asamblea de RS1 en un homo-oct&aacute;mero disulfuro-ligados parece ser cr&iacute;tico para su funci&oacute;n como una prote&iacute;na de adhesi&oacute;n de c&eacute;lulas retinianas.

RS1, una c&eacute;lula retiniana que contiene el dominio discoidin prote&iacute;na de adhesi&oacute;n asociada retinoschisis X-ligado, existe como una novela oct&aacute;mero disulfuro-ligados.

&#x75BE;&#x75C5;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x4E0E;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

Disease mechanisms and gene therapy in a mouse model for X-linked retinoschisis.

Les m&eacute;canismes de la maladie et la th&eacute;rapie g&eacute;nique dans un mod&egrave;le murin pour retinoschisis li&eacute;e &agrave; le X.

Krankheitsmechanismen und Gentherapie in einem Mausmodell f&uuml;r X-chromosomale Retinoschisis.

Meccanismi di malattia e terapia genica in un modello murino di Retinoschisi legata al X.

&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3084; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x7DB2;&#x819C;&#x5206;&#x96E2;&#x75C7;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x3002;

&#xC9C8;&#xBCD1; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBC0F; X&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; retinoschisis&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;.

Mecanismos de la enfermedad y la terapia g&eacute;nica en un modelo murino de retinoschisis X-ligado.

&#x7532;&#x578B;&#x6D41;&#x611F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5728;&#x5176;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x590D;&#x5236;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6D41;&#x611F;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6761;&#x76EE;&#x662F;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x611F;&#x67D3;&#x6240;&#x9700;&#x3002;&#x7532;&#x578B;&#x6D41;&#x611F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7531;&#x5305;&#x542B;&#x516B;&#x4E2A;&#x5355;&#x7EDE;&#x3001; &#x8D1F;&#x8D23;&#x4EFB;&#x611F; RNA &#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5355;&#x72EC;&#x5305;&#x88C5;&#x6210;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x9897;&#x7C92; (vRNPs) &#x4E0E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6838;&#x86CB;&#x767D; (NP) &#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x526F;&#x672C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; vRNPs &#x662F;&#x5927;&#x578B;&#x3001; &#x6746;&#x5F62;&#x542B;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7684; NP&#xFF0C;RNA &#x87BA;&#x65CB;&#x5305;&#x88C5;&#x6240;&#x56F4;&#x7ED5;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#x3002;VRNPs &#x662F;&#x8F93;&#x5165;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x7684;&#x5B9E;&#x4F53;&#x548C;&#x5176;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x5FC5;&#x987B;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6838;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5E8F;&#x5217; &#xFF08;&#x5C3C;&#x6CCA;&#x5C14;&#x751F;&#x6D3B;&#x6C34;&#x5E73;&#x8C03;&#x67E5;&#xFF09; &#x5728; vRNPs &#x4E0A;&#x66B4;&#x9732;&#x3002;NP &#x5305;&#x542B;&#x5C3C;&#x6CCA;&#x5C14;&#x751F;&#x6D3B;&#x6C34;&#x5E73;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5047;&#x5B9A;&#x8C03;&#x67E5;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5728; N &#x603B;&#x7AD9; &#xFF08;NLS1&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5728;&#x4E2D;&#x95F4; &#xFF08;NLS2&#xFF09; &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; NP &#x5C3C;&#x6CCA;&#x5C14;&#x751F;&#x6D3B;&#x6C34;&#x5E73;&#x8C03;&#x67E5;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x8C03;&#x89E3;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4; NP &#x5206;&#x5B50;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4ECD;&#x6709;&#x5F85;&#x786E;&#x5B9A;&#x54EA;&#x4E9B; NLS &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6D41;&#x611F; vRNP &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x3002;

&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x7684;&#x6D41;&#x611F; A &#x75C5;&#x6BD2;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x88AB;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6838;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;

The influenza A virus replicates in the nucleus of its host cell. Thus, entry of the influenza genome into the cell nucleus is necessary for establishing infection. The genome of the influenza A virus consists of eight single-stranded, negative-sense RNA molecules, individually packed with several copies of the viral nucleoprotein (NP) into ribonucleoprotein particles (vRNPs). These vRNPs are large, rod-shaped complexes containing a core of NP, around which the RNA is helically wrapped. The vRNPs are the entities that enter the nucleus, and their nuclear import must be mediated by nuclear localization sequences (NLSs) exposed on the vRNPs. NP contains at least two putative NLSs, one at the N-terminus (NLS1) and one in the middle (NLS2) of the protein. These NP NLSs have been shown to mediate the nuclear import of recombinant NP molecules. However, it remains to be determined which NLS mediates the nuclear import of influenza vRNP complexes.

Nuclear import of influenza A viral ribonucleoprotein complexes is mediated by two nuclear localization sequences on viral nucleoprotein.

Le virus de la grippe A se r&eacute;plique dans le noyau de la cellule h&ocirc;te. Ainsi, entr&eacute;e du g&eacute;nome dans le noyau de la cellule grippe est n&eacute;cessaire pour &eacute;tablir l&#39;infection. Le g&eacute;nome du virus de la grippe A est compos&eacute; de huit mol&eacute;cules d&#39;ARN simple brin, polarit&eacute; n&eacute;gative, emball&eacute;es individuellement avec plusieurs exemplaires de la nucl&eacute;oprot&eacute;ine virale (NP) en particules ribonucl&eacute;oprot&eacute;iques (vRNPs). Ces vRNPs sont des complexes de large, en forme de b&acirc;tonnet contenant un noyau de NP, autour duquel l&#39;ARN est h&eacute;lice enroul&eacute;e. Les vRNPs sont les entit&eacute;s qui entrent dans le noyau, et leur importation nucl&eacute;aire doit &ecirc;tre m&eacute;di&eacute;e par des s&eacute;quences de localisation nucl&eacute;aire (sln) expos&eacute;s sur la vRNPs. NP contient au moins deux sln putatif, une &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N-terminale (NLS1) et l&#39;autre au milieu (NLS2) de la prot&eacute;ine. Ces sln NP ont d&eacute;montr&eacute; &agrave; la m&eacute;diation de l&#39;import nucl&eacute;aire des mol&eacute;cules recombinantes de NP. Cependant, il reste &agrave; d&eacute;terminer lequel NLS intervient dans l&#39;import nucl&eacute;aire des complexes vRNP grippe.

Import nucl&eacute;aire des complexes ribonucl&eacute;oprot&eacute;iques virales de grippe A est m&eacute;di&eacute;e par les deux s&eacute;quences de localisation nucl&eacute;aire sur la nucl&eacute;oprot&eacute;ine virale.

Das Influenza-A-Virus wird in den Zellkern der Wirtszelle repliziert. Daher ist Eintrag des Genoms Grippe in den Zellkern notwendig f&uuml;r den Aufbau der Infektion. Das Genom der Influenza-A-Virus besteht aus acht einzeln-angeschwemmte, negativ-Sinn RNA-Molek&uuml;le, einzeln verpackt mit mehreren Kopien der viralen Nukleoprotein (NP) in Ribonucleoprotein Partikel (vRNPs). Diese vRNPs sind gro&szlig;e, stabf&ouml;rmige komplexe, die mit einen Kern von NP, um die RNA schraubenf&ouml;rmig gewickelt ist. Die vRNPs sind die Einheiten, die den Zellkern eingeben und ihre nuklearen Import muss von nuklearen Lokalisierung Sequenzen (NLSs) auf die vRNPs gemachten vermittelt werden. NP enth&auml;lt mindestens zwei vermeintliche NLSs, eine im N-Terminus (NLS1) und eine in der Mitte (NLS2) des Proteins. Diese NP NLSs wurden gezeigt, die nukleare Einfuhr von rekombinanten NP-Molek&uuml;le zu vermitteln. Jedoch bleibt es ermittelt werden, welche NLS den nuklearen Import der Grippe vRNP komplexe vermittelt.

Nukleare Import der Grippe A viral-Gebiets-komplexe ist durch zwei nukleare Lokalisierung-Sequenzen auf viralen Nukleoprotein vermittelt.

Il virus dell&#39;influenza A si replica nel nucleo della sua cellula ospite. Cos&igrave;, voce del genoma dell&#39;influenza nel nucleo cellulare &egrave; necessario per stabilire l&#39;infezione. Il genoma del virus dell&#39;influenza A &egrave; costituito da otto molecole RNA single-stranded, senso negativo, confezionate singolarmente con diverse copie delle nucleoproteine virali (NP) in particelle della ribonucleoproteina (vRNPs). Questi vRNPs sono grandi, a forma di bastoncello complessi contenenti un nucleo di NP, intorno a cui il RNA elicoidale &egrave; avvolto. Le vRNPs sono le entit&agrave; che entrano il nucleo, e loro importazione nucleare deve essere mediata da sequenze di localizzazione nucleare (NLSs) esposti sulla vRNPs. NP contiene almeno due NLSs putativo, uno presso il N-terminus (NLS1) e uno nel mezzo (NLS2) della proteina. Questi NLSs NP hanno dimostrato di mediare l&#39;importazione nucleare di molecole ricombinanti di NP. Tuttavia, rimane da determinare quale NLS da intermediario l&#39;importazione nucleare dei complessi vRNP dell&#39;influenza.

Importazione nucleare di complessi di ribonucleoproteina virali dell&#39;influenza A &egrave; mediata da due sequenze di localizzazione nucleare su nucleoproteine virali.

&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x3067;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x306B;&#x306F;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306F;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7C92;&#x5B50; (vRNPs) &#x306B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D; (NP) &#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x3092;&#x500B;&#x5225;&#x5305;&#x88C5; 8 &#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x5EA7;&#x7901;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3001;&#x8CA0;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9; RNA &#x5206;&#x5B50;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; vRNPs NP&#x3001;RNA &#x3092;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x5468;&#x308A;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x68D2;&#x72B6;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x3059;&#x3002;VRNPs&#x3001;&#x6838;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6838;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8; vRNPs &#x306B;&#x516C;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6838;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; (NLSs) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NP &#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 2 &#x3064;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A; NLSs&#x3001;1 &#x3064;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF; (NLS1) &#x3067;&#x4E2D;&#x9593; (NLS2) &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; 1 &#x3064;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; NP NLSs &#x7D44;&#x63DB;&#x3048; NP &#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6838;&#x306E;&#x8F38;&#x5165;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3069;&#x306E; NLS &#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; vRNP &#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x6838;&#x306E;&#x8F38;&#x5165;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x6B8B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6838;&#x3078;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4E0A;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6838;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB294; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD575;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC81C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC138;&#xD3EC; &#xD575;&#xC5D0; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC740; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;. 8 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5;, &#xB124;&#xAC70;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xAC10;&#xC9C0; RNA &#xBD84;&#xC790;, ribonucleoprotein &#xC785;&#xC790; (vRNPs)&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; nucleoprotein (NP)&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8;&#xC744; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; vRNPs &#xD070;, &#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xB2E8;&#xC9C0; NP, &#xC8FC;&#xC704;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; RNA &#xD3EC;&#xC7A5; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC758; &#xCF54;&#xC5B4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294;. VRNPs &#xC785;&#xB825; &#xD575;, &#xC5D4;&#xD2F0;&#xD2F0; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD575; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; (NLSs)&#xB294; Vrnps&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. NP &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xB450; &#xC0C1; NLSs, N-&#xC885;&#xC810; (NLS1)&#xC5D0; &#xD55C; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC911;&#xAC04; (NLS2)&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; NP NLSs &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; NP &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xB294; NLS &#xC911;&#xC7AC; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; vRNP &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; ribonucleoprotein &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xB450; &#xD575; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; nucleoprotein&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El virus de la influenza A se replica en el n&uacute;cleo de la c&eacute;lula hu&eacute;sped. As&iacute;, la entrada del genoma de la gripe en el n&uacute;cleo celular es necesaria para establecer la infecci&oacute;n. El genoma de los virus de influenza A se compone de ocho monocatenario, sentido negativo mol&eacute;culas de ARN, embaladas individualmente con varios ejemplares de la nucleoprote&iacute;na viral (NP) en part&iacute;culas de Ribonucleoprote&iacute;na (vRNPs). Estos vRNPs son complejos grandes, en forma de bastoncillos que contiene un n&uacute;cleo de NP, alrededor del cual el RNA helicoidal se envuelve. Los vRNPs son las entidades que entran en el n&uacute;cleo, y su importaci&oacute;n nuclear debe estar mediado por secuencias de localizaci&oacute;n nuclear (NLSs) expuestas en la vRNPs. NP contiene al menos dos supuestos NLSs, uno en el extremo N-terminal (NLS1) y uno en el centro (NLS2) de la prote&iacute;na. Estos NLSs NP han demostrado mediar la importaci&oacute;n nuclear de mol&eacute;culas recombinantes de NP. Sin embargo, queda por determinarse qu&eacute; NLS media la importaci&oacute;n nuclear de complejos de vRNP de la gripe.

Importaci&oacute;n nuclear de complejos de Ribonucleoprote&iacute;na viral de la gripe A est&aacute; mediada por dos secuencias de localizaci&oacute;n nuclear de nucleoprote&iacute;na viral.

Retinoschisin &#x6216;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x662F;&#x7531;&#x8D1F;&#x8D23; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x65E9;&#x671F;&#x53D1;&#x75C5;&#x9EC4;&#x6591;&#x53D8;&#x6027; (XLRS) &#x5288;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;Retinoschisin&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x548C; homo octameric &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x3001; &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4ECE;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x53CC;&#x6781;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x5B83;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x7EF4;&#x6301;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x548C;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x4E24;&#x6781;&#x7A81;&#x89E6;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x8981;&#x6DF1;&#x5165;&#x4E86;&#x89E3; XLRS &#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x53CA; retinoschisin &#x5728;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x4E0E; retinoschisin &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x63D0;&#x53D6;&#x4E2D;&#x7684;&#x819C;&#x5143;&#x4EF6;&#x3002;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x56FA;&#x86CB;&#x767D;&#x56E0;&#x5B50; V &#x548C;&#x7B2C; VIII &#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;retinoschisin &#x672A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x78F7;&#x8102;&#x6216;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x8840;&#x8102;&#x8FDB; unilamellar &#x56CA;&#x6CE1;&#x518D;&#x9020;&#x6216;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5728;&#x5FAE;&#x5B54;&#x677F;&#x4E0A;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;co &#x6C89;&#x6DC0;&#x4E0E;&#x8D28;&#x8C31;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;retinoschisin &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x590D;&#x6742;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684; Na/K ATPase beta2 &#x5F02;&#x6784;&#x4F53; alpha3&#xFF09; &#x548C;&#x4E0D;&#x80B2;&#x7684; alpha TIR &#x6BCD;&#x9898;&#x542B;&#x86CB;&#x767D; SARM1 &#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x53CC;&#x6807;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7814;&#x7A76;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E0E; Na/K ATPase &#x548C; SARM1 &#x5728;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; retinoschisin &#x7684;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x548C;&#x4E24;&#x6781;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;retinoschisin &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Na/K ATPase &#x5BF9;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x548C;&#x53CC;&#x6781;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x65B0;&#x578B;&#x7684; SARM1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x4E24;&#x6781;&#x7A81;&#x89E6;&#x7ED3;&#x6784;&#x7EF4;&#x4FEE;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;

Retinoschisin &#xFF08;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1)&#xFF0C;&#x7531; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x951A;&#x5B9A;&#x5230;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7684;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x548C;&#x53CC;&#x6781;&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x4E0E; Na/K ATPase SARM1 &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x3002;

Retinoschisin or RS1 is a discoidin domain-containing protein encoded by the gene responsible for X-linked retinoschisis (XLRS), an early onset macular degeneration characterized by a splitting of the retina. Retinoschisin, expressed and secreted from photoreceptors and bipolar cells as a homo-octameric complex, associates with the surface of these cells where it serves to maintain the cellular organization of the retina and the photoreceptor-bipolar synaptic structure. To gain insight into the role of retinoschisin in retinal cell adhesion and the pathogenesis of XLRS, we have investigated membrane components in retinal extracts that interact with retinoschisin. Unlike the discoidin domain-containing blood coagulation proteins Factor V and Factor VIII, retinoschisin did not bind to phospholipids or retinal lipids reconstituted into unilamellar vesicles or immobilized on microtiter plates. Instead, co-immunoprecipitation studies together with mass spectrometric-based proteomics and Western blotting showed that retinoschisin is associated with a complex consisting of Na/K ATPase (alpha3, beta2 isoforms) and the sterile alpha and TIR motif-containing protein SARM1. Double labeling studies for immunofluorescence microscopy confirmed the co-localization of retinoschisin with Na/K ATPase and SARM1 in photoreceptors and bipolar cells of retina tissue. We conclude that retinoschisin binds to Na/K ATPase on photoreceptor and bipolar cells. This interaction may be part of a novel SARM1-mediated cell signaling pathway required for the maintenance of retinal cell organization and photoreceptor-bipolar synaptic structure.

Retinoschisin (RS1), the protein encoded by the X-linked retinoschisis gene, is anchored to the surface of retinal photoreceptor and bipolar cells through its interactions with a Na/K ATPase-SARM1 complex.

Retinoschisin ou RS1 est une prot&eacute;ine contenant du domaine discoidin, cod&eacute;e par le g&egrave;ne responsable de la retinoschisis li&eacute;e &agrave; le X (XLR), une d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence maculaire de d&eacute;but pr&eacute;coce caract&eacute;ris&eacute;e par un fractionnement de la r&eacute;tine. Retinoschisin, exprim&eacute;e et s&eacute;cr&eacute;t&eacute;e par les photor&eacute;cepteurs et les cellules bipolaires comme homo-et complexe, associe &agrave; la surface de ces cellules, o&ugrave; il sert &agrave; maintenir l&#39;organisation cellulaire de la r&eacute;tine et la photor&eacute;cepteur-bipolaire structure synaptique. Afin de mieux comprendre le r&ocirc;le de retinoschisin dans l&#39;adh&eacute;sion des cellules r&eacute;tiniennes et la pathogen&egrave;se de la XLR, nous avons &eacute;tudi&eacute; les constituants membranaires dans les extraits r&eacute;tiniennes qui interagissent avec les retinoschisin. &Agrave; la diff&eacute;rence du discoidin contenant du domaine sang prot&eacute;ines de coagulation facteur V et facteur VIII, retinoschisin ne se lient pas aux phospholipides ou lipides r&eacute;tiniennes reconstitu&eacute;e dans les v&eacute;sicules unilamellaires ou immobilis&eacute; sur microplaques. Au lieu de cela, co-immunopr&eacute;cipitation &eacute;tudie avec base par spectrom&eacute;trie de masse prot&eacute;omique et &eacute;ponger occidental a montr&eacute; que retinoschisin est associ&eacute;e &agrave; un complexe compos&eacute; de Na/K ATPase (alpha3, b&ecirc;ta 2 isoformes) st&eacute;rile alpha et de prot&eacute;ine contenant du motif TIR SARM1. Double &eacute;tiquetage des &eacute;tudes pour la microscopie en immunofluorescence a confirm&eacute; la co-localisation de retinoschisin avec Na/K ATPase et SARM1 dans les photor&eacute;cepteurs et les cellules bipolaires du tissu de la r&eacute;tine. Nous concluons que retinoschisin se lie &agrave; la Na/K ATPase sur les photor&eacute;cepteurs et les cellules bipolaires. Cette interaction peut faire partie d&#39;un nouveau cellulaire SARM1 signalisation requis pour le fonctionnement de l&#39;organisation de cellules r&eacute;tiniennes et structure synaptique photor&eacute;cepteur-bipolaire.

Retinoschisin (RS1), la prot&eacute;ine cod&eacute;e par le g&egrave;ne li&eacute; &agrave; le X retinoschisis, est ancr&eacute;e &agrave; la surface des photor&eacute;cepteurs r&eacute;tiniens et les cellules bipolaires &agrave; travers ses interactions avec un complexe de Na/K ATPase-SARM1.

Retinoschisin oder RS1 ist ein jung-Dom&auml;ne-haltige Protein kodiert durch das Gen f&uuml;r X-chromosomale Retinoschisis (XLR), eine fr&uuml;h beginnende Makuladegeneration zeichnet sich durch eine Aufteilung der Netzhaut verantwortlich. Retinoschisin, ausgedr&uuml;ckt und abgesondert von Photorezeptoren und bipolaren Zellen als Homo-Octameric komplexes, ordnet der Oberfl&auml;che dieser Zellen, wo es dient dazu, die zellul&auml;re Organisation der Netzhaut und der Photorezeptor-bipolare synaptische Struktur beizubehalten. Um Einblick in die Rolle des Retinoschisin in retinalen Zelladh&auml;sion und die Pathogenese der XLR haben wir Membran Komponenten retinale auszugsweise untersucht, die mit Retinoschisin interagieren. Im Gegensatz zu den jung-Gebietsenthalten Blut Koagulation Proteine Faktor V und Faktor VIII Retinoschisin nicht an Phospholipiden oder retinale Lipide rekonstituiert in Unilamellar Bl&auml;schen oder auf Mikrotiterplatten immobilisiert binden. Stattdessen co-Immunopr&auml;zipitation studiert zusammen mit spektrometrischen-basierten Massen Proteomics und Westliches Beflecken zeigte, dass Retinoschisin ist verbunden mit einem Komplex bestehend aus Na/K-ATPase (alpha3, beta2-Isoformen) und der sterilen Alpha und TIR Motiv-haltige Protein SARM1. Doppelte Kennzeichnung Studien f&uuml;r die Immunfluoreszenz-Mikroskopie best&auml;tigt die Doppelhybridisierung der Retinoschisin mit Na/K-ATPase und SARM1 in Photorezeptoren und Bipolare Zellen der Netzhaut-Gewebe. Wir schlie&szlig;en, dass Retinoschisin Na/K-ATPase Photorezeptoren und bipolaren Zellen bindet. Diese Interaktion kann Teil einer neuartigen SARM1-vermittelte Zelle signalisieren Weg, die f&uuml;r die Aufrechterhaltung der Netzhaut Zelle Organisation und Photorezeptoren-bipolare synaptische Struktur erforderlich sein.

Retinoschisin (RS1), die durch das X-chromosomale Retinoschisis Gen kodierten Proteins ist die Oberfl&auml;che der Retina Photorezeptoren und bipolaren Zellen durch seine Interaktionen mit dem Na/K-ATPase-SARM1-Komplex verankert.

Retinoschisin o RS1 &egrave; una settore del discoidin dominio contenenti proteina codificata dal gene responsabile Retinoschisi legata al X (XLR), una precoce degenerazione maculare esordio caratterizzata da una scissione della retina. Retinoschisin, espresso e secreto da fotorecettori e cellule bipolari come un complesso di homo octameric, associa la superficie di queste cellule dove serve a mantenere l&#39;organizzazione cellulare della retina e la struttura sinaptica fotorecettore-bipolare. Per comprendere il ruolo di retinoschisin nell&#39;adesione delle cellule retiniche e la patogenesi della XLR, abbiamo studiato componenti della membrana in estratti della retina che interagire con retinoschisin. A differenza del settore del discoidin dominio contenenti sangue proteine della coagulazione fattore V e fattore VIII, retinoschisin non legano ai fosfolipidi o retiniche lipidi ricostituito in vescicole unilamellari o immobilizzata su piastre di microtitolazione. Invece, co-immunoprecipitazione studia insieme a spettrometria di massa basato proteomica e Western blotting ha mostrato che retinoschisin &egrave; associato a un complesso costituito da ATPasi Na/K (alpha3, beta2 isoforme) e l&#39;Alfa sterile e TIR motivo contenente proteine SARM1. Doppia etichettatura studi di microscopia di immunofluorescenza confermata la collocazione di retinoschisin con Na/K ATPasi e SARM1 in fotorecettori e cellule bipolari del tessuto della retina. Concludiamo che retinoschisin si lega a Na/K ATPasi sui fotorecettori e cellule bipolari. Questa interazione pu&ograve; essere parte di un romanzo SARM1-mediata cell signaling pathway necessaria per il mantenimento dell&#39;organizzazione delle cellule retiniche e struttura sinaptica fotorecettore-bipolare.

Retinoschisin (RS1), la proteina codificata dal gene Retinoschisi legata al X, &egrave; ancorata alla superficie dei fotorecettori retinici e cellule bipolari attraverso le sue interazioni con un complesso di Na/K ATPasi-SARM1.

Retinoschisin &#x307E;&#x305F;&#x306F; RS1 &#x8F2A;&#x90ED; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF; (XLRS)&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x5206;&#x5272;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x65E9;&#x671F;&#x767A;&#x75C7;&#x306E;&#x9EC4;&#x6591;&#x5909;&#x6027;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; discoidin &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x53CC;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8; octameric &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5206;&#x6CCC;&#x3055;&#x308C;&#x308B; Retinoschisin&#x3001;&#x3069;&#x3053;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x7DB2;&#x819C;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30DD;&#x30FC;&#x30E9;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7DB2;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; retinoschisin &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068; XLRS &#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;retinoschisin &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x306E;&#x819C;&#x6210;&#x5206;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;Discoidin &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x56FA;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x56E0;&#x5B50; V&#x3001;&#x7B2C; VIII &#x56E0;&#x5B50;&#x3001;retinoschisin &#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30BF;&#x30A4;&#x30BF;&#x30FC; &#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x7DB2;&#x819C;&#x8102;&#x8CEA;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;co &#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x5149;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x5171;&#x306B;&#x7814;&#x7A76;&#x3057;&#x3001;&#x897F;&#x90E8;&#x306B;&#x3057;&#x307F;&#x304C;&#x4ED8;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x305D;&#x306E; retinoschisin &#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; Na/K atp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; 3 &#x30FB;&#x3001;beta2 &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#xFF09; &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6EC5;&#x83CC;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; TIR &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; SARM1 &#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x3002;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB; immunofluorescence &#x306E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x691C;&#x67FB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5927;&#x8178;&#x83CC; Na/K atp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067; SARM1 &#x3068; retinoschisin &#x306E;&#x53CC;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x53CC;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; Na/K atp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x305D;&#x306E; retinoschisin &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x7D44;&#x7E54;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30DD;&#x30FC;&#x30E9;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7DAD;&#x6301;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x65B0;&#x898F; SARM1 &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Retinoschisin (RS1)&#x3001;X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x7DB2;&#x819C;&#x5206;&#x96E2;&#x75C7;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x53CC;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F; Na/K atp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;-SARM1 &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Retinoschisin &#xB610;&#xB294; RS1 X&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; retinoschisis (XLRS) &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; &#xBD84;&#xD560;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xCD08;&#xAE30; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xD669; &#xBC18; &#xBCC0;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xD638;&#xD654; discoidin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. Retinoschisin, &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xD638;&#xBAA8; octameric &#xBCF5;&#xD569;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xB1CC; &#xBC0F; &#xC591;&#xADF9; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84; &#xBE44; &#xC5B4;&#xB514; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC9C1;&#xC744; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xBC14;&#xC774; &#xD3F4;&#xB77C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. XLRS pathogenesis &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29;&#xC5D0; retinoschisin&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC5BB;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC; retinoschisin &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xB9C9; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Discoidin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD608;&#xC561; &#xC751;&#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC790; V &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; VIII, &#xB2EC;&#xB9AC; retinoschisin &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xB610;&#xB294; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC9C0;&#xC9C8; unilamellar vesicles&#xB85C; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xB610;&#xB294; microtiter &#xC811;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC77C; &#xC218;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC2E0;, co immunoprecipitation &#xB300;&#xB7C9; spectrometric &#xAE30;&#xBC18; proteomics&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; retinoschisin&#xB294; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC11C;&#xC591; blotting Na/K ATPase (alpha3, beta2 isoforms) &#xC0B4; &#xADE0; &#xC54C;&#xD30C;&#xC640; &#xC0AC;&#xACA9; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xB4E4;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; sarm1&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;. &#xB354;&#xBE14; &#xB77C;&#xBCA8; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; Na/K Atpase&#xC640; &#xB300;&#xB1CC;&#xC5D0; SARM1 retinoschisin co-localization &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC591;&#xADF9; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACB0;&#xB860; &#xADF8; retinoschisin Na/K ATPase &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130;&#xC640; &#xBC14;&#xC774; &#xD3F4;&#xB77C; &#xC140;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC18C;&#xC124; SARM1 &#xC911;&#xC7AC; &#xC140; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC9C1; &#xBC0F; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xBC14;&#xC774; &#xD3F4;&#xB77C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAD6C;&#xC870; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Retinoschisin (RS1) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; X&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; retinoschisis &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xD638;&#xD654; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130;&#xC640; Na/K ATPase SARM1 &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC591;&#xADF9; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC815;.

Retinoschisin o RS1 es una prote&iacute;na que contiene el dominio discoidin, codificada por el gen responsable de retinoschisis X-ligado (XLR), una degeneraci&oacute;n macular de aparici&oacute;n temprana caracterizada por una separaci&oacute;n de la retina. Retinoschisin, expres&oacute; y secretada de fotorreceptores y las c&eacute;lulas bipolares como un complejo de homo-oct&aacute;merico, se asocia con la superficie de estas c&eacute;lulas que sirve para mantener la organizaci&oacute;n celular de la retina y la estructura sin&aacute;ptica fotorreceptor-bipolar. Para profundizar en el papel de retinoschisin en la adhesi&oacute;n celular retiniana y la patogenesia de XLRS, hemos investigado componentes de la membrana en los extractos de la retinales que interact&uacute;an con retinoschisin. A diferencia de las discoidin dominio sangre coagulaci&oacute;n prote&iacute;nas que contienen Factor V y Factor VIII, retinoschisin no at&oacute; a los fosfol&iacute;pidos o l&iacute;pidos retinianos reconstituido en ves&iacute;culas unilaminar o inmovilizada en placas de microtitulaci&oacute;n. Por el contrario, co-inmunoprecipitaci&oacute;n estudia junto con base masa espectrometr&iacute;a prote&oacute;mica y Western Blot demostr&oacute; que retinoschisin se asocia a un complejo que consta de Na/K ATPasa (alpha3, isoformas de beta2) y alfa est&eacute;ril y prote&iacute;na que contiene motivos TIR SARM1. Doble etiquetado estudios para microscopia de la inmunofluorescencia confirm&oacute; la co-localizaci&oacute;n de retinoschisin con la ATPasa Na/K y SARM1 en los fotorreceptores y las c&eacute;lulas bipolares del tejido de la retina. Concluimos que retinoschisin se une a la ATPasa Na/K en el fotorreceptor y c&eacute;lulas bipolares. Esta interacci&oacute;n puede ser parte de una novela celular mediada por SARM1 requerida para el mantenimiento de la organizaci&oacute;n de c&eacute;lulas retinianas y estructura sin&aacute;ptica fotorreceptor-bipolar de la v&iacute;a de se&ntilde;alizaci&oacute;n.

Retinoschisin (RS1), la prote&iacute;na codificada por el gen retinoschisis X-ligado, est&aacute; anclado a la superficie del fotorreceptor retiniano y c&eacute;lulas bipolares a trav&eacute;s de sus interacciones con un complejo ATPasa Na/K-SARM1.

&#x7532;&#x7C7B;&#x6D41;&#x884C;&#x6027;&#x611F;&#x5192;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7531;&#x516B;&#x4E2A;&#x5355;&#x94FE; RNA &#x5206;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7ED3;&#x6784;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x6838;&#x7CD6;&#x4E0D;&#x540C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6838;&#x86CB;&#x767D; (vRNP) &#x590D;&#x6742;&#x5BE1;&#x805A;&#x6838;&#x5FC3;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;vRNPs &#x662F;&#x7684;&#x5B9E;&#x4F53;&#x8D1F;&#x8D23;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x6D41;&#x611F;&#x75C5;&#x6BD2; Rna &#x5728;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6838;&#x6B66;&#x5668;&#x7784;&#x51C6;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684; vRNPs &#x662F;&#x611F;&#x67D3;&#x548C;&#x6D41;&#x611F; A.&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x6B65;&#x9AA4;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x6240;&#x793A;&#x6838;&#x8FDB;&#x53E3;&#x6765;&#x81EA;&#x7532;&#x578B;&#x6D41;&#x611F; virions vRNPs &#x72EC;&#x7ACB;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5BF9;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6838;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5E8F;&#x5217; &#xFF08;&#x5C3C;&#x6CCA;&#x5C14;&#x751F;&#x6D3B;&#x6C34;&#x5E73;&#x8C03;&#x67E5;&#xFF09;&#xFF1A; NLS1&#xFF0C;&#x8DE8;&#x8D8A; N &#x603B;&#x7AD9;&#x548C; NLS2&#xFF0C;&#x5728;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6B8B;&#x7559; 198-216 1 13 &#x6B8B;&#x7559;&#x4E0E; NLS1 &#x6B63;&#x5728;&#x4E3B;&#x8981;&#x8C03;&#x89E3;&#x4EBA;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x7406;&#x89E3; NLS1 &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x548C; NLS2 &#x7684;&#x8C03;&#x89E3;&#x7684;&#x6D41;&#x611F; vRNPs &#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x57FA;&#x7840;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x70B9;&#x6742;&#x4EA4;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x80F6;&#x4F53;&#x91D1;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; vRNPs &#x5728;&#x5176;&#x672C;&#x673A;&#x72B6;&#x6001;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x9762;&#x66B4;&#x9732;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C3C;&#x6CCA;&#x5C14;&#x751F;&#x6D3B;&#x6C34;&#x5E73;&#x8C03;&#x67E5;&#x5173;&#x4E8E; vRNPs &#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; NLS1 &#x662F;&#x66F4;&#x5BB9;&#x6613;&#x5411;&#x5176;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E0E; NLS2 &#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x7535;&#x955C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x514D;&#x75AB;&#x80F6;&#x4F53;&#x91D1;&#x6807;&#x8BB0; vRNPs &#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E; 71%&#x7684; vRNPs &#x6807;&#x6709;&#x5404;&#x5730; vRNP NLS1 &#x4E3A;&#x4E00;&#x81F3;&#x516D;&#x91D1;&#x7C92;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5C11;&#x4E8E; 10%&#x7684; vRNPs &#x88AB;&#x6807;&#x6709;&#x6297;&#x4F53; NLS2&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x4E0E;&#x4F4D;&#x4E8E; vRNP &#x7684;&#x4E00;&#x7AEF;&#x5355;&#x91D1;&#x9897;&#x7C92;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5B9A;&#x671F;&#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x5468;&#x671F;&#x6709;&#x4EBA;&#x7528;&#x91D1;&#x7C92;&#x5B50;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A; NLS1&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7ECF;&#x5E38;&#x87BA;&#x65CB;&#x6784;&#x8C61;&#x76EE;&#x524D;&#x5728; vRNPs &#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x5960;&#x5B9A;&#x4E86;&#x57FA;&#x7840;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684; NLS1 &#x589E;&#x5F3A;&#x80FD;&#x529B;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6D41;&#x611F; vRNPs &#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x548C;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6D41;&#x611F; A virions vRNP &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;

&#x5173;&#x4E8E;&#x6D41;&#x611F; A &#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x6838;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

The influenza A genome consists of eight single-stranded RNA molecules, each associated with an oligomeric core of the structural protein, nucleoprotein, to form a distinct viral ribonucleoprotein (vRNP) complex. vRNPs are the entities responsible for the transcription and replication of the influenza viral RNAs in the nuclei of host cells. Thus, nuclear targeting and localization of the vRNPs are a critical step in the infection and life cycle of influenza A. We have recently shown that the nuclear import of vRNPs derived from influenza A virions is independently mediated by two nuclear localization sequences (NLSs) on nucleoprotein: NLS1, spanning residues 1-13 at the N terminus, and NLS2, spanning residues 198-216 in the middle of the protein, with NLS1 being the principal mediator. To better understand the structural basis for the differences in the ability of NLS1 and that of NLS2 to mediate nuclear import of influenza vRNPs, we analyzed the levels of surface exposure of these NLSs on vRNPs by both dot blotting and immunogold labeling of vRNPs in their native state. We found that NLS1 is much more accessible to its corresponding antibody compared with NLS2. Electron microscopy of immunogold-labeled vRNPs further showed that 71% of vRNPs were labeled with one to six gold particles located throughout the vRNP for NLS1. In contrast, less than 10% of vRNPs were labeled with an antibody against NLS2, usually with a single gold particle located at one end of the vRNP. In addition, a regular periodicity of repeat was observed with gold particles labeling for NLS1, indicative of a highly regular helical conformation present in the vRNPs. These findings provide the underlying structural basis for the enhanced ability of NLS1 in mediating nuclear import of influenza vRNPs and add to our understanding of the ultrastructural features of vRNP complexes derived from influenza A virions.

Ultrastructural analysis of the nuclear localization sequences on influenza A ribonucleoprotein complexes.

Le g&eacute;nome de l&#39;influenza de type A se compose de huit mol&eacute;cules d&#39;ARN simple brin, chacun associ&eacute; &agrave; un noyau d&#39;oligom&egrave;re de la prot&eacute;ine structurale, nucl&eacute;oprot&eacute;ine, pour former un complexe de ribonucl&eacute;oprot&eacute;ique virale distincte (vRNP). vRNPs sont les entit&eacute;s responsables de la transcription et la r&eacute;plication des virus d&#39;influenza l&#39;ARN viral dans le noyau des cellules de l&#39;h&ocirc;te. Ainsi, le ciblage nucl&eacute;aire et la localisation de la vRNPs sont une &eacute;tape cruciale dans l&#39;infection et cycle de vie de la grippe A. Nous avons r&eacute;cemment d&eacute;montr&eacute; que l&#39;importation nucl&eacute;aire de vRNPs d&eacute;riv&eacute; de virions de la grippe A est ind&eacute;pendamment m&eacute;di&eacute;e par deux s&eacute;quences de localisation nucl&eacute;aire (sln) sur la nucl&eacute;oprot&eacute;ine : NLS1, s&#39;&eacute;tendant sur 1-13 les r&eacute;sidus &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale et NLS2, s&#39;&eacute;tendant sur des r&eacute;sidus 198-216 dans le milieu de la prot&eacute;ine, NLS1 &eacute;tant le principal m&eacute;diateur. Pour mieux comprendre la base structurelle des diff&eacute;rences dans la capacit&eacute; de NLS1 et celle de NLS2 de m&eacute;diation import nucl&eacute;aire de grippe vRNPs, nous avons analys&eacute; les niveaux d&#39;exposition de surface de ces sln sur vRNPs par dot-blot et immunomarquage des vRNPs dans leur &eacute;tat natif. Nous avons trouv&eacute; que la NLS1 est beaucoup plus accessible &agrave; ses anticorps correspondant par rapport aux NLS2. Plus loin, microscopie &eacute;lectronique de vRNPs immunogold marqu&eacute;e a montr&eacute; que 71 % des vRNPs ont &eacute;t&eacute; marqu&eacute;es avec une &agrave; six des particules d&#39;or situ&eacute;s tout au long de la vRNP pour NLS1. En revanche, moins de 10 % des vRNPs ont &eacute;t&eacute; marqu&eacute;es avec un anticorps contre NLS2, g&eacute;n&eacute;ralement avec une seule particule d&#39;or situ&eacute;e &agrave; une extr&eacute;mit&eacute; de la vRNP. En outre, une p&eacute;riodicit&eacute; r&eacute;guli&egrave;re de r&eacute;p&eacute;tition a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e avec de l&#39;or, &eacute;tiquetage pour NLS1, indicatives d&#39;une conformation h&eacute;lico&iuml;dale tr&egrave;s r&eacute;guli&egrave;re des particules pr&eacute;sentent dans le vRNPs. Ces r&eacute;sultats fournissent la base structurelle sous-jacente pour la capacit&eacute; accrue de NLS1 dans la m&eacute;diation import nucl&eacute;aire de grippe vRNPs et ajouter &agrave; la compr&eacute;hension des caract&eacute;ristiques ultrastructurales des complexes vRNP, d&eacute;riv&eacute;s de virions de la grippe A.

Analyses ultrastructurales des s&eacute;quences localisation nucl&eacute;aire sur des complexes ribonucl&eacute;oprot&eacute;iques de grippe A.

Das Influenza-A-Genom besteht aus acht einzelstr&auml;ngige RNA-Molek&uuml;le, jeweils im Zusammenhang mit einem Oligomere Kern des strukturellen Proteins, Nukleoproteine, um eine unterschiedliche virale Ribonucleoprotein (vRNP) komplexe zu bilden. vRNPs sind die Entit&auml;ten, die verantwortlich f&uuml;r die Transkription und Replikation der Influenza viralen RNAs in den Kernen der Wirtszellen. Nukleare targeting und Lokalisierung von der vRNPs sind daher ein wichtiger Schritt bei der Infektion und den Lebenszyklus von Influenza a Wir haben k&uuml;rzlich gezeigt, dass die nukleare Einfuhr von vRNPs abgeleitet von Influenza-A-Virionen unabh&auml;ngig von zwei nukleare Lokalisierung Sequenzen (NLSs) auf Nukleoprotein vermittelt wird: NLS1, &uuml;ber R&uuml;ckst&auml;nde 1-13 an der N-Terminus und NLS2, &uuml;ber R&uuml;ckst&auml;nde 198-216 in der Mitte das Protein mit NLS1 wird der wichtigste Mediator. Um besser zu verstehen, die strukturelle Grundlage f&uuml;r die Unterschiede in der F&auml;higkeit des NLS1 und der NLS2, nukleare Import von Grippe-vRNPs zu vermitteln, analysiert wir das Ausma&szlig; der Oberfl&auml;che Exposition von diesen NLSs auf vRNPs von sowohl Punkt zu beflecken und Immunogold Kennzeichnung von vRNPs in ihrem nativen Zustand. Wir fanden, dass NLS1 viel mehr Zugriff auf die entsprechenden Antik&ouml;rper im Vergleich zu NLS2. Elektronenmikroskopie von Immunogold-markierten vRNPs zeigten weiter, dass 71 % der vRNPs mit ein bis sechs Goldpartikeln befindet sich in der vRNP f&uuml;r NLS1 beschriftet wurden. Im Gegensatz dazu wurden weniger als 10 % der vRNPs mit einen Antik&ouml;rper gegen NLS2, in der Regel mit einem einzigen gold Viruspartikel befindet sich an einem Ende die vRNP beschriftet. Dar&uuml;ber hinaus wurde eine regelm&auml;&szlig;ige Periodizit&auml;t Wiederholung mit Gold beobachtet Teilchen labeling f&uuml;r NLS1, bezeichnend f&uuml;r eine sehr regelm&auml;&szlig;ige spiralf&ouml;rmige Konformation in die vRNPs zu pr&auml;sentieren. Diese Erkenntnisse bieten die zugrunde liegende strukturelle Grundlage f&uuml;r die verbesserte F&auml;higkeit des NLS1 bei der Vermittlung von nuklearen Import von Grippe-vRNPs und f&uuml;gen Sie zu unserem Verst&auml;ndnis der Ultrastrukturelle Merkmale der vRNP-komplexe, die von Influenza-A-Virionen abgeleitet.

Ultrastrukturelle Analyse der nuklearen Lokalisierung Sequenzen auf Influenza A-Gebiets-komplexe.

Il genoma dell&#39;influenza A &egrave; costituito da otto molecole di single-stranded RNA, ognuno associato ad un nucleo oligomerica della proteina strutturale, nucleoproteine, per formare una distinta ribonucleoproteina virale (vRNP) complessa. vRNPs sono gli enti responsabili per la trascrizione e la replicazione dell&#39;influenza virale RNAs nei nuclei delle cellule ospiti. Cos&igrave;, targeting nucleare e localizzazione del vRNPs sono un passaggio fondamentale nell&#39;infezione e ciclo di vita dell&#39;influenza A. Abbiamo recentemente dimostrato che l&#39;importazione nucleare di vRNPs derivati da virioni dell&#39;influenza A in modo indipendente &egrave; mediata da due sequenze di localizzazione nucleare (NLSs) su nucleoproteina: NLS1, spanning residui 1-13 presso il capolinea di N e NLS2, che abbracciano residui 198-216 nel bel mezzo della proteina, con NLS1 essendo il principale mediatore. Per comprendere meglio le basi strutturali delle differenze nella capacit&agrave; di NLS1 e quella di NLS2 a mediare importazione nucleare di influenza vRNPs, abbiamo analizzato i livelli di esposizione superficiale di questi NLSs su vRNPs da macchiare del puntino sia immunogold etichettatura di vRNPs nel loro stato nativo. Abbiamo trovato che NLS1 &egrave; molto pi&ugrave; accessibile al suo corrispondente anticorpo rispetto al NLS2. Microscopia elettronica di vRNPs con etichetta immunogold ha dimostrato ulteriormente che 71% di vRNPs sono stati etichettati con uno di sei particelle d&#39;oro che si trova in tutta la vRNP per NLS1. In contrasto, meno del 10% di vRNPs sono stato etichettato con un anticorpo contro NLS2, solitamente con una singola particella d&#39;oro che si trova ad una estremit&agrave; della vRNP. Inoltre, &egrave; stata osservata una periodicit&agrave; regolare di ripetizione con particelle di etichettatura per NLS1, indicativo di una conformazione elicoidale altamente regolare presenti nella vRNPs in oro. Questi risultati forniscono la base strutturale per la maggiore capacit&agrave; di NLS1 nella mediazione di importazione nucleare di influenza vRNPs e aggiungere alla nostra comprensione delle caratteristiche ultrastrutturali dei complessi vRNP derivati da virioni di influenza A.

Analisi ultrastrutturale delle sequenze di localizzazione nucleare sui complessi ribonucleoproteina di influenza A.

&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; 8 &#x4E00;&#x672C;&#x9396; RNA &#x5206;&#x5B50;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5404;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30EA;&#x30DC; &#xFF08;vRNP &#x8907;&#x5408;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;vRNPs &#x306F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x62C5;&#x5F53;&#x306E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x5185;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; Rna&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6838;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;vRNPs &#x306E;&#x4F1D;&#x67D3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x578B;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F; vRNPs &#x306E;&#x6838;&#x8F38;&#x5165;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4E0A;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6838;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; (NLSs) &#x5A92;&#x4ECB;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#xFF1A; NLS1&#x3001;&#x6B8B;&#x7559; 198 216 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;&#x771F;&#x3093;&#x4E2D;&#x306B;&#x307E;&#x305F;&#x304C;&#x308B;&#x6B8B;&#x6E23; 1 13 N &#x672B;&#x7AEF;&#x3068; NLS2 &#x306B;&#x307E;&#x305F;&#x304C;&#x308B;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B7;&#x30D1;&#x30EB;&#x306E;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3092; NLS1 &#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;NLS1 &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3068; NLS2 &#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; vRNPs &#x306E;&#x6838;&#x3078;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3057;&#x307F;&#x304C;&#x4ED8;&#x304F;&#x3068;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3067; vRNPs &#x306E;&#x6A19;&#x8B58;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; NLSs vRNPs &#x4E0A;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x9732;&#x51FA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;NLS1 &#x304C;&#x3088;&#x308A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D6;&#x30EB;&#x306B; NLS2 &#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30B4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4ED8;&#x3044;&#x305F; vRNPs &#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B; vRNPs &#x306E; 71 &#xFF05; &#x5168;&#x4F53; vRNP &#x306E; NLS1 &#x306B;&#x3042;&#x308B; 1 &#xFF5E; 6 &#x91D1;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;vRNPs &#x306E; 10 &#xFF05; &#x672A;&#x6E80;&#x3067; NLS2&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x3068;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;vRNP &#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x7AEF;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x91D1;&#x7C92;&#x5B50;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x306E;&#x5B9A;&#x671F;&#x7684;&#x5468;&#x671F;&#x6027;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E; NLS1 &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x898F;&#x5247;&#x7684;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051;&#x3067; vRNPs &#x63D0;&#x793A;&#x30B4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3068;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6240;&#x898B;&#x306F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; vRNPs &#x306E;&#x6838;&#x3078;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x306B;&#x3001;NLS1 &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3001;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F; vRNP &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6838;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3002;

8 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A &#xAC8C;&#xB188;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4;, &#xAC01; &#xAD6C;&#xC870; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; ribonucleoprotein (vRNP) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; nucleoprotein&#xC758; oligomeric &#xCF54;&#xC5B4;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;. vRNPs &#xC804;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xC874;&#xC7AC;&#xAC00; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNAs &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD575;&#xC5D0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD575;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; Vrnps&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB294; &#xAC10;&#xC5FC;&#xACFC; &#xB3C5;&#xAC10; &#xB300;&#xB2F5;&#xC758; &#xC218;&#xBA85; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A virions&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; Vrnps&#xC758; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xB450; &#xD575; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; (NLSs) nucleoprotein&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC911;&#xC7AC; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xB294;: &#xC2A4;&#xD328;&#xB2DD; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 198-216 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC911;&#xAC04;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCE5C; N &#xB9D0;&#xB2E8; &#xBC0F; NLS2, &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 1-13 NLS1 NLS1 &#xC8FC; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xAC00; &#xB418;. Nls1&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; &#xBC0F; nls2&#xC758; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; Vrnps&#xC758; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB3C4;&#xD2B8; blotting&#xC640; immunogold &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xAD6D;&#xAC00;&#xC5D0;&#xC11C; Vrnps&#xC758; &#xB77C;&#xBCA8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Vrnps&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Nlss&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xB178;&#xCD9C;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; NLS1 nls2&#xC640; &#xBE44;&#xAD50;&#xB294; &#xD574;&#xB2F9; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xBC1C;&#xACAC;. Immunogold &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; Vrnps&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC740; &#xCD94;&#xAC00; 71 %vrnps nls1&#xC5D0;&#xB294; Vrnp&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC788;&#xB294; 1-6 &#xAE08; &#xC785;&#xC790;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, Vrnps&#xC758; 10% &#xBBF8;&#xB9CC; &#xD588;&#xB2E4; &#xD45C;&#xC2DC; NLS2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB85C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xACE8;&#xB4DC; &#xC785;&#xC790;&#xB294; Vrnp&#xC758; &#xD55C;&#xCABD; &#xB05D;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xACE8;&#xB4DC; &#xB77C;&#xBCA8; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; nls1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC785;&#xC790;&#xB294; Vrnps&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC7AC; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18; &#xC8FC;&#xAE30; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; Vrnps&#xC758; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; nls1&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A virions&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; vRNP &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; ultrastructural &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00;.

&#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A ribonucleoprotein &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xD575; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; ultrastructural &#xBD84;&#xC11D;.

El genoma de la influenza A se compone de ocho mol&eacute;culas de ARN monocatenario, cada uno asociado a un n&uacute;cleo oligom&eacute;rico de la prote&iacute;na estructural, nucleoprote&iacute;na, para formar una ribonucleoprote&iacute;na viral distinta (vRNP) complejo. vRNPs son las entidades encargadas de la transcripci&oacute;n y replicaci&oacute;n de influenza RNAs virales en los n&uacute;cleos de las c&eacute;lulas del hu&eacute;sped. As&iacute;, la orientaci&oacute;n nuclear y localizaci&oacute;n de la vRNPs son un paso cr&iacute;tico en la infecci&oacute;n y ciclo de vida de la gripe A. Recientemente hemos demostrado que la importaci&oacute;n nuclear de vRNPs derivados de viriones de la gripe A independiente est&aacute; mediada por dos secuencias de localizaci&oacute;n nuclear (NLSs) en nucleoprote&iacute;nas: NLS1, que abarca de residuos 1-13 en el extremo N terminal y NLS2, que abarca los residuos 198-216 en el medio de la prote&iacute;na, con NLS1 siendo el mediador principal. Para comprender mejor la base estructural para las diferencias en la capacidad de NLS1 y de NLS2 para mediar la importaci&oacute;n nuclear de vRNPs de la gripe, se analizaron los niveles de exposici&oacute;n superficial de estos NLSs en vRNPs dot Blot y el etiquetado de immunogold de vRNPs en su estado natal. Encontramos que el NLS1 es mucho m&aacute;s accesible a su correspondiente anticuerpo en comparaci&oacute;n con NLS2. La microscopia electr&oacute;nica de vRNPs immunogold-etiquetado adicional demostr&oacute; que 71% de vRNPs fueron etiquetado con part&iacute;culas de oro de uno a seis ubicadas a lo largo de la vRNP para NLS1. En contraste, menos del 10% de vRNPs fueron etiquetado con un anticuerpo contra NLS2, generalmente con una sola part&iacute;cula de oro situada en un extremo de la vRNP. Adem&aacute;s, se observ&oacute; una periodicidad regular de repetici&oacute;n con etiquetado para NLS1, indicativo de una conformaci&oacute;n helicoidal altamente regular de part&iacute;culas presentan en el vRNPs de oro. Estos resultados proporcionan la base estructural subyacente para la mayor capacidad de NLS1 en la mediaci&oacute;n de importaci&oacute;n nuclear de gripe vRNPs y a&ntilde;adir a nuestra comprensi&oacute;n de las caracter&iacute;sticas ultraestructurales de vRNP complejos derivados de viriones de gripe A.

An&aacute;lisis ultraestructural de las secuencias de localizaci&oacute;n nuclear en complejos de Ribonucleoprote&iacute;na gripe A.

&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; retinoschisin&#xFF0C;&#x662F;&#x80DE;&#x5916;&#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4E00;&#x76F4;&#x5728;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EF4;&#x6301;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7A81;&#x89E6;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x8D1F;&#x8D23; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5288;&#x88C2;&#xFF0C;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C42;&#x548C;&#x89C6;&#x529B;&#x635F;&#x5BB3;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x7406;&#x89E3;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x5728;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x548C; X-&#x8FDE;&#x9501;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x8FC7;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x53CA;&#x7A81;&#x53D8;&#x578B;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x652F;&#x6301;&#x5404;&#x79CD;&#x78B3;&#x6C34;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x9AD8;&#x6548;&#x5730;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x548C;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x4E73;&#x7CD6;-&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x3001; N-acetylgalactosamine-&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x3001; N-&#x4E59;&#x9170;&#x6C28;&#x57FA;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;-&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x3001; &#x7518;&#x9732;&#x7CD6;-&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x6216;&#x809D;&#x7D20;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x3002;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;C59S/C223S &#x548C; C59S/C223S/C40S&#xFF09;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x5F62;&#x6210;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x94FE;&#x63A5; octamer &#x5C55;&#x793A;&#x5C0F;&#x5982;&#x679C;&#x4EFB;&#x4F55;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x3002;&#x75BE;&#x75C5;&#x5BFC;&#x81F4; R141H &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5728;&#x6C34;&#x5E73;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF0C;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x800C; R141S &#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6C34;&#x5E73;&#x663E;&#x8457;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x5B75;&#x5316;&#x4E0E;&#x5F02;&#x4E19;&#x57FA; &beta;-d-1-thiogalactopyranoside &#xFF08;IPTG&#xFF09; &#x7684;&#x6D41;&#x79BB;&#x5931;&#x6240;&#x3002;&#x6B64;&#x5C5E;&#x6027;&#x7528;&#x4F5C;&#x57FA;&#x7840;&#xFF0C;&#x5236;&#x5B9A;&#x9AD8;&#x6548;&#x5206;&#x79BB;&#x7EAF;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x548C;&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x4EB2;&#x548C;&#x5C42;&#x6790;&#x7528;&#x4E8E;&#x51C0;&#x5316;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x4ECE;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x5316; Sf21 &#x6606;&#x866B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x5206;&#x6CCC;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x5A92;&#x4F53;&#x3002;&#x6B64;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x79BB;&#x7EAF;&#x5316;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E94;&#x5BF9;&#x5F88;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x5982;&#x679C;&#x5C06; RS1 &#x7684;&#x9694;&#x79BB;&#xFF0C;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x8868;&#x5F81;&#x53CA;&#x5206;&#x79BB;&#x7EAF;&#x5316;&#x76D8;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x86CB;&#x767D; retinoschisin &#x548C;&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;

RS1, also known as retinoschisin, is an extracellular discoidin domain-containing protein that has been implicated in maintaining the cellular organization and synaptic structure of the vertebrate retina. Mutations in the gene encoding RS1 are responsible for X-linked retinoschisis, a retinal degenerative disease characterized by the splitting of the retinal cell layers and visual impairment. To better understand the role of RS1 in retinal cell biology and X-linked retinoschisis, we have studied the interaction of wild-type and mutant RS1 with various carbohydrates coupled to agarose supports. RS1 bound efficiently to galactose-agarose and to a lesser extent lactose-agarose, but not agarose, N-acetylgalactosamine-agarose, N-acetylglucosamine-agarose, mannose-agarose, or heparin-agarose. RS1 cysteine mutants (C59S/C223S and C59S/C223S/C40S) which prevent disulfide-linked octamer formation exhibited little if any binding to galactose-agarose. The disease-causing R141H mutant bound galactose-agarose at levels similar to that of wild-type RS1, whereas the R141S mutant resulted in a marked reduction in the level of galactose-agarose binding. RS1 bound to galactose-agarose could be effectively displaced by incubation with isopropyl beta- d-1-thiogalactopyranoside (IPTG). This property was used as a basis to develop an efficient purification procedure. Anion exchange and galactose affinity chromatography was used to purify RS1 from the culture media of stably transformed Sf21 insect cells that express and secrete RS1. This cell expression and protein purification method should prove useful in the isolation of RS1 for detailed structure-function studies.

Characterization and purification of the discoidin domain-containing protein retinoschisin and its interaction with galactose.

RS1, &eacute;galement connu sous le nom de retinoschisin, est une prot&eacute;ine contenant du domaine extracellulaire discoidin a &eacute;t&eacute; impliqu&eacute;e dans le maintien de l&#39;organisation cellulaire et structure synaptique de la r&eacute;tine des vert&eacute;br&eacute;s. Des mutations du g&egrave;ne codant la RS1 sont responsables de retinoschisis li&eacute;e &agrave; le X, une maladie d&eacute;g&eacute;n&eacute;rative r&eacute;tinienne, caract&eacute;ris&eacute;e par la s&eacute;paration des couches de cellules r&eacute;tiniennes et d&eacute;ficience visuelle. Pour mieux comprendre le r&ocirc;le de RS1 dans la biologie de cellules r&eacute;tiniennes et retinoschisis li&eacute;e &agrave; le X, nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;interaction de type sauvage et mutantes RS1 avec divers glucides coupl&eacute;s aux supports d&#39;agarose. RS1 lie efficacement aux galactose-agarose et &agrave; une moindre mesure au lactose-agarose, mais pas d&#39;agarose, N-ac&eacute;tylgalactosamine-agarose, N-ac&eacute;tylglucosamine-agarose, mannose-agarose ou h&eacute;parine-agarose. Mutants de cyst&eacute;ine RS1 (C59S/C223S et C59S/C223S/C40S) qui emp&ecirc;chent la formation li&eacute;e disulfure octam&egrave;re montrent peu ou pas de liaison au galactose-agarose. Le mutant R141H pathog&egrave;nes li&eacute; galactose-agarose &agrave; des niveaux comparables &agrave; celle du type sauvage RS1, tandis que le mutant R141S a entra&icirc;n&eacute; une r&eacute;duction marqu&eacute;e du niveau de la liaison de la galactose-agarose. RS1 li&eacute; au galactose-agarose pourrait &ecirc;tre efficacement &eacute;cart&eacute;e par incubation avec isopropylique b&ecirc;ta-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG). Cette propri&eacute;t&eacute; a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e comme base pour mettre en place une proc&eacute;dure de purification efficace. Chromatographie d&#39;affinit&eacute; de galactose et de l&#39;&eacute;change anionique servait &agrave; purifier RS1 &agrave; partir du support de culture de cellules d&#39;insectes Sf21 TRANSFORMEES qui expriment et s&eacute;cr&egrave;tent RS1. Cette m&eacute;thode de purification expression et prot&eacute;ine cellulaire devrait &ecirc;tre utile pour l&#39;isolement des RS1 pour &eacute;tudes structure-fonction d&eacute;taill&eacute;e.

Caract&eacute;risation et purification de la discoidin retinoschisin de prot&eacute;ine contenant du domaine et de son interaction avec le galactose.

RS1, auch bekannt als Retinoschisin, ist eine extrazellul&auml;re jung-Gebietsenthalten Protein, das verwickelt war, hat bei der Aufrechterhaltung der zellul&auml;re Organisation und synaptische Struktur der Wirbeltiere Netzhaut. X-chromosomale Retinoschisis, eine retinale degenerative Erkrankung zeichnet sich durch die Aufspaltung der Netzhaut Zellschichten und Sehst&ouml;rungen sind Mutationen im Gen f&uuml;r RS1. Zum besseren Verst&auml;ndnis die Rolle der RS1 in retinalen Zellbiologie und X-chromosomale Retinoschisis haben wir das Zusammenspiel der Wildtyp und Mutanten RS1 mit verschiedenen Kohlenhydraten gekoppelt mit Agarose unterst&uuml;tzt untersucht. RS1 gebunden effizient Galaktose-Agarose und einem geringerem Umfang Laktose-Agarose, aber nicht Agarose, N-Acetylgalactosamin-Agarose, N-Acetylglucosamin-Agarose, Mannose-Agarose oder Heparin-Agarose. RS1 Cystein Mutanten (C59S/C223S und C59S/C223S/C40S) die Disulfid-chromosomale Octamer-Bildung zu verhindern stellte wenig bis gar Bindung an Galaktose-Agarose. Die krankheitserregenden R141H Mutant gebunden Galaktose-Agarose auf Ebenen des Wildtyp RS1, vergleichbar, w&auml;hrend der R141S-Mutant eine deutliche Absenkung der Galaktose-Agarose-Bindung gef&uuml;hrt. RS1 an Galaktose-Agarose gebunden konnte effektiv durch Inkubation mit Isopropyl Beta-d-thiogalactopyranosid (IPTG) verdr&auml;ngt werden. Diese Eigenschaft wurde als Grundlage verwendet, um eine effiziente Reinigung-Verfahren zu entwickeln. Anionen-Austausch und Galaktose-Affinit&auml;ts-Chromatographie wurde zur RS1 der Kultur-Medien der stabil transformierten Sf21 Insektenzellen zu reinigen, die schnelles und sezernieren RS1. Diese Zelle Ausdruck und Protein-Reinigung-Methode sollte in die Isolation der RS1 f&uuml;r detaillierte Struktur-Funktions-Studien n&uuml;tzlich erweisen.

Charakterisierung und Reinigung von der jung-Gebietsenthalten Protein-Retinoschisin und seine Wechselwirkung mit Galaktose.

RS1, noto anche come retinoschisin, &egrave; una proteina extracellulare di settore del discoidin contenenti dominio che &egrave; stata implicata nel mantenimento della organizzazione cellulare e struttura sinaptica della retina Vertebrata. Mutazioni nel gene che codifica RS1 sono responsabili di Retinoschisi legata al X, una malattia degenerativa della retina caratterizzata da spaccare gli strati cellulari della retina e minorazione visiva. Per comprendere meglio il ruolo di RS1 nella biologia delle cellule retiniche e Retinoschisi legata al X, abbiamo studiato l&#39;interazione di wild-type e mutanti RS1 con vari carboidrati accoppiati ai supporti dell&#39;agarosi. RS1 efficiente associato a galattosio-agarosio e a un minore misura lattosio-agarosio, ma non dell&#39;agarosi, N-acetilgalattosamina-agarosio, N-acetilglucosamina-agarosio, mannosio-agarosio o eparina-agarosio. RS1 cisteina mutanti (C59S/C223S e C59S/C223S/C40S) che impediscono la formazione di disolfuro collegato octamer esposto poco se qualsiasi associazione di galattosio-agarosi. Il mutante R141H malattia-causanti associato galattosio-agarosio a livelli simili a quella del selvaggio-tipo RS1, considerando che il mutante R141S portato a una marcata riduzione del livello di associazione galattosio-agarosi. RS1 associato a galattosio-agarosi potrebbe essere efficacemente sfollati da incubazione con isopropilico beta-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG). Questa propriet&agrave; &egrave; stata utilizzata come base per sviluppare una procedura di purificazione efficiente. Cromatografia di affinit&agrave; di galattosio e di scambio anionico &egrave; stata utilizzata per purificare RS1 da media cultura di stabile trasformate Sf21 insetto cellule che esprimono e secernono RS1. Questo metodo di purificazione cellulare della proteina e di espressione, deve risultare utile nell&#39;isolamento di RS1 per studi dettagliati di struttura-funzione.

Caratterizzazione e purificazione del settore del discoidin dominio-contenente della proteina retinoschisin e la sua interazione con galattosio.

RS1 &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066; retinoschisin &#x7D30;&#x80DE;&#x7D44;&#x7E54;&#x3068;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7DAD;&#x6301;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916; discoidin &#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RS1 &#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x7DB2;&#x819C;&#x5206;&#x96E2;&#x75C7;&#x3001;&#x8996;&#x899A;&#x969C;&#x5BB3;&#x3068;&#x7DB2;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C64;&#x306E;&#x5206;&#x5272;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x7DB2;&#x819C;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7DB2;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073; X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x7DB2;&#x819C;&#x5206;&#x96E2;&#x75C7;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; RS1 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x3068;&#x7D50;&#x5408; agarose &#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x70AD;&#x6C34;&#x5316;&#x7269; RS1 &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x578B;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RS1 &#x306F;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9; agarose &#x3068;&#x3092;&#x4F4E;&#x3044;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E73;&#x7CD6;-&#x30A2;&#x30AC;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x3044; agarose&#x3001;N &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30B5;&#x30DF;&#x30F3; agarose&#x3001;N &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B5;&#x30DF;&#x30F3; agarose&#x3001;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9; agarose &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3; agarose &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3002;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9; 8 &#x91CF;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x9632;&#x3050; RS1 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x5909;&#x7570; &#xFF08;C59S/C223S &#x30FB; C59S/C223S/C40S&#xFF09; &#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9; agarose &#x3092; &#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;R141S &#x5909;&#x7570;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9; agarose &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; R141H &#x306E;&#x75C5;&#x6C17;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; RS1 &#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9; agarose &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;RS1 &#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;-&#x30A2;&#x30AC;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EB; &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;-d-1-thiogalactopyranoside &#xFF08;IPTG&#xFF09; &#x3068;&#x5B75;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x907F;&#x96E3;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x7CBE;&#x88FD;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3068;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB; &#x30C6;&#x30A3;&#x30FC; &#x30FB; &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306F; RS1 &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;RS1 &#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x3059;&#x308B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5909;&#x5F62;&#x306E; Sf21 &#x6606;&#x866B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x57FA;&#x304B;&#x3089;&#x6D44;&#x5316;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#x6CD5;&#x306F; RS1 &#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x7D76;&#x7E01;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x8A3C;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Discoidin &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; retinoschisin &#x3068;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3068;&#x6027;&#x8CEA;

RS1, &#xC77C;&#xCEEC;&#xC5B4; retinoschisin&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; discoidin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC9C1;&#xACFC; &#xCC99;&#xCD94; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAD6C;&#xC870; &#xC720;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. RS1 &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; X&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; retinoschisis, &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE35;&#xACFC; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC758; &#xBD84;&#xD560;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xBC0F; X&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; retinoschisis&#xC5D0; rs1&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB354; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; agarose &#xC9C0;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD0C4;&#xC218;&#xD654;&#xBB3C;&#xACFC; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xBC0F; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; rs1&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. RS1 galactose agarose &#xBC0F; &#xD55C; &#xB35C; &#xC815;&#xB3C4; &#xC720; &#xB2F9;-agarose, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; agarose, N acetylgalactosamine agarose, N acetylglucosamine agarose, &#xC2A4; agarose &#xB610;&#xB294; &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; agarose &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. RS1 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (C59S/C223S &#xBC0F; C59S/C223S/C40S) &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC5F0;&#xACB0; octamer &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; galactose agarose&#xB97C; &#xC804;&#xC2DC;. R141H &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; galactose agarose &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xAC10;&#xC18C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; R141S &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC18;&#xBA74; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; RS1, &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC218;&#xC900; galactose agarose&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C;. RS1 galactose agarose&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC774;&#xC18C;&#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xBCA0;&#xD0C0;-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG)&#xC640; &#xBD80; &#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC18D;&#xC131; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC815;&#xD654; &#xC808;&#xCC28;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. RS1 &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; RS1 &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; Sf21 &#xACE4;&#xCDA9; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658; &#xBC0F; galactose &#xCE5C;&#xD654;&#xC131; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC140; &#xC2DD; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC815;&#xD654; &#xBC29;&#xBC95; &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;-&#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C; RS1 &#xC808;&#xC5F0;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9; &#xD558; &#xAC8C; &#xC99D;&#xBA85; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; discoidin &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; retinoschisin&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; galactose &#xC815;&#xD654;.

RS1, tambi&eacute;n conocido como retinoschisin, es una prote&iacute;na que contiene el dominio extracelular de la discoidin que se ha implicado en el mantenimiento de la organizaci&oacute;n celular y la estructura sin&aacute;ptica de la retina de vertebrados. Las mutaciones en el gene que codifica el RS1 son responsables de retinoschisis X-ligado, una enfermedad degenerativa retiniana caracterizada por la divisi&oacute;n de las capas de la retina de la c&eacute;lula y la discapacidad visual. Para entender mejor el papel de RS1 en biolog&iacute;a celular retiniana y retinoschisis X-ligado, hemos estudiado la interacci&oacute;n de tipo salvaje y mutante RS1 con varios carbohidratos juntados a soportes de agarosa. RS1 limitado eficientemente a galactosa-agarosa y a un menor grado lactosa-agarosa, pero no agarosa, N-acetilgalactosamina-agarosa, N-acetilglucosamina-agarosa, manosa-agarosa o heparina-agarosa. Mutantes ciste&iacute;na de RS1 (C59S/C223S y C59S/C223S/C40S) que impiden la formaci&oacute;n de disulfuro-ligados forman exhiben poca o ninguna uni&oacute;n a galactosa-agarosa. El mutante R141H pat&oacute;genos hab&iacute;a limitado galactosa-agarosa en niveles similares a los de tipo salvaje RS1, mientras que el mutante de R141S dio lugar a una reducci&oacute;n marcada en el nivel de enlace de galactosa-agarosa. RS1 a galactosa-agarosa podr&iacute;an ser desplazados con eficacia por la incubaci&oacute;n con isoprop&iacute;lico beta-d-1-tiogalactopiran&oacute;sido (IPTG). Esta propiedad fue utilizada como base para desarrollar un procedimiento de purificaci&oacute;n eficiente. Cromatograf&iacute;a de afinidad de intercambio y galactosa ani&oacute;n fue utilizado para purificar RS1 de los medios de cultivo de c&eacute;lulas estable transformadas de insectos de Sf21 que expresan y secretan RS1. Este m&eacute;todo de purificaci&oacute;n de expresi&oacute;n y prote&iacute;na de la c&eacute;lula puede ser muy &uacute;til en el aislamiento de RS1 estudios detallados de la estructura y funci&oacute;n.

Caracterizaci&oacute;n y purificaci&oacute;n de la retinoschisin de prote&iacute;na que contiene el dominio discoidin y su interacci&oacute;n con la galactosa.

Article	Year
Defective discoidin domain structure, subunit assembly, and endoplasmic reticulum processing of retinoschisin are primary mechanisms responsible for X-linked retinoschisis. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 12746437	2003
RS1, a discoidin domain-containing retinal cell adhesion protein associated with X-linked retinoschisis, exists as a novel disulfide-linked octamer. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 15644328	2005
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Nuclear import of influenza A viral ribonucleoprotein complexes is mediated by two nuclear localization sequences on viral nucleoprotein. Virology journal\| PubMed ID: 17547769	2007
Retinoschisin (RS1), the protein encoded by the X-linked retinoschisis gene, is anchored to the surface of retinal photoreceptor and bipolar cells through its interactions with a Na/K ATPase... The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 17804407	2007
Ultrastructural analysis of the nuclear localization sequences on influenza A ribonucleoprotein complexes. Journal of molecular biology\| PubMed ID: 17976646	2007
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Winco W.H. Wu

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