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Purification and Visualization of Influenza A Viral Ribonucleoprotein Complexes

The influenza A viral genome consists of eight negative-sense, single stranded RNA molecules, individually packed with multiple copies of the influenza A ...

University of British Columbia - UBC

&#x7532;&#x7C7B;&#x6D41;&#x884C;&#x6027;&#x611F;&#x5192;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7531;&#x516B;&#x4E2A;&#x5355;&#x94FE; RNA &#x5206;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7ED3;&#x6784;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x6838;&#x7CD6;&#x4E0D;&#x540C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6838;&#x86CB;&#x767D; (vRNP) &#x590D;&#x6742;&#x5BE1;&#x805A;&#x6838;&#x5FC3;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;vRNPs &#x662F;&#x7684;&#x5B9E;&#x4F53;&#x8D1F;&#x8D23;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x6D41;&#x611F;&#x75C5;&#x6BD2; Rna &#x5728;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6838;&#x6B66;&#x5668;&#x7784;&#x51C6;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684; vRNPs &#x662F;&#x611F;&#x67D3;&#x548C;&#x6D41;&#x611F; A.&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x6B65;&#x9AA4;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x6240;&#x793A;&#x6838;&#x8FDB;&#x53E3;&#x6765;&#x81EA;&#x7532;&#x578B;&#x6D41;&#x611F; virions vRNPs &#x72EC;&#x7ACB;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5BF9;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6838;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5E8F;&#x5217; &#xFF08;&#x5C3C;&#x6CCA;&#x5C14;&#x751F;&#x6D3B;&#x6C34;&#x5E73;&#x8C03;&#x67E5;&#xFF09;&#xFF1A; NLS1&#xFF0C;&#x8DE8;&#x8D8A; N &#x603B;&#x7AD9;&#x548C; NLS2&#xFF0C;&#x5728;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6B8B;&#x7559; 198-216 1 13 &#x6B8B;&#x7559;&#x4E0E; NLS1 &#x6B63;&#x5728;&#x4E3B;&#x8981;&#x8C03;&#x89E3;&#x4EBA;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x7406;&#x89E3; NLS1 &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x548C; NLS2 &#x7684;&#x8C03;&#x89E3;&#x7684;&#x6D41;&#x611F; vRNPs &#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x57FA;&#x7840;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x70B9;&#x6742;&#x4EA4;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x80F6;&#x4F53;&#x91D1;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; vRNPs &#x5728;&#x5176;&#x672C;&#x673A;&#x72B6;&#x6001;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x9762;&#x66B4;&#x9732;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C3C;&#x6CCA;&#x5C14;&#x751F;&#x6D3B;&#x6C34;&#x5E73;&#x8C03;&#x67E5;&#x5173;&#x4E8E; vRNPs &#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; NLS1 &#x662F;&#x66F4;&#x5BB9;&#x6613;&#x5411;&#x5176;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E0E; NLS2 &#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x7535;&#x955C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x514D;&#x75AB;&#x80F6;&#x4F53;&#x91D1;&#x6807;&#x8BB0; vRNPs &#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E; 71%&#x7684; vRNPs &#x6807;&#x6709;&#x5404;&#x5730; vRNP NLS1 &#x4E3A;&#x4E00;&#x81F3;&#x516D;&#x91D1;&#x7C92;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5C11;&#x4E8E; 10%&#x7684; vRNPs &#x88AB;&#x6807;&#x6709;&#x6297;&#x4F53; NLS2&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x4E0E;&#x4F4D;&#x4E8E; vRNP &#x7684;&#x4E00;&#x7AEF;&#x5355;&#x91D1;&#x9897;&#x7C92;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5B9A;&#x671F;&#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x5468;&#x671F;&#x6709;&#x4EBA;&#x7528;&#x91D1;&#x7C92;&#x5B50;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A; NLS1&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7ECF;&#x5E38;&#x87BA;&#x65CB;&#x6784;&#x8C61;&#x76EE;&#x524D;&#x5728; vRNPs &#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x5960;&#x5B9A;&#x4E86;&#x57FA;&#x7840;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684; NLS1 &#x589E;&#x5F3A;&#x80FD;&#x529B;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6D41;&#x611F; vRNPs &#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x548C;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6D41;&#x611F; A virions vRNP &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;

&#x5173;&#x4E8E;&#x6D41;&#x611F; A &#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x6838;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

The influenza A genome consists of eight single-stranded RNA molecules, each associated with an oligomeric core of the structural protein, nucleoprotein, to form a distinct viral ribonucleoprotein (vRNP) complex. vRNPs are the entities responsible for the transcription and replication of the influenza viral RNAs in the nuclei of host cells. Thus, nuclear targeting and localization of the vRNPs are a critical step in the infection and life cycle of influenza A. We have recently shown that the nuclear import of vRNPs derived from influenza A virions is independently mediated by two nuclear localization sequences (NLSs) on nucleoprotein: NLS1, spanning residues 1-13 at the N terminus, and NLS2, spanning residues 198-216 in the middle of the protein, with NLS1 being the principal mediator. To better understand the structural basis for the differences in the ability of NLS1 and that of NLS2 to mediate nuclear import of influenza vRNPs, we analyzed the levels of surface exposure of these NLSs on vRNPs by both dot blotting and immunogold labeling of vRNPs in their native state. We found that NLS1 is much more accessible to its corresponding antibody compared with NLS2. Electron microscopy of immunogold-labeled vRNPs further showed that 71% of vRNPs were labeled with one to six gold particles located throughout the vRNP for NLS1. In contrast, less than 10% of vRNPs were labeled with an antibody against NLS2, usually with a single gold particle located at one end of the vRNP. In addition, a regular periodicity of repeat was observed with gold particles labeling for NLS1, indicative of a highly regular helical conformation present in the vRNPs. These findings provide the underlying structural basis for the enhanced ability of NLS1 in mediating nuclear import of influenza vRNPs and add to our understanding of the ultrastructural features of vRNP complexes derived from influenza A virions.

Ultrastructural analysis of the nuclear localization sequences on influenza A ribonucleoprotein complexes.

Le g&eacute;nome de l&#39;influenza de type A se compose de huit mol&eacute;cules d&#39;ARN simple brin, chacun associ&eacute; &agrave; un noyau d&#39;oligom&egrave;re de la prot&eacute;ine structurale, nucl&eacute;oprot&eacute;ine, pour former un complexe de ribonucl&eacute;oprot&eacute;ique virale distincte (vRNP). vRNPs sont les entit&eacute;s responsables de la transcription et la r&eacute;plication des virus d&#39;influenza l&#39;ARN viral dans le noyau des cellules de l&#39;h&ocirc;te. Ainsi, le ciblage nucl&eacute;aire et la localisation de la vRNPs sont une &eacute;tape cruciale dans l&#39;infection et cycle de vie de la grippe A. Nous avons r&eacute;cemment d&eacute;montr&eacute; que l&#39;importation nucl&eacute;aire de vRNPs d&eacute;riv&eacute; de virions de la grippe A est ind&eacute;pendamment m&eacute;di&eacute;e par deux s&eacute;quences de localisation nucl&eacute;aire (sln) sur la nucl&eacute;oprot&eacute;ine : NLS1, s&#39;&eacute;tendant sur 1-13 les r&eacute;sidus &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale et NLS2, s&#39;&eacute;tendant sur des r&eacute;sidus 198-216 dans le milieu de la prot&eacute;ine, NLS1 &eacute;tant le principal m&eacute;diateur. Pour mieux comprendre la base structurelle des diff&eacute;rences dans la capacit&eacute; de NLS1 et celle de NLS2 de m&eacute;diation import nucl&eacute;aire de grippe vRNPs, nous avons analys&eacute; les niveaux d&#39;exposition de surface de ces sln sur vRNPs par dot-blot et immunomarquage des vRNPs dans leur &eacute;tat natif. Nous avons trouv&eacute; que la NLS1 est beaucoup plus accessible &agrave; ses anticorps correspondant par rapport aux NLS2. Plus loin, microscopie &eacute;lectronique de vRNPs immunogold marqu&eacute;e a montr&eacute; que 71 % des vRNPs ont &eacute;t&eacute; marqu&eacute;es avec une &agrave; six des particules d&#39;or situ&eacute;s tout au long de la vRNP pour NLS1. En revanche, moins de 10 % des vRNPs ont &eacute;t&eacute; marqu&eacute;es avec un anticorps contre NLS2, g&eacute;n&eacute;ralement avec une seule particule d&#39;or situ&eacute;e &agrave; une extr&eacute;mit&eacute; de la vRNP. En outre, une p&eacute;riodicit&eacute; r&eacute;guli&egrave;re de r&eacute;p&eacute;tition a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e avec de l&#39;or, &eacute;tiquetage pour NLS1, indicatives d&#39;une conformation h&eacute;lico&iuml;dale tr&egrave;s r&eacute;guli&egrave;re des particules pr&eacute;sentent dans le vRNPs. Ces r&eacute;sultats fournissent la base structurelle sous-jacente pour la capacit&eacute; accrue de NLS1 dans la m&eacute;diation import nucl&eacute;aire de grippe vRNPs et ajouter &agrave; la compr&eacute;hension des caract&eacute;ristiques ultrastructurales des complexes vRNP, d&eacute;riv&eacute;s de virions de la grippe A.

Analyses ultrastructurales des s&eacute;quences localisation nucl&eacute;aire sur des complexes ribonucl&eacute;oprot&eacute;iques de grippe A.

Das Influenza-A-Genom besteht aus acht einzelstr&auml;ngige RNA-Molek&uuml;le, jeweils im Zusammenhang mit einem Oligomere Kern des strukturellen Proteins, Nukleoproteine, um eine unterschiedliche virale Ribonucleoprotein (vRNP) komplexe zu bilden. vRNPs sind die Entit&auml;ten, die verantwortlich f&uuml;r die Transkription und Replikation der Influenza viralen RNAs in den Kernen der Wirtszellen. Nukleare targeting und Lokalisierung von der vRNPs sind daher ein wichtiger Schritt bei der Infektion und den Lebenszyklus von Influenza a Wir haben k&uuml;rzlich gezeigt, dass die nukleare Einfuhr von vRNPs abgeleitet von Influenza-A-Virionen unabh&auml;ngig von zwei nukleare Lokalisierung Sequenzen (NLSs) auf Nukleoprotein vermittelt wird: NLS1, &uuml;ber R&uuml;ckst&auml;nde 1-13 an der N-Terminus und NLS2, &uuml;ber R&uuml;ckst&auml;nde 198-216 in der Mitte das Protein mit NLS1 wird der wichtigste Mediator. Um besser zu verstehen, die strukturelle Grundlage f&uuml;r die Unterschiede in der F&auml;higkeit des NLS1 und der NLS2, nukleare Import von Grippe-vRNPs zu vermitteln, analysiert wir das Ausma&szlig; der Oberfl&auml;che Exposition von diesen NLSs auf vRNPs von sowohl Punkt zu beflecken und Immunogold Kennzeichnung von vRNPs in ihrem nativen Zustand. Wir fanden, dass NLS1 viel mehr Zugriff auf die entsprechenden Antik&ouml;rper im Vergleich zu NLS2. Elektronenmikroskopie von Immunogold-markierten vRNPs zeigten weiter, dass 71 % der vRNPs mit ein bis sechs Goldpartikeln befindet sich in der vRNP f&uuml;r NLS1 beschriftet wurden. Im Gegensatz dazu wurden weniger als 10 % der vRNPs mit einen Antik&ouml;rper gegen NLS2, in der Regel mit einem einzigen gold Viruspartikel befindet sich an einem Ende die vRNP beschriftet. Dar&uuml;ber hinaus wurde eine regelm&auml;&szlig;ige Periodizit&auml;t Wiederholung mit Gold beobachtet Teilchen labeling f&uuml;r NLS1, bezeichnend f&uuml;r eine sehr regelm&auml;&szlig;ige spiralf&ouml;rmige Konformation in die vRNPs zu pr&auml;sentieren. Diese Erkenntnisse bieten die zugrunde liegende strukturelle Grundlage f&uuml;r die verbesserte F&auml;higkeit des NLS1 bei der Vermittlung von nuklearen Import von Grippe-vRNPs und f&uuml;gen Sie zu unserem Verst&auml;ndnis der Ultrastrukturelle Merkmale der vRNP-komplexe, die von Influenza-A-Virionen abgeleitet.

Ultrastrukturelle Analyse der nuklearen Lokalisierung Sequenzen auf Influenza A-Gebiets-komplexe.

Il genoma dell&#39;influenza A &egrave; costituito da otto molecole di single-stranded RNA, ognuno associato ad un nucleo oligomerica della proteina strutturale, nucleoproteine, per formare una distinta ribonucleoproteina virale (vRNP) complessa. vRNPs sono gli enti responsabili per la trascrizione e la replicazione dell&#39;influenza virale RNAs nei nuclei delle cellule ospiti. Cos&igrave;, targeting nucleare e localizzazione del vRNPs sono un passaggio fondamentale nell&#39;infezione e ciclo di vita dell&#39;influenza A. Abbiamo recentemente dimostrato che l&#39;importazione nucleare di vRNPs derivati da virioni dell&#39;influenza A in modo indipendente &egrave; mediata da due sequenze di localizzazione nucleare (NLSs) su nucleoproteina: NLS1, spanning residui 1-13 presso il capolinea di N e NLS2, che abbracciano residui 198-216 nel bel mezzo della proteina, con NLS1 essendo il principale mediatore. Per comprendere meglio le basi strutturali delle differenze nella capacit&agrave; di NLS1 e quella di NLS2 a mediare importazione nucleare di influenza vRNPs, abbiamo analizzato i livelli di esposizione superficiale di questi NLSs su vRNPs da macchiare del puntino sia immunogold etichettatura di vRNPs nel loro stato nativo. Abbiamo trovato che NLS1 &egrave; molto pi&ugrave; accessibile al suo corrispondente anticorpo rispetto al NLS2. Microscopia elettronica di vRNPs con etichetta immunogold ha dimostrato ulteriormente che 71% di vRNPs sono stati etichettati con uno di sei particelle d&#39;oro che si trova in tutta la vRNP per NLS1. In contrasto, meno del 10% di vRNPs sono stato etichettato con un anticorpo contro NLS2, solitamente con una singola particella d&#39;oro che si trova ad una estremit&agrave; della vRNP. Inoltre, &egrave; stata osservata una periodicit&agrave; regolare di ripetizione con particelle di etichettatura per NLS1, indicativo di una conformazione elicoidale altamente regolare presenti nella vRNPs in oro. Questi risultati forniscono la base strutturale per la maggiore capacit&agrave; di NLS1 nella mediazione di importazione nucleare di influenza vRNPs e aggiungere alla nostra comprensione delle caratteristiche ultrastrutturali dei complessi vRNP derivati da virioni di influenza A.

Analisi ultrastrutturale delle sequenze di localizzazione nucleare sui complessi ribonucleoproteina di influenza A.

&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; 8 &#x4E00;&#x672C;&#x9396; RNA &#x5206;&#x5B50;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5404;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30EA;&#x30DC; &#xFF08;vRNP &#x8907;&#x5408;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;vRNPs &#x306F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x62C5;&#x5F53;&#x306E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x5185;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; Rna&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6838;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;vRNPs &#x306E;&#x4F1D;&#x67D3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x578B;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F; vRNPs &#x306E;&#x6838;&#x8F38;&#x5165;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4E0A;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6838;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; (NLSs) &#x5A92;&#x4ECB;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#xFF1A; NLS1&#x3001;&#x6B8B;&#x7559; 198 216 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;&#x771F;&#x3093;&#x4E2D;&#x306B;&#x307E;&#x305F;&#x304C;&#x308B;&#x6B8B;&#x6E23; 1 13 N &#x672B;&#x7AEF;&#x3068; NLS2 &#x306B;&#x307E;&#x305F;&#x304C;&#x308B;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B7;&#x30D1;&#x30EB;&#x306E;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3092; NLS1 &#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;NLS1 &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3068; NLS2 &#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; vRNPs &#x306E;&#x6838;&#x3078;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3057;&#x307F;&#x304C;&#x4ED8;&#x304F;&#x3068;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3067; vRNPs &#x306E;&#x6A19;&#x8B58;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; NLSs vRNPs &#x4E0A;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x9732;&#x51FA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;NLS1 &#x304C;&#x3088;&#x308A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D6;&#x30EB;&#x306B; NLS2 &#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30B4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4ED8;&#x3044;&#x305F; vRNPs &#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B; vRNPs &#x306E; 71 &#xFF05; &#x5168;&#x4F53; vRNP &#x306E; NLS1 &#x306B;&#x3042;&#x308B; 1 &#xFF5E; 6 &#x91D1;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;vRNPs &#x306E; 10 &#xFF05; &#x672A;&#x6E80;&#x3067; NLS2&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x3068;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;vRNP &#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x7AEF;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x91D1;&#x7C92;&#x5B50;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x306E;&#x5B9A;&#x671F;&#x7684;&#x5468;&#x671F;&#x6027;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E; NLS1 &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x898F;&#x5247;&#x7684;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051;&#x3067; vRNPs &#x63D0;&#x793A;&#x30B4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3068;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6240;&#x898B;&#x306F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; vRNPs &#x306E;&#x6838;&#x3078;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x306B;&#x3001;NLS1 &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3001;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F; vRNP &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6838;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; A &#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3002;

8 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A &#xAC8C;&#xB188;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4;, &#xAC01; &#xAD6C;&#xC870; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; ribonucleoprotein (vRNP) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; nucleoprotein&#xC758; oligomeric &#xCF54;&#xC5B4;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;. vRNPs &#xC804;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xC874;&#xC7AC;&#xAC00; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNAs &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD575;&#xC5D0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD575;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; Vrnps&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB294; &#xAC10;&#xC5FC;&#xACFC; &#xB3C5;&#xAC10; &#xB300;&#xB2F5;&#xC758; &#xC218;&#xBA85; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A virions&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; Vrnps&#xC758; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xB450; &#xD575; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; (NLSs) nucleoprotein&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC911;&#xC7AC; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xB294;: &#xC2A4;&#xD328;&#xB2DD; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 198-216 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC911;&#xAC04;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCE5C; N &#xB9D0;&#xB2E8; &#xBC0F; NLS2, &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 1-13 NLS1 NLS1 &#xC8FC; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xAC00; &#xB418;. Nls1&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; &#xBC0F; nls2&#xC758; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; Vrnps&#xC758; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB3C4;&#xD2B8; blotting&#xC640; immunogold &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xAD6D;&#xAC00;&#xC5D0;&#xC11C; Vrnps&#xC758; &#xB77C;&#xBCA8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Vrnps&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Nlss&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xB178;&#xCD9C;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; NLS1 nls2&#xC640; &#xBE44;&#xAD50;&#xB294; &#xD574;&#xB2F9; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xBC1C;&#xACAC;. Immunogold &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; Vrnps&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC740; &#xCD94;&#xAC00; 71 %vrnps nls1&#xC5D0;&#xB294; Vrnp&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC788;&#xB294; 1-6 &#xAE08; &#xC785;&#xC790;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, Vrnps&#xC758; 10% &#xBBF8;&#xB9CC; &#xD588;&#xB2E4; &#xD45C;&#xC2DC; NLS2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB85C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xACE8;&#xB4DC; &#xC785;&#xC790;&#xB294; Vrnp&#xC758; &#xD55C;&#xCABD; &#xB05D;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xACE8;&#xB4DC; &#xB77C;&#xBCA8; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; nls1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC785;&#xC790;&#xB294; Vrnps&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC7AC; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18; &#xC8FC;&#xAE30; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; Vrnps&#xC758; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; nls1&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A virions&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; vRNP &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; ultrastructural &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00;.

&#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A ribonucleoprotein &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xD575; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; ultrastructural &#xBD84;&#xC11D;.

El genoma de la influenza A se compone de ocho mol&eacute;culas de ARN monocatenario, cada uno asociado a un n&uacute;cleo oligom&eacute;rico de la prote&iacute;na estructural, nucleoprote&iacute;na, para formar una ribonucleoprote&iacute;na viral distinta (vRNP) complejo. vRNPs son las entidades encargadas de la transcripci&oacute;n y replicaci&oacute;n de influenza RNAs virales en los n&uacute;cleos de las c&eacute;lulas del hu&eacute;sped. As&iacute;, la orientaci&oacute;n nuclear y localizaci&oacute;n de la vRNPs son un paso cr&iacute;tico en la infecci&oacute;n y ciclo de vida de la gripe A. Recientemente hemos demostrado que la importaci&oacute;n nuclear de vRNPs derivados de viriones de la gripe A independiente est&aacute; mediada por dos secuencias de localizaci&oacute;n nuclear (NLSs) en nucleoprote&iacute;nas: NLS1, que abarca de residuos 1-13 en el extremo N terminal y NLS2, que abarca los residuos 198-216 en el medio de la prote&iacute;na, con NLS1 siendo el mediador principal. Para comprender mejor la base estructural para las diferencias en la capacidad de NLS1 y de NLS2 para mediar la importaci&oacute;n nuclear de vRNPs de la gripe, se analizaron los niveles de exposici&oacute;n superficial de estos NLSs en vRNPs dot Blot y el etiquetado de immunogold de vRNPs en su estado natal. Encontramos que el NLS1 es mucho m&aacute;s accesible a su correspondiente anticuerpo en comparaci&oacute;n con NLS2. La microscopia electr&oacute;nica de vRNPs immunogold-etiquetado adicional demostr&oacute; que 71% de vRNPs fueron etiquetado con part&iacute;culas de oro de uno a seis ubicadas a lo largo de la vRNP para NLS1. En contraste, menos del 10% de vRNPs fueron etiquetado con un anticuerpo contra NLS2, generalmente con una sola part&iacute;cula de oro situada en un extremo de la vRNP. Adem&aacute;s, se observ&oacute; una periodicidad regular de repetici&oacute;n con etiquetado para NLS1, indicativo de una conformaci&oacute;n helicoidal altamente regular de part&iacute;culas presentan en el vRNPs de oro. Estos resultados proporcionan la base estructural subyacente para la mayor capacidad de NLS1 en la mediaci&oacute;n de importaci&oacute;n nuclear de gripe vRNPs y a&ntilde;adir a nuestra comprensi&oacute;n de las caracter&iacute;sticas ultraestructurales de vRNP complejos derivados de viriones de gripe A.

An&aacute;lisis ultraestructural de las secuencias de localizaci&oacute;n nuclear en complejos de Ribonucleoprote&iacute;na gripe A.

&#x6709;&#x8FEB;&#x5207;&#x7684;&#x9700;&#x8981;&#xFF0C;&#x6D82;&#x5C42;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x533B;&#x7597;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x690D;&#x5165;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6297;&#x83CC;&#x836F;&#x7269;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x51CF;&#x5C11;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x98CE;&#x9669;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x591A;&#x80BD;&#x9635;&#x5217;&#x6280;&#x672F;&#x4FEE;&#x6539;&#x4E3A;&#x5141;&#x8BB8;&#x77ED;&#x800C;&#x62F4;&#x8868;&#x9762;&#x6297;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;&#x3002;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7D20;-&#x6C28;&#x57FA;-&#x7F9F;&#x4E19;&#x57FA;&#x919A; (&#x4F5B;&#x5F97;&#x89D2;) &#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x5316;&#x5B66;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x5BF9;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7D20;&#x7684;&#x652F;&#x6301;&#xFF0C;&#x7EFC;&#x5408;&#x751F;&#x7269;&#x68C0;&#x5B9A;&#x671F;&#x95F4;&#x4ECD;&#x7136;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x3002;&#x4E4B;&#x95F4; 122 &#x6D4B;&#x8BD5;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x6700;&#x4F73;&#x8868;&#x9762;&#x6813; 9-&#xFF0C;12-13 mer &#x80BD;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x548C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x6297;&#x83CC;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x771F;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5982;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4F7F;&#x7528;&#x66FF;&#x4EE3;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x6750;&#x6599;&#x548C;&#x8026;&#x5408;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x901A;&#x8FC7;&#x80BD;&#x7684;&#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;C &#x548C; N &#x8026;&#x5408;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;-&#x6D3B;&#x6027;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x6813;&#x7CFB;&#x80BD;&#x6D3B;&#x6027;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x70B9;&#x8868;&#x660E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x548C;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x6B63;&#x7535;&#x8377;&#x548C;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x662F;&#x5728;&#x786E;&#x5B9A;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x529B;&#x3002;

&#x7B5B;&#x9009;&#x53CA;&#x6297;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x8868;&#x9762;&#x62F4;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

There is an urgent need to coat the surfaces of medical devices, including implants, with antimicrobial agents to reduce the risk of infection. A peptide array technology was modified to permit the screening of short peptides for antimicrobial activity while tethered to a surface. Cellulose-amino-hydroxypropyl ether (CAPE) linker chemistry was used to synthesize, on a cellulose support, peptides that remained covalently bound during biological assays. Among 122 tested sequences, the best surface-tethered 9-, 12-, and 13-mer peptides were found to be highly antimicrobial against bacteria and fungi, as confirmed using alternative surface materials and coupling strategies as well as coupling through the C and N termini of the peptides. Structure-activity modeling of the structural features determining the activity of tethered peptides indicated that the extent and positioning of positive charges and hydrophobic residues were influential in determining activity.

Screening and characterization of surface-tethered cationic peptides for antimicrobial activity.

Il y a un besoin urgent pour recouvrir les surfaces des dispositifs m&eacute;dicaux, y compris les implants, avec des agents antimicrobiens pour r&eacute;duire le risque d&#39;infection. Une technologie de baies de peptide a &eacute;t&eacute; modifi&eacute;e pour permettre la projection de petits peptides &agrave; activit&eacute; antimicrobienne tandis qu&#39;attach&eacute; &agrave; une surface. Chimie linker &eacute;ther de cellulose-amino-hydroxypropyl (Cap) a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour synth&eacute;tiser, sur un support de la cellulose, les peptides qui sont rest&eacute;es covalente au cours d&#39;essais biologiques. Parmi les 122 s&eacute;quences test&eacute;es, la meilleure surface-attach&eacute; 9-, 12- et 13-mer peptides se sont av&eacute;r&eacute;s pour &ecirc;tre hautement antimicrobien contre les bact&eacute;ries et champignons, comme le confirme l&#39;utilisation alternative de surface des mat&eacute;riaux et strat&eacute;gies d&#39;accouplement ainsi que couplage &agrave; travers les terminus de C et N des peptides. Mod&eacute;lisation de la structure et l&#39;activit&eacute; des d&eacute;termination de l&#39;activit&eacute; des peptides attach&eacute;s les caract&eacute;ristiques structurales ont indiqu&eacute; que la mesure et le positionnement des charges positives et les r&eacute;sidus hydrophobes &eacute;taient influents dans la d&eacute;termination de l&#39;activit&eacute;.

D&eacute;pistage et caract&eacute;risation de surface-attach&eacute; des peptides cationiques pour activit&eacute; antimicrobienne.

Es ist dringend notwendig, die Oberfl&auml;chen von Medizinprodukten, einschlie&szlig;lich Implantate mit antimikrobieller Mittel zur Verringerung des Risikos einer Infektion zu beschichten. Eine Peptid-Array-Technologie wurde ge&auml;ndert, um das Screening von kurzen Peptiden f&uuml;r antimikrobielle Aktivit&auml;t w&auml;hrend angebunden an einer Fl&auml;che zu erm&ouml;glichen. Zellulose-amino-Hydroxypropyl-&Auml;ther (CAPE) Linker Chemie wurde verwendet, auf einem Tr&auml;ger Zellulose Peptide zu synthetisieren, die kovalent gebundenen in biologischen Proben blieb. Unter 122 getesteten Sequenzen, die beste Oberfl&auml;che-gefesselte 9-, 12 und 13-Mer Peptide wurden gefunden zu stark antimikrobielle Wirkstoffe gegen Bakterien und Pilze, wie best&auml;tigt wurde, verwenden Alternative Oberfl&auml;chen-Materialien und Kupplung Strategien sowie die Kopplung durch den C- und N-Termini der Peptide. Struktur-Wirkungs-Modellierung von der strukturellen Merkmale, die Bestimmung der Aktivit&auml;t der gefesselte Peptide zeigten das Ausma&szlig; und die Positionierung von positive Ladungen und hydrophoben R&uuml;ckst&auml;nden einflussreich bei der Bestimmung der Aktivit&auml;t.

Screening und Charakterisierung der Oberfl&auml;che-gefesselte kationische Peptide f&uuml;r antimikrobielle Aktivit&auml;t.

C&#39;&egrave; un&#39;urgente necessit&agrave; di ricoprire le superfici dei dispositivi medici, compresi gli impianti, con agenti antimicrobici per ridurre il rischio di infezione. Una tecnologia di matrice del peptide &egrave; stata modificata per permettere la proiezione di brevi peptidi per attivit&agrave; antimicrobica mentre legato ad una superficie. Chimica del linker cellulosa-ammino-idrossipropil etere (il capo) &egrave; stata usata per sintetizzare, su un supporto di cellulosa, peptidi che rimasero covalentemente durante analisi biologiche. Tra sequenze testati 122, la migliore superficie-tethered 9-, 12- e 13-mer peptidi sono stati trovati per essere altamente antimicrobici contro batteri e funghi, come ha confermato l&#39;utilizzo della superficie materiali e strategie di accoppiamento cos&igrave; come accoppiamento attraverso la C e N termini dei peptidi. Modellazione struttura-attivit&agrave; delle caratteristiche strutturali determinando l&#39;attivit&agrave; dei peptidi legati hanno indicato che la misura e posizionamento di cariche positive e idrofobici residui erano influente nella determinazione di attivit&agrave;.

Screening e caratterizzazione di peptidi cationici legato in superficie per attivit&agrave; antimicrobica.

&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x30EA;&#x30B9;&#x30AF;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6297;&#x83CC;&#x5264;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x533B;&#x7642;&#x6A5F;&#x5668;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x304C;&#x7DCA;&#x6025;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x675F;&#x7E1B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x306E;&#x6297;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x77ED;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9; &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE; &#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EB;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A8;&#x30FC;&#x30C6;&#x30EB; (&#x5CAC;) &#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x5316;&#x5B66;&#x5408;&#x6210;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x4E2D;&#x306B;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;122 &#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x6700;&#x9AD8;&#x8868;&#x9762;&#x4FC2;&#x7559; 9 - &#x65E5;&#x9593; 12 &#x304A;&#x3088;&#x3073; 13 mer &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x83CC;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x6297;&#x83CC;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3001;&#x83CC;&#x985E;&#x6750;&#x6599;&#x3068;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x540C;&#x69D8;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E; C &#x304A;&#x3088;&#x3073; N &#x306E;&#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C6;&#x30B6;&#x30FC; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3068;&#x6B63;&#x96FB;&#x8377;&#x30FB;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x6C7A;&#x3081;&#x5F71;&#x97FF;&#x529B;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;.

&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8868;&#x9762;&#x4FC2;&#x7559;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x6027;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x6297;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x3002;

&#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC704;&#xD5D8;&#xC744; &#xC904;&#xC774;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD56D;&#xADE0; &#xC131; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC784; &#xD50C; &#xB780; &#xD2B8; &#xB4F1; &#xC758;&#xB8CC; &#xAE30;&#xAE30; &#xD45C;&#xBA74; &#xCF54;&#xD2B8; &#xAE34;&#xAE09; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; array &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xC9E7;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB2FF;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD56D;&#xADE0; &#xC131; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xBC14;&#xB00C;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140; &#xB8F0; &#xB85C;&#xC2A4; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC5D0;&#xD14C;&#xB974; (&#xCF00;&#xC774;&#xD504;) &#xB9C1;&#xCEE4; &#xD654;&#xD559; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#x70AD; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xB0A8;&#xC544; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xC140; &#xB8F0; &#xB85C;&#xC2A4; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xC131; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 122 &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2FF;&#xB294; 9-, &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; 13 &#xBA54; &#xB974; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC0F; 12-&#xB192;&#xC740; &#xD56D;&#xADE0; &#xC138;&#xADE0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC83;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4; &#xC788;&#xACE0; &#xACF0; &#xD321;&#xC774;, &#xB300;&#xC548;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD655;&#xC778; &#xC790;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xC804;&#xB7B5; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; C&#xC640; N &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC27;&#xC904;&#xB85C; &#xB9E4; &#xC778;&#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBC94;&#xC704;&#xC640; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC694;&#xAE08; &#xBC0F; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xD3EC;&#xC9C0;&#xC154;&#xB2DD; &#xC601;&#xD5A5;&#xB825; &#xC788;&#xB294; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC2EC;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2FF;&#xB294; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xB4DC;&#xC758; &#xD56D;&#xADE0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC131;.

Existe una necesidad urgente para recubrir las superficies de dispositivos m&eacute;dicos, incluyendo implantes, con agentes antimicrobianos para reducir el riesgo de infecci&oacute;n. Una tecnolog&iacute;a de matriz de p&eacute;ptido fue modificada para permitir la proyecci&oacute;n de p&eacute;ptidos cortos actividad antimicrobiana mientras anclado a una superficie. Qu&iacute;mica de vinculador de &eacute;ter de celulosa-amino-hidroxipropil (cabo) fue utilizado para sintetizar, sobre un soporte de celulosa, p&eacute;ptidos que permanec&iacute;an covalentemente durante ensayos biol&oacute;gicos. Entre 122 secuencias probadas, la mejor superficie-atado 9-, 12 y 13-mer p&eacute;ptidos fueron encontrados para ser altamente antimicrobiana contra bacterias y hongos, como confirm&oacute; la alternativa de usar materiales y estrategias de acoplamiento, as&iacute; como acoplamiento a trav&eacute;s de los t&eacute;rminos C y N de los p&eacute;ptidos de la superficie. Modelado de la estructura y actividad de las caracter&iacute;sticas estructurales de determinaci&oacute;n de la actividad de p&eacute;ptidos atadas indic&oacute; que la medida y posicionamiento de cargas positivas y residuos hidrof&oacute;bicos eran influyente en la determinaci&oacute;n de la actividad.

Article	Year
Ultrastructural analysis of the nuclear localization sequences on influenza A ribonucleoprotein complexes. Journal of molecular biology\| PubMed ID: 17976646	2007
Screening and characterization of surface-tethered cationic peptides for antimicrobial activity. Chemistry & biology\| PubMed ID: 19171306	2009

Lindsay L. Weaver

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