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Collection and Cryopreservation of Hamster Oocytes and Mouse Embryos

Embryos and oocytes were first successfully cryopreserved more than 30 years ago, when Whittingham et al. 1 and Wilmut 2 separately described that mouse ...

Universitat Autonoma de Barcelona

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Antimitotic &#x6CBB;&#x7597;&#x5316;&#x5B66;&#x8F85;&#x52A9;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53BB;&#x6838;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x3002;

Chemically assisted enucleation has been successfully applied to porcine and bovine oocytes to prepare recipient cytoplasts for nuclear transfer procedures. In this study, the antimitotic drugs demecolcine, nocodazole, and vinblastine were first assessed for their ability to induce the formation of cortical membrane protrusions in mouse, goat, and human oocytes. While only 2% of the treated human oocytes were able to form a protrusion, high rates of protrusion formation were obtained both in mouse (84%) and goat oocytes (92%), once the treatment was optimized for each species. None of the antimitotics applied was superior to the others in terms of protrusion formation, but mouse oocytes treated with vinblastine were unable to restore normal spindle morphology after drug removal and their in vitro development after parthenogenetic activation was severely compromised, rendering this antimitotic useless for chemically assisted enucleation approaches. Aspiration of the protrusions in mouse oocytes treated with demecolcine or nocodazole yielded 90% of successfully enucleated oocytes and allowed the extraction of a smaller amount of cytoplasm than with mechanical enucleation, but both enucleation methods resulted in the depletion of spindle-associated gamma-tubulin from the prepared cytoplasts. Treatment of mouse oocytes with demecolcine or nocodazole had no effect on their in vitro development after parthenogenetic activation, or on their ability to repolymerize a new spindle after the removal of the drug or the reconstruction of the treated cytoplasts with a somatic nucleus. Therefore, demecolcine- and nocodazole-assisted enucleation appears as an efficient alternative to mechanical enucleation, which can simplify nuclear transfer procedures.

Antimitotic treatments for chemically assisted oocyte enucleation in nuclear transfer procedures.

&Eacute;nucl&eacute;ation chimiquement assist&eacute;e a appliqu&eacute; avec succ&egrave;s &agrave; des ovocytes porcins et bovins pour pr&eacute;parer cytoplasts destinataires transfert de noyaux de proc&eacute;dures. Dans cette &eacute;tude, les d&eacute;molcine de drogues antimitotiques, nocodazole et vinblastine ont &eacute;t&eacute; tout d&#39;abord &eacute;valu&eacute;s pour leur capacit&eacute; &agrave; induire la formation de protrusions membrane corticale en souris, ch&egrave;vre et des ovocytes humains. Tandis que seulement 2 % des ovocytes humains trait&eacute;s ont pu former une protub&eacute;rance, des taux &eacute;lev&eacute;s de formation de protrusion ont &eacute;t&eacute; obtenus tant chez la souris (84 %) et des ovocytes de ch&egrave;vre (92 %), une fois que le traitement a &eacute;t&eacute; optimis&eacute; pour chaque esp&egrave;ce. Aucun d&#39;entre les antimitotiques appliqu&eacute;s a &eacute;t&eacute; sup&eacute;rieur aux autres en termes de formation de la saillie, mais ovocytes de souris trait&eacute;es avec la vinblastine ont &eacute;t&eacute; incapables de restaurer la morphologie normale broche apr&egrave;s le retrait de la drogue et leur d&eacute;veloppement in vitro apr&egrave;s que activation parth&eacute;nog&eacute;n&eacute;tique a &eacute;t&eacute; gravement compromise, rendant cet antimitotique inutile pour chimiquement assist&eacute;e &eacute;nucl&eacute;ation approches. Aspiration des protub&eacute;rances dans des ovocytes de souris trait&eacute;es avec d&eacute;molcine ou nocodazole rapportait 90 % d&#39;ovocytes &eacute;nucl&eacute;&eacute;s avec succ&egrave;s et a permis l&#39;extraction d&#39;une petite quantit&eacute; de cytoplasme qu&#39;avec &eacute;nucl&eacute;ation m&eacute;canique, mais les deux m&eacute;thodes d&#39;&eacute;nucl&eacute;ation a entra&icirc;n&eacute; l&#39;&eacute;puisement des gamma-tubuline associ&eacute;s &agrave; broche des cytoplasts pr&eacute;par&eacute;es. Traitement des ovocytes de souris avec d&eacute;molcine ou nocodazole a eu aucun effet sur leur d&eacute;veloppement in vitro apr&egrave;s activation parth&eacute;nog&eacute;n&eacute;tique, ou sur leur capacit&eacute; &agrave; repolym&eacute;risation une broche de nouveau apr&egrave;s le retrait de la drogue ou la reconstruction des cytoplasts trait&eacute;es avec un noyau somatique. Donc, d&eacute;molcine et nocodazole-assist&eacute;e &eacute;nucl&eacute;ation appara&icirc;t comme une alternative efficace &agrave; l&#39;&eacute;nucl&eacute;ation m&eacute;canique, qui permet de simplifier les proc&eacute;dures de transfert de noyaux.

Traitements antimitotiques pour assist&eacute;e chimiquement &eacute;nucl&eacute;ation d&#39;ovocytes dans les proc&eacute;dures de transfert nucl&eacute;aire.

Chemisch unterst&uuml;tzte Enukleations wurde erfolgreich an Schweinen und Rindern Eizellen zur Empf&auml;nger Cytoplasts Vorbereitung Kerntransfer Verfahren angewandt. In dieser Studie wurden die antimitotic Drogen Demecolcine, Nocodazole und Vinblastin zuerst f&uuml;r ihre F&auml;higkeit zu induzieren die Bildung von kortikalen Membran Vorspr&uuml;nge in der Maus, Ziege und menschlichen Eizellen beurteilt. W&auml;hrend nur 2 % der behandelten menschlichen Eizellen eine Vorw&ouml;lbung bilden konnten, wurden hohe Raten von Vorw&ouml;lbung Bildung erzielt, sowohl in der Maus (84 %) und Ziege Eizellen (92 %), einmal f&uuml;r jede Art die Behandlung optimiert wurde. Keiner von den Mitosehemmstoffen angewendet war besser als die anderen in Bezug auf Vorw&ouml;lbung Bildung, aber Maus Eizellen mit Vinblastin behandelt waren nicht normal Spindel Morphologie nach Droge entfernen und ihre in-vitro-Entwicklung wiederherstellen, nachdem parthenogenetic Aktivierung schwer gef&auml;hrdet war, Rendern dieser Antimitotic nutzlos f&uuml;r chemisch assistierte Enukleations Ans&auml;tze. Aspiration von Vorspr&uuml;ngen in Maus Eizellen mit Demecolcine oder Nocodazole zu 90 % erfolgreich entkernten Eizellen und erlaubt die Extraktion von eine kleinere Menge von Zytoplasma als mit mechanischen Enukleations behandelt, aber beide Enukleations-Methoden f&uuml;hrte zu Ersch&ouml;pfung der Spindel-assoziierte Gamma-Tubulin aus der vorbereiteten Cytoplasts. Behandlung von Maus-Eizellen mit Demecolcine oder Nocodazole hatten keine Auswirkungen auf ihre in-vitro-Entwicklung nach parthenogenetic Aktivierung oder auf ihre F&auml;higkeit, eine neue Spindel nach der Entfernung des Medikaments oder die Rekonstruktion der behandelten Cytoplasts mit einem somatischen Kern repolymerize. Daher erscheint die Demecolcine and Nocodazole-assisted Enukleations als effiziente Alternative zu mechanischen Enukleations, der Kerntransfer Verfahren vereinfachen kann.

Antimitotic Behandlungen f&uuml;r assistierte chemisch Eizelle Enukleations Kerntransfer Verfahren.

Enucleazione chimicamente assistita &egrave; stato applicato con successo alla specie suini e bovina ovociti per preparare citoplasti destinatari per trasferimento nucleare di procedure. In questo studio, i farmaci antimitotici demecolcine, nocodazole e vinblastina in primo luogo sono stati valutati per la loro capacit&agrave; di indurre la formazione di protrusioni della membrana corticale in mouse, capra e gli ovociti umani. Mentre solo il 2% di ovociti umani trattati sono stati in grado di formare una sporgenza, alti tassi di formazione protrusione sono stati ottenuti sia in mouse (84%) e capra ovociti (92%), una volta che il trattamento &egrave; stato ottimizzato per ogni specie. Nessuno di antimitotics applicato era superiore agli altri in termini di formazione di protrusione, ma gli ovociti mouse trattati con vinblastina erano in grado di ripristinare la morfologia normale mandrino dopo la rimozione del farmaco e il loro sviluppo in vitro dopo attivazione nei fu gravemente compromessa, rendendo questo antimitotic inutile per assistito chimicamente enucleazione approcci. Aspirazione di protrusioni in oocytes del mouse trattati con demecolcine o nocodazole ceduto il 90% degli ovociti enucleated con successo e ha permesso l&#39;estrazione di una piccola quantit&agrave; di citoplasma rispetto con enucleazione meccanico, ma entrambi i metodi enucleazione ha provocato l&#39;impoverimento della gamma tubulina associato al mandrino dai citoplasti preparati. Trattamento di ovociti del mouse con demecolcine o nocodazole ha avuto alcun effetto sul loro sviluppo in vitro dopo attivazione nei, o sulla loro capacit&agrave; di repolymerize un nuovo mandrino dopo la rimozione del farmaco o la ricostruzione del citoplasti trattate con un nucleo somatico. Pertanto, demecolcine - e nocodazole-assistita enucleazione appare come un&#39;alternativa efficace per enucleazione meccanici, che pu&ograve; semplificare le procedure di trasferimento nucleare.

Antimitotici trattamenti per chimicamente assistita enucleazione ovocita nelle procedure di trasferimento nucleare.

&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x773C;&#x7403;&#x6458;&#x51FA;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x6838;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x3092;&#x6E96;&#x5099;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30D6;&#x30BF;&#x3068;&#x30A6;&#x30B7;&#x306E;&#x5375;&#x5B50;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x6297;&#x304C;&#x3093;&#x5264;&#x85AC;&#x30C7;&#x30E1;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;nocodazole &#x304C;&#x53D6;&#x308A;&#x5916;&#x3057;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D3;&#x30F3;&#x30D6;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x6700;&#x521D;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x819C;&#x306E;&#x7A81;&#x8D77;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3001;&#x30E4;&#x30AE;&#x3001;&#x3072;&#x3068;&#x5375;&#x5B50;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2% &#x3060;&#x3051;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3072;&#x3068;&#x5375;&#x5B50;&#x306E;&#x7A81;&#x8D77;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x6CBB;&#x7642;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x7A2E;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; 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antimitotic &#x3092;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7121;&#x7528;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x6838;&#x51FA;&#x8853;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1; &#x30A2;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x7A81;&#x8D77;&#x306E;&#x5438;&#x5F15;&#x30C7;&#x30E1;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x9664;&#x6838;&#x5375;&#x5B50;&#x306E; 90% &#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x773C;&#x7403;&#x6458;&#x51FA;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x91CF;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF; nocodazole &#x304C;&#x53D6;&#x308A;&#x5916;&#x3057;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6458;&#x51FA;&#x65B9;&#x6CD5;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x95A2;&#x9023; &gamma; &#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x6E96;&#x5099;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C7;&#x30E1;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x30CE;&#x30B3;&#x30C0;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x4F53;&#x5916;&#x767A;&#x80B2;&#x5358;&#x70BA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x3001;&#x85AC;&#x7269;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3084;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x3068;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x5FA9;&#x8208;&#x5F8C; repolymerize &#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x773C;&#x7403;&#x6458;&#x51FA;&#x30C7;&#x30E1;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068; nocodazole &#x304C;&#x53D6;&#x308A;&#x5916;&#x3057;&#x30A2;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x7C21;&#x7D20;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x773C;&#x7403;&#x6458;&#x51FA;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6297;&#x304C;&#x3093;&#x5264;&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x8131;&#x6838;&#x6838;&#x632F;&#x8FBC;&#x624B;&#x7D9A;&#x304D;&#x306E;&#x652F;&#x63F4;&#x3002;

&#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xBCF4;&#xC870; enucleation &#xB3FC;&#xC9C0;&#xC640; &#xC18C; oocytes &#xC900;&#xBE44; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; cytoplasts &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; &#xC808;&#xCC28; &#xD558;&#xC5D0; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC801;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; antimitotic &#xC57D; demecolcine, nocodazole, &#xBC0F; vinblastine &#xBA3C;&#xC800; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;, &#xC5FC;&#xC18C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB9C9; &#xB3CC;&#xCD9C;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCE58;&#xB8CC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; oocytes&#xC758; 2%&#xB9CC; &#xB3CC;&#xCD9C; &#xD615;&#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xB3D9;&#xC548; &#xB3CC;&#xCD9C; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC18D;&#xB3C4; &#xAC00;&#xC838;&#xC628; &#xBAA8;&#xB450; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; (84%)&#xC640; &#xC5FC;&#xC18C; oocytes (92%)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xB2E8; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB294; &#xAC01; &#xC885;&#xC871;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;. Antimitotics &#xC801;&#xC6A9; &#xC911; &#xB3CC;&#xCD9C; &#xD615;&#xC131; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; oocytes vinblastine&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; parthenogenetic &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC2EC;&#xAC01; &#xD558; &#xAC8C; &#xC190;&#xC0C1; &#xD6C4; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC81C;&#xAC70; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD6C4; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC774; antimitotic &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC4F8;&#xBAA8; &#xC5C6;&#xB294; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xBCF4;&#xC870; enucleation &#xC811;&#xADFC;. &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xCD9C;&#xC758; &#xC5F4;&#xB9DD; demecolcine &#xB610;&#xB294; nocodazole &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; enucleated oocytes&#xC758; 90%&#xB97C; &#xAD74;&#xBCF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC18C;&#xB7C9;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; enucleation&#xC640; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC900;&#xBE44; &#xB41C; cytoplasts&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xB9C8; tubulin &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC758; &#xC18C;&#xBAA8; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; &#xB450; enucleation &#xBC29;&#xBC95;. Demecolcine &#xB610;&#xB294; nocodazole &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; oocytes &#xCE58;&#xB8CC; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70; &#xB610;&#xB294; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC6B0; cytoplasts&#xC758; &#xC7AC;&#xAC74; &#xD6C4; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; repolymerize&#xC744; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; &#xB610;&#xB294; parthenogenetic &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xD6C4;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xBC1C;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, demecolcine &#xBC0F; nocodazole &#xC9C0;&#xC6D0; enucleation &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; &#xC808;&#xCC28;&#xB97C; &#xAC04;&#xC18C;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; enucleation &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC2E0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Antimitotic &#xCE58;&#xB8CC;&#xB294; &#xD654;&#xD559;&#xC801; oocyte enucleation &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; &#xC808;&#xCC28;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC6C0;.

Enucleaci&oacute;n qu&iacute;micamente asistida se ha aplicado con &eacute;xito a ovocitos porcinas y bovinas para preparar transferencia nuclear receptoras cytoplasts procedimientos. En este estudio, la droga antimit&oacute;tica demecolcine, nocodazole y vinblastina fueron evaluados primero por su capacidad para inducir la formaci&oacute;n de protuberancias de la membrana cortical en rat&oacute;n, cabra y ovocitos humanos. Mientras que s&oacute;lo el 2% de los ovocitos humanos tratados fueron capaces de formar una protrusi&oacute;n, altas tasas de formaci&oacute;n saliente se obtuvieron tanto en rat&oacute;n (84%) y los ovocitos de cabra (92%), una vez que el tratamiento se ha optimizado para cada especie. Ninguno de los antimitotics aplicados fue superior a los dem&aacute;s en t&eacute;rminos de formaci&oacute;n de la protuberancia, pero ovocitos de rat&oacute;n tratados con vinblastina fueron incapaces de restaurar la morfolog&iacute;a normal del huso despu&eacute;s de retiro de la droga y su desarrollo in vitro despu&eacute;s de activaci&oacute;n partenogen&eacute;tica fue comprometida seriamente, haciendo este antimitotic in&uacute;til para qu&iacute;micamente asistida enucleaci&oacute;n enfoques. Aspiraci&oacute;n de las protuberancias en ovocitos de rat&oacute;n tratados con demecolcine o nocodazole rindi&oacute; el 90% de los ovocitos con &eacute;xito anucleadas y permite la extracci&oacute;n de una cantidad m&aacute;s peque&ntilde;a de citoplasma que con enucleaci&oacute;n mec&aacute;nica, pero ambos m&eacute;todos de enucleaci&oacute;n resultaron en el agotamiento de la gamma-tubulina asociada del huso de las cytoplasts preparados. Tratamiento de ovocitos de rat&oacute;n con demecolcine o nocodazole tuvo un efecto sobre su desarrollo in vitro despu&eacute;s de la activaci&oacute;n partenogen&eacute;tica, o en su capacidad para repolymerize un nuevo eje despu&eacute;s de la eliminaci&oacute;n de la droga o la reconstrucci&oacute;n de las cytoplasts tratadas con un n&uacute;cleo som&aacute;tico. Por lo tanto, demecolcine y nocodazole-asistida enucleaci&oacute;n aparece como una alternativa eficiente a enucleaci&oacute;n mec&aacute;nica, que puede simplificar los procedimientos de transferencia nuclear.

Tratamientos antimit&oacute;tica qu&iacute;micamente asistida enucleaci&oacute;n de ovocitos en procedimientos de transferencia nuclear.

&#x8FDB;&#x5165;&#x540E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x8F6C;&#x79FB; (SCNT) &#x5168;&#x80FD;&#x80DA;&#x80CE;&#x72B6;&#x6001;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x7684;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x4E0D;&#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x3002;B6D2F1 &#x5C0F;&#x9F20;&#x54C1;&#x7CFB;&#x6742;&#x4EA4;&#x5728;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E0E;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53BB;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; (HDACi) &#x66F2;&#x53E4; SCNT &#x80DA;&#x80CE;&#x77AC;&#x6001;&#x6CBB;&#x7597; (TSA) &#x5927;&#x5927;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4EFB;&#x671F;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C; SCNT &#x534F;&#x8BAE; tsa &#x548C;&#x63A2;&#x7D22;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A; HDACi&#xFF0C;&#x4E19;&#x620A;&#x9178;&#x94A0; (VPA) &#x5BF9;&#x4F53;&#x5916;&#x53D1;&#x80B2;&#xFF0C;&#x56CA;&#x80DA;&#x8D28;&#x91CF;&#x3001; &#x7597;&#x6548;&#x548C;&#x9F20;&#x6807; B6CBAF1 &#x8DB3;&#x53D1;&#x5C55;&#x514B;&#x9686;&#x80DA;&#x80CE;&#x3002;SCNT &#x80DA;&#x56CA;&#x80DA;&#x53D1;&#x5C55;&#x7387;&#x6CBB;&#x7597;&#x6216;&#x8005; 5 nM TSA &#x671F;&#x95F4;&#x548C;&#x4E4B;&#x540E;&#x6FC0;&#x6D3B; (31.8%) &#x6216; 100 nM TSA &#x6216; 2 &#x6BEB;&#x7C73; VPA &#x4E4B;&#x524D;&#x548C;&#x671F;&#x95F4;&#x6FC0;&#x6D3B; (34.5 &#x548C; 38.3%&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#xFF09; &#x90FD;&#x660E;&#x663E;&#x4F18;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B; nontreated SCNT &#x80DA;&#x80CE; (22.9-25.1%)&#x3002;HDACi &#x6CBB;&#x7597;&#x80DA;&#x80CE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x53D1;&#x80B2;&#x7387;&#x88AB;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; H3 14 &#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x548C;&#x6539;&#x8FDB;&#x56CA;&#x80DA;&#x8D28;&#x91CF;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5E73;&#x6839;&#x636E;&#x6765;&#x5224;&#x65AD;&#x7684;&#x603B;&#x6570;&#x548C; nontreated &#x80DA;&#x80CE; (30-35%&#x589E;&#x52A0;) &#x4E0E; ICM &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x591A;&#x3002;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E0E; TSA &#x6216; VPA SCNT &#x80DA;&#x80CE;&#x8FD8;&#x5141;&#x8BB8;&#x53EF;&#x884C;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x6C11;&#x6743;&#x800C;&#x6CA1;&#x6709;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECE;&#x672A;&#x7ECF;&#x5904;&#x7406; SCNT &#x80DA;&#x80CE;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E; VPA &#x53EF;&#x4EE5;&#x6539;&#x5584; B6CBAF1 SCNT &#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A; TSA &#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E00;&#x7EA7;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x8DB3;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6253;&#x5F00;&#x65B0;&#x7684;&#x673A;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x514B;&#x9686;&#x6548;&#x7387;&#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x5C0F;&#x9F20;&#x54C1;&#x7CFB;&#x6216;&#x7269;&#x79CD;&#x3002;

&#x66F2;&#x53E4;&#x6291;&#x83CC;&#x7D20; A &#x5BF9;&#x4F53;&#x5916;&#x53D1;&#x80B2;&#x3001; &#x80DA;&#x6CE1;&#x8D28;&#x91CF;&#x548C;&#x8DB3;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x7684;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x548C;&#x4E19;&#x620A;&#x9178;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;

Reprogramming of differentiated nuclei into a totipotent embryonic state following somatic cell nuclear transfer (SCNT) is not efficient. Previous studies in the hybrid B6D2F1 mouse strain revealed that a transient treatment of the SCNT embryos with the histone deacetylase inhibitor (HDACi) trichostatin A (TSA) significantly enhance the potential of the cloned embryos to develop in vitro and to term. Here, we compare two different SCNT protocols with TSA and explore, for the first time, the effect of another HDACi, valproic acid (VPA), on the in vitro development, blastocyst quality, and full-term development of mouse B6CBAF1 cloned embryos. Rates of blastocyst development in SCNT embryos treated with either 5 nM TSA during and after activation (31.8%) or with 100 nM TSA or 2 mM VPA before and during activation (34.5 and 38.3%, respectively) were clearly superior to those of nontreated SCNT embryos (22.9-25.1%). These increased in vitro development rates of the HDACi-treated embryos were correlated with an increased level of histone H3 lysine 14 acetylation and an improved blastocyst quality, as judged by the increased number of total and ICM cells in comparison to the nontreated embryos (30-35% increase). Treatment of SCNT embryos with TSA or VPA also allowed the obtention of viable cloned mice, whereas none could be produced from untreated SCNT embryos. In conclusion, we have demonstrated for the first time that VPA can improve the in vitro and full-term development of B6CBAF1 SCNT embryos, at a similar level as TSA. Our findings may open new opportunities to improve cloning efficiencies in other mouse strains or species.

Comparison between the effects of valproic acid and trichostatin A on the in vitro development, blastocyst quality, and full-term development of mouse somatic cell nuclear transfer embryos.

Reprogrammation des noyaux diff&eacute;renci&eacute;es dans un &eacute;tat embryonnaire totipotent suite transfert nucl&eacute;aire de cellules somatiques (TNCS) n&#39;est pas efficace. Des &eacute;tudes ant&eacute;rieures chez les hybrides de la souche de souris B6D2F1 a r&eacute;v&eacute;l&eacute; qu&#39;un traitement transitoire des embryons obtenus par TNCS avec l&#39;histone d&eacute;sac&eacute;tylase (HDACi) inhibiteur de la trichostatine A (TSA) consid&eacute;rablement am&eacute;liorer le potentiel des embryons clon&eacute;s pour d&eacute;velopper in vitro et &agrave; terme. Ici, nous comparons des deux protocoles diff&eacute;rents de TNCS avec TSA et Explorer, pour la premi&egrave;re fois, l&#39;effet d&#39;une autre HDACi, l&#39;acide valpro&iuml;que (VPA), sur le d&eacute;veloppement in vitro, la qualit&eacute; du blastocyste, et &agrave; terme d&eacute;veloppement de souris B6CBAF1 clon&eacute; des embryons. Taux de croissance de blastocyste dans les embryons obtenus par TNCS recevant soit 5 nM TSA pendant et apr&egrave;s l&#39;activation (31,8 %) ou avec 100 nM TSA ou 2 mM APV avant et pendant l&#39;activation (34,5 et 38,3 %, respectivement) ont &eacute;t&eacute; nettement sup&eacute;rieures &agrave; celles des embryons obtenus par TNCS non-trait&eacute;es (22,9-25,1 %). Ces taux accru de d&eacute;veloppement in vitro des embryons trait&eacute;s HDACi est en corr&eacute;lation avec un niveau accru de 14 ac&eacute;tylation des histones H3 lysine et une qualit&eacute; am&eacute;lior&eacute;e de blastocyste, si l&#39;on en juge par l&#39;augmentation du nombre de total et les cellules de l&#39;ICM en comparaison avec les embryons non trait&eacute;s (30-35 % d&#39;augmentation). Traitement des embryons obtenus par TNCS avec TSA ou APV a &eacute;galement permis l&#39;obtention d&#39;une souris clon&eacute;e viable, alors qu&#39;aucun pourrait &ecirc;tre produite &agrave; partir des embryons obtenus par TNCS non trait&eacute;es. En conclusion, nous avons d&eacute;montr&eacute; pour la premi&egrave;re fois que l&#39;APV peut am&eacute;liorer le d&eacute;veloppement in vitro et &agrave; terme d&#39;embryons obtenus par TNCS B6CBAF1, &agrave; un niveau semblable comme TSA. Nos r&eacute;sultats peuvent ouvrir de nouvelles perspectives pour am&eacute;liorer l&#39;efficacit&eacute; de clonage dans d&#39;autres souches de souris ou les esp&egrave;ces.

Comparaison entre les effets de l&#39;acide valpro&iuml;que et la trichostatine A sur le d&eacute;veloppement in vitro, qualit&eacute; du blastocyste et &agrave; terme d&eacute;veloppement des embryons de transfert nucl&eacute;aire de cellules somatiques souris.

Eine Anpassung der differenzierten Kerne totipotente embryonalen Zustand nach Kerntransfer somatischer Zellen (SCNT) ist nicht effizient. Fr&uuml;here Studien im Hybrid B6D2F1 Maus Belastung ergab, dass eine vor&uuml;bergehende Behandlung der SCNT Embryonen mit dem Histon Deacetylase Inhibitor (HDACi) Trichostatin A (TSA) deutlich das Potenzial der geklonten Embryonen in vitro zu entwickeln und zu verbessern. Hier wir vergleichen zwei verschiedene SCNT-Protokolle mit TSA und erkunden, zum ersten Mal die Wirkung von anderen HDACi, Valproins&auml;ure (VPA), auf der in-vitro-Entwicklung, Blastozyste-Qualit&auml;t, und endg&uuml;ltigen Entwicklung der Maus B6CBAF1 geklonten Embryonen. Preise der Blastozyste Entwicklung SCNT Embryonen behandelt mit entweder 5 nM TSA w&auml;hrend und nach der Aktivierung (31,8 %) oder mit 100 nM TSA oder 2 mM VPA vor und w&auml;hrend der Aktivierung (34,5 und 38,3 %, beziehungsweise) waren diejenigen von unbehandelten SCNT Embryonen (22,9-25,1 %) deutlich &uuml;berlegen. Diese in-vitro-Entwicklung-Preise der HDACi behandelten Embryonen wurden mit einer erh&ouml;hten Anzahl von Histon H3 Lysin 14 Acetylierung und verbesserte Blastozyste Qualit&auml;t, korreliert, wie durch die erh&ouml;hte Anzahl von Total und ICM-Zellen im Vergleich zu den unbehandelten Embryonen (30-35 % Steigerung) beurteilt. Behandlung SCNT Embryonen mit TSA oder VPA erm&ouml;glichte auch die Obtention lebensf&auml;higen geklonte M&auml;use, w&auml;hrend keiner aus unbehandelten SCNT Embryonen hergestellt werden konnte. Abschlie&szlig;end haben wir zum ersten Mal bewiesen, dass VPA die in vitro und endg&uuml;ltigen Entwicklung B6CBAF1 SCNT Embryonen auf einem &auml;hnlichen Niveau wie TSA verbessern kann. Unsere Ergebnisse k&ouml;nnen neue M&ouml;glichkeiten zur Verbesserung von Klonen Effizienz in anderen Maus-Sorten oder Arten &ouml;ffnen.

Vergleich zwischen den Auswirkungen der Valproins&auml;ure und Trichostatin A auf der in-vitro-Entwicklung, Blastozyste Qualit&auml;t und endg&uuml;ltigen Entwicklung der Maus somatische Kerntransfer Embryonen.

Riprogrammazione dei nuclei differenziati in uno stato embrionale totipotente seguito trasferimento nucleare di cellule somatiche (SCNT) non &egrave; efficiente. Precedenti studi in ibrido ceppo mouse B6D2F1 ha rivelato che un trattamento transitorio degli embrioni con l&#39;istone deacetylase dell&#39;inibitore (notizie) trichostatin SCNT un (TSA) migliorare significativamente il potenziale degli embrioni clonati per sviluppare in vitro e a termine. Qui, noi confrontare due differenti protocolli SCNT con TSA ed esplorare, per la prima volta, l&#39;effetto di un&#39;altra notizie, acido valproico (VPA), sullo sviluppo in vitro, qualit&agrave; di blastocisti, e sviluppo di pieno-termine del mouse B6CBAF1 clonato embrioni. Tassi di sviluppo di blastocisti di embrioni SCNT trattati con entrambi 5 nM TSA durante e dopo l&#39;attivazione (31,8%) o con 100 nM TSA o 2 mM VPA prima e durante l&#39;attivazione (34,5% e 38,3%, rispettivamente) erano chiaramente superiori a quelle degli embrioni SCNT (25,1 22,9%). Questi tassi di maggiore sviluppo in vitro degli embrioni trattati notizie erano correlati con un aumento del livello dell&#39;istone H3 lisina 14 acetilazione e una qualit&agrave; migliorata di blastocisti, a giudicare dal numero aumentato di cellule ICM in confronto gli embrioni (30-35% di aumento) e totale. Trattamento degli embrioni SCNT con TSA o VPA anche consentito l&#39;ottenimento di topi clonati vitali, considerando che nessuno potrebbe essere prodotta da embrioni SCNT non trattati. In conclusione, abbiamo dimostrato per la prima volta che il VPA pu&ograve; migliorare lo sviluppo in vitro e pieno-termine di embrioni B6CBAF1 SCNT, a un livello simile come TSA. I nostri risultati potrebbero aprire nuove opportunit&agrave; per migliorare l&#39;efficienza di clonazione in altre specie o ceppi di topo.

Confronto tra gli effetti dell&#39;acido valproico e trichostatin A sullo sviluppo in vitro, qualit&agrave; di blastocisti e pieno-termine sviluppo degli embrioni di trasferimento nucleare di cellule somatiche del mouse.

&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x306E;&#x6838;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x6B21;&#x306E;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30C8;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DD;&#x80CE;&#x5150;&#x6027;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x306F;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; B6D2F1 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; (HDACi) &#x30C8;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5; &#xFF08;TSA&#xFF09; &#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B; in vitro &#x3067;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x80DA;&#x3068;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB; TSA &#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3001;&#x63A2;&#x691C;&#x3001;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x3001;&#x5225; HDACi&#x3001;&#x30D0;&#x30EB;&#x30D7;&#x30ED;&#x9178; (VPA) in vitro &#x3067;&#x306E;&#x958B;&#x767A;, &#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; B6CBAF1 &#x306E;&#x6E80;&#x671F;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x80DA;&#x3092;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x306E;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B; 5 &#x3067;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x308B; nM TSA &#x4E2D;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; (31.8%) &#x5F8C;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 100 nM TSA &#x307E;&#x305F;&#x306F; 2 mM VPA &#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x8A8D;&#x8A3C;&#x6642;&#x306B; &#xFF08;34.5 &#x3068; 38.3%&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;) &#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x672A;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA; &#xFF08;22.9 25.1 &#xFF05;&#xFF09; &#x306B;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x512A;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x4F53;&#x5916;&#x767A;&#x80B2;&#x7387; HDACi &#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x80DA;&#x306E;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; H3 &#x30EA;&#x30B8;&#x30F3; 14 &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x3001;&#x6539;&#x826F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x3068;&#x672A;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x80DA; (30-35% &#x5897;) &#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066; ICM &#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5224;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x76F8;&#x95A2;&#x304C;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;None &#x304B;&#x3089;&#x672A;&#x51E6;&#x7406;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x3092;&#x4F5C;&#x308A;&#x51FA;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; TSA &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D0;&#x30EB;&#x30D7;&#x30ED;&#x9178;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3082;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x5831;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x521D;&#x3081;&#x3066; VPA TSA &#x3068;&#x4F3C;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E; B6CBAF1 &#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x306E; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x901A;&#x671F;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3084;&#x7A2E;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x4F5C;&#x6210;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x958B;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C8;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3; A in vitro &#x958B;&#x767A;&#x3001;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x80DA;&#x306E;&#x6E80;&#x671F;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x30D0;&#x30EB;&#x30D7;&#x30ED;&#x9178;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;

&#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; (SCNT) &#xB2E4;&#xC74C; totipotent &#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xD575;&#xC758; &#xC7AC;&#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xBE44;&#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; B6D2F1 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; (HDACi) trichostatin&#xC640; SCNT &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; (TSA) &#xD06C;&#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xCCB4; &#xC678; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xC758;&#xC640; &#xC6A9;&#xC5B4;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; TSA&#xC640; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; SCNT &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; HDACi, &#xCCB4; &#xC678; &#xAC1C;&#xBC1C; blastocyst &#xD488;&#xC9C8; valproic &#xC0B0; (VPA)&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD0D0;&#xD5D8; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; b6cbaf1&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xC6A9;&#xC5B4; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC30;&#xC544;. Blastocyst &#xAC1C;&#xBC1C; SCNT &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC911; 5 nM TSA &#xB3D9;&#xC548; &#xBC0F; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; (31.8%) &#xD6C4; &#xB610;&#xB294; 100 nM TSA &#xB610;&#xB294; 2mm VPA &#xC804;&#xC5D0; &#xD558; &#xACE0; &#xC778;&#xC99D; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; (34.5&#xC640; 38.3%, &#xAC01;&#xAC01;) &#xADF8; nontreated SCNT &#xBC30;&#xC544; (22.9 25.1%)&#xC744; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC6B0;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4;. HDACi &#xCE58;&#xB8CC; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xCCB4; &#xC678; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCD1D; &#xBC0F; ICM &#xC140; nontreated &#xBC30;&#xC544; (30-35% &#xC99D;&#xAC00;)&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC99D;&#xAC00; &#xC758;&#xD574; &#xC2EC;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; H3 lysine 14 acetylation blastocyst &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD488;&#xC9C8;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC218;&#xC900;&#xC744;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC544;&#xBB34;&#xB3C4; &#xCE58;&#xB8CC; SCNT &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; TSA &#xB610;&#xB294; VPA SCNT &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; obtention&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC98;&#xC74C; VPA TSA&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; B6CBAF1 SCNT &#xBC30;&#xC544; &#xCCB4; &#xC678; &#xACE0; &#xC804;&#xCCB4; &#xC6A9;&#xC5B4; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAE34;&#xC7A5; &#xB610;&#xB294; &#xC885;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC5F4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Valproic &#xC0B0;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; &#xAC1C;&#xBC1C; blastocyst &#xD488;&#xC9C8;&#xACFC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE30; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; trichostatin A &#xBE44;&#xAD50;.

Reprogramaci&oacute;n de n&uacute;cleos diferenciados en un estado embrionario totipotent despu&eacute;s de la transferencia nuclear de c&eacute;lulas som&aacute;ticas (SCNT) no es eficiente. Estudios previos en el h&iacute;brido B6D2F1 cepa de rat&oacute;n revelaron que un tratamiento transitorio de los embriones de c&eacute;lulas som&aacute;ticas con la histona deacetilasa inhibidor (HDACi) tricostatina un (TSA) mejorar considerablemente el potencial de los embriones clonados para desarrollar in vitro y a t&eacute;rmino. Aqu&iacute;, comparamos dos protocolos diferentes de c&eacute;lulas som&aacute;ticas con TSA y explorar, por primera vez, el efecto de otra HDACi, &aacute;cido valproico (VPA), en el desarrollo in vitro, calidad de blastocisto, y termino desarrollo del rat&oacute;n B6CBAF1 clonado embriones. Las tasas de desarrollo de blastocistos en embriones SCNT trataron con cualquier 5 nM TSA durante y despu&eacute;s de la activaci&oacute;n (31,8%) o con 100 nM TSA o 2 mM VPA antes y durante la activaci&oacute;n (34.5 y 38.3%, respectivamente) fueron claramente superiores a las de embriones de c&eacute;lulas som&aacute;ticas no tratados (22.9-25,1%). Estas tasas de mayor desarrollo in vitro de los embriones tratados con HDACi fueron correlacionadas con un mayor nivel de 14 acetilaci&oacute;n de histona H3 lisina y una calidad mejorada del blastocisto, seg&uacute;n lo juzgado por el aumento del n&uacute;mero de c&eacute;lulas de la ICM en comparaci&oacute;n con los embriones no tratadas (30-35% de aumento) y total. Tratamiento de embriones de c&eacute;lulas som&aacute;ticas con TSA o VPA tambi&eacute;n permiti&oacute; la obtenci&oacute;n de ratones clonados viables, mientras que ninguno podr&iacute;a producirse a partir de embriones de c&eacute;lulas som&aacute;ticas no tratados. En conclusi&oacute;n, hemos demostrado por primera vez que VPA puede mejorar el desarrollo in vitro y termino de embriones B6CBAF1 SCNT, a un nivel similar como TSA. Nuestros resultados pueden abrir nuevas oportunidades para mejorar la eficiencia de clonaci&oacute;n en otras especies o cepas de rat&oacute;n.

Comparaci&oacute;n entre los efectos del &aacute;cido valproico y tricostatina A de desarrollo in vitro, calidad de blastocisto y termino desarrollo de embriones de transferencia nuclear de c&eacute;lulas som&aacute;ticas de rat&oacute;n.

Demecolcine (DEM) &#x4E0E;&#x75C5;&#x7A0B;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x4F7F;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5185;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x6781;&#x4F53; &#xFF08;PB2&#xFF09; &#x7684;&#x6324;&#x538B;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x6458;&#x9664; (IE) &#x623F;&#x4EF7;&#x666E;&#x904D;&#x8F83;&#x4F4E;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x652F;&#x6301;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x540E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;SCNT&#xFF09; &#x662F;&#x53D7;&#x635F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x662F;&#x5426;&#x4E0E; DEM &#x6216;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A; antimitotic&#xFF0C;nocodazole (NOC)&#x3001; &#x77ED;&#x671F;&#x6CBB;&#x7597;&#x63D0;&#x9AD8; IE &#x6548;&#x7387;&#xFF0C;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x6700;&#x5408;&#x9002;&#x7684;&#x65F6;&#x673A;&#x5728;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E2D;&#x6838;&#x8F6C;&#x79FB;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7684; IE &#x53EF;&#x4EE5;&#x5B8C;&#x6210;&#x4F7F;&#x7528; NOC &#x548C; DEM &#x6216; NOC &#x77ED;&#x6CBB;&#x7597;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684; IE &#x7387;&#xFF0C;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x8BC1;&#x660E;&#xFF0C;&#x80FD;&#x5E94;&#x53D8;-&#x9F20;&#x6807;&#x548C;&#x5C71;&#x7F8A;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7269;&#x79CD;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x525C;&#x9664;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x65E2;&#x662F;&#x53EF;&#x9006;&#x7684; antimitotic &#x836F;&#x7269;&#x3001; IE &#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x7ED3;&#x5408; PB2s &#x673A;&#x68B0;&#x6E34;&#x671B;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6C38;&#x4E45;&#x525C;&#x9664;&#x7387;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EA7;&#x751F;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x80DE;&#x8D28;&#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x5C55;&#x5230;&#x56CA;&#x80DA;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5F53;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x91CD;&#x5EFA;&#x4E86;&#x4E4B;&#x524D;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C; antimitotic &#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#xFF0C;&#x5176;&#x4F53;&#x5916;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x80DA;&#x80CE;&#x4EA7;&#x751F;&#x673A;&#x68B0; enucleated &#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Demecolcine-nocodazole &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6458;&#x9664;&#x9F20;&#x6807;&#x548C;&#x5C71;&#x7F8A;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x51C6;&#x5907;&#x3002;

Treatment of pre-activated oocytes with demecolcine (DEM) has been shown to induce the extrusion of all oocyte chromosomes within the second polar body (PB2). However, induced enucleation (IE) rates are generally low and the competence of these cytoplasts to support embryonic development following somatic cell nuclear transfer (SCNT) is impaired. Here, we explored whether short treatments with DEM or another antimitotic, nocodazole (NOC), improve IE efficiency, and determined the most appropriate timing for nuclear transfer in the cytoplasts produced. We show, for the first time, that IE can be accomplished in mouse and goat oocytes using NOC and that short treatments with DEM or NOC result in similar IE rates, which proved to be strain- and species-specific. Because enucleation induced by both antimitotic drugs is reversible, the IE protocol was combined with the mechanical aspiration of PB2s to increase permanent enucleation rates in mouse oocytes. None of the cloned mouse embryos produced from the resultant cytoplasts developed to the blastocyst stage. However, when they were reconstructed prior to the activation and antimitotic treatment, their in vitro embryonic development was similar to that of cloned embryos produced from mechanically-enucleated oocytes.

Demecolcine- and nocodazole-induced enucleation in mouse and goat oocytes for the preparation of recipient cytoplasts in somatic cell nuclear transfer procedures.

Traitement des ovocytes pr&eacute;-activ&eacute; avec d&eacute;molcine (DEM) a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; pour induire l&#39;extrusion de tous les chromosomes d&#39;ovocytes au sein du second globule polaire (PB2). Cependant, les taux induit une &eacute;nucl&eacute;ation (IE) sont g&eacute;n&eacute;ralement faibles et la comp&eacute;tence de ces cytoplasts pour soutenir le d&eacute;veloppement embryonnaire apr&egrave;s transfert nucl&eacute;aire de cellules somatiques (TNCS) est alt&eacute;r&eacute;e. Ici, nous avons explor&eacute; si les traitements courts avec DEM ou d&#39;une autre antimitotiques, nocodazole (CNP), am&eacute;liorer l&#39;efficacit&eacute; de l&#39;IE et d&eacute;termin&eacute; que le moment plus appropri&eacute; pour le transfert de noyaux dans les cytoplasts produits. Nous montrons que, pour la premi&egrave;re fois, que IE peut &ecirc;tre accomplie dans des ovocytes de souris et ch&egrave;vre &agrave; l&#39;aide de CNO et que des traitements courts &agrave; DEM ou CNP entra&icirc;ne des taux similaires de IE, qui s&#39;est av&eacute;r&eacute; pour &ecirc;tre la souche - et sp&eacute;cifique &agrave; l&#39;esp&egrave;ce. Parce que l&#39;&eacute;nucl&eacute;ation induite par fois drogues antimitotiques est r&eacute;versible, le protocole de l&#39;IE a &eacute;t&eacute; combin&eacute; avec l&#39;aspiration m&eacute;canique des PB2s d&#39;augmenter les taux d&#39;&eacute;nucl&eacute;ation permanente dans des ovocytes de souris. Aucun des embryons clon&eacute;s souris produits &agrave; partir des r&eacute;sultantes cytoplasts atteint le stade de blastocyste. Cependant, quand ils ont &eacute;t&eacute; reconstruits avant l&#39;activation et le traitement antimitotique, leur d&eacute;veloppement embryonnaire in vitro a &eacute;t&eacute; similaire &agrave; celle des embryons clon&eacute;s produites d&#39;ovocytes &eacute;nucl&eacute;&eacute; m&eacute;caniquement.

D&eacute;molcine-nocodazole induite et &eacute;nucl&eacute;ation dans des ovocytes de souris et de la ch&egrave;vre pour la pr&eacute;paration des cytoplasts b&eacute;n&eacute;ficiaires dans les proc&eacute;dures de transfert nucl&eacute;aire de cellules somatiques.

Behandlung von voraktivierte Eizellen mit Demecolcine (DEM) hat sich die Extrusion alle Chromosomen der Eizelle im zweiten Polar Body (PB2) induzieren gezeigt. Jedoch induzierten Enukleations (IE) Preise sind im Allgemeinen gering und die Kompetenz der diese Cytoplasts zur Unterst&uuml;tzung der Entwicklung des Embryos nach Kerntransfer somatischer Zellen (SCNT) ist beeintr&auml;chtigt. Hier untersucht wir, ob kurze Behandlungen mit DEM oder einem anderen antimitotic, Nocodazole (NOC), IE-Effizienz verbessern und festgestellt hat, dass der geeignetste Zeitpunkt f&uuml;r Kerntransfer in der Cytoplasts produziert. Wir zeigen erstmals, dass IE in Maus und Ziege Eizellen mit NOC und dass kurze Behandlungen mit DEM oder NOC &auml;hnliche IE-Preise, die erwies f&uuml;hren sich als Stamm - versierter und artspezifische sein kann. Da Enukleations, die durch waren beide antimitotic Drogen ist reversibel, das IE-Protokoll wurde zusammen mit der mechanischen Aspiration von PB2s, permanente Enukleations Preise in Maus Eizellen zu erh&ouml;hen. Keiner der geklonten Maus Embryonen produziert aus den resultierenden Cytoplasts entwickelt, um das Blastozystenstadium. Allerdings, wenn sie vor der Aktivierung und antimitotic Behandlung rekonstruiert wurden, war ihre in-vitro-Embryonalentwicklung &auml;hnlich der geklonten Embryonen aus mechanisch enucleated Eizellen produziert.

Demecolcine - und Nocodazole-induzierte Enukleations in Maus und Ziege Eizellen f&uuml;r die Vorbereitung der Empf&auml;nger Cytoplasts in somatische Kerntransfer Verfahren.

Trattamento degli ovociti pre-attivati con demecolcine (DEM) ha dimostrato di indurre l&#39;estrusione di tutti i cromosomi degli ovociti all&#39;interno del secondo corpo polare (PB2). Tuttavia, tassi di enucleazione indotta (IE) sono generalmente bassi e la competenza di questi citoplasti per supportare lo sviluppo embrionale successivo trasferimento nucleare di cellule somatiche (SCNT) &egrave; compromessa. Qui, abbiamo esplorato se brevi trattamenti con DEM o un altro antimitotici, nocodazole (NOC), migliorare l&#39;efficienza di IE e determinato che i tempi pi&ugrave; appropriati per trasferimento nucleare in citoplasti i prodotto. Vi mostriamo, per la prima volta, che IE pu&ograve; essere compiuta in mouse e capra ovociti tramite NOC e che trattamenti brevi con DEM o NOC risultano simili tassi di IE, che ha dimostrato di essere ceppo - e specie-specifici. Perch&eacute; enucleazione indotta da entrambi farmaci antimitotici &egrave; reversibile, il protocollo di IE &egrave; stato combinato con l&#39;aspirazione meccanica di PB2s per aumentare i tassi di enucleazione permanente nei oocytes del mouse. Nessuno degli embrioni clonati mouse prodotti dalla risultante citoplasti sviluppato allo stadio di blastocisti. Tuttavia, quando essi sono stati ricostruiti prima dell&#39;attivazione e trattamento antimitotici, loro sviluppo embrionale in vitro era simile a quella di embrioni clonati prodotti da ovociti enucleato meccanicamente.

Enucleazione Demecolcine - e nocodazole-indotta in mouse e capra ovociti per la preparazione di citoplasti destinatari nelle procedure di trasferimento nucleare di cellule somatiche.

&#x6CBB;&#x7642;&#x30C7;&#x30E1;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30F3; &#xFF08;DEM&#xFF09; &#x3068;&#x30D3;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D7;&#x30EC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6975;&#x4F53; (PB2) &#x5185;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x5375;&#x5B50;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x62BC;&#x51FA;&#x3057;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6458;&#x51FA; &#xFF08;IE&#xFF09; &#x6599;&#x91D1;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x640D;&#x306A;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x77ED;&#x3044;&#x6CBB;&#x7642; DEM &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5225;&#x306E;&#x6297;&#x304C;&#x3093;&#x5264;&#x3001;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x30CE;&#x30B3;&#x30C0;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB; (NOC) &#x3067; IE &#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x5316;&#x3068;&#x751F;&#x7523;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x6838;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x3001;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x3001;IE NOC &#x3068;&#x3072;&#x305A;&#x307F; - &#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E; IE &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x77ED;&#x3044;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5; DEM &#x3084; NOC &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E4;&#x30AE;&#x306E;&#x5375;&#x5B50;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x7A2E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x773C;&#x7403;&#x6458;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x4E21;&#x65B9;&#x6297;&#x304C;&#x3093;&#x5264;&#x85AC;&#x306F;&#x53EF;&#x9006;&#x3001;IE &#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6C38;&#x4E45;&#x7684;&#x306A;&#x773C;&#x7403;&#x6458;&#x51FA;&#x7387;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B; PB2s &#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x5438;&#x5F15;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;None &#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x306E;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x6297;&#x304C;&#x3093;&#x5264;&#x6CBB;&#x7642;&#x524D;&#x306B;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x4F53;&#x5916;&#x80DA;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x80DA;&#x304B;&#x3089;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306B;&#x9664;&#x6838;&#x5375;&#x5B50;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x30C7;&#x30E1;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30F3;&#x8A98;&#x8D77;&#x3068; nocodazole &#x304C;&#x53D6;&#x308A;&#x5916;&#x3057;&#x773C;&#x7403;&#x6458;&#x51FA;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E4;&#x30AE;&#x306E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x624B;&#x9806;&#x306E;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3002;

Demecolcine (DEM)&#xC640; &#xC8FC;&#xBB38;&#xC790; oocytes &#xCE58;&#xB8CC; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xADF9; &#xBCF8;&#xBB38; (PB2) &#xB0B4; &#xBAA8;&#xB4E0; oocyte &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC758; &#xB3CC;&#xCD9C;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC720;&#xB3C4; enucleation (IE) &#xC694;&#xAE08;&#xC740; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; &#xACE0; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; (SCNT)&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBC30;&#xC544; &#xBC1C;&#xB2EC;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; cytoplasts&#xC758; &#xC5ED;&#xB7C9;&#xC740; &#xC7A5;&#xC560;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; DEM &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; antimitotic, nocodazole (NOC)&#xC640; &#xC9E7;&#xC740; &#xCE58;&#xB8CC; IE &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; cytoplasts &#xD575; &#xC774;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xACB0;&#xC815; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD0D0;&#xD5D8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; IE NOC&#xC640; DEM &#xB610;&#xB294; NOC&#xC640; &#xC9E7;&#xC740; &#xCE58;&#xB8CC; &#xAC83; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;-&#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; IE &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC640; &#xC5FC;&#xC18C; oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xC591; &#xBC0F; &#xC885;&#xC758; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Enucleation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB450; antimitotic &#xC57D;&#xBB3C;&#xC740; &#xAC00;&#xC5ED;, IE &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC601;&#xAD6C; enucleation &#xC18D;&#xB3C4; &#xB192;&#xC774;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; pb2s&#xC758; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD3EC;&#xBD80;&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC5C6;&#xC74C; &#xACB0;&#xACFC; cytoplasts&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544; blastocyst &#xB2E8;&#xACC4;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; antimitotic &#xCE58;&#xB8CC; &#xC804;&#xC5D0; &#xC7AC;&#xAC74; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xC544; &#xBC1C;&#xB2EC;&#xC740; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; enucleated oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C;.

Demecolcine &#xBC0F; nocodazole &#xC720;&#xB3C4; enucleation &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; &#xC808;&#xCC28;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; cytoplasts&#xC758; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC640; &#xC5FC;&#xC18C; oocytes&#xC5D0;&#xC11C;.

Tratamiento de ovocitos pre-activado con demecolcine (DEM) se ha demostrado para inducir la extrusi&oacute;n de todos los cromosomas del ovocito en el segundo cuerpo polar (PB2). Sin embargo, tipos de enucleaci&oacute;n inducido (IE) son generalmente bajos y la competencia de estos cytoplasts para apoyar el desarrollo embrionario, despu&eacute;s de la transferencia nuclear de c&eacute;lulas som&aacute;ticas (SCNT) se deteriora. Aqu&iacute;, exploramos si tratamientos cortos con DEM u otro antimit&oacute;tica, nocodazole (NOC), mejoran la eficiencia de la IE y determinaron que el momento m&aacute;s apropiado para la transferencia nuclear en los cytoplasts producido. Nos muestran, por primera vez, que IE puede ser realizado en ovocitos de rat&oacute;n y cabra usando NOC y que tratamientos cortos con DEM o NOC como resultado tasas similares de IE, que demostr&oacute; para ser tensi&oacute;n - y propios de cada especie. Porque enucleaci&oacute;n inducida por tanto droga antimit&oacute;tica es reversible, el protocolo de la IE se combin&oacute; con la aspiraci&oacute;n mec&aacute;nica de PB2s de aumentar los &iacute;ndices de la enucleaci&oacute;n permanente en ovocitos de rat&oacute;n. Ninguno de los embriones de rat&oacute;n clonado producidos a partir de las cytoplasts resultantes se convirti&oacute; a la fase de blastocisto. Sin embargo, cuando se reconstruyeron antes de la activaci&oacute;n y el tratamiento antimit&oacute;tica, su desarrollo embrionario in vitro fue similar a la de embriones clonados producidos de ovocitos anucleadas mec&aacute;nicamente.

Demecolcine y nocodazole-inducida enucleaci&oacute;n en ovocitos de rat&oacute;n y cabra para la preparaci&oacute;n de receptores cytoplasts en procedimientos de transferencia nuclear de c&eacute;lulas som&aacute;ticas.

&#x9F20;&#x6807;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;SCNT&#xFF09; &#x7ECF;&#x5E38;&#x7531;&#x673A;&#x68B0;&#x6458;&#x9664; &#xFF08;&#x6211;&#xFF09;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x6602;&#x8D35;&#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#x548C;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x5FAE;&#x64CD;&#x4F5C;&#x6280;&#x80FD;&#x521B;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7F16;&#x5199;&#x3002;&#x6216;&#x8005;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x5316;&#x5B66;&#x8F85;&#x52A9; &#xFF08;AE&#xFF09; &#x6216;&#x5728;&#x6280;&#x672F;&#x4E0A;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x8BF1;&#x5BFC; (IE) &#x6458;&#x9664;&#x65B9;&#x6CD5; enucleated &#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x80FD;&#x529B;&#x751F;&#x6210;&#x7531;&#x6211;&#x3001; AE &#x548C; IE &#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53BB;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4E19;&#x620A;&#x9178;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; H3 &#x8D56;&#x6C28;&#x9178; 14 &#x8DDF;&#x540C;&#x6837;&#x8FC5;&#x901F;&#x548C;&#x5F7B;&#x5E95;&#x7684; re-acetylation &#x540E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x5375;&#x4E18;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x6CE8;&#x5165;&#x6211;&#x548C; AE &#x80DE;&#x8D28;&#x53EF;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x53D1;&#x751F;&#x5728; IE &#x80DE;&#x8D28;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F83;&#x4F4E;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x6B67;&#xFF0C;&#x751F;&#x6210;&#x4ECE;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x4E09;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x5C55;&#x6210;&#x56CA;&#x80DA;&#x7684;&#x5F53;&#x91CF;&#x7684;&#x603B;&#x548C;&#x5185;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x79EF;&#x5E73;&#x5747;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7F16;&#x53F7;&#xFF0C;&#x548C;&#x80DA;&#x6CE1;&#x5F62;&#x6210;&#x4E0E;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884D;&#x751F;&#x7684;&#x6BD4;&#x7387;&#x8F83;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7FA4;&#x4F53;&#x3002;&#x4ECE;&#x6211;&#x5236;&#x4F5C;&#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x548C; AE &#x80DE;&#x8D28;&#x663E;&#x793A;&#x7B49;&#x6548;&#x7684;&#x6BD4;&#x7387;&#x8DB3;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x5B50;&#x5973;&#x65E0;&#x6CD5;&#x83B7;&#x5F97;&#x4ECE; IE &#x7EC4;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; IE &#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x80FD;&#x529B;&#x8F83;&#x4F4E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x9F20;&#x6807; SCNT &#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;AE &#x7684;&#x7528;&#x5904;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x66FF;&#x4EE3;&#x6211;&#x3002;AE &#x53EF;&#x4EE5;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53BB;&#x548C;&#x907F;&#x514D;&#x9700;&#x8981;&#x6602;&#x8D35;&#x7684;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5149;&#x5B66;&#x6216;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x7834;&#x574F;&#x6027; Hoechst &#x67D3;&#x8272;&#x548C;&#x7167;&#x5C04;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x9700;&#x8981;&#x5728;&#x6211;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002; you.v&#x3002;

&#x5BF9;&#x9F20;&#x6807;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x6F5C;&#x529B;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x6458;&#x9664;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5F71;&#x54CD;&#x514B;&#x9686;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E0E;&#x4E19;&#x620A;&#x9178;&#x94A0;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

Mouse recipient cytoplasts for somatic cell nuclear transfer (SCNT) are routinely prepared by mechanical enucleation (ME), an invasive procedure that requires expensive equipment and considerable micromanipulation skills. Alternatively, oocytes can be enucleated using chemically assisted (AE) or chemically induced (IE) enucleation methods that are technically simple. In this study, we compared the reprogramming potential and developmental capacity of cloned embryos generated by ME, AE, and IE procedures and treated with the histone deacetylase inhibitor valproic acid. A rapid and almost complete deacetylation of histone H3 lysine 14 in the somatic nucleus followed by an equally rapid and complete re-acetylation after activation was observed after the injection of a cumulus cell nucleus into ME and AE cytoplasts. In contrast, histone deacetylation occurred at a much lower level in IE cytoplasts. Despite these differences, the cloned embryos generated from the three types of cytoplasts developed into blastocysts of equivalent total and inner cell mass mean cell numbers, and the rates of blastocyst formation and embryonic stem cell derivation were similar among the three groups. The cloned embryos produced from ME and AE cytoplasts showed an equivalent rate of full-term development, but no offspring could be obtained from the IE group, suggesting a lower reprogramming capacity of IE cytoplasts. Our results demonstrate the usefulness of AE in mouse SCNT procedures, as an alternative to ME. AE can facilitate oocyte enucleation and avoid the need for expensive microscope optics, or for potentially damaging Hoechst staining and u.v. irradiation, normally required in ME procedures.

Effect of the enucleation procedure on the reprogramming potential and developmental capacity of mouse cloned embryos treated with valproic acid.

Cytoplasts b&eacute;n&eacute;ficiaires de souris pour transfert nucl&eacute;aire de cellules somatiques (TNCS) sont normalement r&eacute;dig&eacute;es par &eacute;nucl&eacute;ation m&eacute;canique (moi), une proc&eacute;dure invasive qui n&eacute;cessite des &eacute;quipements co&ucirc;teux et les comp&eacute;tences de micromanipulation consid&eacute;rable. Alternativement, les ovocytes peuvent &ecirc;tre &eacute;nucl&eacute;&eacute;s chimiquement assist&eacute;e (AE) ou induites chimiquement m&eacute;thodes d&#39;&eacute;nucl&eacute;ation (IE) qui sont techniquement simples. Dans cette &eacute;tude, nous avons compar&eacute; la reprogrammation des capacit&eacute;s potentielles et le d&eacute;veloppementale d&#39;embryons clon&eacute;s g&eacute;n&eacute;r&eacute;s par moi, AE et IE proc&eacute;dures et traitement avec l&#39;acide valpro&iuml;que histone deacetylase inhibiteur. Une d&eacute;sac&eacute;tylation rapide et presque compl&egrave;te de la lysine de H3 histone 14 dans le noyau somatique suivie d&#39;une re-acetylation tout aussi rapide et compl&egrave;te apr&egrave;s l&#39;activation a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e apr&egrave;s l&#39;injection d&#39;un noyau de cellules de cumulus dans moi et AE cytoplasts. En revanche, d&eacute;sac&eacute;tylation des histones est survenu &agrave; un niveau bien inf&eacute;rieur en cytoplasts IE. Malgr&eacute; ces diff&eacute;rences, les embryons clon&eacute;s produits des trois types de cytoplasts d&eacute;veloppent en blastocystes total &eacute;quivalent et cellulaire interne nombre de masse moyenne de cellules, et les taux de formation du blastocyste et d&eacute;rivation de cellules souches embryonnaires ont &eacute;t&eacute; similaires dans les trois groupes. Les embryons clon&eacute;s provenant de moi et cytoplasts AE a montr&eacute; un taux &eacute;quivalent de d&eacute;veloppement &agrave; terme, mais aucune prog&eacute;niture ne pouvait &ecirc;tre obtenue &agrave; partir du groupe IE, ce qui sugg&egrave;re une faible capacit&eacute; de reprogrammation des cytoplasts IE. Nos r&eacute;sultats d&eacute;montrent l&#39;utilit&eacute; de l&#39;AE dans les proc&eacute;dures de souris TNCS, comme alternative &agrave; moi. AE peut faciliter l&#39;&eacute;nucl&eacute;ation de l&#39;ovocyte et &eacute;viter la n&eacute;cessit&eacute; d&#39;optique du statif co&ucirc;teux, ou potentiellement dangereux Hoechst coloration et you.v. ionis&eacute;s et normalement requis en moi des proc&eacute;dures.

Effet de la proc&eacute;dure d&#39;&eacute;nucl&eacute;ation sur la capacit&eacute; potentielle et d&eacute;veloppement reprogrammation de souris clon&eacute;es embryons trait&eacute;s avec l&#39;acide valpro&iuml;que.

Maus Empf&auml;nger Cytoplasts f&uuml;r Kerntransfer somatischer Zellen (SCNT) werden routinem&auml;&szlig;ig von mechanischen Enukleations (ME), ein invasives Verfahren zubereitet, die teure Ausr&uuml;stung und erhebliche Mikromanipulation F&auml;higkeiten erfordert. Alternativ k&ouml;nnen Eizellen mit chemisch unterst&uuml;tzte (AE) oder chemisch induzierte (IE)-Enukleations-Methoden, die technisch einfach enucleated werden. In dieser Studie verglichen wir die Neuprogrammierung potenzielle und Entwicklungsst&ouml;rungen Kapazit&auml;t der geklonten Embryonen von ME, AE und IE Verfahren generiert und mit der Histon-Deacetylase Inhibitor Valproins&auml;ure behandelt. Eine rasche und fast vollst&auml;ndige Deacetylierung von Histon H3 Lysin 14 im somatische Zellkern folgte eine ebenso rasche und vollst&auml;ndige Re-acetylation nach der Aktivierung wurde nach der Injektion von einer Cumulus-Zellkern in ME und AE Cytoplasts beobachtet werden. Im Gegensatz dazu trat Histon-Deacetylierung auf einem viel niedrigeren Niveau in IE Cytoplasts. Trotz dieser Unterschiede die geklonten Embryonen erzeugt von den drei Typen der Cytoplasts entwickelte sich zu Blastozysten entspricht insgesamt und innere Zelle Masse mittlere Zelle Zahlen und die Blastozyste Formation und embryonalen Stammzellen Ableitung waren zwischen den drei Gruppen vergleichbar. Die geklonten Embryonen produziert von mir und AE Cytoplasts zeigte eine entsprechende Zinssatz der endg&uuml;ltigen Entwicklung, aber keine Nachkommen konnte der IE-Gruppe, schl&auml;gt eine niedrigere Neuprogrammierung Speicherkapazit&auml;t von IE Cytoplasts entnommen werden. Unsere Ergebnisse zeigen die N&uuml;tzlichkeit der AE Maus SCNT Verfahren, als Alternative zu mir. AE Eizelle Enukleations erleichtern und die Notwendigkeit f&uuml;r teure Mikroskopoptik oder potentiell sch&auml;dlichen Bestrahlung der Hoechst F&auml;rbe- und you.v., normalerweise ben&ouml;tigt, in mir zu vermeiden kann Verfahren.

Wirkung des Enukleations Verfahrens die Neuprogrammierung potenzielle und Entwicklungsst&ouml;rungen Kapazit&auml;t der Maus geklonten Embryonen mit Valproins&auml;ure behandelt.

Destinatari citoplasti mouse per trasferimento nucleare di cellule somatiche (SCNT) sono ordinariamente preparate da enucleazione meccanico (ME), una procedura invasiva che richiede attrezzature costose e abilit&agrave; considerevole micromanipolazione. In alternativa, gli ovociti possono essere enucleati usando chimicamente assistita (AE) o chimicamente indotte (IE) enucleazione metodi che sono tecnicamente semplice. In questo studio abbiamo confrontato la riprogrammazione capacit&agrave; potenziali e per lo sviluppo di embrioni clonati generati da ME, AE e IE procedure e trattati con l&#39;acido valproico istone deacetylase dell&#39;inibitore. Un rapido e quasi completo deacetilazione della lisina, H3 istone 14 nel nucleo somatico seguita da un&#39;altrettanto rapida e completa re-acetylation dopo l&#39;attivazione &egrave; stata osservata dopo l&#39;iniezione di un nucleo cellulare cumulus in citoplasti mi e AE. Al contrario, deacetilazione istoni si &egrave; verificato a un livello molto pi&ugrave; basso in citoplasti IE. Nonostante queste differenze, gli embrioni clonati generati da tre tipi di citoplasti sviluppano in blastocisti di equivalente totale e cella interiore numeri di cellulare mass media, e il tasso di formazione di blastocisti e derivazione di cellule staminali embrionali sono stati simile tra i tre gruppi. Gli embrioni clonati prodotta da ME e citoplasti AE ha mostrato un tasso equivalente di pieno-termine sviluppo, ma prole non potrebbe essere ottenuta dal gruppo IE, suggerendo una minore capacit&agrave; di riprogrammazione di citoplasti IE. I nostri risultati dimostrano l&#39;utilit&agrave; di AE in procedure SCNT mouse, come alternativa a me. AE pu&ograve; facilitare l&#39;enucleazione degli ovociti ed evitare la necessit&agrave; per ottica microscopio costoso, o potenzialmente dannoso Hoechst colorazione e u.v. irradiazione, normalmente necessaria in ME le procedure.

Effetto della procedura di enucleazione sulla riprogrammazione capacit&agrave; potenziali e dello sviluppo del mouse clonato embrioni trattati con acido valproico.

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x79FB;&#x690D;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x65E5;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x6458;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; &#xFF08;&#x79C1;&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x306A;&#x6A5F;&#x5668;&#x3068;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30CB;&#x30D4;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B9;&#x30AD;&#x30EB;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x4FB5;&#x8972;&#x3092;&#x7528;&#x610F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8; (AE) &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x306B;&#x7C21;&#x5358;&#x3067;&#x3059;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x8A98;&#x5C0E; (IE) &#x773C;&#x7403;&#x6458;&#x51FA;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x9664;&#x6838;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x80DA;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x3068;&#x767A;&#x9054;&#x80FD;&#x529B;&#x79C1;&#x306E; AE &#x3068; IE &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30D0;&#x30EB;&#x30D7;&#x30ED;&#x9178;&#x3068;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x3092;&#x5747;&#x7B49;&#x306B;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A; re-acetylation &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x307B;&#x307C;&#x5B8C;&#x5168;&#x5316;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; H3 &#x30EA;&#x30B8;&#x30F3; 14 &#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x306E;&#x79C1;&#x3068; AE &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x7A4D;&#x96F2;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x306E;&#x6CE8;&#x5165;&#x5F8C;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F; IE &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E; 3 &#x7A2E;&#x985E;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x80DA;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x3068;&#x5185;&#x90E8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x306B;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5E73;&#x5747;&#x30BB;&#x30EB;&#x756A;&#x53F7;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x3001;&#x80DA;&#x76E4;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x8A98;&#x5C0E;&#x7387; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x9593;&#x3067;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x80DA;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3057; AE &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x901A;&#x671F;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x7B49;&#x4FA1;&#x7387;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x5B50;&#x5B6B; IE &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D7; &#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x4F4E;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;IE &#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304B;&#x3089;&#x53D6;&#x5F97;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x624B;&#x9806;&#x3067;&#x308F;&#x305F;&#x3057;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3068;&#x3057;&#x3066; AE &#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AE &#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x5375;&#x5B50;&#x6838;&#x51FA;&#x8853;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x306A;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5149;&#x5B66;&#x7528;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5371;&#x967A;&#x306E;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x67D3;&#x8272;&#x3001;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x7167;&#x5C04;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x79C1;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; &#x30DD;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x3068;&#x767A;&#x9054;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x773C;&#x7403;&#x6458;&#x51FA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x306E;&#x30D0;&#x30EB;&#x30D7;&#x30ED;&#x9178;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x80DA;&#x3092;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC774;&#xC2DD; (SCNT)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; cytoplasts &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC815;&#xAE30;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; enucleation (&#xB0A0;), &#xACE0;&#xAC00;&#xC758; &#xC7A5;&#xBE44; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; micromanipulation &#xAE30;&#xC220;&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xCE68;&#xB7B5; &#xC801; &#xC808;&#xCC28;&#xB97C; &#xC900;&#xBE44; &#xD558;&#xB294;. &#xB610;&#xB294; oocytes &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xBCF4;&#xC870; (AE) &#xB610;&#xB294; &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; (IE) enucleation &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAE30;&#xC220;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xB2E8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; enucleated &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xACFC; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xC808;&#xCC28; &#xB098;, AE, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; IE&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xBC0F; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; valproic &#xC0B0; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xBE44;&#xAD50;. &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xAC70;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; deacetylation &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; H3 lysine 14 &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xD575;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xD6C4; &#xB3D9;&#xC77C; &#xD558; &#xAC8C; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xC644;&#xBCBD; &#xD55C; re-acetylation &#xB4A4;&#xC5D0; &#xC800;&#xC640; AE cytoplasts &#xC801; &#xC6B4; &#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xC8FC;&#xC785; &#xD6C4; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylation IE cytoplasts&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC720;&#xD615;&#xC758; cytoplasts&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544; blastocysts &#xD574;&#xB2F9; &#xCD1D;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300;&#xB7C9; &#xD3C9;&#xADE0; &#xC140; &#xC22B;&#xC790; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xACFC; blastocyst &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xB798;&#xC758; &#xC138; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC0F; AE cytoplasts&#xB97C; &#xD574;&#xB2F9; &#xC804;&#xCCB4; &#xC6A9;&#xC5B4; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC9C0;&#xB9CC; IE cytoplasts&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xC81C;&#xC548; IE &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5C6;&#xB294; &#xC790;&#xC190;&#xC744; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB098;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xB300;&#xC2E0; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; SCNT &#xC808;&#xCC28;&#xC5D0;&#xC11C; AE&#xC758; &#xC720;&#xC6A9;&#xC131; &#xC785;&#xC99D; AE oocyte enucleation&#xB97C; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558; &#xACE0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC190;&#xC0C1;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; Hoechst &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC774; &#xC9C0; &#xACE0; you.v. &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;, &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0B4;&#xAC8C; &#xD544;&#xC694; &#xB610;&#xB294; &#xBE44;&#xC2FC; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAD11;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xD53C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC808;&#xCC28;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; &#xBC0F; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC6A9;&#xB7C9; enucleation &#xC808;&#xCC28;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC30;&#xC544; valproic &#xC0B0; &#xC131; &#xCE58;&#xB8CC;.

Article	Year
Antimitotic treatments for chemically assisted oocyte enucleation in nuclear transfer procedures. Cloning and stem cells\| PubMed ID: 19226218	2009
Comparison between the effects of valproic acid and trichostatin A on the in vitro development, blastocyst quality, and full-term development of mouse somatic cell nuclear transfer embryos. Cellular reprogramming\| PubMed ID: 20698782	2010
Demecolcine- and nocodazole-induced enucleation in mouse and goat oocytes for the preparation of recipient cytoplasts in somatic cell nuclear transfer procedures. Theriogenology\| PubMed ID: 21074837	2011
Effect of the enucleation procedure on the reprogramming potential and developmental capacity of mouse cloned embryos treated with valproic acid. Reproduction (Cambridge, England)\| PubMed ID: 21444624	2011

Nuno Costa-Borges

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