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Method for the Isolation and Identification of mRNAs, microRNAs and Protein Components of Ribonucleoprotein Complexes from Cell Extracts using RIP-Chip

As a result of the development of high-throughput sequencing and efficient microarray analysis, global gene expression analysis has become an easy and ...

University of Missouri

&#x5373; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x5546;&#x4E1A;&#x60EF;&#x4F8B;) &#x8C03;&#x8282; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x5546;&#x4E1A;&#x60EF;&#x4F8B;&#x534F;&#x8C03;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8C03;&#x8282;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5171;&#x4EAB;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x5982;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;-uridylate-&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x5143;&#x7D20; &#xFF08;&#x963F;&#x745E;&#x65AF;&#xFF09; 3&#39; &#x975E;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x533A; &#xFF08;&#x7F16;&#x7801;&#xFF09; &#x7684; mRNA &#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x529F;&#x80FD;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x5546;&#x4E1A;&#x60EF;&#x4F8B;&#x73E5; posttranscriptionally &#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86; IL 4&#x3001; IL-13 &#x548C;&#x5176;&#x4ED6; Th2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x9650;&#x5236;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x662F;&#x8F74;&#x627F;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;Th2 &#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x662F;&#x73E5;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5176;&#x5750;&#x6807;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x540E;&#x6C34;&#x5E73;&#x8C03;&#x63A7; Th2 &#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x5728;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x523A;&#x6FC0;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 mRNA &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 mRNA &#x534A;&#x8870;&#x671F;&#x589E;&#x52A0;&#x540E; restimulation Jurkat T &#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E2D;&#x3001; &#x5728;&#x4EBA;&#x7684;&#x8BB0;&#x5FC6;&#x548C; Th2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; Th2 &#x503E;&#x659C;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x73E5;&#x5C06;&#x4E0E;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 &#x4E2D;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x6C89;&#x6DC0;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x7684;&#x4E0B;&#x62C9;&#x5217;&#x8868;&#x4E2D;&#x5316;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x73E5;&#x4E13;&#x95E8;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5176; 3&#39;UTR&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x548C;&#x589E;&#x76CA;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x73E5;&#x662F;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 mRNA &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x523A;&#x6FC0;&#x589E;&#x52A0;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x89E3;&#x548C;&#x5B83;&#x6B63;&#x9762;&#x5730;&#x5F71;&#x54CD;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 mRNA &#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#xFF0C;&#x4E0E; Th2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5E76;&#x884C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x73E5;&#x9A71;&#x52A8;&#x8F6C;&#x5F55;&#x540E;&#x6C34;&#x5E73;&#x63A7;&#x5236;&#x626E;&#x6F14;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x6548;&#x5E94;&#x529F;&#x80FD;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x73E5;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; Th2 &#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x7406;&#x89E3;&#x53EF;&#x80FD;&#x6539;&#x53D8;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x54EE;&#x5598;&#x60A3;&#x8005;&#x6C14;&#x9053;&#x708E;&#x75C7;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

&#x7531; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x73E5;&#x534F;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 &#x548C; Th2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;

The posttranscriptional mechanisms whereby RNA-binding proteins (RBPs) regulate T cell differentiation remain unclear. RBPs can coordinately regulate the expression of functionally related genes via binding to shared regulatory sequences, such as the adenylate-uridylate-rich elements (AREs) present in the 3' untranslated region (UTR) of mRNA. The RBP HuR posttranscriptionally regulates IL-4, IL-13, and other Th2 cell-restricted transcripts. We hypothesized that the ARE-bearing GATA-3 gene, a critical regulator of Th2 polarization, is under HuR control as part of its coordinate posttranscriptional regulation of the Th2 program. We report that in parallel with stimulus-induced increase in GATA-3 mRNA and protein levels, GATA-3 mRNA half-life is increased after restimulation in the human T cell line Jurkat, in human memory and Th2 cells, and in murine Th2-skewed cells. We demonstrate by immunoprecipitation of ribonucleoprotein complexes that HuR associates with the GATA-3 endogenous transcript in human T cells and found, using biotin pulldown assay, that HuR specifically interacts with its 3'UTR. Using both loss-of-function and gain-of-function approaches in vitro and in animal models, we show that HuR is a critical mediator of stimulus-induced increase in GATA-3 mRNA and protein expression and that it positively influences GATA-3 mRNA turnover, in parallel with selective promotion of Th2 cytokine overexpression. These results suggest that HuR-driven posttranscriptional control plays a significant role in T cell development and effector function in both murine and human systems. A better understanding of HuR-mediated control of Th2 polarization may have utility in altering allergic airway inflammation in human asthmatic patients.

Coordinate regulation of GATA-3 and Th2 cytokine gene expression by the RNA-binding protein HuR.

Les m&eacute;canismes post-transcriptionnelle par lequel les prot&eacute;ines de liaison &agrave; l&#39;ARN (pratiques commerciales restrictives) r&eacute;glementent la diff&eacute;renciation des cellules T demeurent incertains. Pratiques commerciales restrictives peuvent coordonner r&eacute;gulent l&#39;expression de g&egrave;nes fonctionnellement li&eacute;s par la liaison &agrave; des s&eacute;quences r&eacute;gulatrices partag&eacute;es, telles que les &eacute;l&eacute;ments de l&#39;ad&eacute;nylate-uridylate-rich (AREs) pr&eacute;sents dans la r&eacute;gion 3&#39; non traduite (UTR) de l&#39;ARNm. Le HuR RBP r&eacute;gule posttranscriptionally IL-4, IL-13 et autres les transcriptions restreints aux cellules Th2. Nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que le g&egrave;ne sont porteuses GATA-3, un r&eacute;gulateur critique de polarisation Th2, est sous contr&ocirc;le de HuR dans le cadre de sa r&eacute;gulation post-transcriptionnelle coordonn&eacute;e du programme Th2. Les auteurs rapportent que parall&egrave;lement &agrave; l&#39;augmentation induite par la stimulation de GATA-3 niveaux d&#39;ARNm et de prot&eacute;ines, Half-Life 3-GATA ARNm est augment&eacute;e apr&egrave;s restimulation dans la lign&eacute;e humaine T Jurkat, dans la m&eacute;moire humaine et les cellules Th2 et dans des cellules Th2-biais&eacute;. Nous d&eacute;montrer par immunopr&eacute;cipitation des complexes ribonucl&eacute;oprot&eacute;iques qui HuR associe la transcription endog&egrave;ne GATA-3 dans les cellules T humaines et constat&eacute;, par dosage de pulldown biotine, qui HuR sp&eacute;cifiquement interagit avec ses 3&#39;UTR. &Agrave; l&#39;aide de tant de perte de fonction et de gain de fonction des approches in vitro et sur des mod&egrave;les animaux, nous montrons que HuR est un m&eacute;diateur critique d&#39;augmentation induite par la stimulation des expression ARNm et de prot&eacute;ines de GATA-3 et qu&#39;il influe positivement sur le chiffre d&#39;affaires-GATA-3 ARNm, en parall&egrave;le avec la promotion s&eacute;lective de la surexpression de cytokines Th2. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent qu&#39;actionnement post-transcriptionnel HuR joue un r&ocirc;le important dans la fonction de d&eacute;veloppement et d&#39;effecteur des cellules T dans les syst&egrave;mes murins et humains. Une meilleure compr&eacute;hension de la m&eacute;diation HuR contr&ocirc;le de polarisation Th2 peut avoir utilit&eacute; dans l&#39;alt&eacute;ration de l&#39;inflammation des voies respiratoires allergiques chez des patients asthmatiques humains.

Coordonn&eacute;e de la r&eacute;gulation de l&#39;expression des g&egrave;nes de cytokines GATA-3 et Th2 par la prot&eacute;ine de liaison &agrave; l&#39;ARN HuR.

Die Posttranscriptionale Mechanismen, die bei dem RNA-bindende Proteine (RBPs) T-Zell-Differenzierung regulieren bleiben unklar. RBPs kann coordinately regulieren die Expression von verwandeten Genen &uuml;ber Bindung an gemeinsame regulatorische Sequenzen, wie z. B. die Adenylat-Uridylate-Reich-Elemente (AREs) in der 3&#39; un&uuml;bersetzte Region (UTR) der mRNA. Die RBP-HuR regelt posttranscriptionally IL-4, IL-13 und andere Th2-Zelle-eingeschr&auml;nkte-Transkripte. Wir die Hypothese, dass das sind tragende GATA-3 gen, ein wichtiger Regulator der Th2-Polarisation, als Teil seiner Koordinaten Posttranscriptionale Regulation des Programms Th2 HuR Kontrolle unterliegt. Wir berichten, dass parallel zu den Reiz-induzierten Anstieg GATA-3 mRNA und Protein, GATA-3 mRNA-Halbwertszeit nach Restimulation in der menschlichen T-Zell-Linie Jurkat, im menschlichen Ged&auml;chtnis und Th2 Zellen und in murinen verzerrt, Th2 Zellen erh&ouml;ht wird. Wir demonstrieren durch Immunopr&auml;zipitation-Gebiets-komplexe, die die GATA-3 endogene Abschrift in den menschlichen T-Zellen HuR zuordnet und gefunden, Biotin-Pulldown-Probe, die HuR, die speziell mit interagiert mit seiner 3&#39;UTR. Anhand der Verlustfunktion und Gain of Function Ans&auml;tze in vitro und in Tiermodellen zeigen wir, dass HuR ein kritischer Vermittler von Reiz-induzierte Zunahme GATA-3-mRNA und Protein-Expression und GATA-3 mRNA Umsatz, parallel zu selektive F&ouml;rderung von Th2 Cytokine &Uuml;berexpression positiv beeinflusst. Diese Ergebnisse legen nahe, dass HuR-gesteuerte Posttranscriptionale Kontrolle eine bedeutende Rolle in T-Zell-Entwicklung und Effektor-Funktion sowohl murinen und menschliche Systeme spielt. Ein besseres Verst&auml;ndnis der HuR-vermittelte Kontrolle der Th2-Polarisierung m&ouml;glicherweise Dienstprogramm allergischen Atemwegsentz&uuml;ndung in menschlichen Asthma-Patienten zu &auml;ndern.

Verordnung der GATA-3 und Th2-Zytokin-Genexpression durch die RNS-bindene Protein HuR zu koordinieren.

I meccanismi di posttranscriptional per cui RNA-binding proteins (RBPs) regolano la differenziazione delle cellule T rimangono poco chiari. RBPs coordinately possono regolare l&#39;espressione di geni funzionalmente correlati tramite associazione di sequenze regolatrici condivise, come ad esempio gli elementi ricchi di adenilato-uridylate (AREs) presenti della regione 3&#39; non tradotte (UTR) del mRNA. Il HuR RBP regola posttranscriptionally IL-4, IL-13 e altre Th2 cellula-restricted trascrizioni. Abbiamo ipotizzato che il gene sono-cuscinetto GATA-3, un critico di regolazione della polarizzazione Th2, &egrave; sotto il controllo di HuR come parte del suo regolamento di posttranscriptional coordinata del programma Th2. Segnaliamo che in parallelo con indotta da stimolo aumento dei livelli di mRNA e proteine GATA-3, Half-Life GATA-3 mRNA &egrave; aumentato dopo restimulation nella linea di cellule T umane Jurkat, nella memoria umana e le cellule Th2 e nelle cellule Th2 distorta murine. Noi dimostrare di immunoprecipitazione dei complessi ribonucleoproteina che HuR associa con trascrizione GATA-3 endogena nelle cellule T umane e trovato, usando analisi di pulldown biotina, che HuR interagisce specificamente con il 3&#39;UTR. Utilizzando approcci sia della funzione di perdita e guadagno di funzione in vitro e in modelli animali, mostriamo che HuR &egrave; un mediatore critico di stimolo indotto aumento di espressione di mRNA e proteine GATA-3 e che esso influenza positivamente fatturato GATA-3 mRNA, in parallelo con la promozione selettiva della sovraespressione di citochine Th2. Questi risultati suggeriscono che controllo posttranscriptional HuR-driven gioca un ruolo significativo nella funzione sviluppo ed effettrici delle cellule T in sistemi murini e umani. Una migliore comprensione del controllo HuR-mediata della polarizzazione Th2 pu&ograve; avere utilit&agrave; nell&#39;alterare infiammazione allergica delle vie aeree nei pazienti asmatici umani.

Coordinare regolamento GATA-3 e Th2 cytokine espressione di gene RNA-binding protein HuR.

Whereby RNA &#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (Rbp) T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306A;&#x307E;&#x307E;&#x3002;Rbp &#x30EA;&#x30BA;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB; &#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178; &#xFF0D; &#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x8981;&#x7D20; (&#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;)&#x3001;3&#39; &#x975E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x9818;&#x57DF;&#x306E; mRNA &#x306E; (UTR) &#x5B58;&#x5728;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x5171;&#x6709;&#x898F;&#x5236;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RBP &#x30CF;&#x30FC; posttranscriptionally &#x30BB;&#x30EB;&#x5236;&#x9650; IL-4, IL-13, &#x3068;&#x4ED6;&#x306E; Th2 &#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30D9;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30AC;&#x30BF; 3 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF; Th2 &#x5206;&#x6975;&#x306E;&#x5EA7;&#x6A19;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x8ABF;&#x7BC0; Th2 &#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306E;&#x4E00;&#x74B0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D9;&#x30F3;&#x30CF;&#x30FC;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3002;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 mRNA &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x8A98;&#x8D77;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x4E26;&#x884C;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8; T &#x7D30;&#x80DE;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3; Jurkat&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8A18;&#x61B6;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Th2 &#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE; Th2 &#x504F;&#x3063;&#x3066;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x518D;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F8C;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 mRNA &#x306E;&#x534A;&#x6E1B;&#x671F;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; HuR &#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 &#x5185;&#x751F;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;HuR &#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x304C;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3; &#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x305D;&#x306E; 3&#39;UTR&#x3002;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3068;&#x5229;&#x5F97;&#x95A2;&#x6570;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;HuR &#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 mRNA &#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x8A98;&#x8D77;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 mRNA &#x306E;&#x58F2;&#x308A;&#x4E0A;&#x3052;&#x9AD8;&#x3001;&#x4E26;&#x5217; Th2 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x63A8;&#x9032;&#x306B;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HuR &#x99C6;&#x52D5;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Th2 &#x504F;&#x5149;&#x306E; HuR &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x6DF1;&#x3081;&#x308B;&#x30E6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3072;&#x3068;&#x6C17;&#x7BA1;&#x652F;&#x5598;&#x606F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x6027;&#x6C17;&#x9053;&#x708E;&#x75C7;&#x3092;&#x5909;&#x3048;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 &#x3068; Th2 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x308B; RNA &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; HuR &#x5EA7;&#x6A19;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Posttranscriptional &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (RBPs) T &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. RBPs 3&#39; &#xB9DE;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; (UTR) Mrna&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC874;&#xC7AC; adenylate uridylate &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC694;&#xC18C; (AREs) &#xAC19;&#xC740; &#xACF5;&#xC720; &#xADDC;&#xC81C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; coordinately &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. RBP &#xD5C8; posttranscriptionally IL-4, IL-13, &#xBC0F; &#xAE30;&#xD0C0; Th2 &#xC138;&#xD3EC; &#xC81C;&#xD55C; &#xC131;&#xC801;&#xD45C;&#xB97C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Th2 &#xD3B8;&#xAD11;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB294; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; GATA-3 &#xC720;&#xC804;&#xC790; Th2 &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xC88C;&#xD45C;&#xB294; posttranscriptional &#xADDC;&#xC815;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xB85C; &#xD5C8; &#xD1B5;&#xC81C;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; GATA 3 Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC790;&#xADF9; &#xC720;&#xBC1C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xBCD1;&#xB82C;&#xB85C; restimulation &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC120; Jurkat, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xC5B5;&#xACFC; Th2 &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; murine Th2 &#xBE44;&#xC6B0;&#xB294; &#xC140; &#xD6C4; GATA 3 mRNA &#xBC18;&#xAC10;&#xAE30; &#xC99D;&#xAC00; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD5C8; GATA 3 &#xC0DD; &#xB300; &#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; ribonucleoprotein &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; immunoprecipitation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACE0; &#xBC1C;&#xACAC;, biotin &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD5C8; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; 3&#39;UTR. &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; &#xBC0F; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC2E4; &#xBC0F; &#xC774;&#xB4DD; &#xD568;&#xC218; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD5C8; GATA 3 Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD; &#xC99D;&#xAC00; &#xC790;&#xADF9; &#xC720;&#xBC1C;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; GATA 3 mRNA &#xD68C;&#xC804;&#xC728; Th2 cytokine overexpression&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC2B9;&#xACA9;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xD5C8; &#xC81C;&#xC5B4; posttranscriptional &#xC81C;&#xC5B4; T &#xC138;&#xD3EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; murine &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xD55C;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Th2 &#xD3B8;&#xAD11;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD5C8; &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xC774;&#xD574; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xCC9C;&#xC2DD; &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC54C;&#xB808;&#xB974;&#xAE30; &#xAE30;&#xB3C4; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC5D0; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD5C8; &#xC5EC; GATA 3 &#xBC0F; Th2 &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0;&#xCE74;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xC870;&#xC815;.

Los mecanismos postranscripcional por el RNA-proteinas (restrictivas) regulan la diferenciaci&oacute;n de la c&eacute;lula T todav&iacute;a no est&aacute;n claros. Pr&aacute;cticas comerciales restrictivas coordinadamente pueden regular la expresi&oacute;n de genes funcionalmente relacionados mediante la Uni&oacute;n a secuencias reguladoras compartidas, como los elementos ricos en adenilato-uridylate (AREs) presentes en la regi&oacute;n 3&#39; no traducida (UTR) de ARNm. La RBP HuR regula posttranscriptionally IL-4, IL-13 y otras Th2 restringidos celular transcripciones. Presumimos que el gen GATA son-cojinete-3, un regulador cr&iacute;tico de polarizaci&oacute;n Th2, est&aacute; bajo control de HuR como parte de su regulaci&oacute;n postranscripcional coordinar del programa Th2. Se reporta que en paralelo con el aumento inducido por el est&iacute;mulo en los niveles de mRNA y prote&iacute;na de GATA-3, vida media del mRNA de la GATA-3 se incrementa despu&eacute;s de restimulation en la l&iacute;nea de c&eacute;lulas T humanas Jurkat, en la memoria humana y las c&eacute;lulas Th2 y en c&eacute;lulas Th2 asim&eacute;tricos murinas. Nosotros demostrar por inmunoprecipitaci&oacute;n de complejos de Ribonucleoprote&iacute;na que HuR asocia la transcripci&oacute;n end&oacute;gena de la GATA-3 en c&eacute;lulas T humanas y encontramos, usando an&aacute;lisis de telecine de la biotina, que HuR interact&uacute;a espec&iacute;ficamente con sus 3&#39;UTR. Utilizando los enfoques tanto de p&eacute;rdida de funci&oacute;n y de ganar-de-funci&oacute;n in vitro y en modelos animales, mostramos que HuR es un mediador cr&iacute;tico de aumento inducido por el est&iacute;mulo en la expresi&oacute;n de mRNA y prote&iacute;na de GATA-3 y que influye positivamente en facturaci&oacute;n de mRNA de la GATA-3, en paralelo con la promoci&oacute;n selectiva de sobreexpresi&oacute;n de citoquina Th2. Estos resultados sugieren que basadas en HuR postranscripcional control juega un papel importante en funci&oacute;n de desarrollo y efectoras de la c&eacute;lula de T en los sistemas humanos y murinos. Una mejor comprensi&oacute;n de HuR mediada por el control de polarizaci&oacute;n Th2 puede tener utilidad en la alteraci&oacute;n de la inflamaci&oacute;n al&eacute;rgica de las v&iacute;as respiratorias en pacientes asm&aacute;ticos humanos.

Garrett M. Dahm

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