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Avidity-based Extracellular Interaction Screening (AVEXIS) for the Scalable Detection of Low-affinity Extracellular Receptor-Ligand Interactions

Extracellular protein:protein interactions between secreted or membrane-tethered proteins are critical for both initiating intercellular communication and ...

Wellcome Trust Sanger Institute

Le r&eacute;cepteur de chimiokine, CCR5, agit comme un cor&eacute;cepteur pour l&#39;entr&eacute;e de virus de l&#39;immunod&eacute;ficience humaine dans les cellules. CCR5 s&#39;est av&eacute;r&eacute; &ecirc;tre destin&eacute; aux riches en cholest&eacute;rol et sphingolipides membrane microdomaines appel&eacute;s radeaux lipidiques ou cav&eacute;oles. Le cholest&eacute;rol est essentiel pour la liaison de CCL4 &agrave; CCR5 et pour maintenir l&#39;int&eacute;grit&eacute; de conformation du r&eacute;cepteur. Filipin traitement conduit &agrave; la perte de la cav&eacute;oline-1 de la membrane et donc &agrave; un effondrement de la cav&eacute;oles. Nous avons trouv&eacute; ici que s&eacute;questration du cholest&eacute;rol de la membrane avec filipin n&#39;affecte pas les r&eacute;cepteurs de signalisation, a toutefois observ&eacute;e une perte d&#39;internalisation induite par le ligand du CCR5. Extraction de cholest&eacute;rol avec le m&eacute;thyl-b&ecirc;ta-cyclodextrine (MCD) r&eacute;duit la signalisation par l&#39;interm&eacute;diaire de CCR5 tel que mesur&eacute; par la lib&eacute;ration de Ca(2+) intracellulaire et compl&egrave;tement aboli l&#39;inhibition de l&#39;accumulation d&#39;AMPc stimul&eacute;e par la forskoline sans effet sur l&#39;internalisation. Traitement de la coqueluche toxine (PTX) inhibe la lib&eacute;ration intracellulaire du calcium qui est transduite via les prot&eacute;ines G Galphai. Appauvrissement de la couche de cholest&eacute;rol d&eacute;truit microdomaines de la membrane et commut&eacute; de couplage de la prot&eacute;ine CCR5/G &agrave; une prot&eacute;ine G PTX-ind&eacute;pendant. Nous concluons que le cholest&eacute;rol dans la membrane est essentiel pour CCR5 signalisation par l&#39;interm&eacute;diaire de la sous-unit&eacute; de la prot&eacute;ine G Galphai, et que l&#39;int&eacute;grit&eacute; des radeaux lipidiques n&#39;est pas essentielle pour efficace CCR5 internalisation cependant, il est crucial pour la transduction du signal CCR5 appropri&eacute; par l&#39;interm&eacute;diaire de prot&eacute;ines G Galphai.

CCR5 internalisation et signalisation ont une d&eacute;pendance diff&eacute;rente sur l&#39;int&eacute;grit&eacute; de radeau lipidique membranaire.

&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; CCR5&#xFF0C;&#x5145;&#x5F53;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; co-receptor&#x3002;CCR5 &#x5DF2;&#x8BC1;&#x660E;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x5BF9;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x9187;&#x78F7;&#x8102;&#x819C;&#x5FAE;&#x533A;&#x79F0;&#x4E3A;&#x8102;&#x7B4F;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7A74;&#x6837;&#x5185;&#x9677;&#x3002;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x662F; CCL4 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; CCR5 &#x548C;&#x4FDD;&#x6301;&#x53D7;&#x4F53;&#x6784;&#x8C61;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x3002;Filipin &#x6CBB;&#x7597;&#x4ECE;&#x819C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x7A96; 1&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7A74;&#x6837;&#x5185;&#x9677;&#x7684;&#x5D29;&#x6E83;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x627E;&#x5230;&#x87AF;&#x5408;&#x7684; filipin &#x819C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x6709;&#x4EBA;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x914D;&#x4F53;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5185;&#x7684; CCR5 &#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x63D0;&#x53D6;&#x4E0E;&#x7532;&#x57FA;-&beta;-&#x73AF;&#x7CCA;&#x7CBE; (MCD) &#x51CF;&#x5C11;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x6309;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x6E38;&#x79BB;&#x7ECF;&#x8861;&#x91CF;&#x7684; CCR5 &#x548C;&#x5B8C;&#x5168;&#x5E9F;&#x9664;&#x5185;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x773C;&#x538B;&#x5347;&#x9AD8;&#x523A;&#x6FC0;&#x8425;&#x5730;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20; &#xFF08;&#x7D2B;&#x6749;&#x9187;&#xFF09; &#x6CBB;&#x7597;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x901A;&#x8FC7; Galphai G &#x86CB;&#x767D;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x3002;&#x6D88;&#x8017;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x6467;&#x6BC1;&#x5FAE;&#x533A;&#x4E2D;&#x819C;&#x548C; CCR5 G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x8F6C;&#x5411; PTX &#x72EC;&#x7ACB; G &#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x4E2D;&#x819C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6; CCR5 &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7; Galphai G &#x86CB;&#x767D;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x548C;&#x8102;&#x7B4F;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x4E0D;&#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x7684; CCR5 &#x5185;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0D;&#x8FC7;&#x800C;&#x662F;&#x9002;&#x5F53; CCR5 Galphai G-&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

CCR5 &#x5185;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5177;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x819C;&#x8102;&#x7B4F;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x3002;

The chemokine receptor, CCR5, acts as a co-receptor for human immunodeficiency virus entry into cells. CCR5 has been shown to be targeted to cholesterol- and sphingolipid-rich membrane microdomains termed lipid rafts or caveolae. Cholesterol is essential for CCL4 binding to CCR5 and for keeping the conformational integrity of the receptor. Filipin treatment leads to loss of caveolin-1 from the membrane and therefore to a collapse of the caveolae. We have found here that sequestration of membrane cholesterol with filipin did not affect receptor signalling, however a loss of ligand-induced internalisation of CCR5 was observed. Cholesterol extraction with methyl-beta-cyclodextrin (MCD) reduced signalling through CCR5 as measured by release of intracellular Ca(2+) and completely abolished the inhibition of forskolin-stimulated cAMP accumulation with no effect on internalisation. Pertussis toxin (PTX) treatment inhibited the intracellular release of calcium that is transduced via Galphai G-proteins. Depletion of cholesterol destroyed microdomains in the membrane and switched CCR5/G-protein coupling to a PTX-independent G-protein. We conclude that cholesterol in the membrane is essential for CCR5 signalling via the Galphai G-protein subunit, and that integrity of lipid rafts is not essential for effective CCR5 internalisation however it is crucial for proper CCR5 signal transduction via Galphai G-proteins.

CCR5 internalisation and signalling have different dependence on membrane lipid raft integrity.

Der Chemokin-Rezeptor CCR5, fungiert als ein Co-receptor f&uuml;r Human-Immunodeficiency-Virus Eintritt in Zellen. CCR5 wurde gezeigt, um Cholesterin Sphingolipid-reichen und Membrane Microdomains genannt Lipid Rafts oder Caveolae ausgerichtet sein. Cholesterin ist wichtig f&uuml;r die CCL4 Bindung an CCR5 und f&uuml;r die F&uuml;hrung der Konformations&auml;nderungen Integrit&auml;t des Rezeptors. Filipin Behandlung f&uuml;hrt zu einem Verlust von Caveolin-1 aus der Membran und damit zu einem Zusammenbruch der Caveolae. Wir haben hier festgestellt, dass die Beschlagnahme von Membran-Cholesterin mit Filipin nicht beeinflussten Rezeptor Signalgebung, jedoch ein Verlust von Ligand-induzierte Internalisierung der CCR5 beobachtet wurde. Cholesterin Extraktion mit Methyl-Beta-Cyclodextrin (MCD) reduziert Signalisierung durch CCR5 Freigabe der intrazellul&auml;ren Ca(2+) gemessen und die Hemmung der Forskolin stimuliert cAMP Kumulation mit keinen Einfluss auf die Internalisierung abgeschafft. Pertussis-Toxin (PTX)-Behandlung gehemmt die intrazellul&auml;re Freisetzung von Kalzium, die &uuml;ber Galphai G-Proteinen ausgestrahlt wird. Abbau von Cholesterin in der Membrane Microdomains zerst&ouml;rt und CCR5/G-Protein-Kupplung auf ein G-Protein-PTX-unabh&auml;ngige umgestellt. Wir schlie&szlig;en, dass Cholesterin in der Membran unverzichtbar f&uuml;r CCR5 Signalisierung &uuml;ber die Galphai G-Protein-Untereinheit, und die Integrit&auml;t von Lipid Rafts ist nicht notwendig f&uuml;r effektive CCR5 Internalisierung ist es jedoch entscheidend f&uuml;r die richtige CCR5-Signaltransduktion &uuml;ber Galphai G-Proteinen.

CCR5 Internalisierung und Signalisierung haben unterschiedliche Abh&auml;ngigkeit von Membran-Lipid-Raft-Integrit&auml;t.

Il recettore delle chemochine, CCR5, agisce come un ricettore per l&#39;entrata del virus dell&#39;immunodeficienza umana in cellule. CCR5 ha dimostrato di essere mirati ai ricchi di colesterolo e sfingolipidi membrana microdomains chiamati zattere lipidiche o caveolae. Il colesterolo &egrave; essenziale per l&#39;associazione CCL4 CCR5 e per mantenere l&#39;integrit&agrave; conformazionale del recettore. Filipin trattamento porta a perdita della caveolina-1 dalla membrana e di conseguenza al collasso le caveolae. Qui abbiamo trovato che il sequestro di colesterolo di membrana con filipin non influisce sulla recettore segnalazione, tuttavia &egrave; stata osservata una perdita di internalizzazione indotta dal ligando di CCR5. Estrazione di colesterolo con metil-beta-ciclodestrina (MCD) ridotta segnalazione attraverso CCR5 misurata dal rilascio di Ca(2+) intracellulare e completamente abolita l&#39;inibizione di accumulo cAMP ha stimolato la forskolina con nessun effetto sull&#39;internalizzazione. Trattamento con tossina (PTX) pertosse inibito il rilascio intracellulare di calcio che &egrave; transduced via Galphai G-proteine. Deplezione di colesterolo distrutto microdomains nella membrana e commutato accoppiamento CCR5/G-proteina a una proteina G PTX-indipendente. Concludiamo che colesterolo nella membrana &egrave; essenziale per la segnalazione del CCR5 tramite la subunit&agrave; Galphai G-proteine, e che l&#39;integrit&agrave; delle zattere lipidiche non &egrave; essenziale per internalizzazione CCR5 efficace tuttavia &egrave; cruciale per la trasduzione del segnale di CCR5 corretta via Galphai G-proteine.

Internalizzazione del CCR5 e segnalazione hanno diversa dipendenza l&#39;integrit&agrave; della membrana lipidica zattera.

CCR5&#x3001;&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3072;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CCR5 &#x8102;&#x8CEA;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30AB;&#x30D9;&#x30AA;&#x30E9;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x8102;&#x8CEA;&#x819C;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F; CCR5 CCL4 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3068;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x3092;&#x4FDD;&#x3064;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Filipin &#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x30AB;&#x30D9;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3; 1 &#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x819C;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30AB;&#x30D9;&#x30AA;&#x30E9;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x9694;&#x96E2;&#x819C;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092; filipin &#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x5185;&#x5728; CCR5 &#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x62BD;&#x51FA;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;-&beta;-&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30F3; (MCD) &#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B; CCR5 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x84C4;&#x7A4D;&#x5185;&#x5728;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20; (PTX) &#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; Galphai G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5C0E;&#x5165;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x76F8;&#x5206;&#x96E2;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x819C;&#x3092;&#x7834;&#x58CA;&#x3001;CCR5/G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408; PTX &#x72EC;&#x7ACB;&#x306E; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x5207;&#x308A;&#x66FF;&#x3048;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;CCR5 Galphai G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x7528;&#x819C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x6B20;&#x304B;&#x305B;&#x306A;&#x3044;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x305F;&#x3060;&#x3057; Galphai G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9069;&#x5207;&#x306A; CCR5 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A; CCR5 &#x5185;&#x5728;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CCR5 &#x5185;&#x5728;&#x3068;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x819C;&#x8102;&#x8CEA;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Chemokine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, CCR5, &#xC778;&#xAC04; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD56D;&#xBAA9; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; co-receptor &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. CCR5 &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xBC0F; sphingolipid &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB9C9; microdomains &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xD2B8; &#xB610;&#xB294; caveolae &#xB418; &#xB098; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xC774; &#xB420; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; CCL4 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; CCR5 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. Filipin &#xCE58;&#xB8CC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; caveolin-1&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB41C; caveolae &#xBD95;&#xAD34;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30; &#xB9C9; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; filipin&#xC640;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; ligand &#xC720;&#xB3C4; internalisation ccr5&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xBA54; &#xD2F8;-&#xBCA0;&#xD0C0;-cyclodextrin (MCD)&#xACFC; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xCD94;&#xCD9C; CCR5 &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; ca(2+)&#xC758; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xB85C; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; &#xC644;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xD3D0;&#xC9C0; internalisation&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0;&#xC640; &#xCEA0;&#xD504; &#xCD95;&#xC801; forskolin &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xBC31; &#xC77C; &#xD574; &#xB3C5; &#xC18C; (PTX) &#xCE58;&#xB8CC; Galphai G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBC29;&#xCD9C; &#xC800;&#xD574;. &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; microdomains &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xD30C;&#xAD34; &#xD558; &#xACE0; CCR5/G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; PTX &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC804;&#xD658;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; CCR5 Galphai G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB5CF;&#xBAA9;&#xC758; &#xADF8; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; Galphai G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; CCR5 &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; CCR5 internalisation&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;.

CCR5 internalisation &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xB9C9; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB5CF;&#xBAA9; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC758;&#xC874;&#xC744; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El receptor de quimiocina CCR5, act&uacute;a como un correceptor para la entrada del virus de inmunodeficiencia humana en las c&eacute;lulas. CCR5 se ha demostrado para ser dirigido a ricos en colesterol y esfingol&iacute;pidos microdominios de membrana llamados balsas lip&iacute;dicas o caveolas. El colesterol es esencial por la Uni&oacute;n de CCL4 a CCR5 y para mantener la integridad conformacional del receptor. Filipin tratamiento conduce a la p&eacute;rdida de caveolina-1 de la membrana y por lo tanto a un colapso de las caveolas. Aqu&iacute; hemos encontrado que secuestro de colesterol de la membrana con filipina no afect&oacute; el receptor se&ntilde;alizaci&oacute;n, sin embargo se observ&oacute; una p&eacute;rdida inducida por ligando internalizaci&oacute;n de CCR5. Extracci&oacute;n de colesterol con metil-beta-ciclodextrina (MCD) redujo la se&ntilde;alizaci&oacute;n a trav&eacute;s de CCR5, medida por la liberaci&oacute;n de CA intracelular y hab&iacute;a suprimido totalmente la inhibici&oacute;n de la acumulaci&oacute;n del campo forskoline-estimulado con ning&uacute;n efecto sobre la internalizaci&oacute;n. Tratamiento de la tos ferina toxina (PTX) inhibe la liberaci&oacute;n intracelular de calcio que es transduced por Galphai G-prote&iacute;nas. Agotamiento de colesterol hab&iacute;a destruido microdominios en la membrana y cambia de acoplamiento de la prote&iacute;na CCR5/G a una prote&iacute;na G PTX-independiente. Concluimos que el colesterol en la membrana es esencial para CCR5 se&ntilde;alizaci&oacute;n v&iacute;a la subunidad de la prote&iacute;na G Galphai, y la integridad de las balsas lip&iacute;dicas no es esencial para la efectiva internalizaci&oacute;n de CCR5 sin embargo es crucial para la transducci&oacute;n de se&ntilde;al de CCR5 adecuada mediante prote&iacute;nas G Galphai.

Jason S. Kerr

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