protease-acid-catalyzed-labeling-workflows-employing-18o-enriched

Protease- and Acid-catalyzed Labeling Workflows Employing <sup>18</sup>O-enriched Water

Stable isotopes are essential tools in biological mass spectrometry. Historically, 18O-stable isotopes have been extensively used to study the catalytic ...

Boston Biomedical Research Institute

&#x4E0E;&#x6EB6;&#x96F7;&#x8F89;&#x714C;&#x84DD;&#x6807;&#x58C1;&#x5FAE;&#x7403;&#x83CC;&#x9176;&#x8C31;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6EB6;&#x83CC;&#x9176;&#x68C0;&#x6D4B;&#xFF1A; &#x53F0;&#x6E7E;&#x767D;&#x8681;&#x9632;&#x5FA1;&#x5206;&#x6CCC;&#x7269;&#x4E2D;&#x65B0;&#x6EB6;&#x83CC;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4F8B;&#x5B50;&#x3002;

Zymogram with Remazol brilliant blue-labeled Micrococcus lysodeikticus cells for the detection of lysozymes: example of a new lysozyme activity in Formosan termite defense secretions.

Zymogramme avec Remazol brillant bleu marqu&eacute; Micrococcus lysodeikticus cellules pour la d&eacute;tection des lysozymes : exemple d&#39;une nouvelle activit&eacute; de lysozyme dans les s&eacute;cr&eacute;tions de d&eacute;fense Formosan termite.

Zymogram mit Remazol brilliant blau-markierten Micrococcus Lysodeikticus Zellen f&uuml;r den Nachweis von Lysozymes: Beispiel f&uuml;r eine neue Lysozym-Aktivit&auml;t in formosische Termiten Verteidigung Absonderungen.

Zymogram con Remazol con etichetta blu brillante Micrococcus lysodeikticus cells per la rilevazione di lysozymes: esempio di una nuova attivit&agrave; di lisozima nelle secrezioni di difesa della termite formosane.

&#x30EC;&#x30DE;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x67D3;&#x6599;&#x9BAE;&#x3084;&#x304B;&#x306A;&#x9752;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x7403;&#x83CC; lysodeikticus &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EA;&#x30BE;&#x30C1;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;: &#x53F0;&#x6E7E;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EA;&#x9632;&#x885B;&#x5206;&#x6CCC;&#x7269;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30EA;&#x30BE;&#x30C1;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4F8B;&#x3002;

Remazol &#xD654;&#xB824;&#xD55C; &#xBE14;&#xB8E8; &#xB77C;&#xB294; Micrococcus lysodeikticus&#xC640; zymogram lysozymes&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;: &#xD0C0;&#xC774;&#xC644; &#xD770;&#xAC1C;&#xBBF8; &#xAD6D;&#xBC29; &#xBD84; &#xBE44; &#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; lysozyme &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC608;.

Zymogram con Remazol brillante azul marcado Micrococcus lysodeikticus c&eacute;lulas para la detecci&oacute;n de lisozimas: ejemplo de una nueva actividad de lisozima en secreciones de defensa de la termita de Formosa.

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&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF; ChBDChiA1 &#x4ECE;&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x9176;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC; A1 &#x7684;&#x73AF;&#x72B6;&#x7A81;&#x53D8;&#x6539;&#x53D8;&#x5E95;&#x7269;&#x4E13;&#x4E00;&#x6027;&#xFF1A; &#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

A fluorescent binding assay was developed to investigate the effects of mutagenesis on the binding affinity and substrate specificity of the chitin-binding domain of chitinase A1 from Bacillus circulans WL-12. The chitin-binding domain was genetically fused to the N-terminus of a green fluorescent protein, and the polyhistidine-tagged hybrid protein was expressed in Escherichia coli. Residues likely to be involved in the binding site were mutated and their contributions to binding and substrate specificity were evaluated by affinity electrophoresis and depletion assays. The experimental binding isotherms were analyzed by non-linear regression using a modified Langmuir equation. Non-conservative substitution of tryptophan residue (W687) nearly abolished chitin-binding affinity and dramatically lowered chitosan binding while retaining the original level of curdlan binding. Double mutation E668K/P689A had altered specificity for several substrates and also impaired chitin binding significantly. Other substitutions in the binding site altered substrate specificity but had little effect on overall affinity for chitin. Interestingly, mutation T682A led to a higher specificity towards chitinous substrates than the wildtype. Furthermore, the ChBD-GFP hybrid protein was tested for use in diagnostic staining of cell walls of fungi and yeast and for the detection of fungal infections in tissue samples.

Mutation of active site residues in the chitin-binding domain ChBDChiA1 from chitinase A1 of Bacillus circulans alters substrate specificity: use of a green fluorescent protein binding assay.

Un essai de liaison fluorescent a &eacute;t&eacute; d&eacute;velopp&eacute; pour &eacute;tudier les effets de mutagen&egrave;se sur la sp&eacute;cificit&eacute; de liaison affinit&eacute; et substrat du domaine de liaison &agrave; la chitine de chitinase A1 de Bacillus circulans WL-12. Le domaine de liaison &agrave; la chitine a &eacute;t&eacute; g&eacute;n&eacute;tiquement fusionn&eacute; &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N-terminale d&#39;une prot&eacute;ine fluorescente verte, et la prot&eacute;ine hybride polyhistidine-tag a &eacute;t&eacute; exprim&eacute;e chez Escherichia coli. R&eacute;sidus susceptibles d&#39;&ecirc;tre impliqu&eacute;es dans le site de liaison ont &eacute;t&eacute; mut&eacute;s et leurs contributions &agrave; la sp&eacute;cificit&eacute; de liaison et de substrat a &eacute;taient &eacute;valu&eacute;es par &eacute;lectrophor&egrave;se d&#39;affinit&eacute; et l&#39;appauvrissement des essais. Les isothermes de liaison exp&eacute;rimentale ont &eacute;t&eacute; analys&eacute;es par r&eacute;gression non lin&eacute;aire en utilisant une &eacute;quation modifi&eacute;e de Langmuir. Substitution non-conservateur du r&eacute;sidu tryptophane (W687) abolit presque affinit&eacute; de liaison de chitine et chitosane consid&eacute;rablement abaiss&eacute; contraignantes tout en conservant le niveau original de liaison &quot;curdlan&quot;. Double mutation E668K/P689A avait alt&eacute;r&eacute; la sp&eacute;cificit&eacute; pour plusieurs substrats et aussi troubles de chitine contraignant significativement. Autres substitutions dans le site de liaison alt&eacute;r&eacute; la sp&eacute;cificit&eacute; de substrat, mais ont peu d&#39;effet sur l&#39;affinit&eacute; globale pour la chitine. Fait int&eacute;ressant, la mutation T682A conduit &agrave; une plus grande sp&eacute;cificit&eacute; envers les substrats chitineuses que le type sauvage. En outre, la prot&eacute;ine hybride ChBD-GFP a &eacute;t&eacute; test&eacute;e pour une utilisation dans le diagnostic de coloration de la paroi cellulaire des champignons et levures et pour la d&eacute;tection des infections fongiques dans les &eacute;chantillons de tissus.

Mutation des r&eacute;sidus du site actif dans le domaine de la chitine-liaison ChBDChiA1 de chitinase A1 de Bacillus circulans modifie la sp&eacute;cificit&eacute; de substrat : utilisation d&#39;un essai de liaison de la prot&eacute;ine fluorescente verte.

Eine fluoreszierende Bindung-Assay wurde entwickelt, um die Auswirkungen der Mutagenese auf die verbindliche Affinit&auml;t und Substrat Spezifit&auml;t der Chitin-Bindung-Dom&auml;ne des Chitinase A1 aus Bacillus Circulans WL-12 zu untersuchen. Die Chitin-bindende Dom&auml;ne wurde genetisch zu den N-Terminus des gr&uuml;n fluoreszierenden Proteins verschmolzen, und das Polyhistidine-Tags Hybrid-Protein fand ihren Niederschlag in Escherichia coli. R&uuml;ckst&auml;nde, die in die Bindungsstelle einbezogen wurden mutiert und ihren Beitrag zur Bindung und Substrat Spezifit&auml;t von Affinit&auml;t Elektrophorese und Ersch&ouml;pfung ausgewertet wurden Proben. Die experimentelle Bindung Isothermen wurden durch nicht-lineare Regression mit eine modifizierte Langmuir Gleichung analysiert. Nicht-konservative Substitution von Tryptophan R&uuml;ckst&auml;nde (W687) abgeschafft fast Chitin-Bindungsaffinit&auml;t und drastisch gesenkten Chitosan unter Beibehaltung der urspr&uuml;nglichen Ebene Curdlan Bindung Binden. Doppelte Mutation E668K/P689A hatte ver&auml;ndert Spezifit&auml;t f&uuml;r verschiedene Untergr&uuml;nde und auch Chitin binden erheblich beeintr&auml;chtigt. Weiteren Substitutionen in die Bindungsstelle ver&auml;ndert Substratspezifit&auml;t aber hatte kaum Auswirkungen auf die gesamte Affinit&auml;t f&uuml;r Chitin. Interessanterweise f&uuml;hrte Mutation T682A eine h&ouml;here Spezifit&auml;t gegen&uuml;ber Chitinpanzer Substrate als der Wildtyp. Dar&uuml;ber hinaus wurde das ChBD-GFP-Hybrid-Protein f&uuml;r diagnostische Anf&auml;rben der Zellw&auml;nde der Pilze und Hefe und zum Nachweis von Pilzinfektionen im Gewebe-Proben getestet.

Mutation der aktiven Site R&uuml;ckst&auml;nde in der Chitin-bindende Dom&auml;ne ChBDChiA1 aus Chitinase A1 von Bacillus Circulans &auml;ndert Substratspezifit&auml;t: Verwenden Sie ein gr&uuml;n fluoreszierendes Protein-Bindung-Assay.

Un dosaggio di associazione fluorescente &egrave; stato sviluppato per studiare gli effetti della mutagenesi sulla specificit&agrave; di affinit&agrave; e substrato associazione del dominio chitina-associazione di chitinasi A1 da Bacillus circulans WL-12. Il dominio di chitina-associazione geneticamente &egrave; stato fuso per il N-terminale di una proteina fluorescente verde, e la proteina ibrida polyhistidine-tag &egrave; stato espresso in Escherichia coli. Residui di probabilit&agrave; di essere coinvolti nel sito di associazione sono stati mutati e loro contributi all&#39;associazione e substrato specificit&agrave; sono stati valutati da affinit&agrave; elettroforesi e deplezione dosaggi. Le isoterme di associazione sperimentale sono state analizzate da regressione non lineare utilizzando un&#39;equazione di Langmuir modificata. Sostituzione del non-conservatore del residuo di triptofano (W687) abol&igrave; quasi affinit&agrave; di legame di chitina e chitosano drammaticamente abbassato vincolante pur mantenendo il livello originale dell&#39;associazione curdlan. Doppia mutazione E668K/P689A aveva alterato la specificit&agrave; per substrati diversi e anche alterato binding in modo significativo la chitina. Altre sostituzioni nel sito Associazione alterato la specificit&agrave; di substrato ma ebbero poco effetto sulla affinit&agrave; complessiva per chitina. &Egrave; interessante notare che, mutazione T682A ha portato a una maggiore specificit&agrave; verso substrati chitinosa rispetto il wildtype. Inoltre, la proteina ibrida ChBD-GFP &egrave; stata testata per l&#39;uso diagnostico della colorazione delle pareti cellulari dei funghi e lieviti e per la rilevazione di infezioni fungine in campioni di tessuto.

Mutazione di residui del sito attivo nel dominio chitina-associazione ChBDChiA1 da chitinasi A1 di Bacillus circulans altera la specificit&agrave; di substrato: utilizzo di un dosaggio di binding proteina fluorescente verde.

&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x7D30;&#x83CC; circulans WL 12 &#x304B;&#x3089; A1 &#x30AD;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3068;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x3001;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E; polyhistidine &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6B8B;&#x57FA;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x7570;&#x3057;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3078;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB; &#x30C6;&#x30A3;&#x30FC;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x67AF;&#x6E07;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3002;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x7D50;&#x5408;&#x7B49;&#x6E29;&#x7DDA;&#x5909;&#x5F62;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B0;&#x30DF;&#x30E5;&#x30A2;&#x65B9;&#x7A0B;&#x5F0F;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x975E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x56DE;&#x5E30;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA; (W687) &#x306E;&#x975E;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7F6E;&#x63DB;&#x307B;&#x307C;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3068;&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x30AD;&#x30C8;&#x30B5;&#x30F3; &#x30AB;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E9;&#x30F3; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5143;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x91CD;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570; E668K/P689A &#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x3001;&#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x969C;&#x5BB3;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x6587;&#x5B57;&#x5217;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306F;&#x5909;&#x66F4;&#x304C;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066; &#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F; T682A&#x3001;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x8CEA;&#x57FA;&#x677F;&#x3078;&#x9AD8;&#x3044;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3088;&#x308A;&#x5C0E;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;ChBD GFP &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8A3A;&#x65AD;&#x30AB;&#x30D3;&#x3084;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x6CD5;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x771F;&#x83CC;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30AD;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D30;&#x83CC; A1 circulans &#x304B;&#x3089;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; ChBDChiA1 &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;: &#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD615;&#xAD11; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; mutagenesis &#xADE0; circulans WL-12&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; chitinase a 1&#xC758; &#xD2F4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD2F4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; N-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC735;&#xD569; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xBC0F; polyhistidine &#xD0DC;&#xADF8; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558; &#xAC8C; &#xB420; &#xAC83;&#xC740; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xACF5;&#xD5CC; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACE0;&#xAC08; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;. &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; isotherms &#xBE44; &#xC120;&#xD615; &#xD68C;&#xADC0; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; Langmuir &#xBC29;&#xC815;&#xC2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; (W687)&#xC758; &#xBE44;-&#xBCF4;&#xC218; &#xB300;&#xCCB4; &#xD2F4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; curdlan &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC6D0;&#xBCF8; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0AE;&#xCD98;&#xB41C; &#xD0A4;&#xD1A0; &#xC0B0;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC758; &#xC5C6; &#xC574; &#xB2E4;. &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; E668K/P689A &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xC7A5;&#xC560;&#xAC00; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD2F4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xB300;&#xCCB4; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD2F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCCE4;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;, &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; t682a&#xB294; wildtype &#xBCF4;&#xB2E4; chitinous &#xAE30;&#xD310; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xC774;&#xB04C;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, ChBD GFP &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xBC0F; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD;&#xC758; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;.

Chitinase a 1&#xC758; &#xADE0; circulans&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2F4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; Chbdchia1&#xC5D0;&#xC11C; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xBCC0;&#xACBD;: &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Un ensayo de enlace fluorescente fue desarrollado para investigar los efectos de mutag&eacute;nesis en la especificidad de afinidad y sustrato de atascamiento del dominio de uni&oacute;n a quitina de chitinase A1 de Bacillus circulans WL-12. El dominio de uni&oacute;n a quitina fue fundido gen&eacute;ticamente a la N-terminal de una prote&iacute;na fluorescente verde, y la prote&iacute;na polyhistidine-etiquetado h&iacute;brido fue expresada en Escherichia coli. Residuos capaces de involucrarse en el sitio de Uni&oacute;n se transform&oacute; y sus contribuciones a la especificidad de la Uni&oacute;n y el substrato se evaluaron mediante electroforesis de afinidad y agotamiento ensayos. Las isotermas experimentales vinculante se analizaron mediante regresi&oacute;n no lineal utilizando una ecuaci&oacute;n de Langmuir modificada. Conservador no substituci&oacute;n de residuo de tript&oacute;fano (W687) casi hab&iacute;a abolido quitina-afinidad y quitosano dram&aacute;ticamente reducido vinculante conservando el nivel original de enlace curdlan. Doble mutaci&oacute;n E668K/P689A hab&iacute;a alterado la especificidad para varios substratos y deterior&oacute; tambi&eacute;n quitina vinculante significativamente. Otras sustituciones en el sitio de Uni&oacute;n alteraci&oacute;n especificidad de sustrato, pero tuvieron poco efecto en total afinidad por la quitina. Curiosamente, mutaci&oacute;n T682A condujo a una mayor especificidad hacia sustratos quitinosas que el tipo salvaje. Adem&aacute;s, la prote&iacute;na del h&iacute;brido de ChBD-GFP fue probada para su uso en el diagn&oacute;stico de la coloraci&oacute;n de las paredes celulares de hongos y levaduras y para la detecci&oacute;n de infecciones mic&oacute;ticas en muestras de tejido.

Mutaci&oacute;n de residuos del sitio activo en el dominio de uni&oacute;n a quitina ChBDChiA1 de chitinase A1 de Bacillus circulans altera la especificidad de sustrato: uso de un an&aacute;lisis de uni&oacute;n de la prote&iacute;na verde fluorescente.

&#x553E;&#x6DB2;&#x53D1;&#x6325;&#x8BB8;&#x591A;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6DA6;&#x6ED1;&#x548C;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x5230;&#x6D88;&#x5316;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x5404;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x5BB6;&#x5C5E;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#xFF0C;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x8981;&#x5C3D;&#x53EF;&#x80FD;&#x67E5;&#x660E;&#x5C3D;&#x53EF;&#x80FD;&#x591A;&#x7684;&#x553E;&#x6DB2;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5B9E;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E00;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F53;&#x6DB2;&#x7684;&#x5168;&#x7403;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE;&#x4E09;&#x4EBA;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5BFC;&#x7BA1;&#x5206;&#x6CCC;&#x6536;&#x96C6;&#x816E;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC4;&#x5206;&#x9694;&#x5F00; SDS-&#x805A;&#x4E19;&#x70EF;&#x9170;&#x80FA;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3; &#xFF08;2D SDS&#xFF09;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x51DD;&#x80F6;&#x70B9;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x80BD;&#x8D28;&#x91CF;&#x6307;&#x7EB9;&#x56FE;&#x8C31;&#xFF0C;&#x548C;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x6240;&#x9009;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x4E32;&#x8054;&#x8D28;&#x8C31;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8865;&#x5145;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7528;&#x4E8E;&#x8D85;&#x6EE4;&#x51C6;&#x5907;&#x816E;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x76F4;&#x63A5;&#x6216;&#x540E;&#x4F7F;&#x7528;&#x8D28;&#x8C31;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53CD;&#x76F8;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5206;&#x79BB;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x7684;&#x51E0;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;2D SDS-&#x70B9; MS &#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x6210;&#x5206;&#x7684;&#x553E;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; cystatins&#x3001; histatins&#x3001; &#x6EB6;&#x83CC;&#x9176;&#x3001; &#x548C;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x548C; &alpha;-&#x6DC0;&#x7C89;&#x9176;&#x3001; &#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x548C;&#x5BCC;&#x542B;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7247;&#x6BB5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5982;&#x950C;-&alpha;-2-&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x53CA;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x4E9A;&#x578B;&#x3002;MS &#x8D85;&#x6EE4;&#x6DB2;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x5206;&#x6570;&#x7684;&#x816E;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#x80BD;&#x5BCC;&#xFF0C;&#x5BCC;&#x542B;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684; histatins &#x7684;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x7247;&#x6BB5;&#x3002;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4F7F;&#x7528;&#x767D;&#x8272;&#x5FF5;&#x73E0;&#x83CC;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x673A;&#x4F53;&#x8868;&#x660E;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x591A;&#x80BD;&#x6709;&#x6297;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x553E;&#x6DB2;&#x662F;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x80BD;&#x7684;&#x8BCA;&#x65AD;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

&#x5BF9;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x816E;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x548C; peptidome&#xFF1A; &#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528; 2D SDS&#x3001; &#x8D85;&#x6EE4;&#x3001; &#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x3001; &#x8D28;&#x8C31;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

Saliva plays many biological roles, from lubrication and digestion to regulating bacterial and leukocyte adhesion. To understand the functions of individual components and families of molecules, it is important to identify as many salivary proteins as possible. Toward this goal, we used a proteomic approach as the first step in a global analysis of this important body fluid. We collected parotid saliva as the ductal secretion from three human donors and separated the protein components by two-dimensional SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (2D SDS-PAGE). Proteins in gel spots were identified by peptide mass fingerprinting, and the results were confirmed by tandem mass spectrometry of selected peptides. Complementing this approach we used ultrafiltration to prepare a low-molecular-weight fraction of parotid saliva, which was analyzed directly or after reversed phase high-performance liquid chromatography separation by using mass spectrometric approaches. MS analyses of 2D SDS-PAGE spots revealed known components of saliva, including cystatins, histatins, lysozyme, and isoforms and/or fragments of alpha-amylase, albumin, and proline-rich proteins. We also discovered novel proteins, such as several isoforms of Zn-alpha-2-glycoprotein and secretory actin-binding protein. MS analyses of the ultrafiltrate showed that the low-molecular-weight fraction of parotid saliva was peptide-rich, with novel fragments of proline-rich proteins and histatins in abundance. Experiments using Candida albicans as the test organism showed that at least one of the novel peptides had antifungal activity. Our results show that saliva is a rich source of proteins and peptides that are potential diagnostic and therapeutic targets.

Toward defining the human parotid gland salivary proteome and peptidome: identification and characterization using 2D SDS-PAGE, ultrafiltration, HPLC, and mass spectrometry.

Salive joue de nombreux r&ocirc;les biologiques, de lubrification et de digestion pour r&eacute;glementer l&#39;adh&eacute;rence bact&eacute;rienne et de leucocytes. Pour comprendre les fonctions des composants individuels et familles de mol&eacute;cules, il est important d&#39;identifier des prot&eacute;ines salivaires autant que possible. Pour atteindre ce but, nous avons utilis&eacute; une approche prot&eacute;omique comme la premi&egrave;re &eacute;tape d&#39;une analyse globale de ce fluide corporel important. Nous comme la s&eacute;cr&eacute;tion canalaire r&eacute;colt&eacute;es salive parotide trois donneurs humains et s&eacute;par&eacute; les composants des prot&eacute;ines par &eacute;lectrophor&egrave;se sur gel SDS-polyacrylamide &agrave; deux dimensions (2D SDS-PAGE). Prot&eacute;ines en gel taches ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es par la masse de peptide prise d&#39;empreintes digitales, et les r&eacute;sultats ont &eacute;t&eacute; confirm&eacute;s par spectrom&eacute;trie de masse de peptides s&eacute;lectionn&eacute;s. Compl&eacute;ter cette approche, nous avons utilis&eacute; l&#39;ultrafiltration pour pr&eacute;parer une fraction de faible poids mol&eacute;culaire de la salive parotide, qui a &eacute;t&eacute; analys&eacute;e directement ou apr&egrave;s avoir invers&eacute; s&eacute;paration de chromatographie liquide &agrave; haute performance de phase en utilisant des approches par spectrom&eacute;trie de masse. MS analyses des spots de SDS-PAGE 2D ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; des composants connus de salive, y compris cystatins, histatins, lysozyme et isoformes ou fragments de prot&eacute;ines riches en proline, d&#39;albumine et l&#39;alpha-amylase. Nous avons aussi d&eacute;couvert de nouvelles prot&eacute;ines, tels que plusieurs isoformes de la prot&eacute;ine s&eacute;cr&eacute;toire de liaison de l&#39;actine et de Zn-alpha-2-glycoprot&eacute;ine. Les analyses de MS de l&#39;ultrafiltrate ont montr&eacute; que la fraction de faible poids mol&eacute;culaire de la salive parotide est riche en peptide, avec nouveaux fragments de prot&eacute;ines riches en proline et histatins en abondance. Exp&eacute;riences &agrave; l&#39;aide de Candida albicans, comme l&#39;organisme d&#39;essai a montr&eacute; qu&#39;au moins un des nouveaux peptides avait une activit&eacute; antifongique. Nos r&eacute;sultats montrent que la salive est une source riche de prot&eacute;ines et de peptides qui sont des cibles potentielles de diagnostiques et th&eacute;rapeutiques.

Vers la d&eacute;finition du prot&eacute;ome salivaire parotide humaine et peptidome : identification et caract&eacute;risation par SDS-PAGE 2D, ultrafiltration, HPLC et spectrom&eacute;trie de masse.

Gegen die Definition des menschlichen Proteoms Ohrspeicheldr&#xFC;se Speicheldr&#xFC;se und Peptidoms: Identifizierung und Charakterisierung mittels 2D-SDS-PAGE, Ultrafiltration, HPLC und Massenspektrometrie.

Saliva Gioca molti ruoli biologici, dalla lubrificazione e digestione per regolamentare l&#39;adesione batterica e dei leucociti. Per capire le funzioni dei singoli componenti e delle famiglie di molecole, &egrave; importante identificare le proteine salivare come molti come possibile. Verso questo obiettivo, abbiamo utilizzato un approccio proteomico come il primo passo in un&#39;analisi globale di questo fluido corpo importante. Abbiamo raccolto parotide saliva come la secrezione duttale da tre donatori umani e separate le componenti proteiche di elettroforesi del gel di SDS-poliacrilammide bidimensionale (2D SDS-PAGE). Le proteine nel gel macchie sono state individuate dalla massa del peptide impronte digitali, e i risultati sono stati confermati dalla spettrometria di massa tandem di peptidi selezionati. A complemento di questo approccio abbiamo usato ultrafiltrazione per preparare una frazione di basso peso molecolare di saliva parotide, che &egrave; stata analizzata direttamente o dopo aver invertito separazione di fase cromatografia liquida ad alte prestazioni utilizzando approcci spettrometrico di massa. MS analisi delle macchie di SDS-PAGE 2D rivelato componenti noti di saliva, tra cui cystatins, histatins, lisozima e isoforme o frammenti di proteine ricche di prolina, albumina e alfa-amilasi. Abbiamo anche scoperto il romanzo proteine, come ad esempio diverse isoforme di Zn-alfa-2-glicoproteina e secretiva actina-binding protein. Analisi MS l&#39;ultrafiltrato ha dimostrato che la frazione di basso peso molecolare della parotide saliva era ricco di peptidi, con nuovi frammenti di proteine ricche di prolina e histatins in abbondanza. Esperimenti usando Candida albicans come organismo test hanno mostrato che almeno uno dei peptidi romanzo aveva attivit&agrave; antimicotica. I nostri risultati mostrano che la saliva &egrave; una ricca fonte di proteine e peptidi che sono potenziali obiettivi diagnostici e terapeutici.

Verso la definizione della ghiandola parotide human proteome salivare e peptidome: identificazione e caratterizzazione mediante SDS-PAGE 2D, ultrafiltrazione, HPLC e spettrometria di massa.

&#x553E;&#x6DB2;&#x306F;&#x3001;&#x6F64;&#x6ED1;&#x6CB9;&#x3068;&#x6D88;&#x5316;&#x7D30;&#x83CC;&#x3084;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x9650;&#x308A;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x553E;&#x6DB2;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x306B;&#x5411;&#x3051;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4F53;&#x6DB2;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8033;&#x4E0B;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#x81B5;&#x5206;&#x6CCC;&#x3068;&#x3057;&#x3066; 3 &#x3064;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x53CE;&#x96C6;&#x3057;&#x3001;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143; SDS &#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9; &#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; (2 D SDS &#x30DA;&#x30FC;&#x30B8;) &#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6307;&#x7D0B;&#x63A1;&#x53D6;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x8CEA;&#x91CF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3059;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x753B;&#x5206;&#x76F4;&#x63A5;&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5F8C;&#x76F8;&#x9AD8;&#x901F;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x5206;&#x96E2;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9006;&#x8EE2;&#x8033;&#x4E0B;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x306B;&#x9650;&#x5916;&#x308D;&#x904E;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2D &#x306E; SDS &#x30DA;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; MS &#x89E3;&#x6790; cystatins&#x3001;histatins&#x3001;&#x30EA;&#x30BE;&#x30C1;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x304A;&#x3088;&#x3073; &alpha;-&#x30A2;&#x30DF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E; Zn &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; 2 &#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x6CCC;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9650;&#x5916;&#x308D;&#x904E;&#x306E; MS &#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x753B;&#x5206;&#x8033;&#x4E0B;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068; histatins &#x3092;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306B;&#x3002;&#x8A66;&#x9A13;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 1 &#x3064;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x553E;&#x6DB2;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x8A3A;&#x65AD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8033;&#x4E0B;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x306B;&#x5411;&#x3051;&#x3066;: &#x540C;&#x5B9A;&#x3068; 2D SDS &#x30DA;&#x30FC;&#x30B8;&#x3001;&#x9650;&#x5916;&#x308D;&#x904E;&#x3001;HPLC &#x53CA;&#x3073;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x89E3;&#x6790;&#x3002;

&#xD0C0; &#xC561; &#xC724; &#xD65C;&#xACFC; &#xC18C;&#xD654; &#xC138;&#xADE0;&#xACFC; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; &#xC811;&#xCC29; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBCC4; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xB9CE;&#xC740; &#xCE68; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC911;&#xC694;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xD5A5;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCCB4;&#xC561;&#xC774; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xBD84;&#xC11D; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB85C; proteomic &#xC811;&#xADFC;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; 3 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; ductal &#xBD84; &#xBE44;&#xB85C; parotid &#xD0C0; &#xC561;&#xC744; &#xC218;&#xC9D1; &#xD558; &#xACE0; 2 &#xCC28;&#xC6D0; SDS polyacrylamide &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; (2D SDS &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;)&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xBD84;&#xB9AC;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC824; &#xBA85;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xBB38;, &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC9C8;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xBC0F; &#xACB0;&#xACFC; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xD150; &#xB364; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD55C; &#xB0AE;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xBB34;&#xAC8C; &#xBD84;&#xC218; parotid &#xD0C0; &#xC561;&#xC744; &#xC9C1;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; &#xB300;&#xB7C9; spectrometric &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xACC4; &#xACE0;&#xC131;&#xB2A5; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD6C4; &#xBC18;&#xC804; &#xC900;&#xBE44; &#xD558; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC644; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 2D SDS &#xD398;&#xC774;&#xC9C0; &#xBA85;&#xC18C;&#xC758; MS &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; &#xD0C0; &#xC561;, cystatins, histatins, lysozyme, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; isoforms &#xB610;&#xB294; &#xC54C;&#xD30C;-&#xC544; &#xBC00;&#xB77C; &#xC81C;, &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC;, &#xD504;&#xB864;&#xB9B0;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC870;&#xAC01; &#xB4F1;&#xC758; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; Zn &#xC54C;&#xD30C; 2 &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xBD84; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; isoforms &#xAC19;&#xC740; &#xC18C;&#xC124; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. Ultrafiltrate&#xC758; MS &#xBD84;&#xC11D; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; parotid &#xD0C0; &#xC561;&#xC758; &#xC800; &#xBD84;&#xC790; &#xBB34;&#xAC8C; &#xBD84;&#xC218;&#xB294; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xCE58;, &#xD504;&#xB864;&#xB9B0;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD48D;&#xBD80; &#xD558; &#xAC8C;&#xC5D0;&#xC11C; histatins&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xD30C;&#xD3B8;. &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC720; &#xAE30;&#xCCB4;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC744; &#xD56D;&#xC9C4;&#xADE0; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; Candida albicans&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E4;&#xD5D8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD0C0; &#xC561;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC18C;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xADC0; &#xBC11; &#xC120; &#xCE68; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634; &#xBC0F; peptidome &#xC815;&#xC758; &#xD5A5;&#xD574;: &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; 2D SDS &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;, &#xD55C;, HPLC, &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

Saliva desempe&ntilde;a muchas funciones biol&oacute;gicas, de la lubricaci&oacute;n y la digesti&oacute;n a la regulaci&oacute;n de la adhesi&oacute;n de bacterias y leucocitos. Para entender las funciones de los componentes individuales y familias de mol&eacute;culas, es importante identificar prote&iacute;nas salivales tantos como sea posible. Hacia este objetivo, utilizamos un enfoque prote&oacute;mico como el primer paso en un an&aacute;lisis global de este importante l&iacute;quido del cuerpo. Recogimos saliva par&oacute;tida como la secreci&oacute;n ductal de tres donantes humanos y separados los componentes de prote&iacute;nas mediante electroforesis bidimensional de gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE 2D). Prote&iacute;nas en gel de puntos fueron identificadas por la masa de p&eacute;ptido toma de huellas dactilares, y los resultados fueron confirmados por espectrometr&iacute;a total en t&aacute;ndem de p&eacute;ptidos seleccionados. Complementando este enfoque utilizamos ultrafiltraci&oacute;n para preparar una fracci&oacute;n de bajo peso molecular de saliva par&oacute;tida, que analiz&oacute; directamente o despu&eacute;s invirti&oacute; separaci&oacute;n de cromatograf&iacute;a l&iacute;quida de alto rendimiento de fase utilizando enfoques de espectrometr&iacute;a de masa. An&aacute;lisis de MS de puntos 2D de SDS-PAGE revelaron componentes conocidos de saliva, incluyendo cistatinas, histatins, lisozima e isoformas o fragmentos de alfa-amilasa, alb&uacute;mina y prote&iacute;nas ricas en prolina. Tambi&eacute;n descubrimos nuevas prote&iacute;nas, como varias isoformas de Zn-alfa-2-glicoprote&iacute;na y prote&iacute;na de uni&oacute;n a actina secretor. Los an&aacute;lisis de MS de la ultrafiltrado demostraron que la fracci&oacute;n de bajo peso molecular de saliva par&oacute;tida era rica en p&eacute;ptidos, con nuevos fragmentos de prote&iacute;nas ricas en prolina y histatins en abundancia. Experimentos utilizando Candida albicans como el organismo de prueba demostr&oacute; que al menos uno de los p&eacute;ptidos novela tiene actividad antif&uacute;ngica. Nuestros resultados muestran que la saliva es una fuente rica de prote&iacute;nas y p&eacute;ptidos que son potenciales dianas diagn&oacute;sticas y terap&eacute;uticas.

Hacia la definici&oacute;n del proteoma salival par&oacute;tida humana y peptidome: identificaci&oacute;n y caracterizaci&oacute;n mediante SDS-PAGE 2D, ultrafiltraci&oacute;n, HPLC y espectrometr&iacute;a de masas.

Beurteilung der Auswirkungen der Tagesgang &#xFC;ber die Zusammensetzung des menschlichen Parotisspeichel: quantitative Analyse von nativen Peptiden mit iTRAQ Reagenzien.

&#x553E;&#x6DB2;&#x6210;&#x5206;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x4E0E;&#x75BE;&#x75C5;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x3001; &#x75BE;&#x75C5;&#x72B6;&#x6001;&#x6216;&#x4E24;&#x8005;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x553E;&#x6DB2;&#x4E3A;&#x8BCA;&#x65AD;&#x76EE;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x817A;&#x7279;&#x5B9A;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x6216;&#x663C;&#x591C;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x5957;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x80BD; &lt; &#x6216; = 10 kDa &#x5206;&#x6570;&#x7684;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x8BB8;&#x591A;&#x65B0;&#x578B;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x816E;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B0;&#x578B; iTRAQ &#x6807;&#x8BB0;&#x5316;&#x5B66;&#x8C03;&#x67E5;&#x53EF;&#x80FD;&#x663C;&#x591C;&#x5BF9;&#x80BD;&#x4E00;&#x4EE3;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6536;&#x96C6;&#x6837;&#x54C1;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x4F5C;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x6700;&#x5C0F;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#xFF0C;&#x6C47;&#x96C6;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6839;&#x636E;&#x96C6;&#x5408;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9694;&#x79BB;&#x9AD8;&#x5206;&#x6570;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9;&#x7684;&#x5BFC;&#x7BA1;&#x5206;&#x6CCC;&#x7269;&#x7684;&#x5473;&#x89C9;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x5728;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x96C6;&#x5408;&#x65F6;&#x6240;&#x6536;&#x96C6;&#x7684;&#x6837;&#x672C;&#x662F;&#x4E0D;&#x540C;&#x7B49;&#x538B; iTRAQ &#x8BD5;&#x5242;&#x884D;&#x751F;&#x5316;&#x3002;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x6837;&#x672C;&#x5408;&#x5E76;&#x3001; &#x53CD;&#x76F8;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x5206;&#x79BB;&#x3001; &#x4E0E;&#x77E9;&#x9635;&#x5BF9;&#x76EE;&#x6807;&#x8FDB;&#x884C;&#x8D28;&#x8C31; co-spotted&#xFF0C;&#x8FDB;&#x884C;&#x8D28;&#x8C31; TOF/TOF &#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x65F6;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x56DB;&#x4E2A;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9;&#x7684;&#x816E;&#x817A;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5B9A;&#x91CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5728;&#x82E5;&#x5E72;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E00;&#x5929;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E30;&#x5EA6;&#x53D1;&#x751F;&#x5DE8;&#x5927;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;iTRAQ &#x6807;&#x8BB0;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E86; MS/MS &#x788E;&#x7247;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x591A;&#x80BD;&#x9274;&#x5B9A;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x65E2;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x5BF9;&#x6784;&#x6210;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x816E;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2; peptidome &#x663C;&#x591C;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;

&#x8BC4;&#x4F30;&#x5BF9;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x816E;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF1A; &#x4F7F;&#x7528; iTRAQ &#x8BD5;&#x5242;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Changes in salivary composition correlate with disease susceptibility, disease state, or both. However, use of saliva for diagnostic purposes is complicated by the gland-specific effects of circadian rhythm or diurnal variation. We recently characterized a suite of peptides in the < or =10-kDa fraction of human parotid saliva that included many novel species. In this study, we used novel iTRAQ labeling chemistry to investigate possible diurnal effects on peptide generation. We collected samples produced by gustatory stimulation as the ductal secretions at four time points under conditions that minimized proteolysis, pooled them according to collection time, and isolated the LMW fractions. Samples collected at each collection time were derivatized with a different isobaric iTRAQ reagent. The labeled samples were combined, separated by reversed-phase HPLC, co-spotted with matrix on MALDI targets, and analyzed by MALDI TOF/TOF mass spectrometry. With this approach, we achieved relative quantification of the parotid peptides at four time points. In several cases, abundance during the day changed dramatically. iTRAQ tagging improved the efficiency of MS/MS fragmentation, which in turn allowed the identification of several novel peptides. Our results demonstrated both the utility of this method and the importance of diurnal effects on the composition of the human parotid saliva peptidome.

Assessing the effects of diurnal variation on the composition of human parotid saliva: quantitative analysis of native peptides using iTRAQ reagents.

Changements dans la composition salivaire sont corr&eacute;l&eacute;s avec la susceptibilit&eacute; &agrave; la maladie, l&#39;&eacute;tat morbide ou les deux. Cependant, l&#39;utilisation de la salive &agrave; des fins diagnostiques est compliqu&eacute;e par les effets de la glande sp&eacute;cifique du rythme circadien ou variation diurne. Nous avons r&eacute;cemment caract&eacute;ris&eacute; une suite des peptides dans le &lt; ou = fraction 10 kDa de la salive parotide humaine qui comprenait de nombreuses nouvelles esp&egrave;ces. Dans cette &eacute;tude, nous avons utilis&eacute; le roman iTRAQ &eacute;tiquetage chimie pour enqu&ecirc;ter sur les possibles effets diurnes sur la g&eacute;n&eacute;ration de peptide. Nous avons pr&eacute;lev&eacute; des &eacute;chantillons produits par la stimulation gustative comme les s&eacute;cr&eacute;tions canalaires &agrave; quatre points dans le temps dans des conditions qui r&eacute;duit au minimum la prot&eacute;olyse et isolement les fractions LMW mis en commun leur fonction de l&#39;heure de la collection. &Eacute;chantillons pr&eacute;lev&eacute;s lors de chaque collection sont d&eacute;rivatis&eacute;s avec un r&eacute;actif diff&eacute;rent iTRAQ isobare. Les &eacute;chantillons marqu&eacute;s ont &eacute;t&eacute; combin&eacute;es, s&eacute;par&eacute;s par HPLC en phase invers&eacute;e, co-spotted avec matrice sur des cibles MALDI et analys&eacute;s par spectrom&eacute;trie de masse MALDI-TOF/TOF. Avec cette approche, nous avons atteint la quantification relative des parotides peptides &agrave; quatre points dans le temps. Dans plusieurs cas, l&#39;abondance pendant la journ&eacute;e radicalement chang&eacute;. marquage iTRAQ am&eacute;lior&eacute; l&#39;efficacit&eacute; de fragmentation MS/MS, qui &agrave; son tour a permis d&#39;identifier plusieurs nouveaux peptides. Nos r&eacute;sultats d&eacute;montrent aussi bien l&#39;utilit&eacute; de cette m&eacute;thode et l&#39;importance des effets diurnes sur la composition de la peptidome de la salive parotide humaine.

&Eacute;valuation des effets de variation diurne sur la composition de la salive parotide humaine : analyse quantitative des peptides natifs &agrave; l&#39;aide de r&eacute;actifs iTRAQ.

Cambiamenti nella composizione salivare correlano con suscettibilit&agrave; di malattia, stato di malattia o entrambi. Tuttavia, uso di saliva per scopi diagnostici &egrave; complicata dagli effetti specifici di ghiandola del ritmo circadiano o variazione diurna. Abbiamo recentemente caratterizzato un suite dei peptidi nel &lt; o = 10-kDa frazione di saliva umana parotide che comprendeva molte specie di romanzo. In questo studio, abbiamo usato il romanzo iTRAQ etichettatura chimica per indagare su possibili effetti diurni sulla generazione del peptide. Abbiamo raccolto campioni di prodotto da stimolazione gustativa come le secrezioni ductal in quattro punti temporali in condizioni che minimizzato proteolisi, pool di secondo tempo insieme e isolato le frazioni LMW. I campioni raccolti in ogni momento di raccolta erano derivatizzati con un reagente iTRAQ isobarico differenti. I campioni etichettati erano combinati, separati mediante HPLC in fase inversa, co-spotted con matrix su obiettivi di MALDI e analizzati tramite spettrometria di massa MALDI-TOF/TOF. Con questo approccio, abbiamo raggiunto la relativa quantificazione dei peptidi parotidei in quattro punti temporali. In diversi casi, abbondanza durante il giorno &egrave; cambiata radicalmente. iTRAQ tagging migliorato l&#39;efficienza di frammentazione MS/MS, che a sua volta ha permesso l&#39;identificazione di diversi peptidi romanzo. I nostri risultati hanno dimostrato sia l&#39;utilit&agrave; di questo metodo e l&#39;importanza degli effetti diurni sulla composizione del peptidome saliva umana parotide.

Valutare gli effetti della variazione diurna sulla composizione della saliva umana parotide: analisi quantitativa dei peptidi nativi utilizzando reagenti iTRAQ.

&#x553E;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x75BE;&#x60A3;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3001;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x8A3A;&#x65AD;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3084;&#x65E5;&#x5185;&#x5909;&#x52D5;&#x817A;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8907;&#x96D1;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30B9;&#x30A4;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3001;&lt; &#x307E;&#x305F;&#x306F; = &#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x7A2E;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8033;&#x4E0B;&#x306E;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E; 10 kDa &#x5206;&#x6570;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x751F;&#x6210;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x65E5;&#x5468;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5C0F;&#x8AAC; iTRAQ &#x5316;&#x5B66;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x81B5;&#x5206;&#x6CCC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x5316;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6642;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067; 4 &#x3064;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x6642;&#x70B9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5473;&#x899A;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x53CE;&#x96C6;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5404;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x6642;&#x306B;&#x53CE;&#x96C6;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5B9A;&#x5727; iTRAQ &#x8A66;&#x85AC;&#x3067;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x5408;&#x9006;&#x76F8; HPLC &#x3067;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3001;&#x884C;&#x5217;&#x3001;MALDI &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092; co-spotted&#x3001;TOF/TOF MALDI &#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;4 &#x3064;&#x306E;&#x6642;&#x70B9;&#x3067;&#x306E;&#x8033;&#x4E0B;&#x817A;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x65E5;&#x4E2D;&#x306F;&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x5316;&#x3002;iTRAQ &#x30BF;&#x30AE;&#x30F3;&#x30B0; MS/MS &#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x9806;&#x756A;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x5411;&#x4E0A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8033;&#x4E0B;&#x306E;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x65E5;&#x5468;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8033;&#x4E0B;&#x306E;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x5909;&#x52D5;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x8A55;&#x4FA1;: iTRAQ &#x8A66;&#x85AC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#xCE68; &#xC131;&#xBD84;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xC0C1;&#xAD00; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131;, &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC0C1;&#xD0DC;, &#xB610;&#xB294; &#xB458; &#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBAA9;&#xC801;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD0C0; &#xC561;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; circadian &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC758; &#xC77C;&#xC8FC; &#xBCC0;&#xD654; &#xC120; &#xAD00;&#xB828; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC740; &lt; = 10 kDa &#xC77C;&#xBD80;&#xBD84; &#xD3EC;&#xD568; &#xB9CE;&#xC740; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC885;&#xC758; &#xC778;&#xAC04; parotid &#xCE68; &#xB610;&#xB294;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC77C;&#xC8FC; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC18C;&#xC124; iTRAQ &#xD654;&#xD559; &#xB77C;&#xBCA8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC218;&#xC9D1; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD480;&#xB9C1;&#xB41C; LMW &#xBD84;&#xC218;&#xB97C; &#xC808;&#xC5F0; &#xD558;&#xB294; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; ductal &#xBD84; &#xBE44;&#xC640; &#xBBF8;&#xAC01; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC791; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC218;&#xC9D1;. &#xAC01; &#xC218;&#xC9D1; &#xC2DC; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xB4F1; iTRAQ &#xC2DC; &#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; derivatized &#xD588;&#xB2E4;. &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xC0D8;&#xD50C;, &#xACB0;&#xD569; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC18;&#xB300; &#xC704;&#xC0C1; HPLC&#xB85C; &#xAD6C;&#xBD84;, MALDI &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC640; co-spotted &#xBC0F; MALDI TOF/TOF &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; parotid &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300; &#xBD80; &#xB7C9; &#xB2EC;&#xC131;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558;&#xB8E8; &#xB3D9;&#xC548; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xB00C;&#xC5C8;&#xB2E4;. iTRAQ &#xD0DC;&#xADF8; &#xCC28;&#xB840;&#xB85C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC2E0;&#xAE30;&#xD55C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; MS/MS &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBAA8;&#xB450;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xC640; &#xC778;&#xAC04; parotid &#xCE68; peptidome&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0; &#xC77C;&#xC8FC; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; parotid &#xD0C0; &#xC561;&#xC758; &#xC131;&#xBD84;&#xC5D0; &#xC77C;&#xC8FC; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD3C9;&#xAC00;: iTRAQ &#xC2DC; &#xC57D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;.

Cambios en la composici&oacute;n salival se correlacionan con la susceptibilidad de la enfermedad, el estado de la enfermedad o ambos. Sin embargo, el uso de saliva para prop&oacute;sitos de diagn&oacute;stico se complica por los efectos espec&iacute;ficos de la gl&aacute;ndula del ritmo circadiano o variaci&oacute;n diurna. Caracterizamos recientemente un conjunto de p&eacute;ptidos en la &lt; o = fracci&oacute;n de 10 kDa de saliva par&oacute;tida humana que incluye muchas nuevas especies. En este estudio, utilizamos la novela iTRAQ etiquetado qu&iacute;mica para investigar posibles efectos diurnos en la generaci&oacute;n de p&eacute;ptidos. Recogimos muestras producidas por el est&iacute;mulo gustativo como las secreciones ductales en cuatro puntos del tiempo en condiciones que minimizan la prote&oacute;lisis, les agruparon seg&uacute;n el tiempo de colecci&oacute;n y aislaron de las fracciones de BPM. Las muestras recogidas en cada momento de la colecci&oacute;n fueron derivatizadas con un reactivo de diferentes iTRAQ isob&aacute;rico. Las muestras marcadas fueron combinadas, separadas por HPLC de fase inversa, co-spotted con matriz en objetivos MALDI y analizadas por espectrometr&iacute;a de masas MALDI TOF/TOF. Con este enfoque, logramos cuantificaci&oacute;n relativa de los p&eacute;ptidos par&oacute;tidas en cuatro puntos del tiempo. En varios casos, la abundancia durante el d&iacute;a cambi&oacute; dram&aacute;ticamente. Etiquetado iTRAQ mejor&oacute; la eficacia de la fragmentaci&oacute;n de MS/MS, que a su vez permiti&oacute; la identificaci&oacute;n de varios p&eacute;ptidos novela. Nuestros resultados demuestran tanto la utilidad de este m&eacute;todo y la importancia de diurnas efectos sobre la composici&oacute;n de la saliva par&oacute;tida humana peptidome.

Evaluar los efectos de la variaci&oacute;n diurna en la composici&oacute;n de la saliva par&oacute;tida humana: an&aacute;lisis cuantitativo de p&eacute;ptidos nativos iTRAQ reactivos.

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x553E;&#x6DB2;&#x7B49;&#x4F53;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E30;&#x5BCC;&#x80BD;&#x6C47;&#x8F91; &#x300B;&#xFF0C;&#x53CD;&#x6620;&#x4E86;&#x9176;&#x3001; &#x886C;&#x5E95;&#x548C;&#x6291;&#x5236;&#x5242;/&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6B64; subproteome &#x662F;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x6216;&#x95F4;&#x63A5;&#x5730;&#x6D89;&#x53CA;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x7684;&#x6765;&#x6E90;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x5F88;&#x4F4E;&#x4E30;&#x5EA6;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5F88;&#x96BE;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x7C7B;&#x548C;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5E26;&#x504F;&#x89C1;&#x7684;&#x3001; &#x5168;&#x7403;&#x6027;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7D2F;&#x79EF;&#x7684;&#x80BD;&#x4EA7;&#x54C1;&#x654F;&#x611F;&#x6280;&#x672F;&#x5C06;&#x7528;&#x4E8E;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x6D3B;&#x52A8;&#x975E;&#x5E38;&#x6709;&#x7528;&#x3002;&#x5EFA;&#x8BBE; 18O &#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x957F;&#x671F;&#x7528;&#x4E8E;&#x5206;&#x7C7B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x9176;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x8BA2;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x540E; ex &#x4F53;&#x5185;&#x5B75;&#x5316;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x816E;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x5F15;&#x5165; 18O &#x60F0;&#x6027;&#x6D53;&#x7F29;&#x6C34;&#x4ECE; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x7FA7;&#x80BD;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;&#x968F;&#x540E;&#x80BD;&#x5E8F;&#x5217;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x542F;&#x7528;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x9176;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x4EA7;&#x54C1;&#x79BB;&#x6563;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6307;&#x7EB9;&#x4E4B;&#x4E00;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6FC0;&#x80BD;&#x91CA;&#x653E;&#x9176;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x79F0;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x53E4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x53E4;&#x5168;&#x7403;&#x8BC4;&#x4F30;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x7528;&#x4E8E;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x8868;&#x5F81;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8D28;&#x8C31;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x3002;

Endogenous proteinases in biological fluids such as human saliva produce a rich peptide repertoire that reflects a unique combination of enzymes, substrates, and inhibitors/activators. Accordingly, this subproteome is an interesting source of biomarkers for disease processes that either directly or indirectly involve proteolysis. However, the relevant proteinases, typically very low abundance molecules, are difficult to classify and identify. We hypothesized that a sensitive technique for monitoring accumulated peptide products in an unbiased, global manner would be very useful for detecting and profiling proteolytic activities in complex biological samples. Building on the longstanding use of 18O isotope-based approaches for the classification of proteolytic and other enzymatic processes we devised a new method for evaluating endogenous proteinases. Specifically, we showed that upon ex vivo incubation endogenous proteinases in human parotid saliva introduced 18O from isotopically enriched water into the C-terminal carboxylic groups of their peptide products. Subsequent peptide sequence determination and inhibitor profiling enabled the detection of discrete subsets of proteolytic products that were generated by different enzymes. As a proof-of-principle we used one of these fingerprints to identify the relevant activity as tissue kallikrein. We termed this technique PALeO. Our results suggest that PALeO is a rapid and highly sensitive method for globally assessing proteinase activities in complex biological samples.

A mass spectrometry-based strategy for detecting and characterizing endogenous proteinase activities in complex biological samples.

Les prot&eacute;inases endog&egrave;nes dans les fluides biologiques tels que la salive humaine produisent un r&eacute;pertoire riche de peptide qui refl&egrave;te une combinaison unique d&#39;enzymes, substrats et inhibiteurs/activateurs. En cons&eacute;quence, cette subproteome est une source int&eacute;ressante de biomarqueurs pour des processus morbides qui directement ou indirectement impliquent la prot&eacute;olyse. Toutefois, les prot&eacute;inases pertinentes, des mol&eacute;cules en g&eacute;n&eacute;ral tr&egrave;s peu abondantes, sont difficiles &agrave; classer et identifier. Nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se qu&#39;une technique sensible pour la surveillance des produits peptidiques accumul&eacute;s de mani&egrave;re impartiale, globale serait tr&egrave;s utile pour la d&eacute;tection et le profilage des activit&eacute;s prot&eacute;olytiques dans des &eacute;chantillons biologiques complexes. S&#39;appuyant sur l&#39;utilisation de longue date des approches isotope 18O pour la classification des prot&eacute;olytiques et autres proc&eacute;d&eacute;s enzymatiques nous mis au point une nouvelle m&eacute;thode d&#39;&eacute;valuation des prot&eacute;inases endog&egrave;nes. Plus pr&eacute;cis&eacute;ment, nous avons montr&eacute; que sur ex vivo des prot&eacute;inases endog&egrave;nes d&#39;incubation dans la salive parotide humaine introduit 18O de l&#39;eau isotopiquement enrichie en groupes carboxyliques de leurs produits de peptide C-terminal. D&eacute;termination de la s&eacute;quence peptidique ult&eacute;rieures et inhibiteur de profilage activ&eacute; la d&eacute;tection de sous-ensembles discrets de prot&eacute;olytiques produits g&eacute;n&eacute;r&eacute;s par les diff&eacute;rentes enzymes. Comme une preuve de principe, nous avons utilis&eacute; un de ces empreintes digitales pour identifier l&#39;activit&eacute; pertinente comme la kallikr&eacute;ine tissulaire. On appelle cette technique pal&eacute;o. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que le Pal&eacute;o est une m&eacute;thode rapide et tr&egrave;s sensible pour &eacute;valuer globalement les activit&eacute;s de prot&eacute;inase dans des &eacute;chantillons biologiques complexes.

Une strat&eacute;gie bas&eacute; sur la spectrom&eacute;trie de masse pour d&eacute;tecter et caract&eacute;riser les activit&eacute;s des prot&eacute;inases endog&egrave;nes dans les &eacute;chantillons biologiques complexes.

Endogene Proteinasen in biologischen Fl&uuml;ssigkeiten, wie menschliche Speichel produzieren ein Reich Peptid-Repertoire, das eine einzigartige Kombination der Enzyme, Substrate und Inhibitoren/Aktivatoren widerspiegelt. Dementsprechend ist diese Subproteome eine interessante Quelle f&uuml;r Biomarker f&uuml;r Krankheitsprozesse, die direkt oder indirekt Proteolyse betreffen. Allerdings sind die relevanten Proteinasen, in der Regel sehr niedrig F&uuml;lle Molek&uuml;le, schwer zu klassifizieren und zu identifizieren. Wir die Hypothese, dass eine sensible Technik zur &Uuml;berwachung von angesammelten Peptid Produkte unvoreingenommene global kosteng&Atilde;&frac14;nstig sehr n&uuml;tzlich w&auml;re f&uuml;r die Erkennung und Profilerstellung proteolytische Aktivit&auml;ten in komplexen biologischen Proben. Aufbauend auf die langj&auml;hrige Verwendung von 18O Isotop-basierte Ans&auml;tze f&uuml;r die Einstufung von proteolytischen und andere enzymatische Prozesse, die wir entwickelt eine neue Methode zur Bewertung von endogener Proteinasen. Insbesondere haben wir gezeigt, dass bei ex Vivo Inkubation endogene Proteinasen im menschlichen Ohrspeicheldr&uuml;senlymphknoten Speichel 18O aus isotopischer angereichertes Wasser in der C-terminalen carboxylic Gruppen ihrer Peptid-Produkte eingef&uuml;hrt. Nachfolgende Peptid Sequenz Entschlossenheit und Inhibitor Profilerstellung aktiviert die Erkennung von diskrete Teilmengen der proteolytische Produkte, die durch verschiedene Enzyme generiert wurden. Als Beweis-des-Prinzip haben wir eines dieser Fingerabdr&uuml;cke identifizieren die relevante T&auml;tigkeit als Gewebe Kallikrein. Wir bezeichnet diese Technik PALeO. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass PALeO eine schnelle und hochempfindlichen Methode zur Bewertung von Global Proteinase Aktivit&auml;ten in komplexen biologischen Proben ist.

Eine Massen-Spektrometrie-basierte Strategie f&uuml;r die Erkennung und Charakterisierung von endogenen Proteinase Aktivit&auml;ten in komplexen biologischen Proben.

Proteinases endogeno in liquidi biologici come la saliva umana di produrre un repertorio ricco del peptide che riflette una combinazione unica di enzimi, substrati e inibitori/attivatori. Di conseguenza, questo subproteome &egrave; una fonte interessante di biomarcatori per i processi di malattia che direttamente o indirettamente coinvolgono proteolisi. Tuttavia, il proteinases pertinenti, molecole di abbondanza in genere molto bassi, sono difficili da classificare e identificare. Abbiamo ipotizzato che una tecnica sensibile per il monitoraggio del peptide accumulato prodotti in maniera imparziale, globale sarebbe molto utile per il rilevamento e analisi attivit&agrave; proteolitica in campioni biologici complessi. Edificio sull&#39;uso pluriennale di approcci basati su isotopo 18O per la classificazione dei proteolitici e altri processi enzimatici abbiamo ideato un nuovo metodo per la valutazione proteinases endogeno. In particolare, abbiamo mostrato che su ex vivo proteinases endogeno di incubazione in 18O saliva umana parotide introdotto dall&#39;acqua isotopicamente arricchito nei gruppi carbossilici dei loro prodotti del peptide C-terminale. Determinazione di sequenza del peptide successive e inibitore della profilatura abilitato il rilevamento di discreti sottoinsiemi di proteolitici prodotti che sono stati generati da diversi enzimi. Come una prova di principio abbiamo utilizzato uno di queste impronte per identificare l&#39;attivit&agrave; rilevante come callicreina tissutale. Abbiamo chiamato questa tecnica PALeO. I nostri risultati suggeriscono che il PALeO &egrave; un metodo rapido e altamente sensibile per valutare globalmente le attivit&agrave; della proteinasi in campioni biologici complessi.

Una strategia di base di spettrometria di massa per individuare e caratterizzare le attivit&agrave; della proteinasi endogeno in campioni biologici complessi.

&#x3072;&#x3068;&#x553E;&#x6DB2;&#x306A;&#x3069;&#x4F53;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x9175;&#x7D20;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x57FA;&#x677F;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;/&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x8C4A;&#x304B;&#x306A;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30EC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E; subproteome &#x306F;&#x76F4;&#x63A5;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x75C5;&#x6C17;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x8C4A;&#x304B;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x5206;&#x985E;&#x3057;&#x3001;&#x8B58;&#x5225;&#x304C;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x516C;&#x5E73;&#x3001;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x7684;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x88FD;&#x54C1;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x6A5F;&#x5BC6;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x751F;&#x4F53;&#x8A66;&#x6599;&#x4E2D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5F79;&#x306B;&#x7ACB;&#x3064;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;18 O &#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x9577;&#x5E74;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x5206;&#x985E;&#x3068;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8003;&#x6848;&#x3057;&#x305F;&#x4ED6;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5EFA;&#x7269;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6642;&#x306B; ex vivo &#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x5C0E;&#x5165;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8033;&#x4E0B;&#x306E;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E; 18 o &#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x6C34;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30F3;&#x9178;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3068;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x89E3;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x96E2;&#x6563;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x539F;&#x7406;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x7D44;&#x7E54;&#x30AB;&#x30EA;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6307;&#x7D0B;&#x306E; 1 &#x3064;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x53E4;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53E4;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306B;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x751F;&#x4F53;&#x8A66;&#x6599;&#x4E2D;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x6CD5;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x751F;&#x4F53;&#x8A66;&#x6599;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3002;

&#xC778;&#xAC04; &#xCE68; &#xAC19;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xCCB4;&#xC561; &#xB0B4; proteinases &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD6A8;&#xC18C;, &#xAE30;&#xC9C8;, &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;/&#xD65C;&#xC131; &#xC81C;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xBC18;&#xC601; &#xD558;&#xB294; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB808; &#xD37C; &#xD1A0;&#xB9AC;. &#xC774; &#xB530;&#xB77C;&#xC774; subproteome &#xC9C8;&#xBCD1; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xB610;&#xB294; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xC758; &#xC7AC;&#xBBF8; &#xC788;&#xB294; &#xC18C;&#xC2A4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xAD00;&#xB828; proteinases&#xB294; &#xBD84;&#xB958; &#xBC0F; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30;&#xAC00; &#xC5B4;&#xB835;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD3B8;&#xACAC;, &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD95;&#xC801; &#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xC220; &#xAC80;&#xC0C9; &#xBC0F; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC0D8;&#xD50C; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD84;&#xB958; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xB0B4; proteinases&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xACE0;&#xC548; 18O &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xAE30;&#xBC18; &#xC811;&#xADFC;&#xC758; &#xC624;&#xB79C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xAC74;&#xBB3C;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; ex vivo &#xC778;&#xAC04; parotid &#xCE68;&#xC5D0; &#xBD80; &#xD654; &#xC0DD; proteinases &#xB3C4;&#xC785; 18O isotopically &#xB18D;&#xCD95;&#xB41C; &#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; carboxylic &#xADF8;&#xB8F9;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xD6C4;&#xC18D; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC21C;&#xC11C; &#xACB0;&#xC815; &#xBC0F; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; &#xB2E4;&#xB978; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC99D;&#xAC70;&#xC758; &#xC6D0;&#xCE59;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC870;&#xC9C1; kallikrein&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC9C0;&#xBB38; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; PALeO &#xB418; &#xB098;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; PALeO &#xC138;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95; &#xC81C;&#xC548;.

&#xAC10;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xAE30;&#xBC18; &#xC804;&#xB7B5;.

Proteinasas end&oacute;genas en fluidos biol&oacute;gicos como la saliva humana producen un repertorio rico p&eacute;ptido que refleja una combinaci&oacute;n &uacute;nica de enzimas, sustratos y los inhibidores/activadores. Por consiguiente, este subproteomas es una interesante fuente de biomarcadores para procesos de la enfermedad que directa o indirectamente involucran prote&oacute;lisis. Sin embargo, las proteinasas pertinentes, mol&eacute;culas t&iacute;picamente muy baja abundancia, son dif&iacute;ciles de clasificar e identificar. Nuestra hip&oacute;tesis es que una t&eacute;cnica sensible para monitoreo p&eacute;ptido acumulado productos de una manera imparcial, global ser&iacute;a muy &uacute;til para detectar y perfilar las actividades proteol&iacute;ticas en muestras biol&oacute;gicas complejas. Bas&aacute;ndose en el uso desde hace mucho tiempo de enfoques is&oacute;topo 18O para la clasificaci&oacute;n de proteol&iacute;tica y otros procesos enzim&aacute;ticos ideamos un nuevo m&eacute;todo para la evaluaci&oacute;n de proteinasas end&oacute;genos. Espec&iacute;ficamente, nos demostr&oacute; que al ex vivo proteinasas end&oacute;gena de incubaci&oacute;n en humano saliva par&oacute;tida introducido 18O de agua isot&oacute;picamente enriquecido en los grupos carbox&iacute;licos c-terminal de sus productos de p&eacute;ptido. Determinaci&oacute;n de secuencia del p&eacute;ptido posterior y perfiles de inhibidor permitieron la detecci&oacute;n de subconjuntos discretos de productos proteol&iacute;ticos que fueron generados por diferentes enzimas. Como prueba-de-principio utilizamos uno de estas huellas dactilares para identificar la actividad relevante como tejido calicre&iacute;na. Denomina esta t&eacute;cnica PALeO. Nuestros resultados sugieren que el PALeO es un m&eacute;todo r&aacute;pido y altamente sensible para evaluar globalmente las actividades proteinasa en muestras biol&oacute;gicas complejas.

Una estrategia para detectar y caracterizar las actividades de la proteinasa end&oacute;gena en muestras biol&oacute;gicas complejas basadas en espectrometr&iacute;a de masa.

&#x553E;&#x6DB2;&#x662F;&#x53E3;&#x8154;&#x548C;&#x4E00;&#x822C;&#x5065;&#x5EB7;&#x72B6;&#x51B5;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4F53;&#x6DB2;&#x3002;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC4;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8D22;&#x56E2;&#x7F16;&#x76EE;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5BFC;&#x7BA1;&#x5206;&#x6CCC;&#x7269;&#x6536;&#x96C6;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x553E;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF1A; 1166&#x5E74;&#x6807;&#x8BC6; &mdash; &mdash; 914 &#x816E;&#x817A;&#x548C; 917/&#x820C;&#x4E0B;&#x542B;&#x5316;&#x988C;&#x4E0B;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2; &mdash; &mdash; &#x4E2D;&#x7684;&#x4E86;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8840;&#x6D46;&#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; &#x6CEA;&#x6C34;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x5F88;&#x9AD8;&#x4E5F;&#x662F;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x553E;&#x6DB2;&#x4EE5;&#x53CA;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4ECE;&#x7ED3;&#x6784;&#x529F;&#x80FD;&#x5230;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x7684;&#x4F17;&#x591A;&#x5206;&#x5B50;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6620;&#x5C04;&#x5230;&#x80DE;&#x5916;&#x548C;&#x5206;&#x6CCC;&#x8F66;&#x53A2;&#x5982;&#x9884;&#x671F;&#xFF0C;&#x591A;&#x6570;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7528;&#x4E8E;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x7531;&#x8D28;&#x8C31;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6807;&#x8BC6;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x7684;&#x553E;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x91CD;&#x70B9;&#x65B0;&#x578B;&#x6210;&#x5206;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x80BD;&#x8BC1;&#x636E;&#x4E3A;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x5F31;&#x3002;&#x6700;&#x7EC8;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A;&#x4ECE;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x4E2D;&#x5F97;&#x5230;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x548C;&#x5DF2;&#x53D1;&#x8868;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x5C06;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8840;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5316;&#x9A8C;&#x8F6C;&#x5316;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x683C;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x553E;&#x6DB2;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5065;&#x5EB7;&#x4EBA;&#x7684;&#x553E;&#x6DB2;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x76EE;&#x5F55;&#x5141;&#x8BB8;&#x4ECA;&#x540E;&#x7684;&#x553E;&#x6DB2;&#x6837;&#x672C;&#x5206;&#x6790;&#x4ECE;&#x53E3;&#x5934;&#x548C;&#x5168;&#x8EAB;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x5176;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6761;&#x4EF6; &#xFF1B; &#x8BCA;&#x65AD;&#x548C;/&#x6216;&#x9884;&#x540E;&#x503C;&#x786E;&#x5B9A;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x4E0E;&#x5177;&#x6709;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x662F;&#x6CBB;&#x7597;&#x9776;&#x70B9;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x816E;&#x817A;&#x548C;&#x988C;&#x4E0B;&#x817A;/&#x820C;&#x817A; salivas &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x6536;&#x96C6;&#x5BFC;&#x7BA1;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x7269;&#x3002;

Saliva is a body fluid with important functions in oral and general health. A consortium of three research groups catalogued the proteins in human saliva collected as the ductal secretions: 1166 identifications--914 in parotid and 917 in submandibular/sublingual saliva--were made. The results showed that a high proportion of proteins that are found in plasma and/or tears are also present in saliva along with unique components. The proteins identified are involved in numerous molecular processes ranging from structural functions to enzymatic/catalytic activities. As expected, the majority mapped to the extracellular and secretory compartments. An immunoblot approach was used to validate the presence in saliva of a subset of the proteins identified by mass spectrometric approaches. These experiments focused on novel constituents and proteins for which the peptide evidence was relatively weak. Ultimately, information derived from the work reported here and related published studies can be used to translate blood-based clinical laboratory tests into a format that utilizes saliva. Additionally, a catalogue of the salivary proteome of healthy individuals allows future analyses of salivary samples from individuals with oral and systemic diseases, with the goal of identifying biomarkers with diagnostic and/or prognostic value for these conditions; another possibility is the discovery of therapeutic targets.

The proteomes of human parotid and submandibular/sublingual gland salivas collected as the ductal secretions.

La salive est un fluide corporel avec fonctions importantes en sant&eacute; buccale et g&eacute;n&eacute;rale. Un consortium de trois groupes de recherche catalogu&eacute; les prot&eacute;ines de la salive humaine recueillies dans les s&eacute;cr&eacute;tions canalaires : 1166 identifications--914 dans la parotide et 917 dans la salive de la sous-maxillaire/sublinguale--ont &eacute;t&eacute; faites. Les r&eacute;sultats ont montr&eacute; qu&#39;une forte proportion de prot&eacute;ines que l&#39;on retrouve dans le plasma ou les larmes sont &eacute;galement pr&eacute;sents dans la salive, ainsi que des composants uniques. Les prot&eacute;ines identifi&eacute;es sont impliqu&eacute;s dans de nombreux processus mol&eacute;culaires allant de fonctions structurelles &agrave; l&#39;activit&eacute; enzymatique/catalytique. Comme pr&eacute;vue, la majorit&eacute; mapp&eacute;e aux compartiments extracellulaires et s&eacute;cr&eacute;toires. Une approche par immunotransfert a servi &agrave; valider la pr&eacute;sence dans la salive d&#39;un sous-ensemble des prot&eacute;ines identifi&eacute;es par les approches par spectrom&eacute;trie de masse. Ces exp&eacute;riences ax&eacute;es sur les nouveaux produits et prot&eacute;ines pour lesquelles la preuve de peptide &eacute;tait relativement faible. En fin de compte, informations tir&eacute;es des travaux rapport&eacute;s ici et &eacute;tudes connexes peuvent &ecirc;tre utilis&eacute;s pour traduire des tests de laboratoire clinique ax&eacute;e sur le sang dans un format qui utilise la salive. En outre, un catalogue du prot&eacute;ome salivaire des individus en bonne sant&eacute; permet de futures analyses des &eacute;chantillons salivaires de sujets atteints de maladies buccodentaires et syst&eacute;miques, dans le but d&#39;identifier des biomarqueurs &agrave; valeur diagnostique et/ou pronostique pour ces conditions ; une autre possibilit&eacute; est la d&eacute;couverte de cibles th&eacute;rapeutiques.

Les prot&eacute;omes de parotide humaine et salivas glande submandibulaire/sublinguale recueillies dans les s&eacute;cr&eacute;tions canalaires.

Speichel ist eine K&ouml;rperfl&uuml;ssigkeit mit wichtigen Funktionen im Mund-, Kiefer- und allgemeine Gesundheit. Ein Konsortium aus drei Forschergruppen katalogisiert die Proteine im menschlichen Speichel als die Tr&auml;nendr&uuml;se Sekrete gesammelt: 1166-Identifikationen--914 in Ohrspeicheldr&uuml;se und 917 in submandibular/Sublingual Speichel--wurden gemacht. Die Ergebnisse zeigten, dass ein hoher Anteil von Proteinen, die in Plasma und/oder Tr&auml;nen gefunden werden auch im Speichel zusammen mit einzigartigen Komponenten vorhanden. Die Proteine identifiziert sind zahlreiche Molekulare Prozesse von strukturellen Funktionen bis hin zu enzymatische katalytische Aktivit&auml;ten beteiligt. Wie zu erwarten, die meisten, die extrazellul&auml;re und sekretorischen F&auml;cher zugeordnet. Ein Immunoblot-Ansatz wurde verwendet, um die Pr&auml;senz im Speichel einer Teilmenge der Proteine identifiziert durch massenspektrometrische Ans&auml;tze zu &uuml;berpr&uuml;fen. Diese Experimente konzentrierten sich auf neuartige Mitgliedsgruppen und Proteine, die die Peptid-Beweise f&uuml;r die relativ schwach war. Letztlich Informationen aus der Arbeit berichtet hier und verwandte ver&ouml;ffentlichte Studien einsetzbar, Blut-basierten klinischen Labortests in ein Format zu &uuml;bersetzen, der Speichel verwendet. Dar&uuml;ber hinaus erm&ouml;glicht ein Katalog des Speichel-Proteome von gesunden Personen zuk&uuml;nftige Analysen der Speicheldr&uuml;sen Proben von Personen, die mit oralen und systemische Erkrankungen, mit dem Ziel der Identifizierung von Biomarkern mit diagnostischer bzw. prognostischer Wert f&uuml;r diese Bedingungen; eine andere M&ouml;glichkeit ist die Entdeckung der therapeutischen Ziele.

Die Proteome von menschlichen Ohrspeicheldr&uuml;se und submandibular/Sublingual Dr&uuml;se Salivas als die Tr&auml;nendr&uuml;se Sekrete gesammelt.

Saliva &egrave; un fluido corpo con funzioni importanti nella salute orale e generale. Un consorzio di tre gruppi di ricerca catalogate le proteine nella saliva umana raccolti come le secrezioni ductal: identificazioni 1166 - 914 nella parotide e 917 nella saliva sottomandibolare/sublinguale - sono state fatte. I risultati hanno mostrato che un&#39;elevata percentuale di proteine che si trovano nel plasma e/o lacrime sono anche presenti nella saliva insieme a componenti univoci. Le proteine identificate sono coinvolti in numerosi processi molecolari che vanno dalle funzioni strutturali alle attivit&agrave; enzimatica/catalitico. Come prevista, la maggioranza mappata i compartimenti extracellulari e secretiva. Per convalidare la presenza nella saliva di un sottoinsieme delle proteine identificate mediante approcci spettrometrico di massa &egrave; stato utilizzato un approccio di immunoblot. Questi esperimenti incentrato sul romanzo costituenti e le proteine per le quali l&#39;evidenza del peptide era relativamente debole. In definitiva, informazioni derivate dal lavoro qui riportati e relativi studi pubblicati possono essere utilizzati per prove di laboratorio clinico basato su sangue si traducono in un formato che utilizza la saliva. Inoltre, un catalogo di proteoma salivaria di individui sani permette future analisi di campioni salivari da individui con malattie orali e sistemiche, con l&#39;obiettivo di identificare biomarcatori con valore diagnostico o prognostico per queste condizioni; un&#39;altra possibilit&agrave; &egrave; la scoperta di bersagli terapeutici.

Ai proteomi di parotide umana e salive Ghiandola sottomandibolare/sublinguale raccolti come le secrezioni duttale.

&#x553E;&#x6DB2;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x4F53;&#x6DB2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x53E3;&#x8154;&#x3068;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x5065;&#x5EB7;&#x3067;&#x3059;&#x3002;3 &#x3064;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B7;&#x30A2;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x81B5;&#x5206;&#x6CCC;&#x7269;&#x3092;&#x53CE;&#x96C6;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76EE;&#x9332;: 1166&#x5E74;&#x8B58;&#x5225;--914 &#x8033;&#x4E0B;&#x817A;&#x3067;&#x3068; 917 &#x984E;&#x4E0B;/&#x820C;&#x4E0B;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;--&#x3067;&#x4F5C;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6D99;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x307E;&#x305F;&#x553E;&#x6DB2;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x69CB;&#x9020;&#x95A2;&#x6570;&#x304B;&#x3089;&#x9175;&#x7D20;&#x89E6;&#x5A92;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#x6570;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x671F;&#x5F85;&#x3069;&#x304A;&#x308A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x3002;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1; spectrometric &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x6210;&#x5206;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x8A3C;&#x62E0;&#x304C;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5F31;&#x3044;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4F5C;&#x696D;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3001;&#x516C;&#x958B;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x8840;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x691C;&#x67FB;&#x553E;&#x6DB2;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x66F8;&#x5F0F;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5065;&#x5E38;&#x8005;&#x306E;&#x553E;&#x6DB2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30AB;&#x30BF;&#x30ED;&#x30B0;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x53E3;&#x8154;&#x3068;&#x5168;&#x8EAB;&#x75BE;&#x60A3;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3084;&#x4E88;&#x5F8C;&#x306E;&#x5024;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x3068;&#x500B;&#x4EBA;&#x304B;&#x3089;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5225;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8033;&#x4E0B;&#x817A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x984E;&#x4E0B;/&#x820C;&#x4E0B;&#x817A;&#x817A;&#x553E;&#x6DB2;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x81B5;&#x5206;&#x6CCC;&#x7269;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x53CE;&#x96C6;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xD0C0; &#xC561;&#xC740; &#xAD6C;&#xAC15; &#xBC0F; &#xC77C;&#xBC18; &#xAC74;&#xAC15;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xBC14;&#xB514; &#xC624;&#xC77C;. &#xC778;&#xAC04; &#xCE68; ductal &#xBD84; &#xBE44; &#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C; &#xC218;&#xC9D1;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBD84;&#xB958; &#xD558;&#xB294; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xCEE8;&#xC18C;&#xC2DC;&#xC5C4;: 1166 &#xC2DD;&#xBCC4;-&#xADC0; &#xBC11;&#xC5D0;&#xB294; 914&#xC640; submandibular/&#xC0B6;&#xC758; &#xCE68;-917 &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBC0F; &#xB208;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC774; &#xB192;&#xC740; &#xACE0;&#xC720; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD0C0; &#xC561;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAE30;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;. &#xC608;&#xC0C1;&#xB41C; &#xB300;&#xB85C; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xACE0; &#xBD84; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xD551;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Immunoblot &#xC811;&#xADFC; &#xB300;&#xB7C9; spectrometric &#xC811;&#xADFC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xD0C0; &#xC561;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC18C;&#xC124; &#xC131;&#xBD84;&#xACFC; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC99D;&#xAC70;&#xB294; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC57D;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD98;. &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC791;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC815;&#xBCF4; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC640; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xCD9C;&#xD310;&#xB41C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xD608;&#xC561; &#xAE30;&#xBC18; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD0C0; &#xC561;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD615;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658;&#xD560; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xAC1C;&#xC778;&#xC758; &#xCE68; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634; &#xCE74;&#xD0C8;&#xB85C;&#xADF8; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74;;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBC0F;/&#xB610;&#xB294; &#xC804;&#xC870; &#xAC12;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBAA9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xAC15; &#xBC0F; &#xC804;&#xC2E0; &#xC9C8;&#xD658;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xAC1C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE68; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xBBF8;&#xB798; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218; &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC740; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xADC0; &#xBC11;&#xC758; submandibular/&#xC0B6;&#xC758; &#xC120; salivas proteomes ductal &#xBD84; &#xBE44; &#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C; &#xC218;&#xC9D1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La saliva es un l&iacute;quido corporal con funciones importantes en la salud oral y general. Un consorcio de tres grupos de investigaci&oacute;n catalogado las prote&iacute;nas en la saliva humana como las secreciones ductales: 1166 identificaciones--914 en par&oacute;tida y 917 en saliva submaxilar/sublingual--fueron hechos. Los resultados mostraron que una alta proporci&oacute;n de prote&iacute;nas que se encuentran en el plasma y/o l&aacute;grimas tambi&eacute;n est&aacute;n presentes en la saliva junto con componentes &uacute;nicos. Las prote&iacute;nas identificadas est&aacute;n implicadas en numerosos procesos moleculares que van desde funciones estructurales a actividades enzim&aacute;ticas/catal&iacute;ticas. Como era de esperar, la mayor&iacute;a asignada a los compartimentos extracelulares y secretores. Un enfoque de immunoblot se utiliz&oacute; para validar la presencia en la saliva de un subconjunto de las prote&iacute;nas identificadas por m&eacute;todos de espectrometr&iacute;a de masa. Estos experimentos se centran en nuevos componentes y prote&iacute;nas para que las pruebas de p&eacute;ptido eran relativamente d&eacute;bil. En definitiva, informaci&oacute;n derivada del trabajo divulgado aqu&iacute; y estudios publicados relacionados pueden usarse para pruebas de laboratorio cl&iacute;nico basadas en sangre se traducen en un formato que utiliza la saliva. Adem&aacute;s, un cat&aacute;logo del proteoma salival de individuos sanos permite a futuros an&aacute;lisis de muestras de salivales de individuos con enfermedades orales y sist&eacute;micas, con el objetivo de identificar biomarcadores con valor diagn&oacute;stico y pron&oacute;stico de estas condiciones; otra posibilidad es el descubrimiento de dianas terap&eacute;uticas.

Los proteomas de par&oacute;tida humana y salivas de gl&aacute;ndula submaxilar/sublingual recogieron como las secreciones ductales.

&#x9176; (18) O &#x8D34;&#x6807;&#x6218;&#x7565;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#xFF0C;&#x5728;&#x4F4E; ph &#x503C;&#x7FA7;&#x57FA;&#x6C27;&#x7684;&#x4EA4;&#x6362;&#x662F;&#x5E38;&#x89C1;&#x3001; &#x4E0D;&#x5E0C;&#x671B;&#x7684;&#x526F;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x95EE;&#x662F;&#x5426;&#x9178;&#x50AC;&#x5316;&#x540E;&#x4EA4;&#x6362;&#x53EF;&#x80FD;&#x5E72;&#x6270;&#x5B9A;&#x91CF;&#x548C;&#x53CD;&#x5E94;&#x672C;&#x8EAB;&#x662F;&#x5426;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4F5C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5F15;&#x5165;&#x591A;&#x80BD; (18) O &#x6807;&#x7B7E;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5408;&#x6210;&#x591A;&#x80BD;&#x4E2D;&#x542B;&#x6709; 50%(v/v) H(2) (18) O &#x7A00;&#x9178;&#x6EB6;&#x89E3;&#xFF0C;&#x5728;&#x5BA4;&#x6E29;&#x5B75;&#x80B2;&#x3002;&#x804C;&#x4E1A;&#x662F;&#x8FC7;&#x53BB; 3 &#x4E2A;&#x661F;&#x671F;&#x5185;&#x5220;&#x9664;&#x5E76;&#x4E32;&#x8054;&#x8D28;&#x8C31; (MS/MS) &#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x3002;() 18O &#x7EB3;&#x5165;&#x6BD4;&#x7387;&#x662F;&#x5141;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E2A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x7ACB;&#x6848;&#x6CD5;&#x56E2;&#x7684;&#x7EBF;&#x6027;&#x56DE;&#x5F52;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x4F4E; ph &#x503C;&#x3001; &#x591A;&#x80BD;&#x4EA4;&#x6362;&#x4E86;&#x5176;&#x7FA7;&#x57FA;&#x6C27;&#x539F;&#x5B50;&#x4E0E;&#x6C34;&#x7684;&#x6EB6;&#x5242;&#x3002;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x6A21;&#x5F0F;&#x9010;&#x6E10;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x7FA4;&#x4F17;&#xFF0C;&#x76F4;&#x5230;&#x5927;&#x7EA6; 11 &#x5929;&#x540E;&#x5230;&#x8FBE;&#x9884;&#x671F;&#x7684;&#x4E8C;&#x9879;&#x5F0F;&#x5206;&#x5E03;&#xFF0C;&#x5904;&#x4E8E;&#x5E73;&#x8861;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x53CD;&#x5E94;&#x901F;&#x7387;&#x662F;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x6B8B;&#x7559;&#x548C;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x9178;&#x50AC;&#x5316;&#x540E;&#x4EA4;&#x6D41;&#x9884;&#x671F;&#x5176;&#x7F13;&#x6162;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5C06;&#x5FAE;&#x5728;&#x5E72;&#x6270;&#x9176; (18) O &#x6807;&#x8BB0;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x89C4;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x91CF;&#x51CF;&#x5C11;&#x4F4E; pH &#x66DD;&#x5149;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x5B58;&#x50A8;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5173;&#x4E8E;&#x81EA;&#x5DF1;&#xFF0C;&#x9178;&#x50AC;&#x5316; (18) O &#x6807;&#x8BB0;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x7B56;&#x7565;&#xFF0C;&#x662F;&#x5316;&#x5B66;&#x3001; &#x65B0;&#x9648;&#x4EE3;&#x8C22;&#x3001; &#x66FF;&#x4EE3;&#x548C;&#x9176;&#x7684;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x6807;&#x8BB0;&#x5F53;&#x524D;&#x8BA1;&#x5212;&#x7528;&#x4E8E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x3002;

&#x9178;&#x50AC;&#x5316;&#x6C27; 18 &#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x3002;

In enzymatic (18)O-labeling strategies for quantitative proteomics, the exchange of carboxyl oxygens at low pH is a common, undesired side reaction. We asked if acid-catalyzed back exchange could interfere with quantitation and whether the reaction itself could be used as method for introducing (18)O label into peptides. Several synthetic peptides were dissolved in dilute acid containing 50% (v/v) H(2)(18)O and incubated at room temperature. Aliquots were removed over a period of 3 weeks and analyzed by tandem mass spectrometry (MS/MS). (18)O-incorporation ratios were determined by linear regression analysis that allowed for multiple stable-isotope incorporations. At low pH, peptides exchanged their carboxyl oxygen atoms with the aqueous solvent. The isotope patterns gradually shifted to higher masses until they reached the expected binomial distribution at equilibrium after approximately 11 days. Reaction rates were residue- and sequence-specific. Due to its slow nature, the acid-catalyzed back exchange is expected to minimally interfere with enzymatic (18)O-labeling studies provided that storage and analysis conditions minimize low-pH exposure times. On its own, acid-catalyzed (18)O labeling is a general tagging strategy that is an alternative to the chemical, metabolic, and enzymatic isotope-labeling schemes currently used in quantitative proteomics.

Acid-catalyzed oxygen-18 labeling of peptides.

Enzymatique (18) marquage O strat&eacute;gies pour la prot&eacute;omique quantitative, l&#39;&eacute;change d&#39;oxyg&egrave;nes carboxyle &agrave; pH faible est une r&eacute;action secondaire commun, non d&eacute;sir&eacute;s. Nous avons demand&eacute; si acido-catalys&eacute;e dos &eacute;change peut interf&eacute;rer avec la quantification et de savoir si la r&eacute;action elle-m&ecirc;me pourrait &ecirc;tre utilis&eacute;e comme m&eacute;thode pour introduire (18) O label en peptides. Plusieurs peptides synth&eacute;tiques ont &eacute;t&eacute; dissous dans l&#39;acide dilu&eacute; contenant 50 % (v/v) application (18) O et incub&eacute;s &agrave; temp&eacute;rature ambiante. Aliquotes ont &eacute;t&eacute; supprim&eacute;s sur une p&eacute;riode de 3 semaines et analys&eacute;s par spectrom&eacute;trie de masse tandem (MS/MS). (18)O-incorporation rapports ont &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;s par l&#39;analyse de r&eacute;gression lin&eacute;aire qui permettait &agrave; plusieurs incorporations d&#39;isotopes stables. Un pH faible, peptides ont &eacute;chang&eacute; leurs atomes d&#39;oxyg&egrave;ne carboxyle avec le solvant aqueux. Les patrons de l&#39;isotope progressivement d&eacute;plac&eacute; de masses plus &eacute;lev&eacute;es jusqu&#39;&agrave; ce qu&#39;ils ont atteint la distribution binomiale attendue &agrave; l&#39;&eacute;quilibre apr&egrave;s environ 11 jours. Taux de r&eacute;action &eacute;taient sp&eacute;cifiques aux r&eacute;sidus et s&eacute;quence. En raison de sa nature lente, l&#39;&eacute;change de dos acido-catalys&eacute;e devrait minimalement g&ecirc;ner enzymatiques (18) &eacute;tudes de marquage O sous r&eacute;serve que les conditions de stockage et d&#39;analyse de minimiser l&#39;exposition de pH faible. De sa propre initiative, catalys&eacute;e par un acide (18) O &eacute;tiquetage est une strat&eacute;gie g&eacute;n&eacute;rale de marquage qui est une alternative au produit chimique, m&eacute;tabolique, et marquage isotopique enzymatique r&eacute;gimes actuellement utilis&eacute; en prot&eacute;omique quantitative.

Acido-catalys&eacute;e d&#39;oxyg&egrave;ne-18 &eacute;tiquetage des peptides.

Enzymatische (18) O-Kennzeichnung Strategien f&uuml;r quantitative Proteomik ist der Austausch von Karboxyl-Sauerstoffatome bei niedrigem pH-Wert eine h&auml;ufige, unerw&uuml;nschte Seite-Reaktion. Wir fragten, ob S&auml;ure-katalysierte zur&uuml;ck Austausch k&ouml;nnte st&ouml;ren, Quantisierung und ob die Reaktion selbst als Methode f&uuml;r die Einf&uuml;hrung von (18) O-Etikett in Peptide verwendet werden k&ouml;nnten. Mehrere synthetische Peptide wurden in verd&uuml;nnter S&auml;ure mit 50 % (V/V) H(2) (18) O gel&ouml;st und bei Raumtemperatur inkubiert. Aliquoten wurden &uuml;ber einen Zeitraum von 3 Wochen entfernt und von Tandem-Massenspektrometrie (MS/MS) analysiert. (18)O-Gesellschaftsgr&uuml;ndung Verh&auml;ltnisse wurden durch lineare Regressionsanalyse bestimmt, die f&uuml;r mehrere testing-Isotop-Gr&uuml;ndungen zul&auml;ssig. Bei einem niedrigen pH-Wert ausgetauscht Peptide ihre Karboxyl-Sauerstoffatome mit w&auml;ssrigen L&ouml;sungsmittels. Die Isotop-Muster verlagerte sich allm&auml;hlich auf h&ouml;here Massen bis zum Erreichen der erwarteten Binomialverteilung bei Gleichgewicht nach etwa 11 Tagen. Reaktion waren in R&uuml;ckstand und Sequenz-spezifische. Wegen seiner langsamen Natur soll der S&auml;ure-katalysierte zur&uuml;ck Austausch enzymatische (18) O-beschriften Studien minimal zu st&ouml;ren, sofern die Lagerungs-und Analyse niedrig-pH Belichtungszeiten minimieren. Allein verwendet in quantitative Proteomik S&auml;ure-katalysierte (18) O labeling ist eine allgemeine Kennzeichnung Strategie, die eine Alternative zu chemischen, metabolische, und enzymatische Isotop-Kennzeichnung der derzeit Systeme.

S&auml;ure-katalysierte Sauerstoff-18 Kennzeichnung von Peptiden.

Enzimatiche (18) etichettatura O strategie per proteomica quantitativa, lo scambio di oxygens carbossilico a basso pH &egrave; una reazione collaterale indesiderato, comuni. Abbiamo chiesto se acido-catalizzata cambio posteriore potrebbe interferire con la quantificazione e se la reazione stessa potrebbe essere utilizzata come metodo per introdurre (18) etichetta O in peptidi. Diversi peptidi sintetici sono stati dissolti nell&#39;acido diluito contenente 50% (v/v) H(2) (18) O e incubati a temperatura ambiente. Aliquote sono stati rimossi per un periodo di 3 settimane e analizzate tramite spettrometria di massa tandem (MS/MS). (18)Incorporazione O rapporti sono stati determinati mediante analisi di regressione lineare che ha permesso per le incorporazioni dell&#39;isotopo stabile pi&ugrave;. A basso pH, peptidi scambiarono loro atomi di ossigeno carbossilico con il solvente acquoso. I modelli dell&#39;isotopo gradualmente spostato masse superiori fino a quando hanno raggiunto la distribuzione binomiale prevista all&#39;equilibrio dopo circa 11 giorni. Velocit&agrave; di reazione sono stati specifici residui e sequenza. A causa della sua natura lenta, &egrave; previsto il cambio posteriore acido-catalizzata minimamente interferire con enzimatici (18) etichettatura O studi, purch&eacute; le condizioni di immagazzinamento e analisi ridurre al minimo i tempi di esposizione basso-pH. Sui propri, acido-catalizzata (18) O il contrassegno &egrave; una strategia generale di tagging che &egrave; un&#39;alternativa al chimico, metabolico, ed enzimatica dell&#39;isotopo-etichettatura sistemi attualmente utilizzati in proteomica quantitativa.

Acido-catalizzata ossigeno-18 etichettatura dei peptidi.

&#x9175;&#x7D20; (18) O &#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;, &#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x9178;&#x7D20;&#x4F4E; pH &#x3067;&#x306E;&#x4EA4;&#x63DB;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x4E0D;&#x8981;&#x306A;&#x5074;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x9178;&#x89E6;&#x5A92;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3068;&#x53CD;&#x5FDC;&#x81EA;&#x4F53;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; (18) O &#x30E9;&#x30D9;&#x30EB; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x5C0B;&#x306D;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3044;&#x305F; 50 &#xFF05; (v/v) H(2) (18) O &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5E0C;&#x8584;&#x306A;&#x9178;&#x3067;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3057;&#x3001;&#x5BA4;&#x6E29;&#x3067;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x56E0;&#x6570;&#x304C; 3 &#x9031;&#x9593;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5; (MS/MS) &#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;(18)O &#x6DF7;&#x5165;&#x6BD4;&#x7387;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x6CD5;&#x4EBA;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x8A31;&#x53EF;&#x7DDA;&#x5F62;&#x56DE;&#x5E30;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4F4E;&#x3044; pH &#x3067;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x9178;&#x7D20;&#x539F;&#x5B50;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x6C34;&#x6EB6;&#x5A92;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x7D04; 11 &#x65E5;&#x5F8C;&#x4E88;&#x60F3;&#x306E;&#x4E8C;&#x9805;&#x5206;&#x5E03;&#x306E;&#x5E73;&#x8861;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x5F90;&#x3005; &#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x5927;&#x8846;&#x306B;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3002;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x6B8B;&#x6E23;&#x3068;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x7279;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4F4E;&#x901F;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x9178;&#x89E6;&#x5A92;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF; exchange &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B8;&#x3068;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x6291;&#x3048;&#x308B;&#x4F4E; pH &#x9732;&#x5149;&#x6642;&#x9593;&#x304C;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x9175;&#x7D20;&#x306E; (18) O &#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x652F;&#x969C;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x4E88;&#x5B9A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x72EC;&#x81EA;&#x3067;&#x9178;&#x89E6;&#x5A92; (18) O &#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5316;&#x5B66;&#x3001;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306B;&#x4EE3;&#x308F;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x3051;&#x6226;&#x7565;&#x3068;&#x9175;&#x7D20;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x6A19;&#x8B58;&#x73FE;&#x5728;&#x30B9;&#x30AD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

&#x9178;&#x89E6;&#x5A92;&#x9178;&#x7D20; 18 &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;

&#xD6A8;&#xC18C; (18) O &#xB77C;&#xBCA8;&#xB9C1; &#xC804;&#xB7B5; &#xC591;&#xC801; proteomics&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;, &#xB0AE;&#xC740; Ph&#xC5D0;&#xC11C; carboxyl oxygens &#xAD50;&#xD658;&#xC740; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xBC14;&#xB78C;&#xC9C1;&#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xCE21;&#xBA74; &#xBC18;&#xC751;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC2DC; exchange &#xC0B0; &#xCD09;&#xB9E4; &#xBC18;&#xC751; &#xC790;&#xCCB4;&#xB294; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; (18) O &#xB77C;&#xBCA8;&#xC744; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80;&#xC640; &#xC815;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xBC29;&#xD574; &#xC218; &#xBB3C;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD569;&#xC131; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; 50% (v/v) H(2) (18) O &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD76C;&#xC11D; &#xC5FC; &#xC0B0;&#xC5D0; &#xB179;&#xC544; &#xC788;&#xB294; &#xACE0; &#xC2E4; &#xC628;&#xC5D0;&#xC11C; incubated. Aliquots 3 &#xC8FC; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xACE0; &#xD150; &#xB364; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (MS/MS)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xC11D; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. (18)O &#xBC95;&#xC778; &#xBE44;&#xC728; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC548;&#xC815; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xD569;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD615; &#xD68C;&#xADC0; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB0AE;&#xC740; Ph&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC218;&#xC131; &#xC6A9; &#xB9E4;&#xC640; carboxyl &#xC0B0;&#xC18C; &#xC6D0;&#xC790;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC744; &#xAD50;&#xD658; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC57D; 11 &#xC77C; &#xD6C4; &#xC608;&#xC0C1;&#xB41C; &#xC774;&#xD56D; &#xBD84;&#xD3EC; &#xD3C9;&#xD615;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC;&#xD560; &#xB54C;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xD328;&#xD134;&#xC740; &#xC810;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xB300; &#xC911;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xC774;&#xB3D9;. &#xBC18;&#xC751; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAD00;&#xB828; &#xB410;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xB290;&#xB9B0; &#xD2B9;&#xC131;&#xC0C1; &#xC0B0; &#xC131; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB2E4;&#xC2DC; exchange &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C; &#xBC29;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; (18) O &#xB77C;&#xBCA8; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB0AE;&#xC740; pH &#xB178;&#xCD9C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC2A4;&#xD1A0;&#xB9AC;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC11D; &#xC870;&#xAC74; &#xC608;&#xC815; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC790;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC591;&#xC801; proteomics&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB41C; &#xC0B0; &#xC131; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD654;&#xD559;, &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC;, &#xB300;&#xC2E0; &#xC77C;&#xBC18; &#xD0DC;&#xADF8; &#xC9C0;&#xC815; &#xC804;&#xB7B5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; (18) O &#xB77C;&#xBCA8; &#xBC0F; &#xD604;&#xC7AC; &#xACC4;&#xD68D; &#xD6A8;&#xC18C; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xB77C;&#xBCA8;.

&#xC0B0; &#xC131; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC0B0;&#xC18C;-18 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xB77C;&#xBCA8;.

En estrategias O etiquetas (18) enzim&aacute;ticas para prote&oacute;mica cuantitativa, el intercambio de ox&iacute;genos carboxilo en pH bajo es una reacci&oacute;n del lado com&uacute;n, no deseados. Preguntamos si cambio trasero &aacute;cido-catalizado pudiera interferir con cuantificaci&oacute;n y si la reacci&oacute;n s&iacute; mismo podr&iacute;a ser utilizada como m&eacute;todo para introducir la etiqueta de (18) O en p&eacute;ptidos. Varios p&eacute;ptidos sint&eacute;ticos fueron disueltos en &aacute;cido diluido que contiene 50% h (18) O (v/v) y se incubaron a temperatura ambiente. Al&iacute;cuotas fueron durante un per&iacute;odo de 3 semanas y analizadas por espectrometr&iacute;a de masas en t&aacute;ndem (MS/MS). (18)Incorporaci&oacute;n O cocientes se determinaron mediante an&aacute;lisis de regresi&oacute;n lineal que permiti&oacute; varias incorporaciones de is&oacute;topos estables. En pH bajo, p&eacute;ptidos intercambian sus &aacute;tomos de ox&iacute;geno del carboxilo con el solvente acuoso. Los patrones de is&oacute;topo desplazado gradualmente a masas m&aacute;s altas hasta llegar a la esperada distribuci&oacute;n binomial en el equilibrio despu&eacute;s de aproximadamente 11 d&iacute;as. Velocidades de reacci&oacute;n fueron espec&iacute;ficos de residuos y secuencia. Debido a su naturaleza lento, se espera que el cambio trasero &aacute;cido-catalizado interferir m&iacute;nimamente enzim&aacute;ticos (18) etiquetado O estudios siempre que las condiciones de almacenamiento y an&aacute;lisis de minimizan los tiempos de exposici&oacute;n de pH bajo. Por su parte, &aacute;cido-catalizado (18) O etiquetado es una estrategia general de marcado que es una alternativa a la qu&iacute;mica, metab&oacute;lica, y enzim&aacute;tico is&oacute;topo-etiquetado esquemas actualmente utilizado en prote&oacute;mica cuantitativa.

&Aacute;cido-catalizado ox&iacute;geno-18 etiquetado de p&eacute;ptidos.

Las proteasas de ciste&iacute;na Plasmodium falciparum falcipain-2 y falcipain-3 degradar&aacute;n hemoglobina de anfitri&oacute;n para proporcionar amino&aacute;cidos para la s&iacute;ntesis de prote&iacute;nas del par&aacute;sito. Hidr&oacute;lisis de la hemoglobina se ha descrito como un ordenado proceso iniciado por asp&aacute;rtico proteasas, pero inhibidores de la proteasa de ciste&iacute;na bloquean completamente el proceso, lo que sugiere que las proteasas de ciste&iacute;na tambi&eacute;n pueden iniciar la hidr&oacute;lisis de la hemoglobina. Para caracterizar los roles espec&iacute;ficos de falcipains, se utilizaron tres enfoques. En primer lugar, utilizando al azar p - P(4) del amino&aacute;cido sustrato bibliotecas, falcipain-2 y falcipain-3 demostraron gran preferencia por los sitios de escote con Leu en la posici&oacute;n de P(2). En segundo lugar, con la superposici&oacute;n de p&eacute;ptidos que abarca globina alfa y beta y prote&oacute;lisis dependiente (18) O etiquetado, hidr&oacute;lisis fue visto en muchos sitios de escote. En tercer lugar, con la hemoglobina intacta, se identificaron numerosos productos de escote. Nuestros resultados sugieren que la hemoglobina hidr&oacute;lisis por par&aacute;sitos de la malaria no es un proceso muy ordenado, pero m&aacute;s bien procede con escote r&aacute;pido por falcipains en m&uacute;ltiples sitios. Sin embargo, falcipain-2 y falcipain-3 muestran especificidad fuerte para P(2) Leu en sustratos de p&eacute;ptido peque&ntilde;o, de acuerdo con la especificidad en inhibidores de la mol&eacute;cula peque&ntilde;a optimizado que fue identificado previamente. Estos resultados son consistentes con un papel principal de falcipain-2 y falcipain-3 en la hidr&oacute;lisis de la hemoglobina por p. falciparum y con la posibilidad de desarrollar inhibidores de mol&eacute;cula peque&ntilde;a con especificidad optimizado como agentes antimal&aacute;ricos.

Especificidad del escote de hemoglobina de las proteasas de ciste&iacute;na Plasmodium falciparum falcipain-2 y falcipain-3.

&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; falcipain-2 &#x548C; falcipain-3 &#x964D;&#x4F4E;&#x4E3B;&#x673A;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x4E3A;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6E38;&#x79BB;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x3002;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x5DF2;&#x88AB;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E3A;&#x6709;&#x5E8F;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x63D0;&#x51FA;&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#xFF0C;&#x4F46;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5B8C;&#x5168;&#x963B;&#x6B62;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4E5F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x542F;&#x52A8;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x3002;&#x628A; falcipains &#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E09;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E00;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x968F;&#x673A; P(1)-P(4) &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x886C;&#x5E95;&#x5E93;&#x3001; falcipain-2 &#x548C; falcipain 3 &#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5F3A;&#x70C8;&#x504F;&#x597D;&#x4F4E;&#x6D53;&#x7F29;&#x94C0;&#x7684; P(2) &#x4F4D;&#x7F6E;&#x4E0E;&#x5288;&#x88C2;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x53E0;&#x591A;&#x80BD;&#x8DE8;&#x8D8A; &alpha; &#x548C; &beta; &#x73E0;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x4F9D;&#x8D56; (18) O &#x8D34;&#x6807;&#x3001; &#x6C34;&#x89E3;&#x5F53;&#x65F6;&#x770B;&#x5F85;&#x5F88;&#x591A;&#x5288;&#x88C2;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E09;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x65E0;&#x6570;&#x88C2;&#x89E3;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7531;&#x759F;&#x75BE;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x6C34;&#x89E3;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x6709;&#x5E8F;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x800C;&#x662F;&#x7531;&#x591A;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9; falcipains &#x6536;&#x76CA;&#x4E0E;&#x5FEB;&#x901F;&#x88C2;&#x89E3;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;falcipain-2 &#x548C; falcipain-3 P(2) &#x4F4E;&#x6D53;&#x94C0;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x591A;&#x80BD;&#x57FA;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E4B;&#x524D;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x663E;&#x793A;&#x5F3A;&#x7684;&#x4E13;&#x4E00;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#x7B26;&#x5408; falcipain-2 &#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C; falcipain-3 &#x4E2D;&#x7684;&#x6C34;&#x89E3;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7531;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x548C;&#x4E0E;&#x53D1;&#x5C55;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6297;&#x759F;&#x5242;&#x4F18;&#x5316;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;

&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; falcipain-2 &#x548C; falcipain-3 site-specificity&#x3002;

The Plasmodium falciparum cysteine proteases falcipain-2 and falcipain-3 degrade host hemoglobin to provide free amino acids for parasite protein synthesis. Hemoglobin hydrolysis has been described as an ordered process initiated by aspartic proteases, but cysteine protease inhibitors completely block the process, suggesting that cysteine proteases can also initiate hemoglobin hydrolysis. To characterize the specific roles of falcipains, we used three approaches. First, using random P(1) - P(4) amino acid substrate libraries, falcipain-2 and falcipain-3 demonstrated strong preference for cleavage sites with Leu at the P(2) position. Second, with overlapping peptides spanning alpha and beta globin and proteolysis-dependent (18)O labeling, hydrolysis was seen at many cleavage sites. Third, with intact hemoglobin, numerous cleavage products were identified. Our results suggest that hemoglobin hydrolysis by malaria parasites is not a highly ordered process, but rather proceeds with rapid cleavage by falcipains at multiple sites. However, falcipain-2 and falcipain-3 show strong specificity for P(2) Leu in small peptide substrates, in agreement with the specificity in optimized small molecule inhibitors that was identified previously. These results are consistent with a principal role of falcipain-2 and falcipain-3 in the hydrolysis of hemoglobin by P. falciparum and with the possibility of developing small molecule inhibitors with optimized specificity as antimalarial agents.

Hemoglobin cleavage site-specificity of the Plasmodium falciparum cysteine proteases falcipain-2 and falcipain-3.

Les prot&eacute;ases de cyst&eacute;ine Plasmodium falciparum falcipain-2 et falcipain-3 d&eacute;gradent l&#39;h&eacute;moglobine h&ocirc;te pour fournir des acides amin&eacute;s libres pour la synth&egrave;se de prot&eacute;ine parasite. Hydrolyse de l&#39;h&eacute;moglobine a &eacute;t&eacute; d&eacute;crit comme un processus ordonn&eacute; initi&eacute; par aspartique prot&eacute;ases, mais les inhibiteurs de prot&eacute;ase de cyst&eacute;ine bloquent compl&egrave;tement le processus, ce qui sugg&egrave;re que les prot&eacute;ases de cyst&eacute;ine peuvent d&eacute;clencher aussi hydrolyse de l&#39;h&eacute;moglobine. Afin de caract&eacute;riser le r&ocirc;le sp&eacute;cifique de falcipains, nous avons utilis&eacute; trois approches. Tout d&#39;abord, &agrave; l&#39;aide de p al&eacute;atoire - P(4) biblioth&egrave;ques de substrat acide amin&eacute;, falcipain-2 et falcipain-3 a montr&eacute; une pr&eacute;f&eacute;rence marqu&eacute;e pour les sites de clivage avec Leu &agrave; la position p (2). Deuxi&egrave;mement, avec chevauchement des peptides couvrant la globine alpha et b&ecirc;ta et d&eacute;pendante de la prot&eacute;olyse (18) O &eacute;tiquetage, hydrolyse a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e dans de nombreux sites de clivage. Troisi&egrave;mement, avec h&eacute;moglobine intact, nombreux produits de clivage ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que l&#39;h&eacute;moglobine hydrolyse par les parasites du paludisme n&#39;est pas un processus tr&egrave;s ordonn&eacute;, mais plut&ocirc;t un produit avec clivage rapid par falcipains sur plusieurs sites. Toutefois, falcipain-2 et falcipain-3 montrent forte sp&eacute;cificit&eacute; pour Leu p (2) dans les substrats de petit peptide, en accord avec la sp&eacute;cificit&eacute; en optimis&eacute;e de petites mol&eacute;cules inhibitrices identifi&eacute;es pr&eacute;c&eacute;demment. Ces r&eacute;sultats sont compatibles avec le r&ocirc;le principal de falcipain-2 et falcipain-3 lors de l&#39;hydrolyse de l&#39;h&eacute;moglobine par P. falciparum et avec la possibilit&eacute; de d&eacute;velopper de petites mol&eacute;cules inhibitrices avec sp&eacute;cificit&eacute; optimis&eacute;e comme agents antipaludiques.

R&eacute;agissaient clivage de l&#39;h&eacute;moglobine des prot&eacute;ases &agrave; cyst&eacute;ine Plasmodium falciparum falcipain-2 et falcipain-3.

Die Plasmodium Falciparum-Cystein-Proteasen Falcipain-2 und Falcipain-3 verschlechtern Host H&auml;moglobin um Freie Aminos&auml;uren f&uuml;r Parasit Proteinsynthese bereitzustellen. Hydrolyse H&auml;moglobin ist als ein geordneter Prozess initiierten Aspartic Proteasen beschrieben worden, aber Cystein-Protease-Inhibitoren vollst&auml;ndig blockieren den Prozess, die darauf hindeutet, dass Cystein-Proteasen auch H&auml;moglobin Hydrolyse initiieren k&ouml;nnen. Um die spezifischen Rollen von Falcipains zu charakterisieren, haben wir drei Ans&auml;tze verwendet. Zuerst verwenden zuf&auml;llige P(1) - P(4) Aminos&auml;ure Substrat Bibliotheken, Falcipain-2 und Falcipain-3 starke Vorliebe f&uuml;r Spaltung Websites mit Leu an der P(2)-Position gezeigt. Zweitens spanning mit &uuml;berlappenden Peptide Alpha- und Beta-Globin und Proteolyse-abh&auml;ngige (18) O beschriften, Hydrolyse an vielen Standorten der Spaltung gesehen wurde. Drittens wurden mit intakten H&auml;moglobin, zahlreiche Zerfallsprodukte identifiziert. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass H&auml;moglobin Hydrolyse von Malaria-Parasiten ist kein h&ouml;chst geordneten Prozess, sondern vielmehr f&auml;hrt mit schnellen Spaltung von Falcipains an mehreren Standorten. Allerdings zeigen Falcipain-2 und Falcipain-3 starke Spezifit&auml;t f&uuml;r P(2) Leu in kleinen Peptid-Substrate, im Einvernehmen mit der Besonderheit im optimierten niedermolekularer Hemmer, die zuvor identifiziert wurde. Diese Ergebnisse sind konsistent mit einer Hauptrolle Falcipain-2 und Falcipain-3 bei der Hydrolyse von H&auml;moglobin durch p. Falciparum und mit der M&ouml;glichkeit der Entwicklung niedermolekularer Hemmer mit optimierten Spezifit&auml;t gegen Malaria Agenturt&auml;tigkeit.

H&auml;moglobin Spaltung Site-specificity von der Plasmodium Falciparum-Cystein-Proteasen Falcipain-2 und Falcipain-3.

Il Plasmodium falciparum cisteina proteasi falcipain-2 e 3 falcipain degradano emoglobina host per fornire aminoacidi liberi per la sintesi proteica parassita. Idrolisi dell&#39;emoglobina sono stata descritta come un processo ordinato iniziato da aspartico proteasi, ma gli inibitori della proteasi cisteina bloccare completamente il processo, suggerendo che le proteasi cisteina possono anche avviare idrolisi dell&#39;emoglobina. Per caratterizzare i ruoli specifici di falcipains, abbiamo utilizzato tre approcci. In primo luogo, utilizzando P(1) casuale - P(4) librerie substrato dell&#39;amminoacido e falcipain-2 falcipain-3 hanno dimostrato forte preferenza per i siti di clivaggio con Leu dalla posizione P(2). In secondo luogo, con sovrapposizione di peptidi che abbracciano alfa e beta globina e proteolisi-dipendente (18) O etichettatura, idrolisi &egrave; stato visto in molti siti di clivaggio. In terzo luogo, con emoglobina intatto, sono stati identificati numerosi prodotti di clivaggio. I nostri risultati suggeriscono che l&#39;emoglobina idrolisi di parassiti della malaria non &egrave; un processo altamente ordinato, ma piuttosto procede con rapida scissione da falcipains a pi&ugrave; siti. Tuttavia, falcipain-2 e falcipain-3 mostrano forti specificit&agrave; per P(2) Leu in substrati piccolo peptide, d&#39;intesa con la specificit&agrave; in ottimizzato piccole molecole inibitori identificati in precedenza. Questi risultati sono coerenti con il ruolo principale di falcipain-2 e falcipain-3 nell&#39;idrolisi dell&#39;emoglobina da p. falciparum e con la possibilit&agrave; di sviluppare piccole molecole inibitori con specificit&agrave; ottimizzato come agenti antimalarici.

Site-specificity di scissione dell&#39;emoglobina di il Plasmodium falciparum cisteina proteasi falcipain-2 e falcipain-3.

&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; falcipain 2 &#x3068; falcipain 3 &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x904A;&#x96E2;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x958B;&#x59CB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9806;&#x5E8F;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x307E;&#x305F;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Falcipains &#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;3 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x3001;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306A; P(1) - &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; P(4) &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x57FA;&#x677F;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3001;falcipain 2&#x3001;falcipain 3 &#x5B9F;&#x8A3C;&#x958B;&#x88C2;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30EB;&#x30FC; P(2) &#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3068;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x5E0C;&#x671B;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306B;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x91CD;&#x8907;&#x3068; &alpha; &#x3068; &beta; &#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B; &#xFF08;18 O &#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x958B;&#x88C2;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x305F;) &#x306B; &#x3002;&#x7B2C;&#x4E09;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x3068;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x958B;&#x88C2;&#x88FD;&#x54C1;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x793A;&#x5506;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x767A;&#x6CE8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x3080;&#x3057;&#x308D;&#x3068;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x958B;&#x88C2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067; falcipains &#x306B;&#x9032;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;falcipain 2 &#x3068; falcipain 3 P(2) &#x30EB;&#x30FC;&#x5C0F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x57FA;&#x677F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3067;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x306E;&#x5408;&#x610F;&#x3067;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;falcipain 2 &#x306E;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B7;&#x30D1;&#x30EB;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066; falcipain-3 &#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x6297;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3068;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x5375;&#x5272;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30D6;&#x30ED;&#x30E2; &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; falcipain 2 &#x3068; falcipain 3 &#x306E;&#x3002;

&#xD504;&#xB85C; Plasmodium falciparum &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xD14C;&#xC544; falcipain 2, falcipain 3 &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBB34;&#xB8CC; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; &#xC800;&#xD558;. &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; aspartic &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xC791; &#xC21C;&#xC11C;&#xAC00; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C; &#xC800; &#xD574;&#xC81C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC791;&#xD560; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Falcipains&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;, &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0;. &#xCCAB;&#xC9F8;, &#xC784;&#xC758; P(1)-&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; P(4) &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xAE30;&#xD310; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;, falcipain 2, falcipain 3 &#xC2DC;&#xC5F0; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; P(2) &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB808; &#xC6B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xD55C; &#xC120;&#xD638;. &#xB458;&#xC9F8;, &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; &#xC54C;&#xD30C; &#xBC0F; beta globin &#xBC0F; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4; &#xC885;&#xC18D; (18) O &#xB77C;&#xBCA8;&#xB9C1;&#xAC00; &#xC218; &#xBD84;&#xD574; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF8;&#xB294; &#xC2A4;&#xD328;&#xB2DD;. &#xC14B;&#xC9F8;, &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48;&#xACFC; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC81C;&#xD488; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; &#xC81C;&#xC548; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC815;&#xB82C; &#xB41C; &#xACFC;&#xC815; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC624;&#xD788;&#xB824; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB41C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; falcipains&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C4;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, falcipain 2, falcipain 3 &#xBBF8;&#xB9AC; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xB3D9;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0;&#xC11C; P(2) &#xB808; &#xC6B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xD55C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; falcipain 2&#xC758; &#xC8FC; &#xC5ED;&#xD560; &#xBC0F; falcipain-3, P. falciparum &#xBC0F; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC694;&#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48;&#xC758; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xC5D0;&#xC11C;.

&#xD504;&#xB85C; Plasmodium falciparum &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xD14C;&#xC544; falcipain 2, falcipain 3&#xC758; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; &#xBD84;&#xC5F4; site-specificity.

&#x795E;&#x7ECF;&#x80BD;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x53D7; metalloendopeptidases&#xFF0C;&#x4F1A;&#x964D;&#x4F4E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x548C; &beta;-arrestins&#xFF0C;&#x4E0E; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x4F53; (GPCRs) &#x6765;&#x8C03;&#x89E3;&#x8131;&#x654F;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;beta Arrestins &#x8FD8;&#x62DB;&#x8058; GPCRs &#x548C;&#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x5BF9; endosomes &#x5141;&#x8BB8;&#x5185;&#x90E8;&#x5316;&#x53D7;&#x4F53;&#x7EE7;&#x7EED;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8C03;&#x8282; endosomal &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x5185;, &#x76AE;&#x7D20;&#x8F6C;&#x6362;&#x9176;-1 &#xFF08;&#x6B27;&#x6D32;&#x7ECF;&#x59D4;&#x4F1A;-1&#xFF09; &#x4E2D;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6270;&#x4E71; endosomal &#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; signalosome &#x548C;&#x7EC8;&#x6B62;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x65E9;&#x671F; endosomes &#x964D;&#x4F4E; P &#x7269;&#x8D28; (SP)&#x3002;&#x6B27;&#x6D32;&#x7ECF;&#x59D4;&#x4F1A;-1 &#x6291;&#x5236;&#x9020;&#x6210; endosomal &#x4FDD;&#x7559; SP &#x795E;&#x7ECF;&#x6FC0;&#x80BD; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x3001; &beta;-arrestins &#x548C; Src&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x663E;&#x8457;&#x6301;&#x7EED; ERK2 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x548C;&#x6838;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x800C;&#x6B27;&#x6D32;&#x7ECF;&#x59D4;&#x4F1A;-1 &#x9AD8;&#x8868;&#x8FBE;&#x51CF;&#x6BD2; ERK2 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6B27;&#x6D32;&#x7ECF;&#x59D4;&#x4F1A;-1 &#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E5F;&#x589E;&#x5F3A; SP &#x8BF1;&#x5BFC;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6838;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x53D7;&#x4F53; Nur77&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6B27;&#x6D32;&#x7ECF;&#x59D4;&#x4F1A;-1 endosomal &#x8870;&#x51CF;&#x4ECB;&#x5BFC; ERK2 SP &#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5728; endosomes&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x53D7;&#x6B27;&#x6D32;&#x7ECF;&#x59D4;&#x4F1A;-1 &#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x63A7;&#x5236; &beta;-arrestin &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684; endocytosed GPCRs&#x3002;

Endosomal &#x5185;&#x76AE;&#x7D20;&#x8F6C;&#x6362;&#x9176; 1&#xFF1A; &beta;-arrestin-&#x4F9D;&#x8D56; ERK &#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x3002;

Neuropeptide signaling at the cell surface is regulated by metalloendopeptidases, which degrade peptides in the extracellular fluid, and beta-arrestins, which interact with G protein-coupled receptors (GPCRs) to mediate desensitization. beta-Arrestins also recruit GPCRs and mitogen-activated protein kinases to endosomes to allow internalized receptors to continue signaling, but the mechanisms regulating endosomal signaling are unknown. We report that endothelin-converting enzyme-1 (ECE-1) degrades substance P (SP) in early endosomes of epithelial cells and neurons to destabilize the endosomal mitogen-activated protein kinase signalosome and terminate signaling. ECE-1 inhibition caused endosomal retention of the SP neurokinin 1 receptor, beta-arrestins, and Src, resulting in markedly sustained ERK2 activation in the cytosol and nucleus, whereas ECE-1 overexpression attenuated ERK2 activation. ECE-1 inhibition also enhanced SP-induced expression and phosphorylation of the nuclear death receptor Nur77, resulting in cell death. Thus, endosomal ECE-1 attenuates ERK2-mediated SP signaling in the nucleus to prevent cell death. We propose that agonist availability in endosomes, here regulated by ECE-1, controls beta-arrestin-dependent signaling of endocytosed GPCRs.

Endosomal endothelin-converting enzyme-1: a regulator of beta-arrestin-dependent ERK signaling.

Neuropeptide de signalisation &agrave; la surface cellulaire est r&eacute;gi par les metalloendopeptidases, qui affectent les peptides dans le liquide extracellulaire, et b&ecirc;ta-arrestins, qui interagissent avec G protein-coupled receptors (RCPG) &agrave; la m&eacute;diation de d&eacute;sensibilisation. b&ecirc;ta-Arrestins &eacute;galement recruter des RCPG et kinases mitog&egrave;ne-prot&eacute;ine d&#39;endosomes pour permettre &agrave; des r&eacute;cepteurs int&eacute;rioris&eacute;es pour continuer de signalisation, mais les m&eacute;canismes r&eacute;gulant la signalisation endosomale sont inconnus. Les auteurs rapportent qu&#39;endoth&eacute;line-converting enzyme-1 (ECE-1) d&eacute;grade la substance P (SP) dans les endosomes pr&eacute;coces des cellules &eacute;pith&eacute;liales et de neurones pour d&eacute;stabiliser l&#39;endosomes mitogen-activated protein kinase signalosome et arr&ecirc;tez de signalisation. ECE-1 inhibition caus&eacute;e endosomale r&eacute;tention des r&eacute;cepteurs de la neurokinine 1 SP, beta-arrestins et Src, r&eacute;sultant dans l&#39;activation de ERK2 fortement soutenue dans le cytosol et le noyau, tandis que la surexpression de l&#39;ECE-1 att&eacute;nu&eacute;e ERK2 activation. Inhibition de l&#39;ECE-1 a aussi stimul&eacute; expression induite par la SP et la phosphorylation du r&eacute;cepteur nucl&eacute;aire mort Nur77, entra&icirc;nant dans la mort cellulaire. Ainsi, endosomale ECE-1 att&eacute;nue SP ERK2 induite par la signalisation dans le noyau pour pr&eacute;venir la mort cellulaire. Nous proposons que les contr&ocirc;les de disponibilit&eacute; agoniste dans les endosomes, ici r&eacute;gi par l&#39;ECE-1, b&eacute;ta-arrestine-d&eacute;pendante de signalisation du m&eacute;gacaryocyte RCPG.

Endosomale endoth&eacute;line-converting enzyme-1: un r&eacute;gulateur de b&eacute;ta-arrestine-d&eacute;pendante de signalisation ERK.

Neuropeptid Signalisierung an der Zelloberfl&auml;che wird durch Metalloendopeptidases, die Peptide in der extrazellul&auml;ren Fl&uuml;ssigkeit zu beeintr&auml;chtigen, und Beta-Arrestins, die mit G Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) Desensibilisierung zu vermitteln. Beta-Arrestins auch zu rekrutieren, GPCRs und Mitogen-aktivierte Proteinkinasen in Endosomen verinnerlichte Rezeptoren erm&ouml;glichen, um den Vorgang fortzusetzen, Signalisierung, aber die Regulierungsmechanismen Endosomen Signalisierung sind unbekannt. Wir berichten, dass Endothelin-konvertierende Enzym-1 (ECE-1) Substanz P (SP) beeintr&auml;chtigt in fr&uuml;hen Endosomen Epithelzellen und Neuronen zu destabilisieren die Endosomen Mitogen-aktivierte Protein-Kinase-Signalosome und Signalisierung zu beenden. ECE-1-Hemmung verursacht Endosomen Eigentumsvorbehalt der SP Neurokinin-1-Rezeptor, Beta-Arrestins und Src, wodurch deutlich nachhaltiger ERK2-Aktivierung im Zytosol und Kern, w&auml;hrend die ECE-1 eine &Uuml;berexpression ERK2 Aktivierung abgeschw&auml;cht. ECE-1-Hemmung verbesserte auch SP-induzierte Expression und Phosphorylierung des nuklearen Tod Rezeptors Nur77, die Zellentod. So d&auml;mpft Endosomen ECE-1, ERK2-vermittelte SP signalisieren in den Zellkern Zelltod zu verhindern. Wir schlagen Agonist Verf&uuml;gbarkeit in Endosomen, hier von ECE-1, reguliert steuert Beta-arrestin-abh&auml;ngigen Signalisierung der Endocytosed GPCRs.

Endosomen Endothelin-konvertierende Enzym-1: ein Regulator der Beta-arrestin-abh&auml;ngigen ERK signalisieren.

Neuropeptide segnalazione alla superficie delle cellule &egrave; regolata da metalloendopeptidases, che degradano peptidi nel liquido extracellulare, e beta-arrestins, che interagiscono con recettori di proteina-accoppiati del G (GPCR) per mediare la desensibilizzazione. Beta-Arrestins anche reclutare GPCR e chinasi mitogene-attivato a endosomes per consentire i recettori interiorizzati per continuare la segnalazione, ma i meccanismi che regolano endosomal segnalazione sono sconosciuti. Segnaliamo che 1 enzima di conversione endotelina (ECE-1) degrada la sostanza P (SP) in early endosomes delle cellule epiteliali e i neuroni di destabilizzare il signalosome di chinasi di proteina mitogene-attivata endosomal e terminare di segnalazione. ECE-1 inibizione causata endosomal ritenzione del recettore Neurochinina 1 SP, beta-arrestins e Src, con conseguente attivazione di ERK2 marcatamente sostenuta nel citosol e nucleo, considerando che la sovraespressione di ECE-1 attenuato attivazione di ERK2. ECE-1 inibizione anche potenziata espressione SP-indotta e la fosforilazione del recettore nucleare morte Nur77, con conseguente morte cellulare. Cos&igrave;, endosomal ECE-1 attenua SP ERK2-mediata segnalazione nel nucleo per evitare la morte delle cellule. Proponiamo che disponibilit&agrave; agonista in endosomes, qui regolata da ECE-1, controlla beta-arrestin-dipendente di segnalazione di endocytosed GPCR.

Endosomal enzima di conversione endotelina-1: un regolatore di segnalazione ERK beta-arrestin-dipendente.

&#x795E;&#x7D4C;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3067;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;metalloendopeptidases &#x3068; &beta;-&#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x8131;&#x611F;&#x4F5C;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068; (Gpcr) &#x3092;&#x5BFE;&#x8A71;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&beta; &#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x3082; Gpcr &#x3068;&#x5206;&#x88C2;&#x4FC3;&#x9032;&#x56E0;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078;&#x5185;&#x9762;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x4F1D;&#x9054;&#x3057;&#x7D9A;&#x3051;&#x308B;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5236;&#x5FA1;&#x6A5F;&#x69CB;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x5909;&#x63DB;&#x9175;&#x7D20;-1 (ECE-1) &#x7269;&#x8CEA; P &#xFF08;SP&#xFF09; &#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30ED;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x7D42;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;ECE 1 &#x6291;&#x5236; Src&#x3001;ECE 1 &#x904E;&#x5270;&#x6E1B;&#x8870; ERK2 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684; ERK2 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3068;&#x6838;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&beta; &#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;SP &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30AD;&#x30CB;&#x30F3; 1 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4FDD;&#x6301;&#x304C;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;ECE 1 &#x6291;&#x5236;&#x306B; SP &#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x6838;&#x6B7B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; Nur77 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;&#x5F37;&#x5316;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; ECE 1 SP ERK2 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x6838;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x306E; ECE 1 &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x898F;&#x5236;&#x3001;&beta; &#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x7D4C;&#x305F; Gpcr &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x5909;&#x63DB;&#x9175;&#x7D20; 1: &beta; &#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58; ERK &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3002;

Neuropeptide &#xC2E0;&#xD638; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC561;&#xC758; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xC800;&#xD558; metalloendopeptidases &#xBC0F; &#xBCA0;&#xD0C0;-arrestins, G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; (GPCRs) &#xB454;&#xAC10; &#xC911;&#xC7AC;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCA0;&#xD0C0; Arrestins &#xB610;&#xD55C; &#xBAA8;&#xC9D1; GPCRs &#xBC0F; endosomes &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases &#xC2E0;&#xD638;, &#xACC4;&#xC18D; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; endosomal &#xC2E0;&#xD638; &#xC870;&#xC808; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; endothelin &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC18C;-1 (ECE-1) &#xC800;&#xD558; &#xBB3C;&#xC9C8; P (SP) &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; endosomal &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; signalosome&#xB97C; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558; &#xACE0; &#xC885;&#xB8CC; &#xC2E0;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; endosomes &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. ECE-1 &#xC5B5;&#xC81C; SP neurokinin 1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xBCA0;&#xD0C0;-arrestins, Src, ECE-1 overexpression ERK2 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC10;&#xC1E0; &#xBC18;&#xBA74; cytosol&#xC640; &#xD575;, &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; ERK2 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; endosomal &#xBCF4;&#xC874; &#xC778;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. ECE-1 &#xC5B5;&#xC81C; &#xB610;&#xD55C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; SP &#xC720;&#xB3C4; &#xC2DD; &#xBC0F; &#xD575; &#xC8FD;&#xC74C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; Nur77, &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, ECE-1 endosomal ERK2 &#xC911;&#xC7AC; SP &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD575;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xC57D;&#xD654;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; endosomes, &#xC5EC;&#xAE30; ECE-1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131; endocytosed Gpcrs&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; arrestin &#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xD638; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Endosomal endothelin &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC18C; 1: &#xBCA0;&#xD0C0; arrestin &#xC885;&#xC18D; ERK &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;.

Neurop&eacute;ptido de se&ntilde;alizaci&oacute;n en la superficie celular est&aacute; regulada por la metalloendopeptidases, que degradan p&eacute;ptidos en el l&iacute;quido extracelular, y beta-arrestins, que interact&uacute;an con receptores de acoplados a prote&iacute;na de G (GPCRs) para mediar la desensibilizaci&oacute;n. beta-Arrestins tambi&eacute;n reclutar GPCRs y quinasas activadas por mit&oacute;genos prote&iacute;na a endosomas para permitir internalizados receptores para continuar la se&ntilde;alizaci&oacute;n, pero se desconocen los mecanismos de regulaci&oacute;n endosomal se&ntilde;alizaci&oacute;n. Divulgamos que eso endotelina-conversi&oacute;n enzim&aacute;tica-1 (ECE-1) degrada la sustancia P (SP) en endosomas tempranos de c&eacute;lulas epiteliales y neuronas para desestabilizar la endosomal mit&oacute;geno activada de la prote&iacute;na quinasa signalosome y terminar de se&ntilde;alizaci&oacute;n. ECE-1 inhibici&oacute;n causada retenci&oacute;n de endosomal de la fuente, dando por resultado notablemente sostenida ERK2 activaci&oacute;n en el citosol y el n&uacute;cleo, mientras que la sobreexpresi&oacute;n de ECE-1 hab&iacute;a atenuada ERK2 activaci&oacute;n, receptores de Neuroquinina 1 SP y beta-arrestins. Inhibici&oacute;n de la ECE-1 hab&iacute;a mejorado tambi&eacute;n expresi&oacute;n inducida por SP y fosforilaci&oacute;n del receptor nuclear de la muerte Nur77, resultando en la muerte celular. As&iacute;, endosomal ECE-1 aten&uacute;a SP ERK2-mediada de se&ntilde;alizaci&oacute;n en el n&uacute;cleo para evitar la muerte celular. Proponemos que la disponibilidad de agonista en endosomas, aqu&iacute; regulada por ECE-1, controles de beta-arrestin-dependent se&ntilde;alizaci&oacute;n de endocitosis GPCRs.

Endosomal enzima de conversi&oacute;n de endotelina-1: un regulador de la se&ntilde;alizaci&oacute;n de ERK de beta-arrestin-dependiente.

Le proteasi svolgono ruoli importanti in numerosi processi fisiologici e la patogenesi di diverse malattie, che rende loro interessanti obiettivi farmacologici. Per comprendere appieno il ruolo funzionale delle proteasi in questi processi, &egrave; necessario caratterizzare la specificit&agrave; di destinazione degli enzimi, identificare i substrati endogeni e prodotti di scissione, nonch&eacute; attivatori di proteasi e inibitori. La complessit&agrave; di queste reti proteolitici presenta una notevole sfida analitica. Per caratterizzare completamente questi sistemi, sono necessari metodi quantitativi che catturano le distribuzioni spaziali e temporali dei membri della rete. Recentemente, i flussi di lavoro basate su attivit&agrave; sono venuti alla ribalta per affrontare gli aspetti dinamici del trattamento proteolitico reti in vitro, ex vivo e in vivo. In questa recensione, si discuter&agrave; di come massa approcci basati sulla spettrometria possono essere utilizzati per acquisire nuove conoscenze in biologia proteasi da determinare la specificit&agrave; di substrato, profilazione degli Stati di attivit&agrave; delle proteasi, monitoraggio proteolisi in vivo, cinetica di reazione di misurazione e definizione eventi proteolitici in vitro e in vivo. Inoltre, sono riportati alcuni esempi di futuri aspetti della ricerca di proteasi che vanno di l&agrave; di applicazioni basate su spettrometria di massa.

Attivit&agrave; di proteasi profilatura di proteomica dinamica dei flussi di lavoro.

&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x53D1;&#x6325;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x751F;&#x7406;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x548C;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4F7F;&#x5F97;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x9776;&#x70B9;&#x3002;&#x8981;&#x5168;&#x9762;&#x7406;&#x89E3;&#x529F;&#x80FD;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x63CF;&#x8FF0;&#x76EE;&#x6807;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x9176;&#x3001; &#x67E5;&#x660E;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x57FA;&#x8D28;&#x548C;&#x88C2;&#x89E3;&#x4EA7;&#x54C1;&#x4EE5;&#x53CA;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242;&#x548C;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x6311;&#x6218;&#x5F88;&#x5927;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x5168;&#x9762;&#x5730;&#x63CF;&#x8FF0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x9700;&#x8981;&#x6355;&#x83B7;&#x7F51;&#x7EDC;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6D41;&#x5DF2;&#x6765;&#x5230;&#x524D;&#x7EBF;&#x5BF9;&#x4ED8;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x5904;&#x7406;&#x7F51;&#x7EDC;&#x3001; &#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x6B21;&#x5BA1;&#x67E5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x5982;&#x4F55;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8D28;&#x8C31;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x901A;&#x8FC7;&#x786E;&#x5B9A;&#x57FA;&#x677F;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x60C5;&#x51B5;&#x3001; &#x5206;&#x6790;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x3001; &#x76D1;&#x6D4B;&#x4F53;&#x5185;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x964D;&#x89E3;&#x3001; &#x6D4B;&#x91CF;&#x53CD;&#x5E94;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x83B7;&#x5F97;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x672A;&#x6765;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7814;&#x7A76;&#x65B9;&#x9762;&#x8D85;&#x8D8A;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8D28;&#x8C31;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x5E94;&#x7528;&#x4E3E;&#x4F8B;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6D41;&#x52A8;&#x6001;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

Proteases play prominent roles in many physiological processes and the pathogenesis of various diseases, which makes them interesting drug targets. To fully understand the functional role of proteases in these processes, it is necessary to characterize the target specificity of the enzymes, identify endogenous substrates and cleavage products as well as protease activators and inhibitors. The complexity of these proteolytic networks presents a considerable analytic challenge. To comprehensively characterize these systems, quantitative methods that capture the spatial and temporal distributions of the network members are needed. Recently, activity-based workflows have come to the forefront to tackle the dynamic aspects of proteolytic processing networks in vitro, ex vivo and in vivo. In this review, we will discuss how mass spectrometry-based approaches can be used to gain new insights into protease biology by determining substrate specificities, profiling the activity-states of proteases, monitoring proteolysis in vivo, measuring reaction kinetics and defining in vitro and in vivo proteolytic events. In addition, examples of future aspects of protease research that go beyond mass spectrometry-based applications are given.

Profiling protease activities by dynamic proteomics workflows.

Prot&eacute;ases jouent un r&ocirc;le majeur dans de nombreux processus physiologiques et la pathogen&egrave;se des maladies diverses, qui rend les cibles int&eacute;ressantes. Pour bien comprendre le r&ocirc;le fonctionnel des prot&eacute;ases dans ces processus, il est n&eacute;cessaire caract&eacute;riser la sp&eacute;cificit&eacute; de cible des enzymes, l&#39;identification des substrats endog&egrave;nes et produits de clivage comme activateurs de prot&eacute;ase et inhibiteurs. La complexit&eacute; de ces r&eacute;seaux prot&eacute;olytique pr&eacute;sente un d&eacute;fi analytique. Pour compl&egrave;tement caract&eacute;riser ces syst&egrave;mes, les m&eacute;thodes quantitatives qui captent les distributions spatiales et temporelles des membres du r&eacute;seau sont n&eacute;cessaires. R&eacute;cemment, fond&eacute; sur l&#39;activit&eacute; de flux de travail est venus &agrave; l&#39;avant-garde pour lutter contre les aspects dynamiques des r&eacute;seaux de traitement prot&eacute;olytique in vitro, ex vivo et in vivo. Dans cette revue, nous discuterons comment masse approches ax&eacute;es sur la spectrom&eacute;trie peuvent &ecirc;tre utilis&eacute;s pour acqu&eacute;rir de nouvelles connaissances en biologie de la prot&eacute;ase par d&eacute;terminer les sp&eacute;cificit&eacute;s de substrat, profilage-Etats-l&#39;activit&eacute; des prot&eacute;ases, suivi de prot&eacute;olyse in vivo, mesurer la cin&eacute;tique de la r&eacute;action et d&eacute;finition d&#39;&eacute;v&eacute;nements prot&eacute;olytiques in vitro et in vivo. En outre, les exemples d&#39;aspects futurs de la recherche de prot&eacute;ase qui vont au-del&agrave; des applications bas&eacute;es sur la spectrom&eacute;trie de masse sont donn&eacute;s.

Activit&eacute;s prot&eacute;ase profilage prot&eacute;omique dynamique flux de travail.

Proteasen spielen prominente Rollen in vielen physiologischen Prozessen und die Pathogenese von verschiedenen Krankheiten, die Ihnen interessante Droge-Ziele macht. Um die funktionale Rolle der Proteasen in diese Prozesse vollst&auml;ndig zu verstehen, ist es notwendig, die Ziel-Spezifit&auml;t der Enzyme zu charakterisieren, endogene Substrate und Zerfallsprodukte sowie Protease-Aktivatoren und Inhibitoren zu identifizieren. Die Komplexit&auml;t dieser proteolytische Netze stellt eine erhebliche analytische Herausforderung. Quantitative Methoden, die die r&auml;umlichen und zeitlichen Verteilungen der Netzwerk-Mitglieder zu erfassen sind erforderlich, um diese Systeme umfassend zu charakterisieren. Aktivit&auml;t-basierten Workflows sind vor kurzem in den Vordergrund, die dynamischen Aspekte der proteolytische Verarbeitung Netze in-vitro, ex Vivo und in-vivo anzugehen gekommen. In diesem Bericht werden wir diskutieren, wie Masse Spektrometrie-basierte Ans&auml;tze verwendet werden k&ouml;nnen, neue Einblicke in Protease Biologie zu erlangen, indem Bestimmung Substrat Besonderheiten, Profilerstellung die Aktivit&auml;t-Staaten von Proteasen, &Uuml;berwachung Proteolyse in Vivo, Messung der Reaktionskinetik und in-vitro und in vivo proteolytische Ereignisse definieren. Dar&uuml;ber hinaus erhalten die Beispiele f&uuml;r zuk&uuml;nftige Aspekte der Protease-Forschung, die Massen-Spektrometrie-basierten Anwendungen hinausgehen.

Profilerstellung Protease-Aktivit&auml;ten von dynamischen Proteomics-Workflows.

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&#xB3D9;&#xC801; proteomics &#xC6CC;&#xD06C;&#xD50C;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; protease &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Proteasas juegan un papel prominente en muchos procesos fisiol&oacute;gicos y la patogenia de varias enfermedades, que hace de ellos objetivos interesantes de la droga. Para entender completamente el papel funcional de las proteasas en estos procesos, es necesario caracterizar la especificidad del objetivo de las enzimas, identificar sustratos end&oacute;genos y productos de escote as&iacute; como activadores de la proteasa e inhibidores. La complejidad de estas redes proteol&iacute;ticas presenta un considerable desaf&iacute;o anal&iacute;tico. Para caracterizar exhaustivamente estos sistemas, se necesitan m&eacute;todos cuantitativos que captan las distribuciones espaciales y temporales de los miembros de la red. Recientemente, los flujos de trabajo basados en actividad han llegado a la vanguardia para abordar los aspectos din&aacute;micos de las redes de procesamiento proteol&iacute;tico in vitro, ex vivo e in vivo. En esta revisi&oacute;n, se discutir&aacute; c&oacute;mo masa enfoques basados en la espectrometr&iacute;a pueden utilizarse para obtener nuevos conocimientos sobre la biolog&iacute;a de la proteasa por determinar la especificidad de sustrato, perfiles de los Estados de actividad de las proteasas, monitoreo prote&oacute;lisis en vivo, cin&eacute;tica de la reacci&oacute;n de medici&oacute;n y definir eventos proteol&iacute;ticos in vitro e in vivo. Adem&aacute;s, se dan ejemplos de futuros aspectos de la investigaci&oacute;n de la proteasa que van m&aacute;s all&aacute; de las aplicaciones basadas en espectrometr&iacute;a de masa.

Actividades de generaci&oacute;n de perfiles proteasa por flujos de trabajo din&aacute;micos prote&oacute;mica.

Presentamos una estrategia para encuesta proteol&iacute;ticos procesos que ocurren en microambientes de c&aacute;ncer en humanos.

Topograf&iacute;a proteol&iacute;ticos procesos en microambientes de c&aacute;ncer humano por microdialysis y espectrometr&iacute;a de masas basadas en la actividad.

&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E00;&#x9879;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x764C;&#x75C7;&#x5FAE;&#x89C2;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

&#x5FAE;&#x900F;&#x6790;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x8D28;&#x8C31;&#x6D4B;&#x91CF;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x764C;&#x75C7;&#x5FAE;&#x89C2;&#x73AF;&#x5883;&#x3002;

We present a strategy to survey proteolytic processes that occur in human cancer microenvironments.

Surveying proteolytic processes in human cancer microenvironments by microdialysis and activity-based mass spectrometry.

Nous pr&eacute;sentons une strat&eacute;gie afin de sonder les processus prot&eacute;olytiques qui se produisent dans des micro-environnements de cancer chez l&#39;homme.

Par microdialyse et spectrom&eacute;trie de masse bas&eacute; sur les activit&eacute;s d&#39;arpentage processus prot&eacute;olytiques dans des micro-environnements de cancer chez l&#39;homme.

Wir pr&auml;sentieren Ihnen eine Strategie zur proteolytische Prozesse-Umfrage, die im menschlichen Krebs Mikroumgebungen auftreten.

Vermessung proteolytische Prozesse im menschlichen Krebs Mikroumgebungen Microdialysis und t&auml;tigkeitsbezogene Massenspektrometrie.

Vi presentiamo una strategia per l&#39;indagine dei processi proteolitici che si verificano in microambienti tumorali umane.

Agrimensura processi proteolitici in microambienti tumorali umane di Microdialisi e spettrometria di massa basato sulle attivit&agrave;.

&#x3072;&#x3068;&#x764C;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.

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&#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC554; microenvironments&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xC81C;&#xC2DC;.

Microdialysis &#xBC0F; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC554; microenvironments &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC;.

&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5FAA;&#x74B0;&#x5668;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2EC;&#xD608; &#xAD00;&#xACC4; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0; &#xB300;&#xC0C1; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544;.

Dirigidos a las proteasas en enfermedades cardiovasculares por espectrometr&iacute;a de masa basada en prote&oacute;mica.

&#x9488;&#x5BF9;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8D28;&#x8C31;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5728;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;

Targeting proteases in cardiovascular diseases by mass spectrometry-based proteomics.

Ciblant les prot&eacute;ases dans les maladies cardiovasculaires par bas&eacute; sur la spectrom&eacute;trie de masse prot&eacute;omique.

Spektrometrie-basierten Massen-Proteomics Targeting Proteasen bei Herz-Kreislauf-Krankheiten.

Dalla base di spettrometria di massa proteomica di targeting proteasi nelle malattie cardiovascolari.

&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x6210;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x4E8E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x57FA;&#x56E0; (Oct4&#x3001; Sox2&#x3001; Klf4 &#x548C; c-myc&#xFF09; &#x7684;&#x8BC4;&#x9009;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x591A;&#x6F5C;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x5230;&#x672A;&#x5206;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;&#x5916;&#x6E90;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x6C89;&#x9ED8;&#x5DF2;&#x53D1;&#x751F;&#x5141;&#x8BB8;&#x6B63;&#x5E38; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x83B7;&#x5F97;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5916;&#x6E90;&#x7F16;&#x7A0B;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B0;&#x578B;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B;&#x8D28;&#x7C92;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7F16;&#x7801; Oct4&#x3001; Sox2&#x3001; C-myc &#x548C; Klf4&#x3002;&#x786E;&#x4FDD;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x548C;&#x63A7;&#x5236;&#x751F;&#x6210;&#x7684; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6211;&#x4EEC;&#x88C5;&#x5907;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x5411;&#x91CF;&#x4E0E;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53; &phi;C31 attB &#x7AD9;&#x70B9;&#x548C; &phi;C31 &#x6574;&#x5408;&#x9176;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7528;&#x4E8E;&#x589E;&#x5F3A;&#x77E2;&#x91CF;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#x3002;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20;&#x72EC;&#x7ACB;&#x5927;&#x9F20; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x7531;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x68C0;&#x6D4B; Oct4&#x3001; SSEA1 &#x548C; SSEA4&#xFF0C;&#x78B1;&#x6027;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x67D3;&#x8272;&#xFF0C;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x7684; Oct4 &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x5927;&#x9F20;&#x591A;&#x6F5C;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;-&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x575A;&#x51B3;&#x7684;&#x5411;&#x91CF;&#x96C6;&#x6210;&#x6570;&#x548C;&#x7F16;&#x7A0B;&#x56E0;&#x5B50;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x88AB;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3002;&#x5236;&#x5B9A;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x662F;&#x751F;&#x6210;&#x80DA;&#x4F53;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7578;&#x80CE;&#x7624;&#x5F62;&#x6210;&#x4F53;&#x5185;&#x751F;&#x6210;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x80DA;&#x5C42;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7684; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x6211;&#x4EEC; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7531;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8D28;&#x7C92;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x751F;&#x6210;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x5927;&#x9F20; ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86; DNA &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x548C;&#x65E0;&#x8FDB;&#x7EB8;&#x5668;&#x7684;&#x5355;&#x5C42;&#x57F9;&#x517B;&#x7684; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x672A;&#x6765;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

&#x9AD8;&#x6548;&#x4EE3;&#x5927;&#x9F20;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x975E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;

Current methods of generating rat induced pluripotent stem cells are based on viral transduction of pluripotency inducing genes (Oct4, Sox2, c-myc and Klf4) into somatic cells. These activate endogenous pluripotency genes and reprogram the identity of the cell to an undifferentiated state. Epigenetic silencing of exogenous genes has to occur to allow normal iPS cell differentiation. To gain more control over the expression of exogenous reprogramming factors, we used a novel doxycycline-inducible plasmid vector encoding Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4. To ensure efficient and controlled generation of iPS cells by plasmid transfection we equipped the reprogramming vector with a bacteriophage Ï†C31 attB site and used a Ï†C31 integrase expression vector to enhance vector integration. A series of doxycycline-independent rat iPS cell lines were established. These were characterized by immunocytochemical detection of Oct4, SSEA1 and SSEA4, alkaline phosphatase staining, methylation analysis of the endogenous Oct4 promoter and RT-PCR analysis of endogenous rat pluripotency genes. We also determined the number of vector integrations and the extent to which reprogramming factor gene expression was controlled. Protocols were developed to generate embryoid bodies and rat iPS cells demonstrated as pluripotent by generating derivatives of all three embryonic germ layers in vitro, and teratoma formation in vivo. All data suggest that our rat iPS cells, generated by plasmid based reprogramming, are similar to rat ES cells. Methods of DNA transfection, protein transduction and feeder-free monolayer culture of rat iPS cells were established to enable future applications.

Efficient generation of rat induced pluripotent stem cells using a non-viral inducible vector.

Les m&eacute;thodes actuelles de production rat induite pluripotentes que les cellules souches sont bas&eacute;s sur la transduction virale de pluripotence induisant des g&egrave;nes (Oct4, Sox2, Klf4 et c-myc) dans les cellules somatiques. Elles activent les g&egrave;nes endog&egrave;nes de pluripotence et reprogrammer l&#39;identit&eacute; de la cellule &agrave; l&#39;&eacute;tat indiff&eacute;renci&eacute;. &Eacute;pig&eacute;n&eacute;tiques silencing du g&egrave;ne exog&egrave;ne doit survenir afin de permettre la diff&eacute;renciation des cellules iPS normale. Pour mieux contr&ocirc;ler l&#39;expression de facteurs exog&egrave;nes de reprogrammation, nous avons utilis&eacute; un nouveau plasmide inductible par doxycycline vecteur encodage Oct4, Sox2, c-Myc et Klf4. Pour assurer la g&eacute;n&eacute;ration efficace et contr&ocirc;l&eacute;e des cellules iPS par transfection de plasmide nous &eacute;quip&eacute; la reprogrammation vector avec un site attB de bact&eacute;riophage &phi;C31 et un vecteur d&#39;expression &phi;C31 int&eacute;grase permettant de renforcer l&#39;int&eacute;gration de vecteur. Une s&eacute;rie de lign&eacute;es de cellules iPS rat doxycycline ind&eacute;pendantes ont &eacute;t&eacute; &eacute;tablies. Ceux-ci ont &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute;s par d&eacute;tection immunocytochimique de Oct4, SSEA1 et SSEA4, phosphatase alcaline, coloration, analyse de la m&eacute;thylation du promoteur Oct4 endog&egrave;ne et analyse de RT-PCR des g&egrave;nes de pluripotence rat endog&egrave;ne. Nous avons &eacute;galement d&eacute;termin&eacute; le nombre d&#39;int&eacute;grations de vecteur et de l&#39;&eacute;tendue &agrave; laquelle expression de g&egrave;ne du facteur reprogrammation &eacute;tait contr&ocirc;l&eacute;e. Des protocoles ont &eacute;t&eacute; &eacute;labor&eacute;s pour g&eacute;n&eacute;rer le corps embryo&iuml;des et cellules iPS de rat a d&eacute;montr&eacute; comme pluripotentes en g&eacute;n&eacute;rant des d&eacute;riv&eacute;s de chacune des trois couches germinales embryonnaires in vitro et de la formation de t&eacute;ratome in vivo. Toutes les donn&eacute;es sugg&egrave;rent que les cellules iPS de nos rat, g&eacute;n&eacute;r&eacute;s par le plasmide bas&eacute; reprogrammation, sont semblables aux cellules de rat ES. M&eacute;thodes de transfection ADN, transduction de la prot&eacute;ine et de la culture de la monocouche exempte d&#39;engraissement des cellules iPS rat ont &eacute;t&eacute; &eacute;tablies pour permettre de futures applications.

G&eacute;n&eacute;ration efficace de rat induite par les cellules souches pluripotentes &agrave; l&#39;aide d&#39;un vecteur inductible non-virales.

Aktuelle Methoden der Generierung von Ratte induzierte pluripotente Stammzellen basieren auf virale Transduktion von Pluripotenz induzierende Gene (Oct4, Sox2, c-Myc und Klf4) in somatischen Zellen. Diese endogene Pluripotenz Gene zu aktivieren und die Identit&auml;t der Zelle zu einem undifferenzierten Zustand neu zu programmieren. Epigenetische silencing exogenen Gene muss auftreten, um normale iPS Zelldifferenzierung zu erm&ouml;glichen. Um mehr Kontrolle &uuml;ber den Ausdruck der exogenen Neuprogrammierung Faktoren erhalten, haben wir eine neuartige Doxycyclin-inducible Plasmid Vektor Codierung Oct4, Sox2, c-Myc und Klf4 verwendet. Effiziente und kontrollierte Erzeugung von iPS-Zellen durch Plasmid Transfektion zu gew&auml;hrleisten wir ausgestattet den Neuprogrammierung Vektor mit einer Bakteriophage &phi;C31 AttB Website und einen &phi;C31 Integrase Ausdruck Vektor zur Verbesserung der Vektor-Integration verwendet. Eine Reihe von Doxycyclin-unabh&auml;ngige Ratte iPS Zelllinien wurden gegr&uuml;ndet. Diese zeichneten sich durch den Nachweis des Prozesses Immunocytochemical Oct4, SSEA1 und SSEA4, alkalische Phosphatase, F&auml;rbung, Methylierung der endogenen Oct4-Projekttr&auml;ger und RT-PCR-Analyse der endogenen Ratte Pluripotenz Gene. Wir bestimmt auch die Anzahl der Vektor-Integrationen und der Umfang an dem Neuprogrammierung Faktor-Genexpression kontrolliert wurde. Protokolle wurden entwickelt, um Embryoid K&ouml;rper und Ratte-iPS-Zellen, die durch die Generierung von Derivaten aller drei embryonalen Keim Schichten in Vitro und in-vivo Teratom Bildung als Pluripotent gezeigt zu generieren. Alle Daten zeigen, dass unsere Ratte iPS-Zellen, generiert von Plasmid basierte Neuprogrammierung, Ratte ES Zellen &auml;hnlich sind. Methoden der DNA Transfektion, Protein Signaltransduktion und Zubringer-freie Monolayer Kultur der Ratte iPS-Zellen wurden gegr&uuml;ndet, um zuk&uuml;nftige Anwendungen zu erm&ouml;glichen.

Effiziente Erzeugung von Ratte induzierten pluripotenten Stammzellen, die mit nicht-viralen Vektor durch Induktion.

Attuali metodi di generazione ratto indussero pluripotenti le cellule staminali sono basate sulla trasduzione virale dei geni (Oct4, Sox2, c-myc e Klf4) di indurre pluripotenza in cellule somatiche. Questi attivare geni endogeni pluripotenza e riprogrammare l&#39;identit&agrave; della cella a uno stato indifferenziato. Silenziamento epigenetico di geni esogeni deve verificarsi per consentire la differenziazione delle cellule iPS normale. Per guadagnare pi&ugrave; controllo sopra l&#39;espressione dei fattori esogeni di riprogrammazione, abbiamo utilizzato un romanzo doxiciclina-inducible plasmide vettore codifica Oct4, Sox2, c-Myc e Klf4. Per garantire la generazione efficiente e controllata delle cellule iPS di transfezione del plasmide abbiamo equipaggiato la riprogrammazione vettoriale con un sito di attB &phi;C31 del batteriofago e usato un vettore di espressione &phi;C31 integrasi per aumentare l&#39;integrazione vettoriale. Sono state stabilite una serie di linee di cellule iPS ratto doxiciclina-indipendente. Questi sono stati caratterizzati da immunocitochimica di Oct4, SSEA1 e SSEA4, fosfatasi alcalina, colorazione, analisi di metilazione del promotore endogeno Oct4 e l&#39;analisi di RT-PCR dei geni pluripotenza ratto endogeno. Abbiamo anche determinato il numero di integrazioni di vettore e la misura a cui era controllata espressione del gene fattore riprogrammazione. Protocolli sono stati sviluppati per generare embryoid corpi e cellule iPS ratto ha dimostrate come pluripotenti generando derivati di tutti i tre strati di germe embrionali in vitro e in vivo di formazione di teratoma. Tutti i dati suggeriscono che le cellule iPS nostro ratto, generate dal plasmide basato riprogrammazione, sono simili alle cellule di ratto ES. Metodi di transfezione del DNA, trasduzione della proteina e cultura senza alimentatore monostrato di cellule iPS ratto sono stati stabiliti per consentire alle applicazioni future.

Generazione efficiente di ratto indotta da cellule staminali pluripotenti usando un vettore viscoelastico non virale.

&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; (Oct4, Sox2, Klf4&#x3001;c-myc) &#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x672A;&#x5206;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x306E; id &#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3057;&#x76F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x898F;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x7B26;&#x53F7;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B; Oct4, Sox2, C-myc &#x304A;&#x3088;&#x3073; Klf4 &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;IPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E16;&#x4EE3;&#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8; &phi;C31 attB &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3057;&#x76F4;&#x3059;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x88C5;&#x5099;&#x3057;&#x3001;&phi;C31 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x5F0F;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x6A39;&#x7ACB;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x306B;&#x6539;&#x7D44;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;oct4 &#x306F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;SSEA1&#x3001;SSEA4&#x3001;&#x67D3;&#x8272;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; Oct4 &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x89E3;&#x6790;&#x3068; RT-PCR &#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x591A;&#x5206;&#x5316;&#x80FD;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x6027;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x7D71;&#x5408;&#x306E;&#x6570;&#x3068;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x56E0;&#x5B50;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3082;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3002;&#x80DA;&#x69D8;&#x4F53;&#x3068;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x3068;&#x3057;&#x3066; in vitro &#x3068;&#x5947;&#x5F62;&#x816B;&#x5F62;&#x6210; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x80DA;&#x6027;&#x751F;&#x6B96;&#x5C64;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x304C;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; &#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3057;&#x76F4;&#x3059;&#x3068;&#x3001;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; ES &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DNA &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x7121;&#x6599;&#x5358;&#x5C64;&#x57F9;&#x990A;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x751F;&#x6210;&#x975E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xD604;&#xC7AC; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xC0DD;&#xC131; &#xC950;&#xC758; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; pluripotent &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; pluripotency &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; (Oct4, Sox2, klf4&#xC640; c-myc)&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBCC0;&#xD658;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0DD; pluripotency &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; undifferentiated &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC140;&#xC758; id&#xB97C; &#xC7AC; &#xC124; &#xC815;&#xD560;. Exogenous &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; epigenetic &#xC785;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; iPS &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC138; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC694;&#xC18C; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xB354; &#xC5BB;&#xC73C;&#xB824;&#xACE0; &#xC18C;&#xC124; &#xC544;&#xBAA9;&#xC2DC;&#xC2E4;&#xB9B0;&#xACFC; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBCA1;&#xD130;&#xB294; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; Oct4, Sox2, c-Myc &#xBC0F; Klf4 &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; transfection &#xD558; &#xC5EC; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC624;&#xD30C;&#xC9C0; &phi;C31 attB &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC7A5;&#xCC29; &#xD558; &#xACE0; &phi;C31 integrase &#xC2DD; &#xBCA1;&#xD130; &#xBCA1;&#xD130; &#xD1B5;&#xD569;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294;. &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988; &#xC544;&#xBAA9;&#xC2DC;&#xC2E4;&#xB9B0;&#xACFC; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC950; iPS &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xC124;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Oct4, SSEA1 &#xBC0F; SSEA4, &#xC5BC;&#xB8E9;, &#xC0DD; Oct4 &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC758; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xC950; pluripotency &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; RT-PCR &#xBD84;&#xC11D; &#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xC131; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; immunocytochemical &#xD0D0;&#xC9C0; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xBCA1;&#xD130; &#xD1B5;&#xD569; &#xC218; &#xBC0F; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC694;&#xC18C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB294; &#xC5B4;&#xB290; &#xC815;&#xB3C4; &#xACB0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; embryoid &#xC2DC;&#xCCB4;&#xC640; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;, &#xAE30;&#xD615;&#xC885; &#xD615;&#xC131; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB450; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC138;&#xADE0; &#xCE35;&#xC758; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9CC;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xC950; iPS &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xAE30;&#xBC18;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC950; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xC950; ES &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. DNA transfection, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC804;&#xB2EC;&#xC640; &#xC950;&#xC758; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E8;&#xCE35; &#xAE09;&#xC9C0;&#xB300; &#xBB34;&#xB8CC; &#xBB38;&#xD654; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC758; &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC124;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;.

&#xC950;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xC131; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBE44; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

Los m&eacute;todos actuales de generaci&oacute;n de la rata indujeron pluripotentes c&eacute;lulas se basan en la transducci&oacute;n viral de la pluripotencia inducci&oacute;n de genes (Oct4, Sox2, c-myc y Klf4) en las c&eacute;lulas som&aacute;ticas. &Eacute;stos activan genes end&oacute;genos pluripotencia y reprogramar la identidad de la c&eacute;lula a un estado indiferenciado. Epigen&eacute;tica silenciamiento de genes ex&oacute;genos debe ocurrir para permitir la diferenciaci&oacute;n de las c&eacute;lulas iPS normal. Para obtener m&aacute;s control sobre la expresi&oacute;n de factores ex&oacute;genos de reprogramaci&oacute;n, utilizamos un pl&aacute;smido doxiciclina-inducible novela vector codificaci&oacute;n Oct4, Sox2, c-Myc y Klf4. Para asegurar la generaci&oacute;n eficiente y controlada de las c&eacute;lulas iPS por la transfecci&oacute;n de pl&aacute;smido equipamos el vector reprogramaci&oacute;n con un sitio de attB bacteri&oacute;fago &phi;C31 y utiliza un vector de expresi&oacute;n de integrasa de &phi;C31 para mejorar la integraci&oacute;n del vector. Se establecieron una serie de l&iacute;neas de c&eacute;lulas iPS de rata de doxiciclina-independiente. &Eacute;stos se caracterizaron por detecci&oacute;n inmunocitoqu&iacute;mica de Oct4, SSEA1 y SSEA4, fosfatasa alcalina, coloraci&oacute;n, an&aacute;lisis de metilaci&oacute;n del promotor Oct4 end&oacute;geno y an&aacute;lisis de RT-PCR de genes de pluripotencia end&oacute;gena de la rata. Tambi&eacute;n se determinan el n&uacute;mero de integraciones de vector y el grado en el que se controlaron reprogramaci&oacute;n expresi&oacute;n del gen del factor. Se elaboraron protocolos para generar cuerpos embryoid y c&eacute;lulas iPS de rata demostradas como pluripotentes generando derivados de las tres capas embrionarias del germen en vitro y formaci&oacute;n de teratoma en vivo. Todos los datos sugieren que nuestras c&eacute;lulas iPS de rata, generados por la reprogramaci&oacute;n del pl&aacute;smido basado, son similares a las c&eacute;lulas de la rata ES. M&eacute;todos de DNA transfecci&oacute;n, transducci&oacute;n de prote&iacute;na y cultura libre de alimentador monocapa de c&eacute;lulas iPS de rata fueron establecidos para permitir futuras aplicaciones.

Article	Year
Zymogram with Remazol brilliant blue-labeled Micrococcus lysodeikticus cells for the detection of lysozymes: example of a new lysozyme activity in Formosan termite defense secretions. Analytical biochemistry\| PubMed ID: 12479837	2003
Mutation of active site residues in the chitin-binding domain ChBDChiA1 from chitinase A1 of Bacillus circulans alters substrate specificity: use of a green fluorescent protein binding assay... Archives of biochemistry and biophysics\| PubMed ID: 15158679	2004
Toward defining the human parotid gland salivary proteome and peptidome: identification and characterization using 2D SDS-PAGE, ultrafiltration, HPLC, and mass spectrometry. Biochemistry\| PubMed ID: 15723531	2005
Assessing the effects of diurnal variation on the composition of human parotid saliva: quantitative analysis of native peptides using iTRAQ reagents. Analytical chemistry\| PubMed ID: 16053308	2005
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The proteomes of human parotid and submandibular/sublingual gland salivas collected as the ductal secretions. Journal of proteome research\| PubMed ID: 18361515	2008
Acid-catalyzed oxygen-18 labeling of peptides. Analytical chemistry\| PubMed ID: 19243188	2009
Hemoglobin cleavage site-specificity of the Plasmodium falciparum cysteine proteases falcipain-2 and falcipain-3. PloS one\| PubMed ID: 19357776	2009
Endosomal endothelin-converting enzyme-1: a regulator of beta-arrestin-dependent ERK signaling. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 19531493	2009
Profiling protease activities by dynamic proteomics workflows. Proteomics\| PubMed ID: 22246865	2012
Surveying proteolytic processes in human cancer microenvironments by microdialysis and activity-based mass spectrometry. Proteomics. Clinical applications\| PubMed ID: 22262628	2011
Targeting proteases in cardiovascular diseases by mass spectrometry-based proteomics. Circulation. Cardiovascular genetics\| PubMed ID: 22511707	2012
Efficient generation of rat induced pluripotent stem cells using a non-viral inducible vector. PloS one\| PubMed ID: 23383095	2013

Markus Hardt

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