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A Step-by-step Method for the Reconstitution of an ABC Transporter into Nanodisc Lipid Particles

The nanodisc is a discoidal particle (~ 10-12 nm large) that trap membrane proteins into a small patch of phospholipid bilayer. The nanodisc is a ...

University of British Columbia 

NarJ &#x662F;&#x53C2;&#x4E0E;&#x6298;&#x53E0;&#x3001; &#x6210;&#x719F;&#x548C;&#x94BC;&#x8F85;&#x9176;&#x63D2;&#x5165;&#x785D;&#x9178;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; A &#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x3002;&#x5B83;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E; NarJ &#x5C55;&#x54C1;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x53CC;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; translocase (&#x8FBE;) &#x4F9D;&#x8D56;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x7684;&#x6210;&#x719F;&#x548C;&#x8F85;&#x9176;&#x63D2;&#x5165;&#x5E8F;&#x5217;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; NarJ &#x7ED1;&#x5B9A;&#x901A;&#x8FC7;&#x9065;&#x8FDC;&#x7684;&#x897F;&#x65B9;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x7B49;&#x6E29;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x91CF;&#x70ED;&#xFF0C;NarG N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x5730;&#x533A;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x53D1;&#x751F;&#x5BF9;&#x77ED;&#x80BD;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x53CC;-&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x6BCD;&#x9898;&#x3002;&#x5206;&#x998F;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E5F;&#x663E;&#x793A;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684; NarJ &#x4E92;&#x52A8;&#x5C55;&#x54C1;&#x8FBE;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x3002;&#x7ECF;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8C03;&#x67E5;&#x540E;&#x901A;&#x8FC7;&#x9065;&#x8FDC;&#x7684;&#x897F;&#x65B9;&#x7684;&#x6C61;&#x70B9;&#xFF0C;NarJ &#x7684; interactome &#x4E5F;&#x5C55;&#x54C1;&#x8FBE;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x785D;&#x9178;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; A.&#x6210;&#x719F;&#x9014;&#x5F84;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;

&#x53CC;&#x4EBA;-&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; translocase NarJ &#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x51FD;&#x6570;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

NarJ is a chaperone involved in folding, maturation, and molybdenum cofactor insertion of nitrate reductase A from Escherichia coli. It has also been shown that NarJ exhibits sequence homology to a family of chaperones involved in maturation and cofactor insertion of E. coli redox enzymes that are mediated by twin-arginine translocase (Tat) dependent translocation. In this study, we show that NarJ binds the N-terminal region of NarG through Far Western studies and isothermal titration calorimetry, and the binding event occurs towards a short peptide sequence that contains a homologous twin-arginine motif. Fractionation experiments also show that the interaction of NarJ to the cytoplasmic membrane exhibits Tat-dependence. Upon further investigation through Far Western blots, the interactome of NarJ also exhibits Tat-dependence. Together the data suggest that the Tat system may play a role in the maturation pathway of nitrate reductase A.

Twin-arginine translocase may have a role in the chaperone function of NarJ from Escherichia coli.

NarJ est un chaperon impliqu&eacute; dans le pliage, la maturation et insertion de cofacteur molybd&egrave;ne de la nitrate r&eacute;ductase A d&#39;Escherichia coli. Il a &eacute;galement &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; que NarJ pr&eacute;sente une homologie de s&eacute;quence dans une famille de chaperons impliqu&eacute;s dans l&#39;insertion de la maturation et le cofacteur d&#39;enzymes d&#39;oxydor&eacute;duction e. coli qui sont v&eacute;hicul&eacute;es par translocation d&eacute;pendants &agrave; arginine translocase (Tat). Dans cette &eacute;tude, nous montrons que NarJ lie la r&eacute;gion N-terminale de NarG gr&acirc;ce &agrave; des &eacute;tudes de l&#39;extr&ecirc;me ouest et calorim&eacute;trie isotherme de titration, et l&#39;&eacute;v&eacute;nement de liaison se produit vers une s&eacute;quence peptidique court qui contient un motif &agrave; arginine homologue. Exp&eacute;riences de fractionnement montrent aussi que l&#39;interaction de NarJ vers la membrane cytoplasmique montre Tat-d&eacute;pendance. Apr&egrave;s examen plus approfondi par le biais de transferts Western extr&ecirc;me, l&#39;interactome de NarJ expose aussi Tat-d&eacute;pendance. Ensemble, les donn&eacute;es semblent indiquer que le syst&egrave;me Tat peut-&ecirc;tre jouer un r&ocirc;le dans la voie de maturation de la nitrate r&eacute;ductase A.

Translocase &agrave; arginine peut avoir un r&ocirc;le dans la fonction de chaperon de NarJ d&#39;Escherichia coli.

NarJ ist eine Anstandsdame Faltreifen, Reifung und Molybd&auml;n-Cofaktor-Einf&uuml;gung von Nitrat-Reduktase A aus Escherichia coli beteiligt. Es hat sich auch gezeigt, dass NarJ Sequenz-Homologie zu einer Familie von Chaperone Reifung und Cofaktor Einf&uuml;gung von E. Coli Redox Enzyme beteiligt aufweist, die durch Twin-Arginin-Translokase (Tat) abh&auml;ngige Translokation vermittelt werden. In dieser Studie zeigen wir, dass NarJ der N-terminalen Region NarG durch weit westlichen Studien und Isotherme Titrierung Kalorimetrie bindet, und das Bindung-Ereignis tritt in Richtung einer kurzen Peptid-Sequenz, die eine homologe Zweibettzimmer-Arginin Motiv enth&auml;lt. Fraktionierung Experimente zeigen auch, dass das Zusammenspiel von NarJ an der zytoplasmatischen Membran Tat-Abh&auml;ngigkeit aufweist. Bei der weiteren Untersuchung durch Far Western Blot Exponate der Interaktom des NarJ auch Tat-Abh&auml;ngigkeit. Zusammen die Daten deuten darauf hin, dass das Tat-System eine in der Reifung von Nitrat-Reduktase A. Pathway Rolle kann

Zweibettzimmer-Arginin-Translokase m&ouml;glicherweise eine Rolle in der Chaperon-Funktion der NarJ aus Escherichia coli.

NarJ &egrave; un chaperone coinvolti nel pieghevole, maturazione e inserimento cofattore molibdeno della riduttasi del nitrato A da Escherichia coli. Inoltre &egrave; stato dimostrato che NarJ presenta omologia di sequenza da una famiglia di accompagnatori coinvolti nell&#39;inserimento di maturazione e cofattore di enzimi redox di e. coli che sono mediati da una traslocazione dipendente twin-arginina traslocasi (Tat). In questo studio, mostriamo NarJ associa la regione N-terminale di NarG attraverso studi occidentali e calorimetria isotermica di titolazione, che si verifica l&#39;evento di associazione verso una sequenza di brevi del peptide che contiene un motivo twin-arginina omologo. Frazionamento esperimenti mostrano anche che l&#39;interazione di NarJ alla membrana citoplasmatica esibisce Tat-dipendenza. Dopo ulteriori indagini attraverso lontano Western Blot, interactome del NarJ esibisce anche Tat-dipendenza. Insieme i dati suggeriscono che il sistema Tat pu&ograve; svolgere un ruolo nella via della maturazione della nitrato reduttasi A.

Twin-arginina traslocasi possono avere un ruolo nella funzione di chaperone di NarJ da Escherichia coli.

NarJ &#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x3001;&#x6210;&#x719F;&#x3001;&#x30E2;&#x30EA;&#x30D6;&#x30C7;&#x30F3;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x633F;&#x5165;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20; A &#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;NarJ &#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6210;&#x719F;&#x3068;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x30C4;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; translocase (Tat) &#x4F9D;&#x5B58;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;NarJ &#x3044;&#x308B;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x307E;&#x3067;&#x897F;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x7B49;&#x6E29;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x578B;&#x71B1;&#x91CF;&#x8A08;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x76F8;&#x540C;&#x30C4;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x77ED;&#x3044;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x5225;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3082;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x819C;&#x3078;&#x306E; NarJ &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C; Tat &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3002;&#x9060;&#x3044;&#x897F;&#x90E8;&#x306E;&#x3057;&#x307F;&#x3092;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;NarJ &#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x307E;&#x305F; Tat &#x4F9D;&#x5B58;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; Tat &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x304C;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20; A &#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x62C5;&#x3046;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C4;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; translocase &#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6A5F;&#x80FD; NarJ &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

NarJ &#xC811;&#xC774;&#xC2DD;, &#xC131;&#xC219;, &#xBC0F; &#xC9C8; &#xC0B0; &#xD658; &#xC6D0; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xBAB0; &#xB9AC;&#xBE0C; &#xB374; cofactor &#xC0BD;&#xC785;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; NarJ &#xC804;&#xC2DC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; homology &#xD2B8;&#xC708; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; translocase (Tat) &#xC885;&#xC18D; &#xC804; &#xC911;&#xC7AC; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC0B0;&#xD654; &#xD658; &#xC6D0; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC131;&#xC219;&#xACFC; &#xACF5;&#xB3D9; &#xC778;&#xC790; &#xC0BD;&#xC785;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xC758; &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Narj&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC11C; &#xBD80; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC640; &#xB4F1;&#xC628; &#xC801;&#xC815; &#xC5F4; &#xB7C9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; NarG N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xB3D9;&#xC885; &#xD2B8;&#xC708; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD5A5;&#xD574; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xBCC4; &#xBC95; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB610;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB9C9; NarJ &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBB38;&#xC2E0;-&#xC758;&#xC874; &#xC804;&#xC2DC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. NarJ &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xBA40;&#xB9AC; &#xC11C;&#xB3C4; &#xB9D0;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xCD94;&#xAC00; &#xC870;&#xC0AC; &#xC2DC; &#xBB38;&#xC2E0;-&#xC758;&#xC874; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xAE30;&#xB3C4; &#xD558; &#xACE0;. &#xD568;&#xAED8; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC81C;&#xC548; &#xBB38;&#xC2E0; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; reductase a &#xC131;&#xC219; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD2B8;&#xC708;-&#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; translocase &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; Narj&#xC758; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

NarJ es un acompa&ntilde;ante plegable, maduraci&oacute;n y la inserci&oacute;n de cofactor del molibdeno de nitrato reductasa A de Escherichia coli en. Tambi&eacute;n se ha demostrado que la NarJ presenta homolog&iacute;a de secuencia a una familia de acompa&ntilde;antes en la inserci&oacute;n de maduraci&oacute;n y cofactor de enzimas redox de e. coli que son mediadas por desplazamiento dependiente de doble-arginina translocasa (Tat). En este estudio demostramos que NarJ se une a la regi&oacute;n N-terminal de NarG mediante estudios de lejano oeste y calorimetr&iacute;a isoterma de titulaci&oacute;n, y el evento de la Uni&oacute;n se produce hacia una secuencia del p&eacute;ptido corto que contiene un motivo doble-arginina hom&oacute;logo. Fraccionamiento experimentos tambi&eacute;n muestran que la interacci&oacute;n de NarJ a la membrana citoplasm&aacute;tica exhibe Tat-dependencia. A continuar investigando a trav&eacute;s de las manchas blancas /negras lejano oeste, el interactoma de NarJ tambi&eacute;n exhibe Tat-dependencia. Juntos, los datos sugieren que el sistema Tat puede desempe&ntilde;ar un papel en el camino de la maduraci&oacute;n del nitrato reductasa A.

Translocasa de doble-arginina puede tener un papel en la funci&oacute;n de acompa&ntilde;ante de NarJ de Escherichia coli.

&#x53CC;&#x4EBA;-&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; translocase (&#x8FBE;) &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7531;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7528;&#x4E8E;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x5854;&#x5854;&#x4E9A;&#x57FA;&#x662F;&#x9884;&#x6D4B;&#x6210;&#x5B54;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x5DF2;&#x8BC1;&#x660E;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x540C;&#x6E90;&#x5BE1;&#x805A;&#x590D;&#x6742;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E2D;&#x5854;&#x5854;&#x7684;&#x5DEF;&#x57FA;&#x53CD;&#x5E94;&#x8BD5;&#x5242; 4-acetamido-4&#39;-maleimidylstilbene-2,2&#39;-disulfonic &#x9178;&#x548C; Nalpha-(3 maleimidylproprionyl) &#x5BF9;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; biocytin &#x8F85;&#x52A9;&#x529F;&#x80FD;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x5854;&#x5854; N &#x603B;&#x7AD9;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5148;&#x524D;&#x5047;&#x5B9A;&#x7684; periplasm&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x786E;&#x8BA4;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x610F;&#x89C1;&#xFF0C;C-&#x603B;&#x7AD9;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53CC;&#x91CD;&#x7684;&#x62D3;&#x6251;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x7531;&#x819C;&#x89E3;&#x5076;&#x8054;&#x5242;&#x7FB0;&#x57FA;&#x6C30;&#x5316;&#x7269;-m-&#x6C2F;&#x82EF;&#x57FA;&#x8159;&#x6CBB;&#x7597;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; C-&#x5DF4;&#x58EB;&#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x62D3;&#x6251;&#x72B6;&#x6001;&#x4E0D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x4E24;&#x79CD;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5854;&#x5854;&#x5728;&#x819C;&#x4E2D;&#xFF1A; &#x4E00;&#x4E2A;&#x5177;&#x6709;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x87BA;&#x65CB;&#x548C;&#x53E6;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8DE8;&#x819C;&#x87BA;&#x65CB;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x62D3;&#x6251;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x5F00;&#x53D1;&#x548C;&#x5361;&#x901A;&#x540C;&#x6E90;&#x5BE1;&#x805A;&#x590D;&#x6742;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x76F4;&#x5F84;&#x5927;&#x7EA6; 50 A &#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x660E;&#x53CC;&#x8DE8;&#x819C;&#x87BA;&#x65CB;&#x62D3;&#x6251;&#x53EF;&#x80FD;&#x6613;&#x4F4D;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6784;&#x5EFA;&#x57FA;&#x5757;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Gly2Cys &#x548C; Thr22Cys &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4F53;&#x5185;&#x4EA4;&#x8054;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E; Gly2&#xFF0C;&#x5728;&#x8DE8;&#x819C;&#x87BA;&#x65CB;-1&#xFF0C;&#x5F00;&#x59CB;&#x65F6;&#x662F;&#x5728;&#x8FD1;&#x8DDD;&#x79BB;&#x4E0E;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x5854;&#x5854; Gly2 &#x4F5C;&#x4E3A; Cys2 &#x4EA4;&#x8054;&#x7ACB;&#x5373;&#x52A0;&#x5165;&#x94DC;&#x5549;&#x3002;&#x53E6;&#x4E00;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;Cys22&#xFF0C;&#x5728;&#x53E6;&#x4E00;&#x7AEF;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x87BA;&#x65CB;&#xFF0C;&#x82B1;&#x4E86;&#x81F3;&#x5C11; 10 &#x5206;&#x949F;&#x7684;&#x4EA4;&#x53C9;&#x94FE;&#x63A5;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x53EF;&#x80FD;&#x79FB;&#x52A8;&#x6216;&#x8C03;&#x6574;&#x9700;&#x8981;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6B8B;&#x4F59;&#x643A;&#x5E26;&#x4E0E;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x5854;&#x5854;&#x4E9A;&#x57FA;&#x63A5;&#x8FD1;&#x3002;

&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x53CC;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; translocase &#x7B2C;&#x5854;&#x5854;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A; N &#x4E2D;&#x7684;&#x62D3;&#x6251;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

The twin-arginine translocase (Tat) system is used by many bacteria to translocate folded proteins across the cytoplasmic membrane. The TatA subunit is the predicted pore-forming subunit and has been shown to form a homo-oligomeric complex. Through accessibility experiments using the thiol-reactive reagents 4-acetamido-4'-maleimidylstilbene-2,2'-disulfonic acid and Nalpha-(3-maleimidylproprionyl)biocytin toward site-specific cysteine mutants in TatA, we show that the N-terminus of TatA is located in the cytoplasm rather than the previously assumed periplasm. We also confirm previous observations that the C-terminus has a dual topology. By treatment with the membrane uncoupler carbonyl cyanide-m-chlorophenyl hydrazone, we show that the topological state of the C-terminus is dependent on the membrane potential. These results suggest two architectures of TatA in the membrane: one with a single transmembrane helix and the other with two transmembrane helices. Molecular models of both topologies were used to develop and cartoon a homo-oligomeric complex as a channel with a diameter of approximately 50 A and suggest that the double transmembrane helix topology might be the building block for the translocation channel. Additionally, in vivo cross-linking experiments of Gly2Cys and Thr22Cys mutants showed that Gly2, at the beginning of transmembrane helix-1, is in close proximity with Gly2 of a neighboring TatA, as Cys2 cross-linked immediately upon the addition of copper phenanthroline. On the other hand, Cys22, at the other end of the transmembrane helix, took at least 10 min to cross-link, suggesting that a possible movement or reorientation is required to bring this residue into proximity with a neighboring TatA subunit.

The TatA subunit of Escherichia coli twin-arginine translocase has an N-in topology.

Le syst&egrave;me de double-arginine translocase (Tat) est utilis&eacute; par de nombreuses bact&eacute;ries de translocation des prot&eacute;ines repli&eacute;es &agrave; travers la membrane cytoplasmique. La sous-unit&eacute; de TatA est la sous-unit&eacute; de pore-forming pr&eacute;vue et a &eacute;t&eacute; montr&eacute;e pour former un complexe homo-oligom&egrave;re. Gr&acirc;ce &agrave; des exp&eacute;riences de l&#39;accessibilit&eacute; &agrave; l&#39;aide de l&#39;acide 4-acetamido-4&#39;-maleimidylstilbene-2,2&#39;-disulfonic thiol-r&eacute;actifs et la biocytine Nalpha-(3-maleimidylproprionyl) vers des mutants de cyst&eacute;ine in situ &agrave; TatA, nous montrons que l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N-terminale de TatA se trouve dans le cytoplasme et non le p&eacute;riplasme pr&eacute;c&eacute;demment suppos&eacute;. Nous confirmons &eacute;galement que l&#39;extr&eacute;mit&eacute; C-terminale a une topologie double ses pr&eacute;c&eacute;dentes observations. Par traitement avec la membrane d&eacute;coupleur carbonyl cyanide-m-chloroph&eacute;nyl hydrazone, nous montrons que l&#39;&eacute;tat topologique de l&#39;extr&eacute;mit&eacute; C-terminale est d&eacute;pendant du potentiel de membrane. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent deux architectures de TatA dans la membrane : l&#39;un avec une seule h&eacute;lice transmembranaire et l&#39;autre avec deux h&eacute;lices transmembranaires. Mod&egrave;les mol&eacute;culaires de ces deux topologies ont servi &agrave; d&eacute;velopper et un complexe homo-oligom&egrave;re de dessin anim&eacute; comme un canal avec un diam&egrave;tre d&#39;environ 50 A et sugg&egrave;rent que la topologie de la double h&eacute;lice transmembranaire pourrait &ecirc;tre le bloc de construction pour le canal de translocation. En outre, des exp&eacute;riences in vivo r&eacute;ticulation des mutants Gly2Cys et Thr22Cys ont montr&eacute; que Gly2, au d&eacute;but de transmembrane helix-1, se trouve &agrave; proximit&eacute; avec Gly2 d&#39;une TatA voisine, comme Cys2 r&eacute;ticul&eacute; imm&eacute;diatement lors de l&#39;addition de cuivre ph&eacute;nanthroline. En revanche, Cys22, &agrave; l&#39;autre extr&eacute;mit&eacute; de l&#39;h&eacute;lice transmembranaire, a pris au moins 10 min de r&eacute;ticulation, sugg&eacute;rant qu&#39;un mouvement possible ou une r&eacute;orientation est n&eacute;cessaire pour int&eacute;grer ce r&eacute;sidu de proximit&eacute; avec une sous-unit&eacute; de TatA voisine.

La sous-unit&eacute; de TatA d&#39;Escherichia coli &agrave; arginine translocase a une N-dans la topologie.

Das Zweibettzimmer-Arginin-Translokase (Tat)-System wird durch viele Bakterien zur gefaltete Proteine durch die zytoplasmatische Membran zu akkumulieren. Die TatA-Untereinheit ist die vorhergesagte Pore-forming-Untereinheit und nachweislich eine Homo-Oligomere komplexe zu bilden. Durch Zug&auml;nglichkeit Experimente mit Thiol-reaktives Reagenzien 4-acetamido-4&#39;-maleimidylstilbene-2,2&#39;-disulfonic S&auml;ure und Nalpha-(3-Maleimidylproprionyl) Biocytin in Richtung standortspezifische Cystein Mutanten in TatA zeigen wir, dass der N-Terminus von TatA sich im Zytoplasma, anstatt der bisher angenommenen Periplasm befindet. Wir best&auml;tigen auch fr&uuml;here Beobachtungen, dass das C-Terminus eine duale-Topologie hat. Durch die Behandlung mit der Membran Entkuppler Carbonyl Cyanid-m-chlorphenyl Hydrazone zeigen wir, dass topologische Bundesland der C-Terminus der potenziellen Membran abh&auml;ngig ist. Diese Resultate schlagen zwei Architekturen von TatA in der Membran: eine mit einem einzigen Transmembran-Helix und das andere mit zwei Transmembran-Helices. Molekulare Modelle der beiden Topologien dienten zu entwickeln und ein Homo-Oligomeren komplexen als Kanal mit einem Durchmesser von etwa 50 A cartoon und Vermutung nahe, dass die Doppel-Transmembran-Helix-Topologie der Baustein f&uuml;r die Translokation-Kanal. Dar&uuml;ber hinaus zeigte in-vivo Strahlenvernetzung Experimente Mutanten von Gly2Cys und Thr22Cys Gly2, zu Beginn des Transmembran-Helix-1, in der N&auml;he mit Gly2 von einem benachbarten TatA ist wie Cys2 sofort nach dem Zusatz von Kupfer Phenanthrolin vernetzt. Auf der anderen Seite, Cys22, am anderen Ende der Transmembran-Helix, dauerte mindestens 10 Minuten zur Querverbindung, was darauf hindeutet, dass eine m&ouml;gliche Bewegung oder Neuausrichtung erforderlich, diese R&uuml;ckst&auml;nde in der N&auml;he mit einem benachbarten TatA-Untereinheit zu bringen ist.

Die TatA-Untereinheit von Escherichia coli Zweibettzimmer-Arginin Translokase hat eine N-in-Topologie.

Il sistema twin-arginina traslocasi (Tat) &egrave; usato da molti batteri a traslocano nel piegato proteine attraverso la membrana citoplasmatica. La subunit&agrave; di TatA &egrave; la subunit&agrave; che formano dei pori prevista e ha dimostrata di formare un homo oligomerico. Attraverso esperimenti di accessibilit&agrave; utilizzando l&#39;acido 4-acetamido-4&#39;-maleimidylstilbene-2,2&#39;-disulfonic reagenti tiolo-reattiva e n&alpha;-(3-maleimidylproprionyl) biocytin verso mutanti cisteina site-specific in TatA, mostriamo che la N-terminus di TatA si trova nel citoplasma piuttosto che il periplasm precedentemente assunto. Confermiamo anche le osservazioni precedenti che il C-terminale ha una topologia dual. Da un trattamento con la membrana sono Carbonil cianuro-m-clorofenil idrazone, mostriamo che lo stato topologico del C-terminale &egrave; dipendente il potenziale di membrana. Questi risultati suggeriscono due architetture di TatA nella membrana: uno con una singola elica transmembrana e l&#39;altra con due eliche transmembrane. Modelli molecolari di due topologie sono stati utilizzati per sviluppare e cartoon un homo oligomerico come un canale con un diametro di circa 50 A e suggeriscono che la topologia di doppia elica transmembrana potrebbe essere il blocco di costruzione per il canale di traslocazione. Inoltre, esperimenti in vivo di cross-linking dei mutanti di Gly2Cys e Thr22Cys hanno mostrato che Gly2, all&#39;inizio del transmembrane helix-1, &egrave; in stretta vicinanza con Gly2 di una TatA vicino, come Cys2 reticolato immediatamente dopo l&#39;aggiunta di rame fenantrolina. D&#39;altra parte, Cys22, a altra estremit&agrave; dell&#39;elica del transmembrane, preso almeno 10 min di AppleTalk, suggerendo che un possibile movimento o riorientamento &egrave; richiesto di portare questo residuo in prossimit&agrave; con una subunit&agrave; TatA vicina.

La subunit&agrave; TatA di Escherichia coli twin-arginina traslocasi ha una N-in topologia.

&#x30C4;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; translocase (Tat) &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x6298;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x819C;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x62D8;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30BF; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x4E88;&#x6E2C;&#x7D30;&#x5B54;&#x5F62;&#x6210;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x30DB;&#x30E2;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x8A66;&#x85AC; 4-acetamido-4&#39;-maleimidylstilbene-2,2&#39;-disulfonic &#x9178;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066; Nalpha-(3-maleimidylproprionyl) biocytin &#x306E;&#x30BF;&#x30BF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x30BF;&#x30BF;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x4EE5;&#x524D;&#x60F3;&#x5B9A;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x3088;&#x308A;&#x3080;&#x3057;&#x308D;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;.&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB; &#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x819C;&#x89E3;&#x653E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30CB;&#x30EB; &#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;-m-&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB; &#x30D2;&#x30C9;&#x30E9;&#x30BE;&#x30F3;&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x4F4D;&#x76F8;&#x72B6;&#x614B;&#x304C;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30BF;&#x819C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x304C;&#x793A;&#x5506;: 1 &#x3064;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30DB;&#x30E2; &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x76F4;&#x5F84;&#x7D04; 50 A &#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6F2B;&#x753B;&#x3057;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x8EE2;&#x7F6E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30D3;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Cys2 &#x306F;&#x3059;&#x3050;&#x306B;&#x9285;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x67B6;&#x6A4B;&#x3068;&#x3057;&#x3066; Gly2Cys &#x304A;&#x3088;&#x3073; Thr22Cys &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E; in vivo &#x67B6;&#x6A4B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x96A3;&#x63A5;&#x30BF;&#x30BF;&#x3001;Gly2 &#x3068;&#x8FD1;&#x63A5; Gly2 &#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;-1 &#x5E74;&#x306E;&#x521D;&#x3081;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4E00;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;Cys22 &#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 10 &#x5206;&#x304B;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3001;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x52D5;&#x304D;&#x3084;&#x65B9;&#x5411;&#x8EE2;&#x63DB;&#x304C;&#x96A3;&#x63A5;&#x30BF;&#x30BF; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x8FD1;&#x63A5;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x6B8B;&#x6E23;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30BF; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30C4;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; translocase N &#x306E;&#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD2B8;&#xC708;-&#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; translocase (&#xBB38;&#xC2E0;) &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xB9CE;&#xC740; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC811;&#xD78C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB3D9; &#xD558;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD0C0; &#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC774;&#xBA70; &#xD638;&#xBAA8; oligomeric &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD0C0; &#xD0C0;&#xC5D0; thiol &#xBC18;&#xC751; &#xC2DC; &#xC57D; 4-acetamido-4&#39;-maleimidylstilbene-2,2&#39;-disulfonic &#xC0B0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xBCC4; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD5A5;&#xD574; biocytin Nalpha-(3-maleimidylproprionyl)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB0B4;&#xAC8C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC635;&#xC158; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Tata&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC815;&#xB41C; periplasm &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xAD00;&#xCE21; C-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC740; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; uncoupler &#xCE74; &#xCCAD;&#xC0B0;&#xAC00; &#xB9AC;-m-chlorophenyl hydrazone &#xCE58;&#xB8CC;,&#xC73C;&#xB85C; C-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xB9C9; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xD0C0; &#xD0C0; &#xB450; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98; &#xC81C;&#xC548;: &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB098;&#xC120;&#xC640; &#xB450; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xD3EC;&#xD568;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xD558;&#xB098;. &#xB450; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC9C1;&#xACBD; &#xC57D; 50 A&#xC758; &#xCC44;&#xB110;&#xB85C; &#xD638;&#xBAA8; oligomeric &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB9CC;&#xD654;&#xC640; &#xC774;&#xC911; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB098;&#xC120; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0; &#xC804; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBE4C;&#xB529; &#xBE14;&#xB85D; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Gly2Cys &#xBC0F; Thr22Cys &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xAC00;&#xAD50; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;&#xB294; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB098;&#xC120; 1 &#xCD08;&#xC5D0; Gly2 &#xC778;&#xC811; &#xD0C0; &#xD0C0; gly2&#xC640; &#xADFC;&#xC811;&#xC5D0;&#xC11C; Cys2 &#xAD6C;&#xB9AC; phenanthroline&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xB530;&#xB77C; &#xC989;&#xC2DC; &#xC2ED;&#xC790;&#xAC00;. &#xB2E4;&#xB978; &#xD55C;&#xD3B8;&#xC73C;&#xB85C;, Cys22, &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB098;&#xC120;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB05D;&#xC5D0; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 10 &#xBD84; &#xD588;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xB610;&#xB294; &#xC7AC;&#xAD50;&#xC721;&#xC740; &#xADFC;&#xC811; &#xC774;&#xC6C3; &#xD0C0; &#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640;&#xC5D0;&#xC774; &#xCC0C; &#xAEBC;&#xC774; &#xAE30;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xACB0;.

&#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xD2B8;&#xC708; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; translocase&#xC758; &#xD0C0; &#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB294; N-&#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0;.

El sistema de doble-arginina translocasa (Tat) es utilizado por muchas bacterias a translocan prote&iacute;nas plegadas a trav&eacute;s de la membrana citoplasm&aacute;tica. La subunidad de TatA es la subunidad de poro-formaci&oacute;n prevista y se ha demostrado para formar un complejo homo-oligom&eacute;rico. A trav&eacute;s de experimentos de accesibilidad con el &aacute;cido 4-acetamido-4&#39;-maleimidylstilbene-2,2&#39;-disulfonic tiol reactivos reactivos y Nalpha-(3-maleimidylproprionyl) biocitina hacia mutantes de ciste&iacute;na site-specific en TatA, mostramos que el N-terminal de TatA se encuentra en el citoplasma en lugar del periplasma previamente asumido. Tambi&eacute;n confirmamos las observaciones anteriores que el c-terminal tiene una topolog&iacute;a de doble. Por el tratamiento con la membrana uncoupler carbonilo cianuro-m-clorofenil hidrazona, mostramos que el estado topol&oacute;gico de la c-terminal es dependiente en el potencial de membrana. Estos resultados sugieren dos arquitecturas de TatA en la membrana: uno con una sola h&eacute;lice transmembrana y el otro con dos h&eacute;lices transmembrana. Modelos moleculares de ambas topolog&iacute;as se utilizaron para desarrollar un complejo de homo-oligom&eacute;rico de dibujos animados como un canal con un di&aacute;metro de aproximadamente 50 A y sugieren que la topolog&iacute;a de doble h&eacute;lice transmembrana pudiera ser el cimiento para el canal de desplazamiento. Adem&aacute;s, experimentos in vivo Cross-linking de los mutantes Gly2Cys y Thr22Cys demostraron que Gly2, al principio de la h&eacute;lice transmembrana-1, se encuentra muy cerca con Gly2 de un vecino TatA, como Cys2 reticulado inmediatamente sobre la adici&oacute;n de cobre fenantrolina. Por otro lado, Cys22, en el otro extremo de la h&eacute;lice transmembrana, tuvo por lo menos 10 minutos para reticulaci&oacute;n, sugiriendo que un posible movimiento o reorientaci&oacute;n se requiere para traer este residuo en proximidad con una subunidad vecina de TatA.

La subunidad de TatA de Escherichia coli twin-arginina translocasa tiene una topolog&iacute;a de N-in.

The identification of protein interaction partners can often elucidate the function of the protein under investigation based on the "guilty by association" concept. Furthermore, the binding event between two proteins can be used as a functional assay when no such assay is available. Despite the large number of advanced techniques that are currently available for studying protein-protein interactions, far-Westerns or blot overlays are still very commonly used in the average laboratory setting due to their powerfulness. This is due to the simplicity and clarity in the results that they produce. Here, the details and mechanics of far-Westerns are discussed to help the reader choose amongst the different variations that exist depending on the question being investigated and the materials available to them. Some examples involving unique questions are also discussed in order to educate the reader on the versatility of far-Westerns. Finally, a troubleshooting section provides the reader with an understanding of the common problems that can be encountered and how these problems can be circumvented.

Investigating protein-protein interactions by far-Westerns.

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L&#39;identification des partenaires d&#39;interaction de prot&eacute;ine peut souvent &eacute;lucider la fonction de la prot&eacute;ine vis&eacute; par l&#39;enqu&ecirc;te, bas&eacute;e sur le concept de &laquo; coupables par association &raquo;. En outre, l&#39;&eacute;v&eacute;nement de liaison entre les deux prot&eacute;ines peut servir un test fonctionnel lorsque tel aucun test n&#39;est disponible. Malgr&eacute; le grand nombre de techniques avanc&eacute;es qui sont actuellement disponibles pour l&#39;&eacute;tude des interactions prot&eacute;ine-prot&eacute;ine, far-Westerns ou tache superpositions sont encore tr&egrave;s couramment utilis&eacute;es en laboratoire moyenne en raison de leur puissance. C&#39;est en raison de la simplicit&eacute; et la clart&eacute; dans les r&eacute;sultats qu&#39;elles produisent. Ici, les d&eacute;tails et la m&eacute;canique des far-Westerns est discut&eacute;e pour aider le lecteur &agrave; choisir parmi les diff&eacute;rentes variantes qui existent selon la question &agrave; l&#39;&eacute;tude et le mat&eacute;riel mis &agrave; leur disposition. Quelques exemples de questions uniques concernant sont &eacute;galement discut&eacute;s afin d&#39;informer le lecteur sur la polyvalence des far-Westerns. Enfin, une section de d&eacute;pannage fournit au lecteur une compr&eacute;hension des probl&egrave;mes communs que l&#39;on peut rencontrer et comment ces probl&egrave;mes peuvent &ecirc;tre contourn&eacute;s.

Enqu&ecirc;te sur les interactions prot&eacute;ine-prot&eacute;ine par far-Westerns.

Die Identifizierung der Protein-Interaktion-Partner kann oft die Funktion des Proteins untersucht, die basierend auf dem &quot;Schuldigen Association&quot; Konzept n&auml;her beleuchten. Dar&uuml;ber hinaus kann das Ereignis Bindung zwischen zwei Proteine als eine funktionelle Assay verwendet werden, wenn keine solche Probe zur Verf&uuml;gung steht. Trotz der gro&szlig;en Zahl von fortgeschrittenen Techniken, die derzeit verf&uuml;gbar f&uuml;r die Untersuchung von Protein-Protein Interaktionen, weit-Westerns oder Fleck sind sind &Uuml;berlagerungen noch sehr in der durchschnittlichen Labor-Einstellung aufgrund ihrer Leistungsst&auml;rke gebr&auml;uchlich. Dies ist aufgrund der Einfachheit und Klarheit in den Ergebnissen, die sie produzieren. Hier sind die Details und die Mechanik der weit-Western diskutiert, helfen den Leser, w&auml;hlen Sie unter den Varianten, die abh&auml;ngig von der Frage untersucht vorhanden sind und die ihnen zur Verf&uuml;gung stehenden Materialien. Einige Beispiele, bei denen eindeutige Fragen werden ebenfalls behandelt, um den Leser auf die Vielseitigkeit der weit-Western zu erziehen. Schlie&szlig;lich bietet der Abschnitt &quot;Fehlerbehebung&quot; den Leser das Verst&auml;ndnis der h&auml;ufigsten Probleme, die auftreten k&ouml;nnen und wie diese Probleme umgangen werden k&ouml;nnen.

Untersuchung von Protein-Protein Interaktionen von weit-Westerns.

L&#39;identificazione dei partner di interazione della proteina spesso pu&ograve; chiarire la funzione della proteina sotto indagine basata sul concetto di &quot;guilty by association&quot;. Inoltre, l&#39;evento di associazione tra due proteine pu&ograve; essere utilizzato come un test funzionale quando nessuna tale dosaggio &egrave; disponibile. Nonostante il gran numero di tecniche avanzate che sono attualmente disponibili per lo studio delle interazioni proteina-proteina, lontano-Western o macchia sovrapposizioni sono ancora molto usati nell&#39;impostazione del laboratorio media a causa della loro vuol. Ci&ograve; &egrave; dovuto alla semplicit&agrave; e chiarezza nei risultati che esse producono. Qui, i dettagli e la meccanica di lontano-Western &egrave; discussi per aiutare il lettore a scegliere tra le diverse varianti che esistono in funzione della domanda indagata e i materiali a loro disposizione. Alcuni esempi che coinvolgono uniche domande vengono anche discussi al fine di educare il lettore sulla versatilit&agrave; di lontano-Western. Infine, una sezione Risoluzione offre al lettore una comprensione dei problemi comuni che possono essere incontrate e come questi problemi possono essere aggirati.

Studiando le interazioni della proteina-proteina lontano Westerns.

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La identificaci&oacute;n de socios de interacci&oacute;n prote&iacute;na a menudo puede dilucidar la funci&oacute;n de la prote&iacute;na bajo investigaci&oacute;n basada en el concepto &quot;culpables por asociaci&oacute;n&quot;. Adem&aacute;s, el evento de enlace entre dos prote&iacute;nas puede utilizarse como un an&aacute;lisis funcional, cuando no hay tal ensayo est&aacute; disponible. A pesar de la gran cantidad de t&eacute;cnicas avanzadas que est&aacute;n actualmente disponibles para el estudio de las interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na, lejos-Westerns o mancha blanca /negra superposiciones son todav&iacute;a muy usadas en el entorno de laboratorio promedio debido a su potencia. Esto es debido a la simplicidad y la claridad en los resultados que ellos producen. Aqu&iacute;, los detalles y la mec&aacute;nica de pel&iacute;culas del lejano oeste se discute para ayudar al lector a elegir entre las distintas variaciones que existen seg&uacute;n la cuesti&oacute;n investigada y los materiales disponibles para ellos. Tambi&eacute;n se discuten algunos ejemplos que involucran preguntas &uacute;nicas con el fin de educar al lector en la versatilidad de pel&iacute;culas del lejano oeste. Finalmente, una secci&oacute;n de soluci&oacute;n de problemas ofrece al lector una comprensi&oacute;n de los problemas comunes que se encuentran y c&oacute;mo estos problemas pueden ser eludidos.

Investigando las interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na por lejos-Westerns.

&#x53CC;&#x4EBA;-&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; translocase (&#x8FBE;) &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7528;&#x4E8E;&#x9776;&#x5411;&#x548C;&#x79FB;&#x4F4D;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8DE8;&#x819C;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7EC6;&#x83CC;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x5305;&#x542B;&#x5176;&#x4FE1;&#x53F7;/&#x9886;&#x8896;&#x80BD;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&quot;&#x53CC;&#x4EBA;-&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&quot;(RR) &#x6BCD;&#x9898;&#x3002;&#x591A;&#x8FBE;&#x57FA;&#x677F;&#x6709;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x81EA;&#x5DF1;&#x79F0;&#x4E3A;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x6210;&#x719F;&#x86CB;&#x767D; (REMPs) &#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76; DmsD&#xFF0C;&#x4E3A;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#xFF0C;RR &#x5305;&#x542B;&#x9886;&#x8896;&#x80BD;&#x50AC;&#x5316;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x4E00;&#x8D77;&#x8D70;&#x5411;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x4E9A;&#x781C;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; REMP &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7528;&#x591A;&#x7BA1;&#x9F50;&#x4E0B;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x9488;&#x5BF9; DmsD &#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x6765;&#x5B9A;&#x4E49;&#x6B8B;&#x7559;&#x548C;&#x5BF9;&#x627F;&#x8BA4;&#x6027;&#x80BE;&#x9886;&#x5BFC;&#x4EBA;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x5730;&#x533A;&#x3002;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x901A;&#x8FC7;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x548C;&#x4E13;&#x9898;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; DmsD &#x6B8B;&#x7559;&#x53D8;&#x79CD;&#x88AB;&#x7EAF;&#x5316;&#x548C;&#x7B5B;&#x9009;&#x4E0E;&#x4F53;&#x5916;&#x6591;&#x70B9;&#x8FDC;&#x897F;&#x90E8;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5206;&#x6790;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E00;&#x8D77;&#x7684;&#x9886;&#x5BFC;&#x8005;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E5F;&#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x6210;&#x968F;&#x673A; DmsD &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x88AB;&#x5C4F;&#x853D;&#x4F53;&#x5185;&#x7EC6;&#x83CC;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x4E00;&#x5BB6;&#x94F6;&#x884C;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6DF7;&#x5408;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A; DmsD &#x53D8;&#x578B;&#x88AB;&#x5206;&#x4E3A;&#x4E09;&#x7EC4;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5176;&#x5EA6;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x4E0E;&#x6027;&#x80BE;&#x9886;&#x5BFC;&#x4EBA; &#xFF08;&#x65E0;&#x3001; &#x5F31;&#xFF0C;&#x548C;&#x6E29;&#x548C;&#xFF09; &#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x4ECE;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x5206;&#x6790;&#x6570;&#x636E;&#x7136;&#x540E;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E; DmsD &#x57FA;&#x4E8E;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x4F24;&#x5BD2;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x578B;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BF4;&#x660E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6027;&#x80BE;&#x9886;&#x8896;&#x80BD;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x91CD;&#x8981; DmsD &#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x7ACB;&#x573A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x91CD;&#x8981;&#x9886;&#x5BFC;&#x4EBA;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; DmsD &#x7ED3;&#x6784;&#x4E0A;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&quot;&#x70ED;&#x53E3;&#x888B;&quot;&#x3002;

&#x5BF9;&#x4E8E;&#x53CC;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x9886;&#x8896;&#x80BD;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x968F;&#x673A;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x5B9A;&#x5411;&#x8BF1;&#x53D8;&#x5B9A;&#x4E49; DmsD &#x4E2D;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

The twin-arginine translocase (Tat) system is used for the targeting and translocation of folded proteins across the cell membrane of most bacteria. Substrates of this system contain a conserved "twin-arginine" (RR) motif within their signal/leader peptide sequence. Many Tat substrates have their own system-specific chaperone called redox enzyme maturation proteins (REMPs). Here, we study the binding of DmsD, the REMP for dimethyl sulfoxide reductase in Escherichia coli, toward the RR-containing leader peptide of the catalytic subunit DmsA. We have used a multipronged approach targeted at the amino acid sequence of DmsD to define residues and regions important for recognition of the DmsA leader sequence. Residues identified through bioinformatics and THEMATICS analysis were mutated using site-directed mutagenesis. These DmsD residue variants were purified and screened with an in vitro dot-blot far-Western assay to analyze the binding to the DmsA leader sequence. Degenerative polymerase chain reaction was also used to produce a bank of random DmsD amino acid mutants, which were then screened by an in vivo bacterial two-hybrid assay. Using this hybrid method, each DmsD variant was classified into one of three groups based on their degree of interaction with the DmsA leader (none, weak, and moderate). The data from both the in vitro and in vivo analyses were then applied to a model structure of DmsD based on the crystal structure of the Salmonella typhimurium homologue. Our results illustrate the positions of important DmsD residues involved in binding the DmsA leader peptide and identify a "hot pocket" of residues important for leader binding on the structure of DmsD.

Identification of residues in DmsD for twin-arginine leader peptide binding, defined through random and bioinformatics-directed mutagenesis.

Le syst&egrave;me de double-arginine translocase (Tat) est utilis&eacute; pour le ciblage et la translocation des prot&eacute;ines repli&eacute;es &agrave; travers la membrane cellulaire de la plupart des bact&eacute;ries. Substrats de ce syst&egrave;me contient un motif de (RR) de &laquo; twin-arginine &raquo; conserv&eacute; dans leur s&eacute;quence de peptide signal/t&ecirc;te. De nombreux substrats Tat ont leur propre chaperon de syst&egrave;me sp&eacute;cifiques appel&eacute;e prot&eacute;ines de maturation enzyme oxydo-r&eacute;duction (REMPs). Ici, nous &eacute;tudions la liaison de DmsD, le REMP de r&eacute;ductase de sulfoxyde de dim&eacute;thyle dans Escherichia coli, vers le peptide de t&ecirc;te contenant du RR de la sous-unit&eacute; catalytique DmsA. Nous avons utilis&eacute; une approche multiforme, cibl&eacute;e la s&eacute;quence d&#39;acides amin&eacute;s DmsD pour d&eacute;finir les r&eacute;sidus et les r&eacute;gions importantes pour la reconnaissance de la s&eacute;quence de t&ecirc;te de DmsA. R&eacute;sidus identifi&eacute;s par le biais de bio-informatique et analyse des th&eacute;matiques ont &eacute;t&eacute; mut&eacute;s &agrave; l&#39;aide de mutagen&egrave;se dirig&eacute;e. Ces variantes de r&eacute;sidu de DmsD ont &eacute;t&eacute; purifi&eacute;es et projet&eacute;s avec un dosage d&#39;extr&ecirc;me ouest in vitro dot-blot pour analyser la liaison &agrave; la s&eacute;quence de t&ecirc;te de DmsA. PCR d&eacute;g&eacute;n&eacute;rative &eacute;tait &eacute;galement utilis&eacute; pour produire une banque de mutants d&#39;acides amin&eacute;s DmsD al&eacute;atoires, qui ont &eacute;t&eacute; ensuite projet&eacute; par un essai de deux-hybride bact&eacute;rien in vivo. En utilisant cette m&eacute;thode hybride, chaque variante de DmsD a &eacute;t&eacute; r&eacute;parti en trois groupes selon leur degr&eacute; d&#39;interaction avec le leader de DmsA (aucun, faible et mod&eacute;r&eacute;e). Les donn&eacute;es des deux analyses in vitro et in vivo ont ensuite &eacute;t&eacute; appliqu&eacute;es &agrave; un mod&egrave;le de structure de DmsD bas&eacute; sur la structure cristalline de l&#39;homologue de Salmonella typhimurium. Nos r&eacute;sultats illustrent les positions des r&eacute;sidus de DmsD importants impliqu&eacute;s dans la liaison peptide leader DmsA et identifient une &laquo; poche de chaude &raquo; de r&eacute;sidus importants pour la liaison de chef de file sur la structure des DmsD.

Identification des r&eacute;sidus en DmsD pour la liaison de peptide jumeaux-arginine chef, d&eacute;fini par mutagen&egrave;se al&eacute;atoire et ax&eacute;es sur la bio-informatique.

Das Zweibettzimmer-Arginin-Translokase (Tat)-System dient f&uuml;r die Zielgruppenadressierung und Translokation gefaltete Proteine in der Zellmembran von den meisten Bakterien. Substrate dieses Systems enthalten konservierte &quot;Twin-Arginin&quot; (RR) Motiv innerhalb ihrer Signal/F&uuml;hrer-Peptid-Sequenz. Viele Tat Substrate haben ihre eigenen systemspezifische Anstandsdame Redox Enzym Reifung Proteine (REMPs) genannt. Hier untersuchen wir die Bindung des DmsD, REMP f&uuml;r Dimethyl Sulfoxid Reductase in Escherichia coli, in Richtung der RR-haltigen F&uuml;hrer-Peptid von die katalytische Untereinheit DmsA. Wir haben einen diversifizierten Ansatz, der gezielt auf die Aminos&auml;ure-Sequenz des DmsD verwendet, um R&uuml;ckst&auml;nde und Regionen wichtig f&uuml;r die Anerkennung der DmsA-F&uuml;hrer-Sequenz zu definieren. R&uuml;ckst&auml;nde &uuml;ber Bioinformatik und thematische Analyse identifiziert wurden mithilfe von Site-verwiesene Mutagenese mutiert. Diese DmsD R&uuml;ckstand Varianten wurden gereinigt und abgeschirmt mit ein in-vitro-Dot-Blot-weit-Western-Assay, die Bindung an die DmsA-F&uuml;hrer-Sequenz zu analysieren. Degenerativen Polymerase-Kettenreaktion wurde auch verwendet, um eine Bank von zuf&auml;lligen DmsD Aminos&auml;ure Mutanten, zu produzieren, die dann durch ein in-vivo bakterielle-zwei-Hybrid-Assay gezeigt wurden. Mit dieser Hybridmethode wurde jede DmsD-Variante in eine der drei Gruppen basierend auf ihren Grad der Interaktion mit dem DmsA-F&uuml;hrer (none, schwach und moderate) klassifiziert. Die Daten aus den in-vitro und in vivo Analysen wurden dann auf ein Modellstruktur des DmsD basierend auf die Kristallstruktur von der Salmonella Typhimurium Homolog angewendet. Unsere Ergebnisse zeigen die Positionen der wichtigen DmsD R&uuml;ckst&auml;nde binden das DmsA-F&uuml;hrer-Peptid beteiligt und eine &quot;hei&szlig;e Tasche&quot; von R&uuml;ckst&auml;nden, die wichtig f&uuml;r die Bindung der F&uuml;hrer &uuml;ber die Struktur der DmsD zu identifizieren.

Ermittlung von R&uuml;ckst&auml;nden in DmsD f&uuml;r Twin-Arginin F&uuml;hrer Peptid-Bindung definiert durch zuf&auml;llige und Bioinformatik-verwiesene Mutagenese.

Il sistema twin-arginina traslocasi (Tat) &egrave; utilizzato per il targeting e la traslocazione di proteine piegate attraverso la membrana cellulare della maggior parte dei batteri. Substrati di questo sistema contengono un motivo di (RR) &quot;twin-arginina&quot; conservato all&#39;interno della loro sequenza del peptide segnale e responsabile. Molti substrati Tat hanno le proprie specifiche del sistema chaperone chiamato proteine di maturazione enzima redox (REMPs). Qui, studiamo l&#39;associazione di DmsD, la REMP per reduttasi solfossido dimetilico in Escherichia coli, verso il peptide leader RR-contenente della subunit&agrave; catalitica DmsA. Abbiamo usato un approccio diversificato mirato alla sequenza dell&#39;amminoacido di DmsD per definire i residui e le regioni importanti per il riconoscimento della sequenza leader DmsA. Residui identificati attraverso analisi tematiche e Bioinformatica sono stati mutati mediante mutagenesi luogo-diretta. Queste varianti del residuo di DmsD sono state purificate e proiettate con un dosaggio di estremo occidentale in vitro dot-blot per analizzare l&#39;associazione alla sequenza leader DmsA. Reazione a catena della polimerasi degenerativa &egrave; stato utilizzato anche per produrre una banca di casuale DmsD amminoacido mutanti, che poi sono stati proiettati da un test in vivo di due-ibrido batterico. Utilizzando questo metodo ibrido, ogni variante di DmsD &egrave; stato classificato in uno dei tre gruppi basati sul loro grado di interazione con il leader di DmsA (nessuno, debole e moderata). I dati dalle analisi in vitro e in vivo sono stati poi applicati a una struttura di modello di DmsD sulla base della struttura di cristallo dell&#39;omologo di Salmonella typhimurium. I nostri risultati illustrano le posizioni di importanti DmsD residui coinvolti nell&#39;associazione del peptide leader DmsA e identificano una tasca&quot;calda&quot; di residui importanti per l&#39;associazione leader sulla struttura del DmsD.

Identificazione dei residui in DmsD per l&#39;associazione di peptide leader twin-arginina, definito attraverso mutagenesi casuale e diretto di bioinformatica.

&#x30C4;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; translocase (Tat &#x306E;) &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x8EE2;&#x6D41;&#x6298;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x4E0A;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x306B;&#x306F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x300C;&#x30C4;&#x30A4;&#x30F3;-&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x300D;(RR) &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x305D;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;/&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x5185;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E; Tat &#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x6210;&#x719F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (REMPs) &#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x72EC;&#x81EA;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x56FA;&#x6709;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DmsD&#x3001;&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x306E; RR &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; DmsA &#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x306E; REMP &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3068;&#x8A8D;&#x8B58; DmsA &#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B; DmsD &#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3067;&#x591A;&#x9762;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068; THEMATICS &#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x6B8B;&#x7559;&#x3057;&#x305F;&#x5909;&#x7570;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6307;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; DmsD &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057; DmsA &#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B; in vitro &#x30C9;&#x30C3;&#x30C8; &#x30FB; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x9060;&#x3044;&#x897F;&#x90E8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x4E0A;&#x6620;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;in vivo &#x3067;&#x7D30;&#x83CC; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x8A66;&#x91D1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E0A;&#x6620;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0; DmsD &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x9280;&#x884C;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5404; DmsD &#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8; DmsA &#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC; (&#x306A;&#x3057;&#x3001;&#x5F31;&#x3044;&#x3068;&#x9069;&#x5EA6;&#x306A;) &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x5206;&#x985E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;In vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9; &#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30C1;&#x30D5;&#x30B9;&#x83CC;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F; DmsD &#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; DmsA &#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A; DmsD &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x4F8B;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; DmsD &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x4E0A;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x300C;&#x30DB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x300D;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

DmsD &#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x76E3;&#x7763;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x30C4;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; &#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;

&#xD2B8;&#xC708;-&#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; translocase (Tat) &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;&#xACFC; &#xC811;&#xD78C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC804; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAE30;&#xD310;&#xC740; &#xC2E0;&#xD638;/&#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC21C;&#xC11C; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &quot;&#xD2B8;&#xC708;-&#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC;&quot; (RR) &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568;. &#xB9CE;&#xC740; &#xBB38;&#xC2E0; &#xAE30;&#xD310; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC131;&#xC219; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (REMPs) &#xB77C;&#xB294; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAD00;&#xB828; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xB294;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; DmsD, &#xB514; &#xBA54; &#xD2F8; sulfoxide reductase&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; DmsA RR&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC9C0;&#xC2DC;&#xC120; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; REMP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5F0;&#xAD6C;. &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBC0F; DmsA &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC601;&#xC5ED; &#xC815;&#xC758;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; Dmsd&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; multipronged &#xC811;&#xADFC; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559; &#xBC0F; THEMATICS &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD588;&#xB2E4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xB41C; mutagenesis&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; DmsD &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30; &#xBCC0;&#xD615; &#xC815;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; DmsA &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xCCB4; &#xC678; &#xC810; &#xC624; &#xC810; &#xBA40;&#xB9AC; &#xC11C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xC0C1;&#xC601; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; &#xB610;&#xD55C; &#xC784;&#xC758;&#xC758; DmsD &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xADE0; 2 &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC0C1;&#xC601; &#xD588;&#xB2E4; &#xC740;&#xD589;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC01; DmsD &#xBCC0;&#xC885; (&#xC5C6;&#xC74C;, &#xC57D;&#xD558;&#xACE0; &#xC628;&#xAC74;&#xD55C;) DmsA &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC815;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC138; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xB958; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; DmsD &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; &#xD2F0; homologue&#xC758; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB378; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; DmsA &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; DmsD &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; DmsD &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &quot;&#xD56B; &#xD3EC;&#xCF13;&quot;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD2B8;&#xC708;-&#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;, &#xC784;&#xC758; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559; &#xAC10;&#xB3C5; mutagenesis &#xD1B5;&#xD574; &#xC815;&#xC758; Dmsd&#xC5D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

El sistema de doble-arginina translocasa (Tat) se utiliza para el targeting y translocaci&oacute;n de prote&iacute;nas dobladas a trav&eacute;s de la membrana celular de la mayor&iacute;a de las bacterias. Sustratos de este sistema contienen una conservada &quot;twin-arginina&quot; (RR) dentro de la secuencia del p&eacute;ptido se&ntilde;al/l&iacute;der. Muchos sustratos Tat tienen su propio acompa&ntilde;ante espec&iacute;ficos del sistema llamado las prote&iacute;nas redox enzima maduraci&oacute;n (REMPs). Aqu&iacute;, estudiamos el atascamiento de DmsD, el REMP para reductasa de dimetil sulf&oacute;xido en Escherichia coli, hacia el p&eacute;ptido l&iacute;der que contienen RR de la subunidad catal&iacute;tica DmsA. Hemos utilizado un enfoque m&uacute;ltiple dirigido a la secuencia de amino&aacute;cidos de DmsD para definir regiones importantes para el reconocimiento de la secuencia de l&iacute;der de DmsA y residuos. Residuos identificados a trav&eacute;s de la bioinform&aacute;tica y an&aacute;lisis de tem&aacute;ticas fueron transformados mediante mutag&eacute;nesis sitio-dirigida. Estas variantes de residuo DmsD fueron purificadas y defendidas con un ensayo de lejos-Western de dot-blot in vitro para analizar el enlace a la secuencia de l&iacute;der de DmsA. Reacci&oacute;n en cadena de polimerasa degenerativa tambi&eacute;n fue utilizada para producir un banco de mutantes de amino&aacute;cido al azar DmsD, que luego fueron defendidos por un ensayo in vivo de dos-h&iacute;brido bacteriano. Usando este m&eacute;todo h&iacute;brido, cada variante DmsD fue clasificado en tres grupos seg&uacute;n su grado de interacci&oacute;n con el l&iacute;der de DmsA (ninguno, d&eacute;bil y moderada). Los datos de ambos los an&aacute;lisis in vitro e in vivo se aplicaron luego a una estructura de modelo del DmsD basado en la estructura cristalina del hom&oacute;logo de Salmonella typhimurium. Nuestros resultados ilustran las posiciones de residuos DmsD importantes involucrados en vinculante el p&eacute;ptido l&iacute;der de DmsA e identifican un &quot;bolsillo caliente&quot; de residuos importantes para el enlace de l&iacute;der en la estructura del DmsD.

Identificaci&oacute;n de residuos en DmsD para enlace de p&eacute;ptido doble-arginina l&iacute;der, definido mediante mutag&eacute;nesis al azar y bioinform&aacute;tica-dirigido.

&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x662F;&#x6CE5;&#x6CDE;&#x805A;&#x5408;&#x7684;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53EF;&#x80FD;&#x8D1F;&#x8D23;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8BB8;&#x591A;&#x6162;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x4E34;&#x5E8A;&#x548C;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x6C61;&#x67D3;&#x3002;&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x662F;&#x6D41;&#x884C;&#x533B;&#x9662;&#x75C5;&#x539F;&#xFF0C;&#x662F;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x7684;&#x662F;&#x987D;&#x6297;&#x5230;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6297;&#x83CC;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x7A97;&#x4F53;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x5236;&#x8BA2;&#x4E00;&#x79CD;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7EC4;&#x5408;&#x6297;&#x83CC;&#x5242;&#x5BF9;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x90A3;&#x4E9B;&#x7531;&#x7EFF;&#x8113;&#x5F62;&#x6210;&#x534F;&#x540C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x67E5;&#x627E;&#x66F4;&#x6539;&#x5404;&#x79CD;&#x6740;&#x83CC;&#x5242;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x65F6;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4EE3;&#x7406;&#x7ED3;&#x5408;&#x4E86;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x6807;&#x8BC6; Cu(2+) &#x534F;&#x540C;&#x914D;&#x5408;&#x7684;&#x5B63;&#x94F5;&#x76D0;&#x5316;&#x5408;&#x7269; (&#x5B63;&#x94F5;&#x76D0;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x80FD; &#xFF1B; &#x5177;&#x4F53;&#x6C2F;&#x94F5;&#x3001; cetalkonium &#x6C2F;&#x3001; &#x6C2F;&#x5316;&#x5341;&#x516D;&#x70F7;&#x57FA;&#x5421;&#x5576;&#x3001; myristalkonium &#x6C2F;&#x548C; Polycide&#xFF09; &#x8981;&#x6740;&#x7EFF;&#x8113;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x3002;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5C06; Cu(2+) &#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x5B63;&#x94F5;&#x76D0;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x7684;&#x6700;&#x4F4E;&#x6740;&#x83CC;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4E3A;&#x5355;&#x836F;&#x6CBB;&#x7597;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x8DCC;&#x5E45;&#x4E3A; 128-fold&#x3002;&#x5728;&#x7EC4;&#x5408;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4EE3;&#x7406;&#x4FDD;&#x7559;&#x8FD8;&#x6839;&#x9664;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x3001; &#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x3001; &#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x529B;&#x94A9;&#x7AEF;&#x87BA;&#x65CB;&#x4F53; Cholerasuis &#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x7684;&#x5E7F;&#x8C31;&#x6297;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x5236;&#x3001; &#x7B49;&#x6E29;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x91CF;&#x70ED;&#x7528;&#x4E8E;&#x663E;&#x793A; Cu(2+) &#x548C;&#x5B63;&#x94F5;&#x76D0;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x80FD;&#x4E0D;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4EE3;&#x7406;&#x65BD;&#x52A0;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x6BD2;&#x6027;&#x901A;&#x8FC7;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x8DEF;&#x7EBF;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Cu(2+) &#x548C;&#x5B63;&#x94F5;&#x76D0;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x80FD;&#x5355;&#x72EC;&#x548C;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x785D;&#x9178;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#xFF0C;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Cu(2+) &#x548C;&#x5B63;&#x94F5;&#x76D0;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x80FD;&#x662F;&#x53EF;&#x80FD;&#x7528;&#x6765;&#x6740;&#x6B7B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x7684;&#x6297;&#x83CC;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;

&#x94DC;&#x548C;&#x5B63;&#x94F5;&#x76D0;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x65BD;&#x52A0;&#x5BF9;&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x7684;&#x534F;&#x540C;&#x6740;&#x83CC;&#x548C; antibiofilm &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

Biofilms are slimy aggregates of microbes that are likely responsible for many chronic infections as well as for contamination of clinical and industrial environments. Pseudomonas aeruginosa is a prevalent hospital pathogen that is well known for its ability to form biofilms that are recalcitrant to many different antimicrobial treatments. We have devised a high-throughput method for testing combinations of antimicrobials for synergistic activity against biofilms, including those formed by P. aeruginosa. This approach was used to look for changes in biofilm susceptibility to various biocides when these agents were combined with metal ions. This process identified that Cu(2+) works synergistically with quaternary ammonium compounds (QACs; specifically benzalkonium chloride, cetalkonium chloride, cetylpyridinium chloride, myristalkonium chloride, and Polycide) to kill P. aeruginosa biofilms. In some cases, adding Cu(2+) to QACs resulted in a 128-fold decrease in the biofilm minimum bactericidal concentration compared to that for single-agent treatments. In combination, these agents retained broad-spectrum antimicrobial activity that also eradicated biofilms of Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella enterica serovar Cholerasuis, and Pseudomonas fluorescens. To investigate the mechanism of action, isothermal titration calorimetry was used to show that Cu(2+) and QACs do not interact in aqueous solutions, suggesting that each agent exerts microbiological toxicity through independent biochemical routes. Additionally, Cu(2+) and QACs, both alone and in combination, reduced the activity of nitrate reductases, which are enzymes that are important for normal biofilm growth. Collectively, the results of this study indicate that Cu(2+) and QACs are effective combinations of antimicrobials that may be used to kill bacterial biofilms.

Copper and quaternary ammonium cations exert synergistic bactericidal and antibiofilm activity against Pseudomonas aeruginosa.

Les biofilms sont des agr&eacute;gats visqueuses de microbes qui sont susceptibles de responsable de nombreuses infections chroniques aussi bien en ce qui concerne la contamination des milieux cliniques et industriels. Pseudomonas aeruginosa est un pathog&egrave;ne de l&#39;h&ocirc;pital r&eacute;pandu qui est bien connu pour sa capacit&eacute; &agrave; forme biofilms qui sont r&eacute;calcitrantes &agrave; beaucoup de diff&eacute;rents traitements antimicrobiens. Nous avons mis au point une m&eacute;thode de haut-d&eacute;bit pour les essais des combinaisons d&#39;antimicrobiens &agrave; activit&eacute; synergique contre les biofilms, y compris ceux qui sont form&eacute;s par P. aeruginosa. Cette approche a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour chercher des changements dans la susceptibilit&eacute; de biofilm &agrave; divers biocides lorsque ces agents ont &eacute;t&eacute; combin&eacute;s avec des ions m&eacute;talliques. Ce processus a identifi&eacute; que Cu(2+) fonctionne en synergie avec les compos&eacute;s d&#39;ammonium quaternaire (QACs ; sp&eacute;cifiquement le chlorure de benzalkonium, chlorure de c&eacute;talkonium Chlorure de c&eacute;tylpyridinium, chlorure de myristalkonium et Polycide) pour tuer les biofilms P. aeruginosa. Dans certains cas, l&#39;ajout de Cu(2+) &agrave; QACs a entra&icirc;n&eacute; une diminution de 128-fold dans la concentration minimale bact&eacute;ricide de biofilm par rapport &agrave; celle pour les traitements de la monoth&eacute;rapie. En combinaison, ces agents a conserv&eacute; une activit&eacute; antimicrobienne &agrave; large spectre qui aussi &eacute;radiqu&eacute; les biofilms de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella enterica serovar Cholerasuis et Pseudomonas fluorescens. Pour &eacute;tudier le m&eacute;canisme d&#39;action, calorim&eacute;trie isotherme titration a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour montrer que Cu(2+) et QACs n&#39;interagissent pas en solution aqueuse, ce qui sugg&egrave;re que chaque agent exerce une toxicit&eacute; microbiologique par des voies biochimiques ind&eacute;pendants. En outre, Cu(2+) et QACs, seuls ou en combinaison, r&eacute;duit l&#39;activit&eacute; des r&eacute;ductases de nitrate, qui sont des enzymes qui sont importants pour la croissance normale de biofilm. Collectivement, les r&eacute;sultats de cette &eacute;tude indiquent que les Cu(2+) et QACs sont des combinaisons d&#39;agents antimicrobiens qui peuvent &ecirc;tre utilis&eacute;s pour tuer les biofilms bact&eacute;riens.

Cuivre et les cations ammonium quaternaire exercent une activit&eacute; bact&eacute;ricide et antibiofilm synergique contre Pseudomonas aeruginosa.

Biofilme sind schleimig Aggregate von Mikroben, die wahrscheinlich sind verantwortlich f&uuml;r viele chronische Infektionen als auch f&uuml;r die Kontamination von klinischen und industriellen Umgebungen. Pseudomonas Aeruginosa ist eine weit verbreitete Krankenhaus-Erreger, das bekannt f&uuml;r seine F&auml;higkeit, Form Biofilme ist, die widerspenstigen zu vielen anderen antimikrobiellen Therapien sind. Wir haben geplant, eine Hochdurchsatz-Methode zum Testen von Kombinationen von Antibiotika f&uuml;r synergistische Wirkung gegen Biofilme, einschlie&szlig;lich der durch p. Aeruginosa gebildet. Dieser Ansatz wurde verwendet, um &Auml;nderungen im Biofilm Anf&auml;lligkeit f&uuml;r verschiedene Biozide suchen, wenn diese Agenten mit Metallionen kombiniert wurden. Dabei festgestellt, dass Cu(2+) synergistisch mit Quatern&auml;re Ammoniumverbindungen arbeitet (QATs; speziell Benzalkoniumchlorid, Cetalkonium-Chlorid, Cetylpyridiniumchlorid Chlorid, Myristalkonium-Chlorid und Polycide), p. Aeruginosa Biofilme zu t&ouml;ten. In einigen F&auml;llen f&uuml;hrte zu einem 128-fold R&uuml;ckgang der Biofilm minimale bakterizide Konzentration im Vergleich zu Single-Agent-Behandlungen QATs Cu(2+) hinzuf&uuml;gen. In Kombination behielt diese Agenten Breitspektrum antimikrobielle Aktivit&auml;t, die auch Biofilme von Escherichia coli, Staphylococcus Aureus und Salmonella Enterica Serovar Cholerasuis Pseudomonas Fluorescens ausgerottet. Um den Wirkmechanismus zu untersuchen, wurde Isothermischer Titrierung Kalorimetrie verwendet, zu zeigen, dass Cu(2+) und QATs nicht in w&auml;ssrigen L&ouml;sungen interagieren, was darauf hindeutet, dass jeder Agent mikrobiologische Toxizit&auml;t durch unabh&auml;ngige biochemische Routen &uuml;bt. Dar&uuml;ber hinaus verringert Cu(2+) und QATs, sowohl allein als auch in Kombination, die Aktivit&auml;t von Nitrat Reductases, die Enzyme, die f&uuml;r normale Biofilm Wachstum wichtig sind. Zusammenfassend deuten die Ergebnisse dieser Studie, dass Cu(2+) und QATs effektive Kombinationen von Antibiotika, die verwendet werden kann sind, um bakterielle Biofilme zu t&ouml;ten.

Kupfer und Quatern&auml;re Ammonium kationen aus&uuml;ben synergistische bakterizide und Antibiofilm Wirkung gegen Pseudomonas Aeruginosa.

Biofilm sono aggregati viscidi di microbi che sono probabilmente responsabili di molte infezioni croniche come pure per quanto riguarda la contaminazione di ambienti industriali e clinici. Pseudomonas aeruginosa &egrave; un patogeno prevalente ospedale che &egrave; ben noto per la sua capacit&agrave; di biofilm di forma che sono recalcitranti a molti differenti trattamenti antimicrobici. Noi abbiamo messo a punto un metodo di alto-rendimento per test di combinazioni di farmaci antimicrobici per attivit&agrave; sinergica contro il biofilm, comprese quelle formate da p. aeruginosa. Questo approccio &egrave; stato utilizzato per cercare cambiamenti nel biofilm suscettibilit&agrave; ai vari biocidi quando questi agenti sono stati combinati con ioni metallici. Questo processo identificato che Cu(2+) lavora in sinergia con composti di ammonio quaternario (QAC; in particolare cloruro di benzalconio, Cetalconio cloruro, cloruro di cetilpiridinio, myristalkonium cloruro e Saliciuro) per uccidere i biofilm di p. aeruginosa. In alcuni casi, aggiunta di Cu(2+) a QAC ha provocato una 128-fold diminuzione il biofilm minima battericida concentrazione rispetto a quella per i trattamenti di singolo agente. In combinazione, questi agenti mantenuto attivit&agrave; antimicrobica ad ampio spettro che sradicato anche biofilm di Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella enterica sierotipo Cholerasuis e Pseudomonas fluorescens. Per studiare il meccanismo d&#39;azione, calorimetria isotermica di titolazione &egrave; stato usato per mostrare che Cu(2+) e QAC non interagiscono in soluzioni acquose, suggerendo che ogni agente esercita microbiologiche tossicit&agrave; attraverso vie biochimiche indipendente. Inoltre, Cu(2+) e QAC, sia da sola che in combinazione, ridotta l&#39;attivit&agrave; del reductases del nitrato, che sono enzimi che sono importanti per la crescita di biofilm normale. Collettivamente, i risultati di questo studio indicano che Cu(2+) e QAC sono efficaci combinazioni di antimicrobici che possono essere utilizzati per uccidere i biofilm batterici.

Rame e cationi ammonio quaternario esercitare una sinergica attivit&agrave; battericida e antibiofilm contro Pseudomonas aeruginosa.

&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306F;&#x306C;&#x308B;&#x306C;&#x308B;&#x96C6;&#x8A08;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7523;&#x696D;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x6C5A;&#x67D3;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6162;&#x6027;&#x7684;&#x306A;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3092;&#x62C5;&#x5F53;&#x3002;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x529B;&#x306B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6297;&#x83CC;&#x85AC;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x53CD;&#x6297;&#x7684;&#x306A;&#x3044;&#x308B;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; &#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x3067;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6D41;&#x884C;&#x306E;&#x75C5;&#x9662;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6297;&#x83CC;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x542B;&#x3081;&#x3066;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x3001;&#x76F8;&#x4E57;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5264;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8003;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x6BBA;&#x751F;&#x7269;&#x5264;&#x306E;&#x691C;&#x7D22;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7D1A;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x76F8;&#x4E57;&#x7684; Cu(2+) &#x3092;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x8B58;&#x5225; (&#x9006;&#x6027;&#x77F3;&#x9E78;; &#x7279;&#x306B;&#x5869;&#x5316;&#x30D9;&#x30F3;&#x30B6;&#x30EB;&#x30B3; &#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;&#x30BB;&#x30BF;&#x30EB;&#x30B3;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x30AF;&#x30ED;&#x30EA;&#x30C9;&#x3001;&#x5869;&#x5316;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8; &#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;myristalkonium &#x5869;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C9;) &#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Cu(2+) &#x9006;&#x6027;&#x77F3;&#x9E78;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0; 128-fold &#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x6700;&#x5C0F;&#x6BBA;&#x83CC;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x5358;&#x5264;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3001;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC;&#x3001;&#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9; flit Cholerasuis&#x3001;&#x30B7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9; &#x30FB; &#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30EC;&#x30C3; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x3092;&#x6839;&#x7D76;&#x5E83;&#x57DF;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x6297;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7B49;&#x6E29;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x578B;&#x71B1;&#x91CF;&#x8A08;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;Cu(2+) &#x3068;&#x9006;&#x6027;&#x77F3;&#x9E78;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5404;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x793A;&#x5506;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Cu(2+) &#x3068;&#x9006;&#x6027;&#x77F3;&#x9E78;&#x3001;&#x5358;&#x72EC;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x9006;&#x6027;&#x77F3;&#x9E78; Cu(2+) &#x304C;&#x7D30;&#x83CC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x6297;&#x83CC;&#x85AC;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;

&#x9285;&#x3068;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7D1A;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0; &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x306E;&#x76F8;&#x4E57;&#x6BBA;&#x83CC;&#x304A;&#x3088;&#x3073; antibiofilm &#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Biofilms&#xB294; &#xCE59;&#xCE59;&#xD55C; &#xC9D1;&#xACC4; &#xB41C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xC0B0;&#xC5C5; &#xD658;&#xACBD; &#xC624;&#xC5FC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB9CC;&#xC131; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB2F4;&#xB2F9;. &#xB179; &#xB18D; &#xADE0; &#xC591;&#xC2DD; biofilms&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xD56D;&#xADE0; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC798; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xB110;&#xB9AC; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; biofilms, P. &#xB18D; &#xADE0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; antimicrobials&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xACE0;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xB294; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628;&#xACFC; &#xACB0;&#xD569; &#xB418;&#xC5C8;&#xC744; &#xB54C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xADE0;&#xC5D0; biofilm &#xC790;&#xD654; &#xC728;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xB294;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC2DD;&#xBCC4; Cu(2+) synergistically &#xBE44;&#xBC00;&#xC774; &#xC554;&#xBAA8;&#xB284; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xACFC; &#xC791;&#xB3D9; (QACs; &#xD2B9;&#xD788; benzalkonium &#xC5FC;&#xD654; &#xBB3C;, cetalkonium &#xC5FC;&#xD654;, cetylpyridinium &#xC5FC;&#xD654; &#xBB3C;, myristalkonium &#xC5FC;&#xD654; &#xBB3C;, &#xBC0F; Polycide) P. &#xB18D; &#xADE0; biofilms&#xC744; &#xC8FD; &#xC77C;. &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; biofilm &#xCD5C;&#xC18C; &#xC0B4; &#xADE0; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; 128-fold &#xAC10;&#xC18C; &#xACB0;&#xACFC; Qacs&#xB97C; cu(2+)&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00;. &#xC870;&#xD569;,&#xC774; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xD56D;&#xADE0; &#xD65C;&#xB3D9; &#xB610;&#xD55C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;, &#xD669;&#xC0C9; &#xD3EC;&#xB3C4;&#xC0C1;&#xAD6C;&#xADE0;, &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; enterica serovar Cholerasuis, &#xBC0F; &#xB179; fluorescens biofilms &#xBC15;&#xBA78; &#xC720;&#xC9C0;. &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;, &#xB4F1;&#xC628; &#xC801;&#xC815; &#xC5F4; &#xB7C9; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; Cu(2+) &#xBC0F; QACs &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xBA70; &#xC218;&#xC131; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xAC01; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xC801;&#xC778; &#xACBD;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Cu(2+) &#xBC0F; QACs, &#xD63C;&#xC790;&#xC640; &#xACB0;&#xD569;, &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; biofilm &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; reductases&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C;. &#xC9D1;&#xB2E8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;,&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; Cu(2+) &#xBC0F; Qacs&#xB294; &#xC138;&#xADE0; biofilms &#xC8FD; &#xC77C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; antimicrobials&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAD6C;&#xB9AC;&#xC640; 4 &#xAE09; &#xC554;&#xBAA8;&#xB284; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xB179; &#xB18D; &#xADE0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0B4; &#xADE0; &#xBC0F; antibiofilm &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBC1C;&#xD718;.

Biofilms son agregados babosas de microbios que probablemente responsable de muchas infecciones cr&oacute;nicas, as&iacute; como la contaminaci&oacute;n de ambientes cl&iacute;nicos e industriales. Pseudomonas aeruginosa es un pat&oacute;geno prevalente del hospital que es bien conocido por su capacidad de biopel&iacute;culas de forma que son recalcitrantes a muchos diferentes tratamientos antimicrobianos. Hemos ideado un m&eacute;todo de alto rendimiento para probar combinaciones de antimicrobianos para actividad sin&eacute;rgica contra biofilms, los formados por p. aeruginosa incluidos. Este enfoque se utiliz&oacute; para buscar cambios en biofilm susceptibilidad a diversos biocidas cuando estos agentes fueron combinados con iones met&aacute;licos. Este proceso identificado que Cu(2+) funciona sin&eacute;rgicamente con compuestos de amonio cuaternario (QACs; espec&iacute;ficamente cloruro de benzalconio, cloruro de Cetalconio, cloruro de Cetilpiridinio, cloruro de myristalkonium y Polycide) a p. aeruginosa biofilms. En algunos casos, a&ntilde;adir Cu(2+) a QACs produjo una 128-fold disminuci&oacute;n en la concentraci&oacute;n bactericida m&iacute;nima de biofilm en comparaci&oacute;n con tratamientos de agente &uacute;nico. En combinaci&oacute;n, estos agentes retuvo la actividad antimicrobiana de amplio espectro que tambi&eacute;n erradicaron biofilms de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella enterica serovar Cholerasuis y Pseudomonas fluorescens. Para investigar el mecanismo de acci&oacute;n, calorimetr&iacute;a isoterma de titulaci&oacute;n sirvi&oacute; para mostrar que Cu(2+) y QACs no interact&uacute;an en soluciones acuosas, sugiriendo que cada agente ejerce microbiol&oacute;gica toxicidad a trav&eacute;s de rutas bioqu&iacute;micas independientes. Adem&aacute;s, Cu(2+) y QACs, solos y en combinaci&oacute;n, reducen la actividad de las reductasas de nitrato, que son enzimas que son importantes para el crecimiento normal de la biopel&iacute;cula. Colectivamente, los resultados de este estudio indican que Cu(2+) y QACs son efectivas combinaciones de antimicrobianos que pueden utilizarse para matar biofilms de bacterias.

Cobre y cationes de amonio cuaternario ejercen actividad bactericida y antibiofilm sin&eacute;rgica contra Pseudomonas aeruginosa.

El sistema de doble-arginina translocasa (Tat) es utilizado por muchas bacterias para mover las prote&iacute;nas a trav&eacute;s de la membrana citoplasm&aacute;tica. TAT sustratos son desinflados y contienen una conservada SRRxFLK twin-arginina (RR) en sus t&eacute;rminos de N. Muchos sustratos de Tat en Escherichia coli son cofactor que contienen enzimas redox que tienen acompa&ntilde;antes espec&iacute;ficos llaman redox prote&iacute;nas enzim&aacute;ticas de maduraci&oacute;n (REMPs). Aqu&iacute; caracterizamos las interacciones entre 10 REMPs y 15 p&eacute;ptidos RR de subunidades de enzima de redox de Tat-espec&iacute;fica de conocidos y previstos. Una combinaci&oacute;n de experimentos in vitro e in vivo demostraron que algunos REMPs eran espec&iacute;ficos de un enzyme(s) redox de funci&oacute;n similar, mientras que otros eran menos p&eacute;ptidos espec&iacute;ficos y consolidados de enzimas sin relaci&oacute;n. Resultados de Biacore resonancia de plasm&oacute;n superficial (SPR) y bacterianos h&iacute;brido dos experimentos identifican interacciones adem&aacute;s de las que se encuentran en experimentos de lejos-occidental, lo que sugiere que la libertad conformacional y/o otros factores celulares pueden ser necesarios. Por otra parte, nos muestran que la interacci&oacute;n de los dos previene tanto de datos en vivo y cin&eacute;ticas de Mostrar SPR hasta 10 veces-un enlace al sustrato RR esperado proteolytically degrad&aacute;ndose cuando exist&iacute;an m&uacute;ltiples socios de la Uni&oacute;n. Usando secuencias de larga duraci&oacute;n de las prote&iacute;nas RR las investigaciones demostraron que la porci&oacute;n madura para algunas subunidades de la enzima de redox se requiere para la detecci&oacute;n de las interacciones. Alineaciones de la secuencia entre los REMPs y RR p&eacute;ptidos indicaron que homolog&iacute;a entre los REMPs y las regiones hidrof&oacute;bicas siguiendo los motivos de la RR en los correlatos de p&eacute;ptidos a Cruz-reconocimiento.

Diferenciales interacciones espec&iacute;ficas Tat redox enzima p&eacute;ptidos y sus acompa&ntilde;antes.

&#x53CC;&#x4EBA;-&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; translocase (&#x8FBE;) &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7531;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7528;&#x4E8E;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x8FBE;&#x886C;&#x5E95; prefolded&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x5305;&#x542B;&#x5728;&#x5176; N &#x603B;&#x7AD9;&#x5B88;&#x6052;&#x7684; SRRxFLK &#x53CC;-&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; (RR) &#x6BCD;&#x9898;&#x3002;&#x591A;&#x8FBE;&#x886C;&#x5E95;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x90FD;&#x542B;&#x6709;&#x8F85;&#x9176;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x5177;&#x6709;&#x7279;&#x5B9A;&#x4F34;&#x4FA3;&#x79F0;&#x4E3A;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x6210;&#x719F;&#x86CB;&#x767D; (REMPs)&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7279;&#x70B9; 10 REMPs &#x548C; 15 RR &#x80BD;&#x5DF2;&#x77E5;&#x548C;&#x9884;&#x6D4B;&#x8FBE;&#x7279;&#x5B9A;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x4E00;&#x4E9B; REMPs &#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F; enzyme(s) &#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x800C;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E9B;&#x662F;&#x4E0D;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x9176;&#x7684;&#x4E0D;&#x5C11;&#x5177;&#x4F53;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x80BD;&#x3002;Biacore &#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F; (SPR) &#x548C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x53D1;&#x73B0;&#x9664;&#x4E86;&#x90A3;&#x4E9B;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x8FDC;&#x897F;&#x90E8;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x53EF;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6784;&#x8C61;&#x81EA;&#x7531;&#x548C;/&#x6216;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x4ECE; proteolytically &#x6B63;&#x5728;&#x9000;&#x5316;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6570;&#x636E;&#x4ECE; SPR &#x663E;&#x793A;&#x6700;&#x591A; 10 &#x500D;&#x6536;&#x7D27;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x9884;&#x671F;&#x7684; RR &#x57FA;&#x677F;&#x65F6;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F19;&#x4F34;&#x3002;&#x8C03;&#x67E5;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684; RR &#x86CB;&#x767D;&#x5168;&#x957F;&#x5E8F;&#x5217;&#x663E;&#x793A;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E9B;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x6210;&#x719F;&#x90E8;&#x5206;&#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5E8F;&#x5217;&#x6BD4; REMPs &#x548C; RR &#x4E2D;&#x80BD;&#x8868;&#x793A;&#xFF0C;REMPs &#x548C;&#x758F;&#x6C34;&#x533A;&#x57DF;&#x5411;&#x4EA4;&#x53C9;&#x627F;&#x8BA4;&#x4E4B;&#x540E; RR &#x56FE;&#x6848;&#x4E2D;&#x80BD;&#x76F8;&#x5173;&#x56E0;&#x7D20;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x3002;

&#x8FBE;&#x7279;&#x5B9A;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x80BD;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The twin-arginine translocase (Tat) system is used by many bacteria to move proteins across the cytoplasmic membrane. Tat substrates are prefolded and contain a conserved SRRxFLK twin-arginine (RR) motif at their N termini. Many Tat substrates in Escherichia coli are cofactor-containing redox enzymes that have specific chaperones called redox enzyme maturation proteins (REMPs). Here we characterized the interactions between 10 REMPs and 15 RR peptides of known and predicted Tat-specific redox enzyme subunits. A combination of in vitro and in vivo experiments demonstrated that some REMPs were specific to a redox enzyme(s) of similar function, whereas others were less specific and bound peptides of unrelated enzymes. Results from Biacore surface plasmon resonance (SPR) and bacterial two-hybrid experiments identified interactions in addition to those found in far-Western experiments, suggesting that conformational freedom and/or other cellular factors may be required. Furthermore, we show that the interaction of the two prevents both from being proteolytically degraded in vivo, and kinetic data from SPR show up to 10-fold-tighter binding to the expected RR substrate when multiple binding partners existed. Investigations using full-length sequences of the RR proteins showed that the mature portion for some redox enzyme subunits is required for detection of the interactions. Sequence alignments among the REMPs and RR peptides indicated that homology between the REMPs and the hydrophobic regions following the RR motifs in the peptides correlates to cross-recognition.

Differential Interactions between Tat-specific redox enzyme peptides and their chaperones.

Le syst&egrave;me de double-arginine translocase (Tat) est utilis&eacute; par de nombreuses bact&eacute;ries &agrave; traverser les prot&eacute;ines de la membrane cytoplasmique. Tat substrats sont prefolded et contiennent un motif conserv&eacute; de jumeau-arginine (RR) de SRRxFLK &agrave; leurs extr&eacute;mit&eacute;s N. De nombreux substrats Tat en Escherichia coli sont cofacteur contenant les enzymes redox disposant de chaperons sp&eacute;cifiques appel&eacute; oxydor&eacute;duction prot&eacute;ines enzymatiques de maturation (REMPs). Ici, nous avons caract&eacute;ris&eacute; les interactions entre 10 REMPs et 15 peptides RR connue et estim&eacute;e sous-unit&eacute;s enzymatiques de Tat sp&eacute;cifique redox. Une combinaison d&#39;exp&eacute;riences in vitro et in vivo ont d&eacute;montr&eacute; que certains REMPs &eacute;taient sp&eacute;cifiques &agrave; une enzymes d&#39;oxydor&eacute;duction des fonctions similaires, tandis que d&#39;autres &eacute;taient moins des peptides sp&eacute;cifiques et li&eacute;s d&#39;enzymes non apparent&eacute;s. R&eacute;sultats de r&eacute;sonance de plasmon de surface Biacore (SPR) et bact&eacute;riennes-hybride exp&eacute;riences identifi&eacute; les interactions en plus de celles que l&#39;on trouve dans les exp&eacute;riences de l&#39;extr&ecirc;me-ouest, sugg&eacute;rant que la libert&eacute; conformationnelle et/ou d&#39;autres facteurs cellulaires peuvent &ecirc;tre n&eacute;cessaires. De plus, nous montrons que l&#39;interaction des deux emp&ecirc;che de d&eacute;gradation prot&eacute;olytique donn&eacute;es in vivo et cin&eacute;tiques de voir la SPR jusqu&#39;&agrave; 10 fois plu contraignant au substrat RR attendue lorsqu&#39;il existe plusieurs partenaires de liaison. Enqu&ecirc;tes &agrave; l&#39;aide de s&eacute;quences pleine longueur des prot&eacute;ines RR a montr&eacute; que la partie mature pour quelques sous-unit&eacute;s d&#39;enzyme oxydo-r&eacute;duction est n&eacute;cessaire pour la d&eacute;tection des interactions. Alignements de s&eacute;quences parmi les REMPs et RR peptides ont indiqu&eacute; que l&#39;homologie entre les REMPs et les r&eacute;gions hydrophobes, suivant les motifs RR dans les corr&eacute;lats de peptides de reconnaissance crois&eacute;e.

Diff&eacute;rentielles Interactions entre peptides d&#39;enzymes redox Tat-sp&eacute;cifiques et leurs accompagnateurs.

Das Zweibettzimmer-Arginin-Translokase (Tat)-System wird durch viele Bakterien verwendet, um Proteine durch die zytoplasmatische Membran bewegen. Tat-Substrate sind prefolded und enthalten ein konservierten SRRxFLK Twin-Arginin (RR) Motiv ihrer N-Termini. Viele Tat Substrate in Escherichia coli sind Cofaktor-haltigen Redox-Enzyme, die bestimmte Chaperone Redox Enzym Reifung Proteine (REMPs) genannt. Hier charakterisiert wir die Interaktionen zwischen 10 REMPs und 15 RR-Peptide bekannt und vorhergesagten Tat-spezifische Redox Enzym-Untereinheiten. Eine Kombination von in-vitro und in vivo Experimente gezeigt, dass einige REMPs spezifisch f&uuml;r eine Redox-Enzyme(s) &auml;hnliche Funktion wurden, w&auml;hrend andere weniger spezifische und gebundene Peptide unabh&auml;ngige Enzyme. Ergebnisse von Biacore Surface Plasmon Resonance (SPR) und bakterielle-zwei-Hybrid-Experimente identifiziert Interaktionen zus&auml;tzlich zu denen in weit-Western-Experimente, was darauf hindeutet, dass diese Konformations&auml;nderungen Freiheit und/oder anderen zellul&auml;ren Faktoren erforderlich sein k&ouml;nnen. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass das Zusammenspiel der beiden verhindert, beide dass von in vivo und kinetische Daten aus SPR-Karte bis zu 10-8-fach engere Bindung an das erwartete RR-Substrat spaltet degradiert wird, wenn mehrere verbindliche Partner existierte. Untersuchungen mit in Sequenzen der Proteine RR zeigte, dass der &auml;ltere Teil f&uuml;r einige Redox-Enzym-Untereinheiten zur Erkennung der Wechselwirkungen erforderlich ist. Sequenz Ausrichtungen unter den REMPs und RR Peptide angegeben, dass Homologie zwischen den REMPs und hydrophoben Regionen nach den RR-Motive in der Peptide korreliert, gegenseitige Anerkennung.

Differenzielle Interaktionen zwischen Tat-spezifische Redox Enzym Peptide und ihre Begleitpersonen.

Il sistema twin-arginina traslocasi (Tat) &egrave; usato da molti batteri per spostare le proteine attraverso la membrana citoplasmatica. Tat substrati sono prefolded e contengono un motivo di twin-arginina (RR) SRRxFLK conservato a loro termini N. Molti substrati Tat in Escherichia coli sono cofattore contenente enzimi redox che hanno specifiche chaperoni chiamato redox proteine di maturazione enzimatica (REMPs). Qui abbiamo caratterizzato le interazioni tra 10 REMPs e 15 RR peptidi di note e stimate subunit&agrave; redox enzima specifico Tat. Una combinazione di esperimenti in vitro e in vivo hanno dimostrato che alcuni REMPs erano specifici per un enzyme(s) redox di funzione simile, mentre gli altri erano meno specifici e rilegati peptidi di enzimi indipendenti. Risultati dal Biacore risonanza plasmonica di superficie (SPR) e batterici due-ibrido esperimenti identificate interazioni oltre a quelle che si trovano nell&#39;estremo occidentale esperimenti, suggerendo che la libert&agrave; conformazionale e/o altri fattori cellulari possono essere richiesti. Inoltre, ci mostra che l&#39;interazione dei due impedisce sia da essere proteoliticamente degradate dati in vivo e cinetici da Visualizza SPR fino a 10 volte-stretto legame al substrato RR previsto quando esisteva pi&ugrave; partner di associazione. Indagini utilizzando sequenze full-length di proteine RR ha mostrato che la parte matura per alcune subunit&agrave; enzima redox &egrave; necessaria per il rilevamento delle interazioni. Gli allineamenti di sequenza tra il REMPs e RR peptidi indicato tale omologia tra il REMPs e le regioni idrofobiche seguendo motivi la RR nei peptidi &egrave; correlata al riconoscimento reciproco.

Differenziale interazioni tra peptidi di enzima redox Tat-specifiche e loro accompagnatori.

&#x30C4;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; translocase (Tat) &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x819C;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Tat &#x57FA;&#x677F; prefolded &#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E; N &#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F; SRRxFLK &#x30C4;&#x30A4;&#x30F3;-&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; (RR) &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E; Tat &#x57FA;&#x677F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3042;&#x308B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x6210;&#x719F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (REMPs)&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067; 10 REMPs &#x3068; 15 &#x306E; RR &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306E; Tat &#x56FA;&#x6709;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306A;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x7279;&#x5B9A;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3044;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B; REMPs &#x985E;&#x4F3C;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x30EC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D3;&#x30A2;&#x30B3;&#x30A2;&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4; (SPR) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x83CC; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x5B9F;&#x9A13;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x9060;&#x3044;&#x897F;&#x90E8;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x304B;&#x3089;&#x751F; SPR &#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x6700;&#x5927; 10 &#x500D;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x304B;&#x3089; in vivo &#x3068;&#x30AD;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x308B; RR &#x57FA;&#x677F;&#x306B;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RR &#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x7DDA;&#x5F62; REMPs &#x3068; RR &#x9593;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x306F; REMPs &#x3068; RR &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x76F8;&#x95A2;&#x3067;&#x6B21;&#x306E;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x9593;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Tat &#x56FA;&#x6709;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x4ED8;&#x304D;&#x6DFB;&#x3044;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5DEE;&#x5206;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#xD2B8;&#xC708; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; translocase (Tat) &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xB9CE;&#xC740; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBB38;&#xC2E0; &#xAE30;&#xD310; prefolded&#xB294; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; N &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; SRRxFLK &#xD2B8;&#xC708;-&#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; (RR) &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568;. &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xBB38;&#xC2E0; &#xAE30;&#xD310; &#xACF5;&#xB3D9; &#xC778;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xAC00; &#xD2B9;&#xC815; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xB77C;&#xB294; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC131;&#xC219; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (REMPs). &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD2B9;&#xC9D5; 10 Remps&#xC640; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC608;&#xCE21; &#xBB38;&#xC2E0; &#xAD00;&#xB828; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; 15 RR &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC870;&#xD569; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB35C; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xB4DC; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xC77C;&#xBD80; REMPs &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; redox enzyme(s) &#xD2B9;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. Biacore &#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85; (SPR) &#xBC0F; &#xC138;&#xADE0; 2 &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xBA40;&#xB9AC; &#xC11C; &#xC2E4;&#xD5D8;, &#xADF8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC790;&#xC720; &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC694;&#xC778; &#xD544;&#xC694;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB458;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC29;&#xC9C0; proteolytically &#xC608;&#xC0C1;&#xB41C; RR &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; 10 &#xBC30; &#xAC15;&#xD654; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCD5C;&#xB300; SPR &#xACF5;&#xC5F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC131;&#xB2A5;&#xC774; &#xC800;&#xD558; &#xB418; &#xACE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB450; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. RR &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77C;&#xBD80; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xBD80;&#xBD84; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC815;&#xB82C; &#xC21C;&#xC11C; Remps&#xC640; RR &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; homology&#xB97C; REMPs &#xBC0F; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC5F0;&#xAD00;&#xC5D0; RR &#xBAA8;&#xD2F0;&#xD504; &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC601;&#xC5ED; &#xC0AC;&#xC774;.

&#xBB38;&#xC2E0; &#xAD00;&#xB828; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAC04;&#xC758; &#xCC28;&#xB4F1; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;.

&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6BD2;&#x6027;&#x6D89;&#x53CA;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7269;&#x79CD;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x8FD9;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x5BF9;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6BD2;&#x6027;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x751F;&#x5B58;&#x88AB;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x51E0;&#x682A;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#xFF0C;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x66B4;&#x9732;&#x6D6E;&#x6E38;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x8F74;&#x627F;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x7A33;&#x6001;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x8FD9;&#x5927;&#x7EA6; 250 &#x57FA;&#x56E0;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x82CF;&#x6253;&#x6C34;&#x3001; &#x4E13;&#x4E1A;&#x5316;&#x3001; gor&#x3001; trxA&#x3001; &#x5BF9;&#x4E2D;&#x3001; grxA &#x548C;&#x9A6C;&#x5C14;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x5728;&#x7EF4;&#x62A4;&#x6216;&#x63D0;&#x9AD8;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x4E0D;&#x540C;&#x6709;&#x6BD2;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50; &#xFF08;Cr(2)O(7)(2-)&#x3001; Co(2+)&#x3001; Cu(2+)&#x3001; Ag(+)&#x3001; Zn(2+)&#x3001; AsO(2)(-)&#x3001; SeO(3)(2-) &#x6216; TeO(3)(2-))&#x3002;&#x5F04;&#x6E05;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x610F;&#x89C1;&#xFF0C;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27; &#xFF08;ROS&#xFF09; &#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x5DEF;&#x57FA;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x4F20;&#x611F;&#x5668; (RSH) &#x91CF;&#x5316;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA7;&#x751F;&#x6C27;&#x5316;&#x6BD2;&#x6027;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6C27;&#x5316;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x88AB;&#x5F52;&#x7C7B;&#x4E3A;&#x4E00;&#x8D77;&#x6D89;&#x53CA; ROS &#x548C;&#x5DEF;&#x57FA;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7269;&#x5316;&#x5B66; (AsO(2)(-)&#x3001; SeO(3)(2-))&#x3001; &#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x4E3A;&#x4E3B; &#xFF08;Cu(2+)&#x3001; Cr(2)O(7)(2-)) &#x6216;&#x5DEF;&#x57FA;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x4E3A;&#x4E3B; (Ag(+)&#x3001; Co(2+)&#x3001; Zn(2+)&#x3001; TeO(3)(2-))&#x3002;&#x4E0E;&#x6B64;&#x5BF9;&#x5E94;&#xFF0C;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A; luxCDABE &#x878D;&#x5408;&#x663E;&#x793A;&#x6BD2;&#x6027;&#x5242;&#x91CF;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x5411;&#x4E0A; &mdash; &mdash; &#x6216;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x4E0D;&#x540C;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x662F;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x79BB;&#x6563;&#x9014;&#x5F84;&#x6C27;&#x5316;&#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x80CE;&#x513F;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53EF;&#x80FD;&#x5177;&#x6709;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x751F;&#x7406;&#x89D2;&#x8272;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x91D1;&#x5C5E;&#x5BBD;&#x5BB9;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x5242;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x6709;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x89D2;&#x8272;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x91D1;&#x5C5E;&#x5BBD;&#x5BB9;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

Microbiological metal toxicity involves redox reactions between metal species and cellular molecules, and therefore, we hypothesized that antioxidant systems might be chromosomal determinants affecting the susceptibility of bacteria to metal toxicity. Here, survival was quantified in metal ion-exposed planktonic cultures of several Escherichia coli strains, each bearing a mutation in a gene important for redox homeostasis. This characterized approximately 250 gene-metal combinations and identified that sodA, sodB, gor, trxA, gshA, grxA and marR have distinct roles in safeguarding or sensitizing cells to different toxic metal ions (Cr(2)O(7)(2-), Co(2+), Cu(2+), Ag(+), Zn(2+), AsO(2)(-), SeO(3)(2-) or TeO(3)(2-)). To shed light on these observations, fluorescent sensors for reactive oxygen species (ROS) and reduced thiol (RSH) quantification were used to ascertain that different metal ions exert oxidative toxicity through disparate modes-of-action. These oxidative mechanisms of metal toxicity were categorized as involving ROS and thiol-disulfide chemistry together (AsO(2)(-), SeO(3)(2-)), ROS predominantly (Cu(2+), Cr(2)O(7)(2-)) or thiol-disulfide chemistry predominantly (Ag(+), Co(2+), Zn(2+), TeO(3)(2-)). Corresponding to this, promoter-luxCDABE fusions showed that toxic doses of different metal ions up- or downregulate the transcription of gene sets marking distinct pathways of cellular oxidative stress. Altogether, our findings suggest that different metal ions are lethal to cells through discrete pathways of oxidative biochemistry, and moreover, indicate that chromosomally encoded antioxidant systems may have metal ion-specific physiological roles as determinants of bacterial metal tolerance.

Chromosomal antioxidant genes have metal ion-specific roles as determinants of bacterial metal tolerance.

Toxicit&eacute; des m&eacute;taux microbiologique implique des r&eacute;actions redox entre esp&egrave;ces m&eacute;talliques et des mol&eacute;cules cellulaires, et donc, nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se qu&#39;antioxydant syst&egrave;mes pourraient &ecirc;tre d&eacute;terminants chromosomiques qui affectent la sensibilit&eacute; des bact&eacute;ries &agrave; la toxicit&eacute; des m&eacute;taux. Ici, la survie a &eacute;t&eacute; quantifi&eacute;e dans des cultures planctoniques expos&eacute;s ion m&eacute;talliques, de plusieurs souches d&#39;Escherichia coli, chacun portant une mutation dans un g&egrave;ne important pour l&#39;hom&eacute;ostasie redox. Cela caract&eacute;rise environ 250 combinaisons de g&egrave;nes-m&eacute;tal et identifi&eacute; que la soude, sodB, gor, trxA, gshA, grxA et marR ont des r&ocirc;les distincts dans la sauvegarde ou la sensibilisation des cellules de diff&eacute;rents ions m&eacute;talliques toxiques (Cr(2)O(7)(2-), Co(2+), Cu(2+), Ag(+), Zn(2+), AsO(2)(-), SeO(3)(2-) ou TeO(3)(2-)). Pour faire la lumi&egrave;re sur ces observations, capteurs fluorescents pour les esp&egrave;ces r&eacute;actives de l&#39;oxyg&egrave;ne (ROS) et thiols r&eacute;duits quantification (RSH) ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s pour v&eacute;rifier que les diff&eacute;rents ions m&eacute;talliques exercent toxicit&eacute; oxydative par diff&eacute;rents modes d&#39;action. Ces m&eacute;canismes oxydatifs de toxicit&eacute; des m&eacute;taux ont &eacute;t&eacute; class&eacute;s en tant qu&#39;impliquant ROS et thiol-disulfure de chimie ensemble (AsO(2)(-), SeO(3)(2-)), ROS principalement (Cu(2+), Cr(2)O(7)(2-)) ou thiol-disulfure de chimie principalement (Ag(+), Co(2+), Zn(2+), TeO(3)(2-)). Correspondant &agrave; cela, les fusions de promoteur-luxCDABE a montr&eacute; que des doses toxiques de diff&eacute;rents metal ions up - ou r&eacute;gulent la transcription du g&egrave;ne d&eacute;finit le marquage des voies distinctes de stress oxydatif cellulaire. Au total, nos r&eacute;sultats indiquent que diff&eacute;rents ions m&eacute;talliques sont mortelles pour les cellules des voies discr&egrave;tes de biochimie oxydatif et par ailleurs, indiquent que les syst&egrave;mes antioxydants chromosomiquement cod&eacute; peuvent avoir metal ion sp&eacute;cifique des r&ocirc;les physiologiques comme d&eacute;terminants de la tol&eacute;rance aux m&eacute;taux bact&eacute;rienne.

G&egrave;nes chromosomiques antioxydant ont des r&ocirc;les propres &agrave; l&#39;ion m&eacute;talliques comme d&eacute;terminants de la tol&eacute;rance aux m&eacute;taux bact&eacute;rienne.

Mikrobiologische Metall-Toxizit&auml;t beinhaltet Redoxreaktionen zwischen Metall und zellularen Molek&uuml;le, und deshalb wir die Hypothese, dass antioxidative Systeme m&ouml;glicherweise chromosomalen Determinanten beeinflussen die Empfindlichkeit von Bakterien mit Metall-Toxizit&auml;t. Hier wurde &Uuml;berleben in Metall Ionen-gemachten Plankton Kulturen von mehreren Escherichia-coli-St&auml;mme, jeweils mit eine Mutation in einem Gen f&uuml;r Redox-Hom&ouml;ostase wichtig quantifiziert. Dies zeichnet sich etwa 250 gen-Metall-Kombinationen und festgestellt, dass SodA, SodB, Gor, TrxA, GshA, GrxA und MarR unterschiedliche Rollen haben in Schutz oder die Sensibilisierung der Zellen zu verschiedenen giftigen Metallionen (Cr(2)O(7)(2-), Co(2+), Cu(2+), Ag(+), Zn(2+), AsO(2)(-), SeO(3)(2-) oder TeO(3)(2-)). Um Aufschluss &uuml;ber diese Beobachtungen, Fluoreszenz-Sensoren f&uuml;r reaktive Sauerstoffspezies (ROS) und reduzierte Thiol (RSH) Quantifizierung wurden verwendet, um festzustellen, ob die verschiedene Metallionen oxidativen Toxizit&auml;t durch unterschiedliche Modi der Handlung auszu&uuml;ben. Diese oxidativen Mechanismen der Metall-Toxizit&auml;t wurden kategorisiert als ROS und Thiol-Disulfid-Chemie zusammen mit (AsO(2)(-), SeO(3)(2-)), ROS &uuml;berwiegend (Cu(2+), Cr(2)O(7)(2-)) oder Thiol-Disulfid-Chemie &uuml;berwiegend (Ag(+), Co(2+), Zn(2+), TeO(3)(2-)). Die entsprechende, zeigte Projekttr&auml;ger-LuxCDABE Fusionen, dass toxische Dosen verschiedener-Ionen up-Metall oder gulieren die Transkription des Gens Kennzeichnung unterschiedliche Wege des zellul&auml;ren oxidativen Stress Mengen. Insgesamt sprechen unsere Erkenntnisse verschiedene Metallionen Zellen bis diskrete Wege der oxidativen Biochemie t&ouml;dlich sind, und au&szlig;erdem darauf hinweisen, dass bei codierten antioxidative Systeme Metall Ionen-spezifische physiologische Rollen als Determinanten der bakteriellen Metall Toleranz haben k&ouml;nnen.

Chromosomale Antioxidans Gene haben Metall Ion-spezifischen Rollen als Determinanten der bakteriellen Metall Toleranz.

Tossicit&agrave; di metallica microbiologiche coinvolge reazioni redox tra specie metalliche e molecole cellulari, e quindi, abbiamo ipotizzato che antiossidante sistemi potrebbero essere determinanti cromosomiche che interessano la suscettibilit&agrave; dei batteri alla tossicit&agrave; del metallica. Qui, sopravvivenza &egrave; stato quantificato in metalliche ioni esposti planctoniche culture di diversi ceppi di Escherichia coli, ciascuno recante una mutazione in un gene importante per l&#39;omeostasi redox. Questo caratterizza circa 250 combinazioni gene-metallo e identificato che sodA, sodB, gor, trxA, gshA, grxA e marR hanno ruoli distinti nella salvaguardia o sensibilizzante alle cellule di diversi ioni metallici tossici (Cr(2)O(7)(2-), Co(2+), Cu(2+), Ag(+), Zn(2+), AsO(2)(-), SeO(3)(2-) o TeO(3)(2-)). Per fare luce su queste osservazioni, sensori fluorescenti di specie reattive dell&#39;ossigeno (ROS) e tiolo ridotta quantificazione (RSH) sono stati utilizzati per l&#39;accertamento che diversi ioni metallici esercitano tossicit&agrave; ossidativa attraverso diverse modalit&agrave; d&#39;azione. Questi meccanismi ossidativi di tossicit&agrave; di metallo sono stati classificati come coinvolgendo ROS e tiolo-disolfuro di chimica insieme (AsO(2)(-), SeO(3)(2-)), ROS prevalentemente (Cu(2+), Cr(2)O(7)(2-)) o tiolo-disolfuro chimica prevalentemente (Ag(+), Co(2+), Zn(2+), TeO(3)(2-)). Corrispondente a questo, fusioni promotore-luxCDABE hanno mostrato che dosi tossiche di diverso metallo ioni - up o sottoregola la trascrizione del gene imposta marcatura distinti percorsi di stress ossidativo cellulare. Complessivamente, i nostri risultati suggeriscono che diversi ioni metallici sono letali per le cellule attraverso percorsi discreti di biochimica ossidativo e inoltre indicano che sistemi codificati cromosomicamente antiossidanti possono avere metalli ione-specifici ruoli fisiologici come fattori determinanti della tolleranza batterica di metallo.

Geni cromosomici antiossidante hanno ruoli specifici di ioni metalli come fattori determinanti della tolleranza batterica di metallo.

&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6BD2;&#x6027;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7A2E;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6297;&#x9178;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x6D6E;&#x904A;&#x6027;&#x6587;&#x5316;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x30EC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x8EF8;&#x53D7;, &#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x304A;&#x3088;&#x305D; 250 &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x304C;&#x7279;&#x5FB4;&#x3057;&#x3001;&#x30BD;&#x30FC;&#x30C0;&#x3001;sodB&#x3001;&#x30B4;&#x30A2;&#x3001;trxA&#x3001;gshA&#x3001;grxA&#x3001;&#x30DE;&#x30FC;&#x4FDD;&#x8B77;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x5225;&#x306E;&#x6709;&#x6BD2;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; (Cr(2)O(7)(2-)&#x3001;Co(2+)&#x3001;Cu(2+)&#x3001;Ag(+)&#x3001;Zn(2+)&#x3001;AsO(2)(-)&#x3001;SeO(3)(2-) &#x307E;&#x305F;&#x306F; TeO(3)(2-))&#x3002; &#x611F;&#x4F5C;&#x306E;&#x500B;&#x5225;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E; (ROS) &#x3068;&#x4F4E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x7528;&#x86CD;&#x5149;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306B;&#x5149;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x308B;&#x306B; (RSH) &#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x7570;&#x7A2E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x304B;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E; ROS &#x3068;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x5316;&#x5B66;&#x3092;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x542B;&#x3080;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x985E;&#x3055;&#x308C;&#x305F; (AsO(2)(-), SeO(3)(2-)), ROS &#x4E3B;&#x306B; &#xFF08;Cu(2+)&#x3001;Cr(2)O(7)(2-)) &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x5316;&#x5B66;&#x4E3B;&#x306B; &#xFF08;Ag(+)&#x3001;Co(2+)&#x3001;Zn(2+)&#x3001;TeO(3)(2-))&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; luxCDABE &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x91CF;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30A2;&#x30C3;&#x30D7; - &#x91D1;&#x5C5E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8EE2;&#x5199;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x304C;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x306E;&#x96E2;&#x6563;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x306A;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x9178;&#x5316;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x7D30;&#x83CC;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30C8;&#x30EC;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x6297;&#x9178;&#x5316;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D30;&#x83CC;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30C8;&#x30EC;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xAE08;&#xC18D; &#xB3C5;&#xC131; &#xAE08;&#xC18D; &#xC885; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC790; &#xC0AC;&#xC774; redox &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; &#xD56D; &#xC0B0;&#xD654; &#xAC00;&#xC124; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAE08;&#xC18D; &#xB3C5;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC790;&#xD654; &#xC728;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC694;&#xC778; &#xB420; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC0DD;&#xC874;&#xC740; &#xACC4;&#xB7C9; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBCC0;&#xC885;&#xC758; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; planktonic &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC01;&#xAC01; redox &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1;. &#xC774; &#xC57D; 250 &#xC9C4; &#xAE08;&#xC18D; &#xC870;&#xD569; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xC18C; &#xB2E4;, sodB, gor, trxA, gshA, grxA &#xBC0F; &#xB9C8; &#xB974;&#xB294; &#xBCF4;&#xD638; &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xB3C5;&#xC131; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628; (Cr(2)O(7)(2-), Co(2+), Cu(2+), Ag(+), Zn(2+), AsO(2)(-), SeO(3)(2-) &#xB610;&#xB294; TeO(3)(2-)) &#xC140; sensitizing &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xC2DD;&#xBCC4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCC30;, &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885; (&#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;)&#xC640; &#xAC10;&#xC18C; thiol &#xD615;&#xAD11; &#xC13C;&#xC11C;&#xC5D0; &#xBE5B;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0B0; &#xD558; &#xAC8C; (RSH) &#xBD80; &#xB7C9; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC791;&#xC5C5; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0B0;&#xD654; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xBC1C;&#xD718; &#xD655;&#xC778; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE08;&#xC18D; &#xB3C5;&#xC131;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0B0;&#xD654; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD568;&#xAED8; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8; thiol &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xD654;&#xD559; &#xAD00;&#xB828;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xB958; &#xD588;&#xB2E4; (AsO(2)(-), SeO(3)(2-)), &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8; &#xC8FC;&#xB85C; (Cu(2+), Cr(2)O(7)(2-)) &#xB610;&#xB294; thiol &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xD654;&#xD559; &#xC8FC;&#xB85C; (Ag(+), Co(2+), Zn(2+), TeO(3)(2-)). &#xC774; &#xD558;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9;, &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; luxCDABE fusions downregulate &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC; &#xC124;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xACBD;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xB2E4;&#xB978;&#xC758; &#xB3C5;&#xC131; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628;-&#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB450;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559;&#xC758; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xACBD;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xB418;&#xBA70; &#xB610;&#xD55C;, chromosomally &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; &#xD56D; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC138;&#xADE0; &#xAE08;&#xC18D; &#xAD00;&#xC6A9;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628; &#xD2B9;&#xC815; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xD56D; &#xC0B0;&#xD654; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xC138;&#xADE0; &#xAE08;&#xC18D; &#xAD00;&#xC6A9;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5ED;&#xD560;.

Toxicidad metal microbiol&oacute;gica implica reacciones redox entre especies met&aacute;licas y mol&eacute;culas celulares, y por lo tanto, presumimos que antioxidante sistemas podr&iacute;an ser determinantes cromos&oacute;micos que afectan la susceptibilidad de las bacterias a la toxicidad del metal. Aqu&iacute;, la supervivencia se cuantific&oacute; en culturas planct&oacute;nicas expuestos al ion met&aacute;licas de varias cepas de Escherichia coli, cada uno teniendo una mutaci&oacute;n en un gen importante para la homeostasis redox. Esto caracteriza aproximadamente 250 combinaciones de genes-metal e identificado que Sosa, sodB, gor, trxA, gshA, grxA y marR tienen distintos papeles en salvaguardar o sensibilizar las c&eacute;lulas a diferentes iones met&aacute;licos t&oacute;xicos (Cr(2)O(7)(2-), Co(2+), Cu(2+), Ag(+), Zn(2+), AsO(2)(-), SeO(3)(2-) o TeO(3)(2-)). Para arrojar luz sobre estas observaciones, sensores fluorescentes de especies reactivas del ox&iacute;geno (ROS) y tiol reducido cuantificaci&oacute;n (RSH) se utilizaron para determinar que diferentes iones met&aacute;licos ejercen toxicidad oxidativa a trav&eacute;s de diferentes modos de acci&oacute;n. Estos mecanismos oxidativos de la toxicidad del metal fueron categorizados como con ROS y tiol-disulfuro qu&iacute;mica juntos (AsO(2)(-), SeO(3)(2-)), ROS predominante (Cu(2+), Cr(2)O(7)(2-)) o tiol-disulfuro qu&iacute;mica predominante (Ag(+), Co(2+), Zn(2+), TeO(3)(2-)). Correspondiente a esto, promotor-luxCDABE fusiones demostraron que dosis t&oacute;xicas de diferente metal iones para arriba - o regular a la baja la transcripci&oacute;n del gen establece marca caminos distintos de estr&eacute;s oxidativo celular. En conjunto, nuestros resultados sugieren que diferentes iones met&aacute;licos son letales a las c&eacute;lulas a trav&eacute;s de v&iacute;as discretas de oxidaci&oacute;n bioqu&iacute;mica y por otra parte, indican que los sistemas antioxidantes cromos&oacute;mico codificada pueden tener metales papeles fisiol&oacute;gicos de iones espec&iacute;ficos como determinantes de la tolerancia bacteriana de metal.

Genes cromos&oacute;micos antioxidantes tienen un papel metal de iones espec&iacute;ficos como determinantes de la tolerancia bacteriana de metal.

Redox-Enzym-Substraten des Systems Zweibettzimmer-Arginin Translokation (Tat) enthalten ein RR-Motiv in ihrer F&uuml;hrer-Peptid und ben&ouml;tigen die Unterst&uuml;tzung der Chaperone, Redox Enzym Reifung Proteine (REMPs). Hier wurden verschiedene Regionen der RR-haltigen Oxidoreduktase-Untereinheit (Leader-Peptid, volle Preprotein mit und ohne einen F&uuml;hrer Spaltung Website, Reife Protein) f&uuml;r die Interaktion mit ihren REMPs normalisiert. Alle REMPs gebunden ihre preprotein Substrate, die unabh&auml;ngig von der Spaltung-Website. Einige zeigten Bindung an den F&uuml;hrer oder m&uuml;ndig Gebiet, w&auml;hrend in einem Fall nur der Preprotein seine REMP gebunden. Das Fehlen der Tat beeinflusst auch die H&ouml;he der Chaperon-Substrat-Wechselwirkung.

Vergleicht man systemspezifische Anstandsdame Interaktionen mit ihrer Tat abh&auml;ngige Redox-Enzym-Substraten.

Substrati enzima redox del sistema twin-arginina traslocazione (Tat) contengono un RR-motif in loro peptide leader e richiedono l&#39;assistenza di accompagnatori, proteine di maturazione enzima redox (REMPs). Qui varie regioni della subunit&agrave; RR-contenenti ossidoriduttasi (peptide leader, preprotein completo con e senza un sito di clivaggio del leader, proteina matura) sono stati analizzati per l&#39;interazione con loro REMPs. REMPs tutti associato loro substrati preprotein indipendenti del sito di clivaggio. Alcuni mostrato associazione leader o regione maturo, considerando che in un caso solo il preprotein vincolato relativo REMP. L&#39;assenza di Tat influenz&ograve; anche la quantit&agrave; di interazione chaperone-substrato.

Confrontando le interazioni specifiche del sistema chaperone con loro substrati di enzima redox dipendenti Tat.

&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x30C4;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x8EE2;&#x5EA7; (Tat &#x306E;) &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E; RR &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x6210;&#x719F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (REMPs) &#x306E;&#x63F4;&#x52A9;&#x3092;&#x8981;&#x6C42;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067; RR &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; (&#x30D5;&#x30EB; preprotein &#x3068;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x5207;&#x65AD;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x305B;&#x305A;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;) &#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x5730;&#x57DF;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E; REMPs &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;.&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; REMPs preprotein &#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x5375;&#x5272;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x72EC;&#x7ACB;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1 &#x3064;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306E;&#x307F; preprotein &#x305D;&#x306E; REMP &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x5730;&#x57DF;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Tat &#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x57FA;&#x677F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x91CF;&#x3082;&#x3002;

Tat &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Substrats enzymatiques redox du syst&egrave;me twin-arginine translocation (Tat) contiennent un motif du RR dans leur peptide leader et n&eacute;cessitent l&#39;aide d&#39;accompagnateurs, prot&eacute;ines de maturation r&eacute;dox enzymatiques (REMPs). Ici les diff&eacute;rentes r&eacute;gions de la sous-unit&eacute; oxydor&eacute;ductase de RR-contenant (peptide leader, proenzyme complet avec et sans un site de clivage de chef de file, prot&eacute;ine mature) ont &eacute;t&eacute; dos&eacute;es pour l&#39;interaction avec leurs REMPs. Tous REMPs li&eacute; leurs substrats pr&eacute;prot&eacute;ines ind&eacute;pendants du site de clivage. Certains ont montr&eacute; liaison au chef ou r&eacute;gion mature, tandis que dans un cas seulement le pr&eacute;-prot&eacute;ine li&eacute; sa REMP. L&#39;absence de Tat a &eacute;galement influenc&eacute; la quantit&eacute; d&#39;interaction chaperon-substrat.

En comparant les interactions sp&eacute;cifiques au syst&egrave;me chaperon avec leurs substrats enzymatiques de Tat r&eacute;dox d&eacute;pendants.

&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x5E95;&#x7269;&#x53CC;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x6613;&#x4F4D; (&#x8FBE;) &#x7CFB;&#x7EDF;&#x5305;&#x542B;&#x5728;&#x5176;&#x9886;&#x8896;&#x80BD; RR &#x6BCD;&#x9898;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x4F34;&#x4FA3;&#xFF0C;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x6210;&#x719F;&#x86CB;&#x767D; (REMPs) &#x7684;&#x534F;&#x52A9;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5404;&#x533A;&#x57DF;&#x7684; RR &#x5305;&#x542B;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D; (&#x9886;&#x8896;&#x80BD;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x65E0;&#x9886;&#x8896;&#x9176;&#x5207;&#x4F4D;&#x70B9;&#xFF0C;&#x6210;&#x719F;&#x86CB;&#x767D;&#x5145;&#x5206; preprotein) &#x6D4B;&#x5B9A;&#x5176; REMPs &#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;&#x6240;&#x6709; REMPs &#x90FD;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x9176;&#x5207;&#x4F4D;&#x70B9;&#x53CA;&#x5176;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x5E95;&#x7269;&#x3002;&#x4E00;&#x4E9B;&#x663E;&#x793A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x9886;&#x5BFC;&#x8005;&#x6216;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x800C;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6848;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x53EA;&#x6709; preprotein &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5176; REMP&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x8FBE;&#x4E5F;&#x5F71;&#x54CD;&#x4F34;&#x4FA3;&#x57FA;&#x6750;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x91CF;&#x3002;

&#x6BD4;&#x8F83;&#x53CA;&#x5176;&#x8FBE;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x5E95;&#x7269;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

Redox enzyme substrates of the twin-arginine translocation (Tat) system contain a RR-motif in their leader peptide and require the assistance of chaperones, redox enzyme maturation proteins (REMPs). Here various regions of the RR-containing oxidoreductase subunit (leader peptide, full preprotein with and without a leader cleavage site, mature protein) were assayed for interaction with their REMPs. All REMPs bound their preprotein substrates independent of the cleavage site. Some showed binding to either the leader or mature region, whereas in one case only the preprotein bound its REMP. The absence of Tat also influenced the amount of chaperone-substrate interaction.

Comparing system-specific chaperone interactions with their Tat dependent redox enzyme substrates.

&#xC0B0;&#xD654; &#xD658; &#xC6D0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAE30;&#xD310; &#xD2B8;&#xC708; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xC804; (Tat) &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; RR &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;, &#xC0B0;&#xD654; &#xD658; &#xC6D0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC131;&#xC219; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (REMPs)&#xC758; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xB85C;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; Remps&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC18C;&#xB294; RR&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; oxidoreductase &#xB2E8;&#xC704; (&#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC640; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;, &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5C6;&#xC774; &#xC804;&#xCCB4; preprotein)&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; REMPs &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; preprotein &#xAE30;&#xD310; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C;. &#xD55C; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xB9CC; preprotein&#xC758; REMP &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xBC18;&#xBA74; &#xC77C;&#xBD80; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xB610;&#xB294; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xBB38;&#xC2E0;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAE30;&#xD310; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAE08;&#xC561;&#xC744;&#xB3C4; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAD00;&#xB828; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC0C1;&#xD638; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBB38;&#xC2E0; &#xC885;&#xC18D; redox &#xD6A8;&#xC18C; &#xAE30;&#xD310; &#xBE44;&#xAD50;.

Sustratos enzim&aacute;ticos de redox del sistema twin-arginina desplazamiento (Tat) contienen una RR-p&eacute;ptido de su l&iacute;der y requieren la ayuda de acompa&ntilde;antes, las prote&iacute;nas redox enzima maduraci&oacute;n (REMPs). Aqu&iacute; se ensayaron varias regiones de la subunidad oxidorreductasa que contienen RR (p&eacute;ptido l&iacute;der, preprotein completo con y sin un sitio l&iacute;der de hendidura, prote&iacute;na madura) para la interacci&oacute;n con sus REMPs. REMPs todos obligados sus sustratos preprotein independientes del sitio del hendidura. Algunos demostraron vinculante a l&iacute;der o regi&oacute;n madura, mientras que en un caso s&oacute;lo el preprotein hab&iacute;a obligado su REMP. La ausencia de Tat tambi&eacute;n influy&oacute; en la cantidad de interacci&oacute;n del sustrato-acompa&ntilde;ante.

Comparando las interacciones espec&iacute;ficas del sistema acompa&ntilde;ante con sus sustratos enzim&aacute;ticos de Tat redox dependiente.

&#x53CC;&#x4EBA;-&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; translocase (&#x8FBE;) &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7531;&#x5F88;&#x591A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x690D;&#x7269;&#x7528;&#x4E8E;&#x8DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6216;&#x7C7B;&#x56CA;&#x4F53;&#x819C;&#x819C;&#x79FB;&#x52A8;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5728;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7EC6;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5854;&#x5854;&#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x76F4;&#x7ACB;&#x4EBA;&#x9F50;&#x805A;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x5854;&#x5854; protomers &#x901A;&#x8FC7;&#x819C;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A97;&#x4F53;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#x3002;&#x5854;&#x5854;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x5305;&#x62EC;&#x8DE8;&#x819C;&#x87BA;&#x65CB;&#x3001; &#x4E24;&#x4EB2;&#x6027;&#x87BA;&#x65CB;&#x548C;&#x975E;&#x7ED3;&#x6784;&#x5316;&#x7684; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E24;&#x4EB2;&#x6027;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x5854;&#x5854; (&#x6B8B;&#x7559; 22 &#x5230; 44&#xFF0C;&#x7F29;&#x5199; TatAH2) &#x5408;&#x6210;&#x80BD;&#x4E0A;&#x6267;&#x884C;&#x4E86;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x4E0E;&#x7ED3;&#x6784;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x5854;&#x5854; (&#x6B8B;&#x7559; 44 89) &#x6B64;&#x524D;&#x5DF2;&#x663E;&#x793A;&#x53EF;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x548C;&#x5468;&#x8D28;&#x53CC;&#x65B9;&#x819C;&#x7684;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D;&#x4E0D;&#x53D8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5176;&#x62D3;&#x6251;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7535;&#x538B;&#x5F0F;&#x8584;&#x819C;&#x65F6;&#x624D; (&#x9648;&#x4E2D;&#x5357;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x5927;&#x5B66; 2007&#x5E74;&#x751F;&#x5316; 46&#xFF1A; 7396-404&#xFF09;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x89C2;&#x5BDF;&#x8868;&#x660E; TatAH2 &#x533A;&#x57DF;&#x4F1A;&#x6709;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x6613;&#x4F4D;&#x671F;&#x95F4;&#x6709;&#x5173;&#x5854;&#x5854;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x9700;&#x8981;&#x8FDB;&#x884C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x548C; TatAH2 CD &#x5149;&#x8C31;&#x663E;&#x793A;&#x5B83;&#x5269;&#x4F59;&#x7684;&#x975E;&#x7ED3;&#x6784;&#x5316;&#x5728;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x540C;&#x65F6;&#x91C7;&#x7528;&#x819C;&#x73AF;&#x5883;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x87BA;&#x65CB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5DEE;&#x5206;&#x626B;&#x63CF;&#x91CF;&#x70ED;&#x6CD5;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD8;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86; TatAH2 &#x4E0E; DPPG &#x8840;&#x8102;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E0E;&#x5907;&#x707E;&#x3001; &#x6D88;&#x6781;&#x6697;&#x793A;&#x6536;&#x53D6;&#x78F7;&#x8102;&#x5934;&#x7EC4;&#x8D21;&#x732E;&#x4E0E;&#x5854;&#x5854;&#x7684;&#x819C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x8FBE;&#x6613;&#x4F4D;&#x673A;&#x5236;&#x901A;&#x8FC7;&#x5BF9;&#x5854;&#x5854;&#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x4E24;&#x4EB2;&#x6027;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

The twin-arginine translocase (Tat) system is used by many bacteria and plants to move folded proteins across the cytoplasmic or thylakoid membrane. In most bacteria, the TatA protein is believed to form a defined pore in the membrane through homo-oligomerization with other TatA protomers. The predicted secondary structure of TatA includes a transmembrane helix, an amphipathic helix, and an unstructured C-terminal region. Here biophysical and structural investigations were performed on a synthetic peptide representing the amphipathic region of TatA (residues 22 to 44, abbreviated TatAH2). The C-terminal region of TatA (residues 44-89) was previously shown to be accessible from both the cytoplasmic and periplasmic sides of the membrane only when the membrane potential was intact, suggesting dependence of its topology on an energized membrane (Chan et al. 2007 Biochemistry 46: 7396-404). Such observation suggests that the TatAH2 region would have unique lipid interactions that may be related to the function of TatA during translocation and thus warranted further investigations. NMR and CD spectroscopy of TatAH2 show that it adopts a predominantly helical structure in a membrane environment while remaining unstructured in aqueous solution. Differential scanning calorimetry studies also reveal that TatAH2 interacts with DPPG lipids but not with DPPC, suggesting that negatively charged phospholipid head groups contribute to the membrane interactions with TatA.

Towards understanding the Tat translocation mechanism through structural and biophysical studies of the amphipathic region of TatA from Escherichia coli.

Le syst&egrave;me de double-arginine translocase (Tat) est utilis&eacute; par beaucoup de bact&eacute;ries et de plantes &agrave; d&eacute;placer les prot&eacute;ines repli&eacute;es &agrave; travers la membrane cytoplasmique ou thylako&iuml;des. Dans la plupart des bact&eacute;ries, la prot&eacute;ine de TatA est cens&eacute;e former un pore d&eacute;fini dans la membrane par l&#39;interm&eacute;diaire de homo-oligom&eacute;risation avec autres protom&egrave;res de TatA. La structure secondaire pr&eacute;dite de TatA comprend une h&eacute;lice transmembranaire, une h&eacute;lice amphipathique et une r&eacute;gion C-terminale non structur&eacute;e. Ici biophysiques et structurelles des enqu&ecirc;tes ont &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;es sur un peptide synth&eacute;tique repr&eacute;sentant la r&eacute;gion d&#39;amphipathic de TatA (r&eacute;sidus de 22 &agrave; 44, abr&eacute;g&eacute; TatAH2). La r&eacute;gion C-terminale de TatA (r&eacute;sidus 44-89) a d&eacute;j&agrave; &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e pour &ecirc;tre accessible des deux c&ocirc;t&eacute;s du cytoplasme et p&eacute;riplasmiques de la membrane que lorsque le potentiel de membrane est intact, ce qui sugg&egrave;re la d&eacute;pendance &agrave; l&#39;&eacute;gard de sa topologie une membrane sous tension (Chan et al., 2007 biochimie 46:7396-404). Cette observation sugg&egrave;re que la r&eacute;gion de TatAH2 aurait des interactions lipides unique qui peuvent &ecirc;tre li&eacute;es &agrave; la fonction de TatA durant la translocation et ainsi justifi&eacute; davantage d&#39;enqu&ecirc;tes. RMN et spectroscopie de CD de TatAH2 montrent qu&#39;il adopte une structure h&eacute;lico&iuml;dale principalement dans un environnement membranaire tout en restant non structur&eacute;es en solution aqueuse. &Eacute;tudes de calorim&eacute;trie &agrave; balayage diff&eacute;rentiel r&eacute;v&egrave;lent &eacute;galement que TatAH2 interagit avec des lipides DPPG, mais pas avec la DPPC, sugg&eacute;rant que n&eacute;gativement charg&eacute;e groupes de t&ecirc;te de phospholipides contribuent aux interactions membrane avec TatA.

Vers la compr&eacute;hension du m&eacute;canisme de translocation de Tat par le biais des &eacute;tudes structurales et biophysiques de la r&eacute;gion d&#39;amphipathic de TatA d&#39;Escherichia coli.

Das Zweibettzimmer-Arginin-Translokase (Tat)-System wird von vielen Bakterien und Pflanzen verwendet, gefaltete Proteine &uuml;ber die zytoplasmatische oder Thylakoid Membrane bewegen. In den meisten Bakterien wird das TatA-Protein geglaubt, um eine definierte Pore in der Membran durch Homo-Oligomerisierung mit anderen TatA Protomers zu bilden. Die vorhergesagte Sekund&auml;rstruktur von TatA umfasst eine Transmembran-Helix, ein amphipathische Helix und eine unstrukturierte C-terminalen Region. Hier wurden die biophysikalische und strukturelle Untersuchungen auf ein synthetisches Peptid, darstellen AMPHIPHILE Region von TatA (R&uuml;ckst&auml;nde 22 bis 44, abgek&uuml;rzt TatAH2) durchgef&uuml;hrt. Die C-terminalen Region TatA (R&uuml;ckst&auml;nde 44-89) wurde zuvor gezeigt, dass die zytoplasmatische und periplasmatischen beiderseits der Membran zug&auml;nglich sein, nur, wenn die Membran potenzielle intakt, Abh&auml;ngigkeit ihrer Topologie ein energetisiertes Membran vorgeschlagen wurde (Chan Et Al. 2007 Biochemie 46:7396-404). Diese Beobachtung legt nahe, dass die TatAH2-Region einzigartige Lipid Interaktionen haben w&uuml;rde, die auf die Funktion der TatA w&auml;hrend der Translokation bezogen werden kann und somit gerechtfertigt weitere Untersuchungen. NMR und CD-Spektroskopie der TatAH2 zeigen, dass es eine &uuml;berwiegend spiralf&ouml;rmige Struktur in einer Membran-Umgebung annimmt, w&auml;hrend die &uuml;brigen unstrukturierter in w&auml;ssriger L&ouml;sung. Differenzielle Scan Kalorimetrie Studien zeigen auch, dass TatAH2 mit DPPG Lipide interagiert, aber keine DPPC, darauf hindeutet, dass negativ angelastet, dass die Membran-Interaktionen mit TatA Phospholipid Kopf Gruppen beitragen.

In Richtung zum Verst&auml;ndnis des Tat Translokation Mechanismus durch strukturelle und biophysikalischen Studien des Gebietes AMPHIPHILE von TatA aus Escherichia coli.

Il sistema twin-arginina traslocasi (Tat) &egrave; usato da molti batteri e piante per spostare piegate proteine attraverso la membrana citoplasmatica o tilacoide. Nella maggior parte dei batteri, si ritiene che la proteina TatA formano un poro definito nella membrana attraverso homo-oligomerizzazione con altri protomers TatA. La struttura secondaria prevista di TatA include un&#39;elica del transmembrane, un&#39;elica di amphipathic e una regione C-terminale non strutturata. Qui le indagini biofisiche e strutturali sono state eseguite su un peptide sintetico che rappresenta l&#39;area di amphipathic di TatA (residui 22 a 44, abbreviato TatAH2). La regione C-terminale della TatA (residui 44-89) precedentemente &egrave; stata indicata per essere accessibile da entrambi i lati periplasmici e citoplasmatici della membrana solo quando il potenziale di membrana era intatto, suggerendo la dipendenza della sua topologia su una membrana eccitata (Chan et al. 2007 biochimica 46:7396-404). Tale osservazione suggerisce che la regione TatAH2 avrebbe interazioni lipidi uniche che possono essere correlate alla funzione di TatA durante la traslocazione e cos&igrave; garantito ulteriori indagini. NMR e CD spettroscopia di TatAH2 mostrano che esso adotta una struttura prevalentemente elicoidale in un ambiente di membrana pur rimanendo non strutturati in soluzione acquosa. Scansione calorimetria differenziale studi rivelano anche che TatAH2 interagisce con i lipidi DPPG ma non con DPPC, suggerendo che negativamente caricato gruppi testa fosfolipide contribuiscono alle interazioni membrana con TatA.

Verso la comprensione del meccanismo di traslocazione Tat attraverso studi strutturali e biofisici della regione amphipathic di TatA da Escherichia coli.

&#x30C4;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; translocase (Tat) &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x3084;&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x6298;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30C1;&#x30E9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x819C;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x79FB;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x3001;&#x30BF;&#x30BF; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x819C;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x30DB;&#x30E2; &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30E1;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4ED6;&#x30BF;&#x30BF; protomers &#x3067;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x5B54;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30BF;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306E;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3001;&#x4E21;&#x89AA;&#x5A92;&#x6027;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x975E;&#x69CB;&#x9020;&#x5316;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x5E74;&#x4F1A;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x8ABF;&#x67FB;&#x30BF;&#x30BF; &#xFF08;&#x6B8B;&#x57FA; 22 &#x306B; 44&#x3001;&#x7565;&#x79F0; TatAH2&#xFF09; &#x306E;&#x4E21;&#x89AA;&#x5A92;&#x6027;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x5408;&#x6210;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30BF; (&#x6B8B;&#x7559; 44 89) &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x4EE5;&#x524D;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x901A;&#x96FB;&#x819C;&#x305D;&#x306E;&#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x5834;&#x5408;&#x306E;&#x307F;&#x819C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3068;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x4E21;&#x5074;&#x304B;&#x3089;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F; (&#x3061;&#x3083;&#x3093; et al. 2007 &#x751F;&#x5316;&#x5B66; 46:7396 404)&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x89B3;&#x6E2C; TatAH2 &#x5730;&#x57DF;&#x30BF;&#x30BF;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x8EE2;&#x6D41;&#x4E2D;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x8102;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NMR &#x3068; CD &#x5206;&#x5149; TatAH2 &#x306E;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3067;&#x69CB;&#x9020;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x4E2D;&#x3092;&#x4E3B;&#x306B;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB;&#x69CB;&#x9020;&#x819C;&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x63A1;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5DEE;&#x5206;&#x8D70;&#x67FB;&#x71B1;&#x91CF;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x7814;&#x7A76;&#x3067; TatAH2 DPPG &#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x3001;DPPC &#x3068;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x30D8;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; &#x30BF;&#x30BF;&#x3068;&#x819C;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x6599;&#x91D1;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30BF;&#x306E;&#x4E21;&#x89AA;&#x5A92;&#x6027;&#x5730;&#x57DF;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066; Tat &#x8EE2;&#x6D41;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306E;&#x65B9;&#x3002;

&#xD2B8;&#xC708;-&#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; translocase (Tat) &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB610;&#xB294; thylakoid &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC811;&#xD78C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB3D9; &#xB9CE;&#xC740; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC640; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xD0C0; &#xD0C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E4;&#xB978; &#xD0C0; &#xD0C0; protomers&#xC640; &#xD638;&#xBAA8;-oligomerization&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC5EC;&#xACA8;&#xC9C4;&#xB2E4;. Tata&#xC758; &#xC608;&#xCE21; &#xB41C; &#xC774;&#xCC28; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB098;&#xC120;, amphipathic &#xB098;&#xC120; &#xAD6C;&#xC870;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB4F1;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xAD6C;&#xC870; &#xC870;&#xC0AC;&#xB294; &#xD0C0; &#xD0C0; (&#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 22 44, &#xC57D;&#xC2DD;&#xB41C; TatAH2)&#xC758; amphipathic &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD569;&#xC131; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD0C0; &#xD0C0; (&#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 44-89)&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC601;&#xC5ED; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xB9C9;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xACFC; periplasmic &#xC591;&#xCABD; &#xBAA8;&#xB450;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC740; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0; &#xC758;&#xC874;&#xB3C4; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC92C;&#xB358; (&#xCC2C; &#xC678;. 2007 &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; 46: 7396-404). &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; TatAH2 &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC804; &#xC911; &#xD0C0; &#xD0C0; &#xD568;&#xC218; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xCD94;&#xAC00; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC99D; &#xD558;&#xB294; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. NMR &#xBC0F; Tatah2&#xC758; CD &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xD45C;&#xC2DC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC218; &#xC6A9;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xC870;&#xD654; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xB9C9; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xAD6C;&#xC870; &#xCC44;&#xD0DD;. &#xCC28;&#xB3D9; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xC5F4; &#xB7C9; &#xCE21;&#xC815; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; Tatah2&#xC640; DPPG &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; DPPC, &#xD568;&#xAED8; &#xD558;&#xB294; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xCCAD;&#xAD6C; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xBA38;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB8F9; &#xD0C0; &#xD0C0; &#xB9C9; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xACF5;&#xAC1C;.

&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD0C0; &#xD0C0; amphipathic &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBB38;&#xC2E0; &#xC804; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574;.

El sistema de doble-arginina translocasa (Tat) es utilizado por muchas bacterias y plantas para mover prote&iacute;nas plegadas a trav&eacute;s de la membrana citoplasm&aacute;tica o tilacoides. En la mayor&iacute;a de las bacterias, la prote&iacute;na de TatA se cree que forman un poro definido en la membrana a trav&eacute;s de homo-Oligomerizaci&oacute;n con otros prot&oacute;meros de TatA. La estructura secundaria predicha de TatA incluye una h&eacute;lice transmembrana, una h&eacute;lice anfip&aacute;ticos y una regi&oacute;n c-terminal no estructurada. Aqu&iacute; se realizaron investigaciones biof&iacute;sicas y estructurales en un p&eacute;ptido sint&eacute;tico que representa la regi&oacute;n anfip&aacute;ticos de TatA (residuos de 22 a 44, abreviado TatAH2). La regi&oacute;n c-terminal de TatA (residuos 44-89) previamente fue demostrada para ser accesibles desde los lados de la membrana citoplasm&aacute;ticos y periplasmic s&oacute;lo cuando el potencial de membrana estaba intacta, sugiriendo la dependencia de su topolog&iacute;a de una membrana energizada (Chan et al. 2007 bioqu&iacute;mica 46:7396-404). Tal observaci&oacute;n sugiere que la regi&oacute;n de TatAH2 tendr&iacute;a interacciones l&iacute;pido &uacute;nica que pueden estar relacionado con la funci&oacute;n de TatA durante el desplazamiento y as&iacute; una garant&iacute;a m&aacute;s investigaciones. RMN y espectroscopia de CD de TatAH2 muestran que adopta una estructura helicoidal predominante en un entorno de membrana permaneciendo no estructurados en soluci&oacute;n acuosa. Estudios de calorimetr&iacute;a de barrido diferencial tambi&eacute;n revelan que TatAH2 interact&uacute;a con los l&iacute;pidos DPPG pero no con DPPC, sugiriendo negativamente cargado grupos principal fosfol&iacute;pido contribuyen a las interacciones de la membrana con TatA.

Hacia la comprensi&oacute;n del mecanismo de desplazamiento de Tat a trav&eacute;s de estudios estructurales y biof&iacute;sicos de la regi&oacute;n anfip&aacute;ticos de TatA de Escherichia coli.

&#x4E00;&#x4F53;&#x5F0F;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x90FD;&#x5F88;&#x96BE;&#x4E0E;&#x751F;&#x5316;&#x9274;&#x4E8E;&#x5176;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x7684;&#x6027;&#x8D28; &#xFF1B;nanodisc &#x7ED5;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x53CC;&#x5C42;&#x5C0F;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x7684;&#x56F0;&#x96BE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; nanodiscs &#x57FA;&#x4E8E; SILAC &#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7ED3;&#x5408;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x6807;&#x8BC6;&#x51E0;&#x4E4E;&#x4EFB;&#x4F55;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4F19;&#x4F34;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD0;&#x7528;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7EC6;&#x83CC; SecYEG &#x86CB;&#x767D;&#x8FDB;&#x884C;&#x901A;&#x9053; MalFGK(2) &#x9EA6;&#x82BD;&#x7CD6;&#x519C;&#x7528;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8F66;&#x548C;&#x819C;&#x6574;&#x5408;&#x9176; YidC&#x3002;&#x4E0E;&#x6D17;&#x6DA4;&#x5242;&#x675F;&#xFF0C;&#x5F80;&#x5F80;&#x4F1A;&#x7834;&#x574F;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;nanodisc &#x5F97;&#x4EE5;&#x4ECE;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x6355;&#x6349;&#x8D5B;&#x5EB7;&#x3001; Syd &#x548C;&#x7537;&#x6027;&#x4E0E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7684;&#x4FE1;&#x5FC3;&#x548C;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x4E0D;&#x591F;&#x654F;&#x611F;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x5149;&#x76D8;&#x548C;&#x6587;&#x5316;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x6210;&#x5206;&#x5206;&#x79BB;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x975E;&#x540C;&#x5C0F;&#x53EF;&#x3002;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7167;&#x7247;&#x4EA4;&#x53C9;&#x94FE;&#x63A5;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;YidC &#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x8868;&#x660E;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6E38;&#x79BB;&#x6216;&#x5468;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E09;&#x4E2A;&#x793A;&#x4F8B;&#x8BF4;&#x660E;&#x7EB3;&#x7C73;&#x8102;&#x8D28;&#x53CC;&#x5C42;&#x786E;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x96C6;&#x6210;&#x5728;&#x8102;&#x53CC;&#x5C42;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x7684;&#x5916;&#x56F4;&#x4F19;&#x4F34;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

Nanodiscs &#x548C;&#x57FA;&#x4E8E; SILAC &#x7684;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; Interactome&#x3002;

Integral membrane proteins are challenging to work with biochemically given their insoluble nature; the nanodisc circumvents the difficulty by stabilizing them in small patches of lipid bilayer. Here, we show that nanodiscs combined with SILAC-based quantitative proteomics can be used to identify the soluble interacting partners of virtually any membrane protein. As a proof of principle, we applied the method to the bacterial SecYEG protein-conducting channel, the maltose transporter MalFGK(2) and the membrane integrase YidC. In contrast to the detergent micelles, which tend to destabilize interactions, the nanodisc was able to capture out of a complex whole cell extract the proteins SecA, Syd, and MalE with a high degree of confidence and specificity. The method was sensitive enough to isolate these interactors as a function of the lipid composition in the disc and the culture conditions. In agreement with a previous photo-cross linking analysis, YidC did not show any high-affinity interactions with cytosolic or periplasmic proteins. These three examples illustrate the utility of nanoscale lipid bilayers to identify the soluble peripheral partners of proteins intergrated in the lipid bilayer.

Nanodiscs and SILAC-Based Mass Spectrometry to Identify a Membrane Protein Interactome.

Les prot&eacute;ines membranaires intrins&egrave;ques sont difficiles &agrave; travailler avec biochimiquement &eacute;tant donn&eacute; leur nature insoluble ; le nanodisc contourne la difficult&eacute; en stabilisant les en petites parcelles de la bicouche lipidique. Ici, nous montrons que nanodiscs combin&eacute;e &agrave; la prot&eacute;omique quantitative SILAC-bas&eacute; peut servir &agrave; identifier les partenaires qui interagissent solubles de pratiquement n&#39;importe quelle prot&eacute;ine membranaire. Comme une preuve de principe, nous avons appliqu&eacute; la m&eacute;thode sur le canal de conduction prot&eacute;ine bact&eacute;rien SecYEG, le transporteur de maltose MalFGK(2) et de l&#39;int&eacute;grase de membrane YidC. Par contraste avec les micelles de d&eacute;tergents, qui tendent &agrave; d&eacute;stabiliser les interactions, le nanodisc a pu capturer dans un extrait cellulaire complexe des prot&eacute;ines SecA, Syd et m&acirc;le avec un degr&eacute; &eacute;lev&eacute; de confiance et de la sp&eacute;cificit&eacute;. La m&eacute;thode &eacute;tait assez sensible pour isoler ces interacteurs en fonction de la composition des lipides dans le disque et les conditions de culture. En accord avec une pr&eacute;c&eacute;dente analyse de liaison de photo-Croix, YidC n&#39;a pas montr&eacute; les interactions de haute affinit&eacute; avec des prot&eacute;ines cytosoliques ou p&eacute;riplasmiques. Ces trois exemples illustrent l&#39;utilit&eacute; des bicouches lipidiques nanom&eacute;triques pour identifier les partenaires p&eacute;riph&eacute;riques solubles de prot&eacute;ines int&eacute;gr&eacute;s dans la bicouche lipidique.

Nanodiscs et SILAC bas&eacute;e sur la spectrom&eacute;trie de masse pour identifier un Interactome de prot&eacute;ines membranaires.

Integrale Membranproteine sind herausfordernde Arbeit mit biochemisch angesichts ihrer unl&ouml;sliche Natur; die Nanodisc umgeht die Schwierigkeiten von ihnen in kleinen Flecken von Lipid Bilayer zu stabilisieren. Hier zeigen wir, dass Nanodiscs kombiniert mit SILAC-basierte quantitative Proteomik verwendet werden kann, um die l&ouml;slichen interagierenden Partner nahezu jedes Membranprotein zu identifizieren. Als Beweis des Prinzips wir die Methode auf der bakteriellen SecYEG Protein leitenden Kanal angewendet, die Maltose-Transporter MalFGK(2) und die Membran Integrase YidC. Im Gegensatz zu den Sp&uuml;lmittel Mizellen, die tendenziell Interaktionen zu destabilisieren, konnte die Nanodisc aus einem komplexen ganzen Zelle-Extrakt der Proteine, SecA, Syd und M&auml;nnchen mit einem hohen Ma&szlig; an Vertrauen und Spezifit&auml;t erfassen. Die Methode war empfindlich genug, um diese Interaktoren als Funktion der Lipid-Komposition in die Scheibe und die Kulturbedingungen zu isolieren. Im Einvernehmen mit einer fr&uuml;heren Foto-Cross-Link-Analyse zeigte YidC keine hoher Affinit&auml;t Wechselwirkungen mit zellul&auml;ren oder periplasmatischen Proteinen. Diese drei Beispiele verdeutlichen den Nutzen von nanoskaligen Lipid-Doppelschichten um die l&ouml;slichen periphere Partner von Proteinen in der Lipid-Bilayer integriertes zu identifizieren.

Nanodiscs und SILAC-basierte Massenspektrometrie eine Membrane Protein Interaktom zu identifizieren.

Proteine integrali di membrana sono difficili da lavorare con biochimicamente data la loro natura insolubile; il nanodisc aggira la difficolt&agrave; da loro stabilizzazione in piccole chiazze del doppio strato lipidico. Mostriamo qui, che nanodiscs combinato con SILAC-basato proteomica quantitativa pu&ograve; essere utilizzato per identificare il partner interagenti solubile di praticamente qualsiasi proteina di membrana. Come prova di principio, abbiamo applicato il metodo batterico SecYEG protein-conducendo canale, il trasportatore di maltosio MalFGK(2) e la membrana integrase YidC. In contrasto con i detergente micelle, che tendono a destabilizzare le interazioni, il nanodisc &egrave; stato in grado di catturare fuori un Estratto delle cellule intero complesso delle proteine SecA, Syd e maschio con un alto grado di fiducia e di specificit&agrave;. Il metodo &egrave; stato abbastanza sensibile per isolare questi interattori in funzione della composizione lipidica in disco e le condizioni di coltura. D&#39;accordo con un precedente foto-cross linking analisi, YidC non ha mostrato alcun interazioni ad alta affinit&agrave; con le proteine citosoliche o periplasmica. Questi tre esempi illustrano l&#39;utilit&agrave; della nanoscala lipidici per identificare i partner solubili periferici delle proteine integrate nel doppio strato lipidico.

Nanodiscs e SILAC-basa la spettrometria di massa per identificare un Interactome di proteine di membrana.

&#x7A4D;&#x5206;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x4F5C;&#x696D;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x3057;&#x3066;;&#x30CA;&#x30CE;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x306E;&#x78C1;&#x6027;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x96E3;&#x3057;&#x3055;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x4E0A;&#x3042;&#x3089;&#x3086;&#x308B;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B; SILAC &#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F; nanodiscs &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x539F;&#x5247;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; MalFGK(2) &#x3068;&#x819C;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; YidC &#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x7D30;&#x83CC;&#x819C;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x50BE;&#x5411;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x6D17;&#x5264;&#x306E;&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x5BFE;&#x7167;&#x3092;&#x306A;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30CA;&#x30CE;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x306E;&#x78C1;&#x6027;&#x304B;&#x3089;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5168;&#x4F53;&#x30BB;&#x30EB;&#x62BD;&#x51FA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; SecA&#x3001;&#x30B7;&#x30C9;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7537;&#x6027;&#x81EA;&#x4FE1;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x5B66;&#x4F4D;&#x3092;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x3068;&#x57F9;&#x990A;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x654F;&#x611F;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x5199;&#x771F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9; &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x306E;&#x5951;&#x7D04; YidC &#x4EFB;&#x610F;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30CA;&#x30CE;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x819C;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x819C;&#x306B;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x672B;&#x68A2;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 3 &#x3064;&#x306E;&#x4F8B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Nanodiscs &#x3068; SILAC &#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD1B5;&#xD569; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xC0C1; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131;; &#xC791;&#xC5C5;&#xD560; &#xB3C4;&#xC804; nanodisc &#xC9C0;&#xC9C8; bilayer&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xD328;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0;&#xC744; &#xD53C;&#xD560;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; nanodiscs &#xB2E8;&#xAE30; &#xAE30;&#xBC18; &#xC591;&#xC801; proteomics&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xC138;&#xADE0; SecYEG &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xCC44;&#xB110; &#x82BD; &#xC804;&#xC1A1; MalFGK(2) &#xACE0; &#xB9C9; integrase YidC. &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC774; &#xC138;&#xC81C; micelles &#xB2EC;&#xB9AC;&#xB294; nanodisc &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; SecA, &#xC2DC;&#xB4DC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xC640; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xD559;&#xC704;&#xB97C; &#xAC00;&#xC9C4; &#xB0A8;&#xC131; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC138;&#xD3EC; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCEA1;&#xCC98;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC778;&#xD130; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; &#xBB38;&#xD654; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC870;&#xC131;&#xC758; &#xD568;&#xC218;&#xB85C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;. &#xC774;&#xC804; &#xC0AC;&#xC9C4;-&#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xB9C1;&#xD06C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744;&#xC640; Yidc&#xB294; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; cytosolic &#xB610;&#xB294; periplasmic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC608; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayer &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB098;&#xB178; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayers &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nanodiscs &#xBC0F; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xB2E8;&#xAE30; &#xAE30;&#xBC18; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Prote&iacute;nas de membrana integral est&aacute;n desafiando a trabajar con bioqu&iacute;micamente, dada su naturaleza insoluble; el nanodisc evita la dificultad les estabilizando en peque&ntilde;os parches de la bicapa lip&iacute;dica. A continuaci&oacute;n, os mostramos que nanodiscs combinado con prote&oacute;mica cuantitativa basadas en el est&aacute;ndar puede utilizarse para identificar a los socios interact&uacute;an solubles de pr&aacute;cticamente cualquier prote&iacute;na de membrana. Como una prueba del principio, aplicamos el m&eacute;todo en el canal de prote&iacute;na-realizaci&oacute;n de SecYEG bacteriano, el transportador de maltosa MalFGK(2) y la integrasa de membrana YidC. A diferencia de las micelas de detergentes, que tienden a desestabilizar las interacciones, la nanodisc fue capaz de captar de un extracto de c&eacute;lulas enteras complejo las prote&iacute;nas SecA, Syd y hombre con un alto grado de confianza y especificidad. El m&eacute;todo era lo suficientemente sensible para aislar a estos interactianos en funci&oacute;n de la composici&oacute;n de l&iacute;pidos en el disco y las condiciones de cultivo. De acuerdo con un an&aacute;lisis previo de enlace de foto-Cruz, YidC no mostraron ninguna interacci&oacute;n de alta afinidad con prote&iacute;nas citos&oacute;licas o periplasmic. Estos tres ejemplos ilustran la utilidad de bicapas lip&iacute;dicas de nanoescala para identificar a los socios perif&eacute;ricos solubles de prote&iacute;nas integrados en la bicapa lip&iacute;dica.

Nanodiscs y espectrometr&iacute;a de masas basadas en el est&aacute;ndar para identificar un interactoma de prote&iacute;nas de membrana.

The SecA ATPase associates with the SecY complex to push preproteins across the bacterial membrane. Because a single SecY is sufficient to create the conducting channel, the function of SecY oligomerization remains unclear. Here, we have analyzed the translocation reaction using nanodiscs. We show that one SecY copy is sufficient to bind SecA and the preprotein, but only the SecY dimer together with acidic lipids supports the activation of the SecA translocation ATPase. In discs, the dimer is predominantly arranged in a back-to-back manner and remains active even if a constituent SecY copy is defective for SecA binding. In membrane vesicles and in intact cells, the coproduction of two inactive SecYs, one for channel gating and the other for SecA binding, recreates a functional translocation unit. These results indisputably argue that the SecY dimer is crucial for the activation of SecA, which is necessary for preprotein transport.

Two copies of the SecY channel and acidic lipids are necessary to activate the SecA translocation ATPase.

&#x8D5B;&#x5EB7; ATPase &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x590D;&#x6742; SecY preproteins &#x63A8;&#x8DE8;&#x4F7F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5355;&#x4E2A; SecY &#x8DB3;&#x4EE5;&#x521B;&#x5EFA;&#x7684;&#x5BFC;&#x7535;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;SecY &#x9F50;&#x805A;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528; nanodiscs &#x7684;&#x6613;&#x4F4D;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x4E00;&#x4E2A; SecY &#x526F;&#x672C;&#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8D5B;&#x5EB7;&#x548C; preprotein&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EA;&#x4E0E;&#x9178;&#x6027;&#x8840;&#x8102; SecY &#x805A;&#x652F;&#x6301;&#x8D5B;&#x5EB7;&#x6613;&#x4F4D; ATPase &#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x5728;&#x5149;&#x76D8;&#x4E0A;&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x4EE5;&#x80CC;&#x5BF9;&#x80CC;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6392;&#x5217;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4ECD;&#x5904;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x7EC4;&#x6210; SecY &#x526F;&#x672C;&#x662F;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x8D5B;&#x5EB7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x5728;&#x819C;&#x56CA;&#x6CE1;&#x548C;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5408;&#x62CD;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8; SecYs&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7528;&#x4E8E;&#x901A;&#x9053;&#x95E8;&#x63A7;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x8D5B;&#x5EB7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5C06;&#x91CD;&#x65B0;&#x521B;&#x5EFA;&#x529F;&#x80FD;&#x6613;&#x4F4D;&#x80A1;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x65E0;&#x53EF;&#x8FA9;&#x79F0; SecY &#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x8D5B;&#x5EB7;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;

&#x9700;&#x8981;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8D5B;&#x5EB7;&#x6613;&#x4F4D; ATPase SecY &#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x9178;&#x6027;&#x8840;&#x8102;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x526F;&#x672C;&#x3002;

Le SecA ATPase associe la SecY complexe pour pousser les pr&eacute;prot&eacute;ines &agrave; travers la membrane bact&eacute;rienne. Car un seul SecY est suffisante pour cr&eacute;er le canal conducteur, la fonction d&#39;oligom&eacute;risation SecY reste peu claire. Ici, nous avons analys&eacute; la r&eacute;action de translocation &agrave; l&#39;aide de nanodiscs. Nous montrons qu&#39;un exemplaire de SecY est suffisant pour lier SecA et le pr&eacute;-prot&eacute;ine, mais seulement le dim&egrave;re SecY avec lipides acides prend en charge l&#39;activation de la translocation de SecA ATPase. Dans les disques, le dim&egrave;re est principalement dispos&eacute; de mani&egrave;re &agrave; dos &agrave; dos et reste actif m&ecirc;me si une copie de SecY constitutive est d&eacute;fectueuse pour la liaison de SecA. Dans les v&eacute;sicules membranaires et dans les cellules intactes, la coproduction de deux SecYs inactifs, un pour le blocage du canal et l&#39;autre pour la liaison de la SecA, recr&eacute;e une unit&eacute; fonctionnelle de translocation. Ces r&eacute;sultats soutiennent incontestablement que le dim&egrave;re SecY est crucial pour l&#39;activation de la SecA, qui est n&eacute;cessaire pour le transport pr&eacute;prot&eacute;ines.

Deux exemplaires du chenal SecY et lipides acides sont n&eacute;cessaires pour activer la translocation de SecA ATPase.

Die SecA-ATPase ordnet die komplexe SecY, um Preproteins &uuml;ber die bakterielle Membran zu dr&uuml;cken. Da ein einzelnes SecY ausreichen, um den leitenden Kanal zu erstellen ist, bleibt die Funktion des SecY Oligomerisierung unklar. Hier haben wir die Translokation-Reaktion mit Nanodiscs analysiert. Wir zeigen, dass eine SecY Kopie reicht, SecA und die Preprotein zu binden, sondern nur die SecY Dimer zusammen mit sauren Lipiden die Aktivierung der SecA-Translokation ATPase unterst&uuml;tzt. In Scheiben die Dimer ist &uuml;berwiegend in gewissem Sinne hintereinander angeordnet und bleibt aktiv, auch wenn eine konstituierende SecY-Kopie f&uuml;r SecA Bindung defekt ist. Membran Vesikel und intakten Zellen kann die Koproduktion von zwei inaktiven SecYs, eine f&uuml;r Kanal Anschnitt- und die andere f&uuml;r SecA-Bindung, eine funktionale Translokation-Einheit. Diese Ergebnisse argumentieren unbestreitbar, dass die SecY-Dimer entscheidend f&uuml;r die Aktivierung von SecA ist, zum preprotein Transport erforderlich ist.

Zwei Kopien der SecY Kanal und sauren Lipiden sind notwendig, um die SecA-Translokation ATPase zu aktivieren.

L&#39;atpasi SecA associa il complesso SecY a spingere preproteins attraverso la membrana batterica. Perch&eacute; un singolo SecY &egrave; sufficiente per creare il canale di conduzione, la funzione di oligomerizzazione SecY rimane poco chiara. Qui, abbiamo analizzato la reazione di traslocazione utilizzando nanodiscs. Mostriamo che &egrave; sufficiente associare SecA e il preprotein uno SecY copia, ma solo il dimero SecY insieme ai lipidi acidi supporta l&#39;attivazione di traslocazione SecA ATPasi. Nei dischi, il dimero &egrave; prevalentemente organizzato in maniera back to back e rimane attivo anche se una copia SecY costituente &egrave; difettosa per l&#39;associazione SecA. In vescicole di membrana in cellule intatte, la coproduzione di due SecYs inattivo, uno per canale gating e l&#39;altro per l&#39;associazione SecA, ricrea un&#39;unit&agrave; funzionale traslocazione. Questi risultati sostengono incontestabilmente che il dimero SecY &egrave; cruciale per l&#39;attivazione del SecA, che &egrave; necessario per il trasporto preprotein.

Due copie del canale SecY e lipidi acidi sono necessarie per attivare la traslocazione SecA ATPasi.

Preproteins &#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x819C;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30D7;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; SecY &#x30BB;&#x30AB; ATPase &#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x4E00; SecY &#x4F1D;&#x5C0E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x306E;&#x3067;&#x3001;SecY &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30E1;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;nanodiscs &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SecY &#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x306F; 1 &#x3064;&#x304C;&#x30E9;&#x30B0;&#x30CA;&#x30BB;&#x30AB;&#x3068; preprotein&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;SecY &#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x9178;&#x6027;&#x8102;&#x8CEA;&#x3068;&#x5171;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x30BB;&#x30AB;&#x8EE2;&#x5EA7; ATPase &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x3001;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C4;&#x30FC; &#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x5185;&#x5728; SecY &#x30B3;&#x30D4;&#x30FC; &#x30BB;&#x30AB; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x6B20;&#x9665;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3067;&#x3082;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3002;&#x819C;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306A;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x958B;&#x9589;&#x7528;&#x3068;&#x4ED6;&#x30BB;&#x30AB; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A; SecYs &#x306E;&#x5171;&#x540C;&#x5236;&#x4F5C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x518D;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x5A9A; SecY &#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; preprotein &#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x306B;&#x30BB;&#x30AB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3060;&#x3068;&#x4E3B;&#x5F35;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SecY &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9178;&#x6027;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x304C; atp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; SecA &#x8EE2;&#x6D41;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

SecA ATPase &#xC138;&#xADE0; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; preproteins &#xBC00;&#xC5B4; SecY &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; SecY &#xC804;&#xB3C4; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC218; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;, SecY oligomerization &#xD568;&#xC218; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; nanodiscs&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804; &#xBC18;&#xC751; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD558;&#xB098;&#xC758; SecY &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; SecA &#xBC0F; preprotein, &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC0B0; &#xC131; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD568;&#xAED8; SecY dimer SecA &#xC804; Atpase&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C;, &#xC5EC; dimer &#xC8FC;&#xB85C; &#xC5F0;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB82C; &#xD558; &#xACE0; &#xAD6C;&#xC131; SecY &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; SecA &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xD65C;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C9; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC640; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; SecYs, &#xCC44;&#xB110; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xBC0F; SecA &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xD504;&#xB80C;&#xC988; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC804; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC5EC; &#xC9C0; SecY dimer&#xB294; SecA, &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; preprotein &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC8FC;&#xC7A5; &#xD55C;&#xB2E4;.

SecY &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; &#xC0B0; &#xC131; &#xC9C0;&#xC9C8;&#xC758; &#xB450; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8;&#xC740; SecA &#xC804; Atpase&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;.

La ATPasa SecA se asocia con el complejo SecY hacer preproteins a trav&eacute;s de la membrana bacteriana. Porque una sola SecY es suficiente para crear el canal de conducci&oacute;n, la funci&oacute;n de Oligomerizaci&oacute;n de SecY sigue siendo confusa. Aqu&iacute;, hemos analizado la reacci&oacute;n de desplazamiento utilizando nanodiscs. Demostramos que una copia de SecY es suficiente para enlazar la SecA y la preprotein, pero s&oacute;lo el d&iacute;mero SecY junto con &aacute;cidos l&iacute;pidos apoya la activaci&oacute;n de la translocaci&oacute;n de SecA ATPasa. En discos, el d&iacute;mero predominante se arregla de manera contigua y permanece activo, aunque una copia SecY constituyente es defectuosa para atar SecA. En ves&iacute;culas de membrana y en las c&eacute;lulas intactas, la coproducci&oacute;n de dos SecYs inactivos, uno para bloquear el canal y el otro para el atascamiento de la SecA, recrea una unidad funcional de la translocaci&oacute;n. Estos resultados indiscutiblemente argumentan que el d&iacute;mero SecY es esencial para la activaci&oacute;n de SecA, que es necesario para el transporte preprotein.

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Twin-arginine translocase may have a role in the chaperone function of NarJ from Escherichia coli. Biochemical and biophysical research communications\| PubMed ID: 16540088	2006
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Catherine S. Chan

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