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Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of <em>Arabidopsis thaliana</em>

Protoplasts are plant cells that have had their cell walls enzymatically removed. Isolation of protoplasts  from different plant tissues was first ...

Cornell University

&#x87AF;&#x5408;&#x9176;&#x662F;&#x8D1F;&#x8D23;&#x4ECE;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x786B;&#x9187;&#x7684;&#x91CD;&#x578B;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7ED3;&#x5408;&#x80BD; (&#x87AF;) &#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x9176;&#x3002;&#x5B83;&#x6700;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x5B83;&#x4E0D;&#x53EA;&#x5C40;&#x9650;&#x4E8E;&#x690D;&#x7269;&#x548C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x771F;&#x83CC;&#xFF0C;&#x4E00;&#x6B21;&#x601D;&#x60F3;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD8;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6212;&#x6BD2;&#x6A21;&#x5F0F;&#x52A8;&#x7269;&#x7EBF;&#x866B;&#x4E2D;&#x5177;&#x6709;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x53CA;&#x5176;&#x4ED6;&#x8868;&#x660E;&#x87AF;&#x5408;&#x9176;&#x7F16;&#x7801;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x51E0;&#x79CD;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x75C5;&#x539F;&#x7EBF;&#x866B;&#x3001; &#x8840;&#x5438;&#x866B;&#x3001; &#x86D4;&#x866B;&#x3001; &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5148;&#x9A71;&#x87AF;&#x5408;&#x80BD;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C0F;&#x8BF4; post-translationally &#x5408;&#x6210;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x65B0;&#x65F6;&#x4EE3;&#x5C06;&#x53EA;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E0D;&#x5728;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x4FEE;&#x590D;&#x6280;&#x672F;&#x4E5F;&#x4ECE;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5B66;&#x89D2;&#x5EA6;&#x6765;&#x770B;&#x3002;

&#x8815;&#x866B;&#x91C7;&#x53D6; &#39;&#x690D;&#x7269;&#39; &#x51FA; &#39;&#x87AF;&#39;&#x3002;

Phytochelatin synthase is the enzyme responsible for the synthesis of heavy-metal-binding peptides (phytochelatins) from glutathione and related thiols. It has recently been determined that it is not only restricted to plants and some fungi, as was once thought, but also has an essential role in heavy-metal detoxification in the model nematode Caenorhabditis elegans. These findings and others that demonstrate phytochelatin synthase-coding sequences in the genomes of several other invertebrates, including pathogenic nematodes, schistosomes and roundworms, herald a new era in phytochelatin research, in which these novel post-translationally synthesized peptides will not only be investigated in the context of phytoremediation but also from a clinical parasitological standpoint.

Worms take the 'phyto' out of 'phytochelatins'.

Phytoch&#xE9;latine synthase est l&#x26;#39;enzyme responsable de la synth&#xE8;se de heavy-metal-peptides de liaison (phytoch&#xE9;latines) &#xE0; partir de thiols glutathion et connexes. Il a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tabli r&#xE9;cemment que ce n&#x26;#39;est pas seulement limit&#xE9;e aux plantes et certains champignons, comme on l&#x26;#39;a pens&#xE9;, mais elle a aussi un r&#xF4;le essentiel dans la d&#xE9;toxication des m&#xE9;taux lourds dans les elegans mod&#xE8;le n&#xE9;matode Caenorhabditis. Ces r&#xE9;sultats et d&#x26;#39;autres qui d&#xE9;montrent phytoch&#xE9;latine synthase-codantes dans les g&#xE9;nomes de plusieurs autres invert&#xE9;br&#xE9;s, y compris les n&#xE9;matodes pathog&#xE8;nes, les schistosomes et les ascaris, annoncent une nouvelle &#xE8;re dans la recherche phytoch&#xE9;latine, dans lequel ces nouveaux post-traductionnelle des peptides synth&#xE9;tis&#xE9;s ne sera pas seulement &#xE9;tudi&#xE9; dans le contexte de la phytorem&#xE9;diation, mais aussi &#xE0; partir d&#x26;#39;un point de vue clinique parasitologique.

Worms Prenez la phyto &#xBB;sur&#xAB; phytoch&#xE9;latines &#x26;#39;

Worms nehmen Sie die &#x26;quot;Phyto&#x26;quot; aus &#x26;quot;Phytochelatine &#x26;#39;.

Fitochelatina sintasi sono l&#39;enzima responsabile della sintesi di peptidi heavy-metal-binding (fitochelatine) da glutatione e di tioli correlati. Recentemente &egrave; stato determinato che essa non &egrave; solo limitato a piante e alcuni funghi, come pensava, ma ha anche un ruolo essenziale nella disintossicazione di metallo pesante nel modello nematode Caenorhabditis elegans. Queste scoperte e altri che dimostrano fitochelatina sintasi-codifica sequenze nel genoma di diversi altri invertebrati, tra cui nematodi patogeni, schistosomes e nematodi, annunciano una nuova era nella ricerca fitochelatina, in cui questi romanzo sintetizzato traduzionali peptidi sar&agrave; non solo essere indagati nell&#39;ambito della phytoremediation ma anche da un punto di vista clinico parassitologiche.

Vermi prendono la &#39;fito&#39; fuori &#39;fitochelatine&#39;.

&#x30D5;&#x30A3;&#x30C8;&#x30B1;&#x30E9;&#x30C1;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7D50;&#x5408;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#xFF08;phytochelatins&#xFF09;&#x3092;&#x62C5;&#x5F53;&#x3059;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x83CC;&#x985E;&#x304C;&#x3001;&#x304B;&#x3064;&#x3066;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x7DDA;&#x866B;Caenorhabditis elegans&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306E;&#x89E3;&#x6BD2;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x7DDA;&#x866B;&#x3001;&#x4F4F;&#x8840;&#x5438;&#x866B;&#x3084;&#x56DE;&#x866B;&#x3001;&#x30D8;&#x30E9;&#x30EB;&#x30C9;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306F;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x307F;&#x3067;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3057;&#x305F;phytochelatin&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6642;&#x4EE3;&#x3001;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C8;&#x30B1;&#x30E9;&#x30C1;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306A;&#x3069;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30C8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x6587;&#x8108;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5B66;&#x306E;&#x89B3;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#x3002;

&#x30EF;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001; &#x26;#39;phytochelatins&#x26;#39;&#x306E; &#x26;#39;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C8; &#x26;quot;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30C6;&#x30A4;&#x30AF;

Phytochelatin synthase &#xD6A8;&#xC18C; glutathione&#xC640; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; thiols&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xAE08;&#xC18D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; (phytochelatins)&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xADF8;&#xAC83; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xB9CC; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xACFC; &#xC77C;&#xBD80; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xD55C;&#xBC88; &#xC0DD;&#xAC01; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC120; &#xCDA9; &#xB958; Caenorhabditis elegans&#xC5D0; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xD574;&#xB3C5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; phytochelatin synthase &#xCF54;&#xB529; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E4;&#xB978; &#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C;, &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xC120; &#xCDA9;, &#xD68C; &#xCDA9;, schistosomes &#xB4F1;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC18C;&#xC124; post-translationally &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD569;&#xC131; phytochelatin &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC2DC;&#xB300;&#xB97C; &#xC608; &#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xAC83; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC870;&#xC0AC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC784;&#xC0C1; parasitological &#xAD00;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; phytoremediation&#xC758; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C;.

&#xC6DC; &#39;phytochelatins&#39;&#xC5D0;&#xC11C; &#39;&#xD53C;&#xD1A0;&#39; &#xAC78;&#xB9B4;.

Sintasa phytochelatin es la enzima responsable de la s&#xED;ntesis de metales pesados &#x200B;&#x200B;p&#xE9;ptidos de uni&#xF3;n (fitoquelatinas) desde tioles glutati&#xF3;n y relacionadas. Recientemente se ha determinado que no s&#xF3;lo se limita a las plantas y algunos hongos, como se pensaba, sino que tambi&#xE9;n tiene un papel esencial en la desintoxicaci&#xF3;n de metales pesados &#x200B;&#x200B;en los modelo Caenorhabditis elegans nematodos. Estos hallazgos y otros que demuestran fitoquelatina de codificaci&#xF3;n de la sintetasa de las secuencias de los genomas de varios otros invertebrados, incluyendo a los nematodos pat&#xF3;genos, nematodos, esquistosomas y anunciar una nueva era en la investigaci&#xF3;n fitoquelatina, en la que estos nuevos despu&#xE9;s de la traducci&#xF3;n p&#xE9;ptidos sintetizados, no s&#xF3;lo se investigar&#xE1; en el contexto de fitorremediaci&#xF3;n, sino tambi&#xE9;n desde un punto de vista cl&#xED;nico parasitol&#xF3;gico.

Worms Take the &#x26;#39;fito&#x26;#39; de &#x26;#39;fitoquelatinas&#x26;#39;

&#x7EDC; (PC) &#x5408;&#x5DF2;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F; &gamma;-&#x6C34;&#x4E8C;&#x80BD;&#x9170;&#x80BD;&#x9170; (EC 2.3.2.15)&#xFF0C;&#x548C;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x5C31;&#x662F;&#x4F8B;&#x8BC1;&#x5206;&#x6790; immunopurified &#x91CD;&#x7EC4;&#x9176;&#x4ECE;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; &#xFF08;AtPCS1-&#x6807;&#x5FD7;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x8BC1;&#x660E;&#x50AC;&#x5316;&#x8FD1;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x54EA;&#x4E2A; millimolar &#x514D;&#x8D39;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x548C; micromolar &#x7684;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684; bisubstrate &#x53D6;&#x4EE3;&#x9176;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x4E0E; PC &#x5408;&#x6210;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD; thiolates &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#x9549;&#x3002;GS(2)) &#x6216; millimolar S alkylglutathiones &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4F5C;&#x4E3A; cosubstrates&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x76F4;&#x63A5;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x7684; AtPCS1 &#x6807;&#x5FD7;&#x50AC;&#x5316; PC &#x5408;&#x6210;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5B66;&#x3001; &#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5B66;&#x7684;&#x9170;&#x5316;&#x9176;&#x548C;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x81EA;&#x7531;&#x4ECE;&#x6350;&#x52A9;&#x8005; &gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x548C; Cys &#x5230; Ser &#x6216;-Ala &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x548C; Ser-&#x6C28;&#x57FA;&#x53D6;&#x4EE3;&#x7684;&#x4FDD;&#x80B2;&#x50AC;&#x5316;&#x7684; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x4E2D;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x4E00;&#x534A;&#x7684;&#x9176;&#xFF0C;PC &#x5408;&#x7684;&#x786E;&#x662F;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7ECF;&#x5386;&#x5728;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684; &gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x7684; dipeptidyltransferase&#xFF0C;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E00;&#x5728;&#x7B26;&#x5408;&#x4E00;&#x79CD;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BF9;&#x5E94;&#x4E8E;&#x6216;&#x4E0E; Cys(56) &#x5219;&#x81F3;&#x5C11;&#x7D27;&#x5BC6;&#x8026;&#x5408;&#x3002;&#x9176;&#x6539;&#x6027;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x4ECD;&#x6709;&#x5F85;&#x786E;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x662F;&#x533A;&#x5206;&#x5F00;&#x6765;&#x662F;&#x9002;&#x4E8E; &gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x7684;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5176;&#x9170;&#x5316;&#x4E0D;&#x53EA;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x63D0;&#x4F9B; Cd(2+) &#x6216;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x4E0E;&#x963B;&#x585E;&#x3001; S-&#x70F7;&#x57FA;&#x786B;&#x9187;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x51C0; PC &#x5408;&#x6210;&#x4E5F;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A; Cys 56 &#x76F8;&#x5173;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x8BA4;&#x4E3A; des-&#x7518;-Pc &#x4E5F;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4EA7;&#x751F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5373;&#x65F6;&#x7684;&#x526F;&#x4EA7;&#x54C1;&#xFF0C;&#x800C;&#x662F;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x4E8C;&#x80BD;&#x9170;&#x80BD;&#x8F6C;&#x79FB;&#x53CD;&#x5E94;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x80FD;&#x91CF;&#x89E3;&#x653E; Cys &#x7518;&#x503A;&#x5238;&#x7684; &gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x5728;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x5288;&#x88C2;&#x540E;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x6C34;&#x89E3;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6240;&#x9700;&#x7684; PC &#x94FE;&#x957F;&#x5EA6;&#x5EF6;&#x957F;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x65B0;&#x7684;&#x80BD;&#x952E;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x80FD;&#x6E90;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x53D6;&#x4EE3; &gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x9170;&#x57FA;&#x9176;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x7531;&#x4E00;&#x4E2A; &gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x91CD;&#x590D;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x50AC;&#x5316;&#x5468;&#x671F;&#x3002;

&#x87AF;&#x5408;&#x9176;&#xFF0C;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7ECF;&#x5386;&#x4E0E; &gamma; &#x6C34;&#x591A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x9170;&#x5316;&#x7684; dipeptidyltransferase&#xFF1A; &#x62DF;&#x5357;&#x82A5; PCS1 &#x50AC;&#x5316;&#x87AF;&#x5408;&#x6210;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x548C;&#x5B9A;&#x70B9;&#x8BF1;&#x53D8;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Phytochelatin (PC) synthase has been assumed to be a gamma-glutamylcysteine dipeptidyl transpeptidase (EC 2.3.2.15) and, more recently, as exemplified by analyses of the immunopurified recombinant enzyme from Arabidopsis thaliana (AtPCS1-FLAG), has been shown to catalyze a PC synthetic reaction with kinetics that approximates a bisubstrate-substituted enzyme mechanism in which millimolar concentrations of free GSH and micromolar concentrations of heavy metal.GSH thiolates (e.g. cadmium.GS(2)) or millimolar concentrations of S-alkylglutathiones serve as cosubstrates. Here, we show, by direct analyses of the stoichiometry of AtPCS1-FLAG-catalyzed PC synthesis, the kinetics and stoichiometry of acylation of the enzyme and release of free glycine from gamma-Glu-Cys donors, and the effects of the Cys-to-Ser or -Ala and Ser-to-Ala substitution of conserved residues in the catalytic N-terminal half of the enzyme, that PC synthase is indeed a dipeptidyltransferase that undergoes gamma-Glu-Cys acylation at two sites during catalysis, one of which, in accord with a cysteine protease model, likely corresponds to or is at least tightly coupled with Cys(56). The identity of the second site of enzyme modification remains to be determined, but it is distinguishable from the first Cys(56)-dependent site, which is amenable to gamma-Glu-Cys acylation by free GSH, because its acylation not only depends on the provision of Cd(2+) or GSH with a blocked, S-alkylated thiol group, but is also necessary for net PC synthesis. We conclude that des-Gly-PCs are not generated as an immediate by-product, but rather that the enzyme catalyzes a dipeptidyl transfer reaction in which some of the energy liberated upon cleavage of the Cys-Gly bonds of the gamma-Glu-Cys donors in the first phase of the catalytic cycle is conserved through the formation of a two site-substituted gamma-Glu-Cys acyl-enzyme intermediate whose hydrolysis provides the energy required for the formation of the new peptide bond required for the extension of PC chain length by one gamma-Glu-Cys repeat per catalytic cycle.

Phytochelatin synthase, a dipeptidyltransferase that undergoes multisite acylation with gamma-glutamylcysteine during catalysis: stoichiometric and site-directed mutagenic analysis of arabidopsis thaliana PCS1-catalyzed phytochelatin synthesis.

Phytoch&#xE9;latine (PC) synthase a &#xE9;t&#xE9; suppos&#xE9; &#xEA;tre une transpeptidase gamma-glutamyl dipeptidyl (CE 2.3.2.15) et, plus r&#xE9;cemment, comme en t&#xE9;moigne l&#x26;#39;analyse de l&#x26;#39;enzyme recombinante immunopurifi&#xE9;e de Arabidopsis thaliana (AtPCS1-FLAG), a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pour catalyser une r&#xE9;action de synth&#xE8;se PC avec une cin&#xE9;tique qui se rapproche d&#x26;#39;un DEUX SUBSTRATS-substitu&#xE9; m&#xE9;canisme enzymatique dans laquelle les concentrations millimolaires de GSH libre et des concentrations micromolaires de thiolates metal.GSH lourds (par exemple cadmium.GS (2)) ou &#xE0; des concentrations millimolaires de S-alkylglutathiones servir cosubstrats. Ici, nous montrons, par des analyses directes de la stoechiom&#xE9;trie de la synth&#xE8;se de PC AtPCS1-FLAG-catalys&#xE9;e, la cin&#xE9;tique et la st&#x153;chiom&#xE9;trie de l&#x26;#39;acylation de l&#x26;#39;enzyme et la lib&#xE9;ration de glycine libre de gamma-Glu-Cys donateurs, et les effets de la Cys-&#xE0; -Ser ou Ala et-Ser-Ala-&#xE0; substitution des r&#xE9;sidus conserv&#xE9;s dans le catalyseur moiti&#xE9; N-terminale de l&#x26;#39;enzyme, qui synthase PC est effectivement un dipeptidyltransferase qui subit la gamma-Glu-Cys acylation moins deux sites pendant la catalyse, dont l&#x26;#39;un , en accord avec un mod&#xE8;le de cyst&#xE9;ine-prot&#xE9;ase, correspond &#xE0; ou est susceptible d&#x26;#39;au moins &#xE9;troitement coupl&#xE9; avec Cys (56). L&#x26;#39;identit&#xE9; du deuxi&#xE8;me site de la modification enzymatique reste &#xE0; d&#xE9;terminer, mais il se distingue de la premi&#xE8;re Cys (56) d&#xE9;pendant de site, qui se pr&#xEA;te &#xE0; la gamma-Glu-Cys acylation par le GSH libre, parce que son acylation ne d&#xE9;pend pas seulement la fourniture de Cd (2 +) ou GSH avec un bloqu&#xE9;, S-alkyl&#xE9; groupe thiol, mais il est &#xE9;galement n&#xE9;cessaire pour la synth&#xE8;se de PC nette. Nous concluons que des-Gly-PC ne sont pas g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;s en tant que sous-produit imm&#xE9;diat, mais plut&#xF4;t que l&#x26;#39;enzyme catalyse une r&#xE9;action de transfert de la dipeptidyl dans lequel une partie de l&#x26;#39;&#xE9;nergie lib&#xE9;r&#xE9;e lors du clivage des liaisons Cys-Gly de la gamma-Glu-Cys donneurs dans la premi&#xE8;re phase du cycle catalytique est conserv&#xE9;e par la formation d&#x26;#39;une &#xE0; deux sites-substitu&#xE9; gamma-Glu-Cys enzyme-acyl interm&#xE9;diaire dont l&#x26;#39;hydrolyse fournit l&#x26;#39;&#xE9;nergie n&#xE9;cessaire &#xE0; la formation de la liaison peptidique nouvelle requise pour l&#x26;#39;extension de cha&#xEE;ne PC longueur par un gamma-Glu-Cys r&#xE9;p&#xE9;tition par cycle catalytique.

Phytoch&#xE9;latine synthase, une Dipeptidyltransferase qui subit acylation multisite avec Gamma-glutamyl cours de la catalyse: st&#x153;chiom&#xE9;trique et dirig&#xE9;e vers le site Analyse mutag&#xE8;ne d&#x26;#39;Arabidopsis PCS1 catalys&#xE9;e par synth&#xE8;se Arabidopsis phytoch&#xE9;latine

Phytochelatin-Synthase, ein dipeptidyltransferase, die Multisite-Acylierung unterzogen mit Gamma-Glutamylcystein w&#xE4;hrend der Katalyse: st&#xF6;chiometrische und ortsspezifische mutagene Analyse von Arabidopsis thaliana PCS1-katalysierten Synthese Phytochelatin.

Sintasi fitochelatina (PC) sono stato assunto per essere una gamma-glutamilcisteina dipeptidil transpeptidasi (EC 2.3.2.15) e, pi&ugrave; recentemente, come esemplificato da analisi dell&#39;enzima ricombinante immunopurified thaliana di Arabidopsis (AtPCS1-bandiera), ha dimostrato di catalizzare una reazione sintetica PC con cinetica che approssima un meccanismo enzimatico bisubstrate-sostituiti in cui millimolare concentrazioni di GSH libero e concentrazioni micromolari dell&#39;heavy metal.Thiolates GSH (ad esempio cadmio.GS(2)) o millimolare concentrazioni di S-alkylglutathiones servono come cosubstrates. Qui, vi mostriamo, mediante analisi dirette della stechiometria della sintesi PC AtPCS1-bandiera-catalizzata, la cinetica e la stechiometria di acilazione dell&#39;enzima e rilascio di free glicina da gamma-Glu-Cys donatori e gli effetti della Cys-Ser o -Ala e sostituzione Ser-Ala di conservato residui nel N-terminale catalitico met&agrave; dell&#39;enzima, che PC sintasi sono davvero un dipeptidyltransferase che subisce la gamma-Glu-Cys acilazione presso due siti durante la catalisiuno dei quali, in accordo con un modello di cisteina proteasi, probabilmente corrisponde a o &egrave; almeno strettamente accoppiato con Cys(56). L&#39;identit&agrave; del secondo sito di modificazione enzimatica rimane per essere determinato, ma &egrave; distinguibile dal primo Cys (56)-dipendente dal sito, che &egrave; assoggettabile a gamma-Glu-Cys acilazione di GSH libero, perch&eacute; la sua acilazione dipende non solo la fornitura di Cd(2+) o GSH con un gruppo tiolico bloccato, S-alchilati, ma &egrave; anche necessario per la sintesi netta di PC. Concludiamo che PC-Gly-des non vengono generati come un sottoprodotto immediato, ma piuttosto che l&#39;enzima catalizza una reazione di trasferimento dipeptidil in quale parte dell&#39;energia liberata dopo la scissione dei legami dei donatori nel primo gamma-Glu-Cys Cys-Gly, fase del ciclo catalitico &egrave; conservata attraverso la formazione di un due sito-sostituiti gamma-Glu-Cys acil-enzima intermedio cui idrolisi fornisce l&#39;energia necessaria per la formazione del legame peptidico nuova necessaria per l&#39;estensione della lunghezza della catena PC da una ripetizione di gamma-Glu-Cys al ciclo catalitico.

Fitochelatina sintasi, una dipeptidyltransferase che subisce multisito acilazione con gamma-glutamilcisteina durante la catalisi: analisi mutageni stechiometrico e diretto dal sito di arabidopsis thaliana PCS1-catalizzata fitochelatina sintesi.

Phytochelatin&#xFF08;PC&#xFF09;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3B3;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30EB;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x8EE2;&#x79FB;&#x9175;&#x7D20;&#x30B8;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;EC 2.3.2.15&#xFF09;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#xFF08;Arabidopsis thaliana&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x514D;&#x75AB;&#x7CBE;&#x88FD;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;AtPCS1-FLAG&#xFF09;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F8B;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x7121;&#x6599;&#x306E;GSH&#x3068;&#x91CD;&#x3044;metal.GSH&#x306E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;cadmium.GS&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;S-alkylglutathiones&#x306E;&#x30DF;&#x30EA;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x30DF;&#x30EA;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;cosubstrates&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;bisubstrate&#x7F6E;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8FD1;&#x4F3C;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x3092;&#x642D;&#x8F09;&#x3057;&#x305F;PC&#x5408;&#x6210;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;AtPCS1-FLAG-&#x89E6;&#x5A92;PC&#x5408;&#x6210;&#x3001;&#x3B3;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;-Cys&#x306F;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x306A;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x3068;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Cys&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x8868;&#x793A;-Ser&#x307E;&#x305F;&#x306F;-Ala&#x3068;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x306E;N-&#x672B;&#x7AEF;&#x534A;&#x5206;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;Ser&#x304B;&#x3089;Ala&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;PC&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x969B;&#x306B;&#x89E6;&#x5A92;&#x53CD;&#x5FDC;&#x4E2D;&#x306B;2&#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3067;&#x3001;&#x3B3;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;-Cys&#x3092;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3001;&#x305D;&#x306E;di&#x200B;&#x200B;peptidyltransferase&#x3067;&#x3059;&#x3002; &#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x304B;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#xFF08;56&#xFF09;Cys&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x7D20;&#x6539;&#x5909;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x7406;&#x7531;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x3001;&#x7121;&#x6599;&#x306E;GSH&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x3B3;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;-Cys&#x3092;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x5F93;&#x9806;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;Cys&#xFF08;56&#xFF09;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x533A;&#x5225;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;S-&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x57FA;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;CD&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;GSH&#x306E;&#x63D0;&#x4F9B;&#x304C;&#x3001;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;PC&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x3082;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;des-Gly&#x306E;-PC&#x306F;&#x3001;&#x88FD;&#x54C1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5373;&#x5EA7;&#x306B;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x304C;&#x3B3;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;-&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;Cys-Gly&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x958B;&#x88C2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x904A;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x30B8;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x8EE2;&#x79FB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;PC&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3B3;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;-&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x9175;&#x7D20;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3054;&#x3068;&#x306B;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#x7DDA;&#x306E;Glu-Cys&#x3092;&#x53CD;&#x5FA9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9577;&#x3055;&#x3002;

&#x30D5;&#x30A3;&#x30C8;&#x30B1;&#x30E9;&#x30C1;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x89E6;&#x5A92;&#x4E2D;&#x306B;&#x3B3;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;Dipeptidyltransferase&#xFF1A;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;PCS1&#x89E6;&#x5A92;Phytochelatin&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;

Phytochelatin (PC) synthase &#xAC10;&#xB9C8;-glutamylcysteine dipeptidyl transpeptidase (EC 2.3.2.15) &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB354; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; Arabidopsis thaliana (AtPCS1 &#xD50C;&#xB798;&#xADF8;)&#xC5D0;&#xC11C; immunopurified &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; exemplified &#xBB34;&#xB8CC; GSH&#xC758; millimolar &#xB18D;&#xB3C4; &#xD5E4;&#xBE44; &#xBA54;&#xD0C8;&#xC758; micromolar &#xC9D1;&#xC911;&#xC5D0; bisubstrate &#xB300;&#xCCB4; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xADFC;&#xC811; &#xD558;&#xB294; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; PC &#xD569;&#xC131; &#xBC18;&#xC751; &#xCD09;&#xB9E4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC654;&#xB2E4;.GSH thiolates (&#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xBA74; &#xCE74;&#xB4DC;&#xBBB4;.GS(2)) &#xB610;&#xB294; S-alkylglutathiones&#xC758; millimolar &#xB18D;&#xB3C4; cosubstrates&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC1FC;, PC AtPCS1 &#xD50C;&#xB798;&#xADF8; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD569;&#xC131; stoichiometry&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; acylation&#xC640;&#xC758; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; stoichiometry &#xBB34;&#xB8CC; &#xAC10;&#xB9C8; Glu Cys &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;, &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0; &#xBC0F; Cys Ser &#xB610;&#xB294;-Ala&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xACE0; Ser Ala &#xB300;&#xCCB4; &#xBCF4;&#xC874; &#xCD09;&#xB9E4; N &#xB9E8;&#xB05D;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; PC synthase &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC911; &#xAC10;&#xB9C8; Glu Cys acylation &#xB450; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; dipeptidyltransferase&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC808;&#xBC18;&#xD55C; &#xC911;, &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;, &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558; &#xB610;&#xB294; Cys(56) &#xC774;&#xC0C1; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xACB0;&#xD569; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; acylation &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C;, S alkylated thiol &#xADF8;&#xB8F9; Cd(2+) &#xB610;&#xB294; GSH&#xC758; &#xC870;&#xD56D;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; net PC &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC774;&#xAE30;&#xB3C4; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC758;&#xBB34;&#xAC00; &#xBB34;&#xB8CC; GSH&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xB9C8;-Glu-Cys acylation&#xC740; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; Cys (56)-&#xC885;&#xC18D; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC218;&#xC815; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131; &#xACB0;&#xC815;, &#xB0A8;&#xC544;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xACB0;&#xB860; des Gly Pc &#xC989;&#xAC01;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC0B0;&#xBB3C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC624;&#xD788;&#xB824; &#xADF8; &#xD6A8;&#xC18C; catalyzes dipeptidyl &#xC804;&#xC1A1; &#xBC18;&#xC751; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC758; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; PC &#xCCB4;&#xC778; &#xAE38;&#xC774; &#xC5F0;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xACB0;&#xD569;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xB450; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB300;&#xCCB4; &#xAC10;&#xB9C8; Glu Cys acyl-&#xD6A8;&#xC18C; &#xC911;&#xAE09;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBCF4;&#xC874;&#xC740; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xB9C8; Glu Cys &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC758; Cys Gly &#xCC44;&#xAD8C;&#xC758; &#xC720; &#xBC29; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xACE8;&#xC9DC;&#xAE30;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xD574;&#xBC29; &#xD558;&#xB294; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; &#xB2F9; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xAC10;&#xB9C8; Glu Cys &#xBC18;&#xBCF5; &#xD558; &#xC5EC;

Phytochelatin synthase, &#xCD09;&#xB9E4; &#xC911; &#xAC10;&#xB9C8;-glutamylcysteine&#xC640; multisite acylation&#xB97C; &#xACAA; &#xC2B5; dipeptidyltransferase: stoichiometric &#xBC0F; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; arabidopsis thaliana phytochelatin PCS1 &#xCD09;&#xB9E4; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xC6D0; &#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Phytochelatin (PC) sintasa se ha supuesto que ser un transpeptidasa gamma glutamilciste&#xED;na dipeptidil (CE 2.3.2.15) y, m&#xE1;s recientemente, como se ejemplifica por los an&#xE1;lisis de la enzima recombinante inmunopurificados de Arabidopsis thaliana (AtPCS1-FLAG), se ha demostrado para catalizar una reacci&#xF3;n PC sint&#xE9;tico con una cin&#xE9;tica que se aproxima un bisustrato-sustituido mecanismo enzima en la que las concentraciones milimolares de GSH libre y concentraciones micromolares de pesados &#x200B;&#x200B;tiolatos metal.GSH (cadmium.GS por ejemplo, (2)) o concentraciones milimolares de S-alkylglutathiones servir como co-sustratos. Aqu&#xED;, se muestra, mediante an&#xE1;lisis directo de la estequiometr&#xED;a de la s&#xED;ntesis de PC AtPCS1-FLAG-catalizada, la cin&#xE9;tica de las y estequiometr&#xED;a de acilaci&#xF3;n de la enzima y la liberaci&#xF3;n de glicina libre de gamma-Glu-Cys donantes, y los efectos de la Cys-a -Ser o Ala y Ser-a-Ala sustituci&#xF3;n de residuos conservados en el catalizador mitad N-terminal de la enzima, que sintasa PC es de hecho una dipeptidyltransferase que se somete a la gamma-Glu-Cys acilaci&#xF3;n en dos sitios durante la cat&#xE1;lisis, uno de los cuales , de acuerdo con un modelo de la proteasa ciste&#xED;na, corresponde a probables o al menos est&#xE1; estrechamente acoplado con Cys (56). La identidad del segundo sitio de modificaci&#xF3;n enzim&#xE1;tica que queda por determinar, pero se distingue de la primera Cys (56) dependiente de sitio, el cual es susceptible de gamma-Glu-Cys acilaci&#xF3;n por GSH libre, debido a que su acilaci&#xF3;n no s&#xF3;lo depende la provisi&#xF3;n de Cd (2 +) o GSH con una bloqueada, S-alquilada grupo tiol, sino que tambi&#xE9;n es necesaria para la s&#xED;ntesis neta de PC. Se concluye que des-Gly-PC no se generan como un subproducto inmediata, sino que la enzima cataliza una reacci&#xF3;n de transferencia dipeptidil en que parte de la energ&#xED;a liberada por escisi&#xF3;n de los enlaces Cys-Gly de la gamma-Glu-Cys donantes en la primera fase del ciclo catal&#xED;tico se conserva a trav&#xE9;s de la formaci&#xF3;n de un sitio dos sustituido con gamma-Glu-Cys-acil enzima intermedio cuya hidr&#xF3;lisis proporciona la energ&#xED;a necesaria para la formaci&#xF3;n del enlace pept&#xED;dico nuevo requerido para la extensi&#xF3;n de la cadena PC longitud por una gamma-Glu-Cys repetici&#xF3;n por ciclo catal&#xED;tico.

Sintasa fitoquelatina, un Dipeptidyltransferase que sufre acilaci&#xF3;n varios sitios con gamma-glutamylcysteine &#x200B;&#x200B;durante la cat&#xE1;lisis: estequiom&#xE9;trico y dirigida al sitio An&#xE1;lisis mutag&#xE9;nico de Arabidopsis thaliana PCS1 catalizada S&#xED;ntesis fitoquelatina

&#x6742;&#x8349;&#x3001; &#x8815;&#x866B;&#x548C;&#x66F4;&#x591A;&#x3002;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x4E45;&#x8FDD;&#x8868;&#x54E5;&#xFF0C;&#x87AF;&#x5408;&#x9176;&#x3002;

Weeds, worms, and more. Papain's long-lost cousin, phytochelatin synthase.

Les mauvaises herbes, les vers, et plus encore. La papa&#xEF;ne de long-perdue Cousin, phytoch&#xE9;latine synthase

Weeds, W&#xFC;rmer und vieles mehr. Papain die lange verschollenen Cousin, Phytochelatin Synthase.

Erbacce, worm e altro ancora. Scomparso cugino di papaina, fitochelatina sintasi.

&#x96D1;&#x8349;&#x3001;&#x30EF;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x3002;&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9577;&#x3044;&#x9593;&#x884C;&#x65B9;&#x4E0D;&#x660E;&#x306E;&#x3044;&#x3068;&#x3053;&#x3001;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C8;&#x30B1;&#x30E9;&#x30C1;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;

&#xC7A1; &#xCD08;, &#xBC8C;&#xB808;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB354;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Papain&#xC758; &#xAE34; &#xC783;&#xC740; &#xC0AC;&#xCD0C;, phytochelatin synthase.

Las malas hierbas, gusanos, etc. Perdida hace mucho tiempo la papa&#xED;na de la prima, la sintasa de fitoquelatina

&#x73B0;&#x5728;&#x5DF2;&#x77E5;&#x690D;&#x7269;&#x87AF;&#x5408;&#x80BD; (Pc)&#x3001; &#x539F;&#x5148;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x5C40;&#x9650;&#x4E8E;&#x690D;&#x7269;&#x548C;&#x67D0;&#x4E9B;&#x771F;&#x83CC;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#xFF08;&gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;) n &#x7518;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E; &#xFF08;&#x5C24;&#x5176;&#x662F; Cd2 +) &#x6212;&#x6BD2;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;C.&#x7EBF;&#x866B; PC &#x5408; 1 &#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x7B49;&#x540C;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; ce-pc-1&#xFF0C;&#x4ECE;&#x690D;&#x7269;&#x548C;&#x771F;&#x83CC;&#x6765;&#x6E90;&#xFF0C;&#x5176;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x6211;&#x4EEC;&#x53BB;&#x4E86;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E0B;&#x6E38; PC &#x5236;&#x9020;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x6709;&#x673A;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x534A;&#x5206;&#x5B50; ATP &#x7ED3;&#x5408;&#x76D2;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x3001; &#x9274;&#x5B9A; CeHMT-1&#xFF0C;&#x4ECE;&#x540C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B49;&#x6548;&#x62D3;&#x6251;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A; PC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; SpHMT 1 &#x4ECE;&#x7C9F; C.&#x7EBF;&#x866B;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EA7;&#x522B;&#x4E0A; CeHMT 1 &#x6EE1;&#x8DB3;&#x8981;&#x6C42;&#x7684; Cd2 + &#x516C;&#x5DEE;&#x56E0;&#x5B50;&#x53C2;&#x4E0E;&#x87AF;&#x5408;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;/&#x6216;&#x6D88;&#x9664; Cd x PC &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;Cehmt-1 S.&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x5F02;&#x6E90;&#x8868;&#x8FBE;&#x5BF9;&#x7F13;&#x89E3; Cd2 +-CeHMT-1 &#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x518D;&#x5230;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x819C; hmt &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4F34;&#x751F;&#x7684;&#x8FC7;&#x654F;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;Ce-hmt-1 &#x5B8C;&#x597D;&#x8815;&#x866B;&#x7684; RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi) &#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x8D4B;&#x4E88; Cd2 +-&#x8FC7;&#x654F;&#x8868;&#x578B;&#x76F8;&#x4F3C;&#x4F46;&#x6BD4; ce-pc-1 RNAi &#x8815;&#x866B;&#x6240;&#x8868;&#x73B0;&#x7684;&#x66F4;&#x52A0;&#x660E;&#x663E;&#x3002;&#x5728;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C42;&#x6B21;&#xFF0C;&#x662F;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x7684; ce-hmt-1 &#x548C; cepcs-1 &#x5355;&#x3001; &#x53CC; RNAi &#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;CeHMT-1 &#x4E5F;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E; Cd2 + &#x516C;&#x5DEE;&#x4EE5;&#x5176;&#x4ED6;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6BD4;&#x8F83;&#x660E;&#x663E;&#x3002;Ce-pc-1 RNAi &#x8815;&#x866B;&#x7684;&#x80A0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x6709;&#x6BD2;&#x7684; Cd2 + &#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x800C;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684; ce-hmt-1 RNAi &#x8815;&#x866B;&#x76F8;&#x53CD;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x8BF4;&#x660E;&#x6613;&#x8D1D;&#x5C48;&#x5149;&#x5939;&#x6742;&#x5728;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x9644;&#x8FD1;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;CeHMT-1 &#x4E0A;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5E72;&#x6270;&#x8868;&#x578B;&#x5173;&#x8054; CePCS 1 &#x865A;&#xFF0C;&#x53CD;&#x4E4B;&#x4EA6;&#x7136;&#x3002;&#x53CC; ce-hmt-1 &#xFF1B;ce-pc-1 RNAi &#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x5F53;&#x66B4;&#x9732;&#x5728; Cd2 +&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x548C;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5BF9;&#x7EBF;&#x866B;&#x4E2D;&#x8010;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7684; PC &#x5408;&#x8981;&#x6C42;&#x6211;&#x4EEC;&#x524D;&#x51E0;&#x6B21;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x8868;&#x660E; PC &#x4F9D;&#x8D56;&#x3001; &#x4ECB;&#x5BFC; HMT 1 &#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x89E3;&#x6BD2;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x5728; S.&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD;&#x5728;&#x6307;&#x793A;&#x7684;&#x540C;&#x4E00;&#x65F6;&#x95F4;&#x540C;&#x65F6; CeHMT-1 &#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7535;&#x8111;&#x5408;&#x6210;&#x4E00;&#x4E9B;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x4E2D;&#x3002;

CeHMT-1&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B;&#x9549;&#x7684;&#x8010;&#x53D7;&#x6307;&#x8BA4;&#x7EDC;&#x519C;&#x7528;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8F66;&#x3002;

Phytochelatins (PCs), (gamma-Glu-Cys)n Gly polymers that were formerly considered to be restricted to plants and some fungal systems, are now known to play a critical role in heavy metal (notably Cd2+) detoxification in Caenorhabditis elegans. In view of the functional equivalence of the gene encoding C. elegans PC synthase 1, ce-pcs-1, to its homologs from plant and fungal sources, we have gone on to explore processes downstream of PC fabrication in this organism. Here we describe the identification of a half-molecule ATP-binding cassette transporter, CeHMT-1, from C. elegans with an equivalent topology to that of the putative PC transporter SpHMT-1 from Schizosaccharomyces pombe. At one level, CeHMT-1 satisfies the requirements of a Cd2+ tolerance factor involved in the sequestration and/or elimination of Cd x PC complexes. Heterologous expression of cehmt-1 in S. pombe alleviates the Cd2+-hypersensitivity of hmt- mutants concomitant with the localization of CeHMT-1 to the vacuolar membrane. Suppression of the expression of ce-hmt-1 in intact worms by RNA interference (RNAi) confers a Cd2+-hypersensitive phenotype similar to but more pronounced than that exhibited by ce-pcs-1 RNAi worms. At another level, it is evident from comparisons of the cell morphology of ce-hmt-1 and cepcs-1 single and double RNAi mutants that CeHMT-1 also contributes to Cd2+ tolerance in other ways. Whereas the intestinal epithelial cells of ce-pcs-1 RNAi worms undergo necrosis upon exposure to toxic levels of Cd2+, the corresponding cells of ce-hmt-1 RNAi worms instead elaborate punctate refractive inclusions within the vicinity of the nucleus. Moreover, a deficiency in CeHMT-1 does not interfere with the phenotype associated with CePCS-1 deficiency and vice versa. Double ce-hmt-1; ce-pcs-1 RNAi mutants exhibit both cell morphologies when exposed to Cd2+. These results and those from our previous investigations of the requirement for PC synthase for heavy metal tolerance in C. elegans demonstrate PC-dependent, HMT-1-mediated heavy metal detoxification not only in S. pombe but also in some invertebrates while at the same time indicating that the action of CeHMT-1 does not depend exclusively on PC synthesis.

CeHMT-1, a putative phytochelatin transporter, is required for cadmium tolerance in Caenorhabditis elegans.

Phytoch&#xE9;latines (PC), (gamma-Glu-Cys) n Gly polym&#xE8;res qui &#xE9;taient auparavant consid&#xE9;r&#xE9;s comme se limiter &#xE0; des plantes et certains syst&#xE8;mes fongiques, sont maintenant connus pour jouer un r&#xF4;le critique dans les m&#xE9;taux lourds (notamment Cd2 +) de d&#xE9;sintoxication dans Caenorhabditis elegans. Compte tenu de l&#x26;#39;&#xE9;quivalence fonctionnelle de la synthase de g&#xE8;ne codant pour C. elegans PC 1, CE-pcs-1, &#xE0; ses homologues de sources v&#xE9;g&#xE9;tales et fongiques, nous avons continu&#xE9; &#xE0; explorer les processus en aval de la fabrication PC dans cet organisme. Ici on d&#xE9;crit l&#x26;#39;identification d&#x26;#39;un transporteur demi-mol&#xE9;cule cassette de liaison &#xE0; l&#x26;#39;ATP, CeHMT-1, &#xE0; partir de C. elegans avec une topologie &#xE9;quivalente &#xE0; celle du transporteur PC putatif SpHMT-1 de Schizosaccharomyces pombe. &#xC0; un certain niveau, CeHMT-1 satisfait aux exigences d&#x26;#39;un facteur de Cd2 + tol&#xE9;rance impliqu&#xE9;e dans la s&#xE9;questration du carbone et / ou l&#x26;#39;&#xE9;limination des complexes Cd x PC. L&#x26;#39;expression h&#xE9;t&#xE9;rologue de cehmt-1 chez S. pombe all&#xE8;ge le Cd2 +-hypersensibilit&#xE9; de HMT-mutants concomitante avec la localisation des CeHMT-1 &#xE0; la membrane vacuolaire. R&#xE9;pression de l&#x26;#39;expression de ce-hmt-1 dans les vers intacts par l&#x26;#39;ARN interf&#xE9;rence (ARNi) conf&#xE8;re un Cd2 +-hypersensible ph&#xE9;notype similaire mais plus prononc&#xE9; que celui pr&#xE9;sent&#xE9; par CE-PCS-1 vers ARNi. &#xC0; un autre niveau, il est &#xE9;vident &#xE0; partir de comparaisons de la morphologie cellulaire de ce-hmt-1 et cepcs-1 simples et doubles mutants ARNi que CeHMT-1 contribue &#xE9;galement &#xE0; la tol&#xE9;rance Cd2 + par d&#x26;#39;autres moyens. Alors que les cellules &#xE9;pith&#xE9;liales intestinales de vers ARNi CE-pcs-1 subissent une n&#xE9;crose lors de l&#x26;#39;exposition &#xE0; des niveaux toxiques de Cd2 +, les cellules correspondantes de ce-HMT-1 vers ARNi au lieu d&#x26;#39;&#xE9;laborer des inclusions de r&#xE9;fraction ponctu&#xE9;es dans le voisinage du noyau. En outre, une d&#xE9;ficience en CeHMT-1 n&#x26;#39;interf&#xE8;re pas avec le ph&#xE9;notype associ&#xE9; &#xE0; CePCS-1 lacune et vice-versa. Double-CE hmt-1; CE-pcs-1 mutants RNAi pr&#xE9;sentent des morphologies cellulaires lorsqu&#x26;#39;ils sont expos&#xE9;s &#xE0; deux Cd2 +. Ces r&#xE9;sultats et ceux de nos enqu&#xEA;tes pr&#xE9;c&#xE9;dentes de l&#x26;#39;exigence de la synthase de PC pour la tol&#xE9;rance aux m&#xE9;taux lourds chez C. elegans d&#xE9;montrer PC-d&#xE9;pendante, HMT-1-m&#xE9;diation d&#xE9;sintoxication des m&#xE9;taux lourds non seulement chez S. pombe, mais aussi chez certains invert&#xE9;br&#xE9;s, tout en m&#xEA;me le temps qui indique que l&#x26;#39;action de CeHMT-1 ne d&#xE9;pend pas exclusivement sur la synth&#xE8;se de PC.

CeHMT-1, un transporteur putatif phytoch&#xE9;latine, est requis pour la tol&#xE9;rance au cadmium chez Caenorhabditis elegans

CeHMT-1, ein mutma&#xDF;liches Phytochelatin Transporter wird f&#xFC;r Cadmium Toleranz in Caenorhabditis elegans erforderlich.

Fitochelatine (pz), (gamma-Glu-Cys) n Gly polimeri che precedentemente erano considerati limitata alle piante e alcuni sistemi fungini, ora sono noti per svolgere un ruolo critico nella disintossicazione di metallo pesante (in particolare Cd2 +) in Caenorhabditis elegans. In considerazione l&#39;equivalenza funzionale del gene che codifica c. elegans PC sintasi 1, ce-PC-1, ai suoi omologhi dalla pianta e fonti fungine, siamo andati a esplorare i processi di fabbricazione di PC in questo organismo a valle. Qui descriviamo l&#39;identificazione del trasportatore met&agrave;-molecola ATP-binding cassette, CeHMT-1, da c. elegans con una topologia equivalente a quello del trasportatore putativo PC SpHMT-1 da Schizosaccharomyces pombe. A uno livello, CeHMT-1 soddisfa i requisiti di un Cd2 + fattore di tolleranza coinvolto nel sequestro e/o eliminazione dei Cd x complessi di PC. Espressione eterologa di cehmt-1 in S. pombe allevia il Cd2 +-ipersensibilit&agrave; del concomitante hmt-mutanti con la localizzazione di CeHMT-1 per la membrana vacuolar. Soppressione dell&#39;espressione di ce-hmt-1 a worms intatto di interferenza del RNA (RNAi) conferisce un Cd2 +-ipersensibile fenotipo simile ma pi&ugrave; pronunciato rispetto a quello esibito da vermi RNAi ce-PC-1. A un altro livello, &egrave; evidente dal confronto della morfologia delle cellule di ce-hmt-1 e cepcs-1 singole e doppie RNAi mutanti che CeHMT-1 contribuisce anche al Cd2 + tolleranza in altri modi. Mentre le cellule epiteliali intestinali di ce-PZ-1 RNAi vermi subiscono necrosi all&#39;esposizione a livelli tossici di Cd2 +, le celle corrispondenti di ce-hmt-1 RNAi vermi elaborano invece punctati inclusioni rifrangenti nelle vicinanze del nucleo. Inoltre, un deficit di CeHMT-1 non interferisce con il fenotipo associato a deficit di CePCS-1 e viceversa. Doppia ce-hmt-1; CE-PZ-1 RNAi mutanti esibiscono entrambi morfologie di cella quando esposti a Cd2 +. Questi risultati e quelli dalle nostre indagini precedenti del requisito per PC sintasi per tolleranza di heavy metal in c. elegans dimostrare disintossicazione metallo pesante PC-dipendente, HMT-1-mediata in S. pombe, ma anche in alcuni invertebrati mentre presso al tempo stesso che indica che l&#39;azione di CeHMT-1 non dipendono esclusivamente sintesi PC.

CeHMT-1, un trasportatore fitochelatina putativo, &egrave; necessaria per la tolleranza di cadmio in Caenorhabditis elegans.

Phytochelatins&#xFF08;PCS&#xFF09;&#x3001;&#xFF08;&#x3B3;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;-Cys&#xFF09;&#x3092;N&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x690D;&#x7269;&#x3084;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x83CC;&#x985E;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;Gly&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#xFF08;&#x7279;&#x306B;CD2 +&#xFF09;&#x7DDA;&#x866B;&#xFF08;Caenorhabditis elegans&#xFF09;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x89E3;&#x6BD2;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x690D;&#x7269;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x771F;&#x83CC;&#x6E90;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306B;&#x3001;CE-PCS-1&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7DDA;&#x866B;C. elegans&#x306E;PC&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;1&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7B49;&#x4FA1;&#x6027;&#x306E;&#x89B3;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;PC&#x88FD;&#x9020;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x63A2;&#x6C42;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x884C;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30BE;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#xB7;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D9;&#x304B;&#x3089;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;PC&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;SpHMT-1&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x7DDA;&#x866B;C. elegans&#x304B;&#x3089;&#x534A;&#x5206;&#x5B50;ATP-&#x7D50;&#x5408;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;CeHMT-1&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 1&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;CeHMT-1&#x3092;&#x6E80;&#x305F;&#x3059;CD2 +&#x516C;&#x5DEE;&#x9694;&#x96E2;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x56E0;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;Cd x&#x306E;PC&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3002;&#x5206;&#x88C2;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;cehmt-1&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;CD2&#x6DB2;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;CeHMT-1&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3068;HMT-&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x4F75;&#x7528;&#x306E;+  - &#x904E;&#x654F;&#x6027;&#x3092;&#x8EFD;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x30EF;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x3001;CE-HMT-1&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306F;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;CE-PCS-1 RNAi&#x306E;&#x30EF;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x9855;&#x8457;&#x306B;CD2 +&#x904E;&#x654F;&#x6027;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x5225;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CE-HMT-1&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x3068;CeHMT-1&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;CD2 +&#x8010;&#x6027;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;cepcs-1&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x3068;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;RNAi&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x304B;&#x3089;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; CE-PCS-1 RNAi&#x306E;&#x30EF;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x8178;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;CD2 +&#x3001;CE-HMT-1 RNAi&#x306E;&#x30EF;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x6709;&#x6BD2;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x66DD;&#x9732;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x58CA;&#x6B7B;&#x3092;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x6838;&#x306E;&#x8FD1;&#x508D;&#x5185;&#x306B;&#x70B9;&#x72B6;&#x306E;&#x5C48;&#x6298;&#x7387;&#x306E;&#x4ECB;&#x5728;&#x7269;&#x3092;&#x8A73;&#x3057;&#x304F;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;CeHMT-1&#x306E;&#x6B20;&#x640D;&#x306F;CePCS-1&#x6B20;&#x640D;&#x75C7;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x9006;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;CE-HMT-1&#x3001;CD2 +&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;CE-PCS-1&#x306E;RNAi&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x7DDA;&#x866B;C. elegans&#x306E;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x8010;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;PC&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x306E;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x540C;&#x3058;&#x306A;&#x304C;&#x3089;S.&#x30DD;&#x30F3;&#x30D9;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;PC&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3001;HMT-1&#x5A92;&#x4ECB;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306E;&#x89E3;&#x6BD2;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;CeHMT-1&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;PC&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6642;&#x9593;&#x3002;

CeHMT-1&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;Phytochelatin&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x7DDA;&#x866B;&#xFF08;Caenorhabditis elegans&#xFF09;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30C9;&#x30DF;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x8A31;&#x5BB9;&#x5DEE;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;

Phytochelatins (Pc), &#xC2DD;&#xBB3C;&#xACFC; &#xC77C;&#xBD80; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C;&#xD560; &#xC218; &#xC774;&#xC804; &#xC5EC;&#xACA8;&#xC84C;&#xB2E4; (&#xAC10;&#xB9C8;-Glu-Cys) n Gly &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xC9C0;&#xAE08; Caenorhabditis elegans&#xC5D0; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D; (&#xD2B9;&#xD788; c d 2&#xB97C; +) &#xD574;&#xB3C5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. C. elegans PC synthase 1 &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xC744; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xB3D9;&#xB4F1;&#xC131;&#xC5D0; &#xBE44;&#xCD94;&#xC5B4; ce pc 1 &#xC2DD;&#xBB3C;&#xACFC; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xC18C;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; homologs&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC14;&#xC744; &#xD558;&#xB958;&#xC774; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0; PC &#xC81C;&#xC870;&#xC758; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD558;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBC18; &#xBD84;&#xC790; ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xAE30;&#xC220; Schizosaccharomyces pombe&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1; PC &#xC804;&#xC1A1; SpHMT-1&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0;&#xC640; C. elegans&#xC5D0;&#xC11C; CeHMT 1. &#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; CeHMT-1 c d 2 + &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC624;&#xCC28; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D; &#xBC0F;/&#xB610;&#xB294; PC &#xB2E8;&#xC9C0; x Cd&#xC758; &#xC81C;&#xAC70; &#xB9CC;&#xC871;. Cehmt-1 S. pombe&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DD;&#xC744; &#xC644;&#xD654; Cd2 +-CeHMT-1 vacuolar &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; hmt &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xACFC;&#xBBFC; &#xC99D;. RNA &#xAC04;&#xC12D; (RNAi)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xBC8C;&#xB808;&#xC5D0; ce hmt 1 &#xC2DD;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC218; &#xC5EC; Cd2 +-&#xACFC;&#xBBFC; &#xD615; ce pc 1 RNAi &#xBC8C;&#xB808;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC804;&#xC2DC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xBC1C;&#xC74C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xCC28;&#xC6D0;&#xC5D0;&#xC11C;, ce-hmt-1 &#xBC0F; cepcs-1 &#xB2E8;&#xC77C; &#xBC0F; &#xC774;&#xC911; RNAi &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; CeHMT-1&#xB3C4; c d 2 + &#xACF5;&#xCC28; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558;&#xB2E4;. Ce-pc-1 RNAi &#xBC8C;&#xB808;&#xC758; &#xC7A5;&#xB0B4; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; c d 2 + &#xB3C5;&#xC131; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB418; &#xBA74; &#xAD34; &#xC0AC; &#xBC1B; &#xB2E4;, &#xBC18;&#xBA74; ce hmt 1 RNAi &#xBC8C;&#xB808;&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC740; &#xB300;&#xC2E0; &#xD575; &#xBD80;&#xADFC; &#xB0B4; punctate &#xAD74;&#xC808; &#xD760;&#xB3C4; &#xC815;&#xAD50;&#xD55C;. &#xB610;&#xD55C;, CePCS-1 &#xACB0;&#xD54D;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD45C;&#xD604; &#xD615; CeHMT-1&#xC5D0; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354;&#xBE14; ce-hmt-1; ce-pc-1 RNAi &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC804;&#xC2DC; &#xB450; &#xC140; &#xBB38;&#xBC95;&#xACFC; Cd2 + &#xB178;&#xCD9C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; C. elegans&#xC758; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC624;&#xCC28;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; PC synthase&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xC804; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; S. pombe &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC77C;&#xBD80; &#xBB34;&#xCC99;&#xCD94;&#xB3D9;&#xBB3C; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xAC19;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;&#xC5D0;&#xC11C; CeHMT-1 &#xC791;&#xC5C5; PC &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294;&#xC5D0; PC &#xC885;&#xC18D;, HMT 1 &#xC911;&#xC7AC; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xD574;&#xB3C5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CeHMT-1 &#xC0C1; phytochelatin &#xC804;&#xC1A1; Caenorhabditis elegans&#xC5D0; &#xCE74;&#xB4DC;&#xBBB4; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC624;&#xCC28; &#xC694;&#xAD6C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Fitoquelatinas (PC), (&#xE1;cido gamma-Glu-Cys) n Gly pol&#xED;meros que se consideraban anteriormente que se limita a las plantas y algunos sistemas de hongos, ahora se sabe que juegan un papel cr&#xED;tico en el heavy metal (en particular, Cd2 +) de desintoxicaci&#xF3;n en Caenorhabditis elegans. En vista de la equivalencia funcional de la codificaci&#xF3;n del gen sintetasa C. elegans PC 1, CE-PCS-1, a sus hom&#xF3;logos de origen vegetal y hongos, hemos ido a explorar los procesos aguas abajo de la fabricaci&#xF3;n de PC en este organismo. Aqu&#xED; se describe la identificaci&#xF3;n de un transportador de cinta de media mol&#xE9;cula de uni&#xF3;n a ATP, CeHMT-1, a partir de C. elegans con una topolog&#xED;a equivalente a la del transportador de PC putativo SpHMT-1 de Schizosaccharomyces pombe. En un nivel, CeHMT-1 satisface los requisitos de un factor de tolerancia Cd2 + implicado en el secuestro y / o eliminaci&#xF3;n de los complejos de CD de PC x. Expresi&#xF3;n heter&#xF3;loga de cehmt-1 en S. pombe alivia el Cd2 +-la hipersensibilidad de HMT-mutantes concomitante con la localizaci&#xF3;n de CeHMT-1 a la membrana vacuolar. Represi&#xF3;n de la expresi&#xF3;n de la ce-HMT-1 en los gusanos intactos por el ARN de interferencia (RNAi) confiere un Cd2 +-hipersensibles fenotipo similar pero m&#xE1;s pronunciada que la mostrada por ce-PCS-1 gusanos RNAi. A otro nivel, es evidente a partir de la comparaci&#xF3;n de la morfolog&#xED;a de las c&#xE9;lulas de Ce-HMT-1 y cepcs-1 individuales y dobles mutantes RNAi que CeHMT-1 tambi&#xE9;n contribuye a la tolerancia Cd2 + en otras formas. Considerando que las c&#xE9;lulas epiteliales intestinales de ce-PCS-1 gusanos RNAi sufrir necrosis tras la exposici&#xF3;n a niveles t&#xF3;xicos de Cd2 +, las c&#xE9;lulas correspondientes de ce-HMT-1 gusanos RNAi lugar la elaboraci&#xF3;n de las inclusiones puntiformes de refracci&#xF3;n en las proximidades del n&#xFA;cleo. Adem&#xE1;s, una deficiencia en CeHMT-1 no interfiere con el fenotipo asociado con CePCS-1 deficiencia y viceversa. Doble ce-HMT-1, CE-pcs-1 mutantes RNAi presentan ambas morfolog&#xED;as celulares cuando se expone a Cd2 +. Estos resultados y los de nuestras investigaciones anteriores de la exigencia de la sintasa de PC para la tolerancia a metales pesados &#x200B;&#x200B;en C. elegans demuestran PC-dependiente, HMT-1 mediada por la desintoxicaci&#xF3;n de metales pesados, no s&#xF3;lo en S. pombe, sino tambi&#xE9;n en algunos invertebrados, mientras que al mismo tiempo tiempo que indica que la acci&#xF3;n de CeHMT-1 no depende exclusivamente de la s&#xED;ntesis de PC.

CeHMT-1, un Transportador fitoquelatina putativo, se requiere para la Tolerancia el cadmio en Caenorhabditis elegans

&#x7EDC; (PC) &#x5408;&#x9176;&#x662F;&#x50AC;&#x5316;&#x5408;&#x6210; (&gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;) nGly &#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x3001; &#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD; (GSH) &#x548C;/&#x6216;&#x77ED;&#x94FE; Pc &#x4ECE;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7ED1;&#x5B9A; Pc &#x7684; &gamma; &#x6C34;&#x4E8C;&#x80BD;&#x9170;&#x80BD; (&gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;) transpeptidases&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5B83;&#x4ECE;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; &#xFF08;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; &#xFF1B; &#x663E;&#x793A;&#x901A;&#x8FC7;&#x9176;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;AtPCS1&#xFF09;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x72EC;&#x81EA;&#xFF0C;&#x4E00;&#x534A;&#x662F;&#x8DB3;&#x591F;&#x4E3A;&#x6838;&#x5FC3;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4E2D;&#x95F4;&#xFF0C;&#x5355;&#x7AD9;&#x70B9;&#x9176;&#x9170;&#x57FA;&#x901A;&#x8FC7;&#x50AC;&#x5316;&#x5B83;&#x5E76;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x5728;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x9170;&#x548C;&#x5F3A;&#x5316;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x514D;&#x8D39; Cd2 +&#x3002;&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684; N &#x8EAB;&#x60A3; hexahistidinyl &#x6807;&#x7B7E; AtPCS1 &#x622A;&#x65AD;&#x5305;&#x542B;&#x53EA;&#x9996;&#x5148; 221 N &#x672B;&#x7AEF;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA; (HIS AtPCS1_221tr) &#x662F;&#x9176;&#x7684;&#x5728;&#x5408;&#x6210;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x4ECE; Pc &#x4E2D;&#x5305;&#x542B; Cd2 + &#x6216;&#x5408;&#x6210; S methylglutathione S-&#x7532;&#x57FA;-Pc &#x4E2D;&#x6CA1;&#x6709;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x5A92;&#x4F53;&#x5A92;&#x4F53;&#x4E3B;&#x7BA1;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x800C;&#x5176;&#x5168;&#x957F; hexahistidinyl &#x6807;&#x8BB0;&#x7B49;&#x6548;&#xFF0C;HIS-AtPCS1&#xFF0C;&#x671F;&#x95F4; Cd2 + &#x7ECF;&#x5386;&#x5728;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684; &gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x9170;-&#x4F9D;&#x8D56; Pc &#x4ECE;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x662F;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x514D;&#x8D39; Cd2 + &#x5408;&#x6210; S methylglutathione S-&#x7532;&#x57FA;-Pc &#x65F6;&#xFF0C;HIS AtPCS1_221tr &#x7ECF;&#x5386; &gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x5728;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x65F6;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x662F;&#x886C;&#x5E95;&#x5E76;&#x4E0D;&#x76F4;&#x63A5;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E86;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53CD;&#x800C;&#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x514D;&#x8D39; Cd2 + S methylglutathione &#x65F6;&#x57FA;&#x677F;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5E8F;&#x5217;&#x641C;&#x7D22;&#x7B97;&#x6CD5;&#x80FD;&#x591F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x51FA;&#x9065;&#x8FDC;&#x540C;&#x6E90;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x524D;&#x4F5C;&#x4E00;&#x7B80;&#x5355;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x80FD;&#x5728;&#x5176;&#x6574;&#x4E2A;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x786E;&#x5B9A;&#xFF0C;N &#x7AEF; AtPCS1 &#x4EE5;&#x53CA;&#x4ECE;&#x5176;&#x4ED6;&#x6765;&#x6E90;&#x4E0E;&#x5176;&#x7B49;&#x6548;&#x7684;&#x4E00;&#x534A;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x6C0F;&#x65CF; CA Cys &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x800C;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x83B7;&#x5F97;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x9065;&#x8FDC;&#x539F;&#x6838; PC &#x5408;&#x9176;&#x540C;&#x6E90;&#x5FF5;&#x73E0;&#x85FB;&#x84DD;&#x85FB;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x8BC1;&#x5B9E;&#xFF0C;&#x63A8;&#x65AD;&#x51FA;&#x6298;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x6709;&#x80FD;&#x529B;&#x89E3;&#x91CA;&#x5B88;&#x6052;&#x7684; Cys &#x6B8B;&#x7559;&#xFF0C;Cys-56 AtPCS1&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#xFF0C;biosynthetically &#x4E3B;&#x7BA1; &gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x9176;&#x9170;&#x57FA;&#x5728;&#x4E25;&#x683C;&#x8981;&#x6C42;&#x4ECE;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x6570;&#x636E;&#x65E8;&#x5728;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x4ED6; 162 &#x548C; Asp 180 &#x7684; AtPCS1&#xFF0C;&#x5047;&#x5B9A;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x9ED1;&#x793E;&#x4F1A;&#x7684;&#x5F88;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x5C1A;&#x672A;&#x63D0;&#x4EA4;&#x3002;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684; AtPCS1 &#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x7406;&#x89E3;&#x8FD9;&#x4E00;&#x77ED;&#x7F3A;&#x662F;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x8BB2;&#x8BDD;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; Cys 56 &#x4ED6; 162 &#x548C; Asp 180 &#x662F;&#x786E;&#x5B9E;&#x9700;&#x8981;&#x51C0;&#x7535;&#x8111;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x5B83;&#x56E0;&#x6B64;&#x800C;&#x786E;&#x7ACB;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;AtPCS1 &#x548C;&#x6697;&#x793A;&#xFF0C;&#x5176;&#x4ED6;&#x771F;&#x6838; PC &#x5408;&#x9176;&#x662F;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; Cys &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x8D85;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x5374;&#x662F;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9664;&#x4E86;&#x6709;&#x7ECF;&#x5386;&#x4E3B; &gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x9170;&#xFF0C;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6837; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x8F85;&#x52A9;&#x91D1;&#x5C5E;&#x611F;&#x5E94; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x7684;&#x7ECF;&#x5386;&#x4E8C;&#x6B21; &gamma;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x9170;&#x539F;&#x6838;&#x540C;&#x884C;&#x3002;

&#x81F4;&#x7A81;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x9ED1;&#x793E;&#x4F1A;&#x3001; &#x5145;&#x5206;&#x6027;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x9176;&#x3001; &#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x5355;&#x7AD9;&#x70B9;&#x6838;&#x5FC3;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x548C; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x771F;&#x6838;&#x7EDC;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x5F3A;&#x5316;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x57DF;&#x3002;

Phytochelatin (PC) synthases are gamma-glutamylcysteine (gamma-Glu-Cys) dipeptidyl transpeptidases that catalyze the synthesis of heavy metal-binding PCs, (gamma-Glu-Cys)nGly polymers, from glutathione (GSH) and/or shorter chain PCs. Here it is shown through investigations of the enzyme from Arabidopsis (Arabidopsis thaliana; AtPCS1) that, although the N-terminal half of the protein, alone, is sufficient for core catalysis through the formation of a single-site enzyme acyl intermediate, it is not sufficient for acylation at a second site and augmentative stimulation by free Cd2+. A purified N-terminally hexahistidinyl-tagged AtPCS1 truncate containing only the first 221 N-terminal amino acid residues of the enzyme (HIS-AtPCS1_221tr) is competent in the synthesis of PCs from GSH in media containing Cd2+ or the synthesis of S-methyl-PCs from S-methylglutathione in media devoid of heavy metal ions. However, whereas its full-length hexahistidinyl-tagged equivalent, HIS-AtPCS1, undergoes gamma-Glu-Cys acylation at two sites during the Cd2+-dependent synthesis of PCs from GSH and is stimulated by free Cd2+ when synthesizing S-methyl-PCs from S-methylglutathione, HIS-AtPCS1_221tr undergoes gamma-Glu-Cys acylation at only one site when GSH is the substrate and is not directly stimulated, but instead inhibited, by free Cd2+ when S-methylglutathione is the substrate. Through the application of sequence search algorithms capable of detecting distant homologies, work we reported briefly before but not in its entirety, it has been determined that the N-terminal half of AtPCS1 and its equivalents from other sources have the hallmarks of a papain-like, Clan CA Cys protease. Whereas the fold assignment deduced from these analyses, which substantiates and is substantiated by the recent determination of the crystal structure of a distant prokaryotic PC synthase homolog from the cyanobacterium Nostoc, is capable of explaining the strict requirement for a conserved Cys residue, Cys-56 in the case of AtPCS1, for formation of the biosynthetically competent gamma-Glu-Cys enzyme acyl intermediate, the primary data from experiments directed at determining whether the other two residues, His-162 and Asp-180 of the putative papain-like catalytic triad of AtPCS1, are essential for catalysis have yet to be presented. This shortfall in our basic understanding of AtPCS1 is addressed here by the results of systematic site-directed mutagenesis studies that demonstrate that not only Cys-56 but also His-162 and Asp-180 are indeed required for net PC synthesis. It is therefore established experimentally that AtPCS1 and, by implication, other eukaryotic PC synthases are papain Cys protease superfamily members but ones, unlike their prokaryotic counterparts, which, in addition to having a papain-like N-terminal catalytic domain that undergoes primary gamma-Glu-Cys acylation, contain an auxiliary metal-sensing C-terminal domain that undergoes secondary gamma-Glu-Cys acylation.

Mutagenic definition of a papain-like catalytic triad, sufficiency of the N-terminal domain for single-site core catalytic enzyme acylation, and C-terminal domain for augmentative metal activation of a eukaryotic phytochelatin synthase.

Phytoch&#xE9;latine (PC) synthases sont gamma-glutamyl (gamma-Glu-Cys) dipeptidyl transpeptidases qui catalysent la synth&#xE8;se de m&#xE9;taux lourds-contraignants PC, (gamma-Glu-Cys) polym&#xE8;res nGly, de glutathion (GSH) et / ou PC &#xE0; courte cha&#xEE;ne . Ici, il est repr&#xE9;sent&#xE9; par des enqu&#xEA;tes de l&#x26;#39;enzyme &#xE0; partir d&#x26;#39;Arabidopsis (Arabidopsis thaliana; AtPCS1) qui, bien que la moiti&#xE9; N-terminale de la prot&#xE9;ine, seul, est suffisante pour la catalyse de base par la formation d&#x26;#39;une unique site d&#x26;#39;enzyme de acyle interm&#xE9;diaire, il est pas suffisante pour l&#x26;#39;acylation &#xE0; un second site de stimulation et am&#xE9;lior&#xE9;e par Cd 2 + libres. Un purifi&#xE9; N-terminale hexahistidinyl-&#xE9;tiquet&#xE9; AtPCS1 truncate ne contenant que les 221 premiers r&#xE9;sidus N-terminaux d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s de l&#x26;#39;enzyme (HIS-AtPCS1_221tr) est comp&#xE9;tente dans la synth&#xE8;se de PC de GSH dans les milieux contenant Cd2 + ou la synth&#xE8;se de S-m&#xE9;thyl- PC &#xE0; partir de S-methylglutathione dans des milieux d&#xE9;pourvus d&#x26;#39;ions de m&#xE9;taux lourds. Cependant, alors que sa pleine longueur &#xE9;quivalente hexahistidinyl-&#xE9;tiquet&#xE9;, HIS-AtPCS1, subit gamma-Glu-Cys acylation sur deux sites au cours de la Cd2 +-d&#xE9;pendante la synth&#xE8;se des PC de GSH et est stimul&#xE9;e par free Cd2 + lors de la synth&#xE8;se de S-m&#xE9;thyl-PC &#xE0; partir S-methylglutathione, HIS-AtPCS1_221tr subit gamma-Glu-Cys acylation &#xE0; un seul site lorsque GSH est le substrat et n&#x26;#39;est pas directement stimul&#xE9;, mais au lieu inhib&#xE9;e, Cd 2 + par libre lorsque S-methylglutathione est le substrat. Gr&#xE2;ce &#xE0; l&#x26;#39;application d&#x26;#39;algorithmes de recherche de s&#xE9;quences capables de d&#xE9;tecter des homologies lointaines, de travailler, nous avons signal&#xE9; bri&#xE8;vement avant, mais pas dans son int&#xE9;gralit&#xE9;, il a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9; que la moiti&#xE9; N-terminale de AtPCS1 et ses &#xE9;quivalents provenant d&#x26;#39;autres sources ont les caract&#xE9;ristiques d&#x26;#39;une similaire &#xE0; la papa&#xEF;ne , le clan CA prot&#xE9;ase Cys. Consid&#xE9;rant que la cession fois d&#xE9;duite de ces analyses, ce qui justifie et est motiv&#xE9;e par la d&#xE9;cision r&#xE9;cente de la structure cristalline d&#x26;#39;un homologue lointain PC procaryote synthase de la cyanobact&#xE9;rie Nostoc, est capable d&#x26;#39;expliquer l&#x26;#39;exigence stricte d&#x26;#39;un r&#xE9;sidu conserv&#xE9; Cys, Cys-56 dans le cas d&#x26;#39;AtPCS1, pour la formation de la biosynth&#xE8;se comp&#xE9;tente gamma-Glu-Cys enzyme acyl interm&#xE9;diaire, les donn&#xE9;es provenant des exp&#xE9;riences primaires destin&#xE9;e &#xE0; d&#xE9;terminer si les deux autres r&#xE9;sidus, His-162 et Asp-180 du putatif papa&#xEF;ne en forme de triade catalytique de AtPCS1, sont essentiels pour la catalyse n&#x26;#39;ont pas encore &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;sent&#xE9;. Ce manque &#xE0; gagner dans notre compr&#xE9;hension de base de AtPCS1 est abord&#xE9; ici par les r&#xE9;sultats des &#xE9;tudes syst&#xE9;matiques de mutagen&#xE8;se dirig&#xE9;e sur un site qui d&#xE9;montrent que non seulement Cys-56, mais aussi sa-162 et Asp-180 sont en effet n&#xE9;cessaire &#xE0; la synth&#xE8;se PC nette. Il est donc &#xE9;tabli exp&#xE9;rimentalement que AtPCS1 et, par voie de cons&#xE9;quence, d&#x26;#39;autres synthases PC eucaryotes sont la papa&#xEF;ne Cys membres de la superfamille de la prot&#xE9;ase, mais celles, contrairement &#xE0; leurs homologues procaryotes, qui, en plus d&#x26;#39;avoir une similaire &#xE0; la papa&#xEF;ne domaine N-terminal catalytique qui subit primaire gamma- Glu-Cys acylation, contiennent un auxiliaire de m&#xE9;tal de d&#xE9;tection C-terminale du domaine qui subit secondaire gamma-Glu-Cys acylation.

D&#xE9;finition d&#x26;#39;un mutag&#xE8;ne Triade similaire &#xE0; la papa&#xEF;ne catalytique, la suffisance du domaine N-terminal pour site unique acylation core enzyme catalytique, et C-terminale du domaine pour l&#x26;#39;activation d&#x26;#39;un m&#xE9;tal de suppl&#xE9;ance &#xE0; Synthase eucaryote phytoch&#xE9;latine

Phytochelatine (PC)-Synthasen sind Gamma-Glutamylcystein-(Gamma-Glu-Cys) Dipeptidylpeptidase-Transpeptidases, die die Synthese der Heavy-Metal-Bindung-PCs (Gamma-Glu-Cys) nGly Polymere, von Glutathion (GSH) und/oder k&uuml;rzere Kette PCs zu katalysieren. Hier wird es durch Untersuchungen des Enzyms aus Arabidopsis (Arabidopsis Thaliana; gezeigt AtPCS1), obwohl die N-terminale H&auml;lfte des Proteins, allein reicht f&uuml;r Kern-Katalyse durch die Bildung von einem einzigen Standort Enzym Acyl Mittelstufe, es reicht nicht f&uuml;r Acylierung, an einem zweiten Ort und augmentative Stimulierung durch kostenlose Cd2 +. Eine gereinigte N-unheilbar Hexahistidinyl markiert AtPCS1 abschneiden, die nur die zuerst 221 N-terminalen Aminos&auml;ure R&uuml;ckst&auml;nde des Enzyms (KIS-AtPCS1_221tr) ist in der Synthese von PCs von GSH in Medien mit Cd2 + oder die Synthese von S-Methylglutathione-S-Methyl-PCs in Medien frei von Schwermetallionen zust&auml;ndig. Jedoch w&auml;hrend in Hexahistidinyl-Tags gleichwertig KIS-AtPCS1, w&auml;hrend die Cd2 + Gamma-Glu-Cys-Acylierung, an zwei Standorten unterzogen wird-abh&auml;ngige Synthese von PCs von GSH und ist angeregt durch kostenlose Cd2 + beim S-Methylglutathione-S-Methyl-PCs Synthese, KIS-AtPCS1_221tr erf&auml;hrt Gamma-Glu-Cys Acylierung nur an einem Standort, wenn GSH das Substrat ist und wird nicht direkt stimuliert, sondern stattdessen gehemmt, durch frei Cd2 + beim S-Methylglutathione das Substrat ist. Durch die Anwendung der Sequenz Suchalgorithmen Aufsp&uuml;ren von entfernte Homologien, Arbeit, die wir kurz vor, aber nicht in seiner Gesamtheit berichteten, es wurde festgelegt, die die N-terminale H&auml;lfte von AtPCS1 und ihren &Auml;quivalenten aus anderen Quellen haben Kennzeichen eine Papain-&auml;hnliche, Clan CA Cys-Protease. W&auml;hrend die Falten-Zuweisung, abgeleitet aus diesen Analysen, die begr&uuml;ndet und durch die j&uuml;ngsten Bestimmung &uuml;ber die Kristallstruktur von einem fernen prokaryotischen PC Synthase Homolog von Cyanobacterium Nostoc begr&uuml;ndet ist, erkl&auml;ren die strenge Anforderung f&uuml;r einen konservierten Cys-R&uuml;ckstand, Cys-56 bei AtPCS1, f&uuml;r die biosynthetically zust&auml;ndigen Gamma-Glu-Cys-Enzym Acyl Mittelstufe, Bildung kann die Prim&auml;rdaten aus Experimenten gerichtet auf die Festlegung, ob die anderen zwei R&uuml;ckst&auml;ndeHis-162 und Asp-180 von der vermeintlichen Papain-&auml;hnliche Katalytische Triade AtPCS1, unverzichtbar f&uuml;r Katalyse haben noch vorgelegt werden. Dieses Manko in unserem grundlegenden Verst&auml;ndnis der AtPCS1 richtet sich hier durch die Ergebnisse der systematischen Site-verwiesene Mutagenese Studien, die zeigen, dass nicht nur die Cys-56, sondern auch seine-162 und Asp-180 f&uuml;r net PC-Synthese in der Tat erforderlich sind. Es ist daher experimentell festgestellt, dass AtPCS1 und, durch Implikation, anderen eukaryotischen PC-Synthasen Papain Cys Protease &Uuml;berfamilie Mitglieder allerdings solche, im Gegensatz zu ihren Prokaryoten, die, zus&auml;tzlich zum haben einer Papain-&auml;hnliche N-terminalen katalytischen Dom&auml;ne, die prim&auml;re Gamma-Glu-Cys-Acylierung, erf&auml;hrt eine zus&auml;tzliche Metall-Sensorik C-terminalen Dom&auml;ne enthalten, die sekund&auml;re Gamma-Glu-Cys-Acylierung erf&auml;hrt.

Mutagene Definition eine Papain-&auml;hnliche Katalytische Triade, die Hinl&auml;nglichkeit der N-terminalen Dom&auml;ne f&uuml;r einzelne Standorte Kern katalytischen Enzym Acylierung und C-terminalen Dom&auml;ne f&uuml;r augmentative Metall Aktivierung einer eukaryotischen Phytochelatine-Synthase.

Synthases fitochelatina (PC) sono gamma-glutamilcisteina (gamma-Glu-Cys) dipeptidil transpeptidases che catalizzano la sintesi di heavy metal-binding PCs, polimeri nGly (gamma-Glu-Cys), glutatione (GSH) e/o catena pi&ugrave; corta pz. Qui &egrave; mostrato attraverso indagini dell&#39;enzima da Arabidopsis (Arabidopsis thaliana; AtPCS1) che, sebbene il N-terminale met&agrave; della proteina, da sola, &egrave; sufficiente per la catalisi di base attraverso la formazione di un&#39;acil sito singolo enzima intermedia, non &egrave; sufficiente per acilazione presso un secondo sito e stimolazione aumentativa gratis da Cd2 +. Un purificata N-terminali contrassegnati hexahistidinyl AtPCS1 truncate contenente solo il prima volta 221 N-terminale residui dell&#39;amminoacido dell&#39;enzima (HIS-AtPCS1_221tr) &egrave; competente nella sintesi dei PC da GSH nei media contenente Cd2 + o la sintesi di S-metil-PC da S-methylglutathione in media privo di ioni di metalli pesanti. Tuttavia, considerando che l&#39;equivalente hexahistidinyl-tagged full-length, HIS-AtPCS1, subisce la gamma-Glu-Cys acilazione presso due siti durante il Cd2 +-dipendente dalla sintesi dei PC da GSH e viene stimolato da libero Cd2 + quando sintetizzare S-metil-PC da S-methylglutathione, AtPCS1_221tr HIS subisce acilazione di gamma-Glu-Cys al solo sito quando GSH &egrave; il substrato e non &egrave; stimolato direttamente, ma invece inibita, libero da Cd2 + quando S-methylglutathione &egrave; il substrato. Attraverso l&#39;applicazione di algoritmi di ricerca di sequenza in grado di individuare omologie distanti, lavoro abbiamo segnalato brevemente prima ma non nella sua interezza, &egrave; stato determinato che il N-terminale met&agrave; del AtPCS1 e suoi equivalenti da altre fonti sono i tratti distintivi di una proteasi Cys CA Clan come papaina,. Considerando che l&#39;assegnazione di piega dedotta da queste analisi, che sostanzia ed &egrave; suffragata dalla recente determinazione della struttura cristallina di un omologo di synthase PC procariota distante dal cyanobacterium Nostoc, &egrave; in grado di spiegare l&#39;obbligo rigoroso per un residuo di Cys conservato, Cys-56 in caso di AtPCS1, per la formazione dell&#39;acil enzima gamma-Glu-Cys biosynthetically competenti intermedie, i dati primari da esperimenti diretto a determinare se le altre due residui162 Sua e Asp-180 della triade catalitica papaina-come putativa di AtPCS1, sono essenziali per la catalisi devono ancora essere presentato. Questa carenza nella nostra comprensione di base di AtPCS1 &egrave; indirizzata qui dai risultati di studi di mutagenesi luogo-diretta sistematica che dimostrano che non solo Cys-56, ma anche sua-162 e Asp-180 sono infatti necessarie per la sintesi netta di PC. Si &egrave; pertanto stabilito sperimentalmente che AtPCS1 e, implicitamente, altri eucarioti synthases PC papaina Cys proteasi Superfamiglia membri ma quelli, a differenza delle loro controparti procariote, che, oltre ad avere un dominio catalitico papaina-come N-terminale che subisce primaria acilazione di gamma-Glu-Cys, contengono un ausiliario dominio C-terminale metallo-sensing che subisce secondaria gamma-Glu-Cys acilazione.

Mutageni definizione di una triade catalitica papaina-come, la sufficienza del dominio N-terminale per singolo sito core catalitico enzima acilazione e dominio C-terminale per l&#39;attivazione di metallo accrescitivo di un eucariote fitochelatina sintasi.

Phytochelatin&#xFF08;PC&#xFF09;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7D50;&#x5408;PC&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#xFF08;&#x3B3;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;-Cys&#xFF09;&#x3092;nGly&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x3001;&#xFF08;GSH&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x77ED;&#x9396;PC&#x306E;&#x3B3;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;&#x3B3;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;-Cys&#xFF09;&#x3092;&#x30B8;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;transpeptidases&#x3067;&#x3059;&#x3002; 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+&#x3001;2&#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x5897;&#x52A0;&#x7684;&#x306A;&#x523A;&#x6FC0;&#x3067;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;N&#x672B;&#x7AEF;hexahistidinyl&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;AtPCS1&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;221 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S-methylglutathione&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3002;&#x9060;&#x3044;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x914D;&#x5217;&#x691C;&#x7D22;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;AtPCS1&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x7B49;&#x4FA1;&#x7269;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x30CF;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306A;&#x3044;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;CA&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3002;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x53CA;&#x3073;&#x85FB;&#x30CD;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E5;&#x30E2;&#x304B;&#x3089;&#x9060;&#x3044;&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;PC&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x304B;&#x3089;&#x63A8;&#x5B9A;&#x500D;&#x306E;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Cys&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;Cys-56&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x53B3;&#x683C;&#x306A;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001; 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AtPCS1&#x306E;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x7406;&#x89E3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;-56&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5F7C;&#x306E;-162&#x3068;Asp-180&#x304C;&#x5B9F;&#x969B;&#x306B;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;PC&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306A;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306B;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;AtPCS1&#x3068;&#x3001;&#x660E;&#x793A;&#x7684;&#x306B;&#x3082;&#x9ED9;&#x793A;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;PC&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;N&#x672B;&#x7AEF;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3B3;-&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x304C;&#x3082;&#x306E;&#x3092;&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;Glu-Cys&#x3092;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3001;&#x4E8C;&#x6B21;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#x7DDA;&#x306E;Glu-Cys&#x3092;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3001;&#x88DC;&#x52A9;&#x91D1;&#x5C5E;&#x611F;&#x77E5;C-&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C8;&#x30B1;&#x30E9;&#x30C1;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30BF;&#x30EB;&#xB7;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A2;&#x30C9;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B3;&#x30A2;&#x9175;&#x7D20;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5341;&#x5206;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;C-&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x5B9A;&#x7FA9;

Phytochelatin (PC) synthases&#xB294; &#xD5E4;&#xBE44; &#xBA54;&#xD0C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; Pc, glutathione (GSH) &#xB610;&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; &#xCCB4;&#xC778; Pc (&#xAC10;&#xB9C8;-Glu-Cys) nGly &#xACE0;&#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD558;&#xB294; &#xAC10;&#xB9C8;-glutamylcysteine (&#xAC10;&#xB9C8;-Glu-Cys) dipeptidyl transpeptidases. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; Arabidopsis (Arabidopsis thaliana; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. AtPCS1)&#xB294;, &#xBE44;&#xB85D; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; acylation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xD63C;&#xC790;&#xC758; &#xC808;&#xBC18;&#xC740; &#xC911;&#xAC04;, &#xB2E8;&#xC77C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD6A8;&#xC18C; acyl&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD575;&#xC2EC; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBC0F; &#xC758;&#xD574; &#xBB34;&#xB8CC; &#xC544;&#xB3D9;&#xC774; &#xC790;&#xADF9; Cd2 +. &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; N &#xB9D0;&#xAE30; hexahistidinyl &#xD0DC;&#xADF8; AtPCS1 &#xC798;&#xB77C;&#xB0B4;&#xAE30;&#xB9CC; &#xBA3C;&#xC800; 221 N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; (HIS AtPCS1_221tr)&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; c d 2&#xB97C; + &#xB610;&#xB294; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628;&#xC740; &#xC5C6;&#xB294; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; S-&#xBA54; &#xD2F8;-Pc S-methylglutathione&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC758; GSH&#xC5D0;&#xC11C; Pc&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB2A5;&#xB825;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; hexahistidinyl &#xD0DC;&#xADF8; &#xC0C1;&#xC751;, HIS AtPCS1 &#xB3D9;&#xC548; Cd2 + &#xB450; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xB9C8; Glu Cys acylation&#xB97C; &#xACAA; &#xC2B5;-GSH&#xC5D0;&#xC11C; Pc&#xC758; &#xC885;&#xC18D; &#xD569;&#xC131; &#xC790;&#xADF9; &#xC774;&#xBA70; &#xBB34;&#xB8CC; Cd2 + S-&#xBA54; &#xD2F8;-Pc S methylglutathione&#xC5D0;&#xC11C; &#xD569;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;, HIS AtPCS1_221tr &#xAC70;&#xCE69;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xB9CC; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xB9C8; Glu Cys acylation GSH &#xAE30;&#xD310; &#xC774;&#xBA70; &#xC9C1;&#xC811; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB300;&#xC2E0; &#xC800;&#xD574;&#xB85C; &#xBB34;&#xB8CC; Cd2 + S methylglutathione &#xAE30;&#xD310; &#xC77C; &#xB54C;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998; &#xBA3C; homologies, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC790;&#xC0AC;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC5C6;&#xB294; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; N &#xB9E8;&#xB05D; AtPCS1 &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC18C;&#xC2A4; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xB4F1;&#xAC00;&#xBB3C;&#xC758; &#xBC18; papain &#xAC19;&#xC740; &#xC77C;&#xC871; CA Cys protease&#xC758; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC785;&#xC99D; &#xD558; &#xACE0; cyanobacterium Nostoc&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA3C; prokaryotic PC synthase &#xCCB4;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xB860; &#xBC30; &#xD560;&#xB2F9;&#xC740; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; Cys&#xC758; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;, Cys-56, AtPCS1, biosynthetically &#xAD00;&#xD560; &#xAC10;&#xB9C8; Glu Cys &#xD6A8;&#xC18C; acyl &#xC911;&#xAC04;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5C4;&#xACA9;&#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xACB0;&#xC815; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB450; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xADF8;&#xC758;-162&#xC640; Asp-180, AtPCS1, &#xC0C1; papain &#xAC19;&#xC740; &#xCD09;&#xB9E4; &#xAE61;&#xD328;&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4;&#xB294; &#xC544;&#xC9C1; &#xC218; &#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC801;&#xC790; Atpcs1&#xC758; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xAE30; Cys-56 &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xADF8;&#xC758; 162 &#xBC0F; Asp-180&#xC740; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; net PC &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC785;&#xC99D; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; mutagenesis &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xD574;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xB9BD;&#xC740; &#xADF8; AtPCS1 &#xACE0; &#xC554;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C4; &#xD575; PC synthases &#xB2E4;&#xB978; &#xBA64;&#xBC84;&#xC778; papain Cys protease superfamily &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; prokaryotic &#xB300;&#xC751; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAC10;&#xB9C8; Glu Cys acylation &#xACAA; &#xC2B5; papain &#xAC19;&#xC740; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC678;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC870; &#xAE08;&#xC18D; &#xAC10;&#xC9C0; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xACAA; &#xC2B5; &#xBCF4;&#xC870; &#xAC10;&#xB9C8; Glu Cys acylation&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xB4E4;&#xC744; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;.

Papain &#xAC19;&#xC740; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD2B8;&#xB77C;&#xC774; &#xC5B4; &#xB4DC;, &#xC9C4; &#xD575; phytochelatin synthase&#xC758; &#xC544;&#xB3D9;&#xC774; &#xAE08;&#xC18D; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD575;&#xC2EC; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD6A8;&#xC18C; acylation&#xC758; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC758; &#xC790;&#xC871;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xC6D0; &#xC131; &#xC815;&#xC758;.

Phytochelatin (PC) sintasas son gamma-glutamilciste&#xED;na (&#xE1;cido gamma-Glu-Cys) dipeptidil transpeptidasas que catalizan la s&#xED;ntesis de uni&#xF3;n de metal pesado-PC, (&#xE1;cido gamma-Glu-Cys) pol&#xED;meros nGly, de glutati&#xF3;n (GSH) y / o m&#xE1;s cortos PCs cadena . Aqu&#xED; se muestra a trav&#xE9;s de las investigaciones de la enzima de Arabidopsis (Arabidopsis thaliana; AtPCS1) que, aunque la mitad N-terminal de la prote&#xED;na, por s&#xED; solo, es suficiente para la cat&#xE1;lisis n&#xFA;cleo a trav&#xE9;s de la formaci&#xF3;n de un solo sitio de la enzima acil intermedio, es no es suficiente para la acilaci&#xF3;n en un segundo sitio y la estimulaci&#xF3;n aumentativa por el libre Cd2 +. Un purificado N-terminal hexahistidinyl-etiquetados AtPCS1 truncado que contiene s&#xF3;lo los primeros 221 residuos N-terminal de amino&#xE1;cidos de la enzima (SU-AtPCS1_221tr) es competente en la s&#xED;ntesis de los ordenadores de GSH en medios que contienen Cd2 + o la s&#xED;ntesis de S-metil- PC de S-methylglutathione en medios desprovistos de iones de metales pesados. Sin embargo, mientras que su cuerpo entero equivalente hexahistidinyl de etiquetado, SU-AtPCS1, se somete a la gamma-Glu-Cys acilaci&#xF3;n en dos sitios durante el Cd2 +-dependiente de la s&#xED;ntesis de los ordenadores de GSH y es estimulada por la libre Cd2 +, cuando la s&#xED;ntesis de S-metil-PC de S-methylglutathione, SU-AtPCS1_221tr sufre gamma-Glu-Cys acilaci&#xF3;n en un solo sitio, cuando el GSH es el sustrato y no se estimula directamente, sino que inhibe, por el libre Cd2 + en S-methylglutathione es el sustrato. Mediante la aplicaci&#xF3;n de algoritmos de b&#xFA;squeda de secuencias capaces de detectar homolog&#xED;as distantes, trabajar se inform&#xF3; brevemente antes, pero no en su totalidad, se ha determinado que la mitad N-terminal de AtPCS1 y sus equivalentes de otras fuentes tienen las caracter&#xED;sticas de una papa&#xED;na-como , el clan CA Cys de la proteasa. Considerando que la asignaci&#xF3;n de veces deducir de estos an&#xE1;lisis, lo que justifica y se ve corroborada por la reciente determinaci&#xF3;n de la estructura cristalina de un lejano hom&#xF3;logo procariota sintasa PC de la cianobacteria Nostoc, es capaz de explicar el requisito estricto de un residuo conservado Cys, Cys-56 en el caso de AtPCS1, para la formaci&#xF3;n de la biosint&#xE9;ticamente competente gamma-Glu-Cys enzima acil intermedio, los datos primarios de experimentos dirigidos a determinar si los otros dos residuos, Su-162 y Asp 180-de la supuesta papa&#xED;na-como tr&#xED;ada catal&#xED;tica de AtPCS1, son esenciales para la cat&#xE1;lisis a&#xFA;n no se han presentado. Este d&#xE9;ficit en nuestro conocimiento b&#xE1;sico de AtPCS1 se menciona aqu&#xED; por los resultados de estudios sistem&#xE1;ticos de mutag&#xE9;nesis dirigida de sitio que demuestran que no s&#xF3;lo Cys-56 sino tambi&#xE9;n Su-162 y Asp 180-son de hecho necesario para la s&#xED;ntesis neta de PC. Por consiguiente, se estableci&#xF3; experimentalmente que AtPCS1 y, en consecuencia, otros sintasas PC eucariotas se papa&#xED;na Cys miembros de la superfamilia de la proteasa, pero unos, a diferencia de sus hom&#xF3;logos procariotas, que, adem&#xE1;s de tener una papa&#xED;na-como N-terminal del dominio catal&#xED;tico que sufre primaria gamma- Glu-Cys acilaci&#xF3;n, contienen un auxiliar de metal-detecci&#xF3;n dominio C-terminal que sufre secundaria gamma-Glu-Cys acilaci&#xF3;n.

Definici&#xF3;n mutag&#xE9;nico de una tr&#xED;ada catal&#xED;tica similar a la papa&#xED;na, suficiencia del dominio N-terminal para la acilaci&#xF3;n de un solo sitio de la enzima n&#xFA;cleo catal&#xED;tico y el dominio C-terminal para la activaci&#xF3;n de un metal Aumentativa sintasa fitoquelatina eucariotas

HMT-1 (&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x516C;&#x5DEE;&#x56E0;&#x5B50; 1) &#x4E9A;&#x79D1;&#x534A;&#x5206;&#x5B50; ATP &#x7ED3;&#x5408;&#x76D2;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x6240;&#x9700;&#x7684; Cd2 + &#x7C9F;&#x3001; &#x6746;&#x7EBF;&#x866B;&#x548C;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB;&#x7684;&#x5BBD;&#x5BB9;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5BF9; S.&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x63D0;&#x8BAE;&#x5165; vacuolysosomal &#x76D2; SpHMT-1 &#x8FD0;&#x8F93;&#x91CD;&#x578B; metal.phytochelatin &#xFF08;PC&#xFF09; &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;Pc &#x4E2D;&#x690D;&#x7269;&#x3001; &#x771F;&#x83CC;&#x548C;&#x7EBF;&#x866B;&#x4E2D;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x662F;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x884D;&#x751F;&#x54C1;&#x8CEA;&#x5408; PC (&#x4E2A;&#x4EBA;&#x7535;&#x8111;)&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x5B66;&#x7684;&#x7EBF;&#x866B;&#x4E2D;, &#x5EFA;&#x8BAE; HMT-1 &#x548C; PC 1 &#x4E0D;&#x4E00;&#x5B9A;&#x5E72;&#x5728;&#x97F3;&#x4E50;&#x4F1A;&#x4E2D;&#x91D1;&#x5C5E;&#x89E3;&#x6BD2;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x63A2;&#x8BA8;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E0D;&#x4E00;&#x81F4;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x662F;&#x5426; DmHMT-1&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x6E90;&#xFF0C;&#x679C;&#x8747;&#xFF0C;&#x5176;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7F3A;&#x4E4F; PC &#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#xFF0C;HMT 1 &#x4E2D;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7684;&#x89E3;&#x6BD2;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x6837;&#x505A;&#x65F6;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; DmHMT-1 &#x6291;&#x5236;&#x8FC7;&#x654F; Cd2 + S.&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD; hmt 1 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5230;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x819C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4E0D;&#x8FD0;&#x8F93; Cd.PC &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684; S.&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD; hmt 1 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x6269;&#x5C55;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A; SpHMT-1 &#x672C;&#x8EAB;&#x5E76;&#x4E0D;&#x4F20;&#x8F93; Cd.PC &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x6216;&#x8005;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684; Cd.PC/apoPC &#x519C;&#x7528;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8F66;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E00;&#x53D1;&#x73B0;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE;&#xFF0C;HMT 1 &#x548C; PC 1 &#x5728;&#x7B80;&#x5355;&#x7EBF;&#x6027;&#x91D1;&#x5C5E;&#x89E3;&#x6BD2;&#x9014;&#x5F84;&#x4E2D;&#x4E0D;&#x80FD;&#x8FD0;&#x884C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E8E; PC &#x7F3A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x662F;&#x8FC7;&#x654F;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x5143;&#x7D20;&#xFF0C;SpHMT 1 &#x7F3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x8FC7;&#x654F;&#x4E8E; Cd2 +&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E; Hg2 + &#x6216; As3 +&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5927;&#x5927;&#x6539;&#x53D8;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x7684; HMT 1 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x53CA;&#x8C03;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x5728; Cd2 + &#x89E3;&#x6BD2;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E; PC &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x679C;&#x8747; ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;DmHMT-1&#xFF0C;&#x8D4B;&#x4E88;&#x5BF9;&#x9549;&#x7684;&#x8010;&#x53D7;&#x3002;DmHMT-1 &#x548C;&#x5176;&#x9175;&#x6BCD;&#x540C;&#x6E90;&#xFF0C;SpHMT-1&#x3001; &#x662F;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x7EDC;&#x5C01;&#x5B58;&#x4E0D;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x3002;

Half-molecule ATP-binding cassette transporters of the HMT-1 (heavy metal tolerance factor 1) subfamily are required for Cd2+ tolerance in Schizosaccharomyces pombe, Caenorhabditis elegans, and Chlamydomonas reinhardtii. Based on studies of S. pombe, it has been proposed that SpHMT-1 transports heavy metal.phytochelatin (PC) complexes into the vacuolysosomal compartment. PCs are glutathione derivatives synthesized by PC synthases (PCS) in plants, fungi, and C. elegans in response to heavy metals. Our previous studies in C. elegans, however, suggested that HMT-1 and PCS-1 do not necessarily act in concert in metal detoxification. To further explore this inconsistency, we have gone on to test whether DmHMT-1, an HMT-1 from a new source, Drosophila, whose genome lacks PCS homologs, functions in heavy metal detoxification. In so doing, we show that heterologously expressed DmHMT-1 suppresses the Cd2+ hypersensitivity of S. pombe hmt-1 mutants and localizes to the vacuolar membrane but does not transport Cd.PC complexes. Crucially, similar analyses of S. pombe hmt-1 mutants extend this finding to show that SpHMT-1 itself either does not transport Cd.PC complexes or is not the principal Cd.PC/apoPC transporter. Consistent with this discovery and with our previous suggestion that HMT-1 and PCS-1 do not operate in a simple linear metal detoxification pathway, we demonstrate that, unlike PCS-deficient cells, which are hypersensitive to several heavy metals, SpHMT-1-deficient cells are hypersensitive to Cd2+, but not to Hg2+ or As3+. These findings significantly change our current understanding of the function of HMT-1 proteins and invoke a PC-independent role for these transporters in Cd2+ detoxification.

Drosophila ABC transporter, DmHMT-1, confers tolerance to cadmium. DmHMT-1 and its yeast homolog, SpHMT-1, are not essential for vacuolar phytochelatin sequestration.

Demi-mol&#xE9;cule transporteurs ATP-binding cassette de la HMT-1 (facteur de tol&#xE9;rance aux m&#xE9;taux lourds 1) sous-famille sont n&#xE9;cessaires pour Cd2 + tol&#xE9;rance dans Schizosaccharomyces pombe, Caenorhabditis elegans, et Chlamydomonas reinhardtii. Bas&#xE9; sur des &#xE9;tudes de S. pombe, il a &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9; que SpHMT-1 transporte lourds metal.phytochelatin (PC) complexes dans le compartiment vacuolysosomal. PC sont des d&#xE9;riv&#xE9;s de glutathion synth&#xE9;tis&#xE9;s par synthases PC (PCS) dans les plantes, les champignons, et de C. elegans en r&#xE9;ponse aux m&#xE9;taux lourds. Nos &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures chez C. elegans, cependant, a sugg&#xE9;r&#xE9; que HMT-1 et PCS-1 ne sont pas n&#xE9;cessairement agir de concert dans la d&#xE9;sintoxication des m&#xE9;taux. Pour explorer davantage cette contradiction, nous avons continu&#xE9; &#xE0; tester si DmHMT-1, une HMT-1 d&#x26;#39;une nouvelle source, la drosophile, dont le g&#xE9;nome n&#x26;#39;a pas homologues SCP, les fonctions de d&#xE9;sintoxication des m&#xE9;taux lourds. Ce faisant, nous montrons que h&#xE9;t&#xE9;rologue exprim&#xE9; DmHMT-1 supprime le Cd2 + hypersensibilit&#xE9; de S. pombe HMT-1 mutants et se localise sur la membrane vacuolaire, mais ne transporte pas de complexes Cd.PC. Fondamentalement, des analyses similaires de S. pombe hmt-1 mutants &#xE9;tendre cette conclusion &#xE0; montrer que SpHMT-1 lui-m&#xEA;me ne soit pas transporter complexes Cd.PC ou n&#x26;#39;est pas le principal Cd.PC / apoPC transporteur. Conform&#xE9;ment &#xE0; cette d&#xE9;couverte et avec notre suggestion pr&#xE9;c&#xE9;dente que HMT-1 et PCS-1 ne fonctionne pas dans un simple sentier lin&#xE9;aire de m&#xE9;tal de d&#xE9;sintoxication, nous d&#xE9;montrons que, contrairement &#xE0; PCS cellules d&#xE9;ficientes, qui pr&#xE9;sentent une hypersensibilit&#xE9; &#xE0; plusieurs m&#xE9;taux lourds, SpHMT-1- cellules d&#xE9;ficientes sont hypersensibles &#xE0; Cd2 +, mais pas &#xE0; Hg2 + ou As3 +. Ces r&#xE9;sultats modifier consid&#xE9;rablement notre compr&#xE9;hension actuelle de la fonction de HMT-1 prot&#xE9;ines et d&#x26;#39;invoquer un r&#xF4;le ind&#xE9;pendante du PC pour ces transporteurs dans Cd2 + d&#xE9;sintoxication.

Drosophila ABC Transporter, DmHMT-1, conf&#xE8;re une tol&#xE9;rance au cadmium. DmHMT-1 et son homologue de levure, SpHMT-1, ne sont pas indispensables pour la s&#xE9;questration du phytoch&#xE9;latine vacuolaire

Halb-Molek&uuml;l ATP verbindliche Kassette Transporter der HMT-1 (Heavy-Metal-Toleranzfaktor 1) Unterfamilie sind f&uuml;r Cd2 + Toleranz in Schizosaccharomyces Pombe, Caenorhabditis Elegans und Chlamydomonas Reinhardtii erforderlich. Basierend auf Studien von S. Pombe, wurde vorgeschlagen, dass SpHMT-1 schwere metal.phytochelatin (PC)-komplexe in der Vacuolysosomal-Abteil transportiert. PCs sind Glutathion-Derivate synthetisiert durch PC-Synthasen (PCS) in Pflanzen, Pilzen und C. Elegans als Reaktion auf Schwermetalle. Unsere fr&uuml;heren Studien in Caenorhabditis Elegans, schlug jedoch HMT-1 und PCS-1 nicht unbedingt bei einem Konzert in Metall Entgiftung handeln. Um diese Inkonsistenz weiter zu erforschen, sind wir gegangen zu testen, ob DmHMT-1, ein HMT-1 aus einer neuen Quelle, Drosophila, deren Genom PCS UCP1 fehlt, im Schwermetall-Entgiftung funktioniert. Damit zeigen wir, dass heterologously exprimierten DmHMT-1 die Cd2 + &Uuml;berempfindlichkeit von S. Pombe Hmt-1 Mutanten unterdr&uuml;ckt und an der Membran Vacuolar lokalisiert aber nicht Cd.PC-komplexe transportieren. &Auml;hnliche Analysen von S. Pombe Hmt-1 Mutanten erweitern entscheidend, diese Erkenntnis zu zeigen, dass SpHMT-1 selbst nicht Cd.PC-komplexe transportieren oder nicht das wichtigste Cd.PC/apoPC-Transporter ist. Im Einklang mit dieser Entdeckung und mit unserer fr&uuml;heren Vorschlag, die HMT-1 und PCS-1 nicht in einen einfachen linearen Metall-Entgiftung-Weg t&auml;tig sind, wir zeigen, dass, im Gegensatz zu PCS-defizienten Zellen, die &uuml;berempfindlich auf verschiedene Schwermetalle, SpHMT-1-defizienten Zellen &uuml;berempfindlich auf Cd2 +, aber nicht zu Hg2 + oder As3 +. Diese Befunde deutlich &auml;ndern unser gegenw&auml;rtige Verst&auml;ndnis der Funktion des HMT-1 Proteine und eine PC-unabh&auml;ngige Rolle f&uuml;r diesen Transporter in Cd2 + Entgiftung aufrufen.

Taufliege-ABC-Transporter, DmHMT-1, verleiht Toleranz f&uuml;r Kadmium. DmHMT-1 und seine Hefe-Homolog, SpHMT-1, sind nicht notwendig, f&uuml;r welches Phytochelatine-Sequestrierung.

Met&agrave;-molecola ATP-binding cassette della sottofamiglia HMT-1 (fattore di tolleranza del metallo pesante 1) sono richiesti per Cd2 + tolleranza in Chlamydomonas reinhardtii Schizosaccharomyces pombe e Caenorhabditis elegans. Sulla base di studi di S. pombe &egrave; stato proposto che SpHMT-1 trasporta complessi pesanti metal.phytochelatin (PC) nel vano vacuolysosomal. PC sono glutatione derivati sintetizzati da PC synthases (pz) in c. elegans in risposta ai metalli pesanti, funghi e piante. I nostri studi precedenti in c. elegans, tuttavia, ha suggeriti che HMT-1 e PCS-1 non necessariamente agire di concerto in metallo disintossicazione. Per esplorare ulteriormente questa incoerenza, siamo andati per verificare se DmHMT-1, un HMT-1 da una fonte nuova, drosofila, cui genoma manca omologhi PC, funziona nella disintossicazione di metallo pesante. Cos&igrave; facendo, mostriamo che heterologously espresso DmHMT-1 sopprime il Cd2 + ipersensibilit&agrave; dei mutanti di S. pombe hmt-1 e si localizza alla membrana vacuolar ma non trasporto Cd.PC complessi. Fondamentalmente, simili analisi di mutanti di S. pombe hmt-1 estendono questa constatazione per mostrare che SpHMT-1, stesso trasporto non Cd.PC complessi o non &egrave; il principale trasportatore di Cd.PC/apoPC. Coerente con questa scoperta e con nostro suggerimento precedente che HMT-1 e PCS-1 non operano in un percorso di disintossicazione metallo lineari semplici, ci dimostrano che, a differenza delle cellule PC-carenti, che sono ipersensibili a vari metalli pesanti, le cellule SpHMT-1-carenti sono ipersensibili al Cd2 +, ma non a Hg2 + o As3 +. Questi risultati significativamente cambiano la nostra attuale comprensione della funzione delle proteine HMT-1 e richiamare un ruolo indipendente dal PC per questi trasportatori in Cd2 + disintossicazione.

Trasportatore di ABC di drosofila, DmHMT-1, conferisce tolleranza al cadmio. DmHMT-1 e il suo omologo di lievito, SpHMT-1, sono non essenziale per il sequestro vacuolare fitochelatina.

HMT-1&#xFF08;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x8010;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;1&#xFF09;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x534A;&#x5206;&#x5B50;ATP-&#x7D50;&#x5408;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x88C2;&#x9175;&#x6BCD;&#x3001;&#x7DDA;&#x866B;&#xFF08;Caenorhabditis elegans&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x306E;CD2 +&#x516C;&#x5DEE;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; S. pombe&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;SpHMT-1&#x306F;vacuolysosomal&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x91CD;&#x3044;metal.phytochelatin&#xFF08;PC&#xFF09;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x8F38;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; PC&#x304C;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x3001;&#x83CC;&#x985E;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;C. elegans&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;PC&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;PCS&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x7DDA;&#x866B;C. elegans&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F53;&#x793E;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;HMT-1&#x3068;PCS-1&#x306F;&#x3001;&#x5FC5;&#x305A;&#x3057;&#x3082;&#x91D1;&#x5C5E;&#x89E3;&#x6BD2;&#x306B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x884C;&#x52D5;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x77DB;&#x76FE;&#x3092;&#x63A2;&#x6C42;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;PCS&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x3001;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306E;&#x89E3;&#x6BD2;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x304B;&#x3089;DmHMT-1&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3001;HMT-1&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x3046;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x7A2E;&#x767A;&#x73FE;DmHMT-1&#x306F;CD2 S&#x306E;+&#x904E;&#x654F;&#x6027;&#x9175;&#x6BCD;HMT-1&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x6DB2;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x304C;Cd.PC&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x8F38;&#x9001;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x306A;&#x3089;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x6CE8;&#x610F;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x8868;&#x793A;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;S. pombe&#x306E;HMT-1&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;SpHMT-1&#x81EA;&#x4F53;&#x306F;&#x3069;&#x3061;&#x3089;Cd.PC&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x8F38;&#x9001;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B7;&#x30D1;&#x30EB;apoPC / Cd.PC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3053;&#x3068;&#x3082;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x3068;HMT-1&#x3068;PCS-1&#x306F;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x7DDA;&#x5F62;&#x306E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306E;&#x89E3;&#x6BD2;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x63D0;&#x6848;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306B;&#x904E;&#x654F;&#x306A;PCS-&#x6B20;&#x640D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;SpHMT-1-&#x6B20;&#x640D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;CD2 +&#x306B;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;Hg2 +&#x306E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;AS3 +&#x306B;&#x904E;&#x654F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;HMT-1&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x79C1;&#x9054;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x3066;&#x3001;CD2 +&#x89E3;&#x6BD2;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;PC-&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x547C;&#x3073;&#x51FA;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;DmHMT-1&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30C9;&#x30DF;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x8010;&#x6027;&#x3092;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002; DmHMT-1&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3001;SpHMT-1&#x306F;&#x3001;&#x6DB2;&#x80DE;Phytochelatin&#x9694;&#x96E2;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;

HMT-1 (&#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xACC4;&#xC218; 1) &#xC544;&#xC758; &#xC808;&#xBC18;-&#xBD84;&#xC790; ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xB294; Cd2 + Schizosaccharomyces pombe, Caenorhabditis elegans Chlamydomonas reinhardtii&#xC5D0; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC624;&#xCC28;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. S. pombe&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; SpHMT-1 vacuolysosomal &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; metal.phytochelatin (PC) &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC804;&#xC1A1;. Pc &#xC2DD;&#xBB3C;&#xACFC; &#xACF0; &#xD321;&#xC774;, &#xC911; &#xAE08;&#xC18D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; C. elegans glutathione &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488; PC synthases (PC)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD569;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, C. elegans&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; HMT 1&#xACFC; PC 1 &#xD589;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xBA74; &#xBC18;&#xB4DC;&#xC2DC; &#xAE08;&#xC18D; &#xD574;&#xB3C5;&#xC758; &#xCF58;&#xC11C;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB354;&#xC6B1;&#xC774; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xD0D0;&#xD5D8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; DmHMT-1, &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;, &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; PC homologs &#xBD80;&#xC871;, &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC18C;&#xC2A4;&#xC758; HMT 1 &#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xD574;&#xB3C5;&#xC5D0; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294;&#xC9C0; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xAC14;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB807;&#xAC8C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8; heterologously &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; DmHMT-1 S. pombe hmt 1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; Cd2 + &#xACFC;&#xBBFC; &#xC99D;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; vacuolar &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; localizes Cd.PC &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xC815;&#xC801;&#xC778;, S. pombe hmt 1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC790;&#xCCB4; SpHMT 1 &#xB610;&#xB294; Cd.PC &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC8FC; Cd.PC/apoPC &#xC804;&#xC1A1; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC774; &#xCC3E;&#xB294; &#xD655;&#xC7A5;. HMT 1&#xACFC; PC 1 &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC120;&#xD615; &#xAE08;&#xC18D; &#xD574;&#xB3C5; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xBBC0;&#xB85C; &#xC774;&#xC804; &#xC81C;&#xC548; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758;&#xC774; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; PC &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; SpHMT 1 &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xACFC;&#xBBFC; &#xC785;&#xC99D; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Cd2 +, Hg2 + &#xB098; As3 +. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD06C;&#xAC8C; HMT 1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558; &#xACE0; c d 2 + &#xD574;&#xB3C5;&#xC5D0;&#xC774; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; PC &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD638;&#xCD9C;.

Drosophila ABC transporter, DmHMT-1, &#xCE74;&#xB4DC;&#xBBB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC624;&#xCC28;&#xB97C; &#xC218; &#xC5EC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DmHMT-1&#xACFC; &#xADF8; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xCCB4; SpHMT 1, vacuolar phytochelatin &#xACA9;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Mol&#xE9;cula de Half-ATP vinculante cassette transportistas de la HMT-1 (factor de tolerancia a los metales pesados &#x200B;&#x200B;1) subfamilia son necesarios para la tolerancia Cd2 + en Schizosaccharomyces pombe, Caenorhabditis elegans, y Chlamydomonas reinhardtii. Bas&#xE1;ndose en estudios de S. pombe, se ha propuesto que SpHMT-1 transporta pesados &#x200B;&#x200B;metal.phytochelatin (PC) complejos en el compartimiento vacuolysosomal. PC son los derivados de glutati&#xF3;n sintetizados por sintasas PC (PCS) en las plantas, hongos, y C. elegans en respuesta a los metales pesados. Nuestros estudios previos realizados en C. elegans, sin embargo, sugiri&#xF3; que HMT-1 y PCS-1 no necesariamente actuar en concierto en la desintoxicaci&#xF3;n de metales. Para explorar a&#xFA;n m&#xE1;s esta falta de coherencia, hemos ido a comprobar si DmHMT-1, uno de HMT-1 de una nueva fuente, Drosophila, cuyo genoma no tiene hom&#xF3;logos PCS, las funciones de desintoxicaci&#xF3;n de metales pesados. Al hacerlo, nos muestran que heterologously expres&#xF3; DmHMT-1 suprime la hipersensibilidad de Cd2 + S. pombe HMT-1 mutantes y se localiza en la membrana vacuolar, pero no el transporte de complejos Cd.PC. Fundamentalmente, an&#xE1;lisis similares de S. pombe HMT-1 mutantes extienden esta observaci&#xF3;n para demostrar que SpHMT-1 en s&#xED;, o bien no transportar complejos Cd.PC o no es el principal Cd.PC / apoPC transportador. De acuerdo con este descubrimiento y con nuestra sugerencia anterior de que HMT-1 y PCS-1 no funcionan en un simple camino lineal desintoxicaci&#xF3;n de metales, se demuestra que, a diferencia de las c&#xE9;lulas deficientes en PCS, que son hipersensibles a varios metales pesados, SpHMT-1- c&#xE9;lulas deficientes son hipersensibles a Cd2 +, pero no para Hg2 + + o AS3. Estos resultados cambian significativamente nuestro conocimiento actual de la funci&#xF3;n de HMT-1 prote&#xED;nas e invocar una funci&#xF3;n de PC-independiente de estos transportadores en Cd2 + desintoxicaci&#xF3;n.

Drosophila transportador ABC, DmHMT-1, le confiere tolerancia al cadmio. DmHMT-1 y su hom&#xF3;logo de levadura, SpHMT-1, no son esenciales para el secuestro de fitoquelatina vacuolar

(Ds) &#x53CC;&#x94FE; RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi) &#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x690D;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x751F;&#x6210;&#x8868;&#x793A; dsRNA &#x5728;&#x8DB3;&#x5E95;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x690D;&#x682A;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x4E5F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5229;&#x7528; RNAi &#x6765;&#x5BA1;&#x67E5;&#x5728;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x662F;&#x53E6;&#x5916;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6709;&#x6548;&#x89E6;&#x53D1; RNAi &#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x6D88;&#x8017;&#x57FA;&#x56E0;&#x8A8A;&#x672C;&#x4E5F;&#x5C31;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x66F4;&#x66FF;&#x7387;&#x3002;&#x672C;&#x6587;&#x6240;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5982;&#x679C;&#x77AC;&#x6001; RNAi &#x5728;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6D88;&#x8017;&#x7684;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x548C;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x5177;&#x6709;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x5BFF;&#x547D;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5982;&#x679C; RNAi &#x6316;&#x7A7A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x8BC4;&#x4F30;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C06;&#x662F;&#x53EF;&#x884C;&#x7684;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x8FD9;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x5408;&#x6210;&#x7684; dsRNA&#xFF0C;&#x5BF9;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; (&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;) beta &#x6C34;&#x5408;&#x9176; (ECS1)&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4; ECS1 &#x8A8A;&#x672C;&#x3001; ECS1 &#x591A;&#x80BD;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 72%&#x548C;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x542B;&#x91CF;&#x4E0B;&#x964D;&#x4E86; 60%&#x7684; 95%&#x6D88;&#x8017;&#x7684;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x9176;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0E;&#x5BF9;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x5E7C;&#x82D7;&#x8F74;&#x627F; ECS1 &#x7684; cad2-1 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x5206;&#x6790;&#x540E;&#x83B7;&#x5F97;&#x76F8;&#x82E5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x540C;&#x65F6;&#x6539;&#x5584; RNAi &#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5931;&#x6D3B;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x79BB;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x7EC4;&#x7EC7; d 14 &#x5C81;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; 1 &#x4E2A;&#x6708;&#x5C81;&#x6210;&#x719F;&#x690D;&#x7269;&#x7684;&#x5E7C;&#x82D7;&#xFF0C;&#x672C;&#x6587;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x662F;&#x8FC5;&#x901F; (&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x53EA;&#x63A5;&#x53D7;&#x4ECE;&#x64AD;&#x79CD;&#x79CD;&#x5B50;&#x5230;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76; 20 d)&#x3001; &#x9002;&#x5408;&#x7528;&#x4E8E;&#x5206;&#x6790;&#x591A;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#xFF0C;&#x548C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6210;&#x690D;&#x7269;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x514B;&#x9686; dsRNAs&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;RNAi &#x5728;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x4E2D;&#x8865;&#x5145;&#x4E86;&#x73B0;&#x6709;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x5141;&#x8BB8;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x4F4E;&#x6210;&#x672C;&#x548C;&#x7A7A;&#x95F4;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x521D;&#x6B65;&#x7B5B;&#x9009;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x968F;&#x540E; planta &#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x3002;

&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x6280;&#x672F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Double-stranded (ds)RNA interference (RNAi) is widely used for functional analysis of plant genes and is achieved via generating stable transformants expressing dsRNA in planta. This study demonstrated that RNAi can also be utilized to examine gene functions in protoplasts. Because protoplasts are nongrowing cells, effective RNAi-triggered gene silencing depends not only on a depletion of gene transcripts but also on turnover rates of corresponding polypeptides. Herein, we tested if transient RNAi in protoplasts would result in the depletion of a targeted polypeptide and, because protoplasts have a limited life span, if functional assays of RNAi knockout genes would be feasible in protoplasts. We showed that protoplasts transfection with an in vitro-synthesized dsRNA against Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) beta-glutamylcysteine synthase (ECS1), a key enzyme in the synthesis of glutathione, resulted in a 95% depletion of ECS1 transcript, a 72% decrease of ECS1 polypeptide, and a 60% drop in glutathione content. These results were comparable with those obtained upon analysis of Arabidopsis seedlings bearing the cad2-1 mutant allele of ECS1. We also improved the procedure for RNAi inactivation of several genes simultaneously. Finally, because we isolated protoplasts from tissues of 14-d-old seedlings instead of 1-month-old mature plants, the described procedure is rapid (as it only takes 20 d from seed planting to functional studies), suitable for analyzing multiple genes in parallel, and independent of cloning dsRNAs into plant expression vectors. Therefore, RNAi in protoplasts complements existing genetic tools, as it allows rapid, cost- and space-efficient initial screening and selection of genes for subsequent in planta studies.

Establishing RNA interference as a reverse-genetic approach for gene functional analysis in protoplasts.

Double brin (ds) l&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN (ARNi) est largement utilis&#xE9; pour l&#x26;#39;analyse fonctionnelle des g&#xE8;nes de plantes et est r&#xE9;alis&#xE9; par la g&#xE9;n&#xE9;ration des transformants stables exprimant ARNdb in planta. Cette &#xE9;tude a d&#xE9;montr&#xE9; que l&#x26;#39;ARNi peut &#xE9;galement &#xEA;tre utilis&#xE9;e pour examiner les fonctions des g&#xE8;nes dans des protoplastes. Parce que protoplastes sont nongrowing cellules, efficace gene silencing RNAi d&#xE9;clench&#xE9; d&#xE9;pend non seulement de l&#x26;#39;&#xE9;puisement des transcrits de g&#xE8;nes, mais aussi sur les taux de chiffre d&#x26;#39;affaires de polypeptides correspondants. Ici, nous avons test&#xE9; si transitoire ARNi dans les protoplastes se traduirait par l&#x26;#39;&#xE9;puisement d&#x26;#39;un polypeptide cible et, parce protoplastes ont une dur&#xE9;e de vie limit&#xE9;e, si les tests fonctionnels des g&#xE8;nes knock-out ARNi serait faisable dans les protoplastes. Nous avons montr&#xE9; que la transfection de protoplastes avec un synth&#xE9;tis&#xE9; in vitro contre les ARNdb Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) b&#xEA;ta-synthase glutamylcyst&#xE9;ine (ECS1), une enzyme cl&#xE9; dans la synth&#xE8;se du glutathion, a provoqu&#xE9; une diminution de 95% des ECS1 transcription, une diminution de 72% des ECS1 polypeptide, et une chute de 60% de la teneur en glutathion. Ces r&#xE9;sultats &#xE9;taient comparables &#xE0; ceux obtenus sur l&#x26;#39;analyse des plants d&#x26;#39;Arabidopsis portant l&#x26;#39;all&#xE8;le CAD2-1 mutante de ECS1. Nous avons &#xE9;galement am&#xE9;lior&#xE9; la proc&#xE9;dure pour l&#x26;#39;inactivation des g&#xE8;nes ARNi plusieurs simultan&#xE9;ment. Enfin, parce que nous avons isol&#xE9; des protoplastes &#xE0; partir de tissus de 14-d-plantules au lieu de 1-month-old plantes matures, la proc&#xE9;dure d&#xE9;crite est rapide (car il ne prend que 20 jours &#xE0; partir de plantation des semences &#xE0; des &#xE9;tudes fonctionnelles), adapt&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;analyse des g&#xE8;nes multiples en parall&#xE8;le, et ind&#xE9;pendante de ARNdb clonage dans des vecteurs d&#x26;#39;expression de plantes. Par cons&#xE9;quent, l&#x26;#39;ARNi dans les protoplastes compl&#xE8;te les outils de la g&#xE9;n&#xE9;tique, car il permet rapidement, le co&#xFB;t et l&#x26;#39;espace-efficace de d&#xE9;pistage initial et la s&#xE9;lection des g&#xE8;nes pour la suite dans les &#xE9;tudes planta.

&#xC9;tablir l&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN comme une approche Reverse-g&#xE9;n&#xE9;tique pour analyse fonctionnelle des g&#xE8;nes dans des protoplastes

(Ds) doppelstr&auml;ngige RNA-Interferenz (RNAi) ist weit verbreitet f&uuml;r Funktionsanalyse von Pflanzengene und &uuml;ber die Generierung von stabilen Transformants Ausdr&uuml;cken sequenzspezifischen in Planta erzielt wird. Diese Studie zeigte, dass RNAi auch genutzt werden, kann um Genfunktionen in Urformen zu untersuchen. Da Urformen nongrowing Zellen sind, h&auml;ngt die effektive RNAi-ausgel&ouml;sten gen-silencing nicht nur auf eine Entleerung der Gen-Transkripte, sondern auch von Umsatz Preise der entsprechenden Polypeptide. Hierin, testeten wir wenn transiente RNAi in Urformen der Ersch&ouml;pfung der eine gezielte Polypeptid f&uuml;hren w&uuml;rde, und weil Urformen eine begrenzte Lebensdauer haben, wenn funktionelle Assays RNAi k.o. Gene in Urformen durchf&uuml;hrbar w&auml;re. Wir haben gezeigt, dass Urformen Transfektion mit einer in Vitro synthetisiert sequenzspezifischen gegen Arabidopsis (Arabidopsis Thaliana) Beta-Glutamylcystein-Synthase (ECS1), ein Schl&uuml;sselenzym bei der Synthese von Glutathion, resultierte in einem 95 % Ersch&ouml;pfung der ECS1 Abschrift, eine Senkung der ECS1 Polypeptid 72 % und eine 60 % R&uuml;ckgang der Glutathion-Inhalt. Diese Ergebnisse waren vergleichbar mit denjenigen bei der Analyse von Arabidopsis S&auml;mlinge mit der mutant cad2-1-Allel des ECS1. Wir haben auch gleichzeitig das Verfahren f&uuml;r RNAi Inaktivierung von mehreren Genen verbessert. Da wir Urformen aus Gewebe 14 d-alte S&auml;mlinge statt 1 Monate alten Reifen Pflanzen isoliert, das beschriebene Verfahren ist schlie&szlig;lich schnelle (wie es nur 20 d aus Samen Einpflanzen, Funktionsstudien dauert), geeignet zur Analyse von mehreren Genen parallel und unabh&auml;ngig von Klonen DsRNAs in Anlage Expressionsvektoren. Daher erg&auml;nzt RNAi in Urformen vorhandenen genetischen Tools, da es schnelle, Kosten - und platzsparend ersten Screening und Auswahl von Genen, die f&uuml;r nachfolgende in Planta Studien erlaubt.

&Uuml;ber RNA-Interferenz als umgekehrt-genetischer Ansatz f&uuml;r gen-Funktionsanalyse der Urformen.

Double-stranded (ds) interferenza del RNA (RNAi) &egrave; ampiamente usato per l&#39;analisi funzionale di geni vegetali ed &egrave; raggiunto tramite generazione di stabili transformants esprimendo dsRNA in planta. Questo studio ha dimostrato che la RNAi pu&ograve; essere utilizzato anche per esaminare le funzioni del gene in protoplasti. Perch&eacute; i protoplasti sono cellule nongrowing, silenziamento genico RNAi-innescato efficacia dipende non solo una deplezione dei trascritti del gene ma anche sui tassi di turnover dei polipeptidi corrispondente. Nel presente documento, abbiamo testato se RNAi transitori in protoplasti comporterebbe l&#39;esaurimento di un polipeptide mirato e, poich&eacute; i protoplasti hanno una durata di vita limitata, se le analisi funzionale di geni knockout RNAi sarebbe fattibile in protoplasti. Abbiamo mostrato che transfezione protoplasti con un a dsRNA sintetizzato in vitro contro Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) beta-glutamilcisteina sintetasi (ECS1), un enzima chiave nella sintesi del glutatione, ha provocato un impoverimento di 95% di trascrizione ECS1, una diminuzione del 72% del polipeptide ECS1 e un calo del 60% nel contenuto di glutatione. Questi risultati sono comparabili con quelli ottenuti su analisi di Arabidopsis piantine recanti l&#39;allele mutante cad2-1 di ECS1. Abbiamo anche migliorato la procedura per RNAi inattivazione di geni diversi contemporaneamente. Infine, perch&eacute; abbiamo isolato i protoplasti dai tessuti dei semenzali 14-d-vecchio invece di piante mature 1-mese-vecchio, la procedura descritta &egrave; rapida (ci vogliono solo 20 d dal seme alla piantagione a studi funzionali), adatto per analizzare i geni multipli in parallelo e indipendente della clonazione RNAds nei vettori di espressione di pianta. Pertanto, RNAi in protoplasti integra strumenti genetici esistenti, poich&egrave; permette lo screening iniziale e spazio-efficiente, rapido e selezione dei geni per successivi studi planta.

Istituzione di interferenza del RNA come un approccio genetico-reverse per l&#39;analisi funzionale del gene in protoplasti.

&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#xFF08;ds&#xFF09;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5E83;&#x304F;&#x690D;&#x7269;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x4F53;&#x3067;dsRNA&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;RNAi&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;nongrowing&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;RNAi&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x306B;&#x3082;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x96E2;&#x8077;&#x7387;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3060;&#x3051;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; RNAi&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5BFF;&#x547D;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;RNAi&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;in vitro&#x3067;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;dsRNA&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#xFF08;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#xFF09;&#x306E;&#x3B2;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;ECS1&#xFF09;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;ECS1&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306E;95&#xFF05;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x3001;72&#xFF05;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;ECS1&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x91CF;&#x306E;60&#xFF05;&#x3092;&#x30C9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;ECS1&#x306E;cad2-1&#x5909;&#x7570;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x5B9F;&#x751F;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x6642;&#x306B;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;RNAi&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;14-D-&#x82D7;&#x306E;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;1&#x30F6;&#x6708;&#x6B73;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x304B;&#x3089;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x624B;&#x9806;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#xFF08;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x690D;&#x3048;&#x308B;&#x7A2E;&#x304B;&#x3089;20 d&#x3092;&#x53D6;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#xFF09;&#x8FC5;&#x901F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x4E26;&#x884C;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x767A;&#x73FE;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;dsRNA&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x690D;&#x7269;&#x4F53;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x3001;&#x4F4E;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x3068;&#x30B9;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B9;&#x52B9;&#x7387;&#x306B;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x521D;&#x671F;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RNAi&#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;

&#xB354;&#xBE14;-&#xC88C;&#xCD08; (ds) RNA &#xAC04;&#xC12D; (RNAi) &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418; &#xACE0; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; transformants planta&#xC5D0; Dsrna&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC2DC;&#xC5F0; RNAi protoplasts &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB3C4; &#xC774;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. Protoplasts nongrowing &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;, &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; RNAi &#xC720;&#xBC1C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC131;&#xC801;&#xD45C;&#xC758; &#xACE0;&#xAC08;&#xC5D0; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD574;&#xB2F9; polypeptides&#xC758; &#xC774;&#xC9C1; &#xB960;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; protoplasts &#xACFC;&#xB3C4; RNAi &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; polypeptide &#xACE0;&#xAC08; &#xB420; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBC0F; protoplasts &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC218;&#xBA85;, RNAi &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; protoplasts&#xC5D0; &#xC2E4;&#xD604; &#xB420; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; protoplasts transfection&#xC5D0; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; &#xD569;&#xC131; dsRNA Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) &#xBCA0;&#xD0C0;-glutamylcysteine synthase (ECS1), &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; ECS1 &#xC0AC;&#xBCF8;, ECS1 polypeptide&#xC758; 72% &#xAC10;&#xC18C; glutathione &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; 60% &#xAC10;&#xC18C;&#xC758; 95% &#xACE0;&#xAC08; glutathione&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xD568;&#xAED8; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; Arabidopsis &#xBB18; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1;&#xC758; ECS1 cad2 1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC5BB;&#xC740; &#xADF8;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; RNAi &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC808;&#xCC28; &#xAC1C;&#xC120;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, 1 &#xAC1C;&#xC6D4; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xB300;&#xC2E0; 14 d &#xB41C; &#xBB18; &#xBAA9;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; protoplasts &#xC808;&#xC5F0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xB41C; &#xC808;&#xCC28;&#xB294; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; (&#xB85C; &#xAC78;&#xB9AC;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC2EC;&#xB294; &#xC528;&#xC557;&#xC5D0;&#xC11C; 20 d), &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC801;&#xD569; &#xD558; &#xACE0; dsRNAs &#xACF5;&#xC7A5; &#xC2DD; &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xD074;&#xB85C;&#xB2DD;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, protoplasts&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; RNAi &#xADF8;&#xAC83; &#xD6C4;&#xC18D; planta &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xB294; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C;, &#xBE44;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xACF5;&#xAC04; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xCD08;&#xAE30; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xAE30;&#xC874; &#xC720;&#xC804; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC644; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Protoplasts&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; RNA &#xBC29;&#xD574; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC5ED; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xC815;.

De doble cadena (ds) RNA de interferencia (ARNi) es ampliamente utilizado para el an&#xE1;lisis funcional de genes de plantas y se logra a trav&#xE9;s de la generaci&#xF3;n de transformantes estables que expresan dsRNA en planta. Este estudio demostr&#xF3; que RNAi tambi&#xE9;n se puede utilizar para examinar las funciones de genes en protoplastos. Debido a que los protoplastos se estacionaria c&#xE9;lulas, a partir de RNAi activada por el silenciamiento de genes no s&#xF3;lo depende de un agotamiento de las transcripciones de genes, sino tambi&#xE9;n en las tasas de rotaci&#xF3;n de los polip&#xE9;ptidos correspondientes. Aqu&#xED;, la prueba si RNAi transitoria en protoplastos se traducir&#xED;a en la disminuci&#xF3;n de un polip&#xE9;ptido espec&#xED;fico y, por protoplastos tienen una vida &#xFA;til limitada, si los ensayos funcionales de los genes knockout ARNi ser&#xED;a factible en protoplastos. Hemos demostrado que la transfecci&#xF3;n de protoplastos con un in vitro sintetizado dsRNA contra Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) beta-glutamilciste&#xED;na sintasa (ECS1), una enzima clave en la s&#xED;ntesis de glutati&#xF3;n, dio como resultado un agotamiento del 95% de ECS1 transcripci&#xF3;n, una disminuci&#xF3;n del 72% de polip&#xE9;ptido ECS1, y una ca&#xED;da de 60% en el contenido de glutati&#xF3;n. Estos resultados son comparables con los obtenidos en el an&#xE1;lisis de pl&#xE1;ntulas de Arabidopsis con el alelo CAD2-1 mutante de ECS1. Tambi&#xE9;n hemos mejorado el procedimiento para la inactivaci&#xF3;n de RNAi de varios genes simult&#xE1;neamente. Por &#xFA;ltimo, ya que se aislaron protoplastos a partir de tejidos de 14 d&#xED;as de pl&#xE1;ntulas en lugar de plantas maduras de 1 mes de edad, el procedimiento descrito es r&#xE1;pida (ya que s&#xF3;lo tiene 20 d&#xED;as a partir de semillas de siembra a los estudios funcionales), adecuado para el an&#xE1;lisis de m&#xFA;ltiples genes en paralelo, e independiente de dsRNAs clonaci&#xF3;n en vectores de expresi&#xF3;n de plantas. Por lo tanto, el ARNi en protoplastos complementa las herramientas gen&#xE9;ticas, ya que permite una r&#xE1;pida, econ&#xF3;mica y eficiente el espacio de selecci&#xF3;n inicial y la selecci&#xF3;n de genes para la posterior en los estudios de planta.

El establecimiento de la interferencia de ARN como un enfoque de gen&#xE9;tica inversa para el an&#xE1;lisis funcional de genes en protoplastos

&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x4FDD;&#x62A4;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6C61;&#x67D3;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C06;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x89E3;&#x6BD2;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x9549; (Cd) &#x6212;&#x6BD2;&#x534A;&#x5206;&#x5B50; ATP &#x7ED3;&#x5408;&#x76D2; &#xFF08;ABC&#xFF09; &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; HMT 1 &#x4E9A;&#x79D1;&#x3002;HMTs &#x6709;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5B83;&#x4EEC;&#x533A;&#x522B;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6; ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x5141;&#x8BB8;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x53D1;&#x73B0; HMT 1 &#x4ECE;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x5355;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x673A;&#x4F53;&#xFF0C;&#x7C9F;&#xFF0C;SpHMT1&#xFF0C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x7EDC;&#x5408;&#x9176; (PC) &#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11; Cd&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x3002;&#x4E0D;&#x77E5;&#x9053;&#x662F;&#x5426;&#x4ECE;&#x591A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x673A;&#x4F53; HMTs &#x8D4B;&#x4E88;&#x5BB9;&#x5FCD;&#x53EA;&#x5411; Cd &#x6216;&#x5176;&#x4ED6;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x4E5F;&#x3002;

&#x5BF9;&#x591A;&#x4E2A;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7684;&#x534A;&#x5206;&#x5B50; ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; HMT-1 &#x548C;&#x4F53;&#x8154;&#x7684;&#x79C0;&#x4E3D;&#x9690;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B;&#x7684;&#x6392;&#x6BD2;&#x3002;

Developing methods for protecting organisms in metal-polluted environments is contingent upon our understanding of cellular detoxification mechanisms. In this regard, half-molecule ATP-binding cassette (ABC) transporters of the HMT-1 subfamily are required for cadmium (Cd) detoxification. HMTs have conserved structural architecture that distinguishes them from other ABC transporters and allows the identification of homologs in genomes of different species including humans. We recently discovered that HMT-1 from the simple, unicellular organism, Schizosaccharomyces pombe, SpHMT1, acts independently of phytochelatin synthase (PCS) and detoxifies Cd, but not other heavy metals. Whether HMTs from multicellular organisms confer tolerance only to Cd or also to other heavy metals is not known.

Detoxification of multiple heavy metals by a half-molecule ABC transporter, HMT-1, and coelomocytes of Caenorhabditis elegans.

D&#xE9;velopper des m&#xE9;thodes pour prot&#xE9;ger les organismes en m&#xE9;tal pollu&#xE9;es environnements d&#xE9;pend de notre compr&#xE9;hension des m&#xE9;canismes de d&#xE9;toxification cellulaire. &#xC0; cet &#xE9;gard, une demi-mol&#xE9;cule d&#x26;#39;ATP-binding cassette (ABC), les transporteurs de la sous-famille HMT-1 sont n&#xE9;cessaires pour le cadmium (Cd) de d&#xE9;sintoxication. HMTS ont conserv&#xE9; l&#x26;#39;architecture structurelle qui les distingue des autres transporteurs ABC et permet l&#x26;#39;identification des homologues dans les g&#xE9;nomes de diff&#xE9;rentes esp&#xE8;ces, y compris les humains. Nous avons r&#xE9;cemment d&#xE9;couvert que HMT-1 du simple, organisme unicellulaire, Schizosaccharomyces pombe, SpHMT1, agit ind&#xE9;pendamment de la synthase phytoch&#xE9;latine (PCS) et d&#xE9;toxifie Cd, mais pas d&#x26;#39;autres m&#xE9;taux lourds. Que HMTS d&#x26;#39;organismes multicellulaires ne leur conf&#xE8;rent une tol&#xE9;rance au Cd ou &#xE9;galement &#xE0; d&#x26;#39;autres m&#xE9;taux lourds n&#x26;#39;est pas connue.

D&#xE9;sintoxication de multiples m&#xE9;taux lourds par une demi-mol&#xE9;cule Transporter ABC, HMT-1, et coelomocytes de Caenorhabditis elegans

Entwicklung von Methoden zum Schutz von Organismen in Metall-verschmutzten Umgebungen ist von unserem Verst&auml;ndnis der Mechanismen der zellul&auml;ren Entgiftung abh&auml;ngig. In diesem Zusammenhang sind halb-Molek&uuml;l ATP verbindliche Kassette (ABC) Transporter der HMT-1-Unterfamilie f&uuml;r Kadmium (Cd) Entgiftung erforderlich. HMTs haben strukturelle Architektur konserviert, das unterscheidet sie von anderen ABC-Transporter und erm&ouml;glicht die Identifizierung von UCP1 in Genome verschiedener Arten, einschlie&szlig;lich des Menschen. Vor kurzem entdeckten wir, dass HMT-1 aus einfachen, einzelligen Organismus, Schizosaccharomyces Pombe, SpHMT1, unabh&auml;ngig von der Phytochelatine-Synthase (PCS agiert) und Cd, aber nicht andere Schwermetalle entgiftet. Ob HMTs aus vielzelligen Organismen Toleranz nur auf Cd oder auch andere Schwermetalle verleihen, ist nicht bekannt.

Entgiftung von mehreren Schwermetallen durch eine halb-Molek&uuml;l ABC-Transporter, HMT-1 und Coelomocytes von Caenorhabditis Elegans.

Sviluppo di metodi per proteggere gli organismi in ambienti inquinati in metallo &egrave; subordinato la nostra comprensione dei meccanismi di disintossicazione cellulare. A questo proposito, met&agrave;-molecola ATP-binding cassette (ABC) della sottofamiglia HMT-1 sono necessari per la disintossicazione del cadmio (Cd). HMTs hanno conservato di architettura strutturale che li distingue da altri trasportatori ABC e permette l&#39;identificazione di omologhi nel genoma di specie diverse, tra cui gli esseri umani. Abbiamo recentemente scoperto che HMT-1 dall&#39;organismo semplice, unicellulare, Schizosaccharomyces pombe, SpHMT1, agisce indipendentemente da fitochelatina sintasi (pz) e disintossica il Cd, ma non altri metalli pesanti. Non &egrave; noto se HMTs da organismi pluricellulari conferisce tolleranza solo su Cd o anche di altri metalli pesanti.

Disintossicazione dei metalli pesanti pi&ugrave; di una molecola di mezzo trasportatore ABC HMT-1 e coelomocytes di Caenorhabditis elegans.

&#x91D1;&#x5C5E;&#x6C5A;&#x67D3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x751F;&#x7269;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x89E3;&#x6BD2;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x304C;&#x6761;&#x4EF6;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x70B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;HMT-1&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x534A;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;ATP&#x7D50;&#x5408;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;ABC&#xFF09;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30C9;&#x30DF;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;Cd&#xFF09;&#x89E3;&#x6BD2;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002; HMTs&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x7A2E;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x5358;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x3001;&#x30B7;&#x30BE;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#xB7;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D9;&#x3001;SpHMT1&#x304B;&#x3089;&#x3001;HMT-1&#x306F;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C8;&#x30B1;&#x30E9;&#x30C1;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;PCS&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30C9;&#x30DF;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x6BD2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x3002;&#x591A;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x304B;&#x3089;HMTs CD&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x8010;&#x6027;&#x3092;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30CF;&#x30FC;&#x30D5;&#x5206;&#x5B50;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;HMT-1&#x3001;&#x7DDA;&#x866B;Caenorhabditis elegans&#x306E;Coelomocytes&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306E;&#x89E3;&#x6BD2;

&#xAE08;&#xC18D; &#xC624;&#xC5FC; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xD574;&#xB3C5; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD30C;&#xACAC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC640; &#xAD00;&#xB828;, HMT 1 &#xC544;&#xC758; &#xC808;&#xBC18;-&#xBD84;&#xC790; ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; (ABC) &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xB294; &#xCE74;&#xB4DC;&#xBBB4; (Cd) &#xD574;&#xB3C5;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. HMTs &#xB2E4;&#xB978; ABC &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC885;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0;&#xC11C; homologs &#xC2DD;&#xBCC4; &#xAD6C;&#xC870; &#xAC74;&#xCD95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC874; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; HMT-1 &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0;, &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;, Schizosaccharomyces pombe, SpHMT1, phytochelatin synthase (PC) &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; Cd&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D;&#xC744; &#xD574;&#xB3C5;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. HMTs &#xB2E4;&#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; Cd&#xC5D0;&#xB9CC; &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xC131;&#xC744; &#xBD80;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC18; &#xBD84;&#xC790; ABC transporter, HMT 1 &#xBC0F; Caenorhabditis elegans&#xC758; coelomocytes&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xD574;&#xB3C5;.

El desarrollo de m&#xE9;todos para la protecci&#xF3;n de los organismos en ambientes contaminados de metales depende de nuestra comprensi&#xF3;n de los mecanismos de destoxificaci&#xF3;n celular. A este respecto, la mol&#xE9;cula media-ATP vinculante cassette (ABC) transportadores de la subfamilia de HMT-1 se requieren para el cadmio (Cd) desintoxicaci&#xF3;n. HMTs han conservado la arquitectura estructural que los distingue de los otros transportadores ABC y permite la identificaci&#xF3;n de los hom&#xF3;logos en los genomas de diferentes especies, incluyendo seres humanos. Recientemente hemos descubierto que HMT-1 desde el organismo simple, unicelular, Schizosaccharomyces pombe, SpHMT1, act&#xFA;a de forma independiente de la sintasa de fitoquelatina (PCS) y desintoxica CD, pero no a otros metales pesados. Si HMTs de los organismos multicelulares confieren tolerancia s&#xF3;lo en un CD o tambi&#xE9;n a otros metales pesados &#x200B;&#x200B;no se conoce.

La desintoxicaci&#xF3;n de varios metales pesados &#x200B;&#x200B;por un transportador de media mol&#xE9;cula de ABC, HMT-1, y Coelomocytes de Caenorhabditis elegans

&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x86CB;&#x767D; (BMP) &#x89C4;&#x7BA1;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x6052;&#x4E45;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;&#x9014;&#x5F84;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x9057;&#x4F20;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x591A;&#x5C42;&#x6B21;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x80DE;&#x5916;&#x8C03;&#x8282;&#xFF0C;&#x786E;&#x4FDD;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236; BMP &#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x53F3;&#x8702;&#x7A9D;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x7684;&#x7EBF;&#x866B;&#x79F0;&#x4E3A;&#x62D6; 1 &#x4E2D;&#x7684; BMP &#x7C7B;&#x4F3C; Sma/&#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x62D6; 1 &#x662F;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x538C;&#x6076;&#x7684;&#x6307;&#x5BFC;&#x5206;&#x5B50; (rgm &#x8584;&#x819C;) &#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x7EBF;&#x866B;&#x4E2D;, &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x6210;&#x5458;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282;&#x8EAB;&#x4F53;&#x5927;&#x5C0F;&#x548C;&#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x53D1;&#x80B2;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5206;&#x5B50;&#x9057;&#x4F20;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF0C;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x62D6;-1 &#x662F;&#x8C03;&#x8282; Sma/&#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7279;&#x5B9A;&#x65B9;&#x5F0F;&#x914D;&#x4F53;-&#x53D7;&#x4F53;&#x4E00;&#x7EA7;&#x804C;&#x80FD;&#x7684;&#x819C;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A;&#x62D6; 1 &#x79EF;&#x6781;&#x8C03;&#x8282;&#x8FD9;&#x4E2A; BMP &#x7C7B;&#x4F3C;&#x9014;&#x5F84;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B; Sma/&#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;-&#x54CD;&#x5E94;&#x8BB0;&#x8005;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x4E3A; BMP &#x901A;&#x8DEF; rgm &#x8584;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x673A;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B; rgm &#x8584;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; BMP &#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6E29;&#x987A;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;

Rgm &#x8584;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x62D6; 1 &#x79EF;&#x6781;&#x8C03;&#x8282;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B; BMP &#x7C7B;&#x4F3C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;

The bone morphogenetic protein (BMP) signaling pathway regulates multiple developmental and homeostatic processes. Mutations in the pathway can cause a variety of somatic and hereditary disorders in humans. Multiple levels of regulation, including extracellular regulation, ensure proper spatiotemporal control of BMP signaling in the right cellular context. We have identified a modulator of the BMP-like Sma/Mab pathway in C. elegans called DRAG-1. DRAG-1 is the sole member of the repulsive guidance molecule (RGM) family of proteins in C. elegans, and is crucial in regulating body size and mesoderm development. Using a combination of molecular genetic and biochemical analyses, we demonstrate that DRAG-1 is a membrane-associated protein that functions at the ligand-receptor level to modulate the Sma/Mab pathway in a cell-type-specific manner. We further show that DRAG-1 positively modulates this BMP-like pathway by using a novel Sma/Mab-responsive reporter. Our work provides a direct link between RGM proteins and BMP signaling in vivo and a simple and genetically tractable system for mechanistic studies of RGM protein regulation of BMP pathways.

The RGM protein DRAG-1 positively regulates a BMP-like signaling pathway in Caenorhabditis elegans.

La prot&#xE9;ine morphog&#xE9;n&#xE9;tique osseuse (BMP) la voie de signalisation r&#xE9;gule de nombreux processus de d&#xE9;veloppement et hom&#xE9;ostatique. Des mutations dans la voie peut causer une vari&#xE9;t&#xE9; de troubles somatiques et h&#xE9;r&#xE9;ditaires chez l&#x26;#39;homme. Plusieurs niveaux de r&#xE9;gulation, y compris la r&#xE9;glementation extracellulaire, assurer un contr&#xF4;le spatio-temporel de signalisation BMP dans le bon contexte cellulaire. Nous avons identifi&#xE9; un modulateur de la BMP-like Sma / Mab voie chez C. elegans appel&#xE9;e DRAG-1. DRAG-1 est le seul membre de la mol&#xE9;cule d&#x26;#39;orientation r&#xE9;pulsive (RGM) famille de prot&#xE9;ines chez C. elegans, et est crucial dans la r&#xE9;gulation taille du corps et de d&#xE9;veloppement du m&#xE9;soderme. En utilisant une combinaison de des analyses g&#xE9;n&#xE9;tiques mol&#xE9;culaires et biochimiques, nous d&#xE9;montrons que DRAG-1 est une prot&#xE9;ine associ&#xE9;e &#xE0; la membrane qui fonctionne au niveau ligand-r&#xE9;cepteur pour moduler la Sma / voie Mab d&#x26;#39;une mani&#xE8;re un type de cellule sp&#xE9;cifique. Nous montrons en outre que DRAG-1 module positivement cette voie BMP-like en utilisant un Sma roman / Mab sensible journaliste. Notre travail fournit un lien direct entre les prot&#xE9;ines de signalisation BMP RGM et in vivo et un syst&#xE8;me simple et maniable pour g&#xE9;n&#xE9;tiquement &#xE9;tudes m&#xE9;canistiques de r&#xE9;gulation des prot&#xE9;ines RGM des voies BMP.

La prot&#xE9;ine RGM DRAG-1 r&#xE9;gule positivement un sentier de signalisation BMP-comme chez Caenorhabditis elegans

Das Knochen morphogenetische Protein (BMP) signalisieren Weg regelt mehrere Entwicklungs- und hom&ouml;ostatische Prozesse. Mutationen in den Signalweg k&ouml;nnen eine Vielzahl von somatischen und erblichen Erkrankungen beim Menschen verursachen. Verordnung einschlie&szlig;lich extrazellul&auml;rer Verordnung, auf mehreren Ebenen gew&auml;hrleisten angemessene raumzeitliche Kontrolle BMP im Zusammenhang mit ganzer zellulares signalisieren. Wir haben ein Modulator des BMP-wie Sma/Mab Biosyntheseweges in C. Elegans namens DRAG-1 identifiziert. DRAG-1 ist die einzige Pflanzenart aus der Familie der absto&szlig;ende Anleitung-Molek&uuml;l (RGM) Proteine in C. Elegans und ist von entscheidender Bedeutung bei der Regulierung Aufbauentwicklung Gr&ouml;&szlig;e und Mesoderm. Mit einer Kombination von Molekulare genetische und biochemische Analysen, zeigen wir, dass DRAG-1 ein Membran-assoziierte Protein, das funktioniert auf der Ligand-Rezeptor-Ebene ist, die Sma/Mab-Pathway in einer Zelle-abh&auml;ngigen Weise modulieren. Wir zeigen weiter, dass DRAG-1 positiv moduliert diese BMP-wie-Weg mit einen neuartigen Sma/Mab-responsive Reporter. Unsere Arbeit stellt eine direkte Verbindung zwischen RGM Proteine und BMP Signalisierung in-vivo und ein einfaches und genetisch beeinflussende System f&uuml;r mechanistische Untersuchungen RGM Protein Verordnung der BMP-Bahnen.

Das RGM-Protein DRAG-1 regelt positiv ein BMP-&auml;hnliche-Signalweges in Caenorhabditis Elegans.

Il bone morphogenetic protein (BMP) signaling pathway regola pi&ugrave; processi omeostatici e di sviluppo. Mutazioni nel percorso possono causare una variet&agrave; di disturbi somatici ed ereditari negli esseri umani. Livelli multipli di regolazione, compreso il regolamento extracellulare, assicurano il corretto controllo spatiotemporal della segnalazione BMP nel contesto proprio cellulare. Abbiamo identificato un modulatore del percorso come BMP Sma/Mab in c. elegans chiamato DRAG-1. DRAG-1 &egrave; l&#39;unico membro della famiglia guida ripugnante molecola (RGM) delle proteine in c. elegans ed &egrave; cruciale nella regolazione dello sviluppo di dimensione e mesoderma del corpo. Utilizzando una combinazione di analisi biochimiche e genetiche molecolare, dimostreremo che DRAG-1 &egrave; una proteina associata di membrana che funziona a livello di recettore-ligando per modulare il pathway Sma/Mab in modo specifici del tipo di cella. Mostriamo ulteriormente che DRAG-1 Modula positivamente questo percorso come BMP utilizzando un romanzo reporter Sma/Mab-reattivo. Il nostro lavoro fornisce un collegamento diretto tra proteine RGM e BMP segnalazione in vivo e un sistema semplice e geneticamente trattabili per Studi meccanicistici del regolamento proteina RGM di percorsi BMP.

La proteina RGM DRAG-1 regola positivamente una via di segnalazione BMP-come in Caenorhabditis elegans.

&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;BMP&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x3068;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x904E;&#x7A0B;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x907A;&#x4F1D;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5916;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x53F3;&#x306E;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;BMP&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;DRAG-1&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x7DDA;&#x866B;C. elegans&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;BMP&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;SMA / Mab&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; DRAG-1&#x306F;C. elegans&#x306E;&#x4E2D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x53CD;&#x767A;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x5206;&#x5B50;&#xFF08;RGM&#xFF09;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x4F53;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3068;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x3068;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;DRAG-1&#x306F;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; - &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;SMA / MAB&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;DRAG-1&#x306F;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;SMA / MAB-&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;BMP&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x306F;&#x3001;RGM&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;in vivo&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;BMP&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x9593;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;BMP&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;RGM&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x6A5F;&#x5E8F;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x304B;&#x3064;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x6271;&#x3044;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RGM&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;DRAG-1&#x306F;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x7DDA;&#x866B;&#xFF08;Caenorhabditis elegans&#xFF09;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;BMP&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xBF08; &#xC804;&#xCCB4;&#xC801; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (BMP) &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xBC0F; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xC870;&#xC808;. &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804; &#xC9C8;&#xD658;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADDC;&#xC81C;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC218;&#xC900;&#xC758; BMP &#xC2E0;&#xD638; &#xBC14;&#xB85C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; spatiotemporal &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB04C;&#xC5B4;&#xC11C; 1 C. elegans&#xC5D0; BMP &#xAC19;&#xC740; Sma/Mab &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB04C;&#xC5B4;&#xC11C; 1 C. elegans&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD88;&#xCF8C; &#xD574; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC790; (RGM) &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xC774;&#xBA70; &#xBAB8; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; mesoderm &#xBC1C;&#xC804; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xC720;&#xC804;&#xACFC; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB04C;&#xC5B4;&#xC11C; 1 &#xC140; &#xC720;&#xD615;&#xBCC4; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; Sma/Mab &#xD1B5;&#xB85C; &#xC870;&#xC808; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;-&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; &#xB04C;&#xC5B4;&#xC11C; 1 &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC18C;&#xC124; Sma/Mab &#xC751;&#xB2F5; &#xAE30;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; BMP &#xAC19;&#xC740; &#xD1B5;&#xB85C; &#xBCC0;&#xC870; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC791;&#xC5C5; BMP &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; RGM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C; RGM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; BMP vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC138;&#xACF5; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC04;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xB9C1;&#xD06C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RGM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB04C;&#xC5B4;&#xC11C; 1 &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; Caenorhabditis elegans&#xC5D0; BMP &#xAC19;&#xC740; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

La prote&#xED;na morfogen&#xE9;tica &#xF3;sea (BMP) la v&#xED;a de se&#xF1;alizaci&#xF3;n regula m&#xFA;ltiples procesos de desarrollo y la homeostasis. Las mutaciones en la v&#xED;a puede causar una variedad de trastornos som&#xE1;ticos y hereditarios en los seres humanos. M&#xFA;ltiples niveles de regulaci&#xF3;n, incluyendo la regulaci&#xF3;n extracelular, asegurar el adecuado control espacio-temporal de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de BMP en el contexto celular correcta. Hemos identificado un modulador de la BMP-como la Sma / Mab v&#xED;a en C. elegans llama DRAG-1. DRAG-1 es el &#xFA;nico miembro de la mol&#xE9;cula de orientaci&#xF3;n repulsiva (RGM) de la familia de las prote&#xED;nas en C. elegans, y es crucial en la regulaci&#xF3;n del tama&#xF1;o corporal y el desarrollo del mesodermo. Usando una combinaci&#xF3;n de an&#xE1;lisis gen&#xE9;ticos moleculares y bioqu&#xED;micos, se demuestra que DRAG-1 es una prote&#xED;na asociada a la membrana que funciona a nivel ligando-receptor para modular la Sma / Mab v&#xED;a de una manera cada tipo de c&#xE9;lula espec&#xED;fica. Adem&#xE1;s, muestran que DRAG-1 modula positivamente esta v&#xED;a BMP-al igual que mediante el uso de una novela de Sma / Mab-reportero de respuesta. Nuestro trabajo proporciona un v&#xED;nculo directo entre las prote&#xED;nas de RGM y se&#xF1;alizaci&#xF3;n de BMP en vivo y un sistema sencillo y manejable gen&#xE9;ticamente para estudios sobre el mecanismo de regulaci&#xF3;n de prote&#xED;nas de las v&#xED;as de RGM BMP.

La prote&#xED;na RGM DRAG-1 regula positivamente una v&#xED;a de se&#xF1;alizaci&#xF3;n BMP-al igual que en Caenorhabditis elegans

HMT-1 (&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x516C;&#x5DEE;&#x56E0;&#x5B50; 1) &#x4E9A;&#x79D1;&#x7684; ATP &#x7ED3;&#x5408;&#x76D2;&#x5F0F;&#x78C1;&#x5E26; &#xFF08;ABC&#xFF09; &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x89E3;&#x6BD2;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x548C;&#x5177;&#x6709;&#x72EC;&#x7279;&#x62D3;&#x6251;&#xFF1A; &#x4ED6;&#x4EEC;&#x662F;&#x534A;&#x5206;&#x5B50; ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x9664;&#x5355;&#x4E2A;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF; (TMD1) &#x548C;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF; (NBD1)&#xFF0C;&#x62E5;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x758F;&#x6C34; NH2 &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6269;&#x5C55; &#xFF08;&#x8054;&#x7F51;&#xFF09;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x6784;&#x529F;&#x80FD;&#x533A;&#x5206; HMTs &#x5176;&#x4ED6; ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x679C;&#x8747;&#x3002;&#x529F;&#x80FD; ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x7531;&#x7EC4;&#x6210;&#x81F3;&#x5C11;&#x4ECE;&#x5355;&#x4E2A;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x94FE;&#x6216;&#x7531;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6216;&#x56DB;&#x4E2A;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x534F;&#x4F1A;&#x6210;&#x7ACB;&#x7684;&#x56DB;&#x57DF; &#xFF08;&#x4E24;&#x4E2A; TMDs &#x548C;&#x4E24;&#x79CD;&#x60C5;&#x51B5;&#xFF09;&#x3002;HMTs &#x662F;&#x5426;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x548C; NTE &#x57DF;&#x5728;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x4E2D;&#x8D77;&#x4EC0;&#x4E48;&#x4F5C;&#x7528;&#x8FD8;&#x6CA1;&#x6709;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;

N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6269;&#x5C55;&#x57DF;&#x7684;&#x7EBF;&#x866B;&#x534A;&#x5206;&#x5B50; ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;HMT-1&#x3001; &#x662F;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x3002;

Members of the HMT-1 (heavy metal tolerance factor 1) subfamily of the ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily detoxify heavy metals and have unique topology: they are half-molecule ABC transporters that, in addition to a single transmembrane domain (TMD1) and a single nucleotide-binding domain (NBD1), possess a hydrophobic NH2-terminal extension (NTE). These structural features distinguish HMTs from other ABC transporters in different species including Drosophila and humans. Functional ABC transporters, however, are comprised of at least four-domains (two TMDs and two NDBs) formed from either a single polypeptide or by the association of two or four separate subunits. Whether HMTs act as oligomers and what role the NTE domain plays in their function have not been determined.

The N-terminal extension domain of the C. elegans half-molecule ABC transporter, HMT-1, is required for protein-protein interactions and function.

Membres du HMT-1 (lourde facteur de tol&#xE9;rance m&#xE9;tallique 1) sous-famille de la cassette liaison &#xE0; l&#x26;#39;ATP (ABC) transporteur superfamille d&#xE9;toxifier des m&#xE9;taux lourds et une topologie unique: elles sont demi-mol&#xE9;cules transporteurs ABC que, en plus d&#x26;#39;un seul domaine transmembranaire ( TMD1) et un nucl&#xE9;otide unique domaine de liaison &#xE0; (NBD1), poss&#xE8;dent une hydrophobe NH2-terminale de prolongement (NTE). Ces caract&#xE9;ristiques structurelles distinguer HMTS de transporteurs ABC dans d&#x26;#39;autres esp&#xE8;ces diff&#xE9;rentes, y compris la drosophile et l&#x26;#39;homme. Fonctionnels transporteurs ABC, cependant, sont constitu&#xE9;s d&#x26;#39;au moins quatre domaines (deux DMT et deux NDB) form&#xE9;s &#xE0; partir soit d&#x26;#39;un polypeptide unique ou par l&#x26;#39;association de deux ou quatre sous-unit&#xE9;s distinctes. Que ce soit sous forme d&#x26;#39;oligom&#xE8;res HMTS acte et le r&#xF4;le que joue domaine NTE dans leur fonction n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;es.

L&#x26;#39;extension de domaine N-terminal de la C. Elegans demi-mol&#xE9;cule transporteur ABC, HMT-1, est requis pour les interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine et la fonction

Mitglieder der HMT-1 (Heavy-Metal-Toleranzfaktor 1) Unterfamilie der ATP verbindliche Kassette (ABC)-Transporter-Superfamilie Schwermetalle zu entgiften und einzigartige Topologie haben: sie sind halb-Molek&uuml;l-ABC-Transporter, die neben einer einzelnen Transmembran-Dom&auml;ne (TMD1) und einer einzelnen Nukleotid bindende Dom&auml;ne (NBD1), eine hydrophobe NH2-Terminal-Erweiterung (NTE) besitzen. Diese strukturellen Merkmale unterscheiden HMTs von anderen ABC-Transporter bei verschiedenen Tierarten wie Drosophila und Menschen. Funktionale ABC-Transporter, jedoch bestehen aus mindestens vier-Domains (zwei TMDs und zwei NDBs) gebildet aus entweder einem einzigen Polypeptid oder durch die Assoziation von zwei oder vier separaten Untereinheiten. Ob HMTs als Oligomere wirken und welche Rolle spielt die NTE-Dom&auml;ne in ihrer Funktion nicht geworden bestimmt.

Die N-Terminal-Erweiterung-Dom&auml;ne von der C. Elegans-H&auml;lfte-Molek&uuml;l-ABC-Transporter, HMT-1, f&uuml;r Protein-Protein Interaktionen und Funktion ben&ouml;tigt wird.

I membri della sottofamiglia HMT-1 (fattore di tolleranza del metallo pesante 1) della superfamiglia trasportatore ATP-binding cassette (ABC) disintossicare i metalli pesanti e unica topologia: essi sono i trasportatori di ABC di met&agrave;-molecola che, oltre a un singolo dominio transmembrana (TMD1) e un singolo nucleotide-binding domain (NBD1), possiedono un&#39;estensione NH2-terminale idrofobica (NTE). Queste caratteristiche strutturali HMTs si distinguono dagli altri trasportatori ABC in diverse specie tra cui drosofila e gli esseri umani. Funzionali dei trasportatori ABC, tuttavia, sono composti da almeno quattro-domini (due TMDs e due NDB) formano da entrambi un singolo polipeptide o dall&#39;associazione di due o quattro subunit&agrave; separate. Se HMTs agiscono come oligomeri e quale ruolo svolge il dominio NTE nella loro funzione non &egrave; stato determinato.

Il dominio N-terminale estensione del trasportatore ABC met&agrave;-molecola c. elegans, HMT-1, &egrave; richiesto per le interazioni della proteina-proteina e la funzione.

&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#xFF08;&#x534A;&#x5206;&#x5B50;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x3068;&#x304A;&#x308A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;HMT-1&#xFF08;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x8010;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;1&#xFF09;ATP-&#x7D50;&#x5408;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;ABC&#xFF09;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x3092;&#x89E3;&#x6BD2;&#x3057;&#x3001;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;TMD1&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5358;&#x4E00;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;NBD1&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;NH2-&#x672B;&#x7AEF;&#x5EF6;&#x9577;&#xFF08;NTE&#xFF09;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x7279;&#x5FB4;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D2;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x7A2E;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;HMTs&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;2&#x3064;&#x307E;&#x305F;&#x306F;4&#x3064;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;4&#x3064;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;2&#x306E;TMD&#x3068;2 NDBs&#xFF09;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;NTE&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x5224;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x3057;&#x3066;HMTs&#x884C;&#x70BA;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

C. elegans&#x306E;&#x30CF;&#x30FC;&#x30D5;&#x5206;&#x5B50;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;HMT-1&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;

ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; (ABC) &#xC804;&#xC1A1; superfamily&#xC758; HMT-1 (&#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xACC4;&#xC218; 1) &#xC544;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xB3C5;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xACE0; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0;&#xB294;: &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xBC18; &#xBD84;&#xC790; ABC &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xB294; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (TMD1)&#xC640; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (NBD1), &#xC18C;&#xC218; &#xC131; NH2 &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD655;&#xC7A5; (NTE) &#xBCF4;&#xC720;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC885;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; ABC &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; HMTs &#xAD6C;&#xBCC4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;, ABC &#xAE30;&#xB2A5; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 4-&#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (2 &#xAC1C;&#xC758; TMDs &#xBC0F; &#xB450; NDBs) &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC758; polypeptide &#xB610;&#xB294; 2 &#xAC1C; &#xB610;&#xB294; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xD611;&#xD68C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131;. HMTs &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD589;&#xC704;&#xB85C; &#xC5EC;&#xBD80; &#xBC0F; NTE &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC740; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

N-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD655;&#xC7A5; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; C. elegans &#xC808;&#xBC18; &#xBD84;&#xC790; ABC transporter&#xC758; HMT 1&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Los miembros de la HMT-1 (factor de tolerancia a los metales pesados &#x200B;&#x200B;1) subfamilia de la casete de uni&#xF3;n a ATP (ABC) transportador superfamilia desintoxicar metales pesados &#x200B;&#x200B;y tienen topolog&#xED;a &#xFA;nica: son mol&#xE9;culas media-transportadores ABC que, adem&#xE1;s de un solo dominio de transmembrana ( TMD1) y un solo nucle&#xF3;tido vinculante de dominio (NBD1), poseen un hidr&#xF3;fobo NH2-terminal de extensi&#xF3;n (NTE). Estas caracter&#xED;sticas estructurales HMTs distinguir de otros transportadores ABC en diferentes especies, incluyendo Drosophila y humanos. Funcionales transportadores ABC, sin embargo, est&#xE1;n compuestas de al menos cuatro dominios (dos TMDS y NDB dos) formados a partir de cualquiera de un solo polip&#xE9;ptido o por la asociaci&#xF3;n de dos o cuatro subunidades separadas. Si HMTs act&#xFA;an como olig&#xF3;meros y qu&#xE9; papel juega el dominio de NTE en su funci&#xF3;n no se han determinado.

La extensi&#xF3;n de dominio N-terminal de la C. elegans Half-mol&#xE9;cula transportadora ABC, HMT-1, se requiere de interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na y funci&#xF3;n

&#x87AF;&#x8C03;&#x89E3;&#x7531;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x6210;&#x87AF;&#x5408;&#x7EDC;&#x91D1;&#x5C5E;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x5BF9;&#x690D;&#x7269;&#x548C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x771F;&#x83CC;&#x4E2D;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x8010;&#x53D7;&#x6027;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709;&#x7C9F;&#x9152; Hmt1 &#x5DF2;&#x88AB;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E3A;&#x87AF;&#x519C;&#x7528;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8F66;&#x548C;&#x5C1D;&#x8BD5;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x786E;&#x5B9A; orthologous &#x7EDC;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x751F;&#x7269;&#x6709;&#x5931;&#x8D25;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; hmt1 &#x7A81;&#x53D8;&#x79EF;&#x7D2F;&#x5927;&#x87AF;&#x5408;&#x80BD;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x6DB2;&#x6CE1;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x4E0D;&#x660E;&#x7684;&#x7EDC;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x771F;&#x83CC;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x5220;&#x9664;&#x6240;&#x6709;&#x6DB2;&#x6CE1; ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x7684;&#x5E9F;&#x9664;&#x7EDC; S.&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x4E2D;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x548C;&#x5E9F;&#x9664; (35)S-PC(2) S.&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD;&#x5FAE;&#x7C92;&#x4F53;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x6210;&#x7684;&#x5438;&#x6536;&#x3002;&#x6574;&#x4E2A; S.&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD; ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A; Abc2 &#x4E3A;&#x5168;&#x5C3A;&#x5BF8;&#x7684; ABC &#x8F6C;&#x8FD0; (&#x7D22;&#x507F;&#x578B;) &#x4ECB;&#x5BFC;&#x690D;&#x7269;&#x7EDC;&#x5408;&#x7D20;&#x8FD0;&#x8F93;&#x5230;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x3002;S.&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD; abc1 abc2 abc3 abc4 hmt1 &#x4E94;&#x8054;&#x548C; abc2 hmt1 &#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5728;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x6CA1;&#x6709;&#x63A2;&#x6D4B;&#x87AF;&#x3002;Abc2 &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x5C06;&#x8FD8;&#x539F;&#x5230;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x690D;&#x7269;&#x7EDC;&#x5408;&#x7D20;&#x79EF;&#x7D2F;&#x5E76;&#x6291;&#x5236;&#x9549;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684; abc &#x4E94;&#x8054;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;Hmt1 GS &#x5171;&#x8F6D;&#x8FD0;&#x8F93;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x9896;&#x3001; &#x610F;&#x5916;&#xFF0C;&#x51FD;&#x6570;&#x4E5F;&#x4F1A;&#x663E;&#x793A;&#x3002;&#x4E0E; Hmt1&#xFF0C;Abc2 orthologs &#x738B;&#x56FD;&#x5E7F;&#x4E3A;&#x6563;&#x53D1;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x957F;&#x671F;&#x5BFB;&#x6C42;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x690D;&#x7269;&#x7EDC;&#x5408;&#x7D20;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x690D;&#x7269;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x751F;&#x7269;&#x3002;

&#x6DB2;&#x6CE1;&#x819C;&#x672C;&#x5730;&#x5316; Abc2 &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EDC;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x4E2D;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x548C;&#x8D4B;&#x4E88;&#x9549;&#x7684;&#x8010;&#x53D7;&#x3002;

Phytochelatins mediate tolerance to heavy metals in plants and some fungi by sequestering phytochelatin-metal complexes into vacuoles. To date, only Schizosaccharomyces pombe Hmt1 has been described as a phytochelatin transporter and attempts to identify orthologous phytochelatin transporters in plants and other organisms have failed. Furthermore, recent data indicate that the hmt1 mutant accumulates significant phytochelatin levels in vacuoles, suggesting that unidentified phytochelatin transporters exist in fungi. Here, we show that deletion of all vacuolar ABC transporters abolishes phytochelatin accumulation in S. pombe vacuoles and abrogates (35)S-PC(2) uptake into S. pombe microsomal vesicles. Systematic analysis of the entire S. pombe ABC transporter family identified Abc2 as a full-size ABC transporter (ABCC-type) that mediates phytochelatin transport into vacuoles. The S. pombe abc1 abc2 abc3 abc4 hmt1 quintuple and abc2 hmt1 double mutant show no detectable phytochelatins in vacuoles. Abc2 expression restores phytochelatin accumulation into vacuoles and suppresses the cadmium sensitivity of the abc quintuple mutant. A novel, unexpected, function of Hmt1 in GS-conjugate transport is also shown. In contrast to Hmt1, Abc2 orthologs are widely distributed among kingdoms and are proposed as the long-sought vacuolar phytochelatin transporters in plants and other organisms.

Tonoplast-localized Abc2 transporter mediates phytochelatin accumulation in vacuoles and confers cadmium tolerance.

Phytoch&#xE9;latines m&#xE9;diation tol&#xE9;rance aux m&#xE9;taux lourds dans les plantes et certains champignons en s&#xE9;questrant phytoch&#xE9;latine complexes de m&#xE9;taux dans les vacuoles. &#xC0; ce jour, seulement Hmt1 Schizosaccharomyces pombe a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;crit comme un transporteur phytoch&#xE9;latine et tente d&#x26;#39;identifier les transporteurs orthologue phytoch&#xE9;latine dans les plantes et autres organismes ont &#xE9;chou&#xE9;. En outre, des donn&#xE9;es r&#xE9;centes indiquent que le mutant accumule d&#x26;#39;importants niveaux hmt1 phytoch&#xE9;latine dans les vacuoles, ce qui sugg&#xE8;re que les transporteurs non identifi&#xE9;s phytoch&#xE9;latine existent dans les champignons. Ici, nous montrons que la suppression de tous les transporteurs ABC vacuolaires abolit l&#x26;#39;accumulation dans les vacuoles phytoch&#xE9;latine S. pombe et abroge (35) S-PC (2) absorption dans des v&#xE9;sicules de S. pombe microsomales. L&#x26;#39;analyse syst&#xE9;matique de la famille S. pombe transporteur ABC ensemble identifi&#xE9; en tant que transporteur ABC2 pleine grandeur ABC (ABCC-type) que le transport de m&#xE9;diateur dans les vacuoles des phytoch&#xE9;latines. Le S. pombe abc1 abc2 abc3 abc4 hmt1 quintuple et abc2 hmt1 spectacle double mutant pas phytoch&#xE9;latines d&#xE9;tectables dans les vacuoles. ABC2 expression restaure l&#x26;#39;accumulation dans les vacuoles des phytoch&#xE9;latines et supprime la sensibilit&#xE9; au cadmium de la quintuple mutant abc. Un roman, inattendu, en fonction de Hmt1 en GS-conjugu&#xE9; de transport est &#xE9;galement montr&#xE9;. Contrairement &#xE0; Hmt1, ABC2 orthologues sont largement distribu&#xE9;s parmi les royaumes et sont propos&#xE9;s comme les recherch&#xE9;s depuis longtemps par les transporteurs vacuolaires phytoch&#xE9;latine dans les plantes et autres organismes.

Tonoplaste-localis&#xE9;es m&#xE9;diateur Transporter ABC2 accumulation dans les vacuoles et phytoch&#xE9;latine conf&#xE8;re la tol&#xE9;rance au cadmium

Phytochelatine vermitteln Toleranz gegen&uuml;ber Schwermetallen in Pflanzen und einige Pilze durch Phytochelatine-Metall-komplexe in Vakuolen absondern. Bis heute konnten nur Schizosaccharomyces Pombe Hmt1 wurde als Transporter Phytochelatine beschrieben und versucht, Orthologous Phytochelatine Transporter in Pflanzen und andere Organismen zu identifizieren. Dar&uuml;ber hinaus zufolge den j&uuml;ngsten Daten der Mutant hmt1 sammelt sich erhebliche Phytochelatine Ebenen in Vakuolen, darauf hindeutet, dass nicht identifizierter Phytochelatine Transporter in Pilze vorhanden sind. Hier zeigen wir, dass l&ouml;schen alle welches ABC-Transporter Phytochelatine Anh&auml;ufung in S. Pombe Vakuolen schafft und (35)S-PC(2) Aufnahme in S. Pombe mikrosomale Bl&auml;schen hebt. Systematischer Analyse der gesamten S. Pombe ABC Transporter Familie identifiziert Abc2 als ein Full-Size ABC-Transporter (ABCC-Typ), der Phytochelatine Transport in Vakuolen vermittelt. Die S. Pombe abc1 abc2 abc3 abc4 hmt1 5-fach und abc2 hmt1 Doppel Mutant zeigen keine nachweisbaren Phytochelatine Vakuolen. Abc2 Ausdruck stellt Phytochelatine Anh&auml;ufung in Vakuolen und unterdr&uuml;ckt die Kadmium-Empfindlichkeit von den Abc-5-fach-Mutanten. Eine neue, unerwartete, Funktion der Hmt1 im GS-Konjugat Verkehr wird auch angezeigt. Im Gegensatz zum Hmt1 Abc2 Orthologen sind weit verbreitet unter den K&ouml;nigreichen und werden als die lang ersehnte welches Phytochelatine-Transporter in Pflanzen und andere Organismen vorgeschlagen.

Tonoplast lokalisierte Abc2 Transporter vermittelt Phytochelatine Anh&auml;ufung in Vakuolen und Kadmium Toleranz verleiht.

Fitochelatine mediare tolleranza ai metalli pesanti in piante e alcuni funghi sequestrando complessi fitochelatina-metallo nei vacuoli. Ad oggi, solo Schizosaccharomyces pombe Hmt1 &egrave; stato descritto come un trasportatore fitochelatina e tenta di identificare orthologous fitochelatina trasportatori in piante e altri organismi hanno fallito. Inoltre, dati recenti indicano che il mutante hmt1 accumula fitochelatina significativi livelli nei vacuoli, suggerendo che i trasportatori non identificato fitochelatina esistano nei funghi. Qui, ci mostrano che la cancellazione di tutti i trasportatori ABC vacuolar abolisce fitochelatina accumulo nei vacuoli di S. pombe e abroga (35)S-PC(2) assorbimento in vescicole microsomiale S. pombe. Analisi sistematica dell&#39;intera famiglia S. pombe ABC transporter identificato Abc2 come un trasportatore ABC Full-Size (ABCC-tipo) che media fitochelatina trasporto nei vacuoli. Lo S. pombe abc1 abc2 abc3 abc4 hmt1 quintuple e abc2 hmt1 doppio mutante non visualizza fitochelatine rilevabili nei vacuoli. Abc2 espressione Ripristina fitochelatina accumulo nei vacuoli e sopprime la sensibilit&agrave; di cadmio del mutante quintuple abc. Viene mostrata anche una funzione di romanzo, inaspettata, di Hmt1 nei trasporti GS-coniugato. A differenza di Hmt1, Abc2 orthologs sono ampiamente distribuiti tra i regni e vengono proposti come i trasportatori fitochelatina vacuolar lungo cercato in piante e altri organismi.

Localizzato tonoplasto Abc2 transporter da intermediario fitochelatina accumulo nei vacuoli e conferisce tolleranza di cadmio.

Phytochelatins&#x306F;&#x6DB2;&#x80DE;&#x306B;&#x9694;&#x96E2;phytochelatin&#x91D1;&#x5C5E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x690D;&#x7269;&#x3084;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x771F;&#x83CC;&#x306E;&#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x8010;&#x6027;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x307E;&#x3067;&#x306B;&#x3001;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x5206;&#x88C2;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;Hmt1&#x306F;phytochelatin&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x690D;&#x7269;&#x3084;&#x4ED6;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x30AA;&#x30EB;&#x30BD;&#x30ED;&#x30AC;&#x30B9;phytochelatin&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A66;&#x307F;&#x304C;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x4F53;&#x4E0D;&#x660E;&#x306E;phytochelatin&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x771F;&#x83CC;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;hmt1&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x6DB2;&#x80DE;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044;phytochelatin&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x6DB2;&#x80DE;&#x306E;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x306F;&#x3001;S. pombe&#x306E;&#x7A7A;&#x80DE;&#x3068;abrogates&#xFF08;35&#xFF09;S-PC&#xFF08;2&#xFF09;&#x5206;&#x88C2;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306B;phytochelatin&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x88C2;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x6DB2;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;phytochelatin&#x305D;&#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;ABCC&#x578B;&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;ABC2&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; S. pombe&#x306E;&#x4E94;&#x91CD;ABC1 ABC2 ABC3 abc4 hmt1&#x3068;ABC2 hmt1&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x6DB2;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x691C;&#x51FA;phytochelatins&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002; ABC2&#x306E;&#x5F0F;&#x306F;&#x3001;&#x6DB2;&#x80DE;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;phytochelatin&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x3001;&#x4E94;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;ABC&#x306E;&#x30AB;&#x30C9;&#x30DF;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; GS-&#x5171;&#x5F79;&#x8F38;&#x9001;Hmt1&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3001;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x95A2;&#x6570;&#x3082;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Hmt1&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;ABC2&#x30AA;&#x30EB;&#x30BD;&#x30ED;&#x30B0;&#x306F;&#x5E83;&#x304F;&#x738B;&#x56FD;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x5206;&#x6563;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x3084;&#x4ED6;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x5FF5;&#x9858;&#x306E;&#x6DB2;&#x80DE;phytochelatin&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6DB2;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;ABC2 Transporter&#x306E;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x80DE;&#x3067;Phytochelatin&#x84C4;&#x7A4D;&#x3068;&#x30AB;&#x30C9;&#x30DF;&#x30A6;&#x30E0;&#x8010;&#x6027;&#x3092;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;

Phytochelatins phytochelatin &#xAE08;&#xC18D; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C; vacuoles&#xB85C; &#xBD09;&#xC1C4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xACFC; &#xC77C;&#xBD80; &#xADE0;&#xC758; &#xC911; &#xAE08;&#xC18D; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC911;&#xC7AC;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; Schizosaccharomyces pombe Hmt1 phytochelatin &#xC804;&#xC1A1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; orthologous phytochelatin &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xACE0; &#xC2DC;&#xB3C4; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xCD5C;&#xADFC; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; hmt1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCD95;&#xC801; vacuoles&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC900; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; phytochelatin &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xCCB4; &#xBD88;&#xBA85;&#xB41C; phytochelatin &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xACF0; &#xD321;&#xC774;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBAA8;&#xB4E0; vacuolar ABC &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; S. pombe vacuoles&#xC5D0; &#xB204;&#xC801; &#xB41C; phytochelatin&#xB97C; &#xB9D0;&#xC0B4; &#xD558; &#xACE0; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB294; (35)S-PC(2) S. pombe microsomal vesicles&#xB85C; &#xD638;&#xC751;&#xC744; &#xC5BB; &#xC5C8;. &#xC804;&#xCCB4; S. pombe ABC transporter &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC758; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; Abc2 vacuoles&#xB97C; phytochelatin &#xC804;&#xC1A1; &#xC911;&#xC7AC; &#xD480; &#xC0AC;&#xC774;&#xC988; ABC &#xC804;&#xC1A1; (ABCC &#xD0C0;&#xC785;) &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. S. pombe abc1 abc2 abc3 abc4 hmt1 5 &#xBC30;&#xC758; abc2 hmt1 &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; vacuoles&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; phytochelatins&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Abc2 &#xC2DD; phytochelatin &#xCD95;&#xC801; vacuoles &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0; abc 5 &#xBC30;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xCE74;&#xB4DC;&#xBBB4; &#xAC10;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xC124;, &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xC740;, GS-&#xACF5;&#xC561; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0;&#xC11C; hmt1&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hmt1, &#xB2EC;&#xB9AC; Abc2 orthologs &#xC655;&#xAD6D; &#xC0AC;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xBC30;&#xD3EC; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; vacuolar phytochelatin &#xAE34; &#xBAA8;&#xC0C9; &#xC6B4;&#xC1A1;&#xC5C5; &#xC81C;&#xC548;.

Tonoplast &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; Abc2 &#xC804;&#xC1A1; vacuoles&#xC5D0; &#xB204;&#xC801; &#xB41C; phytochelatin&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558; &#xACE0; &#xCE74;&#xB4DC;&#xBBB4; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC624;&#xCC28;&#xB97C; &#xC218; &#xC5EC;.

Fitoquelatinas mediar en la tolerancia a metales pesados &#x200B;&#x200B;en las plantas y algunos hongos por el secuestro de fitoquelatina met&#xE1;licos complejos en las vacuolas. Hasta la fecha, s&#xF3;lo Hmt1 Schizosaccharomyces pombe se ha descrito como un transportador de fitoquelatina y los intentos para identificar los transportadores de ort&#xF3;logos fitoquelatina en plantas y otros organismos han fracasado. Adem&#xE1;s, datos recientes indican que el mutante hmt1 acumula niveles significativos de fitoquelatina en vacuolas, lo que sugiere que los transportistas no identificados fitoquelatina existen en los hongos. Aqu&#xED;, mostramos que la supresi&#xF3;n de todos los transportadores ABC suprime la acumulaci&#xF3;n vacuolar fitoquelatina en vacuolas S. pombe y deja sin efecto (35) S-PC (2) la captaci&#xF3;n en ves&#xED;culas microsomales S. pombe. El an&#xE1;lisis sistem&#xE1;tico de toda la familia de transportadores ABC S. pombe abc2 identificados como transportador de tama&#xF1;o completo ABC (ABCC-tipo) que el transporte de media fitoquelatina en vacuolas. El S. pombe ABC1 ABC2 abc3 abc4 hmt1 qu&#xED;ntuple y abc2 hmt1 espect&#xE1;culo doble mutante no fitoquelatinas detectables en las vacuolas. Abc2 restaura la expresi&#xF3;n de la acumulaci&#xF3;n en las vacuolas fitoquelatina y suprime la sensibilidad de cadmio de la qu&#xED;ntuple mutante abc. Una novela, la funci&#xF3;n inesperada, de Hmt1 en el GS-conjugado de transporte tambi&#xE9;n se muestra. En contraste con Hmt1, abc2 orthologs est&#xE1;n ampliamente distribuidos entre los reinos y se proponen como la tan buscada transportadores vacuolares fitoquelatina en plantas y otros organismos.

Tonoplasto localizados ABC2 media la acumulaci&#xF3;n Transporter fitoquelatina en las vacuolas y confiere tolerancia cadmio

(Ds) &#x53CC;&#x94FE; RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi) &#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4F5C;&#x690D;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x751F;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A;&#x690D;&#x682A;&#x8868;&#x793A; dsRNAs &#x6216;&#x4EBA;&#x5DE5; Microrna (amiRNAs) &#x8DB3;&#x5E95;&#x6216;&#x7531;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8; &#xFF08;VIGS&#xFF09; &#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x672C;&#x6784;&#x6216;&#x77AC;&#x6001; RNAi &#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5DE5;&#x5177;&#x4E3A;&#x529F;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5B66;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4F18;&#x79C0;&#x7684;&#x8D44;&#x6E90;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x9700;&#x8981;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8868;&#x8FBE; dsRNAs &#x6216; amiRNAs &#x5BF9;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5316;&#x548C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x690D;&#x682A;&#x7684;&#x7E41;&#x6B96;&#x6216;&#x591A;&#x4E2A; VIGS &#x7EBF;&#x8DEF;&#x7EF4;&#x62A4;&#x7684;&#x4E00;&#x4EE3;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x65BD;&#x52A0;&#x65F6;&#x95F4;&#x3001; &#x52B3;&#x52A8;&#x529B;&#x548C;&#x7A7A;&#x95F4;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;&#x6B63;&#x5982;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x6240;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x901A;&#x8FC7;&#x8F6C;&#x67D3;&#x4E0E;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x5408;&#x6210; dsRNAs RNAi &#x6548;&#x5E94;&#x89C4;&#x907F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7AE0;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x8BF4;&#x660E;&#x77AC;&#x6001;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x4F7F;&#x7528;&#x5408;&#x6210; dsRNAs &#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E3A;&#x540E;&#x7EED;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x63D0;&#x4F9B;&#x529E;&#x6CD5;&#x7684;&#x5B9E;&#x4F8B;&#x3002;

&#x76F4;&#x63A5;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x53CC;&#x94FE; RNA &#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x539F;&#x751F;&#x8D28;&#x4F53;&#x3002;

Double-stranded (ds) RNA interference (RNAi) is widely used as a reverse genetic approach for functional analysis of plant genes. Constitutive or transient RNAi effects in plants have been achieved via generating stable transformants expressing dsRNAs or artificial microRNAs (amiRNAs) in planta or by viral-induced gene silencing (VIGS). Although these tools provide outstanding resources for functional genomics, they require generation of vectors expressing dsRNAs or amiRNAs against targeted genes, transformation and propagation of transformed plants, or maintenance of multiple VIGS lines and thus impose time, labor, and space requirements. As we showed recently, these limitations can be circumvented by inducing RNAi effects in protoplasts via transfecting them with in vitro-synthesized dsRNAs. In this chapter we detail the procedure for transient gene silencing in protoplasts using synthetic dsRNAs and provide examples of approaches for subsequent functional analyses.

Direct transfer of synthetic double-stranded RNA into protoplasts of Arabidopsis thaliana.

Double brin (ds) l&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN (ARNi) est largement utilis&#xE9; comme une approche de g&#xE9;n&#xE9;tique inverse pour l&#x26;#39;analyse fonctionnelle des g&#xE8;nes de plantes. Constitutifs ou transitoire des effets ARNi dans les usines ont &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;s par la g&#xE9;n&#xE9;ration des transformants stables exprimant ARNdb ou microARN artificiels (amiRNAs) in planta ou par gene silencing d&#x26;#39;origine virale (VIGS). Bien que ces outils offrent les meilleures ressources pour la g&#xE9;nomique fonctionnelle, dont ils ont besoin g&#xE9;n&#xE9;ration de vecteurs exprimant ARNdb ou amiRNAs contre g&#xE8;nes cibl&#xE9;s, la transformation et la propagation des plantes transform&#xE9;es, ou l&#x26;#39;entretien de lignes de VIGS multiples et imposent donc des temps, de travail, et les besoins en espace. Comme nous l&#x26;#39;avons montr&#xE9; r&#xE9;cemment, ces limitations peuvent &#xEA;tre contourn&#xE9;es par induire des effets ARNi dans des protoplastes par les transfecter avec ARNdb synth&#xE9;tis&#xE9;s in vitro. Dans ce chapitre, nous d&#xE9;taillons la proc&#xE9;dure d&#x26;#39;inactivation de g&#xE8;ne passag&#xE8;re dans les protoplastes en utilisant ARNdb synth&#xE9;tiques et des exemples d&#x26;#39;approches pour la suite des analyses fonctionnelles.

Transfert direct d&#x26;#39;synth&#xE9;tiques d&#x26;#39;ARN double brin dans des protoplastes d&#x26;#39;Arabidopsis thaliana

(Ds) doppelstr&auml;ngige RNA-Interferenz (RNAi) ist als umgekehrte genetischer Ansatz f&uuml;r Funktionsanalyse von Pflanzengene verbreitet. Konstitutive oder transiente RNAi-Effekte in Pflanzen wurden erreicht, &uuml;ber stabile Transformants DsRNAs oder k&uuml;nstlichen MicroRNAs (AmiRNAs) in Planta oder von viral-induzierte gen-silencing (VIGS) generieren. Obwohl diese Tools f&uuml;r funktionelle Genomik hervorragende Ressourcen bereitstellen, sie erfordern Generation von Vektoren Ausdr&uuml;cken, DsRNAs oder AmiRNAs gegen gezielte Gene, Transformation und Vermehrung der transformierte Pflanzen und Erhaltung der VIGS Mehrfachlinien und somit zu verh&auml;ngen, Zeit, Arbeit und Platzbedarf. Wie wir k&uuml;rzlich gezeigt hat, k&ouml;nnen diese Einschr&auml;nkungen umgangen werden, durch RNAi-Effekte in Urformen &uuml;ber transfecting mit in Vitro synthetisiert DsRNAs induzieren. In diesem Kapitel haben wir detailliert das Verfahren f&uuml;r transient-gen-silencing in Urformen mit synthetischen DsRNAs und geben Sie Beispiele f&uuml;r Ans&auml;tze f&uuml;r sp&auml;tere Funktionsanalysen.

Direkte &Uuml;bertragung von synthetischen doppelstr&auml;ngige RNA in Urformen von Arabidopsis Thaliana.

Double-stranded (ds) interferenza del RNA (RNAi) &egrave; ampiamente usato come un approccio di genetico inverso per l&#39;analisi funzionale dei geni della pianta. Costitutivi o transitori effetti di RNAi in piante sono stati raggiunti tramite generazione di stabili transformants esprimendo RNAds o microRNA artificiali (amiRNAs) in planta o dal gene virale indotta silenziamento (VIGS). Sebbene questi strumenti forniscono risorse eccezionali per la genomica funzionale, essi richiedono la generazione di vettori che esprimono RNAds o amiRNAs contro geni mirate, trasformazione e moltiplicazione delle piante trasformate, o manutenzione di linee multiple VIGS e quindi imporre requisiti di spazio tempo e manodopera. Come abbiamo mostrato recentemente, queste limitazioni possono essere aggirate da indurre RNAi effetti in protoplasti tramite loro con transfecting di RNAds sintetizzato in vitro. In questo capitolo abbiamo dettaglio la procedura per il silenziamento genico transitorio in protoplasti utilizzando RNAds sintetici e fornire esempi di approcci per successive analisi funzionale.

Trasferimento diretto di sintetico double-stranded RNA in protoplasti di Arabidopsis thaliana.

&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#xFF08;ds&#xFF09;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5E83;&#x304F;&#x690D;&#x7269;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x69CB;&#x6210;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;RNAi&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x690D;&#x7269;&#x4F53;&#x3084;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;VIGS&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;dsRNA&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;RNA&#xFF08;amiRNAs&#xFF09;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306A;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B2;&#x30CE;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x9396;dsRNA&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x4F1D;&#x64AD;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;amiRNAs&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;VIGS&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x5F93;&#x3063;&#x3066;&#x6642;&#x9593;&#x3001;&#x52B4;&#x529B;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B9;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x8AB2;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x304C;&#x6700;&#x8FD1;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x305F;dsRNA&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RNAi&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x56DE;&#x907F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x8A73;&#x7D30;&#x5408;&#x6210;dsRNA&#x3092;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x3053;&#x306E;&#x7AE0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x4F8B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;RNA&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x8EE2;&#x9001;

&#xB354;&#xBE14;-&#xC88C;&#xCD08; (ds) RNA &#xAC04;&#xC12D; (RNAi) &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; transformants dsRNAs &#xB610;&#xB294; &#xC778;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; microRNAs (amiRNAs) planta &#xB610;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC720;&#xB3C4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35; (VIGS) &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xD604; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC815; &#xB610;&#xB294; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; RNAi &#xD6A8;&#xACFC; &#xB2EC;&#xC131;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC720;&#xC804;&#xCCB4;&#xD559;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB6F0;&#xC5B4;&#xB09C; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;, &#xBE44;&#xB85D; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; dsRNAs &#xB610;&#xB294; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, &#xBCC0;&#xD658; &#xD558; &#xACE0; &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC804;&#xD30C; &#xB610;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; VIGS &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Amirnas&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC04;, &#xB178;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xACF5;&#xAC04; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xBD80;&#xACFC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; &#xD569;&#xC131; Dsrnas&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; transfecting&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; protoplasts&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; RNAi &#xD6A8;&#xACFC; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD53C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD569;&#xC131; Dsrnas&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; protoplasts&#xC5D0;&#xC11C; &#xC785;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC808;&#xCC28;&#xC5D0; &#xC790;&#xC138;&#xD788; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xD6C4;&#xC18D; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC608;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Arabidopsis thaliana&#xC758; protoplasts&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; RNA&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC804;&#xC1A1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

De doble cadena (ds) RNA de interferencia (ARNi) es ampliamente utilizado como un m&#xE9;todo de gen&#xE9;tica inversa para el an&#xE1;lisis funcional de genes de plantas. RNAi efectos constitutivos o transitoria en las plantas se han logrado a trav&#xE9;s de la generaci&#xF3;n de transformantes estables que expresan ARN de doble cadena o microRNAs artificiales amiRNAs) en la planta o por el silenciamiento g&#xE9;nico inducido por virus (VIGS). A pesar de estas herramientas proporcionan los recursos pendientes de la gen&#xF3;mica funcional, que requieren la generaci&#xF3;n de vectores que expresan ARN de doble cadena o amiRNAs contra determinados genes, la transformaci&#xF3;n y la propagaci&#xF3;n de las plantas transformadas, o el mantenimiento de las l&#xED;neas de VIGS m&#xFA;ltiples e imponer as&#xED; el tiempo, el trabajo y las necesidades de espacio. Como mostramos recientemente, estas limitaciones pueden ser evitados mediante la inducci&#xF3;n de los efectos de RNAi en protoplastos a trav&#xE9;s de la transfecci&#xF3;n con ARN de doble cadena in vitro de s&#xED;ntesis. En este cap&#xED;tulo se detalla el procedimiento para el silenciamiento del gen transitoria en protoplastos utilizando ARN de doble cadena sint&#xE9;tico y dar ejemplos de enfoques para los subsiguientes an&#xE1;lisis funcionales.

Transferencia directa de sint&#xE9;tico de doble cadena de ARN en protoplastos de Arabidopsis thaliana

&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x6444;&#x52A8;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x6570;&#x4EE5;&#x5343;&#x8BA1;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x3002;&#x8861;&#x91CF;&#x5728;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x6709;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x548C;&#x6280;&#x672F;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x540C;&#x65F6;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x4F7F;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#xFF0C;&#x6709;&#x5F80;&#x5F80;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x5305;&#x62EC;&#x5927;&#x91CF;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x5E76;&#x968F;&#x673A;&#x6392;&#x5217;&#x5176;&#x987A;&#x5E8F;&#x6574;&#x4E2A;&#x5C4F;&#x5E55;&#x3002;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E2D;&#x7684;&#x968F;&#x673A;&#x53D8;&#x5F02;&#x533A;&#x5206;&#x771F;&#x6B63;&#x6539;&#x53D8;&#x8868;&#x578B;&#x662F;&#x6781;&#x5177;&#x6311;&#x6218;&#x6027;&#xFF0C;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x7EBF;&#x6027;&#x6DF7;&#x5408;&#x6548;&#x5E94;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6444;&#x52A8;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E2D;&#x7684;&#x964D;&#x566A;&#x3002;

High-throughput perturbation screens measure the phenotypes of thousands of biological samples under various conditions. The phenotypes measured in the screens are subject to substantial biological and technical variation. At the same time, in order to enable high throughput, it is often impossible to include a large number of replicates, and to randomize their order throughout the screens. Distinguishing true changes in the phenotype from stochastic variation in such experimental designs is extremely challenging, and requires adequate statistical methodology.

Noise reduction in genome-wide perturbation screens using linear mixed-effect models.

&#xC9;crans de perturbation &#xE0; haut d&#xE9;bit mesurer les ph&#xE9;notypes de milliers d&#x26;#39;&#xE9;chantillons biologiques dans des conditions diff&#xE9;rentes. Les ph&#xE9;notypes mesur&#xE9;s dans les &#xE9;crans sont sujettes &#xE0; variation biologique et technique substantielle. Dans le m&#xEA;me temps, afin de permettre un d&#xE9;bit &#xE9;lev&#xE9;, il est souvent impossible d&#x26;#39;inclure un grand nombre de r&#xE9;p&#xE9;titions, et &#xE0; leur ordre al&#xE9;atoire &#xE0; travers les &#xE9;crans. Distinguer les vrais changements dans le ph&#xE9;notype de la variation stochastique de ces mod&#xE8;les exp&#xE9;rimentaux est extr&#xEA;mement difficile, et exige des moyens suffisants de la m&#xE9;thodologie statistique.

R&#xE9;duction du bruit dans les &#xE9;crans Perturbation du g&#xE9;nome entier en utilisant lin&#xE9;aires &#xE0; effets mixtes Mod&#xE8;les

Hochdurchsatz-St&ouml;rung-Bildschirme messen die Ph&auml;notypen von Tausenden von biologischen Proben unter verschiedenen Bedingungen. Die Ph&auml;notypen, gemessen in den Bildschirmen unterliegen erheblichen biologische und technische Variation. Zur gleichen Zeit ist es um hohen Durchsatz erm&ouml;glichen oft unm&ouml;glich, eine gro&szlig;e Anzahl an Wiederholungen einzubeziehen und deren Reihenfolge in den Bildschirmen zuf&auml;llig. Echte Ver&auml;nderungen in der Ph&auml;notyp von stochastische Schwankungen dieser experimentellen Designs zu unterscheiden ist extrem schwierig und erfordert ausreichende statistische Methodik.

Rauschunterdr&uuml;ckung in genomweiten St&ouml;rung Bildschirme mit lineare Modellen der gemischt-Effekt.

Schermi high-throughput perturbazione misurano i fenotipi di migliaia di campioni biologici in varie condizioni. I fenotipi misurati nelle schermate sono soggette a notevoli variazioni biologiche e tecniche. Allo stesso tempo, al fine di consentire ad alto rendimento, spesso &egrave; impossibile includere un gran numero di repliche e al loro ordine in tutto le schermate in modo casuale. Distinguere i veri cambiamenti nel fenotipo da variazione stocastica in tali disegni sperimentali &egrave; estremamente impegnativo e richiede un&#39;adeguata metodologia statistica.

Riduzione del rumore nelle schermate di genome-wide perturbativa utilizzando modelli lineari misti-effetto.

&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x6442;&#x52D5;&#x753B;&#x9762;&#x306F;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x6570;&#x5343;&#x4EBA;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x753B;&#x9762;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x9AD8;&#x3044;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x8907;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x756A;&#x53F7;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x753B;&#x9762;&#x5168;&#x4F53;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x9806;&#x5E8F;&#x3092;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x78BA;&#x7387;&#x7684;&#x5909;&#x52D5;&#x304B;&#x3089;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x771F;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC12D; &#xB3D9; &#xD654;&#xBA74; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC218;&#xCC9C;&#xC758; &#xACE0;&#xAE30;. &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; &#xACE0;&#xAE30; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xACFC; &#xAE30;&#xC220; &#xBCC0;&#xD654; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC19;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC885;&#xC885; &#xC218; &#xC5C6;&#xAE30; &#xB9CE;&#xC740; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC21C;&#xC11C;&#xB97C; &#xBB34;&#xC791;&#xC704;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xB514;&#xC790;&#xC778; stochastic &#xBCC0;&#xD615;&#xC758; phenotype&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C4;&#xC815;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB3C4;&#xC804; &#xD558; &#xACE0; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xD1B5;&#xACC4;&#xC801; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xC120;&#xD615; &#xD63C;&#xD569; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; &#xC12D; &#xB3D9; &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB178;&#xC774;&#xC988; &#xAC10;&#xC18C;.

De alto rendimiento pantallas perturbaci&#xF3;n medir los fenotipos de miles de muestras biol&#xF3;gicas bajo diversas condiciones. Los fenotipos medidos en las pantallas est&#xE1;n sujetas a variaci&#xF3;n sustancial biol&#xF3;gica y t&#xE9;cnica. Al mismo tiempo, a fin de permitir un alto rendimiento, a menudo es imposible incluir un gran n&#xFA;mero de repeticiones, y para aleatorizar su orden a trav&#xE9;s de las pantallas. Distinguir los cambios reales en el fenotipo de la variaci&#xF3;n estoc&#xE1;stica en estos dise&#xF1;os experimentales es extremadamente dif&#xED;cil, y requiere una metodolog&#xED;a estad&#xED;stica adecuada.

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Worms take the 'phyto' out of 'phytochelatins'. Trends in biotechnology\| PubMed ID: 11814595	2002
Phytochelatin synthase, a dipeptidyltransferase that undergoes multisite acylation with gamma-glutamylcysteine during catalysis: stoichiometric and site-directed mutagenic analysis of arabid... The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 15004013	2004
Weeds, worms, and more. Papain's long-lost cousin, phytochelatin synthase. Plant physiology\| PubMed ID: 15375203	2004
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Olena K. Vatamaniuk

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