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Harvesting and Cryo-cooling Crystals of Membrane Proteins Grown in Lipidic Mesophases for Structure Determination by Macromolecular Crystallography

An important route to understanding how proteins function at a mechanistic level is to have the structure of the target protein available, ideally at ...

Trinity College Dublin 

&#x786B;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x83CC;&#x8131;&#x786B;&#x5F27;&#x83CC;&#x7261;&#x86CE;&#xFF0C;diDg&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5934;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4ECE;&#x4E8C;&#x805A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c(3) &#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5F97;&#x5230;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5B8C;&#x5584; 1.2 A &#x51B3;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x7ED9;&#x4E88;&#x6700;&#x540E;&#x7684;&#x53EF;&#x9760;&#x6027;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684; R(free) = 14.8%&#x548C; R = 12.4%&#x3002;&#x6B64;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20;&#x662F;&#x4EE5;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53; tetraheme &#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c(3) &#x5206;&#x5B50;&#x6EB6;&#x5242;&#x53EF;&#x8FBE;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7684;&#x4E24;&#x5EA7;&#x6865;&#x6881;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x8FDE;&#x7684;&#x7279;&#x6709;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c(3) &#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5404;&#x5411;&#x5F02;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x534A;&#x521A;&#x6027;&#x7684; TLS &#x65B9;&#x6CD5;&#x56E0;&#x5176;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5305;&#x88C5;&#x73AF;&#x5883;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5355;&#x4F53;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x5FAA;&#x73AF;&#x3002;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c(3) &#x4E2D;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x57DF;&#x5355;&#x591A; domain &#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c(3) &#x663E;&#x793A;&#x7ED3;&#x6784;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5927;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x91CC;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x8F83;&#x5927;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x7684;&#x6C34;&#x5206;&#x5B50;&#x88AB;&#x5B88;&#x6052;&#x4E2D;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5B89;&#x6392;&#x5728; c(3) tetraheme &#x4E2D;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x57DF;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9014;&#x5F84;&#x4E4B;&#x95F4;&#x9ED1;&#x6885;&#x65AF;&#x4E00;&#x548C;&#x4E8C;&#x3002;DiDg &#x72EC;&#x7279;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5185;&#x90E8;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x63A5;&#x8FD1;&#x6211;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x548C;&#x8F74;&#x5411;&#x914D;&#x4F53;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x4E4B;&#x4E00;&#x4E09;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c(3) &#x5BB6;&#x65CF;&#x6709;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x9887;&#x4E0D;&#x5BFB;&#x5E38;&#x7684; CXXXCH &#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E3B;&#x9898;&#x53EA;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x6837;&#x8FDC;&#x8FDC;&#x5728;&#x6B64;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20;&#x3002;

&#x4ECE;&#x8131;&#x786B;&#x5F27;&#x83CC;&#x7261;&#x86CE; 1.2 A &#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x4E8C;&#x805A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c3 &#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

The structure of dimeric cytochrome c(3) from the sulfate-reducing bacterium Desulfovibrio gigas, diDg, obtained by ab initio methods was further refined to 1.2 A resolution, giving final reliability factors of R(free) = 14.8% and R = 12.4%. This cytochrome is a dimer of tetraheme cytochrome c(3) molecules covalently linked by two solvent-accessible disulfide bridges, a characteristic unique to members of the cytochrome c(3) superfamily. Anisotropic analysis using the semi-rigid TLS method shows different behaviour for analogous loops in each monomer arising from their different packing environments. A detailed sequence and structural comparison with all other known cytochrome c(3) domains in single- and multi-domain cytochromes c(3) shows the presence of structurally conserved regions in this family, despite the high variability of the amino-acid sequence. An internal water molecule is conserved in a common structural arrangement in all c(3) tetraheme domains, indicating a probable electron-transfer pathway between hemes I and II. Unique features of diDg are an internal methionine residue close to heme I and to one of the axial ligands of heme III, where all other structures of the cytochrome c(3) superfamily have a phenylalanine, and a rather unusual CXXXCH heme-binding motif only found so far in this cytochrome.

Structure of dimeric cytochrome c3 from Desulfovibrio gigas at 1.2 A resolution.

La structure du dim&egrave;re de cytochrome c (3) de la bact&eacute;rie sulfato-r&eacute;ductrice Desulfovibrio gigas, diDg, obtenue par ab initio m&eacute;thodes &eacute;tait plue affin&eacute;e jusqu&#39;&agrave; 1,2 r&eacute;solution, donnant des facteurs de fiabilit&eacute; finale de R(free) = 14,8 % et R = 12,4 %. Ce cytochrome est un dim&egrave;re de mol&eacute;cules de c (3) du cytochrome tetraheme covalente par deux ponts disulfure accessible par solvant, une caract&eacute;ristique unique aux membres de la superfamille du cytochrome c (3). Analyse anisotrope en utilisant la m&eacute;thode TLS semi-rigide montre des comportements diff&eacute;rents pour les lignes analogues dans chaque monom&egrave;re d&eacute;coulant de leurs environnements d&#39;emballage diff&eacute;rent. Une s&eacute;quence d&eacute;taill&eacute;e et une comparaison structurelle avec tous les autres domaines de c (3) de cytochrome connu unique et plusieurs domaines Courriel c cytochromes (3) montre la pr&eacute;sence de r&eacute;gions structurellement conserv&eacute;es dans cette famille, en d&eacute;pit de la forte variabilit&eacute; de la s&eacute;quence des acides amin&eacute;s. Une mol&eacute;cule d&#39;eau interne est conserv&eacute;e dans un arrangement structural commun dans tous les domaines de tetraheme c (3), ce qui indique une voie de transfert d&#39;&eacute;lectron probable entre h&egrave;mes I et II. Particularit&eacute;s du diDg sont un r&eacute;sidu m&eacute;thionine interne pr&egrave;s de h&egrave;me I et &agrave; l&#39;un des ligands axiaux de l&#39;h&egrave;me III, o&ugrave; toutes les autres structures de la superfamille du cytochrome c (3) ont une ph&eacute;nylalanine et un motif de liaison &agrave; l&#39;h&egrave;me CXXXCH plut&ocirc;t inhabituels a seulement trouv&eacute; alors loin de ce cytochrome.

Structure de dim&egrave;re cytochrome c3 de Desulfovibrio gigas &agrave; r&eacute;solution 1,2.

Die Struktur der dimeren Cytochrom c(3) von Sulfat-reduzierenden Bakterien Desulfovibrio Gigas, DiDg, ab initio Methoden erzielten wurde weiter verfeinert, 1,2 A Aufl&ouml;sung, geben endg&uuml;ltige Zuverl&auml;ssigkeit Faktoren der R(free) = 14,8 % und W = 12,4 %. Diese Cytochrom ist ein Dimer Tetraheme Cytochrom c(3) Molek&uuml;le kovalent verbunden durch zwei Disulfidbr&uuml;cken, L&ouml;sungsmittel-zug&auml;nglich, ein Merkmal, das nur f&uuml;r Mitglieder der Cytochrom c(3) Superfamilie. Anisotrope Analyse mit der Semi-Rigid-TLS-Methode zeigt unterschiedliche Verhalten f&uuml;r Analog-Loops in jedes Monomer aus ihren verschiedenen Verpackung-Umgebungen. Einer detaillierten Sequenz und strukturellen Vergleich mit allen anderen bekannten Cytochrom c(3) Dom&auml;nen in Einzel - und multi - domain Zellfarbstoff c(3) zeigt das Vorhandensein von strukturell konservierten Regionen in dieser Familie, trotz der hohen Variabilit&auml;t der Aminos&auml;ure-Sequenz. Eine interne Wasser-Molek&uuml;l ist in einer gemeinsamen strukturellen Anordnung in allen c(3) Tetraheme Dom&auml;nen, angibt, einem wahrscheinliche Elektronentransfer Weg zwischen HEMEN I und II erhalten. Einzigartigen Eigenschaften der DiDg sind eine interne Methionin-R&uuml;ckstand nahe H&auml;m ich und einer der axialen Liganden des H&auml;m gefunden III, wo alle anderen Strukturen der Cytochrom c(3) Superfamilie eine Phenylalanin und ein eher ungew&ouml;hnlicher CXXXCH H&auml;m-Bindung Motiv haben nur so weit in diesem Cytochrom.

Struktur der dimeren Cytochrom-c3 von Desulfovibrio Gigas bei 1,2 A Aufl&ouml;sung.

La struttura del citocromo dimerica Sol il batterio solfato-riduzione Desulfovibrio gigas, diDg, ottenuti da ab initio metodi &egrave; stato ulteriormente raffinato a risoluzione 1,2, dando fattori di affidabilit&agrave; finale di R(free) = 14,8% e R = 12,4%. Questo citocromo &egrave; un dimero di molecole di Sol citocromo tetraheme covalentemente legate da due ponti disolfuro solvente-accessibile, una caratteristica unica per i membri della superfamiglia Sol citocromo. Anisotropo analisi utilizzando il metodo TLS semirigido Mostra differenti comportamenti analoghi cicli for in ogni monomero derivanti dal loro imballaggio diversi ambienti. Una sequenza dettagliata e confronto strutturale con tutti gli altri domini di Sol noto citocromo in single e multi domain citocromi Sol indica la presenza di regioni strutturalmente conservate in questa famiglia, nonostante la grande variabilit&agrave; della sequenza di amminoacido. Una molecola d&#39;acqua interno &egrave; conservata in una disposizione strutturale comune in tutti i domini di tetraheme Sol, indicando un percorso di probabile trasferimento di elettroni tra EMI I e II. Caratteristiche uniche di diDg sono un residuo di metionina interna vicino a EME I e ad uno dei ligandi assiali di EME III, dove tutte le altre strutture della superfamiglia Sol citocromo hanno una fenilalanina e un motivo di EME-associazione CXXXCH piuttosto insolito trovato solo cos&igrave; lontano in questo citocromo.

Struttura dimerica citocromo c3 da Desulfovibrio gigas a risoluzione 1,2.

&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c (3) ab initio &#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x786B;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x83CC; Desulfovibrio &#x30DE;&#x30AC;&#x30AD;&#x3001;diDg &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3044;&#x305F; R(free) &#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3066; 1.2 A &#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306B;&#x6D17;&#x7DF4;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 14.8% &#x3068; R = = 12.4%&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6EB6;&#x5A92;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x7269;&#x6A4B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; tetraheme &#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c (3) &#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c (3) &#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306B;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x7279;&#x5FB4;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x525B;&#x306E; TLS &#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7570;&#x65B9;&#x6027;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30D1;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x74B0;&#x5883;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x5404;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x632F;&#x308B;&#x821E;&#x3044;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x6BD4;&#x8F03;&#x4ED6;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0; c (3) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; c (3 &#x3068;&#x591A;&#x5206;&#x57DF;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;) &#x3067;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x53EF;&#x5909;&#x6027;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3053;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x6C34;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x30D8;&#x30E0;&#x9593; I &#x3068; II &#x306F;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x914D;&#x7F6E;&#x3067; c (3) tetraheme &#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DiDg &#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x7279;&#x5FB4;&#x306F;&#x5185;&#x90E8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x9589;&#x3058;&#x308B;&#x30D8;&#x30E0;&#x306B;&#x79C1;&#x3068;&#x306E;&#x30D8;&#x30E0;&#x8EF8;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306B;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c (3) &#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;&#x3080;&#x3057;&#x308D;&#x7570;&#x5E38;&#x306A; CXXXCH &#x30D8;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x304C;&#x3042;&#x308B; III &#x306E;&#x307F;&#x767A;&#x898B;&#x305D;&#x3046;&#x9060;&#x304F;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x3002;

&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c3 &#x304B;&#x3089; Desulfovibrio gigas 1.2 &Aring; &#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3002;

Ab initio &#xBC29;&#xBC95; &#xC5BB;&#xC740; &#xD669;&#xC0B0;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; Desulfovibrio gigas, diDg&#xC5D0;&#xC11C; dimeric &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c(3)&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xB354; &#xC8FC;&#xB294; r(free)&#xC758; &#xCD5C;&#xC885; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xC131; &#xC694;&#xC778; 1.2 A &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC138;&#xB828; &#xB41C; 14.8%&#xC640; R = = 12.4%. &#xC774; &#xC2DC; &#xD1A0;&#xC774; &#xD06C;&#xB86C; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; tetraheme &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c(3) &#xBD84;&#xC790; &#x70AD; &#xB450; &#xC6A9; &#xB9E4; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xB2E4;&#xB9AC;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c(3) superfamily&#xC758; &#xBA64;&#xBC84;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xD2B9;&#xC131; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774;&#xBC29;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC18; &#xAC15;&#xC131; TLS &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xB978; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAC01; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xB8E8;&#xD504;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD589;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xC21C;&#xC11C; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870; &#xBE44;&#xAD50; &#xD55C;&#xB2E4; c(3) &#xB2E8;&#xC77C; &#xBC0F; &#xBA40;&#xD2F0; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c(3) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0B0; &#xC131; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB0B4;&#xBD80; &#xBB3C; &#xBD84;&#xC790;&#xB294; I &#xBC0F; II hemes &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xACBD;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; c(3) tetraheme &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Didg&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC740; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; heme&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; &#xB098; &#xACE0; heme&#xC758; &#xCD95; ligands&#xC758; 3 &#xC138;, &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c(3) superfamily&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB2E4;&#xC18C; &#xD2B9;&#xC774; &#xD55C; CXXXCH heme &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB807;&#xAC8C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC774; &#xC2DC; &#xD1A0;&#xC774; &#xD06C;&#xB86C;&#xC5D0;&#xAE4C;&#xC9C0;.

1.2 A &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; Desulfovibrio gigas&#xC5D0;&#xC11C; dimeric &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c 3&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;.

La estructura del citocromo dim&eacute;rico c(3) las bacterias reductoras de sulfato Desulfovibrio gigas, diDg, obtenida por ab initio m&eacute;todos era m&aacute;s refinado a 1.2 una resoluci&oacute;n, dando factores de fiabilidad final de R(free) = 14,8% y R = 12,4%. Este citocromo es un d&iacute;mero de mol&eacute;culas de c(3) tetraheme citocromo covalentemente Unidas por dos puentes de disulfuro solvente-accesible, una caracter&iacute;stica &uacute;nica a los miembros de la superfamilia de citocromo c(3). Anisotr&oacute;pico an&aacute;lisis utilizando el m&eacute;todo TLS semirr&iacute;gido muestra diferentes comportamientos para bucles an&aacute;logos en cada mon&oacute;mero derivadas de sus entornos de embalaje diferentes. Una secuencia detallada y comparaci&oacute;n estructural con todos otros dominios de c(3) citocromo conocido en single y multi domain c(3) citocromos muestra la presencia de regiones estructuralmente conservadas en esta familia, a pesar de la alta variabilidad de la secuencia de amino&aacute;cidos. Una mol&eacute;cula de agua se conserva en un arreglo estructural com&uacute;n en todos los c(3) tetraheme dominios, indicando un camino probable transferencia de electrones entre hemes I y II. Caracter&iacute;sticas &uacute;nicas de diDg son un residuo de metionina interno cerca de hemo I y a uno de los ligandos axiales del heme III, donde todas las otras estructuras de la superfamilia de citocromo c(3) tienen una fenilalanina y un motivo bastante inusual de hemo-enlace CXXXCH s&oacute;lo encuentra tan lejos en este citocromo.

Estructura del citocromo dim&eacute;rico c3 de Desulfovibrio gigas en 1.2 una resoluci&oacute;n.

&#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4ECE;&#x786B;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8131;&#x786B;&#x5F27;&#x83CC; ATCC 27774 (Dd) &#x548C;&#x8131;&#x786B;&#x5F27;&#x83CC;&#x5BFB;&#x5E38;&#x578B;&#x5E94;&#x53D8; Hildenborough (Dv) &#x5F97;&#x5230;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x538C;&#x6C27;&#x5177;&#x4F53;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x6BCF;&#x79CD;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5DF2;&#x964D;&#x4F4E;&#x4FDD;&#x9669;&#x7C89;&#x548C;&#x9610;&#x660E; Dd &#x548C; Dv&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x4F7F;&#x7528; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x540C;&#x6B65;&#x8F90;&#x5C04;&#x6280;&#x672F;&#x5728; 1.25 A &#x548C; 1.55 A &#x51B3;&#x8BAE;&#x51CF;&#x5C11;&#x7A97;&#x4F53;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x603B;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x65F6;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF0C;&#x5728;&#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x6709;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5305;&#x62EC;&#x91CD;&#x5927;&#x53D8;&#x52A8;&#x6302;&#x94A9;&#x80E8;&#x7ED3;&#x6784;&#x6C27;&#x5316;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5206;&#x79BB;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x80E8;&#x672C;&#x8EAB;&#x7684;&#x786B;&#x539F;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684;&#x94C1;&#x539F;&#x5B50;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#x63CF;&#x8FF0;&#x548C;&#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x804C;&#x80FD;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x3002;

&#x4ECE;&#x8131;&#x786B;&#x5F27;&#x83CC; ATCC 27774 &#x548C;&#x8131;&#x786B;&#x5F27;&#x83CC;&#x67CF; (Hildenborough) &#x51CF;&#x5C11;&#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;HCP&#xFF09;&#xFF1A; &#x4F7F;&#x7528;&#x540C;&#x6B65;&#x8F90;&#x5C04;&#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x3002;

The hybrid cluster proteins from the sulfate reducing bacteria Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 ( Dd) and Desulfovibrio vulgaris strain Hildenborough ( Dv) have been isolated and crystallized anaerobically. In each case, the protein has been reduced with dithionite and the crystal structure of the reduced form elucidated using X-ray synchrotron radiation techniques at 1.25 A and 1.55 A resolution for Dd and Dv, respectively. Although the overall structures of the proteins are unchanged upon reduction, there are significant changes at the hybrid cluster centres. These include significant movements in the position of the iron atom linked to the persulfide moiety in the oxidized as-isolated proteins and the sulfur atom of the persulfide itself. The nature of these changes is described and the implications with respect to the function of hybrid cluster proteins are discussed.

Reduced hybrid cluster proteins (HCP) from Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 and Desulfovibrio vulgaris (Hildenborough): X-ray structures at high resolution using synchrotron radiation.

Les prot&eacute;ines de cluster hybride de la bact&eacute;ries r&eacute;ductrices de sulfate Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 (Dd) et souche de Desulfovibrio vulgaris Hildenborough (Dv) ont &eacute;t&eacute; isol&eacute;s et cristallis&eacute;s en ana&eacute;robiose. Dans chaque cas, la prot&eacute;ine a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite avec dithionite et la structure cristalline de la forme r&eacute;duite &eacute;lucid&eacute;e utilisant des techniques de rayonnement synchrotron de rayons x &agrave; 1.25 A et une r&eacute;solution de 1,55 pour Dd et Dv, respectivement. Bien que les structures globales des prot&eacute;ines sont inchang&eacute;s lors de la r&eacute;duction, il y a des changements significatifs dans les centres de cluster hybride. Il s&#39;agit d&#39;importants mouvements &agrave; la position de l&#39;atome de fer li&eacute; &agrave; la portion de persulfures dans les prot&eacute;ines isol&eacute;es comme oxyd&eacute;s et l&#39;atome de soufre de la persulfures elle-m&ecirc;me. La nature de ces changements est d&eacute;crite et on discute des implications en ce qui concerne la fonction des prot&eacute;ines cluster hybride.

R&eacute;duit les prot&eacute;ines hybrides de cluster (HCP) de Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 et Desulfovibrio vulgaris (Hildenborough): rayons x des structures &agrave; haute r&eacute;solution en utilisant le rayonnement synchrotron.

Die Hybrid Cluster Proteine von Sulfat reduzieren Bakterien Desulfovibrio Desulfuricans ATCC 27774 (Dd) und die Desulfovibrio Vulgaris Belastung Newhaven (Dv) wurden isoliert und kristallisiert anaerob. In jedem Fall wurde das Protein mit Dithionit und die Kristallstruktur der reduzierten Form aufgekl&auml;rt, mit x-ray Synchrotronstrahlung Techniken auf 1,25 A und 1,55 A Aufl&ouml;sung f&uuml;r Dd und Dv, reduziert. Obwohl die allgemeinen Strukturen der Proteine &uuml;ber K&uuml;rzung unver&auml;ndert sind, gibt es bedeutende Ver&auml;nderungen in den Hybrid-Cluster-Zentren. Dazu geh&ouml;ren bedeutende Bewegungen in der Lage die Eisen-Atom mit der Persulfide-Gruppe in die oxidierte als isolierte Proteine und das Schwefel-Atom des Persulfide selbst verkn&uuml;pft. Die Art dieser &Auml;nderungen wird beschrieben und die Auswirkungen in Bezug auf die Funktion von Hybrid-Cluster-Proteinen werden diskutiert.

Hybrid-Cluster-Proteinen (HCP) von Desulfovibrio Desulfuricans ATCC 27774 und Desulfovibrio Vulgaris (Limburg) reduziert: R&ouml;ntgen-Strukturen mit hoher Aufl&ouml;sung mit Synchrotronstrahlung.

Le proteine del cluster ibrido da batteri solfato riducenti Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 (Dd) e Desulfovibrio vulgaris strain Hildenborough (Dv) sono stati isolati e cristallizzati anaerobicamente. In ogni caso, la proteina &egrave; stata ridotta con ditionito e la struttura di cristallo di forma ridotta chiarita utilizzando tecniche di radiazione di sincrotrone a raggi x a 1,25 A e risoluzione 1,55 per Dd e Dv, rispettivamente. Anche se le strutture complessive delle proteine sono invariate su riduzione, ci sono cambiamenti significativi presso i centri di ammasso ibrido. Questi includono movimenti significativi nella posizione dell&#39;atomo di ferro legato al moiety persulfide le proteine ossidate come isolata e l&#39;atomo di zolfo di persulfide stesso. La natura di questi cambiamenti &egrave; descritto e sono discusse le implicazioni per quanto riguarda la funzione delle proteine cluster ibrido.

Ridotte le proteine di cluster ibrido (HCP) da Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 e Desulfovibrio vulgaris (Hildenborough): raggi x strutture ad alta risoluzione mediante radiazione di sincrotrone.

&#x786B;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x83CC; 2a17-4 &#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;, 27774 &#x304B;&#x3089;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (Dd) &#x3068; Desulfovibrio &#x5C0B;&#x5E38;&#x6027;&#x6B6A; Hildenborough (Dv) &#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x7279;&#x5B9A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5ACC;&#x6C17;&#x3092;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B5;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306E; x &#x7DDA;&#x653E;&#x5C04;&#x5149;&#x6280;&#x8853;&#x3067; 1.25 A &#x3068; 1.55 &Aring; &#x5206;&#x89E3;&#x80FD; Dd &#x3068; Dv&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x7E2E;&#x5C0F;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3067;&#x524A;&#x6E1B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x6642;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068; persulfide &#x81EA;&#x4F53;&#x306E;&#x786B;&#x9EC4;&#x539F;&#x5B50;&#x306E; persulfide &#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x9244;&#x539F;&#x5B50;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x542B;&#x610F;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (HCP) 2a17-4 &#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;, 27774 &#x3068; Desulfovibrio &#x5C0B;&#x5E38;&#x6027; (Hildenborough) &#x304B;&#x3089;&#x6E1B;&#x5C11;: x &#x7DDA;&#x653E;&#x5C04;&#x5149;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x69CB;&#x9020;&#x3002;

&#xD669;&#xC0B0; &#xC904;&#xC774;&#xB294; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (Dd) &#xBC0F; Desulfovibrio vulgaris &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; Hildenborough (Dv) &#xACA9;&#xB9AC; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xACE0; anaerobically &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294;. &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; dithionite&#xC640; &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; Dd &#xBC0F; Dv, 1.25 A x &#xC120; synchrotron &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xAE30;&#xBC95; &#xBC0F; 1.55 A &#xD574;&#xACB0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD574;&#xBA85; &#xCD95;&#xC18C; &#xD615;&#xC2DD; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xAC10;&#xC18C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xBE44;&#xB85D; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xC13C;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0B0;&#xD654;&#xB85C; &#xC808;&#xC5F0; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC790;&#xCCB4; persulfide&#xC758; &#xC720;&#xD669; &#xC6D0;&#xC790; persulfide moiety&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xCCA0; &#xC6D0;&#xC790;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC758;&#xBBF8;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294;.

Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 Desulfovibrio vulgaris (Hildenborough)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (HCP) &#xAC10;&#xC18C;: &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; synchrotron &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; x &#xC120;.

Las prote&iacute;nas de cl&uacute;ster de h&iacute;brido de las bacterias reductoras de sulfato Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 (Dd) y Desulfovibrio vulgaris cepa Hildenborough (Dv) han sido aislados y cristalizado anaer&oacute;bicamente. En cada caso, la prote&iacute;na se ha reducido con ditionito y la estructura cristalina de la forma reducida aclarada utilizando t&eacute;cnicas de radiaci&oacute;n de sincrotr&oacute;n de rayos x 1,25 A y 1.55 una resoluci&oacute;n para Dd y Dv, respectivamente. Aunque las estructuras generales de las prote&iacute;nas son invariables en reducci&oacute;n, hay cambios significativos en los centros de cl&uacute;ster de h&iacute;brido. Estos incluyen movimientos significativos en la posici&oacute;n del &aacute;tomo del hierro ligado a la mol&eacute;cula de persulfide en las prote&iacute;nas aisladas como oxidadas y el &aacute;tomo de azufre de la persulfide s&iacute; mismo. Se describe la naturaleza de estos cambios y se discuten las implicaciones con respecto a la funci&oacute;n de prote&iacute;nas del grupo de h&iacute;bridos.

Las prote&iacute;nas h&iacute;bridas racimo (HCP) se ha reducido de Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 y Desulfovibrio vulgaris (Hildenborough): estructuras en alta resoluci&oacute;n utilizando radiaci&oacute;n de sincrotr&oacute;n de rayos x.

The hybrid cluster protein (HCP) from the sulfate-reducing bacteria Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 has been isolated and crystallized anaerobically. The protein sample used in the crystallization studies was several months old, having been stored at 193 K, and initial crystal structure studies were unable to fully resolve details of the hybrid cluster despite the use of high-resolution data to 1.25 A collected at the ESRF, Grenoble, France. Full elucidation of the structure has only become possible with the complete knowledge of the as-isolated and fully reduced crystal structures. The analysis clarifies the significant movements in the position of the Fe atom linked to the persulfide moiety in the oxidized as-isolated protein and the S atom of the persulfide itself as the protein is reduced. The structures of the as-isolated and reduced states are discussed in terms of the putative function of the HCP proteins.

Structure of the hybrid cluster protein (HCP) from Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 containing molecules in the oxidized and reduced states.

&#x786B;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x83CC; ATCC 27774 &#x8131;&#x786B;&#x5F27;&#x83CC;&#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;HCP&#xFF09; &#x5F97;&#x5230;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x538C;&#x6C27;&#x5177;&#x4F53;&#x5316;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x6837;&#x54C1;&#x7ED3;&#x6676;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6708;&#x65E7;&#x540E;, &#x4E00;&#x76F4;&#x5B58;&#x653E;&#x5728; 193 K &#x548C;&#x521D;&#x59CB;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7814;&#x7A76;&#x672A;&#x80FD;&#x5B8C;&#x5168;&#x89E3;&#x51B3;&#x5728; ESRF&#xFF0C;&#x6CD5;&#x56FD;&#x683C;&#x52D2;&#x8BFA;&#x5E03;&#x5C14;&#x6536;&#x96C6;&#x5230; 1.25 A &#x5C3D;&#x7BA1;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x6570;&#x636E;&#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5B8C;&#x5168;&#x6F84;&#x6E05;&#x53EA;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9694;&#x79BB;&#x548C;&#x5145;&#x5206;&#x51CF;&#x5C11;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x77E5;&#x8BC6;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x6F84;&#x6E05;&#x4E86;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x6C27;&#x5316;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5206;&#x79BB;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x80E8;&#x672C;&#x8EAB;&#x7684; S &#x539F;&#x5B50;&#x80E8;&#x6D53;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x91CF;&#x524A;&#x51CF;&#x4E86;&#x94C1;&#x539F;&#x5B50;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x53D8;&#x52A8;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9694;&#x79BB;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x5047;&#x5B9A; HCP &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x4ECE;&#x8131;&#x786B;&#x5F27;&#x83CC; ATCC 27774 &#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;HCP&#xFF09; &#x7ED3;&#x6784;&#x5305;&#x542B;&#x6C27;&#x5316;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

La prot&eacute;ine de cluster hybride (HCP) de la bact&eacute;rie sulfato-r&eacute;ductrice Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 a &eacute;t&eacute; isol&eacute;e et cristallis&eacute;e en ana&eacute;robiose. L&#39;&eacute;chantillon de prot&eacute;ine utilis&eacute;e dans les &eacute;tudes de cristallisation a plusieurs mois, apr&egrave;s avoir &eacute;t&eacute; stock&eacute;es &agrave; 193 K, et les &eacute;tudes de structure cristalline initiale ont &eacute;t&eacute; incapables de r&eacute;soudre compl&egrave;tement les d&eacute;tails du cluster hybride malgr&eacute; l&#39;utilisation de donn&eacute;es &agrave; haute r&eacute;solution pour 1,25 A recueilli &agrave; l&#39;ESRF, Grenoble, France. &Eacute;lucidation de la structure est devenu seulement possible avec la connaissance compl&egrave;te des structures cristallines comme isol&eacute; et enti&egrave;rement r&eacute;duite. L&#39;analyse pr&eacute;cise des mouvements les plus importants dans la position de l&#39;atome de Fe li&eacute; &agrave; la portion persulfures dans la prot&eacute;ine oxyd&eacute;e comme isol&eacute;s et l&#39;atome de S de la persulfures elle-m&ecirc;me que la prot&eacute;ine est r&eacute;duite. On discute des structures des &Eacute;tats comme isol&eacute;e et r&eacute;duites en ce qui concerne la fonction putative des prot&eacute;ines HCP.

Structure de la prot&eacute;ine de cluster hybride (HCP) de Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 contenant des mol&eacute;cules dans les &Eacute;tats oxyd&eacute;es et r&eacute;duites.

Das Hybrid-Cluster-Protein (HCP) durch die Sulfat-reduzierenden Bakterien Desulfovibrio Desulfuricans ATCC 27774 wurde isoliert und kristallisiert anaerob. Die Protein-Probe verwendet in der Kristallisation-Studien war mehrere Monate alt, haben bei 193 K, gespeichert wurden und erste Kristall Struktur Studien waren nicht vollst&auml;ndig aufl&ouml;sen, Informationen &uuml;ber die Hybrid-Cluster trotz der Verwendung von hochaufl&ouml;senden Daten zu 1,25 A an der ESRF, Grenoble, Frankreich gesammelt. Vollst&auml;ndige Aufkl&auml;rung der Struktur ist nur mit vollst&auml;ndiger Kenntnis von den als isoliert und vollst&auml;ndig reduzierten Kristallstrukturen m&ouml;glich geworden. Die Analyse verdeutlicht die wesentlichen Bewegungen in der Lage die Fe-Atom mit der Persulfide-Gruppe in das oxidierte als isolierten Protein und das S-Atom des Persulfide selbst verkn&uuml;pft werden, wie das Protein reduziert wird. Die Strukturen der als isoliert und reduzierten Staaten werden hinsichtlich der vermeintlichen Funktion der HCP-Proteine diskutiert.

Struktur der Hybrid Cluster Proteins (HCP) von Desulfovibrio Desulfuricans ATCC 27774, enthalten Molek&uuml;le im oxidierten und reduzierten Zustand.

La proteina del cluster ibrido (HCP) dai batteri solfato-riduzione Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 &egrave; stata isolata e cristallizzata anaerobicamente. Il campione della proteina utilizzato negli studi di cristallizzazione &egrave; stato diversi mesi di et&agrave;, avendo conservati a 193 K, e gli studi di struttura di cristallo iniziale erano in grado di risolvere completamente i dettagli del cluster ibrido nonostante l&#39;utilizzo di dati ad alta risoluzione a 1,25 A raccolti all&#39;ESRF, Grenoble, Francia. Completa delucidazione della struttura &egrave; diventato soltanto possibili con la completa conoscenza delle strutture di cristallo come isolato e completamente ridotto. L&#39;analisi precisa dei movimenti significativi nella posizione dell&#39;atomo di Fe legata alla moiety persulfide la proteina ossidata come isolata e l&#39;atomo di S di persulfide stesso come la proteina &egrave; ridotta. Le strutture degli Stati come isolato e ridotti sono discussi in termini della funzione putativa delle proteine HCP.

Struttura della proteina cluster ibrido (HCP) da Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 contenenti molecole negli stati ossidati e ridotti.

&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (HCP) &#x786B;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x83CC; 2a17-4 &#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;, 27774 &#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x5ACC;&#x6C17;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x6570;&#x30F6;&#x6708;&#x53E4;&#x3044;&#x3001;193 K &#x3067;&#x683C;&#x7D0D;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3053;&#x3068;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x7814;&#x7A76; ESRF &#x3067;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30CE;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EB;&#x3001;&#x30D5;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; 1.25 A &#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x3092;&#x53CE;&#x96C6;&#x3092;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5B8C;&#x5168;&#x89E3;&#x660E;&#x306E;&#x307F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x96E2;&#x3068;&#x5B8C;&#x5168;&#x9084;&#x5143;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x77E5;&#x8B58;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068; persulfide &#x81EA;&#x4F53;&#x306E; S &#x539F;&#x5B50; persulfide &#x9396;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF; Fe &#x539F;&#x5B50;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x96E2;&#x30FB;&#x9084;&#x5143;&#x72B6;&#x614B;&#x306E; HCP &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x89B3;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

2A17-4 &#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;, 27774 &#x304B;&#x3089;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (HCP) &#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x30FB;&#x9084;&#x5143;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (HCP) Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 &#xD669;&#xC0B0;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB418; &#xACE0; anaerobically &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294;. &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0D8;&#xD50C; &#xBA87; &#xAC1C;&#xC6D4; 193 K&#xC5D0; &#xC800;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC788;&#xC5C8;&#xACE0; &#xCD08;&#xAE30; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; ESRF, &#xD504;&#xB791;&#xC2A4; &#xADF8; &#xB974;&#xB178; &#xBE14;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C; 1.25 A &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xC138;&#xBD80; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870;&#xCCB4;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; elucidation&#xB9CC;&#xC73C;&#xB85C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC11D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC10;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xB85C; &#xC808;&#xC5F0; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xC790;&#xCCB4; persulfide&#xC758; S &#xC6D0;&#xC790; persulfide moiety &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; Fe &#xC6D0;&#xC790;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC744; &#xBA85;&#xD655;&#xD788; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC808;&#xC5F0; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC18C; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xAD6C;&#xC870; HCP &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1; &#xAE30;&#xB2A5; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (HCP)&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;.

La prote&iacute;na del racimo del h&iacute;brido (HCP) de las bacterias reductoras de sulfato Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 ha sido aislada y cristalizado anaer&oacute;bicamente. La muestra de prote&iacute;na utilizada en los estudios de cristalizaci&oacute;n ten&iacute;a varios meses, haber sido almacenados en 193 K, y estudios de estructura de cristal inicial fueron incapaces de resolver completamente los datos del cluster h&iacute;brido a pesar del uso de datos de alta resoluci&oacute;n a 1.25 A recogidos del ESRF, Grenoble, Francia. Completo elucidaci&oacute;n de la estructura s&oacute;lo es posible con el conocimiento completo de las estructuras cristalinas como aislados y totalmente reducida. El an&aacute;lisis clarifica los movimientos significativos en la posici&oacute;n del &aacute;tomo Fe ligado a la mol&eacute;cula de persulfide en la prote&iacute;na aislada como oxidada y el &aacute;tomo de S de la persulfide s&iacute; mismo como la prote&iacute;na se reduce. Se discuten las estructuras de los Estados como aislados y reducidos en cuanto a la supuesta funci&oacute;n de las prote&iacute;nas HCP.

Estructura de la prote&iacute;na del racimo del h&iacute;brido (HCP) de Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 que contienen mol&eacute;culas en los Estados oxidados y reducidos.

&#x7ED3;&#x51B7;&#x80F6;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4E8E;&#x5546;&#x4E1A;&#x6750;&#x6599;&#xFF0C;&#x53EF;&#x7528;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3002;&#x5176;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x5DF2;&#x5BFC;&#x81F4;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x80DE;&#x5916;&#x591A;&#x7CD6;&#x7ED3;&#x51B7;&#x80F6;&#xFF0C;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x4E0A;&#x7F16;&#x5199;&#x4F7F;&#x7528; Sphingomonas &#x4F0A; ATCC 31461 &#x7684;&#x9AD8;&#x6536;&#x76CA;&#x7387;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;1-&#x78F7;&#x9178;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6; uridylyltransferase &#x4ECB;&#x5BFC;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;-1-&#x78F7;&#x9178;&#x548C; UTP &#x53EF;&#x9006;&#x8F6C;&#x6362;&#x6210; UDP-&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x548C;&#x7126;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x7ED3;&#x51B7;&#x80F6;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x5EA7;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;-1-&#x78F7;&#x9178; uridylyltransferase S.&#x4F0A;&#x4ECE; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;S.&#x4F0A;&#x9176;&#x4E0E;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;-1-&#x78F7;&#x9178; thymidylyltransferase&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x7684;&#x5171;&#x4EAB;&#x5F3A;&#x5355;&#x4F53;&#x76F8;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x662F;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7EAA;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x9176;&#x7ED3;&#x6784;&#x800C;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;S.&#x4F0A; 1-&#x78F7;&#x9178;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6; uridylyltransferase &#x548C;&#x53EF;&#x7528; thymidylyltransferases &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x63CF;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x5E76;&#x663E;&#x793A;&#x663E;&#x8457;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x4E4B;&#x5904;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7FA4;&#x4F53;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4F4E;&#x5E8F;&#x5217;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Sphingomonas &#x4F0A; ATCC 31461 &#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x4E0E;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;-1-&#x78F7;&#x9178;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;-1-&#x78F7;&#x9178; uridylyltransferase &#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7EAA;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x72EC;&#x7279;&#x6838;&#x82F7;&#x4E8C;&#x78F7;&#x9178;&#x7CD6; pyrophosphorylase &#x6210;&#x5458;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;

Gellan gum is a widely used commercial material, available in many different forms. Its economic importance has led to studies into the biosynthesis of exopolysaccharide gellan gum, which is industrially prepared in high yields using Sphingomonas elodea ATCC 31461. Glucose-1-phosphate uridylyltransferase mediates the reversible conversion of glucose-1-phosphate and UTP into UDP-glucose and pyrophosphate, which is a key step in the biosynthetic pathway of gellan gums. Here we present the X-ray crystal structure of the glucose-1-phosphate uridylyltransferase from S. elodea. The S. elodea enzyme shares strong monomeric similarity with glucose-1-phosphate thymidylyltransferase, several structures of which are known, although the quaternary structures of the active enzymes are rather different. A detailed comparison between S. elodea glucose-1-phosphate uridylyltransferase and available thymidylyltransferases is described and shows remarkable structural similarities, despite the low sequence identities between the two divergent groups of proteins.

The complex of Sphingomonas elodea ATCC 31461 glucose-1-phosphate uridylyltransferase with glucose-1-phosphate reveals a novel quaternary structure, unique among nucleoside diphosphate-sugar pyrophosphorylase members.

Gomme Gellane est un mat&eacute;riau utilis&eacute; commercial, disponible sous de nombreuses formes diff&eacute;rentes. Son importance &eacute;conomique a conduit &agrave; des &eacute;tudes dans la biosynth&egrave;se des exopolysaccharides Gellane, qui est pr&eacute;par&eacute; industriellement des rendements &eacute;lev&eacute;s &agrave; l&#39;aide de Sphingomonas elodea ATCC 31461. Glucose-1-phosphate uridylyltransferase intervient dans la transformation r&eacute;versible de glucose-1-phosphate et l&#39;UTP en UDP-glucose et du pyrophosphate, qui est une &eacute;tape cl&eacute; dans la voie de biosynth&egrave;se des gommes Gellane. Nous pr&eacute;sentons la structure cristalline de l&#39;uridylyltransferase de glucose-1-phosphate d&#39;elodea S.. L&#39;enzyme d&#39;elodea S. partage forte similitude monom&egrave;re avec glucose-1-phosphate thymidylyltransferase, plusieurs structures dont sont connus, bien que les structures quaternaires des enzymes actives sont assez diff&eacute;rentes. Une comparaison d&eacute;taill&eacute;e entre S. elodea glucose-1-phosphate uridylyltransferase et thymidylyltransferases disponible est d&eacute;crit et montre des similitudes structurelles remarquables, malgr&eacute; l&#39;identit&eacute; de s&eacute;quence faible entre les deux groupes divergents des prot&eacute;ines.

Le complexe de Sphingomonas elodea ATCC 31461 uridylyltransferase de glucose-1-phosphate par le glucose-1-phosphate r&eacute;v&egrave;le une nouvelle structure quaternaire, unique parmi les membres de pyrophosphorylase nucl&eacute;oside diphosphate-sucre.

Gellan-Gummi ist eine weit verbreitete kommerzielle Material, in vielen verschiedenen Formen erh&auml;ltlich. Seine wirtschaftliche Bedeutung f&uuml;hrte zu Studien in die Biosynthese von Exopolysaccharide Gellan-Gummi, die hohe Renditen mit Sphingomonas Wasserpest ATCC 31461 industriell vorbereitet ist. Glucose-1-Phosphat-Uridylyltransferase vermittelt die reversible Umwandlung von Glucose-1-Phosphat und UTP in UDP-Glucose und Diphosphate, das ist ein wichtiger Schritt in die biosynthetischen Pathway Gellan-Zahnfleisch. Hier pr&auml;sentieren wir die R&ouml;ntgen-Kristallstruktur von der Glucose-1-Phosphat-Uridylyltransferase von S. Wasserpest. S. Wasserpest Enzym hat eine starke Monomer Sequenz&auml;hnlichkeit mit Glucose-1-Phosphat-Thymidylyltransferase, mehrere Strukturen, die bekannt sind, obwohl die quatern&auml;ren Strukturen der aktiven Enzyme eher unterschiedlich sind. Ein ausf&uuml;hrlichen Vergleich zwischen S. Wasserpest Glucose-1-Phosphat Uridylyltransferase und verf&uuml;gbaren Thymidylyltransferases wird beschrieben und zeigt bemerkenswerte strukturelle &Auml;hnlichkeiten, trotz der niedrigen Reihenfolge Identit&auml;ten zwischen den beiden unterschiedlichen Gruppen von Proteinen.

Der Komplex von Sphingomonas Wasserpest ATCC 31461 Glucose-1-Phosphat-Uridylyltransferase mit Glucose-1-Phosphat zeigt eine neuartige quart&auml;re Struktur, einzigartig unter den Nukleosid Diphosphat-Zucker Pyrophosphorylase Mitglieder.

Gomma di gellano &egrave; un materiale commerciale ampiamente utilizzato, disponibile in molte forme diverse. La sua importanza economica ha condotto agli studi in biosintesi della gomma di gellano esopolisaccaridi, che &egrave; preparato industrialmente in alti rendimenti utilizzando Sphingomonas elodea ATCC 31461. Glucosio-1-fosfato uridylyltransferase media la conversione reversibile del glucosio-1-fosfato e UTP in UDP-glucosio e pirofosfato, che &egrave; un passo fondamentale nel percorso biosintetico delle gengive gellano. Qui vi presentiamo la struttura di cristallo dei raggi x del glucosio-1-fosfato uridylyltransferase da elodea S.. L&#39;enzima elodea S. condivide la forte somiglianza monomerico con glucosio-1-fosfato thymidylyltransferase, diverse strutture di cui sono noti, anche se le strutture quaternarie degli enzimi attivi sono piuttosto differenti. Un confronto dettagliato tra S. elodea uridylyltransferase glucosio-1-fosfato e thymidylyltransferases disponibile &egrave; descritto e illustrato le notevoli somiglianze strutturali, nonostante l&#39;identit&agrave; di sequenza bassa tra i due gruppi divergenti delle proteine.

Il complesso di Sphingomonas elodea ATCC 31461 uridylyltransferase di glucosio-1-fosfato con glucosio-1-fosfato rivela una romanzo struttura quaternaria, unica tra i membri del nucleoside difosfato-zucchero pyrophosphorylase.

&#x30B8;&#x30A7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AC;&#x30E0;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5546;&#x6750;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x5F62;&#x3067;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7D4C;&#x6E08;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x5DE5;&#x696D;&#x7684;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9; &#x30A8;&#x30ED;&#x30C7;&#x30A2;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;, 31461 &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x9AD8;&#x53CE;&#x7387;&#x3067;&#x6E96;&#x5099;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7CD6;&#x30B8;&#x30A7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AC;&#x30E0;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9; 1-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30A6;&#x30EA;&#x30B8;&#x30EA;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9; 1-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3068; UTP &#x306E;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x8EE2;&#x63DB;&#x3092; UDP &#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;&#x30B8;&#x30A7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AC;&#x30E0;&#x6B6F;&#x830E;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9; 1-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30A6;&#x30EA;&#x30B8;&#x30EA;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; S. &#x30A8;&#x30ED;&#x30C7;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x306E; x &#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7D00;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C; S. &#x30A8;&#x30ED;&#x30C7;&#x30A2;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9; 1-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178; thymidylyltransferase &#x3068;&#x5F37;&#x3044;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x985E;&#x4F3C;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;S. &#x30A8;&#x30ED;&#x30C7;&#x30A2; &#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9; 1-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30A6;&#x30EA;&#x30B8;&#x30EA;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A; thymidylyltransferases &#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x9593;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; id &#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9; &#x30A8;&#x30ED;&#x30C7;&#x30A2;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;, 31461 &#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9; 1-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9; 1-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30A6;&#x30EA;&#x30B8;&#x30EA;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7D00;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x65B0;&#x898F;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30B7;&#x30C9;&#x4E8C;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x7802;&#x7CD6;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x30D4;&#x30ED;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x3002;

Gellan &#xAECC;&#xC740; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC0C1;&#xC5C5;&#xC6A9; &#xC790;&#xB8CC;, &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACBD;&#xC81C; &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xC2A4;&#xD540; elodea ATCC 31461 &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC728;&#xC5D0; &#xC900;&#xBE44; &#xB41C; &#xC0B0;&#xC5C5; &#xC0C1; exopolysaccharide gellan &#xAECC;&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC8FC;&#xB3C4;&#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;-1-&#xC778;&#xC0B0; uridylyltransferase &#xC911;&#xC7AC; UDP-&#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xBC0F; &#xC778;&#xC0B0;, &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;-1-&#xC778;&#xC0B0; &#xBC0F; UTP &#xAC00;&#xC5ED; &#xBCC0;&#xD658; gellan &#xC787;&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC788;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC; &#xBBF8; elodea&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;-1 uridylyltransferase&#xC758; x-&#xC120; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;. S. elodea &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xC131; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC81C; &#xC0AC;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xC624;&#xD788;&#xB824; &#xB2E4;&#xB978; &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;-1 thymidylyltransferase, &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC640; &#xAC15;&#xD55C; monomeric &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC744; &#xACF5;&#xC720; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. S. elodea &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;-1 uridylyltransferase &#xBC0F; thymidylyltransferases &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xBE44;&#xAD50; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; 2 &#xBD84;&#xAE30; &#xADF8;&#xB8F9; &#xAC04;&#xC5D0; &#xB0AE;&#xC740; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; id&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC8FC;&#xBAA9;&#xD560; &#xB9CC;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2A4;&#xD540; elodea ATCC 31461 &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;-1-&#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;&#xACFC; &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;-1 uridylyltransferase &#xB274; &#xD074;&#xB808; &#xC624; &#xC2DC;&#xB4DC; diphosphate &#xC124;&#xD0D5; pyrophosphorylase &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xAC04;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC18C;&#xC124; &#xC81C; &#xC0AC;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC1D;&#xD600;.

Gelano es un material ampliamente utilizado comercial, disponible en muchas formas diferentes. Su importancia econ&oacute;mica ha conducido a estudios en la bios&iacute;ntesis de exopolisac&aacute;rido gelano, que se prepara industrialmente en altos rendimientos utilizando Sphingomonas elodea ATCC 31461. Glucosa-1-fosfato Uridililtransferasa media la conversi&oacute;n reversible de glucosa-1-fosfato y UTP en UDP-glucosa y pirofosfato, que es un paso clave en la v&iacute;a biosint&eacute;tica de enc&iacute;as gellan. Aqu&iacute; presentamos la estructura cristalina de rayos x de la glucosa-1-fosfato Uridililtransferasa de elodea S.. La enzima de elodea S. comparte semejanza fuerte monom&eacute;rica con glucosa-1-fosfato thymidylyltransferase, varias estructuras que se conocen, aunque las estructuras cuaternarias de las enzimas activas son bastante diferentes. Una comparaci&oacute;n detallada entre S. elodea glucosa-1-fosfato Uridililtransferasa y thymidylyltransferases disponibles se describe y muestra semejanzas estructurales notables, a pesar de las identidades de secuencia baja entre los dos grupos divergentes de las prote&iacute;nas.

El complejo de Sphingomonas elodea ATCC 31461 glucosa-1-fosfato Uridililtransferasa con glucosa-1-fosfato revela una novedosa estructura cuaternaria, &uacute;nica entre los miembros del nucle&oacute;sido difosfato-az&uacute;car pirofosforilasa.

Di &#x7FA4;&#x96C6;&#x4E03;&#x94C1;&#x94C1;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x578B;&#x6784;&#x6210;&#x4E86;&#x6709;&#x5173;&#x91D1;&#x5C5E;&#x8F85;&#x52A9;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x8D44;&#x6E90;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x7684;&#x62A5;&#x9053;&#xFF0C;&#x4ECE; ambivalens&#xFF0C;&#x94C1;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D;&#x5E03;&#x6C0F;&#x9178; 2.0 A &#x5206;&#x8FA8;&#x7387; hemihedric &#x59CA;&#x59B9;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x663E;&#x793A;&#x79EF;&#x5206; 103 &#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#xFF0C;&#x7531;&#x7EC4;&#x6210;&#x4ED6; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6269;&#x5C55;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x6709;&#x5173;&#x672C;&#x673A;&#x5F62;&#x5F0F; / Asp Zn(2+) &#x7F51;&#x7AD9;&#x548C;&#x94C1;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D; (betaalphabeta)(2) &#x6838;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x7A9D;&#x85CF;&#x5B8C;&#x597D;&#x65E0;&#x635F;&#x7684;&#x7FA4;&#x96C6;&#x548C;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x3001; [3Fe 4S](1+/0) &#x548C; [4Fe 4S] &#xFF08;2 + 1 +) &#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x4ECE; Sulfolofus tokodai&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x6C27;&#x5316;&#x8F6C;&#x6362;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x83B7;&#x5F97;&#x4EE5;&#x524D;&#x53EF;&#x7528;&#x94C1;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x6784;&#x76F8;&#x6BD4; [3Fe-4S](1+/0) &#x4E2D;&#x5FC3;&#x548C;&#x5468;&#x56F4;&#x7684;&#x6E05;&#x6670;&#x5EA6;&#x5DEE;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x7EC4;&#x3002;

&#x5B8C;&#x6574;&#x91D1;&#x5C5E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790; [3Fe 4S](1+/0) &#x548C; [4Fe 4S] (2 + 1 +) &#x5728; Zn(2+)-&#x542B;&#x94C1;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

Detailed structural models of di-cluster seven-iron ferredoxins constitute a valuable resource for folding and stability studies relating the metal cofactors' role in protein stability. The here reported, hemihedric twinned crystal structure at 2.0 A resolution from Acidianus ambivalens ferredoxin, shows an integral 103 residues, physiologically relevant native form composed by a N-terminal extension comprising a His/Asp Zn(2+) site and the ferredoxin (betaalphabeta)(2) core, which harbours intact clusters I and II, a [3Fe-4S](1+/0) and a [4Fe-4S](2+/1+) centres. This is in contrast with the previously available ferredoxin structure from Sulfolofus tokodai, which was obtained from an artificial oxidative conversion with two [3Fe-4S](1+/0) centres and poor definition around cluster II.

Crystallographic analysis of the intact metal centres [3Fe-4S](1+/0) and [4Fe-4S](2+/1+) in a Zn(2+) -containing ferredoxin.

D&eacute;taill&eacute;e des mod&egrave;les structuraux de ferredoxins sept-fer di-cluster constituent une ressource pr&eacute;cieuse pour les &eacute;tudes de pliage et de stabilit&eacute; concernant le r&ocirc;le des cofacteurs m&eacute;talliques dans la stabilit&eacute; des prot&eacute;ines. L&#39;ici rapport&eacute;, structure cristalline hemihedric jumel&eacute;e &agrave; r&eacute;solution 2.0 de Acidianus ambivalens ferr&eacute;doxine, montre un r&eacute;sidus 103 int&eacute;grante, physiologiquement pertinent forme native, compos&eacute; par une extension de N-terminal comprenant un son / site Asp Zn(2+) et la ferr&eacute;doxine (betaalphabeta)(2) base, qui abrite des grappes intactes I et II, un [3Fe-4 s](1+/0) et un [4Fe-4 s] (2 + / 1 +) centres. Cela diff&egrave;re de la structure de la ferr&eacute;doxine pr&eacute;c&eacute;demment disponible de Sulfolofus tokodai, qui provenait d&#39;une conversion oxydative artificielle avec deux [3Fe-4 s](1+/0) centres et mauvaise d&eacute;finition du groupe II.

Analyse cristallographique des centres m&eacute;talliques intacts [3Fe-4 s](1+/0) et [4Fe-4 s] (2 + 1 +) dans un Zn(2+)-contenant la ferr&eacute;doxine.

Detaillierte Strukturmodelle der di-Cluster sieben-Eisen Ferredoxine bilden eine wertvolle Ressource f&uuml;r Falt- und Stabilit&auml;t Studien im Zusammenhang mit dem Metall Cofaktoren Rolle in Protein Stabilit&auml;t. Die hier berichteten, Hemihedric eine St&auml;dtepartnerschaft Kristallstruktur bei 2.0 A Aufl&ouml;sung von Acidianus Ambivalens Ferredoxin, zeigt ein integraler 103 R&uuml;ckst&auml;nde, physiologisch relevanten systemeigenen Form, bestehend aus einer N-Terminal-Erweiterung, bestehend aus einem seiner / Asp-Zn(2+) Site und das Ferredoxin (betaalphabeta)(2) Kern, der intakten Cluster I und II H&auml;fen, ein [3Fe-4S](1+/0) und ein [4Fe-4S] (2 + / 1 +) Zentren. Dies steht im Gegensatz zu den bisher verf&uuml;gbaren Ferredoxin-Struktur von Sulfolofus Tokodai, die aus einer k&uuml;nstlichen oxidativen Umwandlung mit zwei gewonnen wurde [3Fe-4S](1+/0) Zentren und schlechte Definition um cluster II.

Kristallographische Analyse der intakten Metall Zentren [3Fe-4S](1+/0) und [4Fe-4S] (2 / 1 +) in einem Zn(2+)-mit Ferredoxin.

Dettagliati modelli strutturali di ferredoxins di un cluster di sette-ferro costituiscono una risorsa preziosa per pieghevoli e stabilit&agrave; studi concernenti il ruolo dei cofattori metallici in stabilit&agrave; proteica. Qui riportato, struttura cristallina hemihedric gemellata alla risoluzione 2.0 da Acidianus ambivalens ferredossina, Mostra un&#39;integrale residui 103, fisiologicamente rilevante forma nativa composto da un&#39;estensione del N-terminale composto da un suo / Asp Zn(2+) sito e la ferredossina (betaalphabeta)(2) core, che porti cluster intatti I e II, un [3Fe-4S](1+/0) e un [4Fe-4S] (2 + 1++) centri. Questo &egrave; in contrasto con la struttura ferredossina precedentemente disponibili da Sulfolofus tokodai, che &egrave; stato ottenuto da una conversione ossidativa artificiale con due [3Fe-4S](1+/0) centri e scarsa definizione intorno a grappolo II.

Analisi cristallografica dei centri metalli intatti [3Fe-4S](1+/0) e [4Fe-4S] (2 + 1++) in un Zn(2+)-contenente ferredossina.

&#x30C7;&#x30A3; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; 7 &#x9244;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306E;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Hemihedric &#x53CC;&#x6676;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x7269; ambivalens &#x30D5;&#x30A7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x304B;&#x3089; 2.0 &Aring; &#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5831;&#x544A;&#x3001;&#x7A4D;&#x5206; 103 &#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3001;&#x4F5C;&#x66F2;&#x306F;&#x5F7C;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B; N &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB;&#x62E1;&#x5F35;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x7406;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;/Asp Zn(2+) &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x3001;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; (I &#x304A;&#x3088;&#x3073; II &#x306E;&#x305B;&#x3044;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; betaalphabeta)(2) &#x30B3;&#x30A2;&#x306F; [3Fe 4S](1+/0) &#x3068;&#x306F; [4 &#x9244; 4S] (2 c++/cli 1++) &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x5909;&#x63DB; 2 &#x3064;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F; Sulfolofus &#x306E;&#x6771;&#x5149;&#x53F0;&#x304B;&#x3089;&#x4EE5;&#x524D;&#x5229;&#x7528;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x3067;&#x3059; [3Fe 4S](1+/0) &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x3084;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x4EBA;&#x3005; &#x306E;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x306E;&#x5468;&#x308A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; II&#x3002;

&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790; [3Fe 4S](1+/0) &#x3068; [4 &#x9244; 4S] (2 +/1++&#xFF09; &#x306F; Zn(2+) &#x3067;-&#x30D5;&#x30A7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB514; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; 7 &#xC544;&#xC774;&#xC5B8; ferredoxins&#xC758; &#xC0C1;&#xC138;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xB378; &#xAD6C;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE08;&#xC18D; &#xACF5;&#xB3D9; &#xC778;&#xC790; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xD3F4;&#xB529; &#xBC0F; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xC790;&#xC6D0;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; Acidianus ambivalens ferredoxin&#xC5D0;&#xC11C; 2.0 A &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; hemihedric &#xCD5C;&#xC120;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD544;&#xC218; 103 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;, &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; N-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xC21C;&#xC218; &#xAD00;&#xB828; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC591;&#xC2DD; / Asp Zn(2+) &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640;&#xB294; ferredoxin (I &#xBC0F; II &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xD56D;&#xB9CC;, betaalphabeta)(2) &#xCF54;&#xC5B4;&#xB294; [3Fe 4S](1+/0)&#xC640; [4Fe-4S] (2 + 1 +) &#xC13C;&#xD130;. &#xB450; &#xC778;&#xACF5; &#xC0B0;&#xD654; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC838;&#xC628; Sulfolofus tokodai&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; ferredoxin &#xAD6C;&#xC870;&#xC640;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC774;&#xAC74; [3Fe 4S](1+/0) II &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xC13C;&#xD130; &#xBC0F; &#xC8FC;&#xC704; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xC815;&#xC758;.

&#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xAE08;&#xC18D; &#xC13C;&#xD130;&#xC758; crystallographic &#xBD84;&#xC11D; [3Fe 4S](1+/0) &#xBC0F; [4Fe-4S] (2 + 1 +)&#xB294; zn(2+)&#xC5D0;&#xC11C;-ferredoxin &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;.

Modelos estructurales detallados de ferredoxinas de hierro siete di-racimo constituyen un recurso valioso para plegable y estabilidad estudios relacionados con el papel de los cofactores met&aacute;licos en la estabilidad de la prote&iacute;na. Aqu&iacute; registrados, estructura cristalina de hemihedric hermanado en 2.0 una resoluci&oacute;n de Acidianus ambivalens ferredoxina, muestra una integral residuos 103, fisiol&oacute;gicamente relevante forma nativa compuesta por una extensi&oacute;n de N-terminal, que comprende su / Asp Zn(2+) sitio y ferredoxin (betaalphabeta)(2) n&uacute;cleo, que alberga intactos grupos I y II, un [3Fe-4S](1+/0) y un [4Fe-4S] (2 + 1 +) centros. Esto es en contraste con la estructura de la ferredoxina previamente disponibles de Sulfolofus tokodai, que fue obtenida de una conversi&oacute;n oxidativa artificial con dos [3Fe-4S](1+/0) centros y pobre definici&oacute;n alrededor de cluster II.

An&aacute;lisis cristalogr&aacute;ficos de los centros de metales intactos [3Fe-4S](1+/0) y [4Fe-4S] (2 + 1 +) en un Zn(2+)-que contengan ferredoxina.

&#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x4ECE;&#x8131;&#x786B;&#x5F27;&#x83CC;&#x5BFB;&#x5E38;&#x578B;&#x5E94;&#x53D8;&#x9694;&#x79BB; Hildenborough &#x5E76;&#x5C06;&#x5176;&#x5177;&#x4F53;&#x5316;&#x538C;&#x6C27;&#x786B;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;HCP&#xFF09;&#x3002;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x4F7F;&#x7528;&#x591A;&#x6CE2;&#x957F;&#x53CD;&#x5E38;&#x884D;&#x5C04;&#x6570;&#x636E;&#x6536;&#x96C6;&#x7684; Fe K &#x5438;&#x6536;&#x8FB9;&#x7F18;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684; P2(1)2(1)2(1) &#x6676;&#x4F53;&#x7A97;&#x4F53;&#x89E3;&#x51B3;&#x4E86;&#x9636;&#x6BB5;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x603B;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x57FA;&#x672C;&#x4E0A;&#x662F;&#x4EE5;&#x524D;&#x83B7;&#x5F97;&#x76F8;&#x540C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x663E;&#x793A;&#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#x5177;&#x6709;&#x7279;&#x5B9A;&#x5DEE;&#x5F02;&#x65F6;&#x9694;&#x79BB;&#x548C;&#x5177;&#x4F53;&#x5316;&#x4E3A;&#x65E0;&#x6C27;&#x548C;&#x8FD9;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x4E0E;&#x6C27;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x7F14;&#x7EA6;&#x56FD;&#x548C;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x78B3; dehydrogenases (&#x8C46;&#x835A;) &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x663E;&#x793A;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5177;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x7B49;&#x6548; HCP &#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x4F4D;&#x7F6E; dehydrogenases &#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7FA4;&#x96C6;&#x3002;&#x8FD9;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4E86;&#x89E3;&#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E3A;&#x5404;&#x7C7B; 3&#x3001; &#x7F3A;&#x4E4F; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x4E8C;&#x805A;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

&#x5728;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x5BB6;&#x65CF;&#xFF1A; &#x4ECE;&#x8131;&#x786B;&#x5F27;&#x83CC;&#x5BFB;&#x5E38;&#x578B; 1.35 A &#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x538C;&#x6C27;&#x51C0;&#x5316;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x7FA4;&#x96C6;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

The hybrid cluster protein (HCP) from the sulfate-reducing bacterium Desulfovibrio vulgaris strain Hildenborough has been isolated and crystallized anaerobically. The phase problem was solved for a P2(1)2(1)2(1) crystal form using multiple-wavelength anomalous diffraction data collected in the vicinity of the Fe K absorption edge. Although the overall protein structure is essentially the same as that previously obtained, it shows that the nature of the hybrid cluster has particular differences when isolated and crystallized in the absence of oxygen and this provides insight into the structural features associated with changes in the oxidation state. A comparison between HCPs and carbon monoxide dehydrogenases (CoDs) shows that they possess a similar fold and that the dehydrogenases have a related cluster at the equivalent HCP hybrid cluster position. This helps to understand the nature of the hybrid cluster and to predict a dimeric structure for class 3 HCPs, which lack the N-terminal region.

Structural and functional relationships in the hybrid cluster protein family: structure of the anaerobically purified hybrid cluster protein from Desulfovibrio vulgaris at 1.35 A resolution.

L&#39;hybride cluster prot&eacute;ine (HCP) de la bact&eacute;rie sulfato-r&eacute;ductrices Desulfovibrio vulgaris strain Hildenborough a &eacute;t&eacute; isol&eacute; et cristallis&eacute; en ana&eacute;robiose. Le probl&egrave;me de phase a &eacute;t&eacute; r&eacute;solu pour une forme cristalline P2(1)2(1)2(1) utilisant des donn&eacute;es de diffraction anormale de longueurs d&#39;onde multiples pr&eacute;lev&eacute;es &agrave; proximit&eacute; de la limite d&#39;absorption K Fe. Bien que la structure globale de la prot&eacute;ine est essentiellement la m&ecirc;me que celle obtenue pr&eacute;c&eacute;demment, il montre que la nature du cluster hybride a des diff&eacute;rences particuli&egrave;res lorsque isol&eacute;s et cristallis&eacute; en l&#39;absence d&#39;oxyg&egrave;ne, et cela donne un aper&ccedil;u des caract&eacute;ristiques structurelles associ&eacute;es aux changements dans l&#39;&eacute;tat d&#39;oxydation. Une comparaison entre les professionnels de la sant&eacute; et le monoxyde de carbone d&eacute;shydrog&eacute;nases (morues) montre qu&#39;ils poss&egrave;dent un pli similaire et que les d&eacute;shydrog&eacute;nases disposent d&#39;un cluster li&eacute; &agrave; la position de cluster hybride HCP &eacute;quivalente. Cela aide &agrave; comprendre la nature du cluster hybride et &agrave; pr&eacute;voir une structure dim&egrave;re pour classe 3 professionnels de la sant&eacute;, qui n&#39;ont pas la r&eacute;gion N-terminale.

Les relations structurales et fonctionnelles chez l&#39;hybride de cluster famille de prot&eacute;ines : structure de la prot&eacute;ine de cluster hybride purifi&eacute; par voie ana&eacute;robie de Desulfovibrio vulgaris &agrave; 1,35 r&eacute;solution.

Die Hybrid cluster-Protein (HCP) von die Sulfat-reduzierenden Bakterien Desulfovibrio Vulgaris Stamm Newhaven wurde isoliert und kristallisiert anaerob. Das Phase-Problem wurde gel&ouml;st, f&uuml;r ein P2(1)2(1)2(1)-Kristall-Form mit mehreren Wellenl&auml;ngen anomale Beugung Daten zusammengestellt, in der N&auml;he der Fe K-Resorption-Kante. Obwohl die gesamte Proteinstruktur im Wesentlichen identisch mit dem zuvor bezogen ist, zeigt es, dass die Natur des Clusters Hybrid hat bestimmte Unterschiede beim isoliert und in der Abwesenheit von Sauerstoff kristallisiert und dies Einblick in die strukturellen Merkmale der Oxidationszustand verbundenen bietet. Ein Vergleich zwischen HCPs und Kohlenmonoxid-Dehydrogenases (Kabeljauen) zeigt, dass sie eine &auml;hnliche Falte besitzen und die Dehydrogenases einen &auml;hnliche Cluster an der entsprechenden HCP Hybrid Cluster Position haben. Dies hilft, die Natur des Hybrid-Clusters zu verstehen und vorherzusagen, eine Dimere Struktur f&uuml;r Klasse 3 HCPs, denen die N-terminalen Region fehlt.

Strukturelle und funktionelle Beziehungen im Hybrid cluster Proteinfamilie: Struktur des Proteins anaerob gereinigte Hybrid Cluster von Desulfovibrio Vulgaris bei 1,35 A Aufl&ouml;sung.

L&#39;ibrido di cluster proteina (HCP) dal batterio solfato-riduzione Desulfovibrio vulgaris strain Hildenborough &egrave; stato isolato e cristallizzato anaerobicamente. Per una forma di cristallo P2(1)2(1)2(1) utilizzando multi-lunghezza d&#39;onda anomala diffrazione dati raccolti in prossimit&agrave; del bordo di assorbimento del Fe K &egrave; stato risolto il problema di fase. Anche se la struttura complessiva della proteina &egrave; essenzialmente lo stesso di quello ottenuto in precedenza, si dimostra che la natura del cluster ibrido ha particolari differenze quando isolato e cristallizzato in assenza di ossigeno e ci&ograve; fornisce la comprensione in caratteristiche strutturali associato a cambiamenti dello stato di ossidazione. Un confronto tra HCPs e monossido di carbonio dehydrogenases (CoDs) dimostra che essi possiedono una piega simile e che la dehydrogenases hanno un cluster correlato nella posizione del cluster equivalente HCP ibrido. Questo aiuta a capire la natura del cluster ibrido e prevedere una struttura dimerica per classe 3 HCPs, che manca la regione N-terminale.

Relazioni strutturali e funzionali nell&#39;ibrido del cluster famiglia della proteina: struttura della proteina cluster ibrido anaerobicamente purificato da Desulfovibrio vulgaris a 1,35 risoluzione.

&#x786B;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x83CC; Hildenborough &#x304C;&#x5206;&#x96E2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5ACC;&#x6C17;&#x7D50;&#x6676; Desulfovibrio &#x5C0B;&#x5E38;&#x6027;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (HCP)&#x3002;Fe K &#x5438;&#x53CE;&#x7AEF;&#x4ED8;&#x8FD1;&#x306E;&#x53CE;&#x96C6;&#x591A;&#x6CE2;&#x9577;&#x7570;&#x5E38;&#x56DE;&#x6298;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; P2(1)2(1)2(1) &#x7D50;&#x6676;&#x5F62;&#x306E;&#x4F4D;&#x76F8;&#x554F;&#x984C;&#x304C;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x81EA;&#x7136;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;&#x9178;&#x7D20;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x306B;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91E3;&#x308A;&#x5408;&#x3044;&#x3068;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x70AD;&#x7D20;&#x8131;&#x6C34;&#x7D20;&#x9175;&#x7D20; (Cod) &#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x4F3C;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6298;&#x308A;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x3001;&#x8131;&#x6C34;&#x7D20;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7B49;&#x4FA1; HCP &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3057;&#x3001;N &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; 3 &#x91E3;&#x308A;&#x5408;&#x3044;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3061;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;: &#x5ACC;&#x6C17;&#x7CBE;&#x88FD;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089; Desulfovibrio &#x5C0B;&#x5E38;&#x6027; 1.35 &Aring; &#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3002;

&#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; Desulfovibrio vulgaris &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; Hildenborough&#xB97C; &#xC808;&#xC5F0; &#xD558; &#xACE0; anaerobically &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xB41C; &#xD669;&#xC0B0;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (HCP) &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;. Fe K &#xD761;&#xC218; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC; &#xBD80;&#xADFC; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C; &#xB2E4;&#xC911; &#xD30C;&#xC7A5; &#xBCC0;&#xCE59; &#xD68C;&#xC808; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; P2(1)2(1)2(1) &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xD3FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC704;&#xC0C1; &#xBB38;&#xC81C;&#xAC00; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC5BB;&#xC740; &#xAC83;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC77C;, &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC740; &#xD2B9;&#xC815; &#xCC28;&#xC774; &#xB54C; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB418; &#xACE0; &#xC0B0;&#xC18C;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294; &#xBC0F; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC5F0;&#xAD00; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hcps&#xC640; &#xC77C;&#xC0B0;&#xD654; &#xD0C4;&#xC18C; dehydrogenases (&#xB300;&#xAD6C;)&#xB97C; &#xBE44;&#xAD50; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xBC30;&#xB97C; &#xC18C;&#xC720; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; dehydrogenases &#xB4F1;&#xAC00; HCP &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xC704;&#xCE58; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; N-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBD80;&#xC871; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; 3 HCPs dimeric &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC608;&#xCE21;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xAD00;&#xACC4; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC00;&#xC871;: Desulfovibrio vulgaris 1.35 A &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; anaerobically &#xC815;&#xD654; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;.

El h&iacute;brido se agrupan prote&iacute;na (HCP) las bacterias reductoras de sulfato Desulfovibrio vulgaris cepa Hildenborough ha sido aislado y cristalizado anaer&oacute;bicamente. Se resolvi&oacute; el problema de la fase para una forma de cristal P2(1)2(1)2(1) usando los datos de difracci&oacute;n an&oacute;mala de m&uacute;ltiples longitudes de onda recogidos en las proximidades del borde de la absorci&oacute;n de Fe K. Aunque la estructura de la prote&iacute;na total es esencialmente igual a la obtenida anteriormente, demuestra que la naturaleza del cluster h&iacute;brido tiene diferencias particulares cuando aislado y cristaliz&oacute; en ausencia de ox&iacute;geno y esto proporciona una idea de las caracter&iacute;sticas estructurales asociadas con cambios en el estado de oxidaci&oacute;n. Una comparaci&oacute;n entre EP y mon&oacute;xido de carbono deshidrogenasa (bacalaos) demuestra que poseen un pliegue similar y que las Deshidrogenasas tienen un cl&uacute;ster relacionado en la posici&oacute;n equivalente de cl&uacute;ster de h&iacute;brido HCP. Esto ayuda a entender la naturaleza del cluster h&iacute;brido y predecir una estructura dim&eacute;rica de clase 3 EP, que carece de la regi&oacute;n N-terminal.

Familia de prote&iacute;nas agrupan las relaciones estructurales y funcionales en el h&iacute;brido: estructura de la prote&iacute;na de cl&uacute;ster anaer&oacute;bicamente purificada h&iacute;brido de Desulfovibrio vulgaris en 1.35 una resoluci&oacute;n.

&#x786E;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x624B;&#x6BB5;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E86;&#x6CB9;&#x8102;&#x9AD8;&#x80FD;&#x7684;&#x7ED3;&#x6676;&#x3002;&#x6709;&#x4EBA;&#x5EFA;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x6240;&#x8C13;&#x5728;&#x7EC6;&#x89C2;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6700;&#x521D;&#x5B9E;&#x73B0;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5C06;&#x4E0D;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x5C0F;&#x86CB;&#x767D;&#x6307;&#x6807;&#x5177;&#x6709; &lt; / = 4 &#x8DE8;&#x819C;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8DE8;&#x819C;&#x5341;&#x4E94;&#x80BD;&#x3001; &#x7EBF;&#x6027;&#x79CD;&#x6297;&#x83CC;&#x7D20;&#xFF0C;&#x751F;&#x4EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x7EA7;&#x6676;&#x4F53;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E2D;&#x95F4;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F7F;&#x5C0F;&#x86CB;&#x767D; crystallogenesis &#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E2D;&#x89C2;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E94;&#x88AB;&#x89C6;&#x4E3A;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6216;&#x7F3A;&#x819C;&#x80BD;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7ED3;&#x6784;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x53EF;&#x884C;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x8BB8;&#x591A;&#x9884;&#x8BA1;&#x8981;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x3002;

&#x5728;&#x6CB9;&#x8102;&#x9AD8;&#x80FD;&#x7684;&#x7ED3;&#x6676;&#x819C;&#x80BD;&#x3002;

Structure determination of membrane proteins by crystallographic means has been facilitated by crystallization in lipidic mesophases. It has been suggested, however, that this so-called in meso method, as originally implemented, would not apply to small protein targets having </=4 transmembrane crossings. In our study, the hypothesis that the inherent flexibility of the mesophase would enable crystallogenesis of small proteins was tested using a transmembrane pentadecapeptide, linear gramicidin, which produced structure-grade crystals. This result suggests that the in meso method should be considered as a viable means for high-resolution structure determination of integral membrane peptides, many of which are predicted to be coded for in the human genome.

Crystallizing transmembrane peptides in lipidic mesophases.

D&eacute;termination de la structure des prot&eacute;ines membranaires par cristallographique moyen a &eacute;t&eacute; facilit&eacute;e par la cristallisation dans les m&eacute;sophases lipidiques. Il a &eacute;t&eacute; sugg&eacute;r&eacute;, cependant, que ce soi-disant m&eacute;thode m&eacute;so, comme initialement mis en place, ne s&#39;appliquerait pas aux petites prot&eacute;ines cibles ayant &lt; / = 4 passages transmembranaires. Dans notre &eacute;tude, l&#39;hypoth&egrave;se que la souplesse inh&eacute;rente de la m&eacute;sophase permettrait aux crystallogenesis de petites prot&eacute;ines a &eacute;t&eacute; test&eacute; en utilisant un pentadecapeptide transmembranaire, la gramicidine lin&eacute;aire, ce qui produit des cristaux de qualit&eacute; structure. Ce r&eacute;sultat sugg&egrave;re que la m&eacute;so en m&eacute;thode devrait &ecirc;tre consid&eacute;r&eacute;e comme un moyen viable pour la d&eacute;termination de la structure &agrave; haute r&eacute;solution des peptides membranaires intrins&egrave;ques, dont beaucoup sont pr&eacute;vus pour &ecirc;tre cod&eacute; pour le g&eacute;nome humain.

Cristallisant les peptides transmembranaires dans les m&eacute;sophases lipidiques.

Bestimmung der Struktur von Membranproteinen mit kristallographische Mitteln wurde durch Kristallisation in lipidischen Mesophasen erleichtert. Es ist vorgeschlagen worden, jedoch, dass diesem sogenannten in Meso-Methode, wie urspr&uuml;nglich implementiert, w&uuml;rde nicht auf kleine Protein-Ziele, die mit &lt; / = 4 transmembrane-Kreuzungen. In unserer Studie wurde die Hypothese, dass die inh&auml;rente Flexibilit&auml;t der Mesophase Crystallogenesis kleine Proteine erm&ouml;glichen w&uuml;rde getestet mit einer Transmembran-Pentadecapeptide, lineare Gramicidin, die Struktur-Grade Kristallen hergestellt. Dieses Ergebnis legt nahe, dass die in Meso Methode sollten als gangbare Mittel f&uuml;r hochaufl&ouml;sende Struktur Bestimmung von integralen Membrane Peptide, voraussichtlich viele davon sind f&uuml;r das menschliche Genom kodiert werden.

Kristallisieren Transmembran Peptide in lipidischen Mesophasen.

Determinazione della struttura delle proteine di membrana con mezzi cristallografici &egrave; stata facilitata dalla cristallizzazione in mesophases lipidico. &Egrave; stato suggerito, tuttavia, che questo cosiddetto metodo meso, come inizialmente attuato, non si applicherebbe ai target di piccola proteina avendo &lt; = 4 incroci transmembrane. Nel nostro studio, l&#39;ipotesi che la flessibilit&agrave; intrinseca del mesophase permetterebbe crystallogenesis di piccole proteine &egrave; stato testato con un pentadecapeptide del transmembrane, Gramicidina lineare, che produceva cristalli struttura-grade. Questo risultato suggerisce che la meso in metodo dovrebbe essere considerato come uno strumento efficace per la determinazione della struttura ad alta risoluzione dei peptidi integrali di membrana, molti dei quali sono previsti per essere codificata nel genoma umano.

Cristallizzazione del transmembrane peptidi in mesophases lipidico.

&#x7D50;&#x6676;&#x5B66;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306F;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E2D;&#x9593;&#x76F8;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4FC3;&#x9032;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x3044;&#x308F;&#x3086;&#x308B;&#x30E1;&#x30BD; &#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3067;&#x3001;&#x3082;&#x3068;&#x3082;&#x3068;&#x306E;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x306F;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093; &lt;/4 &#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9; =&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3001;&#x30E1;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; crystallogenesis &#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30DA;&#x30F3;&#x30BF;&#x30C7;&#x30AB;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x7528;&#x7D50;&#x6676;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7DDA;&#x5F62;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B7;&#x30B8;&#x30F3;&#x691C;&#x5B9A;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x63D0;&#x6848;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x3068;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x7A4D;&#x5206;&#x819C;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x69CB;&#x9020;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x624B;&#x6BB5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8003;&#x616E;&#x3057;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x306A;&#x3089;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x578B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E2D;&#x9593;&#x76F8;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x3002;

Crystallographic &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815; &#xACB0;&#xC815; &#xD654; lipidic mesophases&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;,, &#xADF8;&#xC774; &#xC774;&#xB978;&#xBC14; &#xBBF8;&#xC2DC;&#xC801; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6D0;&#xB798; &#xAD6C;&#xD604;, &#xB370; &#xC791;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &lt; = 4 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xD6A1;&#xB2E8; /. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC124; &#xB41C; mesophase&#xC758; &#xACE0;&#xC720;&#xC758; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131; &#xC791;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; crystallogenesis &#xC218; &#xC788;&#xAC8C; &#xB420; &#xAC83;&#xC744; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; pentadecapeptide, &#xC0DD;&#xC0B0; &#xAD6C;&#xC870; &#xB4F1;&#xAE09; &#xACB0;&#xC815; &#xC120;&#xD615; gramicidin&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xC2DC;&#xC801; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC815;&#xC218; &#xB9C9; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xB825;&#xD55C; &#xC218;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB418;&#xC5B4;&#xC57C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC778;&#xAC04; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCF54;&#xB529; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB41C;&#xB2E4;.

Crystallizing &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; lipidic mesophases&#xC5D0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Determinaci&oacute;n de la estructura de las prote&iacute;nas de la membrana por medios cristalogr&aacute;ficos ha sido facilitado por cristalizaci&oacute;n en mesofases lip&iacute;dica. Se ha sugerido, sin embargo, que este supuesto en el m&eacute;todo de meso, como implementado originalmente, no se aplicar&iacute;a a los objetivos de la peque&ntilde;a prote&iacute;na tener &lt; / = 4 cruces de transmembrana. En nuestro estudio, se comprob&oacute; la hip&oacute;tesis de que la flexibilidad inherente de la mesofase permitir&iacute;a crystallogenesis de prote&iacute;nas peque&ntilde;as usando un pentadecapeptide transmembrana, gramicidina lineal, que producen cristales de estructura-grado. Este resultado sugiere que la meso en m&eacute;todo puede considerarse un medio viable para la determinaci&oacute;n de la estructura de alta resoluci&oacute;n de p&eacute;ptidos de integral de la membrana, muchas de las cuales se predicen a codificarse para en el genoma humano.

P&eacute;ptidos transmembrana cristalizaci&oacute;n en mesofases lip&iacute;dica.

G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53; (GPCRs) &#x662F;&#x771F;&#x6838;&#x79EF;&#x5206;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x542F;&#x52A8;&#x54CD;&#x5E94;&#x5316;&#x5B66;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0D;&#x540C;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x7684;&#x8702;&#x7A9D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5728; GPCRs &#x7ED3;&#x6784;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6700;&#x65B0;&#x8FDB;&#x5C55;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x53D8;&#x6784;&#x8C03;&#x8282;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x7840;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x675F;&#x7F1A;&#x6001;&#x7ED3;&#x6784;&#x77E5;&#x8BC6;&#x662F;&#x57FA;&#x672C;&#x7834;&#x8BD1;&#x53D7;&#x4F53;&#x6D3B;&#x5316;&#x673A;&#x7406;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x6307;&#x5BFC;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x53D7;&#x5230;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x7ED1;&#x5B9A; GPCRs &#x7684;&#x7ED3;&#x6676;&#x8C26;&#x865A;&#x7684;&#x4EB2;&#x7F18;&#x5173;&#x7CFB;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x5173;&#x95ED;&#x7387;&#x53EF;&#x7528;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684; &beta;(2) &#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001; &#xFF08;&beta;(2)AR) &#x4F5C;&#x4E3A;&#x6307;&#x5357;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x62F4;&#x5230;&#x5BF9;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684; &beta; (2) AR &#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x3002;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E; &beta; (2) AR &#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x590D;&#x6742;&#x5F62;&#x6210;&#x6709;&#x6548;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x80FD;&#x591F;&#x6FC0;&#x6D3B; heterotrimeric G &#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6676;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x7ED1;&#x5B9A; &beta; (2) AR T4L &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x8102;&#x53CC;&#x5C42;&#x8102;&#x7C7B;&#x4E2D;&#x95F4;&#x76F8;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x4E2D;&#x548C;&#x5728; 3.5 &Aring; &#x51B3;&#x8BAE;&#x786E;&#x5B9A;&#x5176;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x6297;&#x4F53;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7ED3;&#x6784; &#xFF08;&#x914D;&#x5957;&#x6587;&#x4EF6;&#xFF09; &#x663E;&#x793A;&#x5982;&#x4F55;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x9700;&#x7A33;&#x5B9A;&#x79EF;&#x6781;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x90FD;&#x540C;&#x610F;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x5C3A;&#x5EA6; &#xFF08;&#x8FBE; 30 &mu; s&#xFF09; &#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x62DF;&#x663E;&#x793A;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x79EF;&#x6781;&#x6784;&#x8C61;&#x81EA;&#x53D1;&#x5730;&#x653E;&#x677E;&#x5BF9; G &#x86CB;&#x767D;&#x6216;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6297;&#x4F53;&#x6CA1;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x3002;

&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006; agonist-&beta;(2) &#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x590D;&#x6742;&#x3002;

G-protein-coupled receptors (GPCRs) are eukaryotic integral membrane proteins that modulate biological function by initiating cellular signalling in response to chemically diverse agonists. Despite recent progress in the structural biology of GPCRs, the molecular basis for agonist binding and allosteric modulation of these proteins is poorly understood. Structural knowledge of agonist-bound states is essential for deciphering the mechanism of receptor activation, and for structure-guided design and optimization of ligands. However, the crystallization of agonist-bound GPCRs has been hampered by modest affinities and rapid off-rates of available agonists. Using the inactive structure of the human Î²(2) adrenergic receptor (Î²(2)AR) as a guide, we designed a Î²(2)AR agonist that can be covalently tethered to a specific site on the receptor through a disulphide bond. The covalent Î²(2)AR-agonist complex forms efficiently, and is capable of activating a heterotrimeric G protein. We crystallized a covalent agonist-bound Î²(2)AR-T4L fusion protein in lipid bilayers through the use of the lipidic mesophase method, and determined its structure at 3.5â€‰Ã… resolution. A comparison to the inactive structure and an antibody-stabilized active structure (companion paper) shows how binding events at both the extracellular and intracellular surfaces are required to stabilize an active conformation of the receptor. The structures are in agreement with long-timescale (up to 30â€‰Î¼s) molecular dynamics simulations showing that an agonist-bound active conformation spontaneously relaxes to an inactive-like conformation in the absence of a G protein or stabilizing antibody.

Structure and function of an irreversible agonist-Î²(2) adrenoceptor complex.

Les r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines G (RCPG) sont des prot&eacute;ines membranaires intrins&egrave;ques eucaryotes qui modulent la fonction biologique en initiant une signalisation cellulaire en r&eacute;ponse aux agonistes chimiquement diff&eacute;rents. Malgr&eacute; les r&eacute;cents progr&egrave;s de la biologie structurale des RCPG, la base mol&eacute;culaire de l&#39;agoniste liant et modulation allost&eacute;rique de ces prot&eacute;ines est mal comprise. Connaissance structurale de l&#39;agoniste li&eacute; aux Etats est indispensable pour d&eacute;crypter le m&eacute;canisme d&#39;activation des r&eacute;cepteurs et guid&eacute;e par structure de conception et d&#39;optimisation des ligands. Toutefois, la cristallisation des RCPG agoniste li&eacute; a &eacute;t&eacute; entrav&eacute;e par affinit&eacute;s modestes et hors-taux rapide d&#39;agonistes disponibles. En utilisant la structure inactive du r&eacute;cepteur adr&eacute;nergique basant humaine (&beta;(2)AR) comme guide, nous avons con&ccedil;u un agoniste AR &beta; (2) qui peut &ecirc;tre attach&eacute; de fa&ccedil;on covalente &agrave; un site sp&eacute;cifique sur le r&eacute;cepteur &agrave; travers une liaison disulfure. Le complexe d&#39;AR-agoniste &beta; covalents (2) forme efficacement et est capable d&#39;activer une prot&eacute;ine G h&eacute;t&eacute;rotrim&eacute;riques. Nous a cristallis&eacute; une prot&eacute;ine de fusion d&#39;AR-T4L covalente liaison agoniste &beta; (2) dans les bicouches lipidiques gr&acirc;ce &agrave; l&#39;utilisation de la m&eacute;thode de la m&eacute;sophase lipidiques et d&eacute;termin&eacute; sa structure &agrave; 3.5 &Aring; r&eacute;solution. Une comparaison avec la structure inactif et une structure active anticorps stabilis&eacute; (document d&#39;accompagnement) montre comment les &eacute;v&eacute;nements de liaison &agrave; des surfaces extracellulaires et intracellulaires sont n&eacute;cessaires pour stabiliser une conformation active du r&eacute;cepteur. Les structures sont en accord avec les simulations de dynamique mol&eacute;culaire long-&eacute;chelle de temps (jusqu&#39;&agrave; 30 &mu;s) montrant qu&#39;une conformation active li&eacute; aux agonistes d&eacute;tend spontan&eacute;ment &agrave; une conformation comme inactive en l&#39;absence d&#39;un anticorps G de prot&eacute;ines ou de stabilisation.

Structure et fonction de l&#39;adr&eacute;nocepteur irr&eacute;versible agonist-&beta;(2) complexe.

G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) sind eukaryotische integrale Membranproteine, die biologische Funktion modulieren durch die Einleitung der zellul&auml;ren Signalisierung als Reaktion auf chemisch unterschiedliche Agonisten. Trotz der j&uuml;ngsten Fortschritte in der Strukturbiologie von GPCR wird die molekulare Grundlage f&uuml;r Agonisten binden und allosterische Modulation dieser Proteine schlecht verstanden. Strukturelle wissen Agonist gebundenen Staaten ist wesentlich f&uuml;r die Entschl&uuml;sselung des Mechanismus der Rezeptor-Aktivierung und Struktur-gef&uuml;hrte Gestaltung und Optimierung von Liganden. Jedoch hat die Kristallisation von Agonist gebundene GPCRs durch bescheidene Affinit&auml;ten und schnelle Weg-Preise verf&uuml;gbar Agonisten behindert. Mithilfe der Struktur der inaktiven Teil des menschlichen &beta;(2)-adrenerge-Rezeptors (&beta;(2)AR) als Leitfaden, wir entwarfen einen &beta; (2)-AR-Agonisten, die zu einer bestimmten Site auf den Rezeptor durch eine Disulfid-Anleihe kovalent angebunden werden kann. Kovalente &beta; (2) AR-Agonist Komplex bildet effizient und ist in der Lage ein Heterotrimeres G-Protein zu aktivieren. Wir ein kovalent gebundene Agonist &beta; (2)-AR-T4L-Fusionsprotein in Lipid-Doppelschichten durch den Einsatz der Methode lipidischen Mesophase kristallisiert und seine Struktur bei 3,5 &Aring; Aufl&ouml;sung bestimmt. Ein Vergleich der inaktiven Struktur und eine Antik&ouml;rper-stabilisierte aktive Struktur (Begleiter Papier) zeigt, wie Bindung Veranstaltungen auf beiden extrazellul&auml;ren und intrazellul&auml;ren Oberfl&auml;chen erforderlich sind, um eine aktive Konformation des Rezeptors stabilisieren. Die Strukturen sind im Einvernehmen mit lang-Zeitskala (bis zu 30 &mu;s) Molekulardynamik-Simulationen zeigen, dass ein Agonist gebundene aktive Konformation spontan zu einer inaktiven-wie Konformation in Ermangelung eines G-Protein oder zu stabilisieren-Antik&ouml;rpers entspannt.

Struktur und Funktion einer irreversiblen agonist-&beta;(2)-Adrenozeptor-Komplex.

Recettori accoppiati a proteine G (GPCR) sono proteine integrali di membrana eucariotica che modulano la funzione biologica avviando la segnalazione cellulare in risposta a chimicamente diversi agonisti. Nonostante i recenti progressi nella biologia strutturale di GPCR, la base molecolare per agonista vincolanti e modulazione allosterica di queste proteine &egrave; poco conosciuta. Conoscenza strutturale degli Stati associati a agonista &egrave; essenziale per decifrare il meccanismo di attivazione del recettore e progettazione struttura-guidato e ottimizzazione dei ligands. Tuttavia, la cristallizzazione di GPCR associati a agonista &egrave; stata ostacolata dalla modesta affinit&agrave; e rapide off-tariffe degli agonisti disponibili. Utilizzando la struttura del recettore adrenergico umano &beta;(2) inattiva (&beta;(2)AR) come una guida, abbiamo progettato un agonista AR &beta; (2) che pu&ograve; essere legato covalentemente a un sito specifico sul recettore attraverso un legame disolfuro. Il complesso di AR-agonista covalenti &beta; (2) forma efficiente ed &egrave; in grado di attivare una proteina eterotrimerica G. Abbiamo cristallizzato una proteina di fusione AR-T4L covalente associato a agonista &beta; (2) in lipidici mediante il metodo mesophase lipidica e determinata la sua struttura a 3,5 &Aring; risoluzione. Un confronto con la struttura inattiva e una struttura attiva anticorpo-stabilizzato (carta compagno) dimostra come gli eventi di associazione alle superfici extracellulare e intracellulare sono tenuti a stabilizzare una conformazione attiva del recettore. Le strutture sono in accordo con le simulazioni di dinamica molecolare lunga-scala cronologica (fino a 30 &mu;s) mostrando che una conformazione attiva associato a agonista si rilassa spontaneamente in una conformazione inattiva-come in assenza di un anticorpo G di proteine o di stabilizzazione.

Struttura e funzione di un agonist-&beta;(2) irreversibile adrenoceptor complesse.

G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;Gpcr&#xFF09; &#x751F;&#x7269;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x5FDC;&#x3048;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7A4D;&#x5206;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Gpcr &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;&#x304C;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x77E5;&#x8B58;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x675F;&#x7E1B;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x8AAD;&#x3057;&#x3066;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3068;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; Gpcr &#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3055;&#x3084;&#x304B;&#x306A;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30AA;&#x30D5;&#x5229;&#x7528;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x7387;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x59A8;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x3068;&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x983B;&#x5EA6;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; (&beta;(2)AR) &#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x4E0A;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x30C6;&#x30B6;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059; &beta; (2) AR &#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3002;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408; &beta; (2) AR &#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x6027;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &beta; (2) AR T4L &#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x819C;&#x8102;&#x8CEA;&#x30E1;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x3057;&#x3001;3.5 &Aring; &#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6297;&#x4F53;&#x304C;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6D3B;&#x69CB;&#x9020; (&#x30DB;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C8; &#x30DA;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;) &#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306B;&#x3001;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x6297;&#x4F53;&#x306B;&#x4E0D;&#x5728;&#x306E;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x7DE9;&#x548C;&#x3092;&#x8868;&#x793A; &#xFF08;&#x6700;&#x5927; 30 &mu; s&#xFF09; &#x8D85;&#x9577;&#x6642;&#x9593;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x5206;&#x5B50;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A; agonist-&beta;(2) &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;

G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GPCRs)&#xB294; &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; agonists &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC9C4; &#xD575; &#xC815;&#xC218; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. Gpcrs&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC9C4;&#xC804;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; allosteric &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC790; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xC11C; &#xD22C;&#xB974; &#xAC8C; &#xC774;&#xD574;. &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD574;&#xB3C5; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xBC18; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xBC0F; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; ligands&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; Gpcrs&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xACB8;&#xC190; affinities &#xD558; &#xACE0; &#xBE60;&#xB978; &#xC624;&#xD504;-&#xC18D;&#xB3C4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; agonists&#xC758; &#xBC29;&#xD574; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &beta;(2) &#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; (&beta;(2)AR) &#xAC00;&#xC774;&#xB4DC;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC124;&#xACC4; &#x70AD; disulphide &#xBCF8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB2FF;&#xB294; &#xC218; &beta; (2) AR &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;. &#xACF5;&#xC720; &beta; (2) &#xC544;&#xCE78;&#xC18C;-&#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; heterotrimeric G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; lipidic mesophase &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayers&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xC720; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &beta; (2) &#xC544;&#xCE78;&#xC18C;-T4L &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294; &#xBC0F; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &Aring; 3.5&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815;. &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xD65C;&#xC131; &#xAD6C;&#xC870; (&#xB3D9;&#xBC18;&#xC790; &#xC885;&#xC774;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE44;&#xAD50; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xD574;&#xC57C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870;&#xCCB4;&#xAC00; &#xAE34; &#xC2DC;&#xAC04; &#xAC04;&#xACA9; (&#xCD5C;&#xB300; 30 &mu; s) &#xBD84;&#xC790; &#xB3D9;&#xC5ED;&#xD559; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB098; &#xB780; &#xC800;&#xC808;&#xB85C; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB610;&#xB294; &#xC548;&#xC815; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xAC19;&#xC740; &#xB098; &#xB780; &#xD558; &#xC774;&#xC644; &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xC640; &#xACC4;&#xC57D;.

&#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; agonist-&beta;(2) adrenoceptor&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;.

Receptores g-prote&iacute;na-juntados (GPCRs) son prote&iacute;nas de membrana integral eucariotas que modulan la funci&oacute;n biol&oacute;gica iniciando la se&ntilde;alizaci&oacute;n celular en respuesta a los agonistas qu&iacute;micamente diversos. A pesar de los recientes avances en la biolog&iacute;a estructural de GPCRs, la base molecular para el agonista vinculante y modulaci&oacute;n alost&eacute;rica de estas prote&iacute;nas es mal entendida. Conocimiento estructural de Estados ligados de agonista es esencial para descifrar el mecanismo de la activaci&oacute;n del receptor y guiada por la estructura dise&ntilde;o y optimizaci&oacute;n de ligandos. Sin embargo, la cristalizaci&oacute;n de los GPCRs agonista-limite ha sido obstaculizada por afinidades modestas y r&aacute;pidas apagado-tarifas de agonistas disponibles. Usando la estructura inactiva del receptor adren&eacute;rgico &beta;(2) humano (&beta;(2)AR) como gu&iacute;a, hemos dise&ntilde;ado un agonista de AR de &beta; (2) que puede ser anclado covalentemente a un sitio espec&iacute;fico en el receptor a trav&eacute;s de un enlace disulfuro. El complejo de AR-agonista &beta; covalente (2) forma eficientemente y es capaz de activar una prote&iacute;na heterotrim&eacute;ricas G. Se cristaliz&oacute; una prote&iacute;na de fusi&oacute;n covalente enlazados agonista &beta; (2) AR-T4L en bicapas lip&iacute;dicas mediante el m&eacute;todo de mesofases lip&iacute;dica y determina su estructura en 3.5 &Aring; de resoluci&oacute;n. Una comparaci&oacute;n a la estructura inactiva y una estructura activa anticuerpo-estabilizado (papel de compa&ntilde;ero) muestra c&oacute;mo eventos vinculante en ambas superficies intracelulares y extracelulares son necesario para estabilizar una conformaci&oacute;n activa del receptor. Las estructuras son de acuerdo con simulaciones de din&aacute;mica molecular de largo-escala de tiempo (hasta 30 &mu;s) mostrando que una conformaci&oacute;n activa del agonista-limite relaja espont&aacute;neamente a una conformaci&oacute;n inactiva-como en la ausencia de anticuerpos G prote&iacute;na o estabilizadores.

Estructura y funci&oacute;n de un complejo de adrenoceptor agonist-&beta;(2) irreversible.

&#x8FD9;&#x4EFD;&#x62A5;&#x544A;&#x751F;&#x7269;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x6700;&#x8FD1;&#x5B9E;&#x65BD;&#x7EFC;&#x5408;&#x533B;&#x5B66;&#x79D1;&#x5B66;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7814;&#x7A76;&#x6240;&#x548C;&#x56FD;&#x5BB6;&#x764C;&#x75C7;&#x7814;&#x7A76;&#x6240;&#x7684;&#x5149;&#x675F;&#x7EBF;&#x5728;&#x5148;&#x8FDB;&#x5149;&#x5B50;&#x6E90;&#x7684; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x8367;&#x5149;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E8B;&#x6001;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x63AA;&#x65BD;&#x5305;&#x62EC; (i) &#x4E09;&#x5E26;&#x4E0A;&#x98DE;&#x80FD;&#x91CF;&#x5438;&#x6536;&#x5177;&#x6709;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4ECE;&#x7C97;&#x901A; &#xFF1B; &#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x7F5A;&#x6B3E;&#x6B65;&#x5E26;&#x533A;&#x7684;&#x8FB9;&#x7F18;&#x5468;&#x56F4;&#x626B;&#x63CF;(&#x4E8C;) &#x4E0A;--&#x98DE; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x6805;&#x578B;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5C0F;&#x548C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x89C1;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7A7F;&#x68AD;&#x626B;&#x63CF;&#x9009;&#x9879;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x901F;&#x5EA6; &#xFF1B; &#x77E9;&#x5F62;&#x57DF;&#x4E0A;(&#x5BF9;&#x7528;&#x6237;&#x6307;&#x5B9A;&#x7684;&#x7AEF;&#x9762;&#x591A;&#x8FB9;&#x5F62; &#xFF1B; iii) &#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x6805;&#x578B;&#x53CA; (iv) &#x4FE1;&#x53F7;&#x81EA;&#x52A8;&#x4F18;&#x5316;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x8F90;&#x5C04;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x6837;&#x672C;&#x3002;

&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x5149;&#x675F;&#x7EBF;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x8367;&#x5149;&#x6280;&#x672F;&#x3002;

This paper reports on several developments of X-ray fluorescence techniques for macromolecular crystallography recently implemented at the National Institute of General Medical Sciences and National Cancer Institute beamlines at the Advanced Photon Source. These include (i) three-band on-the-fly energy scanning around absorption edges with adaptive positioning of the fine-step band calculated from a coarse pass; (ii) on-the-fly X-ray fluorescence rastering over rectangular domains for locating small and invisible crystals with a shuttle-scanning option for increased speed; (iii) fluorescence rastering over user-specified multi-segmented polygons; and (iv) automatic signal optimization for reduced radiation damage of samples.

Fast fluorescence techniques for crystallography beamlines.

Ce document rend compte des d&#xE9;veloppements techniques de plusieurs fluorescence de rayons X pour la cristallographie macromol&#xE9;culaire r&#xE9;cemment mis en &#x153;uvre &#xE0; l&#x26;#39;Institut national des sciences m&#xE9;dicales g&#xE9;n&#xE9;rales et le National Cancer Institute faisceaux &#xE0; l&#x26;#39;Advanced Photon Source. Il s&#x26;#39;agit notamment (i) &#xE0; trois bandes sur la vol&#xE9;e de l&#x26;#39;&#xE9;nergie autour des bords d&#x26;#39;absorption &#xE0; balayage avec un positionnement adapt&#xE9; de la bande fine &#xE9;tape calcul&#xE9;e &#xE0; partir de un laissez-passer grossiers; (ii) &#xE0; la vol&#xE9;e-X-ray fluorescence tramage sur des domaines rectangulaires pour localisation de petits cristaux et invisible avec une possibilit&#xE9; de navette-balayage pour une vitesse accrue, (iii) la fluorescence tramage plus sp&#xE9;cifi&#xE9;es par l&#x26;#39;utilisateur &#xE0; plusieurs segments polygones, et (iv) l&#x26;#39;optimisation automatique de signal pour les dommages rayonnement r&#xE9;duite d&#x26;#39;&#xE9;chantillons.

Rapides des techniques de fluorescence pour la cristallographie des lignes de faisceaux

Dieses Papier berichtet &uuml;ber verschiedene Entwicklungen der R&ouml;ntgen-Fluoreszenz-Techniken f&uuml;r Makromolekulare Kristallographie, die k&uuml;rzlich auf der National Institute of General Medical Sciences und der National Cancer Institute Beamlines an der Advanced Photon Source umgesetzt. Zum Beispiel (i), 3-Band-on-the-Fly-Energie Scannen um Resorption Kanten mit adaptive Positionierung der fein-Schritt-Band, die aus einem groben Pass berechnet. II on-the-Fly R&ouml;ntgen-Fluoreszenz-Rastering &uuml;ber rechteckigen Domains zum Auffinden von kleine und unsichtbare Kristalle mit einer Shuttle-Scan-Option f&uuml;r h&ouml;here Geschwindigkeit; (Iii) Fluoreszenz-Rastering &uuml;ber benutzerspezifische segmentierten Polygone; und (iv) Signal automatische Optimierung f&uuml;r reduzierte Strahlensch&auml;den Proben.

Schnelle Fluoreszenz-Techniken f&uuml;r Kristallographie Beamlines.

Questa carta segnala su diversi sviluppi di tecniche di fluorescenza a raggi x per la cristallografia macromolecolare recentemente implementato presso il National Institute of General Medical Sciences e National Cancer Institute incrementate presso la fonte del fotone avanzata. Questi includono (i) tre bande on-the-fly energia scansione intorno ai bordi di assorbimento con posizionamento adattivo della band ammenda-passo calcolata da un passaggio di grossolano; (ii) on-the-fly radiografia fluorescenza rastering su domini rettangolari per l&#39;individuazione di cristalli piccoli e invisibili con un&#39;opzione di scansione di navetta per maggiore velocit&agrave;; (iii) fluorescenza rastering sopra specificato dall&#39;utente poligoni segmenti; e (iv) segnale automatico ottimizzazione per danni da radiazione ridotto di campioni.

Tecniche di fluorescenza veloce per cristallografia incrementate.

&#x6700;&#x8FD1;&#x4E00;&#x822C;&#x533B;&#x79D1;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x6240;&#x3068;&#x56FD;&#x7ACB;&#x304C;&#x3093;&#x7814;&#x7A76;&#x6240;&#x3067;&#x5B9F;&#x65BD;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x7D50;&#x6676;&#x5B66;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;X&#x7DDA;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x5149;&#x5B50;&#x6E90;&#x3067;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E0;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;i&#xFF09;&#x7C97;&#x30D1;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x8A08;&#x7B97;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x304B;&#x3044;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3068;&#x5438;&#x53CE;&#x7AEF;&#x306E;&#x5468;&#x308A;&#x306B;&#x8D70;&#x67FB;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;on-the-fly&#x3067;3&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#xFF08;ii&#xFF09;&#x30AA;&#x30F3;&#x30B6;&#x30D5;&#x30E9;&#x30A4;&#x86CD;&#x5149;X&#x7DDA;&#x306F;&#x3001;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9577;&#x65B9;&#x5F62;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x4E0A;&#x306E;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x9AD8;&#x901F;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30AA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x76EE;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x306A;&#x3044;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x7D50;&#x6676;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#xFF08;iii&#xFF09;&#x86CD;&#x5149;&#x306F;&#x3001;&#x30E6;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x304C;&#x6307;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B4;&#x30F3;&#x4E0A;&#x306E;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#xFF08;iv&#xFF09;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x81EA;&#x52D5;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3002;

&#x7D50;&#x6676;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E0;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9AD8;&#x901F;&#x86CD;&#x5149;&#x6280;&#x8853;

&#xC774; &#xC2E0;&#xBB38;&#xC740; &#xCD5C;&#xADFC; &#xACE0;&#xAE09; &#xAD11;&#xC790; &#xC18C;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC77C;&#xBC18; &#xC758;&#xB8CC; &#xACFC;&#xD559;&#xC758; &#xAD6D;&#xAC00; &#xD559;&#xD68C; &#xBC0F; &#xBBF8;&#xAD6D; &#xC554; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC18C; beamlines&#xC5D0; &#xAD6C;&#xD604; &#xB41C; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xC815;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; x-&#xC120; &#xD615;&#xAD11; &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. (I) 3 &#xBC34;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC989;&#xC2DC; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xD761;&#xC218; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;&#xC758; &#xAC70;&#xCE5C; &#xD328;&#xC2A4;;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACC4;&#xC0B0; &#xBC8C;&#xAE08; &#xB2E8;&#xACC4; &#xBC34;&#xB4DC;&#xC758; &#xC801;&#xC751;&#xD615; &#xC704;&#xCE58;&#xC640; &#xC8FC;&#xC704; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. (ii)&#xC5D0; &#xC989;&#xC2DC; x-&#xC120; &#xD615;&#xAD11; rastering &#xC99D;&#xAC00; &#xC18D;&#xB3C4;; &#xC154;&#xD2C0; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC635;&#xC158;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xACE0; &#xBCF4;&#xC774;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8;&#xC744; &#xCC3E;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC0AC;&#xAC01;&#xD615; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; (&#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; &#xC9C0;&#xC815; &#xB2E4;&#xC911; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xB2E4;&#xAC01;&#xD615;;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; iii) &#xD615;&#xAD11; rastering &#xBC0F; (iv) &#xC790;&#xB3D9; &#xC2E0;&#xD638; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xC190;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0D8;&#xD50C;.

&#xACB0;&#xC815;&#xD559; beamlines&#xC758; &#xBE60;&#xB978; &#xD615;&#xAD11; &#xAE30;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Este documento informa sobre la evoluci&#xF3;n de varias t&#xE9;cnicas de rayos X de fluorescencia para la cristalograf&#xED;a macromolecular recientemente implementadas en el Instituto Nacional de Ciencias M&#xE9;dicas Generales y el Instituto Nacional del C&#xE1;ncer l&#xED;neas de luz en la Advanced Photon Source. Estos incluyen: (i) de tres bandas en la marcha de exploraci&#xF3;n de energ&#xED;a alrededor de los bordes de absorci&#xF3;n con el posicionamiento de adaptaci&#xF3;n de la banda de paso fino calculado a partir de un pase de gruesa, (ii) sobre la marcha-fluorescencia de rayos X de barrido sobre dominios rectangulares de localizar peque&#xF1;os cristales e invisible con una opci&#xF3;n de exploraci&#xF3;n de lanzadera para aumentar la velocidad, (iii) la fluorescencia de barrido sobre especificados por el usuario multi-segmentados pol&#xED;gonos, y (iv) la optimizaci&#xF3;n de la se&#xF1;al autom&#xE1;tica de da&#xF1;o por radiaci&#xF3;n reducida de las muestras.

Fast t&#xE9;cnicas de fluorescencia de Cristalograf&#xED;a L&#xED;neas de Luz

&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x662F;&#x56E0;&#x5B50;&#x94DC;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x5BB6;&#x65CF; &#xFF08;&#x5C0F;&#x8D29;&#xFF09; &#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x5C0F;&#x8D29;&#x7BA1;&#x7406;&#x4E3B;&#x4EFB;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x548C;&#x597D;&#x6C27;&#x7684;&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x8DE8;&#x819C;&#x8D28;&#x5B50;&#x6CF5;&#x5206;&#x5B50;&#x6C27;&#x51CF;&#x5C11;&#x547C;&#x5438;&#x94FE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x9176;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6216;&#x7F3A;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x662F;&#x7535;&#x5B50;&#x7684;&#x8F6C;&#x79FB;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c &#x5230;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x77AC;&#x6001;&#x534F;&#x4F1A;&#x901A;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x3002;&#x7535;&#x5B50;&#x8FDB;&#x5165;&#x548C;&#x9000;&#x51FA;&#x62DF;&#x4ECE;&#x540C;&#x4E00;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c &#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; caa3 &#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x6813;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c &#x57DF;&#x9176;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6676;&#x4F53;&#x79CD;&#x690D;&#x7684;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F7F;&#x7528;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x77ED;&#x94FE; monoacylglycerol &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x7684;&#x53CC;&#x8FDE;&#x7EED;&#x76F8;&#x3002;&#x4ECE;&#x7535;&#x5B50;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x56FE;&#xFF0C;&#x5728; 2.36 &#x2460; &#x51B3;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86; a &#x65B0;&#x578B;&#x79EF;&#x5206;&#x819C;&#x4E9A;&#x548C;&#x5D4C;&#x5165;&#x5728;&#x5EFA;&#x7B51;&#x7FA4;&#x4E2D;&#x7684; a &#x672C;&#x673A; glycoglycerophospholipid&#x3002;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x673A;&#x5236;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c&#xFF0C;&#x7ED3;&#x6784;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x6D89;&#x53CA;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0A;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x8FDB;&#x5165;&#x4E0E;&#x9000;&#x51FA;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c &#x7684;&#x7535;&#x7194;&#x7684; cupredoxin/&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c &#x57DF;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x63D0;&#x4EA4;&#x5BF9;&#x53E4;&#x5178;&#x8D28;&#x5B50;&#x95E8;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x5C0F;&#x8D29;&#x8BE5;&#x7C7B;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x652F;&#x6301;&#x3002;

&#x7535;&#x5B50;&#x7ED3;&#x6784;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x8F6C;&#x8BA9; caa3 &#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x3002;

Cytochrome c oxidase is a member of the haem copper oxidase superfamily (HCO). HCOs function as the terminal enzymes in the respiratory chain of mitochondria and aerobic prokaryotes, coupling molecular oxygen reduction to transmembrane proton pumping. Integral to the enzyme's function is the transfer of electrons from cytochrome c to the oxidase via a transient association of the two proteins. Electron entry and exit are proposed to occur from the same site on cytochrome c. Here we report the crystal structure of the caa3-type cytochrome oxidase from Thermus thermophilus, which has a covalently tethered cytochrome c domain. Crystals were grown in a bicontinuous mesophase using a synthetic short-chain monoacylglycerol as the hosting lipid. From the electron density map, at 2.36â€‰Ã… resolution, a novel integral membrane subunit and a native glycoglycerophospholipid embedded in the complex were identified. Contrary to previous electron transfer mechanisms observed for soluble cytochrome c, the structure reveals the architecture of the electron transfer complex for the fused cupredoxin/cytochrome c domain, which implicates different sites on cytochrome c for electron entry and exit. Support for an alternative to the classical proton gate characteristic of this HCO class is presented.

Structural insights into electron transfer in caa3-type cytochrome oxidase.

Cytochrome c oxydase est un membre de la superfamille des h&egrave;me oxydase cuivre (HCO). Och fonctionne comme les enzymes terminales dans la cha&icirc;ne respiratoire des mitochondries et des procaryotes a&eacute;robies, r&eacute;duction de l&#39;oxyg&egrave;ne mol&eacute;culaire &agrave; pompage transmembranaire de protons de couplage. Partie int&eacute;grante de la fonction de l&#39;enzyme est le transfert des &eacute;lectrons du cytochrome c &agrave; l&#39;oxydase via une liaison passag&egrave;re des deux prot&eacute;ines. &Eacute;lectron entr&eacute;e et sortie sont propos&eacute;es &agrave; partir du m&ecirc;me site le cytochrome c. Nous pr&eacute;sentons la structure cristalline de la cytochrome oxydase de type caa3 de Thermus thermophilus, qui poss&egrave;de un domaine ch. du cytochrome par covalence attach&eacute;. Cristaux ont &eacute;t&eacute; cultiv&eacute;s dans une m&eacute;sophase bicontinues utilisant une monoacylglyc&eacute;rol courte cha&icirc;ne synth&eacute;tique comme les lipides h&eacute;bergement. De la carte de densit&eacute; d&#39;&eacute;lectron, &agrave; r&eacute;solution de 2.36 &Aring;, sous-unit&eacute;s membranaires intrins&egrave;ques roman a et a native glycoglycerophospholipid int&eacute;gr&eacute; dans le complexe ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s. Contrairement aux pr&eacute;c&eacute;dents m&eacute;canismes de transfert &eacute;lectron observ&eacute;es pour soluble de cytochrome c, la structure r&eacute;v&egrave;le l&#39;architecture du transfert &eacute;lectronique complex pour le domaine fondu CUPREDOXINE/cytochrome c, qui implique diff&eacute;rents sites le cytochrome c aux &eacute;lectrons entr&eacute;es et sorties. Prise en charge d&#39;une alternative &agrave; la caract&eacute;ristique de porte proton classique de cette classe HCO est pr&eacute;sent&eacute;.

Structurels aper&ccedil;us &eacute;lectron transfert caa3 type cytochrome oxydase.

Cytochrom-C-Oxidase ist ein Mitglied der Haem Kupfer Oxydase-Superfamilie (HCO). HCOs fungieren als terminal Enzyme in die Atmungskette der Mitochondrien und aeroben Prokaryoten, Kupplung molekularen Sauerstoff-Reduktion auf Transmembran Proton zu Pumpen. Integraler Bestandteil der Enzym-Funktion soll die &Uuml;bertragung von Elektronen vom Cytochrom c Oxydase &uuml;ber eine vor&uuml;bergehende Vereinigung zweier Proteine. Elektron ein- und Ausreise werden vorgeschlagen, aus dem gleichen Ort auf Cytochrom c auftreten. Hier berichten wir &uuml;ber die Kristallstruktur von caa3-Typ Cytochrom-Oxidase aus Thermus Thermophilus, die eine kovalent angebundenen Cytochrom-C-Dom&auml;ne hat. Kristalle wurden in einem Bicontinuous Mesophase mit einem synthetischen kurzkettige Monoacylglycerol als hosting Lipid angebaut. Von der Elektronen-Dichte-Map, bei 2,36 &Aring; Aufl&ouml;sung wurden neuartige integrale Membrane trifunctional a und a native Glycoglycerophospholipid eingebettet in die Anlage identifiziert. Im Gegensatz zu fr&uuml;heren Elektron &Uuml;bertragungsmechanismen f&uuml;r l&ouml;sliche Cytochrom c beobachtet zeigt die Struktur die Architektur von der Elektronen-Transfer-komplexe f&uuml;r die verschmolzenen Cupredoxin/Zellfarbstoff C-Dom&auml;ne, die steht in Verbindung mit verschiedene Standorten auf Cytochrom c f&uuml;r Elektron ein- und Ausfahrten. Unterst&uuml;tzung f&uuml;r eine Alternative zu den klassischen Proton Tor Merkmal dieser HCO-Klasse wird vorgestellt.

Strukturelle Einblicke in Elektron &uuml;bertragen in caa3-Typ Cytochrom-Oxidase.

Citocromo c ossidasi sono un membro della superfamiglia eme ossidasi rame (HCO). HCOs funzione come i terminale enzimi della catena respiratoria dei mitocondri e procarioti aerobi, riduzione dell&#39;ossigeno molecolare per il pompaggio di protoni transmembrana di accoppiamento. Parte integrante della funzione dell&#39;enzima &egrave; il trasferimento di elettroni dal citocromo c ossidasi tramite un&#39;associazione transitoria delle due proteine. Uscita e ingresso di elettroni sono proposti a verificarsi dallo stesso sito sul citocromo c. Qui riportiamo la struttura cristallina della caa3-tipo citocromo ossidasi da Thermus thermophilus, che ha un dominio c citocromo legato covalentemente. Cristalli sono stati coltivati in un mesophase bicontinuous usando un sintetico monoacilglicerolo catena corta come l&#39;hosting dei lipidi. Dalla mappa di densit&agrave; di elettroni, 2,36 con risoluzione &Aring;, una subunit&agrave; romanzo integrale di membrana e un glycoglycerophospholipid nativo incorporato nel complesso sono stati identificati. Contrariamente alle precedenti meccanismi trasferimento elettroni osservate per solubili citocromo c, la struttura rivela l&#39;architettura del complesso per il dominio c cupredoxin/citocromo fuso, che implica diversi siti su citocromo c per elettrone entrata e uscita il trasferimento di elettroni. Supporto per un&#39;alternativa per la caratteristica del cancello protone classica di questa classe HCO &egrave; presentato.

Intuizioni strutturali in electron transfer in caa3-tipo citocromo ossidasi.

&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c &#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30D8;&#x30E0;&#x9285;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC; &#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC; (HCO) &#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;HCOs &#x306F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x3092;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x9178;&#x7D20;&#x9084;&#x5143;&#x597D;&#x6C17;&#x6027;&#x306E;&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x547C;&#x5438;&#x9396;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x96FB;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x904E;&#x6E21;&#x5354;&#x4F1A;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c &#x304B;&#x3089;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x96FB;&#x5B50;&#x306E;&#x5165;&#x308A;&#x53E3;&#x3068;&#x51FA;&#x53E3;&#x306F;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c &#x4E0A;&#x306E;&#x540C;&#x3058;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;.&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x30C6;&#x30B6;&#x30FC; &#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x30B5;&#x30FC;&#x30DE;&#x30B9;&#x7531;&#x6765; caa3 &#x578B;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x6676;&#x5408;&#x6210;&#x77ED;&#x9396;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x8102;&#x8CEA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x53CC;&#x9023;&#x7D9A;&#x30E1;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x683D;&#x57F9;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96FB;&#x5B50;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E; 2.36 &Aring; &#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x304B;&#x3089; a &#x65B0;&#x898F;&#x7A4D;&#x5206;&#x819C;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x8907;&#x96D1;&#x3067;&#x57CB;&#x3081;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x305F; a &#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; glycoglycerophospholipid &#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c &#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x8EE2;&#x9001;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x53CD;&#x3057;&#x3066;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x8907;&#x5408;&#x6EB6;&#x878D; cupredoxin/&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c &#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3068;&#x7D42;&#x4E86;&#x4E0A;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x3080;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E; HCO &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3; &#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x7279;&#x6027;&#x3078;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x304C;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x96FB;&#x5B50; caa3 &#x578B;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; haem &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; superfamily (HCO)&#xC758; &#xD68C;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. HCOs &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xBC0F; &#xC5D0;&#xC5B4;&#xB85C;&#xBE45; prokaryotes, &#xBD84;&#xC790; &#xC0B0;&#xC18C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xD38C;&#xD504; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1;&#xC758; &#xD638;&#xD761; &#xC0AC;&#xC2AC;&#xC5D0; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAC83; &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD611;&#xD68C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;. &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c&#xC5D0; &#xAC19;&#xC740; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xC804;&#xC790; &#xC785;&#xAD6C;&#xC640; &#xCD9C;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#x70AD; &#xBC27;&#xC904;&#xB85C; &#xB9E4; &#xC778;&#xB41C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC774; Thermus thermophilus&#xC5D0;&#xC11C; caa3 &#xC720;&#xD615; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xD638;&#xC2A4;&#xD305; &#xC9C0;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xC9E7;&#xC740; &#xCCB4;&#xC778; monoacylglycerol&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; bicontinuous mesophase&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC790; &#xBC00;&#xB3C4; &#xC9C0;&#xB3C4; 2.36 &Aring; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; a &#xC18C;&#xC124; &#xACC4;&#xC5F4; &#xB9C9; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; a &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; glycoglycerophospholipid &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30;, &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC870; &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c &#xC804;&#xC790; &#xC785;&#xAD6C;&#xC640; &#xCD9C;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xC735;&#xD569;&#xB41C; cupredoxin/&#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xC774; HCO &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC758; &#xACE0;&#xC804; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xAC8C;&#xC774;&#xD2B8; &#xD2B9;&#xC131; &#xB300;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xC774; &#xC81C;&#xACF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC804;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825; caa3 &#xC720;&#xD615; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC804;&#xC1A1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Citocromo c oxidasa es miembro de la superfamilia de cobre oxidasa haem (HCO). HCOs funcionan como las enzimas terminales en la cadena respiratoria de las mitocondrias y los procariotas aer&oacute;bicos, reducci&oacute;n de ox&iacute;geno molecular para bombeo de protones transmembrana de acoplamiento. Parte integral de la funci&oacute;n de la enzima es la transferencia de electrones del citocromo c la oxidasa v&iacute;a una asociaci&oacute;n transitoria de las dos prote&iacute;nas. Salida y entrada del electr&oacute;n se proponen desde el mismo sitio en el citocromo c. Presentamos la estructura cristalina de la citocromooxidasa caa3-tipo de Thermus thermophilus, que tiene un dominio c citocromo covalente atada. Cristales crecieron en un mesofases bicontinuas utilizando un Monoacilglicerol sint&eacute;tico de cadena corta como el l&iacute;pido alojamiento. Desde el mapa de la densidad del electr&oacute;n, en resoluci&oacute;n de 2.36 &Aring;, subunidad de novela integral de la membrana y a nativo glycoglycerophospholipid integrado en el complejo fueron identificados. Contrariamente a los anteriores mecanismos de transferencia electr&oacute;n observados soluble citocromo c, la estructura revela la arquitectura de la transferencia de electrones compleja para el dominio c citocromo cupredoxin fundido, que implica diferentes sitios en el citocromo c para entrada de electr&oacute;nica y salida. Soporte para una alternativa a la caracter&iacute;stica de la puerta de protones cl&aacute;sico de esta clase HCO se presenta.

Penetraciones estructurales en electr&oacute;n transferencia de caa3 tipo citocromo oxidasa.

&#x79CD;&#x6297;&#x83CC;&#x7D20;&#x662F;&#x7531;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x4EA4;&#x66FF; D apolar &#x5341;&#x4E94;&#x80BD;&#x6297;&#x751F;&#x7D20;-&#x548C; L-&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x3002;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728;&#x6613;&#x611F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5448;&#x73B0;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6F0F;&#x5230;&#x5355;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x4E2D;&#x521B;&#x5EFA;&#x6BDB;&#x5B54;&#x3002;&#x591A;&#x80BD;&#x5E94;&#x8BE5;&#x80FD;&#x591F;&#x904D;&#x5386;&#x4E3B;&#x673A;&#x819C;&#x53CC;&#x7EDE;&#x3001; &#x76F8;&#x4E92;&#x4EA4;&#x7EC7;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x53CC;&#x87BA;&#x65CB; (DSDH) &#x6216;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8089;&#x640F;&#x6218;&#x7684;&#x5355;&#x7EDE;&#x87BA;&#x65CB; (HHSH)&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x578B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x751F;&#x7269;&#x5927;&#x5206;&#x5B50; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66; (MX) &#x548C;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F; (NMR)&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;HHSH &#x7A97;&#x4F53;&#x53EA;&#x5DF2;&#x9075;&#x5B88;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x3002;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5F62;&#x72B6;&#x548C;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x79CD;&#x6297;&#x83CC;&#x7D20;&#x6784;&#x8C61;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x6D4B;&#x5B83;&#x6539;&#x7EC4;&#x5230;&#x5177;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5FAE;&#x89C2;&#x7ED3;&#x6784;&#x53CC;&#x5C42;&#x8102;&#x7C7B;&#x4E2D;&#x95F4;&#x5C06;&#x4F18;&#x5148;&#x5BF9;&#x5176;&#x4ED6;&#x7A33;&#x5B9A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7A97;&#x4F53;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728;&#x7EC6;&#x89C2; crystallogenesis &#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9AD8;&#x80FD;&#x6240;&#x671F;&#x671B;&#x7684;&#x662F;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4F1A;&#x4EA7;&#x751F;&#x79CD;&#x6297;&#x83CC;&#x7D20;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x6D4B;&#x5B9A; MX HHSH &#x7A97;&#x4F53;&#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x4F7F;&#x7528;&#x5728;&#x7EC6;&#x89C2; crystallogenesis &#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x5546;&#x4E1A;&#x548C;&#x5185;&#x90E8;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x8FDB;&#x884C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x3002;&#x8102;&#x8D28;&#x9170;&#x57FA;&#x94FE;&#x957F;&#x5EA6;&#x4E0D;&#x5C3D;&#x76F8;&#x540C;&#x4ECE; 14 &#x5230; 18 &#x78B3;&#x4E3A;&#x9AD8;&#x80FD;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x53CC;&#x5C42;&#x7C97;&#x7EC6;&#x3002;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x8840;&#x8102;&#x90FD;&#x751F;&#x4EA7;&#x9AD8;&#x8D28;&#x91CF;&#x3001; &#x7ED3;&#x6784;&#x7EA7;&#x6676;&#x4F53;&#x53EA;&#x5728; DSDH &#x6784;&#x8C61;&#x79CD;&#x6297;&#x83CC;&#x7D20;&#x3002;

&#x6CB9;&#x8102;&#x9AD8;&#x80FD;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x6676;&#x3002;&#x627F;&#x8F7D;&#x8102;&#x8D28;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x7ED3;&#x6676;&#x548C;&#x8DE8;&#x819C;&#x80BD;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

Gramicidin is an apolar pentadecapeptide antibiotic consisting of alternating D-and L-amino acids. It functions, in part, by creating pores in membranes of susceptible cells rendering them leaky to monovalent cations. The peptide should be able to traverse the host membrane either as a double stranded, intertwined double helix (DSDH) or as a head-to-head single stranded helix (HHSH). Current structure models are based on macromolecular X-ray crystallography (MX) and nuclear magnetic resonance (NMR). However, the HHSH form has only been observed by NMR. The shape and size of the different gramicidin conformations differ. We speculated therefore that reconstituting it into a lipidic mesophase with bilayers of different microstructures would preferentially stabilize one form over the other. By using such mesophases for in meso crystallogenesis the expectation was that at least one would generate crystals of gramicidin in the HHSH form for structure determination by MX. This was tested using commercial and in-house synthesised lipids that support in meso crystallogenesis. Lipid acyl chain lengths were varied from 14 to 18 carbons to provide mesophases with a range of bilayer thicknesses. Unexpectedly, all lipids produced high quality, structure-grade crystals with gramicidin only in the DSDH conformation.

Membrane Protein Crystallization in Lipidic Mesophases. Hosting lipid affects on the crystallization and structure of a transmembrane peptide.

Gramicidine est apolaire pentadecapeptide antibiotique compos&eacute; d&#39;une alternance de D- et L-acides amin&eacute;s. Il fonctionne, en partie, en cr&eacute;ant des pores dans les membranes des cellules sensibles, les rendant perm&eacute;ables &agrave; monovalent cations. Le peptide devrait &ecirc;tre capable de traverser la membrane de l&#39;h&ocirc;te comme un double brin, entrelac&eacute; double helix (DSDH) ou comme une h&eacute;lice de brin unique face &agrave; face (HHSH). Les mod&egrave;les actuels de structure reposent sur la radiocristallographie macromol&eacute;culaires (MX) et de la r&eacute;sonance magn&eacute;tique nucl&eacute;aire (RMN). Cependant, la forme HHSH a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e seulement par RMN. La forme et la taille des conformations diff&eacute;rentes gramicidine diff&egrave;rent. Donc, nous avons suppos&eacute; que l&#39;il reconstituer dans une m&eacute;sophase lipidique avec bicouches de diff&eacute;rentes microstructures se stabilise pr&eacute;f&eacute;rentiellement une forme sur l&#39;autre. En utilisant ces m&eacute;sophases pour meso crystallogenesis l&#39;attente &eacute;tait qu&#39;au moins un g&eacute;n&eacute;rerait des cristaux de la gramicidine sous la forme HHSH pour la d&eacute;termination de la structure par la bourse. Cela a &eacute;t&eacute; test&eacute; &agrave; l&#39;aide des lipides synth&eacute;tis&eacute;s commerciales et internes qui prennent en charge en meso crystallogenesis. Longueur des cha&icirc;nes acyles lipidiques &eacute;tait vari&eacute;s de 14 &agrave; 18 atomes de carbone de fournir une gamme d&#39;&eacute;paisseurs de la bicouche de m&eacute;sophases. Contre toute attente, tous les lipides produits haute qualit&eacute;, cristaux de structure de qualit&eacute; avec la gramicidine seulement dans la conformation de DSDH.

Cristallisation de prot&eacute;ine de membrane dans les m&eacute;sophases lipidiques. H&eacute;bergement lipidique affecte sur la cristallisation et la structure d&#39;un peptide transmembranaire.

Gramicidin ist Antibiotikum Pentadecapeptide apolaren, bestehend aus abwechselnd D- und L-Aminos&auml;uren. Es funktioniert, teilweise durch Ihre Poren in den Membranen der empf&auml;nglichen Zellen sie undichte zu monovalenten Kationen zu rendern. Das Peptid sollte die Host-Membran als eine doppelte gestrandeten, ineinander verflochtenen Doppelhelix (DSDH) oder ein Kopf an Kopf einzelne angeschwemmte Helix (HHSH) durchlaufen k&ouml;nnen. Aktuelle Strukturmodelle basieren auf Makromolekulare Kristallstrukturanalyse (MX) und Kernspinresonanz (NMR). HHSH Form ist jedoch nur durch NMR beobachtet worden. Die Form und Gr&ouml;&szlig;e der verschiedenen Gramicidin-Konformationen unterscheiden. Wir vermuteten daher, dass es in einem lipidischen Mesophase mit Doppelschichten der verschiedenen Mikrostrukturen Rekonstituierung bevorzugt eine Form &uuml;ber die andere stabilisieren w&uuml;rde. Mit solchen Mesophasen f&uuml;r in Meso-Crystallogenesis war die Erwartung, dass mindestens eine Kristalle von Gramicidin in HHSH Form zur Bestimmung der Struktur von MX generieren w&uuml;rde. Dies wurde getestet, mit kommerziellen und Inhouse synthetisierten Lipide, die in Meso-Crystallogenesis unterst&uuml;tzen. Lipid Acil Kettenl&auml;ngen wurden von 14 bis 18 Kohlenstoffatomen, Mesophasen bieten eine Reihe von Bilayer dicken variiert. Unerwartet, alle Lipide produziert qualitativ hochwertige Struktur-Qualit&auml;t Kristalle mit Gramicidin nur in der DSDH-Konformation.

Membran Proteinkristallisation in lipidischen Mesophasen. Hosten von Lipid wirkt sich auf die Kristallisation und die Struktur der ein Transmembran-Peptid.

Gramicidina &egrave; un antibiotico pentadecapeptide apolari composto alternando D- e L-amminoacidi. Funzioni, in parte, creando i pori nelle membrane delle cellule sensibili rendendoli perde a monovalente cationi. Il peptide deve essere in grado di attraversare la membrana host come un doppio filamento, intrecciata doppia elica (DSDH) o come un testa a testa singolo filamento elica (HHSH). Attuali modelli di struttura si basano sulla cristallografia macromolecolare a raggi x (MX) e risonanza magnetica nucleare (NMR). Tuttavia, la forma HHSH &egrave; stata osservata solo da NMR. La forma e la dimensione delle conformazioni differenti Gramicidina differiscono. Abbiamo ipotizzato quindi che ricostituire esso in un mesophase lipidico con fosfolipidici di differenti microstrutture preferenzialmente sarebbe stabilizzare uno forma sopra l&#39;altro. Utilizzando tali mesophases per in crystallogenesis meso l&#39;aspettativa era che almeno uno sarebbe generare cristalli di Gramicidina in forma HHSH per la determinazione della struttura da MX. Questo &egrave; stato testato utilizzando lipidi sintetizzati in-House e commerciale che supportano in meso crystallogenesis. Lunghezza di catena acil lipidi sono state variate da 14 a 18 atomi di carbonio per fornire mesophases con una gamma di spessori di doppio strato. Inaspettatamente, lipidi tutti prodotti di alta qualit&agrave;, cristalli struttura-grade con Gramicidina solo nella conformazione DSDH.

Membrana proteina cristallizzazione in Mesophases lipidico. Lipidi di hosting influisce sulla cristallizzazione e la struttura di un peptide transmembrana.

&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B7;&#x30B8;&#x30F3;&#x3067;&#x3059; D &#x4EA4;&#x4E92;&#x306B;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8D77;&#x6E90;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x30DA;&#x30F3;&#x30BF;&#x30C7;&#x30AB;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;- &#x3068; L-&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3002;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;&#x6F0F;&#x6D29;&#x3059;&#x308B; 1 &#x4FA1;&#x306E;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x819C;&#x306B;&#x6BDB;&#x7A74;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x3001;&#x7D61;&#x307F;&#x5408;&#x3046;&#x4E8C;&#x91CD;&#x87BA;&#x65CB; &#xFF08;DSDH&#xFF09; &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x982D;&#x306B;&#x982D;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x5EA7;&#x7901;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; (HHSH) &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x819C;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x306E; x &#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790; (MX) &#x3068;&#x6838;&#x78C1;&#x6C17;&#x5171;&#x9CF4; (NMR) &#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;HHSH &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;NMR &#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F62;&#x72B6;&#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B7;&#x30B8;&#x30F3; &#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x306B;&#x8102;&#x8CEA;&#x30E1;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7A4D;&#x5C64;&#x819C;&#x3092;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x512A;&#x5148;&#x7684; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x4E0A;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63A8;&#x6E2C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30BD; crystallogenesis &#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30E1;&#x30BD;&#x76F8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x671F;&#x5F85;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 1 &#x3064;&#x304C; MX &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; HHSH &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B7;&#x30B8;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30E1;&#x30BD; crystallogenesis &#x3067;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x5546;&#x696D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x793E;&#x5185;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x8102;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x9396;&#x9577;&#x304B;&#x3089; 14 &#x30E1;&#x30BD;&#x76F8;&#x4E8C;&#x91CD;&#x819C;&#x539A;&#x3055;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B; 18 &#x306E;&#x70AD;&#x7D20;&#x3078;&#x5909;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7A81;&#x7136;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x8102;&#x8CEA;&#x9AD8;&#x54C1;&#x8CEA;&#x69CB;&#x9020;&#x7528;&#x7D50;&#x6676;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B7;&#x30B8;&#x30F3; DSDH &#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x8102;&#x8CEA;&#x30E1;&#x30BD;&#x76F8;&#x3067;&#x306E;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x8102;&#x8CEA;&#x3092;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x3068;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x578B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Gramicidin&#xC740; &#xAD50;&#xB300;&#xB85C; &#xBC18;&#xBCF5; &#xB418;&#xB294; D&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; apolar pentadecapeptide &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C;-&#xBC0F; L-&#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xD568;&#xC218; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1; &#xD558;&#xAE30;&#xB97C; &#xC5EC;&#xB7EC;&#xCC28;&#xB840; &#xC0C8;&#xB294; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC228; &#xAD6C;&#xBA4D; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;. &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB354;&#xBE14; &#xC88C;&#xCD08;, &#xACE0;&#xB9AC;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC774;&#xC911; &#xB098;&#xC120; (DSDH) &#xB610;&#xB294; &#xBA38;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC88C;&#xCD08; &#xB098;&#xC120; (HHSH)&#xC73C;&#xB85C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xACFC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xB378; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; x-&#xC120; &#xACB0;&#xC815;&#xD559; (MX) &#xBC0F; &#xD575; &#xC790;&#xAE30; &#xACF5;&#xBA85; (NMR)&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, HHSH &#xC591;&#xC2DD;&#xB9CC; NMR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xC591;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; gramicidin conformations&#xC758; &#xD06C;&#xAE30; &#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xADF8; &#xB2E4;&#xB978; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; bilayers&#xC640; lipidic mesophase&#xB85C; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xAC83;&#xC774; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xCD94;&#xCE21; &#xD588;&#xB2E4;. Meso crystallogenesis&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; mesophases&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xB300; MX&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; HHSH &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; gramicidin&#xC758; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xAC83;&#xC774; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xD558;&#xB098;&#xB294; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0C1;&#xC5C5; meso crystallogenesis&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xB0B4; &#xD569;&#xC131;&#xB41C; &#xC9C0;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC9C8; acyl &#xCCB4;&#xC778; &#xAE38;&#xC774; mesophases bilayer &#xB450;&#xAED8;&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; 18 &#xD0C4;&#xC18C; 14&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C;, &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870; &#xB4F1;&#xAE09; &#xACB0;&#xC815;&#xB9CC; DSDH &#xB098; &#xB780;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; gramicidin&#xC640; &#xB192;&#xC740; &#xD488;&#xC9C8;, &#xC0DD;&#xC0B0;.

&#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xC815; &#xD654; Lipidic Mesophases&#xC5D0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD638;&#xC2A4;&#xD305; &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xBC0F; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La gramicidina es un antibi&oacute;tico de pentadecapeptide apolar que consiste en alternar D- y L-amino&aacute;cidos. Funciona, en parte, mediante la creaci&oacute;n de poros en las membranas de c&eacute;lulas susceptibles renderizarlas cationes agujereados a monovalentes. El p&eacute;ptido debe ser capaces de atravesar la membrana de host como un doble trenzado, entrelazado doble h&eacute;lice (DSDH) o como un cabeza a cabeza sola h&eacute;lice trenzada (HHSH). Modelos de estructura actuales se basan en cristalograf&iacute;a macromolecular de rayos x (MX) y la resonancia magn&eacute;tica nuclear (RMN). Sin embargo, la forma HHSH s&oacute;lo se ha observado por RMN. La forma y el tama&ntilde;o de las conformaciones diferentes gramicidina difieren. Por lo tanto Especulamos que reconstituirlo en una mesofase lip&iacute;dica con bicapas de diferentes microestructuras preferencial estabilizar&iacute;a uno forma sobre el otro. Mediante el uso de tales mesofases para en meso crystallogenesis esperaba que al menos uno podr&iacute;a generar cristales de gramicidina en forma HHSH para la determinaci&oacute;n de la estructura por MX. Esto se evalu&oacute; mediante los l&iacute;pidos sintetizados comerciales e in-House que apoyan en meso crystallogenesis. Longitudes de cadena de acil de l&iacute;pidos fueron vari&oacute; entre 14 y 18 carbonos para proporcionar mesofases con una gama de gruesos de la bicapa. Inesperadamente, todos los l&iacute;pidos producen alta calidad, cristales de estructura-grado con gramicidina s&oacute;lo en la conformaci&oacute;n de DSDH.

Cristalizaci&oacute;n de prote&iacute;nas de membrana en mesofases lip&iacute;dica. Hosting l&iacute;pidos afecta en la cristalizaci&oacute;n y la estructura de un p&eacute;ptido transmembrana.

Article	Year
Structure of dimeric cytochrome c3 from Desulfovibrio gigas at 1.2 A resolution. Acta crystallographica. Section D, Biological crystallography\| PubMed ID: 12657783	2003
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The complex of Sphingomonas elodea ATCC 31461 glucose-1-phosphate uridylyltransferase with glucose-1-phosphate reveals a novel quaternary structure, unique among nucleoside diphosphate-sugar... Journal of bacteriology\| PubMed ID: 17434970	2007
Crystallographic analysis of the intact metal centres [3Fe-4S](1+/0) and [4Fe-4S](2+/1+) in a Zn(2+) -containing ferredoxin. FEBS letters\| PubMed ID: 18258200	2008
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David Aragao

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