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Conversion of a Capture ELISA to a Luminex xMAP Assay using a Multiplex Antibody Screening Method

The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) has long been the primary tool for detection of analytes of interest in biological samples for both life ...

Luminex Corporation

&#x7531;&#x87AF;&#x5408;&#x9530;&#x548C;&#x950C;&#x3001; &#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5728;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E3B;&#x673A;&#x9632;&#x5FA1;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x771F;&#x83CC;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6253;&#x4E71;&#x4E86;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4ECD;&#x7136;&#x672A;&#x77E5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#xFF0C;&#x9499;&#x53EF;&#x589E;&#x5F3A;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x5BF9;&#x901A;&#x8FC7;&#x6291;&#x5236;&#x9530;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9632;&#x5FA1;&#x8D85;&#x4ECE;&#x800C;&#x589E;&#x52A0;&#x5728;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x8D85;&#x6C27;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x8D85;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x6B67;&#x5316;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x662F;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x5168;&#x9762;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x6A21;&#x578B;&#x7684; S.&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#xFF0C;&#x6BD2;&#x529B;&#x548C;&#x4E2D;&#x65AD;&#x7684;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x8D85;&#x9632;&#x5FA1;&#x7684;&#x9499;&#x8865;&#x5145;&#x4E86;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4F53;&#x5185;&#x95F4;&#x9699;&#x7684;&#x6297;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5728;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8FC7;&#x6E21;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5728;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x9530;&#x548C;&#x950C;&#x7F3A;&#x9677;&#x4E0D;&#x6291;&#x5236;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x751F;&#x957F;&#xFF0C;&#x6BEB;&#x4E0D;&#x542B;&#x7CCA;&#x5730;&#x6302;&#x94A9;&#x91D1;&#x5C5E;&#x87AF;&#x5408;&#x9499;&#x7684;&#x6297;&#x83CC;&#x6027;&#x80FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x9499;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4E3B;&#x673A;&#x9632;&#x5FA1;&#x901A;&#x8FC7;&#x5448;&#x73B0;&#x7EC6;&#x83CC;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x5BF9;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x514D;&#x75AB;&#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x66F4;&#x52A0;&#x654F;&#x611F;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x7EC6;&#x83CC;&#x751F;&#x957F;&#x3002;

&#x517B;&#x5206;&#x91D1;&#x5C5E;&#x87AF;&#x5408;&#x9499;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8D85;&#x9632;&#x5FA1;&#xFF0C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6740;&#x706D;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x3002;

By sequestering manganese and zinc, the neutrophil protein calprotectin plays a crucial role in host defense against bacterial and fungal pathogens. However, the essential processes disrupted by calprotectin remain unknown. We report that calprotectin enhances the sensitivity of Staphylococcus aureus to superoxide through inhibition of manganese-dependent bacterial superoxide defenses, thereby increasing superoxide levels within the bacterial cell. Superoxide dismutase activity is required for full virulence in a systemic model of S.Â aureus infection, and disruption of staphylococcal superoxide defenses by calprotectin augments the antimicrobial activity of neutrophils promoting inÂ vivo clearance. Calprotectin mutated in two transition metal binding sites and therefore defective in binding manganese and zinc does not inhibit microbial growth, unequivocally linking the antimicrobial properties of calprotectin to metal chelation. These results suggest that calprotectin contributes to host defense by rendering bacterial pathogens more sensitive to host immune effectors and reducing bacterial growth.

Nutrient metal sequestration by calprotectin inhibits bacterial superoxide defense, enhancing neutrophil killing of Staphylococcus aureus.

Par s&eacute;questration de mangan&egrave;se et de zinc, de la calprotectine neutrophiles prot&eacute;ine joue un r&ocirc;le crucial dans la d&eacute;fense de l&#39;h&ocirc;te contre les agents pathog&egrave;nes bact&eacute;riens et fongiques. Toutefois, les processus essentiels, perturb&eacute;es par la calprotectine demeurent inconnus. Les auteurs rapportent que calprotectine am&eacute;liore la sensibilit&eacute; du Staphylococcus aureus de superoxyde par inhibition des d&eacute;fenses de mangan&egrave;se d&eacute;pendante superoxyde bact&eacute;rienne, ce qui augmente les niveaux de superoxyde dans la cellule bact&eacute;rienne. Activit&eacute; de la superoxyde dismutase est requise pour toute virulence dans un mod&egrave;le syst&eacute;mique de l&#39;infestation par S. aureus et perturbation des d&eacute;fenses de superoxyde staphylococcique de la calprotectine augmente l&#39;activit&eacute; antimicrobienne de neutrophiles promotion clearance in vivo. Calprotectine mut&eacute; dans deux sites de liaison m&eacute;tal de transition et donc d&eacute;fectueux dans la liaison de mangan&egrave;se et zinc n&#39;inhibe pas la croissance microbienne, sans &eacute;quivoque, qui relie les propri&eacute;t&eacute;s antimicrobiennes de la calprotectine de ch&eacute;lation m&eacute;tallique. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que calprotectine contribue &agrave; la d&eacute;fense de l&#39;h&ocirc;te en rendant les bact&eacute;ries pathog&egrave;nes plus sensibles aux effecteurs immunitaires h&ocirc;te et en r&eacute;duisant la croissance bact&eacute;rienne.

Nutriments s&eacute;questration m&eacute;tal par calprotectine inhibe la d&eacute;fense bact&eacute;rienne superoxyde, am&eacute;liorant les neutrophil assassinat de Staphylococcus aureus.

Von absondern, Mangan und Zink, die Calprotectin neutrophil Protein spielt eine entscheidende Rolle in der Host-Verteidigung gegen Pathogene Bakterien und Pilze. Die wesentlichen Prozesse, die durch Calprotectin gest&ouml;rt bleiben jedoch unbekannt. Wir berichten, dass das Calprotectin erh&ouml;ht die Empfindlichkeit von Staphylococcus Aureus zu Superoxid durch Hemmung der Mangan-abh&auml;ngige bakterielle Superoxid-Abwehr, wodurch Superoxid Ebenen innerhalb der Bakterienzelle. Superoxid-Dismutase-Aktivit&auml;t ist erforderlich f&uuml;r volle Virulenz in einem systemischen Modell von S. Aureus-Infektion und St&ouml;rung der Staphylokokken Superoxid Abwehr von Calprotectin erweitert die antimikrobielle Aktivit&auml;t der Neutrophilen, die F&ouml;rderung der in-vivo-Abfertigung. Calprotectin mutiert in zwei &Uuml;bergangsmetall-Bindungsstellen und daher Defekt im binden, Mangan und Zink nicht beeintr&auml;chtigt Wachstum von Mikroorganismen, verkn&uuml;pfen unmissverst&auml;ndlich die antimikrobiellen Eigenschaften von Calprotectin mit Metall-Chelat. Diese Ergebnisse legen nahe, dass Calprotectin Host Verteidigung tr&auml;gt, Reduzierung von Bakterienwachstum und Rendern von bakterielle Krankheitserregern empfindlicher auf Host immun Effektoren.

N&auml;hrstoff-Metall-Sequestrierung von Calprotectin hemmt bakterielle Superoxid-Abwehr, Verbesserung der neutrophil T&ouml;tung von Staphylococcus Aureus.

Sequestrando manganese e zinco, la calprotectina neutrofili proteina gioca un ruolo cruciale nella difesa ospite contro agenti patogeni batterici e fungini. Tuttavia, i processi essenziali perturbati da calprotectina rimangono sconosciuti. Segnaliamo che calprotectina migliora la sensibilit&agrave; dello Staphylococcus aureus a superossido attraverso l&#39;inibizione delle difese batteriche superossido manganese-dipendente, aumentando cos&igrave; i livelli di superossido all&#39;interno della cellula batterica. Attivit&agrave; di superossido dismutasi &egrave; necessaria per la piena virulenza in un modello sistemico dell&#39;infezione da S. aureus, e rottura delle difese stafilococciche superossido di calprotectina potenzia l&#39;attivit&agrave; antimicrobica dei neutrofili promuovere la liquidazione in vivo. Calprotectina mutato in due siti di legame del metallo di transizione e quindi difettoso in associazione al manganese e zinco non inibiscono la crescita microbica, inequivocabilmente che collega le propriet&agrave; antimicrobiche della calprotectina a chelazione metallica. Questi risultati suggeriscono che calprotectina contribuisce alla difesa ospite rendering pi&ugrave; sensibili agli effettori immuni ospite di agenti patogeni batterici e riducendo la crescita batterica.

Sequestro del metallo dei nutrienti di calprotectina inibisce la difesa superossido batteriche, migliorando l&#39;uccisione del neutrofilo di Staphylococcus aureus.

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&#x6804;&#x990A;&#x306E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x9694;&#x96E2;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3067;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC;&#x306E;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x9632;&#x5FA1;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB9DD;&#xAC04;&#xACFC; &#xC544;&#xC5F0;, &#xD638; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; calprotectin sequestering &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xADE0;&#xACFC; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC29;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, calprotectin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xB2E8; &#xB420; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; calprotectin &#xB9DD;&#xAC04; &#xC885;&#xC18D; &#xC138;&#xADE0; &#xCD08;&#xACFC; &#xBC29;&#xC5B4;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xCD08;&#xACFC; &#xD558;&#xB294; &#xD669;&#xC0C9; &#xD3EC;&#xB3C4;&#xC0C1;&#xAD6C;&#xADE0;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC138;&#xADE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xCD08;&#xACFC; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Superoxide dismutase &#xD65C;&#xB3D9; S. &#xAD6C; &#xADE0; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378; &#xC804;&#xCCB4; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xBA70; calprotectin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3EC;&#xB3C4; superoxide &#xBC29;&#xC5B4;&#xC758; &#xC911;&#xB2E8; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5C8;&#xAC00; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC758; &#xD56D;&#xADE0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC99D;&#xB300; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Calprotectin &#xB450; &#xC804;&#xC774; &#xAE08;&#xC18D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB9DD;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC544;&#xC5F0;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD568;&#xC5D0; &#xBA85;&#xBC31; &#xD558; &#xAC8C; &#xAE08;&#xC18D; chelation calprotectin&#xC758; &#xD56D;&#xADE0; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; calprotectin &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC5D0; &#xB354; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xB97C; &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1; &#xD558; &#xACE0; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xC5EC; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC29;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xC2DC;&#xAE30; &#xBC14;&#xB78D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Calprotectin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xC591;&#xC18C; &#xAE08;&#xC18D; &#xACA9;&#xB9AC; &#xC138;&#xADE0; &#xCD08;&#xACFC; &#xBC29;&#xC704;&#xB97C;, &#xD3EC;&#xB3C4; &#xC0C1; &#xAD6C; &#xADE0;&#xC758; &#xD638; &#xC0B4;&#xC778; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

Por el secuestro de manganeso y zinc, la prote&iacute;na neutr&oacute;filo calprotectina desempe&ntilde;a un papel crucial en la defensa del hu&eacute;sped frente a bacterias y hongos pat&oacute;genos. Sin embargo, los procesos esenciales interrumpidos por calprotectina siguen siendo desconocidos. Divulgamos que calprotectina incrementa la sensibilidad de Staphylococcus aureus a super&oacute;xido mediante la inhibici&oacute;n de las defensas dependiente de manganeso super&oacute;xido bacteriana, lo que aumenta los niveles de super&oacute;xido dentro de la c&eacute;lula bacteriana. Actividad super&oacute;xido dismutasa se requiere para la virulencia completo en un modelo sist&eacute;mico de la infecci&oacute;n por S. aureus, y alteraci&oacute;n de defensas estafiloc&oacute;cica super&oacute;xido por calprotectina aumenta la actividad antimicrobiana de neutr&oacute;filos promover la separaci&oacute;n en vivo. Calprotectina mutado en dos sitios de uni&oacute;n de metales de transici&oacute;n y por lo tanto defectuoso en vinculantes de manganeso y zinc no inhibe el crecimiento microbiano, inequ&iacute;vocamente vincular las propiedades antimicrobianas de calprotectina con quelaci&oacute;n de metal. Estos resultados sugieren que calprotectina contribuye a la defensa del hu&eacute;sped haciendo m&aacute;s sensibles a los efectores inmunes anfitri&oacute;n bacterias pat&oacute;genas y reduciendo el crecimiento bacteriano.

Secuestro de metal nutriente por calprotectina inhibe la defensa super&oacute;xido bacteriana, aumento de neutr&oacute;filo matanza de Staphylococcus aureus.

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Carlos Garcia

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