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Procedure for Fabricating Biofunctional Nanofibers

Electrospinning is an effective processing method for preparing nanofibers decorated with functional groups. Nanofibers decorated with functional groups ...

Cornell University

&#x80A5;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE; IgE &#x53D7;&#x4F53;&#x901A;&#x8FC7;&#x523A;&#x6FC0;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x591A;&#x4E2A;&#x6D41;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x3001; &#x9897;&#x7C92;&#x80DE;&#x548C;&#x5916;&#x5411;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684; endosomes&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x5171;&#x8F6D;&#x970D;&#x4E71;&#x6BD2;&#x7D20; B (FITC CTxB) &#x4E2D;&#x56DE;&#x6536; endsomes &#x6807;&#x7B7E; GM(1) &#x5E76;&#x76D1;&#x89C6;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C; fluorimeter &#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;D &#x9798;&#x9798;&#x6C28;&#x9187;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x548C; N&#xFF0C;N&#39;-dimethylsphingosine &#x6709;&#x6548;&#x6291;&#x5236;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5916;&#x5411;&#x7684;&#x8D29;&#x8FD0;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E00;&#x79CD;&#x5B63;&#x80FA;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;N&#x3001; N&#39;&#xFF0C;N&Prime;-trimethylsphingosine&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x59A8;&#x788D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E5F;&#x662F;&#x627E;&#x5230;&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x548C;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x4E00;&#x822C;&#x5F71;&#x54CD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; Ca(2+) &#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x8F93;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6B64;&#x6291;&#x5236;&#x4E0E;&#x7FFB;&#x8F6C;&#x5230;&#x5185;&#x90E8;&#x5C0F;&#x518C;&#x5B50;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x53D8;&#x5316;&#x8868;&#x73B0;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x76F8;&#x5173;&#x5F02;&#x786B;&#x6C30;&#x9178; CTxB &#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28; pH &#x7684;&#x8D28;&#x819C;&#x9798;&#x6C28;&#x9187;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0; marcks &#x78F7;&#x9178;&#x6548;&#x5E94;&#x57DF;&#x6765;&#x76D1;&#x89C6;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684; polyphosphoinositides&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9798;&#x6C28;&#x9187;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x53D6;&#x4EE3;&#x6B64; marcks &#x78F7;&#x9178;&#x6548;&#x5E94;&#x57DF;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E0E;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; Ca(2+) &#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5E76;&#x884C;&#x7684;&#x9759;&#x7535;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C; polyphosphoinositides &#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x80DE;&#xFF0C;&#x89D2;&#x8272;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7167;&#x4EAE;&#x7684; D-&#x9798;&#x6C28;&#x9187;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x53CD;&#x5E94;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x9798;&#x6C28;&#x9187;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7531;&#x9759;&#x7535;&#x6D88;&#x9664;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684; polyphosphoinositides &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

Mast cell stimulation via IgE receptors causes activation of multiple processes, including Ca(2+) mobilization, granule exocytosis, and outward trafficking of recycling endosomes to the plasma membrane. We used fluorescein-conjugated cholera toxin B (FITC-CTxB) to label GM(1) in recycling endsomes and to monitor antigen-stimulated trafficking to the plasma membrane in both fluorimeter and imaging-based assays. We find that the sphingosine derivatives D-sphingosine and N,N'-dimethylsphingosine effectively inhibit this outward trafficking response, whereas a quarternary ammonium derivative, N,N',Nâ€³-trimethylsphingosine, does not inhibit. This pattern of inhibition is also found for Ca(2+) mobilization and secretory lysosomal exocytosis, indicating a general effect on Ca(2+)-dependent signaling processes. This inhibition correlates with the capacity of sphingosine derivatives to flip to the inner leaflet of the plasma membrane that is manifested as changes in plasma membrane-associated FITC-CTxB fluorescence and cytoplasmic pH. Using a fluorescently labeled MARCKS effector domain to monitor plasma membrane-associated polyphosphoinositides, we find that these sphingosine derivatives displace the electrostatic binding of this MARCKS effector domain to the plasma membrane in parallel with their capacity to inhibit Ca(2+)-dependent signaling. Our results support roles for plasma membrane polyphosphoinositides in Ca(2+) signaling and stimulated exocytosis, and they illuminate a mechanism by which D-sphingosine regulates signaling responses in mammalian cells.

Sphingosine derivatives inhibit cell signaling by electrostatically neutralizing polyphosphoinositides at the plasma membrane.

La stimulation des cellules de m&acirc;t par l&#39;interm&eacute;diaire de r&eacute;cepteurs d&#39;IgE entra&icirc;ne l&#39;activation de plusieurs processus, dont Ca(2+) mobilisation des granules cytotoxiques et le trafic sortant du recyclage des endosomes vers la membrane plasmique. Nous avons utilis&eacute; B (FITC-CTxB) de la toxine chol&eacute;rique fluoresc&eacute;ine conjugu&eacute;e au label GM(1) en endsomes de recyclage et de surveiller stimul&eacute;e par l&#39;antig&egrave;ne traite tant fluorim&egrave;tre et tests bas&eacute;s sur l&#39;imagerie &agrave; la membrane plasmique. Nous constatons que les d&eacute;riv&eacute;s de la sphingosine sphingosine-D et N, N&#39;-dimethylsphingosine inhibent efficacement cette r&eacute;ponse de trafic vers l&#39;ext&eacute;rieur, alors qu&#39;un d&eacute;riv&eacute; d&#39;ammonium quaternaire, N, N&#39;, N&Prime;-trimethylsphingosine, n&#39;inhibe pas. Ce mod&egrave;le d&#39;inhibition se retrouve pour la mobilisation Ca(2+) et s&eacute;cr&eacute;toire exocytose lysosomal, indiquant un effet g&eacute;n&eacute;ral sur le processus de signalisation Ca(2+)-d&eacute;pendante. Cette inhibition est corr&eacute;l&eacute;e avec la capacit&eacute; des d&eacute;riv&eacute;s de la sphingosine &agrave; faire basculer le feuillet interne de la membrane plasmique qui se manifeste comme changements associ&eacute;s &agrave; la membrane plasmique de fluorescence FITC-CTxB et du pH cytoplasmique. Utiliser un domaine d&#39;effecteur MARCKS fluorescent &eacute;tiquet&eacute; pour surveiller les polyphosphoinositides associ&eacute;es &agrave; la membrane plasmique, nous constatons que ces d&eacute;riv&eacute;s de la sphingosine d&eacute;placent la fixation &eacute;lectrostatique de ce domaine effecteur MARCKS vers la membrane plasmique en parall&egrave;le avec leur capacit&eacute; &agrave; inhiber la Ca(2+)-d&eacute;pendante de signalisation. Nos r&eacute;sultats confirment les r&ocirc;les pour membrane plasmique polyphosphoinositides dans Ca(2+) de signalisation et d&#39;exocytose stimul&eacute;e, et elles &eacute;clairent un m&eacute;canisme par lequel D-sphingosine r&eacute;glemente les r&eacute;ponses de signalisation dans les cellules de mammif&egrave;res.

D&eacute;riv&eacute;s de la sphingosine inhibent en neutralisant &eacute;lectrostatiquement polyphosphoinositides &agrave; la membrane plasmique de signalisation cellulaire.

Mastzelle Stimulierung &uuml;ber IgE-Rezeptoren verursacht Aktivierung mehrerer Prozesse, einschlie&szlig;lich Ca(2+) Mobilisierung, Granulat-Exozytose oder nach au&szlig;en Handel Recycling Endosomen an der Plasmamembran. Wir verwendeten Fluoreszein-konjugierten Cholera-Toxin B (FITC-CTxB), GM(1) zu kennzeichnen, im recycling Endsomes und Antigen-stimuliert um die Plasmamembran Menschenhandel Fluorimeter und Imaging-basierte Assays zu &uuml;berwachen. Wir finden, das Sphingosin Derivate D-Sphingosin und N, N&#39;-Dimethylsphingosine effektiv hemmen diese nach au&szlig;en Menschenhandel Antwort, w&auml;hrend eine quart&auml;re Ammonium-Derivat, N, N&#39;, N&Prime;-Trimethylsphingosine, nicht beeintr&auml;chtigt. Dieses Muster der Hemmung ist auch f&uuml;r Ca(2+)-Mobilisierung und sekretorischen lysosomale Exozytose, angibt, eine allgemeine Wirkung auf Ca(2+)-abh&auml;ngige Signalling Prozesse gefunden. Diese Hemmung korreliert mit der F&auml;higkeit der Sphingosin-Derivate, die innere Merkblatt der Plasmamembran zu kippen, die als &Auml;nderungen in der Plasmamembran-assoziierten FITC-CTxB Fluoreszenz und zytoplasmatischen pH manifestiert. Mithilfe einer Leuchtstoff beschrifteten MARCKS-Effektor-Dom&auml;ne Plasmamembran-assoziierten Polyphosphoinositides &uuml;berwachen, finden wir, dass diese Sphingosin-Derivate die elektrostatische Bindung dieser MARCKS-Effektor-Dom&auml;ne auf der Plasmamembran parallel zu ihrer F&auml;higkeit zur Signalisierung von Ca(2+) abh&auml;ngigen hemmen verdr&auml;ngen. Unsere Ergebnisse unterst&uuml;tzen Rollen f&uuml;r Plasmamembran Polyphosphoinositides in Ca(2+) Signalisierung und stimulierte Exozytose und sie beleuchten einen Mechanismus, mit dem D-Sphingosin Signalling Antworten in den S&auml;ugetier-Zellen reguliert.

Sphingosin Derivate hemmen Zelle Signalisierung durch elektrostatisch Neutralisierung Polyphosphoinositides an der Plasmamembran.

Mastociti stimolazione tramite i recettori IgE provoca attivazione dei processi multipli, tra cui Ca(2+) mobilitazione esocitosi dei granuli e traffico verso l&#39;esterno di riciclaggio endosomes alla membrana del plasma. Abbiamo utilizzato la tossina colera coniugato con fluoresceina (FITC-CTxB) B etichetta GM(1) nel riciclaggio endsomes e monitorare antigene-stimolato traffico alla membrana del plasma fluorimetro e di imaging-based assays. Troviamo che la sfingosina derivati D-sfingosina e N, N&#39;-dimethylsphingosine efficacemente inibire questa risposta di traffico verso l&#39;esterno, mentre un derivato di ammonio quarternario, N, n&#39; &#39;, N&Prime;-trimethylsphingosine, non inibisce. Questo modello di inibizione &egrave; trovato anche per Ca(2+) mobilizzazione e secretiva esocitosi lisosomiale, che indica un effetto generale sui processi di segnalazione Ca(2+)-dipendente. Questa inibizione si correla con la capacit&agrave; di derivati di sfingosina flip per l&#39;opuscolo interno della membrana del plasma che si manifesta come cambiamenti nella membrana plasmatica associati FITC-CTxB fluorescenza e pH citoplasmatico. Utilizza un dominio di effector MARCKS fluorescente contrassegnato per monitorare polyphosphoinositides membrana plasmatica associati, troviamo che questi derivati sfingosina spiazzare il legame elettrostatico di questo dominio effector MARCKS alla membrana del plasma in parallelo con la loro capacit&agrave; di inibire la segnalazione Ca(2+)-dipendente. I nostri risultati supportano ruoli per la membrana del plasma polyphosphoinositides in Ca(2+) di segnalazione ed esocitosi stimolato, e si illumina un meccanismo mediante il quale D-sfingosina regola la segnalazione responses in cellule di mammifero.

Derivati di sfingosina inibiscono cell signaling neutralizzando elettrostaticamente polyphosphoinositides alla membrana del plasma.

&#x30DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x523A;&#x6FC0; IgE &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x54E1;&#x3001;&#x9846;&#x7C92;&#x958B;&#x53E3;&#x5206;&#x6CCC;&#x3001;&#x5916;&#x5074;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30EC;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3;&#x5171;&#x5F79;&#x30B3;&#x30EC;&#x30E9;&#x6BD2;&#x7D20; B (FITC-CTxB&#xFF09; GM(1) endsomes &#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306B;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3068;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x306F;&#x86CD;&#x5149;&#x3068;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x8A66;&#x91D1;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x304C;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x30B7;&#x30F3; &#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; D &#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068; N, N&#39;-dimethylsphingosine &#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x7B2C; 4 &#x7D1A;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D3E;&#x751F;&#x7269;&#x3001;N, N&#39;, N&Prime; trimethylsphingosine &#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3082;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x54E1;&#x3068; Ca(2+) &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x904E;&#x7A0B;&#x4E0A;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0; &#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F; FITC CTxB &#x86CD;&#x5149;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; pH &#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x5185;&#x5074;&#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x30D5;&#x30EA;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x30B7;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x306B;&#x5206;&#x985E;&#x3055;&#x308C;&#x305F; MARCKS &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F; polyphosphoinositides &#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x30B7;&#x30F3; &#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3053;&#x306E; MARCKS &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x4E26;&#x5217; Ca(2+) &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x9759;&#x96FB;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C; polyphosphoinositides &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x523A;&#x6FC0;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; D &#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x30B7;&#x30F3;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7167;&#x3089;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x30B7;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x9759;&#x96FB;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x3067; polyphosphoinositides &#x3092;&#x4E2D;&#x548C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

IgE &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xBA74; Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0;&#xACFC; &#xB9BD; exocytosis &#xBC0F; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; endosomes &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC758; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GM(1) endsomes &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC744; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; fluorimeter &#xBC0F; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBC00;&#xB9E4; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC790;&#xADF9; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; fluorescein conjugated &#xCF5C;&#xB808;&#xB77C; &#xB3C5; &#xC18C; B (FITC-CTxB)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488; sphingosine D sphingosine&#xC640; N, N&#39;-&#xBC18;&#xBA74; dimethylsphingosine&#xC774; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC00;&#xB9E4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5B5;&#xC81C; quarternary &#xC554;&#xBAA8;&#xB284; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4;, N, N&#39;, N&Prime; trimethylsphingosine&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0; &#xBC0F; Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xD638; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBD84; lysosomal exocytosis &#xC800;&#xD574;&#xC758;&#xC774; &#xD328;&#xD134; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC800;&#xD574; FITC CTxB &#xD615;&#xAD11; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; Ph&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC01; &#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC804;&#xB2E8;&#xC9C0; &#xD50C;&#xB9BD; sphingosine &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488;&#xC758; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC5F0;&#xAD00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Polyphosphoinositides &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xBD99;&#xC77C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xB41C; MARCKS &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC; sphingosine &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488;&#xC774; &#xCE58;&#xD658; Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC218; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC774; MARCKS &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC815;&#xC804;&#xAE30; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xCC3E;&#xC744;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; Ca(2+) &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; exocytosis &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; polyphosphoinositides&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0; D sphingosine &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBC1D;&#xD788;&#xB294;.

Sphingosine &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488; &#xC140; electrostatically polyphosphoinositides &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C;.

Mastocito est&iacute;mulo trav&eacute;s de receptores de IgE causa activaci&oacute;n de procesos m&uacute;ltiples, incluyendo la movilizaci&oacute;n CA, exocitosis de gr&aacute;nulos y tr&aacute;fico exterior de reciclaje endosomas a la membrana plasm&aacute;tica. Utilizamos toxina del c&oacute;lera conjugado con fluoresce&iacute;na (FITC-CTxB) de B a la etiqueta GM(1) en el endsomes de reciclaje y monitorizar ant&iacute;geno-estimulado trata a la membrana plasm&aacute;tica tanto Fluor&iacute;metro y proyecci&oacute;n de imagen de ensayos. Encontramos que los derivados de la esfingosina D-esfingosina y N, N&#39;-dimethylsphingosine inhibir eficazmente esta respuesta tr&aacute;fico hacia afuera, mientras que un derivado de amonio cuaternario, N, N&#39;, N&Prime;-trimethylsphingosine, no inhibe. Se encuentra tambi&eacute;n este patr&oacute;n de inhibici&oacute;n para la movilizaci&oacute;n de CA y exocitosis lysosomal secretora, lo que indica un efecto general en procesos de se&ntilde;alizaci&oacute;n Ca(2+)-dependiente. Esta inhibici&oacute;n se correlaciona con la capacidad de los derivados de la esfingosina a voltear al prospecto interno de la membrana plasm&aacute;tica que se manifiesta como cambios en la fluorescencia de FITC-CTxB asociada a la membrana plasm&aacute;tica y pH citopl&aacute;smico. Con un dominio de efector MARCKS fluorescencia etiquetado para supervisar polifosfoinos&iacute;tidos asociada a membrana plasm&aacute;tica, encontramos que estos derivados de la esfingosina desplazan la Uni&oacute;n electrost&aacute;tica de este dominio efector MARCKS a la membrana plasm&aacute;tica en paralelo con su capacidad para inhibir la se&ntilde;alizaci&oacute;n Ca(2+)-dependiente. Nuestros resultados apoyan papeles para polifosfoinos&iacute;tidos de la membrana plasm&aacute;tica en CA se&ntilde;alizaci&oacute;n y exocitosis estimulado e iluminan un mecanismo por el cual D-esfingosina regula las respuestas de se&ntilde;alizaci&oacute;n en c&eacute;lulas de mam&iacute;feros.

Derivados de la esfingosina inhiben la se&ntilde;alizaci&oacute;n neutralizando electrost&aacute;ticamente polifosfoinos&iacute;tidos en la membrana plasm&aacute;tica de la c&eacute;lula.

&#x53C2;&#x4E0E;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x80A5;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8131;&#x9897;&#x7C92;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; E&#xFF0C;Fc&epsilon;RI&#xFF0C;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &beta; (PKC&beta;) &#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x7840;&#x5374;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x591A;&#x5143;&#x6548;&#x5E94;&#x57DF; (ED) &#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x79F0;&#x4E3A; myristoylated &#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5BCC;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x57FA;&#x677F; (marcks &#x78F7;&#x9178;) &#x56FA;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x5185;&#x5355;&#x5F20;&#x808C;&#x9187;&#x76F4;&#x5230; marcks &#x78F7;&#x9178;&#x52A0;&#x5165;&#x540E;&#x901A;&#x8FC7;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6FC0;&#x6D3B; PKC &#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;&#x5B9E;&#x65F6;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x7ECF;&#x80DE;&#x5185;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D7;&#x6FC0;&#x7684;&#x632F;&#x8361;&#x548C; PKC&beta; &#x589E;&#x5F3A;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x632F;&#x8361;&#x534F;&#x4F1A;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x540C;&#x6B65;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;marcks &#x78F7;&#x9178; ED &#x6807;&#x8BB0;&#x6709;&#x5355;&#x4F53;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x632F;&#x8361;&#x89E3;&#x79BB;&#x548C;&#x91CD;&#x65B0;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E0E; PKC&beta; &#x53EF;&#x9006;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x534F;&#x4F1A;&#x4E0E;&#x540C;&#x6B65;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230; marcks &#x78F7;&#x9178; ED &#x5206;&#x79BB;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x662F;&#x7531; PKC &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x5730;&#x70B9;&#x3002;&#x8868;&#x793A;&#x6B64;&#x7A81;&#x53D8; marcks &#x78F7;&#x9178; ED SA4 &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x8FDF;&#x53D1;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x548C;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x9897;&#x7C92;&#x80DE;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;Marcks &#x78F7;&#x9178; ED SA4&#xFF0C;&#x5728;&#x573A;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x8FD8;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E;&#x4E86; thapsigargin&#xFF0C;&#x8DF3;&#x8FC7;&#x808C;&#x9187; 1,4,5 &#x5185;&#x751F;&#x4EA7;&#xFF0C;&#x7531;&#x8131;&#x9897;&#x7C92;&#x523A;&#x6FC0;&#x4F46;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x7ECF;&#x6761;&#x76EE;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5230;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x8C03;&#x8282;&#x9897;&#x7C92;&#x80DE; PKC &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x76D1;&#x7BA1;&#x87AF;&#x5408;&#x7684;&#x8C03;&#x89E3;&#x9897;&#x7C92;&#x878D;&#x5408;&#x5728;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x78F7;&#x8102;&#x808C;&#x9187; marcks &#x78F7;&#x9178; ED &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x87AF;&#x5408;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8; marcks &#x78F7;&#x9178;&#x6548;&#x5E94;&#x57DF;&#x7531;&#x808C;&#x9187;&#x6291;&#x5236;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x548C;&#x80A5;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8131;&#x9897;&#x7C92;&#x3002;

Protein kinase C Î² (PKCÎ²) participates in antigen-stimulated mast cell degranulation mediated by the high-affinity receptor for immunoglobulin E, FcÎµRI, but the molecular basis is unclear. We investigated the hypothesis that the polybasic effector domain (ED) of the abundant intracellular substrate for protein kinase C known as myristoylated alanine-rich protein kinase C substrate (MARCKS) sequesters phosphoinositides at the inner leaflet of the plasma membrane until MARCKS dissociates after phosphorylation by activated PKC. Real-time fluorescence imaging confirms synchronization between stimulated oscillations of intracellular Ca(2+) concentrations and oscillatory association of PKCÎ²-enhanced green fluorescent protein with the plasma membrane. Similarly, MARCKS-ED tagged with monomeric red fluorescent protein undergoes antigen-stimulated oscillatory dissociation and rebinding to the plasma membrane with a time course that is synchronized with reversible plasma membrane association of PKCÎ². We find that MARCKS-ED dissociation is prevented by mutation of four serine residues that are potential sites of phosphorylation by PKC. Cells expressing this mutated MARCKS-ED SA4 show delayed onset of antigen-stimulated Ca(2+) mobilization and substantial inhibition of granule exocytosis. Stimulation of degranulation by thapsigargin, which bypasses inositol 1,4,5-trisphosphate production, is also substantially reduced in the presence of MARCKS-ED SA4, but store-operated Ca(2+) entry is not inhibited. These results show the capacity of MARCKS-ED to regulate granule exocytosis in a PKC-dependent manner, consistent with regulated sequestration of phosphoinositides that mediate granule fusion at the plasma membrane.

Sequestration of phosphoinositides by mutated MARCKS effector domain inhibits stimulated Ca(2+) mobilization and degranulation in mast cells.

Prot&eacute;ine kinase C &beta; (PKC&beta;) participe &agrave; la d&eacute;granulation des mastocytes stimul&eacute;e par l&#39;antig&egrave;ne m&eacute;di&eacute;e par le r&eacute;cepteur de haute affinit&eacute; pour les immunoglobulines E, Fc&epsilon;RI, mais la base mol&eacute;culaire n&#39;est pas claire. Nous avons examin&eacute; l&#39;hypoth&egrave;se que le domaine effecteur polybasiques (ED) du substrat abondant intracellulaire de la prot&eacute;ine kinase C connu comme substrat de myristoylated riche en alanine prot&eacute;ine kinase C (MARCKS) s&eacute;questre phosphoinositides dans le feuillet interne de la membrane plasmique jusqu&#39;&agrave; MARCKS se dissocie apr&egrave;s phosphorylation par activation PKC. Imagerie de fluorescence en temps r&eacute;el confirme la synchronisation entre stimul&eacute;e par des oscillations de concentrations intracellulaires de Ca(2+) et l&#39;association oscillatoire de la prot&eacute;ine fluorescente verte PKC&beta; am&eacute;lior&eacute;e avec la membrane plasmique. De m&ecirc;me, le tag monom&egrave;re rouge fluorescent protein subit une dissociation oscillatoire stimul&eacute;e par l&#39;antig&egrave;ne et une nouvelle liaison &agrave; la membrane plasmique avec une &eacute;volution qui est synchronis&eacute;e avec la membrane plasmique r&eacute;versible association de PKC&beta; MARCKS-ED. Nous trouvons que la dissociation MARCKS-ED est emp&ecirc;ch&eacute;e par mutation de quatre r&eacute;sidus s&eacute;rine qui sont des sites potentiels de phosphorylation par la PKC. Cellules exprimant cette SA4 MARCKS-ED mut&eacute; montrent l&#39;apparition retard&eacute;e de la mobilisation Ca(2+) stimul&eacute;e par l&#39;antig&egrave;ne et inhibition substantielle des granules cytotoxiques. Stimulation de la d&eacute;granulation de thapsigargine, qui contourne la production d&#39;inositol 1,4,5-trisphosphate, est aussi consid&eacute;rablement r&eacute;duite en pr&eacute;sence de SA4 MARCKS-ED, mais fonctionnant sur magasin Ca(2+) entr&eacute;e n&#39;est pas inhib&eacute;e. Ces r&eacute;sultats montrent la capacit&eacute; de MARCKS-ED de r&eacute;glementer des granules cytotoxiques de mani&egrave;re d&eacute;pendante de la PKC, compatible avec s&eacute;questration r&eacute;glement&eacute;e des phosphoinositides qui m&eacute;dient fusion de granules &agrave; la membrane plasmique.

S&eacute;questration des phosphoinositides par mut&eacute; domaine effecteur MARCKS inhibe Ca(2+) stimul&eacute;e par la mobilisation et la d&eacute;granulation des mastocytes.

Protein-Kinase C-&beta; (PKC&beta;) beteiligt sich an Antigen-stimuliert Mastzellen Degranulation von hoher Affinit&auml;t Rezeptor f&uuml;r Immunglobulin E, acht, vermittelt aber die molekulare Ursache ist unklar. Wir untersuchten die Hypothese, dass die polybasic Effektor-Dom&auml;ne (ED) der das reichlich vorhandene intrazellul&auml;re Substrat f&uuml;r Proteinkinase C bekannt als Myristoylated-Alanin-reiche Protein-Kinase C-Substrat (MARCKS) Phosphoinositides an den inneren Prospekt der Plasmamembran Sequester bis nach Phosphorylierung von MARCKS distanziert PKC aktiviert. Echtzeit-Fluoreszenz-Bildgebung best&auml;tigt Synchronisierung zwischen angeregten Schwingungen der intrazellul&auml;ren Ca(2+) Konzentrationen und oszillierende Assoziation der PKC&beta; erh&ouml;hter gr&uuml;n fluoreszierendes Protein mit der Plasmamembran. Ebenso die MARCKS-ED mit Monomer rot fluoreszierendes Protein erf&auml;hrt Antigen stimuliert Oszillatorische Dissoziation und Neubindung an der Plasmamembran mit einem Mal-Kurs, der mit reversiblen Plasmamembran Verband der PKC&beta; synchronisiert wird. Wir finden, dass MARCKS-ED Dissoziation durch Mutation von vier Serin-R&uuml;ckst&auml;nden verhindert wird, die potenziellen Websites der Phosphorylierung von PKC. Ausdruck dieser mutierten MARCKS-ED-SA4 Zellen zeigen Auftreten von Antigen stimuliert Ca(2+) Mobilisierung und erhebliche Hemmung der Untermodul Exozytose. Stimulation der Degranulation von Thapsigargin, die Inosit 1,4,5-Trisphosphate Produktion umgeht, ist auch deutlich reduziert, in Anwesenheit von MARCKS-ED SA4, aber Speicher zu bet&auml;tigende Ca(2+) Eintrag wird nicht gehemmt. Diese Ergebnisse zeigen die Kapazit&auml;t des MARCKS-ED Untermodul Exozytose in PKC-abh&auml;ngige, &Uuml;bereinstimmung mit geregelten Sequestrierung von Phosphoinositides zu regulieren, das Untermodul Verschmelzung an der Plasmamembran zu vermitteln.

Beschlagnahme von Phosphoinositides von mutierten MARCKS-Effektor-Dom&auml;ne hemmt stimulierte Ca(2+) Mobilisierung und Degranulation in Mastzellen.

Proteina chinasi C &beta; (PKC&beta;) partecipa alla degranulazione dei mastociti stimolato antigene mediata dal recettore ad alta affinit&agrave; per l&#39;immunoglobulina E, &epsilon;RI, ma la base molecolare &egrave; poco chiara. Abbiamo valutato l&#39;ipotesi che il dominio effector polibasici (ED) del substrato intracellulare abbondante per la chinasi di proteina C, noto come substrato di myristoylated alanina-rich protein chinasi C (MARCKS) sequestra phosphoinositides presso l&#39;opuscolo interno della membrana del plasma fino a quando non si dissocia MARCKS dopo fosforilazione da attivato PKC. Immagini di fluorescenza in tempo reale confermano la sincronizzazione tra stimolate le oscillazioni delle concentrazioni intracellulari di Ca(2+) e associazione oscillatorio della proteina fluorescente verde PKC&beta;-enhanced con la membrana plasmatica. Analogamente, MARCKS-ED etichettato con rosso monomerica proteina fluorescente subisce antigene-stimolato oscillatorio dissociazione e riassociazione alla membrana del plasma con un corso di tempo che &egrave; sincronizzato con membrana plasmatica reversibile associazione di PKC&beta;. Troviamo che la dissociazione di MARCKS-ED &egrave; impedito da mutazione di quattro residui di serina che sono potenziali siti di fosforilazione di PKC. Le cellule che esprimono questo mutato SA4 MARCKS-ED mostrano insorgenza ritardata di mobilitazione Ca(2+) antigene-stimolato e sostanza inibizione dell&#39;esocitosi dei granuli. Stimolazione della degranulazione da thapsigargin, che aggira il produzione di inositolo 1.4.5-trifosfato, &egrave; anche sostanzialmente ridotto in presenza di MARCKS-ED SA4, ma gestito negozio Ca(2+) voce non &egrave; inibita. Questi risultati dimostrano la capacit&agrave; di MARCKS-ED a regolare l&#39;esocitosi granulo in maniera dipendente dalla PKC, coerente con sequestro regolamentato dei phosphoinositides che mediano la fusione di granuli alla membrana del plasma.

Sequestro di phosphoinositides dal mutato dominio effector di MARCKS inibisce la mobilizzazione Ca(2+) stimolata e degranulazione di mastociti.

&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3; E&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x3001;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x30DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C &beta; (PKC&beta;) &#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;&#x304C;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C MARCKS &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F8C;&#x89E3;&#x96E2;&#x307E;&#x3067;&#x69CB;&#x9020;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3; &#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C &#x57FA;&#x677F; (MARCKS) &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306E;&#x5185;&#x5074;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E2D;&#x9694;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x8907;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (ED) PKC &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3053;&#x3068;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x632F;&#x52D5;&#x3068;&#x632F;&#x52D5;&#x5354;&#x4F1A; PKC&beta; &#x5F37;&#x5316;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x540C;&#x671F;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;MARCKS &#x30A8;&#x30C9;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x8D64;&#x3044;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x632F;&#x52D5;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x3068;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C; PKC&beta; &#x5354;&#x4F1A;&#x3068;&#x306E;&#x540C;&#x671F;&#x6642;&#x9593;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x3082;&#x3064;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x518D;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x7D4C;&#x308B;&#x304C;&#x4ED8;&#x3044;&#x305F;&#x3002;MARCKS &#x30A8;&#x30C9;&#x89E3;&#x96E2; PKC &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x3059; 4 &#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7981;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x7570; MARCKS ED SA4 &#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x54E1;&#x306E;&#x9045;&#x767A;&#x6027;&#x3068;&#x958B;&#x53E3;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x4E09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306E; 1,4,5 &#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D1;&#x30B9;&#x3001;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8131;&#x9846;&#x7C92;&#x523A;&#x6FC0; MARCKS &#x30A8;&#x30C9; SA4 &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA; &#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; PKC &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x9846;&#x7C92;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x3067;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x9694;&#x96E2;&#x3068;&#x6574;&#x5408;&#x958B;&#x53E3;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B; MARCKS ED &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5909;&#x7570; MARCKS &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9694;&#x96E2;&#x523A;&#x6FC0;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x54E1;&#x3068;&#x30DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8131;&#x9846;&#x7C92;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB9C8;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC790;&#xADF9; degranulation &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; E, Fc&epsilon;RI&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C &beta; (PKC&beta;) &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBD84;&#xC790; &#xBCC4;&#xB85C; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C myristoylated &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C &#xAE30;&#xD310; (MARCKS) MARCKS&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6C4; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB420; &#xB54C;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC804;&#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; phosphoinositides sequesters&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; polybasic &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (ED) PKC &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC00;&#xC124; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; &#xC9C4;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; PKC&beta; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCD95;&#xC804;&#xAE30; &#xD611;&#xD68C; &#xAC04;&#xC758; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654;&#xB97C; &#xD655;&#xC778;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, MARCKS-&#xC5D0; &#xB4DC; &#xD0DC;&#xADF8; monomeric &#xB808;&#xB4DC; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC790;&#xADF9; &#xC9C4;&#xB3D9; &#xBD84;&#xB9AC; &#xBC0F; PKC&beta;&#xC758; &#xB418;&#xB3CC;&#xB9B4; &#xC218; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD611;&#xD68C;&#xC640; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xB418;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04; &#xCF54;&#xC2A4;&#xC640; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB97C; &#xACAA; &#xC2B5;. MARCKS-&#xC5D0; &#xB4DC; &#xBD84;&#xB9AC; PKC&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140;&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; MARCKS ED SA4 &#xD45C;&#xD604; Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xB41C; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xACFC; &#xB9BD; exocytosis&#xC758; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Inositol 1,4,5 trisphosphate &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xAC70;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0;, thapsigargin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; degranulation &#xC790;&#xADF9; MARCKS ED SA4 &#xC874;&#xC7AC; &#xB610;&#xD55C; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC6B4;&#xC601;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9BD; exocytosis &#xC911;&#xC7AC; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD4E8;&#xC804;&#xACFC; &#xB9BD; phosphoinositides&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xACA9;&#xB9AC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; PKC &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; MARCKS&#xC5D0; &#xB4DC;&#xC758; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xD45C;&#xC2DC;.

Phosphoinositides &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; MARCKS &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xACA9;&#xB9AC; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0; &#xBC0F; degranulation &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

Prote&iacute;na quinasa C &beta; (PKC&beta;) participa en la degranulaci&oacute;n de mastocitos estimulados por el ant&iacute;geno mediada por el receptor de alta afinidad para la inmunoglobulina E, Fc&epsilon;RI, pero la base molecular est&aacute; clara. Investigamos la hip&oacute;tesis de que el dominio efector polib&aacute;sico (ED) del sustrato abundante intracelular de la prote&iacute;na quinasa C conocida como sustrato de myristoylated rico en alanina prote&iacute;na quinasa C (MARCKS) secuestra fosfoinos&iacute;tidos el folleto interno de la membrana plasm&aacute;tica hasta MARCKS disocia despu&eacute;s de fosforilaci&oacute;n por activa PKC. Proyecci&oacute;n de imagen de fluorescencia a tiempo real confirma sincronizaci&oacute;n entre estimuladas las oscilaciones de las concentraciones de CA intracelulares y Asociaci&oacute;n oscilatoria de la prote&iacute;na fluorescente verde PKC&beta; mejorada con la membrana plasm&aacute;tica. Del mismo modo, MARCKS-ED etiquetados rojo monom&eacute;rico prote&iacute;na fluorescente sufre disociaci&oacute;n oscilatoria ant&iacute;geno-estimulado y reconsolidaci&oacute;n del arancel a la membrana plasm&aacute;tica con un curso de tiempo sincronizado con la Asociaci&oacute;n reversible de membrana plasm&aacute;tica de la PKC&beta;. Encontramos que la disociaci&oacute;n MARCKS-ED es prevenida por la mutaci&oacute;n de cuatro residuos de serina que son potenciales sitios de fosforilaci&oacute;n por PKC. Las c&eacute;lulas que expresan este mutado SA4 MARCKS-ED Mostrar Inicio retrasado de ant&iacute;geno-estimulado CA movilizaci&oacute;n e inhibici&oacute;n sustancial de exocitosis de gr&aacute;nulos. Estimulaci&oacute;n de degranulaci&oacute;n por thapsigargin, que omite la producci&oacute;n de inositol 1,4,5-trifosfato, se reduce tambi&eacute;n substancialmente en presencia de SA4 MARCKS-ED, pero no se inhibe la entrada de CA de tienda que funciona. Estos resultados demuestran la capacidad de MARCKS-ED para regular la exocitosis de gr&aacute;nulos en una forma dependiente de PKC, consistente con el secuestro regulado de fosfoinos&iacute;tidos que median la fusi&oacute;n del gr&aacute;nulo en la membrana plasm&aacute;tica.

Secuestro de fosfoinos&iacute;tidos por mutados dominio efector MARCKS inhibe la movilizaci&oacute;n de CA estimulado y degranulaci&oacute;n de mastocitos.

Mobilisation des Ca(2+) en r&eacute;ponse &agrave; IgE m&eacute;di&eacute;e par les r&eacute;cepteurs de signalisation est un processus cl&eacute; dans de nombreux aspects de la fonction des cellules de m&acirc;t. Ici nous r&eacute;sumons notre compr&eacute;hension des bases mol&eacute;culaires de ce processus et les r&ocirc;les qu&#39;elle joue dans la biologie des cellules de m&acirc;t physiologiquement pertinents. L&#39;activation du r&eacute;cepteur d&#39;IgE de signalisation par antig&egrave;ne que crosslinks ces complexes initie Ca(2+) mobilisation comme une vague rapide qui est souvent suivie d&#39;une s&eacute;rie d&#39;oscillations Ca(2+) qui d&eacute;pendent de l&#39;afflux induite par couplage du r&eacute;ticulum endoplasmique luminal Ca(2+) capteur de Ca(2+) STIM1 pour le calcium release activ&eacute;e prot&eacute;ine de canal de calcium Orai1. Exocytose des granules d&eacute;pend de ce processus, ainsi que l&#39;activation des isoformes de la prot&eacute;ine kinase C, et les r&ocirc;les sp&eacute;cifiques pour ces &eacute;tapes signalisation commencent &agrave; &ecirc;tre compris. Ca(2+) mobilisation joue &eacute;galement un r&ocirc;le important, stimul&eacute;e par exocytose du recyclage des endosomes et des cytokines nouvellement synth&eacute;tis&eacute;es, ainsi que dans le chimiotactisme des mastocytes muqueux de rat induite par l&#39;antig&egrave;ne. Du m&eacute;tabolisme des phosphoinositides joue un r&ocirc;le cl&eacute; dans l&#39;ensemble de ces processus, et nous mettons en &eacute;vidence ces r&ocirc;les dans plusieurs cas.

R&ocirc;les pour la mobilisation de ca(2+) et de son r&egrave;glement en fonctions des cellules de m&acirc;t.

Mobilisierung der Ca(2+) als Reaktion auf die IgE-Rezeptor-vermittelten Signalisierung ist ein Schl&uuml;sselprozess in vielen Aspekten der Mastzell-Funktion. Hier fassen wir unser gegenw&auml;rtige Verst&auml;ndnis der molekularen Grundlagen f&uuml;r diesen Prozess und die Rollen, die physiologisch relevanten Mast Zellbiologie spielt. Aktivierung des IgE-Rezeptors Signalisierung durch Antigen, dass Querverbindungen, die diese komplexe initiiert Ca(2+) Mobilisierung als schnelle Welle, die h&auml;ufig durch eine Reihe von Ca(2+) Schwingungen, die Ca(2+) Zustrom gefolgt wird-vermittelt durch Kopplung des endoplasmatischen Retikulum luminalen Ca(2+) Sensors abh&auml;ngig sind STIM1 zu Calcium release aktiviert Protein Kalzium-Kanal Orai1. Untermodul Exozytose h&auml;ngt dabei zusammen mit der Aktivierung von Protein-Kinase C-Isoformen, und bestimmte Rollen f&uuml;r diese Signalisierung Schritte zu verstehen beginnen. Ca(2+) Mobilisierung spielt auch eine wichtige Rollen in stimulierte Exozytose von recycling Endosomen und neu synthetisierte Zytokine sowie in Antigen-vermittelte Chemotaxis von Ratte Schleimhaut-Mastzellen. Phosphoinositid-Stoffwechsel spielt eine Schl&uuml;sselrolle in all diese Prozesse, und wir markieren diese Rollen in mehreren F&auml;llen.

Rollen f&uuml;r die Mobilisierung der ca(2+) und seine Verordnung in Mastzell-Funktionen.

&#x7ECF; IgE &#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x54CD;&#x5E94;&#x52A8;&#x5458;&#x662F;&#x5728;&#x5F88;&#x591A;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x80A5;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x5DE5;&#x5E8F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x603B;&#x7ED3;&#x4E00;&#x4E0B;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x4E86;&#x89E3;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4F9D;&#x636E;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x548C;&#x5B83;&#x5728;&#x751F;&#x7406;&#x4E0A;&#x6709;&#x5173;&#x80A5;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x626E;&#x6F14;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;&#x7531;&#x6297;&#x539F;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x914D;&#x5408;&#x542F;&#x52A8;&#x5FEB;&#x6CE2;&#x7ECF;&#x5E38;&#x8DDF;&#x6709;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7ECF;&#x632F;&#x8361;&#xFF0C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x9C81;&#x7C73;&#x90A3;&#x7ECF;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x8026;&#x5408;&#x7684;&#x7ECF;&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x7684;&#x65B0;&#x8DE8;&#x754C;&#x901A;&#x9053; STIM1 &#x7684;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x7684; IgE &#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D; Orai1&#x3002;&#x9897;&#x7C92;&#x80DE;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x4E9A;&#x578B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x89D2;&#x8272;&#x90FD;&#x5F00;&#x59CB;&#x88AB;&#x4E86;&#x89E3;&#x3002;&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x4E5F;&#x626E;&#x6F14;&#x91CD;&#x8981;&#x89D2;&#x8272;&#x5728;&#x523A;&#x6FC0;&#x80DE;&#x7684;&#x56DE;&#x6536; endosomes &#x548C;&#x65B0;&#x5408;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5728;&#x6297;&#x539F;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5927;&#x9F20;&#x7C98;&#x819C;&#x80A5;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D8B;&#x5316;&#x3002;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x626E;&#x6F14;&#x5173;&#x952E;&#x89D2;&#x8272;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5728;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6848;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;

&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x548C;&#x80A5;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x53CA;&#x5176;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Mobilization of Ca(2+) in response to IgE receptor-mediated signaling is a key process in many aspects of mast cell function. Here we summarize our current understanding of the molecular bases for this process and the roles that it plays in physiologically relevant mast cell biology. Activation of IgE receptor signaling by antigen that crosslinks these complexes initiates Ca(2+) mobilization as a fast wave that is frequently followed by a series of Ca(2+) oscillations which are dependent on Ca(2+) influx-mediated by coupling of the endoplasmic reticulum luminal Ca(2+) sensor STIM1 to the calcium release activated calcium channel protein Orai1. Granule exocytosis depends on this process, together with the activation of protein kinase C isoforms, and specific roles for these signaling steps are beginning to be understood. Ca(2+) mobilization also plays important roles in stimulated exocytosis of recycling endosomes and newly synthesized cytokines, as well as in antigen-mediated chemotaxis of rat mucosal mast cells. Phosphoinositide metabolism plays key roles in all of these processes, and we highlight these roles in several cases.

Roles for ca(2+) mobilization and its regulation in mast cell functions.

Mobilizzazione del Ca(2+) in risposta a IgE mediata dal recettore di segnalazione &egrave; un processo chiave in molti aspetti della funzione dei mastociti. Qui riassumiamo la nostra attuale comprensione delle basi molecolari per questo processo e il ruolo che essa svolge fisiologicamente rilevanti mast cell biology. Attivazione del recettore IgE segnalazione di antigene che le reticolazioni questi complessi avvia la mobilitazione Ca(2+) come un&#39;onda veloce che &egrave; spesso seguita da una serie di oscillazioni Ca(2+) che dipendono da Ca(2+) afflusso-mediata dall&#39;accoppiamento del sensore Ca(2+) STIM1 del lume del reticolo endoplasmatico per il rilascio di calcio attivato proteina canale calcio Orai1. Esocitosi dei granuli dipende da questo processo, insieme con l&#39;attivazione della proteina chinasi C isoforme, e ruoli specifici per questi passaggi segnalazione stanno cominciando a essere capito. CA(2+) mobilitazione svolge anche importanti ruoli in stimolata esocitosi di riciclaggio endosomes e cytokines recentemente sintetizzati, cos&igrave; come in-mediata antigene chemiotassi dei mastociti mucosali ratto. Phosphoinositide metabolismo svolge ruoli chiave in tutti questi processi, e si evidenziano questi ruoli in diversi casi.

Ruoli per ca(2+) mobilizzazione e relativo regolamento in funzioni delle cellule dell&#39;albero.

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1; IgE &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x80A5;&#x6E80;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3068;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3067;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x70BA;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;&#x306E;&#x5F53;&#x793E;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x8981;&#x7D04;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#xFF78;&#xFF9B;&#xFF7D;&#xFF98;&#xFF9D;&#xFF78;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x932F;&#x4F53;&#x958B;&#x59CB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x54E1;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x8154;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E; STIM1 &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x632F;&#x52D5;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x304C;&#x7D9A;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x901F;&#x6CE2;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; IgE &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; Orai1 &#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;&#x958B;&#x53E3;&#x5206;&#x6CCC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x624B;&#x9806;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3057;&#x59CB;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x54E1;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x7C98;&#x819C;&#x578B;&#x80A5;&#x6E80;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x54E1;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

IgE &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;-&#xC911;&#xC7AC; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5; ca(2+)&#xC758; &#xB3D9;&#xC6D0; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC2EC; &#xACFC;&#xC815; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC21C;&#xC218; &#xAD00;&#xB828; &#xB3DB;&#xB300; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xACFC;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xC9C0;&#xC758; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xC774;&#xD574; &#xC694;&#xC57D;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xC791; &#xC790;&#xC8FC; &#xB4A4;&#xC5D0; Ca(2+) endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; luminal Ca(2+) &#xC13C;&#xC11C;&#xC758; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xC785; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; Ca(2+) &#xC9C4;&#xB3D9; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988; &#xBE60;&#xB978; &#xD30C;&#xB3C4;&#xB85C; &#xB3D9;&#xC6D0; Ca(2+) crosslinks STIM1 &#xCE7C;&#xC298;&#xC744; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; antigen&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638; IgE &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Orai1. &#xACFC; &#xB9BD; exocytosis &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C isoforms&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB294;. &#xB610;&#xD55C; Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; endosomes &#xBC0F; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD569;&#xC131;&#xB41C; cytokines&#xC758; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; exocytosis &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC950; &#xC810; &#xB9C9; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD56D; &#xC6D0;-&#xC911;&#xC7AC; chemotaxis&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. Phosphoinositide &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC; &#xBAA8;&#xB450;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC5ED;&#xD560; &#xC5F0;&#xADF9;&#xACFC; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC0AC;&#xB840;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC15;&#xC870;.

Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0;&#xB294; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;.

Movilizaci&oacute;n de CA en respuesta a la se&ntilde;alizaci&oacute;n mediada por receptores de IgE es un proceso clave en muchos aspectos de la funci&oacute;n de la c&eacute;lula del m&aacute;stil. Aqu&iacute; resumimos nuestra comprensi&oacute;n actual de las bases moleculares de este proceso y el papel que desempe&ntilde;a en la biolog&iacute;a de la c&eacute;lula de m&aacute;stil fisiol&oacute;gicamente relevantes. Activaci&oacute;n de los receptores de IgE de se&ntilde;alizaci&oacute;n por el ant&iacute;geno que reticulaciones estos complejos inicia movilizaci&oacute;n de CA como una ola r&aacute;pida que con frecuencia va seguida de una serie de oscilaciones de CA que dependen de la CA afluencia-mediada por acoplamiento del ret&iacute;culo endopl&aacute;smico luminal CA sensor STIM1 el calcio liberar activado prote&iacute;na del canal de calcio Orai1. Exocitosis de gr&aacute;nulos depende de este proceso, junto con la activaci&oacute;n de isoformas de la prote&iacute;na quinasa C, y roles espec&iacute;ficos para estos pasos de se&ntilde;alizaci&oacute;n est&aacute;n empezando a entenderse. Movilizaci&oacute;n de CA tambi&eacute;n juega un papel importante en exocitosis estimulada de reciclaje endosomas y citoquinas reci&eacute;n sintetizadas, as&iacute; como en ant&iacute;geno mediada por quimiotactismo de mastocitos mucosa de rata. Metabolismo de los fosfoinositoles juega un papel clave en todos estos procesos, y podemos destacar estas funciones en varios casos.

Article	Year
Sphingosine derivatives inhibit cell signaling by electrostatically neutralizing polyphosphoinositides at the plasma membrane. Self/nonself\| PubMed ID: 21423874	2010
Sequestration of phosphoinositides by mutated MARCKS effector domain inhibits stimulated Ca(2+) mobilization and degranulation in mast cells. Molecular biology of the cell\| PubMed ID: 22013076	2011
Roles for ca(2+) mobilization and its regulation in mast cell functions. Frontiers in immunology\| PubMed ID: 22586429	2012

Deepti Gadi

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