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Imaging Glioma Initiation <em>In Vivo</em> Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

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Imaging pHluorin-tagged Receptor Insertion to the Plasma Membrane in Primary Cultured Mouse Neurons

A better understanding of the mechanisms governing receptor trafficking between the plasma membrane (PM) and intracellular compartments requires an ...

The Jackson Laboratory

&#x4EB2;&#x73AF;&#x7D20; D &#xFF08;CyPD&#xFF09; &#x601D;&#x60F3;&#xFF0C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5F00;&#x5E55;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x8F6C;&#x6362;&#x5B54; (mPTP) &#x6839;&#x636E;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x73AF;&#x5B62;&#x7D20; (CsA)&#xFF0C;&#x4F2A; CyPD &#x57FA;&#x677F;&#x3001; hyperpolarizes &#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D; (DeltaPsi) &#x548C;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x6A21;&#x578B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x4E86;&#x9C9C;&#x660E;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x62A5;&#x544A;&#x8BE5;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; CyPD &#x9EBB;&#x75F9;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x548C;&#x5927;&#x9F20; C6 &#x80F6;&#x8D28;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; CyPD &#x8BE5;&#x59A5;&#x534F;&#x9170;-&#x812F;&#x6C28;&#x9170;&#x987A;&#x53CD;&#x5F02;&#x6784;&#x9176; (PPIase) &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x53C2;&#x4E0E;&#x6B64;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x9700;&#x8981; PPIase &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8D85;&#x4E0B;&#x4F11;&#x606F;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;DeltaPsi &#x6781;&#x5316; CyPD &#x8868;&#x8FBE;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; CyPD&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F; PPIase &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5728;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD; S-&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176; (GST) &#x4E0B;&#x62C9;&#x5217;&#x8868;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; CyPD &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x817A;&#x560C;&#x5464;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53; (&#x8682;&#x8681;)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F; mPTP &#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x53D7;&#x635F;&#x5931;&#x7684; PPIase &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; CyPD &#x5E94;&#x88AB;&#x770B;&#x4F5C;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6307;&#x793A; CyPD &#x53CD;&#x5BF9;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8682;&#x8681;&#x4EE5;&#x5916;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6216;&#x591A;&#x4E2A;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;

&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x4EB2; D &#x7531;&#x9170;&#x812F;&#x6C28;&#x9170;&#x5F02;&#x6784;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;

Cyclophilin D (CyPD) is thought to sensitize opening of the mitochondrial permeability transition pore (mPTP) based on the findings that cyclosporin A (CsA), a pseudo-CyPD substrate, hyperpolarizes the mitochondrial membrane potential (DeltaPsi) and inhibits apoptosis. We provide evidence that contrasts with this model. Using live cell imaging and two photon microscopy, we report that overexpression of CyPD desensitizes HEK293 and rat glioma C6 cells to apoptotic stimuli. By site-directed mutagenesis of CyPD that compromises peptidyl-prolyl cis-trans isomerase (PPIase) activity, we demonstrate that the mechanism involved in this protective effect requires PPIase activity. Furthermore, we show that, under resting conditions, DeltaPsi is hyperpolarized in CyPD wild type-overexpressing cells but not in cells overexpressing mutant forms of CyPD that lack PPIase activity. Finally, in glutathione S-transferase (GST) pull-down assays, we demonstrate that CyPD binding to the adenine nucleotide translocator (ANT), which is considered to be the core component of the mPTP, is not affected by the loss of PPIase activity. Collectively, our data suggest that CyPD should be viewed as a cell survival-signaling molecule and indicate a protective role of CyPD against apoptosis that is mediated by one or more targets other than the ANT.

Mitochondrial targeted cyclophilin D protects cells from cell death by peptidyl prolyl isomerization.

Cyclophiline D (CyPD) est pens&eacute; pour sensibiliser l&#39;ouverture de la pore de transition de perm&eacute;abilit&eacute; mitochondriale (mPTP) se fondant sur les constatations que cyclosporine A (CsA), un substrat de pseudo-CyPD, hyperpolarise le potentiel de membrane mitochondrial (DeltaPsi) et inhibe l&#39;apoptose. Nous fournissons des preuves qui contraste avec ce mod&egrave;le. &Agrave; l&#39;aide de l&#39;imagerie de cellules vivantes et deux microscopie photonique, nous rapportons que la surexpression de CyPD banalise des cellules de gliome C6 HEK293 et rat aux stimuli apoptotiques. Par mutag&eacute;n&egrave;se dirig&eacute;e de CyPD cette activit&eacute; isom&eacute;rase (PPiases) de compromis peptidyl-prolyl cis-trans, nous d&eacute;montrons que les m&eacute;canismes impliqu&eacute;s dans cet effet protecteur requiert l&#39;activit&eacute; PPiases. De plus, nous montrons que, sous conditions de repos, DeltaPsi est hyperpolaris&eacute; dans les cellules de type sauvage-surexprimant CyPD mais pas dans les cellules surexprimant des formes mutantes de CyPD qui sont d&eacute;pourvus d&#39;activit&eacute; PPiases. Enfin, dans les essais de la glutathion S-transf&eacute;rase (GST) pull-down, nous d&eacute;montrons que liaison de cypd pour le translocator de nucl&eacute;otide ad&eacute;nine (ANT), qui est consid&eacute;r&eacute; comme l&#39;&eacute;l&eacute;ment central de la mPTP, n&#39;est pas affect&eacute; par la perte d&#39;activit&eacute; PPiases. Ensemble, nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que CyPD devrait &ecirc;tre consid&eacute;r&eacute;e comme une mol&eacute;cule de signalisation de survie cellulaire et indiquent un r&ocirc;le protecteur de CyPD contre l&#39;apoptose qui est v&eacute;hicul&eacute; par une ou plusieurs cibles autres que l&#39;ant.

Mitochondrial cyclophiline cibl&eacute;e D prot&egrave;ge les cellules de la mort cellulaire par isom&eacute;risation prolyl peptidyl.

Cyclophilin D (CyPD) wird angenommen, dass die &Ouml;ffnung der mitochondrialen Permeabilit&auml;t &Uuml;bergang Pore (mPTP) basierend auf den Ergebnissen dieser Cyclosporin A (CsA), eine Pseudo-CyPD-Substrat zu sensibilisieren, die mitochondriale Membran potenzielle (DeltaPsi) hyperpolarizes und verhindert die Apoptose. Dieses Modell bieten wir Beweise, die Kontraste. Mit live-Zelle Darstellung und zwei-Photonen-Mikroskopie, wir berichten, dass eine &Uuml;berexpression von CyPD HEK293 und Ratte Gliomzellen C6 auf Apoptotic Reize unempfindlich. Durch Site-verwiesene Mutagenese von CyPD diese Kompromisse konvertierende-Prolyl-Cis-Trans-Isomerase (PPIase) T&auml;tigkeit zeigen wir, dass der Mechanismus dieser Schutzwirkung beteiligt PPIase Aktivit&auml;t erfordert. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass unter Bedingungen ruhen, DeltaPsi hyperpolarized ist, in CyPD Wildtyp-&uuml;berexprimierenden Zellen aber nicht in Zellen &uuml;berexprimierenden mutierte Formen der CyPD, die PPIase Aktivit&auml;t fehlen. Schlie&szlig;lich zeigen wir bei Glutathion S-Transferase (GST) Pulldown-Assays, CyPD Bindung an die Adenin-Nukleotid-Translokator (ANT), die als Kernkomponente der mPTP gilt, durch den Verlust des PPIase Aktivit&auml;t nicht ber&uuml;hrt wird. Gemeinsam unsere Daten deuten darauf hin, dass CyPD als eine Zelle &uuml;berleben signalisieren Molek&uuml;l betrachtet werden sollte und eine sch&uuml;tzende Rolle des CyPD gegen Apoptosis, die von einem oder mehreren Zielen als die Ant vermittelt wird

Mitochondriale gezielte Cyclophilin D sch&uuml;tzt Zellen vor Zelltod durch konvertierende Prolyl Isomerisierung.

Cyclophilin D (CyPD) &egrave; pensato per sensibilizzare l&#39;apertura del poro di transizione di permeabilit&agrave; mitocondriale (mPTP) sulla base dei risultati che la ciclosporina A (CsA), un substrato di pseudo-CyPD, hyperpolarizes la membrana mitocondriale potenziale (DeltaPsi) e inibisce l&#39;apoptosi. Forniamo prove che contrastano con questo modello. Utilizzando due fotoni microscopia e live cell imaging, segnaliamo che sovraespressione della CyPD desensitizes cellule di glioma C6 HEK293 e ratto a stimoli apoptotic. Da mutagenesi luogo-diretta della CyPD tale attivit&agrave; compromessi peptidilica-prolyl cis-trans isomerasi (PPIase), ci dimostrano che il meccanismo coinvolto in questo effetto protettivo richiede attivit&agrave; di PPIase. Inoltre, ci mostra che, in condizioni di riposo, DeltaPsi &egrave; hyperpolarized in cellule con sovraesprimono relativa wild type CyPD ma non in cellule con sovraesprimono relativa forme mutanti di CyPD che la mancanza di attivit&agrave; PPIase. Infine, in dosaggi di glutatione S-transferasi (GST) pull-down, dimostreremo che CyPD vincolante per il translocator adenina nucleotide (ANT), che &egrave; considerato essere il componente principale del mPTP, non subisce la perdita di attivit&agrave; PPIase. Collettivamente, i nostri dati suggeriscono che CyPD dovrebbe essere visto come una molecola di segnalazione di sopravvivenza delle cellule e indicano un ruolo protettivo della CyPD contro apoptosi che sono mediata da una o pi&ugrave; destinazioni diverse dall&#39;ant.

Cyclophilin mirati mitocondriale D protegge le cellule dalla morte cellulare da peptidilica Prolil isomerizzazione.

&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3; D (CyPD) &#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x819C;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x9077;&#x79FB;&#x5B54; &#xFF08;mPTP&#xFF09; &#x77E5;&#x898B;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3; A (CsA) &#x64EC;&#x4F3C; CyPD &#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x958B;&#x304F;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306B;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D; (DeltaPsi) &#x3092; hyperpolarizes&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BB;&#x30EB; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; CyPD &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5831;&#x544A; HEK293 &#x3068;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; C6 &#x30B0;&#x30EA;&#x30AA;&#x30FC;&#x30DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5148;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2P282 CyPD &#x305D;&#x306E;&#x59A5;&#x5354;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9; &#xFF0D; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; (PPIase) &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C; PPIase &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x9AD8;&#x504F;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x4F11;&#x3093;&#x3067;&#x4E0B; DeltaPsi CyPD &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x904E;&#x5270;&#x7D30;&#x80DE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x904E;&#x5270; PPIase &#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x305F;&#x5909;&#x7570;&#x5F62; CyPD &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x6975;&#x3067;&#x3059;&#x3001;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3; s-&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (GST) &#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306F; CyPD &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;mPTP &#x306E;&#x30B3;&#x30A2; &#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x898B;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30F3;&#x5869;&#x57FA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (ANT) &#x306B; PPIase &#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x3001;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; CyPD &#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x3079;&#x304D;&#x3067; CyPD &#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066; 1 &#x3064;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E4;&#x30DE;&#x30A2;&#x30EA;&#x4EE5;&#x5916;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x6A19;&#x7684;&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3; D &#x306F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB; &#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Cyclophilin D (CyPD) &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xC804;&#xD658; &#xAE30; &#xACF5; (mPTP)&#xC758; &#xC624;&#xD504;&#xB2DD; &#xADF8; cyclosporin (CsA) &#xC758;&#xC0AC; CyPD &#xAE30;&#xD310; &#xAC10;&#xAD11; &#xC131;&#xC744; &#xC0DD;&#xAC01; &#xD558; &#xACE0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; (DeltaPsi) hyperpolarizes apoptosis&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xB300;&#xC870; &#xD558;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70;&#xAC00; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; overexpression Cypd&#xC758; &#xBCF4;&#xACE0; apoptotic &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; HEK293 &#xBC0F; &#xC950; glioma C6 &#xC140; desensitizes. CyPD &#xD0C0;&#xD611; peptidyl prolyl cis &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; isomerase (PPIase) &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; mutagenesis &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC774;&#xB3D9; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xBCF4;&#xD638; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD544;&#xC694; PPIase &#xD65C;&#xB3D9; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC544;&#xB798; &#xC870;&#xAC74; &#xD734;&#xC2DD;, DeltaPsi, CyPD &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xD0C0;&#xC785; overexpressing &#xC140;&#xB9CC; &#xC140; PPIase &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD80;&#xC871; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; CyPD overexpressing hyperpolarized&#xC740; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, glutathione S-&#xC804;&#xC774; (GST) &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Mptp&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xAC83; &#xC5EC;&#xACA8;&#xC9C0;&#xB294; &#xC544;&#xB370;&#xB2CC; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; translocator (&#xAC1C;&#xBBF8;)&#xB97C; CyPD &#xBC14;&#xC778;&#xB529; PPIase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; CyPD &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790;&#xB85C; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xBBF8; &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; apoptosis&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Cypd&#xC758; &#xBCF4;&#xD638; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCD1D;&#xCE6D; &#xD558; &#xC5EC;

&#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; cyclophilin D peptidyl prolyl &#xC218; &#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140;&#xC744; &#xBCF4;&#xD638;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ciclofilina D (CyPD) se piensa para sensibilizar la apertura de los poros de la transici&oacute;n de la permeabilidad mitocondrial (mPTP) basado en los resultados ciclosporina A (CsA), un sustrato de pseudo-CyPD, hyperpolarizes el potencial de membrana mitocondrial (DeltaPsi) e inhibe la apoptosis. Proporcionamos evidencia que contrasta con este modelo. Utilizando im&aacute;genes de c&eacute;lulas vivas y microscop&iacute;a de dos fotones, nos informan que la sobreexpresi&oacute;n de CyPD desensibiliza HEK293 y rata c&eacute;lulas de glioma C6 a est&iacute;mulos apopt&oacute;ticos. Por mutag&eacute;nesis dirigida de CyPD esa actividad de compromisos peptidyl-prolyl cis-trans isomerasa (PPIase), demostramos que el mecanismo implicado en este efecto protector requiere PPIase actividad. Por otra parte, nos muestran que, en condiciones de reposo, DeltaPsi es hyperpolarized en c&eacute;lulas de tipo salvaje-overexpressing CyPD pero no en c&eacute;lulas overexpressing formas mutantes de CyPD que carecen de actividad PPIase. Finalmente, en ensayos de glutati&oacute;n S-transferasa (GST) pull-down, demostramos que CyPD vinculante para el translocador del nucle&oacute;tido adenina (ANT), que constituye el componente principal de la mPTP, no se ve afectado por la p&eacute;rdida de actividad PPIase. Colectivamente, nuestros datos sugieren que CyPD debe considerarse como una mol&eacute;cula de se&ntilde;alizaci&oacute;n supervivencia celular e indican un papel protector de CyPD contra la apoptosis que es mediada por uno o m&aacute;s objetivos que no sean de la Ant.

Mitocondrial espec&iacute;fica ciclofilina D protege las c&eacute;lulas contra la muerte celular por peptidil prolil isomerizaci&oacute;n.

Multi-photon laser scanning microscopes have many advantages over single-photon systems. However, the speed and flexibility of currently available multi-photon microscopes are limited by the use of mechanical mirrors to steer pulsed radiation for fluorophore excitation. Here, we describe the multi-photon adaptation of a confocal microscope that uses an acoustic optical deflector (AOD) for beam steering. AODs are capable of very rapid scanning and, in addition, offer the flexibility of zooming, panning, and being adjustable for slow image acquisition. Because of the highly dispersive nature of AODs, pulsed radiation must be temporally compressed by introducing negative dispersion into the beam path. More critically, pulsed radiation must also be spatially compressed by introducing lateral dispersion into the beam path. This was accomplished by using two prisms in the external beam path and by introducing a third prism element subsequent to the AOD. The end result is an AOD-based multi-photon microscope that is capable of rapid imaging of physiological events as well as slow detection of weakly fluorescent biological samples.

Multi-photon laser scanning microscopy using an acoustic optical deflector.

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5177;&#x6709;&#x8BB8;&#x591A;&#x4F18;&#x4E8E;&#x5355;&#x5149;&#x5B50;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x901F;&#x5EA6;&#x548C;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5F53;&#x524D;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x673A;&#x68B0;&#x955C;&#x50CF;&#x5F15;&#x5BFC;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x8F90;&#x5C04;&#x8367;&#x5149;&#x52B1;&#x78C1;&#x673A;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x53D7;&#x5230;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x6881;&#x8F6C;&#x5411;&#x4F7F;&#x7528;&#x58F0;&#x5149;&#x504F;&#x8F6C;&#x5668; (AOD) &#x7684;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9002;&#x5E94;&#x3002;AODs &#x80FD;&#x591F;&#x975E;&#x5E38;&#x5FEB;&#x901F;&#x626B;&#x63CF;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x7F29;&#x653E;&#x3001; &#x5E73;&#x79FB;&#xFF0C;&#x548C;&#x6B63;&#x5728;&#x7F13;&#x6162;&#x56FE;&#x50CF;&#x91C7;&#x96C6;&#x53EF;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E; AODs &#x9AD8;&#x5EA6;&#x5206;&#x6563;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5F15;&#x5165;&#x8D1F;&#x8272;&#x6563;&#x6210;&#x6881;&#x8DEF;&#x5F84;&#x5FC5;&#x987B;&#x6682;&#x65F6;&#x538B;&#x7F29;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x8F90;&#x5C04;&#x3002;&#x66F4;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x8F90;&#x5C04;&#x5FC5;&#x987B;&#x8FD8;&#x7A7A;&#x95F4;&#x538B;&#x7F29;&#x901A;&#x8FC7;&#x5F15;&#x5165;&#x6A2A;&#x5411;&#x5206;&#x6563;&#x5230;&#x5149;&#x675F;&#x7684;&#x8DEF;&#x5F84;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x5916;&#x90E8;&#x6881;&#x8DEF;&#x5F84;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x68F1;&#x955C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x901A;&#x8FC7;&#x5F15;&#x5165;&#x65B0;&#x673A;&#x573A;&#x542F;&#x7528;&#x540E;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x68F1;&#x955C;&#x5143;&#x7D20;&#x6765;&#x5B8C;&#x6210;&#x7684;&#x3002;&#x6700;&#x7EC8;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6C14;&#x6EB6;&#x80F6;&#x5149;&#x5B66;&#x539A;&#x5EA6;&#x7684;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x80FD;&#x591F;&#x5FEB;&#x901F;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7F13;&#x6162;&#x7684;&#x5F31;&#x8367;&#x5149;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4F7F;&#x7528;&#x58F0;&#x5149;&#x504F;&#x8F6C;&#x5668;&#x3002;

Microscopes &agrave; balayage laser multiphotonique ont plusieurs avantages par rapport aux syst&egrave;mes de photon unique. Cependant, la vitesse et la flexibilit&eacute; des microscopes multiphotonique actuellement disponibles sont limit&eacute;es par l&#39;utilisation de miroirs m&eacute;caniques pour diriger le rayonnement puls&eacute; pour une excitation de fluorophore. Ici, nous d&eacute;crivons l&#39;adaptation multiphotonique d&#39;un microscope confocal qui utilise un d&eacute;flecteur acoustique et optique (OD) pour la direction du faisceau. OD est capables de balayage tr&egrave;s rapide et offre en outre, la flexibilit&eacute; du zoom, panoramique et &eacute;tant r&eacute;glables pour l&#39;acquisition d&#39;images lentes. &Eacute;tant donn&eacute; la nature hautement dispersive d&#39;OD, rayonnement puls&eacute; doit &ecirc;tre temporellement compact&eacute;e en introduisant une dispersion n&eacute;gative dans le trajet optique. Plus grave encore, rayonnement puls&eacute; doit aussi spatialement compress&eacute; en introduisant la dispersion lat&eacute;rale dans le trajet optique. Ceci a &eacute;t&eacute; accompli &agrave; l&#39;aide de deux prismes dans le chemin de la radioth&eacute;rapie externe et en introduisant un troisi&egrave;me &eacute;l&eacute;ment de prisme &agrave; la suite de l&#39;OD. Le r&eacute;sultat final est un microscope multiphotonique AOD-bas&eacute; qui est capable d&#39;imagerie rapide des &eacute;v&eacute;nements physiologiques, mais aussi lente d&eacute;tection d&#39;&eacute;chantillons biologiques fluorescents faiblement.

Multiphotonique microscopie &agrave; balayage laser &agrave; l&#39;aide d&#39;un d&eacute;flecteur optique acoustique.

Multiphoton-Laser-scanning-Mikroskope haben viele Vorteile gegen&uuml;ber der Single-Photon-Systeme. Allerdings sind die Geschwindigkeit und Flexibilit&auml;t der derzeit verf&uuml;gbaren Multiphoton Mikroskope durch den Einsatz von mechanischen Spiegel, gepulste Strahlung f&uuml;r Fluorophor Erregung zu steuern begrenzt. Hier beschreiben wir die Multiphoton Anpassung eines konfokalen Mikroskops, eine akustische optische Deflektor (AOD) f&uuml;r die Schallb&uuml;ndelausrichtung verwendet. BAB sind sehr schnelle Scannen und dar&uuml;ber hinaus bieten die Flexibilit&auml;t der Zoomen, Schwenken und wird f&uuml;r langsame Bilderfassung einstellbar. Aufgrund der sehr verbreitete Art der BAB muss gepulste Strahlung zeitlich komprimiert werden, durch die Einf&uuml;hrung von negativen Dispersion in den Strahlengang. Noch bedenklicher ist, muss gepulste Strahlung auch r&auml;umlich durch die Einf&uuml;hrung der seitliche Streuung in den Strahlengang komprimiert werden. Dies wurde erreicht, mit zwei Prismen in den externen Strahlengang und durch Einf&uuml;hrung einer dritten Prism-Elements im Anschluss an die BAB. Das Ergebnis ist ein AOD-basierte Multiphoton-Mikroskop, das schnelle Belichtung von physiologischen Ereignissen sowie langsamen Erkennung von schwach fluoreszierenden biologischen Proben kann.

Multiphoton Laser-scanning-Mikroskopie mit einer akustischen optische Deflektor.

Microscopi scansione laser multi-Photon hanno molti vantaggi rispetto ai sistemi del singolo-fotone. Tuttavia, la velocit&agrave; e la flessibilit&agrave; dei microscopi multi-photon attualmente disponibili sono limitati dall&#39;uso di specchi meccanici per dirigere la radiazione pulsata per l&#39;eccitazione del fluoroforo. Qui, descriviamo l&#39;adattamento multi-photon di un microscopio confocale che utilizza un deflettore ottico acustiche (AOD) per fascio dello sterzo. Od sono capaci di scansione molto rapido e, inoltre, offrono la flessibilit&agrave; di zoom e panning essendo regolabile per acquisizione di immagini slow. A causa della natura altamente dispersiva di od, radiazione pulsata dovr&agrave; essere compressi temporaneamente con l&#39;introduzione di dispersione negativa nel percorso del fascio. Pi&ugrave; criticamente, radiazione pulsata deve inoltre essere spazialmente compresso mediante l&#39;introduzione di dispersione laterale nel percorso del fascio. Questo &egrave; stato compiuto utilizzando due prismi nel percorso esterno fascio e introducendo un terzo elemento prisma successivamente l&#39;AOD. Il risultato finale &egrave; un microscopio multi-photon AOD-basato che &egrave; in grado di imaging rapido di eventi fisiologici come pure lento rilevamento dei campioni biologici fluorescente debolmente.

Multi-photon laser microscopia a scansione utilizzando un deflettore ottico acustiche.

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5358;&#x4E00;&#x5149;&#x5B50;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x901F;&#x5EA6;&#x3068;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x86CD;&#x5149;&#x52B1;&#x8D77;&#x306E;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x653E;&#x5C04;&#x3092;&#x64CD;&#x7E26;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x30DF;&#x30E9;&#x30FC;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E0; &#x30FB; &#x30B9;&#x30C6;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7528;&#x97F3;&#x97FF;&#x5149;&#x5B66;&#x504F;&#x5411;&#x5668;&#x306E; (AOD) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AODs &#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30BA;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x30D1;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F4E;&#x901F;&#x753B;&#x50CF;&#x53D6;&#x5F97;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x8ABF;&#x6574;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AODs &#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x6563;&#x6027;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x306F;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30D1;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x6563;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x5727;&#x7E2E;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3082;&#x3063;&#x3068;&#x6279;&#x5224;&#x7684;&#x306B;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x653E;&#x5C04;&#x3082;&#x7A7A;&#x9593;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E0; &#x30D1;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x6A2A;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x5206;&#x6563;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x5727;&#x7E2E;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;3 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30D7;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x8981;&#x7D20;&#x3001;AOD &#x5F8C;&#x5C0E;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5916;&#x90E8;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E0; &#x30D1;&#x30B9;&#x3067; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30D7;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x9045;&#x3044;&#x691C;&#x51FA;&#x86CD;&#x5149;&#x751F;&#x7269;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x5F31; AOD &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E; 2 &#x5149;&#x5B50;&#x52B1;&#x8D77;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;&#x97F3;&#x97FF;&#x5149;&#x5B66;&#x504F;&#x5411;&#x5668;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Multi-photon &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC2A4;&#xCE94; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAD11;&#xC790; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB9CE;&#xC740; &#xC7A5;&#xC810;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; multi-photon &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; fluorophore &#xC5EC;&#xAE30; &#xD384;&#xC2A4; &#xBC29;&#xC0AC; &#xC870;&#xC885; &#xAE30;&#xACC4; &#xAC70;&#xC6B8;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; multi-photon &#xC801;&#xC751; &#xBE54; &#xC870; &#xD5A5;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC74C;&#xD5A5; &#xAD11;&#xD559; &#xD3B8;&#xD5A5; (AOD)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC758; &#xC124;&#xBA85;. Aods&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C;, &#xC90C;, &#xD328;&#xB2DD;, &#xB290;&#xB9B0; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC218;&#xC9D1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xC808; &#xB418; &#xACE0;&#xC758; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;. AODs &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC6B0;&#xC218; &#xD2B9;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xD384;&#xC2A4; &#xBC29;&#xC0AC; temporally &#xBE54; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC74C;&#xC758; &#xBD84;&#xC0B0;&#xC744; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558; &#xC5EC; &#xC555;&#xCD95; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xBE44;&#xD310;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD384;&#xC2A4; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xCE21;&#xBA74; &#xBD84;&#xC0B0; &#xBE54; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xC555;&#xCD95;&#xB3C4; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC678;&#xBD80; &#xBE54; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD504;&#xB9AC;&#xC998;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACE0;&#xB294; AOD &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD504;&#xB9AC;&#xC998; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xC885; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xBE60;&#xB978; &#xC601;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC57D;&#xD558;&#xAC8C; &#xD615;&#xAD11; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xB290;&#xB9B0; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC218;&#xB294; AOD &#xAE30;&#xBC18; multi-photon &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;.

Multi-photon &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC2A4;&#xCE94; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC74C;&#xD5A5; &#xAD11;&#xD559; &#xBCC0;&#xB958;&#xAE30;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

Microscopios de escaneo l&aacute;ser los tienen muchas ventajas sobre sistemas de fot&oacute;n &uacute;nico. Sin embargo, la velocidad y la flexibilidad de los disponibles en la actualidad los microscopios est&aacute;n limitadas por el uso de espejos mec&aacute;nicos para dirigir la radiaci&oacute;n pulsada para la excitaci&oacute;n del fluor&oacute;foro. Aqu&iacute;, describimos la adaptaci&oacute;n de los de un microscopio confocal que utiliza un deflector &oacute;ptico ac&uacute;stico (AOD) para el manejo de la viga. AODs son capaces de escaneo muy r&aacute;pido y, adem&aacute;s, ofrecen la flexibilidad de zoom, panor&aacute;mica y ser ajustable para adquisici&oacute;n de im&aacute;genes lento. Dada la naturaleza altamente dispersiva de AODs, radiaci&oacute;n pulsada debe estar comprimida temporal introduciendo dispersi&oacute;n negativa en la trayectoria del haz. M&aacute;s cr&iacute;ticamente, radiaci&oacute;n pulsada debe tambi&eacute;n estar espacial comprimida introduciendo dispersiones laterales en la trayectoria del haz. Esto se logr&oacute; mediante el uso de dos prismas en la ruta de haz externo y la introducci&oacute;n de un tercer elemento de prisma con posterioridad al AOD. El resultado final es un microscopio los basadas en AOD que es capaz de proyecci&oacute;n de imagen r&aacute;pida de eventos fisiol&oacute;gicos como lenta detecci&oacute;n de muestras biol&oacute;gicas fluorescentes d&eacute;bil.

Los l&aacute;ser microscop&iacute;a utilizando un deflector &oacute;ptico ac&uacute;stico.

&#x5E74;&#x9F84;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x5DF2;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x662F;&#x86EE;&#x8352;&#x4E4B;&#x5730;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x662F;&#x5426;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x51CF;&#x5C11;&#x5728;&#x8001;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x3001; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x3001; &#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D; (DeltaPsi) &#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x5206;&#x5316; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x662F;&#x4ECE;&#x8001; (26-29 &#x4E2A;&#x6708;) &#x8F83;&#x5E74;&#x8F7B; &#xFF08;4-6 &#x4E2A;&#x6708;&#xFF09; &#x5C0F;&#x9F20;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x6162;&#x5F97;&#x3002;&#x53BB;&#x65E7;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; DeltaPsis &#x88AB;&#x8FD8;&#x66F4;&#x6781;&#x5316; &#xFF08;&#x8F83;&#x4F4E;&#xFF09;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x5E74;&#x8F7B;&#x7684;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x65E7;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x660E;&#x5BF9;&#x6C27;&#x5316;&#x5242;&#x53D4;&#x4E01;&#x57FA;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x6C22; (t BuOOH) &#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x65E7;&#x7684;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; ATP &#x8BF1;&#x5BFC; Ca2 + &#x53CD;&#x5E94;&#x662F;&#x4E00;&#x8D2F;&#x7684;&#x632F;&#x5E45;&#x66F4;&#x5927;&#x548C;&#x66F4;&#x9891;&#x7E41;&#x632F;&#x8361;&#x6BD4;&#x5E74;&#x8F7B;&#x7684;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53EF;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x964D;&#x4F4E;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; Ca2 + &#x87AF;&#x5408;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x662F;&#x4E0E;&#x65E7;&#x7684;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5171;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x5206;&#x5316; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x662F; t BuOOH &#x7684;&#x5F85;&#x9047;&#x6BD4;&#x5E74;&#x8F7B;&#x7684;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x795E;&#x7ECF;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x5206;&#x5316; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x83CC;&#x7FA4;&#x53D8;&#x5316;&#x65F6;&#x66F4;&#x654F;&#x611F;&#x5927;&#x5927;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x8001;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x5F88;&#x660E;&#x663E;&#x5730;&#x66F4;&#x6539;&#x4E86;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x548C;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FDD;&#x62A4;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53D7;&#x5230;&#x635F;&#x5BB3;&#x3002;

Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x3001; &#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x548C;&#x5BF9;&#x8870;&#x8001;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;

Age-related changes in astrocytes that could potentially affect neuroprotection have been largely unexplored. To test whether astrocyte function was diminished during the aging process, we examined cell growth, Ca2+ signaling, mitochondrial membrane potential (DeltaPsi) and neuroprotection of NGF-differentiated PC12 cells. We observed that cell growth was significantly slower for astrocytes cultured from old (26-29 months) mice as compared to young (4-6 months) mice. DeltaPsis in old astrocytes were also more depolarized (lower) than in young astrocytes and old astrocytes showed greater sensitivity to the oxidant tert-butyl hydrogen peroxide (t-BuOOH). ATP-induced Ca2+ responses in old astrocytes were consistently larger in amplitude and more frequently oscillatory than in young astrocytes, which may be attributable to lower mitochondrial Ca2+ sequestration. Finally, NGF-differentiated PC12 cells that were co-cultured with old astrocytes were significantly more sensitive to t-BuOOH treatment than co-cultures of NGF-differentiated PC12 cells with young astrocytes. Together, these data demonstrate that astrocyte physiology is significantly altered during the aging process and that the astrocyte's ability to protect neurons is compromised.

Ca2+ signaling, mitochondria and sensitivity to oxidative stress in aging astrocytes.

Age-related changes in astrocytes qui pourraient nuire &agrave; la neuroprotection ont &eacute;t&eacute; en grande partie inexplor&eacute;s. Pour v&eacute;rifier que la fonction astrocyte diminua au cours du processus de vieillissement, nous avons examin&eacute; la croissance cellulaire, Ca2 + signalisation, mitochondriale potentiel membranaire (DeltaPsi) et neuroprotection des cellules PC12 dissoci&eacute;s NGF. Nous avons observ&eacute; que la croissance des cellules &eacute;tait consid&eacute;rablement plus lente des astrocytes cultiv&eacute;s de souris &acirc;g&eacute;es (26 &agrave; 29 mois) par rapport &agrave; des souris jeunes (4-6 mois). DeltaPsis dans les astrocytes vieux &eacute;taient &eacute;galement plus d&eacute;polaris&eacute;s (inf&eacute;rieur) dans les astrocytes jeunes et vieux astrocytes ont montr&eacute; une plus grande sensibilit&eacute; &agrave; l&#39;oxydant peroxyde d&#39;hydrog&egrave;ne tert-butyle (t-BuOOH). R&eacute;ponses Ca2 + induite par l&#39;ATP dans les astrocytes vieux &eacute;taient syst&eacute;matiquement plus grande amplitude et plus fr&eacute;quemment oscillatoire que dans les astrocytes jeunes, qui peut &ecirc;tre attribu&eacute;e &agrave; abaisser la s&eacute;questration de Ca2 + mitochondriale. Enfin, les cellules PC12 NGF dissoci&eacute;s qui &eacute;taient cultiv&eacute;s avec des astrocytes vieux &eacute;taient significativement plus sensibles au traitement t-BuOOH que co-cultures de cellules PC12 dissoci&eacute;s NGF avec jeunes astrocytes. Ensemble, ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent que la physiologie de l&#39;astrocyte est significativement alt&eacute;r&eacute;e durant le processus de vieillissement et que la capacit&eacute; de l&#39;astrocyte &agrave; prot&eacute;ger les neurones est compromise.

Signalisation Ca2 +, la mitochondrie et la sensibilit&eacute; au stress oxydatif et du vieillissement des astrocytes.

Altersbedingte Ver&auml;nderungen in Astrozyten, die potenziell Nervenschutz beeinflussen k&ouml;nnten wurden weitgehend unerforscht. Um zu testen ob Gliazelle-Funktion w&auml;hrend der Alterungsprozess vermindert wurde, haben wir gepr&uuml;ft, Zellwachstum, Ca2 + Signalisierung, mitochondriale Membran potenzielle (DeltaPsi) und Nervenschutz NGF getrennte PC12 Zellen. Wir beobachteten, dass Zellwachstum deutlich langsamer f&uuml;r Astrozyten aus alten (26-29 Monate) M&auml;use im Vergleich zu jung (4-6 Monate) M&auml;usen kultiviert wurde. DeltaPsis in alten Astrozyten wurden auch mehr (niedriger) als junge Astrozyten und alte Astrozyten zeigte gr&ouml;&szlig;ere Sensibilit&auml;t f&uuml;r das Oxidationsmittel-Tert-Butyl-Wasserstoffperoxid (t-BuOOH) ersch&uuml;tterten. ATP-induzierten Ca2 + Antworten im alten Astrozyten wurden konsequent in der Amplitude gr&ouml;&szlig;er und h&auml;ufiger als in jungen Astrozyten, oszillierende die mitochondriale Ca2 +-Sequestrierung senken zur&uuml;ckgef&uuml;hrt werden kann. Schlie&szlig;lich waren die NGF getrennte PC12 Zellen, die co-cultured mit alten Astrozyten waren deutlich empfindlicher auf t-BuOOH Behandlung als Co-cultures der NGF getrennte PC12 Zellen mit jungen Astrozyten. Zusammen zeigen diese Daten Gliazelle Physiologie erheblich w&auml;hrend der Alterungsprozess ver&auml;ndert werden und die die Gliazelle F&auml;higkeit, Neuronen zu sch&uuml;tzen beeintr&auml;chtigt ist.

Ca2 + signalisieren, Mitochondrien und Empfindlichkeit gegen&uuml;ber oxidativem Stress in alternden Astrozyten.

Cambiamenti et&agrave;-correlati negli astrociti che potrebbero potenzialmente influenzare neuroprotezione sono state in gran parte inesplorate. Per verificare se &egrave; stata diminuita funzione Astrocita durante il processo di invecchiamento, abbiamo esaminato la crescita cellulare, Ca2 + mitocondriale, segnalazione potenziale di membrana (DeltaPsi) e neuroprotezione delle cellule PC12 differenziate di NGF. Abbiamo osservato che la crescita cellulare &egrave; stato significativamente pi&ugrave; lenta per gli astrociti coltivati da topi vecchi (26-29 mesi) rispetto ai topi giovani (4-6 mesi). DeltaPsis negli astrociti vecchi erano anche pi&ugrave; depolarized (inferiore) in astrociti giovani e vecchi astrociti hanno mostrati una maggiore sensibilit&agrave; per il perossido di idrogeno di terz-butile ossidante (t-BuOOH). ATP-induced Ca2 + risposte negli astrociti vecchi erano costantemente pi&ugrave; grande in ampiezza e pi&ugrave; frequentemente oscillatorio rispetto negli astrociti giovani, che potrebbe essere attribuibile ad abbassare il sequestro Ca2 + mitocondriale. Infine, le cellule PC12 differenziate NGF che erano coltivate con astrociti vecchi erano significativamente pi&ugrave; sensibile al trattamento t-BuOOH di co-cultures delle cellule PC12 differenziate NGF con giovani astrociti. Insieme, questi dati dimostrano che la fisiologia astrocita viene alterato significativamente durante il processo di invecchiamento e che la capacit&agrave; di astrociti di proteggere i neuroni &egrave; compromessa.

Ca2 + segnalazione, mitocondri e sensibilit&agrave; a stress ossidativo nell&#39;invecchiamento astrociti.

&#x52A0;&#x9F62;&#x306B;&#x4F34;&#x3046;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x307E;&#x3060;&#x672A;&#x63A2;&#x67FB;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x95A2;&#x6570;&#x304C;&#x8001;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x4E2D;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3001;ca 2 + &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;, &#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D; (DeltaPsi)&#x3001;NGF &#x5206;&#x5316; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x304C;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x30E4;&#x30F3;&#x30B0; (4-6 &#x30F6;&#x6708;) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x53E4;&#x3044; (26-29 &#x30F6;&#x6708;) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x57F9;&#x990A;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x9045;&#x3044;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3002;&#x7121;&#x504F;&#x5149;&#x5316; DeltaPsis &#x53E4;&#x3044;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3082;&#x3088;&#x308A; (&#x4F4E;&#x3044;) &#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x82E5;&#x3044;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30F3;&#x30C8; t-&#x30D6;&#x30C1;&#x30EB;&#x904E;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20; &#xFF08;t BuOOH&#xFF09; &#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x53E4;&#x3044;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x53E4;&#x3044;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; ATP &#x8A98;&#x8D77; ca 2 + &#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E; ca 2 + &#x9694;&#x96E2;&#x3092;&#x4F4E;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x5E38;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x632F;&#x5E45;&#x3068;&#x82E5;&#x3044;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3088;&#x308A;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x632F;&#x52D5;.&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x53E4;&#x3044;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x5171;&#x3055;&#x308C;&#x305F; NGF &#x5206;&#x5316; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306F; t BuOOH &#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x82E5;&#x3044;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068; NGF &#x5206;&#x5316; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x7CFB;&#x3088;&#x308A;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x304C;&#x8001;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x4E2D;&#x306B;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x640D;&#x306A;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ca 2 + &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;, &#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3068;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x9AD8;&#x9F62;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3002;

Neuroprotection &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC904; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xC774;&#xB2E4; &#xB098;&#xC774; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD0D0;&#xD5D8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0; &#xD568;&#xC218;&#xB294; &#xB178;&#xD654; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;, Ca2 + &#xC2E0;&#xD638;, &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; (DeltaPsi) &#xBC0F; neuroprotection NGF &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC774;&#xB2E4; &#xC601; (4-6 &#xAC1C;&#xC6D4;) &#xC950;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC138; (26-29 &#xAC1C;&#xC6D4;) &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xC591;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB290;&#xB9B0; &#xD588;&#xB2E4; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC624;&#xB798; &#xB41C; &#xC774;&#xB2E4; DeltaPsis &#xD588;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C; &#xB354; depolarized (&#xB0AE;&#xC740;) &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC80A;&#xC740; &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0; &#xC81C; tert-&#xBD80; &#xD2F8; &#xC218;&#xC18C; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC18C; (t-BuOOH)&#xC5D0; &#xD070; &#xAC10;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC624;&#xB798; &#xB41C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC624;&#xB798; &#xB41C; &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C; ATP &#xC720;&#xB3C4; Ca2 + &#xC751;&#xB2F5;&#xC740; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC5D0; &#xC77C;&#xAD00; &#xB418; &#xAC8C; &#xD06C;&#xACE0; &#xC80A;&#xC740; &#xC774;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC790;&#xC8FC; &#xCD95;&#xC804;&#xAE30; &#xB0AE;&#xC740; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; Ca2 + &#xACA9;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC624;&#xB798; &#xB41C; &#xC774;&#xB2E4; co-cultured &#xD588;&#xB2E4; NGF &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; PC12 &#xC138;&#xD3EC; &#xC80A;&#xC740; &#xC774;&#xB2E4; NGF &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; co-cultures &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; t-BuOOH &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xC740; &#xB178;&#xD654; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC0C1;.

Ca2 + &#xC2E0;&#xD638;, &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xBC0F; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC774;&#xB2E4; &#xB178;&#xD654;&#xC5D0; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C;.

Cambios relacionados con la edad en los astrocitos que potencialmente podr&iacute;an afectar la neuroprotecci&oacute;n han sido en gran parte inexplorados. Para comprobar si la funci&oacute;n de astrositos fue disminuida durante el proceso de envejecimiento, examinamos el crecimiento celular, Ca2 + mitocondrial, se&ntilde;alizaci&oacute;n potencial de membrana (DeltaPsi) y neuroprotecci&oacute;n de c&eacute;lulas PC12 diferenciadas NGF. Observamos que el crecimiento de la c&eacute;lula era significativamente m&aacute;s lento para los astrocitos cultivados de ratones de edad (26-29 meses) en comparaci&oacute;n con los ratones j&oacute;venes (4-6 meses). DeltaPsis en los astrocitos viejos fueron tambi&eacute;n m&aacute;s depolarized (inferior) en astrocitos jovenes y viejos astrocitos mostraron una mayor sensibilidad para el per&oacute;xido de hidr&oacute;geno de terc-butilo oxidante (t-BuOOH). Ca2 + respuestas inducidas por ATP en astrocitos viejos fueron consistentemente m&aacute;s grande en amplitud y con m&aacute;s frecuencia oscilatoria que en astrocitos jovenes, que puede ser atribuible a bajar secuestro de Ca2 + mitocondrial. Finalmente, las c&eacute;lulas PC12 diferenciadas NGF que eran co-cultivadas con astrocitos viejos fueron significativamente m&aacute;s sensibles al tratamiento con t-BuOOH de co-cultivos de c&eacute;lulas PC12 NGF-distinguido con j&oacute;venes astrocitos. Juntos, estos datos demuestran que la fisiolog&iacute;a Astrocito es alterado durante el proceso de envejecimiento y que est&aacute; comprometida la capacidad de los astrositos para proteger a las neuronas.

Ca2 + se&ntilde;alizaci&oacute;n, mitocondrias y sensibilidad al estr&eacute;s oxidativo en el envejecimiento de los astrocitos.

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (MPLSM) &#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x65E5;&#x76CA;&#x5B9D;&#x8D35;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x6709;&#x51E0;&#x4E2A;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#xFF0C;&#x5411;&#x6267;&#x884C; MPLSM &#x4F5C;&#x4E3A;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;MPLSM &#x63D0;&#x9AD8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x4FE1;&#x566A;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x56FE;&#x50CF;&#x8D28;&#x91CF;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x7126;&#x5916;&#x8367;&#x5149;&#x5C06;&#x521B;&#x5EFA;&#x5E38;&#x89C4;&#x6216;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6536;&#x96C6;&#x548C;&#x7528;&#x6765;&#x751F;&#x6210;&#x56FE;&#x50CF;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; descanned &#x8367;&#x5149;&#x70B9;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x5149;&#x3002;&#x6DF1;&#x5165;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5207;&#x7247;&#xFF0C;&#x5982;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x4E3A;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x7684;&#x5927; &#xFF08;&#x5927;&#x7EA6; 1 &#x6BEB;&#x7C73;&#x76F4;&#x5F84;&#xFF09; &#x6210;&#x50CF;&#x65F6;&#x5C24;&#x5176;&#x6709;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x5149;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x80FD;&#x91CF;&#x7684;&#x7EA2;&#x5916;&#x6CE2;&#x957F;&#xFF0C;&#x80FD;&#x91CF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4E5F;&#x4F7F;&#x7528;&#x65C5;&#x884C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E0E;&#x592A;&#x5149;&#x6563;&#x5C04;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x7126;&#x5916;&#x52B1;&#x78C1;&#xFF0C;&#x5149;&#x6BD2;&#x6027;&#x3001; &#x5149;&#x7834;&#x574F;&#x548C;&#x6F02;&#x767D;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x53CD;&#x590D;&#x626B;&#x63CF;&#x540C;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5C24;&#x5176;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5438;&#x6536;&#x8C31;&#x7684;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x67D3;&#x6599;&#x7531;&#x4E8E;&#x540C;&#x65F6;&#x5174;&#x594B;&#x591A;&#x4E2A;&#x8367;&#x5149;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7AE0;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4F7F;&#x7528; MPLSM &#x56FE;&#x50CF;&#x4E0E;&#x5E38;&#x89C4;&#x548C;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5229;&#x5F0A;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x4F8B;&#x5B50;&#xFF0C;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x8BC1;&#x660E;&#x6210;&#x50CF;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5B9E;&#x9645;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

Multiphoton laser scanning microscopy (MPLSM) has become an increasingly invaluable tool in fluorescent optical imaging. There are several distinct advantages to implementing MPLSM as a Xenopus oocyte research tool. MPLSM increases signal-to-noise ratio and therefore increases image quality because there is no out-of-focus fluorescence as would be created in conventional or confocal microscopy. All the light that is generated can be collected and used to generate an image because point detection of descanned fluorescence is not required. This is particularly useful when imaging deep into tissue sections, as is necessary for Xenopus oocytes, which are notoriously large (approximately 1-mm diameter). Because multiphoton lasers use pulsed energy in the infrared wavelengths, the energy can also travel further into tissues with much less light scattering. Because there is no out-of-focus excitation, phototoxicity, photodamage, and photobleaching are significantly reduced, which is particularly important for long-term experiments that require the same region to be scanned repeatedly. Finally, multiple fluorophores can be simultaneously excited because of the broader absorption spectra of multiphoton dyes. In this chapter, we describe the advantages and disadvantages of using MPLSM to image Xenopus oocytes as compared to conventional and confocal microscopy. The practical application of imaging oocytes is demonstrated with specific examples.

Multiphoton laser scanning microscopy as a tool for Xenopus oocyte research.

Laser multiphotonique, microscopie (MPLSM) est devenu un outil de plus en plus indispensable en imagerie optique fluorescent. Il y a plusieurs avantages &agrave; mettre en &oelig;uvre MPLSM comme un outil de recherche d&#39;ovocytes Xenopus. MPLSM augmente le rapport signal-bruit et augmente donc la qualit&eacute; d&#39;image car il n&#39;y a aucune fluorescence out-of-focus comme celle cr&eacute;&eacute;e en microscopie conventionnelle ou confocale. Toute la lumi&egrave;re qui est g&eacute;n&eacute;r&eacute;e peut &ecirc;tre recueillie et utilis&eacute;e pour g&eacute;n&eacute;rer une image parce que le point de d&eacute;tection de la fluorescence descanned n&#39;est pas n&eacute;cessaire. Ceci est particuli&egrave;rement utile lorsque l&#39;imagerie profond&eacute;ment dans des sections de tissu, comme c&#39;est n&eacute;cessaire pour les ovocytes de Xenopus, qui sont notoirement grand (environ 1 mm de diam&egrave;tre). Parce que les lasers multiphotoniques utilisent &eacute;nergie puls&eacute;e dans les longueurs d&#39;onde infrarouges, l&#39;&eacute;nergie peut &eacute;galement voyage plus loin dans les tissus avec la diffusion de la lumi&egrave;re beaucoup moins. Parce qu&#39;il n&#39;y a aucune excitation out-of-focus, phototoxicit&eacute; et photovieillissement photoblanchiment sont consid&eacute;rablement r&eacute;duits, qui est particuli&egrave;rement important pour des exp&eacute;riences &agrave; long terme qui n&eacute;cessitent la m&ecirc;me r&eacute;gion soient analys&eacute;s. Enfin, plusieurs fluorophores peut &ecirc;tre simultan&eacute;ment excit&eacute;s en raison plus larges spectres d&#39;absorption des colorants multiphotoniques. Dans ce chapitre, nous d&eacute;crivons les avantages et les inconv&eacute;nients de l&#39;utilisation de MPLSM pour l&#39;image par rapport &agrave; la microscopie confocale classique des ovocytes de Xenopus. L&#39;application pratique de l&#39;imagerie d&#39;ovocytes est d&eacute;montr&eacute;e par des exemples sp&eacute;cifiques.

Multiphoton microscopie &agrave; balayage laser comme un outil de recherche d&#39;ovocytes Xenopus.

Multiphoton-Laser-scanning-Mikroskopie (MPLSM) ist ein zunehmend wertvolles Instrument in der fluoreszierenden optische Bildgebung geworden. Es gibt einige deutliche Vorteile f&uuml;r die Implementierung von MPLSM als Xenopus Eizelle Forschungswerkzeug. MPLSM Signal-Rausch-Verh&auml;ltnis erh&ouml;ht und erh&ouml;ht daher die Bildqualit&auml;t, denn es gibt keine Out-of-Focus-Fluoreszenz, wie in der konventionellen oder konfokale Mikroskopie entstehen w&uuml;rden. Alle das Licht, das generiert wird, kann zusammengestellt und verwendet, um ein Bild zu generieren, da Punkt Nachweisvon descanned Fluoreszenz nicht erforderlich ist. Dies ist besonders n&uuml;tzlich, wenn imaging tief ins Gewebe Abschnitte, f&uuml;r Xenopus Oocytes, erforderlich ist, die notorisch gro&szlig;e (ca. 1 mm Durchmesser) sind. Da multiphoton-Laser verwendet pulsierte Energie in die Infrarot-Wellenl&auml;ngen, die Energie kann auch Reisen weiter in das Gewebe mit viel weniger Lichtstreuung. Denn es keine Out-of-Focus-Erregung gibt, sind Phototoxizit&auml;t, Lichtsch&auml;den und Photobleaching deutlich reduziert die ist besonders wichtig f&uuml;r langfristige Experimente, die die gleiche Region wiederholt gescannt werden m&uuml;ssen. Schlie&szlig;lich k&ouml;nnen mehrere Fluorophore gleichzeitig wegen der breiteren Absorptionsspektren multiphoton Farbstoffe begeistert sein. In diesem Kapitel beschreiben wir die vor- und Nachteile der Verwendung von MPLSM um zu Bild-Xenopus Oocytes im Vergleich zu konventionellen und konfokale Mikroskopie. Die praktische Anwendung von imaging Eizellen wird mit konkreten Beispielen demonstriert.

Multiphoton Laser-Rastermikroskopie als Werkzeug f&uuml;r Xenopus Eizelle Forschung.

Laser multifotonica microscopia (MPLSM) &egrave; diventato uno strumento sempre pi&ugrave; prezioso in imaging ottico fluorescente. Ci sono diversi vantaggi distinti all&#39;implementazione di MPLSM come strumento di ricerca di ovociti di Xenopus. MPLSM aumenta il rapporto segnale-rumore e quindi aumenta la qualit&agrave; dell&#39;immagine perch&eacute; non non c&#39;&egrave; alcuna fluorescenza out-of-focus, come se fosse creata in microscopia confocale o convenzionale. Tutta la luce che viene generata pu&ograve; essere raccolto e utilizzata per generare un&#39;immagine, in quanto punto di rilevamento della fluorescenza descanned non &egrave; necessaria. Questo &egrave; particolarmente utile quando imaging profondit&agrave; in sezioni di tessuto, come &egrave; necessario per gli ovociti di Xenopus, che sono notoriamente grande (circa 1 mm di diametro). Perch&eacute; utilizzare multifotonica laser pulsato energia nell&#39;infrarosso lunghezze d&#39;onda, l&#39;energia pu&ograve; anche viaggi ulteriormente nei tessuti con la diffusione della luce molto meno. Perch&eacute; non non c&#39;&egrave; nessuna eccitazione di out-of-focus, fototossicit&agrave;, fotodanneggiamento e photobleaching sono significativamente ridotti, che &egrave; particolarmente importante per gli esperimenti a lungo termine che richiedono la stessa regione per essere analizzato pi&ugrave; volte. Infine, fluorofori pi&ugrave; possono essere contemporaneamente eccitato a causa del pi&ugrave; ampi spettri di assorbimento di coloranti multifotonica. In questo capitolo, descriveremo i vantaggi e svantaggi dell&#39;utilizzo di MPLSM all&#39;immagine Xenopus oocytes rispetto al microscopia confocal e convenzionale. L&#39;applicazione pratica di ovociti di imaging &egrave; dimostrato con esempi specifici.

Laser multifotonica microscopia a scansione come uno strumento per la ricerca degli ovociti di Xenopus.

&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (MPLSM) &#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x86CD;&#x5149;&#x5149;&#x5B66;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066; MPLSM &#x3092;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x5229;&#x70B9;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MPLSM &#x306F;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5BFE;&#x96D1;&#x97F3;&#x6BD4;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x5F93;&#x6765;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x306E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x691C;&#x67FB;&#x6CD5;&#x3067;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3068;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AB;&#x30B9;&#x86CD;&#x5149;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x753B;&#x8CEA;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x5149;&#x3092;&#x53CE;&#x96C6;&#x3057;&#x3001;descanned &#x86CD;&#x5149;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x691C;&#x51FA;&#x306F;&#x5FC5;&#x8981;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x306E;&#x3067;&#x753B;&#x50CF;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x60AA;&#x540D;&#x9AD8;&#x3044;&#x5927; &#xFF08;&#x7D04; 1 mm &#x5F84;) &#x306F;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x6DF1;&#x3044;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5; &#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x4FBF;&#x5229;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC; &#x30D1;&#x30EB;&#x30B9; &#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x8D64;&#x5916;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3082;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x65C5;&#x884C;&#x304C;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x5149;&#x306E;&#x6563;&#x4E71;&#x3068;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3002;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AB;&#x30B9;&#x52B1;&#x8D77;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x5149;&#x6BD2;&#x6027;&#x3001;&#x5149;&#x640D;&#x50B7;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0;&#x5927;&#x5E45;&#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x540C;&#x3058;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x9577;&#x671F;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x524A;&#x6E1B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x8907;&#x6570; fluorophores &#x306F;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x67D3;&#x6599;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5438;&#x53CE;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x8208;&#x596E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7AE0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5229;&#x70B9;&#x3068;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F93;&#x6765;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x306E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x691C;&#x67FB;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B; MPLSM &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x6B20;&#x70B9;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5B9F;&#x7528;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x4F8B;&#x3067;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;

Multiphoton &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; (MPLSM) &#xD615;&#xAD11; &#xAD11;&#xD559; &#xC601;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC810;&#xC810; &#xB354; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. Xenopus oocyte &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; MPLSM&#xB97C; &#xAD6C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC77C;&#xBD80;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. MPLSM &#xC2E0;&#xD638; &#xB300; &#xC7A1;&#xC74C; &#xBE44;&#xC728;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xB610;&#xB294; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9CC;&#xB4E0; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC544;&#xBB34; &#xCD08;&#xC810; &#xC544;&#xC6C3; &#xD615;&#xAD11; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xD488;&#xC9C8;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBE5B; &#xC218;&#xC9D1; &#xD558; &#xACE0; descanned &#xD615;&#xAD11;&#xC758; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8; &#xD544;&#xC694; &#xC5C6;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Xenopus oocytes &#xC545;&#xBA85; &#xD070; (&#xC57D; 1 m m &#xC9C1;&#xACBD;) &#xD558;&#xB294; &#xD544;&#xC694;&#xB294; &#xC870;&#xC9C1; &#xC139;&#xC158;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE4A;&#xC740; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC720;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Multiphoton &#xB808;&#xC774;&#xC800;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD384;&#xC2A4; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xD30C;&#xC7A5; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC218; &#xB610;&#xD55C; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB35C; &#xBE5B; &#xC0B0;&#xB780;&#xACFC; &#xC870;&#xC9C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xB354; &#xC5EC;&#xD589;. &#xC5C6;&#xB2E4; &#xCD08;&#xC810; &#xBC16; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;, phototoxicity, photodamage, &#xBC0F; photobleaching&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C;, &#xBC18;&#xBCF5; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD2B9;&#xD788; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC5EC;&#xB7EC; fluorophores multiphoton &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xD761;&#xC218; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xD765;&#xBD84; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC804;&#xD1B5;&#xACFC; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; Xenopus oocytes &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; MPLSM&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC7A5;&#xB2E8;&#xC810;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Oocytes &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC758; &#xC2E4;&#xC6A9;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xD2B9;&#xC815; &#xC608;&#xC81C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC8C; Xenopus oocyte &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xC11C; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xB808;&#xC774;&#xC800;.

L&aacute;ser multifot&oacute;n microscop&iacute;a (MPLSM) se ha convertido en una herramienta cada vez m&aacute;s valiosa en im&aacute;genes &oacute;pticas fluorescente. Hay varias ventajas a la aplicaci&oacute;n MPLSM como una herramienta de investigaci&oacute;n de ovocitos de Xenopus. MPLSM aumenta la relaci&oacute;n se&ntilde;al a ruido y por lo tanto aumenta la calidad de la imagen porque no hay ninguna fluorescencia fuera de foco como se crear&iacute;a en microscop&iacute;a confocal o convencional. Toda la luz que se genera puede ser recogida y utilizada para generar una imagen porque no se requiere la detecci&oacute;n del punto de fluorescencia descanned. Esto es particularmente &uacute;til cuando la proyecci&oacute;n de imagen en secciones de tejido, como sea necesario para ovocitos de Xenopus, que son notoriamente grande (aproximadamente 1 mm de di&aacute;metro). Porque multifot&oacute;n l&aacute;seres utilizan energ&iacute;a pulsada en las longitudes de onda infrarrojas, la energ&iacute;a puede tambi&eacute;n viajes m&aacute;s en tejidos con mucho menos light scattering. Porque no hay ninguna excitaci&oacute;n fuera de foco, fototoxicidad, fotoenvejecimiento y photobleaching se redujeron significativamente, que es particularmente importante para los experimentos a largo plazo que requieren la misma regi&oacute;n que se analizar&aacute;n varias veces. Finalmente, fluor&oacute;foros m&uacute;ltiples pueden ser excitadas simult&aacute;neamente debido a los m&aacute;s amplios espectros de absorci&oacute;n de colorantes multifot&oacute;n. En este cap&iacute;tulo, se describen las ventajas y desventajas del uso de MPLSM a la imagen de ovocitos de Xenopus en comparaci&oacute;n con microscop&iacute;a confocal y convencional. La aplicaci&oacute;n pr&aacute;ctica de ovocitos de la proyecci&oacute;n de imagen se demuestra con ejemplos concretos.

L&aacute;ser multifot&oacute;n microscop&iacute;a como una herramienta para la investigaci&oacute;n de ovocitos de Xenopus.

PSD-95 est une prot&eacute;ine majeure dans les synapses excitatrices glutamatergiques pratiquement tous matures dans le cerveau. Ici, nous avons abord&eacute; le r&ocirc;le de PSD-95 en contr&ocirc;lant la fonction des synapses glutamatergiques en g&eacute;n&eacute;rant et en caract&eacute;risant une souris PSD-95 KO. Nous avons constat&eacute; que le sous-type de l&#39;acide alpha-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic (AMPA) du r&eacute;cepteur de glutamate (AMPAR)-transmission synaptique m&eacute;diatis&eacute;e a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite chez ces souris. Deux photons (2p) lib&eacute;ration du glutamate-INM sur l&#39;individu &eacute;pines a sugg&eacute;r&eacute; que la diminution de la fonction AMPAR chez la souris de PSD-95 KO d&eacute;coule d&#39;une augmentation de la proportion des synapses &laquo; silencieuses &raquo; c&#39;est-&agrave;-dire synapses contenant des r&eacute;cepteurs N-m&eacute;thyl-d-aspartate (NMDA) (NMDAR) mais aucun Glur1. Contre toute attente, les synapses silencieuses chez la souris KO sont trouvaient sur les &eacute;pines morphologiquement matures. Nous avons aussi observ&eacute; qu&#39;un nombre important de synapses ne semblait pas touch&eacute;e par d&eacute;l&eacute;tion du g&egrave;ne PSD-95, ce qui sugg&egrave;re que le r&ocirc;le fonctionnel de PSD-95 affiche synapse-sp&eacute;cificit&eacute;. En outre, les auteurs rapportent que la d&eacute;croissance du courant induite par le NMDAR &eacute;tait plus lente chez les souris KO : la contribution de la sous-unit&eacute; NR2B contenant des r&eacute;cepteurs au courant synaptique induite par le NMDAR est plus grande chez la souris KO. L&#39;occurrence plu de synapses silencieuses pourrait &ecirc;tre li&eacute;e &agrave; la plus grande ampleur de la potentialisation apr&egrave;s l&#39;induction de la potentialisation &agrave; long terme observ&eacute;e chez ces souris. Ensemble, ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent un r&ocirc;le sp&eacute;cifique &agrave; synapse pour PSD-95 dans le contr&ocirc;le de la fonction synaptique qui est ind&eacute;pendante de la morphologie de la colonne vert&eacute;brale.

Synapse-specific regulation of la fonction des r&eacute;cepteurs AMPA de PSD-95.

PSD 95 &#x662F;&#x8111;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6240;&#x6709;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x80FD;&#x7A81;&#x89E6;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x751F;&#x6210;&#x548C;&#x8868;&#x5F81; PSD 95 KO &#x9F20;&#x6807;&#x63A7;&#x5236;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x80FD;&#x7A81;&#x89E6;&#x529F;&#x80FD;&#x5904;&#x7406; PSD 95 &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;AMPAR&#xFF09; &#x7684; alpha-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic &#x9178; (AMPA) &#x5B50;&#x7C7B;&#x578B;-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x51CF;&#x5C11;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50; (2 P) uncaging MNI-&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x5230;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x7684;&#x523A;&#x5EFA;&#x8BAE; PSD 95 KO &#x9F20;&#x6807; AMPAR &#x529F;&#x80FD;&#x4E0B;&#x964D;&#x6E90;&#x4E8E;&quot;&#x65E0;&#x58F0;&quot;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x589E;&#x52A0;&#x5373;&#x542B;&#x6709; N-&#x7532;&#x57FA;-d-&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178; (NMDA) &#x53D7;&#x4F53; (NMDARs) &#x4F46;&#x6CA1;&#x6709; AMPARs &#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x3002;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x67EF;&#x9F20;&#x6807;&#x7684;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7A81;&#x89E6;&#x5747;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x6210;&#x719F;&#x5F62;&#x6001;&#x4E0A;&#x523A;&#x4E0A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x91CD;&#x5927;&#x4EBA;&#x53E3;&#x51FA;&#x73B0;&#x53D7; PSD 95 &#x57FA;&#x56E0;&#x7F3A;&#x5931;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; PSD 95 &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x89D2;&#x8272;&#x663E;&#x793A;&#x7A81;&#x89E6;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; NMDAR &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x8870;&#x51CF;&#x8F83;&#x6162; KO &#x5C0F;&#x9F20;&#xFF1A; &#x5305;&#x542B; NMDAR &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x7535;&#x6D41;&#x53D7;&#x4F53; NR2B &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x662F; KO &#x5C0F;&#x9F20;&#x66F4;&#x5927;&#x3002;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7A81;&#x89E6;&#x53D1;&#x751F;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0E;&#x957F;&#x65F6;&#x7A0B;&#x589E;&#x5F3A;&#x540E;&#x957F;&#x671F;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x957F;&#x65F6;&#x7A0B;&#x589E;&#x5F3A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x66F4;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x6709;&#x5173;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E3A; PSD 95 &#x63A7;&#x5236;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x810A;&#x67F1;&#x5F62;&#x6001;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

PSD 95 AMPA &#x53D7;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

PSD-95 is a major protein found in virtually all mature excitatory glutamatergic synapses in the brain. Here, we have addressed the role of PSD-95 in controlling glutamatergic synapse function by generating and characterizing a PSD-95 KO mouse. We found that the alpha-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid (AMPA)subtype of glutamate receptor (AMPAR)-mediated synaptic transmission was reduced in these mice. Two-photon (2P) uncaging of MNI-glutamate onto individual spines suggested that the decrease in AMPAR function in the PSD-95 KO mouse stems from an increase in the proportion of "silent" synapses i.e., synapses containing N-methyl-d-aspartate (NMDA) receptors (NMDARs) but no AMPARs. Unexpectedly, the silent synapses in the KO mouse were located onto morphologically mature spines. We also observed that a significant population of synapses appeared unaffected by PSD-95 gene deletion, suggesting that the functional role of PSD-95 displays synapse-specificity. In addition, we report that the decay of NMDAR-mediated current was slower in KO mice: The contribution of NR2B subunit containing receptors to the NMDAR-mediated synaptic current was greater in KO mice. The greater occurrence of silent synapses might be related to the greater magnitude of potentiation after long-term potentiation induction observed in these mice. Together, these results suggest a synapse-specific role for PSD-95 in controlling synaptic function that is independent of spine morphology.

Synapse-specific regulation of AMPA receptor function by PSD-95.

PSD-95 ist ein wichtiger Protein, das in praktisch allen Reifen exzitatorischen Glutamat Synapsen im Gehirn gefunden. Hier haben wir die Rolle des PSD-95 in Glutamat Synapse-Funktion zu steuern, die Generierung und Charakterisierung einer PSD-95 KO Maus angesprochen. Wir fanden, dass den alpha-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic S&auml;ure (AMPA)-Untertyp des Glutamat-Rezeptors (AMPAR)-vermittelten synaptischen &Uuml;bertragung in diesen M&auml;usen reduziert. Zwei-Photonen (2P) uncaging von MNI-Glutamat auf einzelnen Stacheln vorgeschlagen, dass der R&uuml;ckgang der AMPAR-Funktion in der PSD-95 KO Maus stammt aus einer Zunahme des Anteils der &quot;Stille&quot; Synapsen d.h. Synapsen mit N-Methyl-d-Aspartat (NMDA)-Rezeptoren (NMDARs) aber kein AMPARs. Unerwartet, befanden sich die stillen Synapsen in der KO-Maus auf morphologisch Reifen Stacheln. Wir beobachteten auch, dass eine gr&ouml;&szlig;ere Zahl von Synapsen erschien unbeeinflusst von PSD-95 gen l&ouml;schen, was darauf hindeutet, dass die funktionale Rolle der PSD-95 Synapse-Spezifit&auml;t zeigt. Dar&uuml;ber hinaus berichten wir, dass der Zerfall des aktuellen NMDAR-vermittelte KO-M&auml;usen langsamer war: der Beitrag der NR2B-Untereinheit mit Rezeptoren zum NMDAR-vermittelte synaptische Strom war gr&ouml;&szlig;er in KO-M&auml;usen. Das gr&ouml;&szlig;ere Vorkommen von stillen Synapsen beziehen sich m&ouml;glicherweise auf die gr&ouml;&szlig;ere Gr&ouml;&szlig;e der Potenzierung nach langfristige Erm&ouml;glichung Induktion in diesen M&auml;usen beobachtet. Zusammen, weisen diese Ergebnisse auf eine Synapse-spezifische Rolle f&uuml;r PSD-95 bei der Kontrolle der synaptischen Funktion, unabh&auml;ngig von der Morphologie der Wirbels&auml;ule ist.

Synapse-spezifische Verordnung der AMPA-Rezeptor-Funktion von PSD-95.

PSD-95 &egrave; una proteina importante trovata nelle sinapsi eccitatorie glutamatergico praticamente tutto maturo nel cervello. Qui, abbiamo affrontato il ruolo di PSD-95 nel controllo della funzione di sinapsi glutamatergico generando e che caratterizzano un topo KO PSD-95. Abbiamo trovato che il sottotipo di acido alpha-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic (AMPA) del recettore del glutammato (AMPAR)-Trasmissione sinaptica mediata &egrave; stato ridotto in questi topi. Due-fotone (2P) uncaging di MNI-glutammato sull&#39;individuo spine ha suggerito che la diminuzione nella funzione AMPAR nel topo KO PSD-95 deriva da un aumento nella proporzione della sinapsi &quot;silenziosi&quot; cio&egrave;, sinapsi che contengono recettori N-metil-d-aspartato (NMDA) (NMDARs) ma non AMPARs. Inaspettatamente, la sinapsi silenziose nel topo KO erano situate sulle spine morfologicamente maturi. Abbiamo anche osservato che una popolazione significativa di sinapsi apparsa influenzata dalla delezione di un gene PSD-95, suggerendo che il ruolo funzionale di PSD-95 Visualizza sinapsi-specificit&agrave;. Inoltre, segnaliamo che il decadimento della corrente NMDAR-mediata &egrave; stata pi&ugrave; lento nei topi KO: il contributo della subunit&agrave; NR2B che contengono recettori per la corrente sinaptica mediata NMDAR era maggiore nei topi KO. Maggiore occorrenza di sinapsi silenziose potrebbe essere correlata alla maggiore grandezza del potenziamento dopo l&#39;induzione di potenziamento a lungo termine osservati in questi topi. Insieme, questi risultati suggeriscono un ruolo specifico sinapsi per PSD-95 nel controllo della funzione sinaptica che &egrave; indipendente dalla morfologia della colonna vertebrale.

Sinapsi-specifico regolamento della funzione del recettore AMPA di PSD-95.

PSD 95 &#x4E8B;&#x5B9F;&#x4E0A;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x6210;&#x719F;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x8133;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x751F;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073; PSD 95 KO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B; PSD 95 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (AMPAR) &#x306E; alpha-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic &#x9178; (AMPA) &#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;-&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2 &#x5149;&#x5B50; (2 P) MNI l-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x306B;&#x500B;&#x3005; &#x306E; uncaging &#x795E;&#x7D4C;&#x68D8;&#x3092;&#x793A;&#x5506; PSD 95 KO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306E; AMPAR &#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x300C;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x300D;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304B;&#x3089;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;N-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;-d-&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178; (NMDA) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (NMDARs) &#x304C;&#x306A;&#x3044; AMPARs &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x830E;&#x3068;&#x3002;&#x4E88;&#x671F;&#x305B;&#x305A;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8; &#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9; KO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x5F62;&#x614B;&#x7684;&#x306B;&#x6210;&#x719F;&#x306E;&#x68D8;&#x4E0A;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x4EBA;&#x53E3;&#x304C; PSD 95 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x3044;&#x767B;&#x5834;&#x306B;&#x307E;&#x305F;&#x89B3;&#x5BDF; PSD 95 &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; NMDAR &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x304C; KO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x9045;&#x3044;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x5831;&#x544A;: KO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; NMDAR &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x542B;&#x3080; 2 b &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x304C;&#x5927;&#x304D;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8; &#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x767A;&#x751F;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9577;&#x671F;&#x5897;&#x5F37;&#x8A98;&#x5C0E;&#x5F8C;&#x5897;&#x5F37;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; PSD-95 &#x306E;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x8ABF;&#x7BC0; AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E; PSD 95 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3002;

PSD-95 &#xB1CC;&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xAC00; &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xD765;&#xBD84; &#xC131;&#xC758; glutamatergic&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; PSD 95 &#xCF54; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; glutamatergic &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0; PSD-95&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xD574;&#xACB0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (AMPAR)&#xC758; alpha-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic &#xC0B0; (AMPA) &#xD558;&#xC704; &#xC720;&#xD615;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC;-&#xC911;&#xC7AC; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1;&#xC774;&#xC774; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAD11;&#xC790; (2 P) &#xAC1C;&#xC778;&#xC5D0; MNI-&#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC;&#xC758; uncaging &#xCABD;&#xC774; &#xC81C;&#xC548; PSD 95 &#xCF54; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; AMPAR &#xD568;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xB86F; &#xB41C; &quot;&#xC790;&#xB3D9;&quot; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC758; &#xBE44;&#xC728; &#xC99D;&#xAC00; &#xC989;, &#xB0C5; &#xC5C6;&#xC74C; AMPARs &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; N-&#xBA54; &#xD2F8;-d-aspartate (NMDA) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (NMDARs)&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C;. &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C;, KO &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xCE68;&#xBB35; &#xB0C5; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xCABD;&#xC774;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58; &#xD574; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; &#xB0C5;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC778;&#xAD6C; &#xB4F1;&#xC7A5; PSD 95 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0AD;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; PSD-95&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560; &#xB0C5; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC81C;&#xC548; &#xAD00;&#xCC30;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; NMDAR &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xBD80;&#xD328;&#xB294; &#xCF54; &#xC950;&#xC5D0; &#xB290;&#xB9B0; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;: NR2B &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; NMDAR-&#xC911;&#xC7AC; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xB958;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xCF54; &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD070; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCE68;&#xBB35; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC758; &#xD070; &#xBC1C;&#xC0DD; potentiation &#xC7A5;&#xAE30; potentiation &#xC720;&#xB3C4;&#xC774; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD6C4;&#xC758; &#xD070; &#xADDC;&#xBAA8;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC788;&#xC744; &#xC218;&#xB3C4;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xCC99;&#xCD94; &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0; PSD-95 &#xB0C5; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAD8C;&#xD574; &#xB4DC;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;.

PSD-95&#xC5D0;&#xC11C; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xB0C5; &#xAD00;&#xB828; &#xADDC;&#xC815;.

PSD-95 es una importante prote&iacute;na encontrada en pr&aacute;cticamente todo maduro sinapsis glutamat&eacute;rgica excitatoria en el cerebro. Aqu&iacute;, hemos abordado el papel de PSD-95 en el control de la funci&oacute;n de sinapsis glutamat&eacute;rgica mediante la generaci&oacute;n y caracterizaci&oacute;n de un rat&oacute;n KO PSD-95. Encontramos que el subtipo de &aacute;cido alpha-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic (AMPA) del receptor del glutamato (AMPAR)-transmisi&oacute;n sin&aacute;ptica mediada se redujo en estos ratones. Dos fotones (2P) uncaging del MNI-glutamato en individuo espinas sugirieron que la disminuci&oacute;n en la funci&oacute;n AMPAR en el rat&oacute;n PSD-95 KO proviene de un aumento en la proporci&oacute;n de sinapsis &quot;silenciosas&quot; es decir, las sinapsis que contiene receptores N-metil-d-aspartato (NMDA) (NMDARs) pero no AMPARs. Inesperadamente, las sinapsis silenciosas en el rat&oacute;n KO se ubicaron en espinas morfol&oacute;gicamente maduros. Tambi&eacute;n observamos que una importante poblaci&oacute;n de sinapsis aparec&iacute;a inafectada por deleci&oacute;n del gen de PSD-95, lo que sugiere que el papel funcional de PSD-95 muestra especificidad sinapsis. Adem&aacute;s, se reporta que el decaimiento de la corriente NMDAR-mediada era m&aacute;s lento en los ratones KO: la contribuci&oacute;n de NR2B subunidad contiene receptores a la corriente sin&aacute;ptica mediada por NMDAR fue mayor en los ratones KO. La mayor ocurrencia de sinapsis silenciosas se pudieron relacionar con la mayor magnitud de potenciaci&oacute;n despu&eacute;s de la inducci&oacute;n de la potenciaci&oacute;n a largo plazo observada en estos ratones. Juntos, estos resultados sugieren un papel de sinapsis espec&iacute;ficas para PSD-95 en el control de la funci&oacute;n sin&aacute;ptica que es independiente de la morfolog&iacute;a de la columna vertebral.

Sinapsis espec&iacute;ficas regulaci&oacute;n de la funci&oacute;n de receptor AMPA por PSD-95.

&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x7EF4;&#x62A4;&#x548C;&#x4FDD;&#x62A4;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x66FE;&#x62A5;&#x9053;&#x968F;&#x7740;&#x5E74;&#x9F84;&#x4E0B;&#x964D;&#x4E86;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C55;&#x793A;&#x560C; (P2Y R) &#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5BF9;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x7684;&#x62B5;&#x6297;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x65E7;&#x7684;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE; P2Y-R &#x6FC0;&#x6D3B;&#x589E;&#x52A0;&#x5176;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x5230;&#x4E86;&#x523A;&#x6FC0;&#x5E74;&#x8F7B;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;P2Y-R &#x589E;&#x5F3A;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x53D7;&#x963B;&#x5206;&#x522B;&#x7531; oligomycin &#x548C; Xestospongin c&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; ATP &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x548C; IP3 &#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#xFF08;1,4,5&#xFF09; &#x808C;&#x9187;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178; (IP3) &#x7ED3;&#x5408;&#x3002;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x819C; permeant &#x6A21;&#x62DF;&#x7684; IP3 &#x4E5F;&#x4FDD;&#x62A4;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; P2Y-R &#x589E;&#x5F3A;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; Ca2 +-&#x4F9D;&#x8D56;&#x589E;&#x52A0;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x4EE3;&#x8C22;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8FD8;&#x63ED;&#x793A;&#x80FD;&#x591F;&#x8FC5;&#x901F;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x592E;&#x80FD;&#x6E90;&#x9700;&#x6C42;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x8870;&#x8001;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;

&#x560C;&#x523A;&#x6FC0;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC; IP3 Ca2 + &#x91CA;&#x653E;&#x589E;&#x52A0;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x4EE3;&#x8C22;&#x8001;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x63D0;&#x9AD8;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Astrocytes play an essential role in the maintenance and protection of the brain, which we reported was diminished with age. Here, we demonstrate that activation of a purinergic receptor (P2Y-R) signaling pathway, in astrocytes, significantly increases the resistance of astrocytes and neurons to oxidative stress. Interestingly, P2Y-R activation in old astrocytes increased their resistance to oxidative stress to levels that were comparable with stimulated young astrocytes. P2Y-R enhanced neuroprotection was blocked by oligomycin and by Xestospongin C, inhibitors of the ATP synthase and of inositol (1,4,5) triphosphate (IP3) binding to the IP3 receptor, respectively. Treatment of astrocytes with a membrane permeant analog of IP3 also protected astrocytes against oxidative stress. These data indicate that P2Y-R enhanced astrocyte neuroprotection is mediated by a Ca2+-dependent increase in mitochondrial metabolism. These data also reveal a signaling pathway that can rapidly respond to central energy needs throughout the aging process.

Purinergic receptor-stimulated IP3-mediated Ca2+ release enhances neuroprotection by increasing astrocyte mitochondrial metabolism during aging.

Les astrocytes jouent un r&ocirc;le essentiel dans le maintien et la protection du cerveau, dont nous avons signal&eacute; a &eacute;t&eacute; diminu&eacute;e avec l&#39;&acirc;ge. Ici, nous d&eacute;montrons que l&#39;activation d&#39;une voie de signalisation de r&eacute;cepteurs (P2Y-R) purinergiques, dans les astrocytes, augmente consid&eacute;rablement la r&eacute;sistance des astrocytes et neurones au stress oxydatif. Fait int&eacute;ressant, activation P2Y-R dans les astrocytes vieux ont augment&eacute; leur r&eacute;sistance au stress oxydatif, &agrave; des niveaux comparables avec les astrocytes jeunes stimul&eacute;es. Neuroprotection P2Y-r am&eacute;lior&eacute; a &eacute;t&eacute; bloqu&eacute;e par l&#39;oligomycine et xestopongin C, inhibiteurs de l&#39;ATP synthase et de liaison triphosphate (IP3) inositol (1,4,5) aux r&eacute;cepteurs IP3, respectivement. Traitement des astrocytes avec un analogue perm&eacute;ant de membrane de IP3 &eacute;galement prot&eacute;g&eacute;s contre le stress oxydatif, les astrocytes. Ces donn&eacute;es indiquent que la neuroprotection astrocyte P2Y-r am&eacute;lior&eacute; est m&eacute;di&eacute;e par Ca2 +-d&eacute;pendante hausse du m&eacute;tabolisme mitochondrial. Ces donn&eacute;es r&eacute;v&egrave;lent &eacute;galement une voie de signalisation qui peut r&eacute;pondre rapidement aux besoins de la centrale d&#39;&eacute;nergie tout au long du processus de vieillissement.

Purinergiques stimul&eacute;e par le r&eacute;cepteur induite par l&#39;IP3 lib&eacute;ration de Ca2 + augmente la neuroprotection par le m&eacute;tabolisme mitochondrial astrocyte croissante au cours du vieillissement.

Astrozyten spielen eine wesentliche Rolle bei der Pflege und Schutz des Gehirns, die wir mit zunehmendem Alter vermindert wurde berichtet. Hier zeigen wir, dass die Aktivierung von einem Purinergic Rezeptor (P2Y-R)-Signalweg, in Astrozyten, erh&ouml;ht deutlich den Widerstand der Astrozyten und Neuronen zu oxidativen Stress. Interessanterweise erh&ouml;ht P2Y-R Aktivierung im alten Astrozyten ihren Widerstand gegen oxidativen Stress auf ein Niveau, die vergleichbar mit stimulierte junge Astrozyten waren. P2Y-R erweitert Neuroprotektion wurde von Oligomycin und Xestospongin C, Inhibitoren der ATP-Synthase und Inosit (1,4,5) Triphosphat (IP3) Bindung an die IP3-Rezeptor blockiert. Behandlung von Astrozyten mit einer Membran permeant Analog der IP3 gesch&uuml;tzt auch Astrozyten gegen oxidativen Stress. Diese Daten zeigen, dass P2Y-R erweitert Gliazelle Nervenschutz durch eine Ca2 + vermittelt wird-abh&auml;ngige Anstieg der mitochondrialen Stoffwechsel. Diese Daten zeigen auch einen Signalweg, der zentralen Energiebedarf w&auml;hrend des Alterungsprozesses schnell reagieren.

Purinergic Rezeptor stimuliert IP3-vermittelte Ca2 + Release verbessert die Nervenschutz durch zunehmende Gliazelle mitochondrialen Stoffwechsel w&auml;hrend der Alterung.

Gli astrociti svolgono un ruolo essenziale nella manutenzione e nella protezione del cervello, che abbiamo segnalato &egrave; stata diminuita con l&#39;et&agrave;. Qui, ci dimostrano che attivazione di una via di segnalazione della recettore (P2Y-R) purinergic, negli astrociti, aumenta significativamente la resistenza di astrociti e neuroni per lo stress ossidativo. &Egrave; interessante notare che, attivazione P2Y-R negli astrociti vecchi aumentato la resistenza a stress ossidativo a livelli che erano paragonabili con gli astrociti giovani stimolati. P2Y-R enhanced neuroprotezione &egrave; stato bloccato da oligomycin e da Xestospongin C, inibitori della ATP sintasi e della associazione trifosfato (IP3) inositolo (1.4.5) al recettore IP3, rispettivamente. Trattamento degli astrociti con un analogo permeant membrana di IP3 protetti anche gli astrociti contro lo stress ossidativo. Questi dati indicano che P2Y-R enhanced Astrocita neuroprotezione &egrave; mediata da un Ca2 +-dipendente da aumento del metabolismo mitocondriale. Questi dati rivelano anche una via di segnalazione che pu&ograve; rispondere rapidamente alle esigenze di energia centrale durante tutto il processo di invecchiamento.

Purinergic stimolato recettore IP3-mediata Ca2 + release migliora la neuroprotezione da aumento del metabolismo mitocondriale Astrocita durante l&#39;invecchiamento.

&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5E74;&#x9F62;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x5831;&#x544A;&#x8133;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;P2Y-R&#xFF09; &#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x53E4;&#x3044;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E; P2Y R &#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x82E5;&#x3044;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3057;&#x305F;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x3078;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;P2Y R &#x5F37;&#x5316;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C; Xestospongin C&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB; (1,4,5) &#x4E09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178; (IP3) &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; IP3 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; ATP &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x819C;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x5074;&#x3078;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0; IP3 &#x306E;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3082;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; P2Y R &#x5F37;&#x5316;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77; ca 2 + &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;-&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x5897;&#x52A0;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x8001;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x4E2D;&#x306E;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x9700;&#x8981;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;

&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x523A;&#x6FC0; IP3 &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B; ca 2 + &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x5897;&#x52A0;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x52A0;&#x9F62;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5411;&#x4E0A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218; &#xBC0F; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB098; &#xC774;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xB1CC;&#xC758; &#xBCF4;&#xD638;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC774;&#xB2E4;, purinergic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (P2Y-R) &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;, &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC774;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC785;&#xC99D;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC624;&#xB798; &#xB41C; &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C; P2Y R &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; &#xC80A;&#xC740; &#xC774;&#xB2E4;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50;&#xD560; &#xC218;&#xC900;&#xC774; &#xD558; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D; &#xC99D;&#xAC00;. P2Y R &#xAC15;&#xD654; neuroprotection &#xAC01;&#xAC01; oligomycin&#xC640; Xestospongin C, ATP synthase&#xC758; &#xBC0F; &#xC774;&#xB178; &#xC2DC; &#xD1A8; (1,4,5) &#xC0BC;&#xC778;&#xC0B0; (IP3) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; IP3 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC800; &#xD574;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. I p 3&#xC758; &#xB9C9; permeant &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; &#xC774;&#xB2E4;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB610;&#xD55C; &#xC774;&#xB2E4; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xD638;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; P2Y R &#xAC15;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0; neuroprotection Ca2 +&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;-&#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xB178;&#xD654; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD558;&#xC5EC; &#xC911;&#xC559; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC694;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; &#xACF5;&#xAC1C;.

Purinergic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC790;&#xADF9; IP3 &#xC911;&#xC7AC; Ca2 + &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; neuroprotection &#xB178;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC99D;&#xAC00; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xB300;&#xC0AC; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Astrocitos juegan un papel esencial en el mantenimiento y la protecci&oacute;n del cerebro, que nos inform&oacute; que fue disminuida con la edad. Aqu&iacute;, demostramos que la activaci&oacute;n de una receptor (P2Y-R) de purin&eacute;rgicos v&iacute;a se&ntilde;alizaci&oacute;n, en los astrocitos, aumenta significativamente la resistencia de astrocitos y neuronas al estr&eacute;s oxidativo. Curiosamente, activaci&oacute;n de P2Y-R en los astrocitos viejos hab&iacute;a aumentado su resistencia al estr&eacute;s oxidativo a niveles que eran comparables con los astrocitos j&oacute;venes estimulados. Neuroprotecci&oacute;n P2Y-R mejorado fue bloqueado Oligomicina y Xestospongin C, inhibidores de la ATP Sintetasa y de enlace de inositol (1,4,5) trifosfato (IP3) al receptor IP3, respectivamente. Tratamiento de astrocitos con un an&aacute;logo de membrana Florescente de IP3 tambi&eacute;n protegidos astrocitos contra el estr&eacute;s oxidativo. Estos datos indican que P2Y-R mejorado Astrocito neuroprotecci&oacute;n es mediada por una Ca2 +-dependiente aumento en el metabolismo mitocondrial. Estos datos revelan tambi&eacute;n una v&iacute;a de se&ntilde;alizaci&oacute;n que pueda responder r&aacute;pidamente a las necesidades de energ&iacute;a central durante todo el proceso de envejecimiento.

Purin&eacute;rgicos estimulada receptor IP3 mediada por Ca2 + lanzamiento mejora la neuroprotecci&oacute;n aumento metabolismo mitocondrial de astrositos durante el envejecimiento.

&#x8868;&#x9762;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684; AMPA &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;AMPA &#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;AMPAR&#xFF09; &#x4E9A;&#x57FA;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53; 2 (GluR2) &#x603B;&#x7AD9; C &#x53CA;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; [&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#x5BC6;&#x5EA6;-95/&#x5149;&#x76D8;&#x5927;/zona &#x62FC;&#x88C5;-1] PDZ GluR2 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;-&#x57DF;&#x542B;&#x6709;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PICK1) &#x5DF2;&#x63D0;&#x51FA;&#x5728; GluR2 NMDA &#x53D7;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5185;&#x5316;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x5185;&#x90E8;&#x5316; GluR2 NMDA &#x53D7;&#x4F53; (NMDAR) &#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x7684;&#x547D;&#x8FD0;&#x3002;&#x5DF2;&#x62A5;&#x544A;&#x65E2;&#x56DE;&#x6536;&#x548C; GluR2 NMDAR &#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528; pH &#x654F;&#x611F;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;pHluorin&#xFF0C;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A; GluR2 &#x7684; N &#x603B;&#x7AD9; (pH GluR2) &#x7814;&#x7A76;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x5185;&#x5316;&#x548C; GluR2 NMDAR &#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;Photobleach (&#x8131;&#x8272;) &#x540E;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x6062;&#x590D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x76F4;&#x63A5;&#x8868;&#x660E;&#x5185;&#x5728;&#x7684; pH GluR2 &#x4E9A;&#x57FA; NMDAR &#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x56DE;&#x6536;&#x56DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E; GluR2 C &#x603B;&#x7AD9; S880 &#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x66F4;&#x6539;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; NMDAR &#x7684; GluR2&#x3001; &#x5185;&#x5316;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6539;&#x53D8; GluR2 NMDAR &#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x56DE;&#x6536;&#x5229;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; pH GluR2 &#x7684; N-ethylmaleimide-&#x654F;&#x611F;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;NSF&#xFF09; &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4F1A;&#x51CF;&#x6162;&#x53D7;&#x4F53;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7F3A;&#x4E4F; PICK1 &#x663E;&#x793A;&#x6B63;&#x5E38; NMDAR &#x4F9D;&#x8D56; GluR2 &#x56FD;&#x9645;&#x5316;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8868;&#x660E;&#x52A0;&#x901F; GluR2 NMDAR &#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; GluR2 S880 &#x548C; NSF &#x548C; PICK1 &#x52A8;&#x6001;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; GluR2 &#x89C4;&#x7BA1; GluR2 &#x56DE;&#x6536;&#x3002;

PICK1 &#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53; 2 (GluR2) AMPA &#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x89C4;&#x8303; GluR2 &#x56DE;&#x6536;&#x540E; NMDA &#x53D7;&#x4F53;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x5185;&#x5316;&#x3002;

Changes in surface trafficking of AMPA receptors play an important role in synaptic plasticity. Phosphorylation of the C terminus of the AMPA receptor (AMPAR) subunit glutamate receptor 2 (GluR2) and the binding of GluR2 to the PDZ [postsynaptic density-95/Discs large/zona occludens-1]-domain containing protein, protein interacting with protein kinase C (PICK1), have been proposed to play an important role in NMDA receptor dependent internalization of GluR2. However, the fate of internalized GluR2 after NMDA receptor (NMDAR) activation is still unclear. Both recycling and degradation of GluR2 after the activation of NMDAR have been reported. Here, we used a pH-sensitive green fluorescent protein variant, pHluorin, tagged to the N terminus of GluR2 (pH-GluR2) to study the dynamic internalization and recycling of GluR2 after NMDAR activation. Using fluorescence recovery after photobleach (FRAP), we directly demonstrate that internalized pH-GluR2 subunits recycle back to the cell surface after NMDAR activation. We further demonstrate that changing the phosphorylation state of the S880 residue at the C terminus of GluR2 does not affect NMDAR-dependent GluR2 internalization, but alters the recycling of GluR2 after NMDAR activation. In addition, mutation of the N-ethylmaleimide-sensitive fusion protein (NSF) binding site in the pH-GluR2 slows receptor recycling. Finally, neurons lacking PICK1 display normal NMDAR dependent GluR2 internalization compared with wild-type neurons, but demonstrate accelerated GluR2 recycling after NMDAR activation. These results indicate that phosphorylation of GluR2 S880 and NSF and PICK1 binding to GluR2 dynamically regulate GluR2 recycling.

PICK1 and phosphorylation of the glutamate receptor 2 (GluR2) AMPA receptor subunit regulates GluR2 recycling after NMDA receptor-induced internalization.

Changements dans le trafic de surface des r&eacute;cepteurs AMPA jouent un r&ocirc;le important dans la plasticit&eacute; synaptique. La phosphorylation de la C-terminale du r&eacute;cepteur glutamate AMPA receptor (AMPAR) sous-unit&eacute; 2 (GluR2) et la liaison de GluR2 pour le PDZ [disques-95/densit&eacute; postsynaptique grand/zona occludens-1]-domaine contenant prot&eacute;ines, interagit avec la prot&eacute;ine kinase C (PICK1), ont &eacute;t&eacute; propos&eacute;es pour jouer un r&ocirc;le important dans l&#39;internalisation d&eacute;pendante des r&eacute;cepteurs NMDA de GluR2. Toutefois, le sort de GluR2 int&eacute;rioris&eacute;e apr&egrave;s l&#39;activation du r&eacute;cepteur (NMDAR) NMDA est encore incertain. Recyclage et la d&eacute;gradation de GluR2 apr&egrave;s l&#39;activation des NMDAR ont &eacute;t&eacute; signal&eacute;s. Ici, nous avons utilis&eacute; une pHluorin variant, pH-sensibles &agrave; la prot&eacute;ine verte fluorescente, le tag &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale de GluR2 (pH-GluR2) pour &eacute;tudier l&#39;internalisation dynamique et le recyclage des GluR2 apr&egrave;s activation des NMDAR. &Agrave; l&#39;aide de r&eacute;cup&eacute;ration de fluorescence apr&egrave;s photobleach (PAF), nous d&eacute;montrons directement que les sous-unit&eacute;s int&eacute;rioris&eacute;e pH-GluR2 recyclent remontent vers la surface de la cellule apr&egrave;s l&#39;activation des NMDAR. Par ailleurs, nous d&eacute;montrent que modification de l&#39;&eacute;tat de phosphorylation des r&eacute;sidus &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; C terminale de GluR2 S880 n&#39;affecte pas l&#39;internalisation GluR2 NMDAR d&eacute;pendante, mais modifie le recyclage de GluR2 apr&egrave;s activation des NMDAR. En outre, la mutation du site de fixation prot&eacute;ique (NSF) N-&eacute;thylmal&eacute;imide-sensibles &agrave; la fusion dans le pH-GluR2 ralentit recyclage des r&eacute;cepteurs. Enfin, les neurones manquent PICK1 affichent normale NMDAR d&eacute;pendante GluR2 internalisation par rapport aux neurones de type sauvage, mais d&eacute;montrent acc&eacute;l&eacute;r&eacute;e GluR2 recyclage apr&egrave;s l&#39;activation des NMDAR. Ces r&eacute;sultats indiquent que la phosphorylation de GluR2 S880 et NSF et PICK1 liant &agrave; GluR2 dynamiquement r&egrave;glent GluR2 recyclage.

PICK1 et la phosphorylation du r&eacute;cepteur glutamate 2 (GluR2) r&eacute;glemente les sous-unit&eacute;s du r&eacute;cepteur AMPA GluR2 recyclage apr&egrave;s internalisation induite par le r&eacute;cepteur NMDA.

&Auml;nderungen in der Oberfl&auml;che des Menschenhandels AMPA-Rezeptoren spielen eine wichtige Rolle in synaptische Plastizit&auml;t. Phosphorylierung von Carboxyl-Terminus des AMPA-Rezeptor (AMPAR) Untereinheit Glutamat-Rezeptors 2 (GluR2) und die Bindung der GluR2 an PDZ [postsynaptisches Dichte-95/Scheiben gro&szlig;/Zona Occludens-1]-Dom&auml;ne enthaltenden Protein, Protein Interaktion mit Proteinkinase C (PICK1), wurden eine wichtige Rolle in NMDA-Rezeptor-abh&auml;ngige Internalisierung der GluR2 vorgeschlagen. Das Schicksal der verinnerlichten GluR2 nach Aktivierung der NMDA-Rezeptor (NMDAR) ist jedoch noch unklar. Recycling und Verschlechterung der GluR2 nach Aktivierung des NMDAR wurden gemeldet. Hier wir eine pH-Sensitive gr&uuml;n fluoreszierendes Protein Variante, pHluorin, markiert mit der Endstation N GluR2 verwendet (pH-Wert-GluR2), dynamische Verinnerlichung und das recycling von GluR2 nach NMDAR Aktivierung zu studieren. Mit Fluoreszenz-Wiederherstellung nach Photobleach (FRAP), zeigen wir direkt, dass verinnerlichten pH-Wert-GluR2-Untereinheiten zur&uuml;ck an der Zelloberfl&auml;che nach NMDAR Aktivierung recyceln. Wir zeigen weiter, dass nicht NMDAR-abh&auml;ngige GluR2 Internalisierung wirkt &Auml;ndern des Status der Phosphorylierung des R&uuml;ckstands S880 im C-Terminus der GluR2, aber &auml;ndert das recycling von GluR2 nach NMDAR Aktivierung. Dar&uuml;ber hinaus verlangsamt Mutation des Standortes Bindung Protein (NSF) f&uuml;r N-Ethylmaleimid-Sensitive-Fusion in der pH-Wert-GluR2-Rezeptor-recycling. Schlie&szlig;lich fehlt PICK1 Neuronen anzeigen normal NMDAR abh&auml;ngige GluR2 Internalisierung im Vergleich zu Wildtyp Neuronen, aber beschleunigte GluR2-recycling nach dem NMDAR Aktivierung zu demonstrieren. Diese Ergebnisse zeigen, dass die Phosphorylierung der GluR2-S880 und NSF und PICK1 binden an GluR2 dynamisch Regeln GluR2 Wiederverwertung.

PICK1 und Phosphorylierung des Glutamat-Rezeptors 2 (GluR2) regelt die AMPA-Rezeptor-Untereinheit GluR2 recycling nach dem NMDA-Rezeptor-induzierte Internalisierung.

Cambiamenti nel traffico di superficie dei recettori AMPA giocano un ruolo importante nella plasticit&agrave; sinaptica. La fosforilazione del C terminale del recettore AMPA receptor (AMPAR) subunit&agrave; glutammato 2 (GluR2) e l&#39;associazione di GluR2 di PDZ [postsinaptica densit&agrave;-95/dischi grandi/zona occludens-1]-contenenti proteina, proteina che interagisce con la proteina chinasi C (PICK1), sono state proposte per svolgere un ruolo importante nell&#39;interiorizzazione dipendente di NMDA receptor del GluR2. Tuttavia, il destino di interiorizzata GluR2 dopo l&#39;attivazione di NMDA receptor (NMDAR) &egrave; ancora poco chiaro. Riciclaggio e la degradazione di GluR2 dopo l&#39;attivazione di NMDAR sono stati segnalati. Qui, abbiamo utilizzato una proteina fluorescente verde pH-sensibile variante, pHluorin, messo a capolinea di GluR2 N (pH-GluR2) per studiare la dinamica internalizzazione e riciclaggio di GluR2 dopo attivazione NMDAR. Tramite fluorescenza recovery dopo photobleach (FRAP), direttamente dimostrare che le subunit&agrave; GluR2-pH interiorizzata riciclano torna alla superficie delle cellule dopo attivazione NMDAR. Noi dimostrare ulteriormente che la modifica dello stato di fosforilazione del residuo S880 al capolinea di GluR2 C non pregiudica NMDAR-dipendente GluR2 interiorizzazione, ma altera il riciclaggio di GluR2 dopo attivazione NMDAR. Inoltre, mutazione del sito di legame della proteina (NSF) N-ethylmaleimide-sensitive fusion in pH-GluR2 rallenta il riciclo del recettore. Infine, neuroni manca PICK1 visualizzazione normale NMDAR dipendente GluR2 interiorizzazione confrontato con selvaggio-tipo neuroni, ma dimostrano accelerata GluR2 riciclaggio dopo attivazione NMDAR. Questi risultati indicano che la fosforilazione di S880 GluR2 e NSF e PICK1 associazione a GluR2 dinamicamente regolare GluR2 riciclaggio.

PICK1 e la fosforilazione del recettore glutammato 2 (GluR2) regola la subunit&agrave; del recettore AMPA GluR2 riciclaggio dopo interiorizzazione indotta dal recettore NMDA.

&#x8868;&#x9762;&#x306E; AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x518D;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;C &#x672B;&#x7AEF; (GluR2) AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (AMPAR) &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E; 2 &#x3068; GluR2 PDZ [&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F8C;&#x5BC6;&#x5EA6;-95/&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5927;/&#x30BE;&#x30CA;&#x6BDB;&#x7D30;&#x8840;&#x7BA1;-1] &#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;-NMDA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x5185;&#x9762;&#x5316; GluR2 &#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C (PICK1) &#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5185;&#x9762; GluR2 NMDA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (NMDAR) &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068; NMDAR &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C; GluR2 &#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; GluR2 &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x4ED8;&#x3044;&#x305F; pH &#x611F;&#x5FDC;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;pHluorin&#x3001;&#x4F7F;&#x7528; (pH-GluR2) &#x52D5;&#x7684;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CA;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068; GluR2 &#x306E; NMDAR &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x56DE;&#x5FA9; (FRAP) photobleach &#x5F8C;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x5185;&#x9762; pH GluR2 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; NMDAR &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B; S880 &#x6B8B;&#x6E23; GluR2 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F; NMDAR &#x4F9D;&#x5B58; GluR2 &#x5185;&#x9762;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C; GluR2 &#x306E; NMDAR &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;pH GluR2 &#x306E; N n-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (NSF) &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x304C;&#x9045;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;PICK1 &#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x901A;&#x5E38; NMDAR &#x4F9D;&#x5B58; GluR2 &#x5185;&#x5316;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x304C;&#x52A0;&#x901F; GluR2 &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x5F8C;&#x306E; NMDAR &#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3059; GluR2 S880 &#x306E; NSF &#x305D;&#x3057;&#x3066; PICK1 &#x306E; GluR2 &#x3078;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x9023;&#x7D50;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B; GluR2 &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

PICK1 &#x3068;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; 2 &#xFF08;GluR2&#xFF09; &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B; GluR2 NMDA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8A98;&#x8D77;&#x5185;&#x5728;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. PDZ [postsynaptic &#xBC00;&#xB3C4;-95/&#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; &#xB300;&#xD615;/zona occludens-1]&#xC5D0; Glur2&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; (GluR2) &#xC218;&#xC6A9; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (AMPAR) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xCCB4; 2&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8; &#xBC0F; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;-&#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PICK1)&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; NMDA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; Glur2&#xC758; &#xC885;&#xC18D; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, NMDA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (NMDAR) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; Glur2&#xC758; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC740; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;. &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC800;&#xD558; Glur2&#xC758; NMDAR&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC774;&#xD6C4; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;, Ph&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCC0;&#xD615;, pHluorin, Glur2&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xD0DC;&#xADF8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC801; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC640; Glur2&#xC758; NMDAR &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xACF5;&#xBD80; (pH GluR2). &#xD615;&#xAD11; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; photobleach (FRAP) &#xD6C4;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC9C1;&#xC811; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; pH GluR2 subunits NMDAR &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xADF8; NMDAR &#xC885;&#xC18D; GluR2 &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC5D0;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; Glur2&#xC758; C &#xC2EC;&#xD50C;&#xD558;&#xAC8C; S880 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; GluR2 NMDAR &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; pH GluR2 N ethylmaleimide &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (NSF) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC18D;&#xB3C4;&#xAC00; &#xB290;&#xB824;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, PICK1 &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xB274;&#xB7F0; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; NMDAR &#xC885;&#xC18D; GluR2 &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAC00;&#xC18D; GluR2 NMDAR &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xD6C4; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC785;&#xC99D;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; GluR2 S880 &#xBC0F; NSF&#xC640; pick1&#xC758; GluR2 &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xADDC;&#xC81C; Glur2&#xC744; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;.

Pick1&#xC640; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; 2 (GluR2)&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC870;&#xC808; GluR2 NMDA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC720;&#xB3C4; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xD6C4; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;.

Cambios en el tr&aacute;fico superficial de receptores AMPA juegan un papel importante en la plasticidad sin&aacute;ptica. Fosforilaci&oacute;n de la terminal C de los receptores de glutamato de subunidad AMPA receptor (AMPAR) 2 (GluR2) y la Uni&oacute;n de GluR2 para el PDZ [postsin&aacute;pticos densidad-95/discos grandes/zona occludens-1]-dominio que contiene prote&iacute;na, interacci&oacute;n con la prote&iacute;na quinasa C (PICK1), se han propuesto para jugar un papel importante en la internalizaci&oacute;n dependiente de receptores NMDA de GluR2. Sin embargo, el destino de internalizada GluR2 despu&eacute;s de la activaci&oacute;n del receptor (NMDAR) de NMDA es todav&iacute;a confuso. Reciclaje y degradaci&oacute;n de GluR2 despu&eacute;s de la activaci&oacute;n de NMDAR se han divulgado. Aqu&iacute;, utilizamos un pHluorin variante, pH-sensibles a la prote&iacute;na verde fluorescente, con la etiqueta a la terminal N de GluR2 (pH-GluR2) para estudiar la internalizaci&oacute;n de la din&aacute;mica y el reciclaje de GluR2 despu&eacute;s de la activaci&oacute;n de NMDAR. Despu&eacute;s de photobleach (FRAP) mediante la recuperaci&oacute;n de fluorescencia, directamente demostramos que internalizada pH-GluR2 subunidades reciclan hacia la superficie de la c&eacute;lula despu&eacute;s de la activaci&oacute;n de NMDAR. Adem&aacute;s, demostramos que cambiar el estado de fosforilaci&oacute;n de los residuos S880 en la terminal C de GluR2 no afecta la internalizaci&oacute;n GluR2 NMDAR-dependiente, pero altera el reciclaje de GluR2 despu&eacute;s de la activaci&oacute;n de NMDAR. Adem&aacute;s, la mutaci&oacute;n del sitio de uni&oacute;n de la prote&iacute;na (NSF) sensibles a N-etilmaleimida fusi&oacute;n en el pH-GluR2 disminuye receptor reciclaje. Finalmente, las neuronas falta PICK1 Mostrar la internalizaci&oacute;n de GluR2 dependiente NMDAR de normal, que en comparaci&oacute;n con las neuronas de tipo salvaje, pero demuestran acelerado GluR2 reciclaje despu&eacute;s de la activaci&oacute;n de NMDAR. Estos resultados indican que la fosforilaci&oacute;n de GluR2 S880 y NSF PICK1 vinculante a GluR2 din&aacute;micamente regular GluR2 reciclaje.

PICK1 y fosforilaci&oacute;n del receptor del glutamato 2 (GluR2) regula la subunidad del receptor AMPA GluR2 reciclaje despu&eacute;s de internalizaci&oacute;n inducida por el receptor NMDA.

&#x541B; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x6FC0;&#x9176; (JNKs) &#x88AB;&#x5377;&#x5165;&#x5404;&#x79CD;&#x795E;&#x7ECF;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;JNKs &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECD;&#x7136;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x9AD8;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8111;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684; JNKs&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53C8;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x67E5;&#x660E; AMPA &#x53D7;&#x4F53; GluR2L &#x548C; GluR4 &#x4E9A;&#x57FA;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x751F;&#x7406; JNK &#x57FA;&#x8D28;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x5F02;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E00;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;GluR2L &#x548C; GluR4 &#x5173;&#x8054;&#x7279;&#x5B9A; JNK &#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728; GluR2L &#x548C; GluR4 &#x7684;&#x65B0;&#x578B; JNK &#x7AD9;&#x70B9;&#x8C03;&#x5236;&#x662F;&#x52A8;&#x6001;&#x548C;&#x53CC;&#x5411;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x81F4;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C; de-phosphorylation&#xFF0C;&#x89E6;&#x53D1;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x51CF;&#x5C11;&#x5E76;&#x5206;&#x522B;&#x589E;&#x52A0;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5728;&#x5206;&#x949F;&#x5185;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9E;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x6765;&#x89E3;&#x51B3;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x65B0;&#x578B; JNK &#x7F51;&#x7AD9; GluR2L &#x5728;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x57FA;&#x5E95; GluR2L &#x8D29;&#x8FD0;&#x63A7;&#x5236;&#x91CD;&#x8FD4;&#x793E;&#x4F1A;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x5316; GluR2L &#x56DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x4EE5;&#x4E0B; NMDA &#x5904;&#x7406;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x66F4;&#x6539;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x540E;&#x679C;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; JNK &#x76F4;&#x63A5;&#x8C03;&#x8282; AMPA-R &#x8D29;&#x5356;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x66F4;&#x6539;&#x4E2D;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E2D;&#x8FC5;&#x901F;&#x548C;&#x53CC;&#x5411;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;

AMPA &#x53D7;&#x4F53;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684; JNK &#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x53CC;&#x5411;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

Jun N-terminal kinases (JNKs) are implicated in various neuropathological conditions. However, physiological roles for JNKs in neurons remain largely unknown, despite the high expression level of JNKs in brain. Here, using bioinformatic and biochemical approaches, we identify the AMPA receptor GluR2L and GluR4 subunits as novel physiological JNK substrates in vitro, in heterologous cells and in neurons. Consistent with this finding, GluR2L and GluR4 associate with specific JNK signaling components in the brain. Moreover, the modulation of the novel JNK sites in GluR2L and GluR4 is dynamic and bi-directional, such that phosphorylation and de-phosphorylation are triggered within minutes following decreases and increases in neuronal activity, respectively. Using live-imaging techniques to address the functional consequence of these activity-dependent changes we demonstrate that the novel JNK site in GluR2L controls reinsertion of internalized GluR2L back to the cell surface following NMDA treatment, without affecting basal GluR2L trafficking. Taken together, our results demonstrate that JNK directly regulates AMPA-R trafficking following changes in neuronal activity in a rapid and bi-directional manner.

Rapid and bi-directional regulation of AMPA receptor phosphorylation and trafficking by JNK.

Kinases Jun N-terminal (JNKs) sont impliqu&eacute;es dans diverses conditions neuropathologiques. Cependant, les r&ocirc;les physiologiques pour JNKs dans les neurones demeurent largement inconnues, malgr&eacute; le niveau &eacute;lev&eacute; d&#39;expression de JNKs dans le cerveau. Ici, &agrave; l&#39;aide de bioinformatique et approches biochimiques, nous identifions le r&eacute;cepteur AMPA GluR2L et GluR4 sous-unit&eacute;s comme roman physiologiques JNK substrats in vitro dans les cellules h&eacute;t&eacute;rologues et dans les neurones. Conform&eacute;ment &agrave; cette conclusion, GluR2L et GluR4 associent JNK sp&eacute;cifique des composants dans le cerveau de signalisation. En outre, la modulation des nouveaux sites JNK dans GluR2L et GluR4 est dynamique et bidirectionnelle, telle que la phosphorylation et de-phosphorylation sont d&eacute;clench&eacute;s dans les minutes qui suit diminue et augmente l&#39;activit&eacute; neuronale, respectivement. &Agrave; l&#39;aide de techniques d&#39;imagerie en direct d&#39;aborder les cons&eacute;quences fonctionnelles de ces changements d&#39;activit&eacute; d&eacute;pendante, nous d&eacute;montrons que le site JNK roman en GluR2L contr&ocirc;le r&eacute;insertion d&#39;int&eacute;rioris&eacute;e GluR2L retour &agrave; la cellule suivant NMDA traitement de surface sans affecter le trafic de GluR2L basale. Globalement, nos r&eacute;sultats d&eacute;montrent que JNK directement r&eacute;gule les changements suivants traite AMPA-R dans l&#39;activit&eacute; neuronale de mani&egrave;re rapide et bidirectionnelle.

R&egrave;glement Rapid et bidirectionnel de phosphorylation du r&eacute;cepteur AMPA et le trafic de JNK.

Jun N-terminale Kinasen (JNKs) sind in verschiedenen Neuropathologische Bedingungen beteiligt. Physiologische Rollen f&uuml;r JNKs in Neuronen bleiben jedoch weitgehend unbekannt, trotz hoher Ausdrucksebene der JNKs im Gehirn. Hier identifizieren mit Bioinformatic und biochemische Ans&auml;tze, wir der AMPA-Rezeptor GluR2L und GluR4-Untereinheiten als neuartige physiologische JNK Substrate in vitro in heterologe Zellen und Neuronen. In &Uuml;bereinstimmung mit dieser Feststellung, ordnen GluR2L und GluR4 bestimmten JNK Signalisierung Komponenten im Gehirn. Dar&uuml;ber hinaus ist die Modulation der neuartigen JNK Standorte in GluR2L und GluR4 dynamisch und bidirektional, so dass innerhalb von Minuten Phosphorylierung und De-phosphorylation ausgel&ouml;st werden, folgende Abnahmen und Zunahmen in neuronale Aktivit&auml;t, bzw.. Verwenden Leben-Imaging Techniken, um die funktionale Konsequenz dieser T&auml;tigkeit-abh&auml;ngige &Auml;nderungen adressieren wir nachweisen, dass der Roman JNK-Standort in GluR2L Reintegration verinnerlichten GluR2L zur&uuml;ck zu der Zelle folgende NMDA Oberfl&auml;chenbehandlung, steuert ohne basale GluR2L Menschenhandel. Zusammengenommen zeigen unsere Ergebnisse, dass JNK direkt AMPA-R Menschenhandel folgende &Auml;nderungen in neuronale Aktivit&auml;t eine rasche und bidirektionale Weise reguliert.

Schnelle und Bi-direktionale Regulierung der AMPA-Rezeptor-Phosphorylierung und des Drogenhandels von JNK.

Chinasi Jun N-terminal (JNKs) sono implicate in varie condizioni neuropatologiche. Ruoli fisiologici per JNKs nei neuroni rimangono tuttavia in gran parte sconosciuti, nonostante il livello di alta espressione di JNKs nel cervello. Qui, utilizzando approcci biochimici e bioinformatiche, identifichiamo il recettore AMPA GluR2L e subunit&agrave; GluR4 come romanzo fisiologici JNK substrati in vitro, nelle cellule eterologa e nei neuroni. Coerente con questa constatazione, GluR2L e GluR4 associare specifici JNK segnalazione componenti nel cervello. Inoltre, la modulazione dei nuovi siti JNK GluR2L e GluR4 &egrave; dinamico e bi-direzionale, tale che la fosforilazione e de-phosphorylation vengono attivate in pochi minuti seguenti diminuisce e aumentano in attivit&agrave; neuronale, rispettivamente. Usando tecniche di imaging in diretta per affrontare la conseguenza funzionale di questi cambiamenti di attivit&agrave;-dipendente che dimostriamo che il romanzo sito di JNK GluR2L controlli reinserimento di interiorizzata GluR2L torna al cella seguente NMDA trattamento superficiale, senza influire sul traffico di GluR2L basale. Presi insieme, i nostri risultati dimostrano che JNK disciplina direttamente le modifiche seguenti traffico AMPA-R nell&#39;attivit&agrave; neuronale in maniera rapida e bi-direzionale.

Regolazione rapida e bi-direzionale di fosforilazione del recettore AMPA e il traffico di JNK.

Jun N &#x672B;&#x7AEF;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (JNKs) &#x306F;&#x7A2E;&#x3005; &#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;JNKs &#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x4E3B;&#x306B;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; JNKs &#x306E;&#x9AD8;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x306B;&#x4E0D;&#x660E;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x60C5;&#x5831;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; GluR2L &#x3068; GluR4 &#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x65B0;&#x898F;&#x751F;&#x7406; JNK &#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x3057;&#x3066; in vitro &#x7570;&#x7A2E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x306F;&#x3001;GluR2L &#x3068; GluR4 &#x7279;&#x5B9A;&#x306E; JNK &#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x51C6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068; de-phosphorylation &#x6B21;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x5897;&#x52A0;&#x5206;&#x4EE5;&#x5185;&#x304C;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x65B0;&#x898F; JNK &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; GluR2L &#x3068; GluR4 &#x3067;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306F;&#x52D5;&#x7684;&#x3068;&#x53CC;&#x65B9;&#x5411;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x65B0;&#x898F; JNK &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; GluR2L &#x3067;&#x57FA;&#x5E95; GluR2L &#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305A;&#x5185;&#x9762; GluR2L &#x30BB;&#x30EB;&#x8868;&#x9762;&#x6B21; NMDA &#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x623B;&#x308B;&#x306E;&#x518D;&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5E30;&#x7D50;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0; JNK &#x76F4;&#x63A5; AMPA R &#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x6B21;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x53CC;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068; JNK &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x53CC;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3002;

6 &#xC6D4; N &#xB9E8;&#xB05D; kinases (JNKs)&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; neuropathological &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; Jnks&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560; &#xB1CC;&#xC5D0; Jnks&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; GluR2L &#xBC0F; GluR4 subunits &#xC18C;&#xC124; &#xC0DD;&#xB9AC; JNK &#xAE30;&#xD310; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC2DD;&#xBCC4; bioinformatic &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC774; &#xBC1C;&#xACAC;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58;, GluR2L &#xBC0F; Glur4&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD2B9;&#xC815; JNK &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xB1CC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;. &#xB610;&#xD55C;, GluR2L &#xBC0F; GluR4 &#xC18C;&#xC124; JNK &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBCC0;&#xC870;&#xB294; &#xC5ED;&#xB3D9;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC9C0;&#xD5A5;&#xC131;, &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; de-phosphorylation &#xB2E4;&#xC74C; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC01;&#xAC01; &#xC99D;&#xAC00; &#xBD84; &#xC774;&#xB0B4; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;. &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC8FC;&#xC18C; Glur2l&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xC124; JNK &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAE30;&#xC800; GluR2L &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2E4;&#xC74C; NMDA &#xCC98;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; Glur2l&#xC758; &#xC7AC; &#xD22C;&#xC785;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC18D; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xACB0;&#xACFC;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; JNK &#xC9C1;&#xC811; &#xADDC;&#xC81C; AMPA-R &#xBC00;&#xB9E4; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC774; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xC591;&#xBC29;&#xD5A5; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xC591;&#xBC29;&#xD5A5; &#xADDC;&#xC81C; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; JNK&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;.

Quinasas Jun N-terminal (JNKs) est&aacute;n implicadas en distintas condiciones neuropathological. Sin embargo, funciones fisiol&oacute;gicas para JNKs en las neuronas todav&iacute;a siguen sin conocerse, pese al nivel de alta expresi&oacute;n de JNKs en cerebro. Aqu&iacute;, utilizando enfoques bioqu&iacute;micos y bioinform&aacute;tica, identificamos los receptores AMPA GluR2L y GluR4 subunidades como novela fisiol&oacute;gicos JNK sustratos in vitro, en c&eacute;lulas heter&oacute;logas y en las neuronas. Consistente con este hallazgo, GluR2L y GluR4 asociado con JNK espec&iacute;fico se&ntilde;alizaci&oacute;n componentes en el cerebro. Adem&aacute;s, la modulaci&oacute;n de los nuevos sitios JNK en GluR2L y GluR4 es din&aacute;mico y bidireccional, que se desencadenan fosforilaci&oacute;n y de-phosphorylation pocos minutos siguientes disminuye y aumenta en la actividad neuronal, respectivamente. Utilizando t&eacute;cnicas de imagen en vivo para abordar la consecuencia funcional de estos cambios dependientes de actividad que demostramos que el nuevo sitio JNK en GluR2L controla el reingreso internalizada GluR2L hacia el tratamiento superficial de la c&eacute;lula NMDA siguiente, sin afectar el tr&aacute;fico de GluR2L basal. Tomados en conjunto, nuestros resultados demuestran que JNK directamente regula cambios siguientes trata de AMPA-R en la actividad neuronal de una manera r&aacute;pida y bidireccional.

Regulaci&oacute;n r&aacute;pida y bidireccional de la fosforilaci&oacute;n del receptor AMPA y tr&aacute;fico por JNK.

AMPA &#x53D7;&#x4F53; (AMPARs) &#x4E2D;&#x7684;&#x63D2;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x671F;&#x95F4;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x7684; AMPARs &#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8C03;&#x63A7; AMPAR &#x63D2;&#x5165;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x3002;&#x7531;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316; GluR1 AMPAR &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x5728;&#x556E;&#x9F7F;&#x7C7B;&#x52A8;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x63D2;&#x5165;&#x4E8B;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; 4.1N &#x86CB;&#x767D;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56; GluR1 &#x63D2;&#x5165;&#x6240;&#x9700;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 816 (S816) &#x548C; S818 &#x6B8B;&#x7559;&#x91CF; GluR1 &#x589E;&#x5F3A; 4.1N &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; GluR1&#xFF0C;&#x5E76;&#x5E2E;&#x52A9; GluR1 &#x63D2;&#x5165;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;palmitoylation GluR1 C811 &#x6B8B;&#x7559;&#x8C03;&#x5236; PKC &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C; GluR1 &#x63D2;&#x5165;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6270;&#x4E71; 4.1N-&#x4F9D;&#x8D56; GluR1 &#x63D2;&#x5165;&#x4E0B;&#x8DCC; GluR1 &#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x65F6;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x4EE5;&#x524D;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x63A7;&#x5236;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56; GluR1 &#x8D29;&#x8FD0;&#x3001; &#x63ED;&#x793A; AMPAR palmitoylation &#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x548C;&#x5F3A;&#x8C03;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; 4.1N AMPAR &#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x7A81;&#x89E6;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3002;

&#x8C03;&#x63A7; AMPA &#x53D7;&#x4F53; extrasynaptic &#x63D2;&#x5165; 4.1N&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C; palmitoylation&#x3002;

The insertion of AMPA receptors (AMPARs) into the plasma membrane is an important step in the synaptic delivery of AMPARs during the expression of synaptic plasticity. However, the molecular mechanisms regulating AMPAR insertion remain elusive. By directly visualizing individual insertion events of the AMPAR subunit GluR1 in rodents, we found that the protein 4.1N was required for activity-dependent GluR1 insertion. Protein kinase C (PKC) phosphorylation of the serine 816 (S816) and S818 residues of GluR1 enhanced 4.1N binding to GluR1 and facilitated GluR1 insertion. In addition, palmitoylation of GluR1 C811 residue modulated PKC phosphorylation and GluR1 insertion. Finally, disrupting 4.1N-dependent GluR1 insertion decreased surface expression of GluR1 and the expression of long-term potentiation. Our study uncovers a previously unknown mechanism that governs activity-dependent GluR1 trafficking, reveals an interaction between AMPAR palmitoylation and phosphorylation, and underscores the functional importance of 4.1N in AMPAR trafficking and synaptic plasticity.

Regulation of AMPA receptor extrasynaptic insertion by 4.1N, phosphorylation and palmitoylation.

L&#39;insertion des r&eacute;cepteurs AMPA (Glur1) dans la membrane plasmique est une &eacute;tape importante dans la prestation synaptique des Glur1 au cours de l&#39;expression de la plasticit&eacute; synaptique. Cependant, les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires r&eacute;gulant insertion AMPAR demeurent insaisissables. Par visualisation directement des &eacute;v&eacute;nements individuels d&#39;insertion de la sous-unit&eacute; AMPAR GluR1 chez les rongeurs, nous avons constat&eacute; que la prot&eacute;ine 4.1N est requise pour l&#39;insertion de GluR1 activit&eacute; d&eacute;pendante. La prot&eacute;ine kinase C (PKC) phosphorylation de la s&eacute;rine 816 (S816) et S818 r&eacute;sidus de GluR1 am&eacute;lior&eacute; 4.1N liant &agrave; GluR1 et facilit&eacute; d&#39;insertion GluR1. En outre, palmitoylation du r&eacute;sidu GluR1 C811 modul&eacute; PKC phosphorylation et GluR1 insertion. Enfin, perturbant 4.1N-d&eacute;pendante GluR1 insertion a diminu&eacute; l&#39;expression superficielle de GluR1 et l&#39;expression de la potentialisation &agrave; long terme. Notre &eacute;tude r&eacute;v&egrave;le un m&eacute;canisme inconnu qui r&eacute;git l&#39;activit&eacute; d&eacute;pendante GluR1 trafic, r&eacute;v&egrave;le une interaction entre AMPAR palmitoylation et phosphorylation et souligne l&#39;importance fonctionnelle de 4.1N dans la plasticit&eacute; synaptique et de trafic AMPAR.

R&egrave;glement de l&#39;AMPA receptor extrasynaptic insertion par 4.1N, la phosphorylation et la palmitoylation.

Das Einf&uuml;gen von AMPA-Rezeptoren (AMPARs) in der Plasmamembran ist ein wichtiger Schritt in die synaptische Lieferung von AMPARs, w&auml;hrend der Ausdruck der synaptische Plastizit&auml;t. Die molekularen Mechanismen, die zur Regelung AMPAR Einf&uuml;gung bleiben jedoch tr&uuml;gerisch. Durch die Visualisierung direkt einzelne Einf&uuml;gung Ereignisse der AMPAR Untereinheit GluR1 bei Nagern, fanden wir, dass das Protein 4.1N f&uuml;r leistungsabh&auml;ngige GluR1 Einf&uuml;gung erforderlich war. Protein-Kinase C (PKC) Phosphorylierung von Serin 816 (S816) und S818 R&uuml;ckst&auml;nde von GluR1 verst&auml;rkte 4.1N binden an GluR1 und erleichtert GluR1 einf&uuml;gen. Zus&auml;tzlich moduliert Palmitoylation GluR1 C811 R&uuml;ckst&auml;nde PKC Phosphorylierung und GluR1 einf&uuml;gen. Schlie&szlig;lich st&ouml;ren 4.1N-abh&auml;ngige GluR1 Einf&uuml;gung verringerte Oberfl&auml;che Ausdruck des GluR1 und der Ausdruck der langfristigen Potenzierung. Unsere Studie belegt einen bisher unbekannten Mechanismus, der regelt, leistungsabh&auml;ngige GluR1 Handel, zeigt eine Interaktion zwischen AMPAR Palmitoylation und Phosphorylierung und unterstreicht die funktionelle Bedeutung des 4.1N in AMPAR des Drogenhandels und synaptische Plastizit&auml;t.

Verordnung AMPA-Rezeptor extrasynaptic Einf&uuml;gung von 4.1N, Phosphorylierung und Palmitoylation.

L&#39;inserimento dei recettori AMPA (AMPARs) nella membrana del plasma &egrave; un passo importante nella consegna sinaptica di AMPARs durante l&#39;espressione di plasticit&agrave; sinaptica. Tuttavia, i meccanismi molecolari che regolano inserimento AMPAR rimangano inafferrabili. Visualizzando direttamente gli eventi di inserimento individuale della subunit&agrave; GluR1 AMPAR nei roditori, abbiamo trovato che la proteina 4.1N &egrave; stato richiesta per l&#39;inserimento di GluR1 attivit&agrave;-dipendente. La proteina chinasi C (PKC) fosforilazione della serina 816 (S816) e S818 residui di GluR1 enhanced 4.1N associazione a GluR1 e facilitato GluR1 inserimento. Inoltre, palmitoilazione dei residui GluR1 C811 modulata GluR1 inserimento e fosforilazione della PKC. Infine, interrompendo 4.1N-dipendente GluR1 inserimento diminuita espressione superficiale di GluR1 ed espressione del potenziamento a lungo termine. Il nostro studio scopre un meccanismo sconosciuto che governa l&#39;attivit&agrave;-dipendente GluR1 traffico, rivela un&#39;interazione tra AMPAR palmitoilazione e fosforilazione e sottolinea l&#39;importanza funzionale della 4.1N nella plasticit&agrave; sinaptica e traffico AMPAR.

Regolamento di AMPA receptor extrasynaptic inserimento di 4.1N, fosforilazione e palmitoilazione.

AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (AMPARs) &#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1; AMPARs &#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306E;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;AMPAR &#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3002;&#x9F67;&#x6B6F;&#x52D5;&#x7269;&#x306E; AMPAR &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; GluR1 &#x306E;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 4.1N &#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027; GluR1 &#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C (PKC) &#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3001;816 (S816) &#x3068; S818 &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E; GluR1 GluR1 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; 4.1N &#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3001;GluR1 &#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF; GluR1 C811 &#x6B8B;&#x6E23;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF; PKC &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068; GluR1 &#x633F;&#x5165;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;4.1N &#x3092;&#x4E2D;&#x65AD;-&#x4F9D;&#x5B58; GluR1 &#x633F;&#x5165; GluR1 &#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x73FE;&#x3068;&#x9577;&#x671F;&#x5897;&#x5F37;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58; GluR1 &#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B; AMPAR &#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x5316;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3001;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;AMPAR &#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x53EF;&#x5851;&#x6027; 4.1N &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x8986;&#x3044;&#x3092;&#x53D6;&#x308B;&#x3002;

&#x898F;&#x5236;&#x306E; AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x633F;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x308B; 4.1N&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x5316;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3002;

&#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (AMPARs)&#xC758; &#xC0BD;&#xC785; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Ampars&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, AMPAR &#xC0BD;&#xC785;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC560;&#xB9E4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC124;&#xCE58;&#xB958;&#xC758; AMPAR &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; Glur1&#xC758; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC0BD;&#xC785; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 4.1N &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC18D; GluR1 &#xC0BD;&#xC785;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PKC) &#xC0B0;&#xD654; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 816&#xC758; (S816)&#xC640; Glur1&#xC758; S818 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 4.1N GluR1 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; GluR1 &#xC0BD;&#xC785;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C;. &#xB610;&#xD55C;, PKC &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; GluR1 &#xC0BD;&#xC785; GluR1 C811 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; palmitoylation &#xBCC0;&#xC870; &#xB418;&#xC5B4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, 4.1n&#xC744; &#xBC29;&#xD574;-&#xC885;&#xC18D; GluR1 &#xC0BD;&#xC785; &#xAC10;&#xC18C; Glur1&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xD45C;&#xD604; &#xBC0F; &#xC7A5;&#xAE30; potentiation &#xD45C;&#xD604;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; GluR1 &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xACE0; AMPAR palmitoylation &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;, &#xC0AC;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; AMPAR &#xBC00;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC5D0; 4.1n&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xBC11;&#xC904; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD3ED;&#xB85C; &#xD55C;&#xB2E4;.

AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, 4.1N, extrasynaptic &#xC0BD;&#xC785;&#xC758; &#xADDC;&#xC815; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; palmitoylation.

La inserci&oacute;n de los receptores AMPA (AMPARs) en la membrana plasm&aacute;tica es un paso importante en la entrega sin&aacute;ptica de AMPARs durante la expresi&oacute;n de la plasticidad sin&aacute;ptica. Sin embargo, los mecanismos moleculares que regulan la inserci&oacute;n AMPAR siendo esquivos. Al visualizar directamente los eventos individuales de inserci&oacute;n de la subunidad GluR1 AMPAR en roedores, encontramos que la prote&iacute;na 4.1N se requiere para la inserci&oacute;n de GluR1 dependientes de actividad. Fosforilaci&oacute;n de la prote&iacute;na quinasa C (PKC) de la serina 816 (S816) y residuos de S818 de GluR1 hab&iacute;a mejorado 4.1N a GluR1 y facilitaron la inserci&oacute;n de GluR1. Adem&aacute;s, palmitoilaci&oacute;n de residuo GluR1 C811 hab&iacute;a modulada fosforilaci&oacute;n de PKC y GluR1 inserci&oacute;n. Finalmente, interrumpir 4.1N-inserci&oacute;n dependiente de GluR1 disminuy&oacute; la expresi&oacute;n superficial de GluR1 y la expresi&oacute;n de la potenciaci&oacute;n a largo plazo. Nuestro estudio revela un mecanismo previamente desconocido que rige la actividad dependiente GluR1 tr&aacute;fico, revela una interacci&oacute;n entre la palmitoilaci&oacute;n AMPAR y fosforilaci&oacute;n y subraya la importancia funcional de 4.1N en la plasticidad sin&aacute;ptica y tr&aacute;fico AMPAR.

Reglamento de inserci&oacute;n extrasynaptic del receptor de la AMPA por 4.1N, fosforilaci&oacute;n y palmitoilaci&oacute;n.

AMPA &#x53D7;&#x4F53;&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D7;&#x4F53;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x548C;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F93;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x542B;&#x6709; AMPA &#x53D7;&#x4F53; GluA2 &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E0E;&#x8D28;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; pHluorin &#x6807;&#x8BB0; GluA2 &#x4E9A;&#x57FA;&#x548C;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7684; GluA2 &#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x63D2;&#x5165;&#x9700;&#x8981;&#x5728;&#x5176;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x57DF;&#x5185;&#x7684; NSF &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C; RNA &#x7F16;&#x8F91;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x533A;&#x57DF; Q/R &#x7F51;&#x7AD9; GluA2 &#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x63D2;&#x5165;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x7F1D;&#x9699; GluA2/3 &#x53D7;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x63D2;&#x5165;&#x5982;&#x4E0B; homomeric GluA2 &#x53D7;&#x4F53;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x89C4;&#x5219;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; GluA2 &#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5305;&#x542B; AMPA &#x53D7;&#x4F53;&#x53D7;&#x5176;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5143;&#x7D20;&#x3002;

&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x63D2;&#x5165; AMPA &#x53D7;&#x4F53; GluA2 &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x53D7; NSF &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C; Q/R &#x79BB;&#x5B50;&#x6BDB;&#x5B54;&#x7684;&#x7F16;&#x8F91;&#x3002;

The delivery of AMPA receptors to the plasma membrane is a critical step both for the synaptic delivery of these receptors and for the regulation of synaptic transmission. To directly visualize fusion events of transport vesicles containing the AMPA receptor GluA2 subunit with the plasma membrane we used pHluorin-tagged GluA2 subunits and total internal reflection fluorescence microscopy. We demonstrate that the plasma membrane insertion of GluA2 requires the NSF binding site within its intracellular cytoplasmic domain and that RNA editing of the Q/R site in the ion channel region plays a key role in GluA2 plasma membrane insertion. Finally, we show that plasma membrane insertion of heteromeric GluA2/3 receptors follows the same rules as homomeric GluA2 receptors. These results demonstrate that the plasma membrane delivery of GluA2 containing AMPA receptors is regulated by its unique structural elements.

Plasma membrane insertion of the AMPA receptor GluA2 subunit is regulated by NSF binding and Q/R editing of the ion pore.

La livraison des r&eacute;cepteurs AMPA &agrave; la membrane plasmique est une &eacute;tape cruciale pour la livraison synaptique de ces r&eacute;cepteurs et la r&eacute;glementation de la transmission synaptique. Pour visualiser directement les &eacute;v&eacute;nements de la fusion des v&eacute;sicules de transport contenant la sous-unit&eacute; de GluA2 r&eacute;cepteur AMPA avec la membrane plasmique, nous avons utilis&eacute; pHluorin-tag GluA2 sous-unit&eacute;s et microscopie de fluorescence de r&eacute;flexion totale interne. Nous d&eacute;montrons que l&#39;insertion de la membrane plasmique de GluA2 n&eacute;cessite l&#39;accepteur NSF au sein de son domaine cytoplasmique intracellulaire et que RNA &eacute;dition du site Q/R dans la r&eacute;gion de canal d&#39;ion joue un r&ocirc;le cl&eacute; dans la membrane plasmique de GluA2 d&#39;insertion. Enfin, nous montrons qu&#39;insertion de la membrane plasmique des r&eacute;cepteurs GluA2/3 h&eacute;t&eacute;rom&eacute;rique suit les m&ecirc;mes r&egrave;gles que les r&eacute;cepteurs homom&egrave;res GluA2. Ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent que la livraison de la membrane plasmique des GluA2 contenant des r&eacute;cepteurs AMPA est r&eacute;glement&eacute;e par ses &eacute;l&eacute;ments de structure uniques.

Insertion de la membrane plasmique de la sous-unit&eacute; de GluA2 r&eacute;cepteur AMPA est r&eacute;glement&eacute;e par la liaison de NSF et de Q/R &eacute;dition du pore ionique.

Die Lieferung von AMPA-Rezeptoren an der Plasmamembran ist ein entscheidender Schritt f&uuml;r die synaptische Lieferung dieser Rezeptoren und die Regulierung der synaptischen &Uuml;bertragung. Um Verschmelzung Ereignisse des Transport-Vesikel mit die AMPA-Rezeptor-GluA2-Untereinheit mit der Plasmamembran direkt zu visualisieren verwendet wir pHluorin-Tags GluA2 Untereinheiten und Totalreflexion Fluoreszenzmikroskopie. Wir zeigen, dass die Plasmamembran-Einf&uuml;gung von GluA2 die NSF-Bindungsstelle innerhalb seiner intrazellul&auml;ren zytoplasmatischen Dom&auml;ne erfordert und RNA Bearbeitung des Standortes Q/R in der Ionen-Kanal-Region eine Schl&uuml;sselrolle im GluA2 Plasmamembran einf&uuml;gen spielt. Schlie&szlig;lich zeigen wir, dass die Plasmamembran Einf&uuml;gung des heteromeren GluA2/3 Rezeptoren folgt die gleichen Regeln wie Homomeric GluA2 Rezeptoren. Diese Ergebnisse zeigen, dass die Plasmamembran-Lieferung von GluA2, enth&auml;lt AMPA-Rezeptoren durch seine einzigartige strukturelle Elemente reguliert wird.

Plasmamembran Einf&uuml;gung der AMPA-Rezeptor-GluA2-Untereinheit wird durch NSF-Bindung und Q/R Bearbeitung der Ion-Pore geregelt.

La consegna dei recettori AMPA alla membrana del plasma &egrave; un passo fondamentale sia per la consegna di questi recettori sinaptica per la regolazione della trasmissione sinaptica. Per visualizzare direttamente gli eventi di fusione delle vescicole di trasporto contenenti la subunit&agrave; GluA2 del recettore AMPA con la membrana plasmatica abbiamo usato pHluorin-messo GluA2 subunit&agrave; e microscopia di fluorescenza di riflessione interna totale. Dimostriamo che l&#39;inserimento della membrana del plasma di GluA2 richiede il sito di legame di NSF all&#39;interno del suo dominio intracellulare citoplasmatica e che RNA editing del sito Q/R nella regione del canale ionico gioca un ruolo chiave nell&#39;inserimento di GluA2 membrana plasmatica. Infine, ci mostra che la membrana plasmatica inserimento dei recettori GluA2/3 eteromerico segue le stesse regole come recettori homomeric GluA2. Questi risultati dimostrano che la consegna di membrana del plasma di GluA2 contenenti i recettori AMPA &egrave; regolamentata dai suoi unici elementi strutturali.

Inserimento della membrana plasmatica della subunit&agrave; GluA2 del recettore AMPA &egrave; regolato dall&#39;associazione NSF e Q/R modifica del poro ionico.

AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3002;AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; GluA2 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8F38;&#x9001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E; pHluorin GluA2 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;GluA2 &#x306E;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x633F;&#x5165; NSF &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x3067;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x3001;Q/R &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x306E; RNA &#x7DE8;&#x96C6;&#x30AD;&#x30FC;&#x5F79;&#x5272; GluA2 &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x633F;&#x5165;&#x3067;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;heteromeric GluA2/3 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x819C;&#x633F;&#x5165; homomeric GluA2 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x898F;&#x5247;&#x306B;&#x5F93;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x914D;&#x4FE1; GluA2 &#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x8981;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; GluA2 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x819C;&#x633F;&#x5165;&#x306B;&#x306F;&#x3001;NSF &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068; Q/R &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9593;&#x9699;&#x306E;&#x7DE8;&#x96C6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC804;&#xB2EC;&#xC774; &#xC218;&#xC6A9;&#xC774; &#xCCB4;&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xB2EC; &#xBC0F; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C1;&#xC811; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; GluA2 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xC1A1; vesicles&#xC758; &#xD4E8;&#xC804; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xB97C; GluA2 subunits pHluorin &#xD0DC;&#xADF8; &#xBC0F; &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Glua2&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9; &#xC0BD;&#xC785; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB0B4;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; NSF &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; GluA2 &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC0BD;&#xC785;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC2EC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; RNA &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; Q/R &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xD3B8;&#xC9D1;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; heteromeric GluA2/3 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC0BD;&#xC785; homomeric GluA2 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xADDC;&#xCE59;&#xC744; &#xB530;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; Glua2&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9; &#xBC30;&#xB2EC; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; GluA2 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC0BD;&#xC785; NSF &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; Q/R&#xC740; &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xD3B8;&#xC9D1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La entrega de receptores AMPA a la membrana plasm&aacute;tica es un paso cr&iacute;tico para la entrega sin&aacute;ptica de estos receptores tanto para la regulaci&oacute;n de la transmisi&oacute;n sin&aacute;ptica. Para visualizar directamente eventos de fusi&oacute;n de las ves&iacute;culas de transporte que contiene la subunidad de GluA2 del receptor AMPA con la membrana plasm&aacute;tica utilizamos etiquetas pHluorin GluA2 subunidades y microscop&iacute;a de fluorescencia de reflexi&oacute;n interna total. Demostramos que la inserci&oacute;n de la membrana plasm&aacute;tica de GluA2 requiere el sitio de uni&oacute;n de NSF dentro de su dominio citoplasm&aacute;tico intracelular y que RNA edici&oacute;n del sitio Q/R en la regi&oacute;n del canal del ion desempe&ntilde;a un papel clave en la inserci&oacute;n de la membrana plasm&aacute;tica de GluA2. Finalmente, demostramos que la inserci&oacute;n de la membrana plasm&aacute;tica de heterom&eacute;ricos GluA2/3 receptores sigue las mismas reglas como receptores de homomeric GluA2. Estos resultados demuestran que la entrega de la membrana plasm&aacute;tica de la GluA2 que contiene receptores AMPA est&aacute; regulada por sus &uacute;nicos elementos estructurales.

Inserci&oacute;n de la membrana plasm&aacute;tica de la subunidad de GluA2 del receptor AMPA est&aacute; regulada por la Uni&oacute;n de NSF y Q/R edici&oacute;n del poro ion.

PSD-95/SAP90/DLG/ZO-1 (PDZ) &#x57DF;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8C03;&#x63A7; AMPA &#x53D7;&#x4F53;&#x8D29;&#x5356;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x4E2D;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x540C;&#x6E90;&#x591A; PDZ &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7684; AMPA-R GluA2 &#x548C; GluA3 &#x4E9A;&#x57FA; C-&#x603B;&#x7AD9; GRIP1 &#x548C; GRIP2&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x66FE;&#x8BD5;&#x56FE;&#x786E;&#x5B9A; GRIP1 &#x548C; GRIP2 &#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F5C;&#x7528;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x590D;&#x6742;&#x975E;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8BD5;&#x5242;&#xFF0C;&#x800C;&#x7531;&#x5E38;&#x89C4; GRIP1 KO &#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x81F4;&#x6B7B;&#x7387;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x7ED5;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x6316; GRIP1 &#x4EA7;&#x540E;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6765;&#x81EA; GRIP2 KO &#x5C0F;&#x9F20;&#x6761;&#x4EF6;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x5730;&#x7684;&#x5220;&#x9664;&#x7B56;&#x7565;&#x3002;GRIP1 &#x548C; 2 &#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x6B63;&#x5E38; AMPA-R &#x7A33;&#x6001;&#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4F46;&#x660E;&#x663E;&#x53D7;&#x635F;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56; AMPA-R &#x56DE;&#x6536;&#x3002;GRIP1 &#x8FD9;&#x4EE5;&#x524D;&#x65E0;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x4ECB;&#x5BFC; exocyst &#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x901A;&#x8FC7;&#x8702;&#x7A9D;&#x7684;&#x8D29;&#x5356;&#x4EBA;&#x53E3;&#x673A;&#x68B0;&#x65B0;&#x578B;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x4E0A;&#xFF0C;GRIP1 exocyst &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x4E2D;&#x65AD;&#x9020;&#x6210;&#x60CA;&#x4EBA;&#x5730;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x8D64;&#x5B57; AMPA-R &#x5FAA;&#x73AF;&#x518D;&#x9020;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A; AMPA-R-GRIP1-exocyst &#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56; AMPA-R &#x8D29;&#x8FD0;&#x4EE5;&#x524D;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

GRIP1 &#x548C; 2 &#x8C03;&#x8282;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56; AMPA &#x53D7;&#x4F53;&#x56DE;&#x6536;&#x901A;&#x8FC7; exocyst &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

PSD-95/SAP90/DLG/ZO-1 (PDZ) domain-mediated protein-protein interactions play important roles in regulating AMPA receptor trafficking and neuronal plasticity. GRIP1 and GRIP2 are homologous multi-PDZ domain-containing proteins that bind to the C-termini of AMPA-R GluA2 and GluA3 subunits. Previous attempts to determine the cellular roles of GRIP1 and GRIP2 in neurons have been complicated by nonspecific reagents, and by the embryonic lethality of conventional GRIP1 KO mice. To circumvent these issues we developed a conditional targeted deletion strategy to knock out GRIP1 in postnatal neurons derived from GRIP2 KO mice. Loss of GRIP1 and 2 did not affect normal AMPA-R steady-state trafficking and endocytosis, but strikingly impaired activity-dependent AMPA-R recycling. This previously uncharacterized role for GRIP1 appears to be mediated by novel interactions with the cellular trafficking machinery via the exocyst protein complex. Indeed, disruption of GRIP1-exocyst binding caused a strikingly similar deficit in AMPA-R recycling. Together these findings reveal a previously unidentified role for AMPA-R-GRIP1-exocyst protein complexes in activity-dependent AMPA-R trafficking.

GRIP1 and 2 regulate activity-dependent AMPA receptor recycling via exocyst complex interactions.

Les interactions de prot&eacute;ine-prot&eacute;ine induite par le domaine de PSD-95/SAP90/DLG/ZO-1 (PDZ) jouent un r&ocirc;le important dans la r&eacute;gulation AMPA r&eacute;cepteur trafic et neuronale plasticit&eacute;. GRIP1 et GRIP2 sont homologues multi-PDZ domaine contenant prot&eacute;ines qui se lient &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute;s C-terminales des sous-unit&eacute;s AMPA-R GluA2 et GluA3. Les tentatives pr&eacute;c&eacute;dentes pour d&eacute;terminer les r&ocirc;les cellulaires des GRIP1 et GRIP2 dans les neurones ont &eacute;t&eacute; compliqu&eacute;es par des r&eacute;actifs non sp&eacute;cifiques et de la l&eacute;talit&eacute; embryonnaire de souris classiques de GRIP1 KO. Pour contourner ces probl&egrave;mes, nous avons d&eacute;velopp&eacute; une strat&eacute;gie conditionnelle suppression cibl&eacute;e pour assommer GRIP1 postnatal neurones provenant de souris GRIP2 KO. Perte de GRIP1 et 2 n&#39;affecte pas le trafic du stationnaire AMPA-R normal et endocytose, mais &eacute;tonnamment avec facult&eacute;s affaiblies activit&eacute; d&eacute;pendante AMPA-R recyclage. Ce r&ocirc;le non d&eacute;finie auparavant pour GRIP1 semble &ecirc;tre m&eacute;di&eacute;e par les nouvelles interactions avec la machinerie cellulaire de trafic par l&#39;interm&eacute;diaire de la prot&eacute;ine exocyst complexe. En effet, rupture de la liaison GRIP1-exocyst caus&eacute; un d&eacute;ficit de ressemblance frappante dans le recyclage de la LPCA-R. Ensemble, ces r&eacute;sultats r&eacute;v&egrave;lent un r&ocirc;le non identifi&eacute; auparavant pour AMPA-R-GRIP1-exocyst des complexes de prot&eacute;ine dans le trafic de la LPCA-R activit&eacute; d&eacute;pendante.

GRIP1 et 2 r&eacute;glementer r&eacute;cepteur d&#39;AMPA activit&eacute; d&eacute;pendante recyclage via des interactions complexes exocyst.

PSD-95/SAP90/DLG/ZO-1 (PDZ) Dom&auml;ne-vermittelte Proteinprotein Interaktionen spielen eine wichtige Rolle bei der Regulierung der AMPA-Rezeptor des Drogenhandels und neuronale Plastizit&auml;t. GRIP1 und GRIP2 sind homologe Multi-PDZ Dom&auml;nen-haltige Proteine, die an die C-Termini AMPA-R GluA2 und GluA3-Untereinheiten zu binden. Fr&uuml;here Versuche, um zu bestimmen, die zellularen Rollen von GRIP1 und GRIP2 in Neuronen wurden komplizierte durch unspezifische Reagenzien und durch die embryonale T&ouml;dlichkeit von konventionellen GRIP1 KO-M&auml;usen. Um diese Probleme zu umgehen haben wir eine bedingte gezielte L&ouml;schung-Strategie zur knock out GRIP1 in postnatale Neuronen abgeleitet GRIP2 KO M&auml;usen entwickelt. Verlust von GRIP1 und 2 hatte keine Auswirkungen auf die normale AMPA-R station&auml;ren Handel und Endozytose, sondern auffallend beeintr&auml;chtigt leistungsabh&auml;ngige AMPA-R Wiederverwertung. Diese zuvor uncharakterisiertes Rolle f&uuml;r GRIP1 erscheint durch neuartige Interaktionen mit den zellul&auml;ren Menschenhandel Maschinen &uuml;ber das Exocyst-Protein-komplexen vermittelt. Tats&auml;chlich f&uuml;hrte Unterbrechung des GRIP1-Exocyst-Bindung eine verbl&uuml;ffende &auml;hnliche Defizit im recycling von AMPA-R. Zusammen zeigen diese Ergebnisse eine zuvor unbekannte Rolle AMPA-R-GRIP1-Exocyst-Proteinkomplexe leistungsabh&auml;ngige AMPA-R Handel.

GRIP1 und 2 Regeln die leistungsabh&auml;ngige AMPA-Rezeptor-recycling &uuml;ber Exocyst komplexe Interaktionen.

Interazioni della proteina-proteina mediata dal dominio di PSD-95/SAP90/DLG/ZO-1 (PDZ) giocano un ruolo importante nella regolazione AMPA dei recettori neuronali e traffico plasticit&agrave;. GRIP1 e GRIP2 sono omologhe multi-PDZ dominio-contenente proteine che legano il C-termini di subunit&agrave; AMPA-R GluA2 e GluA3. Precedenti tentativi per determinare i ruoli cellulari di GRIP1 e GRIP2 nei neuroni sono stati complicati dai reagenti aspecifici e dalla letalit&agrave; embrionale di topi KO GRIP1 convenzionali. Per ovviare a questi problemi abbiamo sviluppato una strategia di eliminazione mirata condizionale a knock out GRIP1 in neuroni postnatali derivati da topi GRIP2 KO. Perdita di GRIP1 e 2 non ha interessato il normale traffico di steady-state AMPA-R ed endocitosi, ma sorprendentemente ridotta attivit&agrave;-dipendente AMPA-R riciclaggio. Questo ruolo precedentemente atipiche per GRIP1 sembra essere mediata da interazioni romanzo con il macchinario di traffico cellulare tramite il complesso della proteina exocyst. Infatti, interruzione del GRIP1-exocyst associazione causato un deficit sorprendentemente simile nel riciclaggio di AMPA-R. Insieme questi risultati rivelano un ruolo precedentemente non identificato per complessi della proteina AMPA-R-GRIP1-exocyst in attivit&agrave;-dipendente dal traffico AMPA-R.

GRIP1 e 2 regolano Recettore AMPA attivit&agrave;-dipendente di riciclaggio attraverso complesse interazioni exocyst.

PSD-95/SAP90/DLG/ZO-1 (PDZ) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GRIP1 &#x3068; GRIP2 AMPA R GluA2 &#x3068; GluA3 &#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; C &#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x76F8;&#x540C;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1; PDZ &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GRIP1 &#x3068; GRIP2 &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x8A66;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E; GRIP1 KO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x80DA;&#x81F4;&#x6B7B;&#x3067;&#x306F;&#x975E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x8A66;&#x85AC;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;GRIP1 &#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; GRIP2 KO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x751F;&#x5F8C;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x3066;&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x524A;&#x9664;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;GRIP1 &#x3068; 2 &#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x901A;&#x5E38; AMPA R &#x5B9A;&#x5E38;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3068;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3072;&#x3068;&#x304D;&#x308F;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027; AMPA R &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x969C;&#x5BB3;&#x3002;GRIP1 &#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x6A5F;&#x68B0;&#x88C5;&#x7F6E;&#x3068;&#x65B0;&#x898F;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x78BA;&#x304B;&#x306B;&#x3001;GRIP1 &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4E2D;&#x65AD;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x4F3C;&#x3066;&#x8D64;&#x5B57; AMPA R &#x3092;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3067;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027; AMPA R &#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3067; AMPA R GRIP1 &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x672A;&#x78BA;&#x8A8D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;

GRIP1 &#x3068; 2 &#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027; AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

PSD-95/SAP90/DLG/ZO-1 (PDZ) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC911;&#xC7AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBC00;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GRIP1 &#xBC0F; GRIP2 AMPA-R GluA2 &#xBC0F; GluA3 &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; C &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xB3D9;&#xC885; &#xBA40;&#xD2F0; PDZ &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740;. &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; GRIP1 &#xBC0F; GRIP2 &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC774;&#xC804; &#xC2DC;&#xB3C4; &#xC77C;&#xBC18; &#xC2DC; &#xC57D; &#xBC0F; &#xAE30;&#xC874; GRIP1 &#xCF54; &#xC950;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xCE58; &#xC0AC; &#xC728;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xAC8C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD68C;&#xD53C; GRIP2 &#xCF54; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC0B0; &#xD6C4; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; GRIP1 &#xBC16;&#xC73C;&#xB85C; &#xB178;&#xD06C;&#xB97C; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC0AD;&#xC81C; &#xC804;&#xB7B5; &#xAC1C;&#xBC1C;. GRIP1 &#xBC0F; 2 &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; AMPA-R &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBC00;&#xB9E4;&#xC640; endocytosis&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC18D; AMPA-R &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;. Grip1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB86D;&#xAC70;&#xB098; &#xC5ED;&#xD560;&#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; exocyst &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xAE30;&#xACC4;&#xC640; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB420; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C;, GRIP1 exocyst &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC911;&#xB2E8; AMPA-R &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC801;&#xC790; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xD568;&#xAED8; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC1C; AMPA-R-GRIP1-exocyst &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC18D; AMPA-R &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;.

GRIP1 &#xBC0F; 2 exocyst &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC870;&#xC808;.

Interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na mediada por dominio de PSD-95/SAP90/DLG/ZO-1 (PDZ) juegan un papel importante en la regulaci&oacute;n de la plasticidad de tr&aacute;fico y neuronal de receptores AMPA. GRIP1 y GRIP2 son prote&iacute;nas que contienen dominio hom&oacute;logo multi-PDZ que se unen a la C-termini de subunidades AMPA-R GluA2 y GluA3. Los intentos anteriores para determinar las funciones celulares de GRIP1 y GRIP2 en las neuronas se han complicado por reactivos no espec&iacute;ficos y la letalidad embrionaria de ratones KO GRIP1 convencionales. Para evitar estos problemas, que hemos desarrollado una estrategia de eliminaci&oacute;n espec&iacute;fica condicional para noquear a GRIP1 en neuronas postnatales derivadas de ratones KO GRIP2. P&eacute;rdida de GRIP1 y 2 no afect&oacute; el normal tr&aacute;fico de AMPA-R estacionaria y la endocitosis, pero notablemente deteriorado dependientes de actividad reciclaje AMPA-R. Este papel no previamente caracterizado por GRIP1 parece estar mediado por interacciones de novela con la maquinaria celular de tr&aacute;fico v&iacute;a el complejo de la prote&iacute;na exocyst. De hecho, interrupci&oacute;n del enlace GRIP1-exocyst caus&oacute; un d&eacute;ficit sorprendentemente similar en el reciclaje de AMPA-R. Juntos, estos resultados revelan una funci&oacute;n previamente no identificada para complejos de la prote&iacute;na de AMPA-R-GRIP1-exocyst en dependientes de actividad trata de AMPA-R.

GRIP1 y 2 regular del receptor AMPA dependientes de actividad reciclaje mediante complejas interacciones exocyst.

&#x975E;&#x667A;&#x529B;&#x6B8B;&#x75BE; (NSID) &#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x5FB7;&#x8BFA; (DNMs) &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x89E3;&#x91CA; NSID &#x6709;&#x96F6;&#x661F;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x5E8F; 197 &#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x548C;&#x5176;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x5728; NSID 95 &#x96F6;&#x661F;&#x7684;&#x4E2A;&#x6848;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5F88;&#x5927;&#x7684;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; 11 DNMs&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5341;&#x4E2A;&#x6F5C;&#x5728;&#x6709;&#x5BB3;&#x7A81;&#x53D8; (&#x4E09;&#x4E2A;&#x5E9F;&#x8BDD;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x62FC;&#x63A5;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x56DB;&#x4E2A;&#x9519;&#x4E49;) &#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E2D;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;&#x65E0;&#x63D0;&#x793A;&#xFF09; &#x5728;&#x516B;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x8BA1;&#x7B97;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x4E2D;&#x7ACB;&#x7684;&#x7F51;&#x7AD9;&#x70B9;&#x66FF;&#x4EE3;&#x79FB;&#x6C11;&#x5C40;&#x7387;&#x663E;&#x8457;&#x8FC7;&#x5269;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; DNMs &#x76F8;&#x6BD4;&#x4E2D;&#x7ACB;&#x7684;&#x3002;De novo &#x622A;&#x65AD;&#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; &#x62FC;&#x63A5;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; SYNGAP1&#x3001; STXBP1&#x3001; SHANK3 &#x516D;&#x540D;&#x75C5;&#x4EBA;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x3002;&#x5FB7;&#x8BFA;&#x9519;&#x4E49;&#x7A81;&#x53D8;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728; KIF1A&#x3001; GRIN1&#x3001; CACNG2&#x3001; EPB41L1&#x3002;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x6240;&#x6709;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9519;&#x4E49;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BF9;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6587;&#x5316;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5B83;&#x4EEC;&#x53EF;&#x80FD;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; NSID 50 &#x5176;&#x4ED6;&#x96F6;&#x661F;&#x7684;&#x4E2A;&#x6848;&#x4E2D;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728; GRIN1 &#x4E2D;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A; DNM (c.1679_1681dup/p.Ser560dup)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E5F;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x76F8;&#x4E00;&#x81F4;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#x6216;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5176;&#x4ED6; DNMs &#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728; 285 &#x5065;&#x5EB7;&#x63A7;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7A81;&#x51FA;&#x4E86;&#x5728; NSID &#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x652F;&#x6301; DNMs &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x6B64;&#x969C;&#x788D;&#x3002;

&#x8FC7;&#x91CF;&#x7684; de novo &#x6709;&#x5BB3;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E0E;&#x975E;&#x667A;&#x529B;&#x6B8B;&#x75BE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x80FD;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;

Little is known about the genetics of nonsyndromic intellectual disability (NSID). We hypothesized that de novo mutations (DNMs) in synaptic genes explain an important fraction of sporadic NSID cases. In order to investigate this possibility, we sequenced 197 genes encoding glutamate receptors and a large subset of their known interacting proteins in 95 sporadic cases of NSID. We found 11 DNMs, including ten potentially deleterious mutations (three nonsense, two splicing, one frameshift, four missense) and one neutral mutation (silent) in eight different genes. Calculation of point-substitution DNM rates per functional and neutral site showed significant excess of functional DNMs compared to neutral ones. De novo truncating and/or splicing mutations in SYNGAP1, STXBP1, and SHANK3 were found in six patients and are likely to be pathogenic. De novo missense mutations were found in KIF1A, GRIN1, CACNG2, and EPB41L1. Functional studies showed that all these missense mutations affect protein function in cell culture systems, suggesting that they may be pathogenic. Sequencing these four genes in 50 additional sporadic cases of NSID identified a second DNM in GRIN1 (c.1679_1681dup/p.Ser560dup). This mutation also affects protein function, consistent with structural predictions. None of these mutations or any other DNMs were identified in these genes in 285 healthy controls. This study highlights the importance of the glutamate receptor complexes in NSID and further supports the role of DNMs in this disorder.

Excess of de novo deleterious mutations in genes associated with glutamatergic systems in nonsyndromic intellectual disability.

On conna&#xEE;t peu la g&#xE9;n&#xE9;tique de la d&#xE9;ficience intellectuelle non syndromique (NSID). Nous avons suppos&#xE9; que des mutations de novo (DNMs) dans les g&#xE8;nes synaptiques expliquent une fraction importante de cas sporadiques NSID. Afin d&#x26;#39;&#xE9;tudier cette possibilit&#xE9;, nous avons s&#xE9;quenc&#xE9; 197 g&#xE8;nes codant pour des r&#xE9;cepteurs de glutamate et un grand sous-ensemble de leurs prot&#xE9;ines qui interagissent dans connus 95 cas sporadiques de NSID. Nous avons trouv&#xE9; 11 DNMs, y compris les dix mutations potentiellement d&#xE9;l&#xE9;t&#xE8;res (trois b&#xEA;tises, deux &#xE9;pissage, un d&#xE9;calage du cadre, quatre faux-sens) et une mutation neutre (silencieux) dans huit g&#xE8;nes diff&#xE9;rents. Calcul des taux de DNM point de substitution par site fonctionnel et neutre a montr&#xE9; un exc&#xE8;s significatif de DNMs fonctionnelles par rapport &#xE0; ceux neutres. De novo troncature et / ou des mutations dans l&#x26;#39;&#xE9;pissage SYNGAP1, STXBP1 et SHANK3 ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s chez six patients et sont susceptibles d&#x26;#39;&#xEA;tre pathog&#xE8;nes. Mutations faux-sens De novo ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s dans KIF1A, GRIN1, CACNG2, et EPB41L1. Les &#xE9;tudes fonctionnelles ont montr&#xE9; que toutes ces mutations faux-sens affectent la fonction des prot&#xE9;ines dans les syst&#xE8;mes de culture cellulaire, ce qui sugg&#xE8;re qu&#x26;#39;ils peuvent &#xEA;tre pathog&#xE8;nes. Le s&#xE9;quen&#xE7;age de ces quatre g&#xE8;nes dans 50 autres cas sporadiques de NSID identifi&#xE9; un DNM deuxi&#xE8;me GRIN1 (c.1679_1681dup/p.Ser560dup). Cette mutation affecte aussi la fonction des prot&#xE9;ines, compatibles avec les pr&#xE9;dictions de structure. Aucune de ces mutations ou tout autre DNMs autres ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s dans ces g&#xE8;nes dans 285 t&#xE9;moins sains. Cette &#xE9;tude met en &#xE9;vidence l&#x26;#39;importance des complexes de r&#xE9;cepteurs du glutamate dans NSID et soutient en outre le r&#xF4;le de DNMs dans ce d&#xE9;sordre.

Exc&#xE9;dent des mutations de novo d&#xE9;l&#xE9;t&#xE8;res dans les g&#xE8;nes associ&#xE9;s avec des syst&#xE8;mes glutamatergique dans la d&#xE9;ficience intellectuelle non syndromique

Poco se sabe sobre la gen&#xE9;tica de la discapacidad intelectual no sindr&#xF3;mica (NSID). La hip&#xF3;tesis de que mutaciones de novo (DNMs) en los genes sin&#xE1;pticos explican una fracci&#xF3;n importante de casos espor&#xE1;dicos NSID. Con el fin de investigar esta posibilidad, la secuencia de 197 genes que codifican los receptores de glutamato y un gran subconjunto de sus prote&#xED;nas conocidas que interact&#xFA;an en 95 casos espor&#xE1;dicos de NSID. Se encontraron 11 DNMs, incluyendo diez mutaciones potencialmente nocivos (tres tonter&#xED;as, dos de empalme, un marco de lectura, cuatro sin sentido) y una mutaci&#xF3;n neutra (silencio) en ocho genes diferentes. C&#xE1;lculo de las tasas de sustituci&#xF3;n de DNM punto por cada sitio funcional y neutro mostr&#xF3; un exceso significativo de DNMs funcionales en comparaci&#xF3;n con los neutros. Novo truncar y / o empalme, las mutaciones en SYNGAP1 STXBP1 y SHANK3 se encontraron en seis pacientes y es probable que sean pat&#xF3;genos. De las mutaciones sin sentido novo fueron encontrados en KIF1A, GRIN1, CACNG2 y EPB41L1. Los estudios funcionales mostraron que todas estas mutaciones missense afectar la funci&#xF3;n de prote&#xED;nas en sistemas de cultivo de c&#xE9;lulas, lo que sugiere que pueden ser pat&#xF3;genas. La secuenciaci&#xF3;n de estos cuatro genes en 50 casos adicionales espor&#xE1;dicos de NSID identificado un segundo GRIN1 DNM (c.1679_1681dup/p.Ser560dup). Esta mutaci&#xF3;n tambi&#xE9;n afecta a la funci&#xF3;n de prote&#xED;nas, consistentes con las predicciones estructurales. Ninguna de estas mutaciones o cualquier DNMs otros fueron identificados en estos genes en 285 controles sanos. Este estudio pone de relieve la importancia de los complejos de receptores de glutamato en NSID y apoya a&#xFA;n m&#xE1;s el papel de DNMs en este trastorno.

El exceso de mutaciones de novo en los genes delet&#xE9;reos asociados a los sistemas glutamat&#xE9;rgico en la discapacidad intelectual no sindr&#xF3;mica

&Uuml;ber die Genetik der nicht-syndromalen geistiger Behinderung (NSID) ist wenig bekannt. Wir die Hypothese, dass de Novo Mutationen (DNMs) im synaptischen Gene einen bedeutender Teil des sporadischen NSID F&auml;lle erkl&auml;ren. Um diese M&ouml;glichkeit zu untersuchen, sequenziert wir 197 Gene Kodierung von Glutamat-Rezeptoren und eine gro&szlig;e Teilmenge ihrer bekannten interagierenden Proteine in 95 sporadische F&auml;lle von NSID. Wir haben 11 DNMs, darunter zehn potenziell sch&auml;dlichen Mutationen (drei Unsinn, zwei Splei&szlig;en, eine Frameshift, vier Missense) und eine neutrale Mutation (leise) in acht verschiedenen Genen gefunden. Berechnung der Punkt-Substitution DNM Preise pro funktional und neutral Website zeigte erhebliche &Uuml;berschreitung der funktionalen DNMs mit neutralen Staaten verglichen. De Novo abschneiden und/oder Splei&szlig;en Mutationen in SYNGAP1, STXBP1 und SHANK3 waren bei 6 Patienten gefunden und sind wahrscheinlich pathogenen. De Novo Missense-Mutationen wurden in KIF1A, GRIN1, CACNG2 und EPB41L1 gefunden. Funktionelle Studien zeigten, dass alle diese Missense-Mutationen beeinflussen die Proteinfunktion Zellkultursysteme, was darauf hindeutet, dass sie m&ouml;glicherweise pathogenen. Diese vier Gene in 50 zus&auml;tzliche sporadische F&auml;lle von NSID Sequenzierung identifiziert eine zweite DNM in GRIN1 (c.1679_1681dup/p.Ser560dup). Diese Mutation betrifft auch Proteinfunktion, Einklang mit strukturellen Vorhersagen. Keiner von diesen Mutationen oder jede andere DNMs wurden in diesen Genen in 285 gesunden Kontrollgruppen identifiziert. Diese Studie unterstreicht die Bedeutung der Glutamat-Rezeptor-komplexen in NSID und weiter unterst&uuml;tzt die Rolle der DNMs in dieser St&ouml;rung.

&Uuml;berschuss an de Novo sch&auml;dlichen Mutationen in Genen, die Glutamat-Systemen in nicht-syndromale geistiger Behinderung zugeordnet.

Poco si sa circa la genetica della disabilit&agrave; intellettuale non sindromica (NSID). Abbiamo ipotizzato che mutazioni de novo (DNMs) nei geni sinaptici spiegano un&#39;importante frazione di casi sporadici di NSID. Al fine di indagare questa possibilit&agrave;, abbiamo sequenziato 197 geni che codificano per i recettori del glutammato e un grande sottoinsieme delle loro proteine interagenti conosciute in 95 casi sporadici di NSID. Abbiamo trovato 11 DNMs, tra cui dieci mutazioni potenzialmente deleterie (tre sciocchezze, due splicing, un frameshift, quattro missenso) e una mutazione neutrale (silenzioso) in otto diversi geni. Calcolo dei tassi di sostituzione-punto DNM per neutro e funzionale sito ha mostrato un significativo che eccesso di funzionale DNMs rispetto a quelli neutri. De novo troncamento o impiombatura mutazioni in SYNGAP1, STXBP1 e SHANK3 sono stati trovati in sei pazienti e sono suscettibili di essere patogeno. De novo mutazioni missenso sono state trovate in KIF1A, GRIN1, CACNG2 ed EPB41L1. Studi funzionali hanno dimostrato che tutte queste mutazioni missenso possono influenzare la funzione della proteina in sistemi di coltura delle cellule, suggerendo che essi possono essere patogeni. Sequenziamento di questi quattro geni in 50 ulteriori casi sporadici di NSID identificato un secondo DNM in GRIN1 (c.1679_1681dup/p.Ser560dup). Questa mutazione influisce anche sulla funzione della proteina, coerenza con le previsioni strutturali. Nessuna di queste mutazioni o qualsiasi altri DNMs sono stati identificati in questi geni in 285 controlli sani. Questo studio evidenzia l&#39;importanza dei complessi recettore glutammato NSID e supporta ulteriormente il ruolo di DNMs in questo disturbo.

Eccesso di mutazioni de novo deleterio geni associati ai sistemi glutamatergico in disabilit&agrave; intellettuale non sindromica.

&#x30EA;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x75C7;&#x5019;&#x6027;&#x77E5;&#x7684;&#x969C;&#x5BB3;&#xFF08;NSID&#xFF09;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;de novo&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#xFF08;DNMs&#xFF09;&#x304C;&#x6563;&#x767A;NSID&#x4F8B;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;197&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;NSID&#x306E;95&#x6563;&#x767A;&#x4F8B;&#x3067;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x914D;&#x5217;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;10&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306B;&#x6709;&#x5BB3;&#x306A;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#xFF08;3&#x30CA;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;1&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3001;&#x30DF;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;4&#xFF09;&#x3068;8&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;1&#x3064;&#x306E;&#x4E2D;&#x7ACB;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#xFF08;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;11 DNMs&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x4E2D;&#x7ACB;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3054;&#x3068;&#x306B;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x7F6E;&#x63DB;DNM&#x7387;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x6027;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;DNMs&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x904E;&#x5270;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; de novo&#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x53CA;&#x3073;/&#x53C8;&#x306F;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x5909;&#x7570;&#x304C;SYNGAP1&#x3067;&#x3001;STXBP1&#x3001;&#x3068;SHANK3&#x306F;&#x3001;6&#x4EBA;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; de novo&#x306E;&#x30DF;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;KIF1A&#x3001;GRIN1&#x3001;CACNG2&#x3001;&#x3068;EPB41L1&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30DF;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002; NSID 50&#x8FFD;&#x52A0;&#x6563;&#x767A;&#x4F8B;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;4&#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;GRIN1&#xFF08;c.1679_1681dup/p.Ser560dup&#xFF09;&#x7B2C;&#x4E8C;DNM&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;DNMs&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x3082;285&#x5065;&#x5E38;&#x8005;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;NSID&#x3067;&#x30B0;&#x30EB;&#x200B;&#x200B;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;DNMs&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x75C7;&#x5019;&#x6027;&#x77E5;&#x7684;&#x969C;&#x5BB3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;de novo&#x306E;&#x6709;&#x5BB3;&#x306A;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x904E;&#x5270;

&#xC791;&#xC740; nonsyndromic &#xC9C0;&#xC801; &#xC7A5;&#xC560; (NSID)&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (DNMs)&#xC758; &#xC0B0;&#xBC1C;&#xC801; NSID &#xACBD;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC77C;&#xBD80;&#xBD84; &#xC124;&#xBA85; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; 197 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBC0F; NSID&#xC758; 95 &#xC0B0;&#xBC1C;&#xC801; &#xC778; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD070; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;. 10 &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD574;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (3 &#xB9D0;&#xB3C4; &#xC548; &#xB418;, &#xB450; &#xC811;&#xD569;, &#xD558;&#xB098;&#xC758; frameshift, 4 missense)&#xC640; 1 &#xAC1C;&#xC758; &#xC911;&#xB9BD; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (&#xCE68;&#xBB35;) 8 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; 11 Dnms&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC911;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9C8;&#xB2E4; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8; &#xB300;&#xCCB4; DNM &#xC694;&#xAE08; &#xACC4;&#xC0B0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xCD08;&#xACFC; DNMs &#xC911;&#xB9BD; &#xAC83; &#xB4E4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC798;&#xB77C;&#xB0B4;&#xAE30; &#xBC0F; &#xC811;&#xD569; SYNGAP1, STXBP1, &#xBC0F; shank3&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; 6 &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB420; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; missense &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; KIF1A, GRIN1, CACNG2, &#xBC0F; epb41l1&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xC774;&#xB4E4; missense &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. Grin1&#xC5D0; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; DNM &#xC2DD;&#xBCC4; NSID&#xC758; 50 &#xCD94;&#xAC00; &#xC0B0;&#xBC1C;&#xC801; &#xC778; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xB294;&#xC774; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; (c.1679_1681dup/p.Ser560dup). &#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744;, &#xAD6C;&#xC870; &#xC608;&#xCE21;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; DNMs 285 &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; NSID&#xC5D0; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558; &#xACE0; &#xB354;&#xC6B1;&#xC774; &#xC7A5;&#xC560;&#xC5D0; Dnms&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; glutamatergic &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xACFC; nonsyndromic &#xC9C0;&#xC801; &#xC7A5;&#xC560;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD574;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xCD08;&#xACFC;.

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; D&#x2082; &#x53D7;&#x4F53; (DRD2) &#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x5956;&#x8D4F;&#x56DE;&#x8DEF;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x4F4E; DRD2 &#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0;&#x836F;&#x7269;&#x6EE5;&#x7528;&#x3001; &#x80A5;&#x80D6;&#x3001; &#x6CE8;&#x610F;&#x7F3A;&#x9677;/&#x591A;&#x52A8;&#x969C;&#x788D;&#x3001; &#x6291;&#x90C1;&#x60C5;&#x7EEA;&#x7684;&#x98CE;&#x9669;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;DRD2 &#x662F;&#x5F53;&#x524D;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E2D;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x6297;&#x7CBE;&#x795E;&#x75C5;&#x836F;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; DRD2 &#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x5176;&#x8131;&#x654F;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4ECD;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#x662F;&#x5426; DRD2 &#x662F;&#x56DE;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x56DE;&#x6536;&#x6216;&#x9488;&#x5BF9;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x523A;&#x6FC0;&#x540E;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (TIRFM) &#x5230; superecliptic pHluorin DRD2 &#x56FE;&#x50CF;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A;&#x5176; N &#x603B;&#x7AD9;&#x3002;&#x968F;&#x7740;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x8FDB;&#x6B65;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x90FD;&#x80FD;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316; DRD2 &#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EB9;&#x72B6;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7B49;&#x591A;&#x523A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x6C34;&#x75B1;&#x63D2;&#x5165;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684; DRD2 &#x63D2;&#x5165;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x3002;&#x6A2A;&#x5411;&#x6269;&#x6563;&#x7684; DRD2 &#x6307;&#x51FA;&#x540E;&#x5176;&#x63D2;&#x5165;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E24;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; DRD2 &#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#xFF1A; &#x672C;&#x6784;&#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#x4E0E;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5FAA;&#x73AF;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E; Rab4 &#x5728;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x672C;&#x6784; DRD2 &#x56DE;&#x6536;&#xFF0C;&#x800C; Rab11 &#x662F;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56; DRD2 &#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x4E86;&#x4E24;&#x4E2A; DRD2 &#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#x626E;&#x6F14;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x5728;&#x786E;&#x5B9A; DRD2 &#x51FD;&#x6570;&#xFF1A; Rab4 &#x654F;&#x611F;&#x672C;&#x6784; DRD2 &#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#x786E;&#x5B9A; DRD2&#x3001; &#x7A33;&#x6001;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x800C; Rab11 &#x654F;&#x611F;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56; DRD2 &#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x529F;&#x80FD; resensitization &#x7684; DRD2&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5F3A;&#x8C03; endosomal &#x56DE;&#x6536; DRD2 &#x529F;&#x80FD;&#x8C03;&#x8282;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x610F;&#x4E49;&#x3002;

&#x4E24;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; endosomal D&#x2082; &#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x53D7;&#x4F53;&#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

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Publication title Cited by 12	2012
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Da-Ting Lin

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