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Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector

Through the ectopic expression of four transcription factors, Oct4, Klf4, Sox2 and cMyc, human somatic cells can be converted to a pluripotent state, ...

Boston University School of Medicine

&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x589E;&#x5F3A;&#x5242;&#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x5411;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; scl &#x57FA;&#x56E0; 3&#39;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x5242;&#x4EE5;&#x9650;&#x5236;&#x79BD;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;TVA&#xFF0C;&#x8868;&#x8FBE;&#x5BF9;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x548C;&#x80CE;&#x809D;&#x548C;&#x8BC1;&#x660E;&#x53CD;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x4E13;&#x95E8;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x5916;&#x6E90;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x591A;&#x6570; CFU S12 &#x591A;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x552F;&#x4E00;&#xFF0C;TVA + &#x7F16;&#x7801;&#x560C;&#x5464;&#x8010;&#x836F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E0E;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5141;&#x8BB8;&#x9009;&#x62E9;&#x548C;&#x53EF;&#x4EE5; superinfected &#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x591A;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x4EBA;&#x53E3;&#x81A8;&#x80C0;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21; v Myb &#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x4ECE;&#x79BD;&#x6D41;&#x611F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x53D1;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x8F6C;&#x578B;&#x9F20;&#x6807;&#x3002;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x770B;&#x5230;&#x9E21;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x4E5F;&#x540C;&#x6837;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684; v Myb &#x8F6C;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x75C5;&#x56E0;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x673A;&#x5236;&#x4FDD;&#x80B2;&#x9E1F;&#x7C7B;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;

&#x7531;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x53CD;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x64CD;&#x7EB5;&#x3002;

Previous studies have identified an enhancer 3' of the scl gene that can direct transgene expression to hematopoietic progenitors and stem cells. Here we use this enhancer to restrict expression of the avian leukosis virus receptor, TVA, to hematopoietic stem cells and progenitors in bone marrow and fetal liver and demonstrate that retroviral infection can be used to specifically introduce exogenous sequences. We show that a majority of CFU-S12 multipotential progenitor cells can be transduced in vitro. Uniquely, transduction of TVA+ progenitors with a retrovirus encoding a puromycin resistance gene allows selection and expansion of a multipotential hematopoietic progenitor population that can be superinfected with high efficiency. Using this system we show for the first time that v-Myb oncoproteins expressed from avian viruses can induce a leukemic transformation in the mouse. The phenotype of the transformed cells is similar to that which is seen in the chicken and is likewise dependent on the particular structure of v-Myb. This implies that the basic mechanisms of action of mutated transcription factors in the etiology of leukemia are conserved between birds and mammals.

Manipulation of mouse hematopoietic progenitors by specific retroviral infection.

Des &eacute;tudes ant&eacute;rieures ont identifi&eacute; un renforceur 3&#39; du g&egrave;ne scl qui peut diriger transgene expression de prog&eacute;niteurs h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques et des cellules souches. Ici, nous utilisons cet enhancer pour restreindre l&#39;expression de r&eacute;cepteur de virus de la Leucose aviaire, TVA, aux cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques et des cellules souches dans la moelle osseuse et le foie foetal et d&eacute;montrer qu&#39;infection r&eacute;trovirale peut servir &agrave; introduire sp&eacute;cifiquement les s&eacute;quences exog&egrave;nes. Nous montrons que la majorit&eacute; des cellules prog&eacute;nitrices multipotentielle CFU-S12 peut &ecirc;tre transduite in vitro. Unique, transduction de cellules souches TVA + avec un r&eacute;trovirus codant un g&egrave;ne de r&eacute;sistance &agrave; la puromycine permet de s&eacute;lection et expansion d&#39;une population de prog&eacute;niteurs h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques multipotentielle qui peut &ecirc;tre surinfection avec une grande efficacit&eacute;. &Agrave; l&#39;aide de ce syst&egrave;me nous montrons pour la premi&egrave;re fois que les oncoprot&eacute;ines v-Myb exprim&eacute;e contre les virus aviaires peuvent induire une transformation leuc&eacute;mique chez la souris. Le ph&eacute;notype des cellules transform&eacute;es est analogue &agrave; celui qu&#39;on voit chez le poulet et d&eacute;pend &eacute;galement de la structure particuli&egrave;re de v-Myb. Cela implique que les m&eacute;canismes de base de l&#39;action de facteurs de transcription mut&eacute; dans l&#39;&eacute;tiologie de la leuc&eacute;mie sont conserv&eacute;s entre les oiseaux et les mammif&egrave;res.

Manipulation des prog&eacute;niteurs h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques de souris de l&#39;infection r&eacute;trovirale sp&eacute;cifique.

Fr&uuml;here Studien haben ein Enhancer 3&#39; im Scl-gen identifiziert, die Transgenexpression h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen und Stammzellen lenken k&ouml;nnen. Hier benutzen wir diese Enhancer Ausdruck des avian Leukosis Virus Rezeptors, TVA, h&auml;matopoetischen Stammzellen und Vorl&auml;uferzellen im Knochenmark und fetalen Leber zu beschr&auml;nken und demonstrieren retroviral Infektion kann verwendet werden, um speziell exogene Sequenzen einzuf&uuml;hren. Wir zeigen, dass eine Mehrheit der KBE-S12 multipotenzielle Vorl&auml;uferzellen ausgestrahlt werden kann in-vitro. Transduktion von TVA + Vorfahre mit einen Retrovirus Codierung ein Puromycin-Resistenz-Gen kann eindeutig, Auswahl und Ausbau einer multipotenzielle h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen-Bev&ouml;lkerung, die mit hohem Wirkungsgrad superinfected werden k&ouml;nnen. Mit diesem System zeigen wir zum ersten Mal, dass V-Myb Oncoproteinen ausgedr&uuml;ckt von Vogelgrippe Viren eine leuk&auml;mischen Transformation in der Maus bewegen k&ouml;nnen. Der Ph&auml;notyp der transformierten Zellen &auml;hnelt, was wird in das Huhn gesehen und ist ebenfalls abh&auml;ngig von der besonderen Struktur des V-Myb. Dies bedeutet, dass die grundlegenden Mechanismen der Wirkung von mutierten Transkriptionsfaktoren in der &Auml;tiologie der Leuk&auml;mie zwischen V&ouml;geln und S&auml;ugetieren konserviert werden.

Manipulation der Maus h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen durch spezifische retroviral Infektion.

Precedenti studi hanno identificato un potenziatore 3&#39; del gene scl che pu&ograve; dirigere l&#39;espressione del transgene di progenitori ematopoietici e cellule staminali. Qui usiamo questo potenziatore di limitare l&#39;espressione del recettore di virus della leucosi aviaria, TVA, alle cellule staminali ematopoietiche e progenitori nel midollo osseo e fegato fetale e dimostrare che infezione retrovirale pu&ograve; essere utilizzato per introdurre in particolare sequenze esogeni. Mostriamo che la maggioranza delle cellule progenitrici multipotenziale CFU-S12 pu&ograve; essere transduced in vitro. In modo univoco, trasduzione della TVA + progenitori con un retrovirus che codifica un gene di resistenza con puromicina permette di selezione e l&#39;espansione di una popolazione multipotenziale progenitrici ematopoietiche che pu&ograve; essere superinfected con alta efficienza. Utilizzando questo sistema ci mostra per la prima volta che v-Myb oncoproteins espressa da virus aviario pu&ograve; indurre una trasformazione leucemiche nel topo. Il fenotipo delle cellule trasformate &egrave; simile a quello che si vede nel pollo e similarmente &egrave; dipendente della struttura particolare di v-Myb. Questo implica che i meccanismi fondamentali dell&#39;azione di fattori di trascrizione mutato nell&#39;eziologia della leucemia sono conservati tra uccelli e mammiferi.

Manipolazione dei progenitori ematopoietici mouse da specifica infezione retrovirale.

&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC; 3&#39; &#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3067;&#x304D;&#x308B; scl &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x3068;&#x80CE;&#x5150;&#x809D;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E; TVA&#x3001;&#x30FB; &#x30C8;&#x30EA;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3057;&#x3001;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306F; in vitro CFU S12 &#x591A;&#x5206;&#x5316;&#x80FD;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x610F;&#x306B;&#x3001;TVA + &#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9; &#x30EC;&#x30C8;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x3067; superinfected &#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x591A;&#x5206;&#x5316;&#x80FD;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x3068;&#x62E1;&#x5927;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x521D;&#x3081;&#x3066; v Myb &#x30EA;&#x30B9;&#x30AF;&#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x9CE5;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x8868;&#x73FE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x5316;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x63DB;&#x5F8C;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x9D8F;&#x306E;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;v Myb &#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x9CE5;&#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x9593;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x5909;&#x7570;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3002;

&#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC99D;&#xAC15; transgene &#xC2DD; progenitors &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC218; &#xC788;&#xB294; scl &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 3&#39;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC774; &#xC99D;&#xAC15; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xACE8; &#xC218;&#xC640; &#xD0DC;&#xC544; &#xAC04; progenitors leukosis &#xC870;&#xB958; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, TVA, &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C;&#xB97C; retroviral &#xAC10;&#xC5FC; exogenous &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCCB4; &#xC678; CFU S12 multipotential &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC218;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC77C; &#xD558; &#xAC8C;, TVA + progenitors puromycin &#xC800;&#xD56D; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD558;&#xB294; &#xB808;&#xD2B8;&#xB85C;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; &#xC120;&#xD0DD;&#xACFC; &#xB192;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728;&#xC73C;&#xB85C; superinfected &#xC218; multipotential &#xC870; &#xD608; &#xC870;&#xC0C1; &#xC778;&#xAD6C; &#xD655;&#xC7A5; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. V Myb oncoproteins &#xC870;&#xB958; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; leukemic &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;&#xC744; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC140;&#xC758; phenotype&#xB294; &#xB2ED;&#xACE0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBCF8;&#xB3C4; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; v-Myb&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC989;, &#xC870;&#xB958;&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC758; &#xBCD1; &#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD2B9;&#xC815; retroviral &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870; &#xD608; progenitors &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC758; &#xC870;&#xC791;.

Estudios previos han identificado un reforzador 3&#39; del gen scl que puede dirigir la expresi&oacute;n del transg&eacute;n a progenitores hematopoy&eacute;ticos y c&eacute;lulas madre. Aqu&iacute; utilizamos este potenciador para restringir la expresi&oacute;n de los receptores del virus de la leucosis aviar, TVA, a c&eacute;lulas madre hematopoy&eacute;ticas y progenitores en m&eacute;dula &oacute;sea y el h&iacute;gado fetal y demostrar que la infecci&oacute;n retroviral puede utilizarse espec&iacute;ficamente introducir secuencias ex&oacute;genas. Demostramos que la mayor&iacute;a de las c&eacute;lulas multipotential del progenitor de CFU-S12 puede ser transduced in vitro. &Uacute;nicamente, transducci&oacute;n de TVA + progenitores con un retrovirus de codificaci&oacute;n de un gen de resistencia puromicina permite selecci&oacute;n y expansi&oacute;n de una poblaci&oacute;n de multipotential del progenitor hematopoy&eacute;tico que puede ser superinfecci&oacute;n con alta eficiencia. Mediante este sistema se muestra por primera vez que v-Myb oncoprote&iacute;nas expresado del virus aviar pueden inducir una transformaci&oacute;n leuc&eacute;mica en el rat&oacute;n. El fenotipo de las c&eacute;lulas transformadas es similar a la que se ve en el pollo y adem&aacute;s depende de la estructura particular del v-Myb. Esto implica que los mecanismos b&aacute;sicos de la acci&oacute;n de factores de transcripci&oacute;n mutado en la etiolog&iacute;a de la leucemia se conservan entre aves y mam&iacute;feros.

Manipulaci&oacute;n de progenitores hematopoy&eacute;ticos de rat&oacute;n por infecci&oacute;n retroviral espec&iacute;fica.

&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE; Peyer &#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50; (LPAM) &#x6216; alpha(4)beta(7) &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x8868;&#x793A;&#x5BF9;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x8D1F;&#x8D23; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7C98;&#x819C;&#x6C49;&#x8BED;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50; (MAdCAM)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x9AD8;&#x5185;&#x76AE;&#x5FAE;&#x9759;&#x8109;&#x7684;&#x7C98;&#x819C;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x5668;&#x5B98;&#x8FDB;&#x5165;&#x80A0;&#x9053;&#x76F8;&#x5173;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5F52;&#x5DE2;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5F02;&#x57FA;&#x56E0;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x79FB;&#x690D; (BMT) &#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;alpha(4)beta(7)(-) &#x6350;&#x52A9; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x5DF2;&#x5927;&#x5927;&#x5C11;&#x79FB;&#x690D;&#x7269;&#x6297;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x75C5; (GVHD) &#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x7387;&#x548C;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x4E0E;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA; alpha(4)beta(7)(+) &#x6350;&#x52A9; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x80A0;&#x9053;&#x548C;&#x80A0;&#x7CFB;&#x819C;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66; posttransplantation &#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x66F4;&#x4F4E;&#x7F16;&#x53F7;&#x7684;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x7684; alpha(4)beta(7)(+) T &#x7EC6;&#x80DE; alpha(4)beta(7)(-) T &#x7EC6;&#x80DE; alpha(4)beta(7)(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;GVHD &#x9776;&#x5668;&#x5B98;&#x75C5;&#x7406;&#x7279;&#x70B9;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA; alpha(4)beta(7)(-) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F00;&#x53D1;&#x5C11; GVHD &#x7684;&#x80A0;&#x9053;&#x548C;&#x809D;&#x810F;&#xFF0C;&#x800C;&#x76AE;&#x80A4;&#x548C;&#x80F8;&#x817A; GVHD &#x4E2D;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x7684; alpha(4)beta(7)(-) &#x6216; alpha(4)beta(7)(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x6CA1;&#x6709;&#x5DEE;&#x522B;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4F53;&#x5185;&#x5168;&#x7403;&#x865A;&#x62DF;&#x56E2;&#x961F;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684; alpha(4)beta(7)(-) &#x6350;&#x52A9; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x4FDD;&#x7559;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA; alpha(4)beta(7) &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6210;&#x80A0;&#x53CD;&#x5E94;&#x6027;&#x6350;&#x52A9; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x548C;&#x80A0;&#x9053; GVHD &#x548C;&#x6574;&#x4F53; GVHD &#x53D1;&#x75C5;&#x7387;&#x548C;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x7684;&#x540E;&#x6765;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

LPAM (beta 7 &#x6574;&#x5408;&#x7D20; &alpha; 4) &#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5BFB;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x5BF9;&#x540C;&#x79CD;&#x53CD;&#x5E94;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5C0F;&#x80A0;&#x79FB;&#x690D;&#x7269;&#x6297;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

Lymphocyte Peyer patch adhesion molecule (LPAM) or alpha(4)beta(7) integrin is expressed on lymphocytes and is responsible for T-cell homing into gut-associated lymphoid tissues through its binding to mucosal addressin cell adhesion molecule (MAdCAM), which is present on high endothelial venules of mucosal lymphoid organs. We found in murine allogeneic bone marrow transplantation (BMT) models that recipients of alpha(4)beta(7)(-) donor T cells had significantly less graft-versus-host disease (GVHD) morbidity and mortality compared with recipients of alpha(4)beta(7)(+) donor T cells. A kinetic posttransplantation analysis of lymphocytes in the intestines and mesenteric lymph nodes demonstrated a delayed invasion of lower numbers of alpha(4)beta(7)(+) T cells in recipients of alpha(4)beta(7)(-) T cells compared with recipients of alpha(4)beta(7)(+) T cells. Histopathologic analysis of GVHD target organs revealed that recipients of alpha(4)beta(7)(-) T cells developed less GVHD of the intestines and liver, whereas there was no difference in cutaneous and thymic GVHD between recipients of alpha(4)beta(7)(-) or alpha(4)beta(7)(+) T cells. Finally, we found that in vivo GVT activity of alpha(4)beta(7)(-) donor T cells was preserved. We conclude that the alpha(4)beta(7) integrin is important for the invasion of alloreactive donor T cells into the gut and the subsequent development of intestinal GVHD and overall GVHD morbidity and mortality.

LPAM (alpha 4 beta 7 integrin) is an important homing integrin on alloreactive T cells in the development of intestinal graft-versus-host disease.

Mol&eacute;cule d&#39;adh&eacute;rence &agrave; la patch Peyer lymphocytaire (LPAM) ou de l&#39;int&eacute;grine alpha(4)beta(7) s&#39;exprime sur les lymphocytes et est responsable de lymphocytes homing dans les tissus lympho&iuml;des associ&eacute;s aux intestins gr&acirc;ce &agrave; sa liaison &agrave; mucosal addressin mol&eacute;cule d&#39;adh&eacute;sion cellulaire (MAdCAM), qui est pr&eacute;sente sur les veinules endoth&eacute;liales des organes lympho&iuml;des muqueuses. Nous avons trouv&eacute; murine allog&eacute;niques bone marrow transplantation mod&egrave;les (BMT) b&eacute;n&eacute;ficiaires de cellules du donneur T alpha(4)beta(7)(-) avaient significativement moins graft - versus - host disease (GVHD) morbidit&eacute; et la mortalit&eacute; par rapport aux b&eacute;n&eacute;ficiaires de cellules du donneur T alpha(4)beta(7)(+). Une analyse cin&eacute;tique posttransplantation des lymphocytes dans les intestins et les ganglions lymphatiques m&eacute;sent&eacute;riques ont d&eacute;montr&eacute; une invasion retard&eacute;e de la baisse du nombre de cellules alpha(4)beta(7)(+) T chez les receveurs de cellules alpha(4)beta(7)(-) T par rapport aux b&eacute;n&eacute;ficiaires des cellules alpha(4)beta(7)(+) T. L&#39;analyse histopathologique des organes cibles de greffon contre l&#39;h&ocirc;te a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que les b&eacute;n&eacute;ficiaires des cellules alpha(4)beta(7)(-) T d&eacute;velopp&eacute; moins greffon contre l&#39;h&ocirc;te de l&#39;intestin et le foie, alors qu&#39;il n&#39;y n&#39;avait aucune diff&eacute;rence de GVH cutan&eacute;e et thymique entre b&eacute;n&eacute;ficiaires des cellules de T de alpha(4)beta(7)(-) ou alpha(4)beta(7)(+). Enfin, nous avons constat&eacute; que l&#39;activit&eacute; GVT in vivo de cellules du donneur T alpha(4)beta(7)(-) a &eacute;t&eacute; pr&eacute;serv&eacute;e. Nous concluons que l&#39;int&eacute;grine alpha(4)beta(7) est important pour l&#39;invasion des cellules donneuses T allor&eacute;actifs dans le tube digestif et le d&eacute;veloppement subs&eacute;quent de GVH intestinale et la morbidit&eacute; globale de greffon contre l&#39;h&ocirc;te et de mortalit&eacute;.

AMFP (alpha 4 l&#39;int&eacute;grine b&ecirc;ta 7) est un important int&eacute;grine radioralliement sur cellules allor&eacute;actives T dans le d&eacute;veloppement d&#39;intestinale graft - versus - host disease.

Lymphozyte Peyer Patch Adh&auml;sion Molek&uuml;l (LPAM) oder alpha(4)beta(7)-Integrin dr&uuml;ckt sich auf Lymphozyten und ist verantwortlich f&uuml;r T-Zell-Referenzfahrt in Darm-assoziierten lymphatischen Gewebe durch seine Bindung an Schleimhaut addressin Zelladh&auml;sionsmolek&uuml;l (MAdCAM), die auf hohe endothelial Venolen der Schleimhaut lymphoide Organe vorhanden ist. Wir fanden im murinen allogene Knochenmarktransplantation (BMT) Modelle, die Empf&auml;nger der alpha(4)beta(7)(-) Spender T-Zellen deutlich weniger Graft - Versus - Host Disease (GVHD) Morbidit&auml;t und Mortalit&auml;t, die Empf&auml;nger der alpha(4)beta(7)(+) Spender T-Zellen gegen&uuml;ber hatte. Eine kinetische posttransplantation Analyse der Lymphozyten in den Darm und mesenterischen Lymphknoten zeigte eine verz&ouml;gerte Invasion einer niedrigeren Zahl von alpha(4)beta(7)(+) T-Zellen im Empf&auml;nger der alpha(4)beta(7)(-) T-Zellen im Vergleich mit Empf&auml;ngern von alpha(4)beta(7)(+) T-Zellen. Histopathologische Analyse der GVHD Zielorgane ergab, dass die Empf&auml;nger der alpha(4)beta(7)(-) T-Zellen weniger GVHD der Darm und Leber, entwickelt, w&auml;hrend es keinen Unterschied in der kutanen und Thymom GVHD zwischen Empf&auml;ngern von alpha(4)beta(7)(-) oder alpha(4)beta(7)(+) T-Zellen gab. Schlie&szlig;lich fanden wir, dass in-vivo-GVT-Aktivit&auml;t von alpha(4)beta(7)(-) Spenderzellen T erhalten blieb. Wir schlie&szlig;en, dass die alpha(4)beta(7)-Integrin wichtig f&uuml;r die Invasion des Alloreactive Spender T-Zellen in den Darm und die nachfolgende Entwicklung der intestinalen GVHD und insgesamt GVHD Morbidit&auml;t und Mortalit&auml;t ist.

LPAM (Alpha 4 Beta 7 Integrin) ist eine wichtige zielsuchende Integrin Alloreactive T-Zellen in der Entwicklung der intestinalen Graft - Versus - Host Disease.

Molecola di adesione dei linfociti Peyer patch (LPAM) o dell&#39;integrina alpha(4)beta(7) &egrave; espresso sui linfociti ed &egrave; responsabile della T-cellula homing nei tessuti linfoidi associate all&#39;intestino attraverso la sua associazione alla mucosa addressin molecola di adesione cellule (MAdCAM), che &egrave; presente su venule endoteliali alte degli organi linfoidi della mucosa. Abbiamo trovato nel trapianto di midollo allogenico murino modelli (BMT) che i destinatari delle cellule del donatore T alpha(4)beta(7)(-) erano significativamente meno graft - versus - host disease (GVHD) morbilit&agrave; e la mortalit&agrave; rispetto ai destinatari delle cellule del donatore T alpha(4)beta(7)(+). Un&#39;analisi cinetica miglioramenti dei linfociti nei linfonodi mesenterici e intestini ha dimostrato un&#39;invasione ritardata del basso numero di cellule alpha(4)beta(7)(+) T in destinatari delle cellule alpha(4)beta(7)(-) T rispetto ai destinatari delle cellule alpha(4)beta(7)(+) T. Analisi istopatologica di organi bersaglio GVHD hanno rivelato che i destinatari delle cellule alpha(4)beta(7)(-) T sviluppato meno GVHD di intestino e fegato, considerando che non non c&#39;era alcuna differenza nella GVHD cutanea e del timo tra i destinatari delle cellule T alpha(4)beta(7)(-) o alpha(4)beta(7)(+). Infine, abbiamo trovato che era conservato in vivo attivit&agrave; GVT delle cellule del donatore T alpha(4)beta(7)(-). Possiamo concludere che l&#39;integrina alpha(4)beta(7) &egrave; importante per l&#39;invasione delle cellule T donatore inbisce nell&#39;intestino e il successivo sviluppo di GVHD intestinale e generale GVHD morbilit&agrave; e mortalit&agrave;.

LPAM (alfa-4 integrina beta 7) &egrave; un&#39;importante integrina homing su inbisce T cellule nello sviluppo di intestinale graft - versus - host disease.

&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x30D1;&#x30A4;&#x30A8;&#x30EB;&#x677F;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x63A5;&#x7740;&#x5206;&#x5B50; &#xFF08;LPAM) &#x307E;&#x305F;&#x306F; alpha(4)beta(7) &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3; &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8178;&#x7BA1;&#x95A2;&#x9023;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7CFB;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x7C98;&#x819C;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x9AD8;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x9759;&#x8108;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7C98;&#x819C;&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x5206;&#x5B50; (MAdCAM) &#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30DB;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x540C;&#x7A2E;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x79FB;&#x690D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; alpha(4)beta(7)(-) &#x30C9;&#x30CA;&#x30FC; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x79FB;&#x690D;-&#x5BFE;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x75C5; (GVHD) &#x7F79;&#x60A3;&#x7387;&#x3068;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x306E; alpha(4)beta(7)(+) &#x30C9;&#x30CA;&#x30FC; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F; &#xFF08;BMT&#xFF09; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8178;&#x3068;&#x8178;&#x9593;&#x819C;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x8AD6;&#x7684;&#x79FB;&#x690D;&#x89E3;&#x6790;&#x9045;&#x5EF6;&#x4FB5;&#x7565; alpha(4)beta(7)(+) T &#x7D30;&#x80DE; alpha(4)beta(7)(+) T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066; alpha(4)beta(7)(-) T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x6570;&#x5B57;&#x306E;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3002;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005; alpha(4)beta(7)(-) &#x307E;&#x305F;&#x306F; alpha(4)beta(7)(+) &#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x80F8;&#x817A; GVHD &#x306B;&#x9055;&#x3044;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x4E00;&#x65B9; GVHD &#x6A19;&#x7684;&#x81D3;&#x5668;&#x306E;&#x75C5;&#x7406;&#x7D44;&#x7E54;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005; alpha(4)beta(7)(-) T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x3044; GVHD &#x306E;&#x8178;&#x3068;&#x809D;&#x81D3;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;alpha(4)beta(7)(-) &#x30C9;&#x30CA;&#x30FC; T &#x7D30;&#x80DE; in vivo GVT &#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x4FDD;&#x305F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; alpha(4)beta(7) &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C; alloreactive &#x30C9;&#x30CA;&#x30FC; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x8178;&#x3078;&#x306E;&#x4FB5;&#x653B;&#x3068;&#x6D88;&#x5316;&#x7BA1; GVHD &#x3068;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A; GVHD &#x306E;&#x7F79;&#x60A3;&#x7387;&#x3068;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x306E;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

LPAM (&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; 4 &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; 7 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;) &#x306F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30DB;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3; alloreactive T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8178;&#x7BA1;&#x79FB;&#x690D;&#x7247;&#x5BFE;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x75C5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C; &#xD30C;&#xC774;&#xC5B4; &#xD328;&#xCE58; &#xC811;&#xCC29; &#xBD84;&#xC790; (LPAM) &#xB610;&#xB294; alpha(4)beta(7) integrin&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB418; &#xACE0; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC810; &#xB9C9; addressin &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBD84;&#xC790; (MAdCAM), &#xC810; &#xB9C9; &#xB9BC;&#xD504; &#xAE30;&#xAD00;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB0B4; &#xD53C; venules&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xCC3D; &#xC790; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB41C; &#xB9BC;&#xD504; &#xC870;&#xC9C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC790;&#xB3D9; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; murine allogeneic &#xACE8; &#xC218; &#xC774;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xC2DD;-&#xBE44;&#xAD50;-&#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC9C8;&#xBCD1; (GVHD) &#xBCD1; &#xC801; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960; alpha(4)beta(7)(+) &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC801;&#xC740; alpha(4)beta(7)(-) &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4; (BMT) &#xBAA8;&#xB378; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xCC3D; &#xC790; &#xBC0F; mesenteric &#xB9BC;&#xD504;&#xC808;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9BC;&#xD504; &#xD1A8;&#xC758; &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; posttransplantation &#xBD84;&#xC11D; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC758; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; alpha(4)beta(7)(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; alpha(4)beta(7)(-) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; alpha(4)beta(7)(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xC22B;&#xC790;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xB41C; &#xCE68;&#xACF5;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. GVHD &#xB300;&#xC0C1; &#xAE30;&#xAD00;&#xC758; &#xBCD1;&#xB9AC;&#xD559; &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C; alpha(4)beta(7)(-) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0; &#xAC8C;&#xC758; &#xB0B4;&#xC7A5;&#xACFC; &#xAC04;, &#xB35C; GVHD &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC18;&#xBA74; &#xD53C;&#xBD80; &#xBC0F; thymic GVHD&#xC5D0; alpha(4)beta(7)(-) &#xB610;&#xB294; alpha(4)beta(7)(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; &#xAC04;&#xC5D0; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; alpha(4)beta(7)(-) &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; in vivo GVT &#xD65C;&#xB3D9; &#xC720;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; alpha(4)beta(7) integrin &#xC6A9;&#xAE30;&#xB85C; alloreactive &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE68;&#xC785;&#xACFC; &#xC7A5;&#xC758; GVHD &#xBC0F; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; GVHD &#xBCD1; &#xC801; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960;&#xC758; &#xD6C4;&#xC18D; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xACB0;&#xB860;.

LPAM (&#xC54C;&#xD30C; 4 &#xBCA0;&#xD0C0; 7 integrin) alloreactive T &#xC140; &#xC7A5; &#xC774;&#xC2DD;-&#xBE44;&#xAD50;-&#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xBC1C;&#xC804;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC720;&#xB3C4; integrin&#xC740;.

Mol&eacute;cula de adhesi&oacute;n Peyer de parche en linfocitos (PAM) o integrina alpha(4)beta(7) se expresa en linfocitos y es responsable de la t-c&eacute;lula autoguiado hacia el blanco en tejidos linfoides intestinal asociada a trav&eacute;s de su uni&oacute;n a la mucosa hist&oacute;rico cell adhesion molecule (MAdCAM), que est&aacute; presente en v&eacute;nulas endoteliales altas de mucosas &oacute;rganos linfoides. Encontramos en el trasplante de m&eacute;dula de allogeneic murino modelos (BMT) que los receptores de las c&eacute;lulas T del donante de alpha(4)beta(7)(-) ten&iacute;an significativamente menos injerto - versus - host disease (GVHD) de morbilidad y mortalidad en comparaci&oacute;n con los receptores de las c&eacute;lulas T del donante de alpha(4)beta(7)(+). Un an&aacute;lisis cin&eacute;tico del posttransplantation de linfocitos en los intestinos y ganglios linf&aacute;ticos mesent&eacute;ricos demostraron una invasi&oacute;n retrasada de un menor n&uacute;mero de c&eacute;lulas de alpha(4)beta(7)(+) T en los receptores de las c&eacute;lulas de alpha(4)beta(7)(-) T en comparaci&oacute;n con los receptores de c&eacute;lulas T de alpha(4)beta(7)(+). El an&aacute;lisis histopatol&oacute;gico de los &oacute;rganos diana GVHD revel&oacute; que los receptores de las c&eacute;lulas alpha(4)beta(7)(-) T desarrollaron menos GVHD de los intestinos y el h&iacute;gado, mientras que no hubo diferencias en GVHD cut&aacute;neo y t&iacute;mica entre los receptores de c&eacute;lulas T alpha(4)beta(7)(-) o alpha(4)beta(7)(+). Finalmente, encontramos que la actividad in vivo de GVT de c&eacute;lulas de un donante T alpha(4)beta(7)(-) fue preservada. Concluimos que la integrina alpha(4)beta(7) es importante para la invasi&oacute;n de c&eacute;lulas de un donante T alloreactive en la tripa y el posterior desarrollo de mortalidad y morbilidad global de GVHD y GVHD intestinal.

PAM (alfa 4 beta 7 integrina) es una importante integrina recalada en las c&eacute;lulas de alloreactive T en el desarrollo de injerto intestinal - versus - host disease.

&#x64CD;&#x7EB5;&#x5728;&#x5DE8;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Manipulation of gene expression in megakaryocytes.

Manipulation de l&#39;expression g&eacute;nique dans les m&eacute;gacaryocytes.

Manipulation der Genexpression in Erkrankung.

Manipolazione dell&#39;espressione genica nei megacariociti.

&#x5DE8;&#x6838;&#x7403;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3002;

&#xC5C6;&#xC73C;&#xBA70;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC870;&#xC791;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Manipulaci&oacute;n de expresi&oacute;n g&eacute;nica en megacariocitos.

&#x5229;&#x7528;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x5DE8;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;

Using retroviruses to express genes in primary megakaryocyte lineage cells.

&Agrave; l&#39;aide de r&eacute;trovirus pour exprimer des g&egrave;nes dans les cellules de la lign&eacute;e m&eacute;gacaryocyte primaire.

Verwendung von Retroviren Gene in den Zellen der prim&auml;ren Megakaryozyt-Linie zum Ausdruck zu bringen.

Utilizzando retrovirus per esprimere geni nelle cellule lignaggio primario dei megacariociti.

&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x5DE8;&#x6838;&#x7403;&#x7CFB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Retroviruses&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xBCF8; megakaryocyte &#xD608;&#xD1B5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294;.

Usando retrovirus para expresar genes en c&eacute;lulas de linaje de megacariocitos primario.

&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x5E73;&#x79FB;&#x7EC8;&#x6B62;&#x63A7;&#x5236;&#x5916;&#x6E90;&#x63A7;&#x5236;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x5B9E;&#x73B0;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x63A7;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x5E73;&#x79FB;&#x7EC8;&#x6B62;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x53EA;&#x662F;&#x4E0B;&#x6E38;&#x4ECE;&#x542F;&#x52A8;&#x5668; 8 &#x6708;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4FEE;&#x6539;&#x86CB;&#x767D;&#x7F16;&#x7801;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684; mRNA &#x7FFB;&#x8BD1;&#x5BFC;&#x81F4;&#x70C8;&#x6027;&#x51CF;&#x5C11;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x7269;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x6CBB;&#x7597;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x6C28;&#x57FA;&#x7CD6;&#x82F7;&#x7C7B;&#x6297;&#x751F;&#x7D20;&#x6216;&#x51E0;&#x79CD; nonantibiotic &#x5316;&#x5408;&#x7269; mRNA &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A7;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x7269;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C06;&#x5927;&#x91CF; &#xFF08;60 &#x500D;&#xFF09; &#x548C;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x548C;&#x539F;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x624D;&#x80FD;&#x5B9E;&#x73B0;&#x76D1;&#x7BA1;&#x3002;&#x6B64;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x63A7;&#x7B56;&#x7565;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x7528;&#x4E8E;&#x63A7;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x73B0;&#x6709;&#x65B9;&#x6CD5;&#x66F4;&#x5177;&#x4F18;&#x52BF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5E94;&#x6709;&#x7ACB;&#x5373;&#x5E94;&#x7528;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x5E73;&#x79FB;&#x7EC8;&#x6B62;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5916;&#x6E90;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;

Here, we describe a system for the exogenous control of gene expression in mammalian cells that relies on the control of translational termination. To achieve gene regulation, we modified protein-coding sequences by introduction of a translational termination codon just downstream from the initiator AUG codon. Translation of the resulting mRNA leads to potent reduction in expression of the desired gene product. Expression of the gene product can be controlled by treating cells that express the mRNA with either aminoglycoside antibiotics or several nonantibiotic compounds. We show that the extent of regulation of gene expression can be substantial (60-fold) and that regulation can be achieved in the case of a variety of different genes, in different cultured cell lines and in primary cells in vivo. This gene regulation strategy offers significant advantages over existing methods for controlling gene expression and should have both immediate experimental application and possible clinical application.

Exogenous control of mammalian gene expression via modulation of translational termination.

Nous d&eacute;crivons ici un syst&egrave;me de contr&ocirc;le exog&egrave;ne de l&#39;expression g&eacute;nique dans les cellules de mammif&egrave;res qui s&#39;appuie sur le contr&ocirc;le de r&eacute;siliation translationnelle. Pour r&eacute;aliser la r&eacute;gulation des g&egrave;nes, nous avons modifi&eacute; les s&eacute;quences codant pour des prot&eacute;ines par l&#39;introduction d&#39;un codon de terminaison translationnelle juste en aval du codon initiateur AUG. Traduction de l&#39;ARNm qui en r&eacute;sulte conduit &agrave; une r&eacute;duction puissante dans l&#39;expression du produit du g&egrave;ne d&eacute;sir&eacute;. Expression du produit du g&egrave;ne peut &ecirc;tre contr&ocirc;l&eacute;e en traitant les cellules qui expriment l&#39;ARNm avec aminosides ou plusieurs compos&eacute;s de base. Nous montrons que l&#39;&eacute;tendue de la r&eacute;gulation de l&#39;expression de g&egrave;ne peut &ecirc;tre importante (facteur) et que le r&egrave;glement est possible dans le cas d&#39;une vari&eacute;t&eacute; de diff&eacute;rents g&egrave;nes, dans diff&eacute;rentes lign&eacute;es cultiv&eacute;es et dans les cellules primaires in vivo. Cette strat&eacute;gie de r&egrave;glement de g&egrave;ne offre des avantages significatifs sur les m&eacute;thodes existantes pour le contr&ocirc;le de l&#39;expression g&eacute;nique et devrait avoir les application exp&eacute;rimentale imm&eacute;diate et application clinique possible.

Contr&ocirc;le exog&egrave;ne de l&#39;expression g&eacute;nique chez les mammif&egrave;res par la modulation de r&eacute;siliation translationnelle.

Hier beschreiben wir ein System f&uuml;r die exogenen Kontrolle der Genexpression in den S&auml;ugetier-Zellen, die auf die Kontrolle der translatorischen K&uuml;ndigung beruht. Um Genregulation zu erreichen, haben wir Protein-kodierenden Sequenzen durch Einf&uuml;hrung einer translatorischen K&uuml;ndigung Codon nur stromabw&auml;rts von der Initiator AUG-Codon ge&auml;ndert. &Uuml;bersetzung des resultierenden mRNA f&uuml;hrt zu starken R&uuml;ckgang Ausdruck das gew&uuml;nschte Genprodukt. Ausdruck der das Genprodukt kann durch Behandlung von Zellen, die die mRNA mit AMINOGLYKOSIDANTIBIOTIKA oder mehrere nonantibiotic Verbindungen Ausdr&uuml;cken gesteuert werden. Wir zeigen, dass das Ausma&szlig; der Regulierung der Genexpression (60-fold) erheblich sein kann und dass bei einer Vielzahl von verschiedenen Genen, die in verschiedenen kultivierten Zelllinien und Prim&auml;rzellen in-vivo Verordnung erreicht werden kann. Diese Regelstrategie gen bietet entscheidende Vorteile gegen&uuml;ber bestehenden Methoden zur Steuerung der Genexpression und unmittelbare Erfahrungen mit der Anwendung und m&ouml;gliche klinische Anwendung haben.

Exogenen Kontrolle der S&auml;ugetier-Genexpression &uuml;ber Modulation translational K&uuml;ndigung.

Qui, descriviamo un sistema per il controllo dell&#39;espressione genica in cellule di mammiferi che si basa sul controllo di terminazione traslazionale esogeno. Per ottenere la regolazione genica, abbiamo modificato le sequenze codificanti proteine dall&#39;introduzione di un codone di terminazione traslazionale appena a valle del codone AUG iniziatore. Traduzione del mRNA risultanti conduce alla potente riduzione nell&#39;espressione del prodotto del gene desiderato. Espressione del prodotto del gene pu&ograve; essere controllato dal trattamento delle cellule che esprimono il mRNA con antibiotici aminoglicosidici o diversi composti nonantibiotic. Dimostriamo che l&#39;entit&agrave; della regolazione dell&#39;espressione genica pu&ograve; essere notevole (60-fold) e che il regolamento pu&ograve; essere raggiunto in caso di una variet&agrave; di diversi geni, in linee cellulari coltivate diverse e in celle primarie in vivo. Questa strategia di regolazione genica offre significativi vantaggi rispetto ai metodi esistenti per il controllo dell&#39;espressione genica e dovrebbe avere immediata applicazione sperimentale sia possibile applicazione clinica.

Esogeno controllo dell&#39;espressione genica dei mammiferi tramite modulazione di terminazione traslazionale.

&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E26;&#x9032;&#x7D42;&#x4E86;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4E26;&#x9032;&#x7D42;&#x6B62;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x3092;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306B;&#x306F;&#x30A4;&#x30CB;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; AUG &#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x5C0E;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306E; mRNA &#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306F;&#x3001;&#x76EE;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x524A;&#x6E1B;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F; mRNA &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30C9;&#x7CFB;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E; nonantibiotic &#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3068;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B9; &#x30FB; &#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x6271;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x304C; (60-fold) &#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x898F;&#x5236;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x4E0A;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5229;&#x70B9;&#x3057;&#x3001;&#x5373;&#x6642;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x81E8;&#x5E8A;&#x5FDC;&#x7528;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x4E26;&#x9032;&#x7D42;&#x7AEF;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3002;

&#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; exogenous &#xBCC0;&#xD658; &#xC885;&#xB8CC; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30;&#xC790; 8 &#xC6D4; codon&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD658; &#xC885;&#xB8CC; codon &#xADF8;&#xB0E5; &#xD558;&#xB958;&#xC758; &#xB3C4;&#xC785;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCF54;&#xB529; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC218;&#xC815;. &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; &#xACB0;&#xACFC; Mrna&#xC758; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xC2DD; mRNA aminoglycoside &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; nonantibiotic &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xBC94;&#xC704; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801; &#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; (60-fold) &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, &#xB2E4;&#xB978; &#xBC30;&#xC591;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; 1 &#xCC28; &#xC140;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808; &#xC804;&#xB7B5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xC874; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC774;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC989;&#xC2DC; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC751;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC784;&#xC0C1; &#xC751;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC788;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCC0;&#xD658; &#xC885;&#xB8CC;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; exogenous &#xC81C;&#xC5B4;.

Aqu&iacute;, describimos un sistema para el control ex&oacute;geno de la expresi&oacute;n g&eacute;nica en c&eacute;lulas de mam&iacute;fero que se basa en el control de terminaci&oacute;n traslacional. Para lograr la regulaci&oacute;n g&eacute;nica, modificamos las secuencias de codificaci&oacute;n de prote&iacute;nas por la introducci&oacute;n de un cod&oacute;n de terminaci&oacute;n traslacional justo abajo del cod&oacute;n iniciador AUG. Traducci&oacute;n del mRNA resultante conduce a potente reducci&oacute;n en la expresi&oacute;n del producto del gen deseado. Expresi&oacute;n del producto del gen puede controlarse por el tratamiento de las c&eacute;lulas que expresan el mRNA con antibi&oacute;ticos aminogluc&oacute;sidos o varios compuestos nonantibiotic. Mostramos que el alcance de la regulaci&oacute;n de la expresi&oacute;n g&eacute;nica puede ser sustancial (60-fold) y que el Reglamento se logra en el caso de una variedad de diferentes genes en l&iacute;neas celulares cultivadas diferentes y en c&eacute;lulas primarias en vivo. Esta estrategia de regulaci&oacute;n g&eacute;nica ofrece ventajas significativas sobre los m&eacute;todos existentes para el control de la expresi&oacute;n g&eacute;nica y debe tener aplicaci&oacute;n experimental inmediata y posible aplicaci&oacute;n cl&iacute;nica.

Control ex&oacute;geno de genes mam&iacute;feros mediante modulaci&oacute;n de terminaci&oacute;n traslacional.

&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8868;&#x8FBE; Oct4&#x3001; Klf4&#x3001; Sox2&#x3001; cMyc &#x751F;&#x6210;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (iPS)&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x4E8B;&#x5148;&#x7814;&#x7A76;&#x9700;&#x8981;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x5927;&#x91CF;&#x7684; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6574;&#x5408;&#x548C;&#x9650;&#x5236;&#x5176;&#x7528;&#x4E8E;&#x6CBB;&#x7597;&#x5E94;&#x7528;&#x591A;&#x91CD;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x5355;&#x4E2A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8868;&#x8FBE;&quot;&#x76D2;&#x5F0F;&#x78C1;&#x5E26;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&quot;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C; 2A &#x80BD;&#x548C;&#x5185;&#x90E8;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8FDB;&#x5165;&#x7F51;&#x7AD9;&#x6280;&#x672F;&#x3001; &#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x4ECE;&#x4EA7;&#x540E;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x6210; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4EE5;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x5F0F;&#x751F;&#x6210;&#x7684; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x663E;&#x793A;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6837;&#x5F62;&#x6001;&#x3001; &#x8868;&#x8FBE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6807;&#x8BB0;&#x7269;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6F5C;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x7578;&#x80CE;&#x7624;&#x5316;&#x9A8C;&#x548C;&#x9F20;&#x6807;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x9C81;&#x68D2;&#x8D21;&#x732E;&#x4E2D;&#x533A;&#x5206;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x53EF;&#x89C1;&#x4E00;&#x6591;&#x3002;&#x5C06;&#x6240;&#x6709;&#x56E0;&#x7D20;&#x90FD;&#x5408;&#x5E76;&#x6210;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x8FBE;&#x5230;&#x6700;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5141;&#x8BB8;&#x5355;&#x4E2A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7ED3;&#x5408; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x4E3A;&#x4E34;&#x5E8A;&#x76EE;&#x7684;&#x8868;&#x793A;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x5DE5;&#x5177;&#x548C;&#x5E94;&#x7528; iPS &#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;

&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x6210;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5361;&#x5E26;&#x3002;

Induced pluripotent stem (iPS) cells can be generated using retroviral vectors expressing Oct4, Klf4, Sox2, and cMyc. Most prior studies have required multiple retroviral vectors for reprogramming, resulting in high numbers of genomic integrations in iPS cells and limiting their use for therapeutic applications. Here we describe the use of a single lentiviral vector expressing a "stem cell cassette" composed of the four transcription factors and a combination of 2A peptide and internal ribosome entry site technology, generating iPS cells from postnatal fibroblasts. iPS cells generated in this manner display embryonic stem cell-like morphology, express stem cell markers, and exhibit in vivo pluripotency, as evidenced by their ability to differentiate in teratoma assays and their robust contribution to mouse chimeras. Combining all factors into a single transcript achieves the most efficient reprogramming system to date and allows derivation of iPS cells with a single viral integration. The use of a single lentiviral vector for reprogramming represents a powerful laboratory tool and a significant step toward the application of iPS technology for clinical purposes.

Induced pluripotent stem cell generation using a single lentiviral stem cell cassette.

Cellules souches (iPS) pluripotentes induites peuvent &ecirc;tre g&eacute;n&eacute;r&eacute;s &agrave; l&#39;aide de vecteurs r&eacute;troviraux exprimer Oct4, Klf4, Sox2 et cMyc. La plupart des &eacute;tudes ant&eacute;rieures ont exig&eacute; plusieurs vecteurs r&eacute;troviraux pour la reprogrammation, entra&icirc;nant un nombre &eacute;lev&eacute; d&#39;int&eacute;grations g&eacute;nomiques en cellules iPS et limitant leur utilisation pour des applications th&eacute;rapeutiques. Nous d&eacute;crivons ici l&#39;utilisation d&#39;un seul vecteur lentiviral exprimant qu&#39;une cassette &laquo; cellules souches &raquo; compos&eacute;e des quatre facteurs de transcription et une combinaison de peptide 2 a et de la technologie de site d&#39;entr&eacute;e ribosome interne, g&eacute;n&eacute;rant des cellules iPS de fibroblastes postnatals. les cellules iPS g&eacute;n&eacute;r&eacute;s de cette mani&egrave;re affichent morphologie cellules souches embryonnaire, expriment des marqueurs de cellules souches et pi&egrave;ce pluripotence in vivo, comme en t&eacute;moigne leur capacit&eacute; &agrave; diff&eacute;rencier des essais de t&eacute;ratome et leur contribution robuste aux chim&egrave;res de la souris. Combiner tous les facteurs dans une transcription unique r&eacute;alise le syst&egrave;me reprogrammation plus efficace &agrave; ce jour et permet la d&eacute;rivation de cellules iPS avec une simple int&eacute;gration virale. L&#39;utilisation d&#39;un seul vecteur lentiviral de reprogrammation repr&eacute;sente un outil puissant de laboratoire et un pas important vers l&#39;application de la technologie iPS &agrave; des fins cliniques.

G&eacute;n&eacute;ration de cellules souches pluripotentes induites &agrave; l&#39;aide d&#39;une seule cellule souche lentiviral cassette.

Induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS) k&ouml;nnen mit retrovirale Vektoren Ausdr&uuml;cken Oct4, Sox2, Klf4 und cMyc generiert werden. Die meisten fr&uuml;here Studien haben mehrere retrovirale Vektoren erforderlich, f&uuml;r die Neuprogrammierung, was zu hohen Zahlen von genomischen Integrationen in iPS-Zellen und deren Einsatz f&uuml;r therapeutische Anwendungen begrenzen. Hier beschreiben wir die Verwendung einer einzigen Lentiviralen Vektor auszudr&uuml;cken, die eine &quot;Stem Cell-Kassette&quot; aus der vier Transkriptionsfaktoren und eine Kombination aus 2A Peptid und interne Ribosom Eintrag Site Technologie, Erzeugung von iPS-Zellen aus postnatale Fibroblasten. iPS-Zellen, die auf diese Weise generierte Anzeigen von embryonalen Stammzellen-wie Morphologie, express Stammzell-Marker und in-vivo Pluripotenz zeigen, wie durch ihre F&auml;higkeit, in Teratom Assays und ihre robuste Beitrag zur Maus Chim&auml;ren zu unterscheiden. Kombination aller Faktoren in einer einzigen Abschrift erreicht das effizienteste Neuprogrammierung System Datum und erm&ouml;glicht die Ableitung von iPS-Zellen mit einer einzigen virale Integration. Die Verwendung eines einzigen Lentivirale Vektors f&uuml;r Neuprogrammierung stellt ein leistungsf&auml;higes Labor-Tool und ein gro&szlig;er Schritt in Richtung der Anwendung der iPS-Technologie f&uuml;r klinische Zwecke.

Induzierte pluripotente Stammzellen-Generierung mit eine einzigen Lentivirale Stammzell-Kassette.

Cellule staminali (iPS) pluripotenti indotte possono essere generate utilizzando vettori retrovirali esprimendo cMyc, Klf4, Sox2 e Oct4. La maggior parte dei studi precedenti hanno richiesto pi&ugrave; vettori retrovirali per la riprogrammazione, risultante in un numero elevato di genomic integrazioni nelle cellule iPS e limitando il loro uso per applicazioni terapeutiche. Qui descriviamo l&#39;uso di un singolo vettore lentivirale esprimendo che una &quot;cassetta delle cellule staminali&quot; composto da fattori di quattro trascrizione e una combinazione di peptide 2A e tecnologia di internal ribosome entry site, generando le cellule iPS da fibroblasti postnatali. le cellule iPS generate in questo modo visualizzare morfologia come cellule staminali embrionale, esprimono i marcatori delle cellule staminali ed esibiscono pluripotenza in vivo, come evidenziato dalla loro capacit&agrave; di differenziarsi in teratoma dosaggi e il loro contributo robusto a chimere del mouse. Combinando tutti i fattori in una singola trascrizione realizza il pi&ugrave; efficiente sistema riprogrammazione fino ad oggi e permette la derivazione di cellule iPS con una sola integrazione virale. L&#39;uso di un singolo vettore lentivirale per riprogrammazione rappresenta uno strumento potente di laboratorio e un significativo passo verso l&#39;applicazione di tecnologia iPS per scopi clinici.

Generazione di cellule staminali pluripotenti indotte utilizzando una cassetta singola cellula formativa lentivirali.

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&#xB2E8;&#xC77C; lentiviral &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131;.

C&eacute;lulas madre (iPS) pluripotentes inducidas pueden generarse utilizando vectores retrovirales expresando Oct4, Sox2, Klf4 y cMyc. Mayor&iacute;a de los estudios anterior ha requerido m&uacute;ltiples vectores retrovirales, resultando en un n&uacute;mero elevado de gen&oacute;micas integraciones en las c&eacute;lulas iPS y limitar su uso para aplicaciones terap&eacute;uticas. Aqu&iacute; describimos el uso de un &uacute;nico vector lentivirales expresar que un cassette de&quot;c&eacute;lulas madre&quot; compuesto por los factores de transcripci&oacute;n de cuatro y una combinaci&oacute;n de tecnolog&iacute;a de sitio de entrada interna del ribosoma, el p&eacute;ptido de 2A y generaci&oacute;n de c&eacute;lulas iPS de fibroblastos postnatales. c&eacute;lulas iPS generadas de esta manera Mostrar la morfolog&iacute;a de la c&eacute;lula de v&aacute;stago-como embrionaria, expresan marcadores de c&eacute;lulas madre y exhiben la pluripotencia in vivo, como lo demuestra su capacidad de diferenciarse en teratoma ensayos y su s&oacute;lida contribuci&oacute;n a quimeras de rat&oacute;n. Combinando todos los factores en una transcripci&oacute;n sola alcanza el sistema m&aacute;s eficiente de reprogramaci&oacute;n hasta la fecha y permite la derivaci&oacute;n de c&eacute;lulas iPS con una sola integraci&oacute;n viral. El uso de un &uacute;nico vector lentivirales para reprogramaci&oacute;n representa una herramienta de gran alcance del laboratorio y un paso significativo hacia la aplicaci&oacute;n de la tecnolog&iacute;a iPS fines cl&iacute;nicos.

Generaci&oacute;n de c&eacute;lulas madre pluripotentes inducidas usando un cassette de c&eacute;lula madre lentivirales.

&#x6B8B;&#x4F59;&#x7684;&#x7EFC;&#x5408;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x540E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (iPS) &#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x5B58;&#x5728;&#x6781;&#x4E0D;&#x7406;&#x60F3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x8D39;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x62BD;&#x7A0E; polycistronic &#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x5916;&#x6E90;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x8BB0;&#x8005;&#x8367;&#x5149;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x8F7D;&#x4F53;&#x65B0;&#x9896;&#x7248;&#x672C;&#x5141;&#x8BB8;&#x76F4;&#x63A5;&#x5B9E;&#x65F6;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x77E2;&#x91CF;&#x5207;&#x9664;&#x672F;&#x5728;&#x751F;&#x6D3B; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230;&#x7F16;&#x7A0B;&#x5411;&#x91CF;&#x7684;&#x53BB;&#x9664; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x6F5C;&#x529B;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x6539;&#x5584;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x6269;&#x5145;&#x4E86;&#x5176;&#x63A5;&#x53D7;&#x4F53;&#x5916;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5EFA;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6D88;&#x8D39;&#x7A0E;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E0E;&#x6700;&#x5C0F;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x4F20;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7B49;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x91CC;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x83B7;&#x5F97;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5F02;&#x5E38;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982; 8&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x5728;&#x6587;&#x5316;&#x6269;&#x5F20;&#x540E;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7684;&#x4E09;&#x4F53;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BF4;&#x660E;&#x4E3A;&#x4EE3;&#x65E0;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x6709;&#x6548;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5F3A;&#x8C03;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x6709;&#x5229;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4ECE;&#x6D88;&#x9664;&#x7EFC;&#x5408;&#x56E0;&#x7D20;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5F3A;&#x8C03;&#x5C06;&#x9700;&#x8981;&#x8003;&#x8651;&#x5230;&#x4E3A; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x540E;&#x679C;&#x3002;

&#x5207;&#x9664;&#x7684;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x5584;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x53EF;&#x62BD;&#x7A0E;&#x77E2;&#x91CF;&#x751F;&#x6210;&#x7684; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x6F5C;&#x80FD;&#x3002;

The residual presence of integrated transgenes following the derivation of induced pluripotent stem (iPS) cells is highly undesirable. Here we demonstrate efficient derivation of iPS cells free of exogenous reprogramming transgenes using an excisable polycistronic lentiviral vector. A novel version of this vector containing a reporter fluorochrome allows direct visualization of vector excision in living iPS cells in real time. We find that removal of the reprogramming vector markedly improves the developmental potential of iPS cells and significantly augments their capacity to undergo directed differentiation in vitro. We further propose that methods to efficiently excise reprogramming transgenes with minimal culture passaging, such as those demonstrated here, are critical since we find that iPS cells may acquire chromosomal abnormalities, such as trisomy of chromosome 8, similar to embryonic stem cells after expansion in culture. Our findings illustrate an efficient method for the generation of transgene-free iPS cells and emphasize the potential beneficial effects that may result from elimination of integrated reprogramming factors. In addition, our results underscore the consequences of long-term culture that will need to be taken into account for the clinical application of iPS cells.

Excision of reprogramming transgenes improves the differentiation potential of iPS cells generated with a single excisable vector.

La pr&eacute;sence r&eacute;siduelle de transg&egrave;nes int&eacute;gr&eacute;e suite &agrave; l&#39;obtention de cellules souches (iPS) pluripotentes induites est hautement ind&eacute;sirable. Nous d&eacute;montrons une d&eacute;rivation efficace des cellules iPS libres de transg&egrave;nes de reprogrammation exog&egrave;ne &agrave; l&#39;aide d&#39;un vecteur lentiviral polycistronique soumis &agrave; accises. Une nouvelle version de ce vecteur contenant un fluorochrome journaliste permet directement les cellules de visualisation d&#39;excision de vecteur dans vie EPI en temps r&eacute;el. Nous trouvons que l&#39;&eacute;limination du vecteur reprogrammation am&eacute;liore sensiblement le potentiel de d&eacute;veloppement des cellules iPS et augmente consid&eacute;rablement leur capacit&eacute; &agrave; subissent une diff&eacute;renciation dirig&eacute;e in vitro. De plus, nous proposons que m&eacute;thodes pour efficacement l&#39;accise reprogrammation transg&egrave;nes avec la culture minimale de passage, tels que ceux d&eacute;montr&eacute;s ici, sont essentielles car nous trouvons que les cellules iPS pourront acqu&eacute;rir des anomalies chromosomiques, comme la trisomie du chromosome 8, semblables aux cellules souches embryonnaires apr&egrave;s expansion dans la culture. Nos r&eacute;sultats illustrent une m&eacute;thode efficace pour la g&eacute;n&eacute;ration de cellules iPS exempt de transgene et mettent l&#39;accent sur les effets b&eacute;n&eacute;fiques potentiels pouvant r&eacute;sulter de l&#39;&eacute;limination des int&eacute;gr&eacute;e des facteurs de reprogrammation. En outre, nos r&eacute;sultats mettent en &eacute;vidence les cons&eacute;quences de la culture &agrave; long terme qui devront &ecirc;tre pris en compte pour l&#39;application clinique des cellules iPS.

L&#39;excision de la reprogrammation des transg&egrave;nes am&eacute;liore le potentiel de diff&eacute;renciation des cellules iPS g&eacute;n&eacute;r&eacute; avec un unique vecteur soumis &agrave; accises.

Die verbleibende Anwesenheit von integrierten transgenen nach die Ableitung von induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS) ist h&ouml;chst unerw&uuml;nscht. Hier zeigen wir effiziente Ableitung der iPS-Zellen frei von exogenen Neuprogrammierung transgenen mithilfe eines verbrauchsteuerpflichtigen Polycistronic Lentiviralen Vektors. Eine neue Version dieses Vektors mit einem Reporter-Fluorochrom erm&ouml;glicht direkte Visualisierung der Vektor Exzision in lebenden iPS-Zellen in Echtzeit. Wir finden, dass die Beseitigung der Neuprogrammierung Vektor deutlich verbessert das entwicklungspolitischen Potenzial von iPS-Zellen und wesentlich erweitert ihre Kapazit&auml;ten zur in-vitro-gesteuerte Differenzierung zu unterziehen. Wir weiter schlagen, die Methoden, um effizient Neuprogrammierung Verbrauchsteuern transgene mit minimalen Kultur passieren lassen, wie diese demonstrierte hier sind kritisch, da wir finden, dass iPS-Zellen Chromosomenanomalien wie Trisomie des Chromosoms 8, &auml;hnlich wie embryonale Stammzellen nach Erweiterung in Kultur erwerben k&ouml;nnen. Unsere Ergebnisse zeigen eine sehr effiziente Methode zur Erzeugung von Transgen-freie iPS-Zellen und betonen die potenziellen positiven Auswirkungen, die aus der Beseitigung der Neuprogrammierung Faktoren integriert. Unsere Ergebnisse unterstreichen zus&auml;tzlich die Folgen der Langzeitkultur, die f&uuml;r die klinische Anwendung von iPS-Zellen ber&uuml;cksichtigt werden m&uuml;ssen.

Exzision der Reprogrammierung transgene verbessert das Differenzierung Potenzial von iPS-Zellen, die mit einem einzigen verbrauchsteuerpflichtiger Vektor erzeugt.

La presenza residua di transgeni integrato seguendo la derivazione di cellule staminali (iPS) pluripotenti indotte &egrave; altamente indesiderabile. Qui noi dimostrare la derivazione efficiente delle cellule iPS libera dei transgeni riprogrammazione esogeno usando un vettore lentivirale policistronico soggetti ad accisa. Una nuova versione di questo vettore contenente un fluorocromo reporter consente diretta visualizzazione dell&#39;escissione vettoriale in vita iPS cells in tempo reale. Troviamo che rimozione del vettore riprogrammazione migliora notevolmente il potenziale di sviluppo delle cellule iPS e aumenta notevolmente la capacit&agrave; di subire diretto differenziazione in vitro. Inoltre proponiamo che metodi per recidere efficientemente riprogrammazione transgeni con minima cultura seminando, come quelle dimostrate qui, sono critici poich&eacute; troviamo che le cellule iPS possono acquisire anomalie cromosomiche, come la trisomia del cromosoma 8, simili a cellule staminali embrionali dopo l&#39;espansione nella cultura. I nostri risultati illustrano un metodo efficiente per la generazione di cellule iPS transgene-libero ed enfatizzano i potenziali effetti benefici che possono derivare dall&#39;eliminazione di integrato fattori di riprogrammazione. Inoltre, i nostri risultati sottolineano le conseguenze a lungo termine cultura che dovranno essere presi in considerazione per l&#39;applicazione clinica delle cellule iPS.

L&#39;escissione della riprogrammazione transgeni migliora il potenziale di differenziazione delle cellule iPS generato con un singolo vettore soggetti ad accisa.

&#x6B21;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79; &#xFF08;iPS&#xFF09; &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5C0E;&#x51FA;&#x7D71;&#x5408; transgenes &#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x671B;&#x307E;&#x3057;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x304C;&#x7269;&#x54C1;&#x7A0E;&#x8AB2;&#x7A0E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3; &#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; transgenes &#x306E;&#x7121;&#x6599; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3092;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x7248;&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x5207;&#x9664;&#x30EA;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B0; iPS &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x3002;IPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x683C;&#x6BB5;&#x306B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x3001;in vitro &#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x5F37;&#x5316;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x6211;&#x3005; &#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x5207;&#x9664;&#x306F;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x3068; transgenes &#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x306A;&#x3069;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 8 &#x65E5;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x306E;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x5F8C;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30BD;&#x30DF;&#x30FC;&#x306A;&#x3069;&#x3092;&#x5165;&#x624B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x7121;&#x6599;&#x306E; transgene iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6709;&#x76CA;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x5FDC;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8003;&#x616E;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Transgenes &#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x5207;&#x9664; 1 &#x3064;&#x304C;&#x7269;&#x54C1;&#x7A0E;&#x8AB2;&#x7A0E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x305F; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x30DD;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; (iPS) &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xB798;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD1B5;&#xD569; &#xB41C; transgenes&#xC758; &#xC794;&#xC5EC; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBC14;&#xB78C;&#xC9C1;&#xD558;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xBB34;&#xB8CC; exogenous &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; transgenes excisable polycistronic lentiviral &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD30C;&#xC0DD; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C1;&#xC811; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xC790; &#xD615;&#xAD11; &#xC0C9;&#xC18C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xBC84;&#xC804; &#xBCA1;&#xD130; &#xC808;&#xB2E8; &#xC0DD;&#xD65C; Ips&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xB3C5;&#xB41C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xCCB4; &#xC678;&#xB97C; &#xBC1B; &#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC99D;&#xB300; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xC18C;&#xBE44; &#xC138;&#xB97C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xBB38;&#xD654; passaging&#xC640; transgenes &#xADF8; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xB4F1;, &#xC5EC;&#xAE30;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; iPS &#xC138;&#xD3EC; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 8, &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD6C4; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; trisomy &#xAC19;&#xC740; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; &#xCDE8;&#xB4DD; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; transgene &#xBB34;&#xB8CC; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xC694;&#xC18C; &#xD1B5;&#xD569;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC775;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC15;&#xC870;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC801;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0;&#xB824; &#xB418;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBB38;&#xD654;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC11;&#xC904;.

Transgenes &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC758; &#xC808;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xC77C; excisable &#xBCA1;&#xD130; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La presencia residual de transgenes integradas despu&eacute;s de la derivaci&oacute;n de c&eacute;lulas madre (iPS) pluripotentes inducidas es altamente indeseable. Aqu&iacute; demostramos eficiente derivaci&oacute;n de c&eacute;lulas iPS de transgenes reprogramaci&oacute;n ex&oacute;genos utilizando un vector lentivirales los policistr&oacute;nico. Una nueva versi&oacute;n de este vector que contiene un fluorocromo reportero permite directa visualizaci&oacute;n de supresi&oacute;n de vector en vida iPS c&eacute;lulas en tiempo real. Encontramos que la eliminaci&oacute;n del vector reprogramaci&oacute;n mejora notablemente el desarrollo potencial de las c&eacute;lulas iPS y aumenta significativamente su capacidad para experimentar la diferenciaci&oacute;n dirigida in vitro. Adem&aacute;s proponemos que m&eacute;todos para suprimir eficientemente reprogramaci&oacute;n transgenes con pases de cultura m&iacute;nima, como &eacute;sos demostrada aqu&iacute;, son fundamentales ya que nos encontramos con que las c&eacute;lulas iPS pueden adquirir anormalidades cromos&oacute;micas, como la trisom&iacute;a del cromosoma 8, similares a las c&eacute;lulas madre embrionarias despu&eacute;s de la expansi&oacute;n de la cultura. Nuestros resultados ilustran un m&eacute;todo eficiente para la generaci&oacute;n de c&eacute;lulas iPS transgen-libre y destacan los efectos beneficiosos potenciales que puedan derivarse de la eliminaci&oacute;n de integra factores de reprogramaci&oacute;n. Adem&aacute;s, nuestros resultados ponen de relieve las consecuencias de la cultura a largo plazo que deber&aacute; tenerse en cuenta para la aplicaci&oacute;n cl&iacute;nica de las c&eacute;lulas iPS.

Supresi&oacute;n de reprogramaci&oacute;n transgenes mejora el potencial de diferenciaci&oacute;n de c&eacute;lulas iPS generadas con un vector de los individual.

&#x9488;&#x5BF9;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5165;&#x4F53;&#x5185;&#x7279;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C31;&#x7CFB;&#x662F;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x505A;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8C03;&#x8282;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x7EA0;&#x6B63;&#x7EE7;&#x627F;&#x4EBA;&#x7C7B; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176; antitrypsin (&#x6028;&#x6068;) &#x865A;&#x6240;&#x81F4;&#x7684;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x7531;&#x5F02;&#x6784;&#x3001; &#x5206;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C31;&#x7CFB;&#x53EF;&#x77ED;&#x4F4F;&#x548C;&#x56F0;&#x96BE;&#x5177;&#x4F53; nt-3 &#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x67D3;&#x6BD2;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x80FD;&#x591F;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x5C06;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x591A;&#x8FBE; 70%&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x80BA;&#x80BA;&#x6CE1;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;AMs&#xFF09;&#x3002;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E4B;&#x540E;, &#x57FA;&#x56E0;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; AMs &#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x80BA;&#x80BA;&#x6CE1;&#x548C;&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x5185;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5BFF;&#x547D;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x524D;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#xFF0C;&#x5360;&#x8F6C;&#x5BFC; AMs &#x7684;&#x5947;&#x602A;&#x6301;&#x7EED;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x6B64;&#x957F;&#x5BFF;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5B9E;&#x73B0;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x6028;&#x6068;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x886C;&#x91CC;&#x6D41;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x5728;&#x65E2;&#x5B9A;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#xFF0C;lentivirally &#x4EA4;&#x4ED8;&#x6028;&#x6068;&#x6539;&#x5584;&#x8FDB;&#x5C55;&#x7684;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#xFF0C;&#x8870;&#x51CF;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x80BA;&#x7684;&#x6CD5;&#x89C4;&#x9075;&#x4ECE;&#x6027;&#x548C;&#x80BA;&#x6CE1;&#x5927;&#x5C0F;&#x53EF;&#x89C1;&#x4E00;&#x6591;&#x3002;&#x7ECF;&#x8FC7; 24 &#x4E2A;&#x661F;&#x671F;&#x6301;&#x7EED;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x4F53;&#x6DB2;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x5E94;&#x7B54;&#x7684;&#x6028;&#x6068;&#x86CB;&#x767D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;AMs &#x662F;&#x77ED;&#x7684;&#x6559;&#x6761;&#x6211;&#x4EEC;&#x7ED3;&#x679C;&#x6311;&#x6218;&#x751F;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x4F53;&#x5185;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x5E94;&#x7528;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x7EA0;&#x6B63;&#x7684;&#x6028;&#x6068;&#x865A;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x957F;&#x5BFF;&#x80BA;&#x80BA;&#x6CE1;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x3002;

Directed gene transfer into specific cell lineages in vivo is an attractive approach for both modulating gene expression and correcting inherited mutations such as emphysema caused by human alpha1 antitrypsin (hAAT) deficiency. However, somatic tissues are mainly comprised of heterogeneous, differentiated cell lineages that can be short lived and difficult to specifically transfect. Here, we describe an intratracheally instilled lentiviral system able to deliver genes selectively to as many as 70% of alveolar macrophages (AMs) in the mouse lung. Following a single in vivo lentiviral transduction, genetically tagged AMs persisted in lung alveoli and expressed transferred genes for the lifetime of the adult mouse. A prolonged macrophage lifespan, rather than precursor cell proliferation, accounted for the surprisingly sustained presence of transduced AMs. We utilized this long-lived population to achieve localized secretion of therapeutic levels of hAAT protein in lung epithelial lining fluid. In an established mouse model of emphysema, lentivirally delivered hAAT ameliorated the progression of emphysema, as evidenced by attenuation of increased lung compliance and alveolar size. After 24 weeks of sustained gene expression, no humoral or cellular immune responses to hAAT protein were detected. Our results challenge the dogma that AMs are short lived and suggest that these differentiated cells may be a possible target cell population for in vivo gene therapy applications, including the sustained correction of hAAT deficiency.

Amelioration of emphysema in mice through lentiviral transduction of long-lived pulmonary alveolar macrophages.

R&eacute;alis&eacute; le transfert de g&egrave;nes en lign&eacute;es cellulaires in vivo est une approche int&eacute;ressante pour les deux moduler l&#39;expression des g&egrave;nes et correction h&eacute;rit&eacute; des mutations comme l&#39;emphys&egrave;me caus&eacute;s par les humains alpha1 antitrypsine (hAAT). Cependant, les tissus somatiques sont principalement compos&eacute;es de lign&eacute;es de cellules h&eacute;t&eacute;rog&egrave;nes et diff&eacute;renci&eacute;s pouvant &ecirc;tre bref v&eacute;cue et difficiles &agrave; transfecter sp&eacute;cifiquement. Nous d&eacute;crivons ici un syst&egrave;me des g&egrave;nes par voie intratrach&eacute;ale instill&eacute; en mesure de livrer des g&egrave;nes s&eacute;lectivement que 70 % des macrophages alv&eacute;olaires (AMs) dans les poumons de souris. Suite &agrave; une seule transduction des g&egrave;nes in vivo, AMs g&eacute;n&eacute;tiquement marqu&eacute;s a persist&eacute; dans les alv&eacute;oles pulmonaires et exprim&eacute; des g&egrave;nes transf&eacute;r&eacute;s pendant la dur&eacute;e de vie de la souris adulte. Une dur&eacute;e de vie prolong&eacute;e des macrophages, plut&ocirc;t qu&#39;&agrave; la prolif&eacute;ration des cellules pr&eacute;curseurs, repr&eacute;sentait la pr&eacute;sence &eacute;tonnamment soutenue de transduite AMs. Nous avons eu recours &agrave; cette population de longue dur&eacute;e de vie pour atteindre la s&eacute;cr&eacute;tion localis&eacute;e des niveaux th&eacute;rapeutiques de hAAT de prot&eacute;ines dans l&#39;&eacute;pith&eacute;lium du liquide pulmonaire. Chez une souris &eacute;tablie mod&egrave;le d&#39;emphys&egrave;me, livr&eacute; lentivirally hAAT a am&eacute;lior&eacute; la progression de l&#39;emphys&egrave;me, comme en t&eacute;moigne l&#39;att&eacute;nuation de la taille de la conformit&eacute; et alv&eacute;olaire pulmonaire accrue. Apr&egrave;s 24 semaines de g&egrave;ne soutenue, expression, ne humorale ou cellulaire des r&eacute;ponses immunitaires &agrave; la prot&eacute;ine hAAT ont &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;s. Notre d&eacute;fi r&eacute;sultats le dogme que AMs sont courts a v&eacute;cu et sugg&egrave;rent que ces cellules diff&eacute;renci&eacute;es peuvent &ecirc;tre une population de cellules cibles possibles pour des applications de th&eacute;rapie g&eacute;nique in vivo, y compris la correction durable de la carence en hAAT.

Am&eacute;lioration de l&#39;emphys&egrave;me chez la souris par le biais de transduction des g&egrave;nes des macrophages alv&eacute;olaires pulmonaires longue dur&eacute;e de vie.

Gentransfer in bestimmte Zelle &Uuml;bertragungslinien in-vivo ist ein attraktives Konzept f&uuml;r beide modulierende Genexpression und Korrektur geerbt Mutationen wie Emphysem verursacht durch menschliche alpha1-antitrypsinmangel (hAAT) gerichtet. Jedoch bestehen somatische Gewebe haupts&auml;chlich aus heterogenen, differenzierte Zelle &Uuml;bertragungslinien, die kurz gelebt und schwierig, insbesondere bioaktiven sein k&ouml;nnen. Hier beschreiben wir eine Intratracheally eingefl&ouml;&szlig;t Lentivirale System Gene gezielt zu mehr als 70 % der alveol&auml;ren Makrophagen (AMs) in der Maus-Lunge zu liefern. Nach einer einzigen in-vivo Lentivirale Transduktion genetisch markierte AMs auf Lungen-Alveolen beibehalten und &uuml;bertragene Gene f&uuml;r die Lebensdauer der adulten Maus ausgedr&uuml;ckt. Eine Makrophage verl&auml;ngerte Lebensdauer, sondern als Vorl&auml;ufer Zellproliferation, entfiel der &uuml;berraschend anhaltenden Pr&auml;senz einer transduzierten AMs. Wir verwendet diese langlebige Population um lokalisierten Sekretion von therapeutischen Ebenen der hAAT Protein in der Lunge epitheliale Auskleidung Fl&uuml;ssigkeit zu erreichen. In einer etablierten Maus einged&auml;mmt Modell des Emphysems, lentivirally hAAT geliefert das Fortschreiten des Emphysems, wie D&auml;mpfung von erh&ouml;hten Lunge Compliance und alveol&auml;re Gr&ouml;&szlig;e belegt. Nach 24 Wochen anhaltende Gen Ausdruck, keine humorale oder zellul&auml;re Immunantworten zu hAAT Protein gefunden. Unsere Ergebnisse Herausforderung das Dogma, dass AMs kurz sind lebte und schlagen vor, da&szlig; diese differenzierten Zellen einer Zellpopulation m&ouml;gliches Ziel f&uuml;r in-vivo-gen-Therapie-Anwendungen, einschlie&szlig;lich die nachhaltige Korrektur des hAAT Mangel sein k&ouml;nnen.

Verbesserung des Emphysems bei M&auml;usen durch Lentivirale Transduktion der langlebigen pulmonale alveol&auml;re Makrophagen.

Diretto trasferimento genico in lignaggi specifici delle cellule in vivo &egrave; un approccio interessante per entrambi espressione genica modulante e correggendo ereditato mutazioni quali enfisema causata da umano Alfa1 antitripsina (hAAT). Tuttavia, tessuti somatici principalmente sono costituiti da linee cellulari eterogeneo, differenziato che possono essere breve vissuta e difficili a transfect specificamente. Qui, descriviamo un sistema lentivirale intratracheally instillato in grado di consegnare i geni selettivamente per oltre il 70% dei macrofagi alveolari (AMs) nel polmone del mouse. A seguito di un singolo trasduzione lentivirale in vivo, geneticamente tagged AMs ha persisto in alveoli polmonari ed espressi geni trasferiti per tutta la durata del mouse adulti. Una durata prolungata dei macrofagi, piuttosto che la proliferazione di cellule del precursore, rappresentava la presenza sorprendentemente sostenuta di AMs trasdotte. Abbiamo utilizzato questa popolazione longeva per raggiungere localizzata secrezione dei livelli terapeutici della proteina hAAT nel fluido di rivestimento epiteliale polmonare. In un mouse stabilito modello di enfisema, consegnato lentivirally hAAT migliorata la progressione di enfisema, come evidenziato dalla attenuazione della dimensione di conformit&agrave; e alveolare polmonare aumentata. Dopo 24 settimane di gene sostenuta espressione, non umorale o cellulare immune responses to hAAT proteina sono stati rilevati. La nostra sfida risultati il dogma che AMs sono brevi vissuto e suggeriscono che queste cellule differenziate possono essere una popolazione di cellule bersaglio possibile per applicazioni di terapia genica in vivo, tra cui la correzione sostenuta di deficit hAAT.

Miglioramento di enfisema nei topi attraverso la trasduzione lentivirale di macrofagi alveolari polmonari longevi.

&#x76E3;&#x7763;&#x7279;&#x5B9A;&#x30BB;&#x30EB;&#x8840;&#x7D71;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30DC;&#x3078;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x4E21;&#x65B9;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x8A02;&#x6B63;&#x30D2;&#x30C8; &alpha; 1 &#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; (hAAT) &#x6B20;&#x4E4F;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80BA;&#x6C17;&#x816B;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x7D99;&#x627F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x7D44;&#x7E54;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x77ED;&#x3044;&#x4F4F;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x305F;&#x3068;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F; transfect &#x306B;&#x56F0;&#x96E3;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x7570;&#x7A2E;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x7CFB;&#x8B5C;&#x306E;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6C17;&#x7BA1;&#x5185;&#x6CE8;&#x5165;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80BA;&#x5185;&#x306E;&#x80BA;&#x80DE;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8; (AMs) &#x306E; 70% &#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30BF;&#x30B0; AMs &#x80BA;&#x306E;&#x80BA;&#x80DE;&#x3067;&#x6C38;&#x7D9A;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6210;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x5BFF;&#x547D;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9577;&#x5F15;&#x304F;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x5BFF;&#x547D;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F; AMs &#x306E;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30EC;&#x30BC;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5206;&#x6CCC; hAAT &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x88AB;&#x8986;&#x6DB2;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x9577;&#x5BFF;&#x547D;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; lentivirally hAAT &#x914D;&#x4FE1;&#x80BA;&#x6C17;&#x816B;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x80BA;&#x6C17;&#x816B;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x80BA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x80BA;&#x80DE;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x6539;&#x5584;&#x3002;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 24 &#x9031;&#x9593;&#x5F8C;&#x5F0F;&#x3001;&#x3044;&#x3044;&#x3048;&#x4F53;&#x6DB2;&#x307E;&#x305F;&#x306F; hAAT &#x86CB;&#x767D;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x8AB2;&#x984C; AMs &#x304C;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6559;&#x7FA9;&#x306F;&#x3001;&#x4F4F;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30EB;&#x4EBA;&#x53E3; hAAT &#x6B20;&#x4E4F;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x88DC;&#x6B63;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;in vivo &#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x9577;&#x5BFF;&#x547D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x80BA;&#x80DE;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x80BA;&#x6C17;&#x816B;&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x3002;

Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC140; &#xD608;&#xD1B5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xBAA8;&#xB450; &#xBCC0;&#xC870; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC; &#xC774;&#xBA70; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; alpha1 antitrypsin (hAAT) &#xACB0;&#xD54D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xD3D0;&#xAE30; &#xC885; &#xAC19;&#xC740; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0C1;&#xC18D; &#xC218;&#xC815; &#xAC10;&#xB3C5;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC9C1; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC9E7;&#xC740; &#xC0B4; &#xC558; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B9;&#xBCC4;&#xD788; transfect &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC774;&#xAE30;&#xC885;, &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xACC4;&#xBCF4; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD3D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3D0; &#xD3EC; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; (AMs)&#xC758; 70% &#xC815;&#xB3C4;&#xB97C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xAC8C; &#xC2EC;&#xC5B4; intratracheally&#xC758; lentiviral &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; lentiviral &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD0DC;&#xADF8; AMs &#xD3D0; &#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC778; &#xC950;&#xC758; &#xC218;&#xBA85;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD45C;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC870; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; macrophage &#xC218;&#xBA85; transduced Ams&#xC758; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B8; &#xC815;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xCC28;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD3D0; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC548; &#xB300;&#xAE30; &#xC561;&#xCCB4;&#xC5D0; hAAT &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC218;&#xBA85;&#xC774; &#xAE34; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC124;&#xC815; &#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; lentivirally hAAT &#xBC30;&#xB2EC; &#xAE30;&#xC885;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378; &#xC99D;&#xAC00; &#xD3D0; &#xC900;&#xC218; &#xBC0F; &#xCE58;&#xACBD; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xAC10;&#xC1E0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3D0;&#xAE30; &#xC885;, &#xC9C4;&#xD589; ameliorated. &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 24 &#xC8FC; &#xD6C4; &#xC2DD;, &#xB354; &#xCCB4;&#xC561; &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC751;&#xB2F5; hAAT &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC80;&#xCD9C; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB3C4;&#xC804; Ams&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; &#xAD50;&#xB9AC; &#xC0B4;&#xBA74;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xC140; hAAT &#xACB0;&#xD54D;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xAD50;&#xC815; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; in vivo &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140; &#xC778;&#xAD6C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC218;&#xBA85;&#xC774; &#xAE34; &#xD3D0; &#xD3D0; &#xD3EC; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; lentiviral &#xBCC0;&#xD658;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xC885;&#xC758; &#xAC1C;&#xB7C9;.

Dirigido la transferencia de genes en linajes celulares espec&iacute;ficas en vivo es un enfoque atractivo para ambos genes moduladores y corregir heredado mutaciones como enfisema causado por humanos alfa 1 antitripsina (hAAT). Sin embargo, tejidos som&aacute;ticos se componen principalmente de linajes heterog&eacute;neo, diferenciado de la c&eacute;lula que pueden ser una palabra vivida y dif&iacute;cil transfectar espec&iacute;ficamente. Aqu&iacute;, describimos un sistema lentivirales PCSC inculcado capaz de suministrar genes selectivamente hasta el 70% de los macr&oacute;fagos alveolares (AMs) en el pulm&oacute;n del rat&oacute;n. Tras un solo transducci&oacute;n lentivirales in vivo, gen&eacute;ticamente etiquetados AMs persistieron en los alv&eacute;olos pulmonares y expresan genes transferidos durante toda la vida del rat&oacute;n adulto. Un macr&oacute;fago prolongada vida &uacute;til, en lugar de proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas precursoras, representaba la presencia sorprendentemente sostenida de AMs transduced. Utilizamos esta poblaci&oacute;n duradera para lograr la secreci&oacute;n localizada de niveles terap&eacute;uticos de hAAT prote&iacute;na en l&iacute;quido de revestimiento epitelial pulmonar. En un rat&oacute;n establecido modelo de enfisema, lentivirally entregado hAAT mejor&oacute; la progresi&oacute;n del enfisema, evidenciada por la atenuaci&oacute;n de tama&ntilde;o de cumplimiento y alveolar pulmonar creciente. Despu&eacute;s de 24 semanas del gene sostenida de expresi&oacute;n, no humoral o celular inmunorespuestas hAAT prote&iacute;na fueron detectados. Nuestro reto de resultados el dogma que carecen de AMs vivi&oacute; y sugieren que estas c&eacute;lulas diferenciadas pueden ser una posible poblaci&oacute;n celular para usos de la terapia g&eacute;nica in vivo, incluyendo la correcci&oacute;n sostenida de hAAT deficiencia.

Mejoramiento del enfisema en ratones a trav&eacute;s de transducci&oacute;n lentivirales de macr&oacute;fagos alveolares pulmonares duraderos.

&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5B9E;&#x73B0;&#x540C;&#x65F6;&#x907F;&#x514D;&#x6C38;&#x4E45;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8868;&#x793A;&#x8D70;&#x5411;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7528;&#x9014;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x75BE;&#x75C5;&#x5EFA;&#x6A21;&#x6216;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7597;&#x6CD5;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x5BA1;&#x9605;) &#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x4EBA;&#x4F53;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5145;&#x5206;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4ECD;&#x7136;&#x9700;&#x8981;&#x5B9E;&#x73B0;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x75BE;&#x75C5;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x4ECE;&#x7EE7;&#x627F;&#x6216;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x666E;&#x904D;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5355;&#x4E00;&quot;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5361;&#x5E26;&quot;&#x8F7D;&#x4F53;&#x6765;&#x5B8C;&#x6210;&#x6B63;&#x5E38;&#x6216;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x76AE;&#x80A4;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x51E0;&#x4E4E;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5E74;&#x9F84;&#x7684;&#x4EBA;&#x83B7;&#x5F97;&#x6709;&#x6548;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x7248;&#x672C;&#x3002;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6216;&#x56DB;&#x4E2A;&#x7F16;&#x7A0B;&#x56E0;&#x7D20;&#x7EB3;&#x5165;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x5355;&#x77E2;&#x91CF;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x4F20;&#x8F93;&#x5141;&#x8BB8;&#x5305;&#x542B;&#x5355;&#x4E2A;&#x7684;&#x53EF;&#x62BD;&#x7A0E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#xFF0C;&#x53BB;&#x9664;&#x751F;&#x6210;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x7EFC;&#x5408;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD0;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x7B56;&#x7565;&#x6765;&#x751F;&#x6210; &gt; 100 &#x80BA;&#x75BE;&#x75C5;&#x7279;&#x5B9A;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x884C;&#x4ECE;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x80BA;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x56CA;&#x6027;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#x3001; &alpha;-1 antitrypsin &#x7F3A;&#x4E4F;&#x6709;&#x5173;&#x80BA;&#x6C14;&#x80BF;&#x3001; &#x786C;&#x76AE;&#x75C5;&#x3001; &#x9570;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3001; &#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6216;&#x95F4;&#x8D28;&#x8F66;&#x53A2;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x6B64;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6709;&#x80FD;&#x529B;&#x5F3A;&#x52B2;&#x5206;&#x5316;&#x6210;&#x5185;&#x80DA;&#x6700;&#x7EC8;&#x5C42;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x524D;&#x4F53;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x4E2A;&#x53EF;&#x62BD;&#x7A0E;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5361;&#x5E26;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x65E0;&#x80BA;&#x75BE;&#x75C5;&#x7279;&#x5B9A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x3002;

The development of methods to achieve efficient reprogramming of human cells while avoiding the permanent presence of reprogramming transgenes represents a critical step toward the use of induced pluripotent stem cells (iPSC) for clinical purposes, such as disease modeling or reconstituting therapies. Although several methods exist for generating iPSC free of reprogramming transgenes from mouse cells or neonatal normal human tissues, a sufficiently efficient reprogramming system is still needed to achieve the widespread derivation of disease-specific iPSC from humans with inherited or degenerative diseases. Here, we report the use of a humanized version of a single lentiviral "stem cell cassette" vector to accomplish efficient reprogramming of normal or diseased skin fibroblasts obtained from humans of virtually any age. Simultaneous transfer of either three or four reprogramming factors into human target cells using this single vector allows derivation of human iPSC containing a single excisable viral integration that on removal generates human iPSC free of integrated transgenes. As a proof of principle, here we apply this strategy to generate >100 lung disease-specific iPSC lines from individuals with a variety of diseases affecting the epithelial, endothelial, or interstitial compartments of the lung, including cystic fibrosis, Î±-1 antitrypsin deficiency-related emphysema, scleroderma, and sickle-cell disease. Moreover, we demonstrate that human iPSC generated with this approach have the ability to robustly differentiate into definitive endoderm in vitro, the developmental precursor tissue of lung epithelia.

Generation of transgene-free lung disease-specific human induced pluripotent stem cells using a single excisable lentiviral stem cell cassette.

Le d&eacute;veloppement de m&eacute;thodes pour atteindre efficace de reprogrammation des cellules humaines tout en &eacute;vitant la pr&eacute;sence permanente de reprogrammation des transg&egrave;nes repr&eacute;sente une &eacute;tape cruciale vers l&#39;utilisation des cellules souches pluripotentes induites (iPSC) &agrave; des fins cliniques, telles que la maladie de mod&eacute;lisation ou de reconstituer des th&eacute;rapies. Bien que plusieurs m&eacute;thodes existent pour g&eacute;n&eacute;rer l&#39;iPSC libre de reprogrammation des transg&egrave;nes de cellules de souris ou de tissus humains normaux n&eacute;onatales, un syst&egrave;me suffisamment efficace de reprogrammation est encore n&eacute;cessaire pour atteindre la d&eacute;rivation g&eacute;n&eacute;ralis&eacute;e de l&#39;iPSC sp&eacute;cifiques &agrave; certaines maladies chez les humains atteints de maladies h&eacute;r&eacute;ditaires ou d&eacute;g&eacute;n&eacute;ratives. Nous rapportons ici, l&#39;utilisation d&#39;une version humanis&eacute;e d&#39;un unique vecteur lentiviral &laquo; cassette de cellules de la tige &raquo; pour accomplir une reprogrammation efficace des fibroblastes de peau normale ou malades provenant des humains de pratiquement n&#39;importe quel &acirc;ge. Transfert simultan&eacute; de trois ou quatre facteurs de reprogrammation en cellules de cible humaine &agrave; l&#39;aide de ce vecteur unique permet de d&eacute;rivation de l&#39;iPSC humain contenant une seule int&eacute;gration virale soumis &agrave; accises g&eacute;n&eacute;rant iPSC humain libre de transg&egrave;nes int&eacute;gr&eacute;s sur l&#39;enl&egrave;vement. Comme une preuve de principe, ici, nous appliquons cette strat&eacute;gie pour g&eacute;n&eacute;rer &gt; 100 lignes d&#39;iPSC sp&eacute;cifiques &agrave; une maladie pulmonaire d&#39;individus atteints de diverses maladies affectant les compartiments &eacute;pith&eacute;liales, endoth&eacute;liales ou interstitielles du poumon, y compris de la fibrose kystique, &alpha; 1 antitrypsine li&eacute;es &agrave; une carence en l&#39;emphys&egrave;me, la scl&eacute;rodermie et dr&eacute;panocytose. De plus, nous d&eacute;montrons qu&#39;iPSC humaine g&eacute;n&eacute;r&eacute;e avec cette approche ont la capacit&eacute; de diff&eacute;rencier robuste en d&eacute;finitive endoderme in vitro, le tissu pr&eacute;curseur du d&eacute;veloppement de l&#39;&eacute;pith&eacute;lium pulmonaire.

G&eacute;n&eacute;ration de poumon transg&egrave;ne libres des cellules souches sp&eacute;cifiques &agrave; certaines maladies humaines pluripotentes induites &agrave; l&#39;aide d&#39;une seule cellule de tige des g&egrave;nes soumis &agrave; accises cassette.

Die Entwicklung von Methoden zu erreichen, effiziente Reprogrammierung menschlicher Zellen ohne die st&auml;ndige Pr&auml;senz der Reprogrammierung transgene stellt einen entscheidenden Schritt in Richtung der Nutzung von induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSC) f&uuml;r klinische Zwecke, wie Krankheit, modellieren oder Rekonstituierung der Therapien. Zwar es mehrere Methoden zum Generieren von iPSC frei gibt von Neuprogrammierung transgenen Maus Zellen oder neonatale normalen menschlichen Geweben, ist ein ausreichend effizientes Neuprogrammierung System erforderlich, um die weit verbreitete Ableitung des krankheitsspezifischen iPSC von Menschen mit ererbten oder degenerativen Krankheiten zu erreichen. Hier teilen wir Ihnen die Verwendung einer humanisierten Version eines einzigen Lentivirale &quot;Vorbau Zelle Kassette&quot; Vector, effiziente Neuprogrammierung der normalen oder kranken Hautfibroblasten gewonnenen Menschen nahezu jeden Alters zu erreichen. Gleichzeitige &Uuml;bertragung entweder drei oder vier Neuprogrammierung Faktoren in human Target-Zellen, die unter Verwendung dieser einzigen Vektor erm&ouml;glicht die Ableitung der menschlichen iPSC, enth&auml;lt eine einzelne verbrauchsteuerpflichtige virale-Integration, die &uuml;ber die Entfernung frei von integrierten transgenen menschlichen iPSC generiert. Als Beweis des Prinzips, hier wenden wir diese Strategie generiert &gt; 100 Lunge krankheitsspezifische iPSC-Linien von Personen, die mit einer Vielzahl von Krankheiten, die das Epithel, Endothel oder interstitielle F&auml;cher der Lunge, einschlie&szlig;lich Mukoviszidose, &alpha;-1-antitrypsin-Mangel-bezogene-Emphysem, Sklerodermie und Sichelzellenan&auml;mie. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass menschliche iPSC generiert mit diesem Ansatz haben die F&auml;higkeit, robust in der endg&uuml;ltigen Endodermis in vitro der Entwicklungsbiologie Vorl&auml;ufer-Gewebe der Lunge Epithelien zu unterscheiden.

Generation von Transgen-freie Lunge krankheitsspezifische menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen, die mit eine einzigen verbrauchsteuerpflichtiger Lentivirale Stammzell-Kassette.

Lo sviluppo di metodi per realizzare efficienti riprogrammazione delle cellule umane, evitando la presenza permanente di riprogrammazione transgeni rappresenta un passo fondamentale verso l&#39;uso di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) per scopi clinici, quali la malattia di modellazione o ricostituire le terapie. Anche se esistono metodi diversi per la generazione di iPSC libero di riprogrammazione transgeni da mouse cellule o tessuti umani normali neonatali, un sistema di riprogrammazione sufficientemente efficiente &egrave; ancora necessario per raggiungere la derivazione diffusa delle malattie specifiche iPSC dagli esseri umani con malattie ereditarie o degenerative. Qui, segnaliamo l&#39;uso di una versione umanizzata di un singolo vettore lentivirale &quot;staminali cassetta cella&quot; per realizzare efficienti riprogrammazione dei fibroblasti della pelle normale o malati ottenuti dagli esseri umani di qualsiasi et&agrave;. Trasferimento simultaneo di tre o quattro fattori di riprogrammazione nelle cellule bersaglio umano utilizzando questo singolo vettore permette di derivazione umana iPSC contenente una singola integrazione virale soggetti ad accisa che su rimozione genera umano iPSC libero dei transgeni integrato. Come prova di principio, qui applichiamo questa strategia per generare &amp;gt; 100 linee di iPSC specifici per la malattia polmonare da individui con una variet&agrave; di malattie che colpiscono i compartimenti epiteliali, endoteliali o interstiziali del polmone, fibrosi cistica, &alpha;-1 antitripsina deficit correlati enfisema, sclerodermia e falciforme. Inoltre, abbiamo dimostrato che iPSC umani generati con questo approccio hanno la capacit&agrave; di differenziarsi robustamente in endoderma definitivo in vitro, tessuto precursore dello sviluppo degli epiteli polmonari.

Generazione del polmone privo di transgene specifici per la malattia umana indotta staminali pluripotenti usando una cassetta singola ad accisa lentivirali stem cell.

Transgenes &#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6052;&#x4E45;&#x7684;&#x306A;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x3072;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3084;&#x30BB;&#x30E9;&#x30D4;&#x30FC;&#x306E;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x75BE;&#x60A3;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; (iPSC) &#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x5411;&#x3051;&#x305F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;IPSC transgenes &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D44;&#x7E54;&#x304B;&#x3089;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3057;&#x76F4;&#x3059;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x75BE;&#x60A3;&#x7279;&#x7570; iPSC &#x4EBA;&#x9593;&#x7D99;&#x627F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x3042;&#x3089;&#x3086;&#x308B;&#x5E74;&#x9F62;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6B63;&#x5E38;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x60A3;&#x90E8;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x66F8;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x300C;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x300D;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x5316;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30EB;&#x306B; 3 &#x3064;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 4 &#x3064;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x8EE2;&#x9001;&#x306F;&#x9664;&#x53BB;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593; iPSC &#x7D71;&#x5408; transgenes &#x306E;&#x7121;&#x6599;&#x751F;&#x6210;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x304C;&#x7269;&#x54C1;&#x7A0E;&#x8AB2;&#x7A0E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; iPSC &#x306E;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x539F;&#x5247;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x76EE;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3084;&#x9593;&#x8CEA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &alpha; 1 antitrypsin &#x6B20;&#x4E4F;&#x95A2;&#x9023;&#x80BA;&#x6C17;&#x816B;&#x3001;&#x5F37;&#x76AE;&#x75C7;&#x3001;&#x56A2;&#x80DE;&#x6027;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x75C7;&#x3001;&#x938C;&#x72B6;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x75C5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x80BA;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x500B;&#x4EBA;&#x304B;&#x3089;&#x306E; 100 &#x306E;&#x80BA;&#x75BE;&#x60A3;&#x7279;&#x7570; iPSC &#x884C;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x3053;&#x308C;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x305D;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593; iPSC &#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x9811;&#x5065;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x80DA;&#x8449;&#x306B; in vitro &#x80BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x7269;&#x54C1;&#x7A0E;&#x8AB2;&#x7A0E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306E;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7121;&#x6599;&#x306E; transgene &#x80BA;&#x75BE;&#x60A3;&#x7279;&#x7570;&#x3072;&#x3068;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x3002;

Transgenes &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC758; &#xC601;&#xC6D0;&#xD55C; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD53C;&#xD558; &#xBA74; &#xC11C; &#xC778;&#xAC04; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xB610;&#xB294; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB4F1;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC6A9;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (iPSC)&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xD5A5;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. IPSC &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC140; &#xB610;&#xB294; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; transgenes &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC758; &#xC790;&#xC720;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC774; &#xC788;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC18D; &#xB418;&#xAC70;&#xB098; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xAD00;&#xB828; Ipsc&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB098;&#xC774;&#xC758; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xC815;&#xC0C1; &#xB610;&#xB294; &#xBCD1;&#xC5D0; &#xAC78;&#xB9B0; &#xD53C;&#xBD80; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB2E8;&#xC77C; lentiviral &quot;&#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8;&quot; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; humanized &#xBC84;&#xC804;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140;&#xC5D0; 3 &#xAC1C; &#xB610;&#xB294; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC804;&#xC1A1; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; iPSC &#xBB34;&#xB8CC; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; transgenes&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; excisable &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xD1B5;&#xD569;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Ipsc&#xC758; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB85C; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xC804;&#xB7B5; &#xC801;&#xC6A9; &amp;gt; &#xB0AD; &#xC131; &#xC12C;&#xC720; &#xC99D;, &alpha;-1 antitrypsin &#xACB0;&#xD54D; &#xAD00;&#xB828; &#xAE30;&#xC885;, scleroderma, &#xB0AB; &#xC138;&#xD3EC; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xB4F1; &#xD3D0;&#xC758; &#xC0C1;&#xD53C;, &#xB0B4; &#xD53C;, &#xB610;&#xB294; &#xAC04; &#xC9C8; &#xC131; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAC1C;&#xC778; &#xC73C;&#xB85C;&#xBD80;&#xD130; 100 &#xD3D0; &#xC9C8;&#xD658; &#xAD00;&#xB828; iPSC &#xB77C;&#xC778;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Ipsc&#xC774; &#xC0DD;&#xC131; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC811;&#xADFC; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xCD5C;&#xC885; endoderm &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3D0; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC804;&#xC870; &#xC870;&#xC9C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;.

Transgene &#xBB34;&#xB8CC; &#xD3D0; &#xC9C8;&#xD658; &#xAD00;&#xB828; &#xC778;&#xAC04; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC77C; excisable lentiviral &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El desarrollo de m&eacute;todos para lograr eficiente reprogramaci&oacute;n de c&eacute;lulas humanas, evitando la presencia permanente de reprogramaci&oacute;n transgenes representa un paso crucial hacia el uso de c&eacute;lulas pluripotentes inducidas (iPSC) fines cl&iacute;nicos, tales como enfermedad de modelado o terapias de reconstituci&oacute;n. Aunque existen varios m&eacute;todos para la generaci&oacute;n de iPSC de reprogramaci&oacute;n de los transgenes de las c&eacute;lulas de rat&oacute;n o tejidos humanos normales neonatales, todav&iacute;a es necesario un sistema de reprogramaci&oacute;n suficientemente eficiente para lograr la derivaci&oacute;n generalizada de iPSC enfermedad-espec&iacute;fica de los seres humanos con enfermedades hereditarias o degenerativas. Aqu&iacute;, Divulgamos el uso de una versi&oacute;n humanizada de un vector lentivirales &quot;cassette de la c&eacute;lula de v&aacute;stago&quot; solo para lograr la reprogramaci&oacute;n eficiente de fibroblastos de la piel normal o enfermo de los seres humanos de cualquier edad. Transferencia simult&aacute;nea de tres o cuatro factores reprogramaci&oacute;n en c&eacute;lulas de human target utilizando este vector solo permite derivaci&oacute;n de iPSC humano que contiene una &uacute;nica integraci&oacute;n viral los que en el retiro genera iPSC humana libre de transgenes integrados. Como una prueba del principio, aqu&iacute; aplicamos esta estrategia para generar &gt; 100 l&iacute;neas de iPSC espec&iacute;ficos de la enfermedad pulmonar de individuos con una variedad de enfermedades que afectan a los compartimientos epiteliales, endoteliales o intersticiales del pulm&oacute;n, como la fibrosis qu&iacute;stica, enfisema de relacionados con la deficiencia de &alpha;-1-antitripsina, esclerodermia y enfermedad de c&eacute;lulas falciformes. Por otra parte, demostramos que iPSC humano generado con este enfoque tienen la capacidad de distinguir s&oacute;lidamente en definitiva endodermo in vitro, el tejido del precursor del desarrollo del epitelio pulmonar.

Generaci&oacute;n de c&eacute;lulas pluripotentes inducidas humanas de la enfermedad-espec&iacute;fica pulm&oacute;n libre de transgenes usando un cassette de c&eacute;lula madre lentivirales los.

IPS &#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x6700;&#x7EC8;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42; (DE) &#x5C06;&#x5141;&#x8BB8;&#x5426;&#x5219;&#x4E3A;&#x65E0;&#x6CD5;&#x8BBF;&#x95EE;&#x524D;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80DA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x5C1A;&#x672A;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x5FB7;&#x6765;&#x81EA; iPS &#x548C; ES &#x4EBA;&#x53E3;&#x76F8;&#x5BF9;&#x540C;&#x7B49;&#x5168;&#x7403;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;IPS &#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5DEE;&#x5F02;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x5426;&#x80FD;&#x4EA7;&#x751F;&#x81EA;&#x4F53;&#x80DA;&#x5B97;&#x65CF;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x4E0D;&#x786E;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x5C0F;&#x9F20; iPS &#x548C;&#x7236;&#x6BCD; ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x73B0;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4F53;&#x5916;&#x63A5;&#x53D7;&#x5FB7;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x5C11;&#x6570;&#x4F8B;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E2D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x8282;&#x57FA;&#x56E0;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E3B;&#x5B9A;&#x4E49; DE &#x5206;&#x5316;&#x53D1;&#x5C55;&#x91CC;&#x7A0B;&#x7891;&#x7684;&#x5168;&#x7403; transcriptomes &#x663E;&#x793A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6F6E;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x76F8;&#x5F53;&#x591A;&#x5FB7;&#x4ECE; ES/iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x6B63;&#x5B97;&#x5FB7;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x4F53;&#x5185;&#x4E2D;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x91CD;&#x53E0;&#x3002;&#x8010;&#x4EBA;&#x5BFB;&#x5473;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x5C55;&#x51FA;&#x7684;&#x5DF2;&#x77E5;&#x53C2;&#x52A0;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5370;&#x8FF9;&#x57FA;&#x56E0;&#x5F02;&#x5E38;&#x6C89;&#x9ED8;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4FDD;&#x7559;&#x5F3A;&#x5927;&#x80FD;&#x529B;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x5FB7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#xFF0C;iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x5212;&#x5206;&#x4E3A;&#x5FB7;&#x524D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x52A0;&#x56FA;&#x75C5;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x884D;&#x751F;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;

&#x9F20;&#x6807; ES &#x548C; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x660E;&#x786E;&#x5185;&#x7684;&#x80DA;&#x5C42;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5370;&#x8FF9;&#x57FA;&#x56E0;&#x5B58;&#x5728;&#x7740;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;

The directed differentiation of iPS and ES cells into definitive endoderm (DE) would allow the derivation of otherwise inaccessible progenitors for endodermal tissues. However, a global comparison of the relative equivalency of DE derived from iPS and ES populations has not been performed. Recent reports of molecular differences between iPS and ES cells have raised uncertainty as to whether iPS cells could generate autologous endodermal lineages in vitro. Here, we show that both mouse iPS and parental ES cells exhibited highly similar in vitro capacity to undergo directed differentiation into DE progenitors. With few exceptions, both cell types displayed similar surges in gene expression of specific master transcriptional regulators and global transcriptomes that define the developmental milestones of DE differentiation. Microarray analysis showed considerable overlap between the genetic programs of DE derived from ES/iPS cells in vitro and authentic DE from mouse embryos in vivo. Intriguingly, iPS cells exhibited aberrant silencing of imprinted genes known to participate in endoderm differentiation, yet retained a robust ability to differentiate into DE. Our results show that, despite some molecular differences, iPS cells can be efficiently differentiated into DE precursors, reinforcing their potential for development of cell-based therapies for diseased endoderm-derived tissues.

Mouse ES and iPS cells can form similar definitive endoderm despite differences in imprinted genes.

La diff&eacute;renciation dirig&eacute;e de l&#39;iPS et de cellules d&#39;ES en d&eacute;finitive endoderme (DE) permettrait &agrave; la d&eacute;rivation des prog&eacute;niteurs autrement inaccessibles pour tissus endodermiques. Toutefois, une comparaison globale de l&#39;&eacute;quivalence relative de d&eacute;riv&eacute; iPS et les populations ES n&#39;a pas &eacute;t&eacute; effectu&eacute;e. Rapports r&eacute;cents de diff&eacute;rences mol&eacute;culaires entre l&#39;iPS et de cellules d&#39;ES ont soulev&eacute; l&#39;incertitude quant &agrave; savoir si CSPI pourrait g&eacute;n&eacute;rer des lign&eacute;es endodermiques autologues in vitro. Ici, nous montrons que les iPS de la souris et les cellules de ES parentales montraient tr&egrave;s semblable capacit&eacute; in vitro de subir une diff&eacute;renciation dirig&eacute;e DE cellules souches. &Agrave; quelques exceptions pr&egrave;s, les deux types de cellules affichent ondes similaires dans l&#39;expression g&eacute;nique sp&eacute;cifiques r&eacute;gulateurs transcriptionnels ma&icirc;tres et transcriptomes global qui d&eacute;finissent les &eacute;tapes importantes d&eacute;veloppementales DE diff&eacute;renciation. L&#39;analyse microarray montre un chevauchement consid&eacute;rable entre les programmes g&eacute;n&eacute;tiques de d&eacute;riv&eacute;s de cellules d&#39;ES/iPS in vitro et DE authentique provenant d&#39;embryons de souris in vivo. Curieusement, cellules iPS pr&eacute;sentaient aberrant de silen&ccedil;age de g&egrave;nes imprim&eacute;s connus pour participer &agrave; la diff&eacute;renciation de l&#39;endoderme, pourtant conserv&eacute; une solide capacit&eacute; &agrave; se diff&eacute;rencier en DE. Nos r&eacute;sultats montrent que, malgr&eacute; quelques diff&eacute;rences mol&eacute;culaires, cellules iPS peuvent &ecirc;tre efficacement diff&eacute;renci&eacute;s en pr&eacute;curseurs DE renforcer leur potentiel pour le d&eacute;veloppement de th&eacute;rapies bas&eacute;es sur les cellules des tissus malades endoderme d&eacute;riv&eacute;s.

ES de souris et les cellules iPS peuvent former similaire endoderme d&eacute;finitif malgr&eacute; les diff&eacute;rences dans les g&egrave;nes imprim&eacute;s.

Die gezielte Differenzierung des iPS und ES Zellen in endg&uuml;ltigen Endodermis (DE) w&uuml;rde die Herleitung des sonst unzug&auml;ngliche Vorl&auml;uferzellen f&uuml;r endodermalen Gewebe erlauben. Weltweiten Vergleich der relativen Equivalency de abgeleitet von iPS und ES Populationen wurde jedoch nicht durchgef&uuml;hrt. J&uuml;ngste Berichte &uuml;ber molekulare Unterschiede zwischen iPS und ES-Zellen haben ausgel&ouml;st, Unsicherheit, ob iPS-Zellen autologe endodermalen &Uuml;bertragungslinien in-vitro generieren konnte. Hier zeigen wir, dass sowohl die Maus iPS als auch die elterliche ES-Zellen sehr &auml;hnlichen in-vitro-Kapazit&auml;t gerichtete Differenzierung in DE Vorl&auml;uferzellen zu unterziehen ausgestellt. Mit wenigen Ausnahmen angezeigt beide Zelltypen &auml;hnliche Schwankungen in der Genexpression der spezifischen Meister transkriptionelle Regulierer und globale Transcriptomes, die die Entwicklungsmeilensteine DE Differenzierung zu definieren. Microarray-Analyse zeigte erhebliche &Uuml;berschneidungen zwischen den genetischen Programmen abgeleitet von ES/iPS-Zellen in Vitro und authentische DE von Maus-Embryos in-vivo de. Interessanterweise iPS-Zellen ausgestellt, aberrante Unterdr&uuml;ckender eingepr&auml;gten Gene bekannt, die zur Teilnahme an Endodermis Differenzierung, dennoch bewahrt hat eine robuste F&auml;higkeit, in DE zu unterscheiden. Unsere Ergebnisse zeigen, dass trotz einiger Molekulare Unterschiede, iPS-Zellen effizient in DE Vorl&auml;ufer, verst&auml;rken ihre Entwicklungspotential zellbasierte Therapien f&uuml;r kranke Endodermis abgeleiteten Gewebe unterschieden werden k&ouml;nnen.

Maus ES und iPS-Zellen k&ouml;nnen &auml;hnliche endg&uuml;ltige Endodermis trotz unterschiedlicher eingepr&auml;gten Gene bilden.

La differenziazione regia di iPS e cellule ES in endoderma definitivo (DE) permetterebbe la derivazione dei progenitori altrimenti inaccessibili per tessuti endodermico. Tuttavia, non &egrave; stato eseguito un confronto globale tra l&#39;equivalenza relativa di DE derivato da iPS e popolazioni ES. Recenti rapporti delle differenze molecolari tra iPS e cellule ES hanno generato incertezza se le cellule iPS potrebbero generare autologhi endodermico lignaggi in vitro. Mostriamo qui, che sia del mouse iPS e parentale ES cellule esposte altamente simili capacit&agrave; in vitro di sottoporsi a differenziazione diretto in DE progenitori. Con poche eccezioni, entrambi i tipi di cella visualizzato picchi simili nell&#39;espressione genica di regolatori trascrizionali master specifici e transcriptomes globale che definire le tappe dello sviluppo della differenziazione DE. Analisi di microarray ha mostrato una considerevole sovrapposizione tra i programmi genetici di DE derivati da cellule ES/iPS in vitro e autentico DE da embrioni di topo in vivo. Curiosamente, le cellule iPS esposto aberrante silenziamento dei geni imprinted conosciuti per partecipare alla differenziazione endoderma, ancora mantenuto una robusta capacit&agrave; di differenziarsi in DE. I nostri risultati mostrano che, nonostante alcune differenze molecolari, le cellule iPS possono essere efficientemente differenziate in DE precursori, rafforzando il loro potenziale per lo sviluppo di terapie cell-based per tessuti malati derivato da endoderma.

Mouse ES e le cellule iPS possono formare simile endoderma definitivo nonostante le differenze nei geni imprinted.

IPS &#x3084; ES &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5185;&#x80DA;&#x8449; (DE) &#x4E0D;&#x80FD;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB; iPS &#x3084; ES &#x96C6;&#x56E3;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x30C7;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x7B49;&#x4FA1;&#x6027;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x5B9F;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;IPS &#x3084; ES &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x9055;&#x3044;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x4E0D;&#x78BA;&#x5B9F;&#x6027; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x81EA;&#x5BB6;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x7CFB;&#x7D71; in vitro &#x751F;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x8ABF;&#x9054;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; iPS &#x3084; ES &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BF;&#x30EB; &#x30C7;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x76E3;&#x7763;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E; in vitro &#x3067;&#x5BB9;&#x91CF;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C11;&#x6570;&#x306E;&#x4F8B;&#x5916;&#x3092;&#x9664;&#x304D;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30B5;&#x30FC;&#x30B8;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x30C7;&#x5206;&#x5316;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30C8;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x89E3;&#x6790;&#x30C7; in vitro &#x8A66;&#x9A13;&#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x672C;&#x683C;&#x7684;&#x306A;&#x30C7; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9593;&#x306E;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x91CD;&#x8907;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Lrad iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x306E;&#x637A;&#x5370;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x307E;&#x3060; DE &#x306B;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x30C7;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x6CBB;&#x7642;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x7531;&#x6765;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x6027;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x306B;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; ES &#x3068; iPS &#x7D30;&#x80DE;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x306E;&#x637A;&#x5370;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD655;&#xC2E4; &#xD55C; endoderm (DE)&#xB85C; Ips&#xC640; ES &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C5;&#xB41C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; endodermal &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB807;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xBA74; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; progenitors&#xC758; &#xD30C;&#xC0DD;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; Ip&#xC640; ES &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB370;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300; &#xB4F1;&#xAC00; &#xBE44;&#xAD50; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ips&#xC640; ES &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xCC28;&#xC774;&#xC810;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xB3C4; iPS &#xC138;&#xD3EC; &#xCCB4; &#xC678; &#xD5CC; endodermal &#xACC4;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80; &#xBD88;&#xD655;&#xC2E4;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xAE30; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; Ips&#xC640; &#xBD80;&#xBAA8;&#xC758; ES &#xC138;&#xD3EC; &#xB4DC; progenitors&#xB85C; &#xAC10;&#xB3C5;&#xB41C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xB97C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xCCB4; &#xC678; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xC804;&#xC2DC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC608;&#xC678;&#xB85C;, &#xB450; &#xC140; &#xC720;&#xD615; &#xD2B9;&#xC815; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; transcriptional &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xC640; &#xB4DC; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC774;&#xC815;&#xD45C;&#xB97C; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xB294; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; transcriptomes&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC11C; &#xC9C0;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC;. Microarray &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; &#xBC0F; in vivo &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xD1B5; &#xB4DC; ES/iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xB4DC;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC911;&#xBCF5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xAE00;, iPS &#xC140; endoderm &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC;&#xD560; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xCC0D;&#xD78C;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD0C8; &#xC120; &#xC785;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xC544;&#xC9C1; &#xB4DC;&#xB85C; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;, &#xC5B4;&#xB5A4; &#xBD84;&#xC790; &#xCC28;&#xC774;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; iPS &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB4DC; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4;, &#xBCD1;&#xC5D0; &#xAC78;&#xB9B0; endoderm &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xCE58;&#xB8CC;&#xBC95;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xAC15;&#xD654;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; ES&#xC640; iPS &#xC138;&#xD3EC; &#xCC0D;&#xD78C;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD655;&#xC2E4; &#xD55C; endoderm&#xB97C; &#xD615;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La diferenciaci&oacute;n dirigida de iPS y c&eacute;lulas madre embrionarias en endodermo definitivo (DE) permitir&iacute;a que la derivaci&oacute;n de progenitores de otra manera inaccesibles para los tejidos endod&eacute;rmicos. Sin embargo, no se ha realizado una comparaci&oacute;n global de la equivalencia relativa de derivados de iPS y poblaciones ES. Informes recientes de diferencias moleculares entre iPS y c&eacute;lulas madre embrionarias han planteado dudas acerca de si las c&eacute;lulas iPS podr&iacute;an generar aut&oacute;logos linajes endodermales in vitro. Aqu&iacute;, demostramos que tanto iPS de rat&oacute;n y c&eacute;lulas madre embrionarias parentales exhibieron capacidad in vitro altamente similar a diferenciaci&oacute;n dirigida a DE progenitores. Con pocas excepciones, ambos tipos de c&eacute;lulas muestran picos similares en la expresi&oacute;n g&eacute;nica de reguladores transcripcionales maestros espec&iacute;ficos y transcriptomas global que definen los hitos del desarrollo de la diferenciaci&oacute;n DE. An&aacute;lisis de microarrays mostraron un considerable solapamiento entre los programas gen&eacute;ticos de derivados de las c&eacute;lulas ES/iPS en vitro y aut&eacute;ntico DE embriones de rat&oacute;n in vivo. Intrigante, las c&eacute;lulas iPS exhibieron aberrante silenciamiento de genes impresos conocidos por participar en la diferenciaci&oacute;n del endodermo, pero conservan una robusta capacidad de diferenciarse en DE. Nuestros resultados muestran que, a pesar de algunas diferencias moleculares, las c&eacute;lulas iPS pueden ser distinguidas eficientemente en precursores DE reforzar su potencial para el desarrollo de terapias basadas en c&eacute;lulas de los tejidos derivados del endodermo enfermos.

Article	Year
Manipulation of mouse hematopoietic progenitors by specific retroviral infection. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 12928443	2003
LPAM (alpha 4 beta 7 integrin) is an important homing integrin on alloreactive T cells in the development of intestinal graft-versus-host disease. Blood\| PubMed ID: 14563643	2004
Manipulation of gene expression in megakaryocytes. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)\| PubMed ID: 15308792	2004
Using retroviruses to express genes in primary megakaryocyte lineage cells. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)\| PubMed ID: 15308813	2004
Exogenous control of mammalian gene expression via modulation of translational termination. Nature medicine\| PubMed ID: 16892063	2006
Induced pluripotent stem cell generation using a single lentiviral stem cell cassette. Stem cells (Dayton, Ohio)\| PubMed ID: 19096035	2009
Excision of reprogramming transgenes improves the differentiation potential of iPS cells generated with a single excisable vector. Stem cells (Dayton, Ohio)\| PubMed ID: 19904830	2010
Amelioration of emphysema in mice through lentiviral transduction of long-lived pulmonary alveolar macrophages. The Journal of clinical investigation\| PubMed ID: 20038801	2010
Generation of transgene-free lung disease-specific human induced pluripotent stem cells using a single excisable lentiviral stem cell cassette. Stem cells (Dayton, Ohio)\| PubMed ID: 20715179	2010
Mouse ES and iPS cells can form similar definitive endoderm despite differences in imprinted genes. The Journal of clinical investigation\| PubMed ID: 21537085	2011

George J. Murphy

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