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MALDI Sample Preparation: the Ultra Thin Layer Method

This video demonstrates the preparation of an ultra-thin matrix/analyte layer for analyzing peptides and proteins by Matrix-Assisted Laser Desorption ...

Rockefeller University

&#x56FD;&#x65C5;/Dyrk1A &#x662F;&#x5377;&#x5165;&#x5510;&#x6C0F;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x7684;&#x5BFC;&#x5411;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x3002;&#x663E;&#x793A;&#x591A;&#x56FD;&#x65C5;/Dyrk1A phosphorylate dynamin 1 &#x5E76;&#x6539;&#x53D8;&#x5176;&#x4E0E;&#x51E0;&#x4E2A; SH3 &#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x541E;&#x8F85;&#x52A9;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x8C03;&#x63A7;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6620;&#x5C04;&#x4E2D; dynamin 1 &#x591A;&#x56FD;&#x65C5;/Dyrk1A &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5220;&#x9664;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x548C;&#x5408;&#x6210;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF0C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6F5C;&#x5728;&#x591A;&#x56FD;&#x65C5;/Dyrk1A &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9; (S778&#x3001; S795&#x3001; S857) &#x9996;&#x5148;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x3002;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728; S795 &#x548C; S857 &#x8BC1;&#x5B9E;&#x5728;&#x5168;&#x957F; dynamin 1&#xFF0C;&#x548C; S857 &#x540E;&#x6765;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x591A;&#x56FD;&#x65C5;/Dyrk1A &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6A21;&#x4EFF;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728; S857 &#x88AB;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E3A;&#x6539;&#x53D8;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; amphiphysin 1 dynamin 1 &#x548C; Grb 2 &#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;dynamin 1 S857 &#x662F;&#x7531;&#x8111;&#x63D0;&#x53D6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x5728; PC12 &#x7EC6;&#x80DE; S857 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; S857 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x662F;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x89C4;&#x7BA1; dynamin 1 SH3 &#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E; S857 &#x662F;&#x72EC;&#x6709;&#x7684; dynamin 1xa &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#xFF0C;&#x591A;&#x56FD;&#x65C5;/Dyrk1A dynamin 1 &#x6761;&#x9884;&#x8BA1;&#x5C06;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x62FC;&#x63A5;&#x7684;&#x53D8;&#x79CD;&#x3002;

&#x56FD;&#x65C5;/Dyrk1A &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8C03;&#x8282; dynamin 1 &#x4E0E; SH3 &#x542B;&#x6709;&#x57DF;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Mnb/Dyrk1A is a proline-directed serine/threonine kinase implicated in Down's syndrome. Mnb/Dyrk1A was shown to phosphorylate dynamin 1 and alter its interactions with several SH3 domain-containing endocytic accessory proteins. To determine the mechanism of regulation, we mapped the Mnb/Dyrk1A phosphorylation sites in dynamin 1. Using a combination of deletion mutants and synthetic peptides, three potential Mnb/Dyrk1A phosphorylation sites (S778, S795, and S857) were first identified. Phosphorylation at S795 and S857 was confirmed in full-length dynamin 1, and S857 was subsequently determined to be the major Mnb/Dyrk1A phosphorylation site in vitro. Phosphorylation at S857 was demonstrated to be the basis for altering the binding of dynamin 1 to amphiphysin 1 and Grb 2 by site-directed mutants mimicking phosphorylation. Furthermore, S857 of dynamin 1 is phosphorylated by the endogenous kinase in brain extracts and in PC12 cells. In PC12 cells, the state of S857 phosphorylation is dependent on membrane potentials. These results suggest that S857 phosphorylation is a physiological event, which regulates the binding of dynamin 1 to SH3 domain-containing proteins. Since S857 is unique to dynamin 1xa isoforms, Mnb/Dyrk1A regulation of dynamin 1 is expected to be specific to these spliced variants.

Mnb/Dyrk1A phosphorylation regulates the interaction of dynamin 1 with SH3 domain-containing proteins.

MNB/Dyrk1A est une dirig&eacute;e proline s&eacute;rine/thr&eacute;onine kinase impliqu&eacute;e dans le syndrome de Down. MNB/Dyrk1A s&#39;est av&eacute;r&eacute; de phosphoryler la dynamine 1 et modifier ses interactions avec plusieurs SH3 contenant du domaine endocytose prot&eacute;ines accessoires. Pour d&eacute;terminer le m&eacute;canisme de r&eacute;gulation, nous avons localis&eacute; les sites de phosphorylation du Mnb/Dyrk1A dans dynamine 1. Trois sites de phosphorylation potentiels pour Mnb/Dyrk1A (S778, S795 et S857) en utilisant une combinaison de peptides synth&eacute;tiques et de mutants de d&eacute;l&eacute;tion, furent initialement conceptualis&eacute;s. Phosphorylation S795 et S857 a &eacute;t&eacute; confirm&eacute;e dans la dynamine pleine longueur 1, et S857 a &eacute;t&eacute; par la suite d&eacute;termin&eacute; &agrave; &ecirc;tre le principal site de phosphorylation de la Mnb/Dyrk1A in vitro. Phosphorylation au S857 a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e &agrave; la base pour modifier la liaison de la dynamine 1 &agrave; amphiphysine 1 et 2 Grb par mutants dirig&eacute;e imitant la phosphorylation. En outre, les S857 de la dynamine 1 est phosphoryl&eacute; par la kinase endog&egrave;ne dans les extraits de cerveau et dans les cellules PC12. Dans les cellules PC12, l&#39;&eacute;tat de phosphorylation de S857 d&eacute;pend des potentiels de membrane. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la phosphorylation de S857 est un &eacute;v&eacute;nement physiologique, qui r&eacute;glemente la liaison de la dynamine 1 de prot&eacute;ines domaine SH3. S857 &eacute;tant unique aux isoformes 1xa dynamine, Mnb/Dyrk1A r&egrave;glement de dynamine 1 devrait &ecirc;tre limit&eacute; &agrave; ces variants d&#39;&eacute;pissage.

MNB/Dyrk1A phosphorylation r&eacute;gule l&#39;interaction de la dynamine 1 avec les prot&eacute;ines contenant du domaine SH3.

Mnb/Dyrk1A Phosphorylierung reguliert die Interaktion von Dynamin 1 mit SH3-Dom&#xE4;ne enthaltenden Proteine.

MNB/Dyrk1A &egrave; una diretto prolina serina/treonina chinasi implicata nella sindrome di Down. MNB/Dyrk1A &egrave; stato dimostrato che fosforila dynamin 1 e alterare le sue interazioni con diversi SH3 dominio contenenti endocitico proteine accessorie. Per determinare il meccanismo di regolazione, abbiamo mappato i siti di fosforilazione Mnb/Dyrk1A dynamin 1. Utilizzando una combinazione di peptidi sintetici e mutanti di delezione, tre i siti di fosforilazione Mnb/Dyrk1A potenziali (S778, S795 e S857) in primo luogo sono stati identificati. La fosforilazione a S795 e S857 &egrave; stata confermata in full-length dynamin 1 e S857 successivamente &egrave; stato determinato per essere il principale sito di fosforilazione Mnb/Dyrk1A in vitro. Fosforilazione a S857 &egrave; stata dimostrata essere la base per alterare l&#39;associazione di dynamin 1 a amphiphysin 1 e 2 di Grb da mutanti sito-regia mimando la fosforilazione. Inoltre, S857 di dynamin 1 &egrave; fosforilata dalla chinasi endogena in estratti di cervello e nelle cellule PC12. In cellule PC12, lo stato di fosforilazione della S857 &egrave; dipende dal potenziale di membrana. Questi risultati suggeriscono che la fosforilazione S857 &egrave; un evento fisiologico, che regola l&#39;associazione di dynamin 1 proteine contenenti dominio SH3. Poich&eacute; S857 &egrave; unico a dynamin 1xa isoforme, Mnb/Dyrk1A regolamento di dynamin 1 dovrebbe essere specifico per queste varianti impiombate.

MNB/Dyrk1A fosforilazione regola l&#39;interazione di dynamin 1 con proteine contenenti dominio SH3.

&#x5149;&#x5B66;/Dyrk1A &#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x76E3;&#x7763;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x5B66;/Dyrk1A &#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3; 1 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E; SH3 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x5B66;/Dyrk1A &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3; 1 &#x3067;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3002;1H16-4 &#x3068;&#x5408;&#x6210;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;3 &#x3064;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5149;&#x5B66;/Dyrk1A &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; (S778&#x3001;S795&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; S857) &#x304C;&#x307E;&#x305A;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9; &#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3; 1, S795 &#x3068; S857 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x3001;S857 &#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;in vitro &#x3067;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5149;&#x5B66;/Dyrk1A &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x5224;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;S857 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3; 1 &#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30B7;&#x30F3; 1 &#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068; Grb 2 &#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6307;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;S857 &#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3; 1 &#x306E;&#x8133;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x3068; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; S857 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;S857 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; 1 &#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3; SH3 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;S857 &#x304C;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3; 1xa &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x5149;&#x5B66;/Dyrk1A &#x898F;&#x5236;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3; 1 &#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x898B;&#x8FBC;&#x307F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x5149;&#x5B66;/Dyrk1A &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; 1 &#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3; SH3 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Mnb/dyrk1a&#xB294; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xB2C8;. Mnb/Dyrk1A dynamin 1 phosphorylate &#xBCC0;&#xACBD; &#xC5EC;&#xB7EC; SH3 &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; endocytic &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD655;&#xC778;, Mnb/Dyrk1A &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; dynamin 1&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9E4;&#xD551;&#xB41C;. &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC0F; &#xD569;&#xC131; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xD558; &#xC5EC;, 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; Mnb/Dyrk1A &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; (S778, S795, &#xBC0F; S857) &#xCC98;&#xC74C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. S795 &#xBC0F; S857 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; dynamin 1&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; S857 &#xCCB4; &#xC678; &#xC8FC;&#xC694; Mnb/Dyrk1A &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xACB0;&#xC815; &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0;. S857&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xD749;&#xB0B4; &#xB0B8; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; Grb 2 &#xBC0F; amphiphysin 1&#xC5D0; 1 dynamin &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, dynamin 1 S857 &#xC0DD; &#xB2C8; PC12 &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xB1CC; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphorylated&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; S857 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xB9C9; &#xC804;&#xC704;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; S857 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; dynamin 1 SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. S857 dynamin 1xa isoforms &#xACE0;&#xC720; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;, Mnb/Dyrk1A dynamin 1 &#xAC1C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC774; spliced &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0; &#xAD6D;&#xD55C; &#xB418;&#xC9C0; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB41C;&#xB2E4;.

Mnb/Dyrk1A &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; dynamin 1 SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB4E4;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C;.

MNB/Dyrk1A es una cinasa de serina/treonina prolina-dirigido implicada en el s&iacute;ndrome de Down. MNB/Dyrk1A mostr&oacute; fosforilan Dinamina 1 y alterar sus interacciones con varios SH3 dominio endoc&iacute;ticas accesorias prote&iacute;nas que contienen. Para determinar el mecanismo de regulaci&oacute;n, asignan a los sitios de fosforilaci&oacute;n Mnb/Dyrk1A en Dinamina 1. Primero se identificaron mediante una combinaci&oacute;n de mutantes de deleci&oacute;n y p&eacute;ptidos sint&eacute;ticos, tres Mnb/Dyrk1A fosforilaci&oacute;n sitios potenciales (S778, S795 y S857). Fosforilaci&oacute;n en S795 y S857 fue confirmada en cuerpo entero Dinamina 1 y S857 posteriormente se determin&oacute; que el sitio de fosforilaci&oacute;n de Mnb/Dyrk1A principal in vitro. Fosforilaci&oacute;n en S857 fue demostrada para ser la base para alterar el atascamiento de Dinamina 1 a amphiphysin 1 y 2 de Grb por mutantes dirigida m&iacute;mico fosforilaci&oacute;n. Adem&aacute;s, S857 de Dinamina 1 es fosforilado por la quinasa end&oacute;gena en los extractos de cerebro y en c&eacute;lulas PC12. En las c&eacute;lulas PC12, el estado de fosforilaci&oacute;n de S857 depende de los potenciales de membrana. Estos resultados sugieren que la fosforilaci&oacute;n de S857 es un evento fisiol&oacute;gico, que regula la Uni&oacute;n de la Dinamina 1 a las prote&iacute;nas que contienen dominio SH3. Ya que S857 es &uacute;nico a Dinamina 1xa isoformas, Mnb/Dyrk1A regulaci&oacute;n de Dinamina 1 se espera que sea espec&iacute;fico para estas variantes empalmadas.

MNB/Dyrk1A fosforilaci&oacute;n regula la interacci&oacute;n de la Dinamina 1 con prote&iacute;nas de que contienen dominio SH3.

&#x4E19;&#x6C28;&#x9178; &#xFF08;Ala&#xFF09; &#x6216;&#x4E59;&#x9170;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; (AcSer) &#x800C;&#x4E0D;&#x662F; Val &#x6B63;&#x5E38;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7684;&#x8981;&#x4E48; &alpha;-N &#x7AEF;&#x5B50;&#x6216;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6210;&#x4EBA;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D; &beta;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x8D4B;&#x4E88;&#x4E00;&#x4E9B;&#x65B0;&#x5947;&#x7684;&#x3001; &#x610F;&#x5916;&#x5BF9;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x66FF;&#x6362;&#x662F;&#x6B63;&#x786E;&#x7684;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x3002;&#x5706;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x6CA1;&#x6709;&#x5168;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x805A;&#x7126;&#x8868;&#x660E;&#x6CA1;&#x6709;&#x6742;&#x8D28;&#x3002;Ala liganded &#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E2D;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0; &alpha;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x7801;&#x5934; N &#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x78B1;&#x5EA6; &#xFF08;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; pK(a) &#x503C;&#xFF09; &#x548C;&#x4E9A;&#x57FA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53D8;&#x6784;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;-&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x754C;&#x9762;&#x7684;&#x529B;&#x91CF;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;O(2) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x7684;&#x534F;&#x540C;&#x6548;&#x5E94;&#x4E5F;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;Ala &beta;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x7801;&#x5934; N &#x66FF;&#x4EE3;&#x7ED9;&#x90FD;&#x6CA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4E24;&#x4E9A;&#x57FA; N &#x603B;&#x7AD9;&#x66FF;&#x4EE3; Ser &#x5BFC;&#x81F4;&#x5176;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x5316; &#xFF08;&#x5728;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#xFF09; &#x548C;&#x754C;&#x9762;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x7684;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;-&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x53D8;&#x6784;&#x7684;&#x8DCC;&#x5E45;&#x4E3A;&#x5927;&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#x7684; &alpha;-&#x4E9A;&#x57FA; N &#x603B;&#x7AD9; Ala &#x6216; AcSer &#x65F6;&#xFF0C;&#x60C5;&#x8282;&#x7684;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;-&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x534F;&#x4F1A;/&#x89E3;&#x79BB;&#x5E38;&#x6570;&#x4F5C;&#x4E3A; ph &#x503C;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x659C;&#x7387;&#x88AB;&#x4E0B;&#x8DCC; 60%&#x3002;&#x5B83;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x81EA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7F51;&#x7EDC;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684; &alpha;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;N &#x548C; C &#x662F;&#x6BD4;&#x6CA1;&#x6709;&#x90A3;&#x4E48;&#x5E7F;&#x6CDB; liganded &#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D; &beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x6709;&#x4E2D;&#x65AD;&#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x4EA7;&#x751F;&#x6DF1;&#x8FDC;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5BF9;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x529F;&#x80FD;&#x589E;&#x52A0;&#x78B1;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5982;&#x5BF9;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x548C;&#x4F9D;&#x4ECE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

N &#x7AEF;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x548C;&#x4E2A;&#x522B;&#x7684;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x8D28;&#x5B50;&#x5316;&#xFF1A; &#x5BF9;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x548C;&#x4F9D;&#x4ECE;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

The presence of alanine (Ala) or acetyl serine (AcSer) instead of the normal Val residues at the N-terminals of either the alpha- or the beta-subunits of human adult hemoglobin confers some novel and unexpected features on the protein. Mass spectrometric analysis confirmed that these substitutions were correct and that they were the only ones. Circular dichroism studies indicated no global protein conformational changes, and isoelectric focusing showed the absence of impurities. The presence of Ala at the N-terminals of the alpha-subunits of liganded hemoglobin results in a significantly increased basicity (increased pK(a) values) and a reduction in the strength of subunit interactions at the allosteric tetramer-dimer interface. Cooperativity in O(2) binding is also decreased. Substitution of Ala at the N-terminals of the beta-subunits gives neither of these effects. The substitution of Ser at the N terminus of either subunit leads to its complete acetylation (during expression) and a large decrease in the strength of the tetramer-dimer allosteric interface. When either Ala or AcSer is present at the N terminus of the alpha-subunit, the slope of the plot of the tetramer-dimer association/dissociation constant as a function of pH is decreased by 60%. It is suggested that since the network of interactions involving the N and C termini of the alpha-subunits is less extensive than that of the beta-subunits in liganded human hemoglobin disruptions there are likely to have a profound effect on hemoglobin function such as the increased basicity, the effects on tetramer strength, and on cooperativity.

N-terminal acetylation and protonation of individual hemoglobin subunits: position-dependent effects on tetramer strength and cooperativity.

La pr&#xE9;sence de l&#x26;#39;alanine (Ala) ou de la s&#xE9;rine ac&#xE9;tyle (AcSer) au lieu des r&#xE9;sidus Val normale au N-terminaux de l&#x26;#39;alpha-, soit des sous-unit&#xE9;s ou des b&#xEA;ta de l&#x26;#39;h&#xE9;moglobine adulte humaine conf&#xE8;re des caract&#xE9;ristiques nouvelles et inattendue sur la prot&#xE9;ine. L&#x26;#39;analyse par spectrom&#xE9;trie de masse a confirm&#xE9; que ces substitutions &#xE9;taient correctes et qu&#x26;#39;ils &#xE9;taient les seuls. Circulaire des &#xE9;tudes de dichro&#xEF;sme indiqu&#xE9; aucun changement de conformation de prot&#xE9;ines mondiaux, et la focalisation iso&#xE9;lectrique a montr&#xE9; l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;impuret&#xE9;s. La pr&#xE9;sence de Ala &#xE0; la N-terminaux de les sous-unit&#xE9;s alpha de l&#x26;#39;h&#xE9;moglobine r&#xE9;sultats ligand&#xE9; dans une basicit&#xE9; sensiblement augment&#xE9; (augment&#xE9; pK a) des valeurs) et une r&#xE9;duction de la force d&#x26;#39;interactions de sous-unit&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;allost&#xE9;rique t&#xE9;tram&#xE8;re-dim&#xE8;re d&#x26;#39;interface. La coop&#xE9;rativit&#xE9; en O (2) de liaison est &#xE9;galement diminu&#xE9;. La substitution de Ala &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N-terminaux des sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta-donne aucun de ces effets. La substitution de Ser &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N de sous-unit&#xE9; soit conduit &#xE0; son ac&#xE9;tylation compl&#xE8;te (cours de l&#x26;#39;expression) et une forte diminution dans la force de l&#x26;#39;interface allost&#xE9;rique t&#xE9;tram&#xE8;re-dim&#xE8;re. Lorsque soit Ala ou AcSer est pr&#xE9;sent &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N-terminale de la sous-unit&#xE9; alpha, la pente de la courbe de la t&#xE9;tram&#xE8;re-dim&#xE8;re d&#x26;#39;association / dissociation constante en fonction du pH est diminu&#xE9; de 60%. Il est sugg&#xE9;r&#xE9; que, puisque le r&#xE9;seau d&#x26;#39;interactions impliquant les extr&#xE9;mit&#xE9;s N et C des sous-unit&#xE9;s alpha est moins &#xE9;tendue que celle des sous-unit&#xE9;s b&#xE9;ta-en ligand&#xE9; perturbations d&#x26;#39;h&#xE9;moglobine de l&#x26;#39;homme, il est probable d&#x26;#39;avoir un effet profond sur la fonction d&#x26;#39;h&#xE9;moglobine tels que l&#x26;#39;augmentation basicit&#xE9;, les effets sur la force t&#xE9;tram&#xE8;re, et sur la coop&#xE9;rativit&#xE9;.

Ac&#xE9;tylation N-terminale et de sous-unit&#xE9;s d&#x26;#39;h&#xE9;moglobine protonation individuels: d&#xE9;pendant de la position effets sur la force t&#xE9;tram&#xE8;re et coop&#xE9;rativit&#xE9;

N-terminale Acetylierung und Protonierung der einzelnen H&#xE4;moglobin-Untereinheiten: ortsabh&#xE4;ngigen Auswirkungen auf die St&#xE4;rke und Tetramer Kooperativit&#xE4;t.

La presenza di alanina (Ala) o serina acetile (AcSer) invece che i residui di Val normali a N-terminali sia l&#39;alfa - o la subunit&agrave; beta dell&#39;emoglobina umana adulto conferisce qualche romanzo e caratteristiche inaspettate sulla proteina. Analisi di spettrometria di massa ha confermato che queste sostituzioni erano corrette e che erano gli unici. Studi di Dicroismo circolare non indicato nessun cambiamenti conformazionali della proteina globale, e messa a fuoco isoelettrica ha dimostrato l&#39;assenza di impurit&agrave;. La presenza di Ala presso il N-terminali delle subunit&agrave; alfa-dei risultati dell&#39;emoglobina liganded in un significativo aumento basicit&agrave; (valori pK(a) aumentato) e una riduzione nella forza delle interazioni subunit&agrave; all&#39;interfaccia allosterico tetramero-dimero. Cooperativit&agrave; nell&#39;apparato associazione inoltre &egrave; diminuito. Sostituzione di Ala presso il N-terminali delle subunit&agrave; beta-d&agrave; nessuno di questi effetti. La sostituzione di Ser al capolinea di due subunit&agrave; N porta alla sua completa acetilazione (durante l&#39;espressione) e una grande diminuzione nella forza dell&#39;interfaccia allosterico tetramero-dimero. Quando Ala o AcSer &egrave; presente al capolinea della subunit&agrave; alfa-N, la pendenza della trama della costante di associazione/dissociazione tetramero-dimero in funzione del pH &egrave; diminuita del 60%. &Egrave; suggerito che poich&eacute; la rete di interazioni che coinvolgono la N e C termini della subunit&agrave; alfa &egrave; meno estesa rispetto le subunit&agrave; beta in emoglobina umana liganded interruzioni ci sono probabilit&agrave; di avere un profondo effetto sulla funzione dell&#39;emoglobina come la maggiore basicit&agrave;, gli effetti sulla forza tetramero e sulla cooperativit&agrave;.

Acetilazione del N-terminale e protonazione di subunit&agrave; dell&#39;emoglobina individuale: dipendente dalla posizione effetti sulla forza tetramero e cooperativit&agrave;.

&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;Ala&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;N-&#x7AEF;&#x5B50;&#x3067;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x30F4;&#x30A1;&#x30EB;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;AcSer&#xFF09;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x3B1;-&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D2;&#x30C8;&#x6210;&#x4EBA;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x3B2;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3084;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x304C;&#x6B63;&#x3057;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5186;&#x504F;&#x5149;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x4E16;&#x754C;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x7B49;&#x96FB;&#x70B9;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E0D;&#x7D14;&#x7269;&#x306E;&#x6709;&#x7121;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#xFF08;PK&#xFF08;1&#xFF09;&#x5024;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#xFF09;&#x3068;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x56DB;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x754C;&#x9762;&#x3067;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x3B1;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;Ala&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3002; O&#xFF08;2&#xFF09;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x5354;&#x540C;&#x6027;&#x3082;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#x3B2;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;Ala&#x3078;&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;Ser&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#xFF08;&#x5F0F;&#x4E2D;&#xFF09;&#x3068;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3002; Ala&#x307E;&#x305F;&#x306F;AcSer&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x304C;&#x3B1;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;pH&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5354;&#x4F1A;/&#x89E3;&#x96E2;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x50BE;&#x304D;&#x306F;60&#xFF05;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x3B1;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;N&#x304A;&#x3088;&#x3073;C&#x672B;&#x7AEF;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306F;&#x3001;&#x3B2;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x5E83;&#x7BC4;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D2;&#x30C8;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x3001;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5F37;&#x3055;&#x306B;&#x3001;&#x3068;&#x306E;&#x5354;&#x540C;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3002;

&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#xFF1A;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30DE;&#x30FC;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3068;&#x5354;&#x540C;&#x3067;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x52B9;&#x679C;

&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; (Ala) &#xB610;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xBC1C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC911; &#xC54C;&#xD30C;-N &#xB2E8;&#xB9D0;&#xAE30; &#xB610;&#xB294; &#xC778;&#xAC04; &#xC131;&#xC778; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48;&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xB300;&#xC2E0; acetyl &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; (AcSer)&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xB294; &#xC77C;&#xBD80; &#xC18C;&#xC124;&#xACFC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC608;&#xC0C1;&#xCE58; &#xBABB;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC218; &#xC5EC;. &#xB300;&#xB7C9; spectrometric &#xBD84;&#xC11D; &#xD655;&#xC778; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB300;&#xCCB4; &#xC815;&#xD655; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xD588;&#xC8E0;. &#xC6D0;&#xD615; &#x9EC4; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xBD88;&#xC21C;&#xBB3C;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; isoelectric &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD94;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; liganded &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48;&#xC758; &#xC54C;&#xD30C; subunits&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; Ala&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; basicity (&#xC99D;&#xAC00; pK(a) &#xAC12;) &#xBC0F; allosteric tetramer dimer &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAC15;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;. Cooperativity O(2) &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBCA0;&#xD0C0; subunits&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; Ala&#xC758; &#xB300;&#xCCB4;&#xB3C4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5B4;&#xB290; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; Ser&#xC758; &#xB300;&#xCCB4; (&#xC911; &#xC2DD;)&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; acetylation tetramer dimer allosteric &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xAC15;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD070; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xB9AC;&#xB4DC;. Ala &#xB610;&#xB294; AcSer &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xB54C; Ph&#xC758; &#xD568;&#xC218;&#xB85C; tetramer dimer &#xD611;&#xD68C;/&#xBD84;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC218; &#xD50C;&#xB86F;&#xC758; &#xACBD;&#xC0AC; 60% &#xAC10;&#xC18C;. &#xADF8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xBD80;&#xD130; &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; N &#xBC0F; C &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;&#xB294; &#xB35C; &#xAD11;&#xB300; &#xBCF4;&#xB2E4; liganded &#xC778;&#xAC04; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48;&#xC5D0; &#xBCA0;&#xD0C0; subunits&#xC758; &#xAC70;&#xAE30; &#xC911;&#xB2E8; tetramer &#xAC15;&#xB3C4; &#xBC0F; cooperativity &#xD6A8;&#xACFC; &#xC99D;&#xAC00; basicity &#xAC19;&#xC740; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC2EC;&#xB300;&#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

N-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; acetylation &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; subunits protonation: tetramer &#xAC15;&#xB3C4; &#xBC0F; cooperativity&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xACFC;.

La presencia de alanina (Ala) o serina acetilo (AcSer) en lugar de los residuos Val normales en el N-terminales de cualquiera de los alfa-o las subunidades beta de la hemoglobina humana adulta confiere unas caracter&#xED;sticas novedosas e inesperadas en la prote&#xED;na. El an&#xE1;lisis de espectrometr&#xED;a de masas confirm&#xF3; que estas sustituciones eran correctas y que eran los &#xFA;nicos. Circular estudios de dicro&#xED;smo no indicaron cambios conformacionales de prote&#xED;nas a nivel mundial, y el isoelectroenfoque mostr&#xF3; la ausencia de impurezas. La presencia de Ala en los N-terminales de las subunidades alfa de los resultados de hemoglobina liganded en una basicidad aument&#xF3; significativamente (aumento de la PK (a) los valores) y una reducci&#xF3;n en la fuerza de las interacciones de subunidades en la alost&#xE9;rica tetr&#xE1;mero-d&#xED;mero interfaz. Cooperatividad en O (2) de uni&#xF3;n tambi&#xE9;n se reduce. La sustituci&#xF3;n de Ala en los N-terminales de las subunidades beta da ninguno de estos efectos. La sustituci&#xF3;n de Ser en el extremo N de cualquiera subunidad conduce a su acetilaci&#xF3;n completa (durante la expresi&#xF3;n) y una gran disminuci&#xF3;n en la fuerza de la interfaz alost&#xE9;rica tetr&#xE1;mero-d&#xED;mero. Cuando cualquiera de Ala o AcSer est&#xE1; presente en el extremo N de la subunidad alfa, la pendiente de la trama de la tetr&#xE1;mero-d&#xED;mero asociaci&#xF3;n / constante de disociaci&#xF3;n como una funci&#xF3;n del pH se reduce en un 60%. Se sugiere que, dado que la red de interacciones que implican las N y C terminales de las subunidades alfa es menos extensa que la de las subunidades beta en liganded interrupciones hemoglobina humana no es probable que tengan un efecto profundo en funci&#xF3;n de la hemoglobina, tales como el aumento basicidad, los efectos sobre la fuerza tetr&#xE1;mero, y sobre cooperatividad.

La acetilaci&#xF3;n N-terminal y la protonaci&#xF3;n de subunidades de la hemoglobina individuales: dependientes de la posici&#xF3;n-Efectos sobre la Fuerza tetr&#xE1;mero y la cooperatividad

&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x5E73;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5206;&#x6790;&#x6311;&#x6218;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x751F;&#x754F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x7A33;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x5316;&#x5B66;&#x6807;&#x8BB0;&#x548C;&#x4E32;&#x8054;&#x8D28;&#x8C31;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x3002;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x88AB;&#x9694;&#x79BB;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E24;&#x4E2A;&#x96C6;&#x4E2D;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x6709;&#x7ECF;&#x5386;&#x7684;&#x9274;&#x522B;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x3001; &#x7528; SDS-&#x5206;&#x9694;&#x3001; &#x79BB;&#x4F53;&#xFF0C;&#x548C;&#x906D;&#x53D7;&#x51DD;&#x80F6;&#x4E2D;&#x9176;&#x6D88;&#x5316;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7B80;&#x5355;&#x5316;&#x5B66;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F15;&#x5165;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3001; &#x60F0;&#x6027;&#x622A;&#x7136;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x6807;&#x8BB0;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x80BD;&#x6E90;&#x81EA;&#x4E0B;&#x6BD4;&#x8F83;&#x6837;&#x672C;&#xFF0C;&#x6837;&#x672C;&#x548C;&#x4E3B;&#x9898;&#x88AB;&#x6DF7;&#x5408;&#x5230;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x9A71;&#x52A8;&#x591A;&#x7EA7; MS (HMS MS) &#x65B9;&#x6CD5; (&#x5F20;&#xFF0C;E.J.&#xFF1B; &#x6DF7;&#x5408;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x7684;&#x4E24;&#x5957;&#x963F;&#x9999;&#x535A;&#x3001; V&#x3002;;&#x514B;&#x62C9;&#x514B;&#xFF0C;D.T.;Krutchinsky&#xFF0C;A.N.&#xFF1B;&#x8521;&#x7279;&#xFF0C;B.T.&#x809B;&#x95E8;&#x3002;&#x5316;&#x5B66; 2004 &#x5E74; 76&#xFF0C;4472 4483)&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5229;&#x7528;&#x4F18;&#x52BF;&#x4E27;&#x5931;&#x7684; H3PO4 &#x5728; MS/MS &#x671F;&#x95F4;&#x4ECE;&#x5355;&#x72EC;&#x5145;&#x7535;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x57FA;&#x8D28;&#x8F85;&#x52A9;&#x6FC0;&#x5149;&#x89E3;&#x5438;/&#x7535;&#x79BB; (&#x9A6C;&#x5C14;&#x8FEA;) &#x5728;&#x79BB;&#x5B50;&#x9631;&#x8D28;&#x8C31;&#x4EEA;&#x3002;&#x5728;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x9694;&#x79BB;&#x5305;&#x62EC;&#x4E24;&#x79CD;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x7684; m/z &#x503C;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7ED3;&#x679C;-98 &#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x5B9E;&#x73B0;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;-Da &#x7247;&#x6BB5;&#x79BB;&#x5B50;&#x5CF0;&#x3002;&#x8FD9; MS/MS &#x6D4B;&#x91CF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BF9;&#x6240;&#x6709;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x79BB;&#x5B50;&#x5BF9;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x6D4B;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E0B;&#x7814;&#x7A76;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x540C;&#x8FDB;&#x884C;&#x8D28;&#x8C31;&#x6837;&#x54C1;&#x91CD;&#x590D;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; MS/MS &#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BA9;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x8861;&#x91CF;&#x6C34;&#x5E73;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#xFF0C;&#x6216;&#x4E24;&#x4E2A;&#xFF0C;&#x662F;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x89C2;&#x5BDF;&#x4E0D;&#x7531;&#x5355;&#x7EA7; MS&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EB9;&#x72B6;&#x4F53;&#x7684; DARPP 32 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x9002;&#x7528;&#x5F53;&#x524D;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x5047;&#x8BBE;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x591A;&#x7EA7;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x9F20;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Determination of site-specific changes in the levels of protein phosphorylation in mammals presents a formidable analytical challenge. Here, we demonstrate a strategy for such analyses utilizing a combination of stable isotope chemical labeling and tandem mass spectrometry. Phosphoproteins of interest are isolated from two sets of animals that have undergone differential drug treatments, separated by SDS-PAGE, excised, and subjected to in-gel enzymatic digestion. Using a simple chemical labeling step, we introduce stable, isotopically distinct mass tags into each of the two sets of peptides that originate from the samples under comparison, mix the samples, and subject the resulting mixture to a procedure based on our previously reported hypothesis-driven multistage MS (HMS-MS) method (Chang, E. J.; Archambault, V.; McLachlin, D. T.; Krutchinsky, A. N.; Chait, B. T. Anal. Chem. 2004, 76, 4472-4483). The method takes advantage of the dominant loss of H3PO4 during MS/MS from singly charged phosphopeptide ions produced by matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) in the ion trap mass spectrometer. In the present work, quantitation is achieved by isolating the range of m/z values that include both isotopic forms of the putative phosphopeptide and measuring the relative intensities of the two resulting -98-Da fragment ion peaks. This MS/MS measurement can be repeated on the same MALDI sample for all potential phosphopeptide ion pairs that we hypothesize might be produced from the protein under study. Use of MS/MS for quantitation greatly increases the sensitivity of the method and allows us to measure relatively low levels of phosphorylation, phosphopeptides, or both that are not easily observable by single-stage MS. We apply the current method to the determination of changes in the levels of phosphorylation in DARPP-32 from the mouse striatum upon treatment of animals with psychostimulant drugs.

Quantitative analysis of protein phosphorylation in mouse brain by hypothesis-driven multistage mass spectrometry.

D&#xE9;termination du site-sp&#xE9;cifiques des changements dans les niveaux de phosphorylation des prot&#xE9;ines chez les mammif&#xE8;res constitue un formidable d&#xE9;fi analytique. Ici, nous d&#xE9;montrons une strat&#xE9;gie pour de telles analyses utilisant une combinaison de marquage isotopique stable chimique et la spectrom&#xE9;trie de masse en tandem. Phosphoprot&#xE9;ines d&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t sont isol&#xE9;s &#xE0; partir de deux ensembles d&#x26;#39;animaux qui ont subi des traitements de m&#xE9;dicaments diff&#xE9;rentielles, s&#xE9;par&#xE9;es par SDS-PAGE, excis&#xE9;, et soumis &#xE0; une digestion enzymatique-gel. En utilisant une &#xE9;tape chimique simple &#xE9;tiquetage, nous introduisons stables, les tags de masse isotopique distinctes dans chacun des deux ensembles de peptides qui proviennent des &#xE9;chantillons soumis &#xE0; la comparaison, m&#xE9;lange les &#xE9;chantillons, et sous r&#xE9;serve du m&#xE9;lange obtenu &#xE0; une proc&#xE9;dure bas&#xE9;e sur notre indiqu&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment hypoth&#xE8;se ax&#xE9;e sur plusieurs &#xE9;tages MS (HMS-MS) m&#xE9;thode (Chang, EJ; Archambault, V.; McLachlin, DT; Krutchinsky, AN;.. Chait, BT Anal Chem 2004, 76, 4472-4483). La m&#xE9;thode tire parti de la perte dominante de H3PO4 cours MS / MS &#xE0; partir de seuls ions charg&#xE9;s phosphopeptide produites par d&#xE9;sorption laser assist&#xE9;e par matrice / ionisation (MALDI) dans le spectrom&#xE8;tre de masse &#xE0; pi&#xE8;ge &#xE0; ions. Dans le pr&#xE9;sent travail, la quantification est r&#xE9;alis&#xE9;e en isolant la gamme des valeurs m / z qui incluent les deux formes isotopiques de l&#x26;#39;phosphopeptide putatif et la mesure des intensit&#xE9;s relatives des deux qui en r&#xE9;sulte-98-Da pics d&#x26;#39;ions fragments. Cette mesure MS / MS peut &#xEA;tre r&#xE9;p&#xE9;t&#xE9; sur le m&#xEA;me &#xE9;chantillon MALDI pour toutes les paires d&#x26;#39;ions potentiels phosphopeptide que nous faisons l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se pourrait &#xEA;tre produite &#xE0; partir de la prot&#xE9;ine &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tude. L&#x26;#39;utilisation de MS / MS pour le dosage augmente consid&#xE9;rablement la sensibilit&#xE9; de la m&#xE9;thode et nous permet de mesurer les niveaux relativement faibles de phosphorylation, des phosphopeptides, ou les deux qui ne sont pas facilement observables par une seule &#xE9;tape MS. Nous appliquons la m&#xE9;thode actuelle pour la d&#xE9;termination des changements dans les niveaux de phosphorylation de DARPP-32 de la striatum de souris sur le traitement des animaux avec des m&#xE9;dicaments psychostimulants.

Analyse quantitative de la phosphorylation des prot&#xE9;ines dans le cerveau de souris par hypoth&#xE8;se ax&#xE9;e sur la spectrom&#xE9;trie de masse &#xE0; plusieurs &#xE9;tages

Bestimmung der standortspezifische &Auml;nderungen bei der H&ouml;he der Proteinphosphorylierung bei S&auml;ugetieren stellt eine gewaltige analytische Herausforderung. Hier zeigen wir eine Strategie f&uuml;r solche Analysen unter Verwendung einer Kombination aus stabilen Isotop chemischen Kennzeichnung und Tandem-Massenspektrometrie. Phosphoproteine von Interesse sind isoliert von zwei Gruppen von Tieren, die differenzielle medikament&ouml;se Behandlungen unterzogen, getrennt durch SDS-PAGE, herausgeschnitten und enzymatische in-Gel-Verdau unterworfen haben. Mit eine einfache chemischen Kennzeichnung Schritt, stellen wir stabile, isotopischer unterschiedliche Masse Tags in jedem der beiden S&auml;tze von Peptiden, die stammen aus den Beispielen unter Vergleich, mischen Sie die Proben und die resultierende Mischung an eine Prozedur auf unserer bereits berichtet Hypothese angetriebenen mehrstufigen MS (HMS-MS) Methode (Chang, E. J.; auf Grundlage Archambault, V.; McLachlin, D. T.; Krutchinsky, A. N.; Chait, B. T. Anal. Chem. 2004, 76, 4472-4483). Die Methode nutzt die dominante Verlust von H3PO4 w&auml;hrend MS/MS aus einzeln aufgeladene Phosphopeptide Ionen von Matrix assisted Laser Desorption/Ionisation (MALDI) in den Ionenfallen-Massenspektrometer produziert. In der vorliegenden Arbeit quantitative Bestimmung erfolgt durch Isolierung des Bereichs m/Z-Werte, die beiden Isotopen die vermeintliche Phosphopeptide z&auml;hlen und messen die relativen Intensit&auml;ten der beiden resultierenden-98-Da Fragment Ion Gipfeln. Diese MS/MS-Messung kann an der gleichen MALDI-Probe f&uuml;r alle potenziellen Phosphopeptide-Ion-Paare, die wir theoretisieren produziert werden k&ouml;nnte, vom Protein unter Studie wiederholt werden. Verwendung von MS/MS f&uuml;r quantitative Bestimmung erheblich die Empfindlichkeit der Methode erh&ouml;ht und uns erm&ouml;glicht, relativ niedrigen Niveau der Phosphorylierung, Messen Phosphopeptides, oder beide, sind nicht leicht beobachtbaren durch einstufige MS. Wir gilt die aktuelle Methode zur Bestimmung von &Auml;nderungen bei der H&ouml;he der Phosphorylierung DARPP-32 aus der Maus Striatum bei der Behandlung von Tieren mit Psychostimulanzien Drogen.

Quantitative Analyse von Proteinphosphorylierung in Maus Brain von Hypothese angetriebenen mehrstufigen Massenspektrometrie.

Determinazione del site-specific cambiamenti nei livelli di fosforilazione della proteina nei mammiferi presenta una formidabile sfida analitica. Qui, noi dimostrare una strategia per tale analisi utilizzando una combinazione di etichettatura chimici isotopo stabile e spettrometria di massa tandem. Fosfoproteine di interesse sono isolate da due gruppi di animali che hanno subito trattamenti farmacologici differenziale, separati da SDS-PAGE, asportato e sottoposto a digestione enzimatica in-gel. Utilizzando una sostanza chimica semplice fase di etichettatura, introduciamo Tag massa stabile, isotopicamente distinto in ciascuno dei due gruppi di peptidi che provengono dai campioni sotto confronto, mescolare i campioni e il soggetto la miscela risultante da una procedura basata sul nostro precedentemente riportato basata su ipotesi multistadio MS (HMS-MS) Metodo (Chang, E. J.; Archambault, V.; McLachlin, d. T.; Krutchinsky, A. N.; Chait, B. T. anale. Chem 2004, 76, 4472-4483). Il metodo sfrutta la perdita dominante di H3PO4 durante MS/MS da fosfopeptide singolarmente caricato ioni prodotti da desorbimento/ionizzazione laser assistita da matrice (MALDI) in uno spettrometro di massa il trappola ionica. Nel presente lavoro, la quantificazione &egrave; ottenuta isolando l&#39;intervallo di valori m/z che comprendono entrambe le forme isotopiche della fosfopeptide putativo e misurare le intensit&agrave; relative dei due-98 risultante-Da picchi di ioni frammento. Questa misura di MS/MS pu&ograve; essere ripetuta sullo stesso campione MALDI per tutti i potenziali fosfopeptide ione coppie che si ipotizzano potrebbero essere prodotto dalla proteina in fase di studio. Utilizzo di MS/MS per la quantificazione notevolmente aumenta la sensibilit&agrave; del metodo e ci permette di misurare i livelli relativamente bassi di fosforilazione, fosfopeptidi, o sia che non sono facilmente osservabili da MS monostadio. Applichiamo il metodo corrente per la determinazione delle variazioni dei livelli di fosforilazione in DARPP-32 dallo striato del mouse sul trattamento degli animali con farmaci psicostimolanti.

Analisi quantitativa della fosforilazione della proteina nel cervello del mouse di spettrometria di massa multistadio basata su ipotesi.

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McLachlin&#x3001;DT; Krutchinsky;&#x3002;Chait&#x3001;BT&#x30A2;&#x30CA;&#x30EB;&#x5316;&#x5B66;2004&#x3001;76&#x3001;4472&#x304B;&#x3089;4483&#xFF09;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x578B;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x8A08;&#x3067;&#x306F;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x652F;&#x63F4;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x8131;&#x96E2;/&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#xFF08;MALDI&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;1&#x4FA1;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;MS / MS&#x306E;&#x9593;&#x306B;H3PO4&#x306E;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x306F;&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;m / z&#x5024;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;2&#x3064;&#x306E;-98-Da&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;MS / MS&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x304C;&#x7814;&#x7A76;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x3058;MALDI&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x4F4E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x5358;&#x6BB5;MS&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x5B9A;&#x91CF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;MS / MS&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7CBE;&#x795E;&#x523A;&#x6FC0;&#x85AC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x6642;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7DDA;&#x6761;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x306E;DARPP-32&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306B;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xBCC4; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xB3C4;&#xC804;&#xC744; &#xC120;&#xBB3C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC548;&#xC815; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xD654;&#xD559; &#xB77C;&#xBCA8; &#xBC0F; &#xD0E0;&#xB364; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; phosphoproteins&#xB294; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC57D;&#xBB3C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xBC1B;&#xC740;, SDS &#xD398;&#xC774;&#xC9C0; &#xAD6C;&#xBD84;, excised, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC824;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC18C;&#xD654;&#xC5D0; &#xB4E4;&#xC5B4;&#xC11C;&#xB294; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xB450; &#xC138;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xAD50;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC791;, &#xC0D8;&#xD50C;&#xACFC; &#xD504;&#xB85C;&#xC2DC;&#xC800; &#xACB0;&#xACFC; &#xD63C;&#xD569; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; &#xAC00;&#xC124; &#xAE30;&#xBC18; &#xB2E4;&#xB2E8;&#xACC4; &#xC11D;&#xC0AC; (HMS &#xC11D;&#xC0AC;) (&#xC7A5;, E. J.; &#xC8FC;&#xC81C;&#xB97C; &#xD63C;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xB450; &#xC138;&#xD2B8;&#xC758; &#xAC01; &#xC548;&#xC815;, isotopically &#xACE0;&#xC720; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xD0DC;&#xADF8; &#xC18C;&#xAC1C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB77C;&#xBCA8; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xD654;&#xD559; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xB77C; &#xB974; &#xC0F9; &#xBCF4;, V.; McLachlin, &#xB514; &#xD2F0;; Krutchinsky, A. N.; Chait, B. T. &#xD56D;&#xBB38;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD654;&#xD559; 2004 &#xB144; 76, 4472-4483). &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xB2E8;&#xB3C5;&#xC73C;&#xB85C; &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; phosphopeptide &#xC774;&#xC628; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC870; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD0C8; &#xCC29;/&#xC774;&#xC628;&#xD654; (MALDI) &#xC774;&#xC628; &#xD2B8;&#xB7A9; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC791;&#xC5D0;&#xC11C; MS/MS &#xB3D9;&#xC548; H3PO4 &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xC190;&#xC2E4; &#xC774;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0; &#xC815;&#xB7C9; &#xC0C1; phosphopeptide&#xC758; isotopic &#xD615;&#xD0DC; &#xBAA8;&#xB450;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; m/z &#xAC12;&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; &#xB450; &#xACB0;&#xACFC;-98&#xC758; &#xC0C1;&#xB300; &#xB18D;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;-&#xC870;&#xAC01; &#xC774;&#xC628; &#xBD09;&#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2E4;. &#xC774; MS/MS &#xCE21;&#xC815; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; phosphopeptide &#xC774;&#xC628; &#xC30D; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; MALDI &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0; &#xBC18;&#xBCF5; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC6A9; MS/ms &#xC815;&#xB7C9; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;, &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; phosphopeptides, &#xB610;&#xB294; &#xB458; &#xB2E4; &#xB418;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB2E8;&#xACC4; MS&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC27D;&#xAC8C; &#xAD00;&#xCC30;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294;. &#xC6B0;&#xB9AC; DARPP-32&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654; &#xACB0;&#xC815; psychostimulant &#xC57D;&#xBB3C;&#xACFC; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC2DC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xC801;&#xC6A9;.

&#xAC00;&#xC124; &#xAE30;&#xBC18; &#xB2E4;&#xB2E8;&#xACC4; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xC950;&#xC758; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;.

Determinaci&#xF3;n del sitio de cambios espec&#xED;ficos en los niveles de fosforilaci&#xF3;n de prote&#xED;nas en los mam&#xED;feros presenta un reto formidable anal&#xED;tica. Este sentido, demuestran una estrategia de este tipo de an&#xE1;lisis que utilizan una combinaci&#xF3;n de estabilidad qu&#xED;mica y el etiquetado de is&#xF3;topos de espectrometr&#xED;a de masas en t&#xE1;ndem. Fosfoprote&#xED;nas de inter&#xE9;s se aisl&#xF3; a partir de dos conjuntos de animales que han sido sometidos a tratamientos diferenciales de drogas, separadas por SDS-PAGE, extirpados, y se someti&#xF3; a en gel de digesti&#xF3;n enzim&#xE1;tica. Usando una etapa qu&#xED;mica etiquetado sencillo, se introduce etiquetas estables, masa isot&#xF3;picamente distintas en cada uno de los dos conjuntos de p&#xE9;ptidos que se originan a partir de las muestras bajo comparaci&#xF3;n, las muestras de la mezcla, y sujeta la mezcla resultante a un procedimiento basado en nuestra ya se ha informado de hip&#xF3;tesis impulsada por varias etapas de MS (HMS-MS) m&#xE9;todo (Chang, EJ; Archambault, V.; McLachlin, DT; Krutchinsky, AN;.. Chait, BT Anal Chem. 2004, 76, 4,472-4,483). El m&#xE9;todo toma ventaja de la p&#xE9;rdida dominante de H3PO4 durante MS / MS de solos iones cargados phosphopeptide producidos por desorci&#xF3;n l&#xE1;ser asistida por matriz / ionizaci&#xF3;n (MALDI) en el espectr&#xF3;metro de masas de trampa de iones. En el presente trabajo, la cuantificaci&#xF3;n se logra mediante el aislamiento de la gama de valores m / z que incluyen tanto las formas isot&#xF3;picas del fosfop&#xE9;ptido putativo y medir las intensidades relativas de los dos resultante-98-Da picos fragmento de iones. Esta medida de MS / MS se puede repetir en la misma muestra de MALDI para todos los pares de iones potenciales fosfop&#xE9;ptido Nuestra hip&#xF3;tesis es que podr&#xED;a ser producido a partir de la prote&#xED;na en estudio. El uso de MS / MS para la cuantificaci&#xF3;n aumenta grandemente la sensibilidad del m&#xE9;todo y nos permite medir los niveles relativamente bajos de fosforilaci&#xF3;n, fosfop&#xE9;ptidos, o ambas cosas que no son f&#xE1;cilmente observables por una sola etapa de MS. Se aplica el m&#xE9;todo actual para la determinaci&#xF3;n de cambios en los niveles de fosforilaci&#xF3;n en DARPP-32 desde el cuerpo estriado del rat&#xF3;n en el tratamiento de animales con f&#xE1;rmacos psicoestimulantes.

An&#xE1;lisis cuantitativo de la fosforilaci&#xF3;n de prote&#xED;nas en el cerebro del rat&#xF3;n, por hip&#xF3;tesis, basada en la espectrometr&#xED;a de masas de m&#xFA;ltiples etapas

&#x542B;&#x6709;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4E5D;&#x4E2A;&#x8272;&#x8C31;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x88AB;&#x9694;&#x79BB;&#x4ECE;&#x4F5B;&#x624B;&#x4F5B;&#x624B;&#x74DC;&#x79CD;&#x5B50;&#x7531;&#x4E19;&#x916E;&#x5206;&#x998F;&#x3001; &#x51DD;&#x80F6;&#x8FC7;&#x6EE4;&#x3001; &#x4EB2;&#x548C;&#x8272;&#x8C31;&#x548C;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x5728;&#x6574;&#x4F53;&#x4EA7;&#x91CF;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684; 46%&#x548C; 0.05%&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x6700;&#x9AD8;&#x4EA7;&#x91CF;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x603B;&#x91CF;&#x548C;&#x6700;&#x9AD8;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x88AB;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x7684; Edman &#x964D;&#x89E3;&#x548C;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x5176;&#x5206;&#x5B50;&#x8D28;&#x91CF;&#x3002;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6240;&#x8F7D;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5206;&#x5B50;&#x7684; 31&#x3001; 32 &#x548C; 27 &#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x662F;&#xFF1A; SETI IIa&#x3001; EDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG &#xFF1B;SETI IIb&#x3001; EEDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG &#x548C;&#x641C;&#x5BFB;&#x5730;&#x5916;&#x6587;&#x660E;-V&#xFF0C;CPRILMKCKLDTDCFPTCTCRPSGFCG&#x3002;SETI IIa &#x548C;&#x641C;&#x5BFB;&#x5730;&#x5916;&#x6587;&#x660E;-IIb&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF; E IIb &#x7A97;&#x4F53;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x662F;&#x53D7;&#x96C7;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x53EF;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x3002;&#x5E8F;&#x5217;&#x662F;&#x7B26;&#x5408;&#x4ECE; 37 &#x5176;&#x4ED6;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x5171;&#x8BC6;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF1A; CPriI1meCk_DSDCla_C_C_G_CG&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5927;&#x5199;&#x7684;&#x5B57;&#x6BCD;&#x662F;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x548C;&#x5C0F;&#x5199;&#x5B57;&#x6BCD;&#x662F;&#x6700;&#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x8BE5;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;SETI II &#x548C;&#x641C;&#x5BFB;&#x5730;&#x5916;&#x6587;&#x660E;-V &#x5F62;&#x6210; 1:1 &#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5B66;&#x4E0E;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x914D;&#x5408;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x6709; 5.4x10(-11) M &#x548C; 1.1x10(-9) M&#xFF0C;&#x79BB;&#x89E3;&#x5E38;&#x6570;&#x3002;

&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x5357;&#x74DC;&#x80F0;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4ECE;&#x4F5B;&#x624B;&#x4F5B;&#x624B;&#x74DC;&#x79CD;&#x5B50;&#x3002;

Nine chromatographic components containing trypsin inhibitor activity were isolated from Sechium edule seeds by acetone fractionation, gel filtration, affinity chromatography and RP-HPLC in an overall yield of 46% of activity and 0.05% of protein. The components obtained with highest yield of total activity and highest specific activity were sequenced by Edman degradation and their molecular masses determined by mass spectrometry. The inhibitors contained 31, 32 and 27 residues per molecule and their sequences were: SETI-IIa, EDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG; SETI-IIb, EEDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG and SETI-V, CPRILMKCKLDTDCFPTCTCRPSGFCG. SETI-IIa and SETI-IIb, which differed by an amino-terminal E in the IIb form, were not separable under the conditions employed. The sequences are consistent with consensus sequences obtained from 37 other inhibitors: CPriI1meCk_DSDCla_C_C_G_CG, where capital letters are invariant amino acid residues and lower case letters are the most preserved in this position. SETI-II and SETI-V form complexes with trypsin with a 1:1 stoichiometry and have dissociation constants of 5.4x10(-11)M and 1.1x10(-9)M, respectively.

Low molecular weight squash trypsin inhibitors from Sechium edule seeds.

Neuf composantes chromatographiques contenant l&#39;activit&eacute; inhibitrice de la trypsine ont &eacute;t&eacute; isol&eacute;s de Sechium edule graines par fractionnement de l&#39;ac&eacute;tone, filtration sur gel, chromatographie d&#39;affinit&eacute; et RP-HPLC avec un rendement global de 46 % de l&#39;activit&eacute; et de 0.05 % de prot&eacute;ine. Les composants obtenus avec le rendement le plus &eacute;lev&eacute; de l&#39;activit&eacute; totale et une activit&eacute; sp&eacute;cifique plus &eacute;lev&eacute;e ont &eacute;t&eacute; s&eacute;quenc&eacute;s par d&eacute;gradation d&#39;Edman et leurs masses mol&eacute;culaires d&eacute;termin&eacute;es par spectrom&eacute;trie de masse. Les inhibiteurs des r&eacute;sidus, 31, 32 et 27 par mol&eacute;cule et leurs s&eacute;quences &eacute;taient : SETI-IIa, EDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG ; SETI-IIb, EEDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG et SETI-V, CPRILMKCKLDTDCFPTCTCRPSGFCG. SETI-IIa et IIb-SETI, qui diff&egrave;re par un E amino-terminale sous forme IIb, n&#39;&eacute;taient pas s&eacute;parables dans les conditions utilis&eacute;es. Les s&eacute;quences sont compatibles avec les s&eacute;quences consensus obtenus &agrave; partir de 37 autres inhibiteurs : CPriI1meCk_DSDCla_C_C_G_CG, o&ugrave; majuscules sont invariantes des acides amin&eacute;s et les lettres minuscules sont le plus pr&eacute;serv&eacute; dans cette position. SETI-II et SETI-V forment des complexes avec la trypsine avec une stoechiom&eacute;trie 1:1 et ont des constantes de dissociation de M 5.4x10(-11) et M 1.1x10(-9), respectivement.

Inhibiteurs de trypsine de courge de faible poids mol&eacute;culaire de Sechium edule seeds.

Neun Chromatographische Komponenten mit Trypsin Inhibitor-Aktivit&auml;t wurden in eine gesamte Rendite von 46 % der Aktivit&auml;t und 0,05 % Eiwei&szlig; aus Sechium Edule Samen von Aceton Fraktionierung, Gel Filtration, Affinit&auml;ts-Chromatographie und RP-HPLC isoliert. Die Komponenten, die mit h&ouml;chsten Ertrag der Gesamtaktivit&auml;t und h&ouml;chste spezifische Aktivit&auml;t wurden sequenziert Edman-Abbau und ihre molekularen Massen durch Massenspektrometrie bestimmt. Die Inhibitoren enthalten 31, 32 und 27 R&uuml;ckst&auml;nde pro Molek&uuml;l und ihre Sequenzen waren: SETI-IIa, EDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG; SETI-IIb, EEDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG und SETI-V, CPRILMKCKLDTDCFPTCTCRPSGFCG. SETI-IIa und SETI-IIb, differierten von amino-Terminal E in IIb Form, waren nicht trennbar, unter den Bedingungen besch&auml;ftigt. Die Sequenzen sind konsistent mit Konsens Sequenzen aus 37 andere Hemmer gewonnen: CPriI1meCk_DSDCla_C_C_G_CG, wo Gro&szlig;buchstaben sind invariant Aminos&auml;urereste um und Kleinbuchstaben sind in dieser Position die meisten erhalten. SETI-II und SETI-V bilden komplexe mit Trypsin mit einem 1:1-St&ouml;chiometrie und Dissoziation Konstanten 5.4x10(-11) M und 1.1x10(-9) M, beziehungsweise.

Niedermolekularen Squash Trypsin-Inhibitoren von Sechium Edule Samen.

Nove componenti cromatografiche contenente attivit&agrave; di inibitore della tripsina sono stati isolati da Sechium edule edule semi da frazionamento di acetone, gel filtrazione, cromatografia di affinit&agrave; e RP-HPLC in un rendimento complessivo del 46% di attivit&agrave; e 0,05% di proteine. I componenti ottenuti con rendimento pi&ugrave; alto del totale delle attivit&agrave; e pi&ugrave; alte specifiche erano sequenziati da degradazione di Edman e loro masse molecolari determinate tramite spettrometria totale. Gli inibitori contenevano residui 31, 32 e 27 per molecola e loro sequenze sono state: SETI-IIa, EDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG; SETI-IIb, EEDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG e SETI-V, CPRILMKCKLDTDCFPTCTCRPSGFCG. SETI-IIa e SETI-IIb, che ha differito da un amino-terminale E il modulo IIb, non erano scomponibili in condizioni impiegate. Le sequenze sono coerenti con le sequenze di consenso ottenuti da 37 altri inibitori: CPriI1meCk_DSDCla_C_C_G_CG, dove lettere maiuscole sono residui dell&#39;amminoacido invarianti e lettere minuscole sono pi&ugrave; conservati in questa posizione. SETI II e SETI-V formano complessi con tripsina con una stechiometria 1:1 e hanno costanti di dissociazione di 5.4x10(-11) M. e M. 1.1x10(-9), rispettivamente.

Basso peso molecolare inibitori della tripsina zucca da semi edule Sechium edule.

&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x963B;&#x5BB3;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x542B;&#x3080; 9 &#x3064;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8; &#x30B0;&#x30E9;&#x30D5; &#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8; &#x30CF;&#x30E4;&#x30C8;&#x30A6;&#x30EA;&#x5C5E;&#x3068;&#x7A2E;&#x304B;&#x3089;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C8;&#x30F3;&#x5206;&#x5225;&#x3001;&#x30B2;&#x30EB;&#x6FFE;&#x904E;&#x3001;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3001;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E; 46% &#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; 0.05 &#xFF05; &#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x53CE;&#x7387;&#x3067;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7DCF;&#x6D3B;&#x52D5;&#x91CF;&#x3068;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x53CE;&#x7387;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x6210;&#x5206;&#x30A8;&#x30C9;&#x30DE;&#x30F3;&#x5206;&#x89E3;&#x3068;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x56FA;&#x307E;&#x308A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x914D;&#x5217;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;31&#x3001;32&#x3001;27 &#x6B8B;&#x57FA;&#x3042;&#x305F;&#x308A;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x7269;&#x8CEA;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;: SETI IIa, EDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG;SETI IIb&#x3001;EEDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG&#x3001;CPRILMKCKLDTDCFPTCTCRPSGFCG SETI V&#x3002;SETI IIa&#x3001;IIb &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE; &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB; E &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;SETI IIb&#x3001;&#x63A1;&#x7528;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x5206;&#x96E2;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E; 37 &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3059;&#x308B;&#xFF1A; &#x3069;&#x3053;&#x3067;&#x5927;&#x6587;&#x5B57;&#x304C;&#x4E0D;&#x5909;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3068;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x306E;&#x6587;&#x5B57;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x4FDD;&#x5B58;&#x72B6;&#x614B;&#x306E; CPriI1meCk_DSDCla_C_C_G_CG&#x3002;SETI II &#x3068; SETI V 1:1 &#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x6BD4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x932F;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;5.4x10(-11) M&#x3001;1.1x10(-9) M &#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x5B9A;&#x6570;&#x3092;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x30B9;&#x30AB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5; &#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30CF;&#x30E4;&#x30C8;&#x30A6;&#x30EA;&#x5C5E;&#x3068;&#x7A2E;&#x304B;&#x3089;&#x3002;

9 &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD2B8;&#xB9BD; &#xC2E0; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; 46% &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; 0.05%&#xC758; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xC775;&#xB960;&#xC5D0; &#xC544;&#xC138;&#xD1A4; &#xBD84;&#xB958;, &#xC824; &#xC5EC;&#xACFC;, &#xCE5C;&#xD654;&#xC131; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xBC0F; RP HPLC&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Sechium edule &#xC528;&#xC557;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC815; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xD655;&#xB7C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5BB;&#xC740; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; Edman &#xC800;&#xD558;&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4; &#xBD84;&#xC790; &#xC9C8;&#xB7C9;&#xC744; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC800; &#xD574;&#xC81C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790; &#xB2F9; 31, 32&#xC640; 27 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xD588;&#xB2E4;: SETI IIa, EDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG; SETI IIb, EEDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG &#xBC0F; CPRILMKCKLDTDCFPTCTCRPSGFCG SETI V. SETI IIa &#xBC0F; SETI-IIb, IIb &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; E&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2EC;&#xB790;&#xB2E4;, &#xACE0;&#xC6A9; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; 37 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xC77C;&#xCE58; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;: CPriI1meCk_DSDCla_C_C_G_CG, &#xB300;&#xBB38;&#xC790;&#xB294; &#xACE0;&#xC815; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB0AE;&#xC740; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBB38;&#xC790;&#xB294;&#xC774; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xBCF4;&#xC874;. SETI II &#xBC0F; SETI V &#xD2B8;&#xB9BD; &#xC2E0; 1:1 stoichiometry&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; 5.4x10(-11) M 1.1x10(-9) M&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC218;&#xB97C; &#xAC01;&#xAC01;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;.

&#xB0AE;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xB7C9; &#xC2A4;&#xCFFC;&#xC2DC; &#xD2B8;&#xB9BD; &#xC2E0; &#xC800; &#xD574;&#xC81C; Sechium edule &#xC528;&#xC557;&#xC5D0;&#xC11C;.

Nueve componentes cromatogr&aacute;ficos que contiene la actividad del inhibidor de tripsina se aislaron Sechium edule semillas por filtraci&oacute;n de gel, fraccionamiento de acetona y RP-HPLC, cromatograf&iacute;a de afinidad en una producci&oacute;n total de 46% de la actividad y 0.05% de prote&iacute;na. Los componentes obtenidos con mayor rendimiento de la actividad total y mayor actividad espec&iacute;fica fueron ordenados por la degradaci&oacute;n de Edman y sus masas moleculares determinados por espectrometr&iacute;a de masas. Los inhibidores de la figuran 31, 32 y 27 residuos por la mol&eacute;cula y sus secuencias fueron: SETI-IIa, EDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG; SETI-IIb, EEDRKCPKILMRCKRDSDCLAKCTCQESGYCG y SETI-V, CPRILMKCKLDTDCFPTCTCRPSGFCG. SETI-IIa y SETI-IIb, que diferenciaron por un amino-terminal E en la forma de IIb, no eran separables en las condiciones de empleo. Las secuencias son consistentes con secuencias de consenso obtenidas 37 otros inhibidores: CPriI1meCk_DSDCla_C_C_G_CG, donde may&uacute;sculas son residuos de amino&aacute;cidos invariantes y min&uacute;sculas son las m&aacute;s conservadas en esta posici&oacute;n. SETI-II y SETI-V forman complejos con tripsina con una estequiometr&iacute;a 1:1 y tienen constantes de disociaci&oacute;n de 5.4x10(-11) M y 1.1x10(-9) M, respectivamente.

Inhibidores de tripsina de calabaza de bajo peso molecular de Sechium edule semillas.

&#x81EA;&#x7136;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x6B63;&#x5E38;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x56E0;&#x5176;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;-&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x4E9A;&#x57FA;&#x63A5;&#x53E3;&#x4F18;&#x52BF; &#xFF08;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF09; &#x5728; liganded &#x4E2D;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6570;&#x91CF;&#x7EA7; &#xFF08;CO &#x6216;&#x6C27;&#xFF09; &#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;-&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x63A5;&#x53E3;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x542B;&#x6210;&#x4EBA; &alpha;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x76F8;&#x5E94;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x5E73;&#x5747; 20-fold &#x5F31;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4;&#x80DA;&#x80CE; zeta-&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x5355;&#x4F53;&#x63A5;&#x53E3;&#x76F8;&#x5DEE;&#x81F3;&#x5C11; 500-fold &#x5728;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF; &#xFF1B;&#x8FD9;&#x79CD;&#x63A5;&#x53E3;&#x5F88;&#x5F31;&#xFF0C;&#x5982;&#x679C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5305;&#x542B; zeta &#x4E9A;&#x57FA;&#x548C;&#x6DFB;&#x52A0; &beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x5927;&#x5927;&#x52A0;&#x5FEB;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x90A3;&#x4E9B;&#x4E0E; &alpha;-&#x4E9A;&#x57FA; &#xFF08;HbH&#xFF09; beta(4) &#x5F62;&#x5F0F;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x6362;&#x3002;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4EA4;&#x6362;&#x53D1;&#x751F;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x3001; &#x4E00;&#x7EA7;&#x867D;&#x7136;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x76F8;&#x4E92;&#x5F71;&#x54CD;&#x53EF;&#x4F9B;&#x4EA4;&#x6362;&#x7684;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x91CF;&#x3002;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7ADE;&#x4E89;&#x4F1A;&#x53D1;&#x751F;&#x8FD9;&#x6837;&#x7684;&#x5F31;&#x80DA;&#x80CE;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x5BF9;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4EA4;&#x6362;&#x4E9A;&#x57FA;&#x5F62;&#x6210;&#x66F4;&#x5F3A;&#x7684;&#x80CE;&#x513F;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x4F18;&#x52BF;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x987A;&#x5E8F; Hb &#x6CE2;&#x7279;&#x5170; 2 (zeta(2)beta(2)) &lt; Hb &#x6CE2;&#x7279;&#x5170; 1 (zeta(2)gamma(2)) &#x7EA6;&#x7B49;&#x4E8E; Hb &#x9AD8;&#x5C14;-1 (zeta(2)epsilon(2)) &lt; Hb &#x9AD8;&#x5C14; 2 (alpha(2)epsilon(2)) &lt; HbF(1) &lt; &#x534E;&#x90A6; (alpha(2)gamma(2)) &lt; HbA(2) (alpha(2)delta(2))&#xFF0C;&#x5373;&#x4ECE;&#x80DA;&#x80CE;&#x5230;&#x80CE;&#x513F;&#x5230;&#x6210;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x4ECE;&#x5F31;&#x5230;&#x5F3A;&#x5355;&#x4F53;&#x5355;&#x4F53;&#x4E9A;&#x57FA;&#x63A5;&#x89E6;&#x6B64;&#x9012;&#x589E;&#x7684;&#x987A;&#x5E8F;&#x7EAA;&#x8981;&#x8FD9;&#x7403;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x987A;&#x5E8F;&#x7684;&#x6210;&#x719F; (--&gt; &#x80DA;&#x80CE;&#x80CE;&#x513F;--&gt; &#x6210;&#x4EBA;)&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5185;&#x5728;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x81EA;&#x5DF1;&#x5173;&#x4E8E;&#x63A5;&#x53E3;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x4E0E;&#x7ADE;&#x4E89;&#x4E9A;&#x57FA;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x548C;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x3001; &#x80CE;&#x513F;&#xFF0C;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E9A;&#x57FA;&#x63A5;&#x53E3;&#x7684;&#x957F;&#x5904;&#x3002;&#x4E0E;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BFF;&#x547D;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x3002;

The different types of naturally occurring, normal human hemoglobins vary in their tetramer-dimer subunit interface strengths (stabilities) by three orders of magnitude in the liganded (CO or oxy) state. The presence of embryonic zeta-subunits leads to an average 20-fold weakening of tetramer-dimer interfaces compared to corresponding hemoglobins containing adult alpha-subunits. The dimer-monomer interfaces of these hemoglobins differ by at least 500-fold in their strengths; such interfaces are weak if they contain zeta-subunits and exchange with added beta-subunits in the form of beta(4) (HbH) significantly faster than do those with alpha-subunits. Subunit exchange occurs at the level of the dimer, although tetramer formation reciprocally influences the amount of dimer available for exchange. Competition between subunit types occurs so that pairs of weak embryonic hemoglobins can exchange subunits to form the stronger fetal and adult hemoglobins. The dimer strengths increase in the order Hb Portland-2 (zeta(2)beta(2)) < Hb Portland-1 (zeta(2)gamma(2)) approximately equal Hb Gower-1 (zeta(2)epsilon(2)) < Hb Gower-2 (alpha(2)epsilon(2)) < HbF(1) < HbF (alpha(2)gamma(2)) < HbA(2) (alpha(2)delta(2)), i.e., from embryonic to fetal to adult types, representing maturation from weaker to stronger monomer-monomer subunit contacts. This increasing order recapitulates the developmental order in which globins are expressed (embryonic --> fetal --> adult), suggesting that the intrinsic binding properties of the subunits themselves regarding the strengths of interfaces they form with competing subunits play an important role in the dynamics of protein assemblies and networks.

Human embryonic, fetal, and adult hemoglobins have different subunit interface strengths. Correlation with lifespan in the red cell.

Les diff&#xE9;rents types de naturel, normal h&#xE9;moglobines humaines varient dans leurs t&#xE9;tram&#xE8;re-dim&#xE8;res forces de l&#x26;#39;interface sous-unit&#xE9; (stabilit&#xE9;s) par trois ordres de grandeur dans le ligand&#xE9; (CO ou oxy) de l&#x26;#39;&#xC9;tat. La pr&#xE9;sence de sous-unit&#xE9;s embryonnaires z&#xEA;ta conduit &#xE0; une moyenne de 20 fois l&#x26;#39;affaiblissement de t&#xE9;tram&#xE8;re-dim&#xE8;res interfaces par rapport &#xE0; h&#xE9;moglobines correspondants contenant adultes sous-unit&#xE9;s alpha. Les interfaces dim&#xE8;re-monom&#xE8;res de ces h&#xE9;moglobines diff&#xE8;rent d&#x26;#39;au moins 500 fois dans leurs points forts; de telles interfaces sont faibles si elles contiennent des sous-unit&#xE9;s z&#xEA;ta et d&#x26;#39;&#xE9;change avec ajout&#xE9;e b&#xEA;ta-sous-unit&#xE9;s dans la forme de b&#xEA;ta (4) (HbH) nettement plus vite que faire ceux qui ont sous-unit&#xE9;s alpha. &#xC9;change sous-unit&#xE9; se produit au niveau du dim&#xE8;re, t&#xE9;tram&#xE8;re bien que la formation influence r&#xE9;ciproque la quantit&#xE9; de dim&#xE8;re disponibles pour l&#x26;#39;&#xE9;change. La concurrence entre les types de sous-unit&#xE9;s se produit alors que des paires de faibles h&#xE9;moglobines embryonnaires peuvent &#xE9;changer des sous-unit&#xE9;s pour former des h&#xE9;moglobines plus fortes foetales et adultes. Les forces dim&#xE8;res augmentent dans l&#x26;#39;ordre Hb Portland-2 (zeta (2) beta (2)) &#x26;lt;Hb Portland-1 (zeta (2) gamma (2)) &#xE0; peu pr&#xE8;s &#xE9;gale Hb Gower-1 (zeta (2) epsilon (2 )) &#x26;lt;Hb Gower-2 (alpha (2) epsilon (2)) &#x26;lt;HbF (1) &#x26;lt;HbF (alpha (2) gamma (2)) &#x26;lt;HbA (2) (alpha (2) delta (2)), &#xE0;-dire de l&#x26;#39;embryon &#xE0; foetus &#xE0; des types adultes, ce qui repr&#xE9;sente la maturation du plus faible au plus solides contacts de sous-unit&#xE9;s de monom&#xE8;re monom&#xE8;res. Cette augmentation de l&#x26;#39;ordre de commande r&#xE9;capitule d&#xE9;veloppement dans lequel les globines sont exprim&#xE9;s (embryonnaire -&#x26;gt; foetus -&#x26;gt; adulte), ce qui sugg&#xE8;re que les propri&#xE9;t&#xE9;s intrins&#xE8;ques de liaison des sous-unit&#xE9;s elles-m&#xEA;mes ce qui concerne les points forts des interfaces qu&#x26;#39;ils forment avec les sous-unit&#xE9;s concurrentes jouent un r&#xF4;le important dans le dynamique de assemblages de prot&#xE9;ines et de r&#xE9;seaux.

Embryonnaire de l&#x26;#39;homme, du foetus, et les h&#xE9;moglobines adultes ont des points forts de l&#x26;#39;interface sous-unit&#xE9;s. Corr&#xE9;lation avec dur&#xE9;e de vie dans le globule rouge

Die verschiedenen Arten von nat&uuml;rlich vorkommenden, normale menschliche H&auml;moglobin unterscheiden sich in ihren Tetramer-Dimer Untereinheit Schnittstelle st&auml;rken (Stabilit&auml;ten) um drei Gr&ouml;&szlig;enordnungen in die liganded (CO oder Autogen) Zustand. Das Vorhandensein von embryonalen Zeta-Untereinheiten f&uuml;hrt zu einer durchschnittlichen Zwanzigfache Schw&auml;chung des Tetramer-Dimer Schnittstellen im Vergleich zu entsprechenden H&auml;moglobin, Erwachsene Alpha-Untereinheiten enth&auml;lt. Die Dimer-Monomer-Schnittstellen von diesen H&auml;moglobin unterscheiden sich von mindestens 500-fold in ihren St&auml;rken; solche Schnittstellen sind schwach, wenn sie Zeta-Untereinheiten enthalten und Austausch mit zus&auml;tzlichen Beta-Untereinheiten in Form von beta(4) (HbH) deutlich schneller als diejenigen mit Alpha-Untereinheiten zu tun. Untereinheit Austausch tritt auf der Ebene der Dimer, obwohl Tetramer Bildung gegenseitig die H&ouml;he der Dimer verf&uuml;gbar f&uuml;r Exchange beeinflusst. Wettbewerb zwischen Untereinheit Arten tritt damit Paare von schwachen embryonalen H&auml;moglobin Untereinheiten bilden die st&auml;rkeren fetalen und adulten H&auml;moglobin austauschen k&ouml;nnen. Die Dimer st&auml;rken zu erh&ouml;hen, in der Reihenfolge Hb-Portland-2 (zeta(2)beta(2)) &lt; Hb-Portland-1 (zeta(2)gamma(2)) etwa gleich Hb Gower-1 (zeta(2)epsilon(2)) &lt; Hb Gower-2 (alpha(2)epsilon(2)) &lt; HbF(1) &lt; HbF (alpha(2)gamma(2)) &lt; HbA(2) (alpha(2)delta(2)), d. h. aus embryonalen zu fetalen zu erwachsenen typen, die reifung von schw&auml;cheren zu st&auml;rkeren Monomer-Monomer untereinheit kontakte. Diese zunehmende ordnung rekapituliert die entwicklungsbiologie reihenfolge in der Globins ausgedr&uuml;ckt werden (embryonalen--&gt; fetale--&gt; Erwachsener), darauf hindeutet, dass die systeminterne Bindungseigenschaften der Untereinheiten sich &uuml;ber die St&auml;rken der Schnittstellen, die sie bilden mit konkurrierenden Untereinheiten in der Dynamik von Protein-Baugruppen und Netzwerken eine wichtige Rolle spielen.

Menschliche embryonale, fetale und adulten H&auml;moglobin haben unterschiedliche Untereinheit Schnittstelle st&auml;rken. Korrelation mit Lebensdauer in den roten Blutk&ouml;rperchen.

I diversi tipi di biofiltri, emoglobine umane normali variano nella loro forza di interfaccia subunit&agrave; tetramero-dimero (stabilit&agrave;) da tre ordini di grandezza nella liganded (CO o ossi) dello stato. La presenza di embrionali zeta-subunit&agrave; conduce ad un indebolimento medio fold del tetramero-dimero interfacce rispetto al corrispondente emoglobine contenenti subunit&agrave; alfa adulta. Le interfacce di dimero-monomero di queste emoglobine almeno 500-fold differiscono nei loro punti di forza; tali interfacce sono deboli se contengono zeta-subunit&agrave; e scambiare con subunit&agrave; beta aggiunta sotto forma di beta(4) (HbH) significativamente pi&ugrave; veloce di fare quelli con le subunit&agrave; alfa. Subunit&agrave; scambio avviene a livello del dimero, sebbene formazione tetramero mutuamente influenza la quantit&agrave; di dimero disponibile per lo scambio. Concorrenza tra tipi di subunit&agrave; si verifica cos&igrave; che coppie di emoglobine embrionale debole possono scambiare subunit&agrave; per formare la pi&ugrave; forte delle emoglobine fetali ed adulti. I punti di forza del dimero aumentano nell&#39;ordine 2 Hb Portland (zeta(2)beta(2)) &lt; Hb Portland-1 (zeta(2)gamma(2)) approssimativamente uguale a Hb Gower-1 (zeta(2)epsilon(2)) &lt; Hb Gower-2 (alpha(2)epsilon(2)) &lt; HbF(1) &lt; HbF (alpha(2)gamma(2)) &lt; HbA(2) (alpha(2)delta(2)), cio&egrave;, da tipi embrionali a fetale per adulti, che rappresenta la maturazione dalla pi&ugrave; debole alla pi&ugrave; forte monomero-monomero subunit&agrave; contatti. Questo ordine crescente ricapitola l&#39;ordine dello sviluppo in cui sono espressi globins (embrionali--&gt; fetale--&gt; adulto), suggerendo che le propriet&agrave; di legame intrinseco delle subunit&agrave; stessi per quanto riguarda i punti di forza delle interfacce formano con subunit&agrave; concorrenti svolgono un ruolo importante nella dinamica della proteina assembly e reti.

Umane adulte, embrionale e fetale emoglobine hanno differenti subunit&agrave; interfaccia punti di forza. Correlazione con la durata della vita nella cella di rosso.

&#x5929;&#x7136;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#xFF08;CO&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x9178;&#x7D20;&#xFF09;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x3042;&#x308B;3&#x6841;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x56DB;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x754C;&#x9762;&#x5F37;&#x5EA6;&#xFF08;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF09;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x80DA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x3B1;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;20&#x500D;&#x306E;&#x5F31;&#x4F53;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3001;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x5206;&#x306E;&#x5F37;&#x307F;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;500&#x500D;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x9AD8;&#x901F;&#x5316;&#x3088;&#x308A;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF08;4&#xFF09;&#xFF08;HBH&#xFF09;&#x306E;&#x5F62;&#x3067;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3B2;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3B6;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x4EA4;&#x63DB;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x304C;&#x5F31;&#x3044;&#x3B1;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3092;&#x884C;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x76F8;&#x4E92;&#x306B;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x91CF;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x9593;&#x306E;&#x7AF6;&#x4E89;&#x304C;&#x5F31;&#x3044;&#x80CE;&#x5150;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x3001;&#x80CE;&#x5150;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x5F37;&#x307F;&#x306F;&#x9806;&#x756A;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;-2&#xFF08;&#x30BC;&#x30FC;&#x30BF;&#xFF08;2&#xFF09;&#x3B2;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF09;&#x26;lt;Hb&#x306E;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;-1&#xFF08;&#x3B6;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF09;&#x3068;&#x307B;&#x307C;&#x7B49;&#x3057;&#x3044;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x30AC;&#x30A6;&#x30A2;&#x30FC;-1&#xFF08;&#x3B6;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;&#xFF08;2 &#xFF09;&#xFF09;&#x26;lt;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x30AC;&#x30A6;&#x30A2;&#x30FC;-2&#xFF08;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF09;&#x26;lt;HBF&#xFF08;1&#xFF09;&#x26;lt;HBF&#xFF08;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF09;&#x26;lt;HBA&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;&#x3B1;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF09;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x80DA;&#x304B;&#x3089;&#x5F37;&#x3044;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x63A5;&#x70B9;&#x306B;&#x5F31;&#x3044;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x719F;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x6210;&#x4EBA;&#x578B;&#x3078;&#x306E;&#x80CE;&#x5150;&#x3078;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9806;&#x5E8F;&#x306F;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3059;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x304C;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x9806;&#x5E8F;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x5F7C;&#x3089;&#x304C;&#x7AF6;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x5F37;&#x307F;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x81EA;&#x4F53;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x7279;&#x6027;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#xFF08;&#x80DA; - &#x26;gt;&#x5927;&#x4EBA; - &#x26;gt;&#x80CE;&#x5150;&#xFF09;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3068;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x3001;&#x80CE;&#x5150;&#x3001;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x754C;&#x9762;&#x306E;&#x5F37;&#x307F;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x5BFF;&#x547D;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;

&#xC790;&#xC5F0;&#xC2A4;&#xB7FD; &#xAC8C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC758; &#xC885;&#xB958;, &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; hemoglobins &#xB2E4; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; tetramer dimer &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xAC15;&#xC810; (&#xC548;&#xC815;&#xC131;)&#xC5D0; liganded&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C4;&#xB3C4; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xBA85;&#xB839;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; (&#xACF5;&#xB3D9; &#xB610;&#xB294; &#xC625; &#xC2DC;) &#xC0C1;&#xD0DC;. &#xBC30;&#xC544; &#xC81C;&#xD0C0; subunits&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; &#xD3C9;&#xADE0; 20-fold &#xC131;&#xC778; &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD574;&#xB2F9; hemoglobins&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; tetramer dimer &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xC57D;&#xD654;&#xB97C; &#xB9AC;&#xB4DC;. &#xC774; hemoglobins&#xC758; dimer &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C; 500-fold &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC15;&#xC810;; &#xB2E4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xB294; &#xC57D;&#xD55C; &#xC81C;&#xD0C0;-&#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; beta(4) (HbH) &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xADF8; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xBE60;&#xB978; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xCD94;&#xAC00; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xAD50;&#xD658; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;. &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; exchange tetramer &#xD615;&#xC131; &#xB41C;&#xB2E4; dimer exchange&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAE08;&#xC561;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE69;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xD615;&#xC2DD; &#xAC04;&#xC758; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC774; &#xC57D;&#xD55C; &#xBC30;&#xC544; hemoglobins&#xC758; &#xC30D; subunits &#xAC15;&#xD55C; &#xD0DC;&#xC544; &#xBC0F; &#xC131;&#xC778; hemoglobins&#xB97C; &#xAD50;&#xD658;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Dimer &#xAC15;&#xC810; Hb &#xD3EC;&#xD2C0;&#xB79C;&#xB4DC; 2 &#xC21C;&#xC11C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; (zeta(2)beta(2)) &lt; Hb &#xD3EC;&#xD2C0;&#xB79C;&#xB4DC; 1 (zeta(2)gamma(2))&#xB294; &#xC57D; Hb Gower-1 &#xB3D9;&#xC77C; (zeta(2)epsilon(2)) &lt; Hb Gower 2 (alpha(2)epsilon(2)) &lt; HbF(1) &lt; HbF (alpha(2)gamma(2)) &lt; HbA(2) (alpha(2)delta(2)), &#xC989;, &#xC57D;&#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC219;&#xC5D0; &#xB354; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;.&#xC774; &#xC99D;&#xAC00; &#xC21C;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; globins &#xD45C;&#xD604; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC21C;&#xC11C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC131;&#xC778; &#xD0DC;&#xC544;&#xB97C; &#xBC30;&#xC544; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; (--&gt; &#xBC30;&#xC544; &#xC131;&#xC778;--&gt; &#xD0DC;&#xC544;), &#xACBD;&#xC7C1; subunits&#xC640; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; subunits &#xC790;&#xCCB4;&#xC758; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18D;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9;&#xD560; &#xC81C;&#xC548;.

&#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544;, &#xD0DC;&#xC544;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC131;&#xC778; hemoglobins&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xAC15;&#xC810;. &#xB808;&#xB4DC; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xBA85;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Los diferentes tipos de origen natural, hemoglobinas humanas normales var&#xED;an en sus puntos fuertes-d&#xED;mero tetr&#xE1;mero de subunidades de la interfaz (estabilidades) por tres &#xF3;rdenes de magnitud en la liganded (CO o oxi) del estado. La presencia de embriones zeta subunidades conduce a un promedio de 20-pliegue debilitamiento de tetr&#xE1;mero-d&#xED;mero en comparaci&#xF3;n con interfaces de hemoglobinas correspondientes que contienen adultos subunidades alfa. Las interfaces de mon&#xF3;mero d&#xED;mero de estas hemoglobinas difieren por lo menos 500 veces en sus puntos fuertes; tales interfaces son d&#xE9;biles si contienen zeta subunidades y el intercambio con agregado beta subunidades en la forma de beta (4) (HbH) significativamente m&#xE1;s r&#xE1;pido que aquellos con subunidades alfa. Intercambio de subunidades se produce a nivel del d&#xED;mero, aunque la formaci&#xF3;n tetr&#xE1;mero rec&#xED;procamente influye en la cantidad de d&#xED;mero disponible para el intercambio. La competencia entre los tipos de subunidades se produce de manera que los pares de hemoglobinas embrionarias d&#xE9;biles pueden intercambiar subunidades para formar la hemoglobina de los m&#xE1;s fuertes fetales y adultos. Las resistencias d&#xED;mero aumentar en el orden de Hb Portland-2 (zeta (2) beta (2)) &#x26;lt;Hb Portland-1 (zeta (2) gamma (2)) aproximadamente igual Hb Gower-1 (zeta (2) &#xE9;psilon (2 )) &#x26;lt;Hb Gower-2 (alfa (2) &#xE9;psilon (2)) &#x26;lt;HbF (1) &#x26;lt;HbF (alfa (2) gamma (2)) &#x26;lt;HbA (2) (alfa (2) delta (2)), es decir, a partir de embriones a la del feto a los tipos de adultos, lo que representa la maduraci&#xF3;n de la m&#xE1;s d&#xE9;bil a m&#xE1;s fuerte de contactos de subunidades monom&#xE9;ricas de mon&#xF3;mero. Este aumento de pedidos recapitula el orden del desarrollo en el que se expresan globinas (embrionaria -&#x26;gt; fetal -&#x26;gt; adulto), lo que sugiere que las propiedades intr&#xED;nsecas de uni&#xF3;n de los mismos con respecto a las subunidades los puntos fuertes de las interfaces que forman con subunidades de competencia juegan un papel importante en la din&#xE1;mica de conjuntos de prote&#xED;nas y de las redes.

Origen embrionario humano, fetales y adultas hemoglobinas tienen diferentes fortalezas de la interfaz de subunidades. Correlaci&#xF3;n con una vida &#xFA;til de los gl&#xF3;bulos rojos

Protistan &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x79CD;&#x9525;&#x4F53;&#x5A92;&#xFF0C;&#x662F;&#x5177;&#x6709;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x771F;&#x6211;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x628A;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D;&#x53D8;&#x4F53;&#x8868;&#x9762;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (&#x53EF;&#x89C6;&#x5E94;&#x529B;&#x7B49;&#x7EA7;) &#x548C; procyclin &#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x8840;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x53EF;&#x89C6;&#x5E94;&#x529B;&#x7B49;&#x7EA7;&#x5916;&#x5957;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x6027;&#x53D8;&#x5F02;&#x662F;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x6765;&#x9003;&#x907F;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x800C; procyclin &#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x7684;&#x4E2D;&#x98DE;&#x514B;&#x6C0F;&#x9525;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5355;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x53EF;&#x89C6;&#x5E94;&#x529B;&#x7B49;&#x7EA7;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6781;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x662F;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x8840;&#x6DB2;&#x9525;&#x866B;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x6C89;&#x9ED8;&#x5F15;&#x8D77;&#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x902E;&#x6355;&#x4F53;&#x5916;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x95F4;&#x9699;&#x4ECE;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5230;&#x7C7B;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x590D;&#x6742;&#x6211;&#x53D1;&#x8D77;&#x4EBA;&#x662F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x7F3A;&#x5C11;&#x7684;&#x4E00;&#x7C7B;&#x8F6C;&#x5F55; &#xFF1B;&#x5B83;&#x7531;&#x808C;&#x8F7B;&#x94FE;&#x548C; trypanosomatid &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x4E4B;&#x95F4;&#x53EA;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x516D;&#x79CD;&#x591A;&#x80BD;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x6309;&#x7167;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x6C89;&#x9ED8;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x662F;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x8840;&#x6DB2;&#x9525;&#x866B;&#x548C;&#x5177;&#x4F53;&#x5F71;&#x54CD; rRNA &#x548C;&#x53EF;&#x89C6;&#x5E94;&#x529B;&#x7B49;&#x7EA7; mRNA &#x7684;&#x4E30;&#x5EA6;&#x3002;&#x88AB;&#x79F0;&#x4E3A;&#x590D;&#x6742;&#x4E00;&#x7C7B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; A.

&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E00;&#x7C7B;&#x7684;&#x79CD;&#x9525;&#x4F53;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;

The vector-borne, protistan parasite Trypanosoma brucei is the only known eukaryote with a multifunctional RNA polymerase I that, in addition to ribosomal genes, transcribes genes encoding the parasite's major cell-surface proteins-the variant surface glycoprotein (VSG) and procyclin. In the mammalian bloodstream, antigenic variation of the VSG coat is the parasite's means to evade the immune response, while procyclin is necessary for effective establishment of trypanosome infection in the fly. Moreover, the exceptionally high efficiency of mono-allelic VSG expression is essential to bloodstream trypanosomes since its silencing caused rapid cell-cycle arrest in vitro and clearance of parasites from infected mice. Here we describe a novel protein complex that recognizes class I promoters and is indispensable for class I transcription; it consists of a dynein light chain and six polypeptides that are conserved only among trypanosomatid parasites. In accordance with an essential transcriptional function of the complex, silencing the expression of a key subunit was lethal to bloodstream trypanosomes and specifically affected the abundance of rRNA and VSG mRNA. The complex was dubbed class I transcription factor A.

Multifunctional class I transcription in Trypanosoma brucei depends on a novel protein complex.

La transmission vectorielle, protiste parasite Trypanosoma brucei est l&#x26;#39;eucaryote connue qu&#x26;#39;avec une polym&#xE9;rase ARN multifonctionnel I qui, en plus de g&#xE8;nes ribosomiques, transcrit des g&#xE8;nes codant pour les grands du parasite &#xE0; la surface cellulaire des prot&#xE9;ines des la glycoprot&#xE9;ine de surface (VSG) et procycline. Dans le sang des mammif&#xE8;res, la variation antig&#xE9;nique de la couche de VSG est un moyen du parasite &#xE0; &#xE9;chapper &#xE0; la r&#xE9;ponse immunitaire, alors que procycline est n&#xE9;cessaire pour mise en place effective d&#x26;#39;une infection trypanosomienne chez la mouche. En outre, l&#x26;#39;efficacit&#xE9; exceptionnellement &#xE9;lev&#xE9;e d&#x26;#39;expression VSG mono-all&#xE9;lique est essentiel de trypanosomes depuis sa silencing caus&#xE9; rapide arr&#xEA;t du cycle cellulaire in vitro et la clairance des parasites provenant de souris infect&#xE9;es. Nous d&#xE9;crivons ici un nouveau complexe prot&#xE9;ique qui reconna&#xEE;t les promoteurs de classe I et qui est indispensable pour la classe I de la transcription, il se compose d&#x26;#39;une cha&#xEE;ne l&#xE9;g&#xE8;re dyn&#xE9;ine et six polypeptides qui sont conserv&#xE9;es seulement parmi les parasites trypanosomatides. Conform&#xE9;ment &#xE0; une fonction essentielle de la transcription du complexe, faisant taire l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;une sous-unit&#xE9; cl&#xE9; &#xE9;tait mortel pour les trypanosomes et plus particuli&#xE8;rement affect&#xE9; l&#x26;#39;abondance de l&#x26;#39;ARNm et ARNr VSG. Le complexe a &#xE9;t&#xE9; baptis&#xE9; de classe I A. facteur de transcription

Classe I multifonction de transcription chez Trypanosoma brucei d&#xE9;pend un nouveau complexe prot&#xE9;ique

Die Vektor-borne, Protistan Parasit Trypanosoma Brucei ist die einzige bekannte Eukaryote mit einer multifunktionalen RNA-Polymerase I, die neben ribosomal Genen Gene Codieren der Parasit gr&ouml;&szlig;eren Zelloberfl&auml;che Proteine-die Variante Oberfl&auml;che Glykoprotein (VSG) und Procyclin &uuml;bertr&auml;gt. In den S&auml;ugetier-Blutkreislauf ist Antigene Variation der VSG-Mantel der Parasit Mittel, um die Immunantwort zu entgehen, w&auml;hrend Procyclin f&uuml;r effektive Einrichtung der Trypanosomatida Infektion im Flugteil notwendig ist. Au&szlig;erdem ist die au&szlig;ergew&ouml;hnlich hohe Effizienz der Mono-Allele VSG-Ausdruck wesentlich Trypanosomen Blutbahn, da seine Unterdr&uuml;ckender rapid Zellzyklus Verhaftung in-vitro verursacht und Abfertigung der Parasiten von infizierten M&auml;usen. Hier beschreiben wir ein neues Protein-komplexen, die Klasse erkennt ich Promotoren und ist unverzichtbar f&uuml;r Klasse I Transkription; Es besteht aus einer leichten Kette von Dynein und sechs Polypeptiden, die nur unter Trypanosomatid Parasiten konserviert werden. Entsprechend einer transkriptionelle Hauptfunktion des Komplexes Unterdr&uuml;ckender Ausdruck eine wichtige Untereinheit war t&ouml;dlich, Trypanosomen Blutbahn und speziell betroffen die F&uuml;lle der rRNA und VSG-mRNA. Der Komplex wurde genannt Klasse I &Uuml;bertragungfaktor A.

Multifunktional Klasse I Transkription in Trypanosoma Brucei ein neues Protein komplexe abh&auml;ngt.

Il vector-borne, protistan parassita Trypanosoma brucei &egrave; l&#39;eucariote conosciuta sola con una RNA polimerasi multifunzionale che, oltre ai geni ribosomiali, trascrive i geni che codificano il parassita maggiore superficie cellulare proteine-la variante superficie glicoproteina (VSG) e procyclin. Nel sangue dei mammiferi, variazione antigenica del cappotto VSG &egrave; mezzo del parassita per eludere la risposta immunitaria, mentre procyclin &egrave; necessario per la effettiva creazione di infezione trypanosome in volo. Inoltre, eccezionalmente alta efficienza del mono-allelic espressione VSG &egrave; essenziale a tripanosomi flusso sanguigno dal suo silenzio causato arresto rapido ciclo cellulare in vitro e di liquidazione dei parassiti da topi infetti. Qui descriviamo un romanzo complesso proteico che riconosce classe I promotori ed &egrave; indispensabile per i classe trascrizione; esso &egrave; costituito da una catena leggera di dineina e sei polipeptidi che sono conservate solo tra trypanosomatid parassiti. Secondo una funzione essenziale di transcriptional del complesso, mettendo a tacere l&#39;espressione di una subunit&agrave; chiave &egrave; stato letale per tripanosomi flusso sanguigno e specificamente interessati l&#39;abbondanza di rRNA e VSG mRNA. Il complesso &egrave; stato soprannominato classe I fattore di trascrizione A.

Multifunzionalit&agrave; classe trascrizione in Trypanosoma brucei dipende un romanzo complesso proteico.

&#x5A92;&#x4ECB;&#x3001;protistan&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5909;&#x7570;&#x8868;&#x9762;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;VSG&#xFF09;&#x3068;procyclin&#x3092;&#x8EE2;&#x5199;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x591A;RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;I&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; procyclin&#x305D;&#x306E;&#x5834;&#x3067;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x8840;&#x3067;&#x306F;&#x3001;VSG&#x30B3;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x624B;&#x6BB5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;in vitro&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x304C;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x505C;&#x6B62;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30E2;&#x30CE;&#x5BFE;&#x7ACB;VSG&#x5F0F;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x8840;&#x6D41;&#x306B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;I&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;I&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x65B0;&#x898F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x985E;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#x3068;6&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AD;&#x30FC;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3088;&#x308C;&#x3070;&#x3001;&#x8840;&#x6D41;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x306B;&#x81F4;&#x6B7B;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x7279;&#x306B;rRNA&#x304A;&#x3088;&#x3073;VSG mRNA&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x91CF;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;I&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;A.&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x305F;

&#x30C8;&#x30EA;&#x30D1;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x306E;&#x591A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;I&#x8EE2;&#x5199;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x898F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;

&#xBCA1;&#xD130; &#xB9E4;&#xAC1C;&#xB85C; protistan &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; Trypanosoma brucei&#xB294; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xB098; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBCC0;&#xD615; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (VSG) &#xBC0F; procyclin &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; transcribes ribosomal &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC774;&#xC678;&#xC5D0;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBCC0;&#xC774; VSG &#xCF54;&#xD2B8;&#xC758; procyclin&#xB294; &#xC989;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; trypanosome &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xD68C;&#xD53C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xC218;&#xB2E8; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB9E4;&#xC6B0; &#xACE0;&#xD6A8;&#xC728; &#xBAA8;&#xB178; &#xC720;&#xC804;&#xC790; VSG &#xC2DD; &#xD608; &#xB958; trypanosomes &#xC774;&#xD6C4; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xAC80;&#xAC70; &#xCCB4; &#xC678; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC758; &#xC785;&#xC744; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xC124; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC124;&#xBA85; &#xB098; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0; &#xD558; &#xACE0; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; I &#xC804;&#xC0AC;; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xD68C; &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778;&#xACFC; 6 polypeptides trypanosomatid &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xB4E4;&#xB9CC; &#xBCF4;&#xC874;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; transcriptional &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5;, &#xB530;&#xB77C; &#xD0A4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC2DD; &#xC785;&#xC744; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xD608;&#xC561; trypanosomes&#xB294; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B9;&#xD788; rRNA &#xBC0F; VSG Mrna&#xC758; &#xD48D;&#xC694;&#xB85C; &#xC6C0;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;. &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBD88;&#xB9AC;&#xB294; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; I &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; 1.

Multifunctional &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; I Trypanosoma brucei &#xC18C;&#xC124; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC758;&#xC874;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC0AC;.

La transmisi&#xF3;n vectorial, protista par&#xE1;sito Trypanosoma brucei es el eucariota s&#xF3;lo se conoce con un multifuncional RNA polimerasa I que, adem&#xE1;s de los genes ribosomales, transcribe genes que codifican el par&#xE1;sito principales prote&#xED;nas de la superficie celular de la glicoprote&#xED;na variante de superficie (VSG) y procyclin. En el torrente sangu&#xED;neo de mam&#xED;fero, la variaci&#xF3;n antig&#xE9;nica de la capa de VSG es el medio del par&#xE1;sito para evadir la respuesta inmune, mientras que procyclin es necesario para el establecimiento efectivo de la infecci&#xF3;n por tripanosoma en la marcha. Por otra parte, la eficiencia excepcionalmente alta de expresi&#xF3;n VSG mono-al&#xE9;lica es esencial para los tripanosomas del torrente sangu&#xED;neo desde su silenciamiento causado una r&#xE1;pida detenci&#xF3;n del ciclo celular in vitro y la eliminaci&#xF3;n de los par&#xE1;sitos de los ratones infectados. Aqu&#xED; se describe un complejo de nueva prote&#xED;na que reconoce los promotores de clase I y es indispensable para la clase I de la transcripci&#xF3;n, sino que consiste en una cadena ligera de dine&#xED;na y seis polip&#xE9;ptidos que se conservan s&#xF3;lo entre los par&#xE1;sitos tripanosom&#xE1;tidos. De acuerdo con una funci&#xF3;n esencial transcripcional del complejo, silenciar la expresi&#xF3;n de una subunidad clave era letal para tripanosomas torrente sangu&#xED;neo y espec&#xED;ficamente afectado a la abundancia de ARNr y ARNm VSG. El complejo fue llamado de clase I de la transcripci&#xF3;n factor A.

Clase I multifuncional transcripci&#xF3;n en Trypanosoma brucei depende de un complejo de prote&#xED;nas novela

&#x5728;&#x5927;&#x578B;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E0A;&#x7684;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#xFF0C;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x6CBB;&#x7597;&#x5976;&#x725B;&#x4E73;&#x623F;&#x708E;&#x65B0;&#x578B;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x611F;&#x67D3;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x662F;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x3002;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#xFF0C;&#x547D;&#x540D;&#x4E3A; phiEco32&#xFF0C;77,554-bp &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x88AB;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x548C;&#x6279;&#x6CE8;&#xFF09;&#xFF0C;&#x548C;&#x5176; virions &#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x5B66;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7684;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E24;&#x4E2A; phiEco32 &#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0E; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x4E3B;&#x673A;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E86;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E4B;&#x4E00;&#x662F;&#x73AF;&#x5883;&#x53CA;&#x81EA;&#x7136;&#x4FDD;&#x80B2;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x897F;&#x683C;&#x739B;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x8D1F;&#x8D23;&#x4E00;&#x4E9B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6291;&#x5236;&#x5176;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x7406;&#x8FD8;&#x6709;&#x5F85;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;

PhiEco32&#x3001; &#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

A novel bacteriophage infecting Escherichia coli was isolated during a large-scale screen for bacteriophages that may be used for therapy of mastitis in cattle. The 77,554-bp genome of the bacteriophage, named phiEco32, was sequenced and annotated, and its virions were characterized by electron microscopy and proteomics. Two phiEco32-encoded proteins that interact with host RNA polymerase were identified. One of them is an ECF family sigma factor that may be responsible for transcription of some viral genes. Another RNA polymerase-binding protein is a novel transcription inhibitor whose mechanism of action remains to be defined.

Genomic and proteomic analysis of phiEco32, a novel Escherichia coli bacteriophage.

Un bact&#xE9;riophage infectant roman Escherichia coli a &#xE9;t&#xE9; isol&#xE9; au cours d&#x26;#39;un &#xE9;cran &#xE0; grande &#xE9;chelle pour les bact&#xE9;riophages qui peuvent &#xEA;tre utilis&#xE9;s pour la th&#xE9;rapie des mammites chez les bovins. Le g&#xE9;nome 77554 pb du bact&#xE9;riophage, nomm&#xE9; phiEco32, a &#xE9;t&#xE9; s&#xE9;quenc&#xE9; et annot&#xE9;, et ses virions ont &#xE9;t&#xE9; caract&#xE9;ris&#xE9;s par microscopie &#xE9;lectronique et de la prot&#xE9;omique. Deux phiEco32 cod&#xE9;s prot&#xE9;ines qui interagissent avec l&#x26;#39;ARN polym&#xE9;rase d&#x26;#39;accueil ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s. L&#x26;#39;un d&#x26;#39;eux est une famille ECF sigma facteur qui peut &#xEA;tre responsable de la transcription de certains g&#xE8;nes viraux. Un autre ARN polym&#xE9;rase-binding protein est un inhibiteur de la transcription roman dont le m&#xE9;canisme d&#x26;#39;action reste &#xE0; d&#xE9;finir.

Analyse g&#xE9;nomique et prot&#xE9;omique de PhiEco32, un bact&#xE9;riophage Coli Novel Escherichia

Eine neuartige Bakteriophage infizieren Escherichia coli wurde w&auml;hrend der gro&szlig;en Leinwand f&uuml;r Bakteriophagen, die f&uuml;r die Therapie der Mastitis bei Rindern kann isoliert. Der Bakteriophage, benannt phiEco32, 77.554-bp Genom sequenziert und kommentierte war und seine Virionen zeichneten sich durch Elektronenmikroskopie und Proteomik. Zwei phiEco32-kodierten Proteine, die mit Host der RNS-Polymerase interagieren wurden identifiziert. Einer von ihnen ist ein ECF Familie Sigma-Faktor, der f&uuml;r die Transkription von einigen viralen Genen verantwortlich sein k&ouml;nnen. Ein weiterer RNA-Polymerase-verbindliches Protein ist ein neuartiger Transkription-Hemmer, dessen Wirkmechanismus bleibt definiert werden.

Genomic und Proteomic Analyse der phiEco32, eine neuartige Escherichia-coli-Bakteriophage.

Un romanzo batteriofago che infetta Escherichia coli &egrave; stato isolato durante una schermata su larga scala per i batteriofagi possono essere utilizzati per la terapia della mastite nei bovini. 77.554-Bp genoma del batteriofago, denominato phiEco32, &egrave; stato sequenziato ed annotato, e suoi virioni sono stati caratterizzati da microscopia elettronica e proteomica. Sono state identificate due proteine phiEco32-codificati che interagiscono con host RNA polimerasi. Uno di loro &egrave; un fattore sigma ECF familiare che pu&ograve; essere responsabile della trascrizione di alcuni geni virali. Un&#39;altra proteina-RNA polimerasi &egrave; un inibitore di trascrizione romanzo cui meccanismo d&#39;azione rimane da definire.

Genomic e proteomic analysis of phiEco32, un romanzo batteriofago di Escherichia coli.

&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306F;&#x3001;&#x725B;&#x306E;&#x4E73;&#x623F;&#x708E;&#x306E;&#x6CBB;&#x200B;&#x200B;&#x7642;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; phiEco32&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x540D;&#x524D;&#x306E;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;77554 bp&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x914D;&#x5217;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x6CE8;&#x91C8;&#x3092;&#x4ED8;&#x3051;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BBF;&#x4E3B;RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x4E8C;phiEco32&#x3067;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;ECF&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5225;&#x306E;RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x65B0;&#x898F;&#x8EE2;&#x5199;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

PhiEco32&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x3001;&#x65B0;&#x898F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;

&#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC744; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC624;&#xD30C;&#xC9C0;&#xB294; &#xAC00;&#xCD95;&#xC5D0; &#xC720;&#xC120; &#xC5FC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; bacteriophages&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0; &#xB3D9;&#xC548; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C;. PhiEco32, &#xBA85;&#xBA85; &#xB41C; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC624;&#xD30C;&#xC9C0;&#xC758; 77,554 bp &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xACE0; &#xC8FC;&#xC11D;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8; virions &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xACFC; proteomics&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; phiEco32 &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; ECF &#xAC00;&#xC871; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; &#xC694;&#xC18C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC77C;&#xBD80; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC815;&#xC758;&#xD560; &#xC218; &#xB0A8;&#xC544; &#xC18C;&#xC124; &#xC804;&#xC0AC; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C; &#xC774;&#xB2E4;.

PhiEco32, &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC624;&#xD30C;&#xC9C0;&#xC758; Genomic &#xBC0F; proteomic &#xBD84;&#xC11D;.

Un bacteri&#xF3;fago novela infectar E. coli se aisl&#xF3; durante una pantalla a gran escala para bacteri&#xF3;fagos que pueden ser utilizados para la terapia de la mastitis en el ganado. El genoma de 77.554 pares de bases del bacteri&#xF3;fago, denominado phiEco32, fue secuenciado y anotado, y sus viriones se caracterizaron por microscop&#xED;a electr&#xF3;nica y la prote&#xF3;mica. Dos phiEco32 prote&#xED;nas codificadas que interact&#xFA;an con el anfitri&#xF3;n RNA polimerasa fueron identificadas. Uno de ellos es una familia de sigma ECF factor que puede ser responsable de la transcripci&#xF3;n de algunos genes virales. Otro ARN polimerasa-prote&#xED;na de uni&#xF3;n es un inhibidor de la transcripci&#xF3;n de la novela cuyo mecanismo de acci&#xF3;n a&#xFA;n est&#xE1; por definirse.

An&#xE1;lisis gen&#xF3;mico y prote&#xF3;mico de PhiEco32, una novela bacteri&#xF3;fago Escherichia coli

&#x4EE5;&#x524D;&#x65E0;&#x6CD5;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x88C5;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x63CF;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x5373;&#x81EA;&#x6211;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x914D;&#x5BF9;&#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x6240;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x53D8;&#x91CF;&#x53CA;&#x5176;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x8BB8;&#x591A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x5DF2;&#x77E5;&#x5DF2;&#x6539;&#x53D8;&#x4E9A;&#x57FA;&#x63A5;&#x53E3;&#x7684;&#x957F;&#x5904;&#xFF0C;&#x90A3;&#x4E9B;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x3001; &#x80CE;&#x513F;&#xFF0C;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x6709;&#x4E0D;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x6709;&#x5F88;&#x5927;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x63A5;&#x53E3;&#x7684;&#x4E03;&#x4E2A;&#x516B;&#x4E2A;&#x6B63;&#x5E38;&#x6C27;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5168;&#x9762;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#xFF0C;&#x5373;&#x81EA;&#x7531;&#x80FD;&#x7684;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;-&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x63A5;&#x53E3;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x524D;&#x51E0;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5DEE; 3 &#x4E2A;&#x6570;&#x91CF;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x548C;&#x8D77;&#x4F0F;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x5404;&#x79CD;&#x73E0;&#x86CB;&#x767D;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x8F6C;&#x6362; &#xFF08;&quot;&#x5F00;&#x5173;&quot;&#xFF09; &#x663E;&#x793A;&#x968F;&#x7740;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#x3002;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x754C;&#x9762;&#x4F18;&#x52BF;&#x4E5F;&#x662F;&#x53D8;&#x91CF;&#x548C;&#x5173;&#x8054;&#x7EBF;&#x6027;&#x4E0E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x3002;&#x80DA;&#x80CE;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x6700;&#x5F31;&#x7684; &#xFF1B;&#x80CE;&#x513F;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x6709;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7684;&#x5F3A;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x6700;&#x5F3A;&#x8005;&#x3002;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4E5F;&#x4E0E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E0D;&#x540C; O(2) &#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x548C;&#x53D8;&#x6784;&#x8C03;&#x63A7;&#x5206;&#x5B50;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E00;&#x822C;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x80CE;&#x513F;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x524A;&#x5F31;&#x4E86;&#x5176;&#x5F02;&#x5E38;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x9010;&#x6B65;&#x51FA;&#x73B0;&#xFF0C;&#x5176;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x964D;&#x4F4E;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D; A &#x5F62;&#x6210;&#x5F00;&#x59CB; &#xFF1B;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E00;&#x79CD;&#x56E0;&#x679C;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x73E0;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x987A;&#x5E8F;&#x548C;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x754C;&#x9762;&#x4F18;&#x52BF;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7ADE;&#x4E89;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8D21;&#x732E;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x662F;&#x76F8;&#x8F85;&#x76F8;&#x6210;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x3001; &#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x3001; &#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8FDE;&#x63A5;&#x3002;

&#x7CBE;&#x529B;&#x5145;&#x6C9B;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#xFF0C;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x63A5;&#x53E3;&#x5C06;&#x4E0E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

A previously unrecognized function of normal human hemoglobins occurring during protein assembly is described, i.e. self-regulation of subunit pairings and their durations arising from the variable strengths of their subunit interactions. Although many mutant human hemoglobins are known to have altered subunit interface strengths, those of the normal embryonic, fetal, and adult human hemoglobins have not been considered to differ significantly. However, in a comprehensive study of both types of subunit interfaces of seven of the eight normal oxy human hemoglobins, we found that the strengths, i.e., the free energies of the tetramer-dimer interfaces, contrary to previous reports, differ by 3 orders of magnitude and display an undulating profile similar to the transitions ("switches") of various globin subunit types over time. The dimer interface strengths are also variable and correlate linearly with their developmental profile. Embryonic hemoglobins are the weakest; fetal hemoglobin is of intermediate strength, and adult hemoglobins are the strongest. The pattern also correlates generally with their different O(2) affinities and responses to allosteric regulatory molecules. Acetylation of fetal hemoglobin weakens its unusually strong subunit interactions and occurs progressively as its level of expression diminishes and adult hemoglobin A formation begins; a causal relationship is suggested. The relative contributions of globin gene order and competition among subunits due to differences in their interface strengths were found to be complementary and establish a connection among genetics, thermodynamics, and development.

Energetic differences at the subunit interfaces of normal human hemoglobins correlate with their developmental profile.

D&eacute;crit une fonction pr&eacute;c&eacute;demment non reconnue des h&eacute;moglobines humaines normales, qui se produisent lors de l&#39;assemblage des prot&eacute;ines, c&#39;est-&agrave;-dire d&#39;autor&eacute;gulation de la sous-unit&eacute; jumelages et leurs dur&eacute;es r&eacute;sultant de la force variable de leurs interactions de sous-unit&eacute;. Bien que plusieurs h&eacute;moglobines humaines mutantes sont connus a modifi&eacute; des points forts de la sous-unit&eacute; interface, ceux des h&eacute;moglobines humaines embryonnaires et f&oelig;tales adultes normales n&#39;ont &eacute;t&eacute; envisag&eacute; diff&egrave;re de fa&ccedil;on significative. Cependant, une &eacute;tude approfondie de ces deux types d&#39;interfaces de sous-unit&eacute; de sept des huit h&eacute;moglobines normales oxy humaines, nous avons trouv&eacute; que les points forts, c&#39;est-&agrave;-dire les &eacute;nergies libres des interfaces t&eacute;tram&egrave;re-dim&egrave;re, contrairement aux observations ant&eacute;rieures, diff&egrave;rent de 3 ordres de grandeur et affichent un profil vallonn&eacute; similaire aux transitions (&laquo; commutateurs &raquo;) de divers types de sous-unit&eacute;s de globine au fil du temps. Les points forts l&#39;interface dim&egrave;re sont &eacute;galement variables et corr&eacute;ler lin&eacute;airement avec le profil de leur d&eacute;veloppement. H&eacute;moglobines embryonnaires sont les plus faibles ; h&eacute;moglobine foetale est de force interm&eacute;diaire et h&eacute;moglobines adultes sont les plus forts. Le mod&egrave;le corr&egrave;le aussi g&eacute;n&eacute;ralement avec leurs affinit&eacute;s diff&eacute;rentes d&#39;o (2) et les r&eacute;ponses aux mol&eacute;cules de r&eacute;gulation allost&eacute;riques. Ac&eacute;tylation d&#39;h&eacute;moglobine foetale affaiblit ses interactions sous-unit&eacute; exceptionnellement forte et se produit progressivement comme diminue son niveau d&#39;expression et de la formation de l&#39;h&eacute;moglobine adulte A commence ; un lien de causalit&eacute; est sugg&eacute;r&eacute;. La contribution relative de l&#39;ordre de g&egrave;ne de la globine et de concurrence entre les sous-unit&eacute;s en raison des diff&eacute;rences dans leurs forces d&#39;interface ont &eacute;t&eacute; trouv&eacute;e &agrave; &ecirc;tre compl&eacute;mentaires et d&#39;&eacute;tablir une connexion entre la g&eacute;n&eacute;tique, la thermodynamique et d&eacute;veloppement.

Diff&eacute;rences &eacute;nergiques aux interfaces sous-unit&eacute; des h&eacute;moglobines humaines normales sont en corr&eacute;lation avec leur profil de d&eacute;veloppement.

Eine zuvor unbekannte Funktion des normalen menschlichen H&auml;moglobin vorkommende Protein Montage wird beschrieben, d.h. die Selbstregulierung der Untereinheit Paarungen und deren Dauer, die durch die Variablen st&auml;rken ihre Untereinheit Interaktionen. Obwohl viele Mutante menschliche H&auml;moglobin bekannt ist, dass die Untereinheit Schnittstelle st&auml;rken ver&auml;ndert haben, sind die von der normalen embryonalen und fetalen Erwachsenen menschlichen H&auml;moglobin nicht betrachtet worden, erheblich abweichen. Jedoch in einer umfassenden Studie der beiden Schnittstellentypen Untereinheit von sieben der acht normalen Autogen menschlichen H&auml;moglobin fanden wir, dass die st&auml;rken, d.h. die freie Energie der Tetramer-Dimer Schnittstellen, entgegen fr&uuml;herer Berichte durch 3 Gr&ouml;&szlig;enordnungen unterscheiden und einem welligen Profil &auml;hnlich wie die &Uuml;berg&auml;nge (&quot;Schalter&quot;) der verschiedenen Arten der Globin-Untereinheit im Laufe der Zeit zeigen. Die Dimer Schnittstelle st&auml;rken sind ebenfalls variabel und linear mit Entwicklungsst&ouml;rungen Profil korrelieren. Embryonale H&auml;moglobin sind die schw&auml;chsten; Fetales H&auml;moglobin ist der mittlere St&auml;rke und Erwachsene H&auml;moglobin sind die st&auml;rksten. Das Muster korreliert im Allgemeinen auch mit ihren verschiedenen O(2) Affinit&auml;ten und Antworten zu allosterischer regulatorische Molek&uuml;le. Acetylierung des fetalen H&auml;moglobins schw&auml;cht seine ungew&ouml;hnlich starke Untereinheit Interaktionen und tritt nach und nach verringert das Niveau des Ausdrucks und Erwachsene H&auml;moglobin A Bildung beginnt; eine kausale Beziehung wird vorgeschlagen. Die relative Beitr&auml;ge von Globin gen Reihenfolge und Wettbewerb zwischen den Untereinheiten aufgrund von Unterschieden in ihrer Schnittstelle st&auml;rken fanden sich zu erg&auml;nzen und eine Verbindung zwischen Genetik, Thermodynamik und Entwicklung herzustellen.

Energetische Unterschiede an den Schnittstellen der Untereinheit des normalen menschlichen H&auml;moglobin korrelieren mit ihrer Entwicklungs-Profil.

&Egrave; descritta in precedenza non riconosciuta funzione di emoglobine umane normali che si verificano durante l&#39;assemblaggio di proteine, cio&egrave; l&#39;autoregolamentazione delle subunit&agrave; abbinamenti e loro durate derivanti dalla forza variabile delle loro interazioni subunit&agrave;. Anche se molti mutanti emoglobine umane sono noti per avere alterato i punti di forza di subunit&agrave; interfaccia, quelli della normale adulte, embrionale e fetale emoglobine umane non sono state considerate a differire in modo significativo. Tuttavia, in uno studio completo di entrambi i tipi di interfacce di subunit&agrave; di sette fra le otto emoglobine umane ossi normale, abbiamo scoperto che i punti di forza, cio&egrave;, le energie di libero delle interfacce tetramero-dimero, contrariamente alle precedenti relazioni, differiscono da 3 ordini di grandezza e visualizzare un profilo ondulato simile alle transizioni (&quot;switch&quot;) di vari tipi di subunit&agrave; globiniche nel tempo. I punti di forza di interfaccia dimero sono anche variabili e correlano linearmente con il loro profilo dello sviluppo. Emoglobine embrionale sono i pi&ugrave; deboli; emoglobina fetale &egrave; di forza intermedia e adulti emoglobine sono i pi&ugrave; forti. Il modello inoltre correla generalmente con le loro diverse affinit&agrave; di apparato e risposte a allosterici molecole regolatrici. Acetilazione dell&#39;emoglobina fetale si indebolisce le interazioni subunit&agrave; insolitamente forte e si verifica progressivamente come diminuisce il livello di espressione e formazione adulti emoglobina A comincia; una relazione causale &egrave; suggerita. I contributi relativi di ordine gene globinico e competizione tra le subunit&agrave; a causa delle differenze nei loro punti di forza di interfaccia sono stati trovati per essere complementari e stabilire una connessione tra la genetica, la termodinamica e sviluppo.

Differenze energetiche alle interfacce subunit&agrave; di emoglobine normali umane correlano con il profilo dello sviluppo.

&#x4EE5;&#x524D;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x95A2;&#x6570;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x4E2D;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x81EA;&#x4E3B;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x53EF;&#x5909;&#x5F37;&#x307F;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x6642;&#x9593;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x5F37;&#x307F;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x80CE;&#x5150;&#x3001;&#x80CE;&#x5150;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6210;&#x4F53;&#x3072;&#x3068;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x3067;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E; 8 &#x3064;&#x306E;&#x901A;&#x5E38;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x4EBA;&#x9593;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x4E03;&#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x81EA;&#x7531;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E; 4 &#x91CF;&#x4F53;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x306B;&#x53CD;&#x3057;&#x3066;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x5F37;&#x307F; 3 &#x6841;&#x6570;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x671F;&#x9593;&#x3001;&#x8D77;&#x4F0F;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB; &#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x9077;&#x79FB; (&#x300C;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x300D;&#xFF09; &#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x8868;&#x793A;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x5F37;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x5909;&#x6570;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x5171;&#x306B;&#x76F4;&#x7DDA;&#x7684;&#x76F8;&#x95A2;&#x306B;&#x3082;&#x3002;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306F;&#x5F31;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x80CE;&#x5150;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x306E;&#x5F37;&#x3055;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x6210;&#x4EBA;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x5F37;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B; O(2) &#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3068;&#x30EC;&#x30B9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30B9; &#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x5236;&#x5FA1;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x76F8;&#x4E92;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x80CE;&#x5150;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306B;&#x5F37;&#x3044;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5F31;&#x3081;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x6210;&#x4EBA;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3; A &#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x5F90;&#x3005; &#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;;&#x56E0;&#x679C;&#x95A2;&#x4FC2;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x9806;&#x5E8F;&#x3068;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x5F37;&#x307F;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x9593;&#x306E;&#x7AF6;&#x4E89;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x306F;&#x88DC;&#x8DB3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x3001;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;.

&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x3067;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x767A;&#x9054;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC870;&#xB9BD; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; hemoglobins&#xC758; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC778;&#xC2DD;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; pairings&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAC00;&#xBCC0; &#xC7A5;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xAC04; &#xC989;, &#xC790;&#xC728; &#xADDC;&#xC81C;. &#xBE44;&#xB85D; &#xB9CE;&#xC740; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xAC04; hemoglobins&#xB294; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xAC15;&#xC810; &#xBCC0;&#xACBD;, &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xBC30;&#xC544;, &#xD0DC;&#xC544;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC131;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; hemoglobins&#xC758; &#xC788;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2E4;&#xC744; &#xACE0;&#xB824; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; 7 8 &#xC815;&#xC0C1; &#xC625; &#xC2DC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; hemoglobins&#xC758; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xB450; &#xC720;&#xD615; &#xC804;&#xBD80;&#xC758; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC15;&#xC810;, &#xC989;, &#xC774;&#xC804; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; tetramer dimer &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xC790;&#xC720; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; 3 &#xBC30;&#xB098; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAE30;&#xBCF5;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; globin &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xAC01;&#xC885; &#xC804;&#xD658; (&quot;&#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&quot;)&#xC640; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBC1C;&#xACAC;. Dimer &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xAC15;&#xC810; &#xBCC0;&#xC218; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xACFC; &#xC120;&#xD615; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC30;&#xC544; hemoglobins&#xB294; &#xC57D;&#xD55C;; &#xD0DC;&#xC544; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; &#xC911;&#xAC04; &#xAC15;&#xB3C4;&#xC758; &#xC774;&#xBA70; &#xC131;&#xC778; hemoglobins&#xB294; &#xAC15;&#xD55C;. &#xD328;&#xD134; &#xB610;&#xD55C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; O(2) &#xB3D9;&#xC9C8;&#xC131; &#xBC0F; &#xC751;&#xB2F5; allosteric &#xADDC;&#xC81C; &#xBD84;&#xC790;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0;. &#xD0DC;&#xC544; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48;&#xC758; acetylation &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC15;&#xD55C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC57D;&#xD654; &#xBC0F; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xD55C;&#xB2E4; &#xC131;&#xC778; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; A &#xD615;&#xC131; &#xC2DC;&#xC791;;&#xC73C;&#xB85C; &#xC810;&#xC9C4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC778;&#xACFC; &#xAD00;&#xACC4;&#xB780; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Globin &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC21C;&#xC11C;&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xD798;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xAC04;&#xC758; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xAE30;&#xC5EC; &#xBCF4;&#xC644; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xD559;, &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC911;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; hemoglobins&#xC758; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xCC28;&#xC774; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD00;.

Se describe una funci&oacute;n previamente desconocida de hemoglobinas humanas normales que ocurren durante el ensamblaje de la prote&iacute;na, es decir, la autorregulaci&oacute;n de emparejamientos de la subunidad y sus duraciones derivadas de las fortalezas variables de sus interacciones de subunidad. Aunque muchos hemoglobinas humanas mutantes se saben que han alterado las fortalezas de interfaz subunidad, los de las hemoglobinas humanas embrionarias, fetales y adultos normales no se han considerado una diferencia significativa. Sin embargo, en un estudio comprensivo de ambos tipos de interfaces de la subunidad de siete de los ocho hemoglobinas humanas normales de oxy, encontramos que los puntos fuertes, es decir, las energ&iacute;as libres de las interfaces de d&iacute;mero tetr&aacute;mero, contrario a los informes anteriores, difieren en 3 &oacute;rdenes de magnitud y mostrar un perfil ondulado similar a las transiciones (&quot;switches&quot;) de varios tipos de subunidad de la globina con el tiempo. Las fuerzas de la interfaz de d&iacute;mero son tambi&eacute;n variable y correlaci&oacute;n lineal con su perfil de desarrollo. Hemoglobinas embrionarias son los m&aacute;s d&eacute;biles; hemoglobina fetal es de resistencia intermedia, y hemoglobinas adultos son los m&aacute;s fuertes. El patr&oacute;n tambi&eacute;n se correlaciona generalmente con sus diferentes afinidades O(2) y respuestas a mol&eacute;culas reguladoras alost&eacute;ricos. Acetilaci&oacute;n de hemoglobina fetal debilita sus interacciones subunidad inusualmente fuerte y se produce progresivamente disminuye su nivel de expresi&oacute;n y formaci&oacute;n de la hemoglobina adulta A comienza; se sugiere una relaci&oacute;n causal. Las contribuciones relativas de la orden de gen globina y la competencia entre subunidades debido a diferencias en sus fortalezas de interfaz fueron encontradas para ser complementarios y establecer una conexi&oacute;n entre la gen&eacute;tica, Termodin&aacute;mica y desarrollo.

Las diferencias energ&eacute;ticas en las interfaces de la subunidad de hemoglobinas humanas normales se correlacionan con su perfil de desarrollo.

&#x8F6C;&#x5F55;&#x4FEE;&#x590D;&#x8026;&#x5408;&#x56E0;&#x5B50; (mfd &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4EA7;&#x7269;&#xFF0C;TRCF) &#x662F;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8026;&#x5408; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x3002;TRCF &#x4F7F;&#x7528;&#x5176;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; ATP &#x7684; DNA translocase &#x6D3B;&#x6027;&#x8F6C;&#x5F55;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x505C;&#x6EDE;&#x5728; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E2D;&#x5220;&#x9664;&#xFF0C;&#x5E76;&#x523A;&#x6FC0;&#x4FEE;&#x590D;&#x7531;&#x62DB;&#x8058;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5207;&#x9664;&#x4FEE;&#x590D;&#x9014;&#x5F84;&#x5230;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;TRCF &#x4E0E; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; (RNAP) &beta;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x86CB;&#x767D;/&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F; TRCF &#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5361; &#xFF08;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; CdnL&#xFF09;&#xFF0C;rRNA &#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#xFF0C;&#x57FA;&#x672C;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x4E0E; TRCF &#x5171;&#x4EAB;&#x540C;&#x6E90; RNAP &#x4EA4;&#x4E92;&#x57DF;&#x548C;&#x8FD8;&#x4E0E; RNAP &beta;-&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A; 2.9 &#x2460; &#x51B3;&#x8BAE;&#x4E0E;&#x6E2F;&#x53E3;&#x7684; TRCF &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684; RNAP &beta;1 &#x57DF;&#xFF0C;TRCF &#x7EDC;&#x5408; RNAP &#x4EA4;&#x4E92;&#x57DF;&#x7684; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x4EA4;&#x4E92; RNAP TRCF/RNAP &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;/&#x63A5;&#x53E3;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x89E3;&#x91CA;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x63A2;&#x8BA8; TRCF&#xFF0C;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x540C;&#x6E90;&#x5361;&#x7684;&#x7EC6;&#x8282;&#x3002;

&#x7EC6;&#x83CC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4FEE;&#x590D;&#x8026;&#x5408;&#x56E0;&#x5B50;/RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

The transcription-repair coupling factor (TRCF, the product of the mfd gene) is a widely conserved bacterial protein that mediates transcription-coupled DNA repair. TRCF uses its ATP-dependent DNA translocase activity to remove transcription complexes stalled at sites of DNA damage, and stimulates repair by recruiting components of the nucleotide excision repair pathway to the site. A protein/protein interaction between TRCF and the Î²-subunit of RNA polymerase (RNAP) is essential for TRCF function. CarD (also called CdnL), an essential regulator of rRNA transcription in Mycobacterium tuberculosis, shares a homologous RNAP interacting domain with TRCF and also interacts with the RNAP Î²-subunit. We determined the 2.9-Ã… resolution X-ray crystal structure of the RNAP interacting domain of TRCF complexed with the RNAP-Î²1 domain, which harbors the TRCF interaction determinants. The structure reveals details of the TRCF/RNAP protein/protein interface, providing a basis for the design and interpretation of experiments probing TRCF, and by homology CarD, function and interactions with the RNAP.

Structural basis for the bacterial transcription-repair coupling factor/RNA polymerase interaction.

Le facteur de couplage de transcription-r&eacute;paration (TRCF, le produit du g&egrave;ne mfd) est une prot&eacute;ine bact&eacute;rienne largement conserv&eacute;e qui intervient dans la r&eacute;paration de l&#39;ADN transcription coupl&eacute;s. TRCF utilise l&#39;activit&eacute; de son ADN d&eacute;pendante de l&#39;ATP translocase pour supprimer des complexes de transcription a d&eacute;croch&eacute; &agrave; sites de dommages &agrave; l&#39;ADN et stimule la r&eacute;paration de composants de la voie de r&eacute;paration de l&#39;excision de nucl&eacute;otides sur le site de recrutement. Une interaction de prot&eacute;ine/prot&eacute;ine entre TRCF et la sous-unit&eacute; &beta; de l&#39;ARN polym&eacute;rase (RNAP) est essentielle pour la fonction TRCF. Carte (&eacute;galement appel&eacute; CdnL), un r&eacute;gulateur essentiel de la transcription de rRNA chez Mycobacterium tuberculosis, partage d&#39;un domaine d&#39;interaction RNAP homologue avec TRCF et interagit &eacute;galement avec la sous-unit&eacute; &beta; RNAP. Nous avons d&eacute;termin&eacute; la r&eacute;solution 2,9 &Aring; la structure cristalline du domaine interaction RNAP de TRCF complex&eacute; avec le domaine RNAP-&beta;1, qui rec&egrave;le les d&eacute;terminants d&#39;interaction TRCF. La structure r&eacute;v&egrave;le des d&eacute;tails de l&#39;interface de prot&eacute;ine/prot&eacute;ine TRCF/RNAP, fournissant une base pour la conception et l&#39;interpr&eacute;tation d&#39;exp&eacute;riences TRCF de palpage et par homologie CarD, fonction et les interactions avec la carte.

Base structurale pour l&#39;interaction de polym&eacute;rase facteur/RNA transcription bact&eacute;riennes-r&eacute;paration accouplement.

Die Transkription-Reparatur-Kopplungsfaktor (TRCF, das Produkt des Gens Mfd) ist ein weithin konservierten bakterielle Protein, die Transkription-gekoppelter DNA-Reparatur vermittelt. TRCF verwendet seine ATP-abh&auml;ngige DNA-Translokase-Aktivit&auml;t, um Transkription-komplexe, die ins Stocken geraten an Standorten von DNA-Sch&auml;den zu entfernen und stimuliert die Reparatur durch Anwerben von Komponenten der Nukleotid Exzision Reparatur Pfad zum Ortsbild. Eine Protein/Protein-Interaktion zwischen TRCF und der &beta;-Untereinheit der RNA-Polymerase (Name) unbedingt TRCF Funktion. Karte (auch genannt CdnL), eine wesentliche Regulator der rRNA-Transkription in Mycobacterium Tuberculosis, teilt eine homologe interagierende Name-Domain mit TRCF und interagiert auch mit der Name &beta;-Untereinheit. Wir entschlossen die 2.9-&Aring; Aufl&ouml;sung R&ouml;ntgen Kristallstruktur der Name interagierenden Dom&auml;ne des TRCF komplexiert mit der Name-&beta;1 Dom&auml;ne, die die TRCF Interaktion Determinanten hegt. Die Struktur zeigt Details der TRCF/Name Eiwei&szlig;/Protein-Schnittstelle, die eine Grundlage f&uuml;r die Gestaltung und Auslegung von Experimenten, die Sondierung TRCF und Homologie CarD, Funktion und Interaktionen mit der Name.

Strukturelle Grundlage f&uuml;r die bakterielle Transkription-Reparatur Kupplung Faktor/RNA-Polymerase-Interaktion.

Il fattore di trascrizione-riparazione accoppiamento (TRCF, il prodotto del gene mfd) &egrave; una proteina batterica ampiamente conservata che media trascrizione-accoppiato di riparazione del DNA. TRCF sua attivit&agrave; traslocasi ATP-dipendente DNA viene utilizzato per rimuovere complessi di trascrizione in fase di stallo in siti di danni al DNA e stimola la riparazione di componenti del percorso nucleotide escissione riparazione al sito di reclutamento. Un&#39;interazione proteina/proteina TRCF e la subunit&agrave; &beta; del RNA polimerasi (RNAP) &egrave; essenziale per la funzione TRCF. Carta (anche chiamato CdnL), un regolatore essenziale della trascrizione di rRNA in Mycobacterium tuberculosis, condivide un dominio di interazione RNAP omologo con TRCF e inoltre interagisce con la subunit&agrave; &beta; RNAP. Abbiamo determinato la risoluzione 2,9-&Aring; struttura cristallina ai raggi x del dominio di interazione RNAP di TRCF complessato con il dominio RNAP-&beta;1, che porti i determinanti di interazione TRCF. La struttura rivela dettagli dell&#39;interfaccia proteina/proteina TRCF/RNAP, fornendo una base per la progettazione e l&#39;interpretazione degli esperimenti sondaggio TRCF e di omologia CarD, la funzione e le interazioni con il RNAP.

Base strutturale per l&#39;interazione trascrizione batterica-riparazione accoppiamento fattore/RNA polimerasi.

&#x8EE2;&#x5199;-&#x4FEE;&#x5FA9;&#x7D50;&#x5408;&#x4FC2;&#x6570; (TRCF&#x3001;mfd &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x5171;&#x5F79; DNA &#x4FEE;&#x5FA9;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x5E83;&#x304F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3059;&#x3002;TRCF &#x306F;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x5207;&#x9664;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x52E7;&#x8A98;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4FEE;&#x7406;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E; ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B; DNA translocase &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; DNA &#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x505C;&#x6B62;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TRCF &#x3068; RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (RNAP) &#x306E; &beta; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x9593;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; &#xFF0F; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;TRCF &#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30FC;&#x30C9; (&#x307E;&#x305F;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B; CdnL) &#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x3001;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; rRNA &#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x76F8;&#x540C; RNAP &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; TRCF &#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F; RNAP &beta; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; 2.9 &#x30AA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3068; TRCF &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x96A0;&#x3057;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B; RNAP &beta; 1 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068; RNAP &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; TRCF &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E; x &#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3001;RNAP &#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x89E3;&#x91C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3067;&#x76F8;&#x540C;&#x30AB;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;TRCF&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B0;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;TRCF/RNAP &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; &#xFF0F; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;-&#x4FEE;&#x5FA9;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x4FC2;&#x6570;/RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x57FA;&#x76E4;&#x3002;

&#xC804;&#xC0AC; &#xC218;&#xB9AC; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xACC4;&#xC218; (TRCF, mfd &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC81C;&#xD488;)&#xC740; &#xC804;&#xC0AC; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; DNA &#xC218;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xB110;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. TRCF ATP &#xC885;&#xC18D; DNA translocase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804;&#xC0AC; &#xB2E8;&#xC9C0; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xCC29;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xACE0; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC808;&#xB2E8; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC790;&#xADF9;. TRCF&#xC640; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; (RNAP)&#xC758; &beta; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;/&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; TRCF &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xCE74;&#xB4DC; (&#xB610;&#xD55C; &#xBD88;&#xB9AC; &#xC6B4;&#xB41C; CdnL)&#xC5D0; &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;, rRNA &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; TRCF&#xC640; &#xB3D9;&#xC885; RNAP &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xACF5;&#xC720; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; RNAP &beta; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC; 2.9 &Aring; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; TRCF &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xBE44;&#xD638; RNAP &beta;1 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; complexed TRCF&#xC758; RNAP &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; x-&#xC120; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xACB0;&#xC815;. &#xAD6C;&#xC870; &#xC124;&#xACC4; &#xBC0F; &#xD504;&#xB85C; &#xBE59; TRCF, &#xC2E4;&#xD5D8; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; homology &#xCE74;&#xB4DC;, &#xD574;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; TRCF/RNAP &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;/&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xC138;&#xBD80;&#xB97C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; RNAP&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xADE0;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;-&#xC218;&#xB9AC; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC694;&#xC18C;/RNA &#xD6A8;&#xC18C; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAE30;&#xCD08;.

El factor de acoplamiento de reparaci&oacute;n transcripci&oacute;n (TRCF, el producto del gen mfd) es una prote&iacute;na bacteriana ampliamente conservada que media la transcripci&oacute;n-juntado la reparaci&oacute;n del ADN. TRCF utiliza su actividad Translocasa de DNA dependiente de ATP para quitar complejos de transcripci&oacute;n se estanc&oacute; en los sitios de da&ntilde;o en el ADN y estimula la reparaci&oacute;n mediante la contrataci&oacute;n de componentes de la v&iacute;a de reparaci&oacute;n de la supresi&oacute;n de nucle&oacute;tido al sitio. Una interacci&oacute;n de la prote&iacute;na/prote&iacute;na entre TRCF y la subunidad &beta; de la ARN polimerasa (RNAP) es esencial para la funci&oacute;n TRCF. Tarjeta (tambi&eacute;n llamado CdnL), un regulador esencial de la transcripci&oacute;n del rRNA en tuberculosis del Mycobacterium, comparte un dominio de interacci&oacute;n RNAP hom&oacute;logo con TRCF y tambi&eacute;n interact&uacute;a con la RNAP &beta;-subunidad. Determinamos la resoluci&oacute;n 2.9-&Aring; estructura cristalina de rayos x del dominio interacci&oacute;n RNAP de TRCF complejado con el dominio de la RNAP-&beta;1, que alberga los determinantes de la interacci&oacute;n de TRCF. La estructura revela detalles de la interfaz de prote&iacute;na/TRCF/ARNP, sentar las bases para el dise&ntilde;o e interpretaci&oacute;n de experimentos TRCF de sondeo y por homolog&iacute;a tarjeta, funci&oacute;n e interacciones con la RNAP.

Base estructural para la interacci&oacute;n de reparaci&oacute;n transcripci&oacute;n bacteriana acoplamiento factor/RNA polimerasa.

&#x8026;&#x5408;&#x5230; (TOF) &#x98DE;&#x884C;&#x65F6;&#x95F4;&#x8D28;&#x8C31;&#x4EEA;&#x7684;&#x9AD8;&#x5BB9;&#x91CF;&#x79BB;&#x5B50;&#x9631;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8FDB;&#x884C;&#x5168;&#x9762;&#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x7684;&#x626B;&#x63CF;&#x5206;&#x6790;&#x6240;&#x6709;&#x5B58;&#x50A8;&#x4E2D;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x79BB;&#x5B50;&#x9631;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5305;&#x62EC;&#x65B0;&#x578B;&#x5706;&#x9525;&#x7684;&#x51E0;&#x4F55;&#x9AD8;&#x5BB9;&#x91CF;&#x79BB;&#x5B50;&#x9631;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5B58;&#x50A8;&#x591A;&#x4E2A; 10(6) &#x79BB;&#x5B50; &#xFF08;&#x8303;&#x56F4; 800-4000 m/z&#xFF09; &#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x964D;&#x4F4E;&#x5176;&#x6027;&#x80FD;&#x3002;&#x79BB;&#x5B50;&#x5B58;&#x50A8;&#x548C;&#x626B;&#x63CF;&#x51FA;&#x4ECE;&#x9AD8;&#x5BB9;&#x91CF;&#x79BB;&#x5B50;&#x9631;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x51FD;&#x6570;&#x7684; m/z&#x3001; collisionally &#x652F;&#x79BB;&#x7834;&#x788E;&#xFF0C;&#x7531; TOF &#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x51C6;&#x786E;&#x7684;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x5206;&#x6790;&#x88AB;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4ECE;&#x79BB;&#x5B50;&#x9631;&#x4E2D;&#x5F39;&#x51FA;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x524D;&#x4F53;&#x548C;&#x7247;&#x6BB5;&#x79BB;&#x5B50;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5176;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684; unphosphorylated &#x591A;&#x80BD;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x5168;&#x9762;&#x94FE;&#x63A5;&#x626B;&#x63CF;&#x8BC6;&#x522B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x9AD8;&#x5BB9;&#x91CF;&#x79BB;&#x5B50;&#x9631;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x98DE;&#x884C;&#x65F6;&#x95F4;&#x8D28;&#x8C31;&#x8BA1;&#x7684;&#x5168;&#x9762;&#x94FE;&#x63A5;&#x626B;&#x63CF;&#x6CA1;&#x6709;&#x626B;&#x63CF;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;

A high-capacity ion trap coupled to a time-of-flight (TOF) mass spectrometer has been developed to carry out comprehensive linked scan analysis of all stored ions in the ion trap. The approach involves a novel tapered geometry high-capacity ion trap that can store more than 10(6) ions (range 800-4000 m/z) without degrading its performance. Ions are stored and scanned out from the high-capacity ion trap as a function of m/z, collisionally fragmented and analyzed by TOF. Accurate mass analysis is achieved on both the precursor and fragment ions of all species ejected from the ion trap. We demonstrate the approach for comprehensive linked-scan identification of phosphopeptides in mixtures with their corresponding unphosphorylated peptides.

High-Capacity Ion Trap Coupled to a Time-of-Flight Mass Spectrometer for Comprehensive Linked Scans with no Scanning Losses.

Un pi&#xE8;ge &#xE0; ions de haute capacit&#xE9; coupl&#xE9; &#xE0; un temps de vol (TOF) spectrom&#xE8;tre de masse a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9; pour effectuer une analyse compl&#xE8;te des scan li&#xE9; de tous les ions stock&#xE9;s dans le pi&#xE8;ge &#xE0; ions. Cette approche implique un roman pi&#xE8;ge conique d&#x26;#39;ions g&#xE9;om&#xE9;trie de grande capacit&#xE9; qui peut stocker des ions plus que 10 (6) (plage de 800-4000 m / z) sans d&#xE9;grader ses performances. Ions sont stock&#xE9;s et scann&#xE9; &#xE0; partir du pi&#xE8;ge &#xE0; ions &#xE0; haute capacit&#xE9; en fonction de m / z, collision fragment&#xE9; et analys&#xE9; par TOF. Analyse de masse exacte est atteint &#xE0; la fois sur le pr&#xE9;curseur et des ions fragment&#xE9;s de toutes les esp&#xE8;ces &#xE9;ject&#xE9;es &#xE0; partir du pi&#xE8;ge &#xE0; ions. Nous d&#xE9;montrons l&#x26;#39;approche globale pour li&#xE9; &#xE0; balayage d&#x26;#39;identification de phosphopeptides dans des m&#xE9;langes avec leurs correspondants peptides non phosphoryl&#xE9;s.

Ion Trap haute capacit&#xE9; coupl&#xE9; &#xE0; un spectrom&#xE8;tre de masse &#xE0; temps de vol pour complets Scans li&#xE9;s &#xE0; Pas de pertes de num&#xE9;risation

Ein hoher Kapazit&auml;t Ionenfalle, gekoppelt mit einem Time-of-Flight (TOF)-Massenspektrometer wurde entwickelt, um die umfassenden verkn&uuml;pfte Scan Analyse aller gespeicherten Ionen in die Ionenfalle durchf&uuml;hren. Der Ansatz beinhaltet eine neuartige konische Geometrie Hochleistungs-Ionenfalle, die gespeichert werden k&ouml;nnen, die mehr als 10 6 Ionen (Reichweite 800-4000 m/Z) ohne seine Performance-Einbu&szlig;en. Ionen sind gespeichert und gescannt raus aus der Ionenfalle hoher Kapazit&auml;t als Funktion der m/Z, collisionally fragmentiert und von TOF analysiert. Genaue Masse Analyse erfolgt auf Vorl&auml;ufer sowohl der Fragment-Ionen aller Arten von der Ionenfalle ausgeworfen. Wir zeigen den Ansatz f&uuml;r die umfassende verkn&uuml;pft-Scan-Identifizierung des Phosphopeptides in Mischungen mit ihren entsprechenden unphosphorylated Peptiden.

Hoher Kapazit&auml;t Ionenfalle Kopplung mit einer Time-of-Flight-Massenspektrometer f&uuml;r umfassende verkn&uuml;pfte scannt mit keine Scan-Verluste.

Una trappola ionica ad alta capacit&agrave; accoppiato ad uno spettrometro di massa a tempo di volo (TOF) &egrave; stato sviluppato per effettuare analisi completa scansione collegato di tutti gli ioni stored in trappola ionica. L&#39;approccio comporta un romanzo geometria conica ad alta capacit&agrave; agli ioni trappola che pu&ograve; memorizzare pi&ugrave; di 10 ioni (gamma 800-4000 m/z) senza degradare le prestazioni. Gli ioni sono memorizzati e analizzati fuori dalla trappola ad alta capacit&agrave; agli ioni in funzione di m/z, collisioni frammentati e analizzati da TOF. Accurata analisi di massa &egrave; realizzata su ioni frammento sia il precursore di tutte le specie espulsione dalla trappola ionica. Dimostriamo l&#39;approccio per l&#39;identificazione di collegati-scansione completa di fosfopeptidi in miscele con i corrispondenti peptidi unphosphorylated.

Ad alta capacit&agrave; trappola ionica accoppiato ad uno spettrometro di massa a tempo di volo per scansioni complete collegati senza perdite di scansione.

&#x98DB;&#x884C;&#x6642;&#x9593;&#x578B;&#xFF08;TOF&#xFF09;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x8A08;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9AD8;&#x5BB9;&#x91CF;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x5185;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C9;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6027;&#x80FD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305A;&#x306B;10&#xFF08;6&#xFF09;&#x3088;&#x308A;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#xFF08;&#x7BC4;&#x56F2;800&#x301C;4000&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;/ z&#xFF09;&#x3092;&#x683C;&#x7D0D;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30C6;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30AA;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x9AD8;&#x5BB9;&#x91CF;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306F;&#x885D;&#x7A81;&#x3067;TOF&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x65AD;&#x7247;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;m / z&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x9AD8;&#x5BB9;&#x91CF;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x304B;&#x3089;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3068;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x304B;&#x3089;&#x6392;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7A2E;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9AD8;&#x5BB9;&#x91CF;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x306A;&#x3057;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x640D;&#x5931;&#x3067;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x306E;&#x98DB;&#x884C;&#x6642;&#x9593;&#x578B;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x8A08;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;

&#xBAA8;&#xB4E0; &#xC800;&#xC7A5; &#xB41C; &#xC774;&#xC628; &#xC774;&#xC628; &#xD2B8;&#xB7A9;&#xC758; &#xC885;&#xD569;&#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xACB0;&#xB41C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xACE0;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC774;&#xC628; &#xD2B8;&#xB7A9; &#xBE44;&#xD589; &#xC2DC;&#xAC04; (TOF) &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xAE30;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC2DC;&#xBBFC;&#xAD8C;&#xC774; &#xC774;&#xC628; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC800;&#xC7A5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD14C;&#xC774;&#xD37C; &#xD615;&#xC0C1; &#xACE0;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC774;&#xC628; &#xD2B8;&#xB7A9; (&#xBC94;&#xC704;&#xB294; 800-4000 m/z)&#xC758; &#xC131;&#xB2A5;&#xC744; &#xC800;&#xD558; &#xC2DC; &#xD0A4; &#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0;. &#xC774;&#xC628; &#xC800;&#xC7A5; &#xBC0F; m/z&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC774;&#xC628; &#xD2B8;&#xB7A9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC16;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC80;&#xC0AC;, collisionally &#xC870;&#xAC01; &#xBC0F; TOF &#xBD84;&#xC11D;. &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xC774;&#xC628; &#xD2B8;&#xB7A9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC885;&#xC871;&#xC758; &#xC804;&#xC870;&#xC640; &#xC870;&#xAC01; &#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; unphosphorylated &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0; phosphopeptides&#xC758; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC2A4;&#xCE94; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACE0;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC774;&#xC628; &#xD2B8;&#xB7A9; &#xC2A4;&#xCE94; &#xC190;&#xC2E4; &#xC5C6;&#xC774; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE44;&#xD589; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xAE30;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569;.

Una trampa de iones de alta capacidad junto a un tiempo de vuelo (TOF) espectr&#xF3;metro de masas se ha desarrollado para llevar a cabo un an&#xE1;lisis integral vinculada exploraci&#xF3;n de todos los iones almacenados en la trampa de iones. El enfoque incluye una novedosa geometr&#xED;a c&#xF3;nica de alta capacidad de trampa de iones que puede almacenar iones m&#xE1;s que 10 (6) (rango 800-4000 m / z) sin degradar su rendimiento. Los iones se almacenan y escaneado hacia fuera de la trampa de iones de alta capacidad como una funci&#xF3;n de m / z, colisional fragmentado y se analizaron por TOF. El an&#xE1;lisis de masa exacta se logra en tanto el precursor y los fragmentos de iones de todas las especies expulsadas de la trampa de iones. Se demuestra el enfoque integral para la ligada al an&#xE1;lisis la identificaci&#xF3;n de fosfop&#xE9;ptidos en mezclas con sus p&#xE9;ptidos no fosforilados correspondientes.

Alta capacidad de trampa de iones Junto a un espectr&#xF3;metro de masas de tiempo de vuelo de las exploraciones integrales vinculados sin p&#xE9;rdidas de escaneo

&#x968F;&#x7740;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#x7684;&#x516D;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA; Hb &#x4EBA;&#x7C7B;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x53D7;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E0A;&#x6E38;&#x63A7;&#x5236;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0; &#xFF08;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7684;&#x5916;&#x5728;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF09; &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x5982;&#x4F55;&#x4E9A;&#x57FA;&#x914D;&#x5BF9;&#x548C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5411;&#x56DB;&#x805A;&#x7269;&#x72B6;&#x6001;&#x5904;&#x4E8E; liganded &#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x53D7;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x7684;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A; &#xFF08;&#x89C4;&#x4F8B;&#x7684; &#39;&#x5185;&#x5728;&#39; &#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF09;&#x3002;&#x6210;&#x4EBA; Hb &#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x5177;&#x6709;&#x6700;&#x5F3A;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x63A5;&#x53E3;&#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x54C8;&#x4F5B;&#x6700;&#x5F31;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x80CE;&#x513F;&#x54C8;&#x4F5B;&#x5546;&#x5B66;&#x9662;&#x6B63;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7684;&#x5F3A;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x5E94;&#x4E8E;&#x5176;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x987A;&#x5E8F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D8;&#x91CF;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F18;&#x52BF;&#x548C;&#x8870;&#x51CF;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B; Hb &#x7C7B;&#x578B;&#x5F62;&#x6210;&#x529F;&#x80FD; O(2) &#x7684;&#x533A;&#x522B;-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x56DB;&#x805A;&#x7269;&#x7B26;&#x5408;&#x57FA;&#x56E0;&#x5F00;&#x5173;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;

&#x5185;&#x5728;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x53D8;&#x91CF;&#x4E9A;&#x57FA;&#x63A5;&#x53E3;&#x7684;&#x4F18;&#x70B9;&#x7684;&#x3002;

The expression of the six types of human Hb subunits over time is currently considered to be regulated mainly by transcription factors that bind to upstream control regions of the gene (the 'extrinsic' component of regulation). Here, we describe how subunit pairing and further assembly to tetramers in the liganded state is influenced by the affinity of subunits for one another (the 'intrinsic' component of regulation). The adult Hb dimers have the strongest subunit interfaces and the embryonic Hbs the weakest, with fetal Hbs being of intermediate strength, corresponding to the temporal order of their expression. These variable subunit binding strengths and the attenuating effects of acetylation contribute to the differences with which these Hb types form functional O(2) -binding tetramers consistent with gene switching.

Intrinsic regulation of hemoglobin expression by variable subunit interface strengths.

L&#x26;#39;expression des six types de sous-unit&#xE9;s Hb de l&#x26;#39;homme au fil du temps est actuellement consid&#xE9;r&#xE9; comme devant &#xEA;tre r&#xE9;gi principalement par des facteurs de transcription qui se lient &#xE0; contr&#xF4;ler en amont les r&#xE9;gions du g&#xE8;ne (le &#xAB;extrins&#xE8;que&#xBB; composante de la r&#xE9;glementation). Ici, nous d&#xE9;crivons comment appariement sous-unit&#xE9; et l&#x26;#39;assemblage &#xE0; la suite de t&#xE9;tram&#xE8;res dans l&#x26;#39;&#xE9;tat ligand&#xE9; est influenc&#xE9;e par l&#x26;#39;affinit&#xE9; de sous-unit&#xE9;s pour un autre (le &#xAB;intrins&#xE8;que&#xBB; composante de la r&#xE9;glementation). Les dim&#xE8;res d&#x26;#39;h&#xE9;moglobine adulte ont des interfaces solides sous-unit&#xE9;s et du BH embryonnaire plus faibles, avec foetal HBs &#xE9;tant de force interm&#xE9;diaire, correspondant &#xE0; l&#x26;#39;ordre temporel de leur expression. Ces forces variables de sous-unit&#xE9;s de liaison et les effets d&#x26;#39;att&#xE9;nuation de l&#x26;#39;ac&#xE9;tylation de contribuer &#xE0; des diff&#xE9;rences avec laquelle ces types d&#x26;#39;h&#xE9;moglobine fonctionnelle forment O (2)-contraignants t&#xE9;tram&#xE8;res compatibles avec commutation des g&#xE8;nes.

R&#xE8;glement intrins&#xE8;que d&#x26;#39;expression h&#xE9;moglobine par des variables de l&#x26;#39;interface sous-unit&#xE9;s forts

Der Ausdruck der sechs Arten von menschlichen Hb Untereinheiten im Laufe der Zeit gilt derzeit vor allem von Transkriptionsfaktoren reguliert werden, die vorgeschaltete Kontrolle Regionen des Gens (die &quot;extrinsische&quot; Komponente der Verordnung) binden. Hier beschreiben wir, wie Untereinheit Paarung und weitere Assembly in tetrameren im liganded Zustand ist beeinflusst durch die Affinit&auml;t der Untereinheiten f&uuml;reinander (die &#39;inneren&#39; Komponente der Verordnung). Die Erwachsenen Hb-Dimer haben die st&auml;rksten Untereinheit-Schnittstellen und embryonalen HB die schw&auml;chsten mit fetalen Hbs wird der mittlere St&auml;rke, entsprechend der zeitlichen Reihenfolge ihres Ausdrucks. Diese Variable Untereinheit Bindung st&auml;rken und die d&auml;mpfenden Effekte der Acetylierung dazu beitragen, die Unterschiede, mit denen diese Hb-Arten funktionelle O(2) bilden-Bindung tetrameren mit Gen wechseln.

Systeminterne Verordnung H&auml;moglobin Ausdrucks durch Variable Untereinheit Schnittstelle st&auml;rken.

L&#39;espressione dei sei tipi di subunit&agrave; Hb umana nel corso del tempo &egrave; attualmente considerato essere regolata principalmente da fattori di trascrizione che si legano alle regioni di controllo a monte del gene (il componente &#39;estrinseco&#39; del regolamento). Qui, descriviamo come abbinamento subunit&agrave; e ulteriormente assieme a tetrameri nello stato liganded &egrave; influenzato dall&#39;affinit&agrave; della subunit&agrave; per l&#39;altro (il componente &#39;intrinseco&#39; di regolamento). I dimeri di Hb adulti hanno le interfacce subunit&agrave; pi&ugrave; forte e la Hbs embrionale dei pi&ugrave; deboli, con fetale Hbs di forza intermedia, corrispondente all&#39;ordine temporale della loro espressione. Questi punti di forza di associazione variabile subunit&agrave; e degli effetti attenuanti di acetilazione contribuiscono alle differenze con cui questi tipi di Hb formano funzionale apparato-associazione tetrameri coerente con gene di commutazione.

Regolazione intrinseca dell&#39;espressione emoglobina dai punti di forza di subunit&agrave; variabile interfaccia.

&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;6&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x4E3B;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x5236;&#x5FA1;&#x9818;&#x57DF;&#xFF08;&#x898F;&#x5236;&#x306E; &#x26;quot;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x26;quot;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF09;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30DE;&#x30FC;&#x306B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x304C;&#x200B;&#x200B;1&#x3064;&#x306E;&#x5225;&#x306E;&#xFF08;&#x898F;&#x5236;&#x306E; &#x26;quot;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x26;quot;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF09;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6210;&#x4EBA;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x9806;&#x5E8F;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x4E2D;&#x9593;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x80CE;&#x5150;&#x306E;HBS&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x5F31;&#x3044;&#x6700;&#x5F37;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xB7;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x80DA;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x6570;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3068;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;HB&#x578B;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;O&#xFF08;2&#xFF09;&#x7D50;&#x5408;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5909;&#x6570;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x754C;&#x9762;&#x306E;&#x5F37;&#x307F;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;

&#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Hb subunits&#xC758; 6 &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xC2DD; &#xC9C4; (&#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC758; &#39;&#xC678;&#xBD80;&#39; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;)&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC8FC;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC5EC;&#xACA8;&#xC9C4;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xD398;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xBC0F; &#xCD94;&#xAC00; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; liganded &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; tetramers &#xBC1B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; subunits&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; (&#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#39;&#xB0B4;&#xC7A5;&#39; &#xBD80;&#xD488;) &#xC11C;&#xB85C; &#xB300; &#xD55C; &#xC124;&#xBA85;. &#xC131;&#xC778; Hb &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xAC00; &#xAC15;&#xD55C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xBC30;&#xC544; Hbs Hbs &#xC911;&#xAC04; &#xAC15;&#xB3C4;&#xC758; &#xD0DC;&#xC544;&#xC640; &#xC57D;&#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4; &#xC2DD;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xC21C;&#xC11C;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9;. Hb &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC591;&#xC2DD; &#xAE30;&#xB2A5; O(2) &#xCC28;&#xC774;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xC218; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAC15;&#xC810;&#xACFC; acetylation &#xC57D;&#xD558;&#xAC8C; &#xD6A8;&#xACFC;-tetramers &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xD658;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;.

&#xB0B4;&#xC7A5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xBCC0;&#xC218; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xAC15;&#xC810; &#xD558; &#xC5EC; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; &#xD45C;&#xD604;&#xC758;.

La expresi&#xF3;n de los seis tipos de subunidades de Hb humanos a trav&#xE9;s del tiempo se considera actualmente se rige principalmente por factores de transcripci&#xF3;n que se unen para controlar aguas arriba regiones del gen (la &#x26;quot;extr&#xED;nseca&#x26;quot; componente de regulaci&#xF3;n). Aqu&#xED; se describe c&#xF3;mo el emparejamiento subunidad y el montaje posterior de tetr&#xE1;meros en el estado liganded est&#xE1; influenciado por la afinidad de las subunidades de uno por el otro (el &#x26;quot;intr&#xED;nseco&#x26;quot; componente de regulaci&#xF3;n). Los adultos d&#xED;meros Hb tienen las interfaces m&#xE1;s fuertes y la subunidad HBs embrionario m&#xE1;s d&#xE9;biles, con el feto Hbs ser de fuerza intermedia, correspondiente a la orden temporal de su expresi&#xF3;n. Estas resistencias variables subunidad de uni&#xF3;n y los efectos atenuantes de acetilaci&#xF3;n contribuyen a las diferencias con la que estos tipos de Hb forman funcional de O (2)-uni&#xF3;n tetr&#xE1;meros consistentes con la conmutaci&#xF3;n de genes.

Reglamento intr&#xED;nsecos de la expresi&#xF3;n de hemoglobina por variables Fortalezas subunidades de la interfaz

We have discovered that an electrode containing a conical channel with a small angular divergence can transmit into the vacuum almost 100% of an electrospray ion current produced at atmospheric pressure. Our first implementation of such a conical duct, which we term "ConDuct," uses a conductive plastic pipette tip containing an approximately 1.6° divergent channel at its entrance. We observed that the beam formed by the ConDuct electrode has a very low divergence (less than 1°) and persists for long distances in vacuum. Intrigued by these properties, we incorporated this electrode into a novel atmosphere-to-vacuum ion transmission interface, and devised a technique for evaluating its performance relative to the commercial reference interfaces that contain heated metal capillaries. We determined that our new interface transmits at least 400 times more ions than the commercial Thermo LCQ DECA XP atmosphere-to-vacuum interface and 2 to 3 times more than the commercial interface in the Thermo Velos Orbitrap and the Q Exactive mass spectrometers. We conclude that it might be possible to optimize the properties of the transmitted ions further by manufacturing ConDuct inlet electrodes from metal rather than conductive plastic and by determining the optimum angle of channel divergence and channel length.

Maximizing ion transmission from atmospheric pressure into the vacuum of mass spectrometers with a novel electrospray interface.

We demonstrate that the efficiency of ion transmission from atmosphere to vacuum through stainless steel electrodes that contain slowly divergent conical duct (ConDuct) channels can be close to 100%. Here, we explore the properties of 2.5-cm-long electrodes with angles of divergence of 0°, 1°, 2°, 3°, 5°, 8°, 13°, and 21°, respectively. The ion transmission efficiency was observed to jump from 10-20% for the 0° (straight) channels to 90-95% for channels with an angle of divergence as small as 1°. Furthermore, the 2-3° ConDuct electrodes produced extraordinarily low divergence ion beams that propagated in a laser-like fashion over long distances in vacuum. To take advantage of these newly discovered properties, we constructed a novel atmosphere-to-vacuum ion interface utilizing a 2° ConDuct as an inlet electrode and compared its ion transmission efficiency with that of the interface used in the commercial (Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA, USA) Velos Orbitrap and Q Exactive mass spectrometers. We observed that the ConDuct interface transmitted up to 17 times more ions than the commercial reference interface and also yielded improved signal-to-noise mass spectra of peptides. We infer from these results that the performance of many current atmosphere-to-vacuum interfaces utilizing metal capillaries can be substantially improved by replacing them with 1° or 2° metal ConDuct electrodes, which should preserve the convenience of supplying ion desolvation energy by heating the electrode while greatly increasing the efficiency of ion transmission into the mass spectrometer.

Article	Year
Mnb/Dyrk1A phosphorylation regulates the interaction of dynamin 1 with SH3 domain-containing proteins. Biochemistry\| PubMed ID: 15287745	2004
N-terminal acetylation and protonation of individual hemoglobin subunits: position-dependent effects on tetramer strength and cooperativity. Protein science : a publication of the Protein Society\| PubMed ID: 15929996	2005
Quantitative analysis of protein phosphorylation in mouse brain by hypothesis-driven multistage mass spectrometry. Analytical chemistry\| PubMed ID: 16351129	2005
Low molecular weight squash trypsin inhibitors from Sechium edule seeds. Phytochemistry\| PubMed ID: 16406091	2006
Human embryonic, fetal, and adult hemoglobins have different subunit interface strengths. Correlation with lifespan in the red cell. Protein science : a publication of the Protein Society\| PubMed ID: 17656582	2007
Multifunctional class I transcription in Trypanosoma brucei depends on a novel protein complex. The EMBO journal\| PubMed ID: 17972917	2007
Genomic and proteomic analysis of phiEco32, a novel Escherichia coli bacteriophage. Journal of molecular biology\| PubMed ID: 18294652	2008
Energetic differences at the subunit interfaces of normal human hemoglobins correlate with their developmental profile. Biochemistry\| PubMed ID: 19583196	2009
Structural basis for the bacterial transcription-repair coupling factor/RNA polymerase interaction. Nucleic acids research\| PubMed ID: 20702425	2010
High-Capacity Ion Trap Coupled to a Time-of-Flight Mass Spectrometer for Comprehensive Linked Scans with no Scanning Losses. International journal of mass spectrometry\| PubMed ID: 21516228	2011
Intrinsic regulation of hemoglobin expression by variable subunit interface strengths. The FEBS journal\| PubMed ID: 22129306	2012
Maximizing ion transmission from atmospheric pressure into the vacuum of mass spectrometers with a novel electrospray interface. Journal of the American Society for Mass Spectrometry\| PubMed ID: 25588722	2015
Optimizing Electrospray Interfaces Using Slowly Diverging Conical Duct (ConDuct) Electrodes. Journal of the American Society for Mass Spectrometry\| PubMed ID: 25667060	2015

Julio C. Padovan

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