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Analysis of SNARE-mediated Membrane Fusion Using an Enzymatic Cell Fusion Assay

The interactions of SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor)  proteins on vesicles (v-SNAREs) and on target membranes ...

University of Louisville School of Medicine

Cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta 2-dpm) &#x7684;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x6C27;&#x5316; Br] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2))&#xFF0C;&#x6216; (&#x4E8C;&#x6C2F;&#x7532;&#x70F7;&#xFF0C;&#x5BA1;&#x8BAE;&#x4E86; cis,mer)(0),() () (0.1 M Bu(4)NPF(6)) &#x4F0F;&#x5B89;&#xFF0C;&#x5927;&#x5BB9;&#x91CF;&#x7535;&#x89E3;&#x3001; &#x539F;&#x4F4D;&#x548C;&#x4E8B;&#x540E;&#x7684;&#x539F;&#x4F4D;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x6A21;&#x62DF;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x4F0F;&#x5B89;&#x6CD5;&#x65F6;&#x95F4;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x5728; 20 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x6027; 18 &#x7535;&#x5B50;&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#xFF0C;mer Mn(I) &#x7269;&#x79CD;&#x88AB;&#x6C27;&#x5316;&#x4E3A;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684; 17 &#x7535;&#x5B50;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x6162;&#x901F;&#x626B;&#x63CF;&#x901F;&#x7387; isomerizes &#x5230;&#x8DE8;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x3002;&#x6A21;&#x62DF;&#x662F;&#x7B26;&#x5408; 3.1 + /-0.3 s(-1) &#x6B64;&#x5F02;&#x6784;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x3002;&#x539F;&#x4F4D;&#x7EA2;&#x5916;&#x5149;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x5728;&#x4F4E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x76D1;&#x6D4B;&#x53CD;&#x5E94;&#x4F7F;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x56DB;&#x4E2A;&#x7269;&#x79CD; &#xFF08;&#xFF08;cis,mer)(0) &#xFF1B; nu(CO) &#x4E50;&#x961F;(&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#xFF0C;mer)(+);(&#x900F;&#x660E;&#x80F6;&#x7247;)(0) &#xFF1B;(&#x900F;&#x660E;&#x80F6;&#x7247;)(+))&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8584;&#x5C42;&#x7535;&#x89E3;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x5E73;&#x65B9;&#x7C73;&#x53CD;&#x5E94;&#x65B9;&#x6848;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;17 &#x7535;&#x5B50; cis,fac-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)Br](+) &#x548C;&#x5B83;&#x7684; 18 &#x7535;&#x5B50; (cis,fac)(0) &#x5BF9;&#x5E94;&#xFF0C;&#x7531;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x50AC;&#x5316;&#x5F02;&#x6784;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x751F;&#x6210;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x7279;&#x70B9;&#x7EA2;&#x5916;&#x5149;&#x8C31;&#x5206;&#x6790; &#xFF08;nu(CO))&#x3002;&#x5BA4;&#x6E29;&#x6279;&#x91CF;&#x6C27;&#x5316;&#x7535;&#x89E3;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x63ED;&#x793A;&#x8DE8;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x3001; &#x751F;&#x6210;&#x6279;&#x91CF;&#x4ECE;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E2D; &#xFF08;cis,mer)(+) &#x548C; (cis,fac)(+) &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6162;&#x6162;&#x5730;&#x5F39;&#x51FA;&#x6EB4;&#x4E0E; 1.6 x 10(-3) s(-1) &#x7A97;&#x4F53; trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](+) &#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x3002;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x7ADE;&#x4E89;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6B65;&#x662F;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x6B64;&#x79BB;&#x5B50;&#x4E0E;&#x6EB6;&#x5242;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x662F;&#x5728;&#x4E59;&#x8148;&#x4E2D;&#x7684;&#x7B49;&#x6548;&#x4F0F;&#x5B89;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x5BA4;&#x6E29;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x6C27;&#x5316;&#x540E;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x4EA7;&#x54C1;&#x4ECD;&#x662F;&#x8DE8;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x3002;&#x4E0D;&#x591F;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7814;&#x7A76;&#x7684; cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta 2-dpm) &#x6C27;&#x5316; Cl] trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](2+) &#x5F62;&#x6210;&#x901A;&#x8FC7; Cl(-) &#x9A71;&#x9010;&#x540E;&#x53EA;&#x663E;&#x793A;&#x4E0B;&#x7684;&#x5927;&#x5BB9;&#x91CF;&#x7535;&#x89E3;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x663E;&#x8457;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;

&#x6F84;&#x6E05;&#x7684;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x4F34;&#x968F;&#x7684;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x6C27;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684; cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta 2-dpm) X] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2) &#xFF1B;X = Cl&#xFF0C;Br)&#x3002;

The electrochemical oxidation of cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)Br] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2)), or (cis,mer)(0),()()has been examined in dichloromethane (0.1 M Bu(4)NPF(6)) by voltammetric, bulk electrolytic, in situ and ex situ spectroelectrochemical and simulation techniques. On the voltammetric time scale at 20 degrees C, the neutral 18-electron cis,mer Mn(I) species is oxidized to the corresponding 17-electron cation which at slow scan rates isomerizes to the trans cation. Simulations are consistent with a rate constant of 3.1 +/- 0.3 s(-1) for this isomerization process. Monitoring the reaction by in situ IR spectroscopy at low-temperature enables the identification of the nu(CO) bands of all four species ((cis,mer)(0); (cis,mer)(+); (trans)(0); (trans)(+)) in the resultant square reaction scheme that is operative under these thin layer electrolysis conditions. Additionally, 17-electron cis,fac-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)Br](+) and its 18-electron (cis,fac)(0) counterpart, generated by a redox-induced catalytic isomerization reaction, are detected and characterized by IR spectroscopy (nu(CO)). Room-temperature bulk oxidative electrolysis experiments reveal that the trans cation, generated in bulk solution from the (cis,mer)(+) and (cis,fac)(+) isomers, slowly ejects bromide with a rate constant of 1.6 x 10(-3) s(-1) to form trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](+). The equivalent voltammetry in acetonitrile is complicated by an additional competing kinetic step which is attributed to reaction of this cation with the solvent. However, the major product formed upon oxidation at room temperature is still the trans cation. Less detailed studies on the oxidation of cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)Cl] only show significant differences under conditions of bulk electrolysis after trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](2+) is formed via expulsion of Cl(-).

Elucidation of the Wide Range of Reaction Pathways That Accompany the Electrochemical Oxidation of cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)X] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2); X = Cl, Br).

L&#39;oxydation &eacute;lectrochimique de cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta (2)-dpm) Br] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2)), ou (cis,mer)(0),() () a &eacute;t&eacute; examin&eacute;e dans le dichlorom&eacute;thane (0,1 M Bu(4)NPF(6)) par voltamp&eacute;rom&eacute;trie, vrac &eacute;lectrolytique, in situ et ex situ spectro&eacute;lectrochimiques et simulation techniques. Sur l&#39;&eacute;chelle de temps voltamp&eacute;rom&eacute;triques &agrave; 20 degr&eacute;s C, la CEI 18 &eacute;lectrons neutre, mer esp&egrave;ces Mn(I) est oxyd&eacute; en cation correspondante 17 &eacute;lectrons qui, au taux de balayage lent, s&#39;isom&eacute;rise en cation trans. Les simulations sont compatibles avec une constante de vitesse de 3.1 +/-0,3 s(-1) pour ce processus d&#39;isom&eacute;risation. Surveillance de la r&eacute;action de la spectroscopie IR in situ &agrave; basse temp&eacute;rature permet d&#39;identifier les bandes de nu(CO) des quatre esp&egrave;ces ((cis,mer)(0) ; (cis, mer)(+); (trans)(0) ; (trans)(+)) le sch&eacute;ma r&eacute;actionnel carr&eacute;s qui en r&eacute;sulte, c&#39;est op&eacute;rationnel dans le cadre de ces conditions d&#39;&eacute;lectrolyse de couche mince. En outre, 17 &eacute;lectrons cis,fac-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)Br](+) et ses 18 &eacute;lectrons (cis,fac)(0) homologue, g&eacute;n&eacute;r&eacute; par une r&eacute;action d&#39;isom&eacute;risation catalytique induite par oxydo-r&eacute;duction, sont d&eacute;tect&eacute;s et caract&eacute;ris&eacute;s par spectroscopie IR (nu(CO)). Exp&eacute;riences de temp&eacute;rature de la pi&egrave;ce en vrac &eacute;lectrolyse oxydatif r&eacute;v&egrave;lent que le cation trans, g&eacute;n&eacute;r&eacute;e dans la solution en vrac de la (cis,mer)(+) et (cis,fac)(+) isom&egrave;res, &eacute;jecte lentement avec une constante de vitesse de 1,6 x 10(-3) s(-1) &agrave; trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](+) de la forme du bromure. La voltam&eacute;trie &eacute;quivalente dans l&#39;ac&eacute;tonitrile est compliqu&eacute;e par une &eacute;tape suppl&eacute;mentaire de cin&eacute;tique concurrente qui est attribu&eacute;e &agrave; la r&eacute;action de ce cation avec le solvant. Toutefois, le principal produit form&eacute; lors de l&#39;oxydation &agrave; temp&eacute;rature ambiante est toujours le cation de trans. De fa&ccedil;on moins d&eacute;taill&eacute;e des &eacute;tudes sur l&#39;oxydation du cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta (2)-dpm) Cl] seulement montrent des diff&eacute;rences significatives dans les conditions d&#39;&eacute;lectrolyse en vrac apr&egrave;s trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](2+) est form&eacute; par l&#39;expulsion de Cl(-).

&Eacute;lucidation de la large gamme de r&eacute;action voies qu&#39;accompagne l&#39;oxydation &eacute;lectrochimique de cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta (2)-dpm) X] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2) ; X = Cl, Br).

Die elektrochemische Oxidation des cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (Eta 2-Dpm) Br] (Dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2)), oder (cis,mer)(0),() () in Dichlormethan &uuml;berpr&uuml;ft wurde (0,1 M-Bu(4)NPF(6)) von voltammetric, Massen, elektrolytische, in-situ und Ex Situ Spectroelectrochemical und Simulation Techniken. Voltammetric Zeitskala bei 20 Grad C, die neutrale 18-Elektronen-Cis ist Mer Mn(I) Arten zu den entsprechenden 17-Elektronen-kation oxidiert, die zu langsame Scanraten, das Trans-kation isomerisiert. Simulationen stehen im Einklang mit einer Geschwindigkeitskonstante 3.1 +/-0,3 s(-1) Hierbei Isomerisierung. &Uuml;berwachung der Reaktion durch in-situ-IR-Spektroskopie bei niedrigen Temperaturen erm&ouml;glicht die Identifizierung der nu(CO) Bands aller vier Arten ((cis,mer)(0); (Cis, Mer)(+); (Trans)(0); (Trans)(+)) die resultierende Quadrat Reaktionsschema ist das operative Bedingungen diese d&uuml;nne Schicht die Elektrolyse. Dar&uuml;ber hinaus 17-Elektron-cis,fac-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)Br](+) und seine 18-Elektronen (cis,fac)(0) Gegenst&uuml;ck, erzeugt durch eine katalytische Isomerisierung induziert durch Redox-Reaktion, werden erkannt und gekennzeichnet durch IR-Spektroskopie (nu(CO)). Raumtemperatur Massen oxidativen Elektrolyse Experimente zeigen, dass das Trans-kation, erstellt in loser Sch&uuml;ttung-L&ouml;sung von der (cis,mer)(+) und (cis,fac)(+) Isomere, langsam wirft Bromid mit einer konstanten Geschwindigkeit von 1,6 x 10(-3) s(-1) in Form trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](+). Die entsprechende Voltammetrie in Acetonitril wird durch einen zus&auml;tzlichen Schritt des konkurrierenden kinetische erschwert die Reaktion von diesem kation mit dem L&ouml;sungsmittel zur&uuml;ckzuf&uuml;hren ist. Allerdings ist das Hauptprodukt, gebildet nach Oxydation bei Raumtemperatur noch das Trans-kation. Weniger detaillierte Studien &uuml;ber die Oxidation von cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (Eta 2-Dpm) Cl] nur zeigen signifikante Unterschiede unter Bedingungen der Massen-Elektrolyse nach trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](2+) &uuml;ber Vertreibung der Cl(-) gebildet wird.

Aufkl&auml;rung, der die breite Palette der Reaktion Wege, dass begleiten die elektrochemische Oxidation des cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (Eta 2-Dpm) X] (Dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2); X = Cl, Br).

L&#39;ossidazione elettrochimica di cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta (2)-dpm) Br] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2)), o ((cis,mer)(0),()) &egrave; stato esaminato in diclorometano (0.1 M Bu(4)NPF(6)) da voltammetrica, bulk elettrolitico, in situ ed ex situ tecniche di simulazione e spectroelectrochemical. Sulla scala di tempo voltammetrica a 20 gradi C, il neutro 18-elettrone cis, mer Mn(I) specie viene ossidato a catione corrispondente 17-elettrone che a scansione lenta tariffe isomerizza a catione trans. Simulazioni sono coerenti con una costante di velocit&agrave; di 3.1 + /-0,3 s(-1) per questo processo di isomerizzazione. Monitoraggio della reazione in situ spettroscopia IR a bassa temperatura permette l&#39;identificazione dei gruppi di tutte le quattro specie ((cis,mer)(0); nu(CO) (cis, mer)(+); (trans)(0); (trans)(+)) nello schema di reazione Piazza risultante che &egrave; operativo in queste condizioni di elettrolisi di strato sottile. Inoltre, 17-elettrone cis,fac-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)Br](+) e il suo 18-elettrone (controparte cis,fac)(0), generato da una reazione di isomerizzazione catalitica redox-indotta, sono rilevati e caratterizzata dalla spettroscopia IR (nu(CO)). Esperimenti di elettrolisi ossidativo temperatura massa rivelano che il catione trans, generato in soluzione in massa il (cis,mer)(+) e (cis,fac)(+) isomeri, espelle lentamente bromuro con una costante di velocit&agrave; di 1.6 x 10(-3) s(-1) in forma trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](+). La voltammetria equivalente in acetonitrile &egrave; complicata da un ulteriore passaggio concorrente cinetico che viene attribuito alla reazione di questo catione con il solvente. Tuttavia, il prodotto principale formato su ossidazione a temperatura ambiente &egrave; ancora il catione trans. Meno dettagliati studi sull&#39;ossidazione del cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta (2)-dpm) Cl] solo differenze significative nelle condizioni di elettrolisi di massa dopo che trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](2+) &egrave; formata tramite espulsione di Cl(-).

Delucidazione della vasta gamma di reazione percorsi che accompagnano l&#39;ossidazione elettrochimica di cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta (2)-dpm) X] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2); X = Cl, Br).

Cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) &#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x9178;&#x5316; (eta &#xFF08;2&#xFF09;-dpm) Br] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2))&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; (cis,mer)(0),() &#xFF08;&#xFF09; &#x306E;&#x4E2D;&#x306E;&#x30B8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED; &#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F; (0.1 M Bu(4)NPF(6)) &#x30DC;&#x30EB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3001;&#x30D0;&#x30EB;&#x30AF;&#x96FB;&#x89E3;, in situ &#x3068; ex &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x5834;&#x5206;&#x5149;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x53CA;&#x3073;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6280;&#x8853;&#x3002;&#x30DC;&#x30EB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x6642;&#x9593;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB; 20 &#x2103; &#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x7ACB;&#x306E; 18 &#x96FB;&#x5B50; cis mer Mn(I) &#x7A2E;&#x306F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; &#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x306B; isomerizes &#x3092;&#x4F4E;&#x901F;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B; 17 &#x96FB;&#x5B50;&#x306E;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306B;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F; 3.1 &plusmn; 0.3 s(-1) &#x3053;&#x306E;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x304C;&#x3002;&#x4F4E;&#x6E29;&#x305D;&#x306E;&#x5834;&#x8D64;&#x5916;&#x5206;&#x5149;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3059;&#x3079;&#x3066; 4 &#x7A2E; ((cis,mer)(0); &#x306E; nu(CO) &#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;(cis, mer)(+);&#xFF08;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#xFF09;&#xFF08;0&#xFF09;;&#xFF08;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#xFF09;(+))&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8584;&#x3044;&#x5C64;&#x96FB;&#x89E3;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x624B;&#x8853;&#x3067;&#x3059;&#x7D50;&#x679C;&#x6B63;&#x65B9;&#x5F62;&#x53CD;&#x5FDC;&#x30B9;&#x30AD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;17 &#x96FB;&#x5B50; cis,fac-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)Br](+) &#x3068;&#x305D;&#x306E; 18 &#x96FB;&#x5B50; (&#x306F;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x8A98;&#x5C0E;&#x89E6;&#x5A92;&#x306E;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x305F; cis,fac)(0) &#x306E;&#x76F8;&#x624B;&#x306F;&#x691C;&#x51FA;&#x304A;&#x3088;&#x3073; IR &#x5206;&#x5149;&#x6CD5; &#xFF08;nu(CO))&#x3002;&#x5E38;&#x6E29;&#x4E00;&#x62EC;&#x9178;&#x5316;&#x96FB;&#x89E3;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; &#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3; &#x30D0;&#x30EB;&#x30AF;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x6210;&#x306F; (cis,mer)(+) &#x3068; (cis,fac)(+) &#x7570;&#x6027;&#x4F53;&#x3001;&#x3086;&#x3063;&#x304F;&#x308A;&#x30D6;&#x30ED;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C9;&#x4ED8;&#x304D; 1.6 10(-3) s(-1) &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](+) &#x3092;&#x500D;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x3092;&#x53D6;&#x308A;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C8;&#x30CB; &#x30C8;&#x30EA;&#x30EB;&#x3067;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x30DC;&#x30EB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3053;&#x306E;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6EB6;&#x5A92;&#x3068;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x5E30;&#x305B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x7AF6;&#x5408;&#x30AD;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF; &#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8907;&#x96D1;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5BA4;&#x6E29;&#x3067;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x88FD;&#x54C1;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x304C;&#x4F4E;&#x304F; cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) &#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76; (eta &#xFF08;2&#xFF09;-dpm) Cl] trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](2+) Cl(-) &#x306E;&#x8FFD;&#x653E;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x5F8C;&#x306E;&#x307F;&#x30D0;&#x30EB;&#x30AF;&#x96FB;&#x89E3;&#x6CD5;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x89E3;&#x660E;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x540C;&#x884C; cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) &#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x9178;&#x5316; (eta &#xFF08;2&#xFF09;-dpm) X] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2);X = Cl, Br)&#x3002;

Cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (&#xC5D0;&#xD0C0; (2)-dpm)&#xC758; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC0B0;&#xD654; Br] (dpm Ph(2)PCH(2)PPh(2)), = &#xB610;&#xB294; (dichloromethane&#xC5D0;&#xC11C; cis,mer)(0),() ()&#xB97C; &#xAC80;&#xC0AC; (voltammetric, &#xC804;&#xD574;, &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300;&#xB7C9; &#xBC0F; &#xC804;&#xC9C1; &#xD558; &#xC5EC; 0.1 M Bu(4)NPF(6)) &#xB77C; spectroelectrochemical&#xC640; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xAE30;&#xBC95;. 20&#xB3C4; c, &#xC911;&#xB9BD; 18 &#xC804;&#xC790; cis voltammetric &#xC2DC;&#xAC04; &#xADDC;&#xBAA8;&#xB85C; &#xBA54; &#xB974; Mn(I) &#xC885;&#xC740; &#xB290;&#xB9B0; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB85C; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC744; isomerizes&#xB294; &#xD574;&#xB2F9; 17 &#xC804;&#xC790; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC0B0;&#xD654; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; 0.3 s(-1)&#xC774; &#xC218; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &plusmn; 3.1&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294;. &#xBAA8;&#xB4E0; 4 &#xC885; ((cis,mer)(0); nu(CO) &#xBC34;&#xB4DC;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xAC00;&#xB2A5; &#xB0AE;&#xC740; &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; IR &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC18;&#xC751; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; (cis, &#xBA54; &#xB974;)(+); (&#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;)(0); (&#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;)(+)) &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xAC01;&#xD615; &#xBC18;&#xC751; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC587;&#xC740; &#xCE35; &#xC804;&#xAE30; &#xBD84;&#xD574; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC694;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, 17 &#xC804;&#xC790; cis,fac-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)Br](+) &#xBC0F; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; 18 &#xC804;&#xC790; (cis,fac)(0) &#xB300;&#xC751;, &#xCD09;&#xB9E4; &#xC218; redox &#xC720;&#xBC1C; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD558; &#xACE0; IR &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; (nu(CO)) &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC2E4;&#xB0B4; &#xC628;&#xB3C4; &#xB300;&#xB7C9; &#xC0B0;&#xD654; &#xC804;&#xAE30; &#xBD84;&#xD574; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xB7C9; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xB294; (cis,mer)(+) &#xBC0F; (cis,fac)(+) &#xC131;&#xCCB4; &#xCC9C;&#xCC9C;&#xD788; &#xD654;&#xC5D0; &#xC591;&#xC2DD; trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](+) 10(-3) s(-1) x 1.6&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;&#xC640; &#xBC30;&#xCD9C;. &#xC774; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC6A9; &#xB9E4;&#xC640;&#xC758; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xCD94;&#xAC00;&#xC801;&#xC778; &#xACBD;&#xC7C1; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC774;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; voltammetry &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC0C1; &#xC628;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; &#xC81C;&#xD488; &#xC544;&#xC9C1;&#xB3C4; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC774;&#xB2E4;. Cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (&#xC5D0;&#xD0C0; (2)-dpm)&#xC758; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC790;&#xC138;&#xD788; &#xC801;&#xC740; Cl] trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](2+) cl(-)&#xC758; &#xD1F4; &#xD559;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xD6C4;&#xB9CC; &#xB300;&#xB7C9; &#xC804;&#xAE30; &#xBD84;&#xD574;&#xC758; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774;&#xC810;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB113;&#xC740; &#xBC94;&#xC704;&#xC758; &#xBC18;&#xC751; &#xACBD;&#xB85C; &#xD568;&#xAED8; cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (&#xC5D0;&#xD0C0; (2)-dpm)&#xC758; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC0B0;&#xD654; &#xD574;&#xBA85; X] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2); X = Cl, Br).

La oxidaci&oacute;n electroqu&iacute;mica de cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta 2-dpm) Br] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2)), o (cis,mer)(0),() () ha sido examinado en diclorometano (0.1 M Bu(4)NPF(6)) por voltamperom&eacute;tricas, a granel electrol&iacute;tico, in situ y ex situ t&eacute;cnicas electroqu&iacute;micas y simulaci&oacute;n. En la escala de tiempo voltamperom&eacute;tricas a 20 grados C, la CEI 18 electrones neutra, mer Mn(I) especies es oxidado al correspondiente cati&oacute;n 17 electrones que exploraci&oacute;n lenta precios isomerizes a los cati&oacute;nico de trans. Simulaciones son consistentes con una constante de velocidad de 3.1 +/-0,3 s(-1) para este proceso de isomerizaci&oacute;n. Seguimiento de la reacci&oacute;n por la espectroscopia IR in situ a baja temperatura permite la identificaci&oacute;n de las bandas de nu(CO) de las cuatro especies ((cis,mer)(0); (cis, mer)(+); (trans)(0); (trans)(+)) en el esquema de reacci&oacute;n resultante de cuadrados est&aacute; operativo en estas condiciones de electr&oacute;lisis de capa delgada. Adem&aacute;s, cis,fac-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)Br](+) 17 electrones y sus 18 electrones (contraparte de cis,fac)(0), generado por una reacci&oacute;n de isomerizaci&oacute;n catal&iacute;tica redox-inducida, son detectados y caracterizado por Espectroscopia IR (nu(CO)). Experimentos de electr&oacute;lisis oxidativo de temperatura a granel revelan que el cati&oacute;n trans, generado en la soluci&oacute;n de la mayor parte de la (cis,mer)(+) y (cis,fac)(+) is&oacute;meros, expulsa lentamente bromuro con una constante de velocidad de 1.6 x 10(-3) s(-1) a trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](+) de la forma. La voltametr&iacute;a equivalente en acetonitrilo es complicada por un paso cin&eacute;tico competencia adicional que se atribuye a la reacci&oacute;n de este cati&oacute;n con el solvente. Sin embargo, el principal producto formado por oxidaci&oacute;n a temperatura ambiente es todav&iacute;a el cati&oacute;n de trans. Menos detallados estudios sobre la oxidaci&oacute;n de cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta 2-dpm) Cl] s&oacute;lo muestran diferencias significativas en condiciones de electr&oacute;lisis a granel despu&eacute;s de que trans-[Mn(CO)(2)(eta(2)-dpm)(2)](2+) est&aacute; formado por expulsi&oacute;n de cl (-).

Aclaraci&oacute;n de la amplia gama de reacci&oacute;n v&iacute;as que acompa&ntilde;an la oxidaci&oacute;n electroqu&iacute;mica de cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm) (eta 2-dpm) X] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2); X = Cl, Br).

&#x6297;&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;&#x836F;&#x7269;&#x5728;&#x513F;&#x7AE5;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x7684;&#x968F;&#x673A;&#x53CC;&#x76F2;&#x3001; &#x5B89;&#x6170;&#x5242;&#x5BF9;&#x7167;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x662F;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x968F;&#x673A;&#x7684;&#x3001; &#x53EF;&#x63A7;&#x7684;&#x513F;&#x79D1;&#x964D;&#x538B;&#x836F;&#x7269;&#x8BD5;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x5408;&#x836F;&#x7269;&#x6BD4;&#x7D22;&#x5BCC;&#x9A6C;&#x9178;/&#x567B;&#x55EA; (B/HT) &#x76F8;&#x6BD4;&#x5B89;&#x6170;&#x5242;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x5305;&#x62EC;&#x7B5B;&#x9009;&#x671F;&#x3001; &#x4E3A;&#x671F; 6 &#x5468;&#x53CC;&#x76F2;&#x5242;&#x91CF;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x3001; 4 &#x5468;&#x53CC;&#x76F2;&#x5242;&#x91CF;&#x7EF4;&#x62A4;&#x671F;&#x95F4;&#x548C; 2 &#x5468;&#x53CC;&#x76F2;&#x5242;&#x91CF;&#x9010;&#x6E10;&#x671F; 2 &#x5468;&#x5355;&#x76F2;&#x5B89;&#x6170;&#x5242;&#x3002;140 &#x4E2A;&#x5B66;&#x79D1;&#x62DB;&#x6536;&#x4E86;&#x5B9E;&#x73B0; 94 &#x968F;&#x673A;&#x7684;&#x79D1;&#x76EE;&#x6CBB;&#x7597;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528; B/HT &#xFF08;n = 62&#xFF09; &#x6216;&#x5B89;&#x6170;&#x5242; (n = 32&#xFF09;&#x3002;B/HT &#x8BF1;&#x5BFC;&#x4E0E;&#x5E73;&#x5747;&#x5750;&#x5728;&#x6536;&#x7F29;&#x671F;&#x8840;&#x538B; &#xFF08;SiSBP&#xFF09; &#x7684;&#x5B89;&#x6170;&#x5242;&#x76F8;&#x6BD4;&#x663E;&#x8457;&#x51CF;&#x5C11; &#xFF08;9.3 4.9 &#x6BEB;&#x7C73;&#x6C5E;&#x67F1;&#xFF0C;P &#x4E0E; &lt; 0.05) &#x548C;&#x5750;&#x8212;&#x5F20;&#x8840;&#x538B; (SiDBP) (2.7 &#x6BEB;&#x7C73;&#x6C5E;&#x67F1;&#xFF0C;P &#x4E0E; 7.2 &lt; 0.05)&#x3002;&#x5B89;&#x6170;&#x5242;&#x51CF;&#x53BB; BP &#x524A;&#x51CF;&#x4E86;&#x66F4;&#x5E74;&#x8F7B;&#x7684;&#x513F;&#x7AE5;&#x548C;&#x90A3;&#x4E9B;&#x66F4;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x57FA;&#x7EBF;&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;&#x3002;BP &#x5C0F;&#x4E8E;&#x5728;&#x7814;&#x7A76;&#x5B8C;&#x6210; 90%&#x7684;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x662F; B/HT 45%&#x548C; 34%&#x5B89;&#x6170;&#x5242;&#x7EC4; (P = NS)&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; B/HT &#x51CF;&#x5C11; BP &#x5B89;&#x5168;&#x4E0E;&#x5B89;&#x6170;&#x5242;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x5927;&#x5B89;&#x6170;&#x5242;&#x6548;&#x5E94;&#x548C;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x79D1;&#x76EE;&#x672A;&#x80FD;&#x5B9E;&#x73B0;&#x76EE;&#x6807; BP &#x63A7;&#x5236;&#x4F7F;&#x5176;&#x4E0D;&#x80FD;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426; B/HT &#x662F;&#x9002;&#x5F53;&#x4E00;&#x7EBF;&#x7597;&#x6CD5;&#x6CBB;&#x7597;&#x5C0F;&#x513F;&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5728;&#x9752;&#x5C11;&#x5E74;&#x60A3;&#x8005;&#x8F7B;&#x3001; &#x4E2D;&#x5EA6; BP &#x9AD8;&#x7A0B;&#x3002;

&#x6CBB;&#x7597;&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;&#x513F;&#x7AE5; Beta blocker/&#x567B;&#x55EA;&#x7C7B;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF1A; &#x968F;&#x673A;&#x7684;&#x53CC;&#x76F2;&#x3001; &#x5B89;&#x6170;&#x5242;&#x5BF9;&#x7167;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x3002;

Antihypertensive medications are used extensively in children despite a paucity of randomized, placebo-controlled trials. This study was among the first randomized, controlled pediatric antihypertensive medication trials, in which the combination drug bisoprolol fumarate/hydrochlorothiazide (B/HT) was compared with placebo. The study comprised a 2-week single-blind placebo screening period, a 6-week double-blind dose titration period, a 4-week double-blind dose maintenance period, and a 2-week double-blind dose-tapering period. One hundred and forty subjects were enrolled to achieve 94 randomized subjects treated either with B/HT ( n=62) or placebo ( n=32). B/HT induced significant reductions compared with placebo for average sitting systolic blood pressure (SiSBP) (9.3 vs. 4.9 mmHg, P<0.05) and sitting diastolic blood pressure (SiDBP) (7.2 vs. 2.7 mmHg, P<0.05). The placebo-subtracted BP reductions were greater in younger children and those with more-severe baseline hypertension. The percentage of subjects with BP less than the 90th percentile at study completion was 45% for B/HT and 34% for placebo ( P=NS). Although the study demonstrated that B/HT reduced BP safely compared with placebo, the large placebo effect and failure of most subjects to achieve target BP control make it uncertain whether B/HT is appropriate first-line therapy for pediatric hypertension, particularly in adolescents with mild-to-moderate BP elevation.

Beta-blocker/thiazide combination for treatment of hypertensive children: a randomized double-blind, placebo-controlled trial.

Antihypertenseurs sont largement utilis&eacute;es dans les enfants en d&eacute;pit de la raret&eacute; des essais randomis&eacute;s et contr&ocirc;l&eacute;s par placebo. Cette &eacute;tude a &eacute;t&eacute; parmi les premiers essais randomis&eacute;s et contr&ocirc;l&eacute;s antihypertenseur p&eacute;diatrique, dans lequel la combinaison m&eacute;dicamenteuse bisoprolol fumarate/hydrochlorothiazide (B/HT) a &eacute;t&eacute; compar&eacute; &agrave; un placebo. L&#39;&eacute;tude comprenait un placebo de simple insu 2 semaines p&eacute;riode, une p&eacute;riode de titration de dose en double-aveugle de 6 semaines, une p&eacute;riode de constitution de dose en double-aveugle de 4 semaines et une p&eacute;riode de graduel de dose en double-aveugle 2 semaines de d&eacute;pistage. 140 Sujets ont &eacute;t&eacute; inscrits pour atteindre 94 sujets randomis&eacute;s trait&eacute;s soit avec B/HT (n = 62) ou un placebo (n = 32). B/HT induit une r&eacute;duction significative par rapport au placebo pour moyenne assis la pression art&eacute;rielle systolique (SiSBP) (9,3 vs 4,9 mm Hg, P &lt; 0,05) et diastolique (SiDBP) (7.2 vs 2,7 mmHg, P &lt; 0,05). Les r&eacute;ductions de BP soustraite de placebo ont &eacute;t&eacute; plus &eacute;lev&eacute;es chez les jeunes enfants et ceux avec l&#39;hypertension base plus s&eacute;v&egrave;re. Le pourcentage de sujets avec BP moins que le 90e percentile &agrave; l&#39;ach&egrave;vement de l&#39;&eacute;tude &eacute;tait de 45 % pour B/HT et 34 % pour le placebo (P = NS). Bien que l&#39;&eacute;tude a d&eacute;montr&eacute; que B/HT r&eacute;duit la PA en toute s&eacute;curit&eacute; par rapport au placebo, le grand effet placebo et l&#39;&eacute;chec de la plupart des sujets de contr&ocirc;le BP cible rendent incertain si B/HT est le traitement de premi&egrave;re intention appropri&eacute; pour l&#39;hypertension chez les enfants, particuli&egrave;rement chez les adolescents avec l&#39;&eacute;l&eacute;vation de BP de l&eacute;g&egrave;re &agrave; mod&eacute;r&eacute;e.

Combinaison de b&ecirc;ta-bloquants/thiazidiques pour le traitement des enfants de l&#39;hypertension : une &eacute;tude randomis&eacute;e &agrave; double insu, contr&ocirc;l&eacute; contre placebo.

Blutdrucksenkenden Medikamente werden h&auml;ufig bei Kindern trotz einen Mangel an randomisierten, placebokontrollierten Studien verwendet. Diese Studie war unter die ersten randomisierten, kontrollierten p&auml;diatrische blutdrucksenkenden Medikamenten Versuche, in denen die Kombination Medikament Bisoprolol Fumarat/Hydrochlorothiazid (B/HT) mit Placebo verglichen wurde. Die Studie umfasste eine zweiw&ouml;chige Single-Blind Placebo screening Zeitraum, einer 6-Wochen Doppelblind-Dosis Titrierung Periode, eine 4-Wochen Doppelblind-Dosis-Erf&uuml;llungsperiode und einen Zeitraum 2 Wochen Doppelblind-Dosis-spitz zulaufend. 140 Themen waren eingeschrieben, um 94 zu erreichen randomisierte Themen behandelt, entweder mit B/HT (n = 62) oder Placebo (n = 32). B/HT induzierten drastische K&uuml;rzungen im Vergleich zu Placebo f&uuml;r Durchschnitt sitzen systolischen Blutdruck (SiSBP) (9.3 vs. 4,9 MmHg, P &lt; 0,05) und sitzend diastolischen Blutdruck (SiDBP) (7.2 vs. 2,7 MmHg, P &lt; 0,05). Die Placebo-subtrahiert BP-K&uuml;rzungen waren bei j&uuml;ngeren Kindern und diejenigen mit mehr schwerwiegende Grundlinie Bluthochdruck gr&ouml;&szlig;er. Der Anteil der Probanden mit BP weniger als 90. Perzentil bei Studienabschluss war 45 % f&uuml;r B/HT und 34 % f&uuml;r Placebo (P = NS). Obwohl die Studie gezeigt, dass B/HT BP sicher im Vergleich zu Placebo reduziert, machen die gro&szlig;en Placebo-Effekt und das Scheitern die meisten Untertanen Zielsteuerelement BP zu erreichen es ungewiss, ob B/HT Erstlinien-Therapie f&uuml;r p&auml;diatrische Hypertonie, insbesondere bei Jugendlichen mit leichter bis mittelschwerer BP H&ouml;he ist.

Beta-blocker/Thiazid-Kombination f&uuml;r die Behandlung von hypertensiven Kinder: einer randomisierten, doppelblinden, Placebo-kontrollierte Studie.

Farmaci antipertensivi sono ampiamente utilizzati nei bambini nonostante una scarsit&agrave; di studi randomizzati, controllati con placebo. Questo studio &egrave; stata tra le prime prove di farmaci antipertensivi pediatrica studio randomizzato, controllato, in cui la combinazione farmaco bisoprololo fumarato/idroclorotiazide (B/HT) &egrave; stato confrontato con placebo. Lo studio comprendeva un 2-settimana singolo-cieco placebo screening periodo, un periodo di titolazione della dose di 6 settimane in doppio-cieco, un periodo di 4 settimane in doppio-cieco dose di manutenzione e un periodo di tapering dose 2 settimane in doppio-cieco. Centoquaranta soggetti sono stati arruolati per raggiungere 94 randomizzati soggetti trattati con B/HT (n = 62) o placebo (n = 32). B/HT indotto riduzioni significative rispetto al placebo per media seduto pressione arteriosa sistolica (SiSBP) (9.3 vs 4,9 mmHg, P &lt; 0,05) e seduti la pressione diastolica (SiDBP) (7.2 vs 2.7 mmHg, P &lt; 0,05). Le riduzioni di BP sottratto con placebo sono stati maggiore nei bambini pi&ugrave; giovani e quelli con ipertensione baseline pi&ugrave; grave. La percentuale di soggetti con meno di 90 &deg; percentile al completamento di studio BP era 45% per B/HT e 34% per placebo (P = NS). Anche se lo studio ha dimostrato che B/HT ridotto BP in modo sicuro rispetto al placebo, il grande effetto placebo e il fallimento della maggior parte dei soggetti target BP antiparassitaria rendono incerto se B/HT &egrave; appropriata terapia di prima linea per l&#39;ipertensione pediatrica, specialmente negli adolescenti con elevazione BP lieve-moderata.

Beta-blocker/tiazidico combinazione per il trattamento di bambini ipertesi: uno studio randomizzato in doppio cieco, placebo-controllato.

&#x964D;&#x5727;&#x85AC;&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x4F5C;&#x70BA;&#x5316;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BB;&#x30DC;&#x8A66;&#x9A13;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x5B50;&#x4F9B;&#x3067;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x85AC; bisoprolol &#x30D5;&#x30DE;&#x30EB;&#x9178;/&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30C1;&#x30A2;&#x30B8;&#x30C9; &#xFF08;B/HT&#xFF09; &#x30D7;&#x30E9;&#x30BB;&#x30DC;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5C0F;&#x5150;&#x306E;&#x6297;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x85AC;&#x306E;&#x7121;&#x4F5C;&#x70BA;&#x5316;&#x6BD4;&#x8F03;&#x8A66;&#x9A13;&#x4E2D;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x5148;&#x7D30;&#x306E;&#x7DDA;&#x91CF;&#x306F; 2 &#x9031;&#x9593;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x76F2;&#x691C;&#x671F;&#x9593;&#x306F; 4 &#x9031;&#x9593;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x76F2;&#x691C;&#x7528;&#x91CF;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x671F;&#x9593;&#x3001;6 &#x9031;&#x9593;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x76F2;&#x691C;&#x7528;&#x91CF;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x671F;&#x9593;&#x671F;&#x9593; 2 &#x9031;&#x9593;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x76F2;&#x691C;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3002;1 &#x3064; 100 &#x3068; 40 &#x79D1;&#x76EE;&#x5728;&#x7C4D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F; 94 &#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7121;&#x4F5C;&#x70BA;&#x88AB;&#x9A13;&#x8005;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B; B/HT &#x3068;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x308B; (n = 62) &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BB;&#x30DC; (n = 32)&#x3002;B/HT &#x8A98;&#x767A;&#x53CE;&#x7E2E;&#x671F;&#x8840;&#x5727; (SiSBP) &#x306B;&#x5EA7;&#x3063;&#x3066;&#x5E73;&#x5747;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BB;&#x30DC;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x524A;&#x6E1B; &#xFF08;9.3 P 4.9 mmHg &#x5BFE; &lt; 0.05) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x62E1;&#x5F35;&#x671F;&#x8840;&#x5727; &#xFF08;SiDBP&#xFF09; &#x306B;&#x5EA7;&#x3063;&#x3066; &#xFF08;7.2 P 2.7 mmHg &#x5BFE; &lt; 0.05)&#x3002;BP &#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BB;&#x30DC;&#x6E1B;&#x7B97;&#x524A;&#x6E1B;&#x306F;&#x82E5;&#x3044;&#x5B50;&#x4F9B;&#x3068;&#x3088;&#x308A;&#x53B3;&#x3057;&#x3044;&#x57FA;&#x6E96;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x3068;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3067;&#x5927;&#x304D;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;BP &#x7814;&#x7A76;&#x5B8C;&#x4E86;&#x6642;&#x70B9;&#x3067; 90 &#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30A4;&#x30EB;&#x672A;&#x6E80;&#x3068;&#x88AB;&#x9A13;&#x8005;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306F; 45 &#xFF05; B/HT &#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BB;&#x30DC; 34% &#x3060; (P = NS)&#x3002;&#x7814;&#x7A76; B/HT &#x5B89;&#x5168;&#x306B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BB;&#x30DC;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066; BP &#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B7;&#x30FC;&#x30DC;&#x52B9;&#x679C;&#x3068;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x79D1;&#x76EE;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; BP &#x7BA1;&#x7406;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x305F; B/HT &#x5C0F;&#x5150;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x601D;&#x6625;&#x671F;&#x306E;&#x8EFD;&#x5EA6;&#x304B;&#x3089;&#x4E2D;&#x7B49;&#x5EA6;&#x306E;&#x8840;&#x5727;&#x4E0A;&#x6607;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x78BA;&#x304B;&#x306A;&#x4F5C;&#x308B;&#x3002;

&Beta; blocker &#x30B5;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B6;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x6CBB;&#x7642;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x306E;&#x5B50;&#x4F9B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#xFF1A; &#x7121;&#x4F5C;&#x70BA;&#x5316;&#x4E8C;&#x91CD;&#x76F2;&#x691C;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BB;&#x30DC;&#x8A66;&#x9A13;&#x3002;

Antihypertensive &#xC57D;&#xBB3C; &#xBB34;&#xC791;&#xC704;, &#xC704;&#xC57D; &#xB300;&#xC870; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC544;&#xC774; &#xB4E4;&#xC5D0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC870;&#xD569; &#xB9C8;&#xC57D; bisoprolol &#xB808;&#xC774;&#xD2B8;/hydrochlorothiazide (B/HT) placebo&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBB34;&#xC791;&#xC704;, &#xD1B5;&#xC81C; &#xC18C;&#xC544; antihypertensive &#xC57D;&#xBB3C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xC600;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAE30;&#xAC04;, 6 &#xC8FC; &#xB354;&#xBE14; &#xBE14;&#xB77C;&#xC778;&#xB4DC; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC801;&#xC815; &#xAE30;&#xAC04;, 4 &#xC8FC; &#xB354;&#xBE14; &#xBE14;&#xB77C;&#xC778;&#xB4DC; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218; &#xAE30;&#xAC04; 2 &#xC8FC; &#xB354;&#xBE14; &#xBE14;&#xB77C;&#xC778;&#xB4DC; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xB05D;&#xC774; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0C1;&#xC601; 2 &#xC8FC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB9F9; &#xAC80; &#xC704;&#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131;. 1 &#xBC31; 40 &#xACFC;&#xBAA9; &#xB4F1;&#xB85D; &#xD588;&#xB2E4; 94&#xB97C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xBB34;&#xC791;&#xC704; &#xACFC;&#xBAA9; B/HT&#xB85C; &#xCDE8;&#xAE09; (n = 62) &#xB610;&#xB294; &#xC704;&#xC57D; (n = 32). B/HT &#xD3C9;&#xADE0; &#xC218;&#xCD95; &#xAE30; &#xD608;&#xC555; (SiSBP)&#xC5D0; &#xC549;&#xC544;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC704;&#xC57D;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC808;&#xAC10; &#xC720;&#xB3C4; (4.9 mmHg, P &#xB300; 9.3 &lt; 0.05)&#xACFC; &#xD655;&#xC7A5;&#xAE30; &#xD608;&#xC555; (SiDBP)&#xC5D0; &#xC549;&#xC544; (2.7 mmHg, P &#xB300; 7.2 &lt; 0.05). &#xC704;&#xC57D;&#xC744; &#xBE80; &#xD608;&#xC555; &#xAC10;&#xC18C; &#xC5B4;&#xB9B0; &#xC790;&#xC2DD;&#xACFC; &#xADF8; &#xB354; &#xC2EC;&#xD55C; &#xCD08;&#xAE30; &#xACE0;&#xD608;&#xC555;&#xC5D0; &#xD070; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC644;&#xB8CC; 90 &#xBC88;&#xC9F8; &#xBC31;&#xBD84;&#xC704; &#xC218; &#xBBF8;&#xB9CC; BP&#xC640; &#xC8FC;&#xC81C;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC740; B/HT&#xC758; 45%&#xC640; &#xC704;&#xC57D;&#xC758; 34% (P = NS). &#xC5F0;&#xAD6C; B/HT &#xC704;&#xC57D;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xD608;&#xC555; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC5F0;, &#xBE44;&#xB85D; &#xD070; &#xC704;&#xC57D; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC0F; &#xB300;&#xC0C1; BP &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xACFC;&#xBAA9;&#xC758; &#xC2E4;&#xD328; &#xD55C;&#xBC88; B/HT &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4;-&#xBCF4;&#xD1B5; &#xD608;&#xC555; &#xC0C1;&#xC2B9;&#xC73C;&#xB85C; &#xCCAD;&#xC18C;&#xB144;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xD788; &#xC18C;&#xC544; &#xACE0;&#xD608;&#xC555;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB77C;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC778;&#xC9C0; &#xBD88;&#xD655;&#xC2E4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACE0;&#xD608;&#xC555; &#xC5B4;&#xB9B0;&#xC774;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; Beta blocker/thiazide &#xC870;&#xD569;: &#xBB34;&#xC791;&#xC704;&#xB85C; &#xB354;&#xBE14; &#xBE14;&#xB77C;&#xC778;&#xB4DC;, &#xC704;&#xC57D; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC7AC;&#xD310;.

Medicamentos antihipertensivos se utilizan ampliamente en los ni&ntilde;os a pesar de la escasez de ensayos aleatorios, controlados con placebo. Este estudio fue uno de los primeros ensayos de medicaci&oacute;n antihipertensiva pedi&aacute;trica estudio aleatorizado, controlado, en el que la combinaci&oacute;n de drogas bisoprolol fumarato/hidroclorotiazida (B/HT) se compar&oacute; con placebo. El estudio comprende un placebo simple ciego de 2 semanas periodo, un periodo de titulaci&oacute;n de la dosis de doble ciego de 6 semanas, un per&iacute;odo de 4 semanas doble-ciego dosis mantenimiento, y un per&iacute;odo de reducci&oacute;n de dosis doble ciego de 2 semanas. Ciento cuarenta temas estaban inscritos para lograr 94 aleatorios temas tratados con B/HT (n = 62) o placebo (n = 32). B/HT indujo una reducci&oacute;n significativa en comparaci&oacute;n con placebo para media sentado la presi&oacute;n arterial sist&oacute;lica (SiSBP) (9.3 vs 4,9 mmHg, P &lt; 0.05) y presi&oacute;n arterial diast&oacute;lica (SiDBP) (7.2 vs 2,7 mmHg, P &lt; 0.05). Las reducciones de BP placebo-resta fueron mayores en ni&ntilde;os m&aacute;s peque&ntilde;os y aquellos con hipertensi&oacute;n m&aacute;s grave de la l&iacute;nea de base. El porcentaje de sujetos con BP menos que el percentil 90 en la terminaci&oacute;n del estudio fue de 45% para B/HT y 34% para el placebo (P = NS). Aunque el estudio demostr&oacute; que el B/HT reducido BP con seguridad en comparaci&oacute;n con placebo, el gran efecto placebo y el fracaso de la mayor&iacute;a de los sujetos para lograr un objetivo BP control hacen incierto si B/HT es la terapia apropiada de primera l&iacute;nea para la hipertensi&oacute;n pedi&aacute;trica, particularmente en adolescentes con elevaci&oacute;n de BP de leve a moderada.

Beta-blocker/tiazida combinaci&oacute;n para el tratamiento de los ni&ntilde;os hipertensos: un ensayo aleatorio doble ciego, controlados con placebo.

&#x7C98;&#x7740;&#x6591;&#x6FC0;&#x9176; &#xFF08;FAK&#xFF09;&#xFF0C;&#x975E;&#x53D7;&#x4F53;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F20;&#x8F93;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3001; &#x7C98;&#x9644;&#x548C;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x3002;&#x4E4B;&#x540E;&#x81EA;&#x7B2C; 397 &#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;FAK &#x7ED1;&#x5B9A; Src 2 &#x540C;&#x6E90;&#x57DF;&#x7684; Src &#x548C;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187; 3-&#x6FC0;&#x9176;&#xFF0C;&#x5176;&#x4ED6;&#x51E0;&#x4E2A;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F19;&#x4F34;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x4EE5;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8C03;&#x67E5;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; FAK &#x539F;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x5305;&#x62EC;&#x4EBA;&#x7C7B; FAK &#x4E0E;&#x7B3C;&#x916A;&#x6C28;&#x9178; 397 391 406 &#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x5408;&#x6210;&#x4E86;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x7B3C;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x5BF9;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7A33;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x514D;&#x8D39;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x8868;&#x660E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#xFF0C;&#x534A;&#x8870;&#x671F;&#x5927;&#x7EA6;&#x4E3A; 10-15 &#x5206;&#x949F;&#x3002;&#x8FC1;&#x79FB; NBT &#x4E8C;&#x5355;&#x5143;&#x683C; &#xFF08;&#x5927;&#x9F20;&#x8180;&#x80F1;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;) &#x662F;&#x4E0E;&#x7B3C;&#x7684; FAK &#x80BD;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x4F7F;&#x7528;&#x805A;&#x7126;&#x7684;&#x6FC0;&#x5149;&#x675F;&#x5149;&#x6D3B;&#x5316;&#x5FAE;&#x91CF;&#x6CE8;&#x5C04;&#x3002;&#x8C03;&#x4EA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8EAB;&#x4F53;&#x5185;&#x7167;&#x5C04;&#x7684;&#x5927;&#x7EA6; 1 &#x5206;&#x949F;&#x7684;&#x9886;&#x5148;&#x4F18;&#x52BF;&#x8FC1;&#x79FB;&#x4E34;&#x65F6;&#x62D8;&#x6355; 8 microm &#x76F4;&#x5F84;&#x666F;&#x70B9;&#x7B3C; FAK &#x80BD;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x4E0E;&#x6B64;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x8FC1;&#x79FB;&#x4E0D;&#x53D7;&#x7981;&#x6B62;&#x3002;&#x975E;&#x7B3C;&#x6CE8;&#x5C04;&#x5230;&#x8FC1;&#x79FB; NBT &#x4E8C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x4E5F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5C42;&#x72B6;&#x902E;&#x6355; &#xFF1B; &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x916A;&#x6C28;&#x9178; 397 FAK &#x80BD;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x505A;&#x6CD5;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x7B3C;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x6240;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x65F6;&#x5E8F;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x8C03;&#x4EA1;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6539;&#x53D8;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5728;&#x77AC;&#x6001;&#x5C42;&#x72B6;&#x902E;&#x6355;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x6D4B;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; FAK &#x80BD;&#x7ADE;&#x4E89;&#x4E0E;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; FAK &#x7528;&#x4E8E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; FAK &#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x5305;&#x62EC;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x9650;&#x4E8E; Src &#x548C;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187; 3-&#x6FC0;&#x9176;&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x65F6;&#x7A7A;&#x98CE;&#x6F6E;&#x548C;&#x5176;&#x540E;&#x7684;&#x5C42;&#x72B6;&#x902E;&#x6355;&#x3002;

&#x539F;&#x4F4D;&#x8C03;&#x4EA1;&#x7684;&#x7B3C;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x80BD;&#x9ECF;&#x7740;&#x6591;&#x6FC0;&#x9176;&#x4ECE;&#x6682;&#x65F6;&#x7684;&#x5C06;&#x6682;&#x505C;&#x5C42;&#x72B6;&#x6269;&#x5C55;&#x540D;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Focal adhesion kinase (FAK), a non-receptor tyrosine kinase, mediates integrin-based cell signaling by transferring signals regulating cell migration, adhesion, and survival from the extracellular matrix to the cytoplasm. Following autophosphorylation at tyrosine 397, FAK binds the Src homology 2 domains of Src and phosphoinositide 3-kinase, among several other possible binding partners. To further investigate the role of phosphorylated FAK in cell migration in situ, peptides comprising residues 391-406 of human FAK with caged phosphotyrosine 397 were synthesized. Although the caged phosphopeptides were stable to phosphatase activity, the free phosphopeptides showed a half-life of approximately 10-15 min in cell lysates. Migrating NBT-II cells (a rat bladder tumor cell line) were microinjected with the caged FAK peptide and locally photoactivated using a focused laser beam. The photoactivation of caged FAK peptide in 8-microm diameter spots over the cell body led to the temporary arrest of the leading edge migration within approximately 1 min of irradiation. In contrast, cell body migration was not inhibited. Microinjection of a non-caged phosphorylated tyrosine 397 FAK peptide into migrating NBT-II cells also led to lamellar arrest; however, this approach lacks the temporal control afforded by the caged phosphopeptides. Photoactivation of related phosphotyrosine peptides with altered sequences did not result in transient lamellar arrest. We hypothesize that the phosphorylated FAK peptide competes with the endogenous FAK for binding to FAK effectors including, but not limited to, Src and phosphoinositide 3-kinase, causing spatiotemporal misregulation and subsequent lamellar arrest.

In situ photoactivation of a caged phosphotyrosine peptide derived from focal adhesion kinase temporarily halts lamellar extension of single migrating tumor cells.

Kinase d&#39;adh&eacute;rence focale (FAK), une kinase de tyrosine de r&eacute;cepteur-non, assure la m&eacute;diation ax&eacute;e sur l&#39;int&eacute;grine cellule signalisation en transf&eacute;rant des signaux de r&eacute;gulation de la migration cellulaire, adh&eacute;rence et la survie de la matrice extracellulaire vers le cytoplasme. Suite autophosphorylation &agrave; tyrosine 397, FAK lie les domaines d&#39;homologie 2 Src Src et phosphoinositide 3-kinase, parmi plusieurs autres partenaires de liaison possible. Afin d&#39;&eacute;tudier le r&ocirc;le de FAK phosphoryl&eacute; en la migration cellulaire in situe, peptides comportant des r&eacute;sidus 391-406 de FAK humaine avec la &quot;cage&quot; phosphotyrosine 397 ont &eacute;t&eacute; synth&eacute;tis&eacute;s. Bien que les &quot;cage&quot; phosphopeptides &eacute;taient stables &agrave; l&#39;activit&eacute; de la phosphatase, phosphopeptides gratuits a montr&eacute; une demi-vie d&#39;environ 10-15 min dans les Lysats cellulaires. Migration des cellules NBT-II (une lign&eacute;e de cellules de le tumeur de la vessie rat) &eacute;taient micro avec la &quot;cage&quot; peptide FAK et localement photoactiv&eacute;es en utilisant un faisceau laser focalis&eacute;. La photoactivation de peptide FAK &quot;cage&quot; dans les taches de diam&egrave;tre 8-microm sur le corps de la cellule ont conduit &agrave; l&#39;arrestation provisoire de la migration de pointe au sein d&#39;environ 1 min d&#39;irradiation. En revanche, migration du corps cellulaire n&#39;est pas inhib&eacute;e. La microinjection d&#39;un non-cage phosphoryl&eacute;e peptide FAK 397 de tyrosine dans la migration des cellules de NBT-II a &eacute;galement conduits &agrave; l&#39;arrestation de lamellaire ; Toutefois, cette approche n&#39;a pas le contr&ocirc;le temporel conf&eacute;r&eacute; par phosphopeptides &quot;cage&quot;. Photoactivation de peptides de la phosphotyrosine connexes avec des s&eacute;quences modifi&eacute;es n&#39;entra&icirc;nait pas transitoire arrestation lamellaire. Nous &eacute;mettons l&#39;hypoth&egrave;se que le peptide phosphoryl&eacute; de FAK rivalise avec la FAK endog&egrave;ne pour la liaison aux effecteurs FAK, y compris, mais non limit&eacute; &agrave;, Src et phosphoinositide 3-kinase, causant la d&eacute;r&eacute;gulation spatio-temporelle et arrestation subs&eacute;quente de lamellaire.

Photoactivation in situe d&#39;un peptide phosphotyrosine &quot;cage&quot;, d&eacute;riv&eacute; de la kinase d&#39;adh&eacute;rence focale temporairement arr&ecirc;te une extension lamellaire de simple migration des cellules tumorales.

Fokale Adh&auml;sion Kinase (FAK), ein nicht-Rezeptor-Tyrosinkinase vermittelt Integrin-basierte Zelle Signalisierung durch &Uuml;bertragung von Signalen, die Regulierung der Zellmigration, Adh&auml;sion und &Uuml;berleben von der extrazellul&auml;ren Matrix dem Zytoplasma. Nach Autophosphorylierung an Tyrosin 397, FAK bindet die Src-Homologie 2-Dom&auml;nen von Src und Phosphoinositid-3-Kinase, unter mehreren anderen m&ouml;gliche Bindung-Partnern. Um weiter die Rolle des phosphorylierten FAK in in-situ, Zellmigration Peptide bestehend aus menschlichen FAK mit K&auml;fig Phosphotyrosine 397 391-406 R&uuml;ckst&auml;nde zu untersuchen wurden synthetisiert. Obwohl der K&auml;fig Phosphopeptides Phosphatase-Aktivit&auml;t stabil waren, zeigten die freie Phosphopeptides eine Halbwertszeit von etwa 10-15 min Zelllysate. Migrieren von NBT-II-Zellen (eine Ratte Blase Tumor Zelllinie) wurden mit dem K&auml;fig FAK-Peptid und lokal mit einen fokussierten Laserstrahl Photoactivated microinjected. Die Photoaktivierung K&auml;fig FAK-Peptide in 8-Microm Durchmesser Flecken &uuml;ber den K&ouml;rper der Zelle f&uuml;hrte zur vor&uuml;bergehenden Festnahme der Vorderkante Migration innerhalb ca. 1 min von Bestrahlung. Im Gegensatz dazu war die Zellk&ouml;rper Migration nicht gehemmt. Microinjection der mit einem nicht-K&auml;fig phosphoryliert Tyrosin 397 FAK Peptid in Migration von NBT-II-Zellen zu lamell&auml;re Verhaftung gef&uuml;hrt; Allerdings fehlt dieser Ansatz die zeitliche Steuerung durch den K&auml;fig Phosphopeptides gew&auml;hrte. Photoaktivierung Verwandte Phosphotyrosine Peptide mit ver&auml;nderten Sequenzen nicht vor&uuml;bergehende lamell&auml;re Verhaftung f&uuml;hren. Wir vermuten, dass das phosphorylierte FAK-Peptid mit der endogenen FAK FAK Effektoren, einschlie&szlig;lich, aber nicht beschr&auml;nkt auf Src und Phosphoinositid Bindung konkurriert 3-Kinase, raumzeitliche Misregulation und nachfolgende lamell&auml;re Verhaftung verursachen.

In-situ Photoaktivierung von einem K&auml;fig Phosphotyrosine Peptid fokale Adh&auml;sion Kinase vor&uuml;bergehend abgeleitet h&auml;lt lamell&auml;re Erweiterung des einzigen Migrieren von Tumorzellen.

Chinasi di adesione focale (FAK), una non-recettore tirosina chinasi, media l&#39;integrina-based cell signaling con il trasferimento di segnali che regolano la sopravvivenza da matrice extracellulare, nel citoplasma, adesione e migrazione cellulare. A seguito di autophosphorylation a tirosina 397, FAK associa i domini Src homology 2 Src e fosfoinositide 3-chinasi, tra diversi altri partner possibile associazione. Per indagare ulteriormente il ruolo di FAK fosforilato nella migrazione delle cellule in situ, peptidi composto da residui 391-406 di FAK umano con gabbia phosphotyrosine 397 sono stati sintetizzati. Sebbene fosfopeptidi in gabbia sono stati stabili di attivit&agrave; fosfatasica, fosfopeptidi libero ha mostrato un&#39;emivita di circa 10-15 min in lisati cellulari. La migrazione delle cellule (una ratto vescica tumore linea cellulare) NBT-II sono stati microinjected con la gabbia del peptide FAK e localmente photoactivated utilizzando un raggio laser focalizzato. Il photoactivation del peptide FAK ingabbiato in macchie di diametro 8-microm sopra il corpo della cella ha portato all&#39;arresto temporaneo della leading edge migrazione entro circa 1 min di irradiazione. Al contrario, corpo cellulare migrazione non era inibito. Microiniezione di una gabbia fosforilato del peptide FAK tirosina 397 in migrazione cellule NBT-II ha portate anche all&#39;arresto lamellare; Tuttavia, questo approccio manca il controllo temporale offerto da fosfopeptidi in gabbia. Photoactivation di phosphotyrosine relativi peptidi con sequenze alterate non ha risultato in arresto lamellare transitoria. Ipotizziamo che il peptide fosforilato FAK compete con il FAK endogeno per l&#39;associazione di effettori FAK, compreso ma non limitato a, Src e fosfoinositide 3-chinasi, causando spatiotemporal misregolazione e conseguente arresto lamellare.

Photoactivation in situ di un peptide di phosphotyrosine Ingabbiate derivato dalla chinasi focale di adesione temporaneamente arresta lamellare estensione delle singole cellule tumorali la migrazione.

&#x7126;&#x70B9;&#x63A5;&#x7740;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (FAK) &#x975E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x52D5;&#x3001;&#x4ED8;&#x7740;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x8EE2;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6B21;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3; 397 &#x3067;, FAK Src &#x3068;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E; Src &#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC; 2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; 3-&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x3002;&#x30DC;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30CA;&#x5165;&#x308A;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3; 397 &#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; FAK &#x306E; 391 406 &#x6B8B;&#x57FA;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30EA;&#x30F3;&#x9178; FAK &#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x306E; in situ &#x3067;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3092;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30C1;&#x30BF;&#x30CB;&#x30A2;&#x30AB;&#x30E9;&#x30E0; &#x30BB;&#x30EB; lysates &#x306E;&#x7D04; 10-15 &#x5206;&#x306E;&#x534A;&#x6E1B;&#x671F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79FB;&#x884C;&#x306E; NBT II &#x7D30;&#x80DE; (&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x8180;&#x80F1;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x7DDA;) &#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E; FAK &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x96C6;&#x5149;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x3067;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x3067; microinjected &#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E; FAK &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; 8 microm &#x76F4;&#x5F84;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E; photoactivation &#x7167;&#x5C04;&#x306E;&#x7D04; 1 &#x5206;&#x4EE5;&#x5185;&#x524D;&#x7E01;&#x79FB;&#x884C;&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x306E;&#x902E;&#x6355;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x79FB;&#x884C;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x975E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3; 397 FAK &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x307E;&#x305F;&#x30E9;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x902E;&#x6355;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x79FB;&#x884C;&#x306E; NBT II &#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x95A2;&#x9023;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5909;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E; Photoactivation &#x306E;&#x904E;&#x6E21;&#x30E9;&#x30E1;&#x30E9;&#x902E;&#x6355;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E; FAK &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; FAK FAK &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x3001;&#x542B;&#x3080;&#x304C;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;Src &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x7AF6;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7ACB;&#x3066;&#x308B; 3 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593; misregulation &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x30E9;&#x30E1;&#x30E9;&#x902E;&#x6355;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7126;&#x70B9;&#x63A5;&#x7740;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x7531;&#x6765;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8; &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E; in situ photoactivation &#x30E9;&#x30E1;&#x30E9;&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50; 1 &#x3064;&#x79FB;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x505C;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xCD08;&#xC810; &#xC811;&#xCC29; &#xB2C8; (&#xD30D;)-&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; integrin &#xAE30;&#xBC18; &#xC140; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, &#xC811;&#xCC29;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC;. &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; 397&#xC5D0; autophosphorylation&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD30D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; Src &#xBC0F; phosphoinositide&#xC758; Src homology 2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; 3-kinase, &#xB2E4;&#xB978; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xC911;. &#xCD94;&#xAC00; &#xC870;&#xC0AC; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; phosphorylated &#xD30D;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; 391-406 &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; phosphotyrosine 397&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD30D;&#xC758; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xD569;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; phosphopeptides &#xC548;&#xC815; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xBB34;&#xB8CC; phosphopeptides &#xC140; lysates&#xC5D0; &#xC57D; 10-15 &#xBD84;&#xC758; &#xBC18;&#xAC10;&#xAE30;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; NBT II &#xC140; (&#xC950; &#xBC29;&#xAD11; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xC120;) &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; &#xD30D; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC;&#xC640; &#xB85C;&#xCEEC; &#xCD08;&#xC810;&#xB41C; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xBE54;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; photoactivated&#xC640; microinjected &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xC758; &#xC57D; 1 &#xBD84; &#xC774;&#xB0B4; &#xCCA8;&#xB2E8; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC758; &#xC784;&#xC2DC; &#xCCB4;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC140; &#xBAB8; 8 microm &#xC9C1;&#xACBD; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; &#xD30D; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; photoactivation. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC140; &#xBC14;&#xB514; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294;. Microinjection &#xBE44; &#xAC07;&#xD78C;&#xC758; phosphorylated &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; 397 &#xD30D; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xCCB4;&#xD3EC;;&#xC744; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; NBT II &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; phosphopeptides&#xB85C; &#xC5EC;&#xC720; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xBD80;&#xC871; &#xD558;&#xB2E4;. &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC640; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; phosphotyrosine &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; Photoactivation &#xACFC;&#xB3C4; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xCCB4;&#xD3EC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; phosphorylated &#xD30D; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB0B4; &#xD30D; &#xD30D; &#xC774;&#xD399;&#xD130;, &#xD558; &#xB418;&#xC774; &#xAD6D;&#xD55C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC74C; Src &#xBC0F; phosphoinositide &#xB4F1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0;&#xC640; &#xACBD;&#xC7C1; &#xAC00;&#xC124; 3-kinase, spatiotemporal misregulation&#xC640; &#xD6C4;&#xC18D; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xCCB4;&#xD3EC; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD08;&#xC810; &#xC811;&#xCC29; &#xD0A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; phosphotyrosine &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; photoactivation &#xB2E8;&#xC77C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xD655;&#xC7A5; &#xC911;&#xB2E8;.

Quinasa de adhesi&oacute;n focal (FAK), una no receptores tirosina quinasa, media c&eacute;lula base de integrina se&ntilde;alizaci&oacute;n mediante la transferencia de las se&ntilde;ales de regulaci&oacute;n de la migraci&oacute;n celular, adherencia y supervivencia de la matriz extracelular al citoplasma. Tras autophosphorylation en tirosina 397, FAK une a los dominios de la homolog&iacute;a 2 de fuente de Src y fosfatidilinositol 3-quinasa, entre varios otros socios de la Uni&oacute;n posible. Para investigar m&aacute;s el papel de FAK fosforilada en migraci&oacute;n celular in situ, p&eacute;ptidos compuesta por residuos 391-406 de FAK humano con jaula phosphotyrosine 397 fueron sintetizados. Aunque la jaula fosfotoproteida fueron estable para la actividad de la fosfatasa, la fosfotoproteida libre demostr&oacute; una vida media de aproximadamente 10-15 min en lisados celulares. Migraci&oacute;n de las c&eacute;lulas de NBT-II (una rata vejiga tumor l&iacute;nea celular) fueron microinyectada con el p&eacute;ptido FAK enjaulado y localmente fotoactivado con un rayo l&aacute;ser enfocado. La fotoactivaci&oacute;n de p&eacute;ptido FAK enjaulado en puntos de di&aacute;metro 8 microm sobre el cuerpo de la c&eacute;lula conducido a la detenci&oacute;n temporal de la migraci&oacute;n de vanguardia dentro de aproximadamente 1 minuto de irradiaci&oacute;n. Por el contrario, migraci&oacute;n de c&eacute;lulas de cuerpo no fue inhibida. Microinyecci&oacute;n de un no-enjaulado fosforila p&eacute;ptido FAK 397 de tirosina en la migraci&oacute;n de las c&eacute;lulas de NBT-II tambi&eacute;n conducida a la detenci&oacute;n laminar; sin embargo, este enfoque carece el control temporal otorgado por la fosfotoproteida enjaulado. La fotoactivaci&oacute;n de p&eacute;ptidos phosphotyrosine relacionados con secuencias alteradas no produjo detenci&oacute;n transitoria de laminar. Presumimos que el p&eacute;ptido FAK fosforilado compite con la FAK end&oacute;geno para atar a los efectores FAK, incluyendo, sin limitarse a, Src y fosfatidilinositol 3-quinasa, causando misregulation espacio-temporal y posterior detenci&oacute;n laminar.

Fotoactivaci&oacute;n in situ de un p&eacute;ptido de fosfotirosina enjaulado derivado de la quinasa de adhesi&oacute;n focal temporalmente detiene laminar extensi&oacute;n de c&eacute;lulas tumorales migrar.

Palladium-Nanopartikel auf Rutil TiO(2) 110-1 x 1 unterst&uuml;tzt wurden mit den erg&auml;nzenden Techniken von scanning tunneling Mikroskopie und x-ray Photoemissions-Elektronenmikroskopie untersucht. Zwei verschiedene Arten von Palladium-Nanopartikel sind beobachtete, n&auml;mlich lange Nanowires bis zu 1000 nm lang und kleinere dotlike Funktionen mit Durchmessern von 80 bis 160 nm. X-ray Photoemissions-Elektronenmikroskopie zeigt, dass die Nanopartikel aus metallischem Palladium, getrennt durch die nackten TiO(2)(110)-Oberfl&auml;che bestehen.

Monomolekularen metallische Nanodr&auml;hte auf einem dielektrischen Tr&auml;ger: Pd auf Rutil TiO2(110).

Le nanoparticelle di Palladio supportate su rutilo TiO(2) 110-1 x 1 sono state studiate usando le tecniche complementari di scanning tunneling microscopy e microscopia a raggi x fotoemissione. Due distinti tipi di nanoparticelle di Palladio sono osservati, vale a dire lungo nanofili fino a 1000 nm a lungo e pi&ugrave; piccoli dotlike caratteristiche con diametri che vanno da 80-160 nm. Microscopia a raggi x Emissione fotoelettrica rivela che le nanoparticelle sono composte di palladio metallico, separato dalla superficie TiO(2)(110) nuda.

Nanofili metallici auto-assemblati su un supporto dielettrico: Pd su rutilo TiO2(110).

&#x94AF;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x5BF9;&#x91D1;&#x7EA2;&#x77F3; TiO(2) 110-1 x 1 &#x652F;&#x6301;&#x4EA6;&#x66FE;&#x4F7F;&#x7528;&#x626B;&#x63CF;&#x96A7;&#x9053;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x5149;&#x7535;&#x5B50;&#x80FD;&#x8C31;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x8865;&#x5145;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x4E24;&#x79CD;&#x622A;&#x7136;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x94AF;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x90FD;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#xFF0C;&#x5373;&#x957F;&#x5230;&#x76F4;&#x5F84;&#x4ECB;&#x4E4E; 80-160 nm 1000 nm &#x957F;&#xFF0C;&#x548C;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684; dotlike &#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7EBF;&#x3002;X &#x5C04;&#x7EBF;&#x5149;&#x7535;&#x5B50;&#x80FD;&#x8C31;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x91D1;&#x5C5E;&#x94AF;&#xFF0C;&#x88F8;&#x9732;&#x7684; TiO(2)(110) &#x8868;&#x9762;&#x9694;&#x5F00;&#x3002;

&#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7EBF;&#x4ECB;&#x8D28;&#x652F;&#x6301;&#xFF1A; Pd &#x91D1;&#x7EA2;&#x77F3; TiO2(110) &#x4E0A;&#x7684;&#x3002;

Palladium nanoparticles supported on rutile TiO(2)(110)-1 x 1 have been studied using the complementary techniques of scanning tunneling microscopy and X-ray photoemission electron microscopy. Two distinct types of palladium nanoparticles are observed, namely long nanowires up to 1000 nm long, and smaller dotlike features with diameters ranging from 80-160 nm. X-ray photoemission electron microscopy reveals that the nanoparticles are composed of metallic palladium, separated by the bare TiO(2)(110) surface.

Self-assembled metallic nanowires on a dielectric support: Pd on rutile TiO2(110).

Nanoparticules de palladium support&eacute;s rutile TiO(2) 110-1 x 1 ont &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;s en utilisant les techniques compl&eacute;mentaires de tunneling microscope &agrave; balayage et au microscope &eacute;lectronique de photo&eacute;mission aux rayons x. Deux types distincts de nanoparticules de palladium sont observ&eacute;s, &agrave; savoir long nanofils jusqu&#39;&agrave; 1000 nm long et petits dotlike caract&eacute;ristiques avec des diam&egrave;tres allant de 80 &agrave; 160 nm. Au microscope &eacute;lectronique de photo&eacute;mission aux rayons x r&eacute;v&egrave;le que les nanoparticules sont compos&eacute;s de palladium m&eacute;tallique, s&eacute;par&eacute; par la surface de TiO(2)(110) nu.

Auto-assembl&eacute;s nanofils m&eacute;talliques sur un support di&eacute;lectrique: Pd sur rutile TiO2(110).

&#x30EB;&#x30C1;&#x30EB; TiO(2) 110-1 x 1 &#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8; &#x30D1;&#x30E9;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x8D70;&#x67FB;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068; x &#x7DDA;&#x5149;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;.2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7A2E;&#x985E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x9577;&#x3044;&#x30CA;&#x30CE;&#x30EF;&#x30A4;&#x30E4; 1000 nm &#x306E;&#x9577;&#x3044;&#x3068;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044; dotlike &#x7279;&#x5FB4; 80 160 nm &#x304B;&#x3089;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x76F4;&#x5F84;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x307E;&#x3067;&#x3067;&#x3059;&#x3002;X &#x7DDA;&#x5149;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x88F8; TiO(2)(110) &#x8868;&#x9762;&#x3067;&#x533A;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8A98;&#x96FB;&#x4F53;&#x652F;&#x63F4;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30CA;&#x30CE;&#x30EF;&#x30A4;&#x30E4;&#x30FC;: Pd &#x30EB;&#x30C1;&#x30EB;&#x578B;&#x4E8C;&#x9178;&#x5316;&#x30C1;&#x30BF;&#x30F3;&#x4E0A;&#x3002;

&#xD314;&#xB77C;&#xB4D0; &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790; rutile TiO(2) (110)-1 x 1&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xB418;&#xB294; &#xD130;&#xB110;&#xB9C1; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xBC0F; x-&#xC120; photoemission &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xBCF4;&#xC644;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD615;&#xC2DD;&#xC758; &#xD314;&#xB77C;&#xB4D0; &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790;&#xB294; &#xC9C1;&#xACBD; 80-160 nm&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xC5F4; 1000 nm &#xAE38;&#xACE0; &#xC791;&#xC740; dotlike &#xD2B9;&#xC9D5;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xAD00;&#xCC30;, &#xC989; &#xAE34; &#xC815;. X-photoemission &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;&#xB294; &#xB098;&#xB178; &#xAE08;&#xC18D; &#xD314;&#xB77C;&#xB4D0;, &#xB9E8; &#xC190;&#xC73C;&#xB85C; TiO(2)(110) &#xD45C;&#xBA74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC720; &#xC804;&#xCCB4; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xC870;&#xB9BD;&#xB41C; &#xAE08;&#xC18D; &#xC815;: rutile TiO2(110) Pd.

Nanopart&iacute;culas de paladio soportadas en rutilo TiO(2) 110-1 x 1 han sido estudiadas mediante las t&eacute;cnicas complementarias de microscop&iacute;a de barrido de efecto t&uacute;nel y microscop&iacute;a de rayos x fotoemisi&oacute;n. Dos tipos distintos de nanopart&iacute;culas de paladio son observados, es decir, largo nanohilos hasta 1000 nm largo y m&aacute;s peque&ntilde;o dotlike caracter&iacute;sticas con di&aacute;metros comprendidos entre 80-160 nm. Microscop&iacute;a de rayos x fotoemisi&oacute;n revela que las nanopart&iacute;culas se componen de paladio met&aacute;lico, separado por la superficie TiO(2)(110) desnuda.

Autoensambladas nanohilos met&aacute;licos sobre un soporte diel&eacute;ctrico: Pd en rutilo TiO2(110).

Chromophore assist&eacute;e par laser inactivation (CALI) est une technique qui utilise l&#39;irradiation du chromophores imm&eacute;diates &agrave; une prot&eacute;ine cible pour d&eacute;sactiver la fonction. Auparavant, enhanced green fluorescent protein (EGFP) m&eacute;di&eacute;e par CALI a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour inactiver les prot&eacute;ines EGFP-fusion d&#39;une mani&egrave;re spatio-temporel d&eacute;finie dans les cellules, mais ne conna&icirc;t pas le m&eacute;canisme d&#39;inactivation. Pour aider &agrave; &eacute;lucider le m&eacute;canisme d&#39;inactivation de prot&eacute;ine m&eacute;di&eacute;e par la prot&eacute;ine fluorescente CALI ([FP]-CALI), les activit&eacute;s de fusions purifi&eacute;e glutathion-S-transf&eacute;rase-FP (GST-EXFP) ont &eacute;t&eacute; mesur&eacute;es apr&egrave;s l&#39;irradiation laser in vitro. Extincteurs de radicaux libres et de l&#39;oxyg&egrave;ne singulet ainsi que l&#39;&eacute;limination de l&#39;oxyg&egrave;ne inhib&eacute; CALI, indiquant l&#39;implication des esp&egrave;ces r&eacute;actives de l&#39;oxyg&egrave;ne (ROS). Les concentrations plus &eacute;lev&eacute;es de prot&eacute;ines, turbidit&eacute; apr&egrave;s CALI a augment&eacute; significativement indiquant la r&eacute;ticulation des prot&eacute;ines de fusion imm&eacute;diate sugg&eacute;rant qu&#39;un dommage de r&eacute;sidus sur la surface de la prot&eacute;ine, &eacute;loign&eacute;e du site actif, entra&icirc;ne l&#39;inactivation. Des exp&eacute;riences de contr&ocirc;le supprim&eacute; chauffage &eacute;chantillon comme une cause possible de ces effets. Diff&eacute;rents mutants FP fusionn&eacute;s &agrave; TPS varient dans leur efficacit&eacute; de CALI dans la prot&eacute;ine fluorescente verte (EGFP) ordonnance am&eacute;lior&eacute; &gt; am&eacute;lior&eacute; la prot&eacute;ine fluorescente jaune (EYFP) &gt; am&eacute;lior&eacute; prot&eacute;ine fluorescente cyan (ECFP), tout en une construction GST qui lie les r&eacute;sultats liant (FlAsH) ax&eacute;e sur la fluoresc&eacute;ine arsenical &eacute;pingle l&#39;efficacit&eacute; CALI significativement plus &eacute;lev&eacute;e que n&#39;importe lequel des prot&eacute;ines fluorescentes (XFPs) test&eacute;. Il est probable que la hi&eacute;rarchie de l&#39;efficacit&eacute; XFP refl&egrave;te l&#39;&eacute;quilibre entre les offices r&eacute;cepteurs qui sont emprisonn&eacute;es dans la structure XFP et causer un fluorophore et chromophore blanchiment et celles qui s&#39;&eacute;chappent &agrave; effet CALI des prot&eacute;ines imm&eacute;diates.

M&eacute;canisme du chromophore assist&eacute;e par laser inactivation employant des prot&eacute;ines fluorescentes.

&#x53D1;&#x8272;&#x56E2;&#x534F;&#x52A9;&#x6FC0;&#x5149;&#x706D;&#x6D3B; (&#x5361;&#x5229;) &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8F90;&#x7167;&#x751F;&#x8272;&#x56E2;&#x63A5;&#x8FD1;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x706D;&#x6D3B;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (EGFP) &#x4ECB;&#x5BFC;&#x5361;&#x5229;&#x5DF2;&#x7528;&#x4E8E;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x6682;&#x65F6;&#x5B9A;&#x4E49;&#x65B9;&#x5F0F;&#x505C;&#x7528;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4F46;&#x706D;&#x6D3B;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x4E4B;&#x6570;&#x3002;&#x4EE5;&#x5E2E;&#x52A9;&#x6F84;&#x6E05;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x706D;&#x6D3B;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x5361;&#x5229; ([FP]-&#x5361;&#x5229;)&#xFF0C;&#x6FC0;&#x5149;&#x7167;&#x5C04;&#x4F53;&#x5916;&#x540E;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86;&#x7EAF;&#x51C0;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;-S-&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;-FP (GST EXFP&#xFF09; &#x878D;&#x5408;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x5355;&#x7EBF;&#x6001;&#x6C27;&#x548C;&#x81EA;&#x7531;&#x57FA;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x6DEC;&#x706D;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6D88;&#x9664;&#x6C27;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5361;&#x5229;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27; (ROS) &#x53C2;&#x4E0E;&#x3002;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5F88;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x6D4A;&#x5EA6;&#x540E;&#x5361;&#x5229;&#x589E;&#x52A0;&#x663E;&#x8457;&#x8868;&#x660E;&#x4EA4;&#x8054;&#x7684;&#x8FD1;&#x4F3C;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x6697;&#x793A;&#x8BE5;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x9065;&#x8FDC;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x4E2D;&#x5931;&#x6D3B;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x63A7;&#x5236;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x5220;&#x9664;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6548;&#x679C;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6837;&#x672C;&#x52A0;&#x70ED;&#x3002;&#x5728;&#x5176;&#x987A;&#x5E8F;&#x589E;&#x5F3A;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (EGFP) &#x7684;&#x5361;&#x5229;&#x6548;&#x7387;&#x6709;&#x6240;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; GST &#x878D;&#x5408;&#x4E0D;&#x540C; FP &#x7A81;&#x53D8; &gt; &#x589E;&#x5F3A;&#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (EYFP) &gt; &#x589E;&#x5F3A;&#x84DD;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (ECFP)&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x5C06;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x7684;&#x7837;&#x53D1;&#x5939;&#x6D3B;&#x9875;&#x5939; (FlAsH) &#x7ED3;&#x679C;&#x660E;&#x663E;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x5361;&#x5229;&#x6548;&#x7387;&#x6BD4;&#x4EFB;&#x4F55;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (XFPs) &#x7684;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E2D;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; GST &#x6784;&#x9020;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684; XFP &#x6548;&#x529B;&#x5C42;&#x6B21;&#x7ED3;&#x6784;&#x53CD;&#x6620;&#x4E86;&#x88AB;&#x56F0; xfp &#x6A21;&#x5757;&#x7ED3;&#x6784;&#x5185;&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x6F02;&#x767D;&#x7684;&#x53D1;&#x8272;&#x56E2;&#x7684; ROS &#x548C;&#x90A3;&#x4E9B;&#x9003;&#x5230;&#x6548;&#x679C;&#x8FD1;&#x4F3C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5361;&#x5229;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5E73;&#x8861;&#x3002;

&#x53D1;&#x8272;&#x56E2;&#x673A;&#x5236;&#x534F;&#x52A9;&#x6FC0;&#x5149;&#x706D;&#x6D3B;&#x96C7;&#x7528;&#x8424;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

Chromophore assisted laser inactivation (CALI) is a technique that uses irradiation of chromophores proximate to a target protein to inactivate function. Previously, enhanced green fluorescent protein (EGFP) mediated CALI has been used to inactivate EGFP-fusion proteins in a spatio-temporally defined manner within cells, but the mechanism of inactivation is unknown. To help elucidate the mechanism of protein inactivation mediated by fluorescent protein CALI ([FP]-CALI), the activities of purified glutathione-S-transferase-FP (GST-EXFP) fusions were measured after laser irradiation in vitro. Singlet oxygen and free radical quenchers as well as the removal of oxygen inhibited CALI, indicating the involvement of a reactive oxygen species (ROS). At higher concentrations of protein, turbidity after CALI increased significantly indicating cross-linking of proximate fusion proteins suggesting that damage of residues on the surface of the protein, distant from the active site, results in inactivation. Control experiments removed sample heating as a possible cause of these effects. Different FP mutants fused to GST vary in their CALI efficiency in the order enhanced green fluorescent protein (EGFP) > enhanced yellow fluorescent protein (EYFP) > enhanced cyan fluorescent protein (ECFP), while a GST construct that binds fluorescein-based arsenical hairpin binder (FlAsH) results in significantly higher CALI efficiency than any of the fluorescent proteins (XFPs) tested. It is likely that the hierarchy of XFP effectiveness reflects the balance between ROS that are trapped within the XFP structure and cause fluorophore and chromophore bleaching and those that escape to effect CALI of proximate proteins.

Mechanism of chromophore assisted laser inactivation employing fluorescent proteins.

Chromophor assistierte Laser Inaktivierung (CALI) ist eine Technik, die Bestrahlung von chromophoren naheliegende an ein Zielprotein wird verwendet, um die Funktion zu deaktivieren. Zuvor, verbesserte gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (EGFP) vermittelte CALI wurde benutzt, um EGFP-Schmelzverfahren Proteine in einer r&auml;umlich-zeitlich definierten Weise innerhalb von Zellen zu inaktivieren, aber der Mechanismus der Inaktivierung ist unbekannt. Zu helfen, den Mechanismus der Protein-Inaktivierung von fluoreszierenden Proteins CALI vermittelt zu erhellen ([FP]-CALI), die Aktivit&auml;ten der gereinigten Glutathion-S-Transferase-FP (GST-EXFP) Fusionen nach Laserbestrahlung in-vitro gemessen wurden. Singulett-Sauerstoff und freien Radikalen Quencher sowie die Entfernung von Sauerstoff gehemmt CALI, angibt, die Einbeziehung der eine reaktive Sauerstoffspezies (ROS). Bei h&ouml;heren Konzentrationen des Proteins erh&ouml;hte Tr&uuml;bung nach CALI deutlich angibt, Vernetzung der naheliegende Fusionsproteine vorschlagen diesen Schaden R&uuml;ckst&auml;nde auf der Oberfl&auml;che des Proteins, weit entfernt von der aktiven-Site f&uuml;hrt Inaktivierung. Regelungs-Experimente entfernt Probenerw&auml;rmung als eine m&ouml;gliche Ursache f&uuml;r diese Effekte. Verschiedene FP-Mutanten verschmolzen zu GST variieren in ihrer Effizienz CALI in der Reihenfolge verbessert gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (EGFP) &gt; verbessert gelbes fluoreszierendes Protein (EYFP) &gt; gesteigert, Cyan fluoreszierenden Proteins (ECFP), gleichzeitig ein GST-Konstrukt, das bindet Kurb&auml;der Haarnadel Fluoreszein-basierte Bindemittel (FlAsH) Ergebnisse deutlich h&ouml;heren CALI Wirkungsgrad als alle die fluoreszierende Proteine (XFPs) getestet. Es ist wahrscheinlich, dass die Hierarchie der XFP Wirksamkeit widerspiegelt das Gleichgewicht zwischen ROS, die innerhalb der XFP-Struktur gefangen sind und Fluorophor und Chromophor bleichen verursachen und solche, die Wirkung CALI naheliegende Proteine zu entkommen.

Mechanismus der Chromophor assistierte Laser Inaktivierung fluoreszierende Proteine zu besch&auml;ftigen.

Cromoforo assistita laser inattivazione (CALI) &egrave; una tecnica che utilizza l&#39;irradiazione di cromofori proximate ad una proteina bersaglio per inattivare la funzione. In precedenza, enhanced green fluorescent protein (EGFP) mediato CALI &egrave; stato usato per inattivare le proteine EGFP-fusion in maniera spazio-temporalmente definita all&#39;interno delle cellule, ma il meccanismo di inattivazione &egrave; sconosciuto. Per contribuire a delucidare il meccanismo di inattivazione della proteina mediata dalla proteina fluorescente CALI ([FP]-CALI), le attivit&agrave; di fusioni purificato glutatione-S-transferasi-FP (GST-EXFP) sono state misurate dopo irradiazione laser in vitro. Dissetanti ossigeno e radicali liberi singoletto, nonch&eacute; la rimozione di ossigeno inibito CALI, che indica il coinvolgimento di una specie reattive dell&#39;ossigeno (ROS). A concentrazioni pi&ugrave; elevate di proteine, torbidit&agrave; dopo CALI aumentato significativamente indicando il cross-linking delle proteine di fusione proximate suggerendo che i danni dei residui sulla superficie della proteina, distante dal sito attivo, risultati di inattivazione. Esperimenti di controllo rimosso il riscaldamento del campione come una possibile causa di questi effetti. Diversi mutanti FP fusi a GST variano nella loro efficienza CALI nella proteina fluorescente verde ordine enhanced (EGFP) &amp;gt; enhanced proteina fluorescente gialla (EYFP) &amp;gt; enhanced ciano proteina fluorescente (ECFP), mentre un costrutto GST che associa tornante arsenicale fluorescina-base legante (FlAsH) risultati in efficienza CALI significativamente maggiore rispetto a qualsiasi delle proteine fluorescenti (XFPs) testato. &Egrave; probabile che la gerarchia di efficacia XFP riflette l&#39;equilibrio tra ROS che sono intrappolati all&#39;interno della struttura XFP e causare fluoroforo e cromoforo sbianca e quelli che sfuggono all&#39;effetto CALI delle proteine proximate.

Meccanismo del cromoforo assistita inattivazione laser che impiegano le proteine fluorescenti.

&#x767A;&#x8272;&#x56E3;&#x30A2;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8; &#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; &#xFF08;&#x81EA;&#x8CE0;&#x8CAC;&#xFF09; &#x7167;&#x5C04;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x8FD1;&#x63A5;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x624B;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x3001;&#x5F37;&#x5316;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (EGFP) &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30AB;&#x30EA; EGFP &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x52A9;&#x3051;&#x306B; ([FP]-&#x30AB;&#x30EA;)&#x3001;in vitro &#x3067;&#x306E;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x7167;&#x5C04;&#x5F8C;&#x7CBE;&#x88FD;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;-S-&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;-FP &#xFF08;GST-EXFP) &#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x91CD;&#x9805;&#x9178;&#x7D20;&#x30FB; &#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E9;&#x30B8;&#x30AB;&#x30EB;&#x306E;&#x6D88;&#x3059;&#x7269;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x9178;&#x7D20;&#x9664;&#x53BB;&#x30AB;&#x30EA;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E; (ROS) &#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x306F;, &#x6FC1;&#x5EA6;&#x30AB;&#x30EA;&#x5F8C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x305D;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x304B;&#x3089;&#x9060;&#x3044;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x8FD1;&#x63A5;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x67B6;&#x6A4B;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5236;&#x5FA1;&#x5B9F;&#x9A13;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x6696;&#x623F;&#x304C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7570;&#x306A;&#x308B; FP &#x5909;&#x7570;&#x306B; GST &#x878D;&#x5408;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x30AB;&#x30EA;&#x52B9;&#x7387;&#x5F37;&#x5316;&#x9806;&#x5E8F;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (EGFP) &#x76EE;&#x9EC4;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (EYFP) &#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x76EE;&#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30EC;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; &#x30D2;&#x7D20;&#x306E;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC; &#xFF08;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#xFF09; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (XFPs) &#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x30AB;&#x30EA;&#x52B9;&#x7387;&#x3067; GST &#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (&#x751F;&#x3055;) &#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;XFP &#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x968E;&#x5C64;&#x3001;XFP &#x69CB;&#x9020;&#x5185;&#x306B;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;fluorophore &#x3068;&#x6F02;&#x767D;&#x767A;&#x8272;&#x56E3;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059; ROS &#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x30AB;&#x30EA;&#x8FD1;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8131;&#x51FA;&#x306E;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x767A;&#x8272;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xBC1C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; (&#xCE98; &#xB9AC;) chromophores proximate &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC220; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (EGFP) &#xC911;&#xC7AC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, &#xAC15;&#xD654; &#xB41C; &#xCE7C; &#xB9AC; &#xC140; &#xB0B4;&#xC758; spatio temporally &#xC815;&#xC758; &#xBC29;&#xC2DD; EGFP &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294;. &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCE98; &#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; ([FP]-&#xCE7C; &#xB9AC;), &#xC815;&#xD654; glutathione-S-&#xC804;&#xC774;-FP (gst&#xAC00;-EXFP) fusions&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xCCB4; &#xC678; &#xCE21;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC0B0;&#xC18C;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xB85C; &#xC11C; &#xB0B4;&#xC758; &#xC0B0;&#xC18C;&#xC640; &#xC790;&#xC720; &#xB77C; &#xB514; &#xCE7C; quenchers &#xC800;&#xD574; &#xCE98; &#xB9AC;, &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885; (&#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;)&#xC758; &#xAC1C;&#xC785;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C; &#xB9AC; &#xD6C4; &#xD0C1;&#xB3C4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xADF8; &#xD53C;&#xD574; &#xACB0;&#xACFC;: &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA40;&#xB9AC; &#xB5A8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC81C;&#xC548; proximate &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC81C;&#xC5B4; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC0D8;&#xD50C; &#xB09C;&#xBC29; &#xC2DC;&#xC124; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xAC70; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xBB38; &#xAC15;&#xD654; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (EGFP)&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C; &#xB9AC; &#xD6A8;&#xC728; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; GST&#xB97C; &#xC735;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; FP &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E4; &amp;gt; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (EYFP) &#xD5A5;&#xC0C1; &amp;gt; &#xC2DC;&#xC548;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (ECFP) &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (XFPs)&#xC758; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xB192;&#xC740; &#xCE98; &#xB9AC; &#xD6A8;&#xC728;&#xC5D0;&#xC11C; arsenical &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; fluorescein &#xAE30;&#xBC18; &#xBC14;&#xC778;&#xB354; (&#xD50C;&#xB798;&#xC2DC;) &#xACB0;&#xACFC; GST &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C;. XFP &#xD6A8;&#xACFC; &#xACC4;&#xCE35; &#xAD6C;&#xC870; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8; XFP &#xAD6C;&#xC870; &#xC548;&#xC5D0; &#xAC07;&#xD600; &#xACE0; fluorophore &#xBC0F; &#xD45C;&#xBC31; &#xBC1C; &#xC6D0;&#xC778; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xACFC; proximate &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCE7C; &#xB9AC;&#xB97C; &#xD0C8;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xADF8; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xADE0;&#xD615;&#xC744; &#xBC18;&#xC601; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB192;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB860;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xCC44;&#xC6A9;.

Crom&oacute;foro asistida por l&aacute;ser inactivaci&oacute;n (CALI) es una t&eacute;cnica que utiliza la irradiaci&oacute;n de crom&oacute;foros pr&oacute;ximas a una prote&iacute;na diana para desactivar la funci&oacute;n. Previamente, mejorado green fluorescent protein (EGFP) mediada por CALI se ha utilizado para inactivar prote&iacute;nas de fusi&oacute;n-EGFP de manera spatio-temporal definida dentro de las c&eacute;lulas, pero se desconoce el mecanismo de inactivaci&oacute;n. Para ayudar a aclarar el mecanismo de inactivaci&oacute;n de la prote&iacute;na mediada por la prote&iacute;na fluorescente CALI ([FP]-CALI), se midieron las actividades de fusiones purificada glutati&oacute;n-S-transferasa-FP (GST-EXFP) despu&eacute;s de la irradiaci&oacute;n l&aacute;ser in vitro. Extintores de ox&iacute;geno y radicales libres de camiseta, as&iacute; como la eliminaci&oacute;n de ox&iacute;geno inhibe CALI, indicando la participaci&oacute;n de una especies de ox&iacute;geno reactivo (ROS). En concentraciones m&aacute;s altas de prote&iacute;na, turbidez despu&eacute;s de CALI aument&oacute; significativamente, lo que indica Cross-linking de prote&iacute;nas de fusi&oacute;n proximal sugiriendo que da&ntilde;an de residuos en la superficie de la prote&iacute;na, distante del sitio activo, resultados de inactivaci&oacute;n. Experimentos de control hab&iacute;an quitado el calentamiento de la muestra como una posible causa de estos efectos. Diferentes mutantes FP fusionados a GST var&iacute;an en su eficiencia de CALI en la prote&iacute;na verde fluorescente de orden mejorado (EGFP) &gt; mejorado prote&iacute;na fluorescente amarilla (EYFP) &gt; mejorado cian prote&iacute;na verde fluorescente (ECFP), mientras que una construcci&oacute;n de GST que une resultados de carpeta (FlAsH) horquilla arsenical fluoresce&iacute;na-basado en la eficacia de CALI significativamente m&aacute;s alta que cualquiera de las prote&iacute;nas fluorescentes (XFPs) probado. Es probable que la jerarqu&iacute;a de eficacia XFP refleja el equilibrio entre ROS que est&aacute;n atrapados dentro de la estructura XFP y que causan fluor&oacute;foro crom&oacute;foro blanqueo y aquellos que escapan al efecto CALI de prote&iacute;nas pr&oacute;ximas.

Mecanismo del crom&oacute;foro asistida por l&aacute;ser inactivaci&oacute;n empleando prote&iacute;nas fluorescentes.

&#x4F5C;&#x8005;&#x63D0;&#x51FA;&#xFF0C;&#x8FBE;&#x5230;&#x6700;&#x5927;&#x540E;&#x9A8C; &#xFF08;&#x56FE;&#xFF09; &#x4F30;&#x8BA1;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x6A21;&#x7CCA;&#x548C;&#x566A;&#x58F0;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x6709;&#x6548;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x56FE;&#x50CF;&#x5206;&#x4E3A;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x72EC;&#x7ACB;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x533A;&#x57DF;&#x88AB;&#x4EFF;&#x7167;&#x4E0E;&#x4E8B;&#x5148;&#x7684; WSS &#x9AD8;&#x65AF;&#x3002;&#x53E4;&#x5178;&#x7EF4;&#x7EB3;&#x6EE4;&#x6CE2;&#x7406;&#x8BBA;&#x7528;&#x4E8E;&#x5728;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#xFF0C;&#x5012;&#x5367;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x96C6;&#x5408;&#x7684;&#x4EA4;&#x96C6;&#x7684;&#x5730;&#x56FE;&#x4F30;&#x8BA1;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x529E;&#x6CD5;&#x4E0E;&#x751F;&#x6210;&#x4E00;&#x7EC4;&#x51F8;&#x96C6;&#x3002;&#x62DF;&#x8BAE;&#x7684;&#x7B97;&#x6CD5;&#x4F7F;&#x7528;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x57FA;&#x7840;&#x5206;&#x5272;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63CF;&#x8FF0;&#x786E;&#x5B9A;&#x5206;&#x5272;&#x548C;&#x6539;&#x8FDB;&#x5B83;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;&#x7B97;&#x6CD5;&#x662F;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x56FE;&#x50CF;&#x6062;&#x590D;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5904;&#x7406;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x7EF4;&#x7EB3;&#x6EE4;&#x6CE2;&#x800C;&#x53C8;&#x4E0D;&#x727A;&#x7272;&#x7684;&#x8FC7;&#x6EE4;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7B80;&#x5355;&#x8BA1;&#x7B97;&#x6709;&#x6548;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;&#x8BE5;&#x7B97;&#x6CD5;&#x4E5F;&#x662F;&#x4ECE;&#x7406;&#x8BBA;&#x7684;&#x89D2;&#x5EA6;&#x770B;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7EF4;&#x7EB3;&#x6EE4;&#x6CE2;&#x548C;&#x9006;&#x6EE4;&#x6CE2;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5206;&#x5272;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E0D;&#x8981;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x663E;&#x793A;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x662F;&#x4E00;&#x822C;&#x56FE;&#x50CF;&#x91CD;&#x5EFA;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x6700;&#x4F73;&#x529E;&#x6CD5;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#x5F15;&#x7528;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x4E2D;&#x5177;&#x4F53;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x5EA6;&#x663E;&#x793A;&#x4F18;&#x5F02;&#x7684;&#x6027;&#x80FD;&#x3002;

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&#xC800;&#xC790; &#xCD5C;&#xB300; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xD750;&#xB9BC; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC0F; &#xC7A1;&#xC74C;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; posteriori (&#xC9C0;&#xB3C4;) &#xCD94;&#xC815; &#xACC4;&#xC0B0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xBC95; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB294; &#xD1B5;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xC5ED;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xB258;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; WSS &#xAC00;&#xC6B0;&#xC2DC;&#xC548; &#xD504;&#xB77C;&#xC640; &#xBAA8;&#xB378;&#xC740;. &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; &#xC704; &#xB108; &#xD544;&#xD130; &#xC774;&#xB860; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xAD50;&#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xCD94;&#xC815; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xACF5;&#xAC04;&#xC5D0; &#xBCFC;&#xB85D; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC138;&#xBD84;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC744; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xD654;&#xC758; &#xC758;&#xBBF8;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294;. &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;&#xC740; &#xC704; &#xB108; &#xD544;&#xD130;&#xB9C1; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC758; &#xC804;&#xC0B0; &#xB2E8;&#xC21C;&#xC744; &#xD76C;&#xC0DD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0;&#xB3C4; &#xD544;&#xD130;&#xB9C1;&#xC758; &#xB2E8;&#xC810;&#xC744; &#xB2E4;&#xB8E8;&#xB294; &#xACC4;&#xC0B0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xB2E8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xBB38;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569;. &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xC774;&#xB860;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xD544;&#xD130;&#xB9C1; &#xC18C;&#xC2DC;&#xC9C0;&#xC640; &#xC5ED; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD544;&#xD130;&#xB9C1; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC758; &#xC5F0;&#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0; &#xB9C8;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC; &#xD558;&#xB294;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xC791;&#xC5C5; &#xCC38;&#xC870; demosaicing&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xBB38;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xC131;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC9C0;&#xB3C4; &#xCD94;&#xC815; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD544;&#xD130;&#xB9C1; &#xC811;&#xADFC;.

The authors present a computationally efficient technique for maximum a posteriori (MAP) estimation of images in the presence of both blur and noise. The image is divided into statistically independent regions. Each region is modelled with a WSS Gaussian prior. Classical Wiener filter theory is used to generate a set of convex sets in the solution space, with the solution to the MAP estimation problem lying at the intersection of these sets. The proposed algorithm uses an underlying segmentation of the image, and a means of determining the segmentation and refining it are described. The algorithm is suitable for a range of image restoration problems, as it provides a computationally efficient means to deal with the shortcomings of Wiener filtering without sacrificing the computational simplicity of the filtering approach. The algorithm is also of interest from a theoretical viewpoint as it provides a continuum of solutions between Wiener filtering and Inverse filtering depending upon the segmentation used. We do not attempt to show here that the proposed method is the best general approach to the image reconstruction problem. However, related work referenced herein shows excellent performance in the specific problem of demosaicing.

A filtering approach to edge preserving MAP estimation of images.

Les auteurs pr&eacute;sentent une technique de calcul efficace pour maximum a posteriori estimation (MAP) des images en pr&eacute;sence de bruit et flou. L&#39;image est divis&eacute;e en r&eacute;gions statistiquement ind&eacute;pendantes. Chaque r&eacute;gion est mod&eacute;lis&eacute;e avec un WSS gaussien pr&eacute;alable. Th&eacute;orie de filtre de Wiener classique est utilis&eacute;e pour g&eacute;n&eacute;rer un ensemble d&#39;ensembles convexes dans l&#39;espace de solution, la solution du probl&egrave;me d&#39;estimation de carte se trouvant &agrave; l&#39;intersection de ces ensembles. L&#39;algorithme propos&eacute; utilise une segmentation sous-jacente de l&#39;image, et un moyen de d&eacute;terminer la segmentation et de raffinage sont d&eacute;crites. L&#39;algorithme est adapt&eacute; &agrave; un &eacute;ventail de probl&egrave;mes de restauration d&#39;image, car il fournit un moyen de calcul efficace pour traiter les carences du filtrage sans pour autant sacrifier la simplicit&eacute; computationnelle de l&#39;approche de filtrage de Wiener. L&#39;algorithme est &eacute;galement int&eacute;ressant d&#39;un point de vue th&eacute;orique car elle offre un continuum de solutions entre filtrage de Wiener et Inverse le filtrage selon la segmentation utilis&eacute;e. Nous n&#39;essayez pas de montrer ici que la m&eacute;thode propos&eacute;e est la meilleure approche g&eacute;n&eacute;rale du probl&egrave;me de reconstruction d&#39;image. Toutefois, les travaux mentionn&eacute; aux pr&eacute;sentes montrent excellente performance dans le probl&egrave;me sp&eacute;cifique de d&eacute;matri&ccedil;age.

Une approche de filtrage &agrave; bord pr&eacute;servant l&#39;estimation de la MAP d&#39;images.

Die Autoren pr&auml;sentieren eine rechnerisch effiziente Technik f&uuml;r Maximum a posteriori (anzeigen) Absch&auml;tzung der Bilder in Anwesenheit von Unsch&auml;rfe und L&auml;rm. Das Bild ist in statistisch unabh&auml;ngige Regionen unterteilt. Jede Region ist mit einer WSS Gau&szlig;schen vorherige modelliert. Klassische Wiener-Filter-Theorie wird verwendet, um eine Reihe von konvexen Mengen in den L&ouml;sungsraum, mit der L&ouml;sung f&uuml;r das MAP-Sch&auml;tzung-Problem liegt an der Kreuzung dieser Mengen zu generieren. Der vorgeschlagene Algorithmus verwendet eine zugrunde liegende Segmentierung des Bildes, und ein Mittel zur Bestimmung der Segmentierung und verfeinert sie beschrieben werden. Der Algorithmus eignet sich f&uuml;r eine Reihe Bild Wiederherstellung Probleme, wie es rechnerisch effiziente Mittel zur Bew&auml;ltigung der M&auml;ngel der Wiener Filtern ohne Einbu&szlig;en bei die computational Einfachheit der Filterung Ansatz bietet. Der Algorithmus ist auch von Interesse aus theoretischer Sicht bietet ein Kontinuum von L&ouml;sungen zwischen Wiener Filterung und Inverse Filterung, je nach der Segmentierung verwendet. Wir versuchen nicht hier zeigen, die die vorgeschlagene Methode die beste allgemeine Ansatz f&uuml;r den Wiederaufbau Imageproblem ist. Verwandte Arbeit hierin zeigt jedoch ausgezeichneten Leistung in das spezifische Problem der Demosaicing.

Eine Filterung Ann&auml;herung an Rand Erhaltung MAP-Sch&auml;tzung der Bilder.

Gli autori presentano una tecnica computazionalmente efficiente per massima stima (mappa) a posteriori delle immagini in presenza di sfocatura e il rumore. L&#39;immagine &egrave; divisa in regioni statisticamente indipendenti. Ogni regione &egrave; modellata con una preventiva gaussiana WSS. Classica teoria di filtro di Wiener &egrave; utilizzato per generare un insieme di insiemi convessi nello spazio soluzione, con la soluzione al problema di stima mappa che si trova all&#39;intersezione di questi insiemi. L&#39;algoritmo proposto utilizza una segmentazione dell&#39;immagine sottostante, e un mezzo per determinare la segmentazione e raffinazione sono descritti. L&#39;algoritmo &egrave; adatto ad una gamma di problemi di restauro di immagini, poich&eacute; fornisce un mezzo per far fronte alle carenze di filtraggio senza sacrificare la semplicit&agrave; computazionale dell&#39;approccio filtro di Wiener computazionalmente efficiente. L&#39;algoritmo &egrave; anche di interesse da un punto di vista teorico in quanto fornisce un continuum di soluzioni tra il filtro di Wiener e inversa filtro dipendendo la segmentazione utilizzata. Non tentiamo di mostrare qui che il metodo proposto &egrave; il miglior approccio generale al problema di ricostruzione dell&#39;immagine. Tuttavia, lavoro correlato citato nel presente mostra eccellenti prestazioni nel problema specifico di demosaicizzazione.

Un approccio filtraggio a bordo mantenendo stima mappa delle immagini.

&#x8457;&#x8005;&#x3089;&#x306F;&#x6700;&#x5927;&#x4E8B;&#x5F8C;&#x78BA;&#x7387;&#x63A8;&#x5B9A;&#x6CD5; (&#x5730;&#x56F3;) &#x307C;&#x304B;&#x3057;&#x3068;&#x30CE;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x8A08;&#x7B97;&#x4E0A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306F;&#x3001;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x306B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5206;&#x304B;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404;&#x5730;&#x57DF;&#x306F; WSS &#x30AC;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x4E8B;&#x524D;&#x624B;&#x672C;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53E4;&#x5178;&#x30A6;&#x30A3;&#x30FC;&#x30CA;&#x30FC; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF;&#x30FC;&#x7406;&#x8AD6;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x4EA4;&#x70B9;&#x306B;&#x6A2A;&#x305F;&#x308F;&#x3063;&#x3066;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x63A8;&#x5B9A;&#x554F;&#x984C;&#x3078;&#x306E;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7A7A;&#x9593;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x51F8;&#x96C6;&#x5408;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x63D0;&#x6848;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x9818;&#x57DF;&#x5206;&#x5272;&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x624B;&#x6BB5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8FF0;&#x3079;&#x308B;&#x3002;&#x30A6;&#x30A3;&#x30CA;&#x30FC; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3055;&#x3092;&#x72A0;&#x7272;&#x306B;&#x305B;&#x305A;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6B20;&#x70B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x8A08;&#x7B97;&#x4E0A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x624B;&#x6BB5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x753B;&#x50CF;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x554F;&#x984C;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x30A6;&#x30A3;&#x30CA;&#x30FC; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x9006;&#x4F7F;&#x7528;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8981;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF;&#x30FC;&#x9593;&#x306E;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x7406;&#x8AD6;&#x7684;&#x89B3;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x95A2;&#x5FC3;&#x3082;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x304C;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x306F;&#x3001;&#x63D0;&#x6848;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x753B;&#x50CF;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x554F;&#x984C;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3057;&#x3088;&#x3046;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x3092;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x53C2;&#x7167;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9; &#x30C7;&#x30E2;&#x30B6;&#x30A4; &#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A8;&#x30C3;&#x30B8;&#x753B;&#x50CF;&#x306E; MAP &#x63A8;&#x5B9A;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3078;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3002;

Los autores presentan una t&eacute;cnica computacionalmente eficiente para m&aacute;ximo a posteriori estimaci&oacute;n (mapa) de im&aacute;genes en presencia de tanto desenfoque y ruido. La imagen se divide en regiones estad&iacute;sticamente independientes. Cada regi&oacute;n se modela con una previa WSS gaussiano. Teor&iacute;a cl&aacute;sica de filtro de Wiener se utiliza para generar un conjunto de conjuntos convexos en el espacio de la soluci&oacute;n, la soluci&oacute;n para el problema de estimaci&oacute;n de mapa en la intersecci&oacute;n de estos conjuntos. El algoritmo propuesto utiliza una segmentaci&oacute;n subyacente de la imagen, y un medio para determinar la segmentaci&oacute;n y lo refinaci&oacute;n describen. El algoritmo es conveniente para una variedad de problemas de restauraci&oacute;n de imagen, ya que proporciona un medio computacionalmente eficiente para enfrentar las deficiencias de Wiener filtrado sin sacrificar la simplicidad computacional del enfoque filtrado. El algoritmo es tambi&eacute;n de inter&eacute;s desde un punto de vista te&oacute;rico, ya que proporciona un continuo de soluciones entre Wiener filtrado e inverso filtrado dependiendo de la segmentaci&oacute;n utilizada. No intentamos Mostrar aqu&iacute; que el m&eacute;todo propuesto es el mejor enfoque general para el problema de la reconstrucci&oacute;n de imagen. Sin embargo, trabajos relacionados aqu&iacute; referenciados muestran un rendimiento excelente en la problem&aacute;tica espec&iacute;fica de demosaicing.

Un enfoque filtrado al borde preservando la estimaci&oacute;n del mapa de im&aacute;genes.

&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3001; &#x5408;&#x6210;&#x3001; &#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x4E0E;&#x8868;&#x5F81;&#x7B3C;&#x3002;

Design, synthesis, and characterization of caged compounds.

Conception, synth&egrave;se et caract&eacute;risation des compos&eacute;s mis en cage.

Design, Synthese und Charakterisierung der K&auml;fig-Mischungen.

Progettazione, sintesi e caratterizzazione di composti in gabbia.

&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x5408;&#x6210;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30C9;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xC124;&#xACC4;, &#xD569;&#xC131;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Dise&ntilde;o, s&iacute;ntesis y caracterizaci&oacute;n de compuestos enjaulados.

INTRODUCTIONActivation &#x548C;&#x8C03;&#x4EA1;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x706D;&#x6D3B;&#x7B3C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4F7F;&#x7528;&#x9057;&#x4F20;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x7EC6;&#x80DE;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3002;&#x80FD;&#x591F;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x5728;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x548C;&#x5730;&#x70B9;&#x5185;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x66F4;&#x6539;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E3A;&#x5141;&#x8BB8;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x3002;&#x7B3C;&#x7684;&#x590D;&#x5408;&#x3001; &#x591A;&#x80BD;&#x3001; &#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x5C06;&#x5B83;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230; photolabile&#xFF0C;&#x4FDD;&#x62A4;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E3A;&#x6570;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x751F;&#x7269;&#x5206;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B98;&#x80FD;&#x56E2;&#x7EC4;&#x7F16;&#x5199;&#x7684;&#x3002;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x4ED4;&#x7EC6;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7B80;&#x77ED;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF; &#xFF08;320-400nm) &#x7167;&#x5C04;&#x53EF;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7B3C;&#x7EC4;&#x4E0E;&#x672A;&#x4FEE;&#x6539;&#x3001; &#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x7269;&#x79CD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x952E;&#x7684;&#x65AD;&#x88C2;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x5149;&#x81F4;&#x5F02;&#x6784;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7B56;&#x7565;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x7B3C;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5F15;&#x5165;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF1A; &#x5355;&#x5143;&#x683C; permeant &#x80BD;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3001; &#x73E0;&#x52A0;&#x8F7D;&#x548C;&#x6CE8;&#x5C04;&#x3002;&#x4E2D;&#x73E0;&#x88C5;&#x8F7D;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x6C90;&#x6D74;&#x5728;&#x542B;&#x80BD;/&#x86CB;&#x767D;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3002;&#x73BB;&#x7483;&#x73E0;&#x7136;&#x540E;&#x4E0B;&#x4E86;&#x5C0F;&#x96E8;&#xFF0C;&#x62D6;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E0A;&#x3002;&#x73E0;&#x5B50;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x4E00;&#x4E9B;&#x80BD;&#x5206;&#x5B50;&#x968F;&#x673A;&#x8F93;&#x5165;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E34;&#x65F6;&#x7684;&#x5B54;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x4F4E;&#xFF0C;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x591A;&#x80BD;&#x836F;&#x7269;&#x9700;&#x8981;&#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684;&#x7F16;&#x53F7;&#x3002;&#x591A;&#x80BD;&#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0D;&#x662F;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x5B83;&#x6709;&#x7528;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x60F0;&#x6027;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#xFF0C;&#x5982;&#x7F57;&#x4E39;&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6307;&#x793A;&#x6210;&#x529F;&#x52A0;&#x8F7D; co-load &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6B64;&#x5904;&#x7ED9;&#x51FA;&#x4EE3;&#x8868;&#x6027;&#x7684;&#x73E0;&#x52A0;&#x8F7D;&#x534F;&#x8BAE;&#x4F7F;&#x7528;&#x9C7C;&#x89D2;&#x819C;&#x57FA;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

&#x5BFC;&#x5165;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F7F;&#x7528;&#x73E0;&#x88C5;&#x7B3C;&#x80BD;/&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

INTRODUCTIONActivation and inactivation of proteins using photoactivation of caged peptides or proteins offers insights into cellular dynamics not achievable using genetic means. The ability to selectively alter the activity of a specific protein at a defined time and location inside a cell allows the correlation of changes in protein activity and cellular behavior. A caged compound, peptide, or protein is prepared by covalently linking it to a photolabile, protecting group via a limited number of critical functional groups in the biomolecules. Under carefully defined conditions, a brief irradiation with UV light (320-400 nm) can lead to an intramolecular photoisomerization reaction that induces the cleavage of the chemical bond between the cage group and the unmodified, biologically active species. Three strategies can be used to introduce caged compounds into cells: cell-permeant peptide vectors, bead loading, and microinjection. In bead loading, cells are bathed in a medium containing the peptide/protein of interest. Glass beads are then sprinkled onto the cells. The beads create temporary holes in the cell membranes, allowing some of the peptide molecules to enter cells at random. Due to the low efficiency of this technique, a large amount of protein or peptide is needed to label a relatively small number of cells. If the peptides or proteins are not fluorescent, it is useful to co-load the cells with an inert fluorescent marker, such as rhodamine dextran, to indicate successful loading. A representative bead-loading protocol using fish keratocytes is given here.

Introduction of caged peptide/protein into cells using bead loading.

INTRODUCTIONActivation et inactivation des prot&eacute;ines utilisant la photoactivation de cage peptides ou prot&eacute;ines offres aper&ccedil;u dynamique cellulaire non r&eacute;alisable utilisant g&eacute;n&eacute;tiques des moyens. La capacit&eacute; de s&eacute;lectivement alt&eacute;r&eacute; l&#39;activit&eacute; d&#39;une prot&eacute;ine sp&eacute;cifique &agrave; un temps d&eacute;fini et un emplacement &agrave; l&#39;int&eacute;rieur d&#39;une cellule permet la corr&eacute;lation entre les changements dans le comportement cellulaire et de l&#39;activit&eacute; de prot&eacute;ines. Un compos&eacute; en cage, peptides ou prot&eacute;ines est pr&eacute;par&eacute; en liant par liaison covalente &agrave; un photolabile, prot&eacute;geant le groupe via un nombre limit&eacute; de groupes fonctionnels critiques dans les biomol&eacute;cules. Dans des conditions bien d&eacute;finies, une br&egrave;ve irradiation avec la lumi&egrave;re UV (320-400 nm) peut entra&icirc;ner une r&eacute;action intramol&eacute;culaire photoisom&eacute;risation qui induit le clivage de la liaison chimique entre le groupe de la cage et les esp&egrave;ces non modifi&eacute;s, biologiquement actifs. Trois strat&eacute;gies peuvent &ecirc;tre utilis&eacute;s pour introduire des compos&eacute;s en cage dans des cellules : cellule-perm&eacute;ants peptide vecteurs, chargement de perle et microinjection. Dans le chargement des billes, des cellules baignent dans un milieu contenant des peptides/prot&eacute;ines d&#39;int&eacute;r&ecirc;t. Perles de verre sont ensuite saupoudr&eacute;s sur les cellules. Les perles de cr&eacute;ent des trous temporaires dans les membranes des cellules, permettant &agrave; certains des mol&eacute;cules peptidiques pour entrer dans les cellules au hasard. En raison de la faible efficacit&eacute; de cette technique, il faut une grande quantit&eacute; de prot&eacute;ines ou de peptides d&#39;&eacute;tiqueter un relativement petit nombre de cellules. Si les peptides ou prot&eacute;ines ne sont pas fluorescentes, il est utile de co-load les cellules avec un marqueur fluorescent inerte, comme le dextran de rhodamine, pour indiquer le chargement r&eacute;ussi. Un protocole de chargement perle repr&eacute;sentatif &agrave; l&#39;aide de poissons keratocytes est donn&eacute; ici.

Introduction de &quot;cage&quot; peptides/prot&eacute;ines dans des cellules &agrave; l&#39;aide de chargement de billes.

INTRODUCTIONActivation und Inaktivierung von Proteinen mit Photoaktivierung der K&auml;fig Peptide oder Proteine bietet Einblicke in die Zellul&auml;re Dynamik, die nicht umsetzbar sind mit genetischen bedeutet. Die M&ouml;glichkeit, gezielt die Aktivit&auml;t eines bestimmten Proteins zu einem definierten Zeitpunkt und Ort innerhalb einer Zelle &auml;ndern kann die Korrelation &Auml;nderungen im Protein Aktivit&auml;t und Porenbetonsteinen Verhalten. Ein K&auml;fig Verbindung, Peptid oder Protein ist bereit, durch kovalent verkn&uuml;pfen es mit einer Photolabile, Gruppe &uuml;ber eine begrenzte Anzahl von kritischen Funktionsgruppen in Biomolek&uuml;le zu sch&uuml;tzen. Unter genau definierten Bedingungen kann eine kurze Bestrahlung mit UV-Licht (320-400 nm) zu eine intramolekulare Photoisomerization Reaktion f&uuml;hren, die die Spaltung der chemischen Bindung zwischen der K&auml;fig-Gruppe und die unver&auml;nderten, biologisch aktiven Arten bedingt. Drei Strategien k&ouml;nnen zum K&auml;fig Verbindungen in Zellen einf&uuml;hren: Zelle-permeant Peptid-Vektoren, Perlen-laden und Mikroinjektion. Perlen-laden, werden die Zellen in einem Medium, das Peptid/Protein des Interesses enthalten gebadet. Glasperlen sind dann auf die Zellen bestreut. Die Perlen erstellen tempor&auml;re L&ouml;cher in der Zellmembran, so dass einige von den Peptid-Molek&uuml;len Zellen nach dem Zufallsprinzip eintragen. Auf die geringe Effizienz dieser Technik ist eine gro&szlig;e Menge an Protein oder Peptid erforderlich, um eine relativ kleine Anzahl von Zellen zu beschriften. Wenn die Peptide oder Proteine nicht fluoreszierend sind, ist es sinnvoll, die Zellen mit eine inerte fluoreszierenden Marker, wie z. B. Rhodamin Dextran, an erfolgreichen Laden co-load. Ein repr&auml;sentatives Perlen-laden-Protokoll mit Fisch Keratocytes ist hier gegeben.

Einf&uuml;hrung der K&auml;fig Peptid/Protein in Zellen unter Verwendung von Perlen laden.

INTRODUCTIONActivation e inattivazione delle proteine usando photoactivation della gabbia peptidi o proteine offre approfondimenti dinamiche cellulari non realizzabili utilizzando genetiche significa. La capacit&agrave; di alterare selettivamente l&#39;attivit&agrave; di una proteina specifica in un tempo definito e un percorso all&#39;interno di una cella permette la correlazione dei cambiamenti nel comportamento di attivit&agrave; e cellulare della proteina. Un composto in gabbia, un peptide o proteina &egrave; preparata da covalenza collegandola a un photolabile, proteggendo il gruppo attraverso un numero limitato di gruppi funzionali critiche le biomolecole. In condizioni accuratamente definite, una breve irradiazione con luce UV (320-400 nm) pu&ograve; portare a una reazione intramolecolare Fotoisomerizzazione che induce la scissione del legame chimico tra il gruppo gabbia e le specie non modificate, biologicamente attive. Tre strategie possono essere utilizzati per introdurre in gabbia composti in cellule: cellula-permeant peptide vettori, caricamento del tallone e Microiniezione. A carico del tallone, le cellule sono bagnate in un mezzo contenente il peptide/proteina di interesse. Perle di vetro sono poi spruzzati sulle celle. Le perline creare fori temporanee nelle membrane delle cellule, permettendo alcune delle molecole del peptide per entrare le cellule a casaccio. A causa della scarsa efficienza di questa tecnica, una grande quantit&agrave; di proteina o del peptide &egrave; necessario etichettare un numero relativamente piccolo di cellule. Se i peptidi o proteine non sono fluorescenti, &egrave; utile per co-load le cellule con un marcatore fluorescente inerte, come Destrano rodamina, per indicare il caricamento riuscito. Un rappresentanza protocollo tallone-caricamento utilizzando pesce cheratociti &egrave; dato qui.

Introduzione di peptidi/proteine in gabbia nelle celle utilizzando il caricamento del tallone.

INTRODUCTIONActivation &#x3068;&#x306E; photoactivation &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x9054;&#x6210;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x610F;&#x5473;&#x52D5;&#x614B;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3002;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6642;&#x9593;&#x3068;&#x5834;&#x6240;&#x3092;&#x30BB;&#x30EB;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x52D5;&#x4F5C;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30C9;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6570;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3059;&#x308B;&#x306B; photolabile &#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3057;&#x3066;&#x7528;&#x610F;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x614E;&#x91CD;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x77ED;&#x3044;&#x7167;&#x5C04; UV &#x5149; &#xFF08;320 400 nm&#xFF09; &#x3068;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x3001;&#x672A;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x6D3B;&#x6027;&#x7A2E;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x958B;&#x88C2;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x5149;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30C9;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B; 3 &#x3064;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#xFF1A; &#x7D30;&#x80DE;&#x6027;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x8377;&#x30FB; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3002;&#x30D3;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x8208;&#x5473;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;/&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x5A92;&#x4F53;&#x3067;&#x306C;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x88FD;&#x306E;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x4E0A;&#x306B;&#x632F;&#x308A;&#x304B;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x7A74;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306A;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306F;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x4F4E;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x5927;&#x91CF;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3084;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x6570;&#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x86CD;&#x5149;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB; &#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x6210;&#x529F;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C0;&#x30DF;&#x30F3; &#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068; co-load &#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x4FBF;&#x5229;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9B5A;&#x306E;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x306A;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D3;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;/&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x3002;

INTRODUCTIONActivation &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; photoactivation&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC07;&#xD78C; &#xC758;&#xBBF8; &#xD558;&#xC9C0; &#xB2EC;&#xC131; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5ED;&#xD559;&#xC5D0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC81C;&#xACF5; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;. &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xC140; &#xB0B4;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xC774;&#xB098; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#x70AD; &#xBCF4;&#xD638;&#xB294; biomolecules&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC218;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xADF8;&#xB8F9; photolabile&#xB97C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558; &#xC5EC; &#xC900;&#xBE44; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xC911; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xC678;&#xC120; (320-400 nm)&#xACFC; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xCF00;&#xC774;&#xC9C0; &#xADF8;&#xB8F9; &#xBC0F; &#xC218;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;, &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131; &#xC885; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xD654;&#xD559; &#xACB0;&#xD569;&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; intramolecular photoisomerization &#xBC18;&#xC751;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140;&#xC5D0; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xC140; permeant &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBCA1;&#xD130;, &#xBE44;&#xB4DC; &#xB85C;&#xB4DC; &#xBC0F; microinjection. &#xBE44;&#xB4DC; &#xB85C;&#xB529;&#xC5D0; &#xC140;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;/&#xAD00;&#xC2EC;&#xC0AC;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xAC04;&#xC5D0; &#xBAA9;&#xC695;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xB9AC; &#xBE44;&#xC988;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC140;&#xC5D0; &#xBFCC; &#xB838; &#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC2AC; &#xC140;&#xC744; &#xC784;&#xC758;&#xB85C; &#xC785;&#xB825; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xB97C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC784;&#xC2DC; &#xAD6C;&#xBA4D;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xB0AE;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xB9CE;&#xC740; &#xC591;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB098; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC140; &#xC218;&#xAC00; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC801;&#xC740; &#xB77C;&#xBCA8; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xD615;&#xAD11; &#xC5C6;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xB97C; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xB85C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; rhodamine dextran &#xB4F1; &#xBD88;&#xD65C;&#xC131; &#xD615;&#xAD11; &#xD45C;&#xC2DD; &#xB41C; &#xC140; co-load &#xC720;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30; keratocytes&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB300;&#xD45C;&#xC801;&#xC778; &#xBE44;&#xB4DC; &#xB85C;&#xB4DC; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC8FC;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xB2E4;.

&#xAD6C;&#xC2AC; &#xB85C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC140;&#xC5D0; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC;/&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC18C;&#xAC1C;.

INTRODUCTIONActivation e inactivaci&oacute;n de prote&iacute;nas utilizando la fotoactivaci&oacute;n de enjaulado p&eacute;ptidos o prote&iacute;nas ofreciendo percepci&oacute;n en la din&aacute;mica celular no alcanzables utilizando gen&eacute;tica significa. La capacidad de alterar selectivamente la actividad de una prote&iacute;na espec&iacute;fica en un tiempo definido y ubicaci&oacute;n dentro de una celda permite la correlaci&oacute;n de los cambios en el comportamiento celular y actividad de prote&iacute;na. Un compuesto enjaulado, p&eacute;ptidos o prote&iacute;nas se preparan por enlace covalente a un photolabile, protecci&oacute;n de grupo, a trav&eacute;s de un n&uacute;mero limitado de grupos funcionales cr&iacute;ticos en las biomol&eacute;culas. Bajo condiciones cuidadosamente definidas, una breve irradiaci&oacute;n con luz UV (320-400 nm) puede llevar a una reacci&oacute;n intramolecular de photoisomerization que induce la ruptura de la uni&oacute;n qu&iacute;mica entre el grupo de la jaula y las especies sin modificar, biol&oacute;gicamente activas. Tres estrategias pueden ser usadas para introducir compuestos enjaulados en c&eacute;lulas: p&eacute;ptido de la c&eacute;lula-Florescente vectores, carga de grano y microinyecci&oacute;n. En la carga de grano, las c&eacute;lulas est&aacute;n ba&ntilde;adas en un medio que contiene el p&eacute;ptido/prote&iacute;na de inter&eacute;s. Granos de cristal se asperjan entonces en las c&eacute;lulas. Los granos crean agujeros temporales en las membranas celulares, permitiendo que algunas de las mol&eacute;culas de p&eacute;ptidos para entrar en las c&eacute;lulas al azar. Debido a la baja eficiencia de esta t&eacute;cnica, se necesita una gran cantidad de prote&iacute;nas o p&eacute;ptidos para identificar un n&uacute;mero relativamente peque&ntilde;o de c&eacute;lulas. Si los p&eacute;ptidos o prote&iacute;nas no son fluorescentes, es &uacute;til para co-load las c&eacute;lulas con un marcador fluorescente inerte, como dextran rodamina, para indicar la carga exitosa. Un protocolo de grano-carga representativo utilizando peces queratocitos se da aqu&iacute;.

Introducci&oacute;n de p&eacute;ptido enjaulada/prote&iacute;na en las c&eacute;lulas mediante la carga de grano.

INTRODUCTIONActivation &#x548C;&#x8C03;&#x4EA1;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x706D;&#x6D3B;&#x7B3C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4F7F;&#x7528;&#x9057;&#x4F20;&#x624B;&#x6BB5;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3002;&#x80FD;&#x591F;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x5728;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x548C;&#x5730;&#x70B9;&#x5185;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x66F4;&#x6539;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E3A;&#x5141;&#x8BB8;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x3002;&#x7B3C;&#x7684;&#x590D;&#x5408;&#x3001; &#x591A;&#x80BD;&#x3001; &#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x5C06;&#x5B83;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230; photolabile&#xFF0C;&#x4FDD;&#x62A4;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E3A;&#x6570;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x751F;&#x7269;&#x5206;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B98;&#x80FD;&#x56E2;&#x7EC4;&#x7F16;&#x5199;&#x7684;&#x3002;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x4ED4;&#x7EC6;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7B80;&#x77ED;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF; &#xFF08;320-400nm) &#x7167;&#x5C04;&#x53EF;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7B3C;&#x7EC4;&#x4E0E;&#x672A;&#x4FEE;&#x6539;&#x3001; &#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x7269;&#x79CD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x952E;&#x7684;&#x65AD;&#x88C2;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x5149;&#x81F4;&#x5F02;&#x6784;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x534F;&#x8BAE;&#x4F7F;&#x7528;&#x534A;&#x81EA;&#x52A8;&#x663E;&#x5FAE;&#x6CE8;&#x5C04;&#x7CFB;&#x7EDF; (FemtoJet Microinjector &#x57C3;&#x5F6D;&#x591A;&#x592B;&#x548C;&#x57C3;&#x5F6D;&#x591A;&#x592B; InjectMan&#xFF09; &#x7B3C;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5BFC;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x73E0;&#x52A0;&#x8F7D;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x5141;&#x8BB8;&#x9009;&#x62E9;&#x54EA;&#x4E9B;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;

&#x5BFC;&#x5165;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F7F;&#x7528;&#x5FAE;&#x91CF;&#x6CE8;&#x5C04;&#x7B3C;&#x80BD;/&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

INTRODUCTIONActivation and inactivation of proteins using photoactivation of caged peptides or proteins offer insights into cellular dynamics not achievable using genetic means. The ability to selectively alter the activity of a specific protein at a defined time and location inside a cell allows the correlation of changes in protein activity and cellular behavior. A caged compound, peptide, or protein is prepared by covalently linking it to a photolabile, protecting group via a limited number of critical functional groups in the biomolecules. Under carefully defined conditions, a brief irradiation with UV light (320-400 nm) can lead to an intramolecular photoisomerization reaction that induces the cleavage of the chemical bond between the cage group and the unmodified, biologically active species. The following protocol uses a semiautomated microinjection system (Eppendorf FemtoJet Microinjector along with the Eppendorf InjectMan) for the introduction of caged compounds into cells. Unlike the bead-loading approach, this technique allows the investigator to choose which cells are targeted.

Introduction of caged peptide/protein into cells using microinjection.

INTRODUCTIONActivation et inactivation des prot&eacute;ines utilisant la photoactivation de cage peptides ou prot&eacute;ines offre aper&ccedil;u dynamique cellulaire non r&eacute;alisable utilisant des moyens g&eacute;n&eacute;tiques. La capacit&eacute; de s&eacute;lectivement alt&eacute;r&eacute; l&#39;activit&eacute; d&#39;une prot&eacute;ine sp&eacute;cifique &agrave; un temps d&eacute;fini et un emplacement &agrave; l&#39;int&eacute;rieur d&#39;une cellule permet la corr&eacute;lation entre les changements dans le comportement cellulaire et de l&#39;activit&eacute; de prot&eacute;ines. Un compos&eacute; en cage, peptides ou prot&eacute;ines est pr&eacute;par&eacute; en liant par liaison covalente &agrave; un photolabile, prot&eacute;geant le groupe via un nombre limit&eacute; de groupes fonctionnels critiques dans les biomol&eacute;cules. Dans des conditions bien d&eacute;finies, une br&egrave;ve irradiation avec la lumi&egrave;re UV (320-400 nm) peut entra&icirc;ner une r&eacute;action intramol&eacute;culaire photoisom&eacute;risation qui induit le clivage de la liaison chimique entre le groupe de la cage et les esp&egrave;ces non modifi&eacute;s, biologiquement actifs. Le protocole suivant utilise un syst&egrave;me de micro-injection semi-automatique (Eppendorf FemtoJet Microinjector avec le Eppendorf InjectMan) pour l&#39;introduction de compos&eacute;s en cage dans les cellules. Contrairement &agrave; l&#39;approche de la perle-chargement, cette technique permet au chercheur de choisir quelles cellules sont cibl&eacute;s.

Introduction de &quot;cage&quot; peptides/prot&eacute;ines dans des cellules &agrave; l&#39;aide de microinjection.

INTRODUCTIONActivation und Inaktivierung von Proteinen mit Photoaktivierung der K&auml;fig Peptide oder Proteine bieten Einblicke in die Zellul&auml;re Dynamik mit genetische Mitteln nicht umsetzbar sind. Die M&ouml;glichkeit, gezielt die Aktivit&auml;t eines bestimmten Proteins zu einem definierten Zeitpunkt und Ort innerhalb einer Zelle &auml;ndern kann die Korrelation &Auml;nderungen im Protein Aktivit&auml;t und Porenbetonsteinen Verhalten. Ein K&auml;fig Verbindung, Peptid oder Protein ist bereit, durch kovalent verkn&uuml;pfen es mit einer Photolabile, Gruppe &uuml;ber eine begrenzte Anzahl von kritischen Funktionsgruppen in Biomolek&uuml;le zu sch&uuml;tzen. Unter genau definierten Bedingungen kann eine kurze Bestrahlung mit UV-Licht (320-400 nm) zu eine intramolekulare Photoisomerization Reaktion f&uuml;hren, die die Spaltung der chemischen Bindung zwischen der K&auml;fig-Gruppe und die unver&auml;nderten, biologisch aktiven Arten bedingt. Das folgende Protokoll verwendet ein semiautomated Mikroinjektion (Eppendorf FemtoJet Microinjector zusammen mit dem Eppendorf InjectMan) f&uuml;r die Einf&uuml;hrung der K&auml;fig-Mischungen in Zellen. Im Gegensatz zu der Perlen-laden-Ansatz erm&ouml;glicht diese Technik der Versuchsleiter zu w&auml;hlen, welche Zellen ausgerichtet sind.

Einf&uuml;hrung von K&auml;fig Peptid/Protein in Zellen mittels Mikroinjektion.

INTRODUCTIONActivation e inattivazione delle proteine usando photoactivation della gabbia peptidi o proteine offerta intuizioni dinamiche cellulari usando mezzi genetici non realizzabili. La capacit&agrave; di alterare selettivamente l&#39;attivit&agrave; di una proteina specifica in un tempo definito e un percorso all&#39;interno di una cella permette la correlazione dei cambiamenti nel comportamento di attivit&agrave; e cellulare della proteina. Un composto in gabbia, un peptide o proteina &egrave; preparata da covalenza collegandola a un photolabile, proteggendo il gruppo attraverso un numero limitato di gruppi funzionali critiche le biomolecole. In condizioni accuratamente definite, una breve irradiazione con luce UV (320-400 nm) pu&ograve; portare a una reazione intramolecolare Fotoisomerizzazione che induce la scissione del legame chimico tra il gruppo gabbia e le specie non modificate, biologicamente attive. Il seguente protocollo utilizza un sistema di microiniezione semiautomatica (Eppendorf FemtoJet eppendolf insieme alla Eppendorf InjectMan) per l&#39;introduzione di composti in gabbia nelle celle. A differenza dell&#39;approccio di tallone-caricamento, questa tecnica permette l&#39;investigatore scegliere le celle che sono mirate.

Introduzione della gabbia del peptide/proteina nelle cellule mediante Microiniezione.

INTRODUCTIONActivation &#x3068;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E; photoactivation &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x52D5;&#x614B;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x306B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3002;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6642;&#x9593;&#x3068;&#x5834;&#x6240;&#x3092;&#x30BB;&#x30EB;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x52D5;&#x4F5C;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30C9;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6570;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3059;&#x308B;&#x306B; photolabile &#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3057;&#x3066;&#x7528;&#x610F;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x614E;&#x91CD;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x77ED;&#x3044;&#x7167;&#x5C04; UV &#x5149; &#xFF08;320 400 nm&#xFF09; &#x3068;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x3001;&#x672A;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x6D3B;&#x6027;&#x7A2E;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x958B;&#x88C2;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x5149;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6B21;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB; &#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30C9;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x3092;&#x534A;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; (&#x30A8;&#x30C3;&#x30DA;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x30D5; FemtoJet &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; &#x30A8;&#x30C3;&#x30DA;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x30D5; InjectMan &#x3068;&#x5171;&#x306B;) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x8ABF;&#x67FB;&#x5B98;&#x306F;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DC;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30CA;&#x5165;&#x308A;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;/&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x3002;

INTRODUCTIONActivation &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; photoactivation&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC07;&#xD78C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5ED;&#xD559; &#xD558;&#xC9C0; &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xC218;&#xB2E8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2EC;&#xC131;&#xC5D0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC81C;&#xACF5; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;. &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xC140; &#xB0B4;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xC774;&#xB098; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#x70AD; &#xBCF4;&#xD638;&#xB294; biomolecules&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC218;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xADF8;&#xB8F9; photolabile&#xB97C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558; &#xC5EC; &#xC900;&#xBE44; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xC911; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xC678;&#xC120; (320-400 nm)&#xACFC; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xCF00;&#xC774;&#xC9C0; &#xADF8;&#xB8F9; &#xBC0F; &#xC218;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;, &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131; &#xC885; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xD654;&#xD559; &#xACB0;&#xD569;&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; intramolecular photoisomerization &#xBC18;&#xC751;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC74C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; semiautomated microinjection &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (Eppendorf InjectMan &#xD568;&#xAED8; Eppendorf FemtoJet Microinjector)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC140;&#xC5D0; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xB3C4;&#xC785;&#xC744; &#xC704;&#xD55C;. &#xAD6C;&#xC2AC; &#xB85C;&#xB529; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC758; &#xC811;&#xADFC; &#xB2EC;&#xB9AC;&#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xD0D0;&#xC815;&#xC744; &#xC140;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC120;&#xD0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Microinjection&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC140;&#xC5D0; &#xAC07;&#xD78C;&#xB41C; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC;/&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC18C;&#xAC1C;.

INTRODUCTIONActivation e inactivaci&oacute;n de prote&iacute;nas utilizando la fotoactivaci&oacute;n de enjaulado penetraciones de oferta de p&eacute;ptidos o prote&iacute;nas en din&aacute;mica celular no alcanzable por medios gen&eacute;ticos. La capacidad de alterar selectivamente la actividad de una prote&iacute;na espec&iacute;fica en un tiempo definido y ubicaci&oacute;n dentro de una celda permite la correlaci&oacute;n de los cambios en el comportamiento celular y actividad de prote&iacute;na. Un compuesto enjaulado, p&eacute;ptidos o prote&iacute;nas se preparan por enlace covalente a un photolabile, protecci&oacute;n de grupo, a trav&eacute;s de un n&uacute;mero limitado de grupos funcionales cr&iacute;ticos en las biomol&eacute;culas. Bajo condiciones cuidadosamente definidas, una breve irradiaci&oacute;n con luz UV (320-400 nm) puede llevar a una reacci&oacute;n intramolecular de photoisomerization que induce la ruptura de la uni&oacute;n qu&iacute;mica entre el grupo de la jaula y las especies sin modificar, biol&oacute;gicamente activas. El siguiente protocolo utiliza un sistema de microinyecci&oacute;n semiautomatizado (Eppendorf FemtoJet microinyector junto con el Eppendorf InjectMan) para la introducci&oacute;n de compuestos enjaulados en las c&eacute;lulas. A diferencia del enfoque de la carga de grano, esta t&eacute;cnica permite al investigador a elegir que las c&eacute;lulas se dirigen.

Introducci&oacute;n de p&eacute;ptido enjaulada/prote&iacute;na en las c&eacute;lulas mediante microinyecci&oacute;n.

&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#xFF0C;heterodimeric &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28; (ECM) &#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3001; &#x80BF;&#x7624;&#x548C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x662F;&#x5728;&#x56CA;&#x6CE1;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x6C34;&#x75B1;&#x8D29;&#x5356;&#x3002;&#x5728;&#x5206;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x7684;&#x6700;&#x540E;&#x4E00;&#x6B65;&#x8FDB;&#x884C;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4F20;&#x9012;&#xFF0C;&#x5373;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x542B;&#x56CA;&#x6CE1;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x51FA;&#x5E2D;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x56CA;&#x6CE1;&#x878D;&#x5408;&#x5230;&#x7F51;&#x7F57; (&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N ethylmaleimide &#x654F;&#x611F;&#x56E0;&#x5B50;&#x9644;&#x4EF6;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53;) &#x86CB;&#x767D;&#x8D28; syntaxins 1&#x3001; 2&#x3001; 3 &#x548C; 4&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86; syntaxins 1&#x3001; 2&#x3001; 3 &#x548C; 4 &#x6C34;&#x75B1;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684; &alpha;5&beta;1 &#x548C; &alpha;3&beta;1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; 2&#x3001; 3 &#x548C; 4 &#x7684; syntaxins &#x6709;&#x4EBA;&#x5728;&#x5B50;&#x5BAB;&#x9888;&#x817A;&#x764C;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6F58;&#x8328; 1 &#x80F0;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x5728;&#x8FC1;&#x79FB; HeLa &#x548C;&#x6F58;&#x8328; 1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;syntaxins 2&#x3001; 3 &#x548C; 4 &#x7EF4;&#x4E0E;&#x8102;&#x8D28;&#x7B4F;&#x677F;&#x7EC4;&#x6210; GM1 &#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x82F7;&#x8102;&#x5728;&#x524D;&#x6CBF;&#x3002;&#x2477; siRNA (&#x79D1;&#x5A01;&#x7279;&#x7B2C;&#x7EB3;&#x5C14;) &#x7684; syntaxins 3 &#x548C; 4&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; syntaxin 2&#x3001; HeLa &#x7EC6;&#x80DE;&#x51CF;&#x5C11;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; &alpha;5&beta;1 &#x548C; &alpha;3&beta;1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x548C;&#x79EF;&#x7D2F;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x80DE;&#x6D46;&#x56CA;&#x6CE1;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; syntaxins 3 &#x548C; 4 &#x8C03;&#x89E3;&#x6C34;&#x75B1;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684; &alpha;5&beta;1 &#x548C; &alpha;3&beta;1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;3 &#x548C; 4 &#x7684; syntaxins KD &#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x5230;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x6291;&#x5236;&#x8D8B;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x89E6;&#x53D1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; syntaxins &#x4F9D;&#x8D56; 3 &#x548C; 4 &#x7684;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5728;&#x764C;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x751F;&#x5B58;&#xFF0C;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x764C;&#x75C7;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x4EF7;&#x503C;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

Syntaxins 3 &#x548C; 4 &#x8C03;&#x89E3;&#x6C34;&#x75B1;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684; &alpha;5&beta;1 &#x548C; &alpha;3&beta;1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4E0E;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;

Integrins, a family of heterodimeric receptors for cell adhesion to the extracellular matrix (ECM), play key roles in cell migration, cancer progression and metastasis. As transmembrane proteins, integrins are transported in vesicles and delivered to the cell surface by vesicular trafficking. The final step for integrin delivery, i.e., fusion of integrin-containing vesicles with the plasma membrane, is poorly understood at the molecular level. The SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor) proteins syntaxins 1, 2, 3 and 4 are present at the plasma membrane to drive vesicle fusion. In this study, we examined the roles of syntaxinsÂ 1, 2, 3 and 4 in vesicular trafficking of Î±5Î²1 and Î±3Î²1 integrins. We showed that syntaxinsÂ 2, 3 and 4 were expressed in HeLa cervical adenocarcinoma cells and PANC-1 pancreatic adenocarcinoma cells. In migrating HeLa and PANC-1 cells, syntaxinsÂ 2, 3 and 4 co-localized with the lipid raft constituent GM1 ganglioside at the leading edge. siRNA knockdown (KD) of syntaxinsÂ 3 and 4, but not of syntaxinÂ 2, in HeLa cells reduced cell surface expression of Î±5Î²1 and Î±3Î²1 integrins and accumulated the integrins in cytoplasmic vesicles, indicating that syntaxinsÂ 3 and 4 mediate vesicular trafficking of Î±5Î²1 and Î±3Î²1 integrins to the cell surface. In addition, KD of syntaxinsÂ 3 and 4 inhibited cell adhesion to fibronectin, suppressed chemotactic cell migration and triggered apoptosis. Collectively, these data suggest that syntaxinsÂ 3- and 4-dependent integrin trafficking is important in cancer cell migration and survival, and may be a valuable target for cancer therapy.

Syntaxins 3 and 4 mediate vesicular trafficking of Î±5Î²1 and Î±3Î²1 integrins and cancer cell migration.

Int&eacute;grines, une famille de r&eacute;cepteurs h&eacute;t&eacute;rodim&egrave;res pour l&#39;adh&eacute;rence de la cellule &agrave; la matrice extracellulaire (ECM), jouent un r&ocirc;le cl&eacute; dans la migration cellulaire, la progression du cancer et des m&eacute;tastases. Des prot&eacute;ines transmembranaires, les int&eacute;grines sont transport&eacute;s dans des v&eacute;sicules et livr&eacute;s &agrave; la surface de la cellule par le trafic v&eacute;siculaire. La derni&egrave;re &eacute;tape pour la livraison de l&#39;int&eacute;grine, c&#39;est-&agrave;-dire, la fusion de l&#39;int&eacute;grine contenant des v&eacute;sicules avec la membrane plasmique, est mal comprise au niveau mol&eacute;culaire. Les syntaxins de prot&eacute;ines SNARE (r&eacute;cepteur soluble de prot&eacute;ine de facteur-fixation des sensible N-&eacute;thylmal&eacute;imide) 1, 2, 3 et 4 sont pr&eacute;sents &agrave; la membrane plasmique &agrave; la fusion des v&eacute;sicules en voiture. Dans cette &eacute;tude, nous avons examin&eacute; les r&ocirc;les de syntaxins 1, 2, 3 et 4 dans le trafic v&eacute;siculaire des int&eacute;grines &alpha;5&beta;1 et &alpha;3&beta;1. Nous avons montr&eacute; que les syntaxins, 2, 3 et 4 ont &eacute;t&eacute; exprim&eacute;s dans les cellules HeLa ad&eacute;nocarcinome du col ut&eacute;rin et de cellules d&#39;ad&eacute;nocarcinome pancr&eacute;atique PANC-1. Migration des cellules HeLa et PANC-1 syntaxins, 2, 3 et 4 co-localisaient avec le lipide radeau le ganglioside GM1 constitutif &agrave; la fine pointe. siARN knockdown (KD) de syntaxins 3 et 4, mais pas de la syntaxine 2, dans les cellules HeLa r&eacute;duit l&#39;expression &agrave; la surface cellulaire des int&eacute;grines &alpha;5&beta;1 et &alpha;3&beta;1 et accumul&eacute; les int&eacute;grines dans des v&eacute;sicules cytoplasmiques, indiquant que les syntaxins 3 et 4 m&eacute;dient le trafic v&eacute;siculaire des int&eacute;grines &alpha;5&beta;1 et &alpha;3&beta;1 &agrave; la surface de la cellule. En outre, KD de syntaxins 3 et 4 inhibe l&#39;adh&eacute;sion cellulaire &agrave; la fibronectine, supprim&eacute; la migration cellulaire chimiotactique et d&eacute;clenche l&#39;apoptose. Ensemble, ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que le trafic de syntaxins d&eacute;pendant de 3 et 4 int&eacute;grine est important dans la survie et la migration cellulaire du cancer et pourrait &ecirc;tre une cible de grande valeur pour le traitement du cancer.

Syntaxins 3 et 4 la m&eacute;diation le trafic v&eacute;siculaire de migration cellulaire int&eacute;grines et le cancer &alpha;5&beta;1 et &alpha;3&beta;1.

Integrine, eine Familie von Complex Rezeptoren f&uuml;r Zell-Adh&auml;sion an der extrazellul&auml;ren Matrix (ECM), spielen Schl&uuml;sselrollen in Zellmigration, fortschreiten und Metastasierung. Als Transmembranproteine sind Integrine in Vesikeln transportiert und an der Zelloberfl&auml;che von vesikul&auml;ren Handel geliefert. Der letzte Schritt f&uuml;r Integrin-Lieferung, d.h. die Verschmelzung von Integrin-haltige Vesikel mit der Plasmamembran ist schlecht auf molekularer Ebene zu verstehen. Die SNARE (l&ouml;sliche N-Ethylmaleimid-Sensitive-Faktor-Anlage Protein-Rezeptor) Proteine Syntaxins 1, 2, 3 und 4 sind die Plasmamembran zu Laufwerk des Vesicle Fusion. In dieser Studie wurden die Rollen von Syntaxins 1, 2, 3 und 4 im vesikul&auml;ren Handel mit &alpha;5&beta;1 und &alpha;3&beta;1 Integrine. Wir haben gezeigt, dass Syntaxins 2, 3 und 4 in HeLa zervikale Adenokarzinom und PANC-1 Adenokarzinom Pankreas-Zellen ausgedr&uuml;ckt wurden. Migrieren von HeLa und PANC-1 Zellen raft Syntaxins, 2, 3 und 4 co-localized mit der Lipid konstituierenden GM1-Ganglioside an der Spitze. SiRNA Niederschlag (KD) Syntaxins 3 und 4, aber nicht Syntaxin 2 in HeLa-Zellen verringert Zelle Oberfl&auml;che Ausdruck des &alpha;5&beta;1 und &alpha;3&beta;1 Integrine und angesammelt die Integrine in zytoplasmatischen Vesikeln, darauf hinweist, dass die Syntaxins 3 und 4 vermitteln vesikul&auml;ren Handel mit &alpha;5&beta;1 und &alpha;3&beta;1 Integrine an der Zelloberfl&auml;che. Dar&uuml;ber hinaus KD von Syntaxins 3 und 4 gehemmt Zelladh&auml;sion, Fibronektin, unterdr&uuml;ckt chemotaktische Zellmigration und Apoptose ausgel&ouml;st. Zusammenfassend empfehlen diese Daten Syntaxins 3 - und 4-abh&auml;ngigen Integrin Menschenhandel ist Krebs Zellmigration und &Uuml;berleben wichtig, und m&ouml;glicherweise ein wertvolles Ziel f&uuml;r Krebstherapie.

Syntaxins 3 und 4 vermitteln vesikul&auml;ren &alpha;5&beta;1 &alpha;3&beta;1 Integrine und Krebs Zelle Migration und Menschenhandel.

Le integrine, una famiglia di recettori heterodimeric per adesione delle cellule alla matrice extracellulare (ECM), giocano un ruolo chiave nella migrazione delle cellule, progressione tumorale e le metastasi. Come proteine transmembrana, le integrine sono trasportate in vescicole e consegnate alla superficie delle cellule di traffico vescicolare. Il passaggio finale per la consegna dell&#39;integrina, cio&egrave;, fusione di integrina contenenti vescicole con la membrana plasmatica, &egrave; poco conosciuto a livello molecolare. Il syntaxins di proteine SNARE (solubile N-ethylmaleimide-sensibile fattore accessorio proteina recettore) 1, 2, 3 e 4 sono presenti alla membrana del plasma di fusione della vescicola di auto. In questo studio, abbiamo esaminato i ruoli di syntaxins 1, 2, 3 e 4 nel traffico vescicolare di integrine &alpha;5&beta;1 e &alpha;3&beta;1. Abbiamo dimostrato che syntaxins 2, 3 e 4 sono stati espressi in HeLa adenocarcinoma cervicale e PANC-1 cellule di adenocarcinoma del pancreas. Nella migrazione delle cellule HeLa e PANC-1, syntaxins 2, 3 e 4 co-ha localizzato con i lipidi zattera costituenti dei gangliosidi GM1 all&#39;avanguardia. siRNA atterramento (KD) di syntaxins 3 e 4, ma non di Sintaxina 2, in cellule HeLa ridotta espressione superficiale delle cellule delle integrine &alpha;5&beta;1 e &alpha;3&beta;1 e accumulate le integrine in citoplasmiche vescicole, che indica che syntaxins 3 e 4 mediare traffico vescicolare di integrine &alpha;5&beta;1 e &alpha;3&beta;1 alla superficie delle cellule. Inoltre, KD di syntaxins 3 e 4 inibisce l&#39;adesione cellulare da fibronectina, soppressa la migrazione chemiotattica delle cellule e innescato apoptosi. Collettivamente, questi dati suggeriscono che il traffico di syntaxins 3 - e 4-dipendente integrina &egrave; importante per la sopravvivenza e la migrazione delle cellule di cancro e pu&ograve; essere un obiettivo prezioso per la terapia del cancro.

Syntaxins 3 e 4 mediare traffico vescicolare di &alpha;5&beta;1 e &alpha;3&beta;1 migrazione cellulare integrine e cancro.

&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; (ECM) &#x3078;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x52D5;&#x3001;&#x764C;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3001;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x5C0F;&#x80DE;&#x8F38;&#x9001;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x914D;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x914D;&#x4FE1;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5C0F;&#x80DE;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3068;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x5F8C;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2; &#xFF08;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N n-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;) &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; syntaxins 1&#x3001;2&#x3001;3 &#x304A;&#x3088;&#x3073; 4 &#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306B;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Syntaxins 1&#x3001;2&#x3001;3 &#x304A;&#x3088;&#x3073; 4 &#x5C0F;&#x80DE; &alpha;5&beta;1 &#x3068; &alpha;3&beta;1 &#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Syntaxins 2&#x3001;3&#x3001;4 HeLa &#x5B50;&#x5BAE;&#x9838;&#x90E8;&#x817A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068; panc-1 &#x81B5;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79FB;&#x884C;&#x306E; hela &#x7D30;&#x80DE;&#x3068; PANC 1 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;syntaxins 2&#x3001;3&#x3001;4 co-localized &#x3068;&#x8102;&#x8CEA;&#x6210;&#x5206; GM1 &#x30AC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AA;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A8;&#x30C3;&#x30B8;&#x3067;&#x3044;&#x304B;&#x3060;&#x3002;siRNA &#x304D;&#x305F; (KD) syntaxins 3 &#x3068; 4 &#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 2 HeLa &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E; &alpha;5&beta;1 &#x3068; &alpha;3&beta;1 &#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;syntaxins 3 &#x3068; 4 &#x306F;&#x3001;&alpha;5&beta;1 &#x3068; &alpha;3&beta;1 &#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x9846;&#x7C92;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;syntaxins 3 &#x3068; 4 &#x306E; KD &#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x904A;&#x8D70;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F; syntaxins 3 &#x3068; 4 &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x3068;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x764C;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Syntaxins 3 &#x3068; 4 &#x5C0F;&#x80DE; &alpha;5&beta;1 &#x3068; &alpha;3&beta;1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Integrins, &#xAE30;&#xC9C8; (ECM)&#xC744; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; heterodimeric &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xAC00;&#xC871; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, &#xC554; &#xC9C4;&#xD589;&#xACFC; &#xC804;&#xC774;&#xC5D0; &#xD575;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; integrins &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC774;&#xC1A1; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC804;&#xB2EC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Integrin &#xBC30;&#xB2EC;, &#xC989;, &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; integrin vesicles&#xC758; &#xC735;&#xD569;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294; &#xAC00;&#xB09C; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD84;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xD574; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC62C; &#xBB34; (&#xC218;&#xC6A9; &#xC131; N ethylmaleimide &#xAD6C;&#xBD84; &#xC778;&#xC790; &#xCCA8;&#xBD80; &#xC218;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCCB4;) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; syntaxins 1, 2, 3 &#xBC0F; 4 &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xAE30; &#xD4E8;&#xC804;&#xC744; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; syntaxins 1, 2, 3, 4 &alpha;5&beta;1 &#xBC0F; &alpha;3&beta;1 integrins&#xC758; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 2, 3, 4 syntaxins &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC790; &#xAD81; &#xACBD;&#xBD80; &#xC120; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; PANC 1 &#xCDCC; &#xC7A5; &#xC120; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD5EC;&#xB7EC;&#xC640; PANC-1 &#xC140;&#xC5D0; 2, 3, 4&#xB294; &#xC9C0;&#xC9C8;&#xACFC; co-localized syntaxins &#xCCA8;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xC131; GM1 ganglioside &#xB5CF;&#xBAA9;. siRNA &#xCD5C;&#xC800; (KD) syntaxin &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; 3, 4, syntaxins&#xC758; &alpha;5&beta;1 &#xBC0F; &alpha;3&beta;1 integrins&#xC758; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; syntaxins 3, 4 &#xC140; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &alpha;5&beta;1 &#xBC0F; &alpha;3&beta;1 integrins&#xC758; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xC911;&#xC7AC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0; integrins &#xCD95;&#xC801;. &#xB610;&#xD55C;, KD syntaxins 3, 4&#xC758; fibronectin&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xC800;&#xD574;, &#xD608; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC0F; apoptosis &#xC720;&#xBC1C;. &#xC0E8; &#xB2E4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; syntaxins 3 &#xBC0F; 4 &#xC885;&#xC18D; integrin &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Syntaxins 3, 4 &alpha;5&beta;1 &#xBC0F; &alpha;3&beta;1 integrins &#xBC0F; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xB3D9;&#xC758; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xC911;&#xC7AC;.

Integrinas, una familia de receptores de heterodim&eacute;ricos para la adhesi&oacute;n celular a la matriz extracelular (ECM), juegan un papel clave en la migraci&oacute;n celular, la progresi&oacute;n del c&aacute;ncer y la met&aacute;stasis. Como prote&iacute;nas de transmembrana, integrinas son transportadas en ves&iacute;culas y entregadas a la superficie de la c&eacute;lula por tr&aacute;fico vesicular. El paso final para la entrega de la integrina, es decir, la fusi&oacute;n de la integrina que contienen las ves&iacute;culas con la membrana plasm&aacute;tica, es mal entendido a nivel molecular. Los sintaxinas de las prote&iacute;nas SNARE (sensible a N-etilmaleimida factor accesorio prote&iacute;na receptor soluble) 1, 2, 3 y 4 est&aacute;n presentes en la membrana plasm&aacute;tica a la fusi&oacute;n de la ves&iacute;cula del coche. En este estudio, examinamos los papeles de sintaxinas 1, 2, 3 y 4 en el tr&aacute;fico vesicular de integrinas &alpha;5&beta;1 y &alpha;3&beta;1. Demostramos que sintaxinas 2, 3 y 4 fueron expresadas en c&eacute;lulas de adenocarcinoma cervical HeLa y c&eacute;lulas de adenocarcinoma de p&aacute;ncreas PANC-1. En la migraci&oacute;n de las c&eacute;lulas HeLa y PANC-1, sintaxinas 2, 3 y 4 co-localized con los l&iacute;pidos balsa constituyente gangli&oacute;sido GM1 a la vanguardia. ca&iacute;da de siRNA (KD) de sintaxinas 3 y 4, pero no de la sintaxina 2, en c&eacute;lulas HeLa redujo la expresi&oacute;n superficial de la c&eacute;lula de integrinas &alpha;5&beta;1 y &alpha;3&beta;1 y hab&iacute;a acumulado de las integrinas en ves&iacute;culas citoplasm&aacute;ticas, indicando que sintaxinas 3 y 4 median tr&aacute;fico vesicular de integrinas &alpha;5&beta;1 y &alpha;3&beta;1 a la superficie de la c&eacute;lula. Adem&aacute;s, KD de sintaxinas 3 y 4 inhibe la adhesi&oacute;n celular a fibronectina, suprimi&oacute; la migraci&oacute;n celular quimiot&aacute;cticos y dispara la apoptosis. Colectivamente, estos datos sugieren que trata de integrina sintaxinas dependiente del 3 y 4 es importante para la supervivencia y la migraci&oacute;n de c&eacute;lulas de c&aacute;ncer y puede ser una meta valiosa para la terapia del c&aacute;ncer.

Sintaxinas 3 y 4 median tr&aacute;fico vesicular de la migraci&oacute;n de c&eacute;lulas &alpha;5&beta;1 y &alpha;3&beta;1 integrinas y c&aacute;ncer.

&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#xFF0C;&#x575A;&#x6301;&#xFF0C;&#x5728;&#x5305;&#x62EC;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3001; &#x6269;&#x6563;&#x548C;&#x751F;&#x5B58;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x88AB;&#x53D7;&#x63A7;&#x5236;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x529F;&#x80FD; syntaxin 6 (STX6) &#x4F4D;&#x4E8E;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7F51;&#x7EDC;&#xFF0C;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x8D29;&#x8FD0;&#x4E2D; t-&#x7F51;&#x7F57;&#x3002;STX6 &#x6297;&#x539F;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x764C;&#x75C7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6D88;&#x8017;&#x7684; STX6 &#x6291;&#x5236;&#x8D8B;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x5C42;&#x7C98;&#x8FDE;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53; &alpha;3&beta;1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#xFF0C;&#x800C; STX6 &#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x523A;&#x6FC0;&#x8D8B;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3001; &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x548C;&#x7C98;&#x7740;&#x6591;&#x6FC0;&#x9176;&#x6574;&#x5408;&#x542F;&#x52A8;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; STX6 &#x4F5C;&#x7528;&#x901F;&#x7387;&#x9650;&#x5236;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x8D29;&#x8FD0;&#x3002;STX6 &#x8017;&#x5C3D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5728; &alpha;3&beta;1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x88AB;&#x79EF;&#x7D2F;&#x4E2D;&#x56DE;&#x6536;&#x5305;&#x542B; v &#x7F51;&#x7F57; VAMP3 &#x7684; endosomes&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; STX6 &#x548C; VAMP3 &#x7EC4;&#x6210;&#x7684; v-/ t &#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x3001; VAMP3 &alpha;3&beta;1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x548C; VAMP3 &#x548C; STX6 &#x7684;&#x8F66;&#x53A2; endocytosed &alpha;3&beta;1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x6D41;&#x91CF;&#x9700;&#x8981;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D; endocytosed &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4ECE;&#x8FD0;&#x5F80; VAMP3 &#x542B;&#x56DE;&#x6536; endosomes STX6 &#x5305;&#x542B;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4E4B;&#x524D;&#x88AB;&#x56DE;&#x6536;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x65B0;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x8D29;&#x5356;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;

&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x541E;&#x56DE;&#x6536;&#x53CA;&#x8D8B;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7531; syntaxin 6 &#x4E0E; VAMP3 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

Integrins are the primary receptors of cells adhering to the extracellular matrix, and play key roles in various cellular processes including migration, proliferation and survival. The expression and distribution of integrins at the cell surface is controlled by endocytosis and recycling. The present study examines the function of syntaxin 6 (STX6), a t-SNARE located in the trans-Golgi network, in integrin trafficking. STX6 is overexpressed in many types of human cancer. We show that depletion of STX6 inhibits chemotactic cell migration and the delivery of the laminin receptor Î±3Î²1 integrin to the cell surface, whereas STX6 overexpression stimulates chemotactic cell migration, integrin delivery, and integrin-initiated activation of focal adhesion kinase. These data indicate that STX6 plays a rate-limiting role in cell migration and integrin trafficking. In STX6-depleted cells, Î±3Î²1 integrin is accumulated in recycling endosomes that contain the v-SNARE VAMP3. Importantly, we show that STX6 and VAMP3 form a v-/t-SNARE complex, VAMP3 is required in Î±3Î²1 integrin delivery to the cell surface, and endocytosed Î±3Î²1 integrin traffics to both VAMP3 and STX6 compartments. Collectively, our data suggest a new integrin trafficking pathway in which endocytosed integrins are transported from VAMP3-containing recycling endosomes to STX6-containing trans-Golgi network before being recycled to the plasma membrane.

Regulation of integrin endocytic recycling and chemotactic cell migration by syntaxin 6 and VAMP3 interaction.

Les int&eacute;grines sont les principaux r&eacute;cepteurs des cellules adh&eacute;rant &agrave; la matrice extracellulaire et jouent un r&ocirc;le cl&eacute; dans divers processus cellulaires, y compris la survie, la prolif&eacute;ration et la migration. L&#39;expression et la distribution des int&eacute;grines &agrave; la surface cellulaire est contr&ocirc;l&eacute;e par endocytose et recyclage. La pr&eacute;sente &eacute;tude examine la fonction de la syntaxine 6 (STX6), un t-SNARE situ&eacute;e sur le r&eacute;seau trans-Golgi, dans le trafic de l&#39;int&eacute;grine. STX6 est surexprim&eacute; dans de nombreux types de cancer chez l&#39;homme. Nous montrons que l&#39;appauvrissement de la couche de STX6 inhibe migration cellulaire chimiotactique et la livraison de l&#39;int&eacute;grine &alpha;3&beta;1 de laminine du r&eacute;cepteur &agrave; la surface des cellules, tandis que la surexpression de la STX6 stimule la migration cellulaire chimiotactique et livraison int&eacute;grine int&eacute;grine initi&eacute;e par activation de la kinase d&#39;adh&eacute;rence focale. Ces donn&eacute;es indiquent que les STX6 joue un r&ocirc;le de limitation de vitesse dans la migration cellulaire et le trafic de l&#39;int&eacute;grine. Dans les cellules STX6 appauvri, int&eacute;grine &alpha;3&beta;1 s&#39;accumule dans le recyclage des endosomes contenant la v-SNARE VAMP3. Ce qui est important, nous montrons que STX6 et VAMP3 forment un v- / t-SNARE VAMP3 complexe requise pour livraison int&eacute;grine &alpha;3&beta;1 &agrave; la surface des cellules et m&eacute;gacaryocyte &alpha;3&beta;1 int&eacute;grine trafics aux compartiments fois VAMP3 et STX6. Ensemble, nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent une nouvelle voie de trafic int&eacute;grine dans lesquels le m&eacute;gacaryocyte int&eacute;grines sont transport&eacute;s des endosomes de recyclage contenant VAMP3 &agrave; STX6 contenant le r&eacute;seau trans-Golgi avant d&#39;&ecirc;tre recycl&eacute;e dans la membrane plasmique.

R&egrave;glement de l&#39;int&eacute;grine recyclage endocytose et la migration cellulaire chimiotactique par syntaxine 6 et interaction VAMP3.

Integrine sind die prim&auml;ren Rezeptoren der Zellen, die die Einhaltung der extrazellul&auml;ren Matrix und spielen Schl&uuml;sselrollen in verschiedenen zellul&auml;ren Prozessen einschlie&szlig;lich Migration sowie Verbreitung und &uuml;berleben. Der Ausdruck und die Verteilung von Integrine an der Zelloberfl&auml;che wird gesteuert durch Endozytose und recycling. Die vorliegende Studie untersucht die Funktion von Syntaxin 6 (STX6), ein t-SNARE, gelegen im Trans-Golgi-Netzwerk Integrin Handel. STX6 ist bei vielen menschlichen Krebsarten Pleuramesotheliom. Wir zeigen, dass die Ersch&ouml;pfung der STX6 chemotaktische Zellmigration und die Lieferung von dem Laminin-Rezeptor-&alpha;3&beta;1-Integrin an der Zelloberfl&auml;che, hemmt, w&auml;hrend STX6 eine &Uuml;berexpression chemotaktische Zellmigration, Integrin-Lieferung und Integrin-initiierte Aktivierung der fokale Adh&auml;sion Kinase stimuliert. Diese Daten zeigen, dass STX6 eine geschwindigkeitsbestimmende Rolle in der Zelle Migration und Menschenhandel Integrin spielt. In STX6-abgereichertem Zellen wird &alpha;3&beta;1 Integrin akkumuliert, Recycling Endosomen, die V-SNARE VAMP3 enthalten. Wichtig ist, zeigen wir, dass STX6 und VAMP3 eine v-bilden / t-SNARE-Komplex, VAMP3 in &alpha;3&beta;1-Integrin-Lieferung an der Zelloberfl&auml;che und Endocytosed &alpha;3&beta;1 Integrin Verkehre auf VAMP3 und STX6 F&auml;cher erforderlich ist. Gemeinsam schlagen unsere Daten einen neuen Menschenhandel Integrin-Weg in dem Endocytosed Integrine aus VAMP3-haltige Wiederverwertung Endosomen mit STX6-haltigen Trans-Golgi-Netzwerk transportiert werden vor dem Recycling an der Plasmamembran.

Verordnung von Integrin endocytic recycling und chemotaktische Zellmigration durch Syntaxin 6 und VAMP3 Interaktion.

Le integrine sono i recettori primari delle cellule aderiscono alla matrice extracellulare e svolgono un ruolo chiave in vari processi cellulari, tra cui la migrazione, la proliferazione e la sopravvivenza. L&#39;espressione e la distribuzione delle integrine alla superficie delle cellule &egrave; controllato da endocitosi e riciclaggio. Il presente studio esamina la funzione di Sintaxina 6 (STX6), un t-SNARE situato nella rete trans-Golgi, nel traffico di integrina. STX6 &egrave; sovraespressa in molti tipi di cancro umano. Mostriamo che esaurimento delle STX6 inibisce la migrazione chemiotattica delle cellule e la consegna dell&#39;integrina laminin receptor &alpha;3&beta;1 alla superficie delle cellule, mentre STX6 sovraespressione stimola la migrazione chemiotattica delle cellule, la consegna di integrina e avviata dall&#39;integrina attivazione della chinasi di adesione focale. Questi dati indicano che STX6 svolge un ruolo di limitazione della velocit&agrave; in migrazione cellulare e traffico di integrina. Nelle cellule STX6 impoverito, &alpha;3&beta;1 integrina &egrave; accumulato nel riciclaggio endosomes che contengono le v-SNARE VAMP3. Soprattutto, ci mostra che STX6 e VAMP3 formano una v- / t-SNARE complesso, VAMP3 &egrave; necessaria nella endocytosed &alpha;3&beta;1 integrina traffici di compartimenti sia VAMP3 e STX6 e la consegna dell&#39;integrina &alpha;3&beta;1 alla superficie delle cellule. Collettivamente, i nostri dati suggeriscono un nuovo percorso di integrina traffico in cui endocytosed integrine sono trasportate da contenenti VAMP3 riciclaggio endosomes alla rete trans-Golgi contenenti STX6 prima di essere riciclato per la membrana del plasma.

Regolamento di integrina endocitico riciclaggio e migrazione chemiotattica delle cellule da Sintaxina 6 e interazione VAMP3.

&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x4ED8;&#x7740;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x79FB;&#x884C;&#x3001;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3068;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 6 &#x306E; &#xFF08;STX6&#xFF09;&#x3001;t &#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x5185;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;STX6 &#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x764C;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x904A;&#x8D70;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7126;&#x70B9;&#x63A5;&#x7740;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E; STX6 &#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; STX6 &#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x304C;&#x904A;&#x8D70;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E9;&#x30DF;&#x30CB;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &alpha;3&beta;1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3078;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;STX6 &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;STX6 &#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&alpha;3&beta;1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3; v &#x30B9;&#x30CD;&#x30A2; VAMP3 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; v - &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E; STX6 &#x3068; VAMP3/t SNARE &#x8907;&#x5408;&#x4F53;, VAMP3 &#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3078;&#x306E; &alpha;3&beta;1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x914D;&#x4FE1;&#x3068; VAMP3 &#x3068; STX6 &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x8CAA;&#x98DF;&#x3057;&#x305F; &alpha;3&beta;1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3; &#x30C8;&#x30E9;&#x30D2;&#x30C3;&#x30AF;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x3001;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x8CAA;&#x98DF;&#x3057;&#x305F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3; VAMP3 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B; STX6 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x819C;&#x306B;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 6 &#x3068; VAMP3 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3002;

Integrins &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC900;&#xC218; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC758; 1 &#xCC28; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, &#xC0DD;&#xC874;, &#xD655;&#xC0B0; &#xB4F1; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xD575;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC218;&#xD589;. &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; integrins&#xC758; &#xBD84;&#xD3EC; endocytosis &#xBC0F; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; syntaxin 6 (STX6) t &#xC62C; &#xBB34; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; integrin &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC80;&#xC0AC;. Stx6&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC554;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; overexpressed&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. STX6 overexpression &#xD608; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; integrin &#xC804;&#xB2EC;&#xACFC; integrin &#xC2DC;&#xC791; &#xCD08;&#xC810; &#xC811;&#xCC29; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; stx6&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD608; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; laminin &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &alpha;3&beta;1 integrin &#xC804;&#xB2EC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; STX6 &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xACFC; integrin &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC81C;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. STX6 &#xC18C;&#xC9C4; &#xC140;&#xC5D0; &alpha;3&beta;1 integrin &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; v-&#xC62C; &#xBB34; vamp3&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; endosomes&#xC5D0; &#xCD95;&#xC801; &#xB41C;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; STX6 &#xBC0F; VAMP3 &#xC591;&#xC2DD;&#xC744; v-/ t-&#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0;, VAMP3 &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &alpha;3&beta;1 integrin &#xBC30;&#xB2EC; &#xBC0F; VAMP3 &#xBC0F; STX6 &#xAD6C;&#xD68D;&#xC744; endocytosed &alpha;3&beta;1 integrin &#xAD50;&#xD1B5; &#xC815;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD1D;&#xCE6D;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; endocytosed integrins &#xC774;&#xC1A1; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; endosomes &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; vamp3&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; STX6 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; integrin &#xBC00;&#xB9E4; &#xACBD;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Integrin endocytic &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; syntaxin 6 VAMP3 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;.

Las integrinas son los receptores primarios de c&eacute;lulas adheridas a la matriz extracelular y desempe&ntilde;an un papel clave en varios procesos celulares como la migraci&oacute;n, proliferaci&oacute;n y supervivencia. La expresi&oacute;n y distribuci&oacute;n de las integrinas en la superficie celular es controlado por endocitosis y reciclado. El presente estudio examina la funci&oacute;n de sintaxina 6 (STX6), un t-SNARE ubicado en la red de trans-Golgi, en el tr&aacute;fico de la integrina. STX6 se sobreexpresa en muchos tipos de c&aacute;ncer en humanos. Mostramos que el agotamiento de STX6 inhibe migraci&oacute;n celular quimiot&aacute;cticos y la entrega de la integrina de laminin receptor &alpha;3&beta;1 a la superficie de la c&eacute;lula, mientras que la sobreexpresi&oacute;n de STX6 estimula la migraci&oacute;n celular quimiot&aacute;cticos y entrega de la integrina integrina-inici&oacute; la activaci&oacute;n de la quinasa de adhesi&oacute;n focal. Estos datos indican que STX6 desempe&ntilde;a un papel de limitaci&oacute;n de velocidad en la migraci&oacute;n celular y el tr&aacute;fico de la integrina. En las c&eacute;lulas STX6-agotado, integrina &alpha;3&beta;1 se acumula en el reciclaje de endosomas que contienen el v-SNARE VAMP3. Lo importante, mostramos que STX6 y VAMP3 forman una v- / t-SNARE complex, VAMP3 es necesaria en la entrega de integrina &alpha;3&beta;1 a la superficie de la c&eacute;lula y la endocitosis &alpha;3&beta;1 integrina tr&aacute;ficos en compartimientos de tanto VAMP3 y STX6. En conjunto, nuestros datos sugieren una nueva v&iacute;a de tr&aacute;fico de integrina en que endocitosis integrinas son transportadas desde los endosomas reciclaje que contienen VAMP3 a red de trans-Golgi que contienen STX6 antes de ser reciclados a la membrana plasm&aacute;tica.

Regulaci&oacute;n de la integrina endoc&iacute;ticas reciclaje y migraci&oacute;n celular quimiot&aacute;cticos sintaxina 6 y la interacci&oacute;n VAMP3.

Article	Year
Elucidation of the Wide Range of Reaction Pathways That Accompany the Electrochemical Oxidation of cis,mer-[Mn(CO)(2)(eta(1)-dpm)(eta(2)-dpm)X] (dpm = Ph(2)PCH(2)PPh(2); X = Cl, Br). Inorganic chemistry\| PubMed ID: 11670978	1999
Beta-blocker/thiazide combination for treatment of hypertensive children: a randomized double-blind, placebo-controlled trial. Pediatric nephrology (Berlin, Germany)\| PubMed ID: 12042891	2002
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Introduction of caged peptide/protein into cells using microinjection. CSH protocols\| PubMed ID: 21356930	2007
Syntaxins 3 and 4 mediate vesicular trafficking of Î±5Î²1 and Î±3Î²1 integrins and cancer cell migration. International journal of oncology\| PubMed ID: 21720706	2011
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David Humphrey

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