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Isolating And Immunostaining Lymphocytes and Dendritic Cells from Murine Peyer's Patches

Peyer's  patches (PPs) are integral components of the gut-associated lymphoid tissues  (GALT) and play a central role in intestinal immunosurveillance and ...

New York State Department of Health

Proteine batteriche che sono anormalmente troncate a causa di mRNA incompleta o la presenza di rari codoni sono estese da un&#39;etichetta SsrA durante il salvataggio del ribosoma in un processo di trans-traduzione importante per mantenere la qualit&agrave; della proteina. In Escherichia coli, le proteine SsrA-tag diventano il bersaglio della proteasi Tsp, Lon, FtsH, ClpXP e ClpAP. Qui vi mostriamo quella degradazione delle proteine SsrA-tag modello in Streptococcus pneumoniae dipende principalmente o esclusivamente su ClpXP in vivo. Inoltre, vi mostriamo che l&#39;etichetta di e. coli SsrA &egrave; anche una destinazione di S. pneumoniae ClpXP in vivo, anche se le porzioni N-terminale dei tag differiscono significativamente tra le due specie, suggerendo che non ci pu&ograve; essere nessuna proteina dell&#39;adattatore per SsrA in S. pneumoniae.

ClpXP degrada proteine SsrA-etichettate in Streptococcus pneumoniae.

&#x7570;&#x5E38;&#x306F;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A; mRNA &#x3084;&#x73CD;&#x3057;&#x3044;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30B0;&#x3067;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x7FFB;&#x8A33;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6551;&#x52A9;&#x4E2D;&#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5C0F;&#x3055;&#x3058;&#x3001;&#x7D4C;&#x5EA6;&#x3001;FtsH&#x3001;ClpXP&#x3001;ClpAP &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5F93;&#x6765;&#x624B;&#x6CD5;&#x304C;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x9023;&#x9396;&#x7403;&#x83CC;&#x80BA;&#x708E;&#x3092;&#x4E3B;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x307E;&#x305F;&#x306F; ClpXP &#x3092;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x306B; in vivo &#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x624B;&#x6CD5;&#x30BF;&#x30B0;&#x3092;&#x3082;&#x80BA;&#x708E;&#x7403;&#x83CC; ClpXP in vivo &#x3067;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3001;&#x30BF;&#x30B0;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x306A;&#x3044;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x80BA;&#x708E;&#x7403;&#x83CC;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x7A2E;&#x306E;&#x9593;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

ClpXP &#x624B;&#x6CD5;&#x304C;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x80BA;&#x708E;&#x7403;&#x83CC;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7A00;&#x6709;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x6216;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684; mRNA &#x5F02;&#x5E38;&#x5C06;&#x88AB;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x662F;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x6551;&#x63F4;&#x4E2D;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x4FDD;&#x6301;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x54C1;&#x8D28;&#x8DE8;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x671F;&#x95F4;&#x7531; SsrA &#x6807;&#x8BB0;&#x6269;&#x5C55;&#x3002;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684; SsrA &#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6210;&#x4E3A; Tsp&#x3001; &#x79BB;&#x5B50;&#x3001; FtsH&#x3001; ClpXP&#x3001; ClpAP &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BE5;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x6A21;&#x578B; SsrA &#x6807;&#x8BB0;&#x5728;&#x94FE;&#x7403;&#x83CC;&#x80BA;&#x708E;&#x4E3B;&#x8981;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x6216;&#x4E13;&#x4E0A;&#x663E;&#x793A; ClpXP &#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; SsrA &#x6807;&#x7B7E;&#x4E5F;&#x662F;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x80BA;&#x708E; S.ClpXP &#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F; N &#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7269;&#x79CD;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E3A; SsrA S.&#x80BA;&#x708E;&#x6CA1;&#x6709;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5927;&#x4E0D;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;

ClpXP &#x5C06;&#x964D;&#x4F4E;&#x80BA;&#x708E;&#x94FE;&#x7403;&#x83CC; SsrA &#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

Bacterial proteins that are abnormally truncated due to incomplete mRNA or the presence of rare codons are extended by an SsrA tag during ribosome rescue in a trans-translation process important for maintaining protein quality. In Escherichia coli, the SsrA-tagged proteins become the target of the Tsp, Lon, FtsH, ClpXP, and ClpAP proteases. Here we show that degradation of model SsrA-tagged proteins in Streptococcus pneumoniae depends primarily or exclusively on ClpXP in vivo. In addition, we show the E. coli SsrA tag is also a target of S. pneumoniae ClpXP in vivo, even though the N-terminal portions of the tags differ significantly between the two species, suggesting there may be no adaptor protein for SsrA in S. pneumoniae.

ClpXP degrades SsrA-tagged proteins in Streptococcus pneumoniae.

Prot&eacute;ines bact&eacute;riennes qui sont anormalement tronqu&eacute;es en raison des ARNm incompl&egrave;te ou la pr&eacute;sence de codons rares sont &eacute;tendues par une balise d&#39;ERPS pendant le sauvetage de ribosomes dans un processus de trans-traduction important pour maintenir la qualit&eacute; des prot&eacute;ines. Chez Escherichia coli, les prot&eacute;ines marqu&eacute;es ERPS devient la cible des prot&eacute;ases Tsp, Lon, FtsH, ClpXP et ClpAP. Nous d&eacute;montrons que la d&eacute;gradation des prot&eacute;ines mod&egrave;le ERPS dans Streptococcus pneumoniae d&eacute;pend principalement ou exclusivement sur ClpXP in vivo. En outre, nous montrons que la balise d&#39;e. coli ERPS est aussi une cible de S. pneumoniae ClpXP in vivo, m&ecirc;me si les portions N-terminale des balises diff&egrave;rent significativement entre les deux esp&egrave;ces, ce qui sugg&egrave;re qu&#39;il ne peut y avoir aucune prot&eacute;ine adaptatrice pour ERPS dans S. pneumoniae.

ClpXP d&eacute;grade les prot&eacute;ines marqu&eacute;es ERPS chez Streptococcus pneumoniae.

&#xBD88;&#xC644;&#xC804; &#xD55C; mRNA &#xB610;&#xB294; &#xB4DC;&#xBB38; codons&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC798;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD488;&#xC9C8;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xBC88;&#xC5ED; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xAD6C;&#xC870; &#xC911; SsrA &#xD0DC;&#xADF8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC7A5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;, SsrA &#xD0DC;&#xADF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Tsp, &#xB860;, FtsH, ClpXP, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; ClpAP &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC774; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBAA8;&#xB378; SsrA &#xD0DC;&#xADF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xB294; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xC0C1; &#xAD6C; &#xADE0; &#xADE0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xB610;&#xB294; Clpxp&#xC5D0; &#xB3C5;&#xC810;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;. &#xD0DC;&#xADF8;&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790; &#xBD80;&#xBD84; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBBF8; &#xADE0; Ssra&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xC885;&#xC871; &#xAC04;&#xC5D0; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; SsrA &#xD0DC;&#xADF8;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xBBF8; &#xADE0; ClpXP in vivo&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xD45C;&#xC2DC;.

ClpXP &#xC5F0;&#xC1C4; &#xC0C1; &#xAD6C; &#xADE0; &#xADE0;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; SsrA &#xD0DC;&#xADF8; &#xC800;&#xD558; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Prote&iacute;nas bacterianas que anormalmente se truncan por mRNA incompletos o la presencia de codones raras se extienden por una etiqueta de SsrA durante el rescate del ribosoma en un proceso de trans-traducci&oacute;n importante para mantener la calidad de la prote&iacute;na. En Escherichia coli, las prote&iacute;nas SsrA-etiquetado convertido en el blanco de las proteasas de Tsp, Lon, FtsH, ClpXP y ClpAP. A continuaci&oacute;n os mostramos esa degradaci&oacute;n de las prote&iacute;nas SsrA-con la etiqueta de modelo en Streptococcus pneumoniae depende principalmente o exclusivamente en ClpXP en vivo. Adem&aacute;s, demostramos que la etiqueta de e. coli SsrA es tambi&eacute;n un objetivo de S. pneumoniae ClpXP in vivo, a pesar de que las porciones del N-terminal de las etiquetas difieren significativamente entre las dos especies, sugiriendo que no puede haber ninguna prote&iacute;na adaptadora para SsrA en S. pneumoniae.

ClpXP degrada las prote&iacute;nas SsrA-etiquetadas en Streptococcus pneumoniae.

&#x84D6;&#x9EBB;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x690D;&#x7269;&#x548C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5931;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D; (RIP) &#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7684;&#x3001; &#x57FA;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5C4F;&#x5E55;&#x8D85;&#x8FC7; 118,000 &#x4ECE;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x5E93;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x51CF;&#x5C11;&#x84D6;&#x9EBB;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3001; PW66&#x3001; PW69 &#x548C; PW72&#xFF0C;&#x5728; micromolar &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5927;&#x5927;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x84D6;&#x9EBB;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;None &#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x4E86;&#x84D6;&#x9EBB;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x902E;&#x6355;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x4EFB;&#x4F55;&#x663E;&#x800C;&#x6613;&#x89C1;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x6216;&#x5BF9;&#x84D6;&#x9EBB;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x4E09;&#x79CD;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x51FA;&#x73B0;&#x5230;&#x901A;&#x8FC7;&#x963B;&#x6B62;&#x6BD2;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x4E0B;&#x6E38;&#x5E94;&#x6FC0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;PW66 &#x51E0;&#x4E4E;&#x6D88;&#x706D;&#x4E86;&#x84D6;&#x9EBB;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE; J774A.1 &#x548C;&#x540C;&#x65F6;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x7684; p38 MAPK &#x548C; JNK &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;PW72 &#x538B;&#x5236;&#x84D6;&#x9EBB;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x5206;&#x6CCC;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; p38 MAPK &#x548C; JNK &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;PW69 &#x9547;&#x538B; 3/7 &#x84D6;&#x9EBB;&#x6BD2;&#x7D20;-&#x548C;&#x5FD7;&#x8D3A;&#x6BD2;&#x7D20;&#x6CBB;&#x7597; 2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x523D;&#x5B50;&#x624B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5B9E;&#x9645;&#x7684;&#x4E09;&#x79CD;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x76EE;&#x6807;&#x5C1A;&#x672A;&#x786E;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x4E0D;&#x8FC7;&#x51F8;&#x663E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x5411;&#x4E0B;&#x8C03;&#x8282;&#x708E;&#x75C7;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E0E;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7684; RIP &#x5BB6;&#x4EBA;&#x66DD;&#x5149;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

&#x5236;&#x6B62;&#x84D6;&#x9EBB;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E94;&#x529B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Ricin is a member of the ribosome-inactivating protein (RIP) family of plant and bacterial toxins. In this study we used a high-throughput, cell-based assay to screen more than 118,000 compounds from diverse chemical libraries for molecules that reduced ricin-induced cell death. We describe three compounds, PW66, PW69, and PW72 that at micromolar concentrations significantly delayed ricin-induced cell death. None of the compounds had any demonstrable effect on ricin's ability to arrest protein synthesis in cells or on ricin's enzymatic activity as assessed in vitro. Instead, all three compounds appear to function by blocking downstream stress-induced signaling pathways associated with the toxin-mediated apoptosis. PW66 virtually eliminated ricin-induced TNF-Î± secretion by J774A.1 macrophages and concomitantly blocked activation of the p38 MAPK and JNK signaling pathways. PW72 suppressed ricin-induced TNF-Î± secretion, but not p38 MAPK and JNK signaling. PW69 suppressed activity of the executioner caspases 3/7 in ricin toxin- and Shiga toxin 2-treated cells. While the actual molecular targets of the three compounds have yet to be identified, these data nevertheless underscore the potential of small molecules to down-regulate inflammatory signaling pathways associated with exposure to the RIP family of toxins.

Identification of small molecules that suppress ricin-induced stress-activated signaling pathways.

Ricine est membre de la famille des prot&eacute;ines (RIP) inactivatrice de toxines v&eacute;g&eacute;tales et bact&eacute;riennes. Dans cette &eacute;tude, nous avons utilis&eacute; un test haut d&eacute;bit, bas&eacute;s sur les cellules &agrave; l&#39;&eacute;cran plus de 118 000 compos&eacute;s de diverses biblioth&egrave;ques chimiques des mol&eacute;cules qui r&eacute;duit la mort cellulaire induite par la ricine. Nous d&eacute;crivons trois compos&eacute;s, PW66, PW69 et PW72 qui, &agrave; des concentrations micromolaires consid&eacute;rablement retard&eacute; la mort cellulaire induite par la ricine. Aucun des compos&eacute;s eu aucun effet tangible sur la capacit&eacute; de la ricine &agrave; arr&ecirc;ter la synth&egrave;se des prot&eacute;ines dans les cellules ou sur l&#39;activit&eacute; enzymatique de la ricine comme &eacute;valu&eacute; in vitro. Au lieu de cela, les trois compos&eacute;s semblent fonction de blocage en aval induite par le stress signaling pathways associ&eacute;es &agrave; l&#39;apoptose induite par la toxine. PW66 a pratiquement &eacute;limin&eacute; induite par la ricine s&eacute;cr&eacute;tion de TNF-&alpha; par les macrophages J774A.1 et bloqu&eacute;e en m&ecirc;me temps que l&#39;activation de la p38 MAPK et JNK, voies de signalisation. PW72 supprim&eacute;e ricine induite par la s&eacute;cr&eacute;tion de TNF-&alpha;, mais pas de p38 MAPK et JNK signalisation. PW69 a supprim&eacute; l&#39;activit&eacute; des bourreau caspases 3/7 en ricine toxine - et les cellules trait&eacute;es 2 Shiga toxine. Alors que les cibles mol&eacute;culaires r&eacute;elles des trois compos&eacute;s doivent encore &ecirc;tre identifi&eacute;s, ces donn&eacute;es soulignent n&eacute;anmoins le potentiel des petites mol&eacute;cules au bas de la r&eacute;gulation des voies de signalisation inflammatoires li&eacute;s &agrave; l&#39;exposition &agrave; des toxines, la famille de RIP.

Identification de petites mol&eacute;cules qui inhibent la ricine induites par les voies de signalisation activ&eacute;s par le stress.

Ricina &egrave; un membro della famiglia di proteine (RIP) ribosoma-inattivazione delle tossine vegetali e batteriche. In questo studio abbiamo utilizzato un dosaggio di alto-rendimento, basati su celle a schermo pi&ugrave; di 118.000 composti da diverse librerie chimiche per molecole che ha ridotto la morte cellulare indotta da ricina. Descriviamo tre composti, PW66, PW69 e PW72 che a concentrazioni micromolari significativamente ritardata la morte cellulare indotta da ricina. Nessuno dei composti ha avuto alcun effetto dimostrabile sulla capacit&agrave; di ricina ad arrestare la sintesi proteica nelle cellule o sull&#39;attivit&agrave; enzimatica di ricina, come valutato in vitro. Invece, tutti e tre i composti sembrano funzione di blocco a valle stress-induced segnalazione percorsi associati con l&#39;apoptosi mediata da tossina. PW66 praticamente eliminato la secrezione di TNF-&alpha; ricina-indotta dai macrofagi J774A.1 e simultaneamente bloccato attivazione del p38 MAPK e JNK vie di segnalazione. PW72 soppresso ricina indotta da TNF-&alpha; secrezione, ma non p38 MAPK e JNK segnalazione. PW69 soppresso attivit&agrave; del boia caspasi 3/7 in tossina ricina - e le cellule trattate con 2 di tossina Shiga. Mentre gli obiettivi molecolari effettivi dei tre composti devono ancora essere identificati, questi dati sottolineano tuttavia il potenziale di piccole molecole per down-regolare infiammatorie segnalazione percorsi associati all&#39;esposizione alla famiglia RIP di tossine.

Identificazione delle piccole molecole che sopprimono ricina indotta da stress-attivato segnalazione percorsi.

&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x3068;&#x7D30;&#x83CC;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (RIP) &#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x8A66;&#x91D1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x4EE5;&#x4E0A; 118,000 &#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x5206;&#x5B50;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;3 &#x3064;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3001;PW66&#x3001;PW69&#x3001;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x9045;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067; PW72 &#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x3069;&#x308C;&#x3082;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x902E;&#x6355;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x4E0A;&#x306E;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x660E;&#x767D;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x304B;&#x3068;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E; in vitro &#x8A55;&#x4FA1;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x308B;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; &#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PW66 &#x306F;&#x3001;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x4E0A; TNF-&alpha; &#x5206;&#x6CCC; J774A.1 &#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3068; p38 MAPK JNK &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x4ED8;&#x968F;&#x3057;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x9664;&#x53BB;&#x3002;PW72 &#x6291;&#x5236;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E; TNF-&alpha; &#x5206;&#x6CCC;&#x306F;&#x306A;&#x304F; p38 MAPK &#x3068; JNK &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PW69 &#x6B7B;&#x5211;&#x57F7;&#x884C;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; 3/7 &#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5FD7;&#x8CC0;&#x6BD2;&#x7D20; 2 &#x51E6;&#x7406;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;3 &#x3064;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x5B9F;&#x969B;&#x5206;&#x5B50;&#x6A19;&#x7684;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A; RIP &#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;

&#xC2E0;&#xC740; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xACFC; &#xC138;&#xADE0; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC758; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (RIP) &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF8;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; 118,000 &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xBD84;&#xC790; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2E0;&#xC740; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD654;&#xD559; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9;, &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;, PW66, PW69, &#xBC0F; PW72 micromolar &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xC2E0;&#xC740; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744; &#xC9C0;&#xC5F0; &#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5B4;&#xB5A4; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xCCB4;&#xD3EC; &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xB420;&#xC9C0;&#xB3C4; &#xC601;&#xD5A5; &#xB610;&#xB294;&#xB85C; &#xB9AC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xCCB4; &#xC678; &#xC0AC;&#xC815;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC2E0;, &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xBC1C; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xB3C5; &#xC18C; &#xC911;&#xC7AC; apoptosis&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xAE30;&#xB2A5;. Pw66&#xB294; &#xC0AC;&#xC2E4;&#xC0C1; J774A.1 &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; concomitantly &#xCC28;&#xB2E8;&#xB41C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xACBD;&#xB85C; &#xC2E0;&#xD638; JNK&#xC640; p38 MAPK&#xC758; TNF-&alpha; &#xBD84; &#xBE44; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9AC;&#xB97C; &#xC81C;&#xAC70;. Pw72&#xB294; TNF-&alpha;&#xC758; &#xBD84; &#xBE44; &#xC2E0;&#xC740; &#xC720;&#xB3C4; p38 MAPK&#xC640; JNK&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC2E0;&#xD638;. PW69 &#xC2E0;&#xC740; &#xB3C5; &#xC18C;-&#xACE0; &#xC2DC;&#xAC00; &#xB3C5; &#xC18C; 2 &#xCDE8;&#xAE09; &#xC140;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xD615; &#xC9D1;&#xD589; caspases 3/7&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC2E4;&#xC81C; &#xBD84;&#xC790; &#xD45C;&#xC801; &#xC544;&#xC9C1; &#xD655;&#xC778;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;, &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC5ED;&#xC2DC; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xADDC;&#xC81C; &#xAD00;&#xB828; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC758; RIP &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;&#xB97C; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xBC11;&#xC904;.

&#xC2E0;&#xC740; &#xC720;&#xBC1C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

La ricina es miembro de la familia de prote&iacute;nas (RIP) ribosoma-inactivaci&oacute;n de las toxinas de la planta y bacteriana. En este estudio se utiliz&oacute; un an&aacute;lisis de alto rendimiento, basadas en c&eacute;lulas para detectar m&aacute;s de 118.000 compuestos de quimiotecas diversas mol&eacute;culas que reduce la muerte celular inducida por ricina. Describimos tres compuestos, PW66, PW69 y PW72 que a concentraciones micromolar retrasar&aacute; su muerte celular inducida por ricina. Ninguno de los compuestos tiene alg&uacute;n efecto demostrable sobre la capacidad de ricina detener la s&iacute;ntesis de prote&iacute;nas en las c&eacute;lulas o en la actividad enzim&aacute;tica de ricina como evalu&oacute; in vitro. En cambio, parecen todos tres compuestos funci&oacute;n bloqueando aguas abajo inducida por estr&eacute;s v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n asociadas con la apoptosis mediada por la toxina. PW66 virtualmente hab&iacute;a eliminado la secreci&oacute;n de TNF-&alpha; inducida por ricina por macr&oacute;fagos J774A.1 y concomitante bloqueada activaci&oacute;n de v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n de JNK y p38 MAPK. PW72 suprime la secreci&oacute;n de TNF-&alpha; inducida por ricina, pero no p38 MAPK y JNK se&ntilde;alizaci&oacute;n. PW69 suprime la actividad de las caspasas 3/7 del verdugo en toxina ricina - y Shiga toxina tratada con 2 c&eacute;lulas. Mientras que el reales dianas moleculares de los compuestos de tres todav&iacute;a tienen que ser identificados, estos datos subrayan sin embargo el potencial de mol&eacute;culas peque&ntilde;as para abajo-regulan v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n inflamatorias asociadas con la exposici&oacute;n a la familia RIP de toxinas.

Identificaci&oacute;n de peque&ntilde;as mol&eacute;culas que inhiben inducida por ricina activada por estr&eacute;s v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n.

Article	Year
ClpXP degrades SsrA-tagged proteins in Streptococcus pneumoniae. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 19218384	2009
Identification of small molecules that suppress ricin-induced stress-activated signaling pathways. PloS one\| PubMed ID: 23133670	2012

Sarita Ahlawat

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