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Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Medical University of South Carolina

G-&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC; 3 (AGS3) &#x4E00;&#x4E2A;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6216;&#x591A;&#x4E2A; G &#x86CB;&#x767D;&#x76D1;&#x7BA1; (&#x96F7;&#x8FBE;) &#x56FE;&#x6848;&#xFF0C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x56FD;&#x5185;&#x751F;&#x4EA7;&#x603B;&#x503C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6784;&#x8C61;&#x7684; Galphai &#x7684;&#x4E5D;&#x4E2A;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E3A;&quot;G-&#x5F00;&#x5173;&quot;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6362;&#x80FD;&#x5668;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684; heterotrimeric G &#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x3002;&#x5173;&#x4E8E;&#x6B64;&#x7C7B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x95EE;&#x9898;&#x662F;&#x4EC0;&#x4E48;&#x63A7;&#x5236;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x548C;&#x4E0E; G &#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684; AGS3&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4E2D;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x5C4F;&#x8BC6;&#x522B;&#x4E0E; tetratricopeptide &#x91CD;&#x590D; &#xFF08;TPR&#xFF09; &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684; Frmpd1 &#x6807;&#x8BC6; &#xFF08;&#x5305;&#x542B; 1 &#x53D1;&#x9175;&#x548C; PDZ &#x57DF;&#xFF09; &#x4F5C;&#x4E3A; AGS3 &#x6CD5;&#x89C4;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x3002;Frmpd1 &#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7684; AGS3 &#x548C; coimmunoprecipitates &#x4E0E; AGS3 &#x7684; TPR &#x57DF;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x3002;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5206;&#x998F;&#x8868;&#x793A; Frmpd1 &#x7A33;&#x5B9A; AGS3&#xFF0C;&#x5728;&#x819C;&#x7684;&#x4E00;&#x5C0F;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;Frmpd1-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C; AGS3 mRFP COS7 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684; cotransfection &#x540E;, AGS3 mRFP &#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76AE;&#x5C42;&#x533A;&#x57DF;&#x5E76;&#x8FD8;&#x5728;&#x819C;&#x4E2D;&#x6269;&#x5C55;&#x6216;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x8981;&#x5C06; colocalized &#x4E0E; Frmpd1 GFP &#x6839;&#x636E;&#x5408;&#x5E76;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;Frmpd1 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F; (siRNA) Cath.a &#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x819C;&#x998F;&#x5206;&#x4E2D;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; AGS3 &#x6C34;&#x5E73;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x7EA6; 50%&#x548C;&#x589E;&#x5F3A; alpha2 &#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x8425;&#x589E;&#x52A0;&#x773C;&#x538B;&#x5347;&#x9AD8;&#x6240;&#x81F4;&#x3002;Galphai3 &#x5728;&#x8BE5;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x589E;&#x52A0;&#x4EE5;&#x53CA; AGS3 &#x663E;&#x7136;&#x5207;&#x6362;&#x5176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x4ECE; Frmpd1 &#x5230; Galphai3&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x4E92;&#x65A5;&#x7684; Frmpd1 &#x4E0E; Galphai3 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; AGS3 &#x7684; AGS3 &#x4E0E; Frmpd1 coimmunoprecipitation &#x90FD;&#x5C06;&#x4E22;&#x5931;&#x3002;&#x673A;&#x68B0;&#x5316;&#xFF0C;Frmpd1 &#x53EF;&#x80FD;&#x4F4D;&#x7F6E; AGS3 &#x5728;&#x819C;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x5728;&#x5B83;&#x7136;&#x540E;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92; Galphai &#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;

PDZ &#x548C;&#x5E26; 4.1 &#x542B;&#x6709;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; Frmpd1 &#x89C4;&#x5B9A;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4FE1;&#x53F7; 3 &#x548C;&#x53CA;&#x5176;&#x4E0E; G &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Activator of G-protein signaling 3 (AGS3) is one of nine mammalian proteins containing one or more G-protein regulatory (GPR) motifs that stabilize the GDP-bound conformation of Galphai. Such proteins have revealed unexpected functional diversity for the "G-switch" in the control of events within the cell independent of the role of heterotrimeric G-proteins as transducers for G-protein-coupled receptors at the cell surface. A key question regarding this class of proteins is what controls their subcellular positioning and interaction with G-proteins. We conducted a series of yeast two-hybrid screens to identify proteins interacting with the tetratricopeptide repeat (TPR) of AGS3, which plays an important role in subcellular positioning of the protein. We report the identification of Frmpd1 (FERM and PDZ domain containing 1) as a regulatory binding partner of AGS3. Frmpd1 binds to the TPR domain of AGS3 and coimmunoprecipitates with AGS3 from cell lysates. Cell fractionation indicated that Frmpd1 stabilizes AGS3 in a membrane fraction. Upon cotransfection of COS7 cells with Frmpd1-GFP and AGS3-mRFP, AGS3-mRFP is observed in regions of the cell cortex and also in membrane extensions or processes where it appears to be colocalized with Frmpd1-GFP based upon the merged fluorescent signals. Frmpd1 knockdown (siRNA) in Cath.a-differentiated neuronal cells decreased the level of endogenous AGS3 in membrane fractions by approximately 50% and enhanced the alpha2-adrenergic receptor-mediated inhibition of forskolin-induced increases in cAMP. The coimmunoprecipitation of Frmpd1 with AGS3 is lost as the amount of Galphai3 in the cell is increased and AGS3 apparently switches its binding partner from Frmpd1 to Galphai3 indicating that the interaction of AGS3 with Frmpd1 and Galphai3 is mutually exclusive. Mechanistically, Frmpd1 may position AGS3 in a membrane environment where it then interacts with Galphai in a regulated manner.

The PDZ and band 4.1 containing protein Frmpd1 regulates the subcellular location of activator of G-protein signaling 3 and its interaction with G-proteins.

Activateur de la G-prot&eacute;ine de signalisation 3 (AGS3) est l&#39;une des prot&eacute;ines de mammif&egrave;res neuf contenant une ou plusieurs prot&eacute;ines G r&eacute;glementaires (GPR) motifs qui stabilisent la conformation de PIB li&eacute; de Galphai. Ces prot&eacute;ines ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; diversit&eacute; fonctionnelle inattendue pour le &laquo; G-switch &raquo; dans le contr&ocirc;le des &eacute;v&eacute;nements au sein de la cellule ind&eacute;pendante du r&ocirc;le de heterotrimeric prot&eacute;ines G comme transducteurs pour r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines G &agrave; la surface cellulaire. Une question essentielle au sujet de cette classe de prot&eacute;ines est ce qui contr&ocirc;le leur localisation subcellulaire et l&#39;interaction avec les prot&eacute;ines G. Nous avons men&eacute; une s&eacute;rie d&#39;&eacute;crans de deux-hybride de levure afin d&#39;identifier des prot&eacute;ines interagissant avec la r&eacute;p&eacute;tition du tetratricopeptide (TPR) de AGS3, qui joue un r&ocirc;le important dans la localisation subcellulaire de la prot&eacute;ine. Nous rapportons l&#39;identification des Frmpd1 (domaine FERM et PDZ contenant 1) comme un partenaire de liaison r&eacute;glementaire de AGS3. Frmpd1 se lie &agrave; la TPR de AGS3 et coimmunoprecipitates avec AGS3 de Lysats cellulaires. Fractionnement cellulaire a indiqu&eacute; que Frmpd1 se stabilise AGS3 dans une fraction membranaire. Lors de l&#39;analyse des cellules COS7 Frmpd1-GFP et AGS3-RDRF, AGS3-RDRF est observ&eacute;e dans les r&eacute;gions du cortex cellulaire et aussi dans la membrane, extensions ou processus o&ugrave; il semble &ecirc;tre colocalis&eacute; avec Frmpd1-GFP fond&eacute;es sur les signaux fluorescents fusionn&eacute;es. Frmpd1 pr&eacute;cipitation (siRNA) dans les cellules neuronales Cath.a dissoci&eacute;s ont diminu&eacute; le niveau de AGS3 endog&egrave;ne dans les fractions de membrane d&#39;environ 50 % et am&eacute;lior&eacute; l&#39;inhibition m&eacute;di&eacute;e par les r&eacute;cepteurs alpha2-adr&eacute;nergique des augmentations induites par la forskoline dans le cAMP. Le co-immunopr&eacute;cipitation de Frmpd1 avec AGS3 est perdu car la quantit&eacute; de Galphai3 dans la cellule est augment&eacute;e et AGS3 passe apparemment son partenaire de liaison de Frmpd1 &agrave; Galphai3 en mentionnant que l&#39;interaction de AGS3 avec Frmpd1 et Galphai3 est mutuellement exclusive. M&eacute;caniquement, Frmpd1 peut placer AGS3 dans un environnement membranaire o&ugrave; elle interagit ensuite avec Galphai de mani&egrave;re r&eacute;glement&eacute;e.

Le PDZ et bande 4.1 contenant la prot&eacute;ine Frmpd1 r&eacute;gule la localisation subcellulaire des activateur de G-prot&eacute;ine de signalisation 3 et son interaction avec les prot&eacute;ines G.

Aktivierung der G-Protein-Signalisierung, dass 3 (AGS3) ist eines der neun S&auml;ugetierproteine, enth&auml;lt mindestens ein G-Protein-regulatorischen (GPR) Motive, die die BIP-gebundenen Gestaltung des Galphai zu stabilisieren. Solche Proteine haben unerwartete Funktionsvielfalt ergeben, f&uuml;r die &quot;G-Switch&quot; bei der Kontrolle der Ereignisse innerhalb der Zelle, die unabh&auml;ngig von der Rolle der trimeren G-Proteine als Wandler f&uuml;r G-Protein-gekoppelter Rezeptoren an der Zelloberfl&auml;che. Eine wichtige Frage bez&uuml;glich dieser Klasse von Proteinen ist, was ihre subzellulare Positionierung und Interaktion mit G-Proteinen steuert. Wir haben eine Reihe von Hefe-zwei-Hybrid-Bildschirmen zur Identifizierung von Proteinen, die Interaktion mit der Tetratricopeptide Wiederholung (TPR) durchgef&uuml;hrt, der AGS3, die spielt eine wichtige Rolle bei der subzellul&auml;ren Positionierung des Proteins. Wir berichten &uuml;ber die Identifizierung von Frmpd1 (FERM und PDZ-Dom&auml;nen 1 enth&auml;lt) als rechtliche Bindung Partner von AGS3. Frmpd1 bindet an die TPR-Dom&auml;ne der AGS3 und Coimmunoprecipitates mit AGS3 aus Zelllysate. Zelle Fraktionierung zeigten, dass Frmpd1 AGS3 in Sekundenbruchteilen Membrane stabilisiert. Nach Cotransfection der COS7 Zellen mit Frmpd1-GFP und AGS3-mRFP AGS3-mRFP wird in Regionen der Zelle Rinde beobachtet und auch in Membran Erweiterungen oder Prozesse, wo es scheint, mit Frmpd1-GFP colocalized werden, basierend auf die zusammengef&uuml;hrten fluoreszierende Signale. Frmpd1 Niederschlag (SiRNA) in Cath.a-differenzierte Nervenzellen sanken um etwa 50 % die H&ouml;he der endogenen AGS3 in Membrane Br&uuml;che und verbesserte die alpha2-adrenergene Rezeptor-vermittelte Hemmung der Forskolin-induzierten Anstieg der Lager. Die Coimmunoprecipitation des Frmpd1 mit AGS3 geht verloren, wie der Galphai3 in der Zelle erh&ouml;ht wird und AGS3 offenbar seine Bindung-Partner von Frmpd1 wechselt bis Galphai3, dass das Zusammenspiel von AGS3 mit Frmpd1 und Galphai3 gegenseitig ist. Mechanistisch, kann Frmpd1 positionieren AGS3 in einer Membran-Umgebung wo interagiert dann mit Galphai in einer geregelten Art und Weise.

Die PDZ und Band 4.1 enth&auml;lt Protein Frmpd1 regelt die subzellulare Position der Aktivator der G-Protein-Signalisierung 3 und dessen Interaktion mit G-Proteinen.

Attivatore di G-proteina di segnalazione 3 (AGS3) &egrave; uno dei nove mammiferi proteine contenenti uno o pi&ugrave; G-proteina normativi (GPR) motivi che stabilizzano la conformazione del PIL-limite di Galphai. Tali proteine hanno rivelato inaspettata diversit&agrave; funzionale per il &quot;G-switch&quot; nel controllo degli eventi all&#39;interno della cellula indipendente del ruolo di eterotrimerica G-proteine come trasduttori per ricevitori G-proteina-accoppiato alla superficie delle cellule. Una domanda chiave per quanto riguarda questa classe di proteine &egrave; quello che controlla il loro posizionamento sottocellulare e interazione con le proteine G. Abbiamo condotto una serie di schermi due-ibrido lievito per identificare le proteine interagiscono con la ripetizione di tetratricopeptide (TPR) di AGS3, che svolge un ruolo importante nel posizionamento sottocellulare della proteina. Riportiamo l&#39;identificazione del Frmpd1 (dominio FERM e PDZ contenente 1) come partner di AGS3 normativo vincolante. Frmpd1 si lega al dominio TPR di AGS3 e coimmunoprecipitates con AGS3 da lisati cellulari. Frazionamento cellulare indicato che Frmpd1 stabilizza AGS3 in una frazione di membrana. Su cotransfection delle cellule COS7 con Frmpd1-GFP e AGS3-mRFP, AGS3-mRFP &egrave; osservato nelle regioni della corteccia cellulare e anche in membrana processi dove sembra essere colocalized con Frmpd1-GFP o estensioni basate sui segnali fluorescenti fuse. Frmpd1 atterramento (siRNA) in cellule neuronali differenziate Cath.a diminuito il livello di AGS3 endogeni nelle frazioni di membrana di circa il 50% e migliorato l&#39;inibizione mediata dal recettore alfa2-adrenergico di forskolina-indotta aumenta nell&#39;accampamento. Il coimmunoprecipitation di Frmpd1 con AGS3 &egrave; persa come &egrave; aumentata la quantit&agrave; di Galphai3 nella cella e AGS3 apparentemente passa il suo partner di associazione da Frmpd1 a Galphai3 indicando che si escludono reciprocamente l&#39;interazione del AGS3 con Frmpd1 e Galphai3. Meccanicistico, Frmpd1 pu&ograve; posizionare AGS3 in un ambiente di membrana dove poi interagisce con Galphai in maniera regolamentata.

La PDZ e banda 4.1 contenenti proteine Frmpd1 regola la posizione sottocellulare di attivatore della G-proteina di segnalazione 3 e la sua interazione con le proteine G.

3 (AGS3) Galphai &#x306E; GDP &#x7D50;&#x5408;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B; 1 &#x3064;&#x4EE5;&#x4E0A; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8ABF;&#x7BC0; (GPR) &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x542B;&#x3080; 9 &#x3064;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3067;&#x3059; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x3057;&#x3066; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x63A2;&#x89E6;&#x5B50;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30BB;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x300C;G &#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x300D;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306F;&#x3001;&#x4F55;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x4E0B;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3068; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x6C7A;&#x3081;&#x306F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; AGS3 &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057; (TPR) &#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x9175;&#x6BCD; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B; Frmpd1 &#x306E;&#x540C;&#x5B9A; (1 &#x3092;&#x542B;&#x3080; FERM&#x3001;PDZ &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;) AGS3 &#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB; lysates &#x304B;&#x3089; Frmpd1 AGS3 &#x3068; AGS3 &#x3068; coimmunoprecipitates &#x306E; TPR &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x5206;&#x5225;&#x306F;&#x3001;Frmpd1 AGS3 &#x306F;&#x819C;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x78BA;&#x304B;&#x3081;&#x308B; COS7 &#x7D30;&#x80DE; Frmpd1 GFP &#x3068; AGS3 mRFP AGS3 mRFP &#x30BB;&#x30EB;&#x76AE;&#x8CEA;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x819C;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; Frmpd1-GFP &#x3092;&#x7D50;&#x679C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304B;&#x3089;&#x3002;Frmpd1 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; (siRNA) Cath.a &#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x819C;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; AGS3 &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x7D04; 50 &#xFF05; &#x6E1B;&#x5C11;&#x3001;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x8A98;&#x8D77;&#x5897;&#x52A0;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E; 2 &#x30FB; &#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AGS3 &#x3068; Frmpd1 &#x306E; coimmunoprecipitation &#x306F; Galphai3 &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x91CF;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;AGS3 &#x306F;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B; Galphai3 Frmpd1 &#x3068; Galphai3 &#x3068; AGS3 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x76F8;&#x4E92;&#x306B;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC; Frmpd1 &#x304B;&#x3089;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x3068;&#x5931;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A5F;&#x68B0;&#x8AD6;&#x7684;&#x306B;&#x3001;Frmpd1 AGS3 &#x819C;&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x304C;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3001;Galphai &#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

PDZ &#x3068;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9; 4.1 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; Frmpd1 &#x3092;&#x542B;&#x3080; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB; 3 &#x3068; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2E0;&#xD638; 3 (AGS3)&#xC740; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xADDC;&#xC81C; (GPR) &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; Galphai&#xC758; GDP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xD558;&#xB294; 9 &#xAC1C;&#xC758; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC911;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC81C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;&#xB4C0;&#xC11C;&#xB85C; heterotrimeric G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xC140; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0;&#xC11C; &quot;G-&#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&quot;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xC740; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xBC1D;&#xD600;&#xC84C;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758;&#xC774; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC740; &#xBB34;&#xC5C7; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; subcellular &#xD3EC;&#xC9C0;&#xC154;&#xB2DD; &#xBC0F; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; AGS3, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; subcellular &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xC77C;&#xB828;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; tetratricopeptide &#xBC18;&#xBCF5; (TPR)&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; Frmpd1 &#xC2DD;&#xBCC4; (&#xBCF4;&#xD5D8;&#xC774; &#xACE0; PDZ &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; 1) ags3&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB85C;. Frmpd1 &#xC140; lysates&#xC5D0;&#xC11C; AGS3 &#xBC0F; ags3&#xC640; coimmunoprecipitates&#xC758; TPR &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140; &#xBD84;&#xB958; &#xD45C;&#xC2DC; Frmpd1 &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; ags3&#xB97C; &#xC548;&#xC815; &#xC2DC;&#xD0A8;&#xB2E4;. Frmpd1 GFP&#xC640; AGS3 mRFP COS7 &#xC140;&#xC758; cotransfection&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; AGS3 Mrfp&#xB294; &#xC140; &#xD53C; &#xC9C8; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558; &#xACE0;&#xB3C4; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xD655;&#xC7A5; &#xB610;&#xB294; Frmpd1 GFP&#xC640; colocalized&#xC5D0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xAE30;&#xBC18; &#xBCD1;&#xD569; &#xB41C; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;. Frmpd1 &#xCD5C;&#xC800; (siRNA) Cath.a &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xBD84;&#xC218; &#xC0DD; AGS3 &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC57D; 50% &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; alpha2 &#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;-&#xC911;&#xC7AC; &#xC5B5;&#xC81C; forskolin &#xC720;&#xBC1C; &#xC99D;&#xAC00; &#xCEA0;&#xD504;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C;. Ags3&#xC640; frmpd1&#xC758; coimmunoprecipitation &#xC140;&#xC758; galphai3&#xC758; &#xC591;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; ags3&#xB294; &#xBD84;&#xBA85;&#xD788; Galphai3 Frmpd1 &#xBC0F; galphai3&#xC640; ags3&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xBC30;&#xD0C0;&#xC801;&#xC778; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; frmpd1&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xC758; &#xC804;&#xD658; &#xC190;&#xC2E4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Mechanistically, Frmpd1 &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; ags3&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC704;&#xCE58; &#xB9C9; &#xD658;&#xACBD; &#xC5B4;&#xB514; &#xB2E4;&#xC74C; &#xADDC;&#xC81C; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; Galphai &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;.

PDZ &#xBC0F; &#xBC34;&#xB4DC; 4.1 G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xC758; subcellular &#xC704;&#xCE58; &#xC870;&#xC808; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Frmpd1 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; 3 G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC2E0;&#xD638;.

Activador de la prote&iacute;na G se&ntilde;alizaci&oacute;n 3 (AGS3) es uno de los nueve mam&iacute;feras prote&iacute;nas que contienen uno o m&aacute;s G prote&iacute;nas reguladoras (GPR) motivos que estabilizan la conformaci&oacute;n del PIB-limite de Galphai. Estas prote&iacute;nas han revelado inesperada diversidad funcional para el &quot;G-switch&quot; en el control de eventos dentro de la c&eacute;lula independiente de la funci&oacute;n de heterotrim&eacute;ricas G-prote&iacute;nas como transductores para receptores g-prote&iacute;na-juntados en la superficie de la c&eacute;lula. Una pregunta clave con respecto a esta clase de prote&iacute;nas es lo que controla su posicionamiento subcelular y la interacci&oacute;n con las prote&iacute;nas G. Llevamos a cabo una serie de pantallas de dos h&iacute;bridos de levadura para identificar prote&iacute;nas que interact&uacute;an con la repetici&oacute;n de tetratricopeptide (TPR) de AGS3, que desempe&ntilde;a un papel importante en el posicionamiento subcelular de la prote&iacute;na. Divulgamos la identificaci&oacute;n de Frmpd1 (FERM y PDZ dominio que contiene 1) como socio de la reglamentaci&oacute;n de la Uni&oacute;n de AGS3. Frmpd1 se une al dominio TPR de AGS3 y coimmunoprecipitates con AGS3 de lisados celulares. Fraccionamiento celular indica que Frmpd1 estabiliza AGS3 en una fracci&oacute;n de la membrana. Cotransfection de las c&eacute;lulas COS7 con Frmpd1-GFP y AGS3-mRFP, AGS3-mRFP se observa en las regiones de la corteza de la c&eacute;lula y tambi&eacute;n en la membrana extensiones o procesos donde parece ser colocalized con Frmpd1-GFP basan en las se&ntilde;ales fluorescentes fusionadas. Frmpd1 ca&iacute;da (siRNA) en c&eacute;lulas neuronales diferenciadas Cath.a hab&iacute;a disminuido el nivel de AGS3 end&oacute;geno en fracciones de membrana por aproximadamente el 50% y hab&iacute;a mejorado la inhibici&oacute;n mediada por receptor adren&eacute;rgica alfa2 de forskoline inducida por aumentos en el campamento. El coimmunoprecipitation de Frmpd1 con AGS3 se pierde se incrementa la cantidad de Galphai3 en la c&eacute;lula y AGS3 al parecer cambia a su socio de la Uni&oacute;n de Frmpd1 a Galphai3 indicando que la interacci&oacute;n de AGS3 con Frmpd1 y Galphai3 es mutuamente excluyente. Mec&aacute;nico, Frmpd1 puede colocar AGS3 en un entorno de membrana donde luego interact&uacute;a con Galphai de una manera regulada.

El PDZ y banda 4.1 que contiene prote&iacute;na Frmpd1 regula la localizaci&oacute;n subcelular de activador de la prote&iacute;na G se&ntilde;alizaci&oacute;n 3 y su interacci&oacute;n con las prote&iacute;nas G.

AGS3&#xFF0C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242;&#x7684; G-&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x53C2;&#x4E0E;&#x610F;&#x5916;&#x529F;&#x80FD;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x7684; G-&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;AGS3 &#x6709;&#x4E03;&#x4E2A; tetratricopeptide (TPR) &#x6C5F;&#x9752;&#x4E0A;&#x6E38;&#x56DB; G &#x86CB;&#x767D;&#x76D1;&#x7BA1; (&#x96F7;&#x8FBE;) &#x56FE;&#x6848;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A; Gialpha gdp &#x505C;&#x9760;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x5173;&#x7CFB;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0D;&#x540C;&#x57DF;&#x5185;&#x7684; AGS3 &#x5B9A;&#x4F4D;&#x90FD;&#x53EF;&#x80FD;&#x5F71;&#x54CD; G-&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x53CA;&#x5176;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; AGS3 &#x8FDB;&#x5165; aggresome &#x901A;&#x8DEF;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x53D7; AGS3 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34; Gialpha &#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; Inscuteable &#xFF08;&#x827E;&#x745E;&#xFF09;&#x3002;Gialpha &#x62EF;&#x6551; AGS3 &#x4ECE; aggresome&#xFF0C;&#x800C;&#x827E;&#x745E;&#x8865;&#x5145;&#x4E86; AGS3 &#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C; aggresome &#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x3002;AGS3 &#x5230; aggresome &#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684; TPR &#x57DF;&#x548C;&#x5B83;&#x7684;&#x52A0;&#x901F;&#x4E0B;&#x4E2D;&#x65AD; TPR &#x7EC4;&#x7EC7;&#x7ED3;&#x6784;&#x6216;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x7684;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x5B58;&#x5728; AGS3&#xFF0C;G-&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x827E;&#x745E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5019;&#x9009;&#x86CB;&#x767D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5E94;&#x6FC0;&#x86CB;&#x767D;&#x52A0;&#x5DE5;&#x75C5;&#x75C7;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

&#x5206;&#x5E03;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242; 3 aggresomal &#x901A;&#x8DEF;&#x5185;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF1A; &#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x7684; tetratricopeptide &#x91CD;&#x590D;&#x57DF;&#x548C;&#x5FAE;&#x5206;&#x8C03;&#x8282;&#x7531; AGS3 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5177;&#x4F53;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x4F19;&#x4F34;&#xFF0C;Gi(alpha) &#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; inscuteable&#x3002;

AGS3, a receptor-independent activator of G-protein signaling, is involved in unexpected functional diversity for G-protein signaling systems. AGS3 has seven tetratricopeptide (TPR) motifs upstream of four G-protein regulatory (GPR) motifs that serve as docking sites for Gialpha-GDP. The positioning of AGS3 within the cell and the intramolecular dynamics between different domains of the proteins are likely key determinants of their ability to influence G-protein signaling. We report that AGS3 enters into the aggresome pathway and that distribution of the protein is regulated by the AGS3 binding partners Gialpha and mammalian Inscuteable (mInsc). Gialpha rescues AGS3 from the aggresome, whereas mInsc augments the aggresome-like distribution of AGS3. The distribution of AGS3 to the aggresome is dependent upon the TPR domain, and it is accelerated by disruption of the TPR organizational structure or introduction of a nonsynonymous single-nucleotide polymorphism. These data present AGS3, G-proteins, and mInsc as candidate proteins involved in regulating cellular stress associated with protein-processing pathologies.

Distribution of activator of G-protein signaling 3 within the aggresomal pathway: role of specific residues in the tetratricopeptide repeat domain and differential regulation by the AGS3 binding partners Gi(alpha) and mammalian inscuteable.

AGS3, un activateur du r&eacute;cepteur ind&eacute;pendant de G-prot&eacute;ine de signalisation, est impliqu&eacute; dans l&#39;inattendu diversit&eacute; fonctionnelle des syst&egrave;mes de signalisation de G-prot&eacute;ine. AGS3 a sept motifs de tetratricopeptide (TPR) en amont de quatre prot&eacute;ines G r&eacute;glementaires (GPR) motifs qui servent d&#39;ancrage des sites de Gialpha-PIB. Le positionnement des AGS3 dans la cellule et la dynamique intramol&eacute;culaire entre les diff&eacute;rents domaines des prot&eacute;ines est probables des facteurs d&eacute;terminants de leur capacit&eacute; &agrave; influencer la signalisation de la prot&eacute;ine G. Les auteurs rapportent que AGS3 entre dans la voie de l&#39;aggresome et que la distribution de la prot&eacute;ine est r&eacute;gul&eacute;e par les partenaires de liaison AGS3 Gialpha et Inscuteable chez les mammif&egrave;res (mInsc). Gialpha sauve le AGS3 de l&#39;aggresome, tandis que mInsc augmente la distribution comme aggresome de AGS3. La r&eacute;partition des AGS3 &agrave; l&#39;aggresome d&eacute;pend du domaine TPR, et il est acc&eacute;l&eacute;r&eacute; par la rupture de la structure organisationnelle de TPR ou introduction d&#39;un single-nucleotide polymorphism non-synonymes. Ces donn&eacute;es pr&eacute;sentent AGS3, G-prot&eacute;ines et mInsc comme candidat de prot&eacute;ines impliqu&eacute;es dans la r&eacute;gulation du stress cellulaire li&eacute;s &agrave; la prot&eacute;ine-traitement de pathologies.

Distribution d&#39;activateur de la prot&eacute;ine G 3 dans la voie de l&#39;aggresomal de signalisation : r&ocirc;le des r&eacute;sidus sp&eacute;cifiques dans le domaine tetratricopeptide et r&eacute;gulation diff&eacute;rentielle de la liaison AGS3 partenaires Gi(alpha) et inscuteable chez les mammif&egrave;res.

AGS3, ein Rezeptor-unabh&auml;ngige-Aktivator der G-Protein-Signalisierung, ist unerwartete Funktionsvielfalt f&uuml;r G-Protein-Signalling-Systeme beteiligt. AGS3 hat sieben Tetratricopeptide (TPR) Motive stromaufw&auml;rts der vier G-Protein-regulatorischen (GPR)-Motive, die als docking-Websites f&uuml;r Gialpha-BIP dienen. Die Positionierung der AGS3 innerhalb der Zelle und die intramolekulare Dynamik zwischen verschiedenen Bereichen der Proteine sind wahrscheinlich wichtigsten Determinanten ihrer F&auml;higkeit, G-Protein-Signalisierung zu beeinflussen. Wir berichten, dass die Aggresome-Pathway AGS3 eingeht und Verteilung des Proteins durch die AGS3-Bindung-Partner Gialpha und S&auml;ugetier-Inscuteable (mInsc) geregelt ist. Gialpha rettet AGS3 aus der Aggresome, w&auml;hrend mInsc die Aggresome-&auml;hnliche Verteilung der AGS3 erweitert. Die Verteilung der AGS3 auf die Aggresome ist abh&auml;ngig von der TPR-Dom&auml;ne, und es beschleunigt durch St&ouml;rung im TPR Organisationsstruktur oder die Einf&uuml;hrung einer nonsynonymous Einzel-Nukleotid Polymorphie. Diese Daten pr&auml;sentieren AGS3, G-Proteinen und mInsc als Kandidat Proteine regulieren zellul&auml;re Belastung Protein-Verarbeitung Pathologien zugeordnet.

Verteilung der Aktivator der G-Protein-Signalisierung 3 innerhalb der Aggresomal Weg: Rolle bestimmte R&uuml;ckst&auml;nde in der Tetratricopeptide Wiederholung Dom&auml;ne und differenzielle Verordnung durch die Bindung AGS3 Partner Gi(alpha) und S&auml;ugetier-Inscuteable.

AGS3, un attivatore del recettore-indipendente del G-proteina di segnalazione, &egrave; coinvolto nella inaspettata diversit&agrave; funzionali per sistemi di segnalazione G-proteina. AGS3 ha sette motivi di tetratricopeptide (TPR) a Monte di quattro G-proteina normativi (GPR) motivi che servono come ancoraggio siti per Gialpha-PIL. Il posizionamento di AGS3 all&#39;interno della cellula e la dinamica intramolecolare tra diversi domini delle proteine &egrave; probabilmente determinanti della loro capacit&agrave; di influenzare la G-proteina di segnalazione. Segnaliamo che AGS3 entra nella via del aggresome e che la distribuzione della proteina &egrave; regolata dai partner di associazione AGS3 Gialpha e Inscuteable dei mammiferi (mInsc). Gialpha Salva AGS3 aggresome, mentre mInsc aumenta la distribuzione come aggresome di AGS3. La distribuzione di AGS3 per il aggresome dipende dal dominio TPR, ed &egrave; accelerato dall&#39;interruzione della struttura organizzativa di TPR o introduzione di un polimorfismo a singolo nucleotide nonsynonymous. Questi dati presentano AGS3, G-proteine e mInsc come candidato di proteine coinvolte nella regolazione di stress cellulare associato a proteine-trattamento patologie.

Distribuzione di attivatore della proteina G segnalazione 3 all&#39;interno del percorso di aggresomal: ruolo di specifici residui nella ripetizione dominio tetratricopeptide e regolamento differenziale dall&#39;associazione AGS3 partner Gi(alpha) e inscuteable dei mammiferi.

AGS3&#x3001;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x591A;&#x69D8;&#x6027; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7CFB;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AGS3 &#x306F;&#x3001;7 &#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; (TPR) &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x4E0A;&#x6D41;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; Gialpha-GDP &#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x306A;&#x308B; 4 G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8ABF;&#x7BC0; (GPR) &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x5185; AGS3 &#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044; G &#x86CB;&#x767D;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x6307;&#x6A19;&#x3067;&#x3059;&#x3002;AGS3 aggresome &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x5165;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x5E03; AGS3 &#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC; Gialpha &#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E; Inscuteable (mInsc) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MInsc AGS3 &#x306E; aggresome &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;aggresome &#x304B;&#x3089; AGS3 Gialpha &#x3092;&#x6551;&#x52A9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AGS3 &#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3001;aggresome &#x306B;&#x306F; TPR &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057; TPR &#x7D44;&#x7E54;&#x69CB;&#x9020;&#x3084;&#x55C5;&#x899A;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x591A;&#x5F62;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x306E;&#x7834;&#x58CA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52A0;&#x901F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AGS3&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x63D0;&#x793A; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x51E6;&#x7406;&#x75C5;&#x614B;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x5019;&#x88DC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066; mInsc&#x3002;

G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x5206;&#x5E03; aggresomal &#x7D4C;&#x8DEF;&#x5185; 3 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x5316;: &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E; AGS3 &#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC; Gi(alpha) &#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E; inscuteable&#x3002;

AGS3, &#xC2E0;&#xD638; &#xD558;&#xB294; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2E0;&#xD638; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xC740; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;. AGS3 7 tetratricopeptide (TPR) &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0C1;&#xB958; 4 &#xAC1C;&#xC758; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xADDC;&#xC81C; (GPR) &#xBAA8;&#xD2F0;&#xD504;&#xC758; Gialpha GDP&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xACE0;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294;. &#xC140; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; intramolecular &#xC5ED;&#xD559; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; ags3&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xB294; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC8FC;&#xC694; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; AGS3 aggresome &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; &#xB4E4;&#xC5B4;&#xAC00;&#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD84;&#xD3EC; AGS3 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; Gialpha&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; Inscuteable (mInsc)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Gialpha mInsc AGS3 aggresome&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC99D;&#xB300; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;, aggresome&#xC5D0;&#xC11C; ags3&#xB97C; &#xAD6C;&#xCD9C;. Aggresome&#xC5D0; ags3&#xC758; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB294; TPR &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; TPR &#xC870;&#xC9C1; &#xAD6C;&#xC870; &#xB610;&#xB294; nonsynonymous &#xB2E8;&#xC77C; &#xC5FC;&#xAE30; &#xB2E4;&#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xB3C4;&#xC785;&#xC758; &#xC7A5;&#xC560;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC00;&#xC18D;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC81C;&#xC2DC; AGS3, G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCC98;&#xB9AC; &#xBCD1; &#xB9AC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;&#xC73C;&#xB85C; mInsc.

G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xC758; aggresomal &#xD1B5;&#xB85C; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; 3 &#xC2E0;&#xD638;: tetratricopeptide &#xBC18;&#xBCF5; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; AGS3 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB4F1; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; Gi(alpha) &#xBC0F; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; inscuteable.

AGS3, un activador del receptor independiente de se&ntilde;alizaci&oacute;n de la prote&iacute;na G, participa en diversidad funcional inesperado para los sistemas de se&ntilde;alizaci&oacute;n de prote&iacute;na G. AGS3 tiene siete motivos tetratricopeptide (TPR) aguas arriba de cuatro motivos (GPR) con reguladoras de g-prote&iacute;na que sirven como sitios de atraque para Gialpha-PIB. La colocaci&oacute;n de AGS3 dentro de la c&eacute;lula y la din&aacute;mica intramolecular entre diferentes dominios de las prote&iacute;nas es probablemente determinantes de su capacidad para influir en la se&ntilde;alizaci&oacute;n de la prote&iacute;na G. Divulgamos que AGS3 entra en el camino de aggresome y que la distribuci&oacute;n de la prote&iacute;na es regulada por los socios de la Uni&oacute;n de la AGS3 Gialpha y Inscuteable mam&iacute;fero (mInsc). Gialpha rescata a AGS3 de la aggresome, mientras que mInsc aumenta la distribuci&oacute;n como el aggresome de AGS3. La distribuci&oacute;n de AGS3 a la aggresome depende de si el dominio TPR, y se acelera por alteraci&oacute;n de la estructura organizativa de TPR o la introducci&oacute;n de un polimorfismo de nucle&oacute;tido nonsynonymous. Estos datos presentan AGS3, prote&iacute;nas G y mInsc como candidato las prote&iacute;nas implicadas en la regulaci&oacute;n del estr&eacute;s celular asociado a patolog&iacute;as de procesamiento de prote&iacute;nas.

Distribuci&oacute;n de activador de la prote&iacute;na G 3 dentro de la v&iacute;a de aggresomal de se&ntilde;alizaci&oacute;n: papel de residuos espec&iacute;ficos en el dominio de repetici&oacute;n tetratricopeptide y regulaci&oacute;n diferencial por el atascamiento de AGS3 socios Gi(alpha) y inscuteable mam&iacute;fero.

G-&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x5236;&#x5668; (GPSM) &#x53D1;&#x6325;&#x591A;&#x79CD;&#x804C;&#x80FD;&#x89D2;&#x8272;&#x901A;&#x8FC7; G &#x86CB;&#x767D;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E0E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;AGS3 &#xFF08;GPSM1&#xFF09; &#x5305;&#x542B;&#x56DB;&#x4E2A; G &#x86CB;&#x767D;&#x76D1;&#x7BA1;&#x56FE;&#x6848; &#xFF08;GPR&#xFF09;&#xFF0C;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A; G&alpha;(i) &#x514D;&#x8D39;&#x7684; G&beta;&gamma; &#x4E3A;&quot;G &#x5F00;&#x5173;&quot;&#x63D0;&#x4F9B;&#x975E;&#x540C;&#x5BFB;&#x5E38;&#x7684;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7531;&#x54EA;&#x4E9B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5230;&#x6B64;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x6E05;&#x695A;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; AGS3&middot; &#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;G&alpha;(i) &#x901A;&#x8FC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#xFF0C;&#x4E03;&#x8DE8;&#x819C;&#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6A21;&#x5757;&#x3002;AGS3 &#x548C; G&alpha;(i1) &#x7528;&#x6D77;&#x80BE;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x6807;&#x8BB0;&#x6216;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x5C55;&#x51FA;&#x9971;&#x548C;&#x3001; &#x7279;&#x5B9A;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6307;&#x793A;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x3002;&#x6FC0;&#x6D3B; (2) &alpha;-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x6216; &mu; &#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53;&#x51CF;&#x5C11; AGS3 RLuc&middot;G&alpha; &#xFF08;i1&#xFF09;-YFP &#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; 30%&#x4EE5;&#x4E0A;&#x3002;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x963B;&#x788D;&#x4E86;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x548C; RGS4&#xFF0C;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D; G&beta;&gamma; &#x87AF;&#x5408;&#x4E0E;&#x7FA7;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x7684; GRK2 &#x88AB;&#x7BE1;&#x6539;&#x3002;(I) G&alpha;-&#x4ECE;&#x5C5E;&#x548C;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x4E5F;&#x6709;&#x4EBA; AGS3 &#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x4F53;&#x901A;&#x5E38;&#x8026;&#x5408;&#x5230; G&alpha;(i) &#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; &#x6307;&#x793A; AGS3 &#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742;&#x7684; G&alpha;(o) &#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x5728;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E; AGS3 &#x53EF;&#x9006;&#x52A0;&#x5165;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x590D;&#x6742;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76AE;&#x5C42;&#x3002;&#x53D7;&#x4F53;&#x8026;&#x5408;&#x5230; G&alpha;&beta;&gamma; &#x548C; GPR-G&alpha;(i) &#x63D0;&#x4F9B;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x54CD;&#x5E94;&#x548C;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x5E76;&#x534F;&#x8C03;&#x590D;&#x6742;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;

AGS3&middot; &#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;G {&#x5B57;&#x6BCD;} &#x6211;&#x7684;&#x8DE8;&#x5EA6;&#x4E03;&#x8DE8;&#x819C;&#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742;&#x3002;

G-protein signaling modulators (GPSM) play diverse functional roles through their interaction with G-protein subunits. AGS3 (GPSM1) contains four G-protein regulatory motifs (GPR) that directly bind GÎ±(i) free of GÎ²Î³ providing an unusual scaffold for the "G-switch" and signaling complexes, but the mechanism by which signals track into this scaffold are not well understood. We report the regulation of the AGS3Â·GÎ±(i) signaling module by a cell surface, seven-transmembrane receptor. AGS3 and GÎ±(i1) tagged with Renilla luciferase or yellow fluorescent protein expressed in mammalian cells exhibited saturable, specific bioluminescence resonance energy transfer indicating complex formation in the cell. Activation of Î±(2)-adrenergic receptors or Î¼-opioid receptors reduced AGS3-RLucÂ·GÎ±(i1)-YFP energy transfer by over 30%. The agonist-mediated effects were inhibited by pertussis toxin and co-expression of RGS4, but were not altered by GÎ²Î³ sequestration with the carboxyl terminus of GRK2. GÎ±(i)-dependent and agonist-sensitive bioluminescence resonance energy transfer was also observed between AGS3 and cell-surface receptors typically coupled to GÎ±(i) and/or GÎ±(o) indicating that AGS3 is part of a larger signaling complex. Upon receptor activation, AGS3 reversibly dissociates from this complex at the cell cortex. Receptor coupling to both GÎ±Î²Î³ and GPR-GÎ±(i) offer additional flexibility for systems to respond and adapt to challenges and orchestrate complex behaviors.

Regulation of the AGS3Â·G{alpha}i signaling complex by a seven-transmembrane span receptor.

Modulateurs de signalisation de G-prot&eacute;ine (GPSM) jouent divers r&ocirc;les fonctionnels gr&acirc;ce &agrave; leur interaction avec les sous-unit&eacute;s de prot&eacute;ine G. AGS3 (GPSM1) contient quatre motifs r&eacute;glementaires G-prot&eacute;ine (GPR) qui lient directement G&alpha;(i) gratuit de G&beta;&gamma; fournissant un &eacute;chafaudage inhabituelle pour le &laquo; G-switch &raquo; et signalisation complexes, mais le m&eacute;canisme par lequel des signaux, piste dans cet &eacute;chafaudage ne sont pas bien comprises. Nous rapportons la r&eacute;gulation de la AGS3&middot;G&alpha;(i) module de signalisation par une surface cellulaire, r&eacute;cepteur sept domaines transmembranaire. AGS3 et G&alpha;(i1) le tag Renilla lucif&eacute;rase ou prot&eacute;ine fluorescente jaune exprim&eacute; dans les cellules mammif&egrave;res expos&eacute;s le transfert d&#39;&eacute;nergie de r&eacute;sonance de bioluminescence saturable, sp&eacute;cifique indiquant la formation d&#39;un complexe dans la cellule. Activation de &alpha; (2)-r&eacute;cepteurs adr&eacute;nergiques ou r&eacute;cepteurs opio&iuml;des &mu; r&eacute;duit AGS3-RLuc&middot;G&alpha; (i1)-transfert d&#39;&eacute;nergie YFP par plus de 30 %. Les effets m&eacute;di&eacute;s par les agonistes sont inhib&eacute;es par la toxine pertussique et co-expression de RGS4, mais n&#39;ont pas &eacute;t&eacute; alt&eacute;r&eacute;s par s&eacute;questration de G&beta;&gamma; avec l&#39;extr&eacute;mit&eacute; carboxyle de GRK2. G&alpha; (i)-transfert d&#39;&eacute;nergie d&eacute;pendante et sensibles &agrave; l&#39;agoniste bioluminescence resonance a &eacute;t&eacute; aussi observ&eacute;e entre AGS3 et les r&eacute;cepteurs de surface cellulaire g&eacute;n&eacute;ralement coupl&eacute;s au G&alpha;(i) ou G&alpha;(o), indiquant que les AGS3 fait partie d&#39;une signalisation plus complexe. Lors de l&#39;activation de r&eacute;cepteurs, AGS3 se dissocie r&eacute;versible de ce complexe dans le cortex de la cellule. R&eacute;cepteur de couplage &agrave; la fois G&alpha;&beta;&gamma; et GPR-G&alpha;(i) offre une flexibilit&eacute; suppl&eacute;mentaire pour les syst&egrave;mes de r&eacute;pondre et s&#39;adapter aux d&eacute;fis et orchestrer des comportements complexes.

R&egrave;glement de l&#39;AGS3&middot;G {alpha} je complexe de signalisation par un r&eacute;cepteur span sept domaines transmembranaire.

G-Protein-Signalisierung Modulatoren (GPSM) spielen diverse Funktionsrollen durch ihre Interaktion mit G-Protein-Untereinheiten. AGS3 (GPSM1) enth&auml;lt vier G-Protein-regulatorische Motive (GPR), die direkt G&alpha;(i) frei von G&beta;&gamma; vorsieht, die &quot;G-Switch&quot; eine ungew&ouml;hnliche Ger&uuml;st und Signalisierung von komplexen, aber der Mechanismus binden, durch welche Signale Spur in diesem Ger&uuml;st nicht gut verstanden. Wir berichten &uuml;ber die Regulierung der AGS3&middot;G&alpha;(i) Signalisierung Modul durch eine Zelloberfl&auml;che, sieben-Transmembran Rezeptor. AGS3 und G&alpha;(i1) die mit Renilla-Luciferase oder gelbes fluoreszierendes Protein ausgedr&uuml;ckt in den S&auml;ugetier-Zellen ausgestellt S&auml;ttigbare, spezifische Biolumineszenz-Resonanz-Energie-Transfer angibt, Komplexbildung in der Zelle. Aktivierung von &alpha; (2)-adrenerge Rezeptoren oder &mu;-Opioid-Rezeptoren verringert AGS3-RLuc&middot;G&alpha; (i1)-YFP Energie&uuml;bertragung um &uuml;ber 30 %. Der Agonist-vermittelte Effekte wurden durch Pertussis-Toxin und Koexpression von RGS4 gehemmt, sondern wurden von G&beta;&gamma;-Sequestrierung mit das Carboxyl-Terminus der GRK2 nicht ge&auml;ndert. G&alpha; (i)-abh&auml;ngige und Agonist-Sensitive Biolumineszenz-Resonanz-Energie-Transfer wurde auch beobachtet, zwischen AGS3 und Zelloberfl&auml;che Rezeptoren in der Regel gekoppelt mit G&alpha;(i) und/oder G&alpha;(o) dass AGS3 Teil einer gr&ouml;&szlig;eren signalisieren Komplex ist. Nach der Aktivierung des Rezeptors distanziert AGS3 umkehrbar von dieses Komplexes an der Zelle Kortex. Rezeptor-Ankopplung an G&alpha;&beta;&gamma; und GPR-G&alpha;(i) bieten zus&auml;tzliche Flexibilit&auml;t f&uuml;r Systeme reagieren und Herausforderungen anpassen und komplexe Verhaltensweisen zu orchestrieren.

Verordnung &uuml;ber die AGS3&middot;G {Alpha} ich signalisieren Komplex durch eine sieben-Transmembran-Span-Element-Rezeptor.

G-proteina segnalazione modulatori (GPSM) svolgono diversi ruoli funzionali attraverso la loro interazione con la subunit&agrave; G-proteina. AGS3 (GPSM1) contiene quattro G-proteina normativi motivi (GPR) che si legano direttamente G&alpha;(i) gratuito di G&beta;&gamma; fornendo un&#39;impalcatura insolito per il &quot;G-switch&quot; e segnalazione complessi, ma il meccanismo da cui segnali traccia in questa impalcatura non sono ben compresi. Riportiamo il regolamento della AGS3&middot;G&alpha;(i) modulo di segnalazione di una superficie di cella, 7-transmembrana del recettore. AGS3 e G&alpha;(i1) taggati con Renilla luciferase o proteina fluorescente gialla espressa in cellule di mammifero esposte bioluminescenza saturabile, specifico resonance energy transfer che indica la formazione dei complessi nella cella. Attivazione di &alpha; (2)-recettori adrenergici o i recettori oppioidi &mu; ridotto AGS3-RLuc&middot;G&alpha; (i1)-trasferimento di energia YFP da oltre il 30%. Gli effetti mediati da agonista sono stati inibiti da tossina pertosse e co-expression di RGS4, ma non sono stati modificati, sequestro G&beta;&gamma; con il terminale carbossilico di GRK2. G&alpha; (i)-trasferimento di energia di risonanza di bioluminescenza agonista-sensibili e dipendenti &egrave; stato osservato anche tra AGS3 e recettori della superficie cellulare in genere accoppiati a G&alpha;(i) o G&alpha;(o) che indica che AGS3 &egrave; parte di una segnalazione pi&ugrave; grandi complessi. Dopo l&#39;attivazione del recettore, AGS3 reversibilmente si dissocia da questo complesso presso la corteccia cellulare. Recettore di accoppiamento sia G&alpha;&beta;&gamma; e GPR-G&alpha;(i) offerta ulteriore flessibilit&agrave; per sistemi di rispondere e adattarsi alle sfide e orchestrare comportamenti complessi.

Regolamento dell&#39;AGS3&middot;G {alpha} i complessi di segnalazione di un recettore transmembrana sette span.

G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x5909;&#x8ABF;&#x5668; (GPSM) G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AGS3 (GPSM1) &#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x300C;G &#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x300D;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x8DB3;&#x5834;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x3069;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x3053;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x306B;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x6A5F;&#x69CB;&#x304C;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E; G&beta;&gamma; &#x306E;&#x7121;&#x6599; G&alpha;(i) 4 G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; (GPR) &#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;AGS3&middot; &#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;G&alpha;(i) &#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x3067; 7 &#x56DE;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AGS3 &#x3068; G&alpha;(i1) &#x3092;&#x6301;&#x3064; Renilla &#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x3051;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x9EC4;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x53EF;&#x98FD;&#x548C;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&Alpha; (2) &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3084; &mu;-&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6E1B;&#x5C11; AGS3 RLuc&middot;G&alpha; (i1)-YFP &#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x8EE2;&#x9001;&#x3092; 30% &#x4EE5;&#x4E0A;&#x3002;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3068;&#x306E; RGS4&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x3001;GRK2 &#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x5074;&#x306E; G&beta;&gamma; &#x9694;&#x96E2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;G&alpha; (i)-&#x4F9D;&#x5B58;&#x3068;&#x4F5C;&#x52D5;&#x85AC;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x304B;&#x3089;, AGS3 &#x3068; G&alpha;(i) &#x3084; AGS3 &#x304C;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x90E8;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; G&alpha;(o) &#x306B;&#x901A;&#x5E38;&#x7D50;&#x5408;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x3002;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;AGS3 &#x306F;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x304B;&#x3089;&#x5207;&#x308A;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;G&alpha;&beta;&gamma; &#x3068; GPR-G&alpha;(i) &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x8AB2;&#x984C;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x884C;&#x52D5;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

AGS3&middot; &#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;G {&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;} &#x79C1;&#x306F; 7 &#x56DE;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x578B;&#x30B9;&#x30D1;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F1D;&#x9001;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30; (GPSM) G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. AGS3 (GPSM1) &#xD3EC;&#xD568; 4 &#xAC1C;&#xC758; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xADDC;&#xC81C; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; (GPR) &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; G&alpha;(i) G&beta;&gamma; &quot;G-&#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&quot;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC774; &#xD55C; &#xBE44; &#xACC4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B8;&#xB799;&#xC774; &#xBE44;&#xC774; &#xACC4;&#xC5D0;&#xB294; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xBB34;&#xB8CC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; ags3&middot;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0;G&alpha;(i) 7 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBAA8;&#xB4C8;&#xC744; &#xC2E0;&#xD638;. AGS3 &#xBC0F; G&alpha;(i1) &#xD0DC;&#xADF8;&#xC640; Renilla &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; saturable, &#xD2B9;&#xC815; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xC140;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC804;&#xC2DC;. (2) &Alpha;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;-&#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB610;&#xB294; &mu;-opioid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAC10;&#xC18C; AGS3 RLuc&middot;G&alpha; (i1)-30% &#xC774;&#xC0C1; YFP &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1;. &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC31; &#xC77C; &#xD574; &#xB3C5; &#xC18C; &#xBC0F; RGS4, co-expression&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; grk2&#xC758; G&beta;&gamma; &#xACA9;&#xB9AC; carboxyl &#xC885;&#xC810;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;. G&alpha; (i)-&#xC885;&#xC18D; &#xBC0F; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xB610;&#xD55C; ags3&#xC640; G&alpha;(i) &#xBC0F; G&alpha;(o) AGS3 &#xD070; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAC04;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2DC; AGS3 &#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC5D0;&#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; dissociates. G&alpha;&beta;&gamma;&#xC640; Gpr-g&alpha;(i)&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC751;&#xB2F5; &#xACFC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC801;&#xC751; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD94;&#xAC00;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ags3&middot;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;G {&#xC54C;&#xD30C;} 7 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; span &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xB098;.

Prote&iacute;na G se&ntilde;alizaci&oacute;n moduladores (276C) juegan diversos papeles funcionales a trav&eacute;s de su interacci&oacute;n con las subunidades de prote&iacute;na G. AGS3 (GPSM1) contiene cuatro G prote&iacute;nas reguladoras motivos (GPR) que unen directamente G&alpha;(i) libre de G&beta;&gamma; un andamio inusual para el &quot;G-switch&quot; y la se&ntilde;alizaci&oacute;n complejos, pero el mecanismo por el que las se&ntilde;ales pista en este andamio no son bien entendidos. Divulgamos la regulaci&oacute;n de la AGS3&middot;G&alpha;(i) m&oacute;dulo de se&ntilde;alizaci&oacute;n por una superficie de la c&eacute;lula, receptor transmembrana de siete. AGS3 y G&alpha;(i1) etiquetados Renilla luciferasa o prote&iacute;na fluorescente amarilla expresada en c&eacute;lulas de mam&iacute;fero exhibi&oacute; la transferencia de energ&iacute;a de resonancia de bioluminiscencia saturable, espec&iacute;ficos que indica la formaci&oacute;n de complejos en la c&eacute;lula. Activaci&oacute;n de &alpha; (2)-receptores adren&eacute;rgicos o los receptores &mu;-opioides reducci&oacute;n AGS3-RLuc&middot;G&alpha; (i1)-transferencia de energ&iacute;a YFP por m&aacute;s del 30%. Los efectos del agonista-mediada fueron inhibidos por la toxina pertussis y coexpresi&oacute;n de RGS4, pero no fueron alterados por el secuestro de G&beta;&gamma; con la terminal carboxilo de GRK2. G&alpha; (i)-transferencia de energ&iacute;a de resonancia de bioluminiscencia dependiente y agonista sensibles tambi&eacute;n se observ&oacute; entre AGS3 y receptores de superficie celular t&iacute;picamente acoplados a G&alpha;(i) y/o G&alpha;(o) que indica que el AGS3 es parte de una se&ntilde;alizaci&oacute;n m&aacute;s grande y complejo. Sobre la activaci&oacute;n del receptor, AGS3 reversible se disocia de este complejo en la corteza de la c&eacute;lula. Receptor de acoplamiento a G&alpha;&beta;&gamma; y GPR-G&alpha;(i) ofrece flexibilidad adicional para sistemas responder y adaptarse a los retos y orquestar comportamientos complejos.

Regulaci&oacute;n de la AGS3&middot;G {alfa} me se&ntilde;alizaci&oacute;n complejo por un receptor palmo siete-transmembrana.

IKK-NF&kappa;B &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x7535;&#x79BB;&#x8F90;&#x5C04; (IR) &#x7684;&#x62B5;&#x6297;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x679C;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x5F52;&#x548E;&#x4E8E;&#x6297;&#x51CB;&#x4EA1;&#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; NF&kappa;B&#x3002;&#x7531;&#x4E8E; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2; &#xFF08;DSBs&#xFF09; &#x9AD8;&#x6548;&#x4FEE;&#x590D;&#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x514B;&#x9686;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x7684;&#x8F90;&#x7167;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x5982;&#x679C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; IKK-NF&kappa;B &#x901A;&#x8DEF;&#x8FD8;&#x89C4;&#x5B9A; DSB &#x4FEE;&#x590D;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x540E;&#x7EA2;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E0E;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684; IKK&beta; &#x6291;&#x5236; IKK-NF&kappa;B &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x7EA2;&#x5916;&#x8BF1;&#x5BFC; DSBs &#x5728; mcf-7 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4FEE;&#x590D;&#x3002;&#x4FEE;&#x590D; DSBs &#x8FD8;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x6C89;&#x9ED8; IKK&beta; &#x4E0E; IKK&beta; shRNA &#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;IKK&alpha; &#x4E0E; IKK&alpha; shRNA &#x8868;&#x8FBE;&#x4E0B;&#x8C03;&#x4E86;&#x5BF9;&#x7EA2;&#x5916;&#x8BF1;&#x5BFC; DSBs.&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x4EA6;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728; IKK&alpha; &#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; IKK&beta; &#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE; (MEFs) &#x7684;&#x4FEE;&#x590D;&#x6CA1;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x66F4;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;IKK&beta; &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5177;&#x6709;&#x6291;&#x5236;&#x6216;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; IKK&beta; &#x4E0E; IKK&beta; shRNA &#x81F4;&#x654F; mcf-7 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EA2;&#x5916;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x514B;&#x9686;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;IKK&beta; IKK&beta; &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F; mcf-7 &#x7EC6;&#x80DE;&#x91CD;&#x7EC4;&#x88AB;&#x5B8C;&#x5168;&#x8FD8;&#x539F; DSB &#x4FEE;&#x590D;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x6297;&#x7EA2;&#x5916;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;IKK&beta; &#x53EF;&#x8C03;&#x8282;&#x7684; DSBs&#xFF0C;&#x4EE5;&#x524D;&#x53D8;&#x79CD;&#x548C;&#x91CD;&#x8981;&#x6FC0;&#x9176; IKK&beta; &#x529F;&#x80FD; &#xFF1B; &#x4FEE;&#x590D;&#x548C; DSB &#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x793E;&#x4F1A;&#x5206;&#x5DE5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x653E;&#x5C04;&#x589E;&#x654F; IKK&beta; &#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x6240;&#x81F4;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#xFF0C;IKK&beta; &#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x53EF;&#x80FD;&#x8868;&#x793A;&#x66F4;&#x52A0;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x653E;&#x7597;&#x7684;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x3002;

IKK&beta; &#x89C4;&#x8303; MCF 7 &#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x79BB;&#x8F90;&#x5C04;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2;&#x7684;&#x4FEE;&#x590D;&#x3002;

Activation of the IKK-NFÎºB pathway increases the resistance of cancer cells to ionizing radiation (IR). This effect has been largely attributed to the induction of anti-apoptotic proteins by NFÎºB. Since efficient repair of DNA double strand breaks (DSBs) is required for the clonogenic survival of irradiated cells, we investigated if activation of the IKK-NFÎºB pathway also regulates DSB repair to promote cell survival after IR. We found that inhibition of the IKK-NFÎºB pathway with a specific IKKÎ² inhibitor significantly reduced the repair of IR-induced DSBs in MCF-7 cells. The repair of DSBs was also significantly inhibited by silencing IKKÎ² expression with IKKÎ² shRNA. However, down-regulation of IKKÎ± expression with IKKÎ± shRNA had no significant effect on the repair of IR-induced DSBs. Similar findings were also observed in IKKÎ± and/or IKKÎ² knockout mouse embryonic fibroblasts (MEFs). More importantly, inhibition of IKKÎ² with an inhibitor or down-regulation of IKKÎ² with IKKÎ² shRNA sensitized MCF-7 cells to IR-induced clonogenic cell death. DSB repair function and resistance to IR were completely restored by IKKÎ² reconstitution in IKKÎ²-knockdown MCF-7 cells. These findings demonstrate that IKKÎ² can regulate the repair of DSBs, a previously undescribed and important IKKÎ² kinase function; and inhibition of DSB repair may contribute to cance cell radiosensitization induced by IKKÎ² inhibition. As such, specific inhibition of IKKÎ² may represents a more effective approach to sensitize cancer cells to radiotherapy.

IKKÎ² regulates the repair of DNA double-strand breaks induced by ionizing radiation in MCF-7 breast cancer cells.

Activation de la voie IKK NF&kappa;B augmente la r&eacute;sistance des cellules canc&eacute;reuses &agrave; des rayonnements ionisants (IR). Cet effet a &eacute;t&eacute; largement attribu&eacute; &agrave; l&#39;induction de prot&eacute;ines anti-apoptotiques de NF&kappa;B. Puisque efficace r&eacute;paration des cassures double brin de l&#39;ADN (CDB) est n&eacute;cessaire pour la survie de clonog&eacute;nique de cellules irradi&eacute;es, nous avons examin&eacute; si l&#39;activation de la voie IKK NF&kappa;B r&eacute;glemente &eacute;galement la r&eacute;paration d&#39;ORD afin de promouvoir la survie des cellules apr&egrave;s IR Nous avons trouv&eacute; que l&#39;inhibition de la voie IKK NF&kappa;B avec un inhibiteur sp&eacute;cifique de la IKK&beta; r&eacute;duit significativement la r&eacute;paration des CDB induite par l&#39;IR dans les cellules MCF-7. La r&eacute;paration des CDB est aussi significativement inhib&eacute;e par silencieux expression IKK&beta; avec IKK&beta; shRNA. Cependant, vers le bas-r&egrave;glement d&#39;expression de IKK&alpha; avec IKK&alpha; shARN n&#39;eu aucun effet significatif sur la r&eacute;paration des conclusions ont &eacute;galement &eacute;t&eacute; observ&eacute;es en IKK&alpha; et/ou IKK&beta; knockout fibroblastes embryonnaires de souris (MEFs) induite par l&#39;IR DSBs. semblable. Plus important encore, l&#39;inhibition de la IKK&beta; avec un inhibiteur ou vers le bas-r&egrave;glement de IKK&beta; avec IKK&beta; shARN sensibilis&eacute;s des cellules MCF-7 &agrave; la mort cellulaire induite par l&#39;IR clonog&eacute;niques. La fonction de r&eacute;paration ORD et r&eacute;sistance &agrave; l&#39;IR ont &eacute;t&eacute; enti&egrave;rement restaur&eacute;es par reconstitution de IKK&beta; dans les cellules IKK&beta;-knockdown MCF-7. Ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent que les IKK&beta; peuvent r&eacute;glementer la r&eacute;paration des CDB, une fonction de kinase IKK&beta; pr&eacute;c&eacute;demment non d&eacute;crite et importante ; et l&#39;inhibition de la r&eacute;paration de l&#39;ORD peut contribuer &agrave; cance cellule radiosensibilisation, induite par l&#39;inhibition de la IKK&beta;. Ainsi, l&#39;inhibition sp&eacute;cifique de IKK&beta; peut repr&eacute;sente une approche plus efficace pour sensibiliser les cellules canc&eacute;reuses de la radioth&eacute;rapie.

IKK&beta; r&eacute;gule la r&eacute;paration des cassures double brin de l&#39;ADN induites par les rayonnements ionisants dans les cellules de cancer du sein MCF-7.

Aktivierung des Signalweges IKK-NF&kappa;B erh&ouml;ht die Resistenz von Krebszellen durch ionisierende Strahlung (IR). Dieser Effekt wurde weitgehend auf die Induktion von Anti-apoptotischen Proteine von NF&kappa;B zur&uuml;ckgef&uuml;hrt. Da effiziente Reparatur von Br&uuml;chen der DNA-Doppelstrang (DSBs) f&uuml;r das Clonogenic &Uuml;berleben der bestrahlten Zellen erforderlich ist, untersuchten wir wenn Aktivierung des Signalweges IKK-NF&kappa;B auch DSB-Reparatur zur F&ouml;rderung der Zelle &Uuml;berleben nach dem IR. reguliert Wir fanden, dass die Hemmung des Signalweges IKK-NF&kappa;B mit einem bestimmten IKK&beta; Inhibitor die Reparatur von IR-induzierte DSBs in MCF-7 Zellen deutlich reduziert. Die Reparatur des DSBs wurde auch deutlich an, indem IKK&beta; Ausdruck mit IKK&beta; ShRNA gehemmt. Herunterregulation IKK&alpha; Ausdruck mit IKK&alpha; ShRNA hatte jedoch keinen signifikanten Einfluss auf die Reparatur von IR-induzierte DSBs. &auml;hnliche Ergebnisse auch IKK&alpha; bzw. IKK&beta; ko M&auml;useembryonalen (MEFs) beobachtet wurden. Noch wichtiger ist, sensibilisiert die Hemmung der IKK&beta; mit einem Inhibitor oder Herunterregulation IKK&beta; mit IKK&beta; ShRNA MCF-7 Zellen induziert durch IR Clonogenic Zelltod. DSB-Reparatur-Funktion und Best&auml;ndigkeit gegen IR wurden von IKK&beta; Rekonstitution in IKK&beta;-Niederschlag MCF-7 Zellen vollst&auml;ndig restauriert. Diese Ergebnisse zeigen, dass IKK&beta; die Reparatur des DSBs, eine bisher unbeschriebene und wichtige IKK&beta; Kinase Funktion regulieren kann; und Hemmung der DSB-Reparatur darf Cance Zelle Radiosensitization induziert durch Hemmung von IKK&beta; beitragen. Als solche kann spezifische Hemmung der IKK&beta; ist ein effektiveren Ansatz, Krebszellen zu Strahlentherapie zu sensibilisieren.

IKK&beta; regelt die Reparatur von Br&uuml;chen von DNA-Doppel-Strang durch ionisierende Strahlung in MCF-7 Brustkrebs-Zellen induziert.

Attivazione del percorso IKK-NF&kappa;B aumenta la resistenza delle cellule tumorali a radiazioni ionizzanti (IR). Questo effetto &egrave; stato attribuito in gran parte per l&#39;induzione delle proteine anti-apoptotic di NF&kappa;B. Poich&eacute; una riparazione efficiente di interruzioni del doppio filamento di DNA (DSBs) &egrave; necessaria per la sopravvivenza clonogenica delle cellule irradiate, abbiamo studiato se l&#39;attivazione del percorso IKK-NF&kappa;B regola anche riparazione DSB per promuovere la sopravvivenza cellulare dopo IR. Abbiamo trovato che l&#39;inibizione del percorso con un inibitore specifico di IKK&beta; IKK-NF&kappa;B ridotto significativamente la riparazione di DSBs IR-indotta in cellule MCF-7. La riparazione di DSBs era anche significativamente inibita da silenziare l&#39;espressione IKK&beta; con IKK&beta; shRNA. Tuttavia, down-regulation dell&#39;espressione IKK&alpha; con IKK&alpha; shRNA ha avuto alcun effetto significativo sulla riparazione di IR-induced DSBs. simili risultati sono stati osservati anche in IKK&alpha; o IKK&beta; knockout mouse embryonic fibroblasti (MEFs). Ancora pi&ugrave; importante, l&#39;inibizione della IKK&beta; con un inibitore o down-regulation dei IKK&beta; con IKK&beta; shRNA sensibilizzati cellule MCF-7 morte cellulare indotta da IR autofluorescente. Funzione di riparazione DSB e resistenza a IR erano completamente restaurati mediante ricostituzione IKK&beta; in cellule MCF-7 IKK&beta;-atterramento. Questi risultati dimostrano che IKK&beta; possono regolare la riparazione di DSBs, una funzione IKK&beta; chinasi, precedentemente nuovo e importante; e l&#39;inibizione della riparazione DSB pu&ograve; contribuire al cato cella radiosensitization indotta dall&#39;inibizione della IKK&beta;. Come tale, specifica inibizione della IKK&beta; pu&ograve; rappresenta un approccio pi&ugrave; efficace per sensibilizzare le cellule tumorali alla radioterapia.

IKK&beta; regola la riparazione di rotture di doppio filamento del DNA indotta dalle radiazioni ionizzanti in cellule di cancro al seno MCF-7.

IKK &#x30C7;&#x30B3;&#x30A4;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x96E2;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA; &#xFF08;IR&#xFF09; &#x304C;&#x3093;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x4E3B;&#x30C7;&#x30B3;&#x30A4;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x6291;&#x5236;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6709;&#x52B9;&#x306A;&#x4FEE;&#x7406;&#x306F; DNA &#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD; &#xFF08;Dsb&#xFF09; &#x304C;&#x7167;&#x5C04;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; IKK &#x30C7;&#x30B3;&#x30A4;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3082;&#x8D64;&#x5916;&#x7DDA;&#x5F8C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B; DSB &#x4FEE;&#x5FA9;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;IKK&beta; &#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068; IKK &#x30C7;&#x30B3;&#x30A4;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F; IR &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x504F;&#x5411; mcf-7 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x4FEE;&#x7406;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x524A;&#x6E1B;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Dsb &#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306F;&#x3001;IKK&beta; &#x5F0F; IKK&beta; shRNA &#x3092;&#x9ED9;&#x3089;&#x305B;&#x308B;&#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;IKK&alpha; &#x5F0F; IKK&alpha; shRNA &#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x306F; IR &#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x504F;&#x5411;&#x3002; &#x985E;&#x4F3C;&#x6240;&#x898B;&#x306F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD; IKK&alpha; &#x3084; IKK&beta; &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x7D30;&#x80DE; (MEFs) &#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306B;&#x91CD;&#x5927;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;IKK&beta; &#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x307E;&#x305F;&#x306F; IKK&beta; shRNA &#x3092; IKK&beta; &#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x898F;&#x5236; mcf-7 &#x7D30;&#x80DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E; IR &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x611F;&#x4F5C;&#x3002;DSB &#x4FEE;&#x5FA9;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068; IR &#x3078;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x306F;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B; IKK&beta; IKK&beta; &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; mcf-7 &#x7D30;&#x80DE;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;IKK&beta; &#x306E;&#x504F;&#x5411;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x51FA;&#x73FE;&#x304C;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E; IKK&beta; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DSB &#x4FEE;&#x5FA9;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x308B; IKK&beta; &#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x610F;&#x7FA9;&#x30BB;&#x30EB;&#x611F;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;IKK&beta; &#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

IKK&beta; &#x306F;&#x3001;MCF-7 &#x4E73;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x306B;&#x3088;&#x308B; DNA &#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

IKK NF&kappa;B &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC804;&#xB9AC; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; (IR)&#xC5D0; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD6A8;&#xACFC; NF&kappa;B&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC548;&#xD2F0;-apoptotic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xAE30;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. DNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30; (DSBs)&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC870;&#xC0AC; &#xC140; clonogenic &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC870;&#xC0AC; IKK NF&kappa;B &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB3C4; &#xC870;&#xC808; &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xD6C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xCD09;&#xC9C4; DSB &#xC218;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD2B9;&#xC815; IKK&beta; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC640; IKK NF&kappa;B &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C; MCF 7 &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; DSBs &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xC720;&#xB3C4; &#xC218;&#xB9AC; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Dsbs&#xC758; &#xC218;&#xB9AC;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC785;&#xC744; IKK&beta; shRNA IKK&beta; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; IKK&alpha; shRNA IKK&alpha; &#xC2DD;&#xC758; &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xC720;&#xB3C4; DSBs. &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; IKK&alpha; &#xBC0F; IKK&beta; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544; &#xAC8C;&#xC7AC; (MEFs)&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB354; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, IKK&beta;&#xB294; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC640; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; IKK&beta; Shrna&#xC640; IKK&beta;&#xC758; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xADDC;&#xC81C; sensitized MCF 7 &#xC140; clonogenic &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744;. DSB &#xBCF5;&#xAD6C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; IR&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D; IKK&beta; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; MCF-7 &#xC140;&#xC5D0; IKK&beta; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D; IKK&beta; DSBs, &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; undescribed &#xD558; &#xACE0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; IKK&beta; &#xD0A4; &#xAE30;&#xB2A5;;&#xC758; &#xC218;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC870;&#xC808;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; DSB &#xC218;&#xB9AC;&#xC758; &#xC800;&#xD574; cance &#xC140; radiosensitization IKK&beta; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; IKK&beta;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC800;&#xD574; &#xAC10;&#xAD11; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

IKK&beta; MCF 7 &#xC720;&#xBC29;&#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xB9AC; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; DNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30;&#xC758; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC870;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Activaci&oacute;n de la v&iacute;a de la IKK-NF&kappa;B aumenta la resistencia de las c&eacute;lulas cancerosas a la radiaci&oacute;n ionizante (IR). Este efecto ha sido atribuido en gran parte a la inducci&oacute;n de prote&iacute;nas anti-apopt&oacute;ticas por NF&kappa;B. Desde eficiente reparaci&oacute;n de roturas de doble cadena de DNA (consejos escolares distritales) es necesaria para la supervivencia de clonogenic de las c&eacute;lulas irradiadas, investigamos si la activaci&oacute;n de la v&iacute;a de la IKK-NF&kappa;B regula tambi&eacute;n la reparaci&oacute;n de OSD para promover la supervivencia de la c&eacute;lula despu&eacute;s de ir Encontramos que la inhibici&oacute;n de la v&iacute;a de la IKK-NF&kappa;B con un inhibidor espec&iacute;fico de la IKK&beta; redujo significativamente la reparaci&oacute;n de los consejos escolares distritales IR-inducida en c&eacute;lulas MCF-7. La reparaci&oacute;n de los consejos escolares distritales tambi&eacute;n significativamente fue inhibida por silenciamiento de la expresi&oacute;n de IKK&beta; con IKK&beta; shRNA. Sin embargo, abajo-regulaci&oacute;n de la expresi&oacute;n de la IKK&alpha; con la IKK&alpha; shRNA no tuvo efectos significativos en la reparaci&oacute;n de los resultados tambi&eacute;n fueron observados en la IKK&alpha; y/o IKK&beta; fibroblastos de la embrionarios rat&oacute;n de nocaut (MEFs) inducida por IR consejos escolares distritales. Similar. M&aacute;s importante a&uacute;n, inhibici&oacute;n de IKK&beta; con un inhibidor o abajo-regulaci&oacute;n de IKK&beta; con IKK&beta; shRNA sensibiliza las c&eacute;lulas MCF-7 a la muerte celular inducida por IR clonogenic. Funci&oacute;n de reparaci&oacute;n del OSD y resistencia a IR totalmente fueron restaurados por reconstituci&oacute;n IKK&beta; en las c&eacute;lulas IKK&beta;-ca&iacute;da MCF-7. Estos resultados demuestran que IKK&beta; puede regular la reparaci&oacute;n de los consejos escolares distritales, previamente no descrita e importante IKK&beta; quinasa funci&oacute;n; y la inhibici&oacute;n de la reparaci&oacute;n de la OSD puede contribuir a cance celular radiosensitization inducida por la inhibici&oacute;n de la IKK&beta;. Como tal, la inhibici&oacute;n espec&iacute;fica de IKK&beta; puede representa un enfoque m&aacute;s efectivo para sensibilizar a las c&eacute;lulas cancerosas a la radioterapia.

IKK&beta; regula la reparaci&oacute;n de roturas de doble cadena de DNA inducida por radiaci&oacute;n ionizante en c&eacute;lulas de c&aacute;ncer de mama MCF-7.

&#x6458;&#x8981;&#xFF1A; &#x80CC;&#x666F;&#xFF1A; Pim &#xFF08;&#x7EC4;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x63D2;&#x5165;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;) &#x6FC0;&#x9176;&#x7624;&#x6FC0;&#x9176;&#x662F;&#x4E00;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x3001; &#x9AD8;&#x5EA6;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x5C0F;&#x5C0F;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x548C;&#x6709; 3 &#x540D;&#x6210;&#x5458;&#xFF1A; Pim1&#x3001; Pim2&#x3001; &#x548C; Pim3&#x3002;Pim &#x6FC0;&#x9176;&#x4E5F;&#x6D89;&#x53CA;&#x5230;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x9020;&#x8840;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; B &#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;Pim &#x6FC0;&#x9176;&#x5728;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x661F;) &#x89C4;&#x4F8B; &#x300B; &#x4E2D;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x6709;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x672A;&#x77E5;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF1A; &#x5728;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;Pim1-/-2-/-3-/-&#x4E09;&#x91CD;&#x6572; (&#x5C06;&#x519B;&#x6FB3;) &#x7528;&#x4E8E;&#x786E;&#x5B9A; Pim &#x6FC0;&#x9176;&#x5728;&#x9020;&#x8840;&#x529F;&#x80FD;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x5C06;&#x519B;&#x6FB3; Pim &#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x5E74;&#x9F84;&#x5339;&#x914D;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) &#x63A7;&#x4EF6;&#x91CF;&#x5EA6;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x8840;&#x6DB2;&#x5B66;&#x53C2;&#x6570;&#x3002;&#x5C0F;&#x5B66;&#x3001; &#x4E2D;&#x5B66;&#x548C;&#x7ADE;&#x4E89;&#x79FB;&#x690D;&#x8FDB;&#x884C;&#x6D4B;&#x5B9A; Pim &#x5C06;&#x519B;&#x6FB3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x957F;&#x671F; repopulating &#x661F;&#x3002;&#x5728;&#x4F53;&#x5185; BrdU &#x7EB3;&#x5165;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x4E8B;&#x540E;&#x4F53;&#x5185; Ki67 &#x67D3;&#x8272;&#x548C;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; 3 &#x6807;&#x7B7E;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x661F; Pim &#x5C06;&#x519B;&#x6FB3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;: &#x4E0E;&#x5E74;&#x9F84;&#x5339;&#x914D; WT &#x63A7;&#x4EF6;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;Pim &#x5C06;&#x519B;&#x6FB3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E86;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684;&#x5468;&#x8FB9;&#x8840;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x8BA1;&#x6570;&#x548C;&#x5C55;&#x793A;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D8;&#x8272; microcytosis&#x3002;&#x4ECE;&#x5C06;&#x519B;&#x6FB3; Pim &#x5C0F;&#x9F20;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CF;&#x5C11;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x96C6;&#x843D;&#x5F62;&#x6210;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5C06;&#x519B;&#x6FB3; Pim &#x9AA8;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x635F;&#x5BB3;&#x4E86;&#x62A2;&#x6551;&#x53D7;&#x81F4;&#x6B7B;&#x5242;&#x91CF;&#x7167;&#x5C04;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x548C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x9020;&#x8840;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5C0F;&#x5B66;&#x3001; &#x4E2D;&#x5B66;&#x548C;&#x7ADE;&#x4E89;&#x79FB;&#x690D;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x957F;&#x671F;&#x661F;&#x4F53;&#x5185; BrdU &#x7EB3;&#x5165;&#x51CF;&#x5C11; Pim &#x5C06;&#x519B;&#x6FB3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5C06;&#x519B;&#x6FB3; Pim &#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x661F;&#x663E;&#x793A;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x589E;&#x6B96; Ki67 &#x67D3;&#x8272;&#x548C;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; 3 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7387;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x3002;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF1A; Pim &#x6FC0;&#x9176;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x662F;&#x57FA;&#x672C;&#x5728;&#x6CBF;&#x88AD;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x5C55;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x5728; HSC &#x6269;&#x5F20;&#xFF0C;&#x81EA;&#x6211;&#x66F4;&#x65B0;&#xFF0C;&#x548C;&#x957F;&#x671F;&#x590D;&#x80B2;&#x8FD8;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

Pim &#x6FC0;&#x9176;&#x5F02;&#x5E38;&#x9020;&#x8840;&#x578B;&#x4E09;&#x91CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF1A; Pim &#x6FC0;&#x9176;&#x8C03;&#x8282;&#x9020;&#x8840;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

ABSTRACT: BACKGROUND: Pim (proviral insertion in murine lymphoma) kinases are a small family of constitutively active, highly conservative serine/threonine oncogenic kinases and have 3 members: Pim1, Pim2, and Pim3. Pim kinases are also implicated in the regulation of B- and T- cell responses to cytokines and hematopoietic growth factors. The roles of Pim kinases in the regulation of primitive hematopoietic stem cells (HSCs) are largely unknown. METHODS: In the current study, Pim1-/-2-/-3-/- triple knockout (TKO) mice were used to determine the role of Pim kinases in hematopoiesis. Peripheral blood hematological parameters were measured in Pim TKO mice and age-matched wild-type (WT) controls. Primary, secondary, and competitive transplantations were performed to assay the long-term repopulating HSCs in Pim TKO mice. In vivo BrdU incorporation assay and ex vivo Ki67 staining and caspase 3 labeling were performed to evaluate the proliferation and apoptosis of HSCs in Pim TKO mice. RESULTS: Compared to age-matched WT controls, Pim TKO mice had lower peripheral blood platelet count and exhibited erythrocyte hypochromic microcytosis. The bone marrow cells from Pim TKO mice demonstrated decreased hematopoietic progenitor colony-forming ability. Importantly, Pim TKO bone marrow cells had significantly impaired capacity in rescuing lethally irradiated mice and reconstituting hematopoiesis in primary, secondary and competitive transplant models. In vivo BrdU incorporation in long-term HSCs was reduced in Pim TKO mice. Finally, cultured HSCs from Pim TKO mice showed reduced proliferation evaluated by Ki67 staining and higher rate of apoptosis via caspase 3 activation. CONCLUSIONS: Pim kinases are not only essential in the hematopoietic lineage cell development, but also important in HSC expansion, self-renewal, and long-term repopulation.

Abnormal hematopoietic phenotypes in Pim kinase triple knockout mice: Pim kinase regulates hematopoiesis.

R&eacute;sum&eacute; : Contexte : Pim (insertion provirale dans le lymphome murin) kinases sont une petite famille de constitutivement actif, tr&egrave;s prudente s&eacute;rine/thr&eacute;onine kinases oncog&egrave;nes et ont 3 membres : Pim1 Pim2 et Pim3. PIM kinases sont &eacute;galement impliqu&eacute;es dans la r&eacute;gulation des r&eacute;ponses des cellules B et T de cytokines et de facteurs de croissance h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques. Les r&ocirc;les de Pim kinases dans la r&eacute;gulation de la primitives des cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques (CSH) sont largement inconnus. M&eacute;thodes : Dans cette &eacute;tude, chez des souris Pim1-/-2-/-3-/-triple knockout (TKO) ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;es pour d&eacute;terminer le r&ocirc;le des kinases de Pim dans l&#39;h&eacute;matopo&iuml;&egrave;se. Les param&egrave;tres h&eacute;matologiques de sang p&eacute;riph&eacute;rique ont &eacute;t&eacute; mesur&eacute;s chez les souris de la Pim TKO et contr&ocirc;les appari&eacute;s selon l&#39;&acirc;ge sauvage (WT). Primaires, secondaires et concurrentiels des greffes effectu&eacute;es pour doser le CSH repopulation &agrave; long terme chez la souris Pim TKO. In vivo BrdU incorporation dosage et ex vivo Ki67 coloration et le marquage de la caspase 3 ont &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;es afin d&#39;&eacute;valuer la prolif&eacute;ration et l&#39;apoptose des CSH chez les souris Pim TKO. R&Eacute;SULTATS : Par rapport aux t&eacute;moins de m&ecirc;me &acirc;ge WT, Pim TKO poss&eacute;daient inf&eacute;rieure num&eacute;ration des plaquettes sanguines p&eacute;riph&eacute;riques et pr&eacute;sentaient des &eacute;rythrocytes hypochrome microcytose. Les cellules de moelle osseuse de souris Pim TKO a d&eacute;montr&eacute; a diminu&eacute; la capacit&eacute; formant des colonies de cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques. Important, les cellules de moelle osseuse Pim TKO avaient significativement r&eacute;duite capacit&eacute; en sauvant souris mortellement irradi&eacute;s et reconstitution de l&#39;h&eacute;matopo&iuml;&egrave;se en primaire, secondaire et concurrentiel transplanter des mod&egrave;les. Incorporation de BrdU in vivo en CSH &agrave; long terme a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite chez les souris Pim TKO. Enfin, CSH cultiv&eacute;s de souris Pim TKO a montr&eacute; prolif&eacute;ration r&eacute;duite &eacute;valu&eacute;e par coloration de Ki67 et un taux plus &eacute;lev&eacute; de l&#39;apoptose via l&#39;activation de la caspase 3. CONCLUSIONS : Pim kinases sont non seulement essentiels dans le d&eacute;veloppement de cellules de la lign&eacute;e h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tique, mais aussi important en HSC expansion, l&#39;auto-renouvellement et &agrave; long terme repeuplement.

Les ph&eacute;notypes h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques anormales dans Pim kinase triple souris knockout : Pim kinase r&eacute;gule l&#39;h&eacute;matopo&iuml;&egrave;se.

ABSTRACT: BACKGROUND: Pim (proviral Einf&uuml;gung in murinen Lymphom) Kinasen sind eine Familie der konstitutiv aktiv, h&ouml;chst konservativen Serin/Threonin Onkogene Kinasen und haben 3 Mitglieder: Pim1, Pim2 und Pim3. PIM-Kinasen sind auch bei der Regulierung der B - und T-Zell-Antworten zu Zytokine und h&auml;matopoetische Wachstumsfaktoren beteiligt. Die Rollen der Pim-Kinasen bei der Regulierung der primitiven h&auml;matopoetischen Stammzellen (HSCs) sind weitgehend unbekannt. Methoden: In der aktuellen Studie wurden Pim1-/-2-/-3-/-dreifach Knockout (TKO) M&auml;use zum bestimmen, der Rolle der Pim-Kinasen in Blutbildung. Auf Pim TKO M&auml;use und altersbezogenen Wildtyp (WT)-Steuerelemente wurden peripherem Blut h&auml;matologischen Parameter gemessen. Prim&auml;re, sekund&auml;re und wettbewerbsf&auml;hige Transplantationen wurden durchgef&uuml;hrt, um die langfristige repopulating HSCs Pim TKO M&auml;usen Brutversuch. In Vivo BrdU Einbeziehung Assay und Ex Vivo Ki67 wurden F&auml;rbe- und Caspase 3 Kennzeichnung durchgef&uuml;hrt, um die Proliferation und Apoptose von HSCs Pim TKO M&auml;usen zu bewerten. Ergebnisse: Im Vergleich zu altersbezogenen WT Steuerelemente, Pim TKO M&auml;use hatten niedrigere peripheren Blut Thrombozytenzahl und Erythrozyten hypochrome Microcytosis ausgestellt. Die Knochenmarkzellen von Pim TKO-M&auml;usen gezeigt verringert h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen kolonienbildende F&auml;higkeit. Wichtigsten Pim TKO Knochenmarkzellen hatte Kapazit&auml;t Rettung lethally bestrahlten M&auml;usen erheblich beeintr&auml;chtigt und Rekonstituierung der Blutbildung in prim&auml;r-, Sekund&auml;r- und wettbewerbsf&auml;hige Modelle zu verpflanzen. In-vivo BrdU-Aufnahme in langfristige HSCs wurde Pim TKO M&auml;usen reduziert. Schlie&szlig;lich ergab kultivierten HSCs Pim TKO M&auml;use geringere Verbreitung von Ki67 F&auml;rbe- und h&ouml;here Rate der Apoptose durch die Aktivierung der Caspase 3 ausgewertet. Schlussfolgerungen: Pim-Kinasen sind nicht nur in der h&auml;matopoetischen Linie Zelle Entwicklung wesentlich, aber auch wichtig im HSC Ausbau, Selbsterneuerung und langfristige Wiederbelegung.

Abnormale h&auml;matopoetische Ph&auml;notypen im Pim-Kinase verdreifachen Knock-out-M&auml;use: Pim-Kinase regelt die Blutbildung.

ABSTRACT: BACKGROUND: Pim (proviral inserimento nel linfoma murino) chinasi sono una piccola famiglia di costitutivamente attivo, altamente conservativa serina/treonina chinasi oncogenica e hanno 3 membri: Pim1, Pim2 e Pim3. PIM chinasi sono anche implicate nella regolazione delle risposte delle cellule B e T a citochine e fattori di crescita ematopoietici. I ruoli di Pim chinasi nella regolazione delle primitive cellule staminali ematopoietiche (HSCs) sono in gran parte sconosciuti. Metodi: In questo studio, sono stati utilizzati topi knockout triple (TKO) Pim1-/-2-/-3-/-per determinare il ruolo della chinasi Pim in ematopoiesi. Parametri ematologici del sangue periferico sono stati misurati nei topi Pim TKO e controlli age-matched wild-type (WT). Primari, secondari e competitivi i trapianti sono stati eseguiti per dosaggio le HSCs ripopolante a lungo termine in topi Pim TKO. In vivo BrdU incorporazione dosaggio ed ex vivo Ki67 colorazione e caspase 3 etichettatura sono state eseguite per valutare la proliferazione e l&#39;apoptosi di HSCs in topi Pim TKO. RISULTATI: Rispetto ai controlli WT age-matched, Pim TKO topi avevano il conteggio delle piastrine sangue periferico inferiore ed esposto microcitosi ipocromica degli eritrociti. Le cellule di midollo osseo da Pim TKO topi ha dimostrati diminuita capacit&agrave; formanti progenitrici ematopoietiche. Importante, cellule del midollo osseo Pim TKO avevano significativamente ridotta capacit&agrave; nel salvataggio topi lethally irradiati e ricostitutivo ematopoiesi in primari, secondari e competitivo trapiantare modelli. Incorporazione di BrdU in vivo nel lungo termine HSCs &egrave; stata ridotta nei topi Pim TKO. Infine, HSCs colta da topi TKO Pim ha mostrato ridotta proliferazione valutato dalla colorazione Ki67 e alto tasso di apoptosi mediante attivazione di caspase 3. CONCLUSIONI: Pim chinasi sono non solo essenziale per lo sviluppo delle cellule ematopoietiche lignaggio, ma anche importanti in HSC espansione, auto-rinnovamento e a lungo termine ripopolamento.

Fenotipi ematopoietici anomali nel Pim chinasi tripla topi knockout: Pim chinasi regola ematopoiesi.

&#x8981;&#x65E8;&#xFF1A; &#x80CC;&#x666F;&#xFF1A; Pim &#xFF08;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x633F;&#x5165;&#xFF09; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6052;&#x5E38;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x306A;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x767A;&#x764C;&#x6027;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x3057;&#x3066; 3 &#x4EBA;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#xFF1A; Pim1&#x3001;Pim2&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Pim3&#x3002;Pim &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3084;&#x9020;&#x8840;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; B &#x304A;&#x3088;&#x3073; T &#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x539F;&#x59CB;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; (HSCs) &#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Pim &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x4E3B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;: &#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, Pim1-/-2-/-3-/-&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB; &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; (TKO) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9020;&#x8840; Pim &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x8840;&#x6DB2;&#x5B66;&#x7684;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;Pim TKO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5E74;&#x9F62;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; &#xFF08;WT&#xFF09; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x3001;&#x30BB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7AF6;&#x4E89;&#x529B;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x79FB;&#x690D;&#x306F; Pim TKO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9577;&#x671F;&#x518D; HSCs &#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;.&#x751F;&#x4F53;&#x5185; BrdU &#x8A2D;&#x7ACB;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3068; ex vivo &#x3067;&#x30AD;67 &#x67D3;&#x8272;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; 3 &#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3068; Pim TKO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E; HSCs &#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;: &#x5E74;&#x9F62;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x3055;&#x305B;&#x305F; WT &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x3001;Pim TKO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x4E0B;&#x306E;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x6DB2;&#x306E;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x6570;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x4F4E;&#x5C0F;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x75C7;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; Pim TKO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x5F62;&#x6210;&#x80FD;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;Pim TKO &#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x6551;&#x51FA;&#x81F4;&#x6B7B;&#x7167;&#x5C04;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5BB9;&#x91CF;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E00;&#x6B21;&#x3001;&#x4E8C;&#x6B21;&#x3068;&#x7AF6;&#x4E89;&#x529B;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x9020;&#x8840;&#x79FB;&#x690D;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3002;In vivo &#x3067;&#x306E; BrdU &#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A; Pim TKO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;Pim TKO &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x57F9;&#x990A; HSCs &#x30AD;67 &#x67D3;&#x8272;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; 3 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x7387;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x524A;&#x6E1B;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;: Pim &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x9020;&#x8840;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F; HSC &#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x8907;&#x88FD;&#x3068;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x518D;&#x4F5C;&#x6210;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Pim &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7570;&#x5E38;&#x9020;&#x8840;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB; &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;: Pim &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x9020;&#x8840;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xAC1C;&#xC694;: &#xBC30;&#xACBD;: Pim (murine &#xB9BC;&#xD504; &#xC885;&#xC5D0; proviral &#xC0BD;&#xC785;) kinases&#xB294; constitutively &#xD65C;&#xC131;, &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBCF4;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xAC00;&#xC871; &#xAE08;&#xD558;&#xB294; kinases &#xC788;&#xACE0; 3 &#xD68C;&#xC6D0;: Pim1, Pim2, &#xBC0F; Pim3. Pim kinases&#xB294; cytokines &#xBC0F; &#xC870; &#xD608; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;&#xB97C; B &#xBC0F; T &#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB41C;&#xB2E4;. Pim kinases &#xC6D0;&#xC2DC; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (HSCs)&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0;. &#xBC29;&#xBC95;: &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C; Pim1-/-2-/-3-/-&#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; (&#xB9DD;&#xAC00;) &#xC950; &#xC870;&#xC5D0; Pim kinases &#xC5ED;&#xD560; &#xACB0;&#xC815; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9D0; &#xCD08; &#xD608;&#xC561; &#xD608;&#xC561; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; Pim &#xB9DD;&#xAC00; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xB098;&#xC774; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT)&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8;, &#xBCF4;&#xC870;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xACBD;&#xC7C1;&#xB825; &#xC788;&#xB294; &#xAC04;&#xC774;&#xC2DD; Pim &#xB9DD;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04; repopulating HSCs &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xBCF4; BrdU &#xD569;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; ex vivo Ki67 &#xC5BC;&#xB8E9; &#xBC0F; caspase 3 &#xB77C;&#xBCA8;&#xB9C1; &#xD655;&#xC0B0; &#xBC0F; Pim &#xB9DD;&#xAC00; &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; apoptosis Hscs&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC;: WT &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xB098;&#xC774;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;, Pim &#xB9DD;&#xAC00; &#xC950; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xD608;&#xC561; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xC218;&#xAC00; &#xB354; &#xC801;&#xC740; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC84C;&#xACE0; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; hypochromic microcytosis &#xC804;&#xC2DC;. &#xC2DC;&#xC5F0; Pim &#xB9DD;&#xAC00; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE8; &#xC218; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC18C; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC870; &#xD608; &#xC2DC; &#xC870;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, Pim &#xB9DD;&#xAC00; &#xACE8; &#xC218; &#xC138;&#xD3EC; &#xAD6C;&#xCD9C; lethally &#xC870;&#xC0AC; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xC7A5;&#xC560;&#xAC00; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xBAA8;&#xB378; &#xC774;&#xC2DD; &#xC870; &#xAE30;&#xBCF8;, &#xBCF4;&#xC870; &#xBC0F; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;. &#xC7A5;&#xAE30; Hscs&#xC5D0;&#xC11C; in vivo BrdU &#xBC95;&#xC778; Pim &#xB9DD;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, Pim &#xB9DD;&#xAC00; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; HSCs &#xAC10;&#xC18C; &#xD655;&#xC0B0; Ki67 &#xC5BC;&#xB8E9; caspase 3 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; apoptosis&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBE44;&#xC728;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xB860;: Pim kinases&#xB294; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC870; &#xD608; &#xD608;&#xD1B5; &#xC140; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; HSC &#xD655;&#xC7A5;, &#xC790;&#xAE30; &#xAC31;&#xC2E0; &#xBC0F; &#xC7A5;&#xAE30; repopulation&#xC5D0;&#xC11C; &#xB610;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;.

&#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC870; &#xD608; &#xACE0;&#xAE30; Pim &#xB2C8; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC950;: Pim &#xD0A4; &#xC870;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Resumen: Antecedentes: quinasas de Pim (inserci&oacute;n proviral en linfoma murino) son una peque&ntilde;a familia de constitutivamente activa, altamente conservadora Serina/Treonina Quinasas oncog&eacute;nicas y tienen 3 miembros: Pim1, Pim2 y Pim3. Quinasas de la PIM tambi&eacute;n est&aacute;n implicadas en la regulaci&oacute;n de las respuestas de c&eacute;lulas T y B a citoquinas y factores de crecimiento hematopoy&eacute;ticos. Las funciones de Pim quinasas en la regulaci&oacute;n de las primitivas c&eacute;lulas madre hematopoy&eacute;ticas (HSCs) son en gran parte desconocidas. M&Eacute;TODOS: En el estudio actual, ratones de Pim1-/-2-/-3-/-triple nocaut (TKO) fueron utilizados para determinar el papel de quinasas de la Pim en la hematopoyesis. Par&aacute;metros hematol&oacute;gicos de sangre perif&eacute;rica se midieron en ratones Pim TKO y controles pareados por edad wild-type (WT). Se realizaron trasplantes primarios, secundarios y competitivos para an&aacute;lisis las HSCs repoblamiento a largo plazo en ratones Pim TKO. En vivo BrdU incorporaci&oacute;n ensayo y ex vivo Ki67 tinci&oacute;n y caspasa 3 etiquetado fueron realizados para evaluar la proliferaci&oacute;n y apoptosis de HSCs en ratones Pim TKO. Resultados: En comparaci&oacute;n con los controles pareados por edad WT, Pim TKO ratones ten&iacute;an bajo conteo de plaquetas en la sangre perif&eacute;rica y exhibieron eritrocitos hipocr&oacute;micos microcitosis. Las c&eacute;lulas de la m&eacute;dula &oacute;sea de Pim TKO ratones demostrados disminuci&oacute;n de capacidad de formaci&oacute;n de colonias progenitoras hematopoy&eacute;ticas. Lo importante, las c&eacute;lulas de la m&eacute;dula Pim TKO hab&iacute;an deteriorado significativamente capacidad en ratones radiados letalmente a rescatar y reconstituir la hematopoyesis en primaria, secundaria y competitivo trasplante modelos. Incorporaci&oacute;n de BrdU in vivo en HSCs a largo plazo se redujo en ratones Pim TKO. Finalmente, HSCs cultivadas de ratones Pim TKO mostraron reducida proliferaci&oacute;n evaluado por tinci&oacute;n de Ki67 y mayor tasa de apoptosis mediante la activaci&oacute;n de la caspasa 3. CONCLUSIONES: Pim quinasas son no s&oacute;lo es esencial en el desarrollo de c&eacute;lulas de linaje hematopoy&eacute;tico, sino tambi&eacute;n importante en la repoblaci&oacute;n de auto-renovaci&oacute;n y a largo plazo de expansi&oacute;n, HSC.

Fenotipos hematopoy&eacute;ticos anormales en Pim quinasa triple ratones knockout: Pim quinasa regula la hematopoyesis.

One third of tumor suppressors are haploinsufficient transcriptional regulators, yet it remains unknown how a 50% reduction of a transcription factor is translated at the cis-regulatory level into a malignant transcriptional program. We studied CUX1, a haploinsufficient transcription factor that is recurrently mutated in hematopoietic and solid tumors. We determined CUX1 DNA-binding and target gene regulation in the wildtype and haploinsufficient states. CUX1 binds with transcriptional activators and cohesin at distal enhancers across three different human cell types. Haploinsufficiency of CUX1 altered the expression of a large number of genes, including cell cycle regulators, with concomitant increased cellular proliferation. Surprisingly, CUX1 occupancy decreased genome-wide in the haploinsufficient state, and binding site affinity did not correlate with differential gene expression. Instead, differentially expressed genes had multiple, low-affinity CUX1 binding sites, features of analog gene regulation. A machine-learning algorithm determined that chromatin accessibility, enhancer activity, and distance to the transcription start site are features of dose-sensitive CUX1 transcriptional regulation. Moreover, CUX1 is enriched at sites of DNA looping, as determined by Hi-C analysis, and these loops connect CUX1 to the promoters of regulated genes. We propose an analog model for haploinsufficient transcriptional deregulation mediated by higher order genome architecture.

The haploinsufficient tumor suppressor, CUX1, acts as an analog transcriptional regulator that controls target genes through distal enhancers that loop to target promoters.

New approaches are needed for the treatment of patients with T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) who fail to achieve remission with chemotherapy. Analysis of the effects of pan-PIM protein kinase inhibitors on human T-ALL cell lines demonstrated that the sensitive cell lines expressed higher PIM1 protein kinase levels, whereas T-ALL cell lines with NOTCH mutations tended to have lower levels of PIM1 kinase and were insensitive to these inhibitors. NOTCH-mutant cells selected for resistance to gamma secretase inhibitors developed elevated PIM1 kinase levels and increased sensitivity to PIM inhibitors. Gene profiling using a publically available T-ALL dataset demonstrated overexpression of PIM1 in the majority of early T-cell precursor (ETP)-ALLs and a small subset of non-ETP ALL. While the PIM inhibitors blocked growth, they also stimulated ERK and STAT5 phosphorylation, demonstrating that activation of additional signaling pathways occurs with PIM inhibitor treatment. To block these pathways, Ponatinib, a broadly active tyrosine kinase inhibitor (TKI) used to treat chronic myelogenous leukemia, was added to this PIM-inhibitor regimen. The combination of Ponatinib with a PIM inhibitor resulted in synergistic T-ALL growth inhibition and marked apoptotic cell death. Treatment of mice engrafted with human T-ALL with these two agents significantly decreased the tumor burden and improved the survival of treated mice. This dual therapy has the potential to be developed as a novel approach to treat T-ALL with high PIM expression.

Targeting the PIM protein kinases for the treatment of a T-cell acute lymphoblastic leukemia subset.

Monosomy 7 (-7) and del(7q) are high-risk cytogenetic abnormalities common in myeloid malignancies. We previously reported that , a homeodomain-containing transcription factor encoded on 7q22, is frequently inactivated in myeloid neoplasms, and CUX1 myeloid tumor suppressor activity is conserved from humans to -inactivating mutations are recurrent in clonal hematopoiesis of indeterminate potential as well as myeloid malignancies, in which they independently carry a poor prognosis. To determine the role for CUX1 in hematopoiesis, we generated 2 short hairpin RNA-based mouse models with ∼54% (Cux1) or ∼12% (Cux1) residual CUX1 protein. Cux1 mice develop myelodysplastic syndrome (MDS) with anemia and trilineage dysplasia, whereas CUX1 mice developed MDS/myeloproliferative neoplasms and anemia. In diseased mice, restoration of CUX1 expression was sufficient to reverse the disease. CUX1 knockdown bone marrow transplant recipients exhibited a transient hematopoietic expansion, followed by a reduction of hematopoietic stem cells (HSCs), and fatal bone marrow failure, in a dose-dependent manner. RNA-sequencing after  knockdown in human CD34 cells identified a -7/del(7q) MDS gene signature and altered differentiation, proliferative, and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) signaling pathways. In functional assays, CUX1 maintained HSC quiescence and repressed proliferation. These homeostatic changes occurred in parallel with decreased expression of the PI3K inhibitor, , and elevated PI3K/AKT signaling upon CUX1 knockdown. Our data support a model wherein CUX1 knockdown promotes PI3K signaling, drives HSC exit from quiescence and proliferation, and results in HSC exhaustion. Our results also demonstrate that reduction of a single 7q gene, , is sufficient to cause MDS in mice.

Article	Year
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