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Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels

Coomassie Brilliant Blue (CBB) is a dye commonly used for the visualization of proteins separated by SDS-PAGE, offering a simple staining procedure and ...

University Duesseldorf

&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C-zeta (PKC zeta) &#x53C2;&#x52A0;&#x5728;&#x4E0B;&#x6E38;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x548C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8D1F;&#x9762;&#x53CD;&#x9988;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x627E;&#x51FA; PKC zeta &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x5185;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x5E95;&#x7269; 1 (IRS-1)&#xFF0C;&#x5E76;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684; IRS 1 &#x7247;&#x6BB5; (rIRS-1(449)(-)(664)) &#x5305;&#x542B;&#x4E3B;&#x8981;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x56FE;&#x6848;&#x4E0E;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187; &#xFF08;PI&#xFF09; 3-&#x6FC0;&#x9176;&#x5F3A;&#x70C8;&#x5173;&#x8054;&#x5230; PI 3-&#x6FC0;&#x9176;&#x7B2C; p85alpha &#x4E9A;&#x57FA; Tyr &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x540E;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7; PKC zeta rIRS-1(449)(-)(664) &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7A81;&#x51FA;&#x6291;&#x5236;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x6B63;&#x5728;&#x4E0D;&#x90A3;&#x4E48;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x53E4;&#x5178; PKC &#x4E9A;&#x578B;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x4F53;&#x3002;PKC zeta &#x548C;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x9176;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5BF9; Ser(612) rIRS-1(449)(-)(664)&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6B8B;&#x4F59;&#x7684;&#x4FEE;&#x6539;&#x5E76;&#x672A;&#x51CF;&#x5C11;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; pTyr &#x542B;&#x80BD; (&#x6C28;&#x57FA;&#x9178; 605 615 &#x7684;&#x5927;&#x9F20; IRS-1&#xFF09;&#xFF0C;&#x6240;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F;&#x6280;&#x672F;&#x7684; p85alpha &#x4EB2;&#x548C;&#x3002;rIRS-1(449)(-)(664) &#x7136;&#x540E;&#x7531; PKC zeta &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4F7F;&#x7528; [(32) P] ATP &#x548C;&#x906D;&#x53D7;&#x80F0;&#x9176;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x6620;&#x5C04;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x4E0E;&#x8D28;&#x8C31;&#x8026;&#x5408;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4E3A;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7; PKC zeta &#x786E;&#x5B9A;&#x4E86; Ser(498) &#x548C; Ser(570)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7F51;&#x7AD9;&#x53E6;&#x5916;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x6620;&#x5C04;&#x7684;&#x76F8;&#x5E94; Ser--&gt; Ala &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684; rIRS-1(449)(-)(664)&#x3002;Ser(570) &#x88AB;&#x9488;&#x5BF9;&#x7531; PKC-zeta &#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x4E0E; phosphospecific &#x6297;&#x8840;&#x6E05;&#x5BF9; Ser(570) &#x7684; IRS-1 &#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; S570A p85alpha &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x65F6;&#x4E0D;&#x6613;&#x53D7;&#x5230;&#x6291;&#x5236; PKC-zeta&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4; S612A &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F53;&#x5916;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; PKC zeta &#x4E00;&#x7EA7;&#x6D89;&#x53CA;&#x591A;&#x4E2A;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684; IRS-1/PI 3-&#x6FC0;&#x9176;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5F3A;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x800C; Ser(612) &#x4F3C;&#x4E4E;&#x672A;&#x80FD;&#x53C2;&#x4E0E;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x8D1F;&#x6D41;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;Ser(570) &#x53EF;&#x80FD;&#x81F3;&#x5C11;&#x90E8;&#x5206;&#x6B64;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;

&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x5E95;&#x7269; 1 &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C zeta &#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF1A; &#x65B0;&#x578B;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x4E0E;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;

Protein kinase C-zeta (PKC-zeta) participates both in downstream insulin signaling and in the negative feedback control of insulin action. Here we used an in vitro approach to identify PKC-zeta phosphorylation sites within insulin receptor substrate 1 (IRS-1) and to characterize the functional implications. A recombinant IRS-1 fragment (rIRS-1(449)(-)(664)) containing major tyrosine motifs for interaction with phosphatidylinositol (PI) 3-kinase strongly associated to the p85alpha subunit of PI 3-kinase after Tyr phosphorylation by the insulin receptor. Phosphorylation of rIRS-1(449)(-)(664) by PKC-zeta induced a prominent inhibition of this process with a mixture of classical PKC isoforms being less effective. Both PKC-zeta and the classical isoforms phosphorylated rIRS-1(449)(-)(664) on Ser(612). However, modification of this residue did not reduce the affinity of p85alpha binding to pTyr-containing peptides (amino acids 605-615 of rat IRS-1), as determined by surface plasmon resonance. rIRS-1(449)(-)(664) was then phosphorylated by PKC-zeta using [(32)P]ATP and subjected to tryptic phosphopeptide mapping based on two-dimensional HPLC coupled to mass spectrometry. Ser(498) and Ser(570) were identified as novel phosphoserine sites targeted by PKC-zeta. Both sites were additionally confirmed by phosphopeptide mapping of the corresponding Ser --> Ala mutants of rIRS-1(449)(-)(664). Ser(570) was specifically targeted by PKC-zeta, as shown by immunoblotting with a phosphospecific antiserum against Ser(570) of IRS-1. Binding of p85alpha to the S570A mutant was less susceptible to inhibition by PKC-zeta, when compared to the S612A mutant. In conclusion, our in vitro data demonstrate a strong inhibitory action of PKC-zeta at the level of IRS-1/PI 3-kinase interaction involving multiple serine phosphorylation sites. Whereas Ser(612) appears not to participate in the negative control of insulin signaling, Ser(570) may at least partly contribute to this process.

In vitro phosphorylation of insulin receptor substrate 1 by protein kinase C-zeta: functional analysis and identification of novel phosphorylation sites.

La prot&#xE9;ine kinase C-zeta (PKC-zeta) participe &#xE0; la fois dans la signalisation insulinique en aval et dans le contr&#xF4;le de r&#xE9;troaction n&#xE9;gative de l&#x26;#39;action d&#x26;#39;insuline. Ici nous avons utilis&#xE9; une approche in vitro pour identifier les sites de phosphorylation PKC-zeta dans insulin receptor substrate 1 (IRS-1) et de caract&#xE9;riser les implications fonctionnelles. Un recombinante IRS-1 fragment (RIR-1 (449) (-) (664)) contenant majeurs motifs tyrosine pour l&#x26;#39;interaction avec le phosphatidylinositol (PI) 3-kinase fortement associ&#xE9; &#xE0; la sous-unit&#xE9; de p85alpha PI 3-kinase apr&#xE8;s phosphorylation Tyr par le r&#xE9;cepteur de l&#x26;#39;insuline. La phosphorylation des RIR-1 (449) (-) (664) par la PKC-zeta induit une inhibition importante de ce processus avec un m&#xE9;lange de classiques isoformes de la PKC &#xE9;tant moins efficace. La PKC-z&#xEA;ta et les isoformes classiques phosphoryl&#xE9;e RIR-1 (449) (-) (664) sur Ser (612). Cependant, la modification de ce r&#xE9;sidu ne pas r&#xE9;duire l&#x26;#39;affinit&#xE9; de liaison &#xE0; p85alpha pTyr-peptides contenant (acides amin&#xE9;s 605-615 de rat IRS-1), tel que d&#xE9;termin&#xE9; par r&#xE9;sonance plasmonique de surface. RIR-1 (449) (-) (664) est ensuite phosphoryl&#xE9;e par la PKC-z&#xEA;ta utilisant [(32) P] ATP et soumis &#xE0; la cartographie sur la base de phosphopeptide trypsique bidimensionnelle CLHP coupl&#xE9;e &#xE0; la spectrom&#xE9;trie de masse. Ser (498) et Ser (570) ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s comme sites phosphos&#xE9;rine nouveaux cibl&#xE9;s par la PKC-zeta. Les deux sites ont en outre &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9; par la cartographie phosphopeptide de la Ser correspondant -&#x26;gt; mutants Ala des RIR-1 (449) (-) (664). Ser (570) a &#xE9;t&#xE9; sp&#xE9;cifiquement cibl&#xE9;s par la PKC-zeta, comme le montre par immunoblotting avec un antis&#xE9;rum contre phosphosp&#xE9;cifique Ser (570) d&#x26;#39;IRS-1. Lier de p85alpha au mutant S570A est moins sensible &#xE0; l&#x26;#39;inhibition par la PKC-z&#xEA;ta, par rapport au mutant S612A. En conclusion, nos donn&#xE9;es in vitro montrent une forte action inhibitrice de la PKC-zeta au niveau de IRS-1/PI 3-kinase impliquant l&#x26;#39;interaction de multiples sites de phosphorylation de s&#xE9;rine. Consid&#xE9;rant Ser (612) semble ne pas participer &#xE0; la commande de signalisation de l&#x26;#39;insuline n&#xE9;gative, Ser (570) peut au moins en partie contribuer &#xE0; ce processus.

De la phosphorylation in vitro de Insulin Receptor Substrate 1 par la prot&#xE9;ine kinase C-zeta: Analyse fonctionnelle et identification de nouveaux sites de phosphorylation

In-vitro-Phosphorylierung von Insulin-Rezeptor-Substrat 1 durch Proteinkinase C-zeta: funktionale Analyse und Identifikation von neuen Phosphorylierungsstellen.

Chinasi di proteina C-zeta (PKC-zeta) partecipa in segnalazione a valle insulina e nel controllo di feedback negativo di azione di insulina. Qui abbiamo utilizzato un approccio in vitro per identificare i siti di fosforilazione della PKC zeta all&#39;interno del substrato di insulina recettore 1 (IRS-1) e per caratterizzare le implicazioni funzionali. Frammento di un IRS-1 ricombinante (rIRS-1(449)(-)(664)) contenenti motivi di tirosina principali per l&#39;interazione con il fosfatidilinositolo (PI) 3-chinasi fortemente associata per la subunit&agrave; p85alpha di PI 3-chinasi dopo fosforilazione Tyr dal recettore insulina. La fosforilazione della rIRS-1(449)(-)(664) di PKC zeta indotta da una prominente inibizione di questo processo con una miscela di classico isoforme PKC, essendo meno efficace. PKC zeta sia la classica isoforme fosforilate rIRS-1(449)(-)(664) su Ser(612). Tuttavia, la modifica di questo residuo non riduce l&#39;affinit&agrave; di p85alpha associazione a pTyr contenenti peptidi (aminoacidi 605-615 del ratto IRS-1), come determinato dalla risonanza plasmonica di superficie. rIRS-1(449)(-)(664) fu poi fosforilato da PKC zeta utilizzando [(32) P] ATP e sottoposti a triptico fosfopeptide mapping basato su HPLC bidimensionale accoppiata alla spettrometria di massa. Ser(498) e Ser(570) sono stati identificati come romanzo phosphoserine siti presi di mira da PKC zeta. Entrambi i siti sono stati inoltre confermati da fosfopeptide mappatura del corrispondente Ser--&gt; mutanti Ala di rIRS-1(449)(-)(664). Ser(570) &egrave; stato specificamente mirato di PKC-zeta, come mostrato da immunoblotting con un antisiero phosphospecific contro Ser(570) di IRS-1. Associazione di p85alpha per la S570A mutante &egrave; stato meno sensibili all&#39;inibizione di PKC-zeta, se confrontato con il mutante S612A. In conclusione, i nostri dati in vitro dimostrano una forte azione inibente della PKC-zeta presso il livello di IRS-1/PI 3-chinasi interazione che coinvolgono pi&ugrave; siti di fosforilazione della serina. Considerando che la Ser(612) non sembra partecipare il controllo negativo dell&#39;insulina di segnalazione, Ser(570) almeno in parte possono contribuire a questo processo.

In vitro fosforilazione del substrato del recettore di insulina 1 di chinasi di proteina C-zeta: analisi funzionale e l&#39;identificazione dei siti di fosforilazione romanzo.

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x30BC;&#x30FC;&#x30BF;&#xFF08;PKC-&#x3B6;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x8CA0;&#x5E30;&#x9084;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x57FA;&#x8CEA;1&#xFF08;IRS-1&#xFF09;&#x5185;&#x306E;PKC-&#x3B6;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x610F;&#x5473;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;IRS-1&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF08;RIR&#x306F;-1&#xFF08;449&#xFF09;&#xFF08; - &#xFF09;&#xFF08;664&#xFF09;&#xFF09;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x306B;PI 3  - &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;p85alpha&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;PI&#xFF09;3  - &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x306E;RIR-1&#xFF08;449&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;PKC-&#x3B6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;664&#xFF09;&#x3042;&#x307E;&#x308A;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;PKC&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;612&#xFF09;&#x4E0A;&#x306E;&#xFF08;664&#xFF09; -  PKC-&#x3B6;&#x3068;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x304C;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306E;RIR-1&#xFF08;449&#xFF09;&#x4E21;&#x65B9;&#xFF08;&#xFF09;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x6539;&#x5909;&#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6C7A;&#x5B9A;pTyr&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF08;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;IRS-1&#x306E;605&#x304B;&#x3089;615&#xFF09;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;p85alpha&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002; RIR&#x306F;-1&#xFF08;449&#xFF09;&#xFF08; - &#xFF09;&#xFF08;664&#xFF09;&#x3057;&#x3001;[&#xFF08;32&#xFF09;P]&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;HPLC&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;ATP&#x3068;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;PKC-&#x3B6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; SER&#xFF08;498&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ser&#xFF08;570&#xFF09;&#x306F;&#x3001;PKC-&#x3B6;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x306E;RIR-1&#x26;gt;&#x306E;Ala&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;449&#xFF09; - &#xFF08; - &#xFF09;&#xFF08;664&#xFF09;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;Ser&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; SER&#xFF08;570&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;IRS-1&#x306E;Ser&#xFF08;570&#xFF09;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;phosphospecific&#x6297;&#x8840;&#x6E05;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;PKC-&#x3B6;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; S570A&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;p85alpha&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;S612A&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;PKC-&#x3B6;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306B;&#x304F;&#x304F;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x542B;&#x3080;IRS-1/PI 3  - &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;PKC-&#x3B6;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306E;Ser&#xFF08;612&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4E00;&#x65B9;&#x306E;Ser&#xFF08;570&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;

&#x65B0;&#x898F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x540C;&#x5B9A;&#xFF1A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C-&#x30BC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x57FA;&#x8CEA;1&#x306E;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C-&#xC81C;&#xD0C0; (PKC-&#xC81C;&#xD0C0;) &#xCC38;&#xC5EC; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC870;&#xCE58;&#xC758; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC640; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB428;. &#xC5EC;&#xAE30; PKC &#xC81C;&#xD0C0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB0B4;&#xC758; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE30;&#xC9C8; 1 (&#xAD6D;&#xC138;&#xCCAD;-1)&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC778; &#xC758;&#xBBF8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xCCB4; &#xC678; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xAD6D;&#xC138;&#xCCAD; 1 &#xC870;&#xAC01; (phosphatidylinositol (PI) 3 &#xB2C8; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Tyr &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6C4; PI 3-kinase&#xC758; p85alpha &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xAD00;&#xB828; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; rIRS-1(449)(-)(664)) &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC8FC;&#xC694; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;. PKC &#xC81C;&#xD0C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Rirs-1(449)(-)(664)&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4; &#xB35C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; PKC isoforms &#xD63C;&#xD569;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xC800;&#xBA85;&#xD55C; &#xC800;&#xD574; &#xB41C;&#xB2E4;. PKC &#xC81C;&#xD0C0;&#xC640; &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; isoforms phosphorylated ser(612)&#xC5D0; rIRS-1(449)(-)(664). &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xCC0C; &#xAEBC;&#xC774; &#xAE30;&#xC758; &#xC218;&#xC815; &#xD3A9; &#xD2F0; pTyr &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB4DC; (&#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; 605-615 &#xC950; &#xAD6D;&#xC138;&#xCCAD; 1&#xC758;), &#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; p85alpha&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4E4;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. Rirs-1(449)(-)(664)&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; PKC &#xC81C;&#xD0C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphorylated [(32) P]&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; ATP&#xC640; &#xBCF5;&#xC885;&#xB41C;, tryptic&#xC5D0; phosphopeptide &#xB9E4;&#xD551; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; 2 &#xCC28;&#xC6D0; HPLC &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC;. Ser(498) &#xBC0F; Ser(570) &#xC18C;&#xC124; phosphoserine &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; PKC &#xC81C;&#xD0C0;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBAA8;&#xB450; Rirs-1(449)(-)(664)&#xC758; Ala &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;--&gt; &#xD574;&#xB2F9; Ser&#xC758; phosphopeptide &#xB9E4;&#xD551;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB610;&#xD55C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Ser(570) immunoblotting phosphospecific &#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C; ser(570)&#xC758; &#xAD6D;&#xC138;&#xCCAD;-1&#xC5D0; &#xB300;&#xD574;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; PKC &#xC81C;&#xD0C0; &#xD45C;&#xC801;&#xC774; &#xB410;&#xB2E4;. P85alpha&#xB294; s570a&#xC5D0;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; S612A &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; PKC &#xC81C;&#xD0C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC801;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xB860;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAD6D;&#xC138;&#xCCAD;-1/p I 3 &#xB2C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; PKC-&#xC81C;&#xD0C0;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC870;&#xCE58;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74; Ser(612) &#xC2E0;&#xD638; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC758; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;, Ser(570) &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C &#xC81C;&#xD0C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE30;&#xC9C8; 1&#xC758;: &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xC18C;&#xC124; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

La prote&#xED;na quinasa C-zeta (PKC-zeta) participa tanto en la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de insulina aguas abajo y en el control de retroalimentaci&#xF3;n negativa de la acci&#xF3;n de la insulina. Aqu&#xED; hemos utilizado un enfoque in vitro para identificar la PKC-zeta en los sitios de fosforilaci&#xF3;n del sustrato del receptor de insulina 1 (IRS-1) y para caracterizar las implicaciones funcionales. Un recombinante IRS-1 fragmento (RIR-1 (449) (-) (664)) que contiene los principales motivos de tirosina para la interacci&#xF3;n con el fosfatidilinositol (PI) 3-quinasa fuertemente asociada a la subunidad p85alpha de la PI 3-quinasa despu&#xE9;s de la fosforilaci&#xF3;n de la Tyr del receptor de insulina. La fosforilaci&#xF3;n de la respuesta impulsiva-1 (449) (-) (664) por la PKC-zeta indujo una inhibici&#xF3;n importante de este proceso con una mezcla de isoformas cl&#xE1;sicas de PKC son menos eficaces. Tanto la PKC-zeta y las isoformas cl&#xE1;sicas fosforilados RIRs 1 (449) (-) (664) en Ser (612). Sin embargo, la modificaci&#xF3;n de este residuo no reduce la afinidad de uni&#xF3;n a p85alpha pTyr que contienen p&#xE9;ptidos (amino&#xE1;cidos 605-615 de la rata del IRS-1), seg&#xFA;n lo determinado por la resonancia de plasm&#xF3;n superficial. RIRs 1 (449) (-) (664) se fosforil&#xF3; entonces por PKC-zeta utilizando [(32) P] ATP y se someti&#xF3; a phosphopeptide cartograf&#xED;a tr&#xED;ptico basado en dos dimensiones HPLC acoplado a espectrometr&#xED;a de masas. Ser (498) y Ser (570) fueron identificados como sitios fosfoserina nuevos destinatarios de la PKC-zeta. Ambos sitios se confirm&#xF3; adicionalmente mediante mapeo fosfop&#xE9;ptido de la Ser correspondiente -&#x26;gt; Ala mutantes de la respuesta impulsiva-1 (449) (-) (664). Ser (570) fue dirigida espec&#xED;ficamente por la PKC-zeta, como se muestra por inmunotransferencia con un antisuero contra fosfoespec&#xED;fico Ser (570) de IRS-1. La uni&#xF3;n de p85alpha para el mutante S570A era menos susceptible a la inhibici&#xF3;n por la PKC-zeta, cuando se compara con el mutante S612A. En conclusi&#xF3;n, nuestros datos in vitro demuestran una fuerte acci&#xF3;n inhibidora de la PKC-zeta en el nivel de IRS-1/PI 3-quinasa interacci&#xF3;n que implica m&#xFA;ltiples sitios de fosforilaci&#xF3;n de serina. Considerando Ser (612) aparece no participar en el control negativo de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de la insulina, Ser (570) puede, al menos parcialmente contribuir a este proceso.

In vitro la fosforilaci&#xF3;n del sustrato 1 del receptor de insulina por la prote&#xED;na quinasa C-zeta: An&#xE1;lisis Funcional y la identificaci&#xF3;n de sitios de fosforilaci&#xF3;n novedosos

&#x808C;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185; O2 &#x7ED1;&#x5B9A; hemoprotein &#x5728;&#x5FC3;&#x810F;&#x548C;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x4E2D;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x65AD;&#x7684;&#x808C;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20; (myo-/-) &#x5BFC;&#x81F4;&#x6CA1;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x548C;&#x6B63;&#x5E38;&#x5FC3;&#x810F;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5C06;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5F80;&#x5F80;&#x53D8;&#x5F97;&#x9661;&#x5CED;&#x8D77;&#x6765;&#x6C27;&#x6C14;&#x538B;&#x529B;&#x6E10;&#x53D8;&#x4ECE;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x7BA1;&#x5230;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6539;&#x52A8;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x808C;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5FC3;&#x810F;&#x57FA;&#x677F;&#x5229;&#x7528;&#x7387;&#x4ECE;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x7684;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6C27;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4;&#x751F;&#x5316;&#x7684;&#x8F6C;&#x53D8;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x53D1;&#x73B0;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; beta-oxidation&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6838;&#x53D7;&#x4F53; PPAR &#x8981;&#x7F16;&#x7801;&#x4E2D;&#x808C;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7F3A;&#x5FC3;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x9176;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; PET &#x663E;&#x793A;&#x5927;&#x5E45;&#x589E;&#x52A0;&#x4F53;&#x5185;&#x5FC3;&#x810F;&#x6444;&#x53D6;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x7684;&#x5999;/&#x5C0F;&#x9F20; (+ 2.3 &#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; n &#x4E2D;&#x6CE8;&#x5165;&#x5242;&#x91CF; 0.8+/-0.5%/-6.7 = 5&#xFF0C;P &lt; 0.001)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x4E0E;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x8FD0;&#x8F7D;&#x4F53; 4 &#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0A;&#x8C03;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x5F00;&#x5173;&#x6240;&#x7684;&#x79BB;&#x4F53;&#x5FC3;&#x810F;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;13 C NMR &#x6027;&#x8D28; isotopomer &#x7814;&#x7A76;&#x8BC1;&#x5B9E; [1&#xFF0C;6-13 C 2] &#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x5229;&#x7528;&#x589E;&#x52A0;&#x5999;/&#x5FC3;&#x4E2D; (38 + /-8%&#x548C; 22 + /-5%&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF0C;n = 6&#xFF0C;P &lt; 0.05&#xFF09;&#xFF0C;&#x548C;&#x808C;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7F3A;&#x7EC4;&#x540C;&#x65F6;&#xFF0C;&#x4E0B;&#x964D; [U-13 C 16] &#x68D5;&#x6988;&#x9178;&#x916F;&#x5229;&#x7528; (42 + /-6%&#x548C; 11%&#x5728;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; n + 63 = 6&#xFF0C;P &lt; 0.05)&#x3002;O2 &#x76D8;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x5229;&#x7528;&#x7387;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x57FA;&#x8D28;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x8F6C;&#x53D8;&#x798F;&#x5229;&#x80FD;&#x6E90;&#x75BE;&#x60A3;&#x548C;&#x56E0;&#x6B64;&#x8868;&#x793A;&#x5206;&#x5B50;&#x9002;&#x5E94;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5141;&#x8BB8;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8865;&#x507F;&#x7531;&#x4E8E;&#x6E38;&#x79BB;&#x6C27;&#x8F7D;&#x4F53;&#x808C;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x6539;&#x53D8;&#x808C;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x672C;&#x8EAB;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x886C;&#x5E95;&#x9009;&#x62E9;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#x5173;&#x952E;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x8FD9;&#x7BC7;&#x6587;&#x7AE0;&#x7684;&#x5168;&#x6587;&#x662F;&#x53EF;&#x5728;&#x7EBF; http://circres.ahajournals.org&#x3002;

&#x808C;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5FC3;&#x810F;&#x57FA;&#x6750;&#x9009;&#x62E9;&#x5F00;&#x5173;&#x3002;

Myoglobin is an important intracellular O2 binding hemoprotein in heart and skeletal muscle. Surprisingly, disruption of myoglobin in mice (myo-/-) resulted in no obvious phenotype and normal cardiac function was suggested to be mediated by structural alterations that tend to steepen the oxygen pressure gradient from capillary to mitochondria. Here we report that lack of myoglobin causes a biochemical shift in cardiac substrate utilization from fatty acid to glucose oxidation. Proteome and gene expression analysis uncovered key enzymes of mitochondrial beta-oxidation as well as the nuclear receptor PPAR to be downregulated in myoglobin-deficient hearts. Using FDG-PET we showed a substantially increased in vivo cardiac uptake of glucose in myo-/- mice (6.7+/-2.3 versus 0.8+/-0.5% of injected dose in wild-type, n=5, P<0.001), which was associated with an upregulation of the glucose transporter GLUT4. The metabolic switch was confirmed by 13C NMR spetroscopic isotopomer studies of isolated hearts which revealed that [1,6-13C2]glucose utilization was increased in myo-/- hearts (38+/-8% versus 22+/-5% in wild-type, n=6, P<0.05), and concomitantly, [U-13C16]palmitate utilization was decreased in the myoglobin-deficient group (42+/-6% versus 63+/-11% in wild-type, n=6, P<0.05). Because of the O2-sparing effect of glucose utilization, the observed shift in substrate metabolism benefits energy homoeostasis and therefore represents a molecular adaptation process allowing to compensate for lack of the cytosolic oxygen carrier myoglobin. Furthermore, our data suggest that an altered myoglobin level itself may be a critical determinant for substrate selection in the heart. The full text of this article is available online at http://circres.ahajournals.org.

Lack of myoglobin causes a switch in cardiac substrate selection.

La myoglobine est un important h&#xE9;moprot&#xE9;ine O2 intracellulaire obligatoire dans le c&#x153;ur et le muscle squelettique. &#xC9;tonnamment, la perturbation de la myoglobine chez la souris (myo-/ -) ont abouti &#xE0; aucun ph&#xE9;notype &#xE9;vident et une fonction cardiaque normale a &#xE9;t&#xE9; sugg&#xE9;r&#xE9; d&#x26;#39;&#xEA;tre m&#xE9;diatis&#xE9;e par des modifications structurelles qui ont tendance &#xE0; aggraver l&#x26;#39;&#xE9;cart de pression d&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne &#xE0; partir capillaire vers les mitochondries. Ici, nous signalent que le manque de la myoglobine provoque un d&#xE9;calage dans l&#x26;#39;utilisation des substrats biochimiques cardiaques &#xE0; partir d&#x26;#39;acide gras &#xE0; l&#x26;#39;oxydation du glucose. Prot&#xE9;ome et analyse de l&#x26;#39;expression du g&#xE8;ne d&#xE9;couvert des enzymes cl&#xE9;s de la b&#xEA;ta-oxydation mitochondriale ainsi que le r&#xE9;cepteur nucl&#xE9;aire PPAR &#xEA;tre n&#xE9;gative dans la myoglobine d&#xE9;ficientes c&#x153;urs. Utilisation de la TEP-FDG nous a montr&#xE9; une augmentation substantielle de l&#x26;#39;absorption in vivo cardiaque de glucose dans le myo-/ - souris (6,7 + / -2,3 versus 0,8 + / -0,5% de la dose inject&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat sauvage-type, n = 5, P &#x26;lt;0,001) , qui a &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;e &#xE0; une r&#xE9;gulation &#xE0; la hausse de l&#x26;#39;transporteur de glucose GLUT4. Le commutateur m&#xE9;tabolique a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9;e par des &#xE9;tudes RMN 13C isotopom&#xE8;re spetroscopic de coeurs isol&#xE9;s qui ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que [1,6-13C2] l&#x26;#39;utilisation du glucose a &#xE9;t&#xE9; augment&#xE9; dans le myo-/ - coeurs (38 + / -8% par rapport &#xE0; 22 + / -5% &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat sauvage -type, n = 6, P &#x26;lt;0,05), et concomitamment, [U-13C16] palmitate d&#x26;#39;utilisation a &#xE9;t&#xE9; diminu&#xE9; dans le groupe myoglobine-d&#xE9;ficiente (42 + / -6% contre 63 + / -11% de type sauvage, n = 6, P &#x26;lt;0,05). En raison de l&#x26;#39;effet O2-&#xE9;conome de l&#x26;#39;utilisation du glucose, le d&#xE9;calage observ&#xE9; dans le m&#xE9;tabolisme substrat avantages hom&#xE9;ostasie &#xE9;nerg&#xE9;tique et par cons&#xE9;quent repr&#xE9;sente un processus d&#x26;#39;adaptation mol&#xE9;culaire permettant de compenser le manque de la myoglobine transporteur d&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne dans le cytosol. En outre, nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que la myoglobine un niveau alt&#xE9;r&#xE9; lui-m&#xEA;me peut &#xEA;tre un facteur d&#xE9;terminant pour le choix du substrat dans le c&#x153;ur. Le texte int&#xE9;gral de cet article est disponible en ligne &#xE0; http://circres.ahajournals.org.

Le manque de myoglobine provoque un commutateur dans le choix du substrat cardiaque

Der Mangel an Myoglobin verursacht einen Schalter in der Herz-Substrat Auswahl.

Mioglobina &egrave; un&#39;emoproteina di associazione O2 intracellulare importante nel cuore e muscolo scheletrico. Sorprendentemente, la perturbazione della mioglobina nei topi (myo-/-) ha provocato nessun fenotipo ovvio e normale funzione cardiaca &egrave; stato suggerito per essere mediato da alterazioni strutturali che tendono a steep il gradiente di pressione di ossigeno dal capillare ai mitocondri. Qui riportiamo che mancanza di mioglobina provoca uno spostamento biochimico nell&#39;utilizzazione del substrato cardiaco da acidi grassi per ossidazione del glucosio. Analisi di espressione genica e proteoma scoperti enzimi chiave di metaboliti mitocondriali, come pure i recettori nucleari PPAR essere downregolata nei cuori di mioglobina-carenti. Utilizzando la FDG-PET abbiamo mostrato un sostanzialmente aumentato assorbimento cardiaco in vivo del glucosio in myo-/-mice (6,7 + 2.3 versus 0.8+/-0.5% della dose iniettata nel wild-type, n = 5, P &lt; 0.001), che &egrave; stato associato con un upregulation del trasportatore di glucosio GLUT4. L&#39;interruttore metabolico fu confermata da 13 C NMR spetroscopic isotopomer studi di cuori isolati che ha rivelato che [1,6-13 C 2] &egrave; stata aumentata utilizzazione del glucosio in myo/cuori (38 + /-8% versus 22 + /-5% nel wild-type, n = 6, P &lt; 0.05) e simultaneamente, [U-13 C 16] utilizzazione palmitato era diminuito nel gruppo carente di mioglobina (42 + /-6% contro il 63 &plusmn; 11% nel wild-type, n = 6, P &lt; 0.05). A causa dell&#39;effetto O2-risparmiatori di utilizzazione del glucosio, il cambiamento osservato nel metabolismo di substrato benefici dell&#39;omeostasi energetica e rappresenta quindi un adattamento molecolare processo che permette di compensare la mancanza della mioglobina vettore di ossigeno citosolico. Inoltre, i nostri dati suggeriscono che un livello di mioglobina alterati si pu&ograve; essere un critico determinante per la scelta del substrato nel cuore. Il testo integrale di questo articolo &egrave; disponibile online presso http://circres.ahajournals.org.

Mancanza di mioglobina provoca un interruttore selezione substrato cardiaco.

&#x30DF;&#x30AA;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x3084;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;O2&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D8;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#xFF08;&#x30DF;&#x30AA; -  /  - &#xFF09;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x6DF7;&#x4E71;&#x306F;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x5FC3;&#x81D3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6BDB;&#x7D30;&#x7BA1;&#x304B;&#x3089;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3078;&#x306E;&#x9178;&#x7D20;&#x5727;&#x529B;&#x52FE;&#x914D;&#x3092;&#x6025;&#x52FE;&#x914D;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x50BE;&#x5411;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306F;&#x3001;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x304B;&#x3089;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x9178;&#x5316;&#x3078;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x5229;&#x7528;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x6B20;&#x640D;&#x306E;&#x5FC3;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x3B2;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x6838;&#x5185;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;PPAR&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; FDG-PET&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x30DF;&#x30AA;/&#x4E2D;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;in vivo&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; - &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#xFF08;6.7 + / -2.3&#x5BFE;0.8 + / -0.5&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306B;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6295;&#x4E0E;&#x91CF;&#x306E;&#xFF05;&#x306F;&#x3001;n = 5&#x3001;P &#x26;lt;0.001&#xFF09; &#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;GLUT4&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x4E0A;&#x6607;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x306E;&#x5FC3;+ / -8&#xFF05;22&#x5BFE;&#xFF08;38 + / -5&#xFF05; - &#x4EE3;&#x8B1D;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x304C;[1,6-13C2]&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x5229;&#x7528;&#x7387;&#x306F;&#x30DF;&#x30AA; -  /&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x5FC3;&#x306E;13C NMR spetroscopic&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30C8;&#x30DD;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x578B;&#x3001;n = 6&#x3001;P &#x26;lt;0.05&#xFF09;&#x3001;&#x4F75;&#x7528;&#x3001;[U-13C16]&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7387;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3001;n&#x306E;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x6B20;&#x640D;&#x7FA4;&#xFF08;42 + / -6&#xFF05;63 + / -11&#xFF05;&#x5BFE;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;= 6&#x3001;P &#x26;lt;0.05&#xFF09;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x5229;&#x7528;&#x306E;O2-&#x6E29;&#x5B58;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x57FA;&#x8CEA;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B7;&#x30B9;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9178;&#x7D20;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3092;&#x88DC;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x904E;&#x7A0B;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x81EA;&#x4F53;&#x304C;&#x5FC3;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8A18;&#x4E8B;&#x306E;&#x5168;&#x6587;&#x306F;http://circres.ahajournals.org&#x304B;&#x3089;&#x30AA;&#x30F3;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x5165;&#x624B;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DF;&#x30AA;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306F;&#x5FC3;&#x81D3;&#x57FA;&#x8CEA;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;

&#xC801;&#xD608;&#xAD6C;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; o 2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; hemoprotein &#xC2EC;&#xC7A5;&#xACFC; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC5D0;&#xB294;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C;&#xC758; &#xC7A5;&#xC560; (myo-/-) &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; &#xBD84;&#xBA85; &#xD55C; &#xD615; &#xACE0; &#xC815;&#xC0C1; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC5D0; &#xBAA8; &#xC138;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC555;&#xB825; &#xAE30;&#xC6B8;&#xAE30;&#xB97C; &#xAC00;&#xD30C;&#xB974;&#xAC8C; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC774; &#xAD6C;&#xC870; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC744; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAE30;&#xD310; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xB960; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; beta-oxidation &#xD575; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; myoglobin &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0; downregulated &#xD558;&#xB294; PPAR&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xBB18;/&#xC950;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;&#xC758; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; in vivo &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAE00;&#xADC0; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF8; FDG PET&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; (&#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xD0C0;&#xC785; n&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC785; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC758; 0.8+/-0.5% &#xB300; 2.3 &plusmn; 6.7 5, P = &lt; 0.001), &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC804;&#xC1A1; glut4&#xC758; upregulation&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC0AC; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB41C; &#xB9C8;&#xC74C;&#xC758; 13 C NMR spetroscopic isotopomer &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4; [1, 6-13 C 2] &#xBB18;/&#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC774;&#xC6A9; &#xC99D;&#xAC00; (38 &plusmn; 8% &plusmn; 5% &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; n&#xC5D0;&#xC11C; 22 &#xB300; 6, P = &lt; 0.05), concomitantly, [U-13 C 16] &#xBB3C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xB960; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xACB0;&#xD54D; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; (42 63 &plusmn; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785;, n&#xC5D0; 11%&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; 6% + 6, P = &lt; 0.05). &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC774;&#xC6A9;&#xC758; o 2&#xB97C; &#xC0B4;&#xB824;&#xC8FC;&#xB294; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xAE30;&#xD310; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xBCC0;&#xD654; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; homoeostasis &#xD61C;&#xD0DD; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; cytosolic &#xC0B0;&#xC18C; &#xCE90;&#xB9AC;&#xC5B4; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC0C1;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xBD84;&#xC790; &#xC801;&#xC751; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xC218;&#xC900; &#xC790;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xAE30;&#xD310; &#xC120;&#xD0DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Http://circres.ahajournals.org&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xBB38;&#xC11C;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218;&#xB294; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC801;&#xD608;&#xAD6C;&#xC758; &#xBD80;&#xC871; &#xD558;&#xBA74; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAE30;&#xD310; &#xC120;&#xD0DD;&#xC758; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;.

La mioglobina es una importante hemoprote&#xED;na O2 intracelular obligatorio en coraz&#xF3;n y m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico. Sorprendentemente, la alteraci&#xF3;n de la mioglobina en ratones (mio-/ -) no dio lugar a fenotipo evidente y la funci&#xF3;n card&#xED;aca normal se sugiri&#xF3; a ser mediada por alteraciones estructurales que tienden a steepen el gradiente de presi&#xF3;n capilar a ox&#xED;geno de las mitocondrias. Aqu&#xED; mostramos que la falta de la mioglobina produce un cambio bioqu&#xED;mico en la utilizaci&#xF3;n de sustratos card&#xED;aco de los &#xE1;cidos grasos a la oxidaci&#xF3;n de la glucosa. Proteoma y el an&#xE1;lisis de la expresi&#xF3;n de genes descubri&#xF3; las enzimas clave de la beta-oxidaci&#xF3;n mitocondrial, as&#xED; como la de receptores nucleares PPAR ser regulados a la baja en la deficiencia de la mioglobina-corazones. Uso de la FDG-PET que mostr&#xF3; un aumento sustancial en la captaci&#xF3;n cardiaca in vivo de la glucosa en el mio-/ - ratones (6,7 + / -2,3 versus 0,8 + / -0,5% de la dosis inyectada en la de tipo salvaje, n = 5, P &#x26;lt;0,001) , que se asoci&#xF3; con una regulaci&#xF3;n al alza del transportador de glucosa GLUT4. El interruptor metab&#xF3;lico fue confirmada por los estudios de 13C RMN isotopomer spetroscopic de corazones aislados, que revelaron que [1,6-13C2] la utilizaci&#xF3;n de glucosa se increment&#xF3; en el mio-/ - corazones (38 + / -8% frente a 22 + / -5% en el medio silvestre tipo, n = 6, P &#x26;lt;0,05), y en forma concomitante, [U-13C16] palmitato de la utilizaci&#xF3;n se redujo en el grupo con deficiencia de la mioglobina (42 + / -6% frente a 63 + / -11% en la de tipo salvaje, n = 6, P &#x26;lt;0,05). Debido al efecto ahorrador de O2 de la utilizaci&#xF3;n de la glucosa, el cambio observado en la homeostasis del metabolismo de la energ&#xED;a sustrato beneficios y por lo tanto representa un proceso molecular que permite la adaptaci&#xF3;n para compensar la falta de ox&#xED;geno de la mioglobina compa&#xF1;&#xED;a citos&#xF3;lica. Por otra parte, nuestros datos sugieren que un nivel de alteraci&#xF3;n de la mioglobina en s&#xED; puede ser un factor determinante para la selecci&#xF3;n del sustrato en el coraz&#xF3;n. El texto completo de este art&#xED;culo est&#xE1; disponible en http://circres.ahajournals.org.

La falta de la mioglobina produce un cambio en la selecci&#xF3;n del soporte card&#xED;aco

&#x5728;&#x809D;&#x810F;&#x4E2D;&#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA;&#x5408;&#x6210;&#x9176; (GS) &#x4EC5;&#x9650;&#x4E8E;&#x5C0F;&#x5916;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EBA;&#x53E3;&#x548C;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x6E05;&#x7406;&#x9003;&#x6389;&#x4E86;&#x95E8;&#x9759;&#x8109;&#x5468;&#x56F4;&#x5C3F;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x8F66;&#x53A2;&#x7684;&#x6C28;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x5BF9;&#x5927;&#x9F20;&#x809D;&#x810F;&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x5355;&#x4E00;&#x8179;&#x8154;&#x6CE8;&#x5C04;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6; (LPS) &#x4F53;&#x5185;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x6CE8;&#x5C04;&#x6DB2;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5408;&#x9176;&#x540E; 6 &#x81F3; 12 &#x5C0F;&#x65F6;, &#x662F;&#x6700;&#x5927;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728; 24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x5185;&#x8FD4;&#x56DE;&#x671D;&#x63A7;&#x5236;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x6CE8;&#x5C04;&#x540E;&#x7684;&#x4E8C;&#x5341;&#x56DB;&#x5C0F;&#x65F6;&#x7EA6;&#x4E94;&#x500D;&#x589E;&#x52A0;&#x785D;&#x5316;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x809D;&#x810F;&#x4E2D;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x548C; GS &#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x51CF;&#x5C11;&#x7EA6; 20%&#xFF0C;&#x800C; GS &#x6D3B;&#x6027;&#x964D;&#x4F4E;&#x4E86; 40%&#x81F3; 50%&#x3002;GS &#x53D1;&#x73B0;&#x65E0;&#x6CD5;&#x54CD;&#x5E94; LPS&#xFF0C;&#x785D;&#x5316;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x785D;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; immunodepletion GS &#x86CB;&#x767D;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x7EA6; 50%&#xFF0C;&#x4F46;&#x5BF9; GS &#x6D3B;&#x6027;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4EE5;&#x53CA;&#x901A;&#x8FC7;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x8FC7;&#x6C27;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x6240;&#x81F4;&#x7684;&#x7EAF;&#x51C0; GS &#x706D;&#x6D3B;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x785D;&#x5316;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x785D;&#x5316;&#x5371;&#x91CD;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x9176;&#x5931;&#x6D3B;&#x3002;GS &#x706D;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x6839;&#x636E;&#x4ECE;&#x704C;&#x6D41;&#x4ECE; 24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5927;&#x9F20;&#x809D;&#x810F; (0.3 &#x8840;&#x6DB2;/L) &#x6C28;&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA;&#x5408;&#x6210;&#x88AB;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x7EA6; 50%&#xFF0C;&#x800C;&#x5C3F;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D7;&#x5230;&#x660E;&#x663E;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;LPS &#x635F;&#x5BB3;&#x809D;&#x6C28;&#x89E3;&#x6BD2;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; GS &#x548C;&#x5176;&#x706D;&#x6D3B;&#x7531;&#x4E8E;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x785D;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5173;&#x4E8E;&#x6C28;&#x6D88;&#x9664;&#x5916;&#x6E05;&#x9053;&#x592B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x4EA7;&#x751F;&#x7F3A;&#x9677;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x9AD8;&#x6C28;&#x8840;&#x75C7;&#x4E2D;&#x6709;&#x809D;&#x786C;&#x5316;&#x7684;&#x75C5;&#x4EBA;&#x8113;&#x6BD2;&#x75C7;&#x5F15;&#x8D77;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x785D;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x5927;&#x9F20;&#x809D;&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x7684;&#x706D;&#x6D3B;&#x3002;

Glutamine synthetase (GS) in the liver is restricted to a small perivenous hepatocyte population and plays an important role in the scavenging of ammonia that has escaped the periportal urea-synthesizing compartment. We examined the effect of a single intraperitoneal injection of lipopolysaccharide (LPS) in vivo on glutamine synthesis in rat liver. LPS injection induced expression of inducible nitric oxide synthase, which was maximal after 6 to 12 hours but returned toward control levels within 24 hours. Twenty-four hours after LPS injection, an approximately fivefold increase in tyrosine-nitrated proteins in liver was found, and GS protein expression was decreased by approximately 20%, whereas GS activity was lowered by 40% to 50%. GS was found to be tyrosine-nitrated in response to LPS, and immunodepletion of tyrosine-nitrated proteins decreased GS protein by approximately 50% but had no effect on GS activity. Together with the finding via mass spectrometry that peroxynitrite-induced inactivation of purified GS is associated with nitration of the active site tyrosine residue, our data suggest that tyrosine nitration critically contributes to inactivation of the enzyme. In line with GS inactivation, glutamine synthesis from ammonia (0.3 mmol/L) in perfused livers from 24-hour LPS-treated rats was decreased by approximately 50%, whereas urea synthesis was not significantly affected. In conclusion, LPS impairs hepatic ammonia detoxification by both downregulation of GS and its inactivation because of tyrosine nitration. The resulting defect of perivenous scavenger cell function with regard to ammonia elimination may contribute to sepsis-induced development of hyperammonemia in patients who have cirrhosis.

Lipopolysaccharide-induced tyrosine nitration and inactivation of hepatic glutamine synthetase in the rat.

La glutamine synth&#xE9;tase (GS) dans le foie est limit&#xE9;e &#xE0; une population d&#x26;#39;h&#xE9;patocytes p&#xE9;riveineuse petite et joue un r&#xF4;le important dans le pi&#xE9;geage de l&#x26;#39;ammoniac qui a &#xE9;chapp&#xE9; &#xE0; la p&#xE9;riportale ur&#xE9;e-synth&#xE8;se compartiment. Nous avons examin&#xE9; l&#x26;#39;effet d&#x26;#39;une injection intrap&#xE9;riton&#xE9;ale unique de lipopolysaccharide (LPS) in vivo sur la synth&#xE8;se de la glutamine dans le foie de rat. LPS induit l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;injection d&#x26;#39;oxyde nitrique synthase inductible, qui a &#xE9;t&#xE9; maximale apr&#xE8;s 6 &#xE0; 12 heures mais il est revenu vers des niveaux de contr&#xF4;le dans les 24 heures. Vingt-quatre heures apr&#xE8;s l&#x26;#39;injection de LPS, une d&#x26;#39;environ cinq fois plus de tyrosine-nitr&#xE9;s prot&#xE9;ines dans le foie a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;, et l&#x26;#39;expression des prot&#xE9;ines GS a &#xE9;t&#xE9; diminu&#xE9; d&#x26;#39;environ 20%, tandis que l&#x26;#39;activit&#xE9; GS a &#xE9;t&#xE9; abaiss&#xE9; de 40% &#xE0; 50%. GS a &#xE9;t&#xE9; jug&#xE9;e la tyrosine-nitr&#xE9;s en r&#xE9;ponse au LPS, et immunod&#xE9;pl&#xE9;tion de la tyrosine-nitr&#xE9;s prot&#xE9;ines a diminu&#xE9; prot&#xE9;ine GS d&#x26;#39;environ 50%, mais n&#x26;#39;a eu aucun effet sur l&#x26;#39;activit&#xE9; GS. Avec la constatation par spectrom&#xE9;trie de masse que le peroxynitrite induit l&#x26;#39;inactivation de prot&#xE9;ine purifi&#xE9;e de GS est associ&#xE9; &#xE0; la nitration du r&#xE9;sidu tyrosine du site actif, nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que la nitration tyrosine contribue critique &#xE0; l&#x26;#39;inactivation de l&#x26;#39;enzyme. En ligne avec l&#x26;#39;inactivation GS, synth&#xE8;se de la glutamine &#xE0; partir d&#x26;#39;ammoniac (0,3 mmol / L) dans les foies perfus&#xE9;s de rats de 24 heures LPS-trait&#xE9;es a diminu&#xE9; d&#x26;#39;environ 50%, tandis que la synth&#xE8;se d&#x26;#39;ur&#xE9;e n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; significativement affect&#xE9;s. En conclusion, LPS alt&#xE8;re d&#xE9;sintoxication h&#xE9;patique d&#x26;#39;ammoniac &#xE0; la fois par la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de GS et de son inactivation en raison de la nitration tyrosine. Le d&#xE9;faut r&#xE9;sultant de la fonction cellulaire au tr&#xE9;sor p&#xE9;riveineuse en ce qui concerne l&#x26;#39;&#xE9;limination d&#x26;#39;ammoniac peuvent contribuer &#xE0; une septic&#xE9;mie provoqu&#xE9;e par le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;une hyperammoni&#xE9;mie chez les patients qui ont une cirrhose.

Lipopolysaccharide induite par nitration de la tyrosine et l&#x26;#39;inactivation de la glutamine synth&#xE9;tase h&#xE9;patique chez le rat

Lipopolysaccharid-induzierte Tyrosin-Nitrierung und Inaktivierung der hepatischen Glutaminsynthetase in der Ratte.

Sintetasi glutamina (GS) nel fegato sono limitato ad una popolazione di piccole perivenous degli epatociti e svolge un ruolo importante nello scavenging di ammoniaca che &egrave; sfuggito il vano periportal sintesi di urea. Abbiamo esaminato l&#39;effetto di una singola iniezione intraperitoneale di lipopolisaccaride (LPS) in vivo sulla sintesi della glutammina nel fegato di ratto. Iniezione di LPS induce espressione inducibile ossido nitrico sintasi, che &egrave; massima dopo 6-12 ore ma ritorna verso livelli di controllo entro 24 ore. Ventiquattro ore dopo l&#39;iniezione di LPS, un aumento di cinque volte circa in tirosina-nitrurato proteine nel fegato &egrave; stato trovato, e l&#39;espressione della proteina GS era diminuita di circa il 20%, considerando che l&#39;attivit&agrave; della GS &egrave; stato abbassato dal 40% al 50%. GS &egrave; stato trovato per essere nitrurato tirosina in risposta a LPS, e immunodepletion delle proteine tirosin-nitrurato diminuita della proteina GS da circa il 50%, ma ha avuto alcun effetto sulle attivit&agrave; della GS. Insieme con la ricerca tramite spettrometria di massa che indotta da perossinitrito inattivazione della GS purificato &egrave; associato con nitrazione di residui di tirosina del sito attivo, i nostri dati suggeriscono che nitrazione tirosina criticamente contribuisce all&#39;inattivazione dell&#39;enzima. In linea con l&#39;inattivazione di GS, sintesi di glutamina da ammoniaca (0,3 mmol/L) in fegati perfusi da ratti trattati con LPS 24 ore su 24 sono diminuita del 50% circa, considerando che la sintesi di urea non &egrave; stata influenzata in modo significativo. In conclusione, LPS altera la disintossicazione epatica ammoniaca da downregulation del GS e sua inattivazione a causa di nitrazione di tirosina. Il difetto risultante della funzione delle cellule di perivenous al tesoro per quanto riguarda l&#39;eliminazione di ammoniaca pu&ograve; contribuire allo sviluppo di sepsi-indotta di iperammoniemia in pazienti con cirrosi.

Nitrazione tirosina indotta dal lipopolisaccaride e inattivazione della sintetasi glutamina epatica nel ratto.

&#x809D;&#x81D3;&#x3067;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;GS&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x9759;&#x8108;&#x5468;&#x56F2;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x306B;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x9580;&#x8108;&#x5468;&#x56F2;&#x5C3F;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8131;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A2;&#x306E;&#x6E05;&#x6383;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x809D;&#x81D3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30EA;&#x30DD;&#x591A;&#x7CD6;&#x306E;&#x5358;&#x56DE;&#x8179;&#x8154;&#x5185;&#x6CE8;&#x5C04;&#xFF08;LPS&#xFF09;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; LPS&#x6CE8;&#x5165;6&#x301C;12&#x6642;&#x9593;&#x5F8C;&#x306B;&#x6700;&#x5927;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;24&#x6642;&#x9593;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x5236;&#x5FA1;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x8FD4;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x578B;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x5341;&#x56DB;&#x6642;&#x9593;&#x306E;LPS&#x6CE8;&#x5165;&#x5F8C;&#x3001;&#x7D04;&#x4E94;&#x500D;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x3067;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3057;&#x3001;GS&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;50&#xFF05;&#x306B;40&#xFF05;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;GS&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x7D04;20&#xFF05;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002; GS&#x306F;&#x3001;LPS&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x5316;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;immunodepletion&#x306F;&#x7D04;50&#xFF05;&#x3001;GS&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x304C;&#x3001;GS&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;GS&#x306E;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30CA;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C8;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x77E5;&#x898B;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x5316;&#x304C;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C3F;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;GS&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x3001;24&#x6642;&#x9593;&#x306E;LPS&#x51E6;&#x7406;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x704C;&#x6D41;&#x809D;&#x81D3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3092;&#x5408;&#x6210;&#xFF08;0.3&#x30DF;&#x30EA;&#x30E2;&#x30EB;/ L&#xFF09;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D04;50&#xFF05;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;LPS&#x305F;&#x3081;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x5316;&#x306E;GS&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x809D;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A2;&#x306E;&#x89E3;&#x6BD2;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x3002;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A2;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x9759;&#x8108;&#x5468;&#x56F2;&#x30B9;&#x30AB;&#x30D9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6B20;&#x9665;&#x304C;&#x809D;&#x786C;&#x5909;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9AD8;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A2;&#x8840;&#x75C7;&#x306E;&#x6557;&#x8840;&#x75C7;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x306E;&#x767A;&#x5C55;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EA;&#x30DD;&#x591A;&#x7CD6;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x809D;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;

&#xAE00;&#xB8E8;&#xD0C0;&#xBBFC; &#xD569;&#xC131; (GS) &#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xC740; perivenous hepatocyte &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558; &#xACE0; periportal &#xC694;&#xC18C; &#xD569;&#xC131; &#xAD6C;&#xD68D; &#xD0C8;&#xCD9C; &#xC554;&#xBAA8;&#xB2C8;&#xC544; &#xCCAD;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC950; &#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0C0;&#xBBFC; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; lipopolysaccharide (LPS) in vivo&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; intraperitoneal &#xC8FC;&#xC785;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0;. LPS &#xC0AC;&#xCD9C; &#xC720;&#xB3C4; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; synthase 6 ~ 12 &#xC2DC;&#xAC04; &#xD6C4; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; 24 &#xC2DC;&#xAC04; &#xC774;&#xB0B4;&#xC5D0; &#xBC18;&#xD658; &#xD558;&#xB294; &#xC2DD;. LPS &#xC8FC;&#xC785; &#xD6C4; 24 &#xC2DC;&#xAC04;&#xC740; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4;&#xC758; &#xC57D; &#xC624;&#xBD80; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; GS &#xD65C;&#xB3D9; 40% ~ 50%&#xB85C; &#xB0AE; &#xCDC4; &#xB2E4;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; GS &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xC774; &#xC57D; 20% &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. GS&#xB294; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4; LPS&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5; &#xC218;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4;&#xC758; immunodepletion GS &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC57D; 50% &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC; GS &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xCC3E;&#xB294; &#xD568;&#xAED8; &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; GS&#xC758; peroxynitrite &#xC720;&#xB3C4; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB41C; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; nitration, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; nitration &#xBE44;&#xD310;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. GS &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xCDB0; 24 &#xC2DC;&#xAC04; LPS &#xCC98;&#xB9AC; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; perfused &#xAC04;&#xC740;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC554;&#xBAA8;&#xB2C8;&#xC544; (0.3 m m o l/L)&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0C0;&#xBBFC; &#xD569;&#xC131; &#xBC18;&#xBA74; &#xC694;&#xC18C; &#xD569;&#xC131;&#xC740; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC57D; 50% &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, LPS &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; nitration &#xC778;&#xD574; GS&#xC758; downregulation &#xBC0F; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC554;&#xBAA8;&#xB2C8;&#xC544; &#xD574;&#xB3C5;&#xC744; &#xC190;&#xC0C1;. &#xC554;&#xBAA8;&#xB2C8;&#xC544; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; perivenous &#xD3D0;&#xD488; &#xC140; &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xAC04; &#xACBD; &#xBCC0; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; hyperammonemia&#xC758; &#xD328; &#xD608; &#xC99D; &#xC720;&#xBC1C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; lipopolysaccharide &#xC720;&#xB3C4; nitration &#xBC0F; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC04;&#xC7A5; &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0C0;&#xBBFC; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;.

Glutamina sintetasa (GS) en el h&#xED;gado est&#xE1; restringida a una poblaci&#xF3;n de hepatocitos perivenosa peque&#xF1;o y juega un papel importante en el barrido de amon&#xED;aco que ha escapado a la periportal de urea-sintetizar compartimento. Se examin&#xF3; el efecto de una &#xFA;nica inyecci&#xF3;n intraperitoneal de lipopolisac&#xE1;rido (LPS) in vivo en la s&#xED;ntesis de glutamina en el h&#xED;gado de rata. LPS inyecci&#xF3;n indujo la expresi&#xF3;n de la sintasa de &#xF3;xido n&#xED;trico inducible, que fue m&#xE1;xima al cabo de 6 a 12 horas, pero regres&#xF3; a los niveles de control dentro de las 24 horas. Veinticuatro horas despu&#xE9;s de la inyecci&#xF3;n de LPS, alrededor de un aumento de cinco veces en tirosina-nitrados prote&#xED;nas en el h&#xED;gado se encontr&#xF3;, y la expresi&#xF3;n de la prote&#xED;na GS se redujo en aproximadamente un 20%, mientras que la actividad GS se redujo en un 40% a 50%. GS se encontr&#xF3; que era la tirosina-nitrados en respuesta a LPS, y immunodepletion de la tirosina-nitrados prote&#xED;nas disminuci&#xF3;n de la prote&#xED;na GS en aproximadamente un 50%, pero no tuvo ning&#xFA;n efecto sobre la actividad de GS. Junto con el hallazgo mediante espectrometr&#xED;a de masas que peroxinitrito inducida por la inactivaci&#xF3;n de purificada GS est&#xE1; asociado con la nitraci&#xF3;n del residuo tirosina sitio activo, nuestros datos sugieren que la nitraci&#xF3;n de tirosina cr&#xED;ticamente contribuye a la inactivaci&#xF3;n de la enzima. De acuerdo con la inactivaci&#xF3;n de GS, la s&#xED;ntesis de glutamina a partir de amon&#xED;aco (0,3 mmol / L) en el h&#xED;gado perfundido de 24 horas, las ratas tratadas con LPS se redujo en aproximadamente un 50%, mientras que la s&#xED;ntesis de urea no se vio afectada de manera significativa. En conclusi&#xF3;n, el LPS afecta la desintoxicaci&#xF3;n hep&#xE1;tica amon&#xED;aco por tanto regulaci&#xF3;n a la baja de la SG y su inactivaci&#xF3;n por la nitraci&#xF3;n de la tirosina. El defecto resultante de la funci&#xF3;n celular perivenosa tesoro con lo que se refiere a la eliminaci&#xF3;n de amoniaco pueden contribuir a la sepsis inducida por el desarrollo de hiperamonemia en pacientes que tienen cirrosis.

Lipopolisac&#xE1;rido inducida por nitraci&#xF3;n de tirosina y la inactivaci&#xF3;n de glutamina sintetasa hep&#xE1;tica en la rata

&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x785D;&#x5316;&#x7684;&#x809D;&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x3002;

LPS-induced tyrosine nitration of hepatic glutamine synthetase.

Induite par le LPS nitration Tyrosine de la glutamine synth&#xE9;tase h&#xE9;patique

Tyrosinnitrierung der hepatischen Glutaminsynthetase die LPS-induzierte.

Nitrazione tirosina LPS-indotta della sintetasi epatica glutammina.

&#x809D;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;LPS&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x5316;

LPS &#xC720;&#xBC1C; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; nitration &#xAC04;&#xC7A5; &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0C0;&#xBBFC; &#xD569;&#xC131;&#xC758;.

LPS-inducida por nitraci&#xF3;n de la tirosina glutamina sintetasa hep&#xE1;tica

&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; 5-15%&#x7684;&#x670A;&#x86CB;&#x767D;&#x68D2; (PrP 27-30) &#x7EC4;&#x4EF6;&#x60F0;&#x6027;&#x591A;&#x7CD6;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x662F;&#x660E;&#x786E;&#x533A;&#x5206;&#x5F00;&#x6765;&#x7684; N-&#x7CD6;&#x57FA;&#x7EC4;&#x548C; PrP&#xFF0C;GPI &#x951A;&#x548C;&#x4E3B;&#x8981;&#x7531;&#x94FE;&#x63A5; 1&#xFF0C;4 &#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x4E0E; 1,4,6 &#x94FE;&#x63A5;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5206;&#x652F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x6B64;&#x591A;&#x7CD6;&#x652F;&#x67B6;&#x662F;&#x670A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53D1;&#x73B0;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x6B21;&#x8981;&#x6210;&#x5206;&#x5168;&#x957F; PrP(Sc)&#xFF0C;&#x670A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x68D2;&#x548C;&#x9F20;&#x6807; ScN2a &#x670A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4ECE;&#x57F9;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x4ECE;&#x670A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x68D2;&#x5236;&#x5907;&#x5DF2;&#x6709;&#x6240;&#x6539;&#x5584;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x591A;&#x7CD6;&#x652F;&#x67B6;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x5269;&#x4F59;&#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#x529B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x51FA;&#x4E4E;&#x610F;&#x6599;&#x5982;&#x679C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5B8C;&#x5168; &alpha;-&#x7CD6;&#x82F7;&#x7CD6;&#x82F7;&#x8054;&#x7CFB;&#x7684;&#x7ACB;&#x4F53;&#x5316;&#x5B66;&#x3002;&#x591A;&#x7CD6;&#x3001; &#x53CA;&#x5176;&#x4E0E;&#x670A;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53CA;&#x7CD6;&#x539F;&#x548C;&#x8BED;&#x6599;&#x5E93; amylacea &#x4E0E;&#x6F5C;&#x5728;&#x5173;&#x7CFB;&#x7684;&#x8D77;&#x6E90;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x3002;

PrP 27-30 &#x7684;&#x591A;&#x7CD6;&#x652F;&#x67B6;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x81EA;&#x7136;&#x670A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x94FE;&#x63A5; &alpha; &#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x3002;

An inert polysaccharide scaffold identified as a 5-15% component of prion rods (PrP 27-30) is unambiguously distinguishable from the N-glycosyl groups and the GPI anchor of PrP, and consists predominantly of 1,4-linked glucose with some branching via 1,4,6-linked glucose. We show that this polysaccharide scaffold is a common secondary component of prions found in hamster full-length PrP(Sc), prion rods and in mouse ScN2a prions from cell culture. The preparation from prion rods was improved, resulting in a polysaccharide scaffold free of remaining infectivity. Furthermore, we determined the stereochemistry of the glycoside linkages as pre-dominantly if not entirely alpha-glycosidic. The origin of the polysaccharide, its interaction with PrP and its potential relation to glycogen and corpora amylacea are discussed.

The polysaccharide scaffold of PrP 27-30 is a common compound of natural prions and consists of alpha-linked polyglucose.

Un polysaccharide inerte &#xE9;chafaudage identifi&#xE9;e comme une composante de 5-15% de tiges prion (PrP 27-30) est sans ambigu&#xEF;t&#xE9; &#xE0; distinguer des groupes N-glycosyl et de l&#x26;#39;ancre GPI de la PrP, et se compose principalement de 1,4-glucose li&#xE9;e avec une certaine ramification par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;1,4,6-li&#xE9; au glucose. Nous montrons que cet &#xE9;chafaudage polysaccharide est un composant commun secondaire des prions pr&#xE9;sents dans hamster pleine longueur PrP (Sc), des tiges &#xE0; prions et prions SCN2A souris &#xE0; partir de culture cellulaire. La pr&#xE9;paration de tiges &#xE0; prions est am&#xE9;lior&#xE9;e, r&#xE9;sultant en un polysaccharide &#xE9;chafaudage libre de l&#x26;#39;infectiosit&#xE9; restante. En outre, nous avons d&#xE9;termin&#xE9; la st&#xE9;r&#xE9;ochimie des liens glycosidiques comme pr&#xE9;-dominante si elle n&#x26;#39;est pas enti&#xE8;rement alpha-glycosidique. L&#x26;#39;origine du polysaccharide, son interaction avec la PrP et sa relation avec le potentiel de glycog&#xE8;ne et de corps amylac&#xE9;s sont discut&#xE9;s.

Le polysaccharide de la PrP 27-30 &#xE9;chafaudage est un compos&#xE9; commun des prions naturelles et se compose d&#x26;#39;Alpha-linked polyglucose

Eine inerte Polysaccharid-Ger&uuml;st identifiziert als 5-15 % Bestandteil des Prion-St&auml;be (PrP 27-30) ist von der N-Glycosyl-Gruppen und der GPI-Anker der PrP eindeutig unterscheidbar und besteht &uuml;berwiegend aus 1,4 gebundene Glukose mit einigen Verzweigungen &uuml;ber 1,4,6 gebundene Glukose. Wir zeigen, dass dieses Polysaccharid-Ger&uuml;st ein h&auml;ufiger sekund&auml;rer Bestandteil von Prionen in Hamster gefunden ist in PrP(Sc), Prion-St&auml;be und Maus ScN2a Prionen aus Zellkultur. Die Vorbereitung von Prion St&auml;be wurde verbessert, wodurch ein Polysaccharid-Ger&uuml;st der verbleibenden Infektiosit&auml;t. Dar&uuml;ber hinaus haben wir die Stereochemie der Glykosid-Verbindungen als Produkte, wenn nicht v&ouml;llig Alpha-glycosidische festgestellt. Der Ursprung der Polysaccharid, dessen Interaktion mit PrP und dessen m&ouml;gliche Beziehung zu Glykogen und Corpora Amylacea werden diskutiert.

Das Polysaccharid-Ger&uuml;st der PrP 27-30 ist eine gemeinsame Verbindung des nat&uuml;rlichen Prionen und besteht aus Alpha-chromosomale Polyglukose.

Un&#39;impalcatura di polisaccaride inerte identificato come componente di 5-15% delle barre di prioni (PrP 27-30) &egrave; inequivocabilmente distinguibile dai gruppi N-glicosil e il &agrave;ncora GPI di PrP e consiste principalmente di glucosio legata all&#39;1,4 con qualche ramificazione via glucosio legate 1,4,6. Dimostriamo che questa impalcatura polisaccaride &egrave; un comune componente secondaria di prioni trovato nel criceto full-length PrP(Sc), canne da prioni e nei prioni mouse ScN2a da coltura cellulare. La preparazione da canne da prioni &egrave; stata migliorata, risultante in un ponteggio polisaccaride libero di infettivit&agrave; rimanenti. Inoltre, abbiamo determinato la stereochimica dei legami glicoside come iGuzzini, se non interamente alfa-glicosidico. L&#39;origine del polisaccaride, la sua interazione con PrP e la sua relazione potenziale di glicogeno e corpora amylacea sono discussi.

Patibolo polisaccaride di PrP 27-30 &egrave; un comune composto di prioni naturali e consiste di polyglucose legata all&#39;alfa.

&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;5&#x301C;15&#xFF05;&#x306E;&#x6210;&#x5206;&#xFF08;PRP 27-30&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x591A;&#x7CD6;&#x985E;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5206;&#x5C90;&#x3067;N-&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x3068;PrP&#x306E;GPI&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x3001;1,4  - &#x7D50;&#x5408;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x4E3B;&#x306B;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;1,4,6  - &#x7D50;&#x5408;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x591A;&#x7CD6;&#x985E;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E;PrP&#xFF08;Sc&#xFF09;&#x3092;&#x3001;&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;SCN2A&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x4E8C;&#x6B21;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x304B;&#x3089;&#x6E96;&#x5099;&#x304C;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x611F;&#x67D3;&#x6027;&#x306E;&#x591A;&#x7CD6;&#x985E;&#x8DB3;&#x5834;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3B1;-&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30C9;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x30D7;&#x30EA;&#x512A;&#x6027;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x5316;&#x5B66;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x3002;&#x591A;&#x7CD6;&#x985E;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x306F;&#x3001;PRP&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3068;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x5C0F;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x8AAC;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

PrP&#x306E;27&#x304B;&#x3089;30&#x306E;&#x7CD6;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x306F;&#x81EA;&#x7136;&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x67B6;&#x6A4B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;

&#xD504;&#xB9AC;&#xC628; &#xBD09; (PrP 27-30)&#xC758; 5-15% &#xCEF4;&#xD3EC;&#xB10C;&#xD2B8;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBD88;&#xD65C;&#xC131; &#xB2E4; &#xB2F9; &#xB958; &#xBE44; &#xACC4; N glycosyl &#xADF8;&#xB8F9;&#xACFC; prp, GPI &#xC575;&#xCEE4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xBC0F; 1,4,6&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC77C;&#xBD80; &#xBD84;&#xAE30; 1, 4 &#xC5F0;&#xACB0; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC774; &#xB2E4; &#xB2F9; &#xB958; &#xBE44; &#xACC4; prions &#xD584;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBCF4;&#xC870; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; PrP(Sc), &#xD504;&#xB9AC;&#xC628; &#xBD09; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; ScN2a prions. &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; infectivity &#xBB34;&#xB8CC; &#xB2E4; &#xB2F9; &#xB958; &#xBE44; &#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD504;&#xB9AC;&#xC628; &#xBD09;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC900;&#xBE44; &#xAC1C;&#xC120; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC804;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB807;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;&#xBA74; pre-dominantly &#xC54C;&#xD30C;-glycosidic&#xC73C;&#xB85C; glycoside &#xC5F0;&#xACC4; stereochemistry &#xACB0;&#xC815;. &#xAE30;&#xC6D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4; &#xB2F9; &#xB958;, Prp&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; glycogen &#xBC0F; corpora amylacea&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

PrP 27-30&#xC758; &#xB2E4; &#xB2F9; &#xB958; &#xBE44; &#xACC4; &#xC790;&#xC5F0; prions&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xC774;&#xBA70; &#xC54C;&#xD30C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; polyglucose &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Un polisac&#xE1;rido inerte andamio identificado como un componente de 5-15% de varillas pri&#xF3;nicas (PrP 27-30) es inequ&#xED;vocamente distinguible de los grupos N-glicosilo y el ancla GPI de PrP, y compuesta fundamentalmente de 1,4-ligado de glucosa con alguna ramificaci&#xF3;n a trav&#xE9;s de 1,4,6-linked glucosa. Se demuestra que este polisac&#xE1;rido andamio es un componente secundario com&#xFA;n de los priones se encuentran en h&#xE1;mster de larga duraci&#xF3;n PrP (Sc), barras de priones de rat&#xF3;n y en los priones ScN2a del cultivo de c&#xE9;lulas. La preparaci&#xF3;n de las barras de priones fue mejorada, lo que resulta en un polisac&#xE1;rido andamio libre de la infectividad restante. Adem&#xE1;s, se determin&#xF3; la estereoqu&#xED;mica de los enlaces glicos&#xED;dicos como predominantemente, si no enteramente alfa-glicos&#xED;dico. El origen del polisac&#xE1;rido, su interacci&#xF3;n con PrP y su relaci&#xF3;n potencial de gluc&#xF3;geno y amylacea corpus se discuten.

El polisac&#xE1;rido Cadalso de PrP 27-30 es un compuesto com&#xFA;n de los priones naturales y se compone de Alfa-vinculado poliglucosa

&#x5355;&#x7EBF;&#x6001;&#x6C27; (&#xFF08;1)O(2))&#xFF0C;&#x5206;&#x5B50;&#x6C27;&#x7535;&#x5B50;&#x6FC0;&#x53D1;&#x5F62;&#x5F0F;&#x662F;&#x8C03;&#x89E3;&#x5458;&#x7684;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x8F90;&#x5C04;&#xFF0C;&#x523A;&#x6FC0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7EA7;&#x8054;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6548;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x8BC1;&#x660E; (&#x7531;&#x5149;&#x654F;&#x6216; 3&#xFF0C;3&#39; &#x7684;&#x70ED;&#x5206;&#x89E3;&#x751F;&#x6210;&#x7684; 1)O(2)-(1,4-naphthylidene) &#x7C73;&#x677E;-1&#xFF0C;4-endoperoxide &#x53EF;&#x706D;&#x6D3B;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; (PTPases)&#x3002;PTPase &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684; PTP1B &#x6216; CD45 &#x5DF2;&#x5E9F;&#x9664;&#x7684;&#x4F4E;&#x6D53;&#x5EA6; (1)O(2)&#xFF0C;&#x4F46;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x7531;&#x540E;&#x5904;&#x7406;&#x4E0E;&#x9187;&#x5904;&#x7406;&#x6062;&#x590D;&#x3002;PTP1B &#x66B4;&#x9732;&#x7684;&#x80F0;&#x9176;&#x6458;&#x8981;&#x7535;&#x55B7;&#x96FE;&#x7535;&#x79BB;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5206;&#x6790; &#xFF08;1)O(2) &#x4F5C;&#x4E3A;&#x6C27;&#x5316;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x900F;&#x9732;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9; Cys215 &#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#xFF08;1)O(2) &#x53EF;&#x901A;&#x8FC7;&#x5E72;&#x6270;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x8131;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x53F6;&#x6805;&#x3002;

&#x5355;&#x7EBF;&#x6001;&#x6C27;&#x6C27;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x53EF;&#x706D;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;-1B&#x3002;

Singlet oxygen ((1)O(2)), an electronically excited form of molecular oxygen, is a mediator of biological effects of ultraviolet A radiation, stimulating signaling cascades in human cells. We demonstrate here that (1)O(2) generated by photosensitization or by thermodecomposition of 3,3'-(1,4-naphthylidene)dipropionate-1,4-endoperoxide inactivates isolated protein tyrosine phosphatases (PTPases). PTPase activities of PTP1B or CD45 were abolished by low concentrations of (1)O(2), but were largely restored by post-treatment with dithiothreitol. Electrospray ionization mass spectrometry analysis of tryptic digests of PTP1B exposed to (1)O(2) revealed oxidation of active-site Cys215 as the only cysteine residue oxidized. In summary, (1)O(2) may activate signaling cascades by interfering with phosphotyrosine dephosphorylation.

Singlet oxygen inactivates protein tyrosine phosphatase-1B by oxidation of the active site cysteine.

L&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne singulet ((1) O (2)), une forme &#xE9;lectronique excit&#xE9; de l&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne mol&#xE9;culaire, est un m&#xE9;diateur des effets biologiques des rayonnements ultraviolets A, en stimulant des cascades de signalisation dans les cellules humaines. Nous d&#xE9;montrons ici que (1) O (2) g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; par photosensibilisation ou par thermod&#xE9;composition de 3,3 &#x26;#39;- (1,4-naphtylid&#xE8;ne) dipropionate-1 ,4-endoperoxyde inactive prot&#xE9;ines phosphatases isol&#xE9;es tyrosine PTPases). Activit&#xE9;s PTPase de PTP1B ou CD45 ont &#xE9;t&#xE9; supprim&#xE9;es par de faibles concentrations de (1) O (2), mais ont &#xE9;t&#xE9; en grande partie restaur&#xE9;e par un post-traitement avec le dithiothr&#xE9;itol. Ionisation de spectrom&#xE9;trie de masse par &#xE9;lectropulv&#xE9;risation analyse de digestion trypsique de PTP1B expos&#xE9; &#xE0; (1) O (2) a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; l&#x26;#39;oxydation du site actif de Cys215 que le r&#xE9;sidu de cyst&#xE9;ine ne oxyd&#xE9;. En r&#xE9;sum&#xE9;, (1) O (2) peut activer des cascades de signalisation en interf&#xE9;rant avec la d&#xE9;phosphorylation phosphotyrosine.

L&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne singulet Inactive prot&#xE9;ine tyrosine phosphatase-1B par oxydation de la cyst&#xE9;ine du site actif

Singulett-Sauerstoff ((1)O(2)), eine elektronisch aufgeregt Form des molekularen Sauerstoff, ist ein Vermittler der biologischen Wirkungen der UV-Strahlen eine Strahlung, anregend, Signalisierung ergie&szlig;t er sich in den menschlichen Zellen. Wir zeigen hier, dass (1)O(2) durch Photosensibilisierung oder durch Thermodecomposition von 3, 3&#39; generiert-(1,4-naphthylidene) Dipropionat-1,4-Endoperoxide inaktiviert isolierten Protein-Tyrosin-Phosphatasen (PTPases). PTPase T&auml;tigkeit der PTP1B und CD45 wurden durch niedrige Konzentrationen von abgeschafft (1)O(2), jedoch weitgehend durch Nachbehandlung mit Dithiothreitol wiederhergestellt wurden. Electrospray Ionisierung Massenspektrometrie Analyse der tryptic &Uuml;bersichten der PTP1B ausgesetzt (1)O(2) Oxidation von aktiv-Website Cys215 als der einzige Cystein-R&uuml;ckstand oxidiert offenbart. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen (1)O(2) kann aktivieren Signalling Kaskaden von Phosphotyrosine Dephosphorylierung zu st&ouml;ren.

Singulett-Sauerstoff inaktiviert Protein-Tyrosin-Phosphatase-1B durch Oxidation von der aktiven Site-Cystein.

Ossigeno singoletto ((1)O(2)), una forma di ossigeno molecolare, elettronicamente eccitata &egrave; un mediatore degli effetti biologici dei raggi ultravioletti una radiazione, stimolando la segnalazione cascate nelle cellule umane. Qui dimostriamo che (1)O(2) generati da fotosensibilizzazione o da thermodecomposition di 3, 3&#39;-(1,4-naphthylidene) dipropionate-1,4-endoperoxide inattiva isolato della proteina tirosina fosfatasi (PTPases). Attivit&agrave; di PTPase di PTP1B o CD45 furono abolite da basse concentrazioni di (1)O(2), ma furono in gran parte restaurato di post-trattamento con ditiotreitolo. Analisi di spettrometria di massa ionizzazione elettrospray del Digesto triptico della PTP1B esposta a (1)O(2) rivelato ossidazione del sito attivo Cys215 come i residui di cisteina solo ossidato. In sintesi, (1)O(2) pu&ograve; attivare cascades segnalazione interferendo con phosphotyrosine defosforilazione.

Ossigeno singoletto inattiva proteina tirosina fosfatasi-1B di ossidazione della cisteina del sito attivo.

&#x4E00;&#x91CD;&#x9805;&#x9178;&#x7D20;&#xFF08;O&#xFF08;1&#xFF09;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF09;&#x3001;&#x9178;&#x7D20;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x52B1;&#x8D77;&#x5F62;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; &#xFF08;1,4  -  naphthylidene&#xFF09;&#x30B8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9178;-1,4  - &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PTPases&#xFF09; - &#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;1&#xFF09;&#x5149;&#x5897;&#x611F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;3,3 &#x26;#39;&#x306E;&#x71B1;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;O&#xFF08;2&#xFF09;&#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PTP1B&#x307E;&#x305F;&#x306F;CD45&#x306E;PTPase&#x6D3B;&#x52D5;&#x306F;O&#xFF08;1&#xFF09;&#xFF08;2&#xFF09;&#x306E;&#x4F4E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x30B8;&#x30C1;&#x30AA;&#x30B9;&#x30EC;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x5F8C;&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#xFF08;1&#xFF09;O&#xFF08;2&#xFF09;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;PTP1B&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x307F;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;Cys215&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;O&#xFF08;1&#xFF09;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x8131;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E00;&#x91CD;&#x9805;&#x9178;&#x7D20;&#x306F;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;-1B&#x3092;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;

&#xB0B4;&#xC758; &#xC0B0;&#xC18C; ((1)O(2)), &#xBD84;&#xC790; &#xC0B0;&#xC18C;&#xC758; &#xC804;&#xC790;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD765;&#xBD84;&#xB41C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC790;&#xADF9; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xBC29;&#xC0AC; &#xD3ED;&#xD3EC; &#xC790;&#xC678;&#xC120;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC124;&#xBA85; (1)O(2) &#x25B7; 3, 3&#39;&#xC758; thermodecomposition&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;-(1,4-naphthylidene) &#xD504;&#xB85C;-1, 4-endoperoxide&#xC740; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; (PTPases). PTP1B &#xB610;&#xB294; CD45 PTPase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xD574; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; (1)O(2), dithiothreitol&#xC640; &#xD6C4; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB41C; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC;. &#xBD84;&#xBB34; &#xC774;&#xC628;&#xD654; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; ptp1b&#xC758; tryptic &#xB2E4;&#xC774;&#xC81C;&#xC2A4;&#xD2B8; (1)O(2) &#xC0B0;&#xD654; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; cys215&#xC758; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, (1)O(2) phosphotyrosine dephosphorylation &#xBC29;&#xD574; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xACC4;&#xACE1; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;.

&#xB0B4;&#xC758; &#xC0B0;&#xC18C; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; cysteine&#xC758; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;-1B &#xC0DD;&#xAE34;&#xB2E4;.

El ox&#xED;geno singlete ((1) O (2)), una forma electr&#xF3;nicamente excitada de ox&#xED;geno molecular, es un mediador de los efectos biol&#xF3;gicos de la radiaci&#xF3;n ultravioleta A, estimulando cascadas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas humanas. Estamos aqu&#xED; demostrar que (1) O (2) generado por fotosensibilizaci&#xF3;n o thermodecomposition de 3,3 &#x26;#39;- (1,4-naphthylidene) dipropionato-1 ,4-endoper&#xF3;xido inactiva la prote&#xED;na fosfatasa de tirosina (PTPases aislados). Actividades PTPasa de PTP1B o CD45 fueron abolidas por bajas concentraciones de (1) O (2), pero fueron restauradas en gran medida por el post-tratamiento con ditiotreitol. Ionizaci&#xF3;n electrospray an&#xE1;lisis de espectrometr&#xED;a de masa de tr&#xED;ptico digiere de PTP1B expuesto a (1) O (2) revel&#xF3; la oxidaci&#xF3;n de sitio activo Cys215 como el residuo de ciste&#xED;na oxidada solamente. En resumen, (1) O (2) pueden activar cascadas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n al interferir con la desfosforilaci&#xF3;n fosfotirosina.

El ox&#xED;geno singlete Desactiva prote&#xED;na tirosina fosfatasa-1B por la oxidaci&#xF3;n de la ciste&#xED;na del sitio activo

ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; (&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x7ED3;&#x5408;&#x76D2;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;) &#x5965;&#x666E;&#x963F;&#x662F;&#x8C03;&#x89E3; osmoprotection &#x901A;&#x8FC7;&#x5BFC;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x5BB9;&#x7684;&#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E94;&#x4E2A;&#x819C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x5C31;&#x50CF;&#x6240;&#x6709;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x53E4;&#x83CC; ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8FDB;&#x53E3;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#xFF0C;&#x5965;&#x666E;&#x963F; &#xFF08;&#x6B27;&#x666E;&#x662F;&#x8C03;&#x6E17;&#x5438;&#x6536;&#xFF09; &#x662F;&#x7531; ATPase &#x4E9A;&#x57FA; (OpuAA)&#x3001; &#x8DE8;&#x819C;&#x4E9A;&#x57FA; (OpuAB) &#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (OpuAC) &#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x4E0E;&#x5F88;&#x591A;&#x77E5;&#x540D; ABC-&#x4E09;&#xFF0C;OpuAA &#x662F;&#x7531;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x50AC;&#x5316;&#x548C;&#x87BA;&#x65CB;&#x57DF;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x5176; C &#x603B;&#x7AD9;&#x8F85;&#x52A9;&#x57DF;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x8303;&#x5F0F;&#x662F;&#x8D70;&#x8FDB;&#x9ED1;&#x68EE;&#x6797;&#xFF0C;ABC &#x817A;&#x9EA6;&#x82BD;&#x7CD6;&#x8FDB;&#x53E3;&#x5546;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5176;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x662F;&#x53EF;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x5E94;&#x7528;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x97F3;&#x54C1; &#xFF08;F&ouml;rster &#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#xFF09; &#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5355;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x6765;&#x83B7;&#x53D6; OpuAA &#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x5728;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x521D;&#x59CB;&#x7ED3;&#x6784;&#x4FE1;&#x606F;&#x5728;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0A;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x5E76;&#x5C06;&#x5B83;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x73B0;&#x6709;&#x8D70;&#x8FDB;&#x9ED1;&#x68EE;&#x6797;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7ED3;&#x6784;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x548C;&#x87BA;&#x65CB;&#x7684;&#x57DF;&#x901A;&#x8FC7;&#x8D70;&#x8FDB;&#x9ED1;&#x68EE;&#x6797;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x5B89;&#x6392;&#xFF0C;&#x800C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x8F85;&#x52A9;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x4E24;&#x4E2A; CBS &#xFF08;&#x80F1;&#x786B;&#x919A; &beta;-&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#xFF09; &#x57DF;&#xFF0C;&#x4E09;&#x7EF4;&#x65B9;&#x5411;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x6781;&#x5927;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A;&#x65B0;&#x914D;&#x4EF6;&#x8BE5;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x67D0;&#x4E00;&#x5B50;&#x96C6; ABC &#x817A;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x53CA;&#x5176;&#x751F;&#x7269;&#x529F;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x5FAE;&#x8C03;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

OpuAA&#xFF0C;ATPase &#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x5965;&#x666E;&#x963F; ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x50AC;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x76D1;&#x6D4B;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

The ABC transporter (ATP-binding-cassette transporter) OpuA is one of five membrane transport systems in Bacillus subtilis that mediate osmoprotection by importing compatible solutes. Just like all bacterial and archaeal ABC transporters that catalyse the import of substrates, OpuA (where Opu is osmoprotectant uptake) is composed of an ATPase subunit (OpuAA), a transmembrane subunit (OpuAB) and an extracellular substrate-binding protein (OpuAC). In contrast with many well-known ABC-ATPases, OpuAA is composed not only of a catalytic and a helical domain but also of an accessory domain located at its C-terminus. The paradigm of such an architecture is MalK, the ABC-ATPase of the maltose importer of Escherichia coli, for which detailed structural and functional information is available. In the present study, we have applied solution FRET (FÃ¶rster resonance energy transfer) techniques using two single cysteine mutants to obtain initial structural information on the architecture of the OpuAA dimer in solution. Analysing our results in detail and comparing them with the existing MalK structures revealed that the catalytic and helical domains adopted an arrangement similar to those of MalK, whereas profound differences in the three-dimensional orientation of the accessory domain, which contains two CBS (cystathionine beta-synthetase) domains, were observed. These results shed new light on the role of this accessory domain present in a certain subset of ABC-ATPase in the fine-tuning of three-dimensional structure and biological function.

Monitoring conformational changes during the catalytic cycle of OpuAA, the ATPase subunit of the ABC transporter OpuA from Bacillus subtilis.

Le transporteur ABC (ATP-binding cassette transporteur) Opua est l&#x26;#39;un des cinq syst&#xE8;mes de transport membranaire chez Bacillus subtilis qui interviennent dans osmoprotection par l&#x26;#39;importation de solut&#xE9;s compatibles. Tout comme les transporteurs ABC bact&#xE9;riennes et archaea qui catalysent l&#x26;#39;importation de substrats, Opua (o&#xF9; Opu est absorption osmoprotectant) est compos&#xE9; d&#x26;#39;une sous-unit&#xE9; ATPase (OpuAA), une sous-unit&#xE9; transmembranaire (OpuAB) et une extracellulaire substrat prot&#xE9;ine de liaison (OpuAC). En contraste avec de nombreux bien connue ABC-ATPases, OpuAA est compos&#xE9; non seulement d&#x26;#39;un catalyseur et un domaine h&#xE9;lico&#xEF;dal, mais aussi d&#x26;#39;un domaine accessoire situ&#xE9; &#xE0; son extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale. Le paradigme d&#x26;#39;une telle architecture est MalK, l&#x26;#39;ABC-ATPase de l&#x26;#39;importateur du maltose d&#x26;#39;Escherichia coli, pour lesquels des informations d&#xE9;taill&#xE9;es structurelle et fonctionnelle est disponible. Dans la pr&#xE9;sente &#xE9;tude, nous avons appliqu&#xE9; la solution FRET (transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance F&#xF6;rster) en utilisant des techniques simples deux mutants cyst&#xE9;ine pour obtenir une premi&#xE8;re information structurelle sur l&#x26;#39;architecture du dim&#xE8;re OpuAA en solution. L&#x26;#39;analyse de nos r&#xE9;sultats en d&#xE9;tail et en les comparant avec les structures existantes MalK a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que les domaines catalytiques et h&#xE9;lico&#xEF;dale a adopt&#xE9; une disposition semblable &#xE0; celles de MalK, alors que de profondes diff&#xE9;rences dans l&#x26;#39;orientation tridimensionnelle du domaine accessoire, qui contient deux CBS (cystathionine b&#xEA;ta -synth&#xE9;tase) domaines, ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s. Ces r&#xE9;sultats apportent un nouvel &#xE9;clairage sur le r&#xF4;le de ce pr&#xE9;sent de domaine accessoire dans un certain sous-ensemble de l&#x26;#39;ABC-ATPase dans le peaufinage de la structure tridimensionnelle et la fonction biologique.

Suivi changements conformationnels Pendant le cycle catalytique de OpuAA, la sous-unit&#xE9; ATPase de la Opua transporteur ABC de Bacillus subtilis

Die ABC-Transporter (ATP-Bindung-Kassette Transporter) OpuA ist einer der f&uuml;nf Membransysteme in Bacillus Subtilis, die Osmoprotection zu vermitteln, indem Sie kompatible Analyten importieren. Wie alle Bakterien und Archaea ABC Transporter, die den Import von Substraten katalysieren besteht OpuA (wobei Opu Osmoprotectant Aufnahme ist) eine Untereinheit der ATPase (OpuAA), ein Transmembran-Untereinheit (OpuAB) und eine extrazellul&auml;re Substrat-verbindliches Protein (OpuAC). Im Gegensatz zu vielen bekannten ABC-ATPasen besteht die OpuAA nicht nur &uuml;ber eine katalytische und eine spiralf&ouml;rmige Domain, sondern auch einer Zubeh&ouml;r-Dom&auml;ne befindet sich auf der C-Terminus. Das Paradigma einer solchen Architektur ist MalK, die ABC-ATPase der Maltose-Importeur von Escherichia coli, f&uuml;r die strukturelle und funktionelle Detailinformationen verf&uuml;gbar ist. In der vorliegenden Studie haben wir die L&ouml;sung FRET (F&ouml;rster-Resonanz-Energie-Transfer) Techniken mit zwei einzelnen Cystein-Mutanten anf&auml;ngliche strukturelle Informationen zur Architektur von der OpuAA-Dimer in L&ouml;sung beziehen k&ouml;nnen angewandt. Unsere Ergebnisse im Detail analysiert und vergleicht sie mit den vorhandenen MalK offenbart Strukturen, die katalytische und schr&auml;gen Domains angenommen eine Anordnung der MalK, &auml;hnlich, w&auml;hrend die tief greifenden Unterschiede in der dreidimensionale Ausrichtung der Zubeh&ouml;r-Dom&auml;ne, die zwei CBS (Cystathionin-Beta-Synthase) Dom&auml;nen enth&auml;lt, beobachtet wurden. Diese Ergebnisse werfen ein neues Licht auf die Rolle dieser Zubeh&ouml;r-Dom&auml;ne in eine bestimmte Teilmenge der ABC-ATPase in der Feinabstimmung der dreidimensionalen Struktur und biologische Funktion vorhanden.

&Uuml;berwachung Konformationsver&auml;nderungen w&auml;hrend des katalytischen Zyklus des OpuAA, der ATPase-Untereinheit des ABC Transporters OpuA aus Bacillus Subtilis.

Il trasportatore di ABC (trasportatore ATP-binding-cassette) OpuA &egrave; uno dei cinque sistemi di trasporto di membrana in Bacillus subtilis che mediano osmoprotection importando soluti compatibili. Proprio come tutti i batteri e archaeal ABC trasportatori che catalizzano l&#39;importazione dei substrati, OpuA (dove Opu &egrave; osmoprotectant assorbimento) &egrave; composto da una subunit&agrave; ATPasi (OpuAA), una subunit&agrave; transmembrana (OpuAB) e una proteina extracellulare substrato-associazione (OpuAC). In contrasto con molti ben noti ABC-ATPasi, OpuAA &egrave; composta non solo di un catalizzatore e un dominio elicoidale, ma anche di un dominio accessorio che si trova presso il C-terminus. Il paradigma di tale architettura &egrave; Modolo, ABC-ATPasi dell&#39;importatore maltosio di Escherichia coli, per cui sono disponibili informazioni strutturali e funzionali. Nel presente studio, abbiamo applicato utilizzando due mutanti singolo cisteina per ottenere informazioni strutturali iniziale sull&#39;architettura del dimero OpuAA in soluzione tecniche di soluzione FRET (trasferimento di energia per risonanza). Analizzando i risultati in dettaglio e confrontandoli con il Modolo esistente strutture ha rivelato che i domini catalitici ed elicoidali ha adottato una disposizione simile a quelli di Modolo, considerando le profonde differenze nell&#39;orientamento tridimensionale del dominio accessorio, che contiene due domini CBS (cistationina beta-sintetasi), sono state osservate. Questi risultati gettano nuova luce sul ruolo di questo dominio accessorio presente in un certo sottoinsieme di ABC-ATPasi nella messa a punto della struttura tridimensionale e la funzione biologica.

Cambiamenti conformazionali di controllo durante il ciclo catalitico di OpuAA, la subunit&agrave; ATPasi del trasportatore ABC OpuA da Bacillus subtilis.

ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;ATP-&#x7D50;&#x5408;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;-&#xFF09;&#x30AA;&#x30D7;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x306E;&#x6EB6;&#x8CEA;&#x3092;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;osmoprotection&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306E;5&#x3064;&#x306E;&#x819C;&#x8F38;&#x9001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x57FA;&#x677F;&#x3001;&#x30AA;&#x30D7;&#x30A2;&#xFF08;OPU&#x306F;osmoprotectant&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3067;&#x3059;&#xFF09;&#x306E;&#x8F38;&#x5165;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x3084;&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;ATP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;OpuAA&#xFF09;&#x3001;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;OpuAB&#xFF09;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#xFF08;OpuAC&#xFF09;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x3088;&#x304F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;ABC-ATP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;OpuAA&#x306F;&#x3001;&#x89E6;&#x5A92;&#x3068;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x304C;MalK&#x3001;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3084;&#x6A5F;&#x80FD;&#x60C5;&#x5831;&#x304C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x8F38;&#x5165;&#x306E;ABC-ATP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF09;FRET&#x306F;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3067;OpuAA&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;2&#x3064;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;MalK&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x89E6;&#x5A92;&#x3068;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;2 CBS&#xFF08;&#x30B7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x3B2;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;MalK&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x3092;&#x3001;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#xFF09;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5FAE;&#x8ABF;&#x6574;&#x306E;ABC-ATPase&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x200B;&#x200B;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x5149;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x308B;&#x3002;

OpuAA&#x3001;&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;ABC&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30AA;&#x30D7;&#x30A2;&#x306E;ATPase&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;

ABC transporter (ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; &#xC804;&#xC1A1;) &#xD478;&#xC544; &#xAC00;&#xC838;&#xC640;&#xC11C; &#xD638;&#xD658; solutes osmoprotection &#xC911;&#xC7AC; &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis&#xC5D0; 5 &#xB9C9; &#xC804;&#xC1A1; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138;&#xADE0;&#xACFC; archaeal ABC &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; catalyse &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30;&#xB294;, &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xD478;&#xC544; (Opu&#xC740; osmoprotectant &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;) ATPase &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (OpuAA), &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (OpuAB)&#xC640; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (OpuAC)&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9CE;&#xC740; &#xC798; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; ABC-ATPases, &#xB2EC;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD09;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCEEC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; C-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;&#xD55C; &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; Opuaa&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xC758; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784; MalK, &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xC544;&#xB2F9; &#xC218;&#xC785;&#xC758; ABC ATPase&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB450; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; OpuAA &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xC5D0; &#xCD08;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC870; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC5BB;&#xB294; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; (F&ouml;rster &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC;) &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;&#xC138;&#xD788; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xC874; Malk&#xACFC; &#xBE44;&#xAD50; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC1D;&#xD600; &#xB450; CBS (cystathionine &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xD569;&#xC131;) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2EC;&#xC624;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xCD09;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCEEC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; MalK, &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xD569;&#xC758; &#xCC44;&#xD0DD;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC774; &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC870;&#xC815;&#xC5D0; ABC Atpase&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xD558;&#xC704;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBE5B;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C8;&#xB2E4;.

OpuAA, &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis&#xC5D0;&#xC11C; ABC transporter &#xD478;&#xC544;&#xC758; ATPase &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC8FC;&#xAE30; &#xB3D9;&#xC548; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El transportador ABC (ATP-binding-cassette transportador) Opua es uno de los cinco sistemas de transporte de membrana en Bacillus subtilis que median osmoprotecci&#xF3;n mediante la importaci&#xF3;n de solutos compatibles. Al igual que todos los transportadores ABC bacterianos y archaeal que catalizan la importaci&#xF3;n de sustratos, Opua (donde Opu es absorci&#xF3;n osmoprotector) se compone de una subunidad ATPasa (OpuAA), una subunidad transmembrana (OpuAB) y un sustrato extracelular de uni&#xF3;n a prote&#xED;nas (OpuAC). A diferencia de muchos conocido ABC-ATPasas, OpuAA se compone no s&#xF3;lo de un catalizador y un dominio helicoidal, sino tambi&#xE9;n de un dominio de accesorios situado en su extremo C-terminal. El paradigma de este tipo de arquitectura es Malk, el ABC-ATPasa del importador de maltosa de Escherichia coli, que cuentan con informaci&#xF3;n detallada estructural y funcional est&#xE1; disponible. En el presente estudio, hemos aplicado una soluci&#xF3;n FRET (transferencia de energ&#xED;a F&#xF6;rster resonancia) utilizando t&#xE9;cnicas de dos mutantes de ciste&#xED;na individuales para obtener informaci&#xF3;n estructural inicial en la arquitectura del d&#xED;mero OpuAA en la soluci&#xF3;n. Del an&#xE1;lisis de los resultados en detalle y compararlas con las estructuras existentes Malk revel&#xF3; que los dominios catal&#xED;ticos y helicoidales adopt&#xF3; un acuerdo similar a los de Malk, mientras que las profundas diferencias en la orientaci&#xF3;n en tres dimensiones del dominio de accesorios, que contiene dos CBS (cistationina beta -sintetasa) dominios, se observaron. Estos resultados arrojan nueva luz sobre el papel de este presente de dominio de accesorios en un cierto subconjunto de ABC-ATPasa en el perfeccionamiento de la estructura tridimensional de las funciones biol&#xF3;gicas.

Control de cambios en la conformaci&#xF3;n Durante el ciclo catal&#xED;tico de OpuAA, la subunidad de la ATPasa Opua Transportador ABC de Bacillus subtilis

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x663E;&#x793A; 2 oxoglutarate &#x8131;&#x6C22;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x86CB;&#x767D; OdhI &#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x7684; PknG &#x5728; Thr14&#xFF0C;&#x4F46;&#x989D;&#x5916;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (STPKs) &#x4E5F;&#x53EF;&#x4EE5; phosphorylate OdhI&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E09;&#x5355; &#xFF08;DeltapknA&#xFF0C;DeltapknB&#xFF0C;DeltapknL)&#xFF0C;&#x4E00;&#x5957;&#x4E94;&#x53CC; &#xFF08;DeltapknAG&#x3001; DeltapknAL&#x3001; DeltapknBG&#x3001; DeltapknBL&#x3001; DeltapknLG) &#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E09;&#x91CD;&#x7A81;&#x53D8; DeltapknBLG DeltapknALG&#xFF09; &#x5EFA;&#x9020;&#x4E86;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x8868;&#x660E; PknA&#x3001; PknB&#x3001; PknG &#x548C; PknL &#x4E0D; C.&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A; OdhI &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x6240;&#x6709;&#x56DB;&#x4E2A; STPKs &#x53EF;&#x4EE5;&#x4FC3;&#x8FDB; OdhI &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x4E0E; PknG &#x6B63;&#x5728;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x3002;&#x53EA;&#x6709;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; pknG &#x5DF2;&#x6709;&#x88AB;&#x5220;&#x9664;&#x542B;&#x6709;&#x78B3;&#x548C;&#x6C2E;&#x6E90;&#x4E3A;&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA;&#x7684;&#x743C;&#x8102;&#x5E73;&#x677F;&#x4E0A;&#x663E;&#x793A;&#x5F3A;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;Thr14 &#x548C; Thr15 &#x7684; OdhI &#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x5355;&#x72EC;&#x6216;&#x540C;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5E76;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E24;&#x4E2A;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x4E86;&#x3002;&#x8868;&#x660E;&#x8131;&#x6C2E;&#x9664;&#x78F7;&#x7684; OdhI &#x662F;&#x88AB;&#x50AC;&#x5316;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;-Ser/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; Ppp &#x7684;&#x3002;&#x9664;&#x4E86; OdhI&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x86CB;&#x767D; FtsZ &#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x886C;&#x5E95;&#x7684; PknA&#x3001; PknB &#x548C; PknL &#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x7684; Ppp&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; PknA&#x3001; PknB&#x3001; PknG &#x548C; PknL &#x7684;&#x68D2;&#x72B6;&#x6746;&#x83CC;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#xFF1A; &#x975E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x548C;&#x7531;&#x591A;&#x4E2A;&#x6FC0;&#x9176;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; OdhI &#x548C; FtsZ &#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

We previously showed that the 2-oxoglutarate dehydrogenase inhibitor protein OdhI of Corynebacterium glutamicum is phosphorylated by PknG at Thr14, but that also additional serine/threonine protein kinases (STPKs) can phosphorylate OdhI. To identify these, a set of three single (DeltapknA, DeltapknB, DeltapknL), five double (DeltapknAG, DeltapknAL, DeltapknBG, DeltapknBL, DeltapknLG) and two triple deletion mutants (DeltapknALG, DeltapknBLG) were constructed. The existence of these mutants shows that PknA, PknB, PknG and PknL are not essential in C. glutamicum. Analysis of the OdhI phosphorylation status in the mutant strains revealed that all four STPKs can contribute to OdhI phosphorylation, with PknG being the most important one. Only mutants in which pknG was deleted showed a strong growth inhibition on agar plates containing glutamine as carbon and nitrogen source. Thr14 and Thr15 of OdhI were shown to be phosphorylated in vivo, either individually or simultaneously, and evidence for up to two additional phosphorylation sites was obtained. Dephosphorylation of OdhI was shown to be catalysed by the phospho-Ser/Thr protein phosphatase Ppp. Besides OdhI, the cell division protein FtsZ was identified as substrate of PknA, PknB and PknL and of the phosphatase Ppp, suggesting a role of these proteins in cell division.

Genetic and biochemical analysis of the serine/threonine protein kinases PknA, PknB, PknG and PknL of Corynebacterium glutamicum: evidence for non-essentiality and for phosphorylation of OdhI and FtsZ by multiple kinases.

Nous avons montr&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment que le 2-oxoglutarate d&#xE9;shydrog&#xE9;nase inhibiteur de la prot&#xE9;ine OdhI de Corynebacterium glutamicum est phosphoryl&#xE9;e par PknG &#xE0; Thr14, mais que la serine aussi plus / thr&#xE9;onine kinases (STPKs) peut phosphoryler OdhI. Pour les identifier, un ensemble unique de trois (DeltapknA, DeltapknB, DeltapknL), cinq doubles (DeltapknAG, DeltapknAL, DeltapknBG, DeltapknBL, DeltapknLG) et deux mutants de d&#xE9;l&#xE9;tion triples (DeltapknALG, DeltapknBLG) ont &#xE9;t&#xE9; construits. L&#x26;#39;existence de ces mutants montre que PknA, PknB, PknG et PknL ne sont pas essentielles chez C. glutamicum. L&#x26;#39;analyse de l&#x26;#39;&#xE9;tat de phosphorylation OdhI dans les souches mutantes a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que tous les quatre STPKs peut contribuer &#xE0; la phosphorylation OdhI, avec PknG &#xE9;tant le plus important. Seuls les mutants dans lequel a &#xE9;t&#xE9; supprim&#xE9; pknG ont montr&#xE9; une inhibition de la croissance forte sur les plaques d&#x26;#39;agar contenant la glutamine comme source de carbone et d&#x26;#39;azote. Thr14 et Thr15 de OdhI se sont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9;es &#xEA;tre phosphoryl&#xE9;e in vivo, soit individuellement, soit simultan&#xE9;ment, et la preuve pour un maximum de deux sites de phosphorylation suppl&#xE9;mentaires ont &#xE9;t&#xE9; obtenues. La d&#xE9;phosphorylation de OdhI a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pour &#xEA;tre catalys&#xE9;e par la prot&#xE9;ine phosphatase phospho-Ser/Thr Ppp. Outre OdhI, le FtsZ prot&#xE9;ines de division cellulaire a &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9; en tant que substrat de PknA, PknB et PknL et du Ppp phosphatase, sugg&#xE9;rant un r&#xF4;le de ces prot&#xE9;ines dans la division cellulaire.

Analyse g&#xE9;n&#xE9;tique et biochimique de la s&#xE9;rine / thr&#xE9;onine prot&#xE9;ines kinases PknA, PknB, PknG et PknL de Corynebacterium glutamicum: Preuve de la non-essentialit&#xE9; et de la phosphorylation de OdhI et FtsZ par des kinases multiples

Wir haben zuvor gezeigt, dass die 2 Oxoglutarate Dehydrogenase Inhibitor Protein OdhI von Corynebacterium Glutamicum von PknG an Thr14 phosphoryliert ist, sondern auch zus&auml;tzliche Serin/Threonin-Proteinkinasen (STPKs) OdhI phosphoryliert werden k&ouml;nnen. Um diese, einen Satz von drei einzelne (DeltapknA, DeltapknB, DeltapknL), identifizieren wurden f&uuml;nf Doppelzimmer (DeltapknAG, DeltapknAL, DeltapknBG, DeltapknBL, DeltapknLG) und zwei Dreibettzimmer L&ouml;schung-Mutanten (DeltapknALG, DeltapknBLG) gebaut. Die Existenz dieser Mutanten zeigt, dass PknA, PknB, PknG und PknL nicht in C. Glutamicum unerl&auml;sslich sind. Analyse des OdhI Phosphorylierung Status in der Mutanten Sorten ergab, dass alle vier STPKs mit PknG wird vor allem zur OdhI Phosphorylierung, beitragen k&ouml;nnen. Nur Mutanten, die in denen PknG gel&ouml;scht wurde zeigte eine starkes Wachstum-Hemmung auf Agarplatten mit Glutamin als Quelle f&uuml;r Kohlenstoff und Stickstoff. Thr14 und Thr15 von OdhI wurden gezeigt, um in-vivo, entweder einzeln oder gleichzeitig phosphoryliert werden und Beweismittel f&uuml;r bis zu zwei zus&auml;tzliche Phosphorylierung Sites erlangt wurde. Dephosphorylierung von OdhI wurde durch die Phospho-Ser/Thr-Protein-Phosphatase Ppp katalysiert werden gezeigt. Neben OdhI nannte das Zellteilung Protein FtsZ als Substrat PknA, PknB und PknL sowie der Phosphatase Ppp, was auf eine Rolle dieser Proteine in Zellteilung.

Genetische und biochemische Analyse der die Serin/Threonin-Protein Kinasen PknA, PknB, PknG und PknL von Corynebacterium Glutamicum: Beweise f&uuml;r nicht-Wesentlichkeit und Phosphorylierung von OdhI und FtsZ durch mehrere Kinasen.

Abbiamo precedentemente dimostrato che il 2-ossoglutarato deidrogenasi inibitore della proteina OdhI di Corynebacterium glutamicum &egrave; fosforilata da PknG a Thr14, ma che anche altre serina/treonina chinasi di proteina (STPKs) possono fosforilare OdhI. Per identificare questi, un set di tre single (DeltapknA, DeltapknB, DeltapknL), sono stati costruiti cinque doppie (DeltapknAG, DeltapknAL, DeltapknBG, DeltapknBL, DeltapknLG) e due mutanti di delezione triplo (DeltapknALG, DeltapknBLG). L&#39;esistenza di questi mutanti dimostra che non sono essenziali in c. glutamicum PknA, PknB, PknG e PknL. Analisi dello stato di fosforilazione OdhI in ceppi mutanti ha rivelato che tutti i quattro STPKs pu&ograve; contribuire a OdhI fosforilazione, con PknG essendo quella pi&ugrave; importante. Solo mutanti in cui &egrave; stato eliminato pknG ha mostrato un&#39;inibizione della crescita forte su piastre di agar contenente la glutammina come fonte di carbonio e azoto. Thr14 e Thr15 di OdhI sono stati indicati per essere fosforilato in vivo, singolarmente o contemporaneamente, e prova per fino a due siti di fosforilazione supplementare &egrave; stato ottenuto. Defosforilazione di OdhI &egrave; stato indicato per essere catalizzato dalla fosfatasi fosfo-Ser/Thr proteine Ppp. Oltre a OdhI, la divisione cellulare della proteina FtsZ &egrave; stata identificata come substrato di PknA, PknB e PknL e di fosfatasi Ppp, suggerendo un ruolo di queste proteine nella divisione cellulare.

Analisi genetica e biochimica di serina/treonina proteina chinasi PknA, PknB, PknG e PknL di Corynebacterium glutamicum: prova per non-essenzialit&agrave; e per la fosforilazione di OdhI e FtsZ da chinasi multiple.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x30B3;&#x30EA;&#x30CD;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#xB7;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30AB;&#x30E0;&#x306E;2  - &#x30AA;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30EB;&#x9178;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;OdhI&#x304C;Thr14&#x3067;PknG&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;STPKs&#xFF09;&#x306F;OdhI&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;3&#x3064;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#xFF08;DeltapknA&#x3001;DeltapknB&#x3001;DeltapknL&#xFF09;&#x3001;5&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;&#xFF08;DeltapknAG&#x3001;DeltapknAL&#x3001;DeltapknBG&#x3001;DeltapknBL&#x3001;DeltapknLG&#xFF09;&#x3068;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x4E09;&#x91CD;&#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;DeltapknALG&#x3001;DeltapknBLG&#xFF09;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;PknA&#x3001;PknB&#x3001;PknG&#x3068;PknL&#x306F;&#x3001;C.&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30AB;&#x30E0;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x3067;OdhI&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;4&#x3064;&#x306E;STPKs&#x304C;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;PknG&#x3067;&#x3001;OdhI&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; pknG&#x304C;&#x524A;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x70AD;&#x7D20;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7A92;&#x7D20;&#x6E90;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x5BD2;&#x5929;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x4E0A;&#x3067;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x6210;&#x9577;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; OdhI&#x306E;Thr14&#x3068;Thr15&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x6700;&#x5927;2&#x3064;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3078;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002; OdhI&#x306E;&#x8131;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;phospho-Ser/Thr&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;PPP&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E6;&#x5A92;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; OdhI&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;FtsZ&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;PknA&#x3001;PknB&#x3068;PknL&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;PPP&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;

&#x30B3;&#x30EA;&#x30CD;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#xB7;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30AB;&#x30E0;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PknA&#x3001;PknB&#x3001;PknG&#x3068;PknL&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#xFF1A;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x975E;&#x672C;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;OdhI&#x3068;FtsZ&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;

&#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF8; 2 oxoglutarate &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Corynebacterium OdhI glutamicum PknG Thr14&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphorylated &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8; &#xB610;&#xD55C; &#xCD94;&#xAC00; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases (STPKs) Odhi&#xC744; phosphorylate &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; 3 &#xB2E8; (DeltapknA, DeltapknB, DeltapknL)&#xC758; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; 5 &#xAC1C;&#xC758; &#xB354;&#xBE14; (DeltapknAG, DeltapknAL, DeltapknBG, DeltapknBL, DeltapknLG)&#xC640; &#xB450; &#xBA85;&#xC758; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (DeltapknALG, DeltapknBLG) &#xAC74;&#xC124; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; PknA, PknB, PknG &#xBC0F; PknL C. glutamicum&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC5D0; OdhI &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB418; &#xACE0; Pkng&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBAA8;&#xB450; 4 &#xAC1C;&#xC758; STPKs OdhI &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. PknG &#xC0AD;&#xC81C; &#xB41C; &#xBBA4;&#xD134;&#xD2B8;&#xB9CC; &#xD0C4;&#xC18C;&#xC640; &#xC9C8;&#xC18C; &#xADFC;&#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0C0;&#xBBFC;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD55C; &#xCC9C; &#xBC30;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. Thr14 &#xBC0F; thr15&#xC758; Odhi&#xC744; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0;, vivo&#xC5D0;&#xC11C;, phosphorylated &#xC218; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xCD5C;&#xB300; 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC5BB;&#xC740;. Dephosphorylation Odhi&#xC758; &#xC5EC; &#xC778;-Ser/Thr &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; Ppp catalysed &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. OdhI, &#xC678; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Ftsz&#xB294; PknA, PknB &#xBC0F; Pknl&#xC640; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; Ppp&#xC758; &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases Corynebacterium PknL, PknG, PknB, PknA glutamicum&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xACFC; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D;: &#xC99D;&#xAC70; &#xC544;&#xB2CC; &#xBCF8;&#xC131; &#xBC0F; &#xC5EC;&#xB7EC; kinases &#xC5EC; OdhI Ftsz&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;.

Anteriormente puso de manifiesto que el 2-oxoglutarato deshidrogenasa inhibidor de la prote&#xED;na OdhI de Corynebacterium glutamicum es fosforilada por PknG en Thr14, sino que tambi&#xE9;n serina adicional / treonina cinasas de prote&#xED;nas (STPKs) puede fosforilar OdhI. Para identificar a estos, un conjunto de tres simple (DeltapknA, DeltapknB, DeltapknL), doble cinco (DeltapknAG, DeltapknAL, DeltapknBG, DeltapknBL, DeltapknLG) y dos triples mutantes de deleci&#xF3;n (DeltapknALG, DeltapknBLG) fueron construidos. La existencia de estos mutantes muestra que PknA, PknB, PknG y PknL no son esenciales en C. glutamicum. An&#xE1;lisis del estado de fosforilaci&#xF3;n OdhI en las cepas mutantes revel&#xF3; que todos los cuatro STPKs pueden contribuir a la fosforilaci&#xF3;n OdhI, con PknG siendo el m&#xE1;s importante. S&#xF3;lo mutantes en los que se ha eliminado pknG mostraron una inhibici&#xF3;n del crecimiento fuerte en placas de agar que contienen glutamina como fuente de carbono y nitr&#xF3;geno. Thr14 y Thr15 de OdhI, se mostr&#xF3; a ser fosforilados in vivo, ya sea individualmente o de forma simult&#xE1;nea, y la evidencia para un m&#xE1;ximo de dos sitios de fosforilaci&#xF3;n adicionales se obtuvo. Desfosforilaci&#xF3;n de OdhI ha demostrado ser catalizada por la phospho-Ser/Thr prote&#xED;nas fosfatasa PPP. Adem&#xE1;s OdhI, la divisi&#xF3;n celular FtsZ prote&#xED;na fue identificada como sustrato de PknA, PknB y PknL y del PPP fosfatasa, lo que sugiere un papel de estas prote&#xED;nas en la divisi&#xF3;n celular.

An&#xE1;lisis Gen&#xE9;ticos y Bioqu&#xED;micos de la serina / treonina prote&#xED;na quinasas PknA, PknB, PknG y PknL de Corynebacterium glutamicum: La evidencia de su car&#xE1;cter no esencial y de la fosforilaci&#xF3;n de OdhI y FtsZ por m&#xFA;ltiples quinasas

&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x4FEE;&#x6539;&#x4E86;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x591A;&#x91CD;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x5927;&#x610F;&#x4E49;&#x3002;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x662F;&#x771F;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x666E;&#x904D;&#x73B0;&#x8C61;&#x3002;&#x800C; O-&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E2D;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x4FA7;&#x94FE;&#x4E0A;&#x662F;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x7684;&#x5E76;&#x6709;&#x4E86;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5C31;&#x6211;&#x4EEC;&#x6240;&#x77E5;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x7F9F;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x4EE5;&#x524D;&#x5C1A;&#x672A;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;&#x5728;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#xFF0C;O phosphohydroxyproline &#xFF08;Hyp(P)) &#x662F; proteinogenic &#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x3002;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684; Hyp(P) &#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210;&#x7F9F;&#x812F;&#x6C28;&#x9178; (P)-&#x7279;&#x5B9A;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A; Hyp(P) &#x4E2D;&#x5404;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7535;&#x55B7;&#x96FE;&#x7535;&#x79BB;&#x4E32;&#x8054;&#x8D28;&#x8C31;&#x7279;&#x70B9; Hyp(P) &#x86CB;&#x767D; &alpha;-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; A &#x4E2D;&#x7684;&#x987A;&#x5E8F;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6E05;&#x695A;&#x5730;&#x8868;&#x660E;&#x7F9F;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x968F;&#x540E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; &alpha;-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; A &#x773C;&#x4E2D;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x810F;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x3002;

O phosphohydroxyproline {&#x5B57;&#x6BCD;} &#x5927;&#x9F20;&#x8868;&#x5F81;-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; A.

Post-translational modifications have major importance for the structure and function of a multiplicity of proteins. Phosphorylation is a widespread phenomenon among eukaryotic proteins. Whereas O-phosphorylation on the side chains of serine, threonine, and tyrosine in proteins is well known and has been studied extensively, to our knowledge the endogenous phosphorylation of hydroxyproline has not previously been reported. In the present work, we provide evidence for the first time that O-phosphohydroxyproline (Hyp(P)) is a proteinogenic amino acid. To detect Hyp(P) in proteins we generated a Hyp(P)-specific polyclonal antibody. We could identify Hyp(P) in various proteins by Western blot analysis, and we characterized the sequence position of Hyp(P) in the protein Î±-crystallin A by electrospray ionization-tandem mass spectrometry. Our experiments clearly demonstrate hydroxylation and subsequent phosphorylation of a proline residue in Î±-crystallin A in the eye as well as in heart tissue of rat.

Characterization of O-phosphohydroxyproline in rat {alpha}-crystallin A.

Modifications post-traductionnelles ont une importance majeure pour la structure et la fonction d&#x26;#39;une multiplicit&#xE9; de prot&#xE9;ines. La phosphorylation est un ph&#xE9;nom&#xE8;ne largement r&#xE9;pandu parmi les prot&#xE9;ines eucaryotes. Alors que O-phosphorylation sur les cha&#xEE;nes lat&#xE9;rales de la s&#xE9;rine, la thr&#xE9;onine, et la tyrosine dans les prot&#xE9;ines est bien connue et a &#xE9;t&#xE9; largement &#xE9;tudi&#xE9;, &#xE0; notre connaissance la phosphorylation endog&#xE8;ne de l&#x26;#39;hydroxyproline n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; signal&#xE9;e auparavant. Dans le pr&#xE9;sent travail, nous fournissons des preuves pour la premi&#xE8;re fois que l&#x26;#39;O-phosphohydroxyproline (Hyp (P)) est un acide amin&#xE9; prot&#xE9;inog&#xE9;nique. &#xC0; d&#xE9;tecter Hyp (P) dans les prot&#xE9;ines on produit un Hyp (P) sp&#xE9;cifique anticorps polyclonal. Nous avons pu identifier Hyp (P) dans diverses prot&#xE9;ines par Western blot, et nous avons caract&#xE9;ris&#xE9; la position de la s&#xE9;quence de Hyp (P) dans la prot&#xE9;ine &#x3B1;-crystalline Une spectrom&#xE9;trie de masse &#xE0; ionisation par &#xE9;lectrospray en tandem. Nos exp&#xE9;riences d&#xE9;montrent clairement l&#x26;#39;hydroxylation et la phosphorylation subs&#xE9;quente d&#x26;#39;un r&#xE9;sidu de proline dans &#x3B1;-crystalline A l&#x26;#39;&#x153;il, ainsi que dans le tissu cardiaque de rat.

Caract&#xE9;risation de la O-phosphohydroxyproline dans Rat {alpha}-crystalline Une

&Uuml;bersetzungs&auml;nderungen haben gro&szlig;en Bedeutung f&uuml;r die Struktur und Funktion einer Vielzahl von Proteinen. Phosphorylierung ist ein weit verbreitetes Ph&auml;nomen unter den eukaryotic Proteine. W&auml;hrend O-Phosphorylierung auf die Seitenketten von Serin, Threonin und Tyrosin in Proteinen bekannt ist und wurde ausgiebig untersucht, ist unseres Wissens der endogenen Phosphorylierung von Hydroxyprolin nicht zuvor berichtet worden. In der vorliegenden Arbeit bieten wir Beweise f&uuml;r das erste Mal dass O-Phosphohydroxyproline (Hyp(P)) ist eine proteinogene Aminos&auml;ure. Hyp(P) in Proteine erkennen wir generiert ein Hyp (P)-spezifische polyklonale Antik&ouml;rper. Wir Hyp(P) in verschiedenen Proteinen von Western-Blot-Analyse identifizieren konnte und wir die Position der Sequenz des Hyp(P) in der &alpha;-Crystallin Protein durch Elektrospray-Ionisation-Tandem-Massenspektrometrie charakterisiert. Unsere Experimente zeigen deutlich die Hydroxylierung und anschlie&szlig;ende Phosphorylierung von Prolin R&uuml;ckst&auml;nde in der &alpha;-Crystallin A im Auge sowie im Herzgewebe Ratte.

Charakterisierung von O-Phosphohydroxyproline in Ratte {Alpha}-Crystallin A.

Traslazionali hanno grande importanza per la struttura e la funzione di una molteplicit&agrave; di proteine. La fosforilazione &egrave; un fenomeno molto diffuso tra le proteine eucariotiche. Considerando che O-fosforilazione sulle catene laterali di Serina, treonina e tirosina di proteine &egrave; ben nota ed &egrave; stata studiata approfonditamente, a nostra conoscenza la fosforilazione endogena di idrossiprolina non &egrave; precedentemente stata segnalata. Nel presente lavoro, forniamo prove per la prima volta che O-phosphohydroxyproline (Hyp(P)) &egrave; un amminoacido proteinogenici. Per rilevare le Hyp(P) in proteine abbiamo generato un Hyp (P)-anticorpo policlonale specifico. Noi potremmo identificare Hyp(P) in varie proteine mediante analisi Western blot, e ci caratterizza la posizione di sequenza di Hyp(P) nella proteina &alpha;-crystallin A spettrometria di massa tandem ionizzazione elettrospray. Nostri esperimenti dimostrano chiaramente idrossilazione e successiva fosforilazione di un residuo di prolina nella &alpha;-crystallin A negli occhi, cos&igrave; come nel tessuto cardiaco di ratto.

Caratterizzazione di O-phosphohydroxyproline nel ratto {alpha}-crystallin A.

&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x5E83;&#x307E;&#x3063;&#x305F;&#x73FE;&#x8C61;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x306B;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5074;&#x9396;&#x306B;O-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;&#x3088;&#x304F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x5E83;&#x304F;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;O-phosphohydroxyproline&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;Hyp&#xFF08;P&#xFF09;&#xFF09;&#x306F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x69CB;&#x6210;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;Hyp&#x3092;&#xFF08;P&#xFF09;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Hyp&#x3092;&#xFF08;P&#xFF09;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306F;&#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;Hyp&#x3092;&#xFF08;P&#xFF09;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3B1;-&#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;Hyp&#x3092;&#xFF08;P&#xFF09;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x3001;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x3B1;-&#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x76EE;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7D44;&#x7E54;&#x4E2D;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;O-phosphohydroxyproline&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3B1;-&#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;

&#xD3EC;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC0C1; &#xC218;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xC9C4; &#xD575; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xD37C;&#xC9C4; &#xD604;&#xC0C1;&#xC774; &#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74; O-&#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;, &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778;&#xC5D0; &#xC798; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC2DD; &#xD558;&#xC774;&#xB4DC;&#xC758; &#xC0DD; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC70; &#xADF8; O phosphohydroxyproline&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; (Hyp(P)) proteinogenic &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; hyp(p)&#xC744; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; Hyp (P) &#xC0DD;&#xC131;-&#xD2B9;&#xC815; polyclonal &#xD56D; &#xCCB4;. &#xC11C;&#xCABD; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; hyp(p)&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBD84;&#xBB34; &#xC774;&#xC628;&#xD654; &#xD0E0;&#xB364; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &alpha;-crystallin A&#xC5D0;&#xC11C; hyp(p)&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8; hydroxylation&#xC640; &alpha;-crystallin a &#xB208; &#xBB3C;&#xB860; &#xC950;&#xC758; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xD6C4;&#xC18D; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC950; {&#xC54C;&#xD30C;}&#xC5D0;&#xC11C; O-phosphohydroxyproline&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;-crystallin 1.

Post-translacional modificaciones tienen gran importancia para la estructura y funci&#xF3;n de una multiplicidad de prote&#xED;nas. La fosforilaci&#xF3;n es un fen&#xF3;meno generalizado entre las prote&#xED;nas eucariotas. Considerando O-fosforilaci&#xF3;n en las cadenas laterales de serina, treonina y tirosina en prote&#xED;nas es bien conocida y ha sido estudiada extensamente, a nuestro conocimiento la fosforilaci&#xF3;n end&#xF3;gena de hidroxiprolina no ha sido previamente reportado. En el presente trabajo, nos proporcionan la prueba por primera vez que O-phosphohydroxyproline (Hyp (P)) es un amino&#xE1;cido proteinogenic. Para detectar Hyp (P) en las prote&#xED;nas que genera una Hyp (P)-anticuerpo espec&#xED;fico policlonal. Podr&#xED;amos identificar Hyp (P) en varias prote&#xED;nas por Western blot, y que caracteriza la posici&#xF3;n de la secuencia de Hyp (P) en la prote&#xED;na &#x3B1;-cristalina A por ionizaci&#xF3;n electrospray-espectrometr&#xED;a de masas. Nuestros experimentos demuestran claramente hidroxilaci&#xF3;n y posterior fosforilaci&#xF3;n de un residuo de prolina en &#x3B1;-cristalina A en el ojo, as&#xED; como en el tejido del coraz&#xF3;n de rata.

Caracterizaci&#xF3;n de la O-phosphohydroxyproline Rat {alpha}-cristalina A

&#x4E73;&#x9178;&#x94FE;&#x7403;&#x83CC;&#x7D20;&#x662F;&#x6297;&#x83CC;&#x80BD;&#x7684;&#x4EA7;&#x751F;&#x548C;&#x5206;&#x6CCC;&#x51E0;&#x4E2A; L.&#x4E73;&#x7403;&#x83CC;&#x83CC;&#x682A;&#x7684;&#x662F;&#x5177;&#x4F53;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5BF9;&#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9633;&#x6027;&#x83CC;&#x3002;&#x5728;&#x4EE5;&#x5F80;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E73;&#x9178;&#x94FE;&#x7403;&#x83CC;&#x7D20;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728;&#x4F4E; ph &#x503C;&#x96C7;&#x7528;&#x4F7F;&#x7528; 1 M &#x6C2F;&#x5316;&#x94A0;&#x5355;&#x6B65;&#x6D17;&#x8131;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x51C0;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x51C0;&#x5316;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E94;&#x6B65;&#x6C2F;&#x5316;&#x94A0;&#x6D17;&#x8131;&#x8FDB;&#x884C;&#x6E05;&#x9664;&#x6C61;&#x67D3;&#x7269;&#x3002;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x80BD;&#x662F;&#x6CA1;&#x6709;&#x6742;&#x8D28;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x9AD8;&#x6740;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x80BD;&#x654F;&#x611F; L.&#x4E73;&#x7403;&#x83CC;&#x83CC;&#x682A; NZ9000 &#x53CD;&#x5BF9;&#x3002;&#x7EAF;&#x5316;&#x4E73;&#x9178;&#x94FE;&#x7403;&#x83CC;&#x5C55;&#x54C1;&#x7684; ~ 3 IC(50) nM&#xFF0C;&#x5373;&#x500D;&#x6BD4;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x6B65;&#x6D17;&#x8131;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x80BD;&#x3002;

&#x9AD8;&#x6D3B;&#x6027;&#x80BD;&#x7684;&#x5BB9;&#x6613;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x7EAF;&#x5316;&#x3002;

Nisin is an antimicrobial peptide produced and secreted by several L. lactis strains and is specifically active against Gram-positive bacteria. In previous studies, nisin was purified via cation exchange chromatography at low pH employing a single-step elution using 1â€‰M NaCl. Here, we describe an optimized purification protocol using a five-step NaCl elution to remove contaminants. The obtained nisin is devoid of impurities and shows high bactericidal activity against the nisin-sensitive L. lactis strain NZ9000. Purified nisin exhibits an IC(50) of ~3â€‰nM, which is a tenfold improvement as compared to nisin obtained via the one-step elution procedure.

Easy and rapid purification of highly active nisin.

La nisine est un peptide antimicrobien produite et s&#xE9;cr&#xE9;t&#xE9;e par plusieurs souches de L. lactis et est sp&#xE9;cifiquement actif contre les bact&#xE9;ries Gram-positives. Dans des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures, la nisine a &#xE9;t&#xE9; purifi&#xE9; par chromatographie d&#x26;#39;&#xE9;change cationique &#xE0; pH faible employant une &#xE9;lution en une seule &#xE9;tape en utilisant 1 M de NaCl. Ici, nous d&#xE9;crivons un protocole de purification optimis&#xE9; en utilisant une &#xE9;lution en cinq &#xE9;tapes de NaCl pour &#xE9;liminer les contaminants. La nisine obtenu est exempt d&#x26;#39;impuret&#xE9;s et montre une forte activit&#xE9; bact&#xE9;ricide contre la souche sensible nisine de L. lactis NZ9000. Purifi&#xE9;e nisine pr&#xE9;sente une CI (50) de ~ 3 nM, qui est une am&#xE9;lioration dix fois par rapport &#xE0; la nisine obtenu par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire du proc&#xE9;d&#xE9; en une &#xE9;tape d&#x26;#39;&#xE9;lution.

Purification facile et rapide de la nisine hautement actif

Nisin ist eine antimikrobielle Peptide produziert und abgesondert durch mehrere L. Lactis St&auml;mme und engagiert sich speziell gegen Gram-positive Bakterien. In den vorhergehenden Studien wurde &uuml;ber Kat-Chromatographie bei niedrigen pH besch&auml;ftigt einen Einzelschritt-Elution mit 1 M NaCl Nisin gereinigt. Hier beschreiben wir eine optimierte Reinigung-Protokoll mit ein f&uuml;nf-Stufen-NaCl-Elution um Verunreinigungen zu entfernen. Die erhaltene Nisin ist frei von Verunreinigungen und hohen bakteriziden Aktivit&auml;t gegen das Nisin-Sensitive L. Lactis Stamm NZ9000 zeigt. Gereinigte Nisin Exponate ein IC (50) ~ 3 nM, das ist eine zehnfache Verbesserung verglichen mit Nisin &uuml;ber die einstufigen Elution Verfahren gewonnen.

Einfache und schnelle Reinigung der hochaktiven Nisin.

La nisina &egrave; un peptide antimicrobico prodotto e secreto da diversi ceppi di L. lactis e specificatamente attivo contro i batteri Gram-positivi. In studi precedenti, la nisina &egrave; stata purificata mediante cromatografia a scambio cationico a basso pH impiegando un unico passaggio eluizione utilizzando 1 M NaCl. Qui, descriviamo un protocollo di purificazione ottimizzata utilizzando un&#39;eluizione di NaCl cinque fasi per rimuovere i contaminanti. il nisina ottenuta &egrave; privo di impurit&agrave; e mostra un&#39;elevata attivit&agrave; battericida contro il ceppo sensibile nisina L. lactis NZ9000. Purificato nisina esibisce un IC(50) di ~ 3 nM, che &egrave; un miglioramento decuplicato rispetto a nisina ottenuto mediante il procedimento di eluizione One-Step.

Facile e rapida purificazione della nisina altamente attiva.

&#x30CA;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;L.&#x30E9;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30B9;&#x682A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7523;&#x751F;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5206;&#x6CCC;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6297;&#x83CC;&#x6027;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x967D;&#x6027;&#x83CC;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x7279;&#x306B;&#x6709;&#x52B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30CA;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;1 M NaCl&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x6EB6;&#x51FA;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x4F4E;pH&#x3067;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6C5A;&#x67D3;&#x7269;&#x8CEA;&#x3092;&#x9664;&#x53BB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;5&#x3064;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;NaCl&#x306E;&#x6EB6;&#x51FA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7CBE;&#x88FD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30CA;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x4E0D;&#x7D14;&#x7269;&#x3092;&#x542B;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x30CA;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x654F;&#x611F;&#x306A;L.&#x30E9;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30B9;&#x682A;NZ9000&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x9AD8;&#x3044;&#x6BBA;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30CA;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30EF;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x6EB6;&#x51FA;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30CA;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x500D;&#x306B;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x301C;3 nM&#x306E;IC&#xFF08;50&#xFF09;&#x3092;&#x3001;&#x793A;&#x3059;&#x3002;

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Nisin&#xB294; &#xD56D;&#xADE0; &#xC131; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xC5EC;&#xB7EC; L. lactis &#xAE34;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84; &#xBE44; &#xB418;&#xC5B4; &#xD2B9;&#xD788; &#xADF8;&#xB78C; &#xC591;&#xC131; &#xC138;&#xADE0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD65C;&#xC131;. &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; nisin 1 M Nacl&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC529; &#xCC28;&#xC785;&#xC744; &#xCC44;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB0AE;&#xC740; Ph&#xC5D0;&#xC11C; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC815;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 5 &#xB2E8;&#xACC4; NaCl &#xCC28;&#xC785;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC624;&#xC5FC; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB294; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xC815;&#xD654; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5BB;&#xC740; nisin &#xBD88;&#xC21C;&#xBB3C; &#xC5C6;&#xB294; &#xBC0F; nisin &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; L. lactis &#xBCC0;&#xD615; nz9000&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xD654; nisin &#xC804;&#xC2DC; ~ 3 IC(50) nM, 1 &#xB2E8;&#xACC4; &#xCC28;&#xC785; &#xC808;&#xCC28;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC5BB;&#xC740; nisin&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; 10 &#xBC30; &#xAC1C;&#xC120; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xB192;&#xC740; &#xD65C;&#xC131; nisin&#xC758; &#xAC04;&#xD3B8; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xD654;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La nisina es un p&#xE9;ptido antimicrobiano producido y secretado por varios cepas de L. lactis y est&#xE1; espec&#xED;ficamente activo contra bacterias Gram-positivas. En estudios previos, la nisina se purific&#xF3; mediante cromatograf&#xED;a de intercambio cati&#xF3;nico a un pH bajo empleando una eluci&#xF3;n de un solo paso utilizando 1 M de NaCl. A continuaci&#xF3;n, describimos un protocolo de purificaci&#xF3;n optimizado utilizando una eluci&#xF3;n de NaCl de cinco pasos para eliminar los contaminantes. La nisina obtenida est&#xE1; desprovisto de impurezas y muestra alta actividad bactericida contra la cepa sensible a la nisina L. lactis NZ9000. Purificada nisina exhibe un IC (50) de ~ 3 nM, que es una mejora importante en comparaci&#xF3;n a la nisina obtenido mediante el procedimiento de eluci&#xF3;n de un solo paso.

Purificaci&#xF3;n f&#xE1;cil y r&#xE1;pida de la nisina altamente activa

&#x6839;&#x636E;&#x4E16;&#x754C;&#x53CD;&#x5174;&#x594B;&#x5242;&#x673A;&#x6784; (WADA) &#x53CD;&#x5174;&#x594B;&#x5242;&#x6CD5; &#x300B; &#x6761;&#x6B3E;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7528;&#x4E8E;&#x52A0;&#x901F;&#x6108;&#x5408;&#x7684;&#x8FD0;&#x52A8;&#x635F;&#x4F24;&#x3002;&#x4F5C;&#x5F0A;&#x7684;&#x8FD0;&#x52A8;&#x5458;&#x6709;&#x9ED1;&#x5E02;&#x7528;&#x4F5C;&#x6027;&#x80FD;&#x589E;&#x5F3A;&#x7269;&#x8D28;&#x7684;&#x6765;&#x6E90;&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#x6B63;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x7ECF;&#x5E38;&#x63D0;&#x4F9B; &mdash; &mdash; &#x5C3D;&#x7BA1;&#x4E0E;&#x672A;&#x7ECF;&#x6279;&#x51C6;&#x836F;&#x54C1;&#x7BA1;&#x7406;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x5065;&#x5EB7;&#x98CE;&#x9669;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x5FB7;&#x56FD;&#x6D77;&#x5173;&#x6CA1;&#x6536;&#x8D34;&#x7684;&#x9ED1;&#x5E02;&#x573A;&#x4EA7;&#x54C1;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x65B0;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;&#x79F0;&#x4E3A;&#x78B1;&#x6027;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; 1/FGF-1) &#x4E0E;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x4FEE;&#x590D;&#x4E0E;&#x518D;&#x751F;&#x53D7;&#x635F;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x9274;&#x5B9A;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E0E;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x805A;&#x4E19;&#x70EF;&#x9170;&#x80FA;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3; (SDS-&#x548C; 2D &#x9875;)&#x3001; &#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x6D88;&#x89E3;&#x3001; &#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x7EB3;&#x7C73;&#x6DB2;&#x4F53;&#x8272;&#x8C31;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;/&#x9AD8;&#x7CBE;&#x5EA6; Orbitrap &#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x3002;&#x7535;&#x6CF3;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x5173;&#x4E8E;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4EBA;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x548C;&#x9ED1;&#x5E02; FGF-1 &#x7565;&#x6709;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x51DD;&#x80F6;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#xFF0C;&#x6709;&#x4EBA;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x622A;&#x65AD;&#x6216;&#x4FEE;&#x6539;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D; N-&#x5DF4;&#x58EB;&#x603B;&#x7AD9;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x836F;&#x7269;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x672A;&#x7ECF;&#x4E34;&#x5E8A;&#x6279;&#x51C6;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8F7B;&#x6613;&#x4ECE;&#x9ED1;&#x5E02;&#x4EA4;&#x6613;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x987E;&#x6F5C;&#x5728;&#x5371;&#x9669;&#x540E;&#x679C;&#x7684;&#x6D88;&#x8D39;&#x8005;&#xFF0C;&#x5B83;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x79EF;&#x6781;&#x4E3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x548C;&#x9884;&#x9632;&#x5174;&#x594B;&#x5242;&#x63A7;&#x5236;&#x529E;&#x6CD5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x751F;&#x7406;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4ECE;&#x5065;&#x5EB7;&#x4EBA;&#x8840;&#x6DB2;&#x548C;&#x5C3F;&#x6DB2;&#x6837;&#x672C;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x53D1;&#x73B0;&#x53CA;&#x5230;&#x4F4E;&#x4E8E; 28 pg/ml &#x8303;&#x56F4;&#x5C3F;&#xFF0C;&#x8840;&#x6D46;&#x4E2D;&#x6CA1;&#x6709;&#x53EF;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7684; FGF-1 &#x65F6;&#x3002;

&#x78B1;&#x6027;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; 1 (FGF-1&#xFF09; &#x4E2D;&#x8BC6;&#x522B;&#x9ED1;&#x5E02;&#x573A;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;

The use of growth factors for accelerated healing of sports injuries is restricted under the terms of the World Anti-Doping Agency (WADA) anti-doping code. Cheating athletes have used the black market as a source of performance-enhancing substances. Drugs that currently undergo clinical trials are frequently offered--despite the unknown health risks associated with the administration of unapproved pharmaceuticals. Recently, a new growth factor (referred to as fibroblast growth factor 1/FGF-1) with known effects on the repair and regeneration of damaged tissue was detected in an unlabelled black market product confiscated by the German customs. The identification of the protein was achieved by one- and two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE and 2D-PAGE), different proteolytic digestions, immunological methods and nano-liquid chromatography high-resolution/high-accuracy Orbitrap mass spectrometry. The SDS-PAGE analysis revealed slight differences concerning the molecular weight of recombinant human and black market FGF-1. Using in-gel proteolysis, a truncation or modification located at the N-terminus of the protein was suggested. These findings demonstrate that drug candidates without clinical approval can be readily obtained from the black market, regardless of potential dangerous consequences for the consumer, which corroborates the necessity of proactive and preventive doping control approaches. In that regard, physiological concentrations of blood and urine specimens collected from healthy individuals were analyzed and were found to range below 28 pg/ml in urine, while there was no detectable FGF-1 in plasma.

Identification of fibroblast growth factor 1 (FGF-1) in a black market product.

L&#x26;#39;utilisation de facteurs de croissance pour acc&#xE9;l&#xE9;rer la gu&#xE9;rison des blessures sportives est limit&#xE9;e aux termes de la World Anti-Doping Agency (AMA) code antidopage. Cheating athl&#xE8;tes ont utilis&#xE9; le march&#xE9; noir comme une source de substances am&#xE9;liorant la performance. Les m&#xE9;dicaments qui actuellement subissent les essais cliniques sont souvent offerts - en d&#xE9;pit des risques inconnus pour la sant&#xE9; associ&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;administration des produits pharmaceutiques non approuv&#xE9;s. R&#xE9;cemment, un facteur de croissance nouvelle (appel&#xE9;e facteur de croissance des fibroblastes 1/FGF-1) avec des effets connus sur la r&#xE9;paration et la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration des tissus endommag&#xE9;s a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9; dans un produit du march&#xE9; noir non marqu&#xE9; confisqu&#xE9;s par les douanes allemandes. L&#x26;#39;identification de la prot&#xE9;ine a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;e par &#xE9;lectrophor&#xE8;se sur gel &#xE0; une et deux dimensions de polyacrylamide (SDS-PAGE et 2D-PAGE), diff&#xE9;rentes digestions prot&#xE9;olytiques, des m&#xE9;thodes immunologiques et nano-liquide high-resolution/high-accuracy chromatographie de masse Orbitrap spectrom&#xE9;trie. L&#x26;#39;analyse par SDS-PAGE r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; de l&#xE9;g&#xE8;res diff&#xE9;rences concernant le poids mol&#xE9;culaire du recombinante humaine march&#xE9; et noir FGF-1. Utilisation dans un gel prot&#xE9;olyse, une troncature ou la modification situ&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N-terminale de la prot&#xE9;ine a &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9;. Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que les candidats m&#xE9;dicaments sans l&#x26;#39;approbation clinique peut &#xEA;tre facilement obtenu &#xE0; partir du march&#xE9; noir, quelle que soit les cons&#xE9;quences potentiellement dangereuses pour le consommateur, ce qui corrobore la n&#xE9;cessit&#xE9; de d&#xE9;marches proactives et pr&#xE9;ventives de contr&#xF4;le du dopage. &#xC0; cet &#xE9;gard, des concentrations physiologiques de sp&#xE9;cimens sang et d&#x26;#39;urine recueillis aupr&#xE8;s de sujets sains ont &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;s et ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s &#xE0; aller en dessous de 28 pg / ml dans les urines, alors qu&#x26;#39;il n&#x26;#39;y avait pas d&#xE9;tectable FGF-1 dans le plasma.

Identification des Fibroblast Growth Factor 1 (FGF-1) dans un produit du march&#xE9; noir

Der Einsatz von Wachstumsfaktoren f&uuml;r die beschleunigte Heilung von Sportverletzungen ist unter den Bedingungen der World Anti-Doping Agency (WADA)-Anti-doping-Code eingeschr&auml;nkt. Betrug Athleten haben dem Schwarzmarkt als leistungssteigernde Substanzen benutzt. Medikamente, die derzeit klinische Studien unterzogen werden h&auml;ufig angeboten--trotz der unbekannten Gesundheitsrisiken, die mit der Verwaltung von nicht zugelassenen Arzneimitteln. Vor kurzem wurde ein neuer Wachstumsfaktor (Fibroblasten-Wachstumsfaktor 1/FGF-1 genannt) mit den bekannten Auswirkungen auf die Reparatur und die Regeneration von besch&auml;digtem Gewebe in einem Schwarzmarkt-Produkt, das von der deutsche Zoll beschlagnahmt erkannt. Die Identifizierung des Proteins wurde durch ein- und zweidimensionale Polyacrylamidgelelektrophorese (SDS-PAGE und 2D-Seite), verschiedene proteolytische Verdauung, immunologische Methoden und Nano-Fl&uuml;ssig-Chromatographie high-resolution/hochpr&auml;zise Orbitrap Massenspektrometrie erzielt. Die SDS-PAGE-Analyse ergab leichte Unterschiede hinsichtlich der Molek&uuml;lmasse von rekombinantem menschlichen und Schwarzmarkt FGF-1. Mit in-Gel-Proteolyse, wurde eine K&uuml;rzung oder &Auml;nderung befindet sich im N-Terminus des Proteins vorgeschlagen. Diese Ergebnisse zeigen, dass Medikamentenkandidaten ohne klinische Zustimmung vom Schwarzmarkt, unabh&auml;ngig von m&ouml;glichen gef&auml;hrlichen Folgen f&uuml;r den Verbraucher, der die Notwendigkeit der proaktiven best&auml;tigt und vorbeugende doping Kontrolle Ans&auml;tze leicht abgerufen werden k&ouml;nnen. Insoweit physiologische Konzentrationen von Blut und Urin-Proben von gesunden Personen gesammelt wurden analysiert und erwiesen sich unterhalb 28 Pg/ml im Urin, zwar gab es keine nachweisbaren FGF-1 im Plasma.

Kennung des Fibroblasten-Wachstumsfaktor 1 (FGF-1) in einem Schwarzmarkt-Produkt.

L&#39;uso di fattori di crescita accelerata guarigione delle lesioni sportive &egrave; limitato a norma del codice mondiale Anti-Doping Agency (WADA) anti-doping. Barare atleti hanno usato il mercato nero come fonte di sostanze dopanti. Farmaci che attualmente sottoposti a studi clinici sono spesso offerti - nonostante lo sconosciuto salute rischi associati con la somministrazione di farmaci non approvati. Recentemente, un nuovo fattore di crescita (denominato come fattore di sviluppo del fibroblasto FGF-1/1) con effetti noti sulla riparazione e rigenerazione dei tessuti danneggiati &egrave; stato rilevato in un prodotto senza etichetta nero mercato confiscato dalla dogana tedesca. L&#39;identificazione della proteina &egrave; stato realizzato da one e two - dimensional gel di poliacrilammide elettroforesi (SDS-PAGE e 2D-PAGE), digestioni proteolitici differenti, metodi immunologici e nano-liquido cromatografia ad alta risoluzione e alta accuratezza Orbitrap spettrometria totale. L&#39;analisi SDS-PAGE ha rivelato lievi differenze riguardanti il peso molecolare di ricombinante umano e mercato nero FGF-1. Tramite proteolisi in gel, &egrave; stato suggerito un troncamento o modifica situato presso il N-terminale della proteina. Questi risultati dimostrano che candidati farmaci senza approvazione clinica possono essere facilmente ottenuti dal mercato nero, indipendentemente dalle possibili conseguenze pericolose per il consumatore, che corrobora la convinzione della necessit&agrave; di proattivo e preventivo controllo approcci il doping. A tale proposito, fisiologiche concentrazioni di campioni di sangue e delle urine raccolti da individui sani sono stati analizzati e sono stati trovati a gamma sotto 28 pg/ml nelle urine, mentre non ci fu nessun rilevabile FGF-1 nel plasma.

Identificazione del fattore di crescita dei fibroblasti 1 (FGF-1) in un prodotto di mercato nero.

&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C4;&#x50B7;&#x5BB3;&#x306E;&#x52A0;&#x901F;&#x6CBB;&#x7652;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x4E16;&#x754C;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#xB7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x69CB;&#xFF08;WADA&#xFF09;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#xB7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x898F;&#x7A0B;&#x306E;&#x6761;&#x9805;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0D;&#x6B63;&#x884C;&#x70BA;&#x306E;&#x9078;&#x624B;&#x304C;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x5411;&#x4E0A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x4F9B;&#x7D66;&#x6E90;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D6;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x85AC;&#x306F;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059; - &#x672A;&#x627F;&#x8A8D;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x306E;&#x6295;&#x4E0E;&#x306B;&#x4F34;&#x3046;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x5065;&#x5EB7;&#x30EA;&#x30B9;&#x30AF;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x640D;&#x50B7;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x518D;&#x751F;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;1/FGF-1&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30A4;&#x30C4;&#x306E;&#x7A0E;&#x95A2;&#x3067;&#x6CA1;&#x53CE;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6A19;&#x8B58;&#x306E;&#x95C7;&#x5E02;&#x5834;&#x88FD;&#x54C1;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;1&#x6B21;&#x5143;&#x3068;2&#x6B21;&#x5143;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#xFF08;SDS-PAGE&#x3084;2D-PAGE&#xFF09;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x6D88;&#x5316;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30CA;&#x30CE;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;high-resolution/high-accuracy&#x306E;Orbitrap&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; SDS-PAGE&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30D2;&#x30C8;&#x3068;&#x95C7;&#x5E02;&#x5834;FGF-1&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x82E5;&#x5E72;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B2;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5909;&#x66F4;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x627F;&#x8A8D;&#x3092;&#x5F97;&#x305A;&#x306B;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x5019;&#x88DC;&#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x4E88;&#x9632;&#x7684;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#xB7;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#xB7;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x6D88;&#x8CBB;&#x8005;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5371;&#x967A;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x3001;&#x95C7;&#x5E02;&#x5834;&#x304B;&#x3089;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x5F97;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x610F;&#x5473;&#x3067;&#x3001;&#x5065;&#x5E38;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x63A1;&#x53D6;&#x3057;&#x305F;&#x8840;&#x6DB2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5C3F;&#x691C;&#x4F53;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;&#x8840;&#x6F3F;&#x4E2D;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;FGF-1&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;&#x5C3F;&#x4E2D;&#x306E;28 pg / ml&#x3067;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x30D6;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x5546;&#x54C1;&#x306E;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;1&#xFF08;FGF-1&#xFF09;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;

&#xC2A4;&#xD3EC;&#xCE20; &#xBD80;&#xC0C1;&#xC758; &#xBE60;&#xB978; &#xCE58;&#xC720;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC740; &#xC138;&#xACC4; &#xBC18;&#xB3C4; &#xD551; &#xAE30;&#xAD6C; (WADA) &#xC548;&#xD2F0;&#xB3C4; &#xD551; &#xCF54;&#xB4DC;&#xC758; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xBD80;&#xC815; &#xC120;&#xC218; &#xC131;&#xB2A5; &#xAC15;&#xD654; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xC6D0;&#xCC9C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC554;&#xC2DC;&#xC7A5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC744; &#xBC1B;&#xC544;&#xC57C; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC740; &#xC2B9;&#xC778; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC758;&#xC57D;&#xD488;&#xC758; &#xAD00;&#xB9AC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xAC74;&#xAC15; &#xC0C1;&#xC758; &#xC704;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;-&#xC790;&#xC8FC; &#xC81C;&#xACF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC;, &#xB3C5;&#xC77C; &#xC138;&#xAD00;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC555;&#xC218; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC554;&#xC2DC;&#xC7A5; &#xC81C;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC190;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xD6A8;&#xACFC; (&#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; 1/FGF-1 &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD568;) &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC131;&#xC7A5; &#xC694;&#xC778; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD55C; &#xBC0F; &#xD22C; &#xCC28;&#xC6D0; polyacrylamide &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; (SDS &#xD398;&#xC774;&#xC9C0; &#xBC0F; 2D &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;), &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C;&#xD654;, &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC29;&#xBC95;&#xACFC; &#xB098;&#xB178; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;/&#xACE0;&#xC815;&#xBC00; Orbitrap &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. SDS &#xD398;&#xC774;&#xC9C0; &#xBD84;&#xC11D; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBD84;&#xC790;&#xB7C9; &#xBC0F; &#xC554;&#xC2DC;&#xC7A5; FGF-1&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xC57D;&#xAC04;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC5D0; &#xC824; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC798;&#xB77C;&#xB0B4;&#xAE30; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; N-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;&#xD55C; &#xC218;&#xC815; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2B9;&#xC778; &#xC5C6;&#xC774; &#xC57D;&#xBB3C; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC554;&#xC2DC;&#xC7A5; &#xC790;&#xB3D9; &#xAD00;&#xB9AC;&#xC758; &#xD544;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xB4B7;&#xBC1B;&#xCE68; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xBE44;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC704;&#xD5D8;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xC608;&#xBC29; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC811;&#xADFC;&#xB3C4; &#xD551;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7F0; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xAC1C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C; &#xD608;&#xC561;&#xACFC; &#xC18C;&#xBCC0; &#xACAC;&#xBCF8;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801;&#xC778; &#xB18D;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC9C0; FGF-1 &#xB3D9;&#xC548; &#xC18C;&#xBCC0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xB798; 28 pg/ml &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC2DD;&#xBCC4;&#xC758; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; 1 (FGF-1) &#xC554;&#xC2DC;&#xC7A5; &#xC81C;&#xD488;&#xC5D0;.

El uso de factores de crecimiento para acelerar la curaci&#xF3;n de las lesiones deportivas se limita bajo los t&#xE9;rminos de la World Anti-Doping Agency (WADA) c&#xF3;digo antidopaje. Los atletas de enga&#xF1;o han utilizado el mercado negro como fuente de sustancias para mejorar el rendimiento. Los medicamentos que actualmente se someten a los ensayos cl&#xED;nicos se ofrece con frecuencia - a pesar de los riesgos para la salud desconocidos asociados con la administraci&#xF3;n de f&#xE1;rmacos no aprobados. Recientemente, un nuevo factor de crecimiento (denominado factor de crecimiento de fibroblastos 1/FGF-1) con los efectos conocidos sobre la reparaci&#xF3;n y regeneraci&#xF3;n del tejido da&#xF1;ado se detect&#xF3; en un mercado de productos sin etiqueta negro confiscado por las aduanas alemanas. La identificaci&#xF3;n de la prote&#xED;na se logr&#xF3; mediante electroforesis en gel de uno y de dos dimensiones-poliacrilamida (SDS-PAGE y 2D-PAGE), diferentes digestiones proteol&#xED;ticas, m&#xE9;todos inmunol&#xF3;gicos y nano-l&#xED;quido high-resolution/high-accuracy cromatograf&#xED;a espectrometr&#xED;a de masas Orbitrap. El an&#xE1;lisis de SDS-PAGE revel&#xF3; ligeras diferencias relativas al peso molecular de recombinante humano y mercado negro FGF-1. Utilizando en gel prote&#xF3;lisis, un truncamiento o modificaci&#xF3;n situado en el extremo N-terminal de la prote&#xED;na se sugiri&#xF3;. Estos hallazgos demuestran que los candidatos de drogas sin la aprobaci&#xF3;n cl&#xED;nica se pueden obtener f&#xE1;cilmente en el mercado negro, a pesar de las posibles consecuencias peligrosas para el consumidor, lo que corrobora la necesidad de enfoques proactivos y preventivos de control de dopaje. A este respecto, las concentraciones fisiol&#xF3;gicas de las muestras de sangre y orina recogidas de individuos sanos se analizaron y se encontr&#xF3; que oscilan por debajo de 28 pg / ml en la orina, mientras que no hubo detectable FGF-1 en el plasma.

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Sabine Metzger

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