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Preparation and Culture of Rat Lens Epithelial Explants for Studying Terminal Differentiation

The anterior surface of the ocular lens is covered by a monolayer of epithelial cells, which proliferate in an annular zone underlying the ciliary body.  ...

National Eye Institute (NEI), National Institutes of Health (NIH)

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&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x9E21; betaB1-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

Transgenic mouse technology has been very valuable for the study of lens fiber cells since they can not be propagated in cell culture. The targeting of transgenes to the lens has traditionally been done with the alphaA-crystallin promoter. However, while lens-specific, transgenic lines made with the alphaA-crystallin promoter express the transgene at levels 100-300-fold lower than endogenous alphaA-crystallin. Here we propose an alternative, the chicken betaB1-crystallin promoter (-432/+30). Transgenic mice made with this promoter have successfully expressed CAT, d/n m-calpain, Weel, and betaB2-crystallin mRNA at levels comparable to the endogenous betaB1-crystallin gene and no eye abnormalities such as cataracts, have resulted. All of the transgenic lines made with the chicken betaB1-crystallin promoter have expressed the transgene in the lens fiber cells, and the best lines express at levels close to endogenous betaB1-crystallin. While RNA expression is very high, only moderate protein expression has been achieved, implying that the high protein expression of the crystallins is partially controlled at the level of translation. Thus, the chicken betaB1-crystallin promoter directs high level RNA expression to lens fiber cells, which may be especially useful for the expression of ribozyme and anti-sense RNAs in addition to ectopic proteins.

General utility of the chicken betaB1-crystallin promoter to drive protein expression in lens fiber cells of transgenic mice.

Technologie des souris transg&eacute;niques a &eacute;t&eacute; tr&egrave;s pr&eacute;cieuse pour l&#39;&eacute;tude des cellules fibre objectif puisqu&#39;ils ne peuvent pas se multiplier en culture cellulaire. Le ciblage des transg&egrave;nes &agrave; la lentille s&#39;effectue traditionnellement avec le promoteur alphaA-cristalline. Cependant, tout objectif sp&eacute;cifique, des lign&eacute;es transg&eacute;niques faites avec le promoteur alphaA-cristalline expriment du transg&egrave;ne au niveau 100 &agrave; 300 fois inf&eacute;rieur &agrave; alphaA-cristalline endog&egrave;ne. Le pr&eacute;sent article propose une solution de rechange, le promoteur betaB1-cristalline de poulet (-432 / + 30). Des souris transg&eacute;niques faite avec ce promoteur ont exprim&eacute; avec succ&egrave;s CAT, d/n m-calpain Weel et l&#39;ARNm betaB2-cristalline &agrave; des niveaux comparables &agrave; ceux du g&egrave;ne endog&egrave;ne betaB1-cristalline et aucune anomalie de l&#39;oeil comme la cataracte, ont donn&eacute; lieu. Toutes les lign&eacute;es transg&eacute;niques faites avec le promoteur betaB1-cristalline de poulet ont exprim&eacute; le transg&egrave;ne dans les cellules de fibre de lentille, et meilleures lignes expriment aux niveaux pr&egrave;s betaB1-cristalline endog&egrave;ne. Alors que l&#39;expression des RNA est tr&egrave;s &eacute;lev&eacute;e, expression des prot&eacute;ines mod&eacute;r&eacute; seulement ont &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e, ce qui implique que l&#39;expression de la haute teneur en prot&eacute;ines de la cristallins est partiellement contr&ocirc;l&eacute;e au niveau de la traduction. Ainsi, le promoteur betaB1-cristalline de poulet ordonne &agrave; haut niveau d&#39;expression de RNA &agrave; lentille fibre cellules, qui peut &ecirc;tre particuli&egrave;rement utile pour l&#39;expression des ribozymes et ARN antisens en plus des prot&eacute;ines ectopiques.

Utilit&eacute; g&eacute;n&eacute;rale du promoteur poulet betaB1-cristalline &agrave; l&#39;expression de la prot&eacute;ine en voiture dans les cellules de fibre de lentille de souris transg&eacute;niques.

Allgemeine N&#xFC;tzlichkeit des Huhns betaB1-Kristallin-Promotor zur Expression von Proteinen in Linsenfaser Zellen von transgenen M&#xE4;usen zu fahren.

Tecnologia mouse transgenici &egrave; stato molto preziosa per lo studio delle cellule di fibre lente poich&eacute; essi non possono essere propagati in coltura cellulare. Il targeting dei transgeni alla lente &egrave; stato fatto tradizionalmente con il promotore alphaA-crystallin. Tuttavia, mentre lenti specifiche, linee transgeniche fatte con il promotore alphaA-crystallin esprimono il transgene a livelli 100-300 volte inferiore alphaA-crystallin endogeno. Qui vi proponiamo un&#39;alternativa, il promotore di betaB1-crystallin pollo (-432 / + 30). Topi transgenici fatta con questo promotore con successo hanno espresso CAT, d/n m-calpaina, Weel e betaB2-crystallin mRNA a livelli comparabili per il gene endogeno betaB1-crystallin e senza anomalie oculari come cataratta, hanno portato. Tutte le linee transgeniche fatte con il promotore di betaB1-crystallin pollo hanno espresso il transgene nelle cellule di fibre lente, e le migliori linee express a livelli vicino betaB1-crystallin endogeno. Mentre l&#39;espressione del RNA &egrave; molto alta, solo l&#39;espressione della proteina moderata &egrave; stato raggiunto, implicando che l&#39;espressione di proteine ad alto del crystallins &egrave; parzialmente controllata a livello della traduzione. Cos&igrave;, il promotore di betaB1-crystallin pollo dirige ad alto livello di espressione di RNA a lente fibra cellule, che pu&ograve; essere particolarmente utile per l&#39;espressione del ribozima e RNAs antisenso oltre alle proteine ectopiche.

Utilit&agrave; generale del promotore betaB1-crystallin pollo di espressione della proteina in auto nelle cellule di fibra ottica di topi transgenici.

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&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30E6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x9D8F; betaB1 &#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAE30;&#xC220; &#xC774;&#xD6C4; &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0; &#xC804;&#xD30C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB80C;&#xC988;&#xC5D0; transgenes&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; alphaA crystallin &#xBAA8;&#xD130;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC644;&#xB8CC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB80C;&#xC988; &#xAD00;&#xB828; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB77C;&#xC778; alphaA crystallin &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xB85C; &#xB9CC;&#xB4E0; &#xB808;&#xBCA8; 100-300 &#xBC30;&#xC5D0;&#xC11C; transgene &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xC0DD; alphaA crystallin &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB0AE;&#xC740;. &#xB300;&#xC2E0;, &#xB2ED; betaB1 crystallin &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30; (-432 / + 30). &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950;&#xAC00;&#xC774; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xBA85;&#xD55C; &#xACE0;&#xC591;&#xC774;, d/n m calpain, Weel, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC0DD; betaB1 crystallin &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xBC31; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xB4F1; &#xB208; &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; &#xC5C6;&#xB294; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; betaB2 crystallin mRNA, &#xACB0;&#xACFC;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xB9CC;&#xB4E0;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB2ED; betaB1 crystallin &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9CC;&#xB4E0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB77C;&#xC778; &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720; &#xC140;&#xC5D0; transgene &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xB77C;&#xC778; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xC0DD; betaB1 crystallin&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC218;&#xC900;. RNA &#xC2DD;&#xC774; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB192;&#xC740; &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0;&#xB294; crystallins&#xC758; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31; &#xC2DD; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC554;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC801;&#xB2F9; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xB9CC; &#xB2EC;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xCE58;&#xD0A8; betaB1 crystallin &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xACE0;&#xB3C4;&#xC758; ribozyme &#xBC0F; &#xC18C;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; anti-sense Rnas&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC720;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; RNA &#xC2DD; &#xC9C0;&#xC2DC;.

&#xC77C;&#xBC18; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD; &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xCE58;&#xD0A8; betaB1 crystallin &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758;.

Tecnolog&iacute;a de rat&oacute;n transg&eacute;nico ha sido muy valiosa para el estudio de las c&eacute;lulas de fibra de la lente ya que no pueden ser propagados en cultivo celular. La focalizaci&oacute;n de los transgenes en el objetivo se ha hecho tradicionalmente con el promotor alphaA-crystallin. No obstante, mientras objetivo espec&iacute;ficos, l&iacute;neas transg&eacute;nicas con el promotor alphaA-crystallin expresan el transg&eacute;n en niveles 100-300-pliegue inferior alphaA-crystallin end&oacute;geno. Aqu&iacute; proponemos una alternativa, el promotor de betaB1-crystallin de pollo (-432 / + 30). Ratones transg&eacute;nicos hecho con este promotor con &eacute;xito han expresado CAT, d/n m-calpa&iacute;na, Weel y betaB2-crystallin mRNA a niveles comparables con el gen betaB1-crystallin end&oacute;geno y sin anormalidades oculares como cataratas, han dado como resultado. Todas las l&iacute;neas transg&eacute;nicas con el promotor de betaB1-crystallin pollo han expresado el transg&eacute;n en las c&eacute;lulas de fibra de la lente, y las mejores l&iacute;neas expresan en niveles pr&oacute;ximos a betaB1-crystallin end&oacute;geno. Mientras que la expresi&oacute;n del RNA es muy alta, s&oacute;lo expresi&oacute;n de la prote&iacute;na moderada se ha logrado, lo que implica que la expresi&oacute;n de alto valor proteico de las cristalinas se controla parcialmente en el nivel de traducci&oacute;n. Por lo tanto, el promotor de pollo betaB1-crystallin dirige elevada expresi&oacute;n de RNA a las c&eacute;lulas de fibra de la lente, que puede ser especialmente &uacute;til para la expresi&oacute;n de ribozyme y RNAs anti-sentido adem&aacute;s prote&iacute;nas ect&oacute;picas.

Utilidad general de la promotora betaB1-crystallin de pollo a la expresi&oacute;n de la prote&iacute;na en coche en c&eacute;lulas de la fibra del lente de ratones transg&eacute;nicos.

&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; Cdk5&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86;&#x9ECF;&#x9644;&#x548C;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x6269;&#x5C55;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x5BF9;&#x89D2;&#x819C;&#x4F24;&#x53E3;&#x6108;&#x5408;&#x4F53;&#x5185;&#x5E76;&#x68C0;&#x67E5;&#x8FDE;&#x63A5; Cdk5 &#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x548C;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;Cdk5 &#x88AB;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20; ALDH3 &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x7684;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3002;&#x9AD8;&#x67B6;&#x7684; Cdk5 &#x8868;&#x8FBE;&#x8FDF;&#x949D;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x52A8;&#x7269;&#x89D2;&#x819C;&#x75C5;&#x7076;&#x6E05;&#x9664;&#x4F24;&#x53E3;&#x95ED;&#x5408;&#x548C;&#x538B;&#x5236;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x91CD;&#x6784;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;Cdk5 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;olomoucine&#xFF0C;&#x52A0;&#x901F;&#x4F24;&#x53E3;&#x6E05;&#x521B;&#x6108;&#x5408;&#x9020;&#x6210;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x5206;&#x5F00;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x5B98;&#x773C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x6FC0;&#x6D3B; Src(pY416) &#x6CBF;&#x4F24;&#x53E3;&#x8FB9;&#x7F18;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x66F4;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x5730;&#x63A2;&#x8BA8; Cdk5 &#x4E0E; Src &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x4ECE;&#x5934;&#x5F00;&#x59CB;&#x53D7;&#x4F24;&#x6587;&#x5316;&#x7684;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;Src &#x5728;&#x6CBF;&#x4F24;&#x53E3;&#x8FB9;&#x7F18;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5E76;&#x963B;&#x6B62;&#x6B64;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0E; Src &#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;PP1&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x4F24;&#x53E3;&#x95ED;&#x5408; 85%&#x3002;&#x6291;&#x5236; Cdk5 &#x6D3B;&#x6027;&#x4E0E; olomoucine &#x6216;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x6784;&#x9020;&#xFF0C;Cdk5T33&#xFF0C;Src(pY416) &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x3001; &#x8F6C;&#x79FB;&#x5176;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8FB9;&#x7F18;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x4F24;&#x53E3;&#x95ED;&#x5408;&#x3002;Cdk5(pY15)&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7A97;&#x4F53;&#x7684; Cdk5&#xFF0C;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x4E5F;&#x6CBF;&#x4F24;&#x53E3;&#x8FB9;&#x7F18;&#x3002;&#x6291;&#x5236; Src &#x6D3B;&#x6027;&#x4E0E; PP1 &#x963B;&#x6B62; Cdk5(pY15)&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; Cdk5 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4ECE;&#x5C5E;&#x7684; Src &#x7684;&#x5916;&#x89C2;&#x3002;Cdk5 &#x548C; Src co-immunoprecipitated &#x4ECE;&#x6293;&#x4F24;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x6FC0;&#x9176;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Cdk5 &#x65BD;&#x52A0;&#x5176;&#x5BF9;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684; Src &#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x4F24;&#x53E3;&#x6108;&#x5408;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Cdk5 &#x89C4;&#x7BA1;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x4F24;&#x53E3;&#x95ED;&#x5408; Src &#x7684;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;

Recent studies have shown that Cdk5, a member of the cyclin-dependent-kinase family, regulates adhesion and migration in a mouse corneal epithelial cell line. Here, we extend these findings to corneal wound healing in vivo and examine the mechanism linking Cdk5 to cytoskeletal reorganization and migration. Cdk5 was overexpressed in the corneal epithelium of transgenic mice under control of the ALDH3 promoter. Elevated Cdk5 expression retarded corneal debridement wound closure in these animals and suppressed remodeling of the actin cytoskeleton. Conversely, the Cdk5 inhibitor, olomoucine, accelerated debridement wound healing in organ cultured eyes of normal mice, caused migrating cells to separate from the epithelial cell sheet, and increased the level of activated Src(pY416) along the wound edge. To explore the relationship between Cdk5 and Src in greater detail, we examined scratch-wounded cultures of corneal epithelial cells. Src was activated in cells along the wound edge and blocking this activation with the Src kinase inhibitor, PP1, inhibited wound closure by 85%. Inhibiting Cdk5 activity with olomoucine or a dominant negative construct, Cdk5T33, increased the concentration of Src(pY416), shifted its subcellular localization to the cell periphery and enhanced wound closure. Cdk5(pY15), an activated form of Cdk5, also appeared along the wound edge. Inhibiting Src activity with PP1 blocked the appearance of Cdk5(pY15), suggesting that Cdk5 phosphorylation is Src dependent. Cdk5 and Src co-immunoprecipitated from scratch-wounded cultures, demonstrating that both kinases are part of an intracellular protein complex. These findings indicate that Cdk5 exerts its effects on cell migration during corneal epithelial wound healing by regulating the activation and localization of Src.

Cdk5 regulates activation and localization of Src during corneal epithelial wound closure.

Des &eacute;tudes r&eacute;centes ont montr&eacute; que Cdk5, membre de la famille des kinases cycline-d&eacute;pendantes, r&eacute;gule adh&eacute;rence et la migration dans une lign&eacute;e de cellules &eacute;pith&eacute;liales corn&eacute;ennes de souris. Ici, nous prolongeons ces conclusions &agrave; la corn&eacute;e cicatrisation in vivo et d&#39;examiner le m&eacute;canisme reliant Cdk5 &agrave; la r&eacute;organisation du cytosquelette et la migration. Cdk5 &eacute;tait surexprim&eacute;e dans l&#39;&eacute;pith&eacute;lium corn&eacute;en de souris transg&eacute;niques sous contr&ocirc;le du promoteur ALDH3. Expression &eacute;lev&eacute;e de Cdk5 retard&eacute; la fermeture de la corn&eacute;e d&eacute;bridement plaie chez ces animaux et supprim&eacute; le remodelage du cytosquelette d&#39;actine. &Agrave; l&#39;inverse, l&#39;inhibiteur de la Cdk5, olomoucine, acc&eacute;l&eacute;r&eacute; d&eacute;bridement plaie gu&eacute;rison yeux orgue cultiv&eacute; de souris normales, provoqu&eacute;s la migration de cellules s&eacute;parer la plaque de cellules &eacute;pith&eacute;liales et a augment&eacute; le niveau de Src(pY416) activ&eacute; le long du bord de la plaie. Pour explorer la relation entre la Src et Cdk5 plus en d&eacute;tail, nous avons examin&eacute; les bless&eacute;s de toutes pi&egrave;ces des cultures de cellules &eacute;pith&eacute;liales corn&eacute;ennes. SRC a &eacute;t&eacute; activ&eacute; dans les cellules le long du bord de la plaie et bloquant cette activation avec la Src inhibiteur de la kinase, PP1, inhibe la fermeture de la plaie de 85 %. Inhibant l&#39;activit&eacute; de la Cdk5 avec olomoucine ou une construction n&eacute;gative dominante, Cdk5T33, augmente la concentration Src(pY416), d&eacute;plac&eacute; sa localisation subcellulaire &agrave; la p&eacute;riph&eacute;rie de la cellule et am&eacute;lior&eacute; la fermeture de la plaie. Cdk5(pY15), une forme allotropique de Cdk5, est &eacute;galement apparu le long du bord de la plaie. Inhibant l&#39;activit&eacute; de la Src avec PP1 bloqu&eacute; l&#39;apparition de Cdk5(pY15), ce qui sugg&egrave;re que la phosphorylation Cdk5 Src d&eacute;pendant. Co-immunopr&eacute;cipit&eacute;e Cdk5 et Src de cultures bless&eacute;s de z&eacute;ro, ce qui d&eacute;montre que les deux kinases font partie d&#39;une complexe de prot&eacute;ines intracellulaire. Ces r&eacute;sultats indiquent que la Cdk5 exerce ses effets sur la migration cellulaire durant la cicatrisation &eacute;pith&eacute;liale corn&eacute;enne en r&eacute;gulant l&#39;activation et la localisation de la Src.

Cdk5 r&eacute;gule l&#39;activation et la localisation de la Src au cours de la fermeture de la plaie &eacute;pith&eacute;liales corn&eacute;ennes.

Cdk5 regelt die Aktivierung und Lokalisation von Src w&#xE4;hrend Hornhautepithels Wundverschluss.

Recenti studi hanno dimostrato che regola la Cdk5, un membro della famiglia di chinasi ciclina-dipendente-chinasi, adesione e migrazione in una linea di cellule epiteliali corneali del mouse. Qui, noi estendere queste scoperte a corneale in vivo di guarigione della ferita ed esaminare il meccanismo che collega Cdk5 alla riorganizzazione del citoscheletro e migrazione. Cdk5 era overexpressed nell&#39;epitelio cornea di topi transgenici sotto il controllo del promotore ALDH3. Elevata espressione Cdk5 ritardato chiusura corneale sbrigliamento ferita in questi animali e soppresso il rimodellamento del citoscheletro di actina. Al contrario, l&#39;inibitore Cdk5, olomoucine, accelerato sbrigliamento ferita guarigione agli occhi di organo coltivata di topi normali, causati la migrazione delle cellule separare dal foglio delle cellule epiteliali e aumentato il livello di attivazione Src(pY416) lungo il bordo della ferita. Per esplorare il rapporto tra Cdk5 e Src in maggiore dettaglio, abbiamo esaminato zero-ferito colture di cellule epiteliali corneali. Src &egrave; stato attivato in cellule lungo il bordo della ferita e bloccare questa attivazione con Src inibitore delle chinasi, PP1, inibito chiusura ferita da 85%. Inibendo Cdk5 attivit&agrave; con olomoucine o un costrutto negativo dominante, Cdk5T33, aumenta la concentrazione di Src(pY416), ha spostato la sua localizzazione sottocellulare verso la periferia della cellula e rafforzata la chiusura della ferita. Cdk5(pY15), una forma attivata della Cdk5, apparso anche lungo il bordo della ferita. Inibendo l&#39;attivit&agrave; Src con PP1 bloccato la comparsa di Cdk5(pY15), suggerendo che Cdk5 fosforilazione &egrave; dipendente da Src. Cdk5 e Src co-immunoprecipitated da culture zero feriti, dimostrando che entrambi le chinasi sono parte di un complesso di proteine intracellulare. Questi risultati indicano che Cdk5 esercita i suoi effetti sulla migrazione cellulare durante la guarigione della ferita cornea epiteliale regolando l&#39;attivazione e la localizzazione di Src.

Cdk5 regola attivazione e localizzazione di Src durante la chiusura della ferita corneale epiteliale.

&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F; Cdk5 &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x304C;&#x63A5;&#x7740;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x6240;&#x898B;&#x306B;&#x89D2;&#x819C;&#x5275;&#x50B7;&#x6CBB;&#x7652; in vivo &#x3068; Cdk5 &#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3084;&#x79FB;&#x884C;&#x3078;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3002;Cdk5 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; ALDH3 &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x9AD8;&#x67B6; Cdk5 &#x5F0F;&#x89D2;&#x819C;&#x30C7;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C9;&#x30DE;&#x30F3;&#x5275;&#x50B7;&#x9589;&#x9396;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x3092;&#x9045;&#x6EDE;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;Cdk5 &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;, &#x51E6;&#x7F6E;, &#x5275;&#x50B7;&#x6E05;&#x62ED;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x5225;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x767A;&#x751F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x5668;&#x5B98;&#x57F9;&#x990A;&#x76EE;&#x306B;&#x6CBB;&#x7652;&#x3092;&#x52A0;&#x901F;&#x3057;&#x3001;&#x5275;&#x50B7;&#x306E;&#x7AEF;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027; Src(pY416) &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x8A73;&#x3057;&#x304F; Cdk5 &#x3068; Src &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30AF;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C1;&#x304C;&#x8CA0;&#x50B7;&#x57F9;&#x990A;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Src &#x5275;&#x50B7;&#x306E;&#x7AEF;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F; Src &#x3068;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; PP1&#x3001;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x5275;&#x50B7;&#x9589;&#x9396; 85% &#x963B;&#x5BB3;&#x3002;&#x51E6;&#x7F6E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x8CA0;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8; Cdk5 &#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3001;Cdk5T33&#x3001;Src(pY416) &#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x56F2;&#x306B;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3001;&#x5275;&#x50B7;&#x9589;&#x9396;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Cdk5(pY15)&#x3001;Cdk5 &#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x5275;&#x50B7;&#x306E;&#x7AEF;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x767B;&#x5834;&#x3002;Src &#x6D3B;&#x52D5;&#x3068; PP1 Cdk5 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x4F9D;&#x5B58; Src &#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506; Cdk5(pY15) &#x306E;&#x5916;&#x89B3;&#x306E;&#x7981;&#x6B62;&#x3002;Cdk5 &#x3068; Src co-&#x6C88;&#x6FB1;&#x30B9;&#x30AF;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C1;&#x8CA0;&#x50B7;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x304B;&#x3089;&#x3002;Cdk5 &#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068; Src &#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x5275;&#x50B7;&#x6CBB;&#x7652;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Cdk5 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x5275;&#x50B7;&#x9589;&#x9396; Src &#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C; Cdk5, &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xC811;&#xCC29; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAC01; &#xB9C9; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC808; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD655;&#xC7A5; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC01; &#xB9C9; &#xC0C1;&#xCC98; &#xCE58;&#xC720; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBC0F; cytoskeletal &#xC870;&#xC9C1; &#xAC1C;&#xD3B8; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; Cdk5 &#xC5F0;&#xACB0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cdk5 ALDH3 &#xBAA8;&#xD130;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950;&#xC758; &#xAC01; &#xB9C9; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0; overexpressed &#xD588;&#xB2E4;. &#xB192;&#xC740; Cdk5 &#xC2DD;&#xC774;&#xC774; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xCC98;&#xB97C; &#xAC01; &#xB9C9; debridement &#xD3D0;&#xC1C4;&#xB97C; &#xC800; &#xB2A5; &#xC544;&#xC640; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton&#xC758; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; Cdk5 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;, olomoucine, &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2DC;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC950;&#xC758; &#xAE30;&#xAD00; &#xAD50;&#xC591; &#xB208;&#xC5D0;&#xC11C; debridement &#xC0C1;&#xCC98; &#xCE58;&#xC720; &#xAC00;&#xC18D; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xCC98; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; src(py416)&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC790;&#xC138;&#xD788; Cdk5 Src &#xC0AC;&#xC774; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xCC98;&#xC74C; &#xBD80;&#xC0C1; &#xBB38;&#xD654; &#xAC01; &#xB9C9; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0;. Src&#xB294; &#xC0C1;&#xCC98; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xC140;&#xC5D0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; src &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCC28;&#xB2E8; kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;, PP1, 85%&#xB85C; &#xC0C1;&#xCC98; &#xD3D0;&#xC1C4; &#xC800;&#xD574;. Olomoucine &#xB610;&#xB294; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xBB38; Cdk5 &#xD65C;&#xB3D9; &#xC5B5;&#xC81C;, Cdk5T33, src(py416)&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4;&#xAC00; &#xC99D;&#xAC00;, &#xADF8; subcellular &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC140; &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC5D0; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC0C1;&#xCC98; &#xD3D0;&#xC1C4;. Cdk5(pY15), Cdk5&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC0C1;&#xCC98; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xB4F1;&#xC7A5;. Src PP1 &#xD65C;&#xB3D9; &#xC5B5;&#xC81C; Cdk5 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; Src &#xC885;&#xC18D; &#xC81C;&#xC548; cdk5(py15)&#xC758; &#xBAA8;&#xC591; &#xCC28;&#xB2E8;. Cdk5 &#xBC0F; Src &#xACF5;&#xB3D9;-immunoprecipitated &#xCC98;&#xC74C; &#xBD80;&#xC0C1; &#xBB38;&#xD654;, &#xB450; kinases&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; Cdk5 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; src &#xC18D;&#xC131;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC01; &#xB9C9; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC0C1;&#xCC98; &#xCE58;&#xC720; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cdk5 &#xC870;&#xC808; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; Src&#xC758; &#xAC01; &#xB9C9; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC0C1;&#xCC98; &#xD3D0;&#xC1C4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;.

Estudios recientes han demostrado que Cdk5, un miembro de la familia de la quinasa dependiente de ciclina, regula la adhesi&oacute;n y la migraci&oacute;n en una l&iacute;nea de c&eacute;lula epitelial c&oacute;rnea de rat&oacute;n. Aqu&iacute;, extendemos estos resultados a la c&oacute;rnea wound healing in vivo y examinar el mecanismo de vinculaci&oacute;n Cdk5 reorganizaci&oacute;n del citoesqueleto y migraci&oacute;n. Cdk5 se sobreexpresa en el epitelio corneal de ratones transg&eacute;nicos bajo el control del promotor ALDH3. Elevada expresi&oacute;n Cdk5 cierre de c&oacute;rnea desbridamiento de la herida en estos animales retard&oacute; y suprimi&oacute; la remodelaci&oacute;n del citoesqueleto de actina. Por el contrario, el inhibidor de la Cdk5, olomoucine, aceler&oacute; el desbridamiento de la herida cura ante &oacute;rgano cultivada de ratones normales, provocados la migraci&oacute;n de las c&eacute;lulas separar la hoja de la c&eacute;lula epitelial y aument&oacute; el nivel de Src(pY416) activado por el borde de la herida. Para explorar la relaci&oacute;n entre la Cdk5 y Src en mayor detalle, examinamos cero heridos cultivos de c&eacute;lulas epiteliales corneales. Fuente fue activada en las c&eacute;lulas a lo largo del borde de la herida y bloqueando esta activaci&oacute;n con la fuente inhibidor de la cinasa, PP1, inhibida cierre de herida en un 85%. Inhibir la actividad de Cdk5 con olomoucine o una construcci&oacute;n negativa dominante, Cdk5T33, increment&oacute; la concentraci&oacute;n de Src(pY416), cambi&oacute; de puesto su localizaci&oacute;n subcelular a la periferia de la c&eacute;lula y hab&iacute;a mejorado el cierre de la herida. Cdk5(pY15), una forma activada de la Cdk5, tambi&eacute;n apareci&oacute; en el borde de la herida. Inhibiendo la actividad de la fuente con PP1 bloquea la aparici&oacute;n de Cdk5(pY15), sugiriendo que la fosforilaci&oacute;n de la Cdk5 es dependiente de la fuente. Co-immunoprecipitated Cdk5 y fuente de culturas cero heridos, demostrando que ambas quinasas son parte de un complejo proteico intracelular. Estos resultados indican que la Cdk5 ejerce sus efectos sobre la migraci&oacute;n celular durante la cura de la herida epitelial corneal mediante la regulaci&oacute;n de la activaci&oacute;n y la localizaci&oacute;n de la fuente.

Cdk5 regula la activaci&oacute;n y la localizaci&oacute;n de la fuente durante el cierre de la herida de epitelio corneal.

&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7275;&#x8FDE;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x548C;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x89D2;&#x819C;&#x548C;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176; 5&#x3002;&#x63A2;&#x7D22;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x5206;&#x5B50;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6267;&#x884C;&#x5927;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x955C;&#x5934;&#x5E93;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x7B5B;&#x9009;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176; 5 &#x53CA;&#x5176;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x3001; p35 &#x548C; p39 &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6B64;&#x5C4F;&#x5E55;&#x786E;&#x5B9A; p39 &#x548C; muskelin&#x3001; &#x5DF2;&#x77E5;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x8D34;&#x58C1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5316;&#x5B66;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230; muskelin&#xFF0C;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x955C;&#x5934;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5927;&#x8111;&#x548C;&#x808C;&#x8089;&#x4E2D;&#x3002;Co immunoprecipitations &#x548C;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD; S-&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x62C9;&#x4E0B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x5B9E; p39 muskelin &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;P39 &#x5220;&#x9664;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;muskelin &#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; p39 C &#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x77ED;&#x63D2;&#x5165; (&#x6C28;&#x57FA;&#x9178; 329 366) &#x7F3A;&#x5E2D;&#x4ECE; p35&#x3002;&#x5BF9; muskelin &#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x5206;&#x6790;&#x6620;&#x5C04;&#x5230;&#x7B2C;&#x4E94; kelch &#x91CD;&#x590D;&#x4E0E; p39 &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;P39 &#x548C; muskelin COS1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6216;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x6539;&#x53D8; muskelin&#xFF0C;&#x5B83;&#x62DB;&#x52DF;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8FB9;&#x7F18;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; muskelin &#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176; 5 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242; p39 &#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x4E92;&#x52A8;&#x53CA;&#x5EFA;&#x8BAE;&#xFF0C;p39 &#x53EF;&#x89C4;&#x7BA1; muskelin &#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;

Muskelin &#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176; 5 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242; p39 &#x5177;&#x4F53;&#x4E92;&#x52A8;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5468;&#x8FB9;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684; muskelin&#x3002;

Previous studies implicate cyclin-dependent kinase 5 in cell adhesion and migration of epithelial cells of the cornea and lens. To explore molecular interactions underlying these functions, we performed yeast two-hybrid screening of an embryonic rat lens library for proteins that interact with cyclin-dependent kinase 5 and its regulators, p35 and p39. This screen identified a specific interaction between p39 and muskelin, an intracellular protein known to affect cytoskeletal organization in adherent cells. Immunohistochemistry detected muskelin in the developing lens and in other tissues, including brain and muscle. Glutathione S-transferase pull-down experiments and co-immunoprecipitations confirmed the specificity of the p39-muskelin interaction. Deletion analysis of p39 showed that muskelin binds to the p39 C terminus, which contains a short insertion (amino acids 329-366) absent from p35. Similar analysis of muskelin mapped the interaction with p39 to the fifth kelch repeat. Co-expression of p39 and muskelin in COS1 cells or lens epithelial cells altered the intracellular localization of muskelin, recruiting it to the cell periphery. These findings demonstrate a novel interaction between muskelin and the cyclin-dependent kinase 5 activator p39 and suggest that p39 may regulate the subcellular localization of muskelin.

A specific interaction between muskelin and the cyclin-dependent kinase 5 activator p39 promotes peripheral localization of muskelin.

Des &eacute;tudes pr&eacute;c&eacute;dentes impliquent des kinases cycline-d&eacute;pendantes 5 adh&eacute;sion cellulaire et migration des cellules &eacute;pith&eacute;liales de la corn&eacute;e et la lentille. Pour explorer les interactions mol&eacute;culaires qui sous-tendent ces fonctions, nous avons r&eacute;alis&eacute; le criblage de deux-hybride de levure d&#39;une lentille embryonnaires de rat pour les prot&eacute;ines qui interagissent avec la kinase cycline-d&eacute;pendante 5 et ses r&eacute;gulateurs, p35 et p39. Cet &eacute;cran a identifi&eacute; une interaction sp&eacute;cifique entre p39 et muskelin, une prot&eacute;ine intracellulaire qui influent sur l&#39;organisation du cytosquelette des cellules adh&eacute;rentes. Muskelin de l&#39;immunohistochimie d&eacute;tect&eacute; dans l&#39;objectif de d&eacute;veloppement et dans d&#39;autres tissus, y compris le cerveau et les muscles. Exp&eacute;riences d&eacute;roulant glutathion S-transf&eacute;rase et co-immunopr&eacute;cipitation confirment la sp&eacute;cificit&eacute; de l&#39;interaction p39-muskelin. Analyse de la suppression de p39 a montr&eacute; que muskelin se lie jusqu&#39;au terminus de C p39, qui contient une insertion courte (acides amin&eacute;s 329-366) l&#39;absence de p35. Une analyse similaire des muskelin cartographi&eacute; l&#39;interaction avec p39 &agrave; la cinqui&egrave;me reprise de kelch. Co-expression de p39 et muskelin en COS1 les cellules ou les cellules &eacute;pith&eacute;liales de lentille modifi&eacute; la localisation intracellulaire de la muskelin, il recrute &agrave; la p&eacute;riph&eacute;rie de la cellule. Ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent une nouvelle interaction entre muskelin et la kinase cycline-d&eacute;pendante 5 activateur p39 et sugg&egrave;rent que p39 peut r&eacute;glementer la localisation subcellulaire des muskelin.

Une interaction sp&eacute;cifique entre le muskelin et la kinase cycline-d&eacute;pendante 5 activateur p39 favorise la localisation p&eacute;riph&eacute;rique de muskelin.

Eine spezifische Wechselwirkung zwischen muskelin und der Cyclin-abh&#xE4;ngigen Kinase 5 Aktivator p39 f&#xF6;rdert peripheren Lokalisation muskelin.

Precedenti studi coinvolgono chinasi ciclina-dipendente 5 nell&#39;adesione cellulare e la migrazione delle cellule epiteliali della cornea e lente. Per esplorare le interazioni molecolari alla base di queste funzioni, abbiamo effettuato lo screening di due-ibrido lievito di una libreria di lente embrionali di topo per le proteine che interagiscono con la chinasi ciclina-dipendente 5 e suoi regolatori, p35 e p39. Questo schermo identificato una specifica interazione tra p39 e muskelin, una proteina intracellulare noti per influenzare l&#39;organizzazione del citoscheletro in cellule aderenti. Muskelin immunoistochimica rilevato nella lente in via di sviluppo e in altri tessuti, compresi cervello e muscolo. Gli esperimenti di pull-down di glutatione S-transferasi e co-immunoprecipitazione ha confermato la specificit&agrave; dell&#39;interazione p39-muskelin. Analisi di eliminazione di p39 ha mostrato che muskelin si lega al p39 C terminale, che contiene un breve inserimento (aminoacidi 329-366) assente da p35. Analisi simile di muskelin mappata l&#39;interazione con p39 la quinta ripetizione kelch. Co-Expression di p39 e muskelin COS1 cells o cellule epiteliali lente alterato la localizzazione intracellulare di muskelin, reclutamento e alla periferia della cellula. Questi risultati dimostrano un romanzo interazione tra muskelin e le chinasi ciclina-dipendente 5 attivatore p39 e suggeriscono che p39 pu&ograve; regolamentare la localizzazione sottocellulare di muskelin.

Una specifica interazione tra muskelin e le chinasi ciclina-dipendente 5 attivatore p39 promuove la localizzazione periferica di muskelin.

&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3068;&#x79FB;&#x884C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x89D2;&#x819C;&#x3068;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 5 &#x3092;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 5 &#x3068;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3001;p35 &#x304A;&#x3088;&#x3073; p39 &#x3068;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3059;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x80DA;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA; &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x6CD5;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306F; p39 &#x3068; muskelin&#x3001;&#x4ED8;&#x7740;&#x6027;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66; muskelin &#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3068;&#x8133;&#x3084;&#x7B4B;&#x8089;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3; s-&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3068; co immunoprecipitations p39 muskelin &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;P39 &#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E; muskelin &#x306F;&#x77ED;&#x3044;&#x633F;&#x5165; &#xFF08;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178; 329-366&#xFF09; &#x6B20;&#x5E2D; p35 &#x304B;&#x3089;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;p39 C &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5206;&#x6790; muskelin &#x306E; p39 &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7B2C;&#x4E94; kelch repeat &#x306B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3002;&#x5171;&#x767A;&#x73FE; p39 &#x3068; muskelin COS1 &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6C34;&#x6676;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x56F2;&#x306B;&#x52DF;&#x96C6; muskelin &#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6240;&#x898B;&#x306F; muskelin &#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 5 &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; p39 &#x9593;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E; p39 muskelin &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3002;

&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; muskelin &#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 5 &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; p39 &#x306E;&#x9593; muskelin &#x306E;&#x5468;&#x8FBA;&#x6A5F;&#x5668;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 5 &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xB80C;&#xC988;&#xC640; &#xAC01; &#xB9C9;&#xC758; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC5F0;&#xB8E8;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBD84;&#xC790; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xCC3E;&#xC544;&#xBCF4;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 5&#xC640; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;, p35 p39 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC30;&#xC544; &#xC950; &#xB80C;&#xC988; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC758; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xC218;&#xD589;. &#xC774; &#xD654;&#xBA74; p39&#xC640; muskelin, cytoskeletal &#xC870;&#xC9C1; &#xBD80;&#xCC29; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0AC;&#xC774; &#xD2B9;&#xC815; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB80C;&#xC988;&#xC640; &#xB1CC;, &#xADFC;&#xC721; &#xB4F1; &#xB2E4;&#xB978; &#xC870;&#xC9C1; muskelin&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC220;. Glutathione S-&#xC804;&#xC774; &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC0F; &#xACF5;&#xB3D9; immunoprecipitations p39-muskelin &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. P39&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC774; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xADF8; muskelin&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; &#xC0BD;&#xC785; (&#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; 329-366) &#xACB0; &#xC11D; p 35&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3EC;&#xD568; p39 C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Muskelin&#xC758; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; p39 &#xC0C1;&#xD638; 5 kelch &#xBC18;&#xBCF5;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xD551;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. P39 &#xBC0F; COS1 &#xC140; &#xB610;&#xB294; &#xB80C;&#xC988; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; muskelin&#xC758; co-expression muskelin, &#xC140; &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xC9D1;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; muskelin &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xC18C;&#xC124; &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 5 &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; p39 &#xACE0; &#xADF8; p39 muskelin&#xC758; subcellular &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Muskelin &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 5 &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; p39 &#xC0AC;&#xC774; &#xD2B9;&#xC815; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; muskelin &#xC8FC;&#xBCC0; &#xAE30;&#xAE30; &#xAD6D;&#xC0B0;&#xD654; &#xCD09;&#xC9C4;.

Estudios anteriores implican quinasa dependiente de ciclina 5 en la adhesi&oacute;n celular y la migraci&oacute;n de las c&eacute;lulas epiteliales de la c&oacute;rnea y el cristalino. Para explorar las interacciones moleculares subyacentes a estas funciones, realizamos la proyecci&oacute;n de dos h&iacute;bridos de levadura de una biblioteca de lente de rata embrionario para prote&iacute;nas que interaccionan con la quinasa dependiente de ciclina 5 y sus reguladores, p35 y p39. Esta pantalla identificado una interacci&oacute;n espec&iacute;fica entre p39 y muskelin, una prote&iacute;na intracelular conocidos que afectan la organizaci&oacute;n citoesqueleto en las c&eacute;lulas adherentes. Inmunohistoqu&iacute;mica detecta muskelin la lente en desarrollo y en otros tejidos, incluyendo cerebro y m&uacute;sculo. Glutati&oacute;n S-transferasa desplegable experimentos y co-immunoprecipitations confirman la especificidad de la interacci&oacute;n p39-muskelin. An&aacute;lisis de la canceladura de p39 demostraron que muskelin se une a la terminal C de p39, que contiene una corta inserci&oacute;n (amino&aacute;cidos 329-366) ausente de p35. An&aacute;lisis similar de muskelin asignan a la interacci&oacute;n con p39 a la Quinta repetici&oacute;n kelch. Coexpresi&oacute;n de p39 y muskelin en c&eacute;lulas COS1 o las c&eacute;lulas epiteliales de la lente altera la localizaci&oacute;n intracelular de muskelin, lo de reclutamiento a la periferia de la c&eacute;lula. Estos resultados demuestran una nueva interacci&oacute;n entre muskelin y la quinasa dependiente de ciclina 5 activador p39 y sugieren que P39 puede regular la localizaci&oacute;n subcelular de muskelin.

Una interacci&oacute;n espec&iacute;fica entre la muskelin y la quinasa dependiente de ciclina 5 activador p39 promueve la localizaci&oacute;n perif&eacute;rica de muskelin.

Pax6 &#x548C; c Maf &#x89C4;&#x7BA1;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x955C;&#x5934;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x63A7;&#x5236;&#x533A;&#x57DF; (Dcr) &#x7684; alphaA-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;FGF &#x4FE1;&#x53F7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6807;&#x5FD7;&#x3002;DCR1 &#x523A;&#x6FC0;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E3B;&#x955C;&#x5934;&#x5916;&#x690D;&#x4F53;&#x6CBB;&#x7597; FGF2 FGF &#x4FE1;&#x53F7;&#x8054;&#x7CFB; alphaA-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x518D;&#x52A0;&#x4E0A;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x51E0;&#x4E4E; DCR1/alphaA-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50; &#xFF08;&#x5305;&#x62EC; DCR2&#xFF09; &#x6982;&#x62EC;&#x5728;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7EA4;&#x7EF4; alphaA-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x53D7;&#x4F53; 3/alphaA/&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8BB0;&#x8005;&#x53EA;&#x8868;&#x793A; &#39;&#x665A;&#39; &#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x3002;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28; immunoprecipitations DCR1 &#x548C; alphaA-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5728;&#x955C;&#x5934;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x8868;&#x660E; Pax6 &#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; alphaA-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x589E;&#x52A0;&#x7ED1;&#x5B9A; c &#x519C;&#x6797;&#x90E8;&#x548C; CREB &#x5230;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x548C; CREB &#x5230;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x53D7;&#x4F53; 3&#x3001; &#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x57DF;&#x7684;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; H3K9 hyperacetylation &#x4ECE; DCR1 &#x5EF6;&#x4F38;&#x5230;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x53D7;&#x4F53; 3&#x3001; &#x5173;&#x8054;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x91CD;&#x5851; Brg1 &#x548C; Snf2h alphaA-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x9176;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; Pax6&#x3001; c-&#x519C;&#x6797;&#x90E8;&#x548C; CREB &#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x91CD;&#x6784;&#x7684;&#x9176;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x65B0;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x955C;&#x5934;&#x5206;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684; alphaA-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x591A;&#x7EA7;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

AlphaA-&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x8FC7; Pax6&#x3001; c-&#x519C;&#x6797;&#x90E8;&#x3001; CREB &#x548C;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x57DF;&#x7279;&#x5B9A;&#x955C;&#x5934;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

Pax6 and c-Maf regulate multiple stages of mammalian lens development. Here, we identified novel distal control regions (DCRs) of the alphaA-crystallin gene, a marker of lens fiber cell differentiation induced by FGF-signaling. DCR1 stimulated reporter gene expression in primary lens explants treated with FGF2 linking FGF-signaling with alphaA-crystallin synthesis. A DCR1/alphaA-crystallin promoter (including DCR2) coupled with EGFP virtually recapitulated the expression pattern of alphaA-crystallin in lens epithelium and fibers. In contrast, the DCR3/alphaA/EGFP reporter was expressed only in 'late' lens fibers. Chromatin immunoprecipitations showed binding of Pax6 to DCR1 and the alphaA-crystallin promoter in lens chromatin and demonstrated that high levels of alphaA-crystallin expression correlate with increased binding of c-Maf and CREB to the promoter and of CREB to DCR3, a broad domain of histone H3K9-hyperacetylation extending from DCR1 to DCR3, and increased abundance of chromatin remodeling enzymes Brg1 and Snf2h at the alphaA-crystallin locus. Our data demonstrate a novel mechanism of Pax6, c-Maf and CREB function, through regulation of chromatin-remodeling enzymes, and suggest a multistage model for the activation of alphaA-crystallin during lens differentiation.

Regulation of alphaA-crystallin via Pax6, c-Maf, CREB and a broad domain of lens-specific chromatin.

C-Maf Pax6 r&egrave;glent plusieurs stades de d&eacute;veloppement de la lentille de mammif&egrave;res. Ici, nous avons identifi&eacute; des r&eacute;gions de contr&ocirc;le distal roman (DCR) du g&egrave;ne alphaA-cristalline, un marqueur de diff&eacute;renciation des cellules lentille fibre induite par la FGF-signalisation. DCR1 stimul&eacute;e par l&#39;expression du g&egrave;ne rapporteur dans l&#39;objectif principal des explants trait&eacute;s avec FGF2 reliant FGF-signalisation avec synth&egrave;se alphaA-cristalline. Un promoteur de DCR1/alphaA-cristalline (y compris DCR2) coupl&eacute; avec EGFP pratiquement r&eacute;capitul&eacute; le mod&egrave;le d&#39;expression d&#39;alphaA-cristalline dans l&#39;&eacute;pith&eacute;lium de la lentille et de fibres. En revanche, le journaliste DcR3 niveaux/alphaA/EGFP &eacute;tait exprim&eacute; uniquement dans les fibres de lentille &laquo; fin &raquo;. Immunopr&eacute;cipitation de la chromatine a montr&eacute; la liaison de Pax6 DCR1 et le promoteur alphaA-cristalline dans la chromatine de lentille et d&eacute;montr&eacute; que des niveaux &eacute;lev&eacute;s d&#39;expression alphaA-cristalline sont corr&eacute;l&eacute;s avec une liaison accrue de c-Maf et CREB au promoteur et de CREB &agrave; DcR3, niveaux, un vaste domaine d&#39;histone H3K9-hyperac&eacute;tylation s&#39;&eacute;tendant de DCR1 &agrave; DcR3, niveaux et a augment&eacute; l&#39;abondance d&#39;enzymes Brg1 et Snf2h au locus alphaA-cristalline de remodelage de la chromatine. Nos donn&eacute;es d&eacute;montrent un nouveau m&eacute;canisme de Pax6, c-Maf et fonction CREB, par le biais de r&eacute;gulation des enzymes de remodelage de la chromatine et sugg&egrave;rent un mod&egrave;le &agrave; plusieurs &eacute;tapes pour l&#39;activation de l&#39;alphaA-cristalline durant la diff&eacute;renciation de la lentille.

R&egrave;glement du alphaA-cristalline via Pax6, c-Maf, CREB et un vaste domaine de la chromatine lentille sp&eacute;cifique.

PAX6 und c-Maf Regeln mehrere Phasen der Entwicklung der S&auml;ugetier-Objektiv. Hier haben wir festgestellt, distale unbekanntes Regionen (DCRs) im AlphaA-Crystallin-gen, eine Markierung der Objektiv-Faser-Zelldifferenzierung induziert durch FGF-Signalisierung. DCR1 stimuliert Reporter-Gen-Ausdrucks in prim&auml;re Objektiv Explantaten mit FGF2 behandelt mit AlphaA-Crystallin Synthese verkn&uuml;pfen FGF-Signalisierung. DCR1/AlphaA-Crystallin F&ouml;rderer (einschlie&szlig;lich DCR2) gepaart mit EGFP praktisch rekapituliert die Muster des Ausdrucks der AlphaA-Crystallin in Linse Epithel und Fasern. Im Gegensatz dazu wurde die DCR3/AlphaA/EGFP-Reporter nur in &#39;sp&auml;t&#39; Objektiv Fasern ausgedr&uuml;ckt. Chromatin Immunpr&auml;zipitation zeigte Bindung von Pax6 DCR1 und der Projekttr&auml;ger AlphaA-Crystallin im Objektiv Chromatin und gezeigt, dass hohe AlphaA-Crystallin Ausdruck mit verst&auml;rkten Bindung der c-Maf und CREB an den Projekttr&auml;ger und von CREB, DCR3, einer breiten Dom&auml;ne Korrelieren von Histon-H3K9-Hyperacetylation Verl&auml;ngerung von DCR1 auf DCR3, und F&uuml;lle des Chromatins umgestaltende Enzyme Brg1 und Snf2h bei der AlphaA-Crystallin-Locus erh&ouml;ht. Unsere Daten zeigen einen neuartigen Wirkmechanismus von Pax6, c-Maf und CREB-Funktion, durch Verordnung von Chromatin-Umbau Enzymen, und schlagen Sie ein mehrstufiges Modell zur Aktivierung von AlphaA-Crystallin w&auml;hrend Linse Differenzierung.

Regulierung der AlphaA-Crystallin &uuml;ber Pax6, c-Maf, CREB und ein breites Domain der Objektiv-spezifische Chromatin.

PAX6 e c-Maf regolare pi&ugrave; fasi di sviluppo dei mammiferi lente. Qui, abbiamo identificato regioni romanzo controllo distale (DCRs) del gene della alphaA-crystallin, un marcatore di differenziazione delle cellule di fibra ottica indotta da FGF-segnalazione. DCR1 stimolata espressione del gene reporter in espianti primari lente trattata con FGF2 collegamento FGF-segnalazione con alphaA-crystallin sintesi. Un promotore di DCR1/alphaA-crystallin (compresi DCR2) accoppiato con EGFP virtualmente ricapitolato il pattern di espressione di alphaA-crystallin nell&#39;epitelio lente e fibre. Al contrario, il reporter di DCR3/alphaA/EGFP &egrave; stato espresso solo in fibre lente &#39;fine&#39;. Immunoprecipitazione della cromatina ha mostrato associazione di Pax6 DCR1 e il promotore alphaA-crystallin nella cromatina lente e ha dimostrato che alti livelli di espressione di alphaA-crystallin correlano con la maggiore associazione di c-Maf e CREB al promotore e di CREB a DCR3, un vasto dominio dell&#39;istone H3K9-hyperacetylation che si estende da DCR1 a DCR3 e maggiore abbondanza di enzimi Brg1 e Snf2h presso il locus alphaA-crystallin di rimodellamento della cromatina. I nostri dati dimostrano un nuovo meccanismo di Pax6, c-Maf e funzione CREB, attraverso il regolamento di rimodellamento della cromatina enzimi e suggeriscono un modello multistadio per l&#39;attivazione di alphaA-crystallin durante la differenziazione lente.

Regolamento di alphaA-crystallin via Pax6, c-Maf, CREB e un vasto dominio della cromatina lenti specifiche.

Pax6 &#x3068; c Maf &#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;FGF &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x8D77;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC; alphaA &#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x9060;&#x4F4D;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x9818;&#x57DF; (Dcr) &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DCR1 &#x523A;&#x6FC0; FGF2 &#x3067;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x4E3B;&#x306A;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x5916;&#x690D;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE; FGF &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054; alphaA &#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x4E0A; EGFP &#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F; DCR1/alphaA-&#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#xFF08;&#x542B;&#x3080; DCR2&#xFF09; alphaA-&#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3; &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3068;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x518D;&#x8868;&#x73FE;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;DCR3/alphaA/EGFP &#x8A18;&#x8005; &#39;&#x5F8C;&#x534A;&#39; &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;.&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3; immunoprecipitations DCR1 &#x3068; alphaA &#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA; &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E; Pax6 &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;alphaA &#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x5F0F;&#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408; c Maf &#x3068; CREB &#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068; CREB DCR3&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; H3K9 hyperacetylation DCR1 &#x304B;&#x3089; DCR3 &#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x5E45;&#x5E83;&#x3044;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x9175;&#x7D20; Brg1 &#x3068; Snf2h alphaA &#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x5EA7;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F; Pax6&#x3001;c Maf&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E; CREB &#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; alphaA &#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x591A;&#x6BB5;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

AlphaA-&#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3; Pax6 c Maf&#x3001;CREB&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5E45;&#x5E83;&#x3044;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3002;

Pax6 &#xBC0F; c Maf &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB80C;&#xC988; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC870;&#xC808;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C;&#xC124; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xC601;&#xC5ED; (DCRs) &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654; FGF &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xB9C8;&#xCEE4; alphaA crystallin &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xB80C;&#xC988; explants FGF2 &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; DCR1 alphaA crystallin &#xD569;&#xC131; FGF &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC2E4;&#xC0C1; EGFP&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; DCR1/alphaA-crystallin &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; (&#xD3EC;&#xD568; DCR2) recapitulated alphaA-crystallin &#xB80C;&#xC988; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC640; &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, DCR3/alphaA/EGFP &#xAE30;&#xC790;&#xB294; &#39;&#xB2A6;&#xC740;&#39; &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. Chromatin immunoprecipitations DCR1 &#xBC0F; alphaA crystallin &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xB80C;&#xC988; chromatin&#xC758; pax6&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xBA70; alphaA crystallin &#xC2DD;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; c Maf CREB&#xC758; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBC0F; DCR3, &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; H3K9-hyperacetylation DCR3, dcr1&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC7A5;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; CREB&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xAD00; &#xD558; &#xACE0; &#xD6A8;&#xC18C; Brg1 &#xBC0F; Snf2h alphaA crystallin &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; chromatin&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Pax6, c-&#xB18D;&#xB9BC; &#xBD80; &#xBC0F; CREB &#xD568;&#xC218; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; chromatin &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xB80C;&#xC988; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; alphaA crystallin&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB2E8;&#xACC4; &#xBAA8;&#xB378; &#xC81C;&#xC548;.

AlphaA-crystallin, Pax6, c-&#xB18D;&#xB9BC; &#xBD80;, CREB &#xBC0F; &#xB80C;&#xC988; &#xD2B9;&#xC815; chromatin&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;.

PAX6 y c-Maf regulan m&uacute;ltiples etapas de desarrollo de los mam&iacute;feros de la lente. Aqu&iacute;, se identificaron regiones novela control distal (DCRs) del gen alphaA-crystallin, un marcador de diferenciaci&oacute;n celular de la fibra de lente inducida por se&ntilde;alizaci&oacute;n FGF. DCR1 estimula la expresi&oacute;n del gen reportero en explantes de lente primaria tratados con FGF2 asoci&aacute;ndolo FGF-Se&ntilde;alizaci&oacute;n alphaA-crystallin s&iacute;ntesis. DCR1/alphaA-crystallin promotor (incluyendo DCR2) juntado con EGFP pr&aacute;cticamente recapitul&oacute; el patr&oacute;n de expresi&oacute;n de alphaA-crystallin en el epitelio de la lente y fibras. En contraste, el reportero DCR3/alphaA/EGFP se expres&oacute; solamente en las fibras de lente &#39;finales&#39;. Cromatina immunoprecipitations demostr&oacute; Uni&oacute;n de Pax6 DCR1 y el promotor alphaA-crystallin en cromatina de lente y demostr&oacute; que altos niveles de expresi&oacute;n alphaA-crystallin correlacionan con mayor Uni&oacute;n de c-Maf y CREB al promotor y de CREB a DCR3, un amplio dominio de histona H3K9-hyperacetylation que se extiende desde DCR1 a DCR3 y la mayor abundancia de enzimas Brg1 y Snf2h en el locus alphaA-crystallin de remodelaci&oacute;n de la cromatina. Nuestros datos demuestran un nuevo mecanismo de Pax6, c-Maf y funci&oacute;n CREB, a trav&eacute;s de la regulaci&oacute;n de las enzimas de remodelaci&oacute;n de la cromatina y sugieren un modelo gradual para la activaci&oacute;n de alphaA-crystallin durante la diferenciaci&oacute;n de la lente.

Regulaci&oacute;n de alphaA-crystallin v&iacute;a Pax6, c-Maf, CREB y un amplio dominio de la cromatina de lente espec&iacute;fico.

&#x8C03;&#x67E5;&#x6548;&#x679C; Cdk5 &#x6291;&#x5236;&#x5242; olomoucine &#x5BF9;&#x89D2;&#x819C;&#x75C5;&#x7076;&#x6E05;&#x9664;&#x4F24;&#x53E3;&#x7684;&#x6108;&#x5408;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;

Cdk5 &#x6291;&#x5236;&#x5242; olomoucine &#x4FC3;&#x8FDB;&#x89D2;&#x819C;&#x4F24;&#x53E3;&#x7684;&#x6E05;&#x521B;&#x5C01;&#x95ED;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;

To investigate the effect of the Cdk5 inhibitor olomoucine on corneal debridement wound healing in vivo.

The Cdk5 inhibitor olomoucine promotes corneal debridement wound closure in vivo.

Pour &eacute;tudier l&#39;effet de la Cdk5 olomoucine inhibiteur sur la corn&eacute;e d&eacute;bridement cicatrisation in vivo.

La Cdk5 inhibiteur olomoucine favorise la fermeture de d&eacute;bridement corn&eacute;en plaie in vivo.

Die Wirkung der Cdk5 untersuchen Wundheilung Inhibitor Olomoucine auf Hornhaut Debridement in-vivo.

Die Cdk5 Inhibitor Olomoucine f&ouml;rdert die Hornhaut Debridement Wunde Schlie&szlig;ung in-vivo.

Per studiare l&#39;effetto della Cdk5 inibitore olomoucine su sbrigliamento cornea guarigione delle ferite in vivo.

La Cdk5 inibitore olomoucine favorisce la chiusura della ferita corneale di sbrigliamento in vivo.

Cdk5 &#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x51E6;&#x7F6E;&#x89D2;&#x819C;&#x30C7;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C9;&#x30DE;&#x30F3;&#x4E0A;&#x50B7;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x6CBB;&#x7652;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Cdk5 &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x51E6;&#x7F6E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x89D2;&#x819C;&#x30C7;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C9;&#x30DE;&#x30F3;&#x5275;&#x50B7;&#x9589;&#x9396;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Cdk5&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC01; &#xB9C9; debridement&#xC5D0; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; olomoucine &#xC0C1;&#xCC98; &#xCE58;&#xC720; vivo&#xC5D0;&#xC11C;.

Cdk5 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; olomoucine vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xCC98; &#xB9C9; debridement &#xD3D0;&#xC1C4;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Investigar el efecto de la Cdk5 inhibidor olomoucine en c&oacute;rneo desbridamiento wound healing in vivo.

La Cdk5 inhibidor olomoucine promueve el cierre de la c&oacute;rnea desbridamiento de la herida en vivo.

&#x96F7;&#x516C;&#x85E4;&#x7532;&#x7D20;&#x3001; &#x96F7;&#x516C;&#x85E4;&#x5185;&#x916F;&#x9187;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x4E2D;&#x56FD;&#x98CE;&#x6E7F;&#x836F;&#x8349;&#x96F7;&#x516C;&#x85E4;&#x94A9;&#x697C;&#x5DF2;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x72FC;&#x75AE;&#x80BE;&#x708E;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x6210;&#x5206;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x5BA1;&#x67E5; (NZB x NZW) &#x65E2;&#x5B9A;&#x7684;&#x72FC;&#x75AE;&#x6027;&#x80BE;&#x708E;&#x7684;&#x96F7;&#x516C;&#x85E4;&#x7532;&#x7D20;&#x3001; &#x96F7;&#x516C;&#x85E4;&#x5185;&#x916F;&#x9187;&#x7597;&#x6548; F1 &#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;

&#x6709;&#x6548;&#x6CBB;&#x7597;&#x80BE;&#x708E; (NZB x NZW) &#x5728; F1 &#x5C0F;&#x9F20;&#x4E0E;&#x96F7;&#x516C;&#x85E4;&#x7532;&#x7D20;&#x3001; &#x96F7;&#x516C;&#x85E4;&#x5185;&#x916F;&#x9187;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x6D3B;&#x6027;&#x6210;&#x5206;&#x7684;&#x4E2D;&#x8349;&#x836F;&#x8865;&#x6551;&#x96F7;&#x516C;&#x85E4; F.

Triptolide and tripdiolide are thought to be active components of the Chinese antirheumatic herbal remedy Tripterygium wilfordii Hook F, which has been shown to be effective in treating murine lupus nephritis. This study was undertaken to examine the therapeutic effect of triptolide and tripdiolide on established lupus nephritis in (NZB x NZW)F1 mice.

Effective therapy for nephritis in (NZB x NZW)F1 mice with triptolide and tripdiolide, the principal active components of the Chinese herbal remedy Tripterygium wilfordii Hook F.

Triptolide et tripdiolide sont consid&eacute;r&eacute;s comme des composants actifs de la plante m&eacute;dicinale chinoise antirhumatismaux Tripterygium wilfordii Hook F, qui a &eacute;t&eacute; montr&eacute; pour &ecirc;tre efficace dans le traitement de la n&eacute;phrite de lupus murin. Cette &eacute;tude visait &agrave; examiner l&#39;effet th&eacute;rapeutique de la triptolide et tripdiolide sur lupique &eacute;tablis en (NZB x NZW) souris F1.

Un traitement efficace pour n&eacute;phrite dans (NZB x NZW) F1 souris avec triptolide et tripdiolide, les composants actifs principaux de la Chinese herbal rem&eacute;dier Tripterygium wilfordii Hook F.

Triptolide und Tripdiolide werden gedacht, um die aktiven Bestandteile von der chinesischen antirheumatischer pflanzliche Heilmittel Wilfords Dreifl&uuml;gelfrucht Hook F, zu sein, die nachweislich wirksam gegen murine Lupusnephritis. Diese Studie wurde unternommen, um die therapeutische Wirkung von Triptolide und Tripdiolide auf etablierten Lupusnephritis in (NZB X NZW) untersuchen F1-M&auml;use.

Wirksame Therapie f&uuml;r Nephritis in (NZB X NZW) F1 M&auml;use mit Triptolide und Tripdiolide, die wichtigsten aktiven Komponenten der chinesischen Kr&auml;uter beheben Wilfords Dreifl&uuml;gelfrucht Hook F.

Triptolide e tripdiolide sono pensati per essere componenti attivi del rimedio di erbe cinesi antireumatici Tripterygium wilfordii Hook F, che ha dimostrato di essere efficace nel trattamento della nefrite lupica murino. Questo studio &egrave; stato intrapreso per esaminare l&#39;effetto terapeutico di triptolide e tripdiolide su nefrite lupica stabilito in (NZB x NZW) F1 topi.

Terapia efficace per la nefrite in (NZB x NZW) topi F1 con triptolide e tripdiolide, i principali componenti attivi del cinese di erbe rimedio Tripterygium wilfordii Hook F.

Triptolide &#x3068; tripdiolide &#x306F;&#x4E2D;&#x56FD;&#x306E;&#x6F22;&#x65B9;&#x85AC;&#x306E;&#x6297;&#x30EA;&#x30A6;&#x30DE;&#x30C1; Tripterygium wilfordii &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30FB; &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30B9;&#x814E;&#x708E;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x6709;&#x52B9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D5;&#x30C3;&#x30AF; F &#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76; (NZB x &#x52D5;&#x7269;) &#x3067;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30B9;&#x814E;&#x708E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B; triptolide &#x3068; tripdiolide &#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F; F1 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3002;

&#x814E;&#x708E; (NZB x &#x52D5;&#x7269;) &#x3067;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x7642;&#x6CD5; F1 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; triptolide &#x3068; tripdiolide&#x3001;&#x4E2D;&#x56FD;&#x306E;&#x30CF;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x4E3B;&#x6210;&#x5206;&#x6551;&#x6E08; Tripterygium wilfordii &#x30D5;&#x30C3;&#x30AF; f.

Triptolide &#xBC0F; tripdiolide &#xC57D;&#xCD08; &#xC694;&#xBC95; &#xC911;&#xAD6D; antirheumatic Tripterygium wilfordii murine &#xB8E8; &#xD478; &#xC2A4; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC5FC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD6C4;&#xD06C; F&#xC758; &#xB2A5;&#xB3D9; &#xBD80;&#xD488; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; (NZB x NZW)&#xC5D0; &#xC124;&#xB9BD; &#xB41C; &#xB8E8; &#xD478; &#xC2A4; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC5FC;&#xC5D0; triptolide&#xC640; tripdiolide&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC80;&#xC0AC; &#xCC29;&#xC218;&#xB294; F1 &#xC950;.

&#xC2E0;&#xC7A5; &#xC5FC; (NZB x NZW)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; triptolide&#xC640; tripdiolide, &#xC911;&#xAD6D; &#xD5C8;&#xBC8C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xD65C;&#xC131; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; F1 &#xC950; &#xAD6C;&#xC81C; Tripterygium wilfordii &#xD6C4;&#xD06C; f.

Triptolide y tripdiolide se cree que los componentes activos del remedio herbario antirreum&aacute;ticos China Tripterygium wilfordii gancho F, que ha demostrado ser eficaz en el tratamiento de la nefritis l&uacute;pica murino. Este estudio fue emprendido para examinar el efecto terap&eacute;utico del triptolide y tripdiolide en la nefritis l&uacute;pica establecido en (NZB x NZB) ratones de la F1.

Tratamiento efectivo para la nefritis en (NZB x NZB) F1 ratones con triptolide y tripdiolide, los principales componentes activos de los herbarios chinos remediar Tripterygium wilfordii Hook f el.

&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x660E; Cdk5 &#x4FC3;&#x4F7F;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F38;&#x5C55;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x8C03;&#x67E5;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x5E94;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x968F;&#x7740;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x77E9;&#x9635;&#x7C98;&#x8FDE;&#x548C;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x3001; Cdk5(Y15) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C; Cdk5 &#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;Cdk5(Y15) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x88AB;&#x6291;&#x5236; PP1&#xFF0C;Src &#x5BB6;&#x65CF;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6807;&#x8BC6; PP1 &#x654F;&#x611F;&#x6FC0;&#x9176;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8F6C;&#x67D3; siRNA &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4E3A;&#x4E2D;&#x56FD;&#x8BC1;&#x76D1;&#x4F1A;&#x53CA;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x53EA;&#x6709;&#x4E2D;&#x56FD;&#x8BC1;&#x76D1;&#x4F1A; siRNA &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6291;&#x5236; Cdk5(Y15) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;Cdk5(pY15) &#x548C;&#x5176;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;p35&#xFF0C;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E2D;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E; colocalized&#x3002;&#x8981;&#x68C0;&#x67E5; Cdk5 &#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6291;&#x5236; Cdk5 &#x6D3B;&#x52A8;&#x8FD8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x5728; 15 &#x4E07;&#x4EBF;&#x65E5;&#x5143;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF1A; Cdk5(Y15F) &#x548C; Cdk5(K33T) &#x548C; siRNA &#x6291;&#x5236; Cdk5&#x3002; &#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5C31;&#x4E25;&#x91CD;&#x6291;&#x5236;&#x6FC0;&#x9176;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x533A;&#x5206; Cdk5 &#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x548C; Cdk5(pY15) &#x53EF;&#x80FD;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x65E0;&#x6291;&#x5236;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728; 15 &#x4E07;&#x4EBF;&#x65E5;&#x5143;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF1A; &#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x4E0E; olomoucine &#x548C;&#x6FC0;&#x9176;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;Cdk5(D144N) &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6709;&#x4E86;&#x53D8;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6210;&#x672A;&#x88AB;&#x62E6;&#x622A;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Cdk5(Y15) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x53CA; Cdk5 &#x6D3B;&#x6027;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#x548C;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6210;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;

Cdk5(Y15) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C; Cdk5 &#x6D3B;&#x6027;&#x5728;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

Previous studies have shown that Cdk5 promotes lens epithelial cell adhesion. Here we use a cell spreading assay to investigate the mechanism of this effect. As cells spread, forming matrix adhesions and stress fibers, Cdk5(Y15) phosphorylation and Cdk5 kinase activity increased. Cdk5(Y15) phosphorylation was inhibited by PP1, a Src family kinase inhibitor. To identify the PP1-sensitive kinase, we transfected cells with siRNA oligonucleotides for cSrc and related kinases. Only cSrc siRNA oligonucleotides inhibited Cdk5(Y15) phosphorylation. Cdk5(pY15) and its activator, p35, colocalized with actin in stress fibers. To examine Cdk5 function, we inhibited Cdk5 activity under conditions that also prevent phosphorylation at Y15: expression of kinase inactive mutations Cdk5(Y15F) and Cdk5(K33T), and siRNA suppression of Cdk5. Stress fiber formation was severely inhibited. To distinguish between a requirement for Cdk5 kinase activity and a possible adaptor role for Cdk5(pY15), we used two methods that inhibit kinase activity without inhibiting phosphorylation at Y15: pharmacological inhibition with olomoucine and expression of the kinase inactive mutation, Cdk5(D144N). Stress fiber organization was altered, but stress fiber formation was not blocked. These findings indicate that Cdk5(Y15) phosphorylation and Cdk5 activity have distinct functions required for stress fiber formation and organization, respectively.

Distinct functions of Cdk5(Y15) phosphorylation and Cdk5 activity in stress fiber formation and organization.

Des &eacute;tudes ant&eacute;rieures ont montr&eacute; que Cdk5 favorise l&#39;adh&eacute;rence de cellules &eacute;pith&eacute;liales de lentille. Ici, nous utilisons une cellule de test pour &eacute;tudier le m&eacute;canisme de cet effet. Comme la propagation des cellules, formant des adh&eacute;rences de la matrice et fibres de stress, la phosphorylation de Cdk5(Y15) et a augment&eacute; l&#39;activit&eacute; kinase Cdk5. Cdk5(Y15) la phosphorylation est inhib&eacute;e par PP1, un inhibiteur de kinase de famille de Src. Pour identifier la kinase PP1-sensibles, nous transfect&eacute; des cellules avec des siARN oligonucl&eacute;otides CCRS et kinases connexes. Seulement CCRS siARN oligonucl&eacute;otides inhibent la phosphorylation de Cdk5(Y15). Cdk5(pY15) et son activateur, p35, colocalis&eacute; avec l&#39;actine dans les fibres de stress. Pour examiner la fonction Cdk5, nous a inhib&eacute; l&#39;activit&eacute; Cdk5 dans des conditions qui emp&ecirc;chent &eacute;galement la phosphorylation &agrave; Y15 : expression de mutations inactif kinase, Cdk5(Y15F) et Cdk5(K33T) et siRNA de suppression de la formation de fibres de Stress Cdk5. est fortement inhib&eacute;e. Pour distinguer entre une exigence pour l&#39;activit&eacute; de la kinase Cdk5 et un r&ocirc;le d&#39;adaptateur possible pour Cdk5(pY15), nous avons utilis&eacute; deux m&eacute;thodes qui inhibent l&#39;activit&eacute; de la kinase sans inhiber la phosphorylation &agrave; Y15 : inhibition pharmacologique avec olomoucine et l&#39;expression de la mutation de la kinase inactive, Cdk5(D144N). Organisation de fibres de stress a &eacute;t&eacute; alt&eacute;r&eacute;e, mais formation de fibres de stress n&#39;a pas &eacute;t&eacute; bloqu&eacute;e. Ces r&eacute;sultats indiquent que la phosphorylation de Cdk5(Y15) et activit&eacute; Cdk5 ont des fonctions distinctes requises pour la formation de fibres de stress et d&#39;organisation, respectivement.

Fonctions distinctes de la phosphorylation de Cdk5(Y15) et activit&eacute; Cdk5 dans la formation de fibres de stress et d&#39;organisation.

Fr&uuml;here Studien zeigten, dass Cdk5 Objektiv epithelial Cell Adhesion f&ouml;rdert. Hier verwenden wir eine Zelle verbreiten Assay, um den Mechanismus f&uuml;r diesen Effekt zu untersuchen. Wie Ausbreitung Zellen, Bildung von Matrix Adh&auml;sionen und Spannung Fasern, Cdk5(Y15) Phosphorylierung und Cdk5 Kinaseaktivit&auml;t erh&ouml;ht. Cdk5(Y15) Phosphorylierung wurde durch PP1, ein Src Familie Kinase-Hemmer gehemmt. Um das PP1-Sensitive-Kinase zu identifizieren, die wir transfected Zellen mit SiRNA Oligonukleotide f&uuml;r die cSrc und verwandte Kinasen. Nur cSrc SiRNA Oligonukleotide gehemmt Cdk5(Y15) Phosphorylierung. Cdk5(pY15) und seine Aktivator, p35, colocalized mit Aktin in Spannung Fasern. Um Cdk5 Funktion zu untersuchen, wir gehemmt Cdk5 Aktivit&auml;t unter Bedingungen, die auch die Phosphorylierung an Y15 verhindern: Ausdruck der inaktiven Kinase-Mutationen, Cdk5(Y15F) und Cdk5(K33T) und SiRNA Unterdr&uuml;ckung Cdk5. Stress-Faser-Formation wurde stark gehemmt. Zur Unterscheidung zwischen einer Anforderung f&uuml;r Cdk5 Kinase-Aktivit&auml;t und eine m&ouml;gliche Adapter-Rolle f&uuml;r Cdk5(pY15), die wir verwendet zwei Methoden, die Kinase-Aktivit&auml;t zu hemmen, ohne Hemmung Phosphorylierung an Y15: pharmakologische Hemmung mit Olomoucine und Ausdruck der Kinase inaktive Mutation, Cdk5(D144N). Stress-Faser-Organisation wurde ge&auml;ndert, aber Spannung Faser Bildung wurde nicht blockiert. Diese Befunde zeigen, dass Cdk5(Y15) Phosphorylierung und Cdk5 Aktivit&auml;t unterschiedliche Funktionen f&uuml;r Druck-Faser-Bildung und Organisation, beziehungsweise haben.

Verschiedene Funktionen der Cdk5(Y15) Phosphorylierung und Cdk5 Aktivit&auml;t bei Stress-Faser-Entstehung und Organisation.

Studi precedenti hanno mostrato che Cdk5 favorisce l&#39;adesione delle cellule epiteliali lente. Qui usiamo una cella diffusione dosaggio per indagare il meccanismo di questo effetto. Diffusione di cellule, formando aderenze matrice e fibre di stress, Cdk5(Y15) fosforilazione e Cdk5 aumentato l&#39;attivit&agrave; della chinasi. Cdk5(Y15) fosforilazione &egrave; stata inibita da PP1, un inibitore della chinasi della famiglia Src. Per identificare la chinasi PP1-sensibili, noi transfected le cellule con oligonucleotidi siRNA per cSrc e relative chinasi. Solo cSrc siRNA oligonucleotides inibito Cdk5(Y15) fosforilazione. Cdk5(pY15) e suo attivatore, p35, colocalized con actina in fibre di stress. Per esaminare la funzione Cdk5, abbiamo inibito Cdk5 attivit&agrave; in condizioni che impediscono anche la fosforilazione a Y15: espressione delle mutazioni inattivo chinasi Cdk5(Y15F) e Cdk5(K33T) e siRNA soppressione della formazione di fibra Cdk5. Stress era severamente inibito. Per distinguere tra un requisito per l&#39;attivit&agrave; della chinasi Cdk5 e un ruolo possibile adattatore per Cdk5(pY15), abbiamo utilizzato due metodi che inibiscono l&#39;attivit&agrave; della chinasi senza inibendo la fosforilazione a Y15: inibizione farmacologica con espressione della mutazione chinasi inattiva, Cdk5(D144N) e olomoucine. Organizzazione fibra lo stress &egrave; stato alterato, ma lo stress fibra formazione non &egrave; stata bloccata. Questi risultati indicano che la fosforilazione Cdk5(Y15) e Cdk5 attivit&agrave; hanno distinte funzioni necessarie per la formazione di fibra lo stress e l&#39;organizzazione, rispettivamente.

Funzioni distinte di fosforilazione della Cdk5(Y15) e attivit&agrave; Cdk5 stress fibra formazione e organizzazione.

&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;Cdk5 &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A66;&#x91D1;&#x3092;&#x62E1;&#x6563;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5E83;&#x304C;&#x308A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;Cdk5 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F; Cdk5(Y15) &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x7652;&#x7740;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Cdk5(Y15) &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; PP1&#x3001;Src &#x5BB6;&#x65CF;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;PP1 &#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;siRNA &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; cSrc &#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;CSrc siRNA &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x307F; Cdk5(Y15) &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Cdk5(pY15) &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;p35, &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Cdk5 &#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; Cdk5 &#x6D3B;&#x6027;&#x3082; Y15 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x6291;&#x5236;: Cdk5&#x3002; &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x306E; Cdk5(Y15F) &#x3068; Cdk5(K33T)&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; siRNA &#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3002;Cdk5 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4F5C;&#x696D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3068;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5F79;&#x5272; Cdk5(pY15) &#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; Y15 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;: &#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x51E6;&#x7F6E;&#x3068;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3001;Cdk5(D144N) &#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3002;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D44;&#x7E54;&#x304C;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;Cdk5(Y15) &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068; Cdk5 &#x6D3B;&#x6027;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x7D44;&#x7E54;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Cdk5(Y15) &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x7D44;&#x7E54; Cdk5 &#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3002;

&#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; Cdk5 &#xB80C;&#xC988; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xCD09;&#xC9C4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC654;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xD655;&#xC0B0; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC140;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;. &#xD655;&#xC0B0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xD615;&#xC131; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC720;&#xCC29; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720;, Cdk5(Y15) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; Cdk5 &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. Cdk5(Y15) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; PP1, Src &#xAC00;&#xC871; kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. PP1 &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xD0A4;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; cSrc &#xBC0F; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; kinases siRNA oligonucleotides &#xC140; &#xD398;. &#xB9CC; cSrc siRNA oligonucleotides Cdk5(Y15) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xC800;&#xD574;. Cdk5(pY15) &#xBC0F; &#xADF8; &#xD65C;&#xC131;, p35, &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; &#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; colocalized. Cdk5 &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC80;&#xC0AC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; y15&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; Cdk5 &#xD65C;&#xB3D9; &#xC800;&#xD574;: Cdk5(Y15F) &#xBC0F; Cdk5(K33T), siRNA Cdk5. &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC2EC;&#xAC01; &#xD558; &#xAC8C; &#xC800;&#xD574; &#xB2C8; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;. Y15&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; Cdk5 &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C;&#xC640; cdk5(py15)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xC5ED;&#xD560; &#xAD6C;&#xBD84;: olomoucine&#xC640; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; kinase, cdk5(d144n)&#xC758; &#xC2DD; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC800;&#xD574;. &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xC870;&#xC9C1; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xD615;&#xC131;&#xC740; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; Cdk5(Y15) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; Cdk5 &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774; &#xAC01;&#xAC01; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xACE0;&#xC720; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cdk5(Y15) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; Cdk5 &#xD65C;&#xB3D9; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xC720; &#xAE30;&#xB2A5;.

Estudios anteriores han demostrado que la Cdk5 promueve adherencia de c&eacute;lula epitelial de la lente. Aqu&iacute; utilizamos una c&eacute;lula separarse de ensayo para investigar el mecanismo de este efecto. Como la propagaci&oacute;n de las c&eacute;lulas, formando adherencias de matriz y fibras de estr&eacute;s y fosforilaci&oacute;n Cdk5(Y15) quinasa Cdk5 aumentada. Fosforilaci&oacute;n de Cdk5(Y15) fue inhibida por PP1, un inhibidor de la cinasa de la familia Src. Para identificar la quinasa PP1-sensible, nos transfectadas c&eacute;lulas con oligonucle&oacute;tidos siRNA cSrc y quinasas relacionadas. S&oacute;lo cSrc siRNA oligonucle&oacute;tidos inhiben la fosforilaci&oacute;n de Cdk5(Y15). Cdk5(pY15) y su activador, p35, colocalized con la actina en fibras de estr&eacute;s. Para examinar la funci&oacute;n de la Cdk5, nos inhibe actividad Cdk5 en condiciones que impiden tambi&eacute;n la fosforilaci&oacute;n en Y15: expresi&oacute;n de las mutaciones inactivo quinasa supresi&oacute;n siRNA y Cdk5(K33T) y Cdk5(Y15F) de formaci&oacute;n de la fibra de Cdk5. estr&eacute;s fue inhibida severamente. Para distinguir entre un requisito para la actividad de la quinasa Cdk5 y un papel adaptador posible para Cdk5(pY15), se utilizaron dos m&eacute;todos que inhiben la actividad de la quinasa sin inhibir la fosforilaci&oacute;n en Y15: inhibici&oacute;n farmacol&oacute;gica con expresi&oacute;n de la mutaci&oacute;n inactiva de la cinasa, Cdk5(D144N) y olomoucine. Organizaci&oacute;n de fibra de estr&eacute;s fue alterado, pero no estaba bloqueada la formaci&oacute;n de la fibra del estr&eacute;s. Estos resultados indican que la fosforilaci&oacute;n de Cdk5(Y15) y Cdk5 actividad tienen distintas funciones necesarias para la formaci&oacute;n de la fibra del estr&eacute;s y organizaci&oacute;n, respectivamente.

Distintas funciones de fosforilaci&oacute;n de Cdk5(Y15) y actividad de la Cdk5 en formaci&oacute;n de la fibra del estr&eacute;s y organizaci&oacute;n.

&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x955C;&#x5934;&#x7684;&#x5148;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EF4;&#x62A4;&#x524D;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x524D;&#x4F53;&#x6C60;&#x8C03;&#x8282;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x662F;&#x5426; Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x540E;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x9700;&#x8981;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x5E76;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8C03;&#x67E5; Notch2 &#x548C; Jagged1 &#x7684;&#x4F5C;&#x7528; (Jag1) &#x5728;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x5927;&#x9F20;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x5916;&#x690D;&#x4F53;&#x672F; FGF-2 &#x4F9D;&#x8D56;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;FGF &#x8BF1;&#x5BFC; Jag1 &#x8868;&#x8FBE;&#x53CA; Notch2 12-24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x5185;&#x4FE1;&#x53F7; &#xFF08;&#x5982;&#x6FC0;&#x6D3B; Notch2 &#x80DE;&#x5185;&#x57DF; (N2ICD) &#x7684;&#x5916;&#x8868;&#x6765;&#x770B;&#xFF09;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x66F4;&#x6539;&#x4E86;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7F3A;&#x53E3;&#x6548;&#x5E94;&#xFF0C;Hes5&#xFF0C;(N cad)&#x3001; N-&#x9499;&#x7C98;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0A;&#x8C03;&#x548C;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; E-&#x9499; (E-cad)&#xFF0C;&#x9499;&#x5F00;&#x5173;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x3002;Jag1 &#x611F;&#x5E94;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x963B;&#x6B62;&#x7684; U0126&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242; MAPK/ERK &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x901A;&#x8FC7;&#x6B64;&#x9014;&#x5F84;&#x4E0B;&#x6E38; FGF &#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x6FC0;&#x6D3B; MAPK/ERK &#x4FE1;&#x53F7; &#xFF08;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; &#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x884D;&#x751F;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; &#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;) &#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x56E0;&#x7D20;&#x786E;&#x5B9E;&#x4E0D;&#x4FC3;&#x4F7F; Jag1&#x3002;Notch &#x4F7F;&#x7528;&#x4F3D;&#x739B; secretase &#x6291;&#x5236;&#x5242; DAPT &#x548C; L 685,458 &#x6216;&#x53CD; Jag1 &#x6297;&#x4F53;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0B;&#x964D;&#x8868;&#x660E;&#x69FD;&#x53E3;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6A2A;&#x5411;&#x611F;&#x5E94;&#x7684; Jag1 FGF &#x4F9D;&#x8D56;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x51CF;&#x5C11; N-cad&#x3001; &#x8868;&#x8FBE;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;p57Kip2&#xFF0C;&#x5728;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D; Notch &#x4E3A;&#x6307;&#x793A;&#x7740;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x69FD;&#x53E3;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; Jag1 &#x4FA7;&#x611F;&#x5E94; FGF &#x4F9D;&#x8D56;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;

&#x9700;&#x8981; Jagged1 FGF &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5206;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x6A2A;&#x5411;&#x611F;&#x5E94; notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

Previous studies of the developing lens have shown that Notch signaling regulates differentiation of lens fiber cells by maintaining a proliferating precursor pool in the anterior epithelium. However, whether Notch signaling is further required after the onset of fiber cell differentiation is not clear. This work investigates the role of Notch2 and Jagged1 (Jag1) in secondary fiber cell differentiation using rat lens epithelial explants undergoing FGF-2 dependent differentiation in vitro. FGF induced Jag1 expression and Notch2 signaling (as judged by the appearance of activated Notch2 Intracellular Domain (N2ICD)) within 12-24 h. These changes were correlated with induction of the Notch effector, Hes5, upregulation of N-cadherin (N-cad), and downregulation of E-cadherin (E-cad), a cadherin switch characteristic of fiber cell differentiation. Induction of Jag1 was efficiently blocked by U0126, a specific inhibitor of MAPK/ERK signaling, indicating a requirement for signaling through this pathway downstream of the FGF receptor. Other growth factors that activate MAPK/ERK signaling (EGF, PDGF, IGF) did not induce Jag1. Inhibition of Notch signaling using gamma secretase inhibitors DAPT and L-685,458 or anti-Jag1 antibody markedly decreased FGF-dependent expression of Jag1 demonstrating Notch-dependent lateral induction. In addition, inhibition of Notch signaling reduced expression of N-cad, and the cyclin dependent kinase inhibitor, p57Kip2, indicating a direct role for Notch signaling in secondary fiber cell differentiation. These results demonstrate that Notch-mediated lateral induction of Jag1 is an essential component of FGF-dependent lens fiber cell differentiation.

Notch signaling is required for lateral induction of Jagged1 during FGF-induced lens fiber differentiation.

Des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures de la lentille en d&#xE9;veloppement ont montr&#xE9; que la signalisation Notch r&#xE9;gule la diff&#xE9;renciation des cellules des fibres de lentilles par le maintien d&#x26;#39;un pool de pr&#xE9;curseur prolif&#xE9;ration dans l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium ant&#xE9;rieur. Toutefois, si la signalisation Notch est en outre n&#xE9;cessaire apr&#xE8;s le d&#xE9;but de la diff&#xE9;renciation cellulaire des fibres n&#x26;#39;est pas clair. Ce travail &#xE9;tudie le r&#xF4;le de Notch2 et Jagged1 (JAG1) dans la diff&#xE9;renciation des fibres cellule secondaire &#xE0; partir d&#x26;#39;explants de lentilles de rat &#xE9;pith&#xE9;liales subissent le FGF-2 de diff&#xE9;renciation d&#xE9;pend in vitro. FGF induit JAG1 expression et de signalisation (NOTCH2 &#xE0; en juger par l&#x26;#39;apparence de activ&#xE9; Notch2 domaine intracellulaire (N2ICD)) dans les 12-24 h. Ces changements ont &#xE9;t&#xE9; corr&#xE9;l&#xE9;es avec l&#x26;#39;induction de la voie Notch effecteur, Hes5, la r&#xE9;gulation positive de la N-cadh&#xE9;rine (N-cad), et la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de la E-cadh&#xE9;rine (E-cad), une caract&#xE9;ristique interrupteur cadh&#xE9;rine de la diff&#xE9;renciation cellulaire de la fibre. L&#x26;#39;induction de JAG1 a &#xE9;t&#xE9; bloqu&#xE9; efficacement par U0126, un inhibiteur sp&#xE9;cifique de MAPK / ERK, indiquant une exigence pour la signalisation &#xE0; travers cette voie en aval du r&#xE9;cepteur FGF. Autres facteurs de croissance qui activent MAPK / ERK (EGF, le PDGF, IGF) n&#x26;#39;a pas induit de JAG1. L&#x26;#39;inhibition de la signalisation Notch en utilisant gamma s&#xE9;cr&#xE9;tase inhibiteurs DAPT et L-685, 458 ou anti-JAG1 anticorps nettement diminu&#xE9; FGF-d&#xE9;pendante l&#x26;#39;expression de Notch JAG1 d&#xE9;montrant l&#x26;#39;induction li&#xE9;e lat&#xE9;rale. En outre, l&#x26;#39;inhibition de la signalisation Notch r&#xE9;duit l&#x26;#39;expression de la N-cad, et l&#x26;#39;inhibiteur de kinase cycline-d&#xE9;pendante, p57KIP2, indiquant un r&#xF4;le direct pour la signalisation Notch dans la diff&#xE9;renciation cellulaire des fibres secondaires. Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que Notch m&#xE9;di&#xE9;e par induction lat&#xE9;rale de JAG1 est une composante essentielle de la FGF-d&#xE9;pendante de la diff&#xE9;renciation cellulaire lentille de fibre.

De signalisation Notch est n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;induction lat&#xE9;rale de Jagged1 Pendant FGF-induite diff&#xE9;renciation des fibres optique

Fr&uuml;here Studien der entwickelnden Linse zeigten, dass Notch Signalisierung Differenzierung Objektiv Faser Zellen reguliert durch die Pflege eines wuchernden Vorl&auml;ufer-Pools in der vorderen Epithel. Ob Notch Signalisierung weiter nach erforderlich ist ist der Beginn der Faser Zelldifferenzierung jedoch nicht klar. Diese Arbeit untersucht die Rolle von Notch2 und Jagged1 (Jag1) im sekund&auml;ren Faser Zelldifferenzierung mit Ratte Objektiv epitheliale Explantaten FGF-2 abh&auml;ngige Differenzierung in-vitro-unterzogen. FGF induzierte Jag1 Ausdruck und Notch2 Signalisierung (wie durch das Auftreten von aktivierten Notch2 intrazellul&auml;re Dom&auml;ne (N2ICD) beurteilt) innerhalb von 12-24 h. Diese &Auml;nderungen wurden mit Induktion von Notch Effektor, Hes5, Hochregulation von N-Cadherin (N-Cad) und Heraufregulation des E-Cadherin (E-Cad), ein Cadherin-Schalter, die charakteristisch f&uuml;r Faser-Zelldifferenzierung korreliert. Induktion von Jag1 wurde effizient durch U0126, einen speziellen Inhibitor der MAPK/ERK Signalisierung, angibt, eine Voraussetzung f&uuml;r die Signalisierung durch diese Pathway stromabw&auml;rts von der FGF-Rezeptor blockiert. Andere Wachstumsfaktoren, die MAPK/ERK Signalisierung (EGF, PDGF, IGF) aktivieren nicht Jag1 induzieren. Hemmung der Notch Signalisierung mit Gamma-Sekretase-Inhibitoren DAPT und L-685.458 oder Anti-Jag1 Antik&ouml;rper deutlich zur&uuml;ckgegangen FGF-abh&auml;ngigen Ausdruck Jag1 demonstrieren Notch-abh&auml;ngige seitliche Induktion. Zus&auml;tzlich reduziert Hemmung Kerbe zu signalisieren, Ausdruck der N-Cad und der cyclin abh&auml;ngigen Kinasehemmer, p57Kip2, eine direkte Rolle f&uuml;r Notch signalisieren in sekund&auml;ren Faser Zelldifferenzierung angibt. Diese Ergebnisse zeigen, dass Notch-vermittelte seitliche Induktion von Jag1 ein wesentlicher Bestandteil der FGF-abh&auml;ngige Objektiv Faser Zelldifferenzierung.

Signalisierung der Kerbe ist f&uuml;r seitliche Induktion von Jagged1 w&auml;hrend FGF-induzierte Objektiv Faser Differenzierung erforderlich.

Studi precedenti della lente in via di sviluppo hanno mostrato che Notch signaling regola la differenziazione delle cellule della fibra ottica attraverso il mantenimento di un pool di precursori proliferante nell&#39;epitelio anteriore. Tuttavia, se la tacca di segnalazione &egrave; necessaria ulteriore dopo l&#39;insorgenza della differenziazione delle cellule di fibra non &egrave; chiara. Questo lavoro indaga il ruolo di Notch2 e Jagged1 (Jag1) nel differenziamento cellulare fibra secondaria usando ratto lente epiteliali espianti in fase di FGF-2 dipendente dalla differenziazione in vitro. FGF indotta Jag1 espressione e Notch2 segnalazione (come giudicato dall&#39;apparizione di attivato Notch2 dominio intracellulare (N2ICD)) entro 12-24 h. Queste modifiche erano correlate con induzione di effector il tacca, Hes5, sovraregolazione di N-caderina (N-cad) e downregulation di E-caderina E (cad), un interruttore di cadherin caratteristico di differenziazione delle cellule di fibra. Induzione di Jag1 efficiente &egrave; stato bloccato da U0126, un inibitore specifico di MAPK/ERK di segnalazione, che indica un requisito per la segnalazione attraverso questo percorso a valle del recettore FGF. Altri fattori di crescita che attivano la via MAPK/ERK segnalazione (EGF, PDGF, IGF) non ha indotto Jag1. Inibizione della tacca di segnalazione utilizzando gamma secretasi inibitori DAPT e L-685.458 o anti-Jag1 anticorpo marcatamente diminuita espressione di FGF-dipendente di Jag1 dimostrando induzione laterale-tacca-dipendente. Inoltre, l&#39;inibizione della tacca di segnalazione ridotta espressione di N-cad e l&#39;inibitore della chinasi dipendente cyclin, p57Kip2, che indica un ruolo diretto per tacca di segnalazione nel differenziamento cellulare fibra secondaria. Questi risultati dimostrano che mediata da tacca laterale induzione di Jag1 &egrave; un componente essenziale di differenziazione delle cellule di FGF-dipendente lente fibra.

Tacca di segnalazione &egrave; necessaria per l&#39;induzione laterale del Jagged1 durante la differenziazione di fibre lente FGF-indotta.

&#x958B;&#x767A;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x304C;&#x524D;&#x65B9;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6C34;&#x6676;&#x4F53;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x5F8C;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;FGF-2&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x7D4C;&#x3066;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6C34;&#x6676;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x5916;&#x690D;&#x7247;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Notch2&#x3068;Jagged1&#xFF08;JAG1&#xFF09;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002; FGF&#x8A98;&#x5C0E;JAG1&#x5F0F;&#x3068;12&#x304B;&#x3089;24&#x6642;&#x9593;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;Notch2&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Notch2&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;N2ICD&#xFF09;&#x306E;&#x5916;&#x89B3;&#x3067;&#x5224;&#x65AD;&#xFF09;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3001;Hes5&#x3001;N-&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;N-CAD&#xFF09;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;E-&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;E-CAD&#xFF09;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002; JAG1&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;FGF&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;U0126&#x3001;MAPK / ERK&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MAPK / ERK&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#xFF08;EGF&#x3001;PDGF&#x3001;IGF&#xFF09;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x4ED6;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;JAG1&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; &#x3B3;&#x30BB;&#x30AF;&#x30EC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;DAPT&#x3068;L-685&#x3001;458&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6297;JAG1&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;JAG1&#x30C7;&#x30E2;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;FGF-&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3059;N-CAD&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;p57Kip2&#x306F;&#x3001;Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x307B;&#x304B;&#x306B;&#x3001;&#x963B;&#x5BB3;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;JAG1&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6A2A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;FGF&#x4F9D;&#x5B58;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306F;FGF-&#x8A98;&#x5C0E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D;&#x306B;Jagged1&#x306E;&#x6A2A;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;

&#xAC1C;&#xBC1C; &#xB80C;&#xC988;&#xC758; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC55E;&#xCABD;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0; &#xBC29;&#xC9C0;&#xD560; &#xC804;&#xC870; &#xD480;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xC5EC; &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD6C4; &#xCD94;&#xAC00; &#xD544;&#xC694; &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5EC;&#xBD80; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; notch2&#xC640; jagged1&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xC870;&#xC0AC; (Jag1) 2 &#xCC28; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; FGF 2 &#xC885;&#xC18D; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xCCB4; &#xC678;&#xB97C; &#xBC1B;&#xACE0; &#xC0C1;&#xD53C; explants &#xB80C;&#xC988; &#xC950;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. FGF Jag1 &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; Notch2 12-24 &#xC2DC;&#xAC04; &#xC774;&#xB0B4; (&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; Notch2 &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (N2ICD)&#xC758; &#xC678;&#xBAA8;&#xB85C; &#xD310;&#xB2E8;)&#xB85C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xB178;&#xCE58; &#xC774;&#xD399;&#xD130;, Hes5, N-cadherin (N-cad)&#xC758; upregulation &#xBC0F; E-cadherin (&#xC804;&#xC790; cad), &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; cadherin &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&#xC758; downregulation&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xD588;&#xB2E4;. Jag1&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; U0126, MAPK &#xC2E0;&#xD638;, &#xD558;&#xB958; FGF &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; ERK&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. MAPK/ERK (EGF, PDGF, IGF) &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;&#xB294; jag1&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xB9C8; secretase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; DAPT &#xBC0F; L-685,458 &#xB610;&#xB294; &#xC548;&#xD2F0;-Jag1 &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xB178;&#xCE58;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xAC10;&#xC18C; FGF &#xC885;&#xC18D; &#xC2DD; jag1&#xC758; &#xB178;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xCE21;&#xBA74; &#xC720;&#xB3C4; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5B5;&#xC81C; &#xAC10;&#xC18C; N cad &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; cyclin &#xC758;&#xC874; kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; p57Kip2, &#xB178;&#xCE58; &#xBCF4;&#xC870; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D; jag1&#xC758; &#xCE21;&#xBA74; &#xC720;&#xB3C4; &#xB178;&#xCE58; &#xC911;&#xC7AC; FGF &#xC885;&#xC18D; &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; FGF &#xC720;&#xB3C4; &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; jagged1&#xC758; &#xCE21;&#xBA74; &#xC720;&#xB3C4; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;.

Los estudios previos de la lente en desarrollo han demostrado que la muesca de se&#xF1;alizaci&#xF3;n regula la diferenciaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas de fibra de lentes mediante el mantenimiento de una piscina precursor proliferantes en el epitelio anterior. Sin embargo, si la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Notch Se requiere adem&#xE1;s despu&#xE9;s del inicio de la diferenciaci&#xF3;n celular de fibra no est&#xE1; claro. Este trabajo investiga el papel de Notch2 y Jagged1 (Jag1) en la diferenciaci&#xF3;n celular secundaria de fibra utilizando explantes de rata epiteliales de la lente se someten a FGF-2 dependiente de la diferenciaci&#xF3;n in vitro. FGF inducida Jag1 expresi&#xF3;n y Notch2 se&#xF1;alizaci&#xF3;n (a juzgar por la apariencia de activado Notch2 dominio intracelular (N2ICD)) dentro de las 12-24 h. Estos cambios se correlacionaron con la inducci&#xF3;n de la Notch efector, HES5, la regulaci&#xF3;n positiva de la cadherina N (N-CAD), y la regulaci&#xF3;n a la baja de la E-cadherina (E-CAD), una caracter&#xED;stica interruptor de cadherina de la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas de fibra. La inducci&#xF3;n de Jag1 fue bloqueada eficientemente por U0126, un inhibidor espec&#xED;fico de MAPK / ERK se&#xF1;alizaci&#xF3;n, lo que indica un requisito para la se&#xF1;alizaci&#xF3;n a trav&#xE9;s de esta v&#xED;a aguas abajo del receptor de FGF. Otros factores de crecimiento que activan MAPK / ERK se&#xF1;alizaci&#xF3;n (EGF, PDGF, IGF) no indujo Jag1. La inhibici&#xF3;n de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Notch con inhibidores de la gamma secretasa DAPT y L-685, 458 o anticuerpo anti-Jag1 disminuy&#xF3; notablemente el FGF-dependiente de la expresi&#xF3;n de Jag1 demostrando Notch-dependen de la inducci&#xF3;n lateral. Adem&#xE1;s, la inhibici&#xF3;n de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n Notch reduce la expresi&#xF3;n de N-cad, y el inhibidor de quinasas dependientes de ciclina, p57KIP2, lo que indica un papel directo de se&#xF1;alizaci&#xF3;n Notch en la diferenciaci&#xF3;n celular secundaria de la fibra. Estos resultados demuestran que la muesca mediada por la inducci&#xF3;n lateral de Jag1 es un componente esencial de FGF-dependiente diferenciaci&#xF3;n celular lente de fibra.

La se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Notch es necesaria para la inducci&#xF3;n lateral de Jagged1 Durante el FGF-la diferenciaci&#xF3;n inducida por la lente de fibra

Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x662F;&#x9002;&#x5F53;&#x955C;&#x5934;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x6CA1;&#x6709;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E2A;&#x522B;&#x69FD;&#x53E3;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; Notch2 &#x6761;&#x4EF6;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x5C0F;&#x773C;&#x7403;&#x81F4;&#x75C5;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x77B3;&#x5B54;&#x5F00;&#x53E3;&#xFF0C;&#x7834;&#x574F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#xFF0C;&#x6700;&#x7EC8;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x524D;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x4E0D;&#x5168;&#x3001; &#x51C0;&#x5316;&#x5DE5;&#x827A;&#x7F3A;&#x9677;&#x548C;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#x6676;&#x4F53;&#x8868;&#x578B;&#x3002;Notch2 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; E14.5 &#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F66;&#x53A2;&#x8FD8;&#x6301;&#x7EED;&#x955C;&#x5934;&#x79F8;&#x79C6;&#x5C3D;&#x65E9; E11.5&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5F02;&#x5E38; DNA &#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x540E;&#x7684; Notch2 &#x7684;&#x635F;&#x5931;&#xFF0C;&#x6709;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5347;&#x9AD8; Cdkn1a &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8C03;&#x8282;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684; (p21Cip1)&#x3001; Ccnd2 (CyclinD2) &#x548C; Trp63 (p63) &#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x8C03;&#x8282; Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x518D;&#x52A0;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x8C03; Cdh1 (E-&#x9499;&#x7C98;&#x86CB;&#x767D;)&#x3002;Notch2 &#x53BB;&#x9664;&#x8FD8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5982;&#x5728; Rbpj &#x548C; Jag1 &#x6761;&#x4EF6;&#x7A81;&#x53D8;&#x955C;&#x5934;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;Notch2 &#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x673A;&#x573A;&#x5FEB;&#x7EBF;&#x6269;&#x6563;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x8C03;&#x8282;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; Notch2 &#x901A;&#x5E38;&#x963B;&#x6B62;&#x955C;&#x5934;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA; Notch2 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8C03;&#x8282;&#x955C;&#x5934;&#x5F62;&#x6001;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x64A4;&#x51FA;&#x548C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x3002;

Notch2 &#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x773C;&#x955C;&#x5934;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x6D88;&#x878D;&#x3002;

Notch signaling is essential for proper lens development, however the specific requirements of individual Notch receptors have not been investigated. Here we report the lens phenotypes of Notch2 conditionally mutant mice, which exhibited severe microphthalmia, reduced pupillary openings, disrupted fiber cell morphology, eventual loss of the anterior epithelium, fiber cell dysgenesis, denucleation defects, and cataracts. Notch2 mutants also had persistent lens stalks as early as E11.5, and aberrant DNA synthesis in the fiber cell compartment by E14.5. Gene expression analyses showed that upon loss of Notch2, there were elevated levels of the cell cycle regulators Cdkn1a (p21Cip1), Ccnd2 (CyclinD2), and Trp63 (p63) that negatively regulates Wnt signaling, plus down-regulation of Cdh1 (E-Cadherin). Removal of Notch2 also resulted in an increased proportion of fiber cells, as was found in Rbpj and Jag1 conditional mutant lenses. However, Notch2 is not required for AEL proliferation, suggesting that a different receptor regulates this process. We found that Notch2 normally blocks lens progenitor cell death. Overall, we conclude that Notch2-mediated signaling regulates lens morphogenesis, apoptosis, cell cycle withdrawal, and secondary fiber cell differentiation.

Conditional ablation of the Notch2 receptor in the ocular lens.

Signalisation Notch est essentiel pour le d&#xE9;veloppement lentille correcte, mais les exigences sp&#xE9;cifiques de r&#xE9;cepteurs Notch individuels n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; investigu&#xE9;s. Ici, nous rapportons les ph&#xE9;notypes de lentilles de NOTCH2 souris mutantes conditionnellement, qui pr&#xE9;sentaient microphtalmie s&#xE9;v&#xE8;re, la r&#xE9;duction des ouvertures pupillaires, perturb&#xE9; la morphologie des cellules de fibres, de la perte &#xE9;ventuelle de l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium, dysg&#xE9;n&#xE9;sie ant&#xE9;rieure cellule de fibres, de d&#xE9;fauts denucleation et les cataractes. NOTCH2 mutants &#xE9;galement eu tiges de lentilles persistants que d&#xE8;s E11.5, et la synth&#xE8;se d&#x26;#39;ADN aberrant dans le compartiment de la cellule de fibres par E14.5. Analyses d&#x26;#39;expression g&#xE9;nique ont montr&#xE9; que lors de la perte de Notch2, il y avait des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s de la r&#xE9;glementation du cycle cellulaire CDKN1A (p21Cip1), Ccnd2 (CyclinD2), et Trp63 (p63) qui r&#xE9;gule n&#xE9;gativement la signalisation Wnt, ainsi que la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de Cdh1 (E-cadh&#xE9;rine ). Enl&#xE8;vement des Notch2 &#xE9;galement donn&#xE9; lieu &#xE0; une proportion accrue de cellules fibreuses, comme on l&#x26;#39;a trouv&#xE9; dans Rbpj et JAG1 conditionnelles lentilles mutantes. Toutefois, Notch2 n&#x26;#39;est pas requise pour la prolif&#xE9;ration AEL, ce qui sugg&#xE8;re que un r&#xE9;cepteur diff&#xE9;rent r&#xE9;glemente ce processus. Nous avons constat&#xE9; que Notch2 normalement lentille blocs anc&#xEA;tre mort cellulaire. Dans l&#x26;#39;ensemble, nous concluons que Notch2 la signalisation m&#xE9;di&#xE9;e par r&#xE9;glemente la morphogen&#xE8;se objectif, l&#x26;#39;apoptose, le retrait du cycle cellulaire, la diff&#xE9;renciation cellulaire et secondaire de la fibre.

Ablation conditionnelle du r&#xE9;cepteur Notch2 dans la lentille oculaire

Kerbe Signalisierung unbedingt richtige Objektiv-Entwicklung, jedoch nicht die spezifischen Anforderungen der einzelnen Notch Rezeptoren untersucht haben. Hier berichten wir &uuml;ber die Objektiv-Ph&auml;notypen Notch2 bedingt Mutante M&auml;use, die schweren Mikrophthalmie ausgestellt, Pupillen &Ouml;ffnungen reduziert, gest&ouml;rt Faser Zellmorphologie, letztendlichen Verlust der vorderen Epithel Faser Zelle Dysgenesie, Denucleation M&auml;ngel, und Katarakte. Notch2 Mutanten hatte auch persistente Objektiv Stiele bereits als E11.5 und aberrante DNA-Synthese in der Faser Zelle Fach von E14.5. Gen Ausdruck Analysen nachwiesen, dass beim Ausfall der Notch2, erh&ouml;hte Niveaus der Zellzyklus Regulatoren Cdkn1a (p21Cip1), Ccnd2 (CyclinD2), und Trp63 (p63) reguliert, die negativ Wnt signalisieren, zuz&uuml;glich Herunterregulation Cdh1 (E-Cadherin). Entfernung von Notch2 f&uuml;hrte ebenfalls einen erh&ouml;hten Anteil an Ballaststoffen Zellen, wie in Rbpj und Jag1 bedingte mutant Objektive gefunden wurde. Ist jedoch Notch2 nicht erforderlich f&uuml;r die Vermehrung von AEL, was darauf hindeutet, dass ein anderes Rezeptor dieser Prozess regelt. Wir fanden, dass Notch2 normalerweise Objektiv Stammvater Zelltod blockiert. Insgesamt schlie&szlig;en wir, dass Notch2-vermittelte Signalisierung Objektiv Morphogenese, Apoptosis, Zellzyklus R&uuml;ckzug und sekund&auml;ren Faser Zelldifferenzierung regelt.

Bedingte Ablation des Notch2-Rezeptors in der okul&auml;re Linse.

Tacca di segnalazione &egrave; essenziale per lo sviluppo obiettivo corretto, tuttavia non sono state indagate le esigenze specifiche dei singoli recettori Notch. Qui riportiamo i fenotipi lente di Notch2 topi condizionalmente mutanti, che esposto microftalmia severa, ridotto aperture pupillare, sconvolto la morfologia cellulare fibra, eventuale perdita del epitelio anteriore, disgenesia cella fibra, denucleation difetti e cataratta. Notch2 mutanti avevano anche persistenti lente gambi gi&agrave; come E11.5 e la sintesi del DNA aberrante nel vano cella fibra di E14.5. Analisi di espressione genica hanno dimostrato che sulla perdita di Notch2, ci sono stati livelli elevati del ciclo delle cellule regolatori Cdkn1a (p21Cip1), Ccnd2 (CyclinD2) e Trp63 (p63) che regola negativamente segnalazione Wnt, oltre a down-regulation di Cdh1 (E-caderina). Rimozione di Notch2 ha portato anche in una percentuale maggiore di cellule di fibra, come &egrave; stato trovato in Rbpj e Jag1 lenti mutante condizionale. Tuttavia, Notch2 non &egrave; necessaria per la proliferazione di AEL, suggerendo che un recettore diverso regola questo processo. Abbiamo trovato che la Notch2 blocca normalmente lente progenitrici delle cellule morte. In generale, possiamo concludere che Notch2-mediata segnalazione regola la morfogenesi lente, apoptosi, ritiro del ciclo cellulare e differenziamento cellulare fibra secondaria.

Ablazione condizionale del recettore Notch2 la lente oculare.

Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;Notch&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x304C;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x91CD;&#x7BE4;&#x306A;&#x773C;&#x7403;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;Notch2&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x5909;&#x7570;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3001;&#x6E1B;&#x5C11;&#x77B3;&#x5B54;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x90E8;&#x306F;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x7834;&#x58CA;&#x3057;&#x3001;&#x524D;&#x65B9;&#x306E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x80B2;&#x4E0D;&#x5168;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x640D;&#x5931;&#x3001;&#x8131;&#x6838;&#x6B20;&#x9665;&#x3001;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Notch2&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;E14.5 E11.5&#x3067;&#x65E9;&#x304F;&#x3082;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x5185;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;DNA&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x830E;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;Notch2&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x8CA0;&#x306E;Wnt&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;CDKN1A&#xFF08;p21Cip1&#xFF09;&#x3001;Ccnd2&#xFF08;CyclinD2&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Trp63&#xFF08;P63&#xFF09;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;CDH1&#xFF08;E-&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3002;&#xFF09; Rbpj&#x3068;JAG1&#x6761;&#x4EF6;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;Notch2&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;Notch2&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;AEL&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Notch2&#x901A;&#x5E38;&#x306F;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Notch2&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x64A4;&#x9000;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x63A5;&#x773C;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;Notch2&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x30A2;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB178;&#xCE58; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xB80C;&#xC988; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; microphthalmia &#xC804;&#xC2DC;, &#xB3D9; &#xACF5; &#xAD6C;&#xBA4D; &#xAC10;&#xC18C;, &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;, &#xC55E;&#xCABD;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xD53C;, &#xC12C;&#xC720; &#xC140; dysgenesis, denucleation &#xACB0;&#xD568; &#xBC31; &#xB0B4;&#xC7A5;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xCC28;&#xC9C8;&#xC774; Notch2 &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xB80C;&#xC988; &#xACE0;&#xAE30; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Notch2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; E14.5&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC12C;&#xC720; &#xC140; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC601;&#xAD6C; &#xB80C;&#xC988; &#xC904;&#xAE30; &#xC77C;&#xCC0D; E11.5, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD0C8; &#xC120; DNA &#xD569;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; notch2&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; Cdkn1a (p21Cip1), ccnd2&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;&#xACE0; (CyclinD2), &#xBC0F; trp63&#xB294; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; Wnt &#xC2E0;&#xD638; &#xD50C;&#xB7EC;&#xC2A4; cdh1&#xC758; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; (p63) &#xADDC;&#xC81C; (&#xC804;&#xC790; Cadherin). Notch2&#xC758; &#xC81C;&#xAC70; &#xB610;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xBE44;&#xC728; Rbpj&#xACFC; Jag1 &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB80C;&#xC988;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Notch2 &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; AEL &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xAC00;&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xC790;. Notch2 &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB80C;&#xC988; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xCC28;&#xB2E8;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB80C;&#xC988; morphogenesis, apoptosis, &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xCCA0;&#xC218; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC870; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654; &#xC870;&#xC808; &#xC2E0;&#xD638; Notch2 &#xC911;&#xC7AC; &#xACB0;&#xB860;.

&#xB208; &#xB80C;&#xC988;&#xC5D0; Notch2 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xC808;&#xC81C;.

Se&#xF1;alizaci&#xF3;n Notch es esencial para el desarrollo lente adecuada, sin embargo los requisitos espec&#xED;ficos de receptores Notch individuales no han sido investigados. Aqu&#xED; mostramos los fenotipos de la lente de Notch2 los ratones mutantes condicionalmente, que presentaban severas microftalmia, la reducci&#xF3;n de las aberturas pupilares, interrumpido morfolog&#xED;a de las c&#xE9;lulas de fibra, la eventual p&#xE9;rdida del epitelio anterior de disgenesia, c&#xE9;lula de la fibra, defectos denucleation y cataratas. Notch2 mutantes tambi&#xE9;n ten&#xED;an tallos persistentes lentes tan pronto como E11.5 y la s&#xED;ntesis de ADN aberrante en el compartimento de c&#xE9;lulas de fibra por E14.5. Los an&#xE1;lisis de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica mostraron que, tras la p&#xE9;rdida de Notch2, hab&#xED;a niveles elevados de la del ciclo celular reguladores CDKN1A (p21Cip1), Ccnd2 (CyclinD2), y Trp63 (p63), que regula negativamente la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Wnt, adem&#xE1;s de la baja regulaci&#xF3;n de Cdh1 (E-cadherina ). La eliminaci&#xF3;n de Notch2 tambi&#xE9;n dio lugar a una mayor proporci&#xF3;n de c&#xE9;lulas de fibra, como se constat&#xF3; en Rbpj y JAG1 lentes de mutantes condicionales. Sin embargo, Notch2 no es necesario para la proliferaci&#xF3;n AEL, lo que sugiere que un receptor diferente regula este proceso. Hemos encontrado que Notch2 normalmente lente bloques progenitora la muerte celular. En general, llegamos a la conclusi&#xF3;n de que Notch2 regula la se&#xF1;alizaci&#xF3;n mediada por la morfog&#xE9;nesis del objetivo, la apoptosis, la retirada del ciclo celular y la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas de fibra secundaria.

Article	Year
General utility of the chicken betaB1-crystallin promoter to drive protein expression in lens fiber cells of transgenic mice. Transgenic research\| PubMed ID: 12212842	2002
Cdk5 regulates activation and localization of Src during corneal epithelial wound closure. Journal of cell science\| PubMed ID: 15280426	2004
A specific interaction between muskelin and the cyclin-dependent kinase 5 activator p39 promotes peripheral localization of muskelin. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 15797862	2005
Regulation of alphaA-crystallin via Pax6, c-Maf, CREB and a broad domain of lens-specific chromatin. The EMBO journal\| PubMed ID: 16675956	2006
The Cdk5 inhibitor olomoucine promotes corneal debridement wound closure in vivo. Molecular vision\| PubMed ID: 18385789	2008
Effective therapy for nephritis in (NZB x NZW)F1 mice with triptolide and tripdiolide, the principal active components of the Chinese herbal remedy Tripterygium wilfordii Hook F. Arthritis and rheumatism\| PubMed ID: 18512813	2008
Distinct functions of Cdk5(Y15) phosphorylation and Cdk5 activity in stress fiber formation and organization. Experimental cell research\| PubMed ID: 18838073	2008
Notch signaling is required for lateral induction of Jagged1 during FGF-induced lens fiber differentiation. Developmental biology\| PubMed ID: 19481073	2009
Conditional ablation of the Notch2 receptor in the ocular lens. Developmental biology\| PubMed ID: 22173065	2012

Chun Y. Gao

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