微生物与真菌多样性

概念教师准备学生实验步骤
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  1. 观察微生物菌落结构
    • 首先,取出分配好的培养皿,然后取下其中一个培养皿的封口膜和盖子。
    • 将未加盖的培养皿置于解剖显微镜下,观察培养皿每个象限内的独立菌群。
    • 在识别出菌落后,将观察到的菌落特征填入表格中相应的列。 点击此处下载表1
    • 然后,对另外两种细菌物种重复上述观察步骤。
    • 对三种细菌进行革兰氏染色时,首先在三张载玻片的一端标记每种细菌的缩写、你的姓名缩写以及日期。假设:本实验的假设可能是,通过革兰氏染色可以区分不同的细菌种类和形态,其中革兰氏阳性菌会被结晶紫染成紫色,而革兰氏阴性菌则因番红复染呈现粉红色。零假设可能是所有细菌类型对两种染料的保留程度相同,染色无法帮助区分其种类或形态。
    • 开始第一次染色时,用夹子固定载玻片以便操作。每次涂片时,请确保使用清洁并经火焰灭菌的接种环。
    • 在载玻片中央滴加两环无菌蒸馏水。
    • 再次灭菌接种环后,通过多次接触未接种的琼脂区域来冷却接种环。
    • 然后,从一个孤立的菌落中取少量培养物,并与载玻片上的水混合。
    • 让载玻片在室温下自然干燥,并通过快速通过火焰进行热固定。
    • 干燥后,在载玻片上滴加数滴结晶紫溶液,静置2至3分钟。
    • 用蒸馏水小心冲洗载玻片,水流应从载玻片顶部流入,使其沿表面缓缓流下。切勿将水流直接对准涂片区域。
    • 接下来,用革兰氏碘液覆盖载玻片,静置2分钟,然后用蒸馏水轻轻冲洗。
    • 用95%乙醇脱色,直至不再有染料被洗脱为止。
    • 立即用蒸馏水冲洗载玻片,以防止过度脱色。
    • 然后,滴加数滴番红复染液,染色30秒。此步骤将使存在的革兰氏阴性菌着色。
    • 用蒸馏水轻轻冲洗载玻片,并用吸水纸吸干。
    • 以相同方式对另外两张载玻片进行染色(步骤6–17),然后逐一在显微镜下观察。
    • 先使用低倍物镜进行粗调。找到理想视野后,再切换至更高倍数进行观察。
    • 进一步成像并使用中倍物镜调整涂片后,直接在涂片上滴加镜油。注:高倍物镜需要使用镜油,以获得最佳显微图像。
    • 现在,使用彩色铅笔在相应放大倍数的圆圈中绘制所观察到的细菌,并将观察到的特征填入表格的相应列中,记录细菌的形态以及其为革兰氏阳性(深紫色染色)或革兰氏阴性(粉红色染色)。 点击此处下载表2
    • 最后,对另外两张染色的细菌载玻片重复观察、绘图和特征描述。
  2. 观察真菌结构
    • 从培养箱中取出 S. cerevisiae 培养皿,在载玻片上滴一滴水。
    • 使用灭菌的接种环,将酵母菌涂布于水滴中形成薄层,并在载玻片上加盖盖玻片。
    • 将载玻片置于显微镜下,先使用最低倍数,再逐步提高至油镜模式,以观察单个酵母细胞。
    • 观察酵母菌的一般形态和结构,并识别正在进行出芽无性繁殖的细胞。
    • 现在,在相应放大倍数的圆圈中绘制这些细胞。
    • 完成酵母观察后,将 S. cerevisiae 载玻片更换为已制备的子囊菌门(Ascomycetes)子实体(apothecium)玻片,并将显微镜调至最低倍数。
    • 使用彩色铅笔绘制低倍和高倍下的结构,包括子囊(asci)和子囊孢子(ascospores)。
    • 最后,将一个双孢蘑菇(Agaricus bisporus)置于解剖显微镜下,绘制其结构特征,包括菌盖(pileus)、菌褶(gills)和菌柄(stipe)。
  3. 结果
    • 根据表格中记录的细菌染色情况,判断哪些物种为革兰氏阳性,哪些为革兰氏阴性。
    • 然后,查看表格中记录的形态,判断各细菌物种属于杆菌(bacillus)、球菌(coccus)还是螺旋菌(spirillum)。
    • 接下来,将你绘制的酵母细胞图与细菌细胞图进行比较。注:S. cerevisiae 等子囊菌门酵母可通过出芽方式进行无性繁殖,在显微镜下可观察到出芽现象。
    • 记录你在观察中看到的酵母出芽现象。注:子囊菌门也可通过有丝分裂和单倍体孢子形成进行有性繁殖。
    • 将你在表格中观察到的孢子或子囊形成情况记录下来。
    • 注:担子菌门(Basidiomycota)真菌在菌盖下方具有清晰可见的菌褶。
    • 记录任何在菌盖下方表现出菌褶的真菌物种。

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