Sanger测序

对于某些实验或诊断，可能需要获取生物体全基因组的核苷酸序列，以更深入地了解其所含基因或等位基因、其功能以及相关疾病。这可以通过DNA测序来实现。

两种著名的传统DNA测序技术是Sanger测序法和Maxam-Gilbert法。

在桑格测序（也称为链终止法或双脱氧核苷酸测序）中，待测序的纯化模板DNA在存在适当引物、脱氧核苷三磷酸（dNTPs）以及称为双脱氧核苷三磷酸（ddNTPs）的修饰碱基的条件下，通过PCR进行扩增。

双脱氧核苷酸缺少脱氧核苷酸的羟基，这限制了它们与相邻核苷酸形成磷酸二酯键的能力。

每种双脱氧核苷酸均标记有不同的荧光标签，以方便检测。 

第一步是将模板 DNA 变性为单链 DNA。

然后，当引物结合到目标区域时，DNA聚合酶开始向DNA链中添加新的核苷酸，偶尔会掺入一个双脱氧核苷酸而非脱氧核苷酸，从而终止DNA扩增。

结果是产生不同长度的DNA片段，每个片段均以标记的双脱氧核苷酸终止。

然后将这些DNA片段在毛细管凝胶上进行电泳，根据其大小进行分离，并通过自动化软件分析各片段的发射光谱，以破译目标DNA的遗传序列。