Sanger测序

对于某些实验或诊断，可能需要获得生物体整个基因组的核苷酸序列，以更深入地了解存在的基因或等位基因、它们的功能和相关疾病。这可以通过 DNA 测序来实现。

两种著名的传统 DNA 测序技术是 Sanger 测序法和 Maxam-Gilbert 法。

在 Sanger 测序（也称为链终止或双脱氧核苷酸测序）中，待测序的纯模板 DNA 是在适当的引物、dNTP 和修饰碱基（称为双脱氧核苷酸或 ddNTP）存在下进行 PCR 扩增的。

双脱氧核苷酸缺乏脱氧核苷酸的羟基，这限制了它们与相邻核苷酸形成磷酸二酯键的能力。

每个双脱氧核苷酸也用不同的荧光标记标记，以使其检测更容易。

第一步是将模板 DNA 变性成单链 DNA。

然后，当引物与目标区域结合时，DNA 聚合酶开始向 DNA 链添加新的核苷酸，并偶尔掺入双脱氧核苷酸而不是脱氧核苷酸 - 这会终止 DNA 扩增。

结果是不同长度的 DNA 片段，每个片段都以标记的双脱氧核苷酸为末端。

然后将这些 DNA 片段在毛细管凝胶上运行，以根据大小分离它们，并通过自动化软件分析每个片段的发射光谱，以破译所需 DNA 的基因序列。