免疫荧光显微镜

荧光显微镜使用称为荧光染料的荧光发色团，它可以吸收来自光源的能量，然后以可见光的形式释放这种能量。荧光染料包括天然荧光物质（例如叶绿素）和添加到样本中以产生对比度的荧光染料。Texas Red和 FITC 等染料就是荧光染料的例子。其他例子包括核酸染料 4',6'-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI) 和吖啶橙。

显微镜用短波长激发（例如紫外线或蓝光）照射样品。发色团吸收激发光并发射更长波长的可见光。然后过滤掉激发光（部分原因是紫外线对眼睛有害），因此只有可见光通过目镜，在深色背景下产生样本的明亮颜色图像。

荧光显微镜可以识别病原体，找到环境中的特定物种，或找到细胞内特定分子和结构的位置。人们还开发了一些方法来根据活细胞是否吸收特定的荧光染料来区分活细胞和死细胞。有时，在同一样本上使用多种荧光染料来显示不同的结构或特征。

荧光显微镜最重要的应用之一是免疫荧光，它用于通过观察抗体是否与其结合来识别某些微生物。（抗体是免疫系统产生的蛋白质分子，附着在特定病原体上以杀死或抑制它们。）该技术有两种方法：直接免疫荧光测定（DFA）和间接免疫荧光测定（IFA）。在 DFA 中，特定抗体（例如针对狂犬病病毒的抗体）被荧光染料染色。如果标本中含有目标病原体，可以在荧光显微镜下观察与病原体结合的抗体。这是一抗染色剂，因为染色的抗体直接附着在病原体上。

在 IFA 中，二抗用荧光染料染色，而不是一抗。二抗不直接附着于生物体，而是与一抗结合。当未染色的一抗与病原体结合时，可以观察到荧光二抗与一抗结合。因此，二抗间接附着于病原体。由于多个二抗通常可以附着在一抗上，因此 IFA 增加了附着在样本上的荧光抗体的数量，从而更容易观察其特征。