我们介绍一种用于在绵羊回肠内对“肠段”进行插管的新型外科手术方法。动物在术后恢复且抗生素和镇痛药物完全清除后，可通过导管直接向肠段内递送多种处理物质。
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本文内容
摘要
摘要
肠道是一个复杂的结构，不仅参与营养物质的吸收，还在个体与外界环境之间发挥屏障作用。因此，肠道在免疫监视及抵御肠道病原体方面起着关键作用。研究肠道生理学与免疫学常采用“肠道环段”作为实验模型。目前大多数环段模型均为不可恢复性外科手术模型，用于研究肠道在短期内（<24小时）发生的变化（1-3）。我们此前建立了一种可恢复性肠道环段模型，专门用于检测绵羊在接触疫苗、佐剂和病毒后，肠道内长期（<6个月）的免疫学变化（4）。该方法将处理措施局限在特定的“环段”区域，使我们能够对该部位的肠道进行取样。该方法的一个显著缺点是仅有一个给药时机（即手术时）。此外，肠道黏膜和管腔内容物的样本只能在实验结束时采集。上述模型其他重要的局限性在于，手术操作及相关术后处理措施（如抗生素和镇痛药的使用）可能直接影响处理因素本身和/或改变免疫功能，从而干扰实验结果。因此，我们对肠道环段模型进行了改进，将长期留置导管植入环段中。绵羊在手术后可完全恢复，且对外置导管无不良反应。值得注意的是，在环段中建立导管后，我们可在术后恢复期完成、且术中及术后用药已清除的情况下，在较长时间内多次给予不同处理。
方案
实验步骤：
- 所有器械均经高压灭菌；不可高压灭菌的材料须在Germex冷消毒液中灭菌，时间不少于10 min。
- 绵羊通过肌内注射给予乙酰丙嗪（0.05 mg/kg）、格隆溴铵（0.005 mg/kg）和酒石酸布托啡诺（0.2 mg/kg）进行术前用药，之后静置15-20分钟。
- 颈部剃毛并进行外科刷洗。一旦可视化颈静脉，即在静脉上方皮下注射0.1 ml利多卡因，将导管插入静脉，并使用牲畜识别标签胶和2英寸医用胶带固定于皮肤。术中通过重力滴注给予动物Plasmalyte 148，剂量为10 ml/kg/hr。
- 地西泮（0.2 mg/kg）静脉注射，硫喷妥钠（10 mg/kg）诱导麻醉。利多卡因气管内喷雾用于声带，对绵羊进行气管插管，并以异氟烷（1.5–2.5% 溶于100% O₂）维持麻醉。2 以4 L/min的流速持续通氧至手术结束。
- 将动物置于加热垫上，呈仰卧位，以在手术期间维持体温。插入胃管至瘤胃，以防止过度膨胀。
- 剃除腹部腹侧毛发，使用三次普尔碘外科擦洗液对皮肤进行术前消毒。随后覆盖手术巾，确保手术区域（从脐部至腹部尾侧）充分暴露。
- 使用电刀从脐部开始向尾侧做一条15–20 cm的正中切口，于腹腔右下象限定位回盲皱襞。随后将远端回肠和盲肠提出腹腔外。整个操作过程中应尽量减少对肠管的牵拉，并注意保持外置肠段湿润，使用37–39°C无菌磷酸盐缓冲液（PBS；pH 7.2）
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讨论
在本实验中，我们成功在绵羊回肠内建立的肠段中置入了导管。通过严格执行术后护理，动物在术后迅速恢复，并于手术后5-7天恢复正常的活动。我们确定，在肠段内建立导管不会影响肠道黏膜或免疫功能（数据未显示），且动物术后至少可存活8周。该方法使得在动物术后恢复期结束后，能够在较长时间内向不同的免疫区室引入多种处理，并对这些处理的生理和免疫学效应进行实证测量。
未来实验的一个重要考虑因素是小肠内肠段的位置。在本实验中，我们通过手术在“具有免疫功能的回肠”区域创建了肠段，该区域通常由回肠（连续性）派伊尔结（5,6）界定。这一区域可向前延伸至回盲褶上方约2米处。尽管从解剖学角度这一区域被视为空肠，但从免疫功能角度来看则属于回肠，这凸显了在描述肠道区域时需重视其功能特性。
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披露
所有涉及实验动物的操作均经机构动物护理委员会批准（动物使用协议编号 #0609），并遵循加拿大动物护理委员会制定的指南。
我们没有需要披露的内容。
致谢
本研究的完成离不开加拿大阿尔伯塔省莱斯布里奇市加拿大农业与农业食品研究中心众多人员的奉献与努力。在此，我们感谢：Tara Shelton 在动物术前与术后护理、手术准备、麻醉学、样品分析以及视频成像方面的协助；Randy Wilde 和 Estela Costa 在术前与术后护理方面的贡献；Jenny Gusse 在样品分析方面的帮助；Byron Lee 提供的套管针图像；以及 Brian Egland 在绵羊饲养管理方面的支持。我们还感谢莱斯布里奇大学生物科学系的 Brent Selinger 提供视频设备与技术建议，以及其他协助（即执行制片），同时感谢莱斯布里奇大学课程再开发中心在视频拍摄方面的专业支持。本研究部分得到了先进食品与材料网络（G.D.I.）、加拿大—阿尔伯塔牛肉产业发展基金（G.D.I.）以及加拿大农业与农业食品部（G.D.I. 和 J.P.K.）资助项目的资助。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 外科手套 | 西部药品配送中心有限公司 | 103091 | |
| 外科口罩 | 西部药品配送中心有限公司 | MAX53013 | |
| 手术衣 | 加拿大魁北克省圣海辛特兽医药品分发中心公司 | 3365 | |
| OB围裙 | 西部药品配送中心有限公司 | 900062 | |
| 手术帽 | 西部药品配送中心有限公司 | 903271 | |
| EZ Scrub 刷子 | 西部药品配送中心有限公司 | BDC377479 | |
| 麻醉机 | 博伊尔 | - | |
| Sodasorb | 西部药品分发中心有限公司 | 108638 | |
| 喉镜 | 西部药品配送中心有限公司 | - | |
| 喉镜片（Miller喉镜片 #4） | 西部药品配送中心有限公司 | 902667 | |
| 气管插管（7.0 - 8.5 mm） | 西部药品配送中心有限公司 | - | |
| 利多卡因气管内喷雾 | 西部药品配送中心有限公司 | 103364 | |
| 乙酰丙嗪 | 西部药品配送中心有限公司 | AUS01020 | |
| 格隆溴铵 | 西部药品配送中心有限公司 | SAB2880 | |
| 酒石酸布托啡诺 | 西部药品配送中心有限公司 | AYE304541 | |
| 地西泮 | 西部药品配送中心有限公司 | sab790 | |
| 硫喷妥钠 | 西部药品配送中心有限公司 | 103508 | |
| 盐酸肾上腺素 | 西部药品配送中心有限公司 | 103856 | |
| 多沙普仑 | 斯特拉斯科纳药房 | - | |
| 异氟烷 | 西部药品分发中心有限公司 | 100339 | |
| Hemostam | 西部药品配送中心有限公司 | 103857 | |
| 氟尼辛 | 西部药品配送中心有限公司 | sch140100 | |
| 恩诺沙星 | 西部药品配送中心有限公司 | hll0049 | |
| 甲硝唑 | 西部药品分销中心有限公司 | 101653 | |
| 氨苄青霉素 | 西部药品配送中心有限公司 | NOV67185-6 | |
| 头孢唑林 | 西部药品配送中心有限公司 | nov69397 | |
| 电刀 | Macan | MV8 | |
| 加热垫 | Kane | PHMD-48 | |
| 胃管（Nalgene 软管 5/16）" ID | Fisher Scientific | - | |
| 持针器 | 西部药品配送中心有限公司 | 108338 | |
| 艾迪生·布朗镊子 | 西部药品配送中心有限公司 | 911075 | |
| 大鼠牙用镊 | 加拿大魁北克省圣海辛特市兽用药品分发中心公司 | 5275 | |
| 凯利钳 | 西部药品配送中心有限公司 | 901133 | |
| 蚊式止血钳 | 西部药品配送中心有限公司 | 108471 | |
| 卡马尔特钳 | 西部药品配送中心有限公司 | 901225 | |
| 手术刀柄 | 西部药品配送中心有限公司 | 900285 | |
| 22号手术刀片 | 西部药品分发中心有限公司 | 900511 | |
| 梅茨鲍姆剪刀 | 西部药品配送中心有限公司 | 901166 | |
| 锐-锐剪刀 | 西部药品配送中心有限公司 | 108264 | |
| 止血钳 | 西部药品分发中心有限公司 | 901213 | |
| 艾利斯组织镊 | 西部药品配送中心有限公司 | 901201 | |
| Doyen’s 钳 | 西部药品配送中心有限公司 | 904226 | |
| 不锈钢碗 | 西部药品配送中心有限公司 | 903601 | |
| 不锈钢穿刺器（弯曲型） | 本地供应商 | - | |
| 导管导入器 | 西部药品配送中心有限公司 | 11440 | |
| 手术巾 | 加拿大魁北克省圣海辛特市兽用药品分发中心公司 | 7972 | |
| 一次性铺巾 | 西部药品配送中心有限公司 | 900035 | |
| 无菌巾 | 加拿大魁北克省圣海辛特市兽药分发中心公司 | 2323 | |
| 盖布（40 x 40 cm） | 加拿大魁北克省圣海辛特兽用药品分发中心公司 | 8358 | |
| 手术巾（7" ×11 ¼" 开启 | 加拿大魁北克省圣海辛特市兽用药品分发中心公司 | 2694 | |
| Vicryl（2-0） | 西部药品配送中心有限公司 | JJMJ333H | |
| 丝线 2-0 | 西部药品配送中心有限公司 | 105248 | |
| 羊肠线 #3 | 西部药品配送中心有限公司 | CSL547-2070 | |
| Supramid #1 | 西部药品配送中心有限公司 | CSL547-3040 | |
| 缝合针（切割型与非切割型） | 西部药品配送中心有限公司 | - | |
| 硅胶管（0.040）" ID，0.085" OD | Fisher Scientific | 11-189-15D | |
| Orbeseal 软膏 | 西部药品配送中心有限公司 | 106344 | |
| 透明硅胶（732 多用途密封剂） | 本地供应商 | - | |
| 钝端针 | 西部药品配送中心有限公司 | 905035 | |
| 标记笔（工业用永久性） | 本地供应商 | - | |
| 导管袋（由7.5 cm弹力胶带制成） | 西部药品配送中心有限公司 | 104094 | |
| 医用胶带（2") | 西部药品配送中心有限公司 | 103842 | |
| 医用胶带（1") | 西部药品配送中心有限公司 | VLMRENF20 | |
| 4x4 纱布垫 | 西部药品配送中心有限公司 | 107551 | |
| 纱布粘连 | 西部药品配送中心有限公司 | 107633 | |
| Elastoplast 7.5 cm | 西部药品配送中心有限公司 | 104094 | |
| Elastoplast 可撕裂型绷带 | Western Drug Distribution Center, Ltd. | 104093 | |
| 注射器（60 ml） | 西部药品配送中心有限公司 | 104004 | |
| 注射器（10 ml） | 西部药品配送中心有限公司 | bdc301604 | |
| 25G 针头 | 西部药品配送中心有限公司 | BDC305122 | |
| 20G 针头 | 西部药品配送中心有限公司 | BDC305175 | |
| 18G 针头 | 西部药品配送中心有限公司 | 903353 | |
| Intracath IV 导管（16G 8") | 西部药品配送中心有限公司 | bdc3831621 | |
| 静脉输液器（10滴） | 西部药品配送中心有限公司 | 101797 | |
| 0.9% NaCl 溶液 | 西部药品配送中心有限公司 | BAXJB1322P | |
| Plasmalyte 148 溶液 | 西部药品配送中心有限公司 | BAXJB2534 | |
| 葡萄糖 | 西部药品分发中心有限公司 | MCT60190 | |
| 蠕动泵 | Cole-Parmer | 7524-10 | |
| 家畜标识耳标粘合剂 | 本地供应商 | - | |
| Germex 溶液 | 西部药品配送中心有限公司 | mtc60270 | |
| 异丙醇 | 西部药品配送中心有限公司 | 104590 | |
| 斯坦己定清洁剂 | 西部药品配送中心有限公司 | 109248 | |
| Prepodyne 溶液 | 西部药品配送中心有限公司 | 105710 | |
| Prepodyne 擦洗剂 | 西部药品配送中心有限公司 | 105711 |
参考文献
- Vidal, J. E., McClane, B. A., Saputo, J., Parker, J., Uzal, F. A. Effects of Clostridium perfringens beta-toxin on the rabbit small intestine and colon. Infect. Immun. 76, 4396-4404 (2008).
- Santos, R. L., Zhang, S., Tsolis, R. M., Baumler, A. J., Adams, L. G.
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